HU193936B

HU193936B - Detergent additive containing fusarium oxysporum lipase

Info

Publication number: HU193936B
Application number: HU842431A
Authority: HU
Inventors: Ruby Ione Nielsen
Original assignee: Novo Industri As
Priority date: 1983-06-23
Filing date: 1984-06-22
Publication date: 1987-12-28
Also published as: ATE36869T1; MX27004A; KR850000522A; YU108584A; DE3473771D1; BR8403048A; AU2976484A; DK289083A; JPH0631414B2; EP0130064A1; CA1250537A; DK289083D0; JPS6069200A; EP0130064B1; MX174437B; KR920000589B1; AU573225B2; HUT34539A

Description

A találmány tárgya enzimes mosószer adalékanyag, mely enzimként Fusarium oxysporum lipázt tartalmaz.

Az utóbbi évtizedekben az enzimes adalékanyagok területe igen nagy fejlődésen ment keresztül. Például Claus Dambman, Poul Hóim, Villy Jensen és Mogens Hilmer Nielsen, a Society tor Industrial Microbiology, American lnstítute of Biological Sciences, Washington, D.C. 1971, kiadványában, a Developments in Industrial Microbiology 12. kötetében „How Enzymes Got intő Detergents címmel összefoglaló cikket közölt az ilyen irányú eredményekről és kutatásokról.

A legáltalánosabb enzimes mosószer adalékanyagok proteolitikus adalékok, de lipolitikus adalékokat is leírtak, például a 4,011,116 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 4. oszlop 65. sorától az 5. oszlop 68. soráig, valamint az 1,293,613 számú brit szabadalmi leírás 2. oldalán a 6-29 sorokban.

Ugyancsak átfogó cikket közölt Hans Andree és munkatársai a Journal of Applied Biochemistry, 2, 218-229 (1980) folyóiratban lipázok mosószer adalékanyagként való felhasználásáról „Lipases as Detergeht Components címmel.

Amennyiben a mosást magas hőmérsékleten és erősen lúgos közegben végezzük, a szennyezést tartalmazó zsír elszappanositás révén oldódik tel. Azonban az energiaszegénység miatt általában az alacsony hőmérsékleten (60°C körül és ez alatt) végrehajtott mosási eljárások előnyösebbek, és ezen hőmérsékleten az ismert lipázok a szennyezést tartalmazó zsírnak csak egy részét képesek oldatba vinni.

Valamely lipolitikus enzim mosószer adalékanyag hatékonyságát alkalmasan a 101. (olivaolaj/gyapot) és 102. (olivaolaj/gyapjú) számú EMPA (Eidgenossische Material-prüfungs und Versuchsanstalt.St.Gálién, Switzeland) mintákkal,a 1,361,386 számú brit szabadalmi leírás (4.és 7.oldal) és a 3,723,250 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (15-19. oldal) szerinti eljárás alkalmazásával állapíthatjuk meg.

Ezen a módon, az AR átoldási tényező alapján megállapították, hogy az ismert lipolitikus enzim mosószer adalékanyagok gazdaságos mennyiségben alkalmazott mosóoldat lipáz aktivitás mellett viszonylag alacsony, nem kielégítő lipolitikus tisztítóhatással rendelkeznek.

A találmány tárgya jelentősen jobb lipolitikus tisztító hatással, azaz gazdaságos menynyiségben alkalmazott mosóoldat lipáz aktivitás mellett jelentősen magasabb átoldási AR értékkel rendelkező lipolitikus mosószer adalékanyag. A taiálmány lényege, hogy az adalékanyag lipáz Fusarium oxysporum eredetű.

A Fusarium oxysporum fajok meghatározása az évtizedek során valamennyire változott. A találmány szerinti eljárás leírásában a „The Genus Fusarium, C.Booth, CMI, 1971, által megadott definíciót alkalmazzuk.

Bizonyos Fusarium oxysporum törzsek lipáz termelését különböző közleményekben leírták, például az Agric. Bioi. Chem. 43/10 (1979), 2126, 1.táblázatban Fusarium lini lipázt említenek (a fenti definíció szerint a Fusarium lini a Fusarium oxysporumhoz tartozik) és az Indián Journal of Experimental Biology, Vol. 11. (1973), 37-39., közlemény címe „Lipids and Lipase Activity in Strains of Fusarium vasinfectum (a fent megadott definíció szerint a Fusarium vasinfectum most a Fusarium oxysporumhoz tartozik).

Bár néhány Fusarium oxysporum törzs alacsony lipáz termelő képességgel rendelkezik, a találmány szerint alkalmazható lipázt termelő Fusarium oxysporum törzsek olyanok, amelyeknek termelése nagyobb mint 10 LU/ /ml az alábbi körülmények alkalmazása mellett: a rázóedényenként számított táptalajt az alábbi adalékanyagokból készítjük (g/l):

szójabab liszt 45 glükóz 70

KH₂PO₄ 2

Na₂HPO₄ 3 szója-olaj 5

A sterilizálást 40 percig 121°C-on végezzük. 100 ml táptalajt tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer lombikot inokulálunk olyan spórákkal, amelyeket egy előzőleg lipáztermelés tesztelésre kiválasztott Fusarium oxysporum törzzsel inokulált agar-agar táptalaj-kenetről veszünk. A lombikot 30°C-on, 5 napon át, 230 ford/perc sebességgel rázatjuk, majd a lipáz termelést meghatározzuk. Az eljárást részletesen a 29. példában ismeretjük.

Azt tapasztaltuk, hogy a találmány szerinti mosószer adalékanyag igen nagymértékben megnövekedett lipolitikus tisztítóhatást mutat, amely a találmány szerinti eljárás később leírt példa adataiból is kitűnik.

A DSM 2672. ATCC 7808, CBS, 620.72, CBS 645.78 és CBS 794,70 Fusarium oxysporum törzsekkel kapcsolatban megállapítottuk, hogy pH aktivitás optimum 9-11 közötti, és az átlagos hőmérséklet aktivitás optimumok körülbelül 35-50°C közötti érték (az analízis ideje 20 perc). A DSM 2672 lipázból nyert antitestekkel végrehajtott keresztezett immunoelektroforézis alapján megállapítottuk, hogy a fenti öt törzs megegyező vagy részben megegyező. Ennek alapján megállapítható hogy a találmány szerinti eljárással előállított enzimes mosószer adalékanyag aktív komponense közeli lipáz enzimek csoportja.

A lipáz aktivitást a NOVO módszer szerint határoztuk meg. A módszer az enzim által végzett tributirin hidrolízisen alapszik. A felszabadított butánsav mennyiségét nátrium-hidroxiddal történő titrálás segítségével határoztuk meg. Egy NOVO lipáz egység (LU) az az enzim mennyiség, amely állandó pH és az alábbiakban leírt standart reakciókörülmények mellett 1 mikromól nátrium-hidroxidnak megfelelő butánsavat szabadít fel percenként.

-2193936

Standart körülmények:

hőmérséklet 30,0°C pH 7-0 reakcióidő 20 perc szubsztrát tributirin

A módszert részletesebben az AF 95/4 (1982-08-18) leirat tartalmazza, amely kívánságra a NOVO Industrie A/S, Bagsvaerd, pánia, cégtől beszerezhető.

A találmány szerinti eljárásban az enzimes mosószer adalékanyag előállítására előnyösen a DSM 2672 Fusarium oxysporum lipáztermelő törzset alkalmazzuk. A DSM 2672-t a Fusarium oxysporum Schlecht törzsként azono- 15 sítottuk. A DSM 2672 Fusarium oxysporum törzs morfológiai tulajdonságai pontosan megfelelnek a Genus Fusarium, C. Booth, CMI,

1971, szerinti Fusarium oxysporum fajta leírásnak. A lipáz pH aktivitás görbéjét is meghatá- ²θ roztuk. A lipáz aktivitást az AF 95/4-GB szerint mértük, azzal a módosítással, hogy a normál 7 táptalaj pH érték mellett a táptalaj pH érték 4,5, 6 és 8,9, 10 értékre is módosítottuk. Mivel a tributirin magas pH értékeken 25 lipáz jelenléte nélkül is lebomlik, a pH görbét az autobomlásnak megfelelően korrigáltuk, fgy 10 pH érték körüli aktivitás optimumot kaptunk. Az enzim stabilitása széles pH intervallumban kiváló, és 5°C-on 4,5-11 pHinter- 30 vatlumban, illetve 25°C-on 5-10 pH intervallumban 18 óra után az aktivitás 80%-a fennmarad. A lipáz aktivitás hőmérséklet optimuma 40°C körüli érték. Az enzim 30 percig stabil 40°C-on, amely a fent említett 60°C 35 körüli, vagy ez alatti hőmérsékleten végzett ún. alacsony hőmérsékletű mosási eljárásokban igen .előnyös tulajdonság.

A találmány szerint előnyösen az enzimes mosószer adalékanyag nem porlódó granulátűm formájú.A granulátumot számos különböző módszerrel állíthatjuk elő. Ilyen például az 1,862,365 számú brit szabadalmi leírásban leírt eljárás, amely extruder és labdacs gyártó (MARUMERIZER név alatt forgalmazott) be- 45 rendezések alkalmazásával és a 4,106,991 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerinti eljárás, amely dobgranulátor alkalmazásával állítja elő az enzimtartalmú granulátumot. 50

A találmány különösen előnyös kiviteli alakja szerint az enzimes mosószer adalékanyag enzim stabilizáló segédanyagot tartalmazó folyadék formájú. A stabilizátor lehet propilénglikol vagy más enzimoldatot stabili- 5® záló anyag. A folyékony adalékanyag alkalmazása egyre kedveltebbé válik, könnyű kivitelezhetősége miatt.

A talámány szerint az enzimes mosószer 60 adalékanyag lipáz aktivitása 20,000 és 100,000 LU/g adalékanyag közötti. így a mosóoldatban megfelelő lipáz aktivitás biztosítható abban az esetben, amikor 0,2-2 g mosószer adalékanyag/100 g mosószer és 1-5 g mosó- gg szer/1 mosóoldat mennyiséget alkalmazunk.

A találmány szerint az enzimes mosószer adalékanyag a lipáz mellett előnyösen proteolitikus enzimet is tartalmaz. Azt találtuk, hogy a proteolitikus mosószer adalékanyag nem rontja le a (fehérje) lipáz aktivitást sem az adalékanyagban, sem a mosószerben, sem pedig a mosóoldatban. Ennélfogva a proteolitikus és lipolitikus mosószer adalékanyagok összeférhetőek, és az ilyen mosószer adalékanyagok igen nagy AR értékű, magas tisztító hatásosságot mutatnak, A NOVO Industri A/S által Bacillus licheniformis segítségével termelt ALCALASE proteolitikus enzim kiváló eredménnyel alkalmazható az eljárásban. A kevert enzimes adalékanyagot vagy az előzetesen előállított proteináz granulátum és lipáz granulátum összekeverésével, vagy a proteináz koncentrátum és lipáz koncentrátum Öszszekeverésével, majd a keveréket granuláló segédanyagokkal történő granulátásával állíthatjuk elő.

A találmány szerinti enzimes mosószer adalékanyag proteolitikus aktivitása körülbelül 0,5-3,0 Anson egység/g adalékanyag értékű. Ilyen módon 0,2-2 g adalékanyag/100 g mosószer, és 1-5 g mosószer/1 mosóoldat adagolással megfelelő proteolitikus aktivitást lehet elérni.

A találmány tárgya továbbá eljárás mosószer előállítására, azzal jellemezve, hogy a fenti találmány szerinti eljárással előállított enzimes mosószer adalékanyagot tartalmaz, amelynek aktív hatóanyaga mikrobiológiailag előállított lipáz.

A találmány szerinti adalékanyagokat tartalmazó mosószerek előnyösen 0,2-2,0 tömeg% mennyiségű, találmány szerinti enzimes mosószer adalékanyagot tartalmaznak. Ezzel az eljárással az enzimhatás és az egyéb mosószer alkotó hatóanyagok hatása között megfelelő egyensúly tartható fenn.

A fenti mosószerrel a mosást célszerűen

7-11 közötti pH-értéken és 60°C alatti hőmérsékleten végezzük.

Az eljárásban a mosóoldat előnyösen 1-5 g mosószert tartalmaz 1 1 mosóoldatra vonatkoztatva. így megfelelő, jellemzően 1,000— 5,000 LU/1 mosóoldat közötti, enzim-aktivitás biztosítható a mosóoldatban.

A fenti körülmények alkalmazásával normál mosási idő, körülbelül 20 perc alkalmazásával igen magas AR értéket kapunk.

A találmány szerinti eljárás az alábbi példákon részletesen bemutatjuk.

1. példa

A példa a találmány szerinti eljárásban előállított enzimes mosószer adalékanyag aktív hatóanyagának előállításához szükséges alap tápoldat előállítását mutatja be.

A táptalaj az alábbi anyagokat tartalmazza (g/1):

szójabab liszt 50 glükóz 50

-3193936

Κ₂ΗΡΟ₄ 2

Na₂HPO₄ 3 szója olaj

A sterilizálást 40 percig 121°C-on végez- ₅zük. 100 ml táptalajt tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer lombikot 10⁷ db spórával inokulálunk, amelyet előzetesen DSM 2672 Fusarium oxysporummal inokulált kenetről veszünk.

A lombikot 25-30°C-on, 2-5 napig, 230 10 ford/perc érték alkalmazásával rázatjuk.

A hozam 30-80 LU/ml.

2. példa

Ezen példa és a 3-15. példák a találmány szerinti eljárással előállított enzimes mosószer adalékanyag aktív hatóanyagának 2 literes laboratóriumi fermentorban történő előállítását mutatják be.

Egy 500 ml-es Erlenmeyer lombikban az alábbi 260 ml táptalajt készítjük el:

glükóz 24 g/1 búza áztató folyadék 24 g/1 szőj a-olaj 3,8 g/1 kálciumkarbonát 3,8 g/1 pH=5,5 a kálciumkarbonát beadagolás előtt. A sterilizálást 40 percig, 121°C-on végezzük, Az 1. példa eljárása szerint agar-agar táptalajról spórák inokulálását végezzük, majd a táptalajt 2 napon át 30°C-on, 230 ford/perc érték alkalmazásával keverjük. Az így beoltott kultúra 120 mi ét 2 literes, 1,3 liter 1 órán át 121°C-on sterilizált, és az alábbiak szerinti összetételű:

glükóz szójabab liszt K₂HPO₄Na₂HPO₄.2H₂O szója-olaj

Pluronic nemionos poliéter-glikol emulgátor g/1 50 g/1 2,0 g/1 3,0 g/1 lO.Og/l 0,3 ml táptalajt tartalmazó fermentorba visszük át.

Az inokulálást követően 700 ml/perc levegőztetést kezdünk, és az elegyet az első 24 órában 600 ford/perc sebességgel, majd 800 ford/ /perc sebességgel keverjük. A hőmérséklet értéket 30°C-on tartjuk, és a fermentálást 100 órán át végezzük. Ezalatt a pH érték 6,3-ról 8,5-re emelkedik. A felúszót analizáljuk a lipáz aktivitása 90 LU/ml értékű.

Kísérlet-sorozatot hajtottunk végre a 2. példa eljárása szerint. A hőmérsékletet az alábbi táblázat szerinti módon változtattuk:

Példaszám 34567

Fermen£or hőmérséklet ^ÖC 28 30 32 34 36

LU/ml felúszó 60 90 125 140 60

A fenti táblázat adataiból kitűnik, hogy az optimális hőmérséklet 34°C körüli.

A pH hatásának vizsgálatára kísérlet-sorozatot végeztünk a 34°C-on a 6. példa eljárása szerint, az ott leírt pH értéktől eltekintve. Az egyik esetben (8. példa) a fermentorban a pH értéket foszforsav beadagolásával az első 24 óra után 6,5 értéken tartottuk, a másik kísérlet során (9. példa) a pH értéket az egész fermentáció ideje alatt nem szabályoztuk. Az első 24 órában egyik esetben sem szabályoztuk a pH értéket.

Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze:

Példaszám 8 9

Fermentorban lévő hőmérséklet 34 34 óra után

6,5-értéken tartva x _pH-----------------------------szabályozás nélkül x

Felúszó LU/ml 180 140

A fenti eredményből kitűnik, hogy a lipázhozam növelhető, ha a pH értéket a fent leírt módon szabályozzuk.

A keverés hatásának meghatározására a 8. példa szerinti eljárást ismételtük meg a keverés adatainak kivételével: a keverő 600 ford/ /perc sebességi értékét emeltük az első 24 óra fermentáció ideje u.tán az alábbi módon:

Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaltuk össze:

Példaszám 10 11 12

Hőmérséklet a fermentorban °C 34 34 34 óra eltelte után a pH érték 6,5 értéken tart-

va	X	X	X
Keverő sebessége
ford/perc	700	800	900
LU/ml felúszó	100	180	160

A fenti eredményekből kitűnik, hogy a keverés optimális értéke 800 ford/perc.

A fermentáció táptalajában szója-olaj koncentráció értékének hatását a hozamra három

'.,.·,.··.·.

kísérletben határoztuk meg. A 11. példa szerinti eljárást (azaz a hőmérséklet, pH és keverési sebesség optimális értékeit) alkalmaztuk. A szója-olaj koncentráció értékét változtattuk a táptalajban. Az alábbi eredményeket kaptuk: 5 Példaszám 13 14 15

Hőmérséklet a fermentorban C 34 34 34 óra eltelte után a pH érték

6,5 értékén jg tartva χ χ x

Keverő sebessége ford/perc 800 800 800

Szója-olaj % 0 12

LU/ml felúszó 50 170 170

-------------------------......------ 25

16. példa

Jelen példában bemutatjuk a találmány szerinti eljárás az enzimes mosószer adalékanyag aktív hatóanyagának íélüzemi fermentorban végzett előállítására.

300 literes inokuláló tartályban az alábbi táp] f

· talajt készítjük el:

buzaáztátó oldat 7,2 kg szója-olaj 1,5 kg kalcium-karbonát 1,5 kg pluronic 25 ml vízzel feltöltve 290 l-re

A táptalajt 1 órán át 121^QC-on sterilizáljuk. 7,2 g glükózt,. 7,2 kg citromsavat tartalmazó 12 liter oldatot sterilizálunk fél órán át 121°C-on és a buzaáztató folyadék keverékhez adjuk. Az elegyet 30^eC-ra hütjűk, majd DSM 2672 spórákkal inokuláljuk. A spórákat élesztő extraktumot, foszfátot, magnéziumot, glükózt ésagar-agart tartalmazó Fernbach lombikból vesszük, melyet előzőleg 7 napon át 30C-on inkubáltunk. Az inokulálás után a levegőztetést azonnal megkezdtük (300 l/perc) és 20 óra után keverni kezdjük az elegyet (250 ford/ /perc). A hőmérsékletet 30°-on tartjuk és a szaporodást 29 óráig fenntartjuk. Az így kapott kultúra 30 literét átolt juk a fő fermentorba, ami az alábbi táptalajt tartalmazzaszójebabliszt 15 kg

KjHPO₄ 0,6 kg

Na,HPO₄.2H₃O 1,2 kg szója-olaj 3 kg pluronic 25 ml és

WóHővíz 275 literre.

A táptalajt 1 órán át 121 C-on, sterilizáljuk. Külön 25 I vízben 15 kg glükózt és 15 g citromsavat sterilizálunk 30 percen át 121 ^eCon, majd a szójaliszt kivonathoz adjuk.

Ar, ínokulálást kővetően a levegőztetést megkezdjük (300 l/perc). A keverést is meg30 kezdjük, és a fermentáció első 10 órája alatt sebességét 400 ford/perc értékre növeljük. A hőmérsékletet 34°C-on tartjuk. A fermentációt 60 órán át végezzük, ez alatt a pH érték 6,64-ről 8,0 értékre növekedik. Ezután a fermentor tartalmát lehűtjük, és a micélumot centrifugálással eiválasztjuK. A felúszó folyadékot analizáljuk, a lipáz aktivitás 90 LU/ml.

17. példa

A példában bemutatjuk az enzimes mosószer adalékanyag aktív hatóanyagának félüzemi fermentorban való előállítási eljárását.

A lipázt Fusarium oxysporum DSM 2672 elárasztott aerob fermentációjával állítjuk elő.

Az agar-agar táptalajt Fernbach lombikban az alábbi alkotórészekből készítjük:

Difco élesztő extraktum 4 g

KjHPO, | g

Mgso₄.7H_sO 0,6 g glükóz lS g deszíilált víz 1000 ml

Merck agar-agar 15 g

Az elegyet 40 percen át 121°C-on sterilizáljuk, A táptalajt YPG-agar táptalajnak nevezzük.

DSM 2672 törzset tenyésztettünk 30’C-on egy héten át YPG-agar táptalajon. A kenet spóráit sterilizált, lefölözött tejben szuszpendáljuk és a szuszpenziót ampullákban 1 iofillzál· juk. A liofilizált ampuilatartalmat Fernbach lombikba visszük át, és a lombikot βΟ'Ό-οη 1 héten át inkubáljuk.

500 literes oltó fermentorban az alábbi táptalajt készítjük el:

CaCO_s 1,5 kg glükóz 7,2 kg búza áztató folyadék 7,2 kg habzásgátlö pluronic 30 ml

Körülbelül 240 liter teljes térfogatig vizet adunk az elegyhez, A pH értéket a kalcium-kar. bonát beadagolása előtt, körülbelül 5,5 értékre állítjuk be. A táptalajt 1 órán át 12Í’C-on fermentorban gőzzel sterilizáljuk, A végtérfogat körülbelül 300 liter körüli érték.

A Fernbach lombik spóra szuszpenzióját a beoltó fermentorba visszük át. Az oltó fermentáció körülményei az alábbiak:

Fermentor-típus: szokásos levegőztetett és kevert fermentor, magasság/ /átmérő arány körülbelül 2; 300 ford/perc (két turbina impeller);

300 1 normál levegö/perc; 30°C 0,5 alt körülbelül 17 óra

Keverés:

Levegőztetés:

Hőmérséklet:

Nyomás:

Idő:

A túlzott habzás elkerülése érdekében a levegőztetés és keverés mértéke csökkenlhető. Ebben az esetben a beoltó fermentáció során ezt nem alkalmaztuk. Miután 1/2— 1 nap,' esetünkben 17 óra, után jó tenyészetet kapunk, énnek 25 literét a beoltó fermentorból a fő fermentorba inokuláljuk.

Αζ 500 literes, lő fermentörba az alábbi táptalajt készítjük el:

melegített, hántolt szójaliszt glükóz szója-olaj .1 ί· kg 15 kg 3 kg 0,6 kg 1.2 kg 30 mi

ΚΗ,ΡΟ, Na₅HPÖ,.12H₂O

Keverés:

Levegőztetés:

Pluronic habzásgátló

Annyi vizet adunk hozzá, hogy a térfogat körülbelül 250 1 tegyen. A szójabab lisztet vízben szuszpendáljuk. A pH érteket nátriumkarbonát segítségével 8,0 értékre állítjuk be és a hőmérsékletét 50^eC-ra emeljük. Ezután körülbelül 480 Anson Egység Alcalase-t (4 AU/ml) adunk a szuszpenzióhoz. Az elegyet 4 órán át 50°C-on, pH=8.0 értéken (nátrium-karbonát beadagolás) tartjuk levegőztetés nélkül, 0-és 150-200 ford/perc keverés mellett Ezután a többi táptalaj komponenst is hozzáadjuk az elegyhez és foszforsavval a pH értéket 6,5-re állítjuk be. A táptalajt 1 órán ét !2t^eC-on gőzzel sterilizáljuk. Lehűtjük 34°C-ra és pH értékét sterilizált nátrium karbonát oldattal (3 kg nátrium-karbonát 201 teljes térfogatban) 6,0-ra állítjuk be. Az inokulálás előtt a végtérfogat körülbelül 280 liter. Ezután 25 1 oltó kultúrát inokulálunk a táptalajba. A fermentáció körülményei:

Fermentor-tipusa: szokásos levegőztetett és kevert fermentor, magasság/átmérő arány körülbebefi.il 2;

150 ford/perc (O-tól 6-órá. ig) és 400 ford/perc (6 órától a fermentáció végéig) (két turbina impeller); 200-250 normál 1 /perc (0tól 22-óráig) és 300 normál l/perc levegő (22 órától a fermentáció végéig); 34°C

1,0 att (O-tól 34-óráig) és 0,5 att (34 órától a fermentáció végéig);

1!2 óra

A túlzott habzás elkerülése érdekében a keverés, levegőztetés és nyomás változtatható. A feni leírt fermentáció során ezt a lehetőséget ki is használjuk, mint ahogy azt a megadott adatok mutatják.

A fermentáció pH értékét foszforsav beada, goi ássál körülbelül· 6.5 értéken tartjuk. A fent leírt fermentáció Során a 30. órától kezdve a fermentáció végéig kel] foszforsav beadagolást végezni. A fosziorsav oldatot 500 literes adagoló tartályban készítjük azalábbi módon: 20 kg tömény (80 %-os) foszforsávho'z annyi csapvlzet adunk, hogy az Össztérfogat körülbelül 160 liter legyen. Az oldatot 1 órán át 121°C-on az adagolótartályban gőzzel sterilizáljuk,. A végtériogat az adagolás megkezdése előtt körülbelül 200 liter. A fő fermentörba csak a pH 6,5 érték fenntartásához szükséges foszforsavoldatot adagoljuk be.

A fermentáció során sterilizált P2000 hábzásgátló anyag (propilénglikol) beadagolást

Hőmérséklet:

Nyomás:

Idő:

végzünk a fő fermentörba, hogy a habzási megakadályozzuk. A leírt fermentáció során

3,5 1 P2000 anyagot használtunk.

A fermentációt 112 óra után leállítjuk.

A fő fermentor körülbelül 315 1 fermentlevet tartalmaz és a kapott lipázhozan) körülbelül 200 LU/g fermentlé, amit a NOVO-LU, No, 95/5-GB mérési eljárással tributirin szubsztrát alkalmazásával határozunk meg,

18. példa

A 17. példa szerint járunk el és lipázt állítunk elő azzal az eltéréssel, hogy a fermentációt 2500 literes fő fermentörba végezzük, megfelelően nagyobb táptalaj-mennyiség alkalmazásával.

Keverés: 250 ford/perc (két turbina impeller) ;

A túlzott habzás elkerülése érdekében a levegőztetést és a nyomást az alábbi módon változtatjuk:

Levegőztetés: 750 normál l/perc levegő (0-13 óra);

1200 normál l/perc levegő (13-37 óra);

1500normál l/perc levegő (37-a fermentáció végéig);

Nyomás: 0,7 att (0-25 óra);

0,5 att (25- a fermentáció végéig)·

A fermentáció során nem adagolunk P2000 habzásgátló anyagot a táptalajhoz. A fermentációvégén a fermentor 1800 liter fermentlevet tartalmaz és a lipázbozam 125 LU/g fermcntlé,

19. példa

A 17. példa szerinti eljárással lipázt állítunk elő, azzal az eltéréssel, hogy a fermentációt 2500 literes fő fermentorban, a megfelelően nagyobb táptalaj térfogatmennyiségekkel végezzük, és a szójaliszt Alcalase-zal való kezelését elhagyjuk. 200 kg szója lisztet alkalmazunk és inokulálás előtt a térfogat 1400 liter A táptalajt a fő fermentorban gőzzel 1,5 órán át 123°C-on sterilizáljuk.

Keverés: 250ford/perc (két turbina impeller); A túlzott habzás elkerülésére a levegőztetést és a nyomást az alábbi módon változtatjuk: Levegőztetés: 750 normál l/perc levegő (0-3 óra)

900 normál t/perc levegő (3-11 óra)

1100 normál 1/pcrc levegő (11· -24 óra)

1300 normál l/perc levegő (24-27 óra)

1500 normál l/perc levegő (27a fermentáció végéig);

Nyomás: 1,0 att (0-27 óra) °

0,75 att (27-40 óra)

0,5 att (40- a fermentáció végéig),.

A fermentáció során, nem alkalmazunk

P2000 habzásgátló anyagot A fermentáció

-6.,193936 végén a ίδ fermentor körülbelül 1500 liter fermentlcvet'tartalmaz, és a lipázhozam 198 LU/g fermentlé. A fermentáció Ideje körűibe* lül 140 óra.

20. példa

A 17, példa eljárása szerint lipázt állítunk elő. azzal az eltéréssel, hogy a fermentációt 2500 literes fő íermentorban végezzük, valamint megfelelően nagyobb táptalajmennyiséget és térfogatokat alkalmazunk. A siója liszt Alcalase-va! történő kezelést elhagyjuk. 170kg szóiallsztet alkalmazunk és az inokutálás előtti térfogat 1400 liter, A táptalajt a fő íermentorban 1,5 órán át 123°C-on gőzzel 16 sterilizáljuk.

Keverés: 250 ford/perc (két turbina ímpeller);

A túlzott habzás megakadályozására a levegőztetést és a nyomást az alábbi módon változ- „ tatjuk; »

Levegőztetés: 750 normát levegő 1/perc (ΟΙ! óra)

1150 normát levegő 1/perc (11-10 óra)

1300 normál levegő |/perc (19- ^{22 * * 25}-27 óra)

1500 normát levegő l/perc (27- a fermentáció végéig);

Nyomás: 1,0 att (0-27 óra)

0,5 alt (27- a fermentáció végé- 30 _t le).

A fermentáció során 0,5 liter P2000 habzásgátló anyagot alkalmazunk. A fermentáció befejezésekor a íermentor körülbelül 1400 liter, táptalaj! tartalmaz, és a lipázhozam körűibe- 35 lül 221 LU/g táptalaj. A fermentáció Ideje körülbelül 144 óra.

21. példa 40

A 17. példa szerinti eljárással lipázt állítunk elő azzal a különbséggel, hogy a fő fermentor táptalajában a szójaliszt koncentrációt 5t %-ra csökkentjük,és nem alkalmazunk Alcalase kezelést a szójalisztre. ₄₆

A túlzott habzás elkerülése érdekében a keverést az alábbi módon változtatjuk;

Keverés: 0 ford/perc (0-22 óra)

100-150 ford/perc (22-33 óra)

300 ford/perc (33- a fermentáció 50 végéig).

A fermentáció során nem alkalmazunk P2000 habzásgátió adalékanyagot. A fermentáció befejezésekor a fermentor körülbelül g_S3101 fermentlevet tartalmaz,és a lipáz hozam körülbelül 146 LU/g fermentlé.

22. példa

A 17. példa szerinti eljárással lipázt állí-7 βΟ. tünk elő azzal a különbséggel, hogy a fői.' fermentor táptalajában a szójaliszt koncentrációt 51 %-ra csökkentjük, nem alkalmazunk..

Alcalase kezelést a szójalisztre, a kezdeti fermentációs tdptolajhnn nem alkalmazunk .

szója-olajat, hanem ehelyett a fő íermentor . ⁹ táptalajba adagolunk 1-1 literes adagokban a 48., 60., 72. és 84. fermentációs órában, összesen 4 liter sterilizált szója-olajat.

A túlzott habzás elkerülése érdekében a keverést, levegőztetést ésa nyomást az alábbi módon változtatjuk:

Keverés: 200-300 ford/perc (0-24 óra)

400 ford/perc (24- a fermentáció végéig);

Levegőztetés: 150 normál 1 levegő/perc (ΟΙ? óra)

250 normál 1 levegő/perc (17-26 óra)

300 normál I levegő/perc (25a fermentáció végéig);

Nyomás: 0,9-1,0 all (0-33 óra)

0,5 att (33-' a fermentáció végéig).

A fermentáció során 2 liter P200O habzasgátló adalékanyagot alkalmazunk.

A fermentáció befejezésekor a fermentor körülbelül 285 1 fermentlevet tartalmaz és a lipázhozam körülbelül 285 I fermentlevet tartalmaz és a lipázhozam körülbelül 1)3 LU/g fermentlé.

23. példa

A 19. példában kapott fermentlé pH értékét nátrium-hidroxiddal 8,0 érlékre állítjuk be, majd i t% kálcium-klorid, 1 t% Servamtn, KZA 346 (Servo), 0,03 t% Superfloc, A-130 (American Cyanemid) és 0,5 t% Triton X-10Ö (Rohm and Haas) segítségével flokkul áljuk.

A kicsapott fermentlevet tárcsa centrifugán (Westfalia SAMS) centrifugáljuk.

A centrifugáit lé pH-ját ecetsavval 4,5 értékre állítjuk be, ekkor csapadék válik ki. A csapadékot centrifugálással (Westfalla SAMS) elválasztjuk a felülúszótól, majd Triton Χ-100-al kezeljük. A kezelt csapadékot ezután vízzé! hígítjuk és újra centrifugáljuk.

A két centrifugálás során kapott felúszót egyesitjük és a második centrifugálás során kapott iszapot eldobjuk.

A felülúszót dia lizái juk (DDS-egység OR60P membránok) és ezután ultra szűréssel betöményítjük.

Az ultraszürt koncentrátumot monoproplíéo szöveten szűrjük Hy-flo-supercell (Johns Manville) szűrési segédanyag alkalmazásával.

A szűrlet pH értekét nátrium-hidroxid segítségével 8,0 értékre állítjuk be, majd Supra 100 szűrőlemezeken (Seitz) szűrjük, végül baktérium-szűrők Supra EKS (Seitz) segítségével.

A baktérium-szűrlctet azonos térfogatú acetonnal tócsapatjuk és tiszta acetonnal mossuk.

A csapadékot vákumban megszárítjuk. A kapott száraz koncentrátum körülbelül 90,000 LU/g aktivitású.

24. példa

A Fusarium oxysporum lipáz mosási hatásossága más lipázokkal összehasonlítva.

-7193936

Ρ*

Vizsgált anyag: EMPA 101 (olíva olaj/gyapot)

Mosóoldat: Mosószer A*), e/l 10° dH víz

Mosógép: TERG-O-TOMETER

Mosási program:40’C, 20 perc Minta száma: 9/900 ml mosóoldatban

Lipáz: Fusarium oxysporuni Jipáz

Asp.niger AMANO AP6 Candiaa cytindracea, Sigma Mucor miehei, SP 225

Lipáz koncentráció: 0,750, 1500, 2250, 3000 LU/1.

A Fusarium oxysporum lipáz szükséges aktivitésnyi mennyiségét az 1. példa szerinti eljárással előállított fermentlé centrifugálásával kapott felúszójának megfelelő mennyiségben történőalkalmazásával visszük be a mosóoldatba.

A mosást' hatékonyságot Re=átoldás értékben adjuk meg, melyet Elrenho fotóméterrel R 46 szűrő alkalma zásával, átlagban két leolvasással 9 mintán, határoztuk meg.

* az A mosószer összetétele az alábbi:

Lineáris alkil-benzotszulíonát (LAS, anionos felületaktív anyag) 17%

Nonil-fenol-etoxilát, ΕΟ»=ί2 (nemionos felületaktív anyag) 3% ¹⁰ Nátrlum-tri-polifoszfát (STPP) 30% Nártium-szilikát 4%

Nátrium-karbonát 3%

Nátrium-szulfát 37%

Víz 6%

IB Az eredményeket tartalmazó táblázatban R és AR=R-R₀ értékeket adunk meg, ahol Re jelentése a kioldási érték lipáz nélküli mosott mintákra, R a kioldás értéke lipáz alkalmazásával mosoti mintákra.

Lipáz koncentráció, LU/1

Lipáz 750 1500 2250 3000

	R	AR	R	AR	R	AR	R	AR
Lipáz nélkül, P_oFusarium oxy-	46,1	0,0	46,1	0,0	45,1	0,0	45,2	0,0
sporutn lipáz A,niger, AMANO		*·	53,2	7,1	53,4	8,3	54,0	8,8
AP6 C.cylindracea,	47,0	0,9	48,2	2,1	48,6	3,5	49,8	4,6
Sigma	46,2	0,1	46,4	0,3	46,4	1,3	45,6	0,4
M, miehei, SP 225	49,6	3,5	48,1	2,0	49,9	4,8	49,6	4,4

25. példa

A gyapoton kívül más szövetekre kifejtett mosóhatás vizsgálatára mosási vizsgálati mintákat készjteftünk políészter/gyapot és akrit alapú textíliákból is. ,_n

Teszt szennyezés: 10% olívaolaj ⁴⁰

1,6% emulzifikáló anyag 0,4% föld festékanyag 0,3% indiai tinta 87.8% víz.

Az oldatot Rannie homogenizátorban 45 amulzfíikáljuk. Gyapot, políészter/gyapof és akril szövetmintákat merítünk a homogenizált oldatba. A Felesleg szennyező oldatot kipréseljük a minta textíliákból és a textíliákat 30 per· ccn át centrifugában szárítjuk. ⁵⁰

Mosási körülmények:

Vizsgált anyag: olívaolaj: 1 gyapoton

II poliészter/gyapot textilen

III akril alapú textl- &⁵len

Mosóoldat: B**mosóanyag, 3,25 g/i, IO°C dH víz

C***mosóanyag, 1 g/1, lO’G dH Víz -Úíc 60

Mosógép: Launder-Q-Mcter \

Mosóprogram: melegítés l5°C-ról 40°C-ra, melegítési idő 37 perc, mosás 40^eC-on 12 percig , *

Minte száma: 3/300 ml mosóoldatban Lipáz: Fusarium oxysporum lipáz : ^{c 1}

Mucor miehei, SP 225 C. Cylindracca, Sigma Pancreatic lipase, Sigma Lipáz koncentráció: változó,

A Fusarium oxysporum lipáz aktivitást fagyasztással szárított por formában vittük be a mosóoldatba a megfelelő mennyiségben.

A fagyasztással szárított port az alábbi módon készítettük:

literes laboratóriumi lombikban az 1. példa eljárása szerint fermentációt végzünk. A fermentlevet centrifugáljuk, ultraszűréssel betőményítjük és kifa gyászt ássa 1 szárítjuk.

**B mosószer összetétele az alábbi: lineáris alkll-benzotszulíonát (LAS, anionos felületaktív anyag) 34%

Nonil-fenol-etoxilát, EO = 12 (nemionos felületaktív anyag) 3%

Nátrlum-tri-polifoszfát (STPP) 62%

Karboximetil-cellulóz (CMC) 1% •**C mosószer, 100%-ban nonil-fenol-etoxilát, EO a 12 (nemionos felületaktív anyag).

A mosási hatékonyságot R — kioldási értékben adjuk meg, amit Elrcpho fotóméierreJ R46 szűrő alkalmazásával, átlagban 3 mintán leolvasás segítségével mérünk, ;

A táblázatban AR és R'_o jelentése a 24.

péladában megadott, ,,ί , , í '

A mosószer enzimes adalékanyagában az aktív komponens a találmány szerinti eljárással előállított additív anyag.

-8193936

Vizsgált textilanyag

B mosószer

Lipáz koncentráció, LU/1

C mosószer

Lipáz koncentráció, LU/1

	0 R_o	84 AR	167 ÁR	333 ÁR	1000 Ro	0 AR	84 ÁR	167 ÁR	333 Δ R	1000 ÁR
Gyapot Poliészter/	32,2	2,8	6,7	7,9	10,7	27,9	4,9	4,7	7,9	11,4
gyapot	44,8	2,9	3,5	3,9	3,6	31,6	4,4	5,0	4,6	5,2
Akril	56,7	3,9	5,6	7,0	6,7	33,7	5,8	10,5	11,0	10,2

Mucor miehei lipáz

Vizsgált B mosószer C mosószer textilanyag Lipáz koncentráció, LU/1 Lipáz koncentráció, LU/1

	0	84 aR	167 AR	333 aR	1000 R.	0 áR	84 AR	167 áR	333 Δ R	1000 ar
Gyapot Poliészter/	35,3	4,1	4,8	7,5	8,8	25,4	1,9	2,0	4,3	4,9
gyapot	44,3	2,3	3,1	3,7	1,6	31,4	1,8	2,0	1,8	1,0
Akril	54,4	3,6	4,4	5,7	5,7	33,8	4, '4	5,8	6,5	6,3

C. cylindracea, pancreatic lipase C. cylindracea lipase

Vizsgált textil: gyapot Pancreatic lipase

Mosószer	Lipáz koncentráció,	LU/1	Lipáz	koncentráció	, LU/1
	0	250	500 750	3000	0	750	3000	6000	10000
	R <,	ÁR	AR AR	A R	R,	AR	ÁR	AR	AR
B	36,4	0,0	0,0 1,1	0,0	34,5	2,7	2,2	3,0	3,8
C	26,0	0,0	0,0 0,4	0,5	24,4	3,4	3,8	3,5	3,6

26. példa 40

A példában bemutatjuk a proteolitikus enzim és a találmány szerinti eljárással előállított enzimes mosószer adalékanyag összeférhetőséget. A vizsgált minta a 25. példa szerinti eljárással szennyezett gyapot textília volt. 45 Mosási körülmények:

Vizsgált anyag: gyapot, a fenti módon szenynyezve

Mosóoldat: B mosószer 3,25 g/l, 10° dH víz, C mosószer 1,0 g/l, 10° 50 dH víz

Mosógép: Launder-O-meter

Mosóprogram: melegítés 15°C-ról 40°C-ra, melegítési idő 37 perc, mosás 40 °C-on 12 percen át 55

Minták száma: 3/3000 ml mosóoldatban Enzimek: Fusarium oxysporum lipáz,

Alcalase 2.OT

Lipáz koceritráció: 0; 250; 500; 750; 3000 LU/1 θθ Proteolitikus enzim konc.: 0; 0,06 vagy 0,01;

0,02; 0,04; 0,08 AU/1Λ

A Fusarium oxysporum lipáz atkivitást az

1. példában előállított fermentlé centrifugálási felültíszójának megfelelő mennyisége segítségével visszük a mosóoldatba.

A proteolitikus aktivitást Anson Egységben/! mérjük (AU/1) és a NOVO Enzyme Information 1B No.058e-GB közleményben leírt módosított Anson módszer szerint mérjük (az eredeti módszert a J. Gén. Physicol.,22. 79-89 (1939) közleményben írták le.)

A mosási hatékonyságot a 25. példában leírtak szerint adjuk meg. A rövidítések jelentése a 24. példában megadott. Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaltuk össze.

Lipáz Proteináz Kioldá- B mo-	C mosósze
konc. koncent-	si érték	sószer
AU/1	ráció, AU/1
0	0	AR	35,1	27,0
250	0	AR	3,5	2,7
500	0	AR	3,8	3,2
750	0	AR	5,0	3,5
3000	0	ÁR	7,5	6,5
250	0,06	ÁR	2,8	3,5
500	0,06	ÁR	3,4	5,1
750	0,06	ÁR	3,8	5,6
3000	0,06	AR	5,4	6,4

-9193936

Lipáz Proteináz Kioldá- B mo-	C mosószer
konc. koncént-	si érték	sószer
AU/1	ráció, AU/1
0	0,01	AR	1,5	1,9
0	0,02	AR	1,2	2,4
0	0,04	AR	1,1	1,4
0	0,08	AR	1,8	1,5

27. példa

A példában bemutatjuk, hogy a találmány szerinti eljárással előállított lipolítikus enzimes mosószer adalékanyag jobb mosási tulajdonságú, mint más, ismert lipolítikus mosószer adalékanyagok.

Két mosási körülményt alkalmazunk a vizsgálatban:

1:0-3000 LU+1, EMPALOI

Ter-O-tometer: 40°C, 20 perc mosás,

Mosószer ALL+Na₂SO₄:3,75/ /1,25 g/l, 10° dH, pH = 9,5

2: 0-3000 LU/1, 10% olivaolaj/gya po4

Launder-O-meter: Európai mosást szabv., 40°C Béről wasc (nem ionos tenzid) 1,0 g/l; NOVO mosószer 3,25 g/l, 10° dH, pH 8,5/9,5

A 3,25 g NOVO mosószer 1 g LAS, 2 g STPP, 0,05 g CMC és 0,1 g Béről wasc tartalmú.

A következő táblázatban bemutatjuk a különféle, irodalomban ismert lipolítikus mosószer adalékanyagok és a találmány szerinti eljárással előállított lipolítikus mosószer adalékanyag mosási hatékonyságát AR értékekben kifejezve. Amennyiben egynél több mérést végeztünk, akkor vonallal elválasztva mind a két értéket megadjuk.

Mikroorganizmus vagy eredete	Gyártócég vagy kereskedelmi név	Mosási körülmények
1	2
	NOVO	3
A. niger	Lipase A	0
	AMANO AP G	5
Rhizopus rhi-	NOVO	0

zopodiformis

SIGMA	0 0/0
C. cylindra-
cea Lipase MY	0
Lipase OF	0/0

Mikroorga-	Gyártócég	Mosási kö-
nizmus vagy	vagy keres-	rülmények
eredete	kedelmi név	1	2
M. miehei	NOVO	8	5/8
M. javanicus	AMANO MAP-10	0	2/3
F. oxysporum	NOVO	10	10/8
Bacillus	NOVO		6/5
circulans			(100 LU/1)
Geotr'ichum sp	. NOVO	0
Pancreatin	SIGMA		4/4

A táblázat adataiból világosan kitűnik a

Fusarium oxysporum alapú lipolítikus mosószer adalékanyag jobb mosási tulajdonsága más, ismert lipolítikus mosószer adalékanyagokkal összehasonlítva.

28. példa

A példában bemutatjuk a különböző lipáztermelő Fusarium oxysporum törzsekből származó lipázok mosási jellemzőit.

A mosott, vizsgált anyag akril textília volt, amelyet az alábbi módon szennyeztünk: Vizsgált szennyezés: 3% olívaolaj

1,5% emulzifikáló szer Q,4% föld festékanyag 0,3 indiai tinta 87,8% víz

Az oldatot Rannie homogenizátorban emulzifikáltunk, majd az akril textília darabokat belemerítjük. A felesleg szennyezőanyagot kipréseljük, majd a szövetdarabokat 30 percen át centrifugában szárítjuk.

I. Kísérlet

Előáztatás: öt szövetmintát (5x10 cm) 2 órán át előáztatunk szobahőmérsékleten, 50 ml hígított fermentlevet és 5 ml A oldatot tartalmazó áztatólében.

A oldat: Béről wasc (nonil-fenol-etoxilát) 10° dH vízben (0,00603 %MgCl₂.6H₂O, 0,0165% CaCl₂ és 0,035% NaHCO₃ ionmentesített vízben).

Mosás: a mintákat 10 percig öblítjük és áztatás után, majd Terg-O-lometerben 30°C-on 10 percig mossuk 1,33 g TOP/1 10° dH víz tartalmú mosószeroldatban

A mintákat csapvízzel 10 percig öblítjük a mosás után, majd megszárítjuk. A mosóhatást AR értékben adjuk meg.

-10193936

Vizsgált textilanyag

B mosószer

Lipáz koncentráció, LU/1

C mosószer

Lipáz koncentráció, LU/1

	0 R_o	84 AR	167 AR	333 AR	1000 R_o	0 AR	84 AR	167 AR	333 A R	1000 AR
Gyapot	32,2	2,8	6,7	7,9	10,7	27,9	4,9	4,7	7,9	11,4
Poliészter/
gyapot	44,8	2,9	3,5	3,9	3,6	31,6	4,4	5,0	4,6	5,2
Akril	56,7	3,9	5,6	7,0	6,7	33,7	5,8	10,5	11,0	10,2
Mucor miehei	lipáz
Vizsgált			B mosószer		C	mosószer
textilanyag	Lipáz koncentráció,	LU/1	Lipáz koncentráció, LU/1
	0	84	167	333	1000	0	84	167	333	1000
	Rc	AR	aR	aR	R.	AR	AR	AR	A R	AR
Gyapot	35,3	4,1	4,8	7,5	8,8	25,4	1,9	2,0	4,3	4,9
Poliészter/
gyapot	44,3	2,3	3,1	3,7	1,6	31,4	1,8	2,0	1,8	1,0
Akril	54,4	3,6	4,4	5,7	5,7	33,8	4,4	5,8	6,5	6,3

C. cylindracea, pancreatic lipase

Vizsgált textil: gyapot

C. cylindracea lipase Mosószer Lipáz koncentráció, LU/1

Pancreatic lipase Lipáz koncentráció, LU/1

	0 R o	250 AR	500 AR	750 AR	3000 A R	0 R.	750 AR	3000 AR	6000 AR	10000 AR
B	36,4	0,0	0,0	1,1	0,0	34,5	2,7	2,2	3,0	3,8
G	26,0	0,0	0,0	0,4	0,5	24,4	3,4	3,8	3,5	3,6

26. példa 40

Vizsgált anyag: gyapot, a fenti módon szenynyezve

Mosógép: Launder-O-meter

Minták száma: 3/3000 ml mosóoldatban Enzimek: Fusarium oxysporum lipáz,

Alcalase 2.OT

Lipáz kocentráció: 0; 250; 500; 750; 3000 LU/1 θθ Proteolitikus enzim konc.: 0; 0,06 vagy 0,01;

0,02; 0,04; 0,08 AU/ΙΛ

A Fusarium oxysporum lipáz atkivitást az

1. példában előállított fermentlé centrifugálási felülúszójának megfelelő mennyisége segítségével visszük a mosóoldatba.

A proteolitikus aktivitást Anson Egységben/1 mérjük (AU/1) és a NOVO Enzyme Iriformation 1B No.058 e-GB közleményben leírt módosított Anson módszer szerint mérjük (az eredeti módszert a J. Gén. Physicol.,22. 79-89 (1939) közleményben írták le.)

Lipáz	Proteináz	Kioldá-	B mo-	C mo-
konc.	koncent-	si ér-	sószer	sósze
AU/1	ráció,	ték
	AU/1
0	0	AR	35,1	27,0
250	0	AR	3,5	2,7
500	0	AR	3,8	3,2
750	0	AR	5,0	3,5
3000	0	AR	7,5	6,5
250	0,06	AR	2,8	3,5
500	0,06	AR	3,4	5,1
750	0,06	AR	3,8	5,6
3000	0,06	AR	5,4	6,4

-11193936

Lipáz Proteináz Kioldá- B mo-	C mosószer
konc. koncent-	si érték	sószer
AU/1	ráció, AU/1
0	0,01	AR	1,5	1,9
0	0,02	AR	1,2	2,4
0	0,04	AR	1,1	1,4
0	0,08	AR	1,8	1,5

27. példa

Két mosási körülményt alkalmazunk a vizsgálatban:

1:0-3000 LU+l, EMPALO1 Ter-O-tometer: 40°C, 20 perc mosás,

Mosószer ALL+Na₂SO₄:3,75/ /1,25 g/1, 10° dH. pH = 9,5

2: 0-3000 LU/1, 10% oltvaolaj/gya pót

Launder-O-meter: Európai mosási szabv., 40°C Béről wasc (nem ionos tenzid) 1,0 g/1; NOVO mosószer 3,25 g/1, 10° dH, pH 8,5/9,5

Mikroorganizmus vagy eredete	Gyártócég vagy kereskedelmi név	Mosási körülmények
1	2
	NOVO	3
A. niger	Lipase A AMANO AP G	0 5
Rhizopus rhi-	NOVO	0
zopodiformis
	SIGMA	0	0/0
C. cylindra-
cea	Lipase MY	0
	Lipase OF		0/0

A táblázat adataiból világosan kitűnik a

Fusarium oxysporum alapú lipolítikus mosószer adalékanyag jobb mosási tulajdonsága más, ismert lipolitikus mosószer adalékanyagokkal összehasonlítva.

28. példa

1,5% emulzifikáló szer Q,4% föld festékanyag 0,3 indiai tinta 87,8% víz

I. Kísérlet

A oldat: Béről wasc (nonil-fenol-etoxilát) 10° dH vízben (0,00603 %MgCl₂.6H₂O, 0,0165% CaCl₂ és 0,035% NaHCOj ionmentesített vízben).

Mosás: a mintákat 10 percig öblítjük és áztatás után, majd Terg-O-fometerben 30°C-on 10 percig mossuk 1,33 g TOP/I 10° dH víz tartalmú mosószeroldatban

-12193936

Eredmények

Enzim dózis, Rq LU/1, az áztató

oldatban	0	750	1500	3000	4500	9000
C 597	30,9	5,7	6,2	6,7	8,4	8,4
A 1714		3,9	5,1	6,0	6,7	-

II. Kísérlet _t

Az I. Kísérlet szerinti eljárással vizsga- Fusarium oxysporum törzs fermentlevének fellatot végeztünk néhány más lipáztermelő használásával.

Eredmények

Enzim dózis, LU/1, áztató oldatban	Ro 0	750	aR	4500 9000
1500	3000
C 597		0,9	3,2	3,7	4,9
A 1714		2,1	3,6	3,3	5,1
A 1755	36,8	3,5	2,8	3,1	5,4
A 1756		3,0	4,7	4,7	6,1
A 1760		2,0	3,7	5,3	5,9

29. példa

A példában bemutajuk, hogy bizonyos Fusarium oxysporum törzsek a találmány szerinti leírás értelmében lipáztermelő törzsek, míg más Fusarium oxysporum törzsek a találmány 35 szerinti leírás meghatározása értelmében nem azok. A lipáz termelés táptalaja az alábbi alkotóelemeket tartalmazza, g/1:

szőj a liszt 45 40 glükóz 70

A törzs tudományos azonosító megnevezése

Fusarium oxysporum Schlecht f.sp.vasinfectum f.sp.chrysanthemi f.sp.cyclaminis f.sp.gladioli f.sp.lycopersici f.sp.narcissi

- f.sp.opúnciarum

f.sp.passiflóra f.sp.perniciosum f.sp.lini

Valamennyi, a táblázatban felsorolt törzs kívánságra az érdeklődök rendelkezésére áll.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Enzimes mosószer adalékanyag, azzal ⁰⁵ jellemezve, hogy aktív anyagként 20,000—

KH₂PO₄

Na₂HPO₄szója-olaj

A sterilitást 40 percig 121°C-on végezzük. Tizenegy, 100 ml táptalajt tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer lombikba 10⁷ spórát inokulálunk agar-agar kénetekből, amelyeket előzetesen különféle 11 fajta Fusarium törzzsel oltottunk be. A lombikokat 230 ford/perc sebességgel 30°C-on 5 napon át rázatjuk. A hozamokat a következő táblázatban adjuk meg.

Belső Hivatalos Hozam azonosító azonosító LU/ml

CM CO tO

jelzet jelzet C 597 DSM 2672 122,5 A 1714 ATCC : 7808 18,5 CBS 127.81 1,8 CBS 159.57 5,1 A 1755 CBS 620.72 15,2 A 1756 CBS 645.78 14,6 CBS 196.65 7,6 CBS 743.79 3,3 CBS 744.79 7,9 A 1760 CBS 794.70 10,9 ATCC ; 10960 1,3

100,000 E/g Fusarium oxysporum lipázt tartalmaz, szilárd adalékanyagok, célszerűen granulálószer, folyékony adalékanyagok, célszerűen víz és stabilizálószerek, célszerűen propilén-glikol közül legalább eggyel, valamint adott esetben proteolitikus enzimmel együtt.

-13193936

2. Az 1. igénypont szerinti adalékanyag, azzal jellemezve, hogy Fusarium oxysporum DSM 2672 lipázt tartalmaz.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti adalékanyag, azzal jellemezve, hogy granulátum fór- 5 májú.
4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti adalékanyag, azzal jellemezve, hogy stabilizálószert tartalmazó folyadék formájú.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy proteolitikus aktivitása 0,5-3,0 Anson egység/g adalékanyag közötti.