RU1794434C - Штамм бактерий BacILLUS тнURINGIеNSIS дл изготовлени энтомопатогенного препарата - Google Patents

Abstract

Использование: микробиологическа  промышленность, производство энтомопатогенных препаратов дл  борьбы с кровососущими комарами и саранчовыми и касаетс  нового штамма бактерий дл  производства вышеуказанных препаратов, Сущность изобретени : штамм бактерий Bacillus thuringiensis выделен из погибшей личинки комара Culex pipiens, депонирован в ВКМ генетики под № В-5383. Дл  изготовлени  препарата штамм выращивают на среде (мае. %): кормовые дрожжи 2; пептон 5; кукурузна  мука 1; хлористый натрий 0,5; однозамещенный фосфорнокислый калий 0,1; вода до 100%, при 28°С в течение 28-30 ч, титр спор после культивировани  2,3-109 спор/мл. :

Description

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности и представл ет собой новый штамм бактерий, который может быть использован дл  производства препарата, примен емого дл  борьбы с кровососущими комарами и саранчовыми.

Дл  борьбы с вредител ми сельского и левого хоз йства широко примен ют штаммы Bacillus thuringiensls. Известны штаммы В. thuringlensis, обладающие лар- вицидными свойствами дл  личинок кровососущих комаров.

Однако среди большого числа вредных насекомых, поражаемых всеми известными штаммами В, thuringiensis нет представителей пр мокрылых - саранчи, вредоносное значение которых нет необходимости доказывать ..

Прототипом предлагаемого изобретени  может служить штамм В. thuringiensis (Н-14) № 71,  вл ющийс  основой дл  изготовлени  препарата бактокулицида, эффективного против личинок кровососущих комаров .

Однако этот штамм действует только на одну группу насекомых.

Целью изобретени   вл етс  штамм В. thuringiensis,обладающий высокой энтомо- цидной активностью по отношению к кровососущим комарам и к таким злостным вредител м сельского хоз йства как саранчовые .

Штамм Л.БК-145 выделен в 1988 г, из погибшей личинки комара Culex pipiens.

Штамм Bacillus thuringiensis ЛБК-145 депонирован в коллекции Центрального музе  промышленных микроорганизмов ВНИИ генетика под номером В-5383 и характеризуетс  следующими морфологическими и физиолого-биохимическими свойствами.

Вегетативные клетки палочковидной формы, подвижные, одиночные или в цепочках , размером (3,0-5.5) х (0,8-1,2), перитри- хи, споры овальные, размером (1,2-1,7) х

о)

ч

4 Ы

х(0,7-1,1), спорангии не расшир ют. При спорул ции образуютс  параспоральные включени  различной формы - ромбовидные , кубические, неправильные четырехгранники . Преобладают .кристаллы ромбовидной формы.

Хорошо растет на м сопептонном агаре (МПА), рыбопептонном агаре (РПА) и других питательных средах с добавлением пептона и дрожжевого или кукурузного экстракта.

| На РПА образует матово-белые плоские колонии с изрезанными кра ми пастообразной консистенции. На рыбопептонном агаре образует пленку. Факультативный анаэроб. На желточной среде, ломтиках картофел  и среде с добавлением БВК пигмент не образует. Растет на РПА с добавлением 7% NaCI. Оптимальна  температура роста 28-30°С.

Штамм продуцирует каталазу, гидроли- зует казеин, крахмал, тирозин и разжижает желатину. Уреазоположительный. Образует ацетилметилкарбинол и лецитиназу. Усваивает эскулин, салицин, глюкозу с образованием кислоты без газа. Не образует кислоты и газа из мальтозы, целлобиозы, маннозы, лактозы, галактозы, рамнозы, сахарозы.

Сероводород и индол не образует.

Не агглютинируетс  типовыми антисыворотками 27 серотипов В. thufingiensis, полученными из Института Пастера (Париж ).

Не чувствителен к пенициллину, пол- имиксину, чувствителен к эритромицину, стрептомицину, мономицину, неомицину, левомицитину..

Вызывает 100% гибель личинок комаров Aedes aegypti, Culex pipiens, Anopheles Stephens при использовании суспензии бактериальной культуры в концентрации 2,3 103 спор/мл. Вызывает 100% гибель саранчи Chorthippus apricarius, Chorthippus dichrous при использовании суспензии бактериальной культуры в концентрации 1.0 спор/мл.

По физиологическим свойствам отличаетс  от В. thuringiensis H-14 тем, что усваивает салицин и эскулин, не образует пигмент. По инсектицидной активности отличаетс  тем, что за вл емый штамм действует не только на личинок кровососущих комаров, но и на саранчовых.

Пример. Штамм В, thuringiensis ЛБК-145 культивировали на суэеде следующего состава: кормовые дрожжи 2 (мас.%); пептон 5; кукурузна  мука 1; NaCI 0,5; К2НР040,1; вода до 1000 мл. Конечна  реакци  среды рН-7,2.

В качестве посевного материала использовали водную суспензию споровой 3- дневной культуры, которую вносили в 0,5 л колбы, содержащие 50 мл среды. Культивировали на круговой качалке при 220 об/мин и + 28°С в течение 28-30 ч. Титр спор, подсчитанный с помощью камеры Гор ева. находилс  в пределах 2,3 10 спор/мл.

Отношение к источникам азота. Исполь- зуетаммонийные и нитратные формы азота. Нитраты восстанавливает. Усваивает азотные соединени , вход щие в состав кукурузного экстракта, м сной воды, пептона.

Услови  хранени  - в виде лиофильно

высушенной культуры в запа нных ампулах.

Патогенность дл  личинок комаров изучалась на H-III стадии Culex pipiens, Aedes aeglpty, Anophetes Stephens. В 100 мл воды помещали 25 личинок и вносили суспензию клеток и спор испытуемого штамма. Результаты гибели отмечали через 24 и 48 ч.

Патогенность штамма дл  саранчи провер лась на насекомых IV стадии, помещенных в проволочные садки по 5 особей. Листь  растений обрабатывали суспензией клеток и спор бактериальной культуры и

скармливали саранче. Затем обрабатывали, подкармливали необработанными растени-.  ми. Наблюдени  проводили в течение 7 суток..

Штамм, выбранный в качестве прототипа , эффективен только против личинок комаров .. Предлагаемый штамм вызывает гибель и личинок комаров и саранчи.