JP2003530097A - ｐＨ調節された発酵培養液を加熱処理することによる殺線虫性組成物の製造方法 - Google Patents

ｐＨ調節された発酵培養液を加熱処理することによる殺線虫性組成物の製造方法

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ハンセン，ジエイムズ・アール
マクビカー，ケビン・エイ
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バレント バイオサイエンシス コーポレーション
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、植物に寄生する線虫に対して特に有用な新しい殺線虫性組成物を製造する方法、そしてまた線虫の感染から生じる被害を防止する方法に関する。このような組成物を製造する方法は、微生物のｐＨ調節された発酵培養液を少なくとも約１００℃の温度に少なくとも約１５分間にわたって加熱することを含む。好ましくは、微生物は、ギベレラ・フジクロイ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ）、ストレプトミセス・エリトラエウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｅｒｙｔｈｒａｅｕｓ）、バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・チューリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）またはフザリウム・モニリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、植物に寄生する線虫に対して特に有用な新しい殺線虫性組成物を製
造する方法、そしてまた線虫の感染から生じる被害を防止する方法に関する。こ
のような組成物を製造する方法は、微生物のｐＨ調節された発酵培養液を少なく
とも約１００℃の温度に少なくとも約１５分間にわたって加熱することを含む。
【０００２】 （発明の背景） 植物に寄生する線虫は、世界中で多くの農業作物に対して重大な経済的被害を
生じさせている。この群に含まれる線虫は顕微鏡的な蠕虫であり、一般には植物
の絶対寄生虫である。それらは、主として宿主植物の根について生きているが、
いくつかの属は、茎、葉および花を含む地上部に寄生することが知られている。
経済的に重要な植物種のほぼすべてが数種の線虫による感染を受けやすい（注目
すべき例外はマリーゴールドおよびアスパラガスである）。例えば、根こぶ線虫
（ＲＫＮ）（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｓｐｐ．）は、３，０００種を越える作
物植物に寄生することができる。これらの植物には、栽培作物、野菜、果実、花
樹および花木が含まれる。報告によれば、線虫は、合衆国だけで６０億ドル以上
に相当する作物損失を生じさせ、そして世界中では１０００億ドル以上に相当す
る作物損失を生じさせている。
【０００３】 寄生性線虫による症状は、宿主植物、線虫の種、植物の年齢、地理学的位置な
らびに気候条件および外部環境条件に依存して非常に広範囲に害を及ぼす。一般
に、野外における植物の全体的なまだら状の外観は線虫の侵入を示していると見
なされている。より具体的には、線虫による傷害は、数種の根こぶ線虫（Ｍｅｌ
ｏｉｄｏｇｙｎｅ ｓｐｐ．）およびシスト線虫（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｓｐ
ｐ．）によって生じる根のこぶ形成（皮層領域における細胞の急速な増殖による
組織内の異常な膨大）、病斑線虫（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）によ
って生じる病斑（限局的な脱色領域）、太くて短い根を生じさせる細胞分裂の抑
制（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ ｓｐｐ．）、地上部の縮れまたはねじれを含む成
長異常（Ａｐｈｅｌｅｎｃｈｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．）を生じさせ、そして場合に
より細胞壊死（死）さえも生じさせる。植物に寄生する線虫は、根こぶ線虫およ
び病斑線虫の場合のように本質的には内部寄生虫であり得るか、ダガー線虫（Ｘ
ｉｐｈｉｎｅｍａ ｓｐｐ．）およびランス線虫（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ ｓ
ｐｐ．）のように外部寄生虫であり得る。線虫は植物ウイルスの媒介者であり得
るし、そしてまた他の植物病原性の菌類および細菌による感染に植物をかかりや
すくする病気複合体を誘導することも知られている。
【０００４】 様々な化学的な殺線虫剤（土壌薫蒸剤または非薫蒸剤のどちらも）が長年使用
されており、これらは、線虫を攻撃するための数少ない可能な選択肢の１つであ
る。現在、この方法は、作物を植える前に、合成化学薬品を地面に繰り返し適用
することを含む。このような化学薬品は、線虫以外の生物に対しても毒性がきわ
めて強く、従って、その多くは環境に対する重大な脅威になり得る。清浄な水お
よび空気が環境グループおよび政府当局によって改めて強調され、そして多くの
これらの活性成分またはその代謝産物が地下水およびいくつかの目的外生物にお
いて検出されることにより、このような化学薬品の製造および／または使用に関
する懸念が大きくなっている。最も効果的で、経済的で、かつ広く使用されてい
る殺線虫剤の１つが、地下水に見出されているＤＢＣＰ（１，２−ジブロモ−３
−クロロプロパン）であり、これは、雄性不妊症およびおそらくはガン形成を誘
導すると判断されている。別の広く使用されている化学薬品はＥＤＢ（二臭化エ
チレン）であり、これもまた地下水中に見出されている。さらに別の非常に一般
的な殺昆虫剤／殺線虫剤はアルディカーブ（２−メチル−２−（メチルチオ）−
プロピオンアルデヒド−Ｏ−（メチルカルバモイル）オキシム）であり、これは
急性毒性を有することが見出されている。アルディカーブは合衆国内のいくつか
の地域の地下水に見出されている。カルボフラン（２，３−ジヒドロ−２，２−
ジメチル−７−ベンゾフラニルメチルカルバマート）および１，３−Ｄ（１，３
−ジクロロプロパン）の２つの非常に一般的に使用されている殺線虫剤は、それ
らの鳥類毒性および考えられる発ガン作用のために、現在、米国環境保護庁（Ｅ
ＰＡ）によって特別に再検討されている。より近年には、土壌薫蒸剤の臭化メチ
ルを農業目的のために使用することを制限し、最終的にはその使用を中止するＥ
ＰＡによる決定は、合衆国において農業生産の効率および品質に対する脅威をも
たらしている。
【０００５】 工業的な発酵プロセスの廃棄産物であり、微生物に由来し得る、Ｎ−アセチル
−Ｄ−グルコサミンなどの天然の単離物が米国特許第５，０５７，１４１号に殺
線虫剤として開示されている。
【０００６】 様々な生物殺虫剤が、化学的な殺虫剤の代替物として開発されている。生物殺
虫剤は発酵によって得られ、粗製バイオマスまたは精製バイオマスのいずれかと
して使用することができる。典型的には、発酵は２０℃から４０℃の範囲の温度
で行われる。例えば、パエシロミセス・フモソロウエス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃ
ｅｓ ｆｕｍｏｓｏｒｏｕｅｓ）の菌類単離物ＡＴＣＣ第２０８７４号を２８℃
から３０℃で液内発酵することにより、米国特許第５，３６０，６０７号に開示
されるような、線虫の侵入を抑制する菌類バイオマスが得られる。ストレプトミ
セス・サーモアルカエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏａｒｃ
ｈａｅｎｓｉｓ）ＮＣＩＢ１２０１５を２８℃で発酵することから得られる発酵
培養液全体が米国特許第５，１８２，２０７号に殺線虫剤として開示されている
。ストレプトミセス・シアネオグリセウス・ノンシアノゲヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｃｙａｎｅｏｇｒｉｓｅｕｓ ｎｏｎｃｙａｎｏｇｅｎｕｓ）ＮＲ
ＲＬ１５７７３を２３℃で発酵することから得られる発酵培養液は、米国特許第
５，４３９，９３４号に開示されるように線虫に対して効果的である。菌類ミロ
テシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒｉａ）を２
５℃から３０℃の温度で発酵することによって得られる発酵培養液が米国特許第
５，０５１，２５５号に殺線虫剤として開示されている。
【０００７】 米国特許第４，２２９，４４２号に開示されているように、増殖後のバイオマ
スを、バイオマスの乾燥重量の１倍から５倍の範囲にある量の水とともに少なく
とも１２５℃の温度で加熱することにより、線虫を駆除することができる。
【０００８】 しかしながら、新しい効果的な殺線虫剤の開発が依然として求められている。
従って、効果的かつ安価な殺線虫性組成物を製造する方法を提供することは、本
発明の目的の１つである。
【０００９】 （発明の概要） 本発明は、約ｐＨ２以下または約ｐＨ８以上にｐＨを調節した後、発酵培養液
を少なくとも約１００℃の温度に加熱することによって微生物の発酵培養液から
殺線虫剤を製造する方法に関する。このようにして製造された殺線虫剤は、植物
の被害を防止し、かつ／または線虫の成長を制限するために使用することができ
る。
【００１０】 本発明は、発酵による製造物の生物殺虫活性を改善する方法に関する。この方
法は、 細菌または菌類を発酵して、発酵培養液を得る工程、 前記発酵培養液のｐＨを、生物学的に受容可能な酸で約２．５よりも低いｐＨ
に調節するか、または生物学的に受容可能なアルカリもしくは塩基で約８よりも
高いｐＨに調節する工程、および 前記発酵培養液を少なくとも約１００℃の温度に少なくとも約１５分間にわた
って加熱処理し、次いで周囲温度に冷却して、改善された生物殺虫活性を有する
ｐＨ調節された熱処理組成物を得る工程 を含むが、前記発酵培養液のｐＨが約２．５よりも低いｐＨに調節される場合に
は、前記菌類はミロテシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒ
ｕｃａｒｉａ）ではない。
【００１１】 本発明はまた、ギベレラ・フジクロイ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕ
ｒｏｉ）、ストレプトミセス・エリトラエウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｅ
ｒｙｔｈｒａｅｕｓ）、バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈ
ａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・チューリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈ
ｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）およびフザリウム・モニリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕ
ｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）からなる群から選択される菌類または細菌の熱処
理およびｐＨ調節された発酵培養液を含む組成物に関する。この場合、前記培養
液は、生物学的に受容可能な酸で約２．５よりも低いｐＨに調節されるか、また
は生物学的に受容可能なアルカリもしくは塩基で約８よりも高いｐＨに調節され
るかのいずれかであり、そして前記培養液は少なくとも約１００℃の温度に少な
くとも約１５分間にわたって加熱処理され、次いで周囲温度に冷却される。
【００１２】 本発明はまた、植物についた線虫を駆除する方法に関する。この方法は、菌類
または細菌に由来するｐＨ調節された発酵培養液を加熱することによって得られ
る組成物の効果的な殺線虫量を、そのような処置を必要とする植物の部位、土壌
または種子に投与することを含む。この場合、前記培養液は、生物学的に受容可
能な酸で約２．５よりも低いｐＨに、または生物学的に受容可能なアルカリもし
くは塩基で約８よりも高いｐＨに調節され、そして前記培養液は少なくとも１０
０℃の温度に少なくとも約１５分間にわたって加熱されるが、前記発酵培養液の
ｐＨが約２．５よりも低いｐＨに調節される場合には、前記菌類はミロテシウム
・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒｉａ）ではない。
【００１３】 組成物は、約１ポンド／エーカーから約２００ポンド／エーカーの割合で投与
することができる。
【００１４】 本発明はまた、殺線虫性組成物を製造する方法に関する。この方法は、 ａ）細菌または菌類を発酵して、発酵培養液を得る工程、 ｂ）前記培養液を水溶液に懸濁する工程、 ｃ）水溶液における前記培養液のｐＨを生物学的に受容可能な酸で約ｐＨ２．
５よりも低いｐＨに調節する工程、 ｄ）工程ｃ）のｐＨ処理された培養液を少なくとも約１００℃の温度に少なく
とも約１５分間にわたって加熱し、次いで周囲温度に冷却する工程、および ｅ）前記組成物を回収する工程 を含み、前記菌類がミロテシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅ
ｒｒｕｃａｒｉａ）ではない。
【００１５】 好ましくは、ｐＨは約２よりも低く調節され、そして最も好ましくは、ｐＨは
約１．５よりも低く調節される。
【００１６】 工程ｄ）において得られる組成物のｐＨは約ｐＨ４から約ｐＨ８の範囲に調節
することができる。工程ａ）の発酵培養液は水溶性バイオマスおよび水不溶性バ
イオマスを有することができる。この場合、水溶性バイオマスは前記水不溶性バ
イオマスから分離することができ、そして水不溶性バイオマスは工程ｂ）におい
て水溶液に懸濁することができる。
【００１７】 本発明はまた、殺線虫性組成物を製造する方法に関する。この方法は、 ａ）細菌または菌類を発酵して、発酵培養液を得る工程、 ｂ）前記培養液を水溶液に懸濁する工程、 ｃ）水溶液における前記培養液のｐＨを生物学的に受容可能なアルカリまたは
塩基で約ｐＨ８よりも高いｐＨに調節する工程、 ｄ）工程ｃ）のｐＨ処理された培養液を少なくとも約１００℃の温度に少なく
とも約１５分間にわたって加熱し、次いで周囲温度に冷却する工程、および ｅ）前記組成物を回収する工程 を含む。
【００１８】 好ましくは、ｐＨは約９よりも高く調節され、そして最も好ましくは、ｐＨは
約１０よりも高く調節される。
【００１９】 ｄ）において得られる組成物のｐＨは約ｐＨ４から約ｐＨ８の範囲に調節する
ことができる。工程ａ）の発酵培養液は水溶性バイオマスおよび水不溶性バイオ
マスを有することができる。この場合、水溶性バイオマスは前記水不溶性バイオ
マスから分離することができ、そして水不溶性バイオマスは工程ｂ）において水
溶液に懸濁することができる。
【００２０】 本発明のいずれかの局面を実施するために、除草剤、抗菌剤、殺真菌剤、殺昆
虫剤、植物成長調節剤または栄養分などの少なくとも１つの化合物を、熱処理お
よびｐＨ調節された組成物に加えることができる。
【００２１】 （発明の詳細な説明） 殺線虫性調製物を製造するために、実質的な量のバイオマスが、細菌または菌
類の微生物を液内発酵することによって調製される。微生物の好ましい例には、
Ｂａｃｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｇｉｂｂ
ｅｒｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．およびＦｕｓａ
ｒｉｕｍ ｓｐｐ．が挙げられる。Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｓｐｐおよびＢａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．がより好ましい。
【００２２】 より具体的には、本発明の組成物は、ギベレラ・フジクロイ（Ｇｉｂｂｅｒｅ
ｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ）（ＡＴＣＣ１２６１６または１４１６４）、スト
レプトミセス・エリトラエウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｅｒｙｔｈｒａｅ
ｕｓ）（これはまたサッカロポリスポラ・エリトラエア（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏ
ｌｙｓｐｏｒａ ｅｒｙｔｈｒａｅａ）として知られている；ＡＴＣＣ１１６３
５または３１７７２）、バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈ
ａｅｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ４９７８）、バチルス・チューリンギエンシス・イ
スラエレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｉｓｒａｅ
ｌｅｎｓｉｓ）（ＡＴＣＣ３５６４６）、バチルス・チューリンギエンシス・ク
ルスタキ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｋｕｒｓｔａｋｉ
）（ＡＴＣＣ３３６７９）およびバチルス・チューリンギエンシス・ベルリネル
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｂｅｒｌｉｎｅｒ）（ＡＴ
ＣＣ１９２６８）などのバチルス・チューリンギエンシス、ならびにフザリウム
・モニリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）（ＡＴＣＣ１
００５２）から得ることができる。本発明の方法は微生物の細胞壁を破壊するの
で、組成物は任意の細菌微生物または菌類微生物から得ることができる。微生物
の細胞壁（分岐型多糖）は、本明細書中に記載される条件のもとで部分的または
完全に加水分解され、これにより殺線虫性の加水分解生成物が生成すると考えら
れる。従って、本発明の方法は微生物特異的ではない。
【００２３】 材料は、水溶液（好ましくは、水）に懸濁または溶解され、そして生物学的に
受容可能な酸によって、例えば、硫酸、塩酸もしくはリン酸など、または酢酸も
しくはギ酸などの有機酸によってｐＨを約ｐＨ２．０よりも低く酸性化すること
によって加水分解され、そして少なくとも約１００℃の温度で少なくとも１５分
間の期間にわたって加熱される。このようにして処理される材料は、優先的には
、発酵から得られるバイオマスの水不溶性部分であり、そして不溶物は発酵製造
物の水溶性部分から分離することができるが、分離は必ずしも必要ではない。発
酵槽で製造される発酵培養液全体を本発明の方法により処理することができる。
混合物を酸性化して加熱した後、取り扱いの安全性を高めるために、そして調製
物で処理される植物に対する損傷の危険性を低下させるために、混合物のｐＨを
より中性のｐＨに再調節することは、多くの場合、適切である。前記のｐＨ調節
は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウ
ム、酸化カルシウム、水酸化カルシウムまたはアンモニア溶液（水酸化アンモニ
ウム）などの任意の生物学的に受容可能なアルカリまたは塩基を添加することに
よって行うことができる。
【００２４】 あるいは、処理はまた、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、酸化マ
グネシウム、水酸化マグネシウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウムまたはア
ンモニア溶液（水酸化アンモニウム）などの任意の生物学的に受容可能なアルカ
リまたは塩基を用いたアルカリ化によってｐＨを約ｐＨ８よりも高くし、次いで
得られた混合物を上記のように加熱することによって達成することができる。再
度ではあるが、加熱後、生物学的に受容可能な酸によって、例えば、硫酸、塩酸
もしくはリン酸など、または酢酸もしくはギ酸などの有機酸によって、得られた
混合物のｐＨをより中性のｐＨに調節することは適切であり得る。
【００２５】 加熱工程は、必要な場合には、大気圧よりも高い圧力のもとで行うことができ
る。例えば、高圧は、オートクレーブ内で加熱することによって達成することが
できる。
【００２６】 このようにして製造された製造物は、植物が生育している土壌の表面または根
域に対して直接、製造物を、固体形態で、または水溶液（好ましくは、水）にお
ける懸濁物として適用することによって、植物を保護するために、または線虫の
成長を抑制するために使用することができる。
【００２７】 本発明者らが発見したこの方法の利点は、殺線虫性組成物が安価かつ安全であ
るということである。本プロセスにおいて用いられる材料は発酵培養液を含み、
これには、そのような培養液に含有される水不溶性固体が含まれ、そのような固
体は、薬学的製造物または農学的製造物あるいは食物または飲料物ならびに通常
の酸および塩基を調製するために行われる発酵などの任意の工業的発酵プロセス
に由来する廃棄固体であり得る。殺線虫性調製物を製造するために以前から用い
られている工業的プロセスは、危険かつ毒性の出発物質を使用し、そして処理し
なければならない高毒性の廃棄物の流れをもたらす化学合成である。
【００２８】 本発明の方法は、殺線虫性組成物を製造するための、工業的発酵の廃棄物であ
り得る発酵物質の後処理を含む。
【００２９】 本明細書中で使用される用語「殺線虫剤」または用語「殺線虫（性）」、そし
て線虫に関して、表現「植物の被害を防止する」および表現「成長の抑制」は、
線虫の迅速かつ直接的な殺傷だけでなく、線虫を寄せ付けないという概念、その
増殖または繁殖の防止または効果的な抑制、線虫の卵がふ化することの防止、お
よび線虫が交尾相手または寄生する植物を見つけられないように線虫を混乱させ
るか、または不動化することを含む。
【００３０】 線虫を抑制するために本発明の組成物を使用する方法は、植物に寄生する線虫
（特にＭｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ種）による攻撃を受けやすい任意の野外、果実、
野菜、花作物または鑑賞用作物または苗作物に適用することによって行われる。
適用方法はこの分野では十分に知られており、これには、液体または乾燥固体の
いずれかで土壌に直接適用すること、固体配合物から周囲の土壌内への生物活性
成分の制御された放出、土壌に植える前に植物の根に直接適用すること、葉への
適用などが含まれる。
【００３１】 本明細書中で使用される用語「土壌」は、植物の成長を維持することができる
すべての媒体を含むことが意図される。これには、特に、腐植土、砂、ローム、
堆肥、コンポストおよび市販の鉢植え用混合物を挙げることができる。
【００３２】 本明細書中で使用される用語「発酵槽」は、実験室規模および大規模の両方の
発酵プロセスにおいて本発明の発酵培養液を製造するために考えられる振とう培
養法、固体状態法、連続供給法および回分供給法（これらに限定されない）を含
む様々なタイプの発酵方法のために使用される装置をいう。
【００３３】 本明細書中で使用される用語「生物学的に受容可能な酸」は、硫酸、リン酸、
塩酸、酢酸またはギ酸などの酸をいう。
【００３４】 本明細書中で使用される用語「生物学的に受容可能なアルカリまたは塩基」は
、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム
、酸化カルシウム、水酸化カルシウムまたは水酸化アンモニウムなどの塩基をい
う。
【００３５】 本発明の方法は、初期の培養増殖のために様々な培地を利用することができ、
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎ
ｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＤｅｍａｉｎおよびＳｏｌｏｍｏｎ、Ａｍｅ
ｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗａｓｈｉｎ
ｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．、１９８６）に規定されるようなポテト−デキストロース寒
天、干し草滲出寒天、コーンミール寒天、リーフリッター寒天、ＰＣＮＢ寒天、
土壌滲出物（改変型）または酵母麦芽寒天からなり得る。
【００３６】 本発明の１つの実施形態により、発酵は振とうフラスコまたは固定タンク発酵
槽において行われる。振とうフラスコでは、通気が、培地と空気との混合を生じ
させるフラスコの振とうによってもたらされる。固定発酵槽では、撹拌が、ディ
スクタービン、ベーン付ディスク、オープンタービンまたは船舶用プロペラなど
のインペラー手段によってもたらされ、そして通気が、空気または酸素を発酵混
合物に注入することによって達成される。
【００３７】 発酵培地は、微生物によって資化され得る好適な炭素源、窒素源、無機塩およ
び成長因子からなる。炭素源の好適な例として、デキストロース、グルコース、
ラクトースおよびマルトースなどの様々な糖、ならびにデンプン、デキストリン
、コーンミールおよびグリセロールが挙げられる。
【００３８】 窒素源は、有機起源、無機起源または混合型の有機／無機起源であり得る。培
養培地において使用され得る窒素源の例として、ダイズミール、コーンスチープ
リカー、ピーナッツミール、綿実ミール、コーン胚芽ミール、フィッシュミール
、ラード水、および様々なアンモニウム塩が挙げられる。
【００３９】 一定量のミネラルおよび成長因子を発酵培地に含めることもまた有用である。
蒸留器可溶物、コーンスチープリカー、フィッシュミール、酵母製造物、ペプト
ン化ミルクおよび乳清などの粗製培地成分は、ミネラルだけでなく、成長因子を
も含有する。しかし、リン酸カリウム、塩化ナトリウム、硫酸第二鉄、炭酸カル
シウム、塩化コバルト、硫酸マグネシウムおよび硫酸亜鉛などの無機塩を発酵培
地に加えることができる。
【００４０】 炭酸カルシウムなどの固体物質を、ｐＨ制御を助けるためにこの方法では加え
ることができる。これは、ときには、最も良い結果を得るために特定タイプのペ
レットを形成させることには好都合である。
【００４１】 本発明において使用される発酵物を、振とう培養発酵技術を利用しながら製造
する方法はまた、初期段階または接種物製造のためにそのような技術を同様に使
用することができる。製造的培養は、特別に増殖させた接種物から開始される。
増殖は、一般に最初は早い。その後、増殖は遅くなり、そして通常的には定常期
に達する。製造収量は、存在する細胞量、その比活性、およびその製造物形成能
力の期間に依存する。
【００４２】 接種物は、集団内の細胞の大部分を回収することを可能にするその能力につい
て経験的に選択される液体培地に入れられる。ポテト−デキストロース寒天など
の初期増殖培地上で得られた胞子は、フラスコ（これは種フラスコと呼ばれる）
に含有される増殖培地に移され、これにより、出芽および培養の初期増殖が可能
になる。活発な増殖段階にある出芽した胞子が、その後、特定の発酵培地を含有
する三角フラスコ（振とうフラスコ）または固定タンク発酵槽に移される。典型
的には、１％から２％の接種物が発酵の成長段階のために製造される。
【００４３】 接種物の培地は当業者の範囲内であり、さらなる情報をＭａｎｕａｌ ｏｆ
Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ（３１頁から４０頁、上記）に見出すことができる。
【００４４】 広範囲の振とう機培養装置を本発明の実施において使用することができる。主
なタイプの装置は、回転式または往復運動式のいずれかの振とう機に基づいてい
る。本明細書中の方法では、好ましくは、フラスコが約５０ｍｍの軌道内を約２
００ｒｐｍから約２５０ｒｐｍで運動する（しかし、１００ｒｐｍから５００ｒ
ｐｍの間で変化させることができる）回転式振とう機が使用される。培養物は、
（通常的には三角フラスコである）フラスコの内側の周りを滑らかに運動する。
発酵プロセスのスケールアップは当業者には十分に知られている。
【００４５】 液内培養において振とうすることの目的は、酸素および栄養物を増殖中の細胞
に供給することである。振とう培養では、発酵フラスコ内の培地には、本明細書
中の場合のように、細胞または胞子が接種される。接種物として使用される菌株
は、凍結乾燥状態で、または−７０℃などの低温でマスター培養物として維持さ
れる。接種物のために使用される最適な胞子濃度は日常的な実験によって当業者
により容易に決定される。
【００４６】 本発明の生物殺虫性組成物は、例えば、Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｓｐｐ．、
Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．、Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ ｓｉｍｉｌｉｓ
、Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｄｉｐｓａｃｉ、Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｓｐｐ．
、Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ ｓｐｐ，、Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ ｓｐｐ．およびＨｏｐ
ｌｏｌａｅｍｕｓ ｓｐｐ．を含む、植物に寄生する線虫に対して使用すること
ができる。
【００４７】 本発明の方法に従って調製された加工後の発酵物は、多くの異なる植物および
果実に対する様々な農業適用に関して線虫を駆除するために使用することができ
る。そのような植物および果実には、アーティチョーク、ナス、バナナ、オオム
ギ、ビート根、カカオ、ニンジン、キャッサバ、セロリ、ヒヨコマメ、柑橘類、
ココナッツ、コーヒー、アブラナ属作物、トウモロコシ、ワタ、ササゲ、ナス、
フィールドビーン、ササゲ、ヤクヨウニンジン、ブドウ、グアバ、様々なレタス
、メロン、アワ、オートムギ、オクラ、鑑賞植物、パパイヤ、ピーナッツ、コシ
ョウ、キマメ、パイナップル、ジャガイモ、イネ、ライムギ、モロコシ、ダイズ
、テンサイ、サトウキビ、ピーマン、サツマイモ、チャ、タバコ、トマト、芝、
コムギおよびヤマイモが含まれる。カーネーション、バラ、ガーベラ、キク、鉢
植え植物、フィロデンドロン、シダ、イチジク、ポトス、サンセベリアおよびサ
ボテンなどの栽培花卉植物を本発明に従って保護することができる。苗植物の例
には、すべての鑑賞植物および開花灌木が挙げられる。
【００４８】 生物活性な物質は、移植時またはそれよりも数日前に処理される領域に直接適
用することによって、あるいは徐放性形態で適用することによって花の鉢植えま
たは容器の土壌に含ませることができる。野外または果樹園の作物への適用は、
一般には約１０ｃｍから約２０ｃｍの深さの土壌までクロー耕耘機または軽鋤に
より土壌を掘り返しながら表面に顆粒を散布することによって行うことができる
。この殺線虫剤は水溶性であるので、液滴潅漑による適用法もまた可能である。
【００４９】 本発明の組成物は、直接適用するために、または好適な量の水もしくは他の希
釈剤による希釈を適用前に必要とする濃縮組成物もしくは一次組成物として好適
な形態であり得る。殺虫性濃度は、特定の生成物の性質に依存して、特にそれが
濃縮物であるか、または直接使用されるかどうかに依存して変化する。
【００５０】 活性な物質の効果的な殺線虫量は、遭遇することが予想される線虫の個体数、
線虫のタイプ、土壌、作物および水分に依存する。一般に、組成物は、約１ポン
ド／エーカーから約２００ポンド／エーカーの野外割合で、好ましくは約５ポン
ド／エーカーから約１００ポンド／エーカーの割合で、最も好ましくは約１０ポ
ンド／エーカーから約６０ポンド／エーカーの割合で適用することができる。
【００５１】 殺線虫性組成物は、懸濁物、溶液、乳剤、噴霧用粉末、分散性顆粒、湿潤性粉
末、乳化性濃縮物、エアロゾルまたは含浸型顆粒の形態にすることができ、これ
らは、当業者に十分に知られている技術によって配合される。
【００５２】 これらの組成物に対する添加剤として、表面活性剤、不活性なキャリア、保存
剤、湿潤剤、摂食刺激剤、誘因剤、カプセル化剤、結合剤、乳化剤、色素、ＵＶ
保護剤、緩衝剤、流動剤、または線虫に対する保護のために製造物の取り扱いお
よび適用を容易にする他の成分を挙げることができる。
【００５３】 不活性なキャリアの例には、カオリン、雲母、石膏、肥料、フィロケイ酸塩、
炭酸塩、硫酸塩またはリン酸塩などの無機ミネラル；糖、デンプンまたはシクロ
デキストリンなどの有機物質；あるいは木材製造物、コルク、粉末化トウモロコ
シ穂軸、もみ殻、ピーナッツ殻およびクルミ殻などの植物学的物質が含まれる。
【００５４】 好適な界面活性剤には、カルボン酸塩（例えば、長鎖脂肪酸のアルカリ金属カ
ルボン酸塩）などのアニオン性化合物；Ｎ−アシルサルコシナート；リン酸と脂
肪族アルコールエトキシラートとのモノエステルまたはジエステルあるいはその
ようなエステルの塩；ドデシル硫酸ナトリウム、オクタデシル硫酸ナトリウムま
たはセチル硫酸ナトリウムなどの脂肪族アルコール硫酸塩；エトキシル化脂肪族
アルコール硫酸塩；エトキシル化アルキルフェノール硫酸塩；リグニンスルホナ
ート；石油スルホナート；アルキルベンゼンスルホナートまたは低級アルキルナ
フタレンスルホナート（ブチルナフタレンスルホナートなど）などのアルキルア
リールスルホナート；スルホン化ナフタレン−ホルムアルデヒド縮合物の塩；ス
ルホン化フェノール−ホルムアルデヒド縮合物またはより複雑なスルホナート（
アミドスルホナートなど）の塩が含まれる。非イオン性薬剤には、脂肪酸エステ
ル、脂肪族アルコール、脂肪酸アミドまたは脂肪族アルキル置換フェノールまた
は脂肪族アルケニル置換フェノールとエチレンオキシドとの縮合生成物、多価ア
ルコールエーテルの脂肪族エステル（ソルビタン脂肪酸エステルなど）、そのよ
うなエステルとエチレンオキシドとの縮合生成物（ポリオキシエチレンソルビタ
ン脂肪酸エステルなど）、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドならびに
アセチレン性グリコールのブロック共重合体が含まれる。カチオン性表面活性剤
の例には、酢酸塩またはナフトエ酸塩またはオレイン酸塩としての脂肪族のモノ
アミンまたはジアミンまたはポリアミン；ポリオキシエチレンアルキルアミンの
アミンオキシドなどの酸素含有アミン；カルボン酸とジアミンまたはポリアミン
との縮合により調製されるアミド結合アミン；あるいは四級アンモニウム塩が含
まれる。
【００５５】 本発明の物質は、他の不可欠な生物学的物質または有益な微生物または活性な
成分と組み合わせて、例えば、除草剤、抗菌剤、抗真菌剤、殺昆虫剤、植物成長
調節因子または栄養分などと組み合わせて使用され得ることもまた考えられる。
【００５６】 本発明の組成物はまた、細かく分割された乾燥希釈剤または液体希釈剤、増量
剤、充てん剤、調整剤、および賦形剤（様々な粘土、ケイソウ土、タルクなどを
含む）、または水および様々な有機液体、ならびにそれらの混合物を含み得る活
性な混合物として配合することができる。
【００５７】 当然のことではあるが、本発明は、本明細書中に記載される特定の実施形態お
よび操作様式に限定されず、そして本発明の範囲から逸脱することなく、細部に
おける多数の変化形態を考えることができる。
【００５８】 下記の実施例は、本発明の好ましい実施形態および有用性を説明するために示
され、本明細書に添付された請求項において別途述べられている場合を除き、本
発明を限定することを意味していない。
【００５９】 実施例１ 水不溶物をミロテシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕ
ｃａｒｉａ）の発酵培養液から遠心分離によって単離した。この固形物を、蒸留
水に再懸濁し、再び遠心分離することによって洗浄した。この洗浄プロセスをさ
らに２回繰り返し、そして固形物を凍結乾燥によって粉末形態で回収した。続い
て、この粉末化物質を、その一定重量を水に懸濁し、そして加熱のみによって、
またはいくつかの酸性環境で加熱することによって処理した（下記の表１に詳し
く記載される）。これらの条件から得られた物質をｐＨ４に調節し、凍結乾燥し
て粉末にし、そしてＲＫＮを用いた接触アッセイにおいて試験した。すべての加
熱処理は、オートクレーブにおいて１２１℃で４時間行われた。各反復試験につ
いて約５０匹の線虫からなる群を、再構成された物質のそれぞれの１２．５％水
性懸濁物において２４時間の期間にわたってインキュベーションし、その後、計
数して、ＲＫＮの死亡率を求めた。ｐＨ２以下の酸性条件下で加熱することから
生じる物質は殺線虫活性の著しい増大を示した。
【００６０】
【表１】
【００６１】 実施例２ ２つの菌類発酵物に由来するろ過ケーク（洗浄された湿った発酵固形体）をそ
の３倍重量の水に再懸濁し、硫酸でｐＨ２．０に調節して、オートクレーブにお
いて１２１℃で３時間加熱した。サンプルを冷却して、水酸化ナトリウム溶液で
ｐＨ４．０５から４．１０に再調節し、そして蒸留水で使用ケークの重量の８倍
の最終重量にした（１２．５％の濃度）。各反復試験について約５０匹の根こぶ
線虫からなる群をこれらの懸濁物ならびに蒸留水コントロールにおいて２４時間
インキュベーションし、計数して、死亡率を求めた。熱処理された菌類発酵固形
物は、表２に示されるように強い殺線虫活性を示した。
【００６２】
【表２】
【００６３】 実施例３ 乾燥物を、未分類のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種に由来する発酵固形物から凍
結乾燥することによって回収した。固形物（４．５６ｇ）を４０ｍＬの水に再懸
濁し、硫酸でｐＨ１．９に調節して、１２１℃から１２２℃で３時間加熱した。
冷却後、ｐＨを水酸化ナトリウム溶液で４．０に再調節して、９重量％の発酵固
形物を含有する最終懸濁物を得た。各反復試験について約５０匹の根こぶ線虫か
らなる群をこの懸濁物または抗生物質コントロール溶液（１ｍｌあたり１００ユ
ニットのペニシリンおよび０．１ｍｇのストレプトマイシン）と２４時間インキ
ュベーションし、その後、計数して、死亡率を求めた。熱処理された菌類発酵固
形物の懸濁物は、表３に示されるように、植物に寄生する線虫を殺すことにおい
て効果的であった。
【００６４】
【表３】
【００６５】 実施例４ 水不溶物を、実施例１に記載されるように、Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍの発酵培
養液から単離した。この不溶性画分を、一定重量を水に懸濁し、そしてｐＨ１．
７２に調節することによって酸処理した。サンプルを分けて、一方を１２０℃で
３時間加熱し、もう一方を室温で保った。これらの物質をともにｐＨ４に再調節
して、凍結乾燥して粉末にした。粉末を再構成して、根こぶ線虫の死亡率を測定
する試験で使用した。線虫を溶液中で２４時間インキュベーションし、その後、
表４に示されるように、生存している線虫および死亡した線虫を求めるために計
数した。ｐＨを１．７２に下げて加熱することにより、根こぶ線虫の死亡率が増
大した。
【００６６】
【表４】
【００６７】 実施例５ 発酵培養液の殺線虫活性に対する酸消化の影響（温室評価） Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍの発酵培養液全体を２つに分けた。一方を、ｐＨを１
．５に下げて、１２１℃で２時間加熱し、その後、ｐＨを４に調節することによ
って処理した。もう一方は未処理のコントロールであった。得られた物質を凍結
乾燥して粉末にした。これらの粉末を等しい重量濃度に水で再構成して、キュウ
リの実生およびポットあたり約８００匹の根こぶ線虫を含有する小さい土壌ポッ
トに１．０グラム／ポットの割合で与えた。植物を光および水とともに１週間維
持し、その後、土壌から取り出した。それぞれの根におけるこぶ（根こぶ線虫（
Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）による感染から生じる根の膨大
部）を計数して、線虫感染割合を求めた。効力は、未処理の線虫感染コントロー
ル植物からのこぶ減少率によって測定される。表５に示されるように、酸処理お
よび加熱処理が行われた発酵培養液は、線虫感染を約８０％低下させることにお
いて効果的であったが、酸処理および加熱処理が行われなかった発酵培養液はこ
ぶ形成を約３０％抑制した。
【００６８】
【表５】
【００６９】 上記の物質はまた、凍結乾燥粉末から作製された再構成溶液において根こぶ線
虫が２４時間インキュベーションされる接触アッセイで試験された。表６に示さ
れるように、酸処理および加熱処理が行われた物質は線虫の死亡率を増大させた
が、未処理の培養液および酸処理を伴わない加熱された培養液は線虫の低い死亡
率を示した。
【００７０】
【表６】
【００７１】 実施例６ 酸消化またはアルカリ消化の発酵サンプルの殺線虫活性（接触アッセイ） Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍの発酵培養液を酸性条件および塩基性（アルカリ性）
条件で加熱し、得られた物質の効力を殺線虫アッセイ（根こぶ線虫の死亡率％）
において比較した。コントロールの培養液サンプルを中性ｐＨ（ｐＨ７）に調節
し、他のサンプルを酸性（ｐＨ３）および塩基性（ｐＨ１２）の条件に調節した
。各サンプルの半分を１２１℃で２時間加熱した。冷えたら、すべてのサンプル
を中性ｐＨに再調節して凍結乾燥した（粉末に乾燥した）。これらの粉末を等し
重量濃度に水で再構成して、接触アッセイで試験した。接触アッセイは、多数の
反復試験を用いて、それぞれの物質の５つの濃度で２４時間インキュベーション
されたＲＫＮからなった。線虫を計数して、死亡した線虫の数をすべてのサンプ
ルのそれぞれの濃度について求めた。この試験から得られるデータをＰＲＯＢＩ
Ｔ分析によって分析し、ＬＣ５０（９５％の信頼性範囲内における線虫の推定５
０％死亡率を得るための致死濃度または致死量）を求めた。発酵培養液は、酸性
条件または塩基性条件のいずれかで加熱されたとき、表７に示されるように、こ
れらの物質に対する低下したＬＣ５０値によって示される増大した線虫毒性を示
した。ｐＨ調節されたが、加熱されなかった物質は、線虫毒性の著しい増大を示
さなかった。
【００７２】
【表７】
【００７３】 植物に寄生する線虫を、そのようにして製造された組成物と直接接触させた場
合、線虫は、加えられた組成物の濃度に依存して麻痺または死亡している。鉢植
え植物が成長している土壌を、本発明の方法に従って製造された製造物の懸濁物
で処理し、その後、植物に寄生する線虫を土壌に接種した場合、数日の成長期間
の後、植物は、線虫が同じように接種された未処理の植物よりも、大きく、重い
地上部を有して、元気である。処理された植物の根もまた、未処理の植物よりも
少ない根のこぶ（線虫の攻撃および侵入の症状）を示していた。野外では、製造
された組成物は、寄生する線虫から保護しようとする植物に、水における懸濁物
として、または乾燥顆粒物として適用することができる。
【００７４】 実施例７ Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｓｐ．の液内発酵から得られる発酵物全体の一部を
硫酸または水酸化ナトリウムで４、８、９、１０または１１（±０．１）のｐＨ
に調節して、オートクレーブにおいて１２１℃で２時間加熱した。コントロール
サンプルはｐＨ調節されたが、加熱しなかった。加熱後、サンプルを室温に冷却
し、すべてのサンプルを、硫酸を使用してｐＨ４．１（±０．１）に調節した。
その後、サンプルを２％固形分の最終濃度に希釈した。Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ
ｉｎｃｏｇｎｉｔａ（根こぶ線虫、ＲＫＮ）の群を懸濁物ならびに希釈抗生物
質コントロール溶液（１ユニット／ｍｌのペニシリンおよび０．１ｍｇ／ｍｌの
ストレプトマイシン）に接種して、２４時間後に生存個体および死亡個体を計数
した。高いｐＨで加熱された発酵物サンプルは、表８に示されるように、非加熱
サンプルを上回る増大した殺線虫活性を示した。
【００７５】
【表８】
【００７６】 引用されるすべての参考文献はこれらにより参考として組み込まれる。
【００７７】 本発明は前記の説明および実施例によって例示される。それらを考慮して多く
の変化が当業者には明らかになるので、前記の説明は非限定的な例示であること
が意図される。添付された請求項の範囲および精神に含まれるそのような変化は
すべて請求項によって包含されるものとする、 様々な変化を、添付された請求項に規定される本発明の概念および範囲から逸
脱することなく、本明細書中に記載された本発明の組成物、本発明の方法の操作
および構成において行うことができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｐ 1/06 Ｃ１２Ｐ 1/06 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 レーバーガー，リンダ・エイ アメリカ合衆国、イリノイ・60025、グレ ンビユー、ミラー・ドライブ・4001 (72)発明者 ジヨンソン，ロナルド・イー アメリカ合衆国、イリノイ・60030、グレ イズレイク、ハーベイ・ストリート・26 (72)発明者 ハンセン，ジエイムズ・アール アメリカ合衆国、イリノイ・60106、ベン センビル、マイナー・ストリート・248 (72)発明者 マクビカー，ケビン・エイ アメリカ合衆国、イリノイ・60464、ペイ ラス・パーク、ラムズゲート・43 Ｆターム(参考） 4B064 AH19 CA02 CA04 CA05 CE05 CE17 DA12 4H011 AC01 DA15 DC11

Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 発酵による製造物の生物殺虫活性を改善する方法であって、 細菌または菌類を発酵して、発酵培養液を得る工程、 前記発酵培養液のｐＨを、生物学的に受容可能な酸で約２．５よりも低いｐＨ
    に調節するか、または生物学的に受容可能なアルカリもしくは塩基で約８よりも
    高いｐＨに調節する工程、および 前記発酵培養液を少なくとも約１００℃の温度に少なくとも約１５分間にわた
    って加熱処理し、次いで周囲温度に冷却して、改善された生物殺虫活性を有する
    ｐＨ調節された熱処理組成物を得る工程 を含み、 前記発酵培養液のｐＨが約２．５よりも低いｐＨに調節される場合には、前記
    菌類はミロテシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒ
    ｉａ）ではない、方法。
  2. 【請求項２】 前記菌類または細菌が、ギベレラ・フジクロイ（Ｇｉｂｂｅ
    ｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ）、ストレプトミセス・エリトラエウス（Ｓｔ
    ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｅｒｙｔｈｒａｅｕｓ）、バチルス・スファエリクス（
    Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・チューリンギエンシス
    （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）およびフザリウム・モニリ
    フォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）からなる群から選択さ
    れる、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 ギベレラ・フジクロイ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋ
    ｕｒｏｉ）、ストレプトミセス・エリトラエウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
    ｅｒｙｔｈｒａｅｕｓ）、バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ
    ｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・チューリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔ
    ｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）およびフザリウム・モニリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉ
    ｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）からなる群から選択される菌類または細菌の加
    熱処理およびｐＨ調節された発酵培養液を含み、 前記培養液が、生物学的に受容可能な酸で約２．５よりも低いｐＨに調節され
    るか、または生物学的に受容可能なアルカリもしくは塩基で約８よりも高いｐＨ
    に調節されるかのいずれかであり、そして 前記培養液が少なくとも約１００℃の温度に少なくとも約１５分間にわたって
    加熱処理され、次いで周囲温度に冷却される、 組成物。
  4. 【請求項４】 植物についた線虫を駆除する方法であって、菌類または細菌
    に由来するｐＨ調節された発酵培養液を加熱することによって得られる組成物の
    効果的な殺線虫量を、そのような処置を必要とする植物の部位、土壌または種子
    に投与することを含み、 前記培養液が、生物学的に受容可能な酸で約２．５よりも低いｐＨに、または
    生物学的に受容可能なアルカリもしくは塩基で約８よりも高いｐＨに調節され、
    そして 前記培養液が少なくとも１００℃の温度に少なくとも約１５分間にわたって加
    熱され、 前記発酵培養液のｐＨが約２．５よりも低いｐＨに調節される場合には、前記
    菌類はミロテシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒ
    ｉａ）ではない、方法。
  5. 【請求項５】 前記組成物が約１ポンド／エーカーから約２００ポンド／エ
    ーカーの割合で投与される、請求項４に記載の方法。
  6. 【請求項６】 前記菌類または細菌が、ギベレラ・フジクロイ（Ｇｉｂｂｅ
    ｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ）、ストレプトミセス・エリトラエウス（Ｓｔ
    ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｅｒｙｔｈｒａｅｕｓ）、バチルス・スファエリクス（
    Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・チューリンギエンシス
    （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）およびフザリウム・モニリ
    フォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）からなる群から選択さ
    れる、請求項４に記載の方法。
  7. 【請求項７】 前記組成物が、除草剤、抗菌剤、殺真菌剤、殺昆虫剤、植物
    成長調節剤および栄養分からなる群から選択される少なくとも１つの化合物をさ
    らに含む、請求項４に記載の方法。
  8. 【請求項８】 殺線虫性組成物を製造する方法であって、 ａ）細菌または菌類を発酵して、発酵培養液を得る工程、 ｂ）前記培養液を水溶液に懸濁する工程、 ｃ）水溶液における前記培養液のｐＨを生物学的に受容可能な酸で約ｐＨ２．
    ５よりも低いｐＨに調節する工程、 ｄ）工程ｃ）のｐＨ処理された培養液を少なくとも約１００℃の温度に少なく
    とも約１５分間にわたって加熱し、次いで周囲温度に冷却する工程、および ｅ）前記組成物を回収する工程 を含み、 前記菌類がミロテシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕ
    ｃａｒｉａ）ではない、方法。
  9. 【請求項９】 前記ｐＨが約２よりも低く調節される、請求項８に記載の方
    法。
  10. 【請求項１０】 前記ｐＨが約１．５よりも低く調節される、請求項８に記
    載の方法。
  11. 【請求項１１】 工程ｄ）において得られる前記組成物のｐＨを約ｐＨ４か
    ら約ｐＨ８の範囲に調節することをさらに含む、請求項８に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 工程ｅ）の前記組成物に、除草剤、抗菌剤、殺真菌剤、殺
    昆虫剤、植物成長調節剤および栄養分からなる群から選択される少なくとも１つ
    の化合物を加えることをさら含む、請求項８に記載の方法。
  13. 【請求項１３】 工程ａ）の前記発酵培養液が水溶性バイオマスおよび水不
    溶性バイオマスを有する、請求項８に記載の方法。
  14. 【請求項１４】 前記水溶性バイオマスが前記水不溶性バイオマスから分離
    され、そして前記水不溶性バイオマスが工程ｂ）において水溶液に懸濁される、
    請求項１３に記載の方法。
  15. 【請求項１５】 殺線虫性組成物を製造する方法であって、 ａ）細菌または菌類を発酵して、発酵培養液を得る工程、 ｂ）前記培養液を水溶液に懸濁する工程、 ｃ）水溶液における前記培養液のｐＨを生物学的に受容可能なアルカリまたは
    塩基で約ｐＨ８よりも高いｐＨに調節する工程、 ｄ）工程ｃ）のｐＨ処理された培養液を少なくとも約１００℃の温度に少なく
    とも約１５分間にわたって加熱し、次いで周囲温度に冷却する工程、および ｅ）前記組成物を回収する工程 を含む、方法。
  16. 【請求項１６】 前記ｐＨが約９よりも高く調節される、請求項１５に記載
    の方法。
  17. 【請求項１７】 前記ｐＨが約１０よりも高く調節される、請求項１５に記
    載の方法。
  18. 【請求項１８】 工程ｄ）において得られる前記組成物のｐＨを約ｐＨ４か
    ら約ｐＨ８の範囲に調節することをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 工程ｅ）の前記組成物に、除草剤、抗菌剤、殺真菌剤、殺
    昆虫剤、植物成長調節剤および栄養分からなる群から選択される少なくとも１つ
    の化合物を加えることをさら含む、請求項１５に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 工程ａ）の前記発酵培養液が水溶性バイオマスおよび水不
    溶性バイオマスを有する、請求項１５に記載の方法。
  21. 【請求項２１】 前記水溶性バイオマスが前記水不溶性バイオマスから分離
    され、そして前記水不溶性バイオマスが工程ｂ）において水溶液に懸濁される、
    請求項２０に記載の方法。
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