JPH0358904A

JPH0358904A - 新規なバシラス・スリンギエンシス分離体

Info

Publication number: JPH0358904A
Application number: JP2190908A
Authority: JP
Inventors: Theresa C Olson; テリーサ　シー．オルソン; Jewel Payne; ジュエル　ペイン; Theodore Alby Iii; テオドール　アルビー　ザ　サード; W Talbelt Henry; ヘンリー　ダブル．タルバト
Original assignee: Mycogen Corp
Current assignee: Mycogen Corp
Priority date: 1989-07-21
Filing date: 1990-07-20
Publication date: 1991-03-14
Also published as: CA2019442A1; EP0409438A1; ZA904956B; AU5898490A; AU632830B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は新規なバシラス・スリンギエンシス分離体に関
する。

〔従来の技術〕

バシラス・スリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈ
ｒｉｎ−ｇｉｅｎｓｉｓ．　Ｂ．ｔ．）は、δ一エンド
トキシンと呼ばれる昆虫毒素をつくる。毒素はｅ．ｔ．
抱子形成細胞によって合成される。毒素が感受性のある
昆虫の幼虫に結晶型で摂取されると、昆虫の腸液ブロテ
アーゼにより、毒素は生物学的活性部分に転化される。

主要目標は昆虫の腸上皮細胞であり、これが急速に破壊
される。

８．ｔ．の報告された活性スペクトルは、鱗翅目と鞘翅
目内の昆虫種を包含し、その多くは農林業の主要害虫で
ある。活性スペクトルはまた、蚊とブヨを含む双翅目（
旧ｐｔｅｒａ）の昆虫を包含している。

コウチ・ティー・エル（Ｃｏｕｃｈ，　Ｔ．Ｌ．）（１
９８０年）「バシラス・スリンギエンシス◆バラエティ
・イスラエレンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎ３ｉｅｎｓｉｓ
　ｖａｒ．　ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）の蚊病原性」工
業微生物学の発展２２巻６１−７６頁：ビーグル●シー
・シー（Ｂｅｅｇｌｅ，　Ｃ．Ｃ．）（１９７８年）「
農業生態系における昆虫体内ｗ菌の使用」工業微生物学
の発展２０巻９７−１０４頁を参照のこと。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明は、双翅目害虫に対して活性をもった新規なバシ
ラス・スリンギエンシス（Ｂ．ｔ．）分離体に関する。

例えば、本明細書でバシラス・スリンギエンシス●バラ
エティーモリソニＰＳ７１Ｍ３　（　Ｂ．ｔ．ＰＳ７１
Ｍ３）及びバシラス・スリンキエンシス・バラエティ●
イスラエレンシスＰＳ１２３ＤＩ　（　Ｂ．ｔ．ＰＳ１
２３０＋）として知られる新規なＢ．ｔ．分離体は、試
験ざれたすべての蚊に対して活性であることが示された
。

本発明はまた、親微生物と実質的に同し殺虫性状をもつ
新規な分離体の無胞子性（　ｓｐｏ−）変式種も包含す
る。これらの変異種はバシラス・スリンギエンシス・バ
ラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６９　（Ｂ．ｔ．Ｐ
ｓ７１Ｍ３−６９）及びバシラス・スリンキエンシス◆
バラエティ●イスラエレンシスＰＳ１２３ＤＩ−４５　
（　Ｂ．ｔ．Ｐｓ１２３ＤＩ−４５）と指定されている
。本発明の新規な変異種は溶菌マイナスであり、すなわ
ち容易に溶菌しない。変異種をつくる手１頻は、本明！
４書に明らかにされている。

更に、本発明は実質的に無傷の細胞を目標害虫環境に施
用する時に殺虫活性を持続させろために、実質的に無傷
のＢ．ｔ．細胞を処理することを包含する。このような
処理は、手法が殺虫剤の性状に悪影響しない限り、又は
殺虫剤を保護する細胞能力を消滅させない限り、化学的
又は物理的手段、又は化学・物理的手段の矧み合わせで
ありうる。処理されたＲ．ｔ．細胞は、殺虫剤毒素に刻
する保護被覆としての役目を果たす。毒素は、目標害虫
による摂取時に、その場で作用するように利用できる。

本発明の変異種細胞は延長された発酵間間中に無傷のま
までいるから、細胞は上の手順によって容易に処理でき
る。更に、変異種微生物に胞子がないため、胞子汚染に
よって環境に脅威を与えることなく、より安全な殺虫剤
が提供される。

〔課題を解決する手段〕

本発明の新規なハシラス・スリンギエンシス分離体は以
下の性状をもっている。

集落で、表面はくすんでいる。

増殖共月の細胞形態鞭毛の血清型Ｂ，ｔ．に典型的８ａ８ｈ，モリソニ同じｌ４、イスラエレンシス細胞内封入体無定形無定形〜１３０，０００　　　　　　　Ｇ７，０００６７，０
００　　　　　　　　　　２７．０００２７，０００ｓｐｏ一変異種は親培養基について上に列挙されたもの
と同じ特性をもつている。

両分離体とその無胞子性変異種は、試験されたすべての
蚊を殺虫する。生物検定は、ネッタイシマ力（Ａｅｄｅ
ｓ　ａｅｇｙｐｔｔ）、アエデス・ドルサリス（Ａｅ−
ｄｅｓ　ｄｏｒｓａｌｉｓ）、アノフエレス・アルボマ
ニス（　Ａｎ−ｏｐｈｅｌｅｓ　ａｌｂｏｍａｎｉｓ）
、クレツクス●ビビエンスくＣｕｌｅｘ　ｐｉｐｉｅｎ
ｓ）、クレックス・キンケフ７シアツス（Ｃｕｌｅｘｑ
ｕｉｎｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓ）、及びクレックス◆
タルサリス（Ｃｕｌｅｘ　ｔａｒｓａｌｉｓ）に対して
行なわれた。

生物検定手ＩＩＩ！　：　　胞子及び結晶懸濁液の希釈
液を小さなカップ中の水に加える。第４齢幼虫を加える
。致死率を４８時間後に読取る。

本発明出願で明らかにざれた培養基は、６１６０４合衆
国イリノイ州ビオリア、ノース・ユニバーシティ・スト
リート１８１５番地、北部研究センター農業研究サービ
ス特許培養基保存施設（ＮＲＲＬ）に寄託された。

培養基二Ｂ．スリンギエン　シス・バラエテ受託番号：寄託間日：培養基：ィ・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６９ＮＲＲＬ　　Ｂ−１８５１５！９８９年６月２９日バシラス・スリンギエンシス・バラエティ◆イスラエレンシスＰＳ１２３０１−４５受託番号：　　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８５１４寄託期日：　
　１９８９年６月２９日本培養基は、３７　ＣＦＲＩ．＋４及び３５　１Ｊｓｃ
　１２２の下でを特許庁長官に権限があると認められた
者は、本特許出願の対応米国出願の係属中に、培養基を
人手できることを保証されているという条件の下で寄託
された。また、本出願又はその子孫の対応特許出願が提
出されている国々の外国特許法で要求されるとおりに、
寄託物は人手できる。しかし、寄託物が入手できるから
といって、行政行為によって付与された特許権を損わし
めて本発明を実施する権利を構成するものではないこと
を理解すべきてある．更に、本培養基寄託物は、ブタベスト微生物寄託条約の
規定に従って保存され、一般の人々に利用可能とされる
。すなわち、寄託物の試料提洪に対する最も最近の請求
後少なくとも５年間、かつどんな場合も、寄託期日から
少なくとも３０年間か、又は培養基を開示して発酵され
る特許の権利行使可能な期間中、これらの寄託物は、生
育可能て汚染されていない状態に保つために必要なあら
ゆる配慮をもって保存される。要求を受けた受託ｌｉ１
！設が、寄託物の状態のために試料を供給できない場合
には、寄託者は寄託物を補充する義務を認めるものであ
る。本培養基寄託物の一般への人手可能性に閏するすべ
ての制限は、これらを開示した特許の付与に際して永久
に取り除かれる。

本出願のＢ．ｔ．培養基は、標準的な培地及び発酵技術
を用いて培養できる。発酵周期の終了後、この技術で周
知の手段で、まずＢ．ｔ．胞子と結晶を発酵液から分離
することにより、細菌を取り入れることができる。

