HU222200B1 - Kromatográfiai eljárás nagy tisztaságú ciklosporin A és hasonló ciklosporinok kinyerésére - Google Patents
Kromatográfiai eljárás nagy tisztaságú ciklosporin A és hasonló ciklosporinok kinyerésére Download PDFInfo
- Publication number
- HU222200B1 HU222200B1 HU9901801A HUP9901801A HU222200B1 HU 222200 B1 HU222200 B1 HU 222200B1 HU 9901801 A HU9901801 A HU 9901801A HU P9901801 A HUP9901801 A HU P9901801A HU 222200 B1 HU222200 B1 HU 222200B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- smb
- cyclosporin
- product fraction
- acetonitrile
- extract
- Prior art date
Links
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 title claims abstract description 53
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 title claims abstract description 52
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 title claims abstract description 52
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 title claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 title claims abstract description 24
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 108010036941 Cyclosporins Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims abstract description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 69
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 abstract description 11
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 abstract 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 24
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 13
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 5
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 3
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 3
- JTOKYIBTLUQVQV-QRVTZXGZSA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s,21s,24s,30s,33s)-30-[(1r)-1-hydroxyethyl]-33-[(e,1r,2r)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontan Chemical compound C\C=C\C[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H]1N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC1=O JTOKYIBTLUQVQV-QRVTZXGZSA-N 0.000 description 2
- JTOKYIBTLUQVQV-UHFFFAOYSA-N Cyclosporin C Natural products CC=CCC(C)C(O)C1N(C)C(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C(C(C)O)NC1=O JTOKYIBTLUQVQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 150000008280 chlorinated hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 108010019248 cyclosporin C Proteins 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- FWMBRFVXLUJFCT-WKHWYDSQSA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s,21s,24s,30s,33s)-30-ethyl-33-[(e,1r,2r)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,25,28-octamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,17,20 Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O FWMBRFVXLUJFCT-WKHWYDSQSA-N 0.000 description 1
- ZNVBEWJRWHNZMK-SYOLRUPNSA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s,21s,24s,30s,33s)-33-[(e,1r,2r)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21,30-tri(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,17,20,2 Chemical compound C\C=C\C[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H]1N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC1=O ZNVBEWJRWHNZMK-SYOLRUPNSA-N 0.000 description 1
- ZMKGDQSIRSGUDJ-VSROPUKISA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s,21s,24s,30s,33s)-33-[(e,1r,2r)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-30-propyl-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,1 Chemical compound CCC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O ZMKGDQSIRSGUDJ-VSROPUKISA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZSNYYEIGOZADKA-UHFFFAOYSA-N Cyclosporin L Natural products CCC1NC(=O)C(C(O)C(C)CC=CC)NC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O ZSNYYEIGOZADKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMBRFVXLUJFCT-UHFFFAOYSA-N Cyclosporin U Natural products CCC1NC(=O)C(C(O)C(C)CC=CC)N(C)C(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O FWMBRFVXLUJFCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMKGDQSIRSGUDJ-UHFFFAOYSA-N NVa2 cyclosporine Natural products CCCC1NC(=O)C(C(O)C(C)CC=CC)N(C)C(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O ZMKGDQSIRSGUDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029897 Obsessive thoughts Diseases 0.000 description 1
- 241000123975 Trichoderma polysporum Species 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 108010019594 cyclosporin D Proteins 0.000 description 1
- 108010019249 cyclosporin G Proteins 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000002038 ethyl acetate fraction Substances 0.000 description 1
- MHYCRLGKOZWVEF-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hydrate Chemical compound O.CCOC(C)=O MHYCRLGKOZWVEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N etoac etoac Chemical compound CCOC(C)=O.CCOC(C)=O OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- JQOAQUXIUNVRQW-UHFFFAOYSA-N hexane Chemical compound CCCCCC.CCCCCC JQOAQUXIUNVRQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
- C07K7/645—Cyclosporins; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
A találmány tárgya új eljárás ciklosporin A (Cy A) és hasonlóciklosporinok kromatográfiai tisztítására ciklo- sporintartalmú nyersextraktumból kiindulva kromatográfiás eljárással, adszorbenskéntkovasavgélt alkalmazva. Az eljárásra jellemző, hogy a nyersextraktumot a) első kromatográfiás lépésben preparatív HPLC- vagy SMB-technika („simulated moving bed") segítségével a kevésbé polároskísérőanyagokat tartalmazó 1. termékfrakcióra és az inkább polároskísérőanyagokat tartalmazó 2. termékfrakcióra szétválasztják, majd b)az 1. termékfrakciót (raffinátumot) és a 2. termékfrakciót(extraktumot) SMB-technikával végzett második kroma- tografálásnakvetik alá. ŕ
Description
A találmány tárgya új eljárás ciklosporin A (Cy A) és hasonló ciklosporinok kromatográfiai tisztítására. Az eljárás a gyógyszeriparban alkalmazható. Az eljárás során a hatóanyagokat gyógyszergyári célokra megfelelő tisztaságban nyeljük ki; a ciklosporin A esetében ez azt jelenti, hogy a termék a PHARMEUROPA (PHARMEUROPA, 4. köt. 270. oldala, 1992. december) tisztasági követelményeknek eleget tesz.
Miután A. Rüegger és munkatársai [Helv. Chim. Acta 59, 112 (1976)] Trichoderma polysporum (LINKEX PERS.) Rifaiból sikeresen izolálták a ciklosporin A-t, első ízben egy új, erősen immunszupresszív anyagcsoport vált hozzáférhető. Ezóta intenzív kutatások során több, mint 25 hasonló, immunszupresszív és gombaölő hatású ciklosporin vált ismertté [R. Traber és munkatársai, Helv. Chim. Acta 70, 13 (1987)].
