HU195724B - Insecticide compositions containing new c-pathotipe bacillus thuringiensis stock or theyr toxin as active component and process for producing the active component - Google Patents

Insecticide compositions containing new c-pathotipe bacillus thuringiensis stock or theyr toxin as active component and process for producing the active component Download PDF

Info

Publication number
HU195724B
HU195724B HU844761A HU476184A HU195724B HU 195724 B HU195724 B HU 195724B HU 844761 A HU844761 A HU 844761A HU 476184 A HU476184 A HU 476184A HU 195724 B HU195724 B HU 195724B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
toxin
bacillus thuringiensis
weight
active component
pathotype
Prior art date
Application number
HU844761A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT36690A (en
Inventor
Aloisius Krieg
Alois M Huger
Wolfgang Schnetter
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=6217523&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU195724(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of HUT36690A publication Critical patent/HUT36690A/hu
Publication of HU195724B publication Critical patent/HU195724B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/075—Bacillus thuringiensis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/832—Bacillus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/82—Proteins from microorganisms
    • Y10S530/825—Bacteria

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

A találmány tárgya hatóanyagként új, C-patotipusú Bacillus thuringiensis törzset vagy az általa termelt toxint tartalmazó inszekticid készítmény és eljárás a hatóanyag előállítására.
A kémiai inszekticidek mellett több éve ismert inszekticid kutatómunkák tárgyát képezik bakteriális inszekticidek. Legelőször 1915-ben írták le a Bacillus thuringiensist (Bt), mint lisztmolylárvák elerötelenedésének előidézőjét. A 70-es évek közepéig minden elkülönített Bt olyan patotipushoz tartozott, amelyik csak pikkely esszér nyúak (Lepidoptera) lárvái ellen volt hatásos. Ezt a patotípust A típusként jelölik. Ehhez tartoznak a var. thuringiensisen kivül a szintén gyakorlatilag felhasznált kurstaki és galleriae változatok.
1977-ben Goldberg és Margalit elkülönítettek a Negev-sivatagban egy szúnyogköltőhelyről származó mintából egy olyan törzset, amely különböző szúnyogalkatúak ( Nematocera) (Diptera) lárvái ellen fertőződnek bizonyult, és később Bacillus thuringiensis var. israeliensisként (Bti) osztályozták. Ezt a patotlpust B típusként jelölik. Időközben ezt a változatot is hasznosították gazdaságilag.
A bakteriális inszekticidek előnye abban van, hogy nagyon szelektíven bizonyos kártevő fajtákra hatnak.
így például a 4.166.112 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban közölnek egy inszekticidet, amelyet a Goldberg által felfedezett Bacillus thuringiensis var. israeliensis hatóanyagként tartalmaz. Ez nagyon egyértelműen mutatja, hogy ez a baktériumtörzs szúnyoglárvák ellen milyen szelektíven fertőzőén hat, míg más szervezeteket nem is befolyásol.
Igény van bakteriális inszekticidekre más kárlevőcsoportok ellen is.
A találmány tárgya a Bacillus thuringiensis egy új változata, amelyet Bacillus thuringiensis var. tenebrionsisként (Btt) jelölünk. Kimutatható volt, hogy ez a törzs inszekticid hatással rendelkezik mégpedig bogárfajták (Coleoptera, fedelesszárnyúak), különösen levélbogarak, például a kék égerlevelész (Agelestica alni) valamint a burgonyabogár (Leptinotarsa decemlineata) ellen. Egy új patotipusról van szó, amelyet C patotípusként jelölünk.
A találmány tárgyát képező továbbá egy bakteriális inszekticid, amely hatóanyagként C patotípusú Bacillus thuringiensist, különösen Bacillus- thuringiensis var. tenebrionist vagy egy ebből nyerhető inszekticid hatású készítményt illetve toxint tartalmaz.