本出願のｓｐｏ一変異種は、胞子を分離するための追加
段階なしに培養し、取り入れることができて有利である
。

！Ｉ抱を目標害虫環境に施用する時に殺虫活性を持続さ
せるために、Ｂ．ｔ．細胞を処方に先立って、実質的に
無傷のまま処理できる。このような処理は、手法が殺虫
剤の性状に悪影響しない限り、又は殺虫剤を保護する細
胞能力を消滅させない限り、化学的又は物理的手段、又
は化学・物理的手段の組み合わせでありうる。化学試薬
の例はハロゲン化剤、特に原子番号Ｉ７−８０のハロゲ
ン類である。

更に詳しくは、ヨウ素を温和な条件下に、所望の結果を
達成するのに十分な時間に使用できる。他の適当な手法
は、ホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドのようなア
ルデヒト類；塩化ゼフィランと塩化セチルビリジニウム
のような抗感染薬；イソブロビルアルコールとエタノー
ルのようなアルコール類；アアン固定液やヘリ一固定液
のような種々の絹織学的固定液（フマソン、グレッチェ
ン●エル（Ｈｕｍａｓｏｎ，Ｇｒｅｔｃｈｅｎ　Ｌ．）
ｒ動物紹織の手法」ダアリュー◆エッチ・フリーマン社
、１９６７年）；又は目標害虫環境に細胞を施用する時
に細胞内につくられる毒素の活性を持続さ仕るような物
理的手段（加熱〉及び化学的薬剤の組み合わせによる処
理を包含する。物理的手段の例は、ガンマ線とＸ線のよ
うな短波長の放射線、凍結、Ｕｖ照射、凍結乾燥等であ
る。微生物細胞の処理手順については、合衆国特許第４
，６９５，４６２号を参煕のこと。この特許の方法は、
参照により、本明細書に取入れられている．本発明のＢ．ｔ．細胞を種々の方法で処方できる。

種々の不活性材料、例えば無機鉱物（フィロ珪酸塩、炭
酸塩、硫酸塩、燐酸塩等〉や植物材料（粉末トウモロコ
シ穂軸、もみ殻、くるみ殻等）と混合することにより、
水和剤、粒剤、又は粉剤として使用できる。処方剤は展
粘着助剤、安定剤、その他の殺虫剤添加物、又は表面活
性剤を包含できる．液体処方剤は水性基盤又は非水性で
あり、フォーム、ゲル、懸濁液、濃厚乳剤等として使用
できる。成分は流動剤、表面活性剤、乳化剤、分散剤又
は重合体を包含できる．殺虫剤濃度は特定処方剤の性質、特に濃厚液か直接使用
ざれるかによって、広範囲にわたる．殺虫剤は少なくと
もｌｉ量Ｘで存在し、１００重量２でありうる．乾燥処
方剤は約１−９５重ｆｔｚの殺虫剤をもつが、液体処方
剤は一般に約１・６０重量２の固形分を液相中にもつで
あろう。処方剤は概してＷＩｇ当たり約１０２ないし約
１０’個の細胞をもつであろう．これらの処方剤はへク
タール当たり約５０　Ｂ（液体又は乾燥）ないし１　ｋ
ｇ以上の率で投与されよう。

処方剤は双翅目害虫環境、例えは植物、土壌、又は水に
噴霧、散布、散水等によって施用できる。

〔実施例〕

以下は本発明実施の最善の態様を含めた手順を例示した
実施例である。これらの例は限定的に労えられてはなら
ない。他に注意がなければ、百分率はすべて１１溶媒混
合物割合はすべて容量による．実施例Ｉ　　Ｂ．ｔ．ＰＳ７１Ｍ３及ひＢ．ｔ．ＰＳ１
２３ＤＩの培養Ｂ．ｔ．ＰＳ７１Ｍ３及びＢ．ｔ．ＰＳ
１２３［１１の二次培養基又は出発培養基を使用して、
ＬＢブロスとして知られる次の培地に接種した。

トリブトン　　　　　　ｔｏ　ｇ酵母エキス　　　　　　　５８ＮａＣＩ　　　　　　　　　　５　ｇ５Ｎ　ＮａＯ｝１　　　　　　　　　０．６　ｍｌ水　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０００．０　
　ｍｌ標準的な微生物学手法に従って、上の培地は接種
に先立って滅菌され、接種は無菌手順を用いて行なわれ
る。

詳細な手１１１ロは以下のとおのである。

無菌のＰｌ，ＩＹＥ培地（水１リットル中ベブトン５％
、酵母エキス０．１％、Ｎ　ａ　ｌ．”　Ｉ　Ｏ　．　
５％；　ｐ＋＋　７．５に調整）を含有する一連の１５
０　ｍｌ三角フラスコに、Ｂ．ｔ．ＰＳ７１Ｍ３及びＲ
．　ｔ．　ＰＳ１２３Ｄｌのベトリ皿培養基から接種す
る。フラスコを回転振どう機（　２００　ｒｐｍ）上で
一夜３０゛Ｃで培責ずろ。この出発培養基から、７．５
ｍ１の出発培養基を用いて、２リットルフラスコ中のし
Ｒブロス３００　ｍｌに接種する。ＬＢアロスのフラス
コを出発培養基と同し条件下に培養するが、２〜３時間
後に取り入れろ。６００　ｎｍての光学密度は１．０で
ある。

上の手順は、この技術で周知の手順により、大発酵装置
まで容易に規模拡大できる。

上の発酵で得られるＦｌ．ｔ．ｍ胞は、この技術で周チ
ロの手順により単離てきる。しばしば用いられる手１１
屓は、取り入れた発＃液を分離手＋ｌｌ（ｉ，例えば遠
心分離にかけることである。その代わりに、Ｂ．ｔ．細
胞を既述のように取り入れずに、発酵容器中で処理でき
る。

実施例２　　ｓ．ｔ．バラエティ・モリソニ（ＰＳ７１
Ｍ３−６９）及ひＲ．ｔ．バラエティ●イスラエレンシ
ス（ＰＳ１２３ｆ）ｌ−４５）と指定される無胞子性の
溶菌マイナス変Ｘ　１４の調製本発明の新規な無胞子性の請菌マイナス変異種は、次の
ように調製された。

ｌ．　野性型Ｂ．ｔ．バラエティ・モリソニＰＳ７＋１
−１３及Ｕ　Ｂ．ｔ．　イスラＺ　レン’ｙ　７．　Ｐ
Ｓ１２３ｒｌｌを冷凍（一８５℃）アンプルから直接に
栄養寒天培地へ線状接種した。

接種はプレー｝ＩＱ枚に行なった。

２．　次にプレートを３０゜Ｃて７２時間培養した。

３．　滅菌の０．０５Ｍ　Ｐｔ）４緩衝液（ｐＨ　７．
０）（各プレートに７　ｉｔ）によって胞子を取り入れ
た。

４．　次に懸濁液を各ＩＱ　ｍ１５回のアリコートで分
離した。

５．　増殖間の細胞を殺菌するために、５アリコートを
７０℃の温浴にかけた。

６．　これらの処理試料に、エチルメタンスルホネー｝
　（ＥＭＳ）（シグマ・ケミカル社から人手）を添加し
た。添加量は０．１５　ｍｌ；　０．２５　ｎ３　０．
３５　ｍｌ；０．５０　ｍｌであった。

？．　　ＥＭＳの添加後、試料を３０℃、３５０　ｒｐ
ｍ　（回転振とう機）で１８時間培養した。

８．　次に処理培養基を無菌蒸留水１０　ｍｌで２回洗
い、８，０００　ｒｐｍで５分の遠心分離にかけた．殺
虫率を決定するために、プレートカウントを行なった。

９。　次に、最終ベレットを無菌食塩水１０　ｍｌと４
０％無菌グリセロール１０　ｉｆに再懸濁し、−８５℃
で保存した。

１０．　振どうフラスコの培地中で無胞子性変異種を選
別し、発酵の終期に泄傷で毒素結晶を含有する変異種を
選択することによって、溶菌マイナス菌株を確認できる
。

範囲：　　　ＥＭＳ：　　０．１５　ｍｌ０．５０　ｍ
ｌ殺虫＄　：　　９８−９９．９９９％ＥＭＳａ用時間＋　　１５−１８時間温浴適用温度：　　Ｔｏ−８０℃ バシラス・スリンギエンシスの無胞子性ｍＶＪマイナス
変′Ａ種を得るためのその他の手段としては、ニトロソ
グアニジン、Ｕｖ照削、亜硝酸、部位特異的変異誘発な
どがある。

実施例３　変異菌株Ｂ．　ｔ．Ｐｓ７１Ｍ３−６９及び
Ｂ．ｔ．ＰＳ１２３ＤＩ−４５からの、それぞれの親菌
株［１．ｔ．ＰＳ７１Ｍ３及びＢ．ｔ．ＰＳ１２３１Ｊ
Ｉの調製低温殺菌のような応力条件下に、変異種から親
菌株を得ることができる。下記の条件下に、次の復帰頻
度が確定された。

ＰＳ１２３ＤＩ−４５　　　　　　　７．９２　ｘ　１
０−■ＰＳ７１Ｍ３−６９　　　　　　　１．６３　ｘ
　１０−”統計的に、これはＩ　ｘ　！Ｏ”個の細胞の
うち１個が復帰細胞であることを示す。低温殺菌後に発
見された胞子形成体く復帰！！Ｉ抱）の成長から生ずる
タンパクのゲル走査分析は、両菌株とも？Ｊｌ！ｓｌｌ
ｉ！と同じであった。手；１１６は次のとおりである。

ｌ．　希釈培地（Ｌブロス）１リットル中で変異種培養
基（　Ｂ．ｔ．ＰＳ７１Ｍ３−６９又は［＋．ｔ．ＰＳ
１２３ＤＩ−４５）を回転振とう機上で２４時間生育さ
せる。

２．　細胞懸濁液を取入れ、無菌の遠心分離びんに移し
、８，０００　ｒｐｍで１０分間遠沈させろ。

３．　上澄み液を除き、ベレットを容量５０　ｍにする
量の無菌脱イオン水中に再悲濁させる。

４．　ベレットを再懸濁し、無菌フラスコに移す。この
未処理材科から７レートカウントを行なう。

５．　フラスコを８０℃の温浴中に入れて、２００ｒｐ
ｍで１５分振どうする。

６．　フラスコを取り出し、懸濁液を栄養寒天上にプレ
ートする（５０ｍｌでプレート５０枚）。

７．　プレートを３０℃で４８時間培養し、現われる集
落を顕微鏡観察する。

８．　栄養寒天上Ｌこ胞子形成体を二次培養し、７２時
間培養する．復帰頻度は、胞子形成体の数を全処理細胞
数で割ることによって算出ざれる。

例：　　（８．９ｘｌＯ’　ｃｆｕ／ｍｌ）ｘ５０　ｍ
ｌ　＝＝　４．４５Ｘ１０”処理細胞３胞子形成体が見つかる。

３／４．４５ｘｌ０１１＝　０．７４ｘｌＯ−１２９．
　胞子形成体の身元を決定するために、「復帰体」を液
体発酵培地中て親菌株と平行して生育させる。

１０．　生ずるタンパクを、親から生ずるものと比較分
析する。「復帰体」と親菌株は同一帯域移動パターンを
もつはずである。

Claims

【特許請求の範囲】１、バシラス・スリンギエンシス・バラエティ・モリソ
ニＰＳ７１Ｍ３；バシラス・スリンギエンシス・バラエ
ティ・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１；寄託番号ＮＲ
ＲＬＢ−１８５１５の確認特性をもったバシラス・スリ
ンギエンシス・バラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６
９；及び寄託番号ＮＲＲＬＢ・１８５１４の確認特性を
もったバシラス・スリンギエンシス・バラエティ・イス
ラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１−４５からなる群から選ば
れる微生物の昆虫防除有効量に害虫を接触させることを
含めてなる、昆虫の防除法。２、微生物がバシラス・スリンギエンシス・バラエティ
・モリソニＰＳ７１Ｍ３である、特許請求の範囲第１項
に記載の方法。３、微生物がバシラス・スリンギエンシス・バラエティ
・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１である、特許請求の
範囲第１項に記載の方法。４、微生物がバシラス・スリンギエンシス・バラエティ
・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６９である、特許請求の範囲
第１項に記載の方法。５、微生物がバシラス・スリンギエンシス・バラエティ
・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１−４５である、特許
請求の範囲第１項に記載の方法。６、上記の害虫が双翅目に属している、特許請求の範囲
第１項に記載の方法。７、上記の害虫が蚊である、特許請求の範囲第１項に記
載の方法。８、上記の蚊がネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ　ａｅｇｙ
ｐｔｉ）、アエデス・ドルサリス（Ａｅｄｅｓ　ｄｏｒ
ｓａｌｉｓ）、アノフエレス・アルボマニス（Ａｎｏｐ
ｈｅｌｅｓ　ａｌｂｏｍａｎｉｓ）、クレックス・ピピ
エンス（Ｃｕｌｅｘ　ｐｉｐｉｅｎｓ）、クレックス・
キンケフアシアツス（Ｃｕｌｅｘ　ｑｕｉｎｑｕｅｆａ
ｓ−ｃｉａｔｕｓ）、及びクレックス・タルサリス（Ｃ
ｕｌｅｘ　ｔａ−ｒｓａｌｉｓ）からなる群から選ばれ
る、特許請求の範囲第７項に記載の方法。９、寄託番号ＨＲＲＬＢ−１８５１５の確認特性をもっ
たバシラス・スリンギエンシス・バラエティ・モリソニ
ＰＳ７１Ｍ３−６９；及び寄託番号ＮＲＲＬＢ−１８５
１４の確認特性をもったバシラス・スリンギエンシス・
バラエティ・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１−４５か
らなる群から選ばれる安定なｌｙｓｉｓ＾−ｓｐｏ＾−
ｃｒｙ＾＋バシラス・スリンギエンシスの昆虫防除有効
量に、上記の害虫を接触させることを含めてなる、感受
性をもった害虫の防除法。１０、上記の害虫が双翅目に属している、特許請求の範
囲第９項に記載の方法。１１、上記の害虫が蚊である、特許請求の範囲第１０項
に記載の方法。１２、上記の蚊がネッタイシマカ（アエデス・アエギプ
チ）、アエデス・ドルサリス、アノフェレス・アルボマ
ニス、クレックス・ピピエンス、クレックス・キンケフ
アシアツス、及びクレックス・タルサリスからなる群か
ら選ばれる、特許請求の範囲第１１項に記載の方法。１３、殺虫剤担体と組み合わせた、寄託番号ＮＲＲＬＢ
−１８５１５の確認特性をもったバシラス・スリンギエ
ンシス・バラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６９；及
び寄託番号ＮＲＲＬＢ−１８５１４の確認特性をもつた
バシラス・スリンギエンシス・バラエテイ・イスラエレ
ンシスＰＳ１２３Ｄ１−４５からなる群から選ばれる安
定なｌｙｓｉｓ＾−ｓｐｏ＾−ｃｒｙ＾＋バシラス・ス
リンギエンシスを含めてなる、物質の組成物。１４、上記の安定なｌｙｓｉｓ＾−ｓｐｏ＾−ｃｒｙ＾
＋バシラス・スリンギエンシスがバシラス・スリンギエ
ンシス・バラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６９であ
る、特許請求の範囲第１３項に記載の物質の組成物。１５、上記の安定なｌｙｓｉｓ＾−ｓｐｏ＾−ｃｒｙ＾
＋バシラス・スリンギエンシスがバシラス・スリンギエ
ンシス・バラエティ・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１
−４５である、特許請求の範囲第１３項に記載の物質の
組成物。１６、殺虫剤担体と組み合わせたバシラス・スリンギエ
ンシス・バラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３とバシラス
・スリンギエンシス・バラエティ・イスラエレンシスＰ
Ｓ１２３Ｄ１からなる群から選ばれるバシラス・スリン
ギエンシスを含めてなる、物質の組成物。１７、上記のバシラス・スリンギエンシスがバシラス・
スリンギエンシス・バラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３
である、特許請求の範囲第１６項に記載の物質の組成物
。１８、上記のバシラス・スリンギエンシスが、バシラス
・スリンギエンシス・バラエテイ・イスラエレンシスＰ
Ｓ１２３Ｄ１である、特許請求の範囲第１６項に記載の
物質の組成物。１９、目標害虫環境に施用されると持続的な殺虫活性と
摂食帯域でより大きな持続性をもった実質的に無傷の処
理細胞を含めてなる殺虫剤組成物であつて、上記の殺虫
剤が双翅目昆虫に有毒なポリペプチドで、細胞内にあり
、バシラス・スリンギエンシス・バラエティ・モリソニ
ＰＳ７１Ｍ３；バシラス・スリンギエンシス・バラエテ
イ・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１；寄託番号ＮＲＲ
ＬＢ−１８５１５の確認特性をもったバシラス・スリン
ギエンシス・バラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６９
；及び寄託番号ＮＲＲＬＢ−１８５１４の確認特性をも
ったバシラス・スリンギエンシス・バラエティ・イスラ
エレンシスＰＳ１２３Ｄ１−４５からなる群から選ばれ
る微生物によってつくられる場合の殺虫剤組成物。２０、上記の処理細胞が、環境中で殺虫活性を持続させ
るために、化学的又は物理的手段によって処理される、
特許請求の範囲第１９項に記載の殺虫剤組成物。２１、上記の微生物がバシラス・スリンギエンシス・バ
ラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３である、特許請求の範
囲第２０項に記載の殺虫剤組成物。２２、上記の微生物がバシラス・スリンギエンシス・バ
ラエティ・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１である、特
許請求の範囲第２０項に記載の殺虫剤組成物。２３、上記の微生物がバシラス・スリンギエンシス・バ
ラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６９である、特許請
求の範囲第２０項に記載の殺虫剤組成物。２４、上記の微生物がバシラス・スリンギエンシス・バ
ラエテイ・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１−４５であ
る、特許請求の範囲第２０項に記載の殺虫剤組成物。２５、目標害虫環境に施用されると持続的な殺虫活性を
もった実質的に無傷の処理細胞を含めてなる殺虫剤組成
物の昆虫防除有効量に害虫を接触させることを含めてな
る害虫防除法であって、上記の殺虫剤が双翅目昆虫に有
毒なポリペプチドで、細胞内にあり、バシラス・スリン
ギエンシス・バラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３；バシ
ラス・スリンギエンシス・バラエティ・イスラエレンシ
スＰＳ１２３Ｄ１；寄託番号ＮＲＲＬＢ−１８５１５の
確認特性をもったバシラス・スリンギエンシス・バラエ
ティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６９；及び寄託番号ＮＲ
ＲＬＢ−１８５１４の確認特性をもったバシラス・スリ
ンギエンシス・バラエティ・イスラエレンシスＰＳ１２
３Ｄ１−４５からなる群から選ばれる微生物によってつ
くられる場合の害虫防除法。２６、上記の微生物がバシラス・スリンギエンシス・バ
ラエティ・モリソニＰＳ７１Ｍ３である、特許請求の範
囲第２５項に記載の方法。２７、上記の微生物がバシラス・スリンギエンシス・バ
ラエティ・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１である、特
許請求の範囲第２５項に記載の方法。２８、上記の微生物がバシラス・スリンギエンシス・バ
ラエテイ・モリソニＰＳ７１Ｍ３−６９である、特許請
求の範囲第２５項に記載の方法。２９、上記の微生物がバシラス・スリンギエンシス・バ
ラエティ・イスラエレンシスＰＳ１２３Ｄ１−４５であ
る、特許請求の範囲第２５項に記載の方法。３０、上記の昆虫が蚊である、特許請求の範囲第２５項
に記載の方法。３１、上記の蚊がネツタイシマカ（Ａｅｄｅｓ　ａｅｇ
ｙｐ−ｔｉ）、アエデス・ドルサリス（Ａｅｄｅｓ　ｄ
ｏｒｓａｌｉｓ）、アノフエレス・アルボマニス（Ａｎ
ｏｐｈｅｌｅｓ　ａｌｂｏｍａ−ｎｉｓ）、クレックス
・ピピエンス（Ｃｕｌｅｘ　ｐｉｐｉｅｎｓ）、クレッ
クス・キンケフアシアツス（Ｃｕｌｅｘ　ｑｕｉｎｑｕ
ｅ−ｆａｓｃｉａｔｕｓ）、及びクレックス・タルサリ
ス（Ｃｕｌｅｘｔａｒｓａｌｉｓ）からなる群から選ば
れる、特許請求の範囲第３０項に記載の方法。