NO321570B1 - Fremgangsmate for rensing av cyklosporin A og beslektede cyklosporiner fra en cyklosporinholdig raekstrakt. - Google Patents
Fremgangsmate for rensing av cyklosporin A og beslektede cyklosporiner fra en cyklosporinholdig raekstrakt. Download PDFInfo
- Publication number
- NO321570B1 NO321570B1 NO19984133A NO984133A NO321570B1 NO 321570 B1 NO321570 B1 NO 321570B1 NO 19984133 A NO19984133 A NO 19984133A NO 984133 A NO984133 A NO 984133A NO 321570 B1 NO321570 B1 NO 321570B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- fraction
- cyclosporin
- smb
- extract
- chromatography step
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 57
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 title claims abstract description 41
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 title claims abstract description 40
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 title claims abstract description 33
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 108010036941 Cyclosporins Proteins 0.000 title claims description 16
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims description 14
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims description 23
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 13
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 4
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 claims description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 11
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 7
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- JTOKYIBTLUQVQV-QRVTZXGZSA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s,21s,24s,30s,33s)-30-[(1r)-1-hydroxyethyl]-33-[(e,1r,2r)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontan Chemical compound C\C=C\C[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H]1N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC1=O JTOKYIBTLUQVQV-QRVTZXGZSA-N 0.000 description 3
- JTOKYIBTLUQVQV-UHFFFAOYSA-N Cyclosporin C Natural products CC=CCC(C)C(O)C1N(C)C(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C(C(C)O)NC1=O JTOKYIBTLUQVQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 108010019248 cyclosporin C Proteins 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- 150000005693 branched-chain amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000008280 chlorinated hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 2
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 2
- FWMBRFVXLUJFCT-WKHWYDSQSA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s,21s,24s,30s,33s)-30-ethyl-33-[(e,1r,2r)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,25,28-octamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,17,20 Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O FWMBRFVXLUJFCT-WKHWYDSQSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- ZSNYYEIGOZADKA-UHFFFAOYSA-N Cyclosporin L Natural products CCC1NC(=O)C(C(O)C(C)CC=CC)NC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O ZSNYYEIGOZADKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMBRFVXLUJFCT-UHFFFAOYSA-N Cyclosporin U Natural products CCC1NC(=O)C(C(O)C(C)CC=CC)N(C)C(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O FWMBRFVXLUJFCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001226034 Nectria <echinoderm> Species 0.000 description 1
- 241001335016 Nectria sp. (in: Fungi) Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000012045 crude solution Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
- C07K7/645—Cyclosporins; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for rensing av cyklosporin A og beslektede cyklosporiner fra en cyklosporinholdig råekstrakt.
Ved hjelp av foreliggende oppfinnelse oppnås de aktive bestanddeler under økonomisk gunstige betingelser i en farmasøytisk akseptabel renhet, det vil når det gjelder cyklosporin A, for eksempel si at de oppfyller renhetskravene i "Pharmeuropa"
("Pharmeuropa", vol. 4, nr. 4, side 270, desember 1992).
Med den vellykkede isolering av cyklosporin A fra Trichorderma polysporum (Link ex PERS.) Rifai ved A. Riiegger el. al. ["Heiv. Chim. Acta", 59,112 (1976)] ble for første gang en immunsuppressiv substansklasse tilgjengelig. Ved intense undersøkelser ble det i mellomtiden kjent mer enn 25 beslektede cyklosporiner med immunsuppressiv og anti-fungal aktivitet [R. Traber et al., "Heiv. Chim. Acta", 70,13 (1987)].
I dag er den store betydning av cyklosporin A som det valgte middel ved undertrykkelse av immunforsvaret etter organtransplantasjoner ubestridt. Som følge av dette har det i mellomtiden ikke manglet anstrengelser for å oppfylle de stadig stigende krav hva angår mengde og kvalitet for dette livreddende legemiddel ved forbedring av frem-stillingsmetodene.
De hittil nu kjente tekniske løsninger for opprensing av cyklosporin A-holdige råekstrakter inneholder som oftest flere kromatografitrinn under anvendelse av organiske oppløsningsmidler som elueringsmidler.
Følgelig kromatograferer man i det ovenfor nevnte arbeid av A. Riiegger først på Kieselgel 60 Merck (0,063-0,2 mm) med kloroform med stigende mengder metanol. Deretter blir det oppnådde produkt underkastet en gelkromatografi på Sephadex LH 20 i metanol og deretter til slutt på aluminiumoksyd (Brockmann, Akt. I) i toluen med stigende andeler etylacetat.
En lignende arbeidsmåte benyttes også i senere arbeider (tabell 1). Hyppig anvendes adsorpsjonsmidlene Sephadex LH 20, Kieselgel 60 Merck (0,063-0,2 mm) og nøytralt aluminiumoksyd.