Az új Btt változata a közönséges lisztbogár (Tenebrió molitor L., Coleoptera : Tenebrionidae) beteg fejlődési stádiumban lévő egyedeikböl különítették el. A tiszta tenyészet fenntartása 25 - 30 °C-on kémcsövekben ferde agar táptalajon történik. A típus konzerválása céljából száraz spórákat fagyasztanak. A meghatározás morfológiai és biokémiai ismertetőjegyek alapján történt.
Az elkülönített baktériumok agar táptalajon nagy, egyenetlen, fehéres telepeket fejleszt, amelyek sejtjei 18 - 24 óra múlva spóráznak. A vegetatív sejt ostoros, pálcikaalakú, és mérete körülbelül 1,0 x 2 - 8 pm. Gvam-pozitlvan reagál. A spóraanyasejt az alul fekvő ellipszoidális spóra mellett (0,8 x 1,4 - 1,6 pm) egy sík, lemezalakú és parallelogramma, rombusz vagy négyzet körvonalú (körülbelül 0,8 - 1,5 pm élhosszúságú) paraspcrális kristályt tartalmaz.
A vegetatív fázisban a Bacillus növekedése fakultatívan és anaerob is végbemegy. A spórazás ellenben aerob történik. A vegetatív sejtek növekedésére 25 - 30 °C-nál van a hőmérsékleti optimum. A 15 percig 121 °C-on végzett autoklávozás (megfelel 1 bal- túlnyomásnak) a spórákat és a kristálytoxint is teljesen inaktiválja. A spórák 254 nm-nél végzett ultraibolya besugárzással megfelelő dózisnál inaktiválódnak, a kristály toxin azonban nem.
A vegetatív sejtek biokémiai teljesítőképessége a következő. Lebontható szénhidrátokból (például glükózból) erjedési sav és acetil-metil-karbonil keletkezik, gáz azonban nem. Glükózon kívül savasodás közben mannózt és szacharózt is lebont, de laktózt, cellobiózt, szalicint, arabinózt, xilózt vagy mannitot nem. Eszkulint hidrolizál, hasonlóképpen keményítőt is. A következő enzimek mutathatók ki : kataláz, nitrát-reduktáz és proteináz. Nem mutatható viszont ki : lizin-dekarboxiláz, fenilalanin-dezamináz, ureáz és leeitináz.
Laboratóriumi méretben előállítási célokra fermentlézárót használunk. Egy 250 ml-es Erlenmeyer lombikban 50 ml tápoldatot fermentálunk. A tápoldat összetétele a kővetkező : 0,5 % élesztőkivonat, 0,5 % tripton, 0,1 % glukóz, 0,08 % kálium-dihidrogén-foszfát csapvizben, pll 7,0. Tenyésztési hőmérséklet 25 - 30 °C. Λ tenyészet spörázását követően, amely mikroszkóposán ellenőrizhető, a biomasszát lecentrifugáljuk és vízzel vagy pufferral kimossuk.
A Btt hatása fedelesszárnyúak (Coleoptera) lárváira olyan, ahogy már az A p>atotípusról ismert : Néhány órán belül a táplálkozás megszűnik, és a dózistól függően néhány nap múlva bekövetkezik az elhullás. A toxikus hatás oka az, hogy a középbél felhámját a bélnedvben oldott kristályos toxin tartósan károsítja. A károsodott bélsejtek elválnak egymástól és az alaphártyától, és a bélűrbe kerülnek. A bélfal áttörése következtében baktériumsejtek hatolhatnak a keringési űrbe, és ott a felbomlás folyamatát halálos vérmérgezéssel befejezik.
Az új Btt változat C patotipust, amelynek prototípusát egy elpusztult lisztbogár-bábból tudták elkülöníteni, a .Német Mikroorganizmus-gyűjteményben’ (Deutsche Samm3
195721 lung für Mikroorganismen) a DSM 2803 számon tették letétbe. A szerológiai vizsgálat szerint a DSM 2803 var. tenebrionsis törzs a H 8a,8b szerotlpushoz tartozik.
Az új Btt változat C patotípus szelektív inszekticid hatást mutat fedelesszárnyuakra, különösen a kék egérlevelészre (Agelastica alni) vagy a burgonyabogárra (Leptinotarsa decemlineata). A hatás lárvák esetében lényegesen erősebb, mint imágóknál. Semmilyen hatást nem észleltünk pikkelyesszárnyúak (Lepidoptera) ellen, például a lisztmoly (Ephestia Kühniella Zell.), Káposztamoly (Plutella xylostella L.) ellen, és kétszárnyúak (Diptera), például a sárgalázszúnyog (Aedes aegypti L.) ellen sem. A kővetkető táblázatban összefoglaljuk az elvégzett biológiai vizsgálatok eredményeit.
