JPH11302647A - 有害土壌線虫の生育を抑制する微生物資材およびその製造法 - Google Patents
有害土壌線虫の生育を抑制する微生物資材およびその製造法Info
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- JPH11302647A JPH11302647A JP10125350A JP12535098A JPH11302647A JP H11302647 A JPH11302647 A JP H11302647A JP 10125350 A JP10125350 A JP 10125350A JP 12535098 A JP12535098 A JP 12535098A JP H11302647 A JPH11302647 A JP H11302647A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 有害土壌線虫を環境上安全に防除できる手段
を開発すること。 【解決手段】 ストレプトマイセス属に属し、かつ有害
土壌線虫に対し抗線虫活性を有する菌株を有効成分とす
る土壌改良材。
を開発すること。 【解決手段】 ストレプトマイセス属に属し、かつ有害
土壌線虫に対し抗線虫活性を有する菌株を有効成分とす
る土壌改良材。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、有害土壌線虫に抗
線虫活性を有する微生物を有効成分とする土壌改良資材
およびその製造法に関するものである。
線虫活性を有する微生物を有効成分とする土壌改良資材
およびその製造法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】有害土壌線虫の多くはほとんどの作物に
寄生し、連作栽培や施設栽培におけるその被害は深刻で
あり、農作物の安定生産に対して重大な脅威を与えてい
る。我が国ではこれらの被害を回避するために、年間約
２００億円が土壌薫蒸剤などに消費されているといわれ
ている。しかしながら、これらの殺線虫剤は環境破壊や
生態系破壊、人体への安全性などその使用に当ってはこ
れまでに数多くの問題が報告されている。こうした背景
から、消費者の食料品の安全性や環境保護に対する関心
は急激に高まり、農薬に頼らない新たな農作物栽培技術
・病害虫防除技術の開発が望まれている。
寄生し、連作栽培や施設栽培におけるその被害は深刻で
あり、農作物の安定生産に対して重大な脅威を与えてい
る。我が国ではこれらの被害を回避するために、年間約
２００億円が土壌薫蒸剤などに消費されているといわれ
ている。しかしながら、これらの殺線虫剤は環境破壊や
生態系破壊、人体への安全性などその使用に当ってはこ
れまでに数多くの問題が報告されている。こうした背景
から、消費者の食料品の安全性や環境保護に対する関心
は急激に高まり、農薬に頼らない新たな農作物栽培技術
・病害虫防除技術の開発が望まれている。
【０００３】この要望に応えるべく、これまでに線虫捕
捉性菌や線虫寄生性菌等の天敵微生物を利用した有害線
虫の生物的防除が盛んに試みられている。しかしなが
ら、これらの微生物は寄主特異性の高い絶対寄生菌であ
るが故に人工培養による大量増殖が至難である上、線虫
の種類に応じて菌の系統を使い分けないと効果が期待で
きないといった問題に直面している。
捉性菌や線虫寄生性菌等の天敵微生物を利用した有害線
虫の生物的防除が盛んに試みられている。しかしなが
ら、これらの微生物は寄主特異性の高い絶対寄生菌であ
るが故に人工培養による大量増殖が至難である上、線虫
の種類に応じて菌の系統を使い分けないと効果が期待で
きないといった問題に直面している。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、有害土
壌線虫に拮抗性を有し、かつ、培養などの取り扱いが容
易で、しかも安全性が高い微生物を探索し、これを各種
キャリアーに定着させることにより土壌中で安定または
増殖しうる土壌改良材として提供するものである。
壌線虫に拮抗性を有し、かつ、培養などの取り扱いが容
易で、しかも安全性が高い微生物を探索し、これを各種
キャリアーに定着させることにより土壌中で安定または
増殖しうる土壌改良材として提供するものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
め、本発明者らは有害土壌線虫の一種であるサツマイモ
ネコブセンチュウの二期幼虫の運動活性を抑制する物質
の生産菌を土壌微生物中から探索し、ストレプトマイセ
ス属(Streptomyces sp.)に属する下記の表１記載の寄託
番号を有する６菌株、識別番号ＮＡ−４９４，ＮＡ−３
６９，ＮＡ−３５９，ＮＡ−３０３，ＮＡ−１５０，Ｎ
Ａ−１２８を分離することに成功した。更に、これらの
菌株を適当なキャリアーに定着させて土壌改良資材とし
て施用することにより、サツマイモネコブセンチュウの
被害を軽減させることに成功した。
め、本発明者らは有害土壌線虫の一種であるサツマイモ
ネコブセンチュウの二期幼虫の運動活性を抑制する物質
の生産菌を土壌微生物中から探索し、ストレプトマイセ
ス属(Streptomyces sp.)に属する下記の表１記載の寄託
番号を有する６菌株、識別番号ＮＡ−４９４，ＮＡ−３
６９，ＮＡ−３５９，ＮＡ−３０３，ＮＡ−１５０，Ｎ
Ａ−１２８を分離することに成功した。更に、これらの
菌株を適当なキャリアーに定着させて土壌改良資材とし
て施用することにより、サツマイモネコブセンチュウの
被害を軽減させることに成功した。
【０００６】
【表１】
【０００７】本発明の各菌株の培養性状は下記の表２〜
７の通りである。
７の通りである。
【０００８】
【表２】
【０００９】
【表３】
【００１０】
【表４】
【００１１】
【表５】
【００１２】
【表６】
【００１３】
【表７】
【００１４】また各菌株の生理生化学的性状は下記の表
８の通りである。
８の通りである。
【００１５】
【表８】
【００１６】
【実施例】（実施例１）放線菌の分離および抗線虫活性
菌株の一次選抜 有害土壌線虫に対する拮抗物質を生産する微生物の分離
および選抜は、以下の方法によって行った。
菌株の一次選抜 有害土壌線虫に対する拮抗物質を生産する微生物の分離
および選抜は、以下の方法によって行った。
【００１７】全国各地より採取した土壌１ｇを蒸留水に
懸濁して数分間静置後、上澄み液を３種類の抗生物質(C
ycloheximide 25 μg/ml, Nystatin 12.5 μg/ml, Nali
dixic acid 25 μg/ml）を添加した Pridham寒天培地で
混釈し、２７℃にて５〜１４日間培養した。生育してき
たコロニーを Waksman寒天培地に移植し、２７℃にて５
〜１４日間純粋培養することで放線菌を選択的に分離し
た。
懸濁して数分間静置後、上澄み液を３種類の抗生物質(C
ycloheximide 25 μg/ml, Nystatin 12.5 μg/ml, Nali
dixic acid 25 μg/ml）を添加した Pridham寒天培地で
混釈し、２７℃にて５〜１４日間培養した。生育してき
たコロニーを Waksman寒天培地に移植し、２７℃にて５
〜１４日間純粋培養することで放線菌を選択的に分離し
た。
【００１８】 ◎Ｐｒｉｄｈａｍ寒天培地 ◎Ｗａｋｓｍａｎ寒天培地 可溶性デンプン １．０（％） グルコース １．０（％） グリセリン １．０ ペプトン ０．５ （ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 ０．２ 肉エキス ０．５ ＣａＣＯ3 ０．２ ＮａＣｌ ０．３ Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．１ 寒天 １．５ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．１ （ｐＨ７．０） ＮａＣｌ ０．１ 寒天 １．２ （ｐＨ７．０）
【００１９】分離された放線菌株を大試験管内のＴＮ２
液体培地１０mlに接種し、２７℃で５日間振盪培養し
た。この培養液にアセトン１０mlを加えて２０分間振盪
後、３０００ rpmにて１０分間遠心し、菌体を分離し除
去した。上清のアセトンをエバポレーターにて留去し、
残渣を検定試料とした。
液体培地１０mlに接種し、２７℃で５日間振盪培養し
た。この培養液にアセトン１０mlを加えて２０分間振盪
後、３０００ rpmにて１０分間遠心し、菌体を分離し除
去した。上清のアセトンをエバポレーターにて留去し、
残渣を検定試料とした。
【００２０】
【００２１】検定試料３００μｌと線虫懸濁液３００μ
ｌ（５０〜６０頭／穴）を２４穴プレート上にて混合し
て２５℃の恒温器内に静置し、数時間おきに実体顕微鏡
で線虫の状態を観察した。このとき対照区には蒸留
水、ＴＮ２液体培地、pyrocatechol（最終濃度３
１．２５，６２．５，１２５，２５０，５００，１００
０μg/mlの６段階）を設定した。活性の判定方法は１６
および２４時間後の線虫の形態をＡ（正常：活発に動い
ている），Ｂ（異常：動いていないが、動いているとき
の形に似る），Ｃ（死亡：全く動かない。円弧状、直線
状になっている）で判別し、活動指数Ｍ＝Ａ′（Ａの百
分率）＋Ｂ′（Ｂの百分率）／２の計算式で線虫の生残
率を算出した。最終的に１６および２４時間後の線虫の
生残率が共に０％（対照区の１０００μg/mlの活性に
相当）であったものを一次選抜株とした。
ｌ（５０〜６０頭／穴）を２４穴プレート上にて混合し
て２５℃の恒温器内に静置し、数時間おきに実体顕微鏡
で線虫の状態を観察した。このとき対照区には蒸留
水、ＴＮ２液体培地、pyrocatechol（最終濃度３
１．２５，６２．５，１２５，２５０，５００，１００
０μg/mlの６段階）を設定した。活性の判定方法は１６
および２４時間後の線虫の形態をＡ（正常：活発に動い
ている），Ｂ（異常：動いていないが、動いているとき
の形に似る），Ｃ（死亡：全く動かない。円弧状、直線
状になっている）で判別し、活動指数Ｍ＝Ａ′（Ａの百
分率）＋Ｂ′（Ｂの百分率）／２の計算式で線虫の生残
率を算出した。最終的に１６および２４時間後の線虫の
生残率が共に０％（対照区の１０００μg/mlの活性に
相当）であったものを一次選抜株とした。
【００２２】（実施例２）抗線虫活性菌株の二次選抜 一次選抜株について検定試料の濃度を考慮しながら再
度、活性を評価した。濃度を３段階（５％，２５％，５
０％）に設定した検定試料と線虫懸濁液とを２４穴プレ
ート上にて混合して２５℃の恒温器内に静置し、実体顕
微鏡で１６および２４時間後の線虫の形態を観察した。
一次選抜の時と同様の方法で活性を判定し、低濃度かつ
短時間で線虫の運動能を低下させた菌株を選択した。
度、活性を評価した。濃度を３段階（５％，２５％，５
０％）に設定した検定試料と線虫懸濁液とを２４穴プレ
ート上にて混合して２５℃の恒温器内に静置し、実体顕
微鏡で１６および２４時間後の線虫の形態を観察した。
一次選抜の時と同様の方法で活性を判定し、低濃度かつ
短時間で線虫の運動能を低下させた菌株を選択した。
【００２３】（実施例３）抗線虫活性菌株の菌学的性質 各種寒天培地上における培養性状 前記表２〜表７ 生理生化学的性状 前記表８ 細胞壁成分 試験対象菌株の細胞壁中のジアミノ酸タイプは、６株全
てがＬＬ体（ＬＬ−Ａ２ｐｍ）であった。
てがＬＬ体（ＬＬ−Ａ２ｐｍ）であった。
【００２４】（実施例４）抗線虫活性菌株培養液の植物
に対する影響性試験 各菌株の培養上清液が野菜（トマト：豊金福寿、キュウ
リ：はやみどり）の生育に及ぼす影響を調査した。試験
対象の各菌株をＴＮ２液体培地（坂口フラスコ１００ml
×２本）にて２７℃で５日間振盪培養し、遠心（３００
０ rpm，１０分）後の上清液を２段階（原液、１／１
０）に希釈したものを検定試料とし、対照区には蒸留水
ならびにＴＮ２液体培地を設定した。この検体試料を培
土に混合（約６ml／３号鉢）し、これを詰めた３号鉢に
供試作物の種子をまき、供試作物の発芽、生体重、葉数
などへの影響を調査した。その結果、植物の生育に問題
となるような傾向は見られなかった。
に対する影響性試験 各菌株の培養上清液が野菜（トマト：豊金福寿、キュウ
リ：はやみどり）の生育に及ぼす影響を調査した。試験
対象の各菌株をＴＮ２液体培地（坂口フラスコ１００ml
×２本）にて２７℃で５日間振盪培養し、遠心（３００
０ rpm，１０分）後の上清液を２段階（原液、１／１
０）に希釈したものを検定試料とし、対照区には蒸留水
ならびにＴＮ２液体培地を設定した。この検体試料を培
土に混合（約６ml／３号鉢）し、これを詰めた３号鉢に
供試作物の種子をまき、供試作物の発芽、生体重、葉数
などへの影響を調査した。その結果、植物の生育に問題
となるような傾向は見られなかった。
【００２５】（実施例５）キャリアー定着性試験 土壌中での選抜菌株の安定化を図るため、各種キャリア
ーに対する定着性を調査した。各菌株を Waksman液体培
地１００ml、２７℃で５日間振盪培養したものを各キャ
リアー（バーミキュライト、ゼオライト、珪藻土焼成
粒、紙パルプ廃繊維堆肥、ピートモス、粒状ピートモ
ス）に噴霧してよく混合し、２７℃の恒温室に静置し
た。これを定期的に採取し、希釈平板法により生存菌数
を調べた。その結果を図１に示した。
ーに対する定着性を調査した。各菌株を Waksman液体培
地１００ml、２７℃で５日間振盪培養したものを各キャ
リアー（バーミキュライト、ゼオライト、珪藻土焼成
粒、紙パルプ廃繊維堆肥、ピートモス、粒状ピートモ
ス）に噴霧してよく混合し、２７℃の恒温室に静置し
た。これを定期的に採取し、希釈平板法により生存菌数
を調べた。その結果を図１に示した。
【００２６】図１より有機物系および無機物系キャリア
ーのいずれにおいても生存菌数が高かった。また、無機
物系キャリアーでは全体的に高い安定性が認められた。
特にバーミキュライトの安定性は高く生存菌数も多いこ
とから、定着性が高いといえる。有機物系キャリアーは
初期段階の生存菌数は少ないものの、６０日以降に増加
の傾向が認められた。
ーのいずれにおいても生存菌数が高かった。また、無機
物系キャリアーでは全体的に高い安定性が認められた。
特にバーミキュライトの安定性は高く生存菌数も多いこ
とから、定着性が高いといえる。有機物系キャリアーは
初期段階の生存菌数は少ないものの、６０日以降に増加
の傾向が認められた。
【００２７】（実施例６）施用効果試験 本例は、キュウリ（はやみどり）を供試して各菌株の施
用効果の発現結果を見たものである。結果は表９および
表１０に示した。 （１）試験規模 ８号プラスチック鉢（普通鉢） （２）菌の施用量 次の各資材２００kg/a相当を施用。 ・資材１：バーミキュライトに培養菌液を添加し、資材
中の菌密度が約１×１０6 CFU/ｇとなるように調製した
もの。 ・資材２：紙パルプ廃繊維堆肥を主原料とする基材に培
養菌液を添加し、資材中の菌密度が約１×１０6 CFU/ｇ
となるように調製したもの。 （３）汚染土中の線虫密度 高密度区（約２．３頭／乾土１ｇ） 低密度区（約０．４６頭／乾土１ｇ） （４）試験区の構成 菌添加の有無 (2)×線虫密度 (2)×キャリアー (2)×２
区制＝１６鉢 （５）ネコブセンチュウの寄生度の調査方法 ゴール着生の程度は、試験終了時に掘り取ったキュウリ
の根系全体を１株毎に眺め、図２に示す基準により５段
階にわけて記録した。 （６）汚染土壌中のネコブセンチュウ密度の調査方法 土壌汚染中のネコブセンチュウ密度はベルマン法にて調
査した。本試験実施前後の汚染土壌５０ｇを用い、２７
℃で４８時間の分離とし、乾燥土壌１ｇ当りの頭数で表
した。
用効果の発現結果を見たものである。結果は表９および
表１０に示した。 （１）試験規模 ８号プラスチック鉢（普通鉢） （２）菌の施用量 次の各資材２００kg/a相当を施用。 ・資材１：バーミキュライトに培養菌液を添加し、資材
中の菌密度が約１×１０6 CFU/ｇとなるように調製した
もの。 ・資材２：紙パルプ廃繊維堆肥を主原料とする基材に培
養菌液を添加し、資材中の菌密度が約１×１０6 CFU/ｇ
となるように調製したもの。 （３）汚染土中の線虫密度 高密度区（約２．３頭／乾土１ｇ） 低密度区（約０．４６頭／乾土１ｇ） （４）試験区の構成 菌添加の有無 (2)×線虫密度 (2)×キャリアー (2)×２
区制＝１６鉢 （５）ネコブセンチュウの寄生度の調査方法 ゴール着生の程度は、試験終了時に掘り取ったキュウリ
の根系全体を１株毎に眺め、図２に示す基準により５段
階にわけて記録した。 （６）汚染土壌中のネコブセンチュウ密度の調査方法 土壌汚染中のネコブセンチュウ密度はベルマン法にて調
査した。本試験実施前後の汚染土壌５０ｇを用い、２７
℃で４８時間の分離とし、乾燥土壌１ｇ当りの頭数で表
した。
【００２８】
【表９】
【００２９】
【表１０】
【００３０】
【発明の効果】このように本発明によれば有害土壌線虫
に拮抗性を有し、土壌中で安定して増殖する微生物を有
効成分とする土壌改良材を得ることができ、化学農薬に
頼らずに病害虫を防除できる可能性が見出されたので、
人体や環境に安全な農作物栽培技術を提供できる。
に拮抗性を有し、土壌中で安定して増殖する微生物を有
効成分とする土壌改良材を得ることができ、化学農薬に
頼らずに病害虫を防除できる可能性が見出されたので、
人体や環境に安全な農作物栽培技術を提供できる。
【図１】Streptomyces sp.ＮＡ−４９４の各種キャリア
ーに対する定着性を測定した実測図である。
ーに対する定着性を測定した実測図である。
【図２】キュウリへの根系のゴール着生程度の基準を示
す説明図である。
す説明図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ０５Ｆ 11/08 Ｃ０５Ｆ 11/08 Ｃ０５Ｇ 3/02 Ｃ０５Ｇ 3/02 Ｃ１２Ｎ 1/00 Ｃ１２Ｎ 1/00 Ｐ // Ｃ０９Ｋ 101:00
Claims (4)
- 【請求項１】 ストレプトマイセス属(Streptomyces s
p.)に属し、かつ有害土壌線虫に対し抗線虫活性を有す
る菌株を有効成分とする土壌改良材。 - 【請求項２】 菌株が寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１６６１
０，Ｐ−１６６１１，Ｐ−１６６１２，Ｐ−１６６１
３，Ｐ−１６６１４およびＰ−１６６２７のうちの少な
くとも１つである請求項１記載の土壌改良材。 - 【請求項３】 請求項１または２記載の微生物のうちの
少なくとも１つを下記キャリアーに添加安定させた土壌
改良材。 ・紙パルプ廃繊維を主原料とする濃縮堆肥 ・食品工業から廃棄される、とうふかす、コーヒーか
す、ビールかす等 ・バーミキュライト、ゼオライト、大谷石、沖縄石灰岩
（コーラル）等の無機物 ・米ぬか、油粕、ピートモス等の有機物 ・バーク炭、もみ殻くん炭、活性炭 ・カニ殻（キチン質を含む資材）、カキ殻、貝化石 ・上記のいずれか２種以上の組合せ - 【請求項４】 キャリアーに対する請求項２記載の菌株
の添加量が１０3 〜１０8 個／ｇである土壌改良材。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12535098A JP3509056B2 (ja) | 1998-04-20 | 1998-04-20 | 有害土壌線虫の生育を抑制する微生物資材およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12535098A JP3509056B2 (ja) | 1998-04-20 | 1998-04-20 | 有害土壌線虫の生育を抑制する微生物資材およびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11302647A true JPH11302647A (ja) | 1999-11-02 |
| JP3509056B2 JP3509056B2 (ja) | 2004-03-22 |
Family
ID=14907958
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12535098A Expired - Fee Related JP3509056B2 (ja) | 1998-04-20 | 1998-04-20 | 有害土壌線虫の生育を抑制する微生物資材およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3509056B2 (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| KR100392886B1 (ko) * | 2000-09-09 | 2003-07-28 | 박경삼 | 잔디 병해 방제용 조성물 및 이를 이용한 잔디 병해방제방법 |
| JP2003530097A (ja) * | 2000-04-11 | 2003-10-14 | バレント バイオサイエンシス コーポレーション | ｐＨ調節された発酵培養液を加熱処理することによる殺線虫性組成物の製造方法 |
| WO2004077946A1 (ja) * | 2003-03-04 | 2004-09-16 | Japan Applied Microbiology Research Institute Ltd. | 粒状殺センチュウ剤の製造方法 |
| JP2011084449A (ja) * | 2009-10-19 | 2011-04-28 | Kenichi Sato | 農業用資材、微生物資材、有機腐植肥料、水質浄化材、土壌改良材、飼料添加剤、廃棄物処理剤、屋上緑化材及び農業用資材の製造方法 |
| JP2015502912A (ja) * | 2011-07-25 | 2015-01-29 | バイエル クロップサイエンス エルピーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｐ | 線虫の生物学的防除 |
| KR20160118857A (ko) * | 2015-04-03 | 2016-10-12 | 한국화학연구원 | 뿌리혹선충에 대한 살선충 활성을 가지는 스트렙토마이세스 네트롭시스 an110065 균주 및 이의 용도 |
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-
1998
- 1998-04-20 JP JP12535098A patent/JP3509056B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| JP2015502912A (ja) * | 2011-07-25 | 2015-01-29 | バイエル クロップサイエンス エルピーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｐ | 線虫の生物学的防除 |
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