Som elueringsmiddel anvendes som oftest blandinger av organiske oppløsningsmidler.
På grunn av den høye toksisitet er derved kloroform og metylenklorid, både hva angår gjenværende oppløsningsmiddelrester i den aktive bestanddel og også på grunn av de derfrå resulterende sikkerhetstekniske problemer, uegnet ved opparbeiding av større mengder av disse stoffer (destillasjon, deponering).
Videre er, ved anvendelse av gradienter eller kompliserte, for eksempel ternære, iso-kratiske blandinger, en ny innstilling av elueringsmidlene etter destillasjon av eluatene, både omstendelig og dyr.
På samme måte må man også bedømme en av BIOGAL i det kanadiske patent
CA 2 096 892 beskrevet metode der råekstrakten før kromatografien underkastes en temperaturbehandling.
Råproduktet blir her oppvarmet ca. 1 time til ca. 100°C og derefter definert over 5 timer avkjølt igjen til romtemperatur. Under anvendelse av en høy andel klorerte hydrokarboner isolerer man i to etter hverandre anvendte elueringsmiddelsystemer i en en-trinnskromatografi på Kieselgel 60, ca. 15% av den tilsatte mengde cyklosporin A i en renhet på ca. 97,6%. Dette resultat kan imidlertid ikke være tilfredsstillende med henblikk på en industriell utnyttelse når det gjelder utbytte og renhet av den oppnådde aktive bestanddel. I tillegg skal dette kompliserte naturstoff erfaringsmessig ikke ut-settes for noen temperaturbelastninger på grunn av den termiske instabilitet og en mulig isomerisering.
Etter det man i dag vet, er det kun i henhold til Fujisawa (WO 9 213 094) og Biogal (CA 2 096 892) at man kan nøye seg med en entrinnskromatografisk rensing. For dette formål er det imidlertid nødvendig med en komplisert elueringsmiddelkombinasjon henholdsvis en gradient, noe som vanskeliggjør en elueringsmiddelregenerering. For en grundigere bedømmelse av disse metoder mangler det imidlertid ofte opplysninger når det gjelder utbytter og oppnådde produktrenheter.
EP 0 568 698 Al beskriver en fremgangsmåte for fremstilling av cyklosporin A og/eller C ved å dyrke en cyklosporin A og/eller C-produserende bakterie som tilhører slekten Nectria, for eksempel Nectria sp. F-4908 i et medium og isolere der derved produserte cyklosporin A og/eller C fra mediet.
Adachi, s. et al, beskriver i Agricultural and Biological Chemistry, Japan Soc. For Bioscience, Biotechnology and Agrochem., bind 55, nr. 4, s. 9225-932 en fremgangsmåte for å fremstille peptider med definerte egenskaper fra et kaseinhydrolysat behandlet trinnvis med termolysin og papain. Hydrolysatet ble separert ved to kromatografiske trinn til fire peptidgrupper med høye og lave innhold av aromatiske aminosyrer (AAA) og aminosyrer med forgrenet kjede (BCAA). Hydrolysatet ble først separert i AAA-fattige og -rike peptidgrupper ved både en konvensjonell satsvis kromatografi med Sephdex G-I5 og en kontinuerlig, på den samme harpiksen, av en type med simulert bevegelig sjikt.
US 2 985 589 Al beskriver en separasjonsrfemgangsmåte med kontinuerlig bevegelig sjikt. Blandingen som skal fraksjoneres innføres i et delvis pakket sjikt, og elueringsmiddel innføres i et annet delvis pakket sjikt, og to produktrfaksjoner trekkes ut i det vesentlige samtidig. Det foreligger minst fire delvis pakkede sjikt som utgjør en enkelt krets med kontinuerlig sirkulering, og punktene for mating og produktfjernelse forskyves cyklisk i nedstrømsretning i sjiktet av pakningsmaterialet.
US 4 402 832 Al beskriver en fremgangsmåte for å separere en ekstraktkomponent fra en raffinatkomponent i en råstoffblanding. Et ensrettet væskestrømssystem oppretthol-des gjennom en serie av separasjonsenheter hvorigjennom komponentene beveger seg med forskjellige hastigheter. En komponent-konsentrasjonsfordeling etableres i systemet av enheter og oppdeles i forskjellige soner.
US 4 923 616 Al beskriver en fremgangsmåte for å separere kjemiske komponenter i en kontinuerlig separator av typen med simulert bevegelig sjikt. Separatoren omfatter en serie av pakkede sjikt fylt med adsorpsjonsmiddel for selektivt å adsorbere en spesifikk komponent i en råoppløsning. De pakkede sjiktene er oppdelt i tre soner.
Eksempler på enkelte hittil kjente kromatografiske rensemetoder for cyklosporin A:
En kort beskrivelse av SMB-teknikken som sådan finnes for eksempel hos R.M. Nicoud, "LC-GCINTL", vol. 5, nr. 5,43-47 samt K.K. Unger (utgiver), "Handbuch der HPLC", del 2, GIT Verlag, Darmstadt, 1994 (se også figur 1).
Går man ut fra den her beskrevne kjente teknikk har man for en oppfinnerisk løsning av den kromatografiske cyklosporin A-rensing med høye krav til produktrenhet og utbytte, følgende oppgavestilling: • Den nye metode må gi mer enn 70% av det innførte cyklosporin A med en kvalitet tilsvarende Pharmeuropa (henført til de kromatografiske rensetrinn). • Metoden må tilfredsstille de høyeste krav med henblikk på årsproduksjon og samtidig redusere behovet for oppløsningsmidler og materialer for de stasjonære faser på drastisk måte. • Den tekniske løsning må være enkel, hurtig og robust, det vil si at oppløsningsmidler og adsorpsjonsmidler må kunne være gjenanvendbare over et lengst mulig tidsrom. Derved bortfaller også anvendelsen av vanskelig innstillbare, henholdsvis regenerer-bare, isokratisk anvendte oppløsningsmiddelblandinger og gradienter.
• Klorerte hydrokarboner skal ikke anvendes.
• Metoden må gi muligheter for automatisering, henholdsvis for kontinuerlig arbeidsmåte og samtidig tilfredsstille kravene til en GMP-riktig produksjon.
Som utgangsprodukt for den kromatografiske rengjøring tjener for eksempel en råekstrakt som er oppnådd i henhold til kjente metoder (for eksempel DD 295 872 A5) fra cyklosporin A-holdig tørrmycel ved ekstraksjon (etylacetat) og avfetting (petroleum-bensin:metanol:vann) som ved siden av en rekke som oftest ukjente, gul- og rødfargede stoffer samt oljeaktige produkter, for eksempel oppviser følgende sammensetning av cyklosporiner:
I et første kromatografitrinn blir de polare cyklosporiner (C, B, L, U) separert fra de ikke-polare cyklosporiner (G, D) slik at det dannes to ønskede fraksjoner som ved siden av cyklosporin A enten kun inneholder polare eller kun ikke-polare forurensninger. Derved kan man i det andre kromatografitrinn med fordel rense cyklosporin A fra den angjeldende forurensning.
Ifølge oppfinnelsen gjennomfører man høyrensing av cyklosporin A ved hjelp av kromatografisk rengjøring under anvendelse av konvensjonell HPLC i kombinasjon med den "Simulated Moving Bed"-teknikk, SMB, som følger:
1. Kromatografl HPLC eller SMB-teknikk
2. Kromatografi SMB-teknikk
Det skal her henvises til skjema 1 til 4.
Mer spesielt angår oppfinnelsen en fremgangsmåte for rensing av cyklosporin A og beslektede cyklosporiner fra en cyklospoirnholdig råekstrakt under anvendelse av kromatografiske metoder med kieselgel som absorbens, og som kjennetegnes ved at man
a) i et første kromatografitrinn ved hjelp av preparativ HPLC eller SMB-teknikk separerer råekstrakten ved fraksjonssnitt i en oppdelt konsentrasjonsprofil i en fraksjon 1
inneholdende ikke-polare ledsagerstoffer og en fraksjon 2 inneholdende de mere
polare ledsagerstoffer og
b) underkaster fraksjon 1 (raffinar) og fraksjon 2 (ekstrakt) en ytterligere rensing ved hjelp av SMB-teknikk i et andre kromatografitrinn.
Derved kan man gjennomføre både det første kromatografitrinn og det andre kromatografitrinn i et system normalfase:etylacetat eller reversfase, acetonitirl:vann.
Særlig oppnår man følgende fordeler ved anvendelse av SMB-teknikken:
• Man kan gjennomføre en absolutt kontinuerlig arbeidsmåte, det vil si at diskrete substansinjeksjoner bortfaller ved den nye kromatografimodus. En slik kontinuerlig arbeidende kromatografi er fremfor alt fordelaktig for industriell anvendelse. • SMB-teknikken muliggjør arbeidet med mer konsentrerte oppløsninger enn hittil. Derved synker oppløsningsmiddelbehovet og samtidig også den nødvendige tid for oppløsningsmiddelgj envinning.
På grunn av disse gunstige, økonomiske parametere blir SMB-teknikken i tiltagende grad også benyttet for kromatografisk separering av bioteknologisk produserte proteiner
(T.K. Nadler, "F.E. Sch.Sci.", Purdue Univ. East Lafayette, IN 47097 USA) og aminosyrer (S. Adachi et al., "Agric. Biol. Chem.", 1991, 55, 925-32).
Også i det foreliggende tilfellet med rensing av cyklosporin A-holdige produkter kan man fastslå overlegenheten ved SMB sammenlignet med konvensjonelle kromatografi-metoder.
Sammenligning mellom SMB- og HPLC-teknikk.
Den viktigste, tekniske forutsetning for realisering av en SMB-separering er den nøyaktige innstilling av de forskjellige delstrømmer (se eksemplene) for å sikre den kvasi-stasjonære tilstand for elueringsfrontene i avhengighet av koblingstiden.
Videre er det for optimal innstilling av SMB-separeringen nødvendig med en nøyaktig kjennskap til absorpsjonsisotermen for det ønskede produkt samt til forurensningene i det anvendte kromatografisystem. Disse må bestemmes analytisk på forhånd.
Videre har det vært mulig, ved innføring av en såkalt femte sone, å forlate den hittil vanlige to-komponent-separering av den klassiske fire-sone-SMB. Ved det i denne ytterligere sone installerte spylesystem muliggjøres i samme løp også eliminering av forurensningene som i forhold til cyklosporin A oppviser ekstreme k'-verdier. Derved er det mulig med en ytterligere kvalitetsforbedring for det ønskede produkt.
Vanligvis kan man ved en standard SMB-teknikk godt separere blandinger med k'-verdier mellom 0,6 og 2,0 (k' = 1 er det ønskede produkt). Dog blir komponenter som ligger utenfor dette området vanligvis kun spylt ut i ekstrakten på ufullstendig måte, slik at det kommer til en anrikning i raffinatet i forhold til tilført materiale (Feed) (figur 1).
I henhold til den nye arbeidsmåte ifølge oppfinnelsen blir søylene bragt til en definert tilstand ved omkobling mellom den fjerde og den første sone ved spyling med et oppløsningsmiddel med sterk elueringskraft (for eksempel metanol). De angjeldende søyler i apparaturen som befinner seg i den femte sone er derved, for varigheten av en takt, koblet ut fullstendig fra det lukkede ringforbund av de øvre fire soner (figur 1).
Denne femte sone deles derved opp i to delskritt:
1. Under varigheten av det første delskritt blir søylene i den femte sone spylt med et egnet oppløsningsmiddel med høy elueringskraft slik at den stasjonære fase renses for fremdeles vedheftende forurensning.
Som spylemiddel anvendes derved fortrinnsvis metanol. Når det gjelder spyling av RP-materialer kan man også anvende ren acetonitril, hvorved problemet med oppløs-ningsmiddelgjenvinning forenkles på grunn av bortfallet av et ytterligere oppløs-ningsmiddel. 2. I det andre deltrinn sjaltes det om fra spylemidlet til det for den angjeldende separering nødvendig elueringsmiddel.
Hvis søylene er slik fordelt på sonene at det befinner seg flere søyler i den femte sone, kan spyleprosessen intensiveres når disse søyler under spylingen bringes i parallellkobling.
En ytterligere prosessoptimalisering oppnås ved høyrensingen av den såkalte fraksjon 2 i det første kromatografitrinn. Denne fraksjon inneholder ved siden av cyklosporin fremfor alt de polare forurensninger som cyklosporin U og L. Her finner det overraskende, efter bytting av utløpssted for ekstrakt og raffinat på SMB-anlegget, at denne fraksjon 2 deretter meget godt kan separeres. Herved elueres de polare forurensninger før det ønskede produkt cyklosporin A, det vil si at de oppviser en kortere retensjonstid. Dette betyr at ved anvendelse av dette spesielle SMB-oppsett i det andre kromatografitrinn blir i dette trinn så utelukkende arbeidet med RP-18-systemet hvorved oppløsningsmiddelgjenvinningen forenkles sterkt (skjema 1).
I de følgende tre eksempler som viser egnetheten for SMB-teknikken for det andre kromatografitrinn, tilsvarer de anvendte utgangssubstanser, hva angår forurensnings-profilen, typiske fraksjoner slik de foreligger efter det første kromatografitrinn, utført med konvensjonell, preparativ HPLC.
I eksempel 1 vises høyrensingen av et mellomprodukt fra det første kromatografitrinn ved hjelp av SMB-teknikk i normalfasesystemet Si 60:etylacetat. Det anvendte produkt inneholder ved siden av cyklosporin A overveiende polare forurensninger.
I resultatet ser man den tydelige anrikning av de polare cyklosporiner (særlig U og L samt B og C), hvorved den prinsipielle egnethet for separeringssystemet tydeliggjøres i forbindelse med SMB-teknikken.
Eksempel 2 beskriver høyrensing av et mellomprodukt som, som fraksjon 1 overveiende inneholder ikke-polare forurensninger, ved hjelp av SMB-teknikk i systemet reversfase RP-18:acetonitril, vann (60:40, volum/volum). Efter SMB separeringen kan man obser-vere en tydelig utarming av de ikke-polare cyklosporiner (særlig G og D).
I eksempel 3 beskrives høyrensing av et mellomprodukt som inneholder fraksjonen 1 med overveiende ikke-polare forurensninger, ved hjelp av SMB-teknikk i system normalfase:etylacetat.
Sammenlignet med eksempel 1 oppnår man ved bytting av utløpssetet for ekstrakt:raffinat en høyere reduksjon av ikke-polare forurensninger samt en oppløs-ningsmiddelbesparelse.
Finsepareringen er i den grad overraskende da det inntil nylig ikke var mulig, ikke engang ved hjelp av analytisk HPLC, å separere disse kromatografisk svært like ledsagerstoffer, fra cyklosporin A.
Det oppnådde cyklosporin A tilsvarer etter omkrystallisering både kvalitetskravene i henhold til USP XXIII samt i "European Pharmacopoeia", 2. utgave, 1995.
Beskrivelse av figur 1
Elueringsmidlet føres inn i kretsløp mellom sone 1 og sone 4. Materialtilførselen skjer mellom sone 2 og 3. Friskt elueringsmiddel tilsettes mellom sonene 4 og 1. Raffinat (cyklosporin A) trekkes ut mellom sone 3 og 4 og ekstrakt cyklosporin A + forurensninger) mellom sone 1 og 2. Hver søyle er i forband utstyrt med fire ventiler for til-måting (substanstilførsel), elueringsmiddel, ekstrakt (ønsket produkt + forurensninger) og raffinat (ønsket produkt). "Bevegelsen" i bærermaterialet simuleres ved forskyvning av oppsamlings- og tilførselspunktene mot elueringsretningen. Derved kan man oppnå en kontinuerlig substansfordeling mellom fasene i søylesystemet og elueringskonsentra-sjonen i avtrekkingspunktene synes konstant.
Videre kan man i eksperimentelle tester overraskende finne at avskillingen av bicyklo-sporinene U og L på den ene side og G og D på den annen skjer mere fullstendig ved SMB-teknikk enn med konvensjonell kromatografi og at det samtidig er mulig å oppnå høyere utbytter i trinnene. Som følge av dette er det mulig med mindre anlegg for sammenlignbar produktivitet, idet anleggene derved også har mindre behov både for søylefyllmateriale og elueringsmidler.
Naturligvis er det prinsipielt også mulig å anvende SMB-teknikk i det første kromatografitrinn (skjema 3) Derved kan man prinsipielt, når det foreligger egnede råekstrakter (lav oppfylling med ballaststoffer, særlig av lipofil natur) også i det første trinn utføre SMB-separering i systemet reversfase:acetonitril, vann (skjema 4). Da, slik det også ble funnet, også polare forurensninger kan separeres fra cyklosporin A i systemet reversfase:acetonitril, vann etter bytting av raffinat-/ekstraktposisjonen, er det også mulig å gjennomføre cyklosporin A-rensingen kun under anvendelse av systemet reversfase:acetonitril:vann i to trinn ved hjelp av SMB-teknikk, eller også å separere ikke-polare forurensninger i systemet normalfase:etylacetat fra cyklosporin A etter bytting av raffinat-/ekstraktposisjonene, er det da også mulig å gjennomføre cyklosporin A-rensingen kun under anvendelse av systemet normalfase:etylacetat i to trinn ved hjelp av SMB-teknikk.
Eksempel 1
Separering av overveiende polare cyklosporiner (cyklosporinene C, B, L, U) fra cyklosporin A i det andre kromatografitrinn ved hjelp av SMB-teknikken i system normal-fase:etylacetat.
Eksempel 2
Separering av overveiende ikke-polare cyklosporiner (cyklosporinene G, D) fra cyklosporin A ved hjelp av SMB-teknikk i system RP-18:acetonitril, vann.
Eksempel 3
Separering av overveiende ikke-polare cyklosporiner (cyklosporinene C, G, D) fra cyklosporin A i det andre kromatografitrinn ved hjelp av SMB-teknikk i system normal-fase:etylacetat ved bytting av ekstrakt- og raffinat-avtrekkingspunktene.
Claims (6)
1.
Fremgangsmåte for rensing av cyklosporin A og beslektede cyklosporiner fra en cyklosporinholdig råekstrakt under anvendelse av kromatografiske metoder med Kieselgel som adsorpsjonsmiddel, karakterisert ved atman a) i et første kromatografermgstrinn ved hjelp av preparativ HPLC eller "simulated moving bed"-teknikk separerer råekstrakten ved fraksjonssnitt i oppdelt konsentrasjonsprofil i en fraksjon 1 inneholdende ikke-polare ledsagerstoffer og en fraksjon 2 med de mere polare ledsagerstoffer og b) underkaster fraksjon 1 (raffinat) og fraksjon 2 (ekstrakt) en ytterligere rensing ved hjelp av SMB-teknikk i et andre kromatografitrinn.
2.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at man a) gjennomfører både det første kromatografitrinn og det andre kromatografitrinn i system normalfase:etylacetat eller reversfase, acetonitrikvann, b) under fraksjon 1 (raffinat) ved hjelp av SMB-teknikk i system reversfase, acetonitrihvann og fraksjon 2 (ekstrakt) et andre kromatografitrinn i system normal-fase:etylacetat, c) underkaster fraksjon 2 (ekstrakt) ved hjelp av SMB-teknikk i system reversfase, acetonitril:vann og fraksjon 1 (raffinat) et andre kromatografitrinn i system normal-fase:etylacetat.
3.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at man ved hjelp av innføring av en femte sone først gjennomfører et spyletrinn med en alkohol og deretter med elueringsmidlet, og at, ved flere søyler i den femte sone, disse gjennomstrømmes i parallellkobling.
4.
Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at man gjennomfører separeringen i det andre kromatografitrinn i systemet reversfase acetonitril:vann med et forhold acetonitrihvann på 40 til 80 : 20 til 60, fortrinnsvis 60:40, på volumbasis.
5.
Fremgangsmåte ifølge krav 1 og 2, karakterisert ved at søylene og elueringsmidlet i SMB-anlegget holdes i temperaturområdet 40 til 80°C, fortrinnsvis ved 60°C.
6.
Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at man i systemet reversfase/acetomtril, vann innstiller pH-verdien i elueringsmidlet til området 2 til 5, fortrinnsvis til 3.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1996111094 DE19611094C2 (de) | 1996-03-21 | 1996-03-21 | Verfahren zur Reinigung von Cyclosporin A und/oder verwandten Cyclosporinen aus einem Cyclosporin-haltigen Rohextrakt unter Anwendung chromatographischer Verfahren mit Kieselgel als Adsorbens |
| PCT/DE1997/000525 WO1997034918A1 (de) | 1996-03-21 | 1997-03-14 | Chromatographisches verfahren zur gewinnung von hochgereinigtem cyclosporin a und verwandten cyclosporinen |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO984133L NO984133L (no) | 1998-09-08 |
| NO984133D0 NO984133D0 (no) | 1998-09-08 |
| NO321570B1 true NO321570B1 (no) | 2006-06-06 |
Family
ID=7788939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19984133A NO321570B1 (no) | 1996-03-21 | 1998-09-08 | Fremgangsmate for rensing av cyklosporin A og beslektede cyklosporiner fra en cyklosporinholdig raekstrakt. |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6306306B1 (no) |
| EP (1) | EP0888382B1 (no) |
| JP (1) | JP3408818B2 (no) |
| KR (1) | KR100467127B1 (no) |
| CN (1) | CN1196711C (no) |
| AT (1) | ATE210146T1 (no) |
| CZ (1) | CZ293243B6 (no) |
| DE (3) | DE19611094C2 (no) |
| DK (1) | DK0888382T3 (no) |
| ES (1) | ES2169384T3 (no) |
| HK (1) | HK1015382A1 (no) |
| HU (1) | HU222200B1 (no) |
| IL (1) | IL125807A (no) |
| NO (1) | NO321570B1 (no) |
| PL (1) | PL187763B1 (no) |
| PT (1) | PT888382E (no) |
| RU (1) | RU2163607C2 (no) |
| SK (1) | SK282836B6 (no) |
| WO (1) | WO1997034918A1 (no) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19858892A1 (de) | 1998-12-19 | 2000-06-21 | Merck Patent Gmbh | Kontinuierliches Verfahren zur Trennung von Stoffen nach Molekülgröße |
| DE69939335D1 (de) | 1998-12-30 | 2008-09-25 | Dexcel Ltd | Dispergierbares konzentrat zur verabreichung von cyclosporin |
| US7732404B2 (en) | 1999-12-30 | 2010-06-08 | Dexcel Ltd | Pro-nanodispersion for the delivery of cyclosporin |
| PL210841B1 (pl) | 2001-10-19 | 2012-03-30 | Isotechnika Inc | Sposób wytwarzania mieszaniny izomerów (E) i (Z) ISATX247 |
| US6843854B2 (en) | 2002-05-31 | 2005-01-18 | Purdue Research Foundation | Method and apparatus for separating a component from a mixture |
| CA2498725C (en) * | 2002-09-13 | 2014-07-08 | Biogen Idec Inc. | Method of purifying polypeptides by simulated moving bed chromatography |
| CN1763084B (zh) * | 2005-10-11 | 2010-04-21 | 山东新时代药业有限公司 | 高纯度环孢菌素a的制备方法 |
| EP2151450A1 (de) | 2008-07-29 | 2010-02-10 | Sandoz AG | Verfahren zur Aufarbeitung von mikrobiologisch hergestellten zyklischen Oligopeptiden |
| CN102086226B (zh) * | 2009-12-04 | 2012-10-10 | 山东新时代药业有限公司 | 一种制备环孢菌素a的方法 |
| US9428711B2 (en) | 2013-05-07 | 2016-08-30 | Groupe Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
| US8802880B1 (en) | 2013-05-07 | 2014-08-12 | Group Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
| EP3118186B1 (fr) | 2013-12-11 | 2022-02-09 | Novasep Process | Installation chromatographique de production d acides gras polyinsatures |
| BR112016015718B1 (pt) | 2014-01-07 | 2021-12-07 | Novasep Process Solutions | Processo de purificação de aminoácidos aromáticos |
| HUP1500502A2 (en) * | 2015-10-26 | 2017-04-28 | Rotachrom Tech Kft | Process for the purification of cyclosporin-a |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB568698A (en) | 1943-05-26 | 1945-04-17 | M O Valve Co Ltd | Improvements in the capping of thermionic valves, electric lamps and like devices |
| US2985589A (en) * | 1957-05-22 | 1961-05-23 | Universal Oil Prod Co | Continuous sorption process employing fixed bed of sorbent and moving inlets and outlets |
| US4117118A (en) | 1976-04-09 | 1978-09-26 | Sandoz Ltd. | Organic compounds |
| US4215199A (en) | 1978-06-05 | 1980-07-29 | Sandoz Ltd. | Antibiotic production |
| SE448386B (sv) | 1978-10-18 | 1987-02-16 | Sandoz Ag | Nya cyklosporinderivat, forfarande for framstellning av dem samt farmaceutisk komposition innehallande dem |
| US4402832A (en) * | 1982-08-12 | 1983-09-06 | Uop Inc. | High efficiency continuous separation process |
| US4923616A (en) * | 1987-09-24 | 1990-05-08 | Mitsubishi Petrochemical Company, Ltd. | Method of separating chemical components in simulated moving bed |
| HU201577B (en) | 1988-12-20 | 1990-11-28 | Gyogyszerkutato Intezet | Process for producing cyclosporin antibiotics |
| WO1992013094A1 (fr) | 1991-01-25 | 1992-08-06 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Procede pour produire de la cyclosporine a et/ou c |
| HU213553B (en) | 1992-05-25 | 1997-07-28 | Biogal Gyogyszergyar | Process for isolating of cyclosporin-a |
| US5709797A (en) * | 1996-06-05 | 1998-01-20 | Poli Industria Chimica S.P.A. | Method of isolating cyclosporins |
-
1996
- 1996-03-21 DE DE1996111094 patent/DE19611094C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-03-14 DK DK97920517T patent/DK0888382T3/da active
- 1997-03-14 EP EP97920517A patent/EP0888382B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 ES ES97920517T patent/ES2169384T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 RU RU98119067/12A patent/RU2163607C2/ru active
- 1997-03-14 JP JP53303697A patent/JP3408818B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 AT AT97920517T patent/ATE210146T1/de active
- 1997-03-14 PT PT97920517T patent/PT888382E/pt unknown
- 1997-03-14 WO PCT/DE1997/000525 patent/WO1997034918A1/de active IP Right Grant
- 1997-03-14 HU HU9901801A patent/HU222200B1/hu active IP Right Grant
- 1997-03-14 CZ CZ19982999A patent/CZ293243B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-03-14 IL IL12580797A patent/IL125807A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-03-14 SK SK1222-98A patent/SK282836B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-03-14 DE DE59705670T patent/DE59705670D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 KR KR10-1998-0707580A patent/KR100467127B1/ko active IP Right Grant
- 1997-03-14 PL PL32911397A patent/PL187763B1/pl unknown