Btt toxikus hatása különböző fedelesszárnyúakra (Coleoptera), pikkelyesszárnyúakra (Lepidoptera) illetve kétszárnyúakra (Diptera).
l'izsgalt faj Alkalmazott dózis (spóraek vivale ns) Toxikus hatás
Kék égerlevelész 10®/cm2 +
Burgonyabogár 106/cm2 +
Lisztmoly 2.5xl08/cm3 -
Káposztamoly 4xlO7/cm2 -
Sárgalázszúnyog 5xl06/cn,3 -
A tulajdonképpeni inszekticid hatóanyag a Bacillus thuringiensis esetében a kristályos toxin. A kristálytömeg elkülöníthető, ha a spórázott tenyészetekből a spórangiumok lizise után a kristályokat a sejtmaradékoktól és a spóráktól elválasztjuk, és megtisztítjuk, például sűrűséggradienssel.
A Laemmli módszere [Natúré 227, 680 (1970)] szerinti SDS-poliakrilamidgélelektroforézis segítségével végzett molekulatömeg meghatározásnál két fő sávot találtunk körülbelül 65000 D és körülbelül 70000 D értéknél. Kisebb, gyengébb intenzitású sávok vannak a 20000-40000 D tartományban.
A találmány szerinti toxin segítségével olyan antitestek nyerhetők, amelyek Ouchterlony-féle immundiffúziós tesztben semmilyen keresztreakciót nem adnak az A vagy B patotipus más toxinjával.
Inszekticidként való alkalmazás céljából a Bacillus thuringiensis var. tenebrionist vagy valamely ebből nyerhető inszekticid hatású preparátumot vagy toxint önmagában ismert módon szokásos adalékokkal (hordozók, rőgzltöszerek, nedvesítőszerek, stb.) elegyítjük, és valamilyen megfelelő alkalmazási fámába alakítjuk. Az így formált inszekticid nedvesíthető por, szuszpenzió formájában, granulátumként vagy egyéb formában alkalmazható. Előnyösen valamilyen tisztított, spórázott tenyészetet használunk valamilyen nedvesi tőszer, például 0,1 % Citowet s (BASF) hozzáadásával készített szuszpenció formájában. A kezelendő földfelületre hektáronként 1Ü12 - 1015, előnyösen 1013 - 10H spórát és ekvivalens számú toxikus kristályt permetezünk ki. Ilyen módon például sikerül burgonyaföldet 2-4 hétig védeni burgonyabogártól. Az egész növekedési fázis alatti védelem céljából az említett időközönként további kezelések szükségesek. A nem-célszervezetek, például rovarevők (untomofagúk) és mézelő méhek elleni hatás nem volt figyelemreméltó.
Az alábbi példák kapcsán közelebbről is ismertetjük a találmány szerinti megoldást és eredményeit
1.példa.
C-patotípusú Bacillus thuringiensis tenyésztése és az inszekticid toxin elkülönítése 10 g eptonból (vagy rptonból), g élesztőkivonatból, g nátrium-kloridból,
1000 ml-re kiegészítő desztillált vízből álló tápoldatot sterilizáltunk és C patotipusú Bacillus thuringiensis DSM 2803-mal inokuláltunk. Az inokulálási dózis egy 24 órás indulási kultúrából 0,5-1 % volt. Az inkubációs hőmérséklete 30-32 °C-ra állítottuk be, a rázógép rázási sebessége max 200 ford/perc.
A fermentáló akkor fejeződött be, amikor egy mikroszkopikus vizsgálat azt mutatta, hogy a spórangiumok több, mint 90%-a spontán lizálódott. A szabad spórák és kristályok (= spóraekvivalens) kitermelése körülbelül 1010/ ml.
Az ezen tenyésztési eljárással kapott spórákat a fermentációs tápoldat 30 perc alatt 5000 g-ná) végzett centrifugálásával elkülönítettük. Az üledéket vízzel mostuk és ezt követően liofilizáltuk.
Annak érdekében, hogy ebből a primer termékből a toxinkristályokat elkülönítsük, a kapott üledéket mintegy 1 mg/ml koncentrációban szuszpendáltuk és 25-55 tömeg% lineáris cézium-klorid-gradiensre állítottuk be. 3 óra alatt 20000 ford/perc-nél végzett centrifugálés a spórák kristályok és sejttörmelék különböző sávokká való szétválasztásához vezetett. A 35-45 tömeg% cézium-klorid tartományú három sáv közül a középső tartalmazta a tiszta toxinkristályokat. Ezt a sávot kivettük és 50 ml vízben 15000 ford/perc-nél 30 percig kétszer centrifugáltuk, hogy a kristályokat cézium-klorid-mentesre mossuk. Ezt követőét, a kristályok szuszpenzióként vagy liofilizálva alkalmazhatók a továbbiakban.
2. példa
C-patotípusú Bacillus thuringiensist tartalmazó inszekticid készítmény.
-3G
19572-1 ι
Λζ 1. példa szerint kapuit primer termék (üledék a tenyészet szuszpenziójának 30 perces, 5000 g-nál végzett centrifugása után (fagyasztva szárítást követően kb. 3xl08 spóraekvivalenst tartalmazott liofilizátum mg-onként. A dózisfüggö hatás vizsgálatára 5 burgonya-hajtásokat mártottunk a C-patotipusú Bacillus thuringiensis (DSM 2803) vizes szuszpenziójéba és száradás után meghatározott stádium burgonyabogárral (Li, L2, L3 és L-t) népesítettük be. Az a) 10®, b) 107, c) 10 10s és d) 10® spóraekvivalens/ml koncentrációsort teszteltük. 0,025 % Citowett (alkil— -aril-poliglikoléter bázisú nedvesitöszert, BASF, Ludwigshafen/Rhein, NSZK) hozzáadásával javítottuk a szuszpenziók nedvesítőké- 15 pességét. 3xl08 spóraekvivalens/mg liofilizátum alapul vételével az inszekticid készítmény összetétele a kővetkezőképpen alakult:
a) 0,0003 tömegszázalék aktív hatóanyag,
0,025 tömegszázalék nedvesitöszer és a 20 maradék víz;
b) 0,003 tömegszázalék aktív hatóanyag,
0,025 tömegszázalék nedvesítőszer és a maradék víz;
c) 0,03 tömegszázalék aktív hatóanyag, 25
0,025 tömegszázalék nedvesitöszer és a maradék víz;
d) 0,3 tömegszázalék aktiv hatóanyag,
0,025 tömegszázalék nedvesitöszer és a maradék viz. 30
A kontroll burgonya-hajtásait csak olyan nedvesitöszer-oldatba mártottuk, amely 0,025 tömegszázalék Citowett-et és a fennmaradó mennyiségben vizet tartalmazott.
Az állatok száma kísérletenként 30 volt. 35 A kísérleti hőmérséklet körülbelül 30 °C volt.
A kiértékelés szempontjából mértékadónak a végső mortalitást tekintettük. Ennek során a következő értékek adódtak:
Li: LCsoSxlO® spóraekvivalens/ml 40
L2: LCsolxlO7 spóraekvivalens/ml L3: LCsobxlO7 spóraekvivalens/ml Li: LCso >109 spóraekvivalens/ml
Szabadföldi kísérlet számára 108 spóraekvivalens/ml permetezöszert készítettünk, 45 ami megfelel kb. 0,03 tömegszázalék aktív hatóanyagnak, 0,025 tömegszázalék Citowett-nek, a maradék viz volt. A készítményt hordozható sűrített levegővel működő permetezőkészülékkel permeteztük ki. Az eredmények 50 ellenőrzésére meghatároztuk a három vagy több lárvát tartalmazó növények számát. A felhasznált mennyiség 500 liter volt hektáronként, vagyis 5xl09 spóraekvivalens négyzetméterenként. Az 1. ábra szemlélteti a 4 55 kísérleti variáns eredményeit.
Az 1. jelölési változat a kezeletlen kontrollt szemlélteti. A 2. jelölésű változatban rendszeresen, körülbelül 14 napos időközökben 5xl09 spóraekvivalens/m2 dózist perme- 60 teztünk ki. A 3. jelölésű változatban rendszeresen, minden két hétben 5xl010 spóraekvivalens/m^t permeteztünk ki. A 4. jelölési változatban először 5x109 spóraekvivalens/ /m2-t alkalmaztunk. Ezután az adagot 2,5xxlO11 spóraekvivalens/m2 értékre növeltük és ezután már csak egy kezelést alkalmaztunk, amennyiben a növények legalább 10%-át legalább 3 lárva lepte el. Összesen csupán 4 permetezés volt szükséges, míg a 2. és
3. jelölésű változatban 6 permetezést végeztünk.A kipennetezett aktív hatóanyag összmennyisége a 2. jelölésű változatban 7,5xlO10 spóraekvivalens/m2, a 3. jelölésű változatban 2,1x1ο11 spóraekvivalens/m2 és a 4. jelölésű változatban 7,CxlO11 spóraekvivalens/m2 volt
Az 1. ábrából az is kitűnik, hogy a fertözőttség a kezeletlen kontroliban július végéig megközelítőleg azonos volt. Augusztus kezdetén jelentős növekedés következett be, amit vélhetően a lárvák 2. generációja határozott meg. A fertözőttség a kezelt parcellákban jóval a kezeletlen kontrolié alatt volt. Már egy 5xl09 spóraekvivalens/m2 dózis elegendő ahhoz, hogy a fertözöttséget a kezeletlen kontrolihoz képest - 17%-ra csökkentsük. A 4. jelölésű változat azt szemlélteti, hogy kezelések takaríthatok meg, amennyiben nagyobb dózist alkalmazunk. Gazdaságosság kérdése, hogy ezt az utat választjuk-e.,

Claims (4)

1. Eljárás C-i»atotipusú, fedelesszárnyúak (Coleoptera) ellen hatásos toxint tartalmazó Bacillus thuringiensis eejtkészitmény és a C-patotipusú toxin előállítására, azzal jellemezve, hogy C-patotipusú Bacillus thuringiensist szén-és nitrogénforrásokat tartalmazó tápközegben tenyésztünk, a tenyészetből a sejttömeget kinyerjük, és a spontán lizált keverékből a kristályokat a spóra- és egyéb sejtmaradékoktól elkülönítjük és az így kapott kristálytömeget tisztítjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy C-patotipusú Bacillus thuringl'ensisként a DSM 2803 letéti számú törzset tenyésztjük.
3. Inszekticid készítmény Coleoptera ellen, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként 0,001-95 tömegszázalék előnyösen 0,003-60 tömegszázalék C-patotipusú Bacillus thuringiensist vagy ebből előállítható toxint, és 5-99,999 tömegszázalék adalékanyagot, úgymint szilárd, inért szervetlen vagy szerves hordozóanyagot, folyékony szuszpendáló- emulgeáló- vagy oldószert és/vagy nedvesítő, szétterülést elősegítő és/vagy tapadást elősegítő szert, előnyösen 99,987-39,99 tömegszázalék vizet és 0,01-1 tömegszázalék nedvesítószert, előnyösen alkil-aril-poíiglikoléter bázisút tartalmaz.
4. A 3. igénypont szerinti Coleoptera elleni inszekticid készítmény, azzal jellemezve, hogy a hatóanyag olyan C-patotipusú Bacillus thuringiensis, melynek letéti száma DSM 2803,vagy az ebből nyerhető toxin.
HU844761A 1983-12-21 1984-12-20 Insecticide compositions containing new c-pathotipe bacillus thuringiensis stock or theyr toxin as active component and process for producing the active component HU195724B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19833346138 DE3346138A1 (de) 1983-12-21 1983-12-21 Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT36690A HUT36690A (en) 1985-10-28
HU195724B true HU195724B (en) 1988-07-28

Family

ID=6217523

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU844761A HU195724B (en) 1983-12-21 1984-12-20 Insecticide compositions containing new c-pathotipe bacillus thuringiensis stock or theyr toxin as active component and process for producing the active component

Country Status (11)

Country Link
US (3) US4766203A (hu)
EP (1) EP0149162B1 (hu)
JP (2) JPH0634708B2 (hu)
AT (1) ATE60980T1 (hu)
CA (1) CA1268133A (hu)
DE (2) DE3346138A1 (hu)
ES (1) ES8605032A1 (hu)
HU (1) HU195724B (hu)
IL (1) IL73838A (hu)
PL (2) PL145191B1 (hu)
SU (1) SU1448995A3 (hu)

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3346138A1 (de) * 1983-12-21 1985-07-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera
US4889918A (en) * 1983-12-21 1989-12-26 Boehringer Mannheim Gmbh Protein tokin from bacillus thiringiensis which is toxic to coleoptera
BR8600161A (pt) * 1985-01-18 1986-09-23 Plant Genetic Systems Nv Gene quimerico,vetores de plasmidio hibrido,intermediario,processo para controlar insetos em agricultura ou horticultura,composicao inseticida,processo para transformar celulas de plantas para expressar uma toxina de polipeptideo produzida por bacillus thuringiensis,planta,semente de planta,cultura de celulas e plasmidio
DE3685968T2 (de) * 1985-01-22 1993-07-01 Mycogen Corp Zellulare einkapselung biologischer pestizide.
US4797276A (en) * 1985-03-22 1989-01-10 Mycogen Corporation Control of cotton boll weevil, alfalfa weevil, and corn rootworm via contact with a strain of Bacillus thuringiensis
US4764372A (en) * 1985-03-22 1988-08-16 Mycogen Corporation Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof
US4771131A (en) * 1985-08-16 1988-09-13 Mycogen Corporation Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene encoding a protein toxic to beetles of the order Coleoptera
GB8526774D0 (en) * 1985-10-30 1985-12-04 Sandoz Ltd Bacillus thuringiensis hybrids
TR27832A (tr) * 1987-04-29 1995-08-31 Monsanto Co Zararli ucucu hasarata mukavim bitkiler.
US5024837A (en) * 1987-05-06 1991-06-18 Donovan William P Coleopteran active microorganisms, related insecticide compositions and methods for their production and use
US4910016A (en) * 1987-08-03 1990-03-20 Mycogen Corporation Novel Bacillus thuringiensis isolate
NZ226442A (en) * 1987-10-13 1991-08-27 Lubrizol Genetics Inc Anti-coleopteran toxin and gene
GB8800652D0 (en) * 1988-01-13 1988-02-10 Ici Plc Bacterial strain
US4999192A (en) * 1988-02-12 1991-03-12 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
US4966765A (en) * 1988-02-23 1990-10-30 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolate
US4996155A (en) * 1988-03-04 1991-02-26 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin
US5683691A (en) * 1989-02-15 1997-11-04 Plant Genetic Systems, N.V. Bacillus thuringiensis insecticidal toxins
IT1231766B (it) * 1989-08-01 1991-12-21 Mini Ricerca Scient Tecnolog Bacillus thuringiensis var. donegani, preparato o tossina da esso ottenuta aventi attivita' insetticida contro i coleotteri.
US5279962A (en) * 1989-11-17 1994-01-18 Novo Nordisk A/S Mutants or variants of Bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin
US5874289A (en) * 1989-11-17 1999-02-23 Abbott Laboratories Bacillus thuringiensis mutants which produce high yields of crystal delta-endotoxin
SK281286B6 (sk) * 1989-11-17 2001-02-12 Novo Nordisk A/S Mutant mikroorganizmu bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis dsm 5480, spôsob jeho prípravy a pesticídny prostriedok, ktorý ho obsahuje
US5602032A (en) * 1989-11-17 1997-02-11 Abbott Laboratories Bacillus thuringiensis mutants which produce high yields of crystal delta-endotoxin
GB9003546D0 (en) * 1990-02-16 1990-04-11 Tabac Fab Reunies Sa Control of cigarette beetles
US5187091A (en) * 1990-03-20 1993-02-16 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects
DK73890D0 (da) * 1990-03-22 1990-03-22 Novo Nordisk As Pesticid
DK141790D0 (da) * 1990-06-08 1990-06-08 Novo Nordisk As Middel
GB9023735D0 (en) * 1990-11-01 1990-12-12 Ici Plc Bacterial strain
US5698440A (en) 1990-11-14 1997-12-16 Abbott Laboratories Bacillus thuringiensis mutants which produce high yelds of crystal delta-endotoxin
US5264364A (en) * 1991-01-31 1993-11-23 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects
US5204100A (en) * 1991-02-01 1993-04-20 Ciba-Geigy Corporation Baciullus thuringiensis strains active against coleopteran insects
ATE237679T1 (de) 1991-02-05 2003-05-15 Valent Biosciences Corp Bacillus thuringiensis isolate
US5260058A (en) * 1991-05-22 1993-11-09 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis isolates active against hymenopteran pests
CA2101610A1 (en) * 1992-08-07 1994-02-08 William D. Prevatt Production of bacillus entomotoxins in methylotrophic yeast
US6277624B1 (en) 1992-11-05 2001-08-21 Valent Biosciences, Inc. Mutants which produce a potentiator of Bacillus pesticidal activity
US6406691B1 (en) 1992-11-05 2002-06-18 Valent Biosciences Corp. Potentiator of Bacillus pesticidal activity
US6268181B1 (en) 1992-11-05 2001-07-31 Valent Biosciences, Corporation Methods for producing a potentiator of Bacillus pesticidal activity
IL110299A0 (en) 1993-07-15 1994-10-21 Novo Nordisk Entotech Inc Formation of and methods for the production of large bacillus thuringiensis crystals with increased pesticidal activity
US5976563A (en) * 1994-03-14 1999-11-02 Abbott Laboratories Pesticidal composition and Bacillus thuringiensis strain
US5976564A (en) * 1994-03-14 1999-11-02 Abbott Laboratories Pesticidal composition and bacillus thurigiensis strain
US6258356B1 (en) 1995-02-10 2001-07-10 Valent Biosciences Corp. Methods for controlling insect pests with compositions containing Bacillus thuringiensis strains
IL124020A (en) * 1995-10-13 2003-05-29 Dow Agrosciences Llc Plant optimized nucleotide sequence that encodes an insecticidal crystal protein
US6063756A (en) * 1996-09-24 2000-05-16 Monsanto Company Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor
US5942664A (en) * 1996-11-27 1999-08-24 Ecogen, Inc. Bacillus thuringiensis Cry1C compositions toxic to lepidopteran insects and methods for making Cry1C mutants
DE69835538T2 (de) 1997-12-18 2008-01-03 Monsanto Technology Llc Insekten-resistante transgene pflanzen und verfahren zur verbesserung von der aktivität von delta-endotoxine gegen insekte
US6500617B1 (en) 1998-05-01 2002-12-31 Maxygen, Inc. Optimization of pest resistance genes using DNA shuffling
US8080496B2 (en) 2000-10-06 2011-12-20 Syngenta Crop Protection, Inc. Method for reducing pest damage to corn by treating transgenic corn seeds with thiamethoxam pesticide
US6586365B2 (en) 2000-10-06 2003-07-01 Monsanto Technology, Llc Method for reducing pest damage to corn by treating transgenic corn seeds with clothianidin pesticide
US9816104B2 (en) * 2000-10-06 2017-11-14 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for deploying a transgenic refuge as a seed blend
US6593273B2 (en) 2000-10-06 2003-07-15 Monsanto Technology Llc Method for reducing pest damage to corn by treating transgenic corn seeds with pesticide
US10036036B1 (en) 2007-03-15 2018-07-31 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for deploying a transgenic refuge as a seed blend
CA2760697C (en) 2009-05-03 2017-10-17 Monsanto Technology Llc Systems and processes for combining different types of seeds
US8551757B2 (en) * 2009-09-11 2013-10-08 Valent Biosciences Corporation Bacillus thuringiensis isolate
US9365863B2 (en) 2013-05-08 2016-06-14 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for deploying a transgenic refuge seed blend
WO2023156906A1 (en) 2022-02-15 2023-08-24 Futuragene Israel Ltd A bacillus thuringiensis pesticidal protein (bt pp) combination useful for plant protection

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS4833364B1 (hu) * 1970-12-29 1973-10-13
SU548625A1 (ru) * 1976-01-09 1977-02-28 Мордовский государственный университет им.Н.П.Огарева Штамм вас вариант полынного листоеда
FR2338707A1 (fr) * 1976-01-22 1977-08-19 Rhone Poulenc Ind Nouvel inhibiteur de glyco-hydrolases et sa preparation par culture d'un streptomyces
US4133716A (en) * 1976-11-22 1979-01-09 Crc Compagnia Ricerca Chimca, S.A. Method for the biosynthesis of a microbial insecticide
US4265880A (en) * 1979-04-27 1981-05-05 Battelle Development Corporation Microbial insecticide
WO1982003872A1 (en) * 1981-04-27 1982-11-11 Washington Univ B.thuringiensis crystal protein in e.coli
FR2525630B1 (fr) * 1982-04-26 1985-07-05 Pasteur Institut Adn contenant une sequence codant pour une proteine du cristal ou un polypeptide doue de proprietes insecticides, micro-organismes transformes par de tels adn, compositions contenant lesdites proteines du cristal, polypeptide ou micro-organismes
DE3338480A1 (de) * 1983-10-22 1985-05-02 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neues protein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)0(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung
DE3346138A1 (de) * 1983-12-21 1985-07-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera
US4764372A (en) * 1985-03-22 1988-08-16 Mycogen Corporation Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof
US4853331A (en) * 1985-08-16 1989-08-01 Mycogen Corporation Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene toxic to beetles of the order Coleoptera
US5024837A (en) * 1987-05-06 1991-06-18 Donovan William P Coleopteran active microorganisms, related insecticide compositions and methods for their production and use

Also Published As

Publication number Publication date
JPH06192027A (ja) 1994-07-12
HUT36690A (en) 1985-10-28
PL251010A1 (en) 1985-08-27
JPH0634708B2 (ja) 1994-05-11
SU1448995A3 (ru) 1988-12-30
EP0149162A3 (en) 1986-12-30
ATE60980T1 (de) 1991-03-15
US4973676A (en) 1990-11-27
US4766203A (en) 1988-08-23
US4851340A (en) 1989-07-25
DE3346138A1 (de) 1985-07-11
ES8605032A1 (es) 1986-03-16
EP0149162B1 (de) 1991-02-27
JPH0729895B2 (ja) 1995-04-05
PL154613B1 (en) 1991-08-30
CA1268133A (en) 1990-04-24
EP0149162A2 (de) 1985-07-24
IL73838A (en) 1988-11-30
JPS60156382A (ja) 1985-08-16
ES538984A0 (es) 1986-03-16
PL145191B1 (en) 1988-08-31
DE3484196D1 (de) 1991-04-04
IL73838A0 (en) 1985-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU195724B (en) Insecticide compositions containing new c-pathotipe bacillus thuringiensis stock or theyr toxin as active component and process for producing the active component
US6406690B1 (en) Bacillus firmus CNCM I-1582 or Bacillus cereus CNCM I-1562 for controlling nematodes
US5006336A (en) Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
SK13062001A3 (sk) Biologicky čistá kultúra, prostriedok, izolovaný metabolit, supernatant, čiastočne vyčistená frakcia, vo vode rozpustná látka, spôsob produkcie fungicídneho supernatantu, spôsob čiastočného vyčistenia supernatantu, spôsob zvýšenia insekticídnej aktivity
ZA200107386B (en) A strain of Bacillus pumilus for controlling plant diseases.
EP0366398A1 (en) Novel lepidopteran-active bacillus thuringiensis isolate
JPH02288814A (ja) 新規な鞘翅目に活性のバシルス　チューリンゲンシス単離体
US3087865A (en) Process for making pesticidal compositions
CN114736828A (zh) 一种生防菌株及其在植物病害防治中应用
JPH05260954A (ja) 微生物の単離方法並びにそれによって単離された微生物及びその用途
US5266483A (en) Bacillus strain and insect pest controlling agent
JPH0358904A (ja) 新規なバシラス・スリンギエンシス分離体
US4889918A (en) Protein tokin from bacillus thiringiensis which is toxic to coleoptera
JPH04505998A (ja) バシラススリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の新株、その製造法及び、昆虫の制御ならびに昆虫の攻撃からの植物の保護におけるその利用
KR20220097325A (ko) 포자 형성속도가 빠르며 나방목 해충에 살충 효과를 가지는 바실러스 투린지엔시스 아종 쿠르스타키(Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki) KNU-25 균주 및 이의 용도
KR100403896B1 (ko) 채소류 모잘록병균에 길항하는 바실러스 에히멘시스
RU2048099C1 (ru) Штамм бактерий bacillus thuringiensis var donegani для получения инсектицидного препарата против жесткокрылых насекомых, кристаллический параспоральный белковый токсин и способ борьбы с жесткокрылыми насекомыми
EP0309145A1 (en) Bacteriophage-resistant strain of Bacillus Thuringiensis Var. San Diego
JP2845722B2 (ja) 黒腐病の防除方法
Vishnu et al. Management of root-knot nematode in tomato using antagonistic bacteria Stenotrophomonas maltophilia strain w 2–7
US7319028B2 (en) Process for producing sporangia of Bacillus popilliae, control agent, and controlling method
RU1794434C (ru) Штамм бактерий BacILLUS тнURINGIеNSIS дл изготовлени энтомопатогенного препарата
JP2001149066A (ja) バチルス・ポピリエの胞子嚢の製造方法
JPH02503510A (ja) アセテート選択バチルス・ツリンギエンシスおよび使用法
CA2118207C (en) Bacillus thuringiensis m200 for the biological control of agricultural and horticultural entomological pests

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: NOVO NORDISK A/S, DK

HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: ABBOTT LABORATORIES, US

HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: VALENT BIOSCIENCES CORPORATION, US

HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee