HU218357B - Hepatitis C vírus antitestek kimutatására alkalmas szintetikus antigéneket tartalmazó immundiagnosztikai készítmények és eljárás az antigének előállítására - Google Patents

Hepatitis C vírus antitestek kimutatására alkalmas szintetikus antigéneket tartalmazó immundiagnosztikai készítmények és eljárás az antigének előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU218357B
HU218357B HU9202645A HU264592A HU218357B HU 218357 B HU218357 B HU 218357B HU 9202645 A HU9202645 A HU 9202645A HU 264592 A HU264592 A HU 264592A HU 218357 B HU218357 B HU 218357B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
arg
pro
gln
lys
glu
Prior art date
Application number
HU9202645A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT65930A (en
HU9202645D0 (en
Inventor
Robert J. De Leys
Hugo Heuverswijn
Geert Maertens
Dirk Pollet
Original Assignee
Innogenetics N.V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26125651&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU218357(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Innogenetics N.V. filed Critical Innogenetics N.V.
Publication of HU9202645D0 publication Critical patent/HU9202645D0/hu
Publication of HUT65930A publication Critical patent/HUT65930A/hu
Publication of HU218357B publication Critical patent/HU218357B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/655—Somatostatins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
    • C12N2770/24222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/82—Hepatitis associated antigens and antibodies

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

A találmány szerinti peptidszekvenciák a HCV által kódolt fehérjéketutánozzák, és reagensként alkalmazhatók a HCV vérben és vértermékekbentörténő kimutatására. A peptidek legalább öt aminosavat tartalmaznak,és különböző specifikus vizsgálatokban HCV-antitestek, HCV-antigénekvagy immunogének kimutatására használhatók. A találmány kiterjed afenti peptideket tartalmazó immundiagnosztikai készítményekre, HCV invitro diagnosztizálására, HCV-antitestek kimutatására alkalmaskészletre, valamint a peptidek előállítására. ŕ

Description

A találmány hepatitis C vírus antitestek kimutatására alkalmas szintetikus antigéneket tartalmazó immundiagnosztikai készítményekre és az antigének előállítására vonatkozik.
A hepatitis B vírus (HBV) szisztémás vizsgálatának bevezetésével ezt a vírust gyakorlatilag kiiktatták a szervezetből. Ennek ellenére számos további poszttranszfúziós hepatitis- (PTH) eset fordul elő. Ezeket általában nem A, nem B hepatitis- (NANBH) vírus vagy vírusok okozzák, amelyek diagnosztizálása pillanatnyilag más vírusmarkerek kizárásával történik.
A fenti esetek legtöbbjéért felelős kórokozót nemrég klónozták [Choo, Q-L és munkatársai: Science 244, 359-362 (1988)] és egy elsőgenerációjúantitesttesztet fejlesztettek ki [Kuo G. és munkatársai: Science 244, 362-364 (1989)]. A kórokozó azonosítás után egy pozitív szálú RNS-vírusnak bizonyult, amelynél a genom szekvenciáját részlegesen meghatározták. A tapasztalatok szerint a vírus (a továbbiakban Hepatitis C vírus, HCV) a flavivírusokkal és pestivírusokkal rokon. Csimpánzból izolált HCV (HCVcdc/chi) genomjának egy szakaszát a0316218 számú európai szabadalmi leírás ismerteti. A leírt kódolószekvencia nem tartalmazza a vírusgenom 5’-végének szekvenciáját, amely a feltételezett szerkezeti fehérjéket kódolja. Nemrég publikálták azonban a HCV-genom ezen szakaszának szekvenciáját is [Okamoto Η. és munkatársai: Japan J. Exp. Med. 60, 167-177 (1990)]. A japán HC-J1 klón által kódolt aminosavszekvenciát a HCVcdc/CHi szekvenciával kombinálták egy olyan szakaszon belül, ahol a két szekvencia átfedést mutat, amelynek során az 1. ábra szerinti szekvenciát kapták. Közelebbről, a két szekvenciát a 451-helyzetben található glicin kapcsolja össze. Feltételezhető, hogy a HCV-aminosavszekvenciánál alkalmazott számozási rendszer nem abszolút, mivel nagy valószínűséggel olyan HCV-törzsek is léteznek, amelyek különböző kiiktatásokat vagy inszerteket hordoznak. A HCV-genom 5’-végi szekvenciáját ismerteti továbbá a 0 388 232 számú európai szabadalmi leírás.
A lehetséges HCV-hordozók kimutatásához nagy mennyiségű vírusfehérjére van szükség. A HCV esetében nincs megoldva a vírus tenyésztése, ami a vírusantigén-forrásként alkalmazható vírussal fertőzött tenyészet feltétele lenne. Az ismert elsőgenerációjúantitestteszt a HCV-genom által kódolt 363 aminosavból álló szekvenciát tartalmazó fúziós fehérjét alkalmaz. A fehérjének megfelelő antitestekkel a krónikus NANBHbetegek 75-85%-a mutatható ki. Ezzel ellentétben a betegség akut fázisában lévő betegeknek mintegy 15%-a tartalmazza azokat az antitesteket, amelyek felismerik ezt a fúziós fehérjét [Kuo G. és munkatársai: Science 244, 362-364 (1989)]. A megfelelő igazolótesztek hiánya azonban bizonytalanná teszi ezeket az értékeket. A HCV-genom és a flavivírusok genomja közötti hasonlóság alapján feltételezhető, hogy lokalizálhatok olyan epitópok, amelyek felhasználhatók a diagnózishoz. Az elvégzett analízis szerint a HCV-genom egy folyamatos, hosszú, nyílt leolvasókeretet tartalmaz. A vírus-RNS feltételezhetően egy hosszú poliproteinné fordítódik le, amit ezután celluláris és/vagy vírusproteázok hasítanak. Például a Dengue-vírussal analóg módon feltételezhető, hogy a vírus szerkezeti fehérjéi a víruspoliprotein aminoterminális harmadából származnak. A poliprotein pontos hasítási helyeit pillanatnyilag csak feltételezni lehet. Ennek ellenére úgy tűnik, hogy a szerkezeti fehérjék tartalmaznak olyan epitópokat, amelyek felhasználhatók diagnosztikai célokra, egyrészt az antitestek kimutatásához, másrészt a vírusantigének kimutatásához alkalmazható antitestek előállításához. Hasonló módon feltételezhető, hogy a nem szerkezeti fehérjékre vonatkozó domének szintén tartalmaznak diagnosztikailag alkalmazható epitópokat, még akkor is, ha ezek a fehérjék nem találhatók meg a vírusrészecskék szerkezeti komponenseiben.
Az 1. ábra a HCVhc_j1/cdc/CHi aminosavszekvenciáját mutatja.
A 2. ábra az ELISA-vizsgálatban az egyedi peptidekhez vagy különböző elegyekhez kötődő antitestet mutatja.
Ismert, hogy az RNS-vírusok gyakran nagyszámú spontán mutációt mutatnak, ezért feltételezhető, hogy nincs két teljesen azonos HCV-izolátum, még akkor sem, ha ezek ugyanabból az egyedből származnak. A leírás keretein belül egy vírust Hepatitis C vírusnak vagy annak ekvivalensének tekintünk akkor, ha a nukleinsavszekvencia vonatkozásában átlag legalább 60%-os, és az aminosavszekvencia vonatkozásában átlag legalább 70%-os homológiát mutat a HCVhc j1/cdc/CHi szekvenciával.
A találmány immunológiailag a HCV által kódolt fehérjéket utánzó peptidekre vonatkozik. Az egyes törzsek között a szekvenciában jelentkező változatok kiegyenlítése érdekében konzervatív és nemkonzervatív jellegű aminosavcseréket végzünk. Ennek mértéke az adott szekvenciára vonatkozóan legfeljebb 35%. Abban az esetben, ha a peptid a HCV-polipeptid erősen polimorf szakaszának felel meg, az egyes vírustörzsek különböző epitópjainak jobb utánzása érdekében egy vagy több aminosavat megváltoztatunk.
A találmány tárgya tehát immundiagnosztikai készítmény, amely legalább egy peptidet tartalmaz az alábbi csoportok közül:
(a) (I)-(XIX) általános képletű peptid
Y-Met-Ser-Thr-Ile-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-ThrLys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Z-X (I)
Y-Pro-Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg-Asn-Thr-Asn-ArgArg-Pro-Gln-Asp-Val-Lys-Phe-Pro-Gly-Z-X (Π)
Y-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Asp-Val-LysPhe-Pro-Gly-Gly-Gly-Gln-Ile-Val-Gly-Z-X (III)
Y-Leu-Pro-Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-V al-ArgAla-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser-Z-X (IV)
Y-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser-Gln-Pro-ArgGly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Val-Z-X (V)
HU 218 357 Β
Υ-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Val-Arg-Arg-ProGlu-Gly-Arg-Thr-Trp-Ala-Gln-Pro-Gly-Z-X (VI)
Y-Gly-Arg-Thr-Trp-Ala-Gln-Pro-Gly-Tyr-Pro-TrpPro-Leu-Tyr-Gly-Asn-Glu-Gly-Cys-Gly-Z-X (VII)
Y-Leu-Ser-Gly-Lys-Pro-Ala-Ile-lle-Pro-Asp-Arg-GluVal-Leu-Tyr-Arg-Glu-Phe-Asp-Glu-Z-X (VIII)
Y-Ile-Ile-Pro-Asp-Arg-Glu-V al-Leu-Tyr-Arg-GluPhe-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-Ser-Gln-Z-X (IX)
Y-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-Ser-Gln-His-Leu-ProTyr-Ile-Glu-Gln-Gly-Met-Met-Leu-Ala-Z-X (X)
Y-Ser-Gln-His-Leu-Pro-Tyr-Ile-Glu-Gln-Gly-MetMet-Leu-Ala-Glu-Gln-Phe-Lys-Gln-Lys-Z-X (xi)
Y-Ile-Glu-Gln-Gly-Met-Met-Leu-Ala-Glu-Gln-PheLys-Gln-Lys-Ala-Leu-Gly-Leu-Leu-Gln-Z-X (XII)
Y-Leu-Ala-Glu-Gln-Phe-Lys-Gln-Lys-Ala-Leu-GlyLeu-Leu-Gln-Thr-Ala-Ser-Arg-Gln-Ala-Z-X (XIII)
Y-Gln-Lys-Ala-Leu-Gly-Leu-Leu-Gln-Thr-Ala-SerArg-Gln-Ala-Glu-Val-Ile-Ala-Pro-Ala-Z-X (XIV)
Y-Glu-Asp-Glu-Arg-Glu-Ile-Ser-Val-Pro-Ala-Glu-IleLeu-Arg-Lys-Ser-Arg-Arg-Phe-Ala-Z-X (XV)
Y-Leu-Arg-Lys-Ser-Arg-Arg-Phe-Ala-Gln-Ala-LeuPro-Val-Trp-Ala-Arg-Pro-Asp-Tyr-Asn-Z-X (XVI)
Y-Val-Trp-Ala-Arg-Pro-Asp-Tyr-Asn-Pro-Pro-LeuVal-Glu-Thr-Trp-Lys-Lys-Pro-Asp-Tyr-Z-X (XVII)
Y-Glu-Thr-Trp-Lys-Lys-Pro-Asp-Tyr-Glu-Pro-ProVal-Val-His-Gly-Cys-Pro-Leu-Pro-Pro-Z-X (XVIII)
Y-Val-His-Gly-Cys-Pro-Leu-Pro-Pro-Pro-Lys-SerPro-Pro-Val-Pro-Pro-Pro-Arg-Lys-Lys-Z-X (xix) a képletekben
Y jelentése hidrogénatom vagy linker, amellyel a peptid egy hordozóhoz vagy szilárd fázishoz kapcsolható, és amely legalább 1 és legfeljebb 60 aminosavat, előnyösen 1-10 aminosavat, előnyösen cisztein, lizin, tirozin, glutaminsav vagy aszparaginsav közül megválasztott aminosavat tartalmaz, vagy kémiai csoport, előnyösen biotin vagy tioglikolsav, ahol Y adott esetben például N-terminális acetilezéssel módosítható,
Z jelentése kémiai kötés vagy linker, amellyel a peptid egy hordozóhoz vagy szilárd fázishoz kapcsolható, és amely legalább 1 és legfeljebb 60 aminosavat, előnyösen 1-10 aminosavat, előnyösen cisztein, lizin, tirozin, glutaminsav vagy aszparaginsav közül megválasztott aminosavat tartalmaz, vagy kémiai csoport, előnyösen biotin vagy tioglikolsav,
X jelentése aminocsoport vagy hidroxilcsoport, vagy ezek valamelyikét tartalmazó kapcsolócsoport, azzal a megszorítással, hogy ha Y vagy Z-X jelentése egy vagy több aminosav, akkor az bármely természetes HCV-farok-szakasztól eltérő, (b) a fenti peptidek variánsai, amelyek konzervatív vagy nemkonzervatív aminosavcserét tartalmaznak, (c) a fenti peptidek fragmensei, amelyek a fenti peptidekből legalább 6 aminosavat tartalmaznak, azzal a megszorítással, hogy a peptid az alábbi peptidektől eltérő:
(1) Met-Ser-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys (2) Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg-Asn-ThrAsn-Arg-Arg-Pro-Gln (3) Gln-Asp-Val-Lys-Phe-Pro (4) Gly-Tyr-Pro-Trp-Pro-Leu-Tyr-Gly-Asn-Glu-Gly (5) Met-Ser-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-ThrLys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln (6) Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-Val-Arg (7) Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-Val-Arg-Ala-ThrArg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser (8) Ala-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser (9) Gln-Pro-Arg-Gly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile (10) Pro-Ly s-V al-Arg-Arg-Pro-Glu-Gly-Arg (11) Met-Ser-Thr-Ile-Pro-Lys-Pro-Gln-ArgLys-Thr-Lys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln (12) Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg (13) Glu-Arg-Glu-Ile-Ser-Val-Pro-Ala-Glu-Ile-LeuArg-Lys-Ser-Arg-Arg (14) Arg-Phe-Ala-Gln-Ala-Leu-Pro-Val-Trp-Ala-Arg legalább egy hordozóanyag mellett.
A találmány szerinti peptidek legalább öt, néha hat, nyolc vagy tizenkettő, általában legfeljebb ötven, előnyösen legfeljebb harmincöt, és különösen előnyösen legfeljebb mintegy huszonöt aminosavból állnak a HCV-genom által kódolt szekvencián belül. A peptid minden esetben a lehető legkisebb, de lényegében megtartja a nagyméretű peptid teljes érzékenységét. Bizonyos esetekben előnyös lehet, ha egy peptidszerkezeten belül két vagy több peptidet egyesítünk.
Megjegyezzük, hogy a találmány szerinti peptid nem minden esetben azonosítható valamely adott HCV-szekvenciával, amennyiben az adott vegyület legalább egy HCV-törzsnél részt vesz az immunológiai versengésben. A peptideknél ezért különböző beépítések, kiiktatások és konzervatív vagy nemkonzervatív jellegű aminosavcserék fordulhatnak elő, ahol ezek a változtatások az alkalmazás szempontjából előnyt jelentenek.