- 1997-03-14 CN CNB971927049A patent/CN1196711C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-21 US US08/821,823 patent/US6306306B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-04-18 DE DE19716167A patent/DE19716167C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-09-08 NO NO19984133A patent/NO321570B1/no not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-02-10 HK HK99100547A patent/HK1015382A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0888382A1 (de) | 1999-01-07 |
| DE19611094A1 (de) | 1997-09-25 |
| EP0888382B1 (de) | 2001-12-05 |
| ES2169384T3 (es) | 2002-07-01 |
| JP2000507237A (ja) | 2000-06-13 |
| IL125807A0 (en) | 1999-04-11 |
| CN1212703A (zh) | 1999-03-31 |
| NO984133L (no) | 1998-09-08 |
| DE19611094C2 (de) | 1999-06-17 |
| DE19716167C2 (de) | 2000-06-29 |
| KR100467127B1 (ko) | 2005-05-27 |
| ATE210146T1 (de) | 2001-12-15 |
| CZ293243B6 (cs) | 2004-03-17 |
| PT888382E (pt) | 2002-05-31 |
| JP3408818B2 (ja) | 2003-05-19 |
| US6306306B1 (en) | 2001-10-23 |
| HK1015382A1 (en) | 1999-10-15 |
| IL125807A (en) | 2003-10-31 |
| DE19716167A1 (de) | 1998-10-22 |
| WO1997034918A1 (de) | 1997-09-25 |
| RU2163607C2 (ru) | 2001-02-27 |
| HUP9901801A2 (hu) | 1999-09-28 |
| DK0888382T3 (da) | 2002-04-02 |
| CN1196711C (zh) | 2005-04-13 |
| DE59705670D1 (de) | 2002-01-17 |
| HUP9901801A3 (en) | 2001-01-29 |
| CZ299998A3 (cs) | 1999-10-13 |
| HU222200B1 (hu) | 2003-05-28 |
| NO984133D0 (no) | 1998-09-08 |
| SK122298A3 (en) | 1999-08-06 |
| SK282836B6 (sk) | 2002-12-03 |
| PL187763B1 (pl) | 2004-10-29 |
| KR20000064784A (ko) | 2000-11-06 |
| PL329113A1 (en) | 1999-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO321570B1 (no) | Fremgangsmate for rensing av cyklosporin A og beslektede cyklosporiner fra en cyklosporinholdig raekstrakt. | |
| CA2257271C (en) | Method of isolating cyclosporins | |
| EP2772289B1 (en) | Chromatographic process for enrichment and isolation | |
| NZ563078A (en) | Method of purifying polypeptides by simulated moving bed chromatography | |
| Hodges et al. | Preparative purification of peptides by reversed-phase chromatography: Sample displacement mode versus gradient elution mode | |
| RU98119067A (ru) | Хроматографический способ получения высокочистого циклоспорина a и родственных циклоспоринов | |
| Wu et al. | Counter-current chromatography for high throughput analysis of natural products | |
| Hodges et al. | Multi-column preparative reversed-phase sample displacement chromatography of peptides | |
| Schulte et al. | Continuous preparative liquid chromatography in the downstrem processing of biotechnological products | |
| Lawton et al. | Purification of closely eluting hydrophobic microcystins (peptide cyanotoxins) by normal-phase and reversed-phase flash chromatography | |
| Knight | Separations of hydrophobic synthetic peptides in counter-current chromatography | |
| CN1243760C (zh) | 一种分离纯化卵磷脂和脑磷脂的方法 | |
| CA2255062C (en) | Process of purification of cyclosporin | |
| Huang et al. | Separation and Purification of β‐Carotene from Chlorophyll Factory Residues | |
| JPH01246296A (ja) | 配糖体を含む原料の異種成分分取法 | |
| Gelpi et al. | Evaluation of chromatographic techniques for the preparative separation of steranes and triterpanes from Green River formation oil shale | |
| CN114591309B (zh) | 离线三维高速逆流色谱分离化合物的方法 | |
| Strickler et al. | Strategy for the preparative-scale high-performance liquid chromatographic isolation of kadsurenone and futoquinol from the medicinal plant Piper futokadsura | |
| Nott et al. | A fast and reliable chromatographic procedure for the purification of virginiamycin M 1 factor | |
| Sogn et al. | Separation of amino acid mixtures enriched in stable isotopes | |
| Inoue et al. | Separation of bufotalin and cinobufotalin by preparative liquid chromatography | |
| Kikuchi et al. | Effective separation of sterol C-24 epimers by reversed-phase high performance liquid chromatography | |
| Báthori et al. | Preparative scale purification of shidasterone, 2-deoxy-polypodine B and 9α, 20-dihydroxyecdysone from Silene italica ssp. nemoralis | |
| Girardie et al. | Separation of the proteins of locust neurosecretory endings with HPLC | |
| RU2123855C1 (ru) | Способ получения 20-гидроксиэкдизона и экдизона из смеси экдистероидов |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |