HU223344B1 - Immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag, ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények, eljárás az előállítására és alkalmazásai - Google Patents
Immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag, ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények, eljárás az előállítására és alkalmazásai Download PDFInfo
- Publication number
- HU223344B1 HU223344B1 HU9801797A HUP9801797A HU223344B1 HU 223344 B1 HU223344 B1 HU 223344B1 HU 9801797 A HU9801797 A HU 9801797A HU P9801797 A HUP9801797 A HU P9801797A HU 223344 B1 HU223344 B1 HU 223344B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- immunostimulant
- fermentation
- dried
- lyophilisate
- fermented
- Prior art date
Links
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 title claims abstract description 13
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 9
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 title abstract description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title abstract description 8
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 title abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 42
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 42
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims abstract description 24
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 18
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 16
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- OLBNOBQOQZRLMP-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxy-p-benzoquinone Chemical compound COC1=CC(=O)C=C(OC)C1=O OLBNOBQOQZRLMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 18
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 11
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 11
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 11
- ZJKWJHONFFKJHG-UHFFFAOYSA-N 2-Methoxy-1,4-benzoquinone Chemical compound COC1=CC(=O)C=CC1=O ZJKWJHONFFKJHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 claims 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 19
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000006052 feed supplement Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 23
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 7
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 7
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 6
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 6
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000004057 1,4-benzoquinones Chemical class 0.000 description 5
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 150000005208 1,4-dihydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 3
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 3
- 150000004054 benzoquinones Chemical class 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 3
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000003305 oral gavage Methods 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 3
- 238000003210 sulforhodamine B staining Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- BCIBKWCJOCMBSI-UHFFFAOYSA-N 2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione Chemical compound CCCCCCCCCCCCC1=CC(=O)C=C(OC)C1=O BCIBKWCJOCMBSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000003468 Ehrlich Tumor Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 2
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 2
- 150000004059 quinone derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000010911 splenectomy Methods 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 231100000338 sulforhodamine B assay Toxicity 0.000 description 2
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 2
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 1,4-Benzenediol Natural products OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 240000008886 Ceratonia siliqua Species 0.000 description 1
- 235000013912 Ceratonia siliqua Nutrition 0.000 description 1
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 208000006431 amelanotic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003254 anti-foaming effect Effects 0.000 description 1
- 230000002001 anti-metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 235000012206 bottled water Nutrition 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000004098 cellular respiration Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N doxycycline monohydrate Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 1
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 1
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- -1 hydroquinone glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000695 menaquinone group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229940042016 methacycline Drugs 0.000 description 1
- MHIGBKBJSQVXNH-IWVLMIASSA-N methacycline Chemical compound C=C([C@H]1[C@@H]2O)C3=CC=CC(O)=C3C(=O)C1=C(O)[C@@]1(O)[C@@H]2[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C1=O MHIGBKBJSQVXNH-IWVLMIASSA-N 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940100692 oral suspension Drugs 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- MYKLQMNSFPAPLZ-UHFFFAOYSA-N p-xyloquinone Natural products CC1=CC(=O)C(C)=CC1=O MYKLQMNSFPAPLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 description 1
- 239000010451 perlite Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 208000011581 secondary neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000005070 sphincter Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000000724 thymus hormone Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 150000003669 ubiquinones Chemical class 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019143 vitamin K2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011728 vitamin K2 Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/062—Ascomycota
- A61K36/064—Saccharomycetales, e.g. baker's yeast
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/20—Malt products
- A23L7/25—Fermentation of cereal malt or of cereal by malting
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/14—Yeasts or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/152—Cereal germ products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
- A61K36/899—Poaceae or Gramineae (Grass family), e.g. bamboo, corn or sugar cane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/308—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on cancer prevention
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Botany (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Grain Derivatives (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
A találmány immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárítottanyagra, ezt tartalmazó gyógyszerkészítményekre, az előállításáraszolgáló eljárásra, valamint a szárított anyagnaktáplálékkiegészítőként, tápszerként, valamint immunstimuláns éskülönösen metasztázist gátló gyógyszerkészítmények előállításábantörténő alkalmazására vonatkozik. A találmány szerinti anyag búzacsíraSaccharomyces cerevisiae jelenlétében, vizes közegben végzettfermentálásával és a fermentlé beszárításával állítható elő. ŕ
Description
A találmány immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyagra, az ezt tartalmazó gyógyszerkészítményekre, az előállítására szolgáló eljárásra, valamint a szárított anyagnak táplálékkiegészítőként, tápszerként, valamint immunstimuláns és különösen metasztázist gátló gyógyszerkészítmények előállításában történő alkalmazására vonatkozik.
A daganatos megbetegedések kezelésének egyik legjelentősebb feladata a metasztázisok gátlása, ugyanis a sejtek rosszindulatú burjánzása nyomán kialakult elsődleges daganat a szomszédos szövetekbe és szervekbe áttétképző sejtek révén átterjedve másodlagos daganatokat alakít ki, amelyek már nem távolíthatók el sebészeti beavatkozással, és kemoterápiás kezelésre is rezisztensekké válhatnak.
A kutatók egyre nagyobb figyelmet fordítanak az immunmoduláns anyagok kidolgozására, és előtérbe került a természetes - általában növényi - eredetű anyagok intenzív tanulmányozása is.
Ismeretes, hogy a kinonszerkezetű vegyületeknek fontos biológiai szerepük van. Számos kinonszármazék előfordul a növényekben, így az ubikinonok, plasztokinonok, menakinonok, amelyek például a fotoszintézisben játszanak szerepet, de a gerincesek, így az ember sejtlégzésében és a véralvadásban is van jelentőségük. Számos benzokinonszármazékot alkalmaznak gyógyászati célokra is. Például az adriamicin, daunorubicin és mitomicin C olyan kinonszármazékok, amelyek citosztatikus hatásúak, míg más benzo-, illetve hidrokinonok antimikrobiális hatással bírnak, és olyan bakteriális fertőzések kezelésére alkalmas antibiotikumok aktív komponensei, mint például a tetran-B, metaciklin és doxiciklin.
A szakirodalom beszámol arról, hogy a 2,6-dimetoxi-p-benzokinonnak (2,6-DMBQ) és a 2-metoxip-benzokinonnak (2-MBQ) fungicid és bakteriosztatikus hatásuk van, valamint citotoxikusak rosszindulatú tumorsejtekre is [Int. J. Quant. Chem.: Quant. Bioi. Symp. 7, 217-222 (1980), 9, 27-30 (1982) és 12, 257-261 (1985); Phytochemistry 27, 225 (1971) és J. Agric. Food Chem. 39, 266 (1991)]. Kimutatták, hogy a 2,6-dimetoxi-p-benzokinon és aszkorbinsav keveréke gátolja az Ehrlich aszcitesz tumorsejtek növekedését egerekben [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 2088-2091 (1984) és 82, 1439-1442 (1985)]. A 2,6-dimetoxip-benzokinont és a 2-metoxi-p-benzokinont számos növényben kimutatták és izolálták [Magy. Kém. Folyóirat 102(1) 320-325 (1996)]. Legnagyobb mennyiségben a búzában (Triticum vulgáris), mégpedig a búzacsírában található meg ez a két vegyület glükozid formában. A vegyületeket az 1950-es években élesztővel fermentált búzacsírából izolálták és azonosították a búzacsírával adagolt kenyér minőségromlásának vizsgálatához [Helv. Chim. Acta 33, 433 (1950); J. Chem. Soc. London 1952, 4821-4823]. Szakirodalmi adatok szerint a búzacsírában a 2-MBQ körülbelül 0,05 tömeg%-ban, a 2,6-DMBQ körülbelül 0,01 tömeg%-ban fordul elő (glükozidként). A kinonok glükozidként való jelenlétének magyarázata az, hogy a kinonok, különösen a parametoxihelyettesített benzokinonok meglehetősen reakcióképesek, míg hidrokinon-glükozidjaik stabilabbak és inertek.
A búzacsíra fermentációs vizsgálatára irányuló kísérleteink során megállapítottuk, hogy a búzacsíra sütőélesztővel (Saccharomyces cerevisiae) végzett fermentációjával kapott fermentléből származó szárított anyagnak meglepő immunstimuláns és metasztázist gátló hatása van, és kiválóan alkalmazható immunstimuláns és metasztázist gátló gyógyszerkészítmények hatóanyagaiként.
Ez a felismerésünk azért meglepő, mert a szakirodalom [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 129 (1983)] beszámol ugyan a 2,6-DMBQ és aszkorbinsav keverékének Ehrlich aszcitesz tumorsejtekre - amelyek különösen alkalmasak a daganatok növekedési viszonyainak kvantitatív elemzésére, valamint funkcióinak biokémiai tanulmányozására - kifejtett növekedést gátló hatásáról, a találmány szerinti fermentált növényi anyag - amely eddig még nem azonosított alkotórészek mellett 2,6DMBQ-t és 2-MBQ-t is tartalmaz - aszkorbinsavval kombinálva is lényegében hatástalannak bizonyult ezekre a primer tumorsejtekre, és elsősorban az áttételes daganatok - metasztázisok - kezelésében bizonyult igen hatékonynak. A primer daganatok és az ezekből kifejlődő metasztázisok kezelésének szempontjai alapvetően eltérőek, így a szakember számára nem volt kézenfekvő, hogy primer daganatellenes hatásukról ismert komponenseket is tartalmazó, teljes kémiai összetételében azonban egyelőre nem azonosított, növényi eredetű fermentált anyagnak immunstimuláns és metasztázist gátló hatása lenne (Cancer, Principles & Practice of Oncology, 1. kötet, 4. kiadás, J. B. Lippincott Company, Philadelphia, 1993).
A találmány tehát immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyagra vonatkozik, amely olyan fermentléből származik, amely búzacsíra Saccharomyces cerevisiae jelenlétében, vizes közegben végzett fermentálásával kapható meg.
A találmány tárgya továbbá eljárás a fermentált, szárított anyag előállítására oly módon, hogy búzacsírát sütőélesztővel (Saccharomyces cerevisiae) vizes közegben fermentálunk, a fermentlevet sejtmentesre szűrjük és beszárítjuk.
A találmány olyan immunstimuláns és metasztázist gátló gyógyszerkészítményekre is vonatkozik, amelyek hatóanyagként a találmány szerinti fermentált, szárított anyagot tartalmazzák.
A találmány tárgya továbbá az előzőkben említett fermentált anyag alkalmazása immunstimuláns és metasztázist gátló gyógyszerkészítmények előállítására.
A találmány szerinti fermentált és szárított anyag felhasználható emlősök kezelési eljárásában is az immunrendszer stimulálására és metasztázisok megakadályozására.
A találmány továbbá táplálékkiegészítőre és tápszerre is vonatkozik, amely találmány szerinti fermentált, szárított anyagot és maltodextrint vagy más alkalmas hordozót tartalmaz.
A találmány szerinti növényi fermentált, szárított anyagot 2,6-DMBQ-tartalma alapján azonosítottuk és vizsgáltuk. Itt jegyezzük meg, hogy a kivonat kémiai
HU 223 344 Bl összetételének azonosítása a rendelkezésre álló módszerekkel nem volt lehetséges, ezért minden adat a 2,6DMBQ-tartalomra, mint alapra vonatkozik.
A találmány szerinti fermentált anyagot búzacsírából állítjuk elő, amely malmi melléktermék, és nagy mennyiségben hozzáférhető. Előnyösen lisztfinomságúra őrölt búzacsírát alkalmazunk, amely lehet eredeti állapotában vagy zsírtalanított. A zsírtalanított búzacsíra használata azonban nem jár különös előnyökkel. A fermentálást sütőélesztővel (Saccharomyces cerevisiae) végezzük; a sütőélesztő kereskedelmi forgalomban kapható. A fermentáció ideje 10-24 óra, előnyösen 15-20 óra, célszerűen körülbelül 18 óra. A fermentálást általában 25-35 °C-on, előnyösen 30 °C körüli hőmérsékleten végezzük. A búzacsíra és a sütőélesztő tömegaránya általában 4:1-2:1, előnyösen körülbelül 3:1 lehet; a szárazanyag és víz tömegaránya pedig általában 1:6-1:12, előnyösen körülbelül 1:9 lehet.
A fermentálást - laboratóriumi méretben - például úgy végezhetjük, hogy üvegfermentorban a friss, őrölt búzacsírához a fent megadott arányban hozzákeverjük a sütőélesztő vízzel készült szuszpenzióját, majd az elegyet kevertetjük vagy rázógépen rázatjuk, miközben a fermentlé felhabosodik. A fermentáció befejeztével az elegyet 5-15 percig 2000-4500 ford./perc, előnyösen 3000 ford./perc fordulatszámmal centrifugáljuk, majd az így kapott felülúszót forraljuk, lehűtjük és alkalmas módon, például liofilizálással vagy porlasztva szárítással beszárítjuk. Barnásvörös port kapunk, amely a találmány szerinti anyag. Célszerű ezt az anyagot további felhasználásig higroszkópos volta miatt a levegő kizárásával tárolni. Az így kapott szárazanyag 2,6-DMBQ-tartalma körülbelül 0,4 mg/g.
Ipari méretű fermentálás esetén (például 4 köbméteres fermentáció) a fermentációt előnyösen folyamatos levegőztetéssel, célszerűen 1/2 liter levegő/liter fermentlé/perc, lassú kevertetés mellett, 18 órán át végezzük. A habzás megakadályozására szokásos habzásgátlókat adhatunk a fermentációs elegyhez, előnyösen napraforgóolajat alkalmazunk. A fermentáció végén leállítjuk a keverést és levegőztetést, és a fermentlevet elválasztjuk a búzacsíra-élesztő szuszpenzióból ismert módon, például csigás dekanterben, majd szeparátorban és végül szűrőprésben, adott esetben szűrési segédanyag jelenlétében. Szűrési segédanyagként előnyösen szűrőperlitet alkalmazunk 5-10 kg/m fermentlé mennyiségben. A fermentlevet tükrösre (élesre) szűrjük, az élességet mikroszkópos vizsgálattal ellenőrizzük. A szűrt fermentlé gyakorlatilag sejtmentes, ami azt jelenti, hogy minden 10. látómezőben van 1 élesztősejt. Az így kapott fermentlevet, melynek szárazanyag-tartalma körülbelül 1,5 tömeg%, vákuumsűrítőben bepároljuk, előnyösen 40-50 °C-on, majd a vákuum megszüntetésével atmoszferikus nyomáson forrásban tartjuk körülbelül 15 percig. Ezáltal a káros enzimaktivitások csökkenését érhetjük el. Ezután az oldatot célszerűen porlasztva szárítással, például egy forgótárcsás porlasztószárítóban beszárítjuk. A fenti fermentációs körülmények között - a kiindulási búzacsíra benzokinontartalmától függően - a kapott fermentált, szárított növényi anyag
2,6-DMBQ-tartalma 0,12-0,52 mg/g szárazanyag és 2MBQ-tartalma 0,05-0,28 mg/g szárazanyag.
Mivel a végtermék higroszkópos, a porlasztva szárítás jobb kivitelezhetősége és a végtermék jobb kezelhetősége érdekében valamely szokásos adalékanyag, így például maltodextrin, gumiarábikum, guargumi, xantán, szentjánoskenyérmag-liszt stb., előnyösen maltodextrin jelenlétében végezhetjük a porlasztva szárítást. Ebben az esetben előnyösen úgy járunk el, hogy a vákuumsűrítőben bepárolt és felforralt oldat szárazanyagtartalmát meghatározzuk, és annyi maltodextrint adunk hozzá, hogy a szárításra kerülő oldat szárazanyag-tartalma körülbelül 30 tömeg% legyen. Ehhez a maltodextrint előnyösen forró vízben feloldjuk, majd hagyjuk lehűlni, és úgy adjuk a besűrített oldathoz. A szárítás után kapott por alakú végtermék körülbelül 60 tömeg% fermentált, szárított növényi anyagot és körülbelül 40 tömeg% maltodextrint tartalmaz.
A kapott anyag stabilitása a 2,6-DMPQ koncentrációjának változásával követhető nyomon, és a mennyiségi analízis HPLC-vel végezhető. A fenti módon előállított por szobahőmérsékleten körülbelül 3 évig stabil.
A találmány szerinti fermentált, szárított anyag immunstimuláns és metasztázist gátló gyógyszerkészítmények hatóanyagaként alkalmazható. A gyógyszerkészítmény a hatóanyag mellett aszkorbinsavat vagy például citosztatikumokat is tartalmazhat.
A találmány szerinti hatóanyag a szokásos szilárd vagy folyékony gyógyszerkészítményekké dolgozható fel, amelyek perorális vagy parenterális stb. beadásra alkalmasak. A gyógyszerkészítmények előállításánál figyelembe kell venni, hogy az anyag higroszkópos, tehát a gyógyszerformát is ennek megfelelően kell megválasztani. Célszerű gyógyszerforma a kapszula, amely úgy alakítandó ki, hogy a hatóanyagot a levegő nedvességétől megvédje. A gyógyszerkészítmények előállításához a szokásos és gyógyszerészeti gyakorlatban használatos segédanyagok használhatók fel. Ilyen segédanyagokat és ezek felhasználását a gyógyszerészeti szakkönyvek kellő részletességgel ismertetik, ennélfogva a megfelelő gyógyszerforma kiválasztása és elkészítése a szakember számára rutinfeladat. A hatóanyag egyszeri adagja a beteg állapotától fiiggően tág határok között változhat, és minden esetben az orvos feladata a megfelelő hatásos adag megválasztása. Általában kielégítő eredmények érhetők el egy kg testtömegre vonatkoztatva 0,001-100 g, előnyösen 0,01-50 g, előnyösebben 0,1-40 g, például 0,1-10,1-25 vagy 10-30 g dózisokkal.
A találmány szerinti hatóanyag aszkorbinsawal (Cvitamin) is összekeverhető. Vizsgálataink szerint bizonyos kísérleti modellekben a C-vitamin fokozhatja a találmány szerinti anyag metasztázist gátló hatását. A növényi anyag és az aszkorbinsav tömegaránya például 10:1-1:1, előnyösen 6:1-2:1, előnyösebben 3:1, 4:1 vagy 5:1 lehet.
A találmány szerinti fermentált, szárított anyag felhasználható immunstimuláns és/vagy metasztázist gátló kezelési eljárásban is. Az eljárás lényege, hogy a kezelendő betegnek a fermentált, szárított anyag hatásos mennyiségét adjuk be.
HU 223 344 Bl
A találmány szerinti fermentált, szárított anyagot emlősöknél táplálékkiegészítőként is alkalmazhatjuk. Erre a célra előnyösen a maltodextrint tartalmazó keveréket alkalmazzuk az élelmiszeriparban szokásosan alkalmazott segédanyagokkal, mint például aromaanyagok, édesítőszerek, élelmiszer-színezékek stb., vagy a tápszerkészítésben szokásosan alkalmazott anyagokkal, mint például fehérje, szénhidrát, ásványi anyagok, vitaminok stb. együtt. A táplálékkiegészítőt például úgy állíthatjuk elő, hogy a körülbelül 60 tömeg% szárított anyagot és körülbelül 40 tömeg% maltodextrint tartalmazó port aromával és édesítőszerrel fluid ágyban granuláljuk, és az instant granulátumot például zacskókba csomagoljuk.
Az alábbiakban ismertetjük az ábrákat:
1. ábra: a 2,6-DMBQ HPLC-mérésének kalibrációs diagramja
2. ábra: a kloroformos extraktum HPLC-kromatogramja
3. ábra: az etanolos extraktum HPLC-kromatogramja
4. ábra: B16 tumorsejtek letapadása különböző dózisú liofilizátum jelenlétében a kihelyezéstől számított 60. és 90. percben (minden érték 8 párhuzamos mérés átlagát ±SD mutatja be; a kiértékelés spektrofotometriás méréssel történt)
5. ábra: a liofilizátum különböző dózisainak hatása a B16 sejtek proliferációjára a kezelés kezdetétől számított 24 és 48 óra múlva (minden érték 8 párhuzamos mérés átlagát ±SD reprezentálja; a kiértékelés spektrofotometriás méréssel történt)
6. ábra: az A2058 jelű humán melanoma viselkedése különböző dózisú liofilizátum jelenlétében a kezelés kezdetétől számított 24 óra elteltével. A tenyészetek kiértékelése fehéqetartalom (SRB) és dehidrogenázaktivitás (MTT) alapján párhuzamosan spektrofotometriás méréssel történt (minden érték 8 párhuzamos mérés átlagát ±SD mutatja be)
7. ábra: az A2058 jelű humán melanoma in vitro tenyészetében különböző dózisú liofilizátumkezelést követően megjelenő apoptotikus sejtek aránya (FACS-analízis)
A találmány szerinti fermentált, szárított anyagot, előállítását és farmakológiai hatásait a következő példákkal illusztrálva részletesen ismertetjük.
1. példa
Búzacsíra fermentációja laboratóriumi méretben
100 g friss, lisztfmomságúra őrölt búzacsírához, amely megfelel a magyar szabványnak (MSZ-081361-80), hozzákevertünk 33,3 g pékélesztőből (Saccharomyces cerevisiae) és 1000 ml ivóvízből álló szuszpenziót. Az elegyet 30 °C-on, 18 órán át rázógéppel rázattuk. A fermentlé ez idő alatt felhabosodott, és kiindulási térfogatának közel 3-szorosára duzzadt. A fermentáció befejeztével az elegyet 15 percig 3000 min-' fordulaton centrifugáltuk. A felülúszót forraltuk, majd lehűtöttük, és liofilezéssel szárítottuk. A liofilizátumot további felhasználásig hűtőben (-10 °C) tároltuk. A kapott liofilizátum 2,6-DMBQ-tartalma 0,4 mg/g szárazanyag (0,04 tömeg%).
2. példa
Búzacsíra ipari méretű fermentációja
Egy 5 köbméteres fermentorba betöltöttünk 300 kg lisztfmomságúra őrölt, a magyar szabványnak megfelelő búzacsírát és 100 kg élesztőt, majd feltöltöttük ivóvízzel 4000 literre. A fermentációt folyamatos levegőztetés (1/2 1 levegő/1 fermentlé/perc), lassú kevertetés mellett (30 ford./perc), 18 órán át végeztük. Habzásgátlásra köbméterenként 11 napraforgó-étolajat adtunk az elegyhez. A fermentáció végén leállítottuk a keverést és levegőztetést, és a fermentlevet elválasztottuk először egy csigás dekanteren, majd szeparátoron és végül egy vásznas szűrőprésen történő átvezetéssel, köbméterenként 10 kg szűrőperlit segédanyag jelenlétében. A fermentlevet tükrösre (élesre) szűrtük, az élességet mikroszkópos vizsgálattal ellenőriztük. A szűrt fermentlé gyakorlatilag sejtmentes, ami azt jelentette, hogy minden 10. látómezőben van 1 élesztősejt. Az így kapott fermentlevet, melynek szárazanyag-tartalma körülbelül 1,5 tömeg%, vákuumsűrítőben 40-50 °C-on bepároltuk, majd a vákuum megszüntetésével atmoszferikus nyomáson körülbelül 15 percig forrásban tartottuk. Ezután meghatároztuk az oldat szárazanyag-tartalmát, és annyi - előzőleg forró vízben feloldott, majd lehűtött - maltodextrint adtunk hozzá, hogy a besűrített oldat szárazanyag-tartalomra nézve kb. 30 tömeg%-os legyen. Ezután az oldatot porlasztva szárítással egy nyíró porlasztófejes forgótárcsás porlasztószárítóban beszárítottuk, amelyben a kilépő levegő hőmérséklete kb. 90 °C volt. Az így kapott végtermék por 60 tömeg%-ban találmány szerinti fermentált növényi anyagot és 40 tömeg%-ban maltodextrint tartalmazott. 2,6-DMBQ-tartalma az alábbi példában megadott módszer szerint HPLC-vel meghatározva 0,4 mg/g szárazanyag.
3. példa
A találmány szerinti anyag jellemzése
A találmány szerinti anyagot kétféle módon jellemeztük, egyrészt 2,6-dimetoxi-p-benzokinon-tartalmának meghatározásával, másrészt úgynevezett ujjlenyomatkromatogram („fingerprint”) készítésével, mindkét esetben HPLC-kromatográfiával.
Az analitikai vizsgálatokat az 1. példa szerint kapott liofilizátumból és a 2. példa szerint kapott porlasztva szárított anyaggal is elvégeztük, és mindkét esetben ugyanazt azt az eredményt kaptuk.
A) Benzokinonszármazékok mennyiségi és minőségi analízise
Minta-előkészítés
Az analitikai vizsgálatok előtt a liofilizátum benzokinonokra való töményítése vált szükségessé. Ehhez a liofilizátumot desztillált vízzel az eredeti koncentrációig (1 tömeg% szilárdanyag-tartalom) hígítottuk (0,5 g liofilizátum, 50 ml desztillált víz). Az oldatot
HU 223 344 Bl másfélszeres mennyiségű (3x25 ml) kloroformmal, 3 lépésben extraháltuk. A kloroformos fázist vízmentes nátrium-szulfáton megszárítottuk. Szűrés után a kloroformos fázist bepároltuk, a maradékot kloroformmal 5 ml-re kiegészítettük. Ez a minta került injektálásra a HPLC-analízis során.
A benzokinonszármazékok mennyiségi és minőségi analízisét HPLC-módszerrel végeztük.
HPLC-módszer leírása
Az alkalmazott HPLC-berendezés Beckman modell 114M pumpa, LaborMIM UV-, illetve mód. 4500 Merck-Hitachi-DAD diódasoros detektor, és Waters 740 típusú integrátoregységekből állt. A méréshez Chromsil C18 (250x4 mm) 10 μ-os oszlopot használtunk. Az UV-detektálást 290 nm hullámhosszon végeztük, az áramlási sebesség 2 ml/perc volt.
Az alkalmazott eluens összetétele a következő volt: Na2HPO4 25 mM, NaH2PO4 25 mM, Na2EDTA 25 mM, NH2OH.HC120 mM, 10 tf% metanol, pH=6,05.
Három különböző, benzo-, illetve hidrokinont vizsgáltunk meg a fent leírt módszerrel. A vegyületek retenciós ideje között kicsi a különbség. Az eluens erősségét csökkentve - a szerves fázist 10%-ra - a szelektivitás nagymértékben javult. A retenciós adatok elemzése azt mutatja, hogy a p-benzokinonok nagyobb retenciót mutatnak, mint a megfelelő hidrokinonok, és a retenció a metoxicsoportok számával növekszik. Mindhárom standard koncentrációja 0,1 mg/ml. A standardok retenciós idejét (tR) és kapacitási tényező (k’) adatait a 2. táblázat tartalmazza. Számunkra a 2,6-dimetoxi-p-benzokinon kimutatása és mennyiségi meghatározása volt a cél, ezért a méréseknek ezzel a részével foglalkoztunk tovább részletesebben. Megvizsgáltuk, hogy a kidolgozott módszer alkalmas-e a 2,6-dimetoxi-p-benzokinon mennyiségi elemzésére. Felvettünk egy kalibrációs diagramot, amely az 1. ábrán látható. Jó közelítéssel egyenest kaptunk, a korrelációs koefficiens 0,99. Ellenőriztük a mérés reprodukálhatóságát is, három párhuzamos mérést végeztünk minden mintából, s számoltuk az adatok szórását. Az 1. táblázat kb. három hónapon keresztül mért minták párhuzamos értékeit és azok szórását mutatja be. Eredményeink alapján megállapítható, hogy a mérési módszer alkalmas 2,6-dimetoxi-p-benzokinon pontos és reprodukálható mérésére.
1. táblázat
2,6-DMBQ mennyiségi analízisének párhuzamos értékei és az eredmények szórása
| Dátum | 2,6-DMBQ-tartalom (mg/50g minta) | (σ-%) | ||
| IV. 27. | 3,45 | 3,54 | 3,66 | 0,08-2 |
| IV. 28. | 3,27 | 3,68 | 3,31 | 0,18-5 |
| V. 10. | 1,56 | 1,49 | 1,48 | 0,03-1,9 |
| [ V. 10. | 3,65 | 3,42 | - | 0,12-3 |
| 1 VI. 8. | 3,00 | 2,98 | 2,86 | 0,06-2 |
| [ VI. 9. | 2,92 | 3,06 | 2,87 | 0,08-2,3 |
| I VI. 10. | 3,34 | 3,23 | 3,36 | 0,05-1,5 |
2. táblázat
A vizsgált anyagok retenciós idő (tR) és kapacitási tényező (k’) értékei
| I Standard | 4r | k’ |
| S 2,6-DMBQ | 13,4 | 5,0 |
| | 2,6-DMHQ | 5,1 | L2 |
| I 2-MBQ | 8,5 | 2,7 |
A fentiekben leírt módon előkészített kloroformos minta HPLC-kromatogramját a 2. ábrán mutatjuk be. A kromatogram csak egy csúcsot mutat, amely jellemző a 2,6-DMBQ-ra. Ennek alapján határoztuk meg a minta 2,6-DMBQ-tartalmát.
B) Ujjlenyomat-kromatogram készítése Minta-előkészítés g porlasztva szárított anyaghoz (2. példa szerinti) 50 ml 96%-os etanolt adtunk. Az elegyet 30 percen keresztül 50 °C-on 200 ford./perc sebességgel rázattuk. Ezután az elegyet leszűrtük, szárazra pároltuk, majd a maradékot 10 ml metanolban oldottuk. A szűrt oldatot injektáltuk az oszlopra.
HPLC-módszer
A fentiekben megadott HPLC-készüléket, oszlopot és körülményeket alkalmaztuk azzal az eltéréssel, hogy az eluens összetétele az alábbi volt: Na2HPO4 1,25 mM, NaH2PO4 1,25 mM, Na2EDTA 1,25 mM, NH2OH.HC1 2,50 mM, 5 tf% metanol.
A kapott HPLC-kromatogramot a 3. ábrán mutatjuk be. Amint az ábrából látható, ilyen körülmények között jellegzetes csúcs jelent meg kb. 4,7 percnél (5), majd 5,8 percnél (6). Két csúcs (7, 8) jelent meg 7,3, illetve 7,7 perces retenciós időnél szorosan egymás után, amelyek nem válnak el egymástól teljesen. Kisebb intenzitású csúcs jelent meg 9,8 percnél (9), majd egy jellegzetes intenzív csúcs (11) 13,1 perc körül. 15 perc körül egy kisebb csúcs (12), majd 18 percnél egy újabb intenzív csúcs (14) látható a kromatogramon. 21,8 percnél egy kisebb csúcs (15) és 31 perc körül egy laposabb, több anyagot is tartalmazó csúcs jelent meg a kromatogramon.
C) Stabilitási vizsgálatok
A találmány szerinti anyag bomlékonyságát a 2,6dimetoxi-p-benzokinon koncentrációjának változásán keresztül ellenőriztük. Tárolási kísérleteket végeztünk különböző hőmérsékleten, úgymint szobahőmérsékleten (20-25 °C), 40 °C és 60 °C-on. A kb. 1 g-nyi liofilizátumot légmentesen zárt kémcsövekben tároltuk az adott hőmérsékleteken. A kísérletek 8 hétig tartottak, mintavétel (három párhuzamos mérés) minden héten történt mindegyik hőmérsékletű sorozatból. A benzokinonszármazékok mennyiségi analízisét HPLC-vel végeztük. Azt találtuk, hogy a találmány szerinti szárított anyag szobahőmérsékleten stabil (még 3 év után is), azaz a 2,6-DMBQ mennyisége gyakorlatilag változatlan. Ugyanakkor 40 °C-on már nem stabil (a 2,6DMBQ pár hét alatt lebomlik), és 60 °C-on rohamosan bomlik (a 2,6-DMBQ mennyisége már pár nap alatt lecsökken).
HU 223 344 Bl
Megvizsgáltuk a 2-metoxi-p-benzokinon bomlását is. Ez a vegyület sokkal bomlékonyabb a 2,6-dimetoxip-benzokinonnál, s ennek megfelelően már az első hét után nem tudtuk kimutatni sem a 40 °C-on, sem a 60 °C-on tárolt mintákból. Szobahőmérsékleten ennek a vegyületnek a mennyisége sem változott.
4. példa
Hatástani vizsgálatok
A hatástani vizsgálatokat az 1. példa szerinti liofilizátummal és a 2. példa szerinti porlasztva szárított anyaggal is elvégeztük. Egy standardizált szárított anyagot alkalmaztunk, melynek 2,6-DMBQ-tartalma 0,4 mg/g szárazanyag volt, és HPLC-görbéje megfelel a 2. ábrának. Mindkét anyaggal ugyanazokat az eredményeket kaptuk, az egyszerűség kedvéért a továbbiakban a találmány szerinti anyagra „liofilizátum”-ként hivatkozunk. Erre a liofilizátumra vonatkozó biológiai és toxikológiai vizsgálatok eredményeit foglaljuk össze az alábbiakban, különös tekintettel annak immunrekonstitúciót keltő és daganatnövekedést és áttétképzést gátló hatására.
I. Daganatnövekedést és metasztázist gátló hatás (in vivő vizsgálatok)
A kísérletekhez a következő, egereken vagy patkányokon növekedő átoltható daganatvonalakat használtuk: Lewis lung karcinóma (egértüdőrák) magasan áttétképző variánsa (3LL-HH), B16 egérmelanoma és HCR-25 humán kolonkarcinóma xenograft.
A 3LL-HH (LLT-HH) és B16 tumorokat C57B1/6 beltenyésztett egereken tartottuk fenn. A HCR-25 xenograftot timektómiával és egésztest-besugárzással immunszupprimált CBA/CA egerekre oltottuk. A 3LLHH és HCR-25 tumor esetében a daganatsejtek oltása a lépbe, B16 melanoma esetében a bal alsó végtag izomzatába történt. Az állatok egy kezelt és egy kontrollcsoportjával HCR-25 tumor esetében splenektómiát (lép eltávolítása) végeztünk, 21 nappal a tumor lépbe oltása után.
A találmány szerinti liofilizátummal a kezelést a daganat beoltása után 24 órával kezdtük meg. Per os, gyomorszondán át vittük be naponta a 3 g/testtömeg kg dózisnak megfelelő mennyiséget 0,6 g/ml vizes szuszpenzió formájában.
A kísérletet 3LL-HH tumor esetében 14 nappal, B16 tumor esetében 21 nappal és HCR-25 tumor esetében 51 nappal a daganat beoltása után fejeztük be az állatok altatásban történő elvéreztetésével.
A kísérletek eredményeit a 3., 4. és 5. táblázatban foglaltuk össze.
3. táblázat
A találmány szerinti liofilizátummal végzett kezelés hatása a májáttétek számára lépbe oltott 3LL-HH egértüdőrák esetében
| Kezelés | Beoltott sejtszám | Májáttétek száma |
| Kontroll | 3xl03 | 104,0±28,2 |
| Liofilizátum | 3xl03 | 29,8± 16,4* |
*p<0,01, minden egyes kísérleti csoport 10-10 állatból állt
4. táblázat
A találmány szerinti liofilizátummal végzett kezelés hatása a májáttétek számára 51 nappal a HCR-25 humán kolonkarcinóma immunszuppresszált CBA/CA egerek lépébe történt oltás után
| 1 Kezelés | Tumoros lép tömege (g) | Májmetasztázisok száma |
| Kontroll nem lépirtott | l,02±0,59 | 42,0±25,8 |
| Liofilizátum nem | lépirtott | 0,62±0,47 | 19,5±19,0 |
| Kontroll lépirtott* | 0,10+0,02 | 19,1±13,5 |
| Liofilizátum lépirtott* | 0,08±0,02 | 10,6±ll,6 |
* A lépeltávolítást 21 nappal a tumor lépbe oltása után végeztük, minden egyes kísérleti csoport 12-12 állatból állt.
5. táblázat
A találmány szerinti liofilizátummal végzett kezelés hatása a tumorral oltott végtag tömegére és a tüdőmetasztázisok számára végtagizomba oltott B16 melanoma esetében 21 nappal a tumor oltása után
| 1 Kezelés | A tumoros végtag tömege (átlag) | Tüdőmetasztázisok száma (átlag) |
| | Kontroll | 7,6±0,43 | 42,4±10,2 |
| I Liofilizátum | 7,2±0,38 | 6,2±3,7* |
* p<0,01, minden kísérleti csoport 10-10 állatból állt
A fenti adatokból látható, hogy a találmány szerinti liofilizátummal történő kezelés szignifikánsan, 71%kal csökkentette a lépbe oltott 3LL-HH tumor tüdőmetasztázisainak számát (3. táblázat).
HCR-25 humán kolonkarcinóma esetében az 50 napig tartó kezelés mind a tumoros lép tömegét, mind a májmetasztázisok számát csökkentette. Az áttétek száma a kontrolihoz képest mind a splenektomizált, mind a nem splenektomizált kezelt állatokban 50% körüli volt (4. táblázat).
Az izomba oltott B16 melanoma esetében a liofilizátummal történő kezelés hatására az izomban növekedő tumor tömege nem változott, viszont a tüdőmetasztázisok száma igen szignifikánsan, 85%-ban csökkent a kontrolihoz viszonyítva (5. táblázat).
II. In vitro vizsgálatok
Tekintettel arra, hogy a fenti kísérletek egyértelműen arra utalnak, hogy a találmány szerinti liofilizátum képes a rosszindulatú daganatok áttétképzését jelentős mértékben csökkenteni, megvizsgáltuk a készítmény hatását az áttétképzésben fontos szerepet játszó, néhány lépésben. A metasztázisképződés egy többlépcsős folyamat, melyben a primer tumor sejtjeinek proliferációs és apoptotikus aktivitása, a daganatsejtek adhéziós (letapadási) készsége és a szervezetnek a daganatsejtekkel szembeni védekező mechanizmusai egyaránt szerepet játszanak. In vitro vizsgálatainkban a találmány szerinti liofilizátum sejtproliferációra és apoptózisra, valamint az adhézióra kifejtett hatását tanulmányoztuk.
HU 223 344 Bl
Mivel az in vivő kísérleteink nagy részét B16 egérmelanomasejteken végeztük, első kísérleteinkben ezt a tumort használtuk a liofilizátum tesztelésére.
1. Adhéziós teszt
A tumorsejtek letapadását 96 lyukú tenyésztőlemezen a liofilizátum 300, 3000, illetve 30 000 pg/ml dózisa jelenlétében szérummentes és szérumot (10% FCS) tartalmazó RPMI-tápközegben egyaránt, 10, 30, 60, 90 és 120 perccel a szokásos szövettenyésztési körülmények között történő inkubálás után vizsgáltuk. A kiértékelés kolorimetriás eljárással az SRB-teszt [Mossmann T.: J. Immunoi. Meth. 65, 55-63 (1983)] alapján történt (a teszt a tenyészet össz-fehéijetartalmának szulforodamin B-festésén alapszik, az abszorbanciát 570 nmen spektrofotométerrel olvassuk le). A 4. ábrán csak két időpontot ábrázoltunk, amely azonban jól reprezentálja a liofilizátum hatását, nevezetesen, hogy a liofilizátum 3000 pg/ml és természetesen ennek tízszeres dózisa drámaian csökkenti a tumorsejtek letapadását szérummentes és szérumot tartalmazó környezetben egyaránt. 300 pg/ml dózisnál ez a hatás még nem figyelhető meg.
2. Proliferáciös teszt
Ebben a tesztben a tumorsejteket a kezelés előtt 24 órával helyeztük ki a 96 lyukú tenyésztőlemezre. A liofilizátum megfelelő dózisaival végzett kezelést követően 24, 48 és 72 óra múlva ugyancsak SRB-teszt segítségével határoztuk meg a sejtek proliferáciös aktivitását. A kapott eredmények szerint, melyeket ismételt kísérletek is bizonyítottak - a liofilizátummal történő kezelés hatására a 900-15 000 pg/ml-es tartományban a tumorsejtek az egysejtrétegből (monolayer) felúsznak, és tripánkék festékkizárásos módszerrel [Kaltenbach J. P. et al.: Exp. Cell Rés. 15, 112-117 (1985)] bizonyítottuk, hogy a felúszott sejtek elpusztulnak (5. ábra).
Vizsgálataink humán amelanotikus melanomán [A2058 tumorsejt - Todaro G. J. et al.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77, 5258-5262 (1980)] az egér melanotikus melanomához hasonló eredményt mutattak (6. ábra). Ezen tumor esetén az SRB-teszttel párhuzamosan a sejt metabolikus aktivitását reprezentáló MTTtesztet [Colé S. P. C.: Cancer Chemother. Pharmacol. 17, 259-263 (1986)] is elvégeztük. (A teszt azon alapul, hogy a metabolikusan aktív sejt, elsősorban dehidrogenázaktivitása révén a tetrazóliumsót színes formazántermékké alakítja át. A színreakciót, amely az aktivitással arányos, spektrofotométerrel 570 nm-en olvashatjuk le.) Az MTT-teszt világosan bizonyította, hogy a tumorsejtek funkcionális aktivitása még 300 pg dózis esetén is csökkent (4. ábra). Mivel a felúszott sejtek esetén az apoptózis (sejthalál) oka ismeretlen volt, flow cytometriás (FACS) analízissel megvizsgáltuk a teljes sejtpopuláció apoptotikus aktivitását (7. ábra). Amint a 7. ábrán látható, a tumorsejtek dózisfiiggően és szokatlanul magas arányban voltak apoptózisban.
111. Immunválaszra kifejtett hatások vizsgálata
A találmány szerinti liofilizátum immunválaszra kifejtett hatását két különböző modellben vizsgáltuk. Az egyik kísérletsorozatban a liofilizátummal kezelt állatok lépéből nyert mononukleáris sejtek blasztos transzformálhatóságát, míg egy másik, az allograft bőrtranszplantációs kísérleti modellben az egerek háti régiójába beültetett bőrtranszplantátumok teljes lelökődését vizsgáltuk.
1. T-limfociták blasztos transzformációjának vizsgálata
Az immunválaszban fontos szerepet játszó T-limfociták blasztos transzplantációjának mértékét a találmány szerinti liofilizátummal végzett kezelés szignifikánsan emeli. Ezt a következő kísérlettel igazoltuk.
C57B116 egereket 6 héten át heti 5 alkalommal kezeltünk per os, gyomorszondán át 3 g/kg dózisban a találmány szerinti liofilizátummal (0,6 g/ml vizes szuszpenzió formájában). A kezelés befejezése után az állatok lépéből perfúzió útján nyert limfocitákat sejttenyészetbe vittük, ahol azok 1 pg/ml konkonavalin A (Con A)-kezelésben részesültek, majd 48 óra múlva 0,4 pCi 3H-timidinnel jelöltük meg a DNS-szintézist folytató sejteket. A jelölődés mértékét folyadékszcintillációs számláló (Beckman) segítségével határoztuk meg. Amint azt a 6. táblázat mutatja, a Con A-kezelés szignifikánsan emelte a kontrollal szemben a 3H-TdR-beépülést, tehát a blasztos transzformációt.
6. táblázat 3H-timidin-beépülés a kontroll- és a liofilizátummal kezelt egerek léplimfocitáiba
| Kezelés | 1 pg/ml ConA | |
| átlag (cpm) | SEM | |
| Kontroll | 3760,6 | 583,3 |
| Liofilizátum | 8041,8 | 957,1 |
2. Immunstimuláns hatás vizsgálata allograft bőrtranszplantációs modellben A károsított immunválasz helyreállítását (restitúció) legjobban timektómiával (timusz műtéti eltávolítása) részlegesen immundeficienssé tett egereken végzett allograft bőrátültetési kísérletben modellezhetjük. A C57B1 io és a B10LP egértörzsek csak a H-3 lókuszban különböznek egymástól, így az egyik törzsről a másikra oltott bőr nem 7 napon belül, hanem mintegy 3 héten belül lökődik le. Ha a recipiens timektómián esett át, a lelökődési idő 50 nap körül lesz átlagosan. Minden olyan szer, amely a csontvelői limfociták érését, differenciálódását a timuszhormonokhoz hasonlóan elősegíti, lerövidíti az átültetett bőr kilökődéséhez szükséges időt [J. Immunopharmacology 7, 67-78 (1985)]. Ez következett be a találmány szerinti liofilizátummal végzett kezelés hatására a következő kísérletünkben.
Recipiensként C57B11O egereket, donorként B10LP egereket használtunk. A recipiens egerek timektómián estek át, majd 7 hét múlva végeztük a bőrátültetést, donorként B10LP egereket használva. A liofilizátumos kezelést egy héttel a timektómia után kezdtük meg, éspedig per os adagoltunk naponta, gyomorszondán át 30 mg/kg liofilizátumot, heti 5 alkalommal. A kezelést 70 nappal a bőrátültetés után fejeztük be. A bőr lelökődést naponta végzett megfigyeléssel regisztráltuk.
A 7. táblázatból kitűnik, hogy a nem timektomizált egerek esetében a bőr lelökődése 21 (hímek), illetve 28,7 (nőstények) nap volt, ez timektómia hatására 52,4,
HU 223 344 Bl illetve 41,6 napra nyúlt meg. A találmány szerinti liofilizátummal végzett kezelés igen szignifikánsan megrövidítette a timektomizált és kezelt egerek esetében a bőrátültetések (bőrgraftok) túlélését. Ez arra utal, hogy a kezelés hatására a timektómia után bekövetkezett immundeficiencia jelentősen mérséklődött, tehát a vizsgált anyag immunstimuláns hatással rendelkezik.
7. táblázat
A találmány szerinti liofilizátummal végzett kezelés hatása bőrgraftok kilökődésére (recipiens: C57B110, donor: B10LP egér)
| Kezelés | Kilökődés ideje | |||
| Hím | Nőstény | |||
| Átlag (napok) | SEM | Átlag (napok) | SEM | |
| Kontroll (nem timektomizált) | 21,0 | 3,1 | 28,7 | 4,5 |
| Kontroll (timektomizált) | 52,4 | 5,0 | 41,6 | 5,5 |
| Liofilizátum (30 mg/kg) | 28,8* | 8,6 | 32,6** | 4,5 |
* 0,001 <p<0,01 vs timektomizált kontroll ** 0,01 <p<0,05 vs timektomizált kontroll
A találmány szerinti liofilizátummal végzett in vitro és in vivő vizsgálataink arra utalnak, hogy ez a készítmény igen jelentős antimetasztatikus hatással rendelkezik, több állatkísérleti modellben. Ez a hatás nagy valószínűséggel összefügg az in vivő és in vitro egyaránt észlelt immunstimuláns hatással, de az antiproliferatív, apoptózist előidéző és az adhézióra kifejtett, valamint szabadgyök-képző effektusok is hozzájárulhatnak az áttétek számának csökkentéséhez.
IV. Gyökfogó aktivitás vizsgálata
Tekintettel a benzokinonok ismert, a szabad gyökök képződésére kifejtett hatására, megvizsgáltuk a találmány szerinti liofilizátum gyökfogó aktivitását. Mind a szuperoxid-gyökfogó- (SSA), mind a hidroxil-gyökfogó- (OH-SA) aktivitást mértük, elektronspinrezonanciamódszerrel. A liofilizátum jelentős SSA-val rendelkezik, számszerűen kifejezve 1 mg-jának tiszta gyökfogóaktivitása megfelel 5,64 pg szuperoxid-dizmutáz (SÓD) aktivitásának. A liofilizátum OH-SA-aktivitással nem rendelkezik, viszont zavaija a hidrogén-peroxid/Fe hidroxilgyökképző rendszert, tehát feltételezhető, hogy úgynevezett non-chelator aktivitással rendelkezik.
V. Toxikológiai vizsgálatok (szubakut)
A 77 napos toxikológiai vizsgálatokat a Registry of Industrial Toxicology Animal-data (RITA) ajánlásai alapján végeztük [Exp. Toxic. Pathol. 47, 247-266 (1995)] F344 patkányokon és C57B116 egereken. Az állatokat naponta kezeltük 3 g/kg dózisban (0,6 g/ml vizes szuszpenzió). A kezelési periódusban az állatok testtömegváltozását, a patológiásnak tekinthető fizikai elváltozásokat, az állatok spontán elhullását kísértük figyelemmel. A kísérlet végén a szív, tüdő, timusz, lép, máj, vese és here tömegét megmértük, majd kórszövettani vizsgálatnak vetettük alá a RITA által előírt 34 szervet. Spontán elhullást nem észleltünk, az állatok testtömege a kontrollnak megfelelően alakult. A kísérlet befejezésekor a szervtömegek nem mutattak a kontrolihoz viszonyítva eltérést. A kezelt állatok szerveinek kórszövettani feldolgozása során semmi olyan elváltozást nem észleltünk, ami a szer által okozott károsító hatásra utalt volna.
A fentiek alapján tehát a találmány szerinti fermentált anyag nem toxikus, és immunstimuláns hatása miatt minden, az immunrendszer károsodásával járó állapotban ajánlható. Továbbá fenti biológiai tulajdonságai alapján felhasználható lehet a rosszindulatú daganatok gyógyszeres kezelésének kiegészítésében, elsősorban a metasztázisok képződésének gátlására.
Claims (12)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag, amely búzacsíra vizes közegben, Saccharomyces cerevisiae jelenlétében végzett fermentálásával nyerhető fermentléből származik.
- 2. Az 1. igénypont szerinti anyag, amelynek HPLCkromatogramja lényegében megfelel a 3. ábra szerintinek.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti anyag, amelynek 2,6-dimetoxi-p-benzokinon-tartalma 0,12-0,52 mg/g szárazanyag és 2-metoxi-p-benzokinon-tartalma 0,05-0,28 mg/g szárazanyag HPLC-vel meghatározva.
- 4. A 3. igénypont szerinti anyag, amelynek 2,6-dimetoxi-p-benzokinon-tartalma 0,4 mg/kg szárazanyag.
- 5. Eljárás immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag előállítására, azzal jellemezve, hogy őrölt búzacsírát vizes közegben Saccharomyces cerevisiae jelenlétében fermentálunk, a fermentlevet elválasztjuk, tükrösre szűqük, forraljuk, és adott esetben szárítási segédanyag jelenlétében beszárítjuk.
- 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentálást 30 °C körüli hőmérsékleten, körülbelül 18 órán át, folyamatos levegőztetés és kevertetés mellett végezzük.
- 7. Az 5. vagy 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szárítást maltodextrin jelenlétében végezzük.
- 8. Immunstimuláns és metasztázist gátló gyógyszerkészítmény, amely hatóanyagként az 1-4. igénypontok bármelyikében definiált szárított anyagot tartalmaz.
- 9. Táplálékkiegészítő vagy tápszer emlősök számára, amely az 1-4. igénypontok bármelyikében definiált szárított anyagot tartalmaz.
- 10. A 9. igénypont szerinti táplálékkiegészítő vagy tápszer, amely az 5-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárással előállított szárított anyagot tartalmaz, amely 60 tömeg%-ban fermentált anyagból és 40 tömeg%-ban maltodextrinből áll.
- 11. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti szárított anyag alkalmazása immunstimuláns és metasztázist gátló gyógyszerkészítmények előállítására.
- 12. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti szárított anyag alkalmazása táplálékkiegészítő vagy tápszer előállítására emlősök számára.
Priority Applications (36)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9801797A HU223344B1 (hu) | 1997-08-13 | 1998-08-05 | Immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag, ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények, eljárás az előállítására és alkalmazásai |
| PCT/HU1998/000077 WO1999008694A1 (en) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented vegetal material |
| KR1020007001459A KR100544376B1 (ko) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | 면역증강성 및 전이억제성 발효된 식물성 추출물, 약제학적 조성물 및 이의 용도 |
| YU7200A YU7200A (sh) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Fermentirani biljni materijal koji je imunostimulatoran i inhibira metastaze |
| AT98940483T ATE227580T1 (de) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunstimulierendes und metastasehemmendes fermentiertes material aus weizenkeim |
| ES98940483T ES2186208T3 (es) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Material fermentado inmunoestimulante e inhibidor de metastasis procedente de germen de trigo. |
| EP98940483A EP1003536B1 (en) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented material from wheat germ |
| AU88802/98A AU754815B2 (en) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented vegetal material |
| CZ20000418A CZ298654B6 (cs) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Fermentovaný a vysušený rostlinný materiál, zpusob jeho prípravy, farmaceutický výrobek, dietní doplnek a použití vysušeného rostlinného materiálu |
| GEAP19985247A GEP20032988B (en) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunostimulatory and Metastasis Inhibiting Fermented Vegetal Material, Pharmaceutical Compositions and Use Thereof |
| CNB988101254A CN1192099C (zh) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | 植物性发酵物质及其制备方法及其应用以及含该物质的药用组合物和饮食添加剂 |
| TR2000/00404T TR200000404T2 (tr) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Fermente edilmiş bitkisel malzemeyi inhibe eden bir immunostimülatör ve metastaz, farmasötik kompozisyonlar ve kullanım. |
| EA200000212A EA003090B1 (ru) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Ферментированный высушенный материал, способ его получения и его применение для получения фармацевтической композиции и диетической добавки, а также фармацевтическая композиция и диетическая добавка, содержащие указанный материал |
| EEP200000078A EE04222B1 (et) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunostimuleeriv ja metastaase inhibeeriv fermenteeritud taimne materjal |
| DE69809434T DE69809434T2 (de) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunstimulierendes und metastasehemmendes fermentiertes material aus weizenkeim |
| SI9830286T SI1003536T1 (en) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented material from wheat germ |
| CA002300208A CA2300208C (en) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented vegetal material |
| SK182-2000A SK1822000A3 (en) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | IMMUNOSTIMULATORY AND METASTASIS INHIBITING FERMENTED VEGETALì (54) MATERIAL |
| IL13449398A IL134493A (en) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented vegetal material |
| KR1020057013782A KR100544377B1 (ko) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | 맥아의 발효에 의해 얻어진 발효액으로부터 유도된건조물질을 함유하는 식이 보충물 |
| SK186-2000A SK282917B6 (sk) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Fermentovaný a vysušený rastlinný materiál, spôsob jeho prípravy, farmaceutický výrobok, diétny doplnok a použitie vysušeného rastlinného materiálu |
| PT98940483T PT1003536E (pt) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Material vegetal fermentado imunoestimulador e inibidor de metasteses |
| PL338891A PL191414B1 (pl) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Sfermentowany, wysuszony materiał roślinny o działaniu immunostymulującym i hamującym przerzuty nowotworowe, sposób jego wytwarzania, środek farmaceutyczny, dodatek żywnościowy oraz zastosowanie sfermentowanego, wysuszonego materiału roślinnego |
| BRPI9811936-2A BR9811936B1 (pt) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Material vegetal fermentado imunoestimulante e inibidor de metástase, processo para sua produção e seus usos |
| YUP-72/00A RS49692B (sr) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Imunostimulirajući i metastaza inhibirajući fermetnirani materijal iz pšenične prekrupe |
| DK98940483T DK1003536T3 (da) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunstimulerende og metastasehæmmende materiale af hvedekim |
| IDW20000424A ID25515A (id) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Bahan tumbuhan terfermentasi penghambat rambatan penyakit (metastasis) dan stimulator kekebalan |
| MEP-2000-72A ME00638B (me) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Imunostimulirajući i metastaza inhibirajući fermentirani materijal iz pšenićne prekrupe |
| JP2000509431A JP4387586B2 (ja) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | 免疫刺激及び転移阻害用の発酵植物性材料 |
| US09/485,221 US6355474B1 (en) | 1997-08-13 | 1998-08-13 | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented vegetal material |
| UA2000020979A UA67747C2 (uk) | 1997-08-13 | 1998-11-08 | Ферментований та висушений рослинний матеріал для імуностимуляції та запобігання метастазам, спосіб його виготовлення, фармацевтичний продукт та харчова добавка для ссавців, що його містять |
| NO20000675A NO323562B1 (no) | 1997-08-13 | 2000-02-10 | Immunstimulerende og metastasehemmende fermentert torket materiale, fremstilling og anvendelser derav samt kosttilskudd og farmasoytisk produkt. |
| BG104220A BG64038B1 (bg) | 1997-08-13 | 2000-03-06 | Имуностимулиращ и инхибиращ метастази ферментационен растителен материал |
| HK01103870A HK1033097A1 (en) | 1997-08-13 | 2001-06-05 | Fermented vegetal material, process for producing it, the use thereof, the pharmaceutical composition and dietary supplement containing the same. |
| JP2009170505A JP4861458B2 (ja) | 1997-08-13 | 2009-07-21 | 免疫刺激及び転移阻害用の発酵植物性材料 |
| JP2011168726A JP4886087B2 (ja) | 1997-08-13 | 2011-08-01 | 免疫刺激及び転移阻害用の発酵植物性材料 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9701392A HUP9701392D0 (en) | 1997-08-13 | 1997-08-13 | Immunostimulating and methastasis-inhibiting plant extract, pharmaceutical compositions containing thereof, process for production of plant extract and use for production of immunostimulating and metastasis-inhibiting pharmaceutical composition thereof |
| HU9801797A HU223344B1 (hu) | 1997-08-13 | 1998-08-05 | Immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag, ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények, eljárás az előállítására és alkalmazásai |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP9801797D0 HUP9801797D0 (en) | 1998-09-28 |
| HUP9801797A2 HUP9801797A2 (hu) | 1999-05-28 |
| HUP9801797A3 HUP9801797A3 (en) | 1999-06-28 |
| HU223344B1 true HU223344B1 (hu) | 2004-06-28 |
Family
ID=90014226
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9801797A HU223344B1 (hu) | 1997-08-13 | 1998-08-05 | Immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag, ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények, eljárás az előállítására és alkalmazásai |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6355474B1 (hu) |
| EP (1) | EP1003536B1 (hu) |
| JP (3) | JP4387586B2 (hu) |
| KR (2) | KR100544376B1 (hu) |
| CN (1) | CN1192099C (hu) |
| AT (1) | ATE227580T1 (hu) |
| AU (1) | AU754815B2 (hu) |
| BG (1) | BG64038B1 (hu) |
| BR (1) | BR9811936B1 (hu) |
| CA (1) | CA2300208C (hu) |
| CZ (1) | CZ298654B6 (hu) |
| DE (1) | DE69809434T2 (hu) |
| DK (1) | DK1003536T3 (hu) |
| EA (1) | EA003090B1 (hu) |
| EE (1) | EE04222B1 (hu) |
| ES (1) | ES2186208T3 (hu) |
| GE (1) | GEP20032988B (hu) |
| HK (1) | HK1033097A1 (hu) |
| HU (1) | HU223344B1 (hu) |
| ID (1) | ID25515A (hu) |
| IL (1) | IL134493A (hu) |
| ME (1) | ME00638B (hu) |
| NO (1) | NO323562B1 (hu) |
| PL (1) | PL191414B1 (hu) |
| PT (1) | PT1003536E (hu) |
| RS (1) | RS49692B (hu) |
| SK (2) | SK282917B6 (hu) |
| TR (1) | TR200000404T2 (hu) |
| UA (1) | UA67747C2 (hu) |
| WO (1) | WO1999008694A1 (hu) |
| YU (1) | YU7200A (hu) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002507246A (ja) | 1998-04-24 | 2002-03-05 | シーケイ ウィトコ コーポレイション | シラン又はシラン処理の充填剤を用いる粉末の塗料又は接着剤 |
| FR2815822B1 (fr) * | 2000-10-30 | 2004-08-27 | Roquette Freres | Additif carbone pour fermentations alimentaires et compositions alimentaires le contenant |
| FR2834718B1 (fr) * | 2002-01-15 | 2004-12-24 | Cognis France Sa | Substances actives cosmetiques et/ou pharmaceutiques |
| EP1503776B1 (en) * | 2002-05-02 | 2011-12-21 | E-L Management Corp. | Method of enhancing biological activity of plant extracts |
| HUP0202638A3 (en) * | 2002-08-09 | 2007-08-28 | Hidvegi Mate Dr | Use of fermented wheat-germ extract for preparation of antiphlogistic compositions |
| EA009170B1 (ru) * | 2002-08-13 | 2007-10-26 | Мате Хидвеги | Применение ферментированных зародышей пшеницы в ветеринарной практике |
| MXPA05001725A (es) * | 2002-08-13 | 2005-05-27 | Mate Hidvegi | El uso de germen de trigo fermentado en la alimentacion y practica veterinaria. |
| WO2007140277A1 (en) | 2006-05-24 | 2007-12-06 | Vitality Concepts Corporation | Method for embedding and targeted release of micronutrients in activated dietary fibers |
| US7365102B1 (en) | 2007-02-26 | 2008-04-29 | Delphi Technologies, Inc. | Process for pre-reforming hydrocarbon fuels |
| HUP0900614A2 (en) | 2009-09-29 | 2011-05-30 | Mate Dr Hidvegi | Preparation comprising dehydrated, fermented material with amorphous crystaline structure and process for its production |
| EP2403513A2 (en) * | 2009-03-06 | 2012-01-11 | Maté Hidvégi | Fractions of wheat germ ferment |
| US20130122580A1 (en) * | 2010-01-08 | 2013-05-16 | Sumitomo Bakelite Co., Ltd. | Culture vessel for forming aggregated cell mass |
| US20120164132A1 (en) * | 2010-08-02 | 2012-06-28 | Mate Hidvegi | Anticancer and immunomodulating molecules and fractions containing said molecules, and process for preparing said fractions and said molecules from fermented vegetal material, and their uses |
| GB201108560D0 (en) | 2011-05-20 | 2011-07-06 | 3 Ch Ltd | Use of fermented wheat germ in the treatment of inflammatory bowel disease |
| GB201110746D0 (en) | 2011-06-23 | 2011-08-10 | Biropharma Uk Ltd | Wheat germ derived material |
| US11090353B2 (en) | 2013-04-22 | 2021-08-17 | David Wales | Gluten-free grain-concentrate substitute for fermented wheat germ drug product and method preparation |
| US11129389B2 (en) | 2013-04-22 | 2021-09-28 | David Wales | Gluten-free grain-concentrate substitute for fermented wheat germ food product and method of preparation |
| JP2017033691A (ja) * | 2015-07-30 | 2017-02-09 | 三菱自動車工業株式会社 | 車載電池パック、リチウムイオン補充装置、及びリチウムイオン補充方法 |
| CN107455551A (zh) * | 2016-06-06 | 2017-12-12 | 铜陵安尔生物科技有限公司 | 麦胚发酵黄酮提取物及其制备方法与在动物饲养中的应用 |
| JP6739774B2 (ja) * | 2018-06-25 | 2020-08-12 | 学校法人立命館 | がんの治療、予防、改善、抑制又は転移抑制用組成物 |
| EP3659444B1 (en) | 2018-11-27 | 2023-12-06 | Gyula Bencze | Gluten-free grain-concentrate substitute for fermented wheat germ food product and method of preparation |
| WO2022091075A1 (en) * | 2020-11-01 | 2022-05-05 | Aili Life Sciences Ltd. | Combination compositions of probiotics with fermented wheat germ extract and uses thereof |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63230774A (ja) * | 1987-03-19 | 1988-09-27 | Seinosuke Ueda | 紫青系色素の製法 |
| JP2618286B2 (ja) * | 1990-10-25 | 1997-06-11 | 免疫代謝薬製造株式会社 | 降圧酵母製剤及びその製造法 |
| KR940001544B1 (ko) * | 1990-11-21 | 1994-02-24 | 강권중 | 은행잎을 위시한 천연약재로부터 미생물의 공서배양에 의한 건강식품의 제조방법 |
| JP3296433B2 (ja) * | 1990-11-30 | 2002-07-02 | 日本食品化工株式会社 | 酒類の製造法 |
| US5231017A (en) | 1991-05-17 | 1993-07-27 | Solvay Enzymes, Inc. | Process for producing ethanol |
| RU94040718A (ru) * | 1992-02-06 | 1997-03-10 | Био-Текникал Ресорсиз (US) | Способ получения концентрированного продукта со вкусом пива и способ приготовления солода |
| CA2168584C (en) * | 1993-08-09 | 2008-10-14 | Edward Baral | A method for sensitization of cancer cells for killer cell mediated lysis |
| JPH07155136A (ja) * | 1993-12-03 | 1995-06-20 | Nippon Mektron Ltd | 植物発酵エキス粉末の製造方法 |
| EP1090553A3 (en) * | 1993-12-24 | 2001-04-18 | Dsm N.V. | Dry yeast compositions |
| DE69428213T2 (de) * | 1994-01-06 | 2002-06-13 | Hyd Kutato-Fejleszto Ktf, Budapest | Nahrungsmittel zur verhinderung der entwicklung von erkrankungen und verfahren zur herstellung dieser nahrungsmittel |
| JP3471879B2 (ja) * | 1994-01-20 | 2003-12-02 | ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ | セリンキナーゼ活性の抑制方法、ｐｉ３−キナーゼのサブユニット間の結合活性の調整方法、ｐｉ３−キナーゼのサブユニット結合抗体、この抗体を生成するハイブリドーマ細胞系、核酸分子、プラスミド、アゴニスト、アンタゴニスト、ｐｉ３−キナーゼ活性を抑制するサブユニット結合分子、サブユニットの存在検出方法、ｐｉ３−キナーゼ活性の抑制剤製造方法、およびｐｉ３−キナーゼ活性の抑制剤 |
| JP2875739B2 (ja) * | 1994-04-27 | 1999-03-31 | エーザイ株式会社 | ＮＦκＢ活性阻害剤 |
| ATE187768T1 (de) * | 1994-05-27 | 2000-01-15 | Agrano Ag | Verfahren zur gewinnung einer biomasse aus einem medium von getreide, verwendung der erhaltenen produkte und brottreibmittel |
| JP4167733B2 (ja) * | 1996-12-16 | 2008-10-22 | 花王株式会社 | ＮＦ−κＢ活性化抑制剤 |
-
1998
- 1998-08-05 HU HU9801797A patent/HU223344B1/hu active IP Right Grant
- 1998-08-11 DE DE69809434T patent/DE69809434T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 WO PCT/HU1998/000077 patent/WO1999008694A1/en active IP Right Grant
- 1998-08-11 EP EP98940483A patent/EP1003536B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 KR KR1020007001459A patent/KR100544376B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 CN CNB988101254A patent/CN1192099C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 SK SK186-2000A patent/SK282917B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 AU AU88802/98A patent/AU754815B2/en not_active Ceased
- 1998-08-11 BR BRPI9811936-2A patent/BR9811936B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 JP JP2000509431A patent/JP4387586B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 RS YUP-72/00A patent/RS49692B/sr unknown
- 1998-08-11 AT AT98940483T patent/ATE227580T1/de active
- 1998-08-11 GE GEAP19985247A patent/GEP20032988B/en unknown
- 1998-08-11 PL PL338891A patent/PL191414B1/pl unknown
- 1998-08-11 ES ES98940483T patent/ES2186208T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 CZ CZ20000418A patent/CZ298654B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 TR TR2000/00404T patent/TR200000404T2/xx unknown
- 1998-08-11 EA EA200000212A patent/EA003090B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 SK SK182-2000A patent/SK1822000A3/sk unknown
- 1998-08-11 YU YU7200A patent/YU7200A/sh unknown
- 1998-08-11 ME MEP-2000-72A patent/ME00638B/me unknown
- 1998-08-11 EE EEP200000078A patent/EE04222B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 KR KR1020057013782A patent/KR100544377B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 PT PT98940483T patent/PT1003536E/pt unknown
- 1998-08-11 CA CA002300208A patent/CA2300208C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 ID IDW20000424A patent/ID25515A/id unknown
- 1998-08-11 IL IL13449398A patent/IL134493A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 DK DK98940483T patent/DK1003536T3/da active
- 1998-08-13 US US09/485,221 patent/US6355474B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-08 UA UA2000020979A patent/UA67747C2/uk unknown
-
2000
- 2000-02-10 NO NO20000675A patent/NO323562B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-03-06 BG BG104220A patent/BG64038B1/bg unknown
-
2001
- 2001-06-05 HK HK01103870A patent/HK1033097A1/xx unknown
-
2009
- 2009-07-21 JP JP2009170505A patent/JP4861458B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-08-01 JP JP2011168726A patent/JP4886087B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU223344B1 (hu) | Immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag, ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények, eljárás az előállítására és alkalmazásai | |
| US20080138395A1 (en) | Pharmaceutical Composition for the Prevention and Control of Cancer | |
| EP3639833A1 (en) | Agent for the prevention or treatment of fat-related diseases and/or inflammation | |
| US20110052732A1 (en) | Mineral absorption accelerator and iron deficiency anemia improver of food composition | |
| KR20190047626A (ko) | 안토시아닌-후코이단 복합체를 유효성분으로 함유하는 면역증강제, 면역항암제 및 항암제 부작용 완화제 | |
| KR20170082249A (ko) | 참옻나무 목심 추출물을 함유하는 항암치료 부작용에 따른 소화기능장애, 백혈구 감소증 및 골수부전증의 개선, 예방 또는 치료용 조성물 | |
| US6616928B1 (en) | Active oxygen scavenger and cancer chemopreventer from Grifola | |
| RU2027434C1 (ru) | Иммуномодулирующее средство | |
| JP2004277414A (ja) | 食用キノコ由来のエストロゲン様活性物質 | |
| EP1535619B1 (en) | Poria extract devoid of secolanostane derivatives comprising lanostane derivatives for immunity enhancement | |
| MXPA00001557A (en) | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented vegetal material | |
| KR20190053309A (ko) | 쌀겨 추출물을 함유하는 피부 개선용 건강기능식품 | |
| EP2133323A1 (en) | The production and use of 3,5-dicaffeoyl-4-malonylquinic acid | |
| KR102169710B1 (ko) | 커큐민 나노스피어, 그 제조방법 및 이의 용도 | |
| CN117159493A (zh) | 壳聚糖季铵盐木犀草素脂质体及其制备方法和应用 | |
| JP2005320307A (ja) | 新規セスキテルペン系化合物、その製造方法及び組成物 | |
| CN101001617A (zh) | 抗肿瘤剂 | |
| KR20150084253A (ko) | 회양목 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| JP2003252782A (ja) | Ｎｋ細胞活性化剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20040301 |
|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: DR. SZENDE BELA, HU Free format text: FORMER OWNER(S): DR. LAPIS KAROLY, HU; DR. RASO ERZSEBET, HU Owner name: DR. TOEMOESKOEZINE FARKAS RITA, HU Free format text: FORMER OWNER(S): DR. LAPIS KAROLY, HU; DR. RASO ERZSEBET, HU Owner name: DR. HIDVEGI MATE, HU Free format text: FORMER OWNER(S): DR. LAPIS KAROLY, HU; DR. RASO ERZSEBET, HU Owner name: TAPSZER KFT., HU Free format text: FORMER OWNER(S): DR. LAPIS KAROLY, HU; DR. RASO ERZSEBET, HU |
|
| QB4A | Exploitation contract |
Name of requester: BIROPHARMA ELSOE MAGYAR BIOTECHNOLOGIAI KFT., HU |
|
| FH92 | Termination of representative |
Representative=s name: S.B.G. & K. UEGYVEDI ES SZABADALMI IRODAK, HU |