Ma már senki sem vitatja, hogy szervátültetések után az immunválasz elnyomásához a ciklosporin Anak van a legtöbb jelentősége. Ennek következtében a múltban nagy erőfeszítéseket tettek az életmentő hatóanyag előállítására kidolgozott eljárások javítására, az egyre csak növekvő mennyiségi és minőségi igények kielégítése érdekében.
A ciklosporin A-tartalmú nyers kivonatok tisztítására kidolgozott műszaki megoldások többnyire többszörös kromatográfiás tisztításon alapulnak, amelynek során eluensként szerves oldószereket alkalmaznak. A. Rüegger fent említett cikke szerint például először kovasavgélen (Kieselgel Merck 0,063-0,2 mm), növekvő részarányban metanolt tartalmazó metanol/kloroform gradienssel kromatografálják a terméket, majd Sephadex LH 20 gélen metanollal végzett gélkromatográfiának vetik alá, végül alumínium-oxidon (Brockmann, Akt. I) növekvő mennyiségű etil-acetátot tartalmazó toluol/etil-acetát gradienssel kromatografálják.
A többi eljárás hasonlóképpen működik (az 1. táblázatban összefoglaltunk néhány ismert eljárást). Adszorbensként gyakran Sephadex LH 20, Kieselgel 60 Merck (0,063-0,2 mm) és semleges alumínium-oxid kerül felhasználásra. Eluensként többnyire szerves oldószerek elegyeit alkalmazzák.
Az oldószerek közül a kloroform és diklór-metán nem alkalmas, mégpedig nagy toxicitásuk következtében, amely problémás, ha oldószermaradványok maradnak a termékben, de problémás biztonságtechnikai szempontból is, ha ezen oldószerek nagyobb mennyiségeit desztillálni vagy ártalmatlanítani kell.
Gradiensek vagy bonyolult, például háromkomponenses oldószerelegy esetén az eluens desztillálása után újra kell beállítani az oldószerelegyet.
A CA 2 096 892 számú kanadai szabadalmi leírás (BIOGAL) szerinti eljárás szerint a nyers kivonatot kromatografálás előtt hőkezelésnek vetik alá, amelynek során a nyersterméket 1 órán át kb. 110 °C-on tartják, majd 5 óra alatt határozott idő-hőmérséklet-fúnkció szerint szobahőmérsékletre hűtik. Ezt követi kovasavgélen (Kieselgel 60) nagy mennyiségű klórozott szénhidrogének felhasználásával végzett egylépcsős kromatografálás, amelynek során egymás után két különböző oldószerelegyet használnak, és a feladott ciklosporin A 15%-át nyerik ki 97,6%-os tisztaságban. Ez az eredmény azonban ipari hasznosítás szempontjából nem kielégítő sem hozam, sem tisztaság vonatkozásában. Emellett ismert, hogy a bonyolult szerkezetű természetes hatóanyagokat - termikus instabilitásuk és lehetséges izomerizálódásuk miatt - nem szabad kitenni hőmérsékleti stressznek.
Az eddigi ismeretek szerint csak a FUJISAWA (WO 9 213094) és a BIOGAL eljárása egylépcsős kromatografálással oldja meg a tisztítást. Ehhez azonban futtatóelegyek, illetve gradiensek szükségesek, ez az oldószer visszanyerését nehezíti. Az eljárások pontos elbírálását akadályozza, hogy többnyire a termék hozamától, tisztaságáról nem közölnek adatokat.
1. táblázat
Ismert kromatográfiás módszerek ciklosporin A tisztítására
| Szabadalom | Cég | Tisztítási lépések |
| US 4 117 118 | SANDOZ | 1. Sephadex LH 20, metanol 2. semleges alumínium-oxid, toluol/etil-acetát gradiens 3. kovasavgél (Kieselgel 60) CHCl3:MeOH 98:2 |
| US 4 215 199 | SANDOZ | 1. kovasavgél, CHC13: MeOH 98:2 2. Sephadex LH 20, metanol 3. kovasav (Kieselgel 60) CHC13: MeOH 98:2 |
| BE 879 402 | SANDOZ | 1. Sephadex LH 20, metanol 2. kovasavgél, hexán:aceton=66:33 3. kristályosítás, aceton, -15 °C |
| WO9 213 094 | FUJISAWA | 1. kovasavgél, hexán hexán/etil-acetát gradiens aceton |
| GB 2 227 489 | BIOGAL | 1. kovasavgél, CHCl3/MeOH/aceton 92:4:4 2. kovasavgél, hexán/aceton gradiens |
| CA 2 096 892 | BIOGAL | 1. kovasavgél, CHCl3/CH2Cl2/EtOH 48:50:2 CHCl3/CH3COOC2H5/EtOH 48:50:2 |
HU 222 200 Bl
Az SMB-technika (Simulated Moving Bed) rövid leírása található például R. M. Nicoud, LC-GC INTL Vol. 5, 5. szám 43-47. oldalán közölt cikkében, valamint K. K. Unger (kiadó), Handbuch dér HPLC, 2. rész, GIT-Verlag Darmstadt, 1994 (lásd 1. ábrát is), a nagynyomású folyadékkromatográfia kézikönyvében.
A technika fent részletezett állása alapján a ciklosporin A kromatográfiás tisztítása területén igény mutatkozik olyan eljárás iránt, amely a termék tisztasága és hozama vonatkozásában a legszigorúbb követelményeknek eleget tesz, különösen
- a ciklosporin A bevitt mennyiségének több, mint a 70%-át a PHARMEUROPÁ-nak megfelelő minőségben szolgáltatja (a kromatográfiás tisztítólépésekre vonatkoztatva)
- minél nagyobb évi termelést tegyen lehetővé, ugyanakkor az álló fázisok oldószer- és anyagigényét erőteljesen csökkentse,
- egyszerű, gyors és robusztus legyen, azaz oldószer és adszorbensek minél hosszabb időn keresztül újrafelhasználhatok legyenek, tehát bonyolultan beállítható, illetve regenerálható oldószerelegyek és gradiensek nem kerülhetnek alkalmazásra,
- klórozott szénhidrogének alkalmazását mellőzze,
- legyen automatizálható, folyamatos eljárásként elvégezhető, ugyanakkor megfeleljen a GMP-szerű termelés kívánalmainak.
A kromatográfiás tisztítás kiindulási anyaga lehet például az ismert módon (DD 295 872 A5) ciklosporin A-tartalmú száraz micélium etil-acetátos extrahálásával és az extraktum petróleumbenzinnel, metanollal, vízzel végzett zsírtalanítása útján nyert nyers kivonat, amely többnyire ismeretlen összetételű, sárga és vörös színű anyagok egész sora mellett az alábbi ciklosporinokat is tartalmazza:
| Ciklosporin | Nemnorm. reláció |
| C | 14,9 |
| B | 13,7 |
| L | 0,2 |
| A | 65,1 |
| G | 1,2 |
| D | 1,2 |
| egyéb | 3,7 |
') HPLC-elemzés a PHARMEUROPA Vol. 4. 4. szám 270. oldala szerint
Első kromatográfiás lépésben a poláros ciklosporinokat (C, B, L, U) elválasztjuk a nem poláros ciklosporinoktól (G, D), így két termékfrakciót kapunk, amely ciklosporin A mellett vagy csak poláros, vagy csak nem poláros szennyezőket tartalmaz. Ez előnyös a kromatografálás 2. lépcsőjében, mert a ciklosprorin A előnyös módon választható el az adott szennyezőktől.
A találmány értelmében a ciklosporin A tisztítását hagyományos HPLC- és SMB-technika (Simulated
Moving Bed) kombinálásával végezzük az alábbiak szerint:
1. lépés: HPLC- vagy SMB-kromatografálás
2. lépés: SMB-technikával végzett kromatografálás Lásd az 1-4. vázlat
Pontosabban kifejtve a találmány tárgya eljárás ciklosporintartalmú nyers kivonatból származó ciklosporin A és hasonló ciklosporinok tisztítására kovasavgélen végzett kromatografálás útján. Az eljárásra jellemző, hogy ciklosporintartalmú nyers kivonatból származó ciklosporin A és hasonló ciklosporinok elegyét kovasavgélen végzett kromatografálás útján
a) első kromatográfiás lépésben preparatív HPLCvagy SMB-technika segítségével a kevésbé poláros kísérőanyagokat tartalmazó 1. termékffakcióra és az inkább poláros kísérőanyagokat tartalmazó 2. termékfrakcióra szétválasztjuk, majd
b) az 1. termékfrakciót (raffinátumot) és a 2. termékfrakciót (extraktumot) SMB-technikával végzett második kromatografálásnak vetjük alá. Ennek során mint az első, mint a második kromatografálást normálfázis/etil-acetát rendszerben vagy fordított fázis/acetonitril-víz rendszerben végezhetjük.
Az SMB-technika az alábbi előnyökkel jár:
- Teljesen folyamatos munkamódszer valósítható meg, azaz az újszerű kromatografálásban nincs szakaszos anyaginjektálás. A folyamatosan üzemeltetett kromatografálás főleg ipari létesítmények esetén fontos.
- Az SMB-technikával töményebb oldatokat lehet feldolgozni. Ezzel a szükséges oldószer mennyisége és ezzel az oldószer-visszanyerésre fordított idő is csökken.
A kedvező gazdasági paraméterek alapján az SMBtechnikát növekvő mértékben biotechnológiai módszerekkel előállított proteinek (Nadler, T. K., Sch. Sci., Purdue Univ. East Lafayette, IN 47 907, USA) és aminosavak (Adachi, S. és munkatársai, Agric. Bioi. Chem. 1991, 55, 925-32) kromatográfiás szétválasztására alkalmazzák.
A találmány szerinti feladat megoldása, azaz ciklosporin A tisztítása során is bebizonyosodott, hogy az SMB-technika a hagyományos kromatográfiás módszerekhez viszonyítva előnyösebb.
Az alábbi táblázat szemlélteti az SMB- és a HPLCtechnika összehasonlítását:
| Fázisrendszer | Paraméter | (SMB: HPLC) arány |
| Normálfázisú rendszer | etil-acetát fogyasztása | 0,7 |
| kovasavgél Si 60 fogyasztása | 0,25 | |
| termelékenység g feladott anyag/(kg adszorbensxnap) | 2,5 | |
| Fordított fázisú rendszer | acetonitril/víz fogyasztás | 0,15 |
HU 222 200 Bl
Táblázat (folytatás)
| Fázisrendszer | Paraméter | (SMB: HPLC) arány |
| RP 18 anyag fogyasztása | 0,15 | |
| termelékenység g feladott anyag/(kg adszorbensxnap) | 10 |
Az SMB-elválasztás legfontosabb műszaki feltétele a különböző részáramok pontos beállítása (lásd példák), hogy az eluálás frontja kvázi állandó legyen.
Az SMB-elválasztás optimális beállításához fontos továbbá a terméknek, valamint a kísérőanyagoknak az adott kromatográfiás rendszerben beálló adszorpciós izotermájának pontos ismerete. Ezeket előzetesen elemzéssel kell meghatározni.
Egy úgynevezett ötödik zóna bevezetésével sikerült a klasszikus négyzónás SMB kétkomponenses elválasztásán túllépni. A járulékos zónában felszerelt öblítőrendszer révén egy cikluson belül olyan szennyeződések is eliminálhatók, amelyek ciklosporín A-hoz viszonyított k’-értéke szélsőséges. így a tennék minőségének további javítása lehetséges.
A szokásos SMB-technikával általában 0,6 és 2,0 közötti k’-értékkel rendelkező komponensek elegye jól szétválasztható (a kívánt termék k’-értéke definíció szerint 1). E tartományon kívül eső komponensek a raffinátumban feldúsulnak a betáplált kiindulási oldathoz képest (1. ábra).
Az új, találmány szerinti eljárásmód értelmében a negyedik és az első zóna közötti átkapcsoláskor az oszlopokat nagy eluálóerővel rendelkező oldószerrel (például metanollal) öblítve definiált állapotba hozzuk. A berendezésnek az éppen ebben az ötödik zónában lévő oszlopai egy ciklus időtartamára ki vannak iktatva a többi négy zóna zárt gyűrűjéből.
Az ötödik zóna műveleteit két lépésre választjuk szét:
1. Az első lépés során az ötödik zóna oszlopait alkalmas, nagy eluálóerővel rendelkező oldószerrel öblítjük, így az álló fázist a hozzátapadt szennyezőktől megszabadítjuk.
Öblítőszerként előnyösen metanolt alkalmazunk. Az RP-anyag öblítése során tiszta acetonitril is alkalmazható, ez egyszerűbb, mert járulékos oldószer nélkül az oldószer visszanyerése egyszerűbb.
2. A második lépésben az oszlopot az adott elválasztáshoz szükséges oldószerrel kezeljük.
Ha egy zóna több oszlopot tartalmaz, az öblítés intenziválható azzal, hogy - ha a zóna ötödik zónaként van kapcsolva - öblítés közben párhuzamosan kapcsoljuk az oszlopokat.
Az első kromatográfiás lépés során keletkező 2. termékfrakció tisztítását szintén sikerült optimálni. Ez a frakció ciklosporín A mellett főleg a poláros szennyezőket, így ciklosporín U-t és L-t tartalmazza. Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy - miután az SMB-berendezésen az extraktum és a raffinátum elvezetési helyét felcseréltük - a 2. termékfrakciót igen jól sikerült szétválasztani. Ennek során a poláros szennyezők a ciklosporin A mellől eluálódnak, mert retenciós idejük rövidebb. Ez azt jelenti, hogy ezt a különleges SMBkapcsolást alkalmazva a 2. kromatográfiás lépésben kizárólag az RP-18 rendszerrel dolgozhatunk, ami az oldószer visszanyerését nagyon egyszerűsíti (1. vázlat).
Az alábbi három példa azt mutatja, hogy az SMBtechnika a második lépésre igen előnyös. A kiindulási anyagok - szennyeződéseik vonatkozásában - tipikus termékfrakciók, mint amilyenek a hagyományos preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiás eszközökkel végzett 1. lépés során keletkezni szoktak.
Az 1. példa az 1. kromatográfiás lépés során kapott termék további tisztítását mutatja be, SMB-technikával, normálfázisú Si 60/etil-acetát rendszerrel. A nyerstermék ciklosporín A mellett főleg poláros szennyezőket tartalmaz. Világosan látható, hogy a poláros ciklosporinok (különösen U és L, valamint B és C) mennyisége csökkent, ami jelzi, hogy az SMB-technikával összekapcsolt elválasztórendszer alkalmas.
A 2. példa olyan közbenső termék tisztítását mutatja be, amely főleg nem poláros szennyeződéseket tartalmaz. A fordított fázisú RP-18/acetonitril/víz rendszerrel (60:40 v/v) végzett SMB-elválasztás után a nem poláros ciklosporinok (különösen G és D) mennyisége erősen csökkent.
A 3. példa olyan közbenső termék tisztítását mutatja, amely főleg nem poláros szennyeződéseket tartalmaz. A tisztítás SMB-technikával történik normálfázis/etilacetát rendszerben. Az extraktum és a raffinátum elvezetési helyét felcserélve az 1. példához viszonyítva a nem poláros szennyeződések jobb eltávolítását, valamint az oldószermennyiség csökkenését éljük el,
A fent leírt finomítás azért meglepő, mert eddig még analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiával sem sikerült a ciklosporín A és a kromatográfiailag rendkívül hasonló kísérőanyagok szétválasztása. A kapott ciklosporín A átkristályosítás után megfelel mind az USP XXIII, mind az EUROPEAN PHARMACOPOEIA, 2. Edition, 1995 előírásainak.
Az 1. ábra ötzónás SMB-tisztítás elvi vázlatát mutatja. A futtatóelegy az 1. és a 4. zóna között körfolyamatban áramlik. A nyersanyagot a 2. és 3. zóna között tápláljuk be a rendszerbe, friss eluálószert a 4. és 1. zóna között adunk fel. A 3. és 4. zóna között levesszük a raffinátumot (a tiszta ciklosporín A-t), az 1. és 2. zóna között extraktumot (ciklosporín A és szennyeződések elegyét) vételezzük. Mindegyik oszlopnak négy szelepe van: nyersanyag és eluálószer betáplálására, valamint extraktum (termék+szennyeződés) és raffinátum (termék) elvételére. A hordozóanyag „mozgását” azzal szimuláljuk, hogy a betápláló és kivezető pontokat az eluálóáram irányához képest változtatjuk, eltoljuk. Ezzel elérhető, hogy az anyag az oszloprendszer fázisai között egyenletesen oszlik meg, és az elvételi pontoknál az eluátum koncentrációja állandó.
Meglepő módon a kísérletek során azt találtuk, hogy az SMB-technikával az egyéb ciklosporinokat, így a cik4
HU 222 200 Bl losporin U és L, valamint G és D melléktermékeket jobban lehetett elválasztani, mint a hagyományos kromatográfiás eljárással, és az egyes lépcsők hozama nagyobb.
Ez azt jelenti, hogy adott termelési volumen mellett kisebb berendezésekkel lehet kijönni, így az oszlop töltésé- 5 re használt anyagból és az eluálószerből is kevesebb kell.
Elvileg természetesen az SMB-technika a kromatografálás első lépésében is alkalmazható (3. vázlat). Ha a nyers extraktum minősége alkalmas arra, azaz főleg a lipofil szennyeződések mennyisége csekély, az első lé- 10 pésben is a fordított fázis/acetonitril/víz rendszerben végezhetjük az SBM-elválasztást (4. vázlat). Azt találtuk továbbá, hogy a fordított fázis/acetonitril/víz rendszerrel poláros szennyeződéseket is el tudunk választani a ciklosporin A-tól, ehhez csupán a raffinátum és az extraktum elvételének a helyét kell felcserélni. Ez megteremti a lehetőségét annak, hogy csupán egyetlenegy rendszert, a fordított fázis/acetonitril/víz rendszert alkalmazva két SMB-lépésben tudjuk elvégezni a ciklosporin A tisztítását. Hasonlóképpen: a hagyományos fázis/etil-acetát rendszerben a nem poláros szennyeződéseket is tudjuk eltávolítani a ciklosporin A-ból, ha a raffinátum és az extraktum elvezetésének helyét felcseréljük, így a ciklosporin A tisztítását csupán a normálfázis/etil-acetát rendszert alkalmazva is kétlépéses SMBtechnikával végezhetjük.
1. vázlat 4
Ciklosporin A - nyers extraktum
| 1. kromatográfiás lépés | Kovasavgél Si 60 | |
| Hagyományos preparatív HPLC | etil-acetát | |
| 1. termékfrakció | 2. termékffakció | |
| nem poláros | poláros | |
| Cy A+Cy G+Cy D stb. | CyA+CyL+CyU |
4
| 2. kromatográfiás lépés | Si 60 | Si 60 | |
| SMB | etil-acetát | etil-acetát |
2. vázlat 4
Ciklosporin A - nyers extraktum
| 1. kromatográfiás lépés | kovasavgél Si 60 | |
| Hagyományos preparatív HPLC | etil-acetát | |
| 1. frakció | 2. frakció | |
| 1 | Cy A+Cy G+Cy D stb. | Cy A+Cy L, Cy U stb. |
4
| 2. kromatográfiás lépés | RP-18 | Si60 |
| SMB | acetonitril, víz | etil-acetát |
| vagy | ||
| az extraktum és raffinátum vételezési pozíciójának felcserélése után | ||
| RP 18/acetonitril/víz |
3. vázlat 4
Ciklosporin A - nyers extraktum
| 1. kromatográfiás lépés SMB | kovasavgél Si 60 etil-acetát | |
| raffinátum | extraktum | |
| Cy A+nem poláros szennyezők | poláros szennyezők feldúsulása (1. példa) |
HU 222 200 Β1
3. vázlat (folytatás)
I
| 2. kromatográfiás lépés SMB | KP-18 acetonitril, víz | |
| raffinátum | extraktum | |
| CyA | a nem poláros szennyezők feldúsulása (2. példa) |
4. vázlat
I
Ciklosporin A - nyers extraktum
| 1. kromatográfiás lépés SMB | RP-18 acetonitril, víz | |
| raffinátum | extraktum | |
| — | Cy A+poláros szennyezők | nem poláros szennyezők feldúsulása (2. példa) |
I
| 2. kromatográfiás lépés SMB | RP-18 acetonitril, víz | |
| raffinátum | extraktum | |
| a poláros szennyezők feldúsulása | CyA |
1. példa lépésben SMB-technikát alkalmazunk normálfázis/etilFőleg poláros ciklosporinok (ciklosporin C, B, L, acetát rendszerben.
U) és ciklosporin A szétválasztása. A 2. kromatográfiás 30
| Berendezés | LiChrosep® 8-50, kísérleti gyártás |
| Oszlop | 8 oszlop, hossz: 100 mm, belső 0 50 mm, axiális kompresszió |
| Álló fázis | LiChrospher® Si 60,5 pm |
| Mobil fázis | etil-acetát |
| Nyerstermék | #011194 ciklosporin tisztaság (%) C 2,3 B 6,9 L 0,7 U 1,2 A 86,2 G 1,0 szennyezés összesen 13,8% |
| Betáplálás | etil-acetátos oldat, 5,8 g/1, ebből 5,3 ml/perc |
| Eluálószer | 100 ml/perc |
| Recycling | 151 ml/perc |
| Detektálás | HPLC-elemzés az extraktum- és a raffinátáramban |
| Eredmények | |
| Raffinátum | Ciklosporin Tisztaság (%) C 0,2 B 0,4 L 0,0 U 0,4 |
HU 222 200 Β1
Táblázat (folytatás)
| A 97,4 G 1,1 D 0,1 szennyezők összesen 2,6% | |
| ciklosporin A hozama: >95% | |
| Extraktum | ciklosporin A: 75,5% szennyezők összesen 24,5% |
| A kísérlet eredménye mutatja az elvi lehetőségét annak, hogy a Si 60/etil-acetát rendszerrel főleg a poláros szennyezőket választhatjuk el a ciklosporin A-tól. |
2. példa
A főleg nem poláros ciklosporinok (ciklosporin G és D) elválasztása ciklosporin A-tól SMB-technika segítségével, az RP-18/acetonitril rendszerben.
| Berendezés | LiChrosep® 8-50, kísérleti gyártás |
| Oszlop | 8 oszlop, hossz: 100 mm, belső 0 50 mm, axiális kompresszió |
| Álló fázis | LiChrospher® RP-18,15 pm |
| Mobil fázis | acetonitril és víz 60:40 térfogatarányú elegye |
| Nyerstermék | #251094 ciklosporin tisztaság (%) L 0,3 U 0,8 A 92,5 G 4,1 D 1,6 szennyezés összesen 7,5% |
| Betáplálás | acetonitriles oldat 1 G/1, ebből 12,7 ml/perc |
| Eluálószer | 81 ml/perc |
| Recycling | 151 ml/perc |
| Detektálás | HPLC-elemzés az extraktum- és a raffinátáramban |
| Eredmények | |
| Raffinátum | Ciklosporin Tisztaság (%) ismeretlen (a=3,4) 0,1 L 0,2 U 0,5 A 99,1 G 0,0 D 0,1 ismeretlen («.=20,1) 0,1 szennyezők összesen 0,9 ciklosporin A-tartalom 99,4% a lépcső ciklosporin A hozama >95% |
| A kísérlet során elért terméktisztaság (a raffinátum tisztasága) 99,1% volt. E termék szárítása után 99,4%-os tisztaságot mutattunk ki. A kísérlet mutatja, hogy az RP-18/acetonitril/víz (60:40 v/v) rendszerrel a nem poláros szennyezőket választhatjuk el a ciklosporin A-tól. |
HU 222 200 Β1
3. példa
A példa főleg nem poláros ciklosporinok (ciklosporin C, G, D) eltávolítását mutatja a 2. kromatográfiás lépésben, SMB-technikával, normálfázis/etil-acetát rendszerben, az extraktum és a raffinátum elvezetési helyének felcserélésével.
| 1 Berendezés | LiChrosep® 12-26, kísérleti gyártás |
| Oszlop | 8 oszlop, hossz: 100 mm, belső 0 26 mm, axiális kompresszió |
| Álló fázis | LiChrospher® Si 60,15-25 pm |
| Mobil fázis | etil-acetát |
| Nyerstermék | ciklosporin tisztaság (%) C 0,04 B 0,122 L 0,075 A 92,462 G 2,934 D 4,177 szennyezés összesen 7,538 |
| Betáplálás | etil-acetátos oldat, 28 g/1, ebből 1,5 ml/perc |
| Eluálószer | 16,4 ml/perc |
| Detektálás | HPLC-elemzés az extraktum- és a raffinátáramban |
| Eredmények | |
| Extraktum | Ciklosporin Tisztaság (%) C 0,02 B 0,075 L 0,063 A 99,364 ismereti. 0,219 G 0,175 szennyezők összesen 0,636% |
| ciklosporin A hozama: >95% | |
| A kísérlet eredménye azt mutatja, hogy az elvezetési helyek felcserélésével az SMB-technikával nem poláros szennyezők is |
nagyon jól eltávolíthatók az Si 60/etil-acetát rendszerben.
Claims (6)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás ciklosporin A és hasonló ciklosporinok tisztítására ciklosporintartalmú nyers extraktumból kiindulva kromatográfiás eljárással, adszorbensként kovasavgélt alkalmazva, azzal jellemezve, hogya) első kromatográfiás lépésben preparatív HPLCvagy SMB-technika („simulated moving bed”) segítségével a kevésbé poláros kísérőanyagokat tartalmazó 1. termékfrakcióra és az inkább poláros kísérőanyagokat tartalmazó 2. termékfrakcióra szétválasztjuk, majdb) az 1. termékfrakciót (raffinátumot) és a 2. termékfrakciót (extraktumot) SMB-technikával végzett második kromatografálásnak vetjük alá.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy45 a) mind az első, mind a második kromatográfiás lépésben a normálfázis/etil-acetát rendszert vagy a fordított fázis/acetonitril-víz rendszert alkalmazzuk,b) az SMB-technikával végzett 2. kromatográfiás lépésben az 1. termékfrakciót (raffinátumot) fordított fá50 zis/acetonitril-víz rendszerben, a 2. termékfrakciót (raffínátumot) normálfázis/etil-acetát rendszerben tisztítjuk,c) az SMB-technikával végzett 2. kromatográfiás lépésben a 2. tennékfrakciót (extraktumot) fordított fázis/acetonitril-víz rendszerben, az 1. tennékfrakciót (raf55 finátumot) normálfázis/etil-acetát rendszerben tisztítjuk.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ötödik zóna bevezetésével öblítést végzünk először alkohollal, majd az eluálószerrel, és amennyiben az ötödik zóna több oszlopot tartalmaz, ezeket párhuza60 mosan kapcsolva öblítjük.HU 222 200 Bl
- 4. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a 2. kromatográfiás lépésben alkalmazott fordított fázis/acetonitril-víz rendszerben az acetonitril: víz arány 40-80:60-20, előnyösen 60:40 (v/v).
- 5. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jel- 5 lemezve, hogy az SMB-berendezésben az oszlopok és az eluálószer hőmérsékletét 40-80 °C-on, előnyösen60 °C-on tartjuk.
- 6. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fordított fázis/acetonitril-víz rendszert alkalmazzuk, és az eluálószer pH-értékét 2 és 5 között, előnyösen 3-nál tartjuk.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1996111094 DE19611094C2 (de) | 1996-03-21 | 1996-03-21 | Verfahren zur Reinigung von Cyclosporin A und/oder verwandten Cyclosporinen aus einem Cyclosporin-haltigen Rohextrakt unter Anwendung chromatographischer Verfahren mit Kieselgel als Adsorbens |
| PCT/DE1997/000525 WO1997034918A1 (de) | 1996-03-21 | 1997-03-14 | Chromatographisches verfahren zur gewinnung von hochgereinigtem cyclosporin a und verwandten cyclosporinen |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP9901801A2 HUP9901801A2 (hu) | 1999-09-28 |
| HUP9901801A3 HUP9901801A3 (en) | 2001-01-29 |
| HU222200B1 true HU222200B1 (hu) | 2003-05-28 |
Family
ID=7788939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9901801A HU222200B1 (hu) | 1996-03-21 | 1997-03-14 | Kromatográfiai eljárás nagy tisztaságú ciklosporin A és hasonló ciklosporinok kinyerésére |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6306306B1 (hu) |
| EP (1) | EP0888382B1 (hu) |
| JP (1) | JP3408818B2 (hu) |
| KR (1) | KR100467127B1 (hu) |
| CN (1) | CN1196711C (hu) |
| AT (1) | ATE210146T1 (hu) |
| CZ (1) | CZ293243B6 (hu) |
| DE (3) | DE19611094C2 (hu) |
| DK (1) | DK0888382T3 (hu) |
| ES (1) | ES2169384T3 (hu) |
| HK (1) | HK1015382A1 (hu) |
| HU (1) | HU222200B1 (hu) |
| IL (1) | IL125807A (hu) |
| NO (1) | NO321570B1 (hu) |
| PL (1) | PL187763B1 (hu) |
| PT (1) | PT888382E (hu) |
| RU (1) | RU2163607C2 (hu) |
| SK (1) | SK282836B6 (hu) |
| WO (1) | WO1997034918A1 (hu) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19858892A1 (de) | 1998-12-19 | 2000-06-21 | Merck Patent Gmbh | Kontinuierliches Verfahren zur Trennung von Stoffen nach Molekülgröße |
| DE69939335D1 (de) | 1998-12-30 | 2008-09-25 | Dexcel Ltd | Dispergierbares konzentrat zur verabreichung von cyclosporin |
| US7732404B2 (en) | 1999-12-30 | 2010-06-08 | Dexcel Ltd | Pro-nanodispersion for the delivery of cyclosporin |
| PL210841B1 (pl) | 2001-10-19 | 2012-03-30 | Isotechnika Inc | Sposób wytwarzania mieszaniny izomerów (E) i (Z) ISATX247 |
| US6843854B2 (en) | 2002-05-31 | 2005-01-18 | Purdue Research Foundation | Method and apparatus for separating a component from a mixture |
| CA2498725C (en) * | 2002-09-13 | 2014-07-08 | Biogen Idec Inc. | Method of purifying polypeptides by simulated moving bed chromatography |
| CN1763084B (zh) * | 2005-10-11 | 2010-04-21 | 山东新时代药业有限公司 | 高纯度环孢菌素a的制备方法 |
| EP2151450A1 (de) | 2008-07-29 | 2010-02-10 | Sandoz AG | Verfahren zur Aufarbeitung von mikrobiologisch hergestellten zyklischen Oligopeptiden |
| CN102086226B (zh) * | 2009-12-04 | 2012-10-10 | 山东新时代药业有限公司 | 一种制备环孢菌素a的方法 |
| US9428711B2 (en) | 2013-05-07 | 2016-08-30 | Groupe Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
| US8802880B1 (en) | 2013-05-07 | 2014-08-12 | Group Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
| EP3118186B1 (fr) | 2013-12-11 | 2022-02-09 | Novasep Process | Installation chromatographique de production d acides gras polyinsatures |
| BR112016015718B1 (pt) | 2014-01-07 | 2021-12-07 | Novasep Process Solutions | Processo de purificação de aminoácidos aromáticos |
| HUP1500502A2 (en) * | 2015-10-26 | 2017-04-28 | Rotachrom Tech Kft | Process for the purification of cyclosporin-a |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB568698A (en) | 1943-05-26 | 1945-04-17 | M O Valve Co Ltd | Improvements in the capping of thermionic valves, electric lamps and like devices |
| US2985589A (en) * | 1957-05-22 | 1961-05-23 | Universal Oil Prod Co | Continuous sorption process employing fixed bed of sorbent and moving inlets and outlets |
| US4117118A (en) | 1976-04-09 | 1978-09-26 | Sandoz Ltd. | Organic compounds |
| US4215199A (en) | 1978-06-05 | 1980-07-29 | Sandoz Ltd. | Antibiotic production |
| SE448386B (sv) | 1978-10-18 | 1987-02-16 | Sandoz Ag | Nya cyklosporinderivat, forfarande for framstellning av dem samt farmaceutisk komposition innehallande dem |
| US4402832A (en) * | 1982-08-12 | 1983-09-06 | Uop Inc. | High efficiency continuous separation process |
| US4923616A (en) * | 1987-09-24 | 1990-05-08 | Mitsubishi Petrochemical Company, Ltd. | Method of separating chemical components in simulated moving bed |
| HU201577B (en) | 1988-12-20 | 1990-11-28 | Gyogyszerkutato Intezet | Process for producing cyclosporin antibiotics |
| WO1992013094A1 (fr) | 1991-01-25 | 1992-08-06 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Procede pour produire de la cyclosporine a et/ou c |
| HU213553B (en) | 1992-05-25 | 1997-07-28 | Biogal Gyogyszergyar | Process for isolating of cyclosporin-a |
| US5709797A (en) * | 1996-06-05 | 1998-01-20 | Poli Industria Chimica S.P.A. | Method of isolating cyclosporins |
-
1996
- 1996-03-21 DE DE1996111094 patent/DE19611094C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-03-14 DK DK97920517T patent/DK0888382T3/da active
- 1997-03-14 EP EP97920517A patent/EP0888382B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 ES ES97920517T patent/ES2169384T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 RU RU98119067/12A patent/RU2163607C2/ru active
- 1997-03-14 JP JP53303697A patent/JP3408818B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 AT AT97920517T patent/ATE210146T1/de active
- 1997-03-14 PT PT97920517T patent/PT888382E/pt unknown
- 1997-03-14 WO PCT/DE1997/000525 patent/WO1997034918A1/de active IP Right Grant
- 1997-03-14 HU HU9901801A patent/HU222200B1/hu active IP Right Grant
- 1997-03-14 CZ CZ19982999A patent/CZ293243B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-03-14 IL IL12580797A patent/IL125807A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-03-14 SK SK1222-98A patent/SK282836B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-03-14 DE DE59705670T patent/DE59705670D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 KR KR10-1998-0707580A patent/KR100467127B1/ko active IP Right Grant
- 1997-03-14 PL PL32911397A patent/PL187763B1/pl unknown
- 1997-03-14 CN CNB971927049A patent/CN1196711C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-21 US US08/821,823 patent/US6306306B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-04-18 DE DE19716167A patent/DE19716167C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-09-08 NO NO19984133A patent/NO321570B1/no not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-02-10 HK HK99100547A patent/HK1015382A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0888382A1 (de) | 1999-01-07 |
| DE19611094A1 (de) | 1997-09-25 |
| EP0888382B1 (de) | 2001-12-05 |
| ES2169384T3 (es) | 2002-07-01 |
| JP2000507237A (ja) | 2000-06-13 |
| IL125807A0 (en) | 1999-04-11 |
| CN1212703A (zh) | 1999-03-31 |
| NO984133L (no) | 1998-09-08 |
| DE19611094C2 (de) | 1999-06-17 |
| DE19716167C2 (de) | 2000-06-29 |
| KR100467127B1 (ko) | 2005-05-27 |
| ATE210146T1 (de) | 2001-12-15 |
| CZ293243B6 (cs) | 2004-03-17 |
| PT888382E (pt) | 2002-05-31 |
| JP3408818B2 (ja) | 2003-05-19 |
| US6306306B1 (en) | 2001-10-23 |
| HK1015382A1 (en) | 1999-10-15 |
| IL125807A (en) | 2003-10-31 |
| DE19716167A1 (de) | 1998-10-22 |
| WO1997034918A1 (de) | 1997-09-25 |
| RU2163607C2 (ru) | 2001-02-27 |
| HUP9901801A2 (hu) | 1999-09-28 |
| DK0888382T3 (da) | 2002-04-02 |
| CN1196711C (zh) | 2005-04-13 |
| NO321570B1 (no) | 2006-06-06 |
| DE59705670D1 (de) | 2002-01-17 |
| HUP9901801A3 (en) | 2001-01-29 |
| CZ299998A3 (cs) | 1999-10-13 |
| NO984133D0 (no) | 1998-09-08 |
| SK122298A3 (en) | 1999-08-06 |
| SK282836B6 (sk) | 2002-12-03 |
| PL187763B1 (pl) | 2004-10-29 |
| KR20000064784A (ko) | 2000-11-06 |
| PL329113A1 (en) | 1999-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU222200B1 (hu) | Kromatográfiai eljárás nagy tisztaságú ciklosporin A és hasonló ciklosporinok kinyerésére | |
| HU213553B (en) | Process for isolating of cyclosporin-a | |
| RU98119067A (ru) | Хроматографический способ получения высокочистого циклоспорина a и родственных циклоспоринов | |
| KR100304324B1 (ko) | 사이클로스포린a의제조방법 | |
| Weldon et al. | Enrichment and purification of peptide impurities using twin-column continuous chromatography | |
| CA2255062C (en) | Process of purification of cyclosporin | |
| US6706192B2 (en) | Purification process | |
| Báthori et al. | Preparative scale purification of shidasterone, 2-deoxy-polypodine B and 9α, 20-dihydroxyecdysone from Silene italica ssp. nemoralis | |
| KR100496929B1 (ko) | 시클로스포린의정제방법 | |
| HRP980604A2 (en) | Purification process | |
| KR100341355B1 (ko) | 사이클로스포린a의제조방법 | |
| Eng et al. | Purification of neuropeptides: Cholecystokinin and vasoactive intestinal peptide | |
| JPH0578538B2 (hu) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20030311 |