Konzervatív jellegűnek minősül az aminosavcsere akkor, ha a bevitt aminosav kémiai természete hasonló az eredeti aminosav kémiájához. A konzervatív jellegű aminosavkombinációkra példaként említhető a Gly, Alá; Asp, Glu; Asn, Gin; Val, Ile, Leu; Ser, Thr; Lys, Arg; és Phe, Tyr.
Emellett az amino- vagy karboxiterminális véghez további aminosavak vagy kémiai csoportok kapcsolhatók, és így olyan „linker”-kar alakítható ki, amellyel a peptid a hordozóhoz kapcsolható. A linker legalább 1 aminosav és legfeljebb 60 aminosav hosszúságú, általában 1-10 aminosavat tartalmaz. A szilárd fázishoz vagy hordozóhoz történő hozzákapcsolás vonat3
HU 218 357 Β kozásában nem szükségszerű a kovalens kötés kialakítása.
A szilárd fázishoz vagy hordozóhoz történő kapcsolást biztosító funkciós csoportok kialakításához az amino- vagy karboxiterminális véghez természetes aminosavak, így cisztein, lizin, tirozin, glutaminsav vagy aszparaginsav kapcsolható. Emellett azonban alkalmazhatók más kémiai csoportok is, például biotin és tioglikolsav, amelyek a peptid végéhez kapcsolva kívánt kémiai vagy fizikai tulajdonságot biztosítanak. A peptidek vége módosítható továbbá például N-terminális acetilezéssel, vagy terminális karboxi-amidálással. A találmány szerinti peptideket az 1. ábrán megadott aminosavszekvenciára hivatkozva ismertetjük. Az aminosavszekvenciát az általánosan alkalmazott hárombetűs kód felhasználásával adjuk meg.
Az 1-20. aminosavaknak megfelelő (I) peptid aminosavszekvenciája :
Y-Met-Ser-Thr-Ile-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-Thr-LysArg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Z-X (I)
A 7-26. aminosavaknak megfelelő (II) peptid aminosavszekvenciája:
Y-Pro-Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg-Asn-Thr-Asn-ArgArg-Pro-Gln-Asp-Val-Lys-Phe-Pro-Gly-Z-X (»)
Ezen belül előnyös a (HA) szekvenciájú oligopeptid: Y-Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-ArgZ-X (IIA)
A 13-32. aminosavaknak megfelelő (III) peptid aminosavszekvenciája:
Y-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Asp-Val-LysPhe-Pro-Gly-Gly-Gly-Gln-Ile-Val-Gly-Z-X (III)
A 37-56. aminosavaknak megfelelő (IV) peptid aminosavszekvenciája:
Y-Leu-Pro-Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-V al-ArgAla-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser-Z-X (IV)
A 49-68. aminosavaknak megfelelő (V) peptid aminosavszekvenciája :
Y-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser-Gln-Pro-ArgGly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Val-Z-X (V)
A 61-80. aminosavaknak megfelelő (VI) peptid aminosavszekvenciája:
Y-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Val-Arg-Arg-ProGlu-Gly-Arg-Thr-Trp-Ala-Gln-Pro-Gly-Z-X (VI)
A 73-92. aminosavaknak megfelelő (VII) peptid aminosavszekvenciája:
Y-Gly-Arg-Thr-Trp-Ala-Gln-Pro-Gly-Tyr-Pro-TrpPro-Leu-Tyr-Gly-Asn-Glu-Gly-Cys-Gly-Z-X (VII)
Az 1688-1707. aminosavaknak megfelelő (VIII) aminosavszekvenciája:
Y-Leu-Ser-Gly-Lys-Pro-Ala-Ile-Ile-Pro-Asp-ArgGlu-Val-Leu-Tyr-Arg-Glu-Phe-Asp-Glu-Z-X (VIII)
Az 1694-1713. aminosavaknak megfelelő (IX) peptid aminosavszekvenciája :
Y-Ile-Ile-Pro-Asp-Arg-Glu-V al-Leu-T yr-Arg-GluPhe-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-Ser-Gln-Z-X (ix)
Az 1706-1725. aminosavaknak megfelelő (X) peptid aminosavszekvenciája: Y-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-Ser-Gln-His-Leu-ProTyr-Ile-Glu-Gln-Gly-Met-Met-Leu-Ala-Z-X (X)
Az 1712-1731. aminosavaknak megfelelő (XI) peptid aminosavszekvenciája: Y-Ser-Gln-His-Leu-Pro-Tyr-Ile-Glu-Gln-Gly-MetMet-Leu-Ala-Glu-Gln-Phe-Lys-Gln-Lys-Z-X (Xi)
Az 1718-1737. aminosavaknak megfelelő (XII) peptid aminosavszekvenciája: Y-Ile-Glu-Gln-Gly-Met-Met-Leu-Ala-Glu-GlnPhe-Lys-Gln-Lys-Ala-Leu-Gly-Leu-Leu-Gln-Z-X (XII)
Az 1724-1743. aminosavaknak megfelelő (XIII) peptid aminosavszekvenciája: Y-Leu-Ala-Glu-Gln-Phe-Lys-Gln-Lys-Ala-Leu-GlyLeu-Leu-Gln-Thr-Ala-Ser-Arg-Gln-Ala-Z-X (XIII)
Az 1730-1749. aminosavaknak megfelelő (XIV) peptid aminosavszekvenciája: Y-Gln-Lys-Ala-Leu-Gly-Leu-Leu-Gln-Thr-Ala-SerArg-Gln-Ala-Glu-Val-Ile-Ala-Pro-Ala-Z-X (Xiv)
A 2263-2282. aminosavaknak megfelelő (XV) peptid aminosavszekvenciája: Y-Glu-Asp-Glu-Arg-Glu-Ile-Ser-Val-Pro-Ala-Glu-IleLeu-Arg-Lys-Ser-Arg-Arg-Phe-Ala-Z-X (XV)
A 2275-2294. aminosavaknak megfelelő (XVI) peptid aminosavszekvenciája: Y-Leu-Arg-Lys-Ser-Arg-Arg-Phe-Ala-Gln-Ala-LeuPro-Val-Trp-Ala-Arg-Pro-Asp-Tyr-Asn-Z-X (XVI)
A 2287-2306. aminosavaknak megfelelő (XVII) peptid aminosavszekvenciája: Y-Val-Trp-Ala-Arg-Pro-Asp-Tyr-Asn-Pro-Pro-LeuVal-Glu-Thr-Trp-Lys-Lys-Pro-Asp-Tyr-Z-X (XVII)
A 2299-2318. aminosavaknak megfelelő (XVIII) peptid aminosavszekvenciája: Y-Glu-Thr-Trp-Lys-Lys-Pro-Asp-Tyr-Glu-Pro-ProVal-Val-His-Gly-Cys-Pro-Leu-Pro-Pro-Z-X (XVIII)
A 2311-2330. aminosavaknak megfelelő (XIX) peptid aminosavszekvenciája: Y-Val-His-Gly-Cys-Pro-Leu-Pro-Pro-Pro-Lys-SerPro-Pro-Val-Pro-Pro-Pro-Arg-Lys-Lys-Z-X (xix)
A peptidek ciklizálása vagy két peptid összekapcsolása vonatkozásában különösen előnyösen alkalmazható a cisztein vagy a terminális aminocsoportok acilezésére alkalmazott tioglikolsav merkaptocsoportja. A ciklizálást vagy az összekapcsolást közvetlen kötés
HU 218 357 Β vagy tiolspecifikus reagensek alkalmazása esetén egy molekuláris híd kialakításával hajtjuk végre.
Az antitesttermelés vagy a pepiidnek egy szilárd fázishoz történő adszorbeálásának gyorsítása érdekében a peptid kívánt esetben egy oldható hordozóhoz kapcsolható. Ennek során legalább 500 móltömegű hordozót alkalmazunk, amelyet a humán szérumban található antitestek nem ismernek fel. Hordozóként általában valamely fehérjét alkalmazunk. A hordozóként alkalmazható fehérjékre példaként említhető a kulcslyukkagylóhemocianin, borjú-gamma-globumin, borjúszérum-albumin és poli-L-lizin.
A pepiidnek a hordozóhoz történő hozzákapcsolását a szokásos módon végezzük. Az összekapcsolás megvalósítható a peptid N-terminális, C-terminális vagy valamely közbenső szakaszán keresztül. Eljárhatunk úgy is, hogy a kapcsoláshoz a peptidet származékká alakítjuk. A kapcsolási eljárásokat és ezek körülményeit számos irodalom ismerteti, például a Van Regenmortel Μ. Η. V., Briand J. P., Muller S. és Plaué S.: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, 19. kötet, Synthetic Polypeptides as Antigens, Elsevier Press, Amsterdam, New York, Oxford, (1988).
Eljárhatunk úgy is, hogy a peptideket közvetlenül egy oligolizinmagon szintetizáljuk, amelynek során a lizinnek vagy az alfa-, vagy az epszilon-aminocsoportját alkalmazzuk növekedési pontként. A magot képező lizinek száma előnyösen 3-7. Emellett a komplex Cterminális végén vagy annak közelében egy ciszteinmaradék lehet, amely gyorsítja a homo- vagy heterodimerek képződését. Ez az eljárás a Hepatitis B antigének esetében [Tam J. P. és Lu Y-A: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86,9084-9088 (1989)], valamint egy sor más antigén esetében [Tam J. P.: Multiple Antigén Peptide System: A Növel Design fór Synthetic Peptide Vaccine and Immunoassay; Synthetic Peptides, Approaches to Biological Problems; Tam J. P. és Kaiser Ε. T., Alán R. Liss Inc. kiadó, New York (1989)] ismert.
A kívánt felhasználási területtől függően a peptid lehet jelölt vagy jelöletlen. A találmány szerinti peptideknél bármely ismert jelölési módszer, így enzimatikus, kémiai, fluoreszcens, lumineszcens vagy radioaktívjelölés alkalmazható. Emellett a peptideket módosíthatjuk annak érdekében, hogy valamely felülethez vagy szilárd fázishoz, például mikrotitrálólemezhez, műanyag membránhoz, üveg- vagy műanyag gyöngyökhöz vagy kromatográfiás hordozóanyaghoz, így cellulózhoz, szilikagélhez vagy agarózhoz kössük. A találmány szerinti peptidek szilárd hordozóhoz vagy felülethez történő hozzákötése bármely ismert módszerrel megvalósítható.
A Hepatitis C vírusra specifikus antitestek kimutatásához előnyösen különböző peptidek elegyét alkalmazzuk. Ebből a szempontból előnyösen alkalmazhatók a következő elegyek:
(a) (II), (III), (V), (IX) és (XVIII) (b) (I), (II), (V), (IX), (XI), (XVI) és (XVIII) (c) (II), (III), (IV), (V), (VIII), (XI), (XVI) és (XVIII) (d) (II), (IX) és (XVIII) (e) (II), (III), (IV) és (V) (f) (VIII), (IX), (XI), (XIII) és (XIV) (g) (XV), (XVI), (XVII), (XVIII) és (XIX)
A peptidek által felismert antitestek különböző eljárásokkal kimutathatók. A detektálás előnyösen megvalósítható enzimmel kapcsolt immunoszorbens vizsgálattal (ELISA-vizsgálattal), amelyben a peptidet vagy a peptidelegyet egy szilárd hordozóhoz kötjük. A legtöbb esetben ez egy mikrotitrálólemez, de hordozóként elvileg bármely oldhatatlan szilárd fázis felhasználható. A vizsgálandó szérum vagy más testfolyadék megfelelő hígítását vagy hígítási sorozatát érintkeztetjük azzal a szilárd fázissal, amelyhez a peptidet kötöttük. Az inkubálást a szükséges ideig a kötési reakció befejeződéséig végezzük. Ezután a nem kötött komponenseket a szilárd fázis mosásával eltávolítjuk. Az immunkomplex detektálását humán immunoglobulinokhoz specifikusan kötődő antitestekkel végezzük, amelyeket enzimmel, előnyösen torma-peroxidázzal, lúgos foszfatázzal vagy béta-galaktozidázzal jelölünk, amelyek alkalmasak arra, hogy egy színtelen vagy közel színtelen szubsztrátumot vagy koszubsztrátumot olyan termékké alakítsanak, amelynek intenzív színe van, vagy amely egy kromogénnel színes komplexszé alakítható. Detektálórendszerként alkalmazható továbbá olyan enzim, amely megfelelő szubsztrátum jelenlétében fényt bocsát ki. A képződött termék mennyiségét vizuálisan, spektrofotometriásán, elektrokémiailag vagy luminometriailag detektáljuk, és hasonlóan kezelt kontrollmintához viszonyítjuk. Detektálórendszerként alkalmazható továbbá radioaktív jelölésű antitest, amikor is az immunkomplex mennyiségét szcintillációs számlálással vagy gamma-számlálással határozzuk meg.
Detektálórendszerként alkalmazható továbbá a Staphylococcus aureus Cowan I törzsből származó A fehérje, a Staphylococcus sp. C csoportjából (26RP66 törzs) származó G fehérje, valamint azok a rendszerek, amelyek képesek a hatékony biotinavidinvagy sztreptavidinkötő reakciók kihasználására.
A hordozóhoz kötött peptidekkel szemben kitermelt antitestek is felhasználhatók a szérumban vagy más testfolyadékban lévő antitesteknek a jelölt peptidekkel versengési vizsgálattal történő kimutatásához. Ebben az esetben a hordozóhoz kötött peptidekkel szemben kitermelt antitesteket egy szilárd hordozóhoz kapcsoljuk, amely lehet például műanyag gyöngy vagy műanyag cső. A jelölt peptidet ezután megfelelő hígításban a vizsgálandó folyadékkal keverjük, és az elegyet ezután a szilárd hordozóhoz kötött antitesttel érintkeztetjük. Megfelelő inkubációs periódus után a szilárd hordozót mossuk, és mérjük a jelölt peptid mennyiségét. A szilárd hordozóhoz kötött jelölt peptid mennyiségének csökkenése utal az eredeti mintában az antitestek jelenlétére. Az eljárás megvalósítható úgy is, hogy a peptidet kötjük a szilárd hordozóanyaghoz. Ennek során a jelölt antitest korlátozott mennyiségű peptid jelenlétében verseng a mintában található antitesttel. Mint a fenti példában, a mértjei csökkenése utal a vizsgált mintában található antitestekre.
HU 218 357 Β
Az antitest kimutatása előnyösen megvalósítható továbbá homogén immunoassay-vizsgálattal is. Az ilyen típusú vizsgálatok különböző eljárásokkal valósíthatók meg. Ezek közül előnyösen alkalmazhatók például a homogén enzimimmunoassay-vizsgálatok, valamint a Tijssen P.: Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, Elsevier Press, Amersham Oxford, New York (1985) irodalomban ismertetett megoldások. Az alkalmazható detektorrendszerekre példaként említhető az enzimcsatoma-rendszer, a biolumineszcencia, az alloszterikus aktiválás és alloszterikus gátlás. Alkalmazhatók továbbá liposzómába zárt enzimek és koenzimek is [Pinnaduwage P. és Huang L.: Clin. Chem. 34/2, 268-272 (1988); Ullman E. F. és munkatársai: Clin. Chem. 33/9,1579-1584(1987)].
A peptidek előállítása megvalósítható oldatban vagy szilárd hordozóanyagon. A peptidszintézis előnyösen megvalósítható terc-butil-oxi-karbonil-csoporttal vagy 9-fluorenil-metoxi-karbonil-csoporttal védett aktivált aminosavakkal. Az alkalmazható szintézismódszereket, az oldalláncok megvédésére alkalmazható védőcsoportokat és a hasítási módszereket ismerteti például Steward és Young: Solid Phase Peptide Synthesis, 2. kiadás, Pierce Chemical Company (1984); valamint Atherton és Sheppard: Solid Phase Peptide Synthesis, IRL Press (1989).
Kísérleti rész
I. Peptidszintézis
A leírt peptideket pepszin K poliamid Kieselguhr gyantán (Milligen, Novato, Califomia, USA) állítottuk elő, amit etilén-diaminnal funkcionalizáltunk, és amelyhez savra érzékeny linkerként 2-(Ó-Fmoc-amino-2 ’ ,4 ’ -dimetoxi-benzil)-fenoxi-ecetsavat kapcsoltunk [Rink: Tetrahedron Lett. 28, 3787 (1987)]. Az oldalláncbeli csoportokat terc-butil-csoporttal, az Óamino-csoportokat Fmoc segítségével blokkoltuk. Az arginin guanidinocsoportját 2,2,5,7,8-pentametil-kromán-6-szulfonil-csoporttal védtük. A hisztidin imidazolcsoportját terc-Boc-csoporttal vagy tritilcsoporttal, és a cisztein szulfhidrilcsoportját tritilcsoporttal védtük. A kapcsolást O-pentafluor-fenil-észter segítségével végeztük az arginin kivételével, ahol diizopropilkarbodiimiddel közvetített hidroxi-benzotriazol-észterképzést alkalmaztunk. Az I peptid kivételével valamennyi peptidet ecetsavanhidrid segítségével N-acetileztünk. A szintéziseket Miiligen 9050 PepSynthesizer berendezésen (Novato, Califomia, USA) végeztük folyamatos áramlási módszerrel. A trifluor-ecetsavval végzett hasítás és dietil-éterrel végzett extrahálás után a peptideket C18 reverz fázisú kromatográfiával analizáltuk.
II. Hepatitis C vírus antitestek detektálása
A. Műanyag membránhoz kötött peptidek alkalmazása
A peptidet megfelelő pufferben oldva törzsoldatot készítünk, amit foszfátpufferelt sóoldattal (PBS) vagy nátrium-karbonát-pufferrel (pH = 9,6) tovább hígítva előállítjuk a vizsgálati oldatot. A peptideket vonalak formájában műanyag membránra (Pali, Portsmouth,
Nagy-Britannia) visszük, majd a membránokat kazeinnel kezelve blokkoljuk az el nem foglalt kötőhelyeket. A membránokat ezután a peptidvonalakra merőlegesen csíkokra vágjuk. Minden csíkot HCV-fertőzött egyedektől nyert és 1-100 hígítású szérummintával inkubálunk. Az antitest kötődését úgy detektáljuk, hogy a csíkokat kecske anti-humán immunoglobulin antitesttel konjugált lúgos foszfatázenzimmel inkubáljuk. A kötetlen konjugátum mosással történő eltávolítása után 5-bróm-4-klór-3-indolil-foszfátot és nitrokék tetrazóliumot tartalmazó szubsztrátoldatot adunk a csíkokhoz.
A pozitív reakció látható választ ad, mivel a specifikusan felismert peptideknek megfelelő helyeken színes csíkok keletkeznek. 36 különböző szérum mérési eredményét az 1. táblázatban, ennek összefoglalását a 2. táblázatban adjuk meg.
B. Peptidek alkalmazása enzimmel kapcsolt immunoszorbens vizsgálatban (ELISA-vizsgálatban)
A peptidtörzsoldatokat nátrium-karbonát-pufferben (pH=9,6) hígítjuk, és 2 pg/ml peptidkoncentráció mellett mikrotitrálólemezekre visszük. A lemezekre felvisszük továbbá a (II), (III), (V), (IX) és (XVIII) peptidek elegyét is. A felvitel után a lemezeket kazeinnel blokkoljuk. 15 HCV-antitest-pozitív szérumot és 7 fertőzetlen vérdonorból származó kontrollszérumot 1-20 értékben hígítunk, és a pepiiddel bevont lemezek mérőhelyein inkabáljuk. Az antitestkötődés detektálásához a lemezeket kecske anti-humán immunoglobulin antitesttel konjugált torma-peroxidáz enzimmel inkubáljuk. A meg nem kötött konjugátum mosással történő eltávolítása után a lemezekhez hidrogén-peroxidot és 3,3’,5,5’-tetrametil-benzidint tartalmazó oldatot adunk. A reakciót a megfelelő idő eltelte után kénsavval megállítjuk. Pozitív reakció esetében sárga szín jelentkezik, ami a szokásos mikrotitrálólemez-leolvasóval kvantitatíve kiértékelhető. A vizsgálatok eredményét a 3. táblázatban adjuk meg. A peptid fizikai és kémiai tulajdonságaiból következő nemspecifikus kötődések korrekcióba vételéhez minden peptidnél külön meghatározzuk a töréspontot. A töréspont abszorpciós értékét úgy számoljuk, hogy a negatív minta átlagos optikai sűrűségéhez hozzáadunk 0,200-at. A töréspontnál nagyobb abszorpciót mutató mintákat pozitív mintának minősítjük. A tizenöt pozitív szérumminta mérési eredményét a 4. táblázatban összegezzük.
A mérési eredményekből látható, hogy több enzimet nagyszámú HCV-fertőzött egyedből származó szérum felismer, de nincs egyetlen olyan peptid, amit minden szérum felismerne. Ezzel ellentétben a peptidelegy mind a tizenöt szérumot felismeri, és a tizenöt szérumból hat esetben a kapott optikai sűrűség eléri vagy meghaladja az egyedi peptiddel kapott értéket. A mérési eredmények tehát egyértelműen igazolják a peptidelegyek alkalmazásának előnyét az anti-HCV-antitestek kimutatásában.
C. HCV-fertőzött betegektől nyert szérumban található antitestek különböző egyedi peptidekkel és peptideleggyel történő megkötése ELISA-vizsgálatban
HU 218 357 Β
Öt peptidet önmagában és hét különböző kombinációban mikrotitrálólemezre viszünk. A lemezeket ezután tizenöt HCV-antitest-pozitív szérum hígításával inkubáljuk a peptidelegyek alkalmazhatóságának az egyedi peptidekhez történő viszonyítása érdekében. A mért elegyeket és a mérési eredményeket a 2. ábrán adjuk meg.
Általánosságban megállapíthatjuk, hogy a peptidelegyek jobban működnek, mint az egyedi peptidek. Ez különösen nyilvánvaló a 12 számú elegy esetében [(I), (III), (V), (IX) és (XVIII) peptid], amely mind a tizenkettő vizsgált szérumot felismeri. Ezek az eredmények tehát igazolják, hogy a peptidelegyek előnyösen alkalmazhatók a HCV-antitestek kimutatásához.
D. Peptidelegyek alkalmazása anti-HCV-antitestek ELISA-vizsgálatban történő kimutatásához
A (II), (III), (V), (IX) és (XVIII) peptid keverékét mikrotitrálólemezre visszük a peptidek önmagukban történő vizsgálatánál leírt módszerrel. Összesen negyvenkilenc szérumot vizsgálunk, amelyek klinikailag diagnosztizált, de közelebbről nem meghatározott krónikus nem A, nem B Hepatitisvírussal fertőzött betegekből származnak. Kontrollként negyvenkilenc egészséges donor szérumát alkalmazzuk. Az antitestkötődést kecske antihumán immunoglobulin antitestekkel konjugált torma-peroxidáz-enzimmel mutatjuk ki. A kapott optikaisűrűség-értékeket az 5. táblázatban adjuk meg. Az eredmények szerint a peptidelegyet nem ismerik fel az egészséges donor szérumából származó antitestek (0/49 reakció), de nagy számban felismeri a krónikus NANBH- fertőzött betegekből származó szérum (41/49, vagyis 84%). Az eredmények igazolják, hogy a megadott peptidek előnyösen alkalmazhatók elegy formájában a HCV-fertőzés diagnosztizálására.
E. Akut NANB-fertőzéssel rendelkező betegekből származó szérumban található anti-HCV-antitestek detektálása műanyag membránhoz kötött egyedi peptidekkel és peptideleggyel ELISA-vizsgálatban, és ezek összehasonlítása a kereskedelmi forgalomban kapható készlet alkalmazásával
A peptideket műanyag membránokra visszük vagy összekeverjük, és a fent leírt módon mikrotitrálólemezekre visszük. A peptidelegy a (II), (III), (V), (IX) és (XVIII) peptidekből áll. Huszonkilenc akut nem A, nem B hepatitisfertőzésben szenvedő betegtől nyert szérumot Hepatitis C vírus elleni antitest jelenlétére vizsgálunk. Ugyanezeket a szérumokat vizsgáljuk a kereskedelmi forgalomban kapható készlettel (Ortho, Emeryvilié, CA, USA).
Az összehasonlító vizsgálat eredményeit a 6. táblázatban adjuk meg. A peptidalapú ELISA és a kereskedelmi készlet összehasonlítása érdekében mindkét teszt eredményeit a jel/zaj viszony (S/N) vonatkozásában is kifejezzük, amit úgy határozunk meg, hogy az adott mintánál mért optikai sűrűséget osztjuk a határértékkel. Az 1,0 értéket elérő vagy meghaladó jel/zaj viszonyt pozitív reakciónak értékeljük. A kereskedelmi készlet esetében a határértéket a gyártó előírásai szerint határozzuk meg. A peptidalapú ELISA határértékét úgy számoljuk, hogy öt negatív minta átlagos optikai sűrűségéhez hozzáadunk 0,200-at.
A műanyaghoz kötött peptidek antitestfelismerő képességének méréséhez alkalmazott skála azonos az 1. táblázatban megadott eredmények értékeléséhez használt skálával. A vizsgált huszonkilenc mintából huszonöt pozitív (86%) a peptidalapú ELISA-vizsgálatban, és egy vagy több műanyaghoz kötött peptid felismeri. Ezzel ellentétben huszonkilenc szérumból csak tizennégy minősült pozitívnak a kereskedelmi ELISA-készlettel. Ezek az eredmények igazolják a peptidelegy alkalmazásának előnyét az anti-HCV-antitestek detektálásában, amikor is a peptidelegy a HCV-poliprotein különböző szakaszaiból származó aminosavszekvenciákat tartalmazza.
HU 218 357 B
1. táblázat
Műanyag membránhoz kötött peptidek és HCV-fertőzött betegek szérumának reakciója PEPTID
(XIX) - - 04 0,5 -
(ΙΙΙΛΧ) - - •n θ' 04 04 - -
(ΙΙΛΧ) 04 - 0,5 - - 0,5 04 -
(ΙΛΧ) 04 04 04 - Ol 0,5 0,5 04 - - 04 in θ' - 04
(ΛΧ) 04 04 04 0,5 04
(ΛΙΧ) 04 0,5 0,5 - - -
(IIIX) - - - - - <n © - -
(IIX)
(IX) 0,5 1 0,5 in θ' - - 0,5 04 <-4
g - 04 04 - - 0,5 - - 0,5 04
g 0,5 04 - - 0,5 in θ' 04
(Ι1ΙΛ) - 04 - ΓΟ 04 04 04 04 - m
(ΙΙΛ) - 0,5 0,5 0,5 0,5
> 0,5 0,5 04 0,5 -
> 0,5 0,5 - 0,5 - m θ' -
> - - - - - 0,5 0,5 0,5 - - •n cf 04
(III) 04 04 04 m 0,5 04 0,5 ro - 04 - -
g in θ' - - - 1 0,5 - - in θ' in θ' 0,5
£ - in © in θ' 0,5 04 - 0,5 - 0,5
A szérum száma - 04 oő ö ói in \o oő 23. 24. 25. 26. 27. 29.
HU 218 357 B
1. táblázat (folytatás)
>< z - <ΖΊ © υο θ'
(ΙΙΙΛΧ) 0,5 0,5 - Κ) © 0,5 -
(XVII) - 0,5 - - - -
(ΙΛΧ) - - ι-Η - -
> £ 0,5 - 04 τ—Η
(ΛΙΧ) -
(xni) Ό) θ' 0,5 - - 04
(xii) -
(IX) 0,5 0,5 0,5 ι ...... υο Ο —Η - 0,5
(X) 0,5 - - ιο θ' - ό θ' -
- 0,5
(Vili) 0,5 ΟΊ 04 - 04 04 ιη θ' 04
> 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 - NO i
> V) o” - - «η θ' 0,5 ό θ’ NO
(λ) - - 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5j NO
> - - - - - ι/Ί <ο 0,5 04 θ' - 0,5 0,5 NO
s 0,5 [ 0,5 04 - 04 04 04 04 - 04 04 04 04 Γ NO
g in θ' - - - - - 0,5 0,5 04 - - Γ NO
£ - - - - NO
A szérum száma 30. 32. 33. 34. iri ΓΟ 36. 37. 44. 48. 47. 48. 49. 50. <ο 52. 54. 56.
Üres mező: nincs reakció; 0,5: enyhén pozitív; 1: egyértelműen pozitív; 2: erős reakció; 3: intenzív reakció; ND: nincs meghatározva.
HU 218 357 Β
2. táblázat
Műanyaghoz kötött peptidek antitestkötő képessége
A peptid jele A reakciókcpcs szérum száma A reakcióképcs szérum százaléka
(I) 13/35 37
(II) 22/35 63
(ΠΙ) 27/35 77
(IV) 24/35 69
(V) 14/35 40
(VI) 11/35 31
(VII) 11/35 31
(VIII) 19/36 53
(IX) 9/36 25
(X) 17/36 47
(XI) 15/36 42
(XII) 1/36 3
(XIII) 13/36 36
(XIV) 7/36 19
(XV) 9/36 25
(XVI) 20/36 56
(XVII) 14/36 39
(XVIII) 14/36 39
(XIX) 8/36 22
D <υ
Ό
4>
§ >
u s
§
Λ •Ka CQ
1¾ •X5 N 'S >
l (Z) ω
c3 'CG
N c3
Λ ’ÖS <u
3J
CL <u
CL •5 <υ fcí) ö
T3 £X
Q ci-
(XIX) 1,346 θ' 0,038 1,271 0,058 1,356 0,065
(XVIII) OO 0,154 0,046 0,872 1 0,417 1,335 1 0,838
> X 0,956 σ\ m θ' 0,038 0,041 0,671 0,037 0,093
(XVI) 1,063 0,64 0,292 0,042 0,552 0,886 0,274
(AX) 1-1 0,041 0,039 0,043 0,575 0,068 0,793 0,111
(ΛΙΧ) 0,044 0,515 0,341 0,068 0,102 0,314 0,088
X 0,068 0,042 0,093 0,235 CH o 0,044 0,454
X -, 0,043 0,039 0,041 0,041 0,046 0,041 0,125
X 0,04 0,563 0,668 0,646 1,175 1- 0,834 Z.96‘0
X 0,048 0,169 0,468 0,663 0,752 0,689 0,199
X 0,659 0,78 0,965 1,42 0,863 1,529 0,711
(Vili) 0,571 0,479 0,705 Z.06‘0 0,61 1,49 0,634
> 0,05 0,039 0,32 j 0,107 ι 0,623 0,073 0,1
(VI) 1 1 0,04 \ 0,038 0,487 0,182 ΓΛ Τί- © 0,042 0,039
> 0,042 0,037 0,654 0,659 1,272 0,508 0,119
> 0,265 0,041 0,399 0,682 0,508 0,044 0,052
1,284 o* 0,825 0,588 ch ' 1,083 0,476
(II) 1 1,119 0,039 0,944 CH 1,159! _1 1,236 0,051
e 0,786 _1 0,044 0,815 1,122 1,155 1,089 0,048
kódja - CH Γ*Ί r- OO 0
HU 218 357 B
3. táblázat (folytatás)
(XIX) 0,077 |- 0,05 0,085 0,041 0,04 0,501 1- 1,206 0,039 0,061 0,042 0,039 0,04 0,041 0,098 0,054 0,021 0,167
wu CM CM 50 Tf 00 r- WU 50 00 50 HU X
wu wu 05 50 CM 00 00 Tf WU wu WU Tf X WU © CM
> i—l © 1—t —H © CM CM © © © © © © © © © 1—<
X ©~ © © © © θ' © © © © © © © © © θ'
00 HU 00 r- 00 CM 50 CM 00 50 r- 05 Tf 00 CM Tf
O\ HU WU HU HU HU Tf HU Tf HU HU HU HU HU HU © 00
© © © © © © © © © © © © © © © © ©
íS θ' © © © © © ©’ © © ©’ © © © © © © ©
CM 00 05 50 CM 00 00 r- WU CM 50 HU r- HU X
r~- i-H 05 00 05 50 i-H © wu 05 00 © WU X Hl T-H
(X* X HU HU Tf CM © CM CM CM Hl CM CM CM CM CM CM © Tf
θ' © ©* ©” ©* © © ©* © © ©” © ©’ © © © θ'
x“\ wu 00 Tf HU 50 05 HU 44 WU 05 05 00 Hl
> χ 50 WU Tf Tf HU Tf HU Tf Tf Tf Tf HU WU H) CM
X © © © © © r-4 © © © © 1—< © © © © © CM
©* ©* ©* ©* ©* © © ©“ © © © © © ©” ©” ©’ ©
CM 50 05 50 00 00 HU 00 - HU CM Γ-
> © © r~ HU 00 50 05 Hí Tf Tf HU Tf Tf Tf Tf © 05
X CM —4 © © © Tf © © © © © © © © © ©
©* © θ' © © θ' © ©~ © ©* θ' © © © ©* © o
Tf 05 HU HU Tf 00 CM 00 05 05 F-l WU X
wu Tf CM i—t Tf Tf Tf 50 WU Tf HU HU Tf HU Tf © ©
sx 1—1 © 1—I © © © WU © © © © © © © © 1—<
© © θ' © © © © © © © © © © © © © ©”
X Tf Tf HU 00 Tf | HU CM CM CM wu
>—< Tf Tf WU Tf Tf Tf s wu Tf 3 Tf Tf Tf Tf Tf © 05
X © © © © © © © © © © © © © © ©
© © © ©* © ©* © © ©~ ©“ © ©* © ©* © ©” θ'
00 50 r- WU 05 CM CM 05 Tf
OO 05 Os HU HU Os Tf 50 Tf Tf HU Tf 3 Tf Tf © 05
X 50 oo HU C' Γ 50 © © © © © o © © © ©
©“ © θ' © ©* ©” © © θ' θ' ©~ © © ©* © ©
13 wu CM 50 05 05 WU Tf θ' Tf HU HU CM wu
CM HU © CM wu Tf r- Tf Tf Tf Tf Tf Tf Tf © 05
§· cl. X HU Tf CM CM WU CM © © © © © © © © © © ©
©’ ©* © θ’* © © © © © © © θ' © ©’ ©* © ©*
WU Tf Tf 05 05 HU wu WU 50 X 05
CM CM 50 50 00 wu HU CM C WU X X 05 r- CM 00
X CM HU © Tf Ί—t c- WU -K © © © © © © © í—1
© θ' © © © © o C3 ©~ © © Ο ©
O 05 HU Tf HU Tf wu 50 rH X θ' HU 00
© 00 00 c- 00 Tf wu 00 50 00 r- wu wu X wu
00 © © © Tf -H WU Tf © © © © © © © © i-H
© © © ©’ © © X-. © © © o” o* © © © ©
Γ- HU HU WU CM HU 50 wu CM CM CM 00
k—1 Tf OO WU Tf Tf Tf c- 50 Tf Tf Tf Tf Tf Tf Tf © 05
> 50 CM © © © © © | © © © © © | © © © ©
© © ©* © © & © ^-Tn © © o Ο* θ' © θ' © ©
r- CM CM wu 00 1—t 05 CM WU CM HU Tf wu
c- Tf © wu 05 Tf CM wu Tf Tf Tf Tf Tf WU Tf © ©
> © Tf HU © © © 50 00 © 1 © © © © © © o
©* ©* © ©* © © © ©“ θ' © © © © © o © ©
00 θ' 50 CM CM 50 Tf WU 00 50 C- 00 wu HU c- Tf
50 WU r-l c- CM Tf HU Γ- HU HU HU HU HU HU WU HU
> © C- 05 HU Tf © 1 OO HU F-l © © © © © © © CM
©” © © © © © © θ' © © © © © © ©* ©
HU 00 00 CM 05 WU Tf HU Tf HU HU CM 05
> Os x i—4 00 wu 50 Tf Tf Tf Tf Tf Tf Tf © 05
© wu wu © 50 r- CM © © © © © © © © ©
O © © o cT ©* ©’ © ©” © © Ο* © ©’ © ©
HU Tf 50 Tf wu WU 50 Tf 05 Tf C· 00 Tf HU Tf
M* 1 CM CM 00 —-I HU 50 HU HU Tf CM CM HU 1·«·^
H1 00 05 © 00 00 CM Hl i—· •—I 1-^ »—t © CM
© © © © © © θ' © © © © θ' © ©*
CM CM r- Tf i—t HU CM Tf X X X wu CM
z— © HU HU wu HU © Tf Tf Tf Tf Tf 3 Tf © ©
5 50 00 »—< r~~ oo WU Hl © © © © © © ©
©* ©” © © © ©* © θ' o © © © ©
Tf CM Tf HU 05 Tf r- Tf WU Os
__ CM CM Tf CM 50 Tf © 50 WU Tf Tf Tf Tf Tt Tf © ©
CM 50 © 50 r- 00 HU t—f © © © © O © © © 1—1
©* © © ©* © © Ó θ' © © ©” © o ©
S 00 CM 05 © X wu
o3 50 WU 50 r- r- X X Ü Q
ε Ő* ‘O WU HU CM Tf CM 49 HU HU r- Tf < < < < < < > H
< 2 Ό •o Ό o < CO ffi 'u
X) X X X X
HU 218 357 Β
4. táblázat
Egyedi peptidek antitestkötő képessége ELISA-vizsgálatban
A peptid jele A reakcióképes szérum száma A reakcióképes szérum százaléka
(I) 13 87
(II) 13 87
(III) 14 93
(IV) 10 67
(V) 10 67
(VI) 7 47
(VII) 8 53
(VIII) 13 87
(IX) 12 80
(X) 13 87
(XI) 13 87
(XII) 1 7
(XIII) 7 47
(XIV) 8 53
(XV) 2 13
(XVI) 5 33
(XVII) 4 27
(XVIII) 10 67
(XIX) 6 40
5. táblázat
HCV-antitestek kimutatása peptidelegy segítségével krónikus NANBH-betegektől származó szérumban egészséges donorok szérumához viszonyítva
Krónikus NANB-szérum Kontrollszérum
a szérum száma optikai sűrűség a szérum száma optikai sűrűség
101. 0,041 1. 0,049
102. 1,387 2. 0,047
103. 1,578 3. 0,049
104. 1,804 4. 0,046
105. 1,393 5. 0,049
107. 1,604 6. 0,045
108. 1,148 7. 0,043
109. 1,714 8. 0,053
110. 1,692 9. 0,049
112. 0,919 10. 0,047
113. 1,454 11. 0,060
114. 0,936 12. 0,044
115. 0,041 13. 0,049
Krónikus NANB-szérum Kontrollszérum
a szérum száma optikai sűrűség a szérum száma optikai sűrűség
116. 1,636 14. 0,051
118. 1,242 15. 0,056
119. 1,568 16. 0,050
120. 1,290 17. 0,049
121. 1,541 18. 0,055
122. 1,422 19. 0,054
123. 1,493 20. 0,058
124. 1,666 21. 0,050
125. 1,644 22. 0,044
126. 1,409 23. 0,043
127. 1,625 24. 0,045
128. 1,061 25. 0,046
129. 1,553 26. 0,049
130. 1,709 27. 0,050
131. 0,041 28. 0,047
132. 0,044 29. 0,050
133. 1,648 30. 0,053
134. 0,043 31. 0,051
135. 1,268 32. 0,053
136. 1,480 33. 0,055
138. 0,628 34. 0,064
139. 0,042 35. 0,063
140. 0,040 36. 0,057
141. 0,039 38. 0,048
142. 1,659 39. 0,045
143. 1,457 40. 0,046
144. 0,722 41. 0,046
145. 1,256 42. 0,051
146. 0,373 43. 0,057
147. 1,732 44. 0,050
148. 1,089 45. 0,050
149. 1,606 46. 0,045
150. 1,725 47. 0,041
151. 1,449 48. 0,064
154. 1,639 49. 0,040
155. 1,775 50. 0,036
HU 218 357 Β
6. táblázat
Anti-HCV-antitest kimutatása műanyaghoz kötött peptidekkel, peptidalapú ELISA-vizsgálattal és ismert készlettel
A szérum száma Műanyaghoz kötött peptidek
(I) (Hl) (IV) (V) (VI) (VIII) (XI) (XIV) (XV) (XVI) (XVIII)
191. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
192. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
193. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
194. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
195. 1 2 2 3 0 0 0,5 0,5 1 3 1
196. 1 2 1 2 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 2 0
197. 1 2 1 2 0 0,5 0,5 0,5 1 2 0
198. 1 2 2 2 0 0 0 0 1 0 0
211. 0,5 1 0,5 0,5 0 2 2 0 2 0 1
213. 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
214. 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
215. 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
216. 0 0 0 0,5 0 0 0 0 0 0 0
217. 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
219. 0,5 1 1 2 1 0,5 1 0 0,5 0,5 1
220. 0,5 1 1 2 1 0,5 1 0 0,5 0,5 1
221. 0 0 0 0,5 0 0 0 0 0 0 0
222. 1 1 1 1 0 0 2 0,5 0,5 0 0
223. 1 1 1 1 0 0 3 0,5 0,5 0 0
224. 1 1 2 1 0 0,5 3 0,5 0,5 0 0
225. 0 0 0 0 0 0,5 0,5 0,5 0 0 2
226. 0,5 0 0 0 0 2 3 2 0,5 0,5 3
227. 0 0 0 0 0 2 2 0,5 0,5 0,5 2
228. 0,5 0 0,5 0,5 0 2 2 2 0 0 2
234. 0,5 0,5 0 0,5 0 0 3 1 3 1 3
235. 0 0 0 0,5 0 0 0 0 0 0 0
236. 0 0 0 0,5 0 0 0 0 0 0 0
237. 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
238. 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 0
A szérum száma Optikai sűrűség ELISA-vizsgálattal S/N Optikai sűrűség kereskedelmi készlettel S/N
191. 0,045 0,18 0,295 0,47
192. 0,042 0,17 0,289 0,46
193. 0,039 0,16 0,197 0,32
194. 0,044 0,18 0,183 0,29
195. 1,692 6,77 3,000* 4,82*
196. 1,569 6,28 0,386 0,62
197. 1,523 6,09 0,447 0,72
198. 1,578 6,31 0,354 0,57
211. 1,606 6,42 3,000* 4,82*
HU 218 357 Β
6. táblázat (folytatás)
A szérum száma Optikai sűrűség ELISA-vizsgálattal S/N Optikai sűrűség kereskedelmi készlettel S/N
213. 0,369 1,48 0,127 0,20
214. 0,444 1,78 0,101 0,16
215. 0,637 2,55 0,101 0,16
216. 0,812 3,25 0,092 0,15
217. 1,320 5,28 0,875 1,40
219. 1,547 6,19 3,000* 4,82*
220. 1,536 6,14 3,000* 4,82*
221. 1,428 5,71 0,327 0,52
222. 1,362 5,45 3,000* 4,82*
223. 1,316 5,26 3,000* 4,82*
224. 1,304 5,22 3,000* 4,82*
225. 1,178 4,71 2,398 3,85
226. 1,256 5,14 3,000* 4,82*
227. 1,335 5,34 3,000* 4,82*
228. 1,400 5,60 3,000* 4,82*
234. 1,481 5,92 3,000* 4,82*
235. 0,351 1,40 0,257 0,41
236. 0,475 1,90 0,245 0,39
237. 1,134 4,54 0,351 0,56
238. 1,096 4,38 1,074 1,72
Határérték: 0,250 Határérték: 0,623
Megjegyzések a 6. táblázathoz:
O: nincs reakció;
0,5: enyhén pozitív;
1: egyértelműen pozitív;
2: erős reakció;
3: intenzív reakció.
*: Az optikai sűrűség túllépi a 3,000 értéket és a mérési tartományt. A megadott értek ezért a minimumérték.

Claims (14)

    SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Immundiagnosztikai készítmény, azzal jellemezve, hogy legalább egy peptidet tartalmaz az alábbi csoportok közül: (a) (I)-(XIX) általános képletű peptid Y-Met-Ser-Thr-Ile-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-ThrLys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Z-X (I) Y-Pro-Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg-Asn-Thr-Asn-ArgArg-Pro-Gln-Asp-Val-Lys-Phe-Pro-Gly-Z-X (Π) Y-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Asp-Val-LysPhe-Pro-Gly-Gly-Gly-Gln-Ile-Val-Gly-Z-X (III) Y-Leu-Pro-Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-Val-ArgAla-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser-Z-X (IV) Y-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser-Gln-Pro-ArgGly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Val-Z-X (V) Y-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Val-Arg-Arg-ProGlu-Gly-Arg-Thr-Trp-Ala-Gln-Pro-Gly-Z-X (VI) Y-Gly-Arg-Thr-Trp-Ala-Gln-Pro-Gly-Tyr-Pro-TrpPro-Leu-Tyr-Gly-Asn-Glu-Gly-Cys-Gly-Z-X (VII) Y-Leu-Ser-Gly-Lys-Pro-Ala-Ile-Ile-Pro-Asp-Arg-GluV al-Leu-T yr-Arg-Glu-Phe-Asp-Glu-Z-X (VIII) Y-Ile-Ile-Pro-Asp-Arg-Glu-V al-Leu-Tyr- Arg-GluPhe- Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-Ser-Gln-Z-X (ix) Y-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-Ser-Gln-His-Leu-ProTyr-Ile-Glu-Gln-Gly-Met-Met-Leu-Ala-Z-X (X) Y-Ser-Gln-His-Leu-Pro-Tyr-Ile-Glu-Gln-Gly-MetMet-Leu-Ala-Glu-Gln-Phe-Lys-Gln-Lys-Z-X (xi) Y-Ile-Glu-Gln-Gly-Met-Met-Leu-Ala-Glu-Gln-PheLys-Gln-Lys-Ala-Leu-Gly-Leu-Leu-Gln-Z-X (xii) HU 218 357 Β Y-Leu-Ala-Glu-Gln-Phe-Lys-Gln-Lys-Ala-Leu-GlyLeu-Leu-Gln-Thr-Ala-Ser-Arg-Gln-Ala-Z-X (XIII) Y-Gln-Lys-Ala-Leu-Gly-Leu-Leu-Gln-Thr-Ala-SerArg-Gln-Ala-Glu-Val-Ile-Ala-Pro-Ala-Z-X (xiv) Y-Glu-Asp-Glu-Arg-Glu-Ile-Ser-Val-Pro-Ala-GluIle-Leu-Arg-Lys-Ser-Arg-Arg-Phe-Ala-Z-X (XV) Y-Leu-Arg-Lys-Ser-Arg-Arg-Phe-Ala-Gln-Ala-LeuPro-Val-Trp-Ala-Arg-Pro-Asp-Tyr-Asn-Z-X (XVI) Y-Val-Trp-Ala-Arg-Pro-Asp-Tyr-Asn-Pro-Pro-LeuVal-Glu-Thr-Trp-Lys-Lys-Pro-Asp-Tyr-Z-X (XVII) Y-Glu-Thr-Trp-Lys-Lys-Pro-Asp-Tyr-Glu-Pro-ProVal-Val-His-Gly-Cys-Pro-Leu-Pro-Pro-Z-X (XVIII) Y-Val-His-Gly-Cys-Pro-Leu-Pro-Pro-Pro-Lys-SerPro-Pro-Val-Pro-Pro-Pro-Arg-Lys-Lys-Z-X (xix) a képletekben Y jelentése hidrogénatom vagy linker, amellyel a peptid egy hordozóhoz vagy szilárd fázishoz kapcsolható, és amely legalább 1 és legfeljebb 60 aminosavat, előnyösen 1-10 aminosavat, előnyösen cisztein, lizin, tirozin, glutaminsav vagy aszparaginsav közül megválasztott aminosavat tartalmaz, vagy kémiai csoport, előnyösen biotin vagy tioglikolsav, ahol Y adott esetben például N-terminális acetilezéssel módosítható, Z jelentése kémiai kötés vagy linker, amellyel a peptid egy hordozóhoz vagy szilárd fázishoz kapcsolható, és amely legalább 1 és legfeljebb 60 aminosavat, előnyösen 1-10 aminosavat, előnyösen cisztein, lizin, tirozin, glutaminsav vagy aszparaginsav közül megválasztott aminosavat tartalmaz, vagy kémiai csoport, előnyösen biotin vagy tioglikolsav, X jelentése aminocsoport vagy hidroxilcsoport, vagy ezek valamelyikét tartalmazó kapcsolócsoport, azzal a megszorítással, hogy ha Y vagy Z-X jelentése egy vagy több aminosav, akkor az bármely természetes HCV-farok-szakasztól eltérő, (b) a fenti peptidek variánsai, amelyek konzervatív vagy nemkonzervatív aminosavcserét tartalmaznak, (c) a fenti peptidek fragmensei, amelyek a fenti peptidekból legalább 6 aminosavat tartalmaznak, azzal a megszorítással, hogy a peptid az alábbi peptidektől eltérő: (1) Met-Ser-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys (2) Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg-Asn-ThrAsn-Arg-Arg-Pro-Gln (3) Gln-Asp-Val-Lys-Phe-Pro (4) Gly-Tyr-Pro-Trp-Pro-Leu-Tyr-Gly-Asn-Glu-Gly (5) Met-Ser-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-ThrLys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln (6) Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-Val-Arg (7) Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-GlyV al-Arg-Ala-Thr-Arg-Lys-Thr- Ser-Glu-Arg-Ser (8) Ala-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser (9) Gln-Pro-Arg-Gly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile (10) Pro-Lys-Val-Arg-Arg-Pro-Glu-Gly-Arg (11) Met-Ser-Thr-Ile-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-ThrLys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln (12) Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg (13) Glu-Arg-Glu-Ile-Ser-Val-Pro-Ala-Glu-Ile-LeuArg-Lys-Ser-Arg-Arg (14) Arg-Phe-Ala-Gln-Ala-Leu-Pro-V al-Trp-Alá-Arg legalább egy hordozóanyag mellett. 2. Az 1. igénypont szerinti immundiagnosztikai készítmény, azzal jellemezve, hogy legalább egy (I)—(VII) képletű peptidet tartalmaz. 3. A 2. igénypont szerinti immundiagnosztikai készítmény, azzal jellemezve, hogy további komponensként legalább egy (VIII)-(XIX) képletű peptidet tartalmaz. 4. Az 1. igénypont szerinti immundiagnosztikai készítmény, azzal jellemezve, hogy legalább egy (VIII)-(XIX) képletű peptidet tartalmaz. 5. Az 1. igénypont szerinti immundiagnosztikai készítmény, azzal jellemezve, hogy legalább egy, (XV)-(XIX) képletű peptidet tartalmaz. 6. Az 1. igénypont szerinti immundiagnosztikai készítmény, azzal jellemezve, hogy az alábbi peptidkeverékek közül legalább egyet tartalmaz: (a) (II), (III), (V), (IX) és (XVIII) (b) (I), (II), (V), (IX), (XI), (XVI) és (XVIII) (c) (II), (III), (IV), (V), (VIII), (XI), (XVI) és (XVIII) (d) (II), (IX) és (XVIII) (e) (II), (III), (IV)és(V) (f) (VIII), (IX), (XI), (XIII) és (XIV) (g) (XV), (XVI), (XVII), (XVIII) és (XIX) 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti immundiagnosztikai készítmény, azzal jellemezve, hogy a peptidek) N-terminálisan, C-terminálisan vagy intemálisan egy hordozómolekulához van(nak) kapcsolva, amely felhasználható antitestek előállítására, vagy elősegíti az adott peptid(ek) adszorpcióját a szilárd fázison. 8. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti immundiagnosztikai készítmény, azzal jellemezve, hogy a peptid(ek) detektálható jelölést tartalmaz(nak). 9. Eljárás hepatitis C vírus antitestek biológiai folyadékban, így szérumban vagy plazmában történő in vitro kimutatására, azzal jellemezve, hogy (a) egy diagnosztizálandó személy testfolyadékát az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti készítménnyel érintkeztetjük, és (b) az antitestből és az alkalmazott készítményben lévő peptid(ek)ből kialakult immunológiai komplexet detektáljuk. 10. Hepatitis C vírus elleni antitestek biológiai folyadékban történő detektálására alkalmas készlet, azzal jellemezve, hogy - az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti készítményből és - az antitestből és az alkalmazott készítményben lévő peptid(ek)ből kialakult immunológiai komplex detektálására alkalmas eszközből áll. 11. Eljárás az alábbi csoportba tartozó valamely peptid oldatban vagy szilárd hordozón történő előállítására: HU 218 357 Β (a) (I)-(XIX) általános képletű peptid Y-Met-Ser-Thr-lle-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-ThrLys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Z-X (I) Y-Pro-Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg-Asn-Thr-Asn-ArgArg-Pro-Gln-Asp-Val-Lys-Phe-Pro-Gly-Z-X (II) Y-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Asp-Val-LysPhe-Pro-Gly-Gly-Gly-Gln-Ile-Val-Gly-Z-X (III) Y-Leu-Pro-Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-Val-ArgAla-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser-Z-X (IV) Y-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser-Gln-Pro-ArgGly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Val-Z-X (V) Y - Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-V al-Arg-Arg-ProGlu-Gly-Arg-Thr-Trp-Ala-Gln-Pro-Gly-Z-X (VI) Y-Gly-Arg-Thr-Trp-Ala-Gln-Pro-Gly-Tyr-Pro-TrpPro-Leu-Tyr-Gly-Asn-Glu-Gly-Cys-Gly-Z-X (VII) Y-Leu-Ser-Gly-Lys-Pro-Ala-Ile-Ile-Pro-Asp-Arg-GluVal-Leu-Tyr-Arg-Glu-Phe-Asp-Glu-Z-X (VIII) Y-Ile-Ile-Pro-Asp-Arg-Glu-Val-Leu-Tyr-Arg-GluPhe-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-Ser-Gln-Z-X (ix) Y-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-Ser-Gln-His-Leu-ProTyr-Ile-Glu-Gln-Gly-Met-Met-Leu-Ala-Z-X (X) Y-Ser-Gln-His-Leu-Pro-Tyr-Ile-Glu-Gln-Gly-MetMet-Leu-Ala-Glu-Gln-Phe-Lys-Gln-Lys-Z-X (xi) Y-Ile-Glu-Gln-Gly-Met-Met-Leu-Ala-Glu-Gln-PheLys-Gln-Lys-Ala-Leu-Gly-Leu-Leu-Gln-Z-X (xu) Y-Leu-Ala-Glu-Gln-Phe-Lys-Gln-Lys-Ala-Leu-GlyLeu-Leu-Gln-Thr-Ala-Ser-Arg-Gln-Ala-Z-X (XIII) Y-Gln-Lys-Ala-Leu-Gly-Leu-Leu-Gln-Thr-Ala-SerArg-Gln-Ala-Glu-Val-Ile-Ala-Pro-Ala-Z-X (Xiv) Y-Glu-Asp-Glu-Arg-Glu-Ile-Ser-Val-Pro-Ala-Glu-IleLeu-Arg-Lys-Ser-Arg-Arg-Phe-Ala-Z-X (XV) Y-Leu-Arg-Lys-Ser-Arg-Arg-Phe-Ala-Gln-Ala-LeuPro-Val-Trp-Ala-Arg-Pro-Asp-Tyr-Asn-Z-X (XVI) Y-Val-Trp-Ala-Arg-Pro-Asp-Tyr-Asn-Pro-Pro-LeuVal-Glu-Thr-Trp-Lys-Lys-Pro-Asp-Tyr-Z-X (XVII) Y-Glu-Thr-Trp-Lys-Lys-Pro-Asp-Tyr-Glu-Pro-ProV al-V al-His-Gly-Cys-Pro-Leu-Pro-Pro-Z-X (XVIII) Υ -V al-His-Gly-Cys-Pro-Leu-Pro-Pro-Pro-Ly s-SerPro-Pro-Val-Pro-Pro-Pro-Arg-Lys-Lys-Z-X (XIX) a képletekben Y jelentése hidrogénatom vagy linker, amellyel a peptid egy hordozóhoz vagy szilárd fázishoz kapcsolható, és amely legalább 1 és legfeljebb 60 aminosavat, előnyösen 1-10 aminosavat, előnyösen cisztein, lizin, tirozin, glutaminsav vagy aszparaginsav közül megválasztott aminosavat tartalmaz, vagy kémiai csoport, előnyösen biotin vagy tioglikolsav, ahol Y adott esetben például N-terminális acetilezéssel módosítható, Z jelentése kémiai kötés vagy linker, amellyel a peptid egy hordozóhoz vagy szilárd fázishoz kapcsolható, és amely legalább 1 és legfeljebb 60 aminosavat, előnyösen 1-10 aminosavat, előnyösen cisztein, lizin, tirozin, glutaminsav vagy aszparaginsav közül megválasztott aminosavat tartalmaz, vagy kémiai csoport, előnyösen biotin vagy tioglikolsav, X jelentése aminocsoport vagy hidroxilcsoport, vagy ezek valamelyikét tartalmazó kapcsolócsoport, azzal a megszorítással, hogy ha Y vagy Z-X jelentése egy vagy több aminosav, akkor az bármely természetes HCV-farok-szakasztól eltérő, (b) a fenti peptidek variánsai, amelyek konzervatív vagy nemkonzervatív aminosavcserét tartalmaznak, (c) a fenti peptidek fragmensei, amelyek a fenti peptidekből legalább 6 aminosavat tartalmaznak, azzal a megszorítással, hogy a peptid az alábbi peptidektől eltérő:
  1. (1) Met-Ser-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys
  2. (2) Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg-Asn-ThrAsn-Arg-Arg-Pro-Gln
  3. (3) Gln-Asp-Val-Lys-Phe-Pro
  4. (4) Gly-Tyr-Pro-Trp-Pro-Leu-Tyr-Gly-Asn-Glu-Gly
  5. (5) Met-Ser-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg- Lys-ThrLys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln
  6. (6) Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-V al-Arg
  7. (7) Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-Val-Arg-Ala-ThrArg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser
  8. (8) Ala-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg-Ser
  9. (9) Gln-Pro-Arg-Gly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile
  10. (10) Pro-Lys-Val-Arg-Arg-Pro-Glu-Gly-Arg
  11. (11) Met-Ser-Thr-Ile-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-ThrLys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln
  12. (12) Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg
  13. (13) Glu-Arg-Glu-Ile-Ser-Val-Pro-Ala-Glu-Ile-LeuArg-Lys-Ser-Arg-Arg
  14. (14) Arg-Phe-Ala-Gln-Ala-Leu-Pro-Val-Trp-Ala-Arg azzal jellemezve, hogy az aminosavakat adott esetben védett és/vagy aktivált formában, önmagában ismert módon a kívánt sorrendben összekapcsoljuk.
HU9202645A 1990-12-14 1991-12-13 Hepatitis C vírus antitestek kimutatására alkalmas szintetikus antigéneket tartalmazó immundiagnosztikai készítmények és eljárás az antigének előállítására HU218357B (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP90124241A EP0489968B1 (en) 1990-12-14 1990-12-14 Synthetic antigens for the detection of antibodies to hepatitis C virus
SG1996005024A SG47062A1 (en) 1990-12-14 1990-12-14 Synthetic antigens for the detection of antibodies to hepatitis virus

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9202645D0 HU9202645D0 (en) 1993-01-28
HUT65930A HUT65930A (en) 1994-07-28
HU218357B true HU218357B (hu) 2000-08-28

Family

ID=26125651

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9202645A HU218357B (hu) 1990-12-14 1991-12-13 Hepatitis C vírus antitestek kimutatására alkalmas szintetikus antigéneket tartalmazó immundiagnosztikai készítmények és eljárás az antigének előállítására

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5922532A (hu)
EP (3) EP0489968B1 (hu)
JP (1) JP2995216B2 (hu)
KR (3) KR0181344B1 (hu)
AT (3) ATE149522T1 (hu)
AU (1) AU652013B2 (hu)
BR (1) BR9106220A (hu)
CY (2) CY2043A (hu)
DE (2) DE69030124T2 (hu)
DK (3) DK0644202T3 (hu)
ES (3) ES2138784T3 (hu)
GR (3) GR3022089T3 (hu)
HK (1) HK57597A (hu)
HU (1) HU218357B (hu)
IL (1) IL100158A (hu)
NZ (1) NZ240964A (hu)
SG (1) SG47062A1 (hu)
WO (1) WO1992010514A2 (hu)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5350671A (en) * 1987-11-18 1994-09-27 Chiron Corporation HCV immunoassays employing C domain antigens
US5683864A (en) * 1987-11-18 1997-11-04 Chiron Corporation Combinations of hepatitis C virus (HCV) antigens for use in immunoassays for anti-HCV antibodies
US6312889B1 (en) 1990-04-04 2001-11-06 Chiron Corporation Combinations of hepatitis c virus (HCV) antigens for use in immunoassays for anti-HCV antibodies
ATE206717T1 (de) * 1990-11-03 2001-10-15 Dade Behring Marburg Gmbh Hcv-spezifische peptide, mittel dazu und ihre verwendung
US5910404A (en) * 1990-12-14 1999-06-08 Innogenetics N.V. Synthetic antigens for the detection of antibodies to hepatitis C virus
AU1459792A (en) * 1991-01-14 1992-08-27 James N. Gamble Institute Of Medical Research Basic structural immunogenic polypeptides having epitopes for hcv, antibodies, polynucleotide sequences, vaccines and methods
RO117329B1 (ro) * 1991-06-24 2002-01-30 Chiron Corp Emeryville Polipeptide care contin o secventa a virusului hepatitei c
DE4209215A1 (de) * 1991-07-04 1993-01-07 Boehringer Mannheim Gmbh Hcv peptidantigene und verfahren zur bestimmung von hcv
US5811246A (en) * 1991-12-17 1998-09-22 The Research Foundation Of State University Of New York Process for immobilization onto the surfaces of ELISA plates of a compound carrier complex and for immunization
ZA928954B (en) * 1991-12-24 1993-05-19 Akzo Nv Peptides immunochemically reactive with antibodies directed against hepatitis non-A, non-B virus.
ATE179716T1 (de) 1992-03-06 1999-05-15 Innogenetics Nv Verfahren zur bestimmung von peptiden, die immunologisch wichtigen epitopen von hcv zugehörig sind
US6667387B1 (en) 1996-09-30 2003-12-23 N.V. Innogenetics S.A. HCV core peptides
US6709828B1 (en) 1992-03-06 2004-03-23 N.V. Innogenetics S.A. Process for the determination of peptides corresponding to immunologically important epitopes and their use in a process for determination of antibodies or biotinylated peptides corresponding to immunologically important epitopes, a process for preparing them and compositions containing them
CN1053196C (zh) * 1992-07-16 2000-06-07 株式会社先端生命科学研究所 用于丙型肝炎病毒分类的抗原肽, 含有所述肽的药盒及用所述肽进行分类的方法
DE4240980A1 (de) * 1992-08-07 1994-02-10 Boehringer Mannheim Gmbh HCV Peptidantigene und Verfahren zur Bestimmung von HCV
BR9405334A (pt) 1993-04-27 1999-05-25 Innogenetics Nv Novas sequências de genótipos de vírus da hepatite c e seu uso como agentes terapêuticos e diagnóstico
IT1270941B (it) * 1993-05-12 1997-05-26 Sorin Biomedica Spa Peptidi di hcv e loro usi.
US7070790B1 (en) * 1993-06-29 2006-07-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Nucleotide and deduced amino acid sequences of the envelope 1 and core genes of isolates of hepatitis C virus and the use of reagents derived from these sequences in diagnostic methods and vaccines
WO1996034013A1 (fr) * 1995-04-28 1996-10-31 Srl, Inc. Compose peptidique antigenique et methode de dosage immunologique
FR2775690B1 (fr) * 1998-03-09 2001-12-14 Bio Merieux Anticorps monoclonal et utilisations pour detecter des antigenes de la proteine core de vhc
WO1999058561A1 (fr) * 1998-05-14 1999-11-18 Pasteur Merieux Serums & Vaccins Mimotopes du virus de l'hepatite c
US7052830B1 (en) * 1998-06-09 2006-05-30 Branch Andrea D Hepatitis C virus peptides and uses thereof
DE60113139T2 (de) * 2000-07-07 2006-06-22 Medmira Inc., Halifax Hcv mosaik antigen zusammensetzung
AUPQ899400A0 (en) * 2000-07-26 2000-08-17 Csl Limited A method of stabilisation and compositions for use therein
EP1978365B1 (en) 2007-03-16 2010-08-25 Sysmex Corporation Reagent kit and method for measuring HCV antibody
JP4975601B2 (ja) * 2007-03-16 2012-07-11 シスメックス株式会社 Ｈｃｖ抗体測定用試薬キット及びｈｃｖ抗体測定方法
JP4975600B2 (ja) * 2007-03-16 2012-07-11 シスメックス株式会社 Ｈｃｖ抗体測定用試薬キット及びｈｃｖ抗体測定方法
ES2303496B1 (es) * 2008-02-21 2009-07-07 Fundacion Para El Estudio De Las Hepatitis Virales Metodo analitico perfeccionado para la deteccion de hepatitis c oculta, aplicaciones del mismo y su correspondiente kit de diagnostico.
US20100104555A1 (en) * 2008-10-24 2010-04-29 The Scripps Research Institute HCV neutralizing epitopes
FR2987836A1 (fr) * 2012-03-09 2013-09-13 Biomerieux Sa Peptides d'interference et procede de detection de microorganismes

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US594854A (en) * 1897-12-07 Territory
US505611A (en) * 1893-09-26 Henry v
JP2702911B2 (ja) * 1985-09-11 1998-01-26 ユナイテツド・バイオメデイカル・インコ−ポレ−テツド 合成ペプチド、並びにそれを用いたエイズおよびプリ・エイズの検出方法
US4879212A (en) * 1986-04-02 1989-11-07 United Biomedical Inc. Peptide composition and method for the detection of antibodies to HTLV-III
US4749259A (en) * 1987-05-15 1988-06-07 Hughes Aircraft Company Liquid crystal image projection with multicolor prepolarizing system
CN1049686C (zh) * 1987-11-18 2000-02-23 希龙股份有限公司 非ａ和非ｂ肝炎病毒的诊断及疫苗
US5350671A (en) * 1987-11-18 1994-09-27 Chiron Corporation HCV immunoassays employing C domain antigens
KR0185373B1 (ko) * 1989-03-17 1999-05-01 로버트 피. 블랙버언 Hcv 폴리단백질에서 유래되는 hcv 아미노산 서열 부분을 포함하는 폴리펩티드 및 그 사용
AU638304B2 (en) * 1989-12-22 1993-06-24 Abbott Laboratories Hepatitis c assay
KR940000755B1 (ko) * 1990-02-16 1994-01-29 유나이티드 바이오메디칼 인코오포레이티드 Hcv에 대한 항체 검출, hcv 감염의 진단 및 백신으로서의 그 예방에 특히 적합한 합성 펩티드
US5106726A (en) * 1990-02-16 1992-04-21 United Biomedical, Inc. Synthetic peptides specific for the detection of antibodies to HCV
EP0445801A3 (en) * 1990-03-08 1992-07-01 Kuraray Co., Ltd. Peptide and its use
ZA912040B (en) * 1990-03-30 1991-12-24 Akzo Nv Peptides immunochemically reactive with antibodies directed against hepatitis non-a,non-b virus
RU2130969C1 (ru) * 1990-04-04 1999-05-27 Чирон Корпорейшн Композиция для диагностики гепатита c человека (варианты), способ и набор для обнаружения антител к вирусу гепатита c человека
AU660925B2 (en) * 1990-04-06 1995-07-13 Genelabs Technologies, Inc. Hepatitis C virus epitopes
AU635124B2 (en) * 1990-04-16 1993-03-11 United Biomedical Inc. Synthetic peptides specific for the detection of antibodies to HCV, diagnosis of HCV infection and prevention thereof as vaccines
WO1992001714A1 (en) * 1990-07-24 1992-02-06 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Non-a non-b hepatitis virus antigen
CA2047792C (en) * 1990-07-26 2002-07-02 Chang Y. Wang Synthetic peptides specific for the detection of antibodies to hcv, diagnosis of hcv infection and prevention thereof as vaccines
JP3114731B2 (ja) * 1990-08-14 2000-12-04 国立感染症研究所長 Ｃ型肝炎ウイルス抗体検出用ペプチド抗原及びその使用方法
ATE346302T1 (de) * 1990-08-25 2006-12-15 Bioprocess Pty Ltd Nicht-a, nicht-b hepatitis virus antigen, und diagnostische verfahren.
JP2949822B2 (ja) * 1990-10-03 1999-09-20 住友化学工業株式会社 熱可塑性樹脂組成物
ATE206717T1 (de) * 1990-11-03 2001-10-15 Dade Behring Marburg Gmbh Hcv-spezifische peptide, mittel dazu und ihre verwendung
EP0485209A1 (en) * 1990-11-08 1992-05-13 Immuno Japan Inc. Non A, non B hepatitis virus related antigen, antibody detection systems, polynucleotides and polypeptides
KR920703640A (ko) * 1990-11-29 1992-12-18 테루카츄 아리마 비a비b형 간염 바이러스 항원 단백질
DE69200512T2 (de) * 1991-03-01 1995-03-09 Akzo Nv Mit Antikörper gegen Hepatitis non-A, non-B-Virus immunochemische reaktive Peptide.
AU2068992A (en) * 1991-08-02 1993-02-04 Akzo N.V. Non-a, non-b peptide
ZA927243B (en) * 1991-10-07 1994-01-26 Akzo Nv Non-A, Non-B peptides
ATE179716T1 (de) * 1992-03-06 1999-05-15 Innogenetics Nv Verfahren zur bestimmung von peptiden, die immunologisch wichtigen epitopen von hcv zugehörig sind

Also Published As

Publication number Publication date
KR0181345B1 (ko) 1999-04-01
KR0181343B1 (ko) 1999-04-01
DE69029092D1 (de) 1996-12-12
DE69029092T2 (de) 1997-04-17
DE69030124T2 (de) 1997-09-18
AU652013B2 (en) 1994-08-11
CY2053B1 (en) 1998-04-30
EP0489968B1 (en) 1996-11-06
DE69030124D1 (de) 1997-04-10
EP0489968A1 (en) 1992-06-17
ES2138784T3 (es) 2000-01-16
GR3023664T3 (en) 1997-09-30
BR9106220A (pt) 1993-03-30
CY2043A (en) 1998-02-20
EP0754704B1 (en) 1999-10-06
ES2095852T3 (es) 1997-03-01
NZ240964A (en) 1992-10-28
GR3022089T3 (en) 1997-03-31
HUT65930A (en) 1994-07-28
IL100158A (en) 1998-02-22
ATE144993T1 (de) 1996-11-15
DK0644202T3 (da) 1997-09-15
EP0754704A3 (en) 1997-05-28
HU9202645D0 (en) 1993-01-28
ES2101388T3 (es) 1997-07-01
DK0754704T3 (da) 2000-04-03
KR0181344B1 (ko) 1999-04-01
WO1992010514A2 (en) 1992-06-25
SG47062A1 (en) 1998-03-20
ATE149522T1 (de) 1997-03-15
GR3032150T3 (en) 2000-04-27
EP0644202B1 (en) 1997-03-05
EP0754704A2 (en) 1997-01-22
JPH05503722A (ja) 1993-06-17
ATE185350T1 (de) 1999-10-15
US5922532A (en) 1999-07-13
WO1992010514A3 (en) 1992-08-20
EP0644202A1 (en) 1995-03-22
JP2995216B2 (ja) 1999-12-27
AU9068991A (en) 1992-07-08
HK57597A (en) 1997-05-09
KR920703632A (ko) 1992-12-18
DK0489968T3 (da) 1997-03-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU218357B (hu) Hepatitis C vírus antitestek kimutatására alkalmas szintetikus antigéneket tartalmazó immundiagnosztikai készítmények és eljárás az antigének előállítására
JP3443809B2 (ja) 免疫学的に重要なエピトープに相当するペプチドの決定方法、及び免疫学的に重要なエピトープに相当するビオチニル化ペプチド又は抗体の決定のための方法におけるその利用、その調製方法及びそれを含む組成物
KR930008092B1 (ko) Hcv에 대한 항체의 검출, hcv 감염의 진단, 및 백신으로서의 그 예방에 특이적인 합성펩티드
US20120270208A1 (en) Synthetic antigens for the detection of antibodies to hepatitis c virus
US20060276622A1 (en) Process for the determination of peptides corresponding to immunologically important epitopes and their use in a process for determination of antibodies or biotinylated peptides corresponding to immunologically important epitopes, a process for preparing them and compositions containing them
CA2039481A1 (en) Peptides immunochemically reactive with antibodies directed against hepatitis non-a, non-b virus
AU655112B2 (en) HCV peptide antigens and method of determining HCV
US6709828B1 (en) Process for the determination of peptides corresponding to immunologically important epitopes and their use in a process for determination of antibodies or biotinylated peptides corresponding to immunologically important epitopes, a process for preparing them and compositions containing them
EP0744467A2 (en) Multiple antigenic peptide comprising at least two hepatitis C virus-associated peptides
JPH05320192A (ja) 非ａ非ｂ型肝炎ウイルスに対する抗体に免疫化学反応性を示すペプチド
AU775557B2 (en) Synthetic peptides immunoreactive with hepatitis A virus antibodies
JPH05331193A (ja) 非ａ非ｂ型肝炎ウイルスに対する抗体と免疫化学的に反応するペプチド
CA2074370C (en) Synthetic antigens for the detection of antibodies to hepatitis c virus
JPH04221398A (ja) 非ａ非ｂ型肝炎ウイルスに対する抗体と免疫化学反応するペプチド
WO1993002363A1 (en) Method to detect antibodies against hepatitis c virus and kits for the use thereof
JPH08325292A (ja) Ｃ型肝炎ウイルス関連合成ペプチド

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee