HRP20040870A2 - Radiolabelled quinoline and quinolinone derivatives and their use as metabotropic glutamate receptorligands - Google Patents

Radiolabelled quinoline and quinolinone derivatives and their use as metabotropic glutamate receptorligands

Info

Publication number
HRP20040870A2
HRP20040870A2 HR20040870A HRP20040870A HRP20040870A2 HR P20040870 A2 HRP20040870 A2 HR P20040870A2 HR 20040870 A HR20040870 A HR 20040870A HR P20040870 A HRP20040870 A HR P20040870A HR P20040870 A2 HRP20040870 A2 HR P20040870A2
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
6alkyl
compound
amino
formula
mono
Prior art date
Application number
HR20040870A
Other languages
English (en)
Inventor
Anne
Francois
Gerardus Maria Janssen Cornelius
Lavreysen Hilde
Original Assignee
Janssen Pharmaceutica N.V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Pharmaceutica N.V. filed Critical Janssen Pharmaceutica N.V.
Publication of HRP20040870A2 publication Critical patent/HRP20040870A2/hr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/041—Heterocyclic compounds
    • A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
    • A61K51/0459—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having six-membered rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, e.g. piperazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/041—Heterocyclic compounds
    • A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
    • A61K51/0463—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Addiction (AREA)

Description

Predloženi izum bavi se radioaktivno označenim derivatima kinolina i kinolinona koji pokazuju antagonističko djelovanje prema metabotropnom receptoru glutamata, naročito djelovanje prema mGlu 1 receptoru, i njihovim pripravljanjem; dalje se odnosi na pripravke koji ih sadrže, kao i na njihovu primjenu u dijagnostičkom postupku, posebno za označavanje i identifikaciju mjesta metabotropnog receptora glutamata i za predočavanje organa.
Uvod
Neuroprijenosnik glutamat smatra se glavnim neuroprijenosnikom podražaja u središnjem živčanom sustavu sisavaca. Vezanje ovog neuroprijenosnika na metabotropne receptore glutamata (mGluR), koji su podfamilija receptora vezanih na G-protein i koji obuhvaćaju 8 različitih podtipova mGluR-a, naime mGluR1 do mGluR8, aktivira mnoštvo sistema drugih glasnika unutar stanice. mGluR-i mogu se podijeliti u 3 skupine bazirano na homologiji aminokiselinskog niza, sistemu drugih glasnika kojeg koriste receptori te farmakološkim svojstvima. Skupina I mGluR-a, koja uključuje mGluR podtip 1 i 5, veže se na fosfolipazu C i njihova aktivacija dovodi do pokretanja kalcijevih iona. Skupina II mGluR-a (mGluR2 i 3) i skupina III mGluR-a (mGluR4, 6, 7 i 8) veže se na adenil ciklazu i njihova aktivacija uzrokuje smanjenje drugog glasnika cAMP i kao takva oslabljenje neuronske aktivnosti. Liječenje s grupom I mGluR antagonista pokazalo se da prenosi u parasinapsi u smanjenom otpuštanje neuroprijenosnika glutamata te da smanjuje neuronski podražaj nastao posredovanjem glutamata putem postsinaptičkih mehanizama. Budući se za mnoštvo patofizioloških procesa i bolesnih stanja koja pogađaju središnji živčani sustav smatra da su nastala uslijed prekomjerenog podražaja neurona u središnjem živčanom sustavu potaknutog glutamatom, skupina I antagonista mGluR, posebno mGluR1 antagonisti mogli bi biti terapeutski blagotvorni u liječenju bolesti središnjeg živčanog sustava, posebno, u psihijatrijskim i neurološkim bolestima.
Međutim, sve do sada, nisu bili dostupni nikakvi specifični mGluR1-ligandi, što je nedostatak koji je ozbiljno narušavao izučavanje mGlu1 receptora, osobito autoradiografska istraživanja nesumnjive raspodjele i obilja ovih receptora u sekcijama mozga. Za skupinu I, do sada je bio dostupan samo [3H] glutamat, upotrijebljen je na mGlu1a receptorima štakora (Thomsen et al., Brain Res. 619: 22-28, 1993) ili čovjeka (Kingston et al., Neuropharmacology 37: 211-281, 1998). Za mGlu1a receptor i mGlu5 receptor dostupan je [3H] kviskvalat, međutim, spomenuti receptor nije specifičan za Glu1 receptor (također se veže na AMPA receptor) te je kompetitivan, tj. premješta glutamat (Mutel at al., J. Neurochem. 75: 2590-2601, 2000).
Cilj ovog izuma bio je pribaviti specifične, posebno nekompetitivne ligande mGlu1 receptora.
Izumitelji su sada pronašli posebnu skupinu spojeva koji u radioaktivno označenom obliku daju za odgovarajuće specifične, posebno nekompetitivne ligande mGlu1 receptora kao i postupak označavanja i identifikacije receptorskih mjesta metabotropnog receptora glutamata te za predočavanje organa.
U okviru ove prijave, pojam "specifičan" znači da se ligand ponajprije veže na mGlu1 receptorsko mjesto. Pojam "nekompetitivan" znači da ligand uopće ne ili samo marginalno premješta glutamat vezan na mGlu1 receptorsko mjesto.
WO 02/28837 iznosi neradioaktivne spojeve prema predloženom izumu.
WO 99/26927 iznosi antagoniste skupine I mGluR-a za liječenje neuroloških bolesti i poremećaja, baziranih među ostalim na strukturi kinolina.
WO 99/03822 iznosi bicikličke ligande metabotropnog receptora glutamata, niti jedan od njih nije baziran na strukturi kinolina ili kinolinona.
WO 94/27605 iznosi 1,2,3,4-tetrahidrokinolin-2,3,4-trion-3 ili 4-oksime i njihovu uporabu za liječenje i spriječavanje gubitka nurona, neurodegenerativnih bolesti, štetnih posljedica hiperaktivnosti ekscitacijskih aminokiselina i anksioznosti, kao i njihove radioaktivno označene spojeve.
Detaljan opis izuma
Predloženi izum razmatra radioaktivno označene spojeve Formule (I-A)* ili (I-B)*
[image]
njihov N-oksidni oblik, farmaceutski prihvatljivu adicijsku sol, kvaterni amin i stereokemijski izomerni oblik, pri čemu
X predstavlja O; C(R6)2 s tim da je R6 vodik, aril ili C1-6 alkil moguće supstituiran s amino ili mono- ili di(C1-6alkil) amino; S ili N-R7 s tim da je R7 amino ili hidroksi; R1 predstavlja C1-6alkil; ari; tienl; kinolinil; cikloC3-12alkil ili (cikloC3-12alkil)C1-6alkil pri čemu cikloC3-12alkilna skupina može sadržavati dvostruku vezu i pri čemu se jedan ugljikov atom u cikloC3-12alkilnoj skupini može zamijeniti s kisikovim atomom ili NR8-skupinom uz R8 je vodik, benzil ili C1-6alkiloksikarbonil; pri čemu jedan ili više vodikovih atoma u C1-6alkilnoj skupini ili u acikloC3-12alkilnoj skupini može biti zamijenjen s C1-6alkilom, hidroksiC1-6alkilom, haloC1-6alkilom, aminoC1-6alkilom, hidroksi, C1-6alkiloksi, arilC1-6alkiloksi, halo, C1-6alkiloksikarbonilom, arilom, amino, mono-ili di(C1-6alkil)amino, C1-6alkiloksikarbonilamino, halo, piperazinilom, piridinilom, morfolinilom, tienilom ili dvovalentnim radikalom formule -O-, -O-CH2-O ili -O-CH2-CH2-O-; ili radikal formule (a-1)
[image]
u kojem je
Z1jednostruka kovalentna veza, O, NH ili CH2;
Z2 je jednostruka kovalentna veza, O, NH ili CH2;
n je cijeli broj 0, 1, 2 ili 3;
i u kojem se svaki vodikov atom u fenilnom prstenu
nezavisno može zamijeniti s halo, hidroksi, C1-6alkilom, C1-6alkiloksi ili hidroksiC1-6alkilom;
ili
X i R1 mogu se uzeti zajedno s ugljikovim atomom na kojeg su X i R1 vezani kako bi se oblikovao radikal formule (b-1), (b-2) ili (b-3);
[image]
R2 predstavlja vodik; halo; cijano; C1-6alkil; C1-6alkiloksi; C1-6alkiltio; C1-6alkilkarbonil; C1-6alkiloksikarbonil; C1-6alkilkarboniloksiC1-6alkil; C2-6alkenil; hidroksiC2-6alkenil; C2-6alkinil; hidroksiC2-6alkinil; tri(C1-6alkil)silanC2-6alkinil; amino; mono- ili di(C1-6alkil)amino; mono- ili di (C1-6alkiloksiC1-6alkil) amino; mono- ili di(C1-6alkiltioC1-6alkl)amino; aril; arilC1-6alkil; arilC2-6alkinil; C1-6alkiloksiC1-6alkilaminoC1-6alkil; aminokarbonil moguće supstituiran s C1-6alkilom, C1-6alkiloksiC1-6alkilom, C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkilom ili piridinilC1-6alkilom; heterocikl izabran između tienila, furanila, pirolila, tiazolila, oksazolila, imidazolila, izotiazolila, izoksazolila, pirazolila, piridila, pirazinila, piridazinila, pirimidinila, piperidinila i piperazinila, moguće N-supstituiran s C1-6alkiloksiC1-6alkilom, morfolinilom, tiomorfolinilom, dioksanilom ili ditianilom; radikal -NH-C(=O)R9 u kojem
R9 predstavlja C1-6alkil moguće supstituiran s cikloC3-12alkilom, C1-6alkiloksi, C1-6alkiloksikarbonilom, arilom, ariloksi, tienilom, piridinilom, mono- ili di(C1-6alkil)amino, C1-6alkiltio, benziltio, piridiniltio ili pirimidiniltio; cikloC3-12alkilom; cikloheksenilom; amino; arilcikloC3-12alkilamino; mono- ili -di(C1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksikarbonil)amino; mono- ili di(C2-6alkenil)amino; mono- ili di(arilC1-6alkil)amino; mono- ili diarilamino; arilC2-6alkenilom; furanilC2-6alkenilom; piperididinilom; piperazinilom; indolilom; furilom; benzofurilom; tetrahidrofurilom; indenilom; adamantilom; piridinilom; pirazinilom; arilom; arilC1-6alkiltio ili radikalom formule (a-1);
sulfonamid -NH-SO2-R10 u kojem
R10 predstavlja C1-6alkil, mono-ili polihaloC1-6alkil, arilC1-6alkil, arilC2-6alkenil, aril, kinolinil, izoksazolil ili di(C1-6alkil)amino;
svaki R3 i R4 nezavisno predstavlja vodik; halo; hidroksi; cijano; C1-6alkil; C1-6alkiloksi; C1-6alkiloksiC1-6alkil; C1-6alkilkarbonil; C1-6alkiloksikarbonil; C2-6alkenil; hidroksiC2-6alkenil; C2-6alkinil; hidroksiC2-6alkinil; tri(C1-6alkil)silanC2-6alkinil; amino; mono- ili di(C1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksiC1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiltioC1-6alkil)amino; aril; morfolinilC1-6alkil ili piperidinilC1-6alkil; ili
R2 i R3 mogu se uzeti zajedno i oblikovati -R2-R3, koji predstavlja dvovalentni radikal formule -(CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)6-, -CH=CH-CH=CH-, -Z4-CH=CH-, -CH=CH-Z4-, -Z4-CH2-CH2-CH2-, CH2-Z4-CH2-CH2-, -CH2-CH2-Z4-CH2-, -CH2-CH2-CH2-Z4-, -Z4-CH2-CH2-, -CH2-Z4-CH2- ili -CH2-CH2-Z4-, uz Z4 je O, S, SO2 ili NR11 pri čemu je R11 vodik, C1-6alkil, benzil ili C1-6alkiloksikarbonil; i pri čemu je svaki dvovalentni radikal moguće supstituiran s C1-6alkilom. ili
R3 i R4 mogu se uzeti zajedno i oblikovati dvovalentni radikal formule -CH=CH-CH=CH- ili -CH2-CH2-CH2-CH2-;
R5 predstavlja vodik; cikloC3-12alkil; piperidinil; okso-tienil; tetrahidrotienil, arilC1-6alkil; C1-6alkiloksiC1-6alkil; C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkil ili C1-6alkil moguće supstituiran radikalom C(=O)NRxRy, u kojem su Rx i Ry, svaki nezavisno, vodik, cikloC3-12alkil, C2-6alkinil ili C1-6alkil moguće supstituiran s cijano, C1-6alkiloksi, C1-6alkiloksikarbonilom, furanilom, pirolidinilom, benziltio, piridinilom, pirolilom ili tienilom;
Y predstavlja O ili S;
ili Y i R5 mogu se uzeti zajedno i oblikovati =Y-R5- koji predstavlja radikal formule -CH=N-N= (c-1); -N=N-N= (c-2); ili -N-CH=CH- (c-3);
aril predstavlja fenil ili naftil moguće supstituiran s jednim ili više supstituenata izabranih između halo, hidroksi, C1-6alkila, C1-6alkiloksi, feniloksi, nitro, amino, tio, C1-6alkiltio, haloC1-6alkila, polihaloC1-6alkila, polihaloC1-6alkiloksi, hidroksiC1-6alkila, C1-6alkiloksiC1-6alkila, aminoC1-6alkila, mono- ili di(C1-6alkil)amino; mono- ili di (C1-6alkil)aminoC1-6alkila, cijano, -CO-R12, -CO-OR13, -NR13SO2R12, -SO2-NR13R14, -NR13C(O)R12, -C(O)NR13R14, -SOR12, -SO2R12; pri čemu svaki R12, R13 i R14 nezavisno predstavlja C1-6alkil; cikloC3-6alkil; fenil; fenil supstituiran s halo, hidroksi, C1-6alkilom, C1-6alkiloksi, haloC1-6alkilom, polihaloC1-6alkilom, furanilom, tienilom, pirolilom, imidazolilom, tiazolilom ili oksazolilom;
i kada je R1-C(=X) skupina vezana na poziciju drugačiju od pozicije 7 ili 8, tada se spomenuta pozicija 7 i 8 može supstituirati s R15 i R16 pri čemu bilo jedan ili oba R15 i R16 predstavlja C1-6alkii, C1-6alkiloksi ili R15 i R16 uzeti zajedno mogu oblikovati dvovalentni radikal formule -CH=CH-CH=CH-.
Kako se rabi u prethodnim definicijama i dalje C1-6alkil kao skupina ili dio skupine obuhvaća zasićene ugljikovodične radikale ravnog ili razgranatog lanca koji imaju od 1 do 6 ugljikovih atoma kao što je, primjerice, metil, etil, propil, butil, pentil ili heksil; C2-6alkenil kao skupina ili dio skupine obuhvaća ugljikovodične radikale ravnog ili razgranatog lanca koji imaju od 2 do 6 ugljikovih atoma i imaju dvostruku vezu kao što je etenil, propenil, butenil, pentenil, heksenil, 3-metilbutenil i slično; C2-6alkinil kao skupina ili dio skupine obuhvaća ugljikovodične radikale ravnog ili razgranatog lanca koji imaju od 2 do 6 ugljikovih atoma i imaju trostruku vezu kao što je etinil, propinil, butinil, pentinil, heksinil, 3-metilbutinil i slično; cikloC3-6alkil obuhvaća monocikličke alkilne prstenaste strukture kao što je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, i cikloheksil; cikloC3-12alkil uključuje mono-, bi- ili tricikličke alkilne prstenaste strukture i znači na primjer ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, norbornanil, adamantil.
Pojam halo znači fluoro, kloro, bromo i jodo. Kako se rabi u prethodno i dalje u tekstu, polihaloC1-6alkil kao skupina ili dio skupine definiran je kao mono- ili polihalosupstituirani C1-6alkil, posebno metil s jednim ili više fluoro atoma, primjerice, difluormetil ili trifluormetil. U slučaju kada je na alkilnu skupinu vezano više od jednog halogenog atoma unutar definicije polihalo C1-6alkila, oni mogu biti jednaki ili različiti.
Kada se bilo koja varijabla, npr. aril, pojavljuje više od jednom u bilo kojem sastavu, svaka definicija je nezavisna.
Kada je bilo koja veza povučena u prstenastu strukturu, to znači da odgovarajući supstituent može biti povezan na bilo koji atom iz spomenute prstenaste strukture. To znači na primjer da R1-C(=X) skupina može biti vezana na kinolinsku ili kinolinonsku skupinu na poziciji 5, 6, 7, 8, ali također i na poziciji 3 ili poziciji 4.
Pod pojmom "radioaktivno označeni spoj" podrazumijeva se bilo koji spoj prema formuli (I-A)* ili (I-B)*, njegov N-oksidni oblik, farmaceutski prihvatljiva adicijska sol, kvaterni amin i stereokemijski izomerni oblik, koji sadrži barem jedan radioaktivni atom. U okviru ove prijave, spojevi koji ne sadrže radioaktivni atom označeni su bez zvjezdice uz njihov broj formule, spojevi koji sadrže radioaktivni atom označeni su sa zvjezdicom uz njihov broj formule. Spojevi se mogu označiti s radionuklidima koji emitiraju ili pozitrone i gama zrake. Za tehnike vezanja radioaktivnog liganda (ispitivanje membranskog receptora), odabrani atom je atom [3H] ili atom [125I]. za predočavanje, najčešće upotrijebljeni radionuklidi koji emitiraju pozitrone (PET) su 11C, 18F, 15O i 13N, od kojih su svi proizvedeni u akceleratoru i imaju vremena poluraspada redom od 20, 100, 2 i 10 minuta. Budući su vremena poluraspada ovih radionuklida tako kratka, može se postići samo to da se upotrijebe u ustanovama koje imaju akcelerator na mjestu njihove proizvodnje, ograničujući tako njihovu primjenu. Najšire korišteni od ovih su 18F, 99mTc, 201Tl i 123I.
Posebno, radioaktivni atom izabran je iz skupine vodika, ugljika, dušika, sumpora, kisika i halogena. Poželjno je da se radioaktivni atom izabere iz skupine vodika, ugljika i halogena.
Posebno, radioaktivni atom izabran je iz skupine 3H, 11C, 18F, 122I, 123I, 125I, 131I, 75Br, 76Br, 77Br i 82Br. Poželjno je da se radioaktivni atom izabere iz skupine 3H, 11C i 18F.
Pod pojmom "spoj prema izumu" podrazumijeva se spoj prema formuli (I-A)* ili (I-B)*, njegov N-oksidni oblik, farmaceutski prihvatljiva adicijska sol, kvaterni amin i stereokemijski izomerni oblik.
Za uporabu in vivo, soli spojeva formule (I-A)* i (I-B)* su one u kojima je protuion farmaceutski prihvatljiv. Međutim, soli kiselina i baza koje nisu farmaceutski prihvatljive također mogu pronaći primjenu, primjerice, u pripravljanju ili pročišćavanju farmaceutski prihvatljivog spoja. Sve soli, bilo farmaceutski prihvatljive ili ne uključene su u doseg ovog izuma. Pod pojmom "in vivo" podrazumijeva se uporaba spojeva prema izumu pri čemu su spojevi dani živim životinjama.
Podrazumijeva se da farmaceutski prihvatljive adicijske soli kako su gore spomenute obuhvaćaju terapeutski aktivne netoksične oblike adicijskih soli koje spojevi formule (I-A)* i (I-B)* mogu oblikovati. Potonje se prikladno mogu dobiti obradom bazičnog oblika s takvim prikladnim kiselinama kao što su anorganske kiseline, primjerice, halovodične kiseline, npr. klorovodična, bromovodična i slično; sulfatna kiselina; nitratna kiselina; fosfatna kiselina i slično; ili organske kiseline, primjerice, octena, propan, hidroksioctena, 2-hidroksipropan, 2-oksopropan, oksalna, malonska, jantarna, maleinska, fumarna, jabučna, vinska, 2-hidroksi-1,2,3-propantrikarboksilna, metansulfonska, etansulfonska, benzensulfonska, 4-metilbenzensulfonska, cikloheksansulfaminska, 2-hidroksibenzojeva, 4-amino-2-hidroksibenzojeva i slične kiseline. Obrnuto, oblik soli može se pretvoriti obradom s alkalijama u slobodni bazični oblik.
Spojevi formule (I-A)* i (I-B)* koji sadrže kiselinske protone mogu se pretvoriti u njihove terapeutski aktivne netoksične oblike metalnih ili aminskih adicijskih soli obradom s odgovarajućim organskim ili anorganskim bazama. Odgovarajući bazični oblici soli obuhvaćaju, primjerice, amonijeve soli, soli alkalijskih i zemnoalkalijskih metala, npr. litijeve, natrijeve, kalijeve, magnezijeve, kalcijeve soli i slično, soli s organskim bazama, npr. primarni, sekundarni i tercijarni alifatski i aromatski amini kao što je metilamin, etilamin, propilamin, izopropilamin, četiri izomera butilamina, dimetilamin, dietilamin, dietanolamin, dipropilamin, diizopropilamin, di-n-butilamin, pirolidin, piperidin, morfolin, trimetilamin, trietilamin, tripropilamin, kinuklidin, piridin, kinolin i izokinolin, benzatin, N-metil-D-glukamin, 2-amino-2-(hidroksimetil)-1,3-propandiol, hidrabaminske soli, i soli s aminokiselinama kao što je, primjerice, arginine, lizin i slično.
Obrnuto, oblik soli može se pretvoriti obradom s kiselinom u slobodni kiselinski oblik.
Pojam adicijska sol također obuhvaća hidratne i solvatne adicijske oblike koje spojevi formule (I-A)* i (I-B)* mogu oblikovati. Primjeri takvih oblika su npr. hidrati, alkoholati i slično.
Pojam "kvaterni amin" kako se prethodno rabi definira kvaterne amonijeve soli koje spojevi formule (I-A)* ili (I-B)* mogu oblikovati reakcijom između bazičnog dušika spoja formule (I-A)* ili (I-B)* i odgovarajućeg kvaternizirajućeg sredstva, kao što je, primjerice, moguće supstituirani alkilhalid, arilhalid ili arilalkilhalid, npr. metiljodid ili benziljodid. Također se mogu upotrijebiti ostali reaktantni s povoljnim izlaznim skupinama, kao što su alkil trifluormetansulfonati, alkil metansulfonati, i alkil p-toluensulfonati. Kvaterni amin ima pozitivno nabijeni dušik. Farmaceutski prihvatljivi protuioni uključuju kloro, bromo, jodo, trifluoracetat i acetat. Odabrani protuion može se uvesti pomoću ionskih izmjeničnih smola.
Podrazumijevat će se da neki od spojeva prema izumu mogu sadržavati jedan ili više kiralnih centara i postojati u stereokemijski izomernim oblicima.
Pojam "stereokemijski izomerni oblici" kako se prethodno rabi definira sve moguće stereoizomerne oblike koje spojevi prema izumu ili fiziološki funkcionalni derivati mogu imati. Ako drugačije nije spomenuto ili naznačeno, kemijska oznaka spojeva označava smjesu svih mogućih stereokemijski izomernih oblika, spomenute smjese sadrže sve dijastereomere i enantiomere bazične molekularne strukture, kao i svaki od pojedinačnih izomernih oblika spojeva prema izumu u biti čist, tj. pomiješan s manje od 10%, poželjno manje od 5%, naročito manje od 2%, a najpovoljnije manje od 1% ostalih izomera. Očigledno je da se stereokemijski izomerni oblici spojeva prema izumu nalaze unutar dosega predloženog izuma. Isto vrijedi za intermedijare kako su ovdje definirani, upotrijebljene za pripravljanje krajnjih produkata spojeva prema izumu.
Pojmovi cis i trans ovdje su upotrijebljeni u skladu s Chemical Abstracts nomenklaturom.
U nekim spojevima prema izumu i u intermedijarima upotrijebljenim za njihovo pripravljanje, apsolutna stereokemijska konfiguracija nije eksperimentalno određena. U tim slučajevima stereoizomerni oblik koji je izoliran prvi označen je kao "A", a drugi kao "B", bez daljnjeg osvrta na stvarnu stereokemijsku konfiguraciju. Međutim, spomenuti "A" i "B" stereoizomerni oblici mogu se nedvosmisleno karakterizirati primjerice njihovom optičkom rotacijom u slučaju "A" i "B" imaju enantiomerni odnos. Osoba vična struci može odrediti apsolutnu konfiguraciju takvih spojeva koristeći u struci poznate postupke kao što je, primjerice, rendgenska difrakcija. U slučaju kada su "A" i "B" stereoizomerne smjese, oni se mogu dalje razdvojiti pri čemu su frakcije izolirane prve označene s "Al" i "Bi", a druge kao "A2" i "B2", bez daljnjeg osvrta na stvarnu stereokemijsku konfiguraciju.
Podrazumijeva se da N-oksidni oblici predloženih spojeva obuhvaćaju spojeve formule (I-A)* i (I-B)* u kojima je jedan ili nekoliko dušikovih atoma oksidirano u takozvani N-oksid.
Neki od spojeva formule (I) također mogu postojati u svom tautomernom obliku. Za takve oblike, iako nije eksplicitno naznačeno u gornjoj formuli podrazumijeva se da se nalaze unutar dosega predloženog izuma. Od posebnog interesa su oni spojevi formule (I-A)* i (I-B)* koji su stereokemijski čisti.
Zanimljiva skupina spojeva su oni spojevi formule (I-A)* i (I-B)* u kojima
X predstavlja O; C(R6)2 s tim da je R6 vodik ili aril; ili N-R7 uz R7 je amino ili hidroksi;
R1 predstavlja C1-6alkil; aril; tienl; kinolinil; cikloC3-12alkil ili (cikloC3-12alkil)C1-6alkil pri čemu cikloC3-12alkilna skupina može sadržavati dvostruku vezu i pri čemu se jedan ugljikov atom u cikloC3-12alkilnoj skupini može zamijeniti s kisikovim atomom ili NR8-skupinom uz R8 je vodik, benzil ili C1-6alkiloksikarbonil; pri čemu jedan ili više vodikovih atoma u C1-6alkilnoj skupini ili u cikloC3-12alkilnoj skupini može biti zamijenjen s C1-6alkilom, haloC1-6alkilom, hidroksi, C1-6alkiloksi, arilC1-6alkiloksi, halo, arilom, mono- ili di (C1-6alkil)amino, C1-6alkiloksikarbonilamino, halo, piperazinilom, piridinilom, morfolinilom, tienilom ili dvovalentnim radikalom formule -O-, -O-CH2-O ili -O-CH2-CH2-O-; ili radikal formule (a-1)
[image]
u kojem je
Z1jednostruka kovalentna veza, O ili CH2;
Z2 je jednostruka kovalentna veza, O ili CH2;
n je cijeli broj 0, 1, ili 2;
i u kojem se svaki vodikov atom u fenilnom prstenu '
nezavisno može zamijeniti s halo ili hidroksi; ili
X i R1 mogu se uzeti zajedno s ugljikovim atomom na kojeg su X i R1 vezani kako bi se oblikovao radikal formule (b-1), (b-2) ili (b-3);
[image]
R2 predstavlja vodik; halo; cijano; C1-6alkil; C1-6alkiloksi; C1-6alkiltio; C1-6alkilkarbonil; C1-6alkiloksikarbonil; C2-6alkenil; hidroksiC2-6alkenil; C2-6alkinil; hidroksiC2-6alkinil; tri(C1-6alkil)silanC2-6alkinil; amino; mono- ili di(C1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksiC1-6alkil)amino; mono- ili di (C1-6alkiltioC1-6alkil)amino; aril; arilC1-6alkil; arilC2-6alkinil; C1-6alkiloksiC1-6alkilaminoC1-6alkil; aminokarbonil moguće supstituiran s C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkilom; heterocikl izabran između tienila, furanila, tiazolila i piperidinila, moguće N-supstituiran s morfolinilom ili tiomorfolinilom; radikal -NH-C(=O)R9 u kojem
R9 predstavlja C1-6alkil moguće supstituiran s cikloC3-12alkilom, C1-6alkiloksi, C1-6alkiloksikarbonilom, arilom, ariloksi, tienilom, piridinilom, mono- ili di(C1-6alkil)amino, C1-6alkiltio, benziltio, piridiniltio ili pirimidiniltio; cikloC3-12alkil; cikloheksenil; amino; arilcikloC3-12alkilamino; mono- ili -di(C1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksikarbonil)amino; mono- ili di(C2-6alkenil)amino; mono- ili di(arilC1-6alkil)amino; mono- ili diarilamino; arilC2-6alkenil; furanilC2-6alkenil; piperididinil; piperazinil; indolil; furil; benzofuril; tetrahidrofuril; indenil; adamantil; piridinil; pirazinil; aril; ili radikal formule (a-1);
sulfonamid -NH-SO2-R10 u kojem
R10 predstavlja C1-6alkil, mono- ili polihaloC1-6alkil, arilC1-6alkil, ili aril;
svaki R3 i R4 nezavisno predstavlja vodik; C1-6alkil; C1-6alkiloksiC1-6alkil; C1-6alkiloksikarbonil; ili
R2 i R3 mogu se uzeti zajedno i oblikovati -R2-R3, koji predstavlja dvovalentni radikal formule -(CH2)4-, -(CH2)5-, -Z4-CH=CH-, -Z4-CH2-CH2-CH2- ili -Z4-CH2-CH2- uz Z4 je O, S, SO2 ili NR11 pri čemu je R11 vodik, C1-6alkil, benzil ili C1-6alkiloksikarbonil; i pri čemu je svaki dvovalentni radikal moguće supstituiran s C1-6alkilom; ili
R3 i R4 mogu se uzeti zajedno i oblikovati dvovalentni radikal formule -CH=CH-CH=CH- ili -CH2-CH2-CH2-CH2-;
R5 predstavlja vodik; piperidinil; okso-tienil; tetrahidrotienil, arilC1-6alkil; C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkil ili C1-6alkil moguće supstituiran s radikalom C(=O)NRxRy, u kojem su Rx i Ry, svaki nezavisno, vodik, cikloC3-12alkil, C2-6alkinil ili C1-6alkil moguće supstituiran s cijano, C1-6alkiloksi, C1-6alkiloksi karboni lom; Y predstavlja 0 ili S; ili
Y i R5 mogu se uzeti zajedno i oblikovati =Y-R5- koji predstavlja radikal formule -CH=N-N= (c-1); ili -N=N-N= (c-2);
aril predstavlja fenil ili naftil moguće supstituiran s jednini ili više supstituenata izabranih između halo, C1-6alkiloksi, feniloksi, mono- ili di (C1-6alkil) amino i cijano;
i kada je R1-C(=X) skupina vezana na poziciju drugačiju od pozicije 7 ili 8, tada se spomenuta pozicija 7 i 8 može supstituirati s R15 i R16 pri čemu bilo jedan ili oba R15 i R16 predstavlja C1-6alkil ili R15 i R16 uzeti zajedno mogu oblikovati dvovalentni radikal formule -CH=CH-CH=CH-.
Daljnju najzanimljiviju skupinu spojeva čine oni spojevi formule (I-A)* i (I-B)* u kojima
X predstavlja O;
R1 predstavlja C1-6alkil; cikloC3-12alkil ili (cikloC3-12alkil)C1-6alkil, pri čemu se jedan ili više vodikovih atoma u C1-6alkilnoj skupini ili u cikloC1-6alkilnoj skupini može zamijeniti s C1-6alkiloksi, arilom, halo ili tienilom;
R2 predstavlja vodik; halo; C1-6alkil ili amino;
svaki R3 i R4 nezavisno predstavlja vodik ili C1-6alkil; ili
R2 i R3 mogu se uzeti zajedno i oblikovati -R2-R3-, koji predstavlja dvovalentni radikal formule -Z4-CH2-CH2-CH2-ili -Z4-CH2-CH2- uz Z4 je O ili NR11 pri čemu je R11 C1-6alkil; i pri čemu svaki dvovalentni radikal može biti supstituiran s C1-6alkilom; ili
R3 i R4 mogu se uzeti zajedno i oblikovati dvovalentni radikal formule -CH2-CH2-CH2-CH2-;
R5 predstavlja vodik;
Y predstavlja O; i
aril predstavlja fenil moguće supstituiran s halo.
Daljnja zanimljiva skupina spojeva uključuje one spojeve formule (I-A)* i (I-B)* u kojima je skupina R1-C(=X) vezana na kinolinsku ili kinolinonsku skupinu u poziciji 6.
Naročito zanimljivi su sljedeći radioaktivni spojevi:
[image]
Svi spojevi prema izumu pokazuju blagu do snažnu aktivnost prema mGluR1. Takva aktivnost se među ostalim pripisuje specifičnom vezanju spomenutog spoja na mGlu1 receptor, što spojeve čini korisnima u dijagnostičkom postupku, npr. za označavanje i otkrivanje mGlu1 receptorskih mjesta. Izum se stoga također odnosi na radioaktivno označeni spoj prema izumu za uporabu u dijagnostičkom postupku.
Prvo povoljno ostvarenje (radionuklid koji emitira gamazračenje)
Prema prvom povoljnom ostvarenju, radioaktivno označeni spoj uključuje barem jedan [3H]-atom ili jedan [125I]-atom. [3H]-atom se prikladno uvodi djelomičnom ili potpunom supstitucijom jednog ili više neradioaktivnih [1H]-vodikovih atoma u molekuli pomoću njihovih radioaktivnih izotopa. Odluka o tome da li će se upotrijebiti radioaktivni ligand [3H] ili [125I] može dijelom ovisiti o dostupnosti tekućinskih scintilacijskih brojača (LSC), koji su prilično skupi. Količina liganda [125I] može se odrediti ili pomoću γ-brojača ili LSC, dok ligandi [3H] zahtijevaju korištenje LSC. Povoljno je da se u tehnikama vezanja radioaktivnog liganda upotrijebi radioaktivno označeni spoj koji uključuje barem jedan [3H]-atom ili jedan [125I],-atom, posebno u ispitivanjima membranskog receptora in vitro za označavanje ili prepoznavanje mGlu1 receptora u biološkom materijalu.
Također je povoljno da se u in vivo autoradiografiji mGlu1 receptora mozga upotrijebe radioaktivno označeni spojevi koji uključuju barem jedan [3H]-atom ili jedan [125I]-atom budući da spojevi prema izumu imaju povoljnu i neočekivanu sposobnost da lagano prijeđu krvno-moždanu barijeru.
Izum se stoga također odnosi na radioaktivno označeni spoj prema izumu upotrijebljen u dijagnostičkom postupku koji se sastoji od označavanja ili prepoznavanja mGlu1 receptora u biološkom materijalu, kao i uporabe spojeva prema izumu za proizvodnju dijagnostičkog alata za označavanje ili prepoznavanje mGlu1 receptora u biološkom materijalu, bilo in vivo ili in vitro.
U okviru ove prijave, pod pojmom "biološki materijal" uključen je bilo koji materijal koji je biološkog porijekla. Posebno, ovo se odnosi na uzorke tkiva, plazmatske fluide, tjelesne fluide, dijelove tijela i organa koji potječu od toplokrvnih životinja i toplokrvnih životinja per se, naročito ljudi.
Temeljni eksperimenti koji su izvedeni primjenom sistema ispitivanja membrane za označavanje ili prepoznavanje mGlu1 receptora u biološkom materijalu su: eksperimenti zasićenja, eksperimenti inhibicije, kinetički eksperimenti asocijacije i kinetički eksperimenti disocijacije. Ovi postupci primjenjivi su na većinu neuroprijenosničkih i hormonskih receptorskih sistema, uključujući mGluR1-sistem (Methods for Neurotransmitter Receptor Analysis, izd. Henry I. Yamamura et al., Raven Press Ltd., New York, 1990). S tim ciljem, radioaktivno označeni spoj daje se biološkom materijalu kako bi se označili mGlu1 receptori, a otkrivaju se zračenja iz radioaktivno označenih spojeva kako bi se odredila količina ili lokacija mGlu1 receptora, primjerice za ex vivo receptorsku autoradiografiju.
Radioaktivno označeni spojevi prema izumu koji uključuju barem jedan [3H]-atom ili jedan [125I]-atom također su korisni kao sredstva za screening da li testni spoj ima sposobnost zauzeti ili vezati se na mGlu1 receptorsko mjesto. Stupanj do kojeg će testni spoj premjestiti spoj prema izumu iz mGlu1 receptorskog mjesta pokazat će sposobnost testnog spoja da zauzme ili se veže na mGlu1 receptor i tako djeluje ili kao agonist, antagonist ili miješani agonist/antagonist mGlu1 receptora.
Povoljno je da se radioaktivno označeni spojevi prema izumu koji uključuju barem jedan [3H]-atom ili jedan [125I]-atom priprave supstitucijom halogenog atoma s tricijevim atomom, kako je zabilježeno u eksperimentalnom odjeljku ispod.
Drugo povoljno ostvarenje (radionuklid koji emitira pozitrone)
U drugom povoljnom ostvarenju, radioaktivno označeni spoj obuhvaća barem jedan radioaktivni ugljikov ili halogeni atom. U biti, bilo koji spoj prema formuli (I) koji sadrži ugljikov ili halogeni atom sklon je radioaktivnom označavanju zamjenom ugljikova ili halogenog atoma s odgovarajućim radioaktivnim izotopom ili pripravljanjem spojeva prema formuli (I) pomoću radioaktivno označenih reagensa. Prikladni halogeni radioizotopi za tu svrhu su radioaktivni ugljik, npr. [11C]; radioaktivni jodidi, npr. [122I], [123I], [131I]; radioaktivni bromidi, npr. [75Br], [76Br], [77Br] i [82Br]; i radioaktivni fluoridi, npr. [18F]. Povoljni radioaktivno označeni spojevi su oni spojevi formule (I-A)* i (I-B)*, u kojima R1 obuhvaća radioaktivni ugljikov ili halo atom, naročito [11C], [18F], [123I], [75Br], [76Br] ili [77Br].
Pripravljanje radioaktivnih spojeva
Uvođenje radioaktivnog halogenog atoma može se izvesti odgovarajućom reakcijom kao što je prikazana ispod
[image]
u kojoj su svi supstituenti formule (I-A-a) i (I-A-a)* definirani kao u formuli (I-A)* i halo je halogeni atom. Odgovarajući spoj (I-A-a) reagira s H[18F] tako da se halogeni atom prisutan na kinolinskom prstenu reakcijom nukleofilnog premještanja zamijeni s radioaktivnim atomom [18F].
Za dobivanje radioaktivno označenih spojeva prema formuli (I-B)*, radioaktivno označavanje može se izvesti na ekvivalentan način, primjerice slijedeći reakcijsku shemu prikazanu ispod. Očito je da se također i spojevi prema formuli (I-A)* mogu dobiti na ekvivalentan način, tj. na način označavanja R1 supstituenta.
[image]
Ostali postupci za označavanje tricijem izneseni su u npr. Peng et al. Fusion Technology, American Nuclear Society, 21(2): 307-311, 1992 i u Brundish et al. Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals 25(12): 1361-1369 (1988).
Uvođenje radioaktivnog [11C] može se izvesti primjenom reakcijske sheme ispod u kojoj se odgovarajući spoj (I-A-a) najprije staniliran (eng. stanyllated) nakon čega se uvodi radioaktivni [11C] primjenom npr. reakcije "Stille-tipa" vezanja kataliziranog paladijem pomoću [11C] metiljodida (Scott, W. J.; Crisp, G. T.; Stille, J.K. J. Am. Chem. Soc., 1984, 106, 4630).
[image]
U formuli (I-A-a), (I-A-b) i (I-A-c)*, svi supstituenti imaju isto značenje kako je definirano u formuli (I-A)*, halo je halogeni atom i R17 je metil ili butil.
Zbog njihovog neočekivanog svojstva da lagano prodru krvno-moždanu barijeru, radioaktivno označeni spojevi koji uključuju radioaktivni halogeni atom povoljno se daju in vivo, u odgovarajućem pripravku životinji, posebno toplokrvnoj životinji, a lokacija spomenutih radioaktivno označenih spojeva otkrivena je tehnikama predočavanja, kao što je, na primjer, kompjuterizirana tomografija emisijom jednog fotona (SPECT) ili pozitron emisijska tomografija (PET) i slično. Na taj način se može otkriti raspodjela mGlu1 receptorskih mjesta u tijelu i organi koji sadrže mGlu1 receptorska mjesta kao što je, primjerice, mozak, mogu se vizualizirati gore spomenutim tehnikama predočavanja. Ovaj proces predočavanja organa davanjem radioaktivno označenog spoja formule (I-A)* ili (I-A)*, koji se vežu na mGlu1 receptorska mjesta i otkrivanje emisija iz radioaktivnog spoja također čini aspekt predloženog izuma.
Primjena spojeva formule (I-A)* i (I-B)* u gore opisanim tehnikama čini daljnji aspekt predloženog izuma. Izum se posebno odnosi na uporabu spojeva prema izumu za proizvodnju dijagnostičkog alata za primjenu u PET. Za primjenu u PET, najpovoljniji su radioaktivno označeni spojevi prema izumu, u koje je uključen 18F (US 4,931,270, Horn et al., objavljeno 5. lipnja , 1990).
Pripravljanje neradioaktivnih spojeva
Neradioaktivni spojevi prema izumu mogu se proizvesti na brojne načine.
Kako bi se pojednostavilo strukturalno predstavljanje nekih od predloženih spojeva i intermedijara u sljedećim procedurama pripravljanja kinolinska ili kinolinonska skupina će se od sada pa nadalje prikazati simbolom Q.
[image]
Spojevi formule (I-A) ili (I-B), u kojima X predstavlja O, spomenuti spojevi prikazani su formulom (Ia/b-a), mogu se pripraviti oksidacijom intermedijara formule (II) u prisutnosti odgovarajućeg oksidacijskog sredstva, kao što je kalijev permanganat, i odgovarajućeg katalizatora za prijenos faza, kao što je tris(dioksa-3,6-heptil)amin, u odgovarajućem reakcijski inertnom otapalu, kao što je primjerice diklorometan.
[image]
Spojevi formule (Ia/b-a) također se mogu pripraviti reakcijom intermedijara formule (III) s intermedijarom formule (IV), u kojem W1 predstavlja halo atom, npr. bromo, u prisutnosti bultillitija i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je primjerice tetrahidrofuran.
[image]
Alternativno, spojevi formule (IA/B-a) također se mogu pripraviti reakcijom intermedijara formule (V) s intermedijarom formule (IV) u prisutnosti butillitija i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je primjerice tetrahidrofuran.
[image]
Spojevi formule (Ia/b-a), u kojima je R1 supstituent vezan na karbonilnu skupinu preko kisikova atoma, spomenuti R1 supstituent predstavljen je s O-R1a i spomenuti spojevi formulom (IA/B-a-1), može se pripraviti reakcijom intermedijara formule (VI) s intermedijarom formule (VII) u prisutnosti odgovarajuće kiseline, kao što je sulfatna kiselina.
[image]
Spojevi formule (I-A), u kojima R2 predstavlja metilkarbonil, spomenuti spojevi prikazani su formulom (I-A-1), mogu se pripraviti reakcijom intermedijara formule (VIII) u prisutnosti odgovarajuće kiseline, kao što je klorovodična kiselina, i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je primjerice tetrahidrofuran.
[image]
Spojevi formule (I) također se mogu pretvoriti jedan u drugi slijedeći u struci poznate transformacije.
Spojevi formule (I-A) u kojima je R2 halo atom, kao što je kloro, mogu se pretvoriti u spoj formule (I-A), u kojem je R2 drugi halo atom, kao što je fluoro ili jodo, reakcijom s odgovarajućim halogenacijskim sredstvom, kao što je primjerice kalijev fluorid ili natrijev jodid, u prisutnosti odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, npr. dimetil-sulfoksida ili acetonitrila i moguće u prisutnosti acetil-klorida.
Spojevi formule (I-A), u kojima je R2 odgovarajuća izlazna skupina, kao što je halo atom, npr. kloro, jodo, spomenuta izlazna skupina prikazana je s W2 i spomenuti spojevi s (I-A-2), mogu se pretvoriti u spoj formule (I-A) u kojem je R2 cijano, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-A-3), reakcijom s odgovarajućim sredstvom za uvođenje cijano, kao što je primjerice trimetilsilankarbonitril, u prisutnosti odgovarajuće baze kao što je N,N-dietiletanamin i odgovarajućeg katalizatora, kao što je primjerice tetrakis (trifenilfosfin)paladij.
Spojevi formule (I-A-2) također se mogu pretvoriti u spoj formule (I-A-4) reakcijom s C2-6alkiniltri (C1-6alkil) silanom u prisutnosti CuI, odgovarajuće baze, kao što je primjerice N,N-dietiletanamin, i odgovarajućeg katalizatora, kao što je na primjer tetrakis(trifenilfosfin)paladij. Spojevi formule (I-A-4) mogu se zauzvrat pretvoriti u spoj formule (I-A-5) reakcijom s kalijevim fluoridom u prisutnosti odgovarajuće kiseline kao što je octena kiselina, ili reakcijom s odgovarajućom bazom, kao što je kalijev hidroksid, u prisutnosti odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je alkohol, npr. metanol i slično.
Spojevi formule (I-A-2) također se mogu pretvoriti u spoj formule (I-A-6) reakcijom s intermedijarom formule (IX) u prisutnosti Cul, odgovarajuće baze, kao što je primjerice N,N-dietiletanamin, i odgovarajućeg katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladij.
Spojevi formule (I-A-2) također se mogu pretvoriti u spoj u kojem je R2 C1-6alkil, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-A-8) u prisutnosti odgovarajućeg alkilacijskog sredstva, kao što je primjerice Sn(C1-6alkil)4, ili u spoj u kojem je R2 C2-6alkenil, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-A-9) u prisutnosti odgovarajućeg alkilacijskog sredstva, kao što je na primjer Sn(C1-6alkenil)(C1-6alkil)3, obje reakcije u prisutnosti odgovarajućeg katalizatora, kao što je na primjer tetrakis(trifenilfosfin)paladij i reakcijski inertnog otapala, kao što je na primjer toluen ili dioksan.
Spojevi formule (I-A-2) također se mogu pretvoriti u spoj formule (I-A-7) u kojem Z predstavlja O ili S, reakcijom s intermedijarom formule (X) moguće u prisutnosti odgovarajuće baze kao što je dikalijev karbonat i reakcijski inertnog otapala, kao što je N,N-dimetil formamid.
Spojevi formule (I-A-2) također se mogu pretvoriti u spoj formule (I-A), u kojem je R2 C1-6alkiloksikarbonil, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-A-10) i spoj formule (I-A), ,u kojem je R2 vodik, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-A-11), reakcijom s odgovarajućim alkoholom formule C1-6alkilOH i CO u prisutnosti odgovarajućeg katalizatora, kao što je na primjer paladij(II)acetat, trifenilfosfin, odgovarajuće baze kao što je dikalijev karbonat i reakcijski inertnog otapala, kao što je N,N-dimetilformamid.
Spojevi formule (I-A-11) također se mogu pripraviti reakcijom spoja formule (I-A-2) s Zn u prisutnosti odgovarajuće kiseline kao što je octena kiselina.
Spojevi formule (I-A-2) također se mogu pretvoriti u spoj formule (I-A), u kojem je R2 aminokarbonil supstituiran s C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkilom, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-A-12), reakcijom s intermedijarom formule H2N-C1-6alkil-C(=O)-O-C1-6alkil u prisutnosti CO, odgovarajućeg katalizatora kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladij, odgovarajuće baze, kao što je primjerice N,N-dietiletanamin, i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je na primjer toluen.
[image]
Spojevi formule (I-A-2) također se mogu pretvoriti u spoj formule (I-A) u kojem je R2 aril ili heterocikl izabran iz skupine opisane u definiciji R2 ovdje iznad, spomenuti R2 prikazan je s R2a i spomenuti spoj formulom (I-A-13) reakcijom s intermedijarom formule (XI), (XII) ili (XIII) u prisutnosti odgovarajućeg katalizatora kao što je primjerice tetrakis(trifenilfosfin)paladij i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je na primjer dioksan.
[image]
Spojevi formule (I-A-2) također se mogu pretvoriti u spoj formule (I-B), u kojem su Y i R5 uzeti zajedno i oblikuju radikal formule (b-1) ili (b-2), spomenuti spoj prikazan je formulom (I-B-1) ili (I-B-2), reakcijom s hidrazinkarboksaldehidom ili natrijevim azidom u odgovarajućem reakcijski inertnom otapalu, kao što je alkohol, npr. butanol, ili N,N-dimetilformamid.
[image]
Spojevi formule (I-A-11) mogu se pretvoriti u odgovarajući N-oksid, prikazan formulom (I-A-14), reakcijom s odgovarajućim peroksidom, kao što je 3-kloro-benzenkarboperoksi kiselina, u odgovarajućem reakcijski inertnom otapalu, kao što je primjerice metilen-klorid. Spomenuti spoj formule (I-A-14) može se dalje pretvoriti u spoj formule (I-B), u kojem je R5 vodik, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-B-3), reakcijom s 4-metil-benzen sulfonil-kloridom u prisutnosti odgovarajuće baze, kao što je primjerice dikalijev karbonat i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je na primjer metilen-klorid.
[image]
Spojevi formule (I-B-3) također se mogu pripraviti iz spoja formule (I-A), u kojem je R2 C1-6alkiloksi, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-A-15), reakcijom s odgovarajućom kiselinom, kao što je klorovodična kiselina, u prisutnosti odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je primjerice tetrahidrofuran.
[image]
(I-A-15) (I-B-3)
Spojevi formule (I-B-3) mogu se pretvoriti u spoj formule (I-B), u kojem R5 predstavlja C1-6alkil, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-B-4), reakcijom s odgovarajućim alkilacijskim sredstvom, kao što je primjerice intermedijar formule (XIV), u kojem W3 predstavlja prikladnu izlaznu skupinu kao što je halo atom npr. jodo, u prisutnosti kalijeva tert. butoksida i u prisutnosti odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je primjerice tetrahidrofuran.
[image]
Spojevi formule (I-B-3) također se mogu pretvoriti u spoj formule (I-B), u kojem je R5 C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkil ili arilC1-6alkil, spomenuti R5 predstavljen je s R5a i spomenuti spoj prikazan je formulom (I-B-5), reakcijom s intermedijarom formule (XV), u kojem W4 predstavlja odgovarajuću izlaznu skupinu, kao što je halo atom, npr. bromo, kloro i slično, u prisutnosti odgovarajuće baze, kao što je primjerice natrijev hidrid i prikladnog reakcijski inertnog otapala, kao što je na primjer N,N-dimetilformamid.
[image]
(I-A-15)
Spojevi formule (I-A-2) također se mogu pretvoriti u spoj formule (I-B), u kojem je R5 vodik i Y je S, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-B-6), reakcijom s H2N-C(=S)-NH2 u prisutnosti odgovarajuće baze, kao što je kalijev hidroksid, i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je alkohol, primjerice etanol, ili voda. Spojevi formule (I-B-6) mogu se dalje pretvoriti u spoj formule (I-A), u kojem je R2 C1-6alkil tio, spomenuti spoj prikazan je formulom (I-A-16), reakcijom s odgovarajućim C1-6alkilhalidom, kao što je primjerice C1-6alkil jodid, u prisutnosti odgovarajuće baze, kao što je dikalijev karbonat, i odgovarajućeg otapala, kao što je na primjer aceton.
[image]
Spojevi formule (IA/B-a) mogu se pretvoriti u spojeve formule (I-A) ili (I-B), u kojima je X N-R7, spomenuti spoj prikazan je formulom (IA/B-b), reakcijom s intermedijarom formule (XVI), moguće u prisutnosti odgovarajuće baze, kao što je primjerice N,N-dietiletanamin, i u prisutnosti odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je alkohol, npr. etanol.
[image]
Kao što je već naznačeno u proceduri pripravljanja spojeva formule (I-A-13) opisanoj iznad, spojevi formule (I) također se mogu pretvoriti u odgovarajuće N-oksidne oblike slijedeći u struci poznate procedure pretvaranja trovalentnog dušika u njegov N-oksidni oblik. Spomenuta reakcija N-oksidacije može se općenito izvesti reakcijom početnog materijala formule (I) s odgovarajućim organskim ili anorganskim peroksidom. Prikladni anorganski peroksidi uključuju, primjerice, vodikov peroksid, perokside alkalijskih i zemnoalkalijskih metala, npr. natrijev peroksid, kalijev peroksid; odgovarajući organski peroksidi mogu uključivati peroksi kiseline kao što je, primjerice, benzenkarboperoksi kiselina ili halo supstituirana benzenkarboperoksi kiselina, npr. 3-klorobenzenkarboperoksi kiselina, peroksoalkan kiseline, npr. peroksooctenu kiselinu, alkilhidroperokside, npr. tert-butilhidroperoksid. Prikladna otapala su, na primjer, voda, niži alkanoli, npr. etanol i slično, ugljikovodici, npr. toluen, ketoni, npr. 2-butanon, halogenirani ugljikovodici, npr. diklorometan, i smjese takvih otapala.
Neki od intermedijara i početnih materijala upotrijebljeni u gornjim reakcijskim procedurama su tržišno dostupni, ili se mogu sintetizirati prema procedurama koje su već opisane u literaturi.
Intermedijari formule (II) mogu se pripraviti reakcijom intermedijara formule (XVII) s intermedijarom formule (XVIII), u kojem W5 predstavlja odgovarajuću izlaznu skupinu kao što je halo atom, npr. kloro, bromo i slično, u prisutnosti magnezija, dietiletera i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je dietileter.
[image]
Intermedijari formule (XVII) mogu se pripraviti oksidacijom intermedijara formule (XIX) u prisutnosti odgovarajućeg oksidacijskog sredstva, kao što je MnO2, i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je metilen-klorid.
[image]
Intermedijari formule (XIX) mogu se pripraviti redukcijom intermedijara formule (XX) u prisutnosti odgovarajućeg redukcijskog sredstva kao što je litij aluminij hidrid, i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je tetrahidrofuran.
[image]
Intermedijari formule (XX), u kojima Q predstavlja kinolinsku skupinu moguće supstituiranu na poziciji 3 s C1-6alkilom i u kojima se karbonilna skupina nalazi na poziciji 6, spomenuti intermedijari prikazani su formulom (XX-a), mogu se pripraviti reakcijom intermedijara formule (XXI) s intermedijarom formule (XXII) u prisutnosti 3-nitro-benzen sulfonata, odgovarajuće kiseline, kao što je sulfatna kiselina, i odgovarajućeg alkohola, npr. metanola, etanola, propanola, butanola i slično.
[image]
Alternativno, intermedijari formule (II) također se mogu pripraviti reakcijom intermedijara formule (XXIII) s intermedijarom formule (XXIV), u kojem je W6 odgovarajuća izlazna skupina, kao što je halo atom, npr. bromo, kloro i slično, u prisutnosti odgovarajućeg sredstva kao što je butillitij i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je tetrahidrofuran.
[image]
Intermedijari formule (XXIII) mogu se pripraviti oksidacijom intermedijara formule (XXV) primjenom Moffatt Pfitzner ili Swern oksidacije (dimetilsulfoksid adukti s dehidracijskim sredstvima npr. DCC, Ac2O, SO3, P4O10, COCl2 ili Cl-CO-COCI) u inertnom otapalu kao što je metilen-klorid.
[image]
Intermedijari formule (XXV) mogu se pripraviti redukcijom intermedijara formule (XXVI) u prisutnosti odgovarajućeg redukcijskog sredstva, kao što je primjerice litij aluminij hidrid i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je benzen.
[image]
Intermedijari formule (XXVI) mogu se pripraviti iz intermedijara formule (XXVII) esterifikacijom u prisutnosti odgovarajućeg alkohola, kao što je metanol, etanol, propanol, butanol i slično, i odgovarajuće kiseline, kao što je sulfatna kiselina.
[image]
Intermedijari formule (XXVII), u kojima R1 predstavlja radikal formule (a-1) uz Z1 je O, Z2 je CH2 i n je 1, spomenuti intermedijari prikazani su formulom (XXVII-a), mogu se pripraviti redukcijom intermedijara formule (XXVIII) u prisutnosti odgovarajućeg redukcijskog sredstva kao što je vodik, i odgovarajućeg katalizatora, kao što je paladij na drvenom ugljenu, i odgovarajuće kiseline kao što je octena kiselina. Kada R1 iz intermedijara (XXVII) predstavlja moguće supstituiranu fenilnu skupinu, on se također može pretvoriti u moguće supstituiranu cikloheksilnu skupinu redukcijom u prisutnosti odgovarajućeg redukcijskog sredstva kao što je rodij na Al2O3, i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je tetrahidrofuran.
[image]
Intermedijari formule (IV), u kojima Q predstavlja kinolinsku skupinu supstituiranu na poziciji 2 s halo, npr. kloro, spomenuti intermedijari prikazani su formulom (IV-a), mogu se pripraviti reakcijom intermedijara formule (IV), u kojem Q predstavlja kinolinsku skupinu s R5 koji je vodik, spomenuti intermedijar prikazan je formulom (IV-b), u prisutnosti POCl3.
[image]
Intermedijari formule (IV-a), u kojima je R4 vodik, spomenuti intermedijari prikazani su formulom (IV-a-1), također se mogu pripraviti reakcijom intermedijara formule (XXIX) s POCl3 u prisutnosti N,N-dimetilformamida (Vilsmeier-Haack formilacija, zatim ciklizacija).
[image]
Intermedijari formule (XXIX) mogu se pripraviti reakcijom intermedijara formule (XXX) s intermedijarom formule (XXXI), u kojem W-7 predstavlja prikladnu izlaznu skupinu, kao što je halo atom, npr. kloro, u prisutnosti odgovarajuće baze, kao što je primjerice N,N-dietiletanamin, i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je metilen-klorid.
[image]
Intermedijari formule (IV-a) mogu se pretvoriti u intermedijar formule (IV-c) reakcijom s intermedijarom formule (XXXII) u prisutnosti odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je alkohol, npr. metanol i slično.
[image]
Intermedijari formule (IV-a) također se mogu pretvoriti u intermedijar formule (IV-d-1) reakcijom s odgovarajućim aminom formule (XXXIII-a), u kojem Z3 i Z4 svaki nezavisno predstavlja vodik, C1-6alkil, C1-6alkiloksiC1-6alkil, C1-6alkiltioC1-6alkil ili u intermedijar formule (IV-d-2) reakcijom s odgovarajućim aminom formule (XXXIII-b), u kojem su Z3 i Z4 uzeti zajedno kako bi se oblikovao heterocikl kako je definirano ovdje iznad u definiciji R2 uz uvjet da heterocikl obuhvaća barem jedan dušikov atom, u prisutnosti odgovarajuće baze, kao što je primjerice dikalijev karbonat, i reakcijski inertnog otapala, kao što je N,N-dimetilformamid.
[image]
Intermedijari formule (IV-a), u kojima R3 predstavlja CH2-CH2-CH2-Cl, spomenuti intermedijari prikazani su formulom (IV-a-2), također se mogu pretvoriti u intermedijar formule (IV), u kojem su R2 i R3 uzeti zajedno i oblikuju dvovalentni radikal formule -O-CH2-CH2-CH2-, spomenuti intermedijar prikazan je formulom (IV-e-1), reakcijom s odgovarajućom kiselinom, kao što je klorovodična kiselina i slično. Intermedijari formule (IV-a-2) također se mogu pretvoriti u intermedijar formule (IV), u kojem su R2 i R3 uzeti zajedno kako bi se oblikovao dovalentni radikal formule -S-CH2-CH2-CH2-, spomenuti intermedijar prikazan je formulom (IV-e-2), reakcijom s H2N-C(=S)-NH2 u prisutnosti odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je alkohol, npr. etanol.
[image]
Intermedijari formule (V) mogu se pripraviti reakcijom intermedijara formule (XXVII) s intermedijarom formule CH3-NH-O-CH3 u prisutnosti 1,1'-karbonildiimidazola i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je metilen-klorid.
[image]
Intermedijari formule (VII), u kojima Q predstavlja kinolinsku skupinu, posebno kinolinsku skupinu u kojoj je R2 etil, R3 je metil i R4 je vodik, a karbonilna skupina nalazi se na poziciji 6, spomenuti intermedijari prikazani su formulom (Vll-a), mogu se pripraviti reakcijom intermedijara formule (XXXIV) u prisutnosti odgovarajućeg aldehida, kao što je CH3-CH2-CH(=O), (CH2O)n, ZnCl2, FeCl3 i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je alkohol, primjerice etanol.
[image]
Intermedijari formule (VIII) mogu se pripraviti reakcijom intermedijara formule (XXXV) s intermedijarom formule (XXXVI) u prisutnosti odgovarajućeg katalizatora, kao što je primjerice tetrakis(trifenilfosfin)paladij i odgovarajućeg reakcijski inertnog otapala, kao što je na primjer dioksan.
[image]
Mogu se smisliti još neki pripravci, a neki su izneseni dalje u prijavi s primjerima.
Čisti stereoizomerni oblici spojeva i intermedijara iz ovog izuma mogu se dobiti primjenom procedura poznatih u struci. Dijastereomeri se mogu odvojiti postupcima fizičke separacije kao što su selektivna kristalizacija i kromatografske tehnike, npr. tekućinska kromatografija uz uporabu kiralnih stacionarnih faza.
Enantiomeri se mogu međusobno razdvojiti selektivnom kristalizacijom njihovih dijastereomernih soli s optički aktivnim kiselinama. Alternativno, enantiomeri se mogu odvojiti kromatografskim tehnikama uz uporabu kiralnih stacionarnih faza. Spomenuti čisti stereoizomerni oblici mogu se također izvesti iz odgovarajućih čistih stereoizomernih oblika prikladnih početnih materijala, uz uvjet da se reakcija odvija stereoselektivno ili stereospecifično. Povoljno je, ako se želi određeni stereoizomer, da spomenuti spoj bude sintetiziran stereoselektivnim ili stereospecifičnim postupcima pripravljanja. Ti postupci će povoljno iskoristiti kiralno čiste početne tvari. Stereoizomerni oblici spojeva formule (I) očito se podrazumijevaju uključenima unutar dosega izuma.
Stereoizomer spoja formule (I-A) ili (I-B), kao što je cis oblik, može se pretvoriti u drugi stereoizomer kao što je odgovarajući trans oblik putem reakcije spoja s prikladnom kiselinom, kao što je klorovodična kiselina, u prisutnosti prikladnog reakcijski inertnog otapala, kao što je primjerice tetrahidrofuran.
Antagonistička aktivnost prema mGluR1 predloženih spojeva može se pokazati na testu prijenosa signala na klonirani mGluR1 štakora u CHO stanicama i testu boli nastale uslijed boravka na sobnoj temperaturi (koja inače ne izaziva bol) u štakora s Bennettovim vezanjem, kako je opisano ovdje ispod. Zbog njihove antagonističke aktivnosti prema mGluR, posebno njihove antagonističke aktivnosti prema skupini I mGluR i još povoljnije, njihove antagonističke aktivnosti prema mGluR1, spojevi formule (I-A) ili (I-B), njihovi N-oksidi, farmaceutski prihvatljive adicijske soli, kvaterni amini i stereokemijski izomerni oblici korisni su u liječenju ili sprječavanju bolesti središnjeg živčanog sustava potaknμtih glutamatom. Bolesti u kojima je dokazana uloga glutamata uključuju ovisnost ili apstinenciju (ovisnost, podnošljivost opioida, ustezanje opioida), hipoksične, anoksične i ishemične ozljede (ishemični udar, kardijalni arest), bol (neuropatska bol, upalna bol, hiperalgezija), hipoglikemiju, bolesti povezane s oštećenjem neurona, ozljedu mozga, ozljedu glave, ozljedu kralježnične moždine, mijelopatiju, demeniciju, anksioznost, shizofreniju, depresiju, oštećenu spoznajnu funkciju, amneziju, bipolarne poremećaje, poremećaje ponašanja, Alzheimerovu bolest, vaskularnu demenciju, miješanu (Alzheimerovu i vaskularnu) demenciju, bolest Lewyevog tijela, delirij ili konfuziju, Parkinsonovu bolest, Huntingtonovu bolest, Downov sindrom, epilepsiju, starenje, amiotrofičnu lateralnu sklerozu, multiplu sklerozu, AIDS (sindrom stečene imunodeficijencije) i kompleks povezan s AIDS-om (ARC).
Ovaj izum također pruža pripravke za davanje sisavcima, posebno ljudima, osobito za dijagnostičke svrhe, još više za predočavanje organa koji obuhvaćaju terapeutski djelotvornu količinu radioaktivno označenog spoja formule (I-A)* ili (I-B)* i farmaceutski prihvatljivi prijenosnik ili razrjeđivač.
Spojevi iz predloženog izuma ili bilo koja njihova podskupina mogu se formulirati u različite farmaceutske oblike za davanje. Kao prikladni pripravci mogu se navesti svi pripravci koji se obično koriste za sistemsko davanje lijekova. Za pripravljanje farmaceutskih pripravaka iz ovog izuma, djelotvorna količina određenog spoja, u obliku u bazičnom ili obliku adicijske soli, kao aktivni sastojak kombinira se temeljito pomiješana s farmaceutski prihvatljivim prijenosnikom, koji prijenosnik može poprimiti široki raspon oblika ovisno o obliku željenog pripravka za davanje. Ti farmaceutski pripravci poželjni su u jediničnom obliku doze prikladnom, posebno, za oralno davanje, rektalno, perkutano, ili parenteralnom injekcijom. Primjerice, prilikom pripravljanja pripravaka za oralni oblik doziranja, može se upotrijebiti bilo koje od uobičajenih farmaceutskih sredstava kao što je primjerice, voda, glikoli, ulja, alkoholi i slično u slučaju oralnih tekućih pripravaka kao što su suspenzije, sirupi, eliksiri, emulzije i otopine; ili kruti prijenosnici kao što su škrobovi, šećeri, kaolin, razrjeđivači, lubrikanti, veziva, sredstva za razgradnju i slično u slučaju prašaka, pilula, kapsula, i tableta. Zbog njihove jednostavnosti davanja, tablete i kapsule predstavljaju najpovoljnije oblike za oralno jedinično davanje, u kojem se slučaju očito koriste kruti farmaceutski prijenosnici. Za parenteralne pripravke, prijenosnik će obično uključiti sterilnu vodu, barem u velikoj mjeri, iako se mogu uključiti ostali sastojci, primjerice, za pospješenje topljivosti. Na primjer, mogu se pripraviti injekcijske otopine u kojima prijenosnik obuhvaća slanu otopinu, otopinu glukoze ili smjesu slane otopine i otopine glukoze. Također se mogu pripraviti injekcijske suspenzije, u kojem slučaju se mogu upotrijebiti odgovarajući tekući prijenosnici, suspenzijska sredstva i slično. Također su uključeni kruti oblici pripravaka, a namjera je da se neposredno prije uporabe pretvore u tekuće oblike pripravaka. Kao prikladni pripravci za površinsku primjenu mogu se navesti svi pripravci koji se uobičajeno koriste za površinsko davanje lijekova npr. kreme, gelovi, dresinzi, šamponi, tinkture, paste, masti, pomasti, prašci i slično. U pripravcima prikladnim za perkutano davanje, prijenosnik može uključivati sredstvo za poboljšanje prodiranja i/ili odgovarajuće sredstvo za vlaženje, moguće u kombinaciji s odgovarajućim dodacima bilo koje prirode u manjim omjerima, koji dodaci ne dovode do značajnog štetnog učinka na koži. Spomenuti dodaci mogu olakšati davanje na kožu i/ili mogu biti korisni za pripravljanje željenih pripravaka. Ti pripravci mogu se davati na razne načine, npr. transdermalnim flasterom, kao spot-on, kao mast.
Naročito je povoljno formulirati gore spomenute farmaceutske pripravke u jediničnom obliku doziranja zbog jednostavnosti davanja i jednoličnosti doziranja.
Jedinični oblik doziranja kako se ovdje rabi odnosi se na fizički razdvojene jedinice prikladne kao jedinične doze, od kojih svaka sadrži prethodno određenu količinu aktivnog sastojka, izračunatu kako bi se proizveo željeni terapeutski učinak, zajedno sa potrebnim farmaceutskim prijenosnikom. Primjeri takvih jediničnih oblika doziranja su tablete (uključujući zarezane ili obložene tablete), kapsule, pilule, paketići praška, vafli, supozitoriji, injekcijske otopine ili suspenzije i slično te njihova odijeljene višestruka pakiranja.
Dijagnostički djelotvorna doza ili učestalost davanja ovisi o određenom spoju formule (I-A)* ili (I-B)* koji je upotrijebljen i određenom stanju sisavca kojeg se liječi, kao što je dobro poznato osobama vičnim struci.
Svrha sljedećih primjera je ilustrirati, a ne ograničiti doseg predloženog izuma.
Eksperimentalni dio
Od sada pa nadalje, "DMF" definira je kao N,N-dimetilformamid, "DIPE" kao diizopropileter, "DMSO" definiran je kao dimetilsulfoksid, "BHT" definiran je kao 2,6-bis(1,1-dimetiletil)-4-metilfenol, i "THF" definiran je kao tetrahidrofuran.
A. Pripravljanje intermedijara
Primjer A1
Pripravljanje
[image]
Smjesa 4-(1-metiletoksioksi)benzojeve kiseline (0.083 mol) i Rh/Al2O3 5% (10 g) u THF (220 ml) hidrogenirana je na 50°C (pod tlakom H2 od 3 bara) 1 noć. Smjesa je profiltrirana preko dijatomejske zemlje, isprana s THF i uparena. Donos: 16 g intermedijara 1 (100%).
Primjer A2
Pripravljanje 2-etil-3-metil-6-kinolin karboksilne kiseline (interm. 2)
Smjesa 4-aminobenzojeve kiseline (0.299 mol) u etanolu (250 ml) miješana je na sobnoj temperaturi. Dodani su ZnCl2 (0.0367 mol) i (CH2O)n (10 g). U obrocima je dodan FeCl3.6H2O (0.5 mol) te je temperatura porasla do 60-65°C. Tijekom perioda od 2 sata kap po kap dodavan je propanal (30 ml). Smjesa je refluksirana 2 sata i držana na sobnoj temperaturi 12 sati. Smjesa je izlivena u vodu i profiltrirana preko dijatomejske zemlje. Filtrat je zakiseljen do pH=7 s 6N HCl i smjesa uparena do suhog. Ostatak je upotrijebljen bez daljnjeg pročišćavanja.
Donos: 56.1 g 2-etil-3-metil-6-kinolinkarboksilne kiseline (interm. 2).
Primjer A3
Pripravljanje
[image]
Pentanoil-klorid (0.2784 mol) dodan je na 5°C smjesi 4-bromobenzenamina (0.232 mol) i N,N-dietiletanamina (0.2784 mol) u CH2Cl2 (4 00 ml). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi preko noći, izlivena u vodu i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, ispran s koncentriranom otopinom NH4OH i vodom, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (60 g) je kristalizirao iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Ostatak (35 g, 63%) je umiješan u CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, ispran s 10% otopinom K2CO3, ispran s vodom, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Donos: 30 g intermedijara (3) (54%).
Primjer A4
Pripravljanje
[image]
Smjesa 6-bromo-2(IH)-kinolinona (0.08 9 mol) u POCl3 (55 ml) miješana je na 60°C preko noći, zatim na 100°C 3 sata i otapalo upareno. Ostatak je umiješan u CH2Cl2, izliven u ledenu vodu, zalužen s konc. NH4OH, profiltriran preko dijatomejske zemlje i ekstrahiran s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Donos: 14.5 g intermedijara (4) (67%).
Primjer A5
a) Pripravljanje
[image]
DMF (37 ml) dodan je kap po kap na 10°C u struji N2 u POCl3 (108 ml). Nakon prestanka dodavanja, smjesa je ostavljena da se zagrije do sobne temperature. U obrocima je dodan N-(4-bromofenil) butanamid (0.33 mol). Smjesa je miješana na 85°C preko noći, zatim je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i izlivena na led (egzotermna reakcija). Talog je odfiltriran, ispran s malom količinom vode i isušen (vakuum). Ostatak je ispran s EtOAc/dietileterom i isušen. Donos: 44.2 g intermedijara (5) (50%).
b) Pripravljanje
[image]
Smjesa intermedijara (5) (0.162 mol) u metanolu (600 ml), i otopina natrijeve soli metanola u metanolu na 35% (154 ml) miješana je i refluksirana preko noći. Smjesa je izlivena na led. Talog je odfiltriran, ispran s malom količinom vode i umiješan u CH2Cl2. Dodan je 10% K2CO3 te je smjesa ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, ispran s vodom, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Donos: 31.9 g intermedijara (6) (74%).
Primjer A6
Pripravljanje
[image]
1,1'-Karbonilbis-1H-imidazol (0.074 mol) u obrocima je dodan smjesi 4-metoksicikloheksankarboksilne kiseline (0.063 mol) u CH2Cl2 (200 ml). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim je dodan N-metoksimetanamin (0.074 mol). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi preko noći, izlivena u H2O i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, nekoliko puta ispran s H2O, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Donos: 12.6 g interm. 7.
Primjer A7
a) Smjesa 6-fluoro-4-okso-4H-1-benzopiran-2-karboksilne kiseline (0.30 mol) u octenoj kiselini (400 ml) hidrogenirana je s Pd/C (3 g) kao katalizatorom. Nakon prihvaćanja H2 (3 ekviv), katalizator je odfiltriran. Filtrat je uparen. Ostatak je miješan u petrol eteru. Talog je odfiltriran i isušen (vakum; 70°C). Nakon rekristalizacije iz CHCl3/CH3OH, talog je odfiltriran i isušen (vakum; 80°C i visoki vakuum; 85°C). Donos: 8.8 g 6-fluoro-3,4-dihidro-2H-1-benzopiran-2-karboksilne kiseline (interm. 8) (15.0%).
b) Smjesa intermedijara (8) (0.255 mol) u etanolu (400 ml) i H2SO4 (5 ml) miješana je i refluksirana 8 sati. Otapalo je upareno do suhog. Ostatak je otopljen u CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, ispran s 10% K2CO3, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Donos: 45 g etil 6-fluoro-3,4-dihidro-2H-1-benzopiran-2-karboksilata (interm. 9) (79%).
c) Reakcija pod N2. Smjesa natrijeva bis(2-metoksietoksi) aluminijeva hidrida, 70 tež. % otopine u metilbenzenu 3.4M (0.44 mol) u benzenu (150 ml) (refluks) dodavana je kap po kap tijekom 1 sata refluksiranoj smjesi interm. 9 (0.22 mol) i benzena (600 ml). Nakon 2.5 sata miješanja na temperaturi refluksa, smjesa je ohlađena na 15°C. Smjesa je razgrađena dodavanjem kap po kap etanola (30 ml) i vode (10 ml). Ova smjesa izlivena je na led/vodu te je ta smjesa zakiseljena s koncentriranom klorovodičnom kiselinom. Ta je smjesa ekstrahirana s dietil-eterom (500 ml). Odvojeni organski sloj je ispran s vodom, isušen, profiltriran i otapalo upareno. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CHCl3). Željena frakcija je skupljena i otapalo upareno. Donos: 34 g 6-fluoro-3,4-dihidro-2H-1-benzopiran-2-metanola (interm. 10) (85%).
d) Reakcija pod N2. U miješanu i ohlađenu (-60°C; 2-propanon/CO2 kupelj) smjesu etandioil diklorida (0.1 mol) u CH2Cl2 (350 ml) tijekom 10 minuta dodavan je sulfinilbis[metan] (30 ml). Nakon 10 minuta miješanja, tijekom 5 minuta dodavana je smjesa interm. 10 u CH2Cl2 (90 ml). Nakon 15 minuta miješanja, dodan je N,N-dietiletanamin (125 ml). Kada se smjesa zagrijala do sobne temperature, izlivena je u vodu. Produkt je ekstrahiran s CH2Cl2. Organski sloj je ispran s vodom, HCl (1M), vodom, NaHCO3 (10%) i vodom, isušen i uparen. Ostatak je otopljen u dietileteru, ispran s vodom, isušen, profiltriran i uparen. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CHCl3). Željena frakcija je skupljena i otapalo upareno. Donos: 21.6 g 6-fluoro-3,4-dihidro-2H-1-benzopiran-2-karboksaldehida (interm. 11) (67%).
e) Pripravljanje
[image]
nButillitij 1.6 M (0.056 mol) polagano je dodan na -70°C otopini intermedijara (5) (0.046 mol) u THF (100 ml). Smjesa je miješana na -70°C 30 minuta. Polagano je dodana suspenzija interm. 11 (0.056 mol) u THF (100 ml). Smjesa je miješana na -70°C 1 sat, zatim dovedena do sobne temperature, izlivena u H2O i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (21 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 80/10; 15-35um). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 9.5 g interm. 12 (55%).
Primjer A8
a) Pripravljanje
[image]
Smjesa intermedijara (5) (0.1127 mol), 2-metoksietanamina (0.2254 mol) i K2CO3 (0.2254 mol) u DMF (500 ml) miješana je na 120°C 15 sati i zatim ohlađena. Otapalo je upareno. Ostatak je prihvaćen u CH2Cl2 i H2O. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno do suhog. Ostatak (33.53 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH 99.5/0.5; 15-40um). Dvije frakcije su skupljene i njihova otapala uparena. Donos: 5.7 g interm. 14 (38%) i interm. 13 (34%).
b) Pripravljanje
[image]
Smjesa intermedijara (5) (0.0751 mol), tiomorfolina (0.0891 mol) i K2CO3 (0.15 mol) u DMF (200 ml) miješana je na 120°C 12 sati. Otapalo je upareno do suhog. Ostatak je prihvaćen u CH2Cl2 i H2O. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (26 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 80/20; 20-45 μm). Dvije frakcije su skupljene i njihova otapala uparena. Dvije frakcije su kombinirane. Donos: 9.4 g interm. 15 (37%); tt. 82°C.
Primjer A9
a) 4-Aminobenzojeva kiselina (0.219 mol) dodana je otopini natrijeva 3-nitrobenzensulfonata (0.118 mol) u H2SO4 70% (230 ml) te je smjesa miješana i refluksirana. Kap po kap dodan je 2-propen-1,1-diol, 2-metil-, acetat (0.216 mol) te je smjesa refluksirana 4 sata. Dodan je etanol (200 ml) i smjesa miješana na 80°C 48 sati. Smjesa je uparena, ostatak je izliven u ledenu vodu/NH4OH i ekstrahiran s CH2Cl2. Organski sloj je isušen (MgSO4) i uparen. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/2-propanol 99/1). Čiste frakcije su skupljene i uparena. Donos: 21 g etil 3-metil-6-kinolinkarboksilata (interm. 16) (45%).
b) Interm. 16 (0.098 mol) u THF(270 ml) dodan je na 0°C otopini LiAlH4 (0.098 mol) u THF pod N2. Po završetku dodavanja, dodana je voda (10 ml). Talog je odfiltriran i ispran s CH2Cl2. Organski sloj je isušen (MgSO4), odfiltriran i uparen. Produkt je upotrijebljen bez daljnjeg pročišćavanja. Donos: 16.71 g 3-metil-6-kinolinmetanola (interm. 17).
c) MnO2 (0.237 mol) dodan je otopini interm. 17 (0.096 mol) u CH2Cl2 (200 ml) te je smjesa miješana na sobnoj temperaturi 12 sati. Smjesa je profiltrirana kroz dijatomejsku zemlju i filtrat ponovo miješan s MnO2 (20 g) 12 sati. Ponovo je dodan MnO2 (10 g). Smjesa je miješana 12 sati. Smjesa je profiltrirana kroz dijatomejsku zemlju i uparena. Produkt je upotrijebljen bez daljnjeg pročišćavanja. Donos: 11.71 g 3-metil-6-kinolinkarboksaldehida (71 %) (interm. 18).
d) Otopina bromocikloheksila (0.14 mol) u 1,1'-oksibisetanu (50 ml) i Mg strugotina (50 ml) dodana je na 10°C smjesi THF (0.14 mol) u 1,1'-oksibisetanu (10 ml). Na 5°C pažljivo je dodana otopina interm. 18 (0.07 mol) u Mg strugotinama (100 ml), smjesa je izlivena u ledenu vodu te ekstrahirana s EtOAc.
Donos: 11.34 g (±)-α-cikloheksil-3-metil-6-kinolinmetanola (63%) (interm. 19).
Primjer A10
Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (5) (0.001507 mol), tributil(1-etoksietenil) stanana (0.00226 mol) i Pd(PPh3)4 (0.000151 mol) u 1,4-dioksanu (5 ml) miješana je na 80°C 3 sata. Dodana je voda. Smjesa je ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ovaj produkt je upotrijebljen bez daljnjeg pročišćavanja. Donos: 1.4 g interm. 20.
Primjer A11
Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (45) (pripravljenog prema B6) (0.00125 mol) u NaOH 3N (5 ml) i iPrOH (1.7 ml) miješana je na sobnoj temperaturi preko noći, zatim izlivena u H2O, zakiseljena s HCl 3N i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo isušeno. Ostatak je umiješan u dietileter. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.26 g intermedijara 21 (56%). (tt.: 232°C)
Primjer A12
a. Pripravljanje
[image]
Smjesa 5-bromo-1H-indol-2,3-diona (0.221 mol) u NaOH 3N (500 ml) miješana je na 80°C 30 minuta, dovedena na sobnu temperaturu te je dodan 2-pentanon (0.221 mol). Smjesa je miješana i refluksirana 1 sat i 30 minuta te zakiseljena s AcOH do pH=5. Talog je profiltriran, ispran s vodom i isušen. Donos: 52.3 g intermedijara 22 i intermedijara 23. (Ukupni donos: 80%).
b. Pripravljanje
[image]
nBuLi 1.6 M (0.0816 mol) dodan je kap po kap na -78°C suspenziji intermedijara 22 (0.034 mol) i intermedijara 23 (0.034 mol) u THF (300 ml) u struji N2. Smjesa je miješana na -78°C 30 minuta. Dodan je kap po kap nBuLi 1.6M (0.0816 mol). Smjesa je miješana 1 sat. Polagano je dodana smjesa intermedijara 9 (0.102 mol) u THF (250 ml). Smjesa je miješana od -78°C do -20°C, izlivena u H2O/HCl 3N i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno do suhog. Donos: 20.89 g spoja intermedijara 24 i intermedijara 25 (86%).
Primjer A13
a. Pripravljanje
[image]
4-amino-3-metoksibenzojeva kiselina (0.054 mol) dodana je u obrocima na sobnoj temperaturi otopini 3-kloro-2-etil-2-butenala (0.065 mol) u AcOH (100 ml). Smjesa je miješana i refluksirana 8 sati te uparena do suhog. Ostatak je umiješan u CH2Cl2, dodana je voda te je otopina zalužena s Et3N. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz 2-propanona. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 2.5 g interm. 26 (18%).
b. Pripravljanje
[image]
CDI (0.012 mol) dodan je na sobnoj temperaturi otopini interm. 26 (0.011 mol) u CH2Cl2 (30 ml). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 1 sat. Dodan je metoksiaminometil (0.012 mol) te je smjesa miješana na sobnoj temperaturi 8 sati. Dodana je H2O. Talog je odfiltriran. Filtrat je ekstrahiran s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.95 g interm. 27 (31%) (tt.: 148°C).
Primjer A14
Pripravljanje
[image]
4-Bromobenzenamin (0.034 mol) dodan je na sobnoj temperaturi otopini 3-klorid-2-etil-2-butanala (0.041 mol) u AcOH (60 ml). Smjesa je miješana i refluksirana 8 sati, dovedena na sobnu temperaturu i uparena do suhog. Produkt je kristalizirao iz EtOAc. Talog je profiltriran, ispran s 10% K2CO3 i umiješan u CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Donos: 4,6 g interm. 28 (54%).
Primjer A15
a. Pripravljanje
[image]
Otopina KOH (0.326 mol) u H2O (150 ml) polagano je dodana na 5°C otopini 1,3-cikloheksandiona (0.268 mol) u H2O (150 ml). Temperatura nije smjela doseći 12°C. U obrocima su dodani KI (2 g) zatim 2-bromo-1-(4-nitrofenil)etanon (0.294 mol). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 48 sati. Talog je profiltriran, ispran s H2O zatim s dietileterom i isušen. Donos: 63 g (85%).
Dio te frakcije (1 g) je kristalizirao iz EtOH. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.5 g interni. 29 (42%) (tt.:100°C).
b. Pripravljanje
[image]
Smjesa interm. 29 (0.145 mol) u H2SO4 (40 ml) miješana je na sobnoj temperaturi 1 sat, izlivena na led, zalužena s NH4OH i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz EtOH. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 31 g (58%). Dio te frakcije (1 g) je kristalizirao iz EtOH. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.7 g interm. 30 (58%) (tt. :200°C).
c. Pripravljanje
[image]
Smjesa interm. 30 (0.039 mol), Raney Ni (10 g) u EtOH (100 ml) hidrogenirana je 1 sat na sobnoj temperaturi pod tlakom od 3 bara. Smjesa je profiltrirana preko dijatomejske zemlje i isprana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (9.5 g) je kristalizirao iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 4.6 g (52%). Filtrat je uparen. Ostatak (2.7 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH; 99/1; 15-40 um). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 1.6g F1 i 1.2g F2. F2 je kristalizirala iz EtOH. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.24 g interm. 31 (2%) (tt.: 202°C).
d. Pripravljanje
[image]
Interm. 30 (0.02 mol) dodan je na sobnoj temperaturi otopini 3-kloro-2-etil-2-butenala (0.04 mol) u AcOH (50 ml). Smjesa je miješana i refluksirana 4 sata. Otapalo je upareno do suhog. Ostatak je kristalizirao iz EtOAc. Talog je odfiltriran i isušen. Ostatak je umiješan u CH2Cl2. Smjesa je zalužena s 10% K2CO3 i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz EtOH. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 2.5 g interm. 32 (40%).
Primjer A16
Pripravljanje
[image]
Smjesa 2-(4-nitrofenil)-1-feniletanona (0.083 mol) i Raney Ni (20 g) u EtOH (200 ml) hidrogenirana je na sobnoj temperaturi 1 sat pod tlakom od 3 bara, zatim je profiltrirana preko dijatomejske zemlje, isprana s CH2Cl2/CH3OH i isušena. Donos: 17.5 g interm. 33 (97%).
Primjer A17
a. Pripravljanje
[image]
DMF (12.4ml) dodan je kap po kap na 5°C u POCl3 (0.7536 mol). Dodan je 4'-bromo-5-klorovaleranilid (0.1032 mol) te je smjesa miješana na 75°C 6 sati, ohlađena na sobnu temperaturu te izlivena na ledenu vodu. Netopljivi dio je profiltriran, ispran s vodom i isušen. Donos: 25.7 g intermedijara 34 (78%).
b. Pripravljanje
[image]
Smjesa intermedijara 34 (0.094 mol) u HCl 6N (250 ml) miješana je i refluksirana 2 dana, ohlađena, izlivena na vodu (100 ml) i neutralizirana s NH4OH (koncentrirana). Netopljivi dio je profiltriran i ispran s vodom zatim s EtOH. Donos: 19 g. Filtrat je uparen. Ostatak (9.4 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH 99.25/0.75; 15-35 um). Jedna frakcija je skupljena i otapalo uparena. Donos: 8 g intermedijara 35 (32%).
B. Pripravljanje neradioaktivnih spojeva
Primjer B1
Pripravljanje
[image]
POCl3 (0.024 mol) dodan je polagano na 5°C u DMF (0.024 mol). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 30 minuta, zatim ohlađena na 5°C. Polagano je dodan etil-ester 3-okso-butan kiseline (0.024 mol). Smjesa je miješana na 5°C 30 minuta. U obrocima je dodan 1-(4-aminofenil)-2-feniletanon (0.024 mol). Smjesa je miješana na 90°C 3 sata i otopljena u CH2Cl2. Dodana je ledena voda. Smjesa je zalužena s NH4OH i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz 2-propanona/dietil-etera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.9 g spoja 306 (11%) (tt.: 136°C).
Primjer B2
Pripravljanje
[image]
KMnO4 (10 g) dodan je u obrocima na sobnoj temperaturi otopini
[image]
(pripravljenog prema primjeru A7.e) (0.022 mol) u tris(dioksa-3,6-heptil)aminu (1 ml) i CH2Cl2 (100 ml). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 8 sati, profiltrirana preko dijatomejske zemlje, isprana s CH2Cl2 i isušena. Ostatak (6 g, 100%) je kristalizirao iz dietiletera/petrol etera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 2 g spoja (2) (33%); tt. 82°C.
Primjer B3
a) Pripravljanje
[image]
nBuLi 1.6M (0.07 mol) polagano je dodan na -7 0°C otopini intermedijara (5) (0.058 mol) u THF (150 ml). Smjesa je miješana na -70°C 30 minuta. Polagano je dodan 2,3-dihidro-1H-inden-2-karbonitril (0.07 mol) u THF (100 ml). Smjesa je miješana na -70°C 1 sat, polagano dovedena do sobne temperature, hidrolizirana s H2O i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (22 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/cikloheksan 80/20 do 100; 15-35 um). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Druga frakcija je kristalizirala iz 2-propanona/dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.11 g spoja (3). Filtrat je koncentriran. Donos: 0.55 g spoja (3); tt. 145°C.
b) Pripravljanje
[image]
nBuLi 1.6M (0.022 mol) polagano je dodan na -70°C otopini intermedijara (5) (0.018 mol) u THF (50 ml). Smjesa je miješana na -70°C 1 sat, dovedena do -40°C, zatim ohlađena do -70°C. Polagano je dodan interm. 7 (0.018 mol) u THF (40 ml). Smjesa je miješana na -70°C 1 sat, zatim dovedena do -20°C, hidrolizirana s H2O i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (6.5 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: toluen/EtOAc 90/10/ 15-40 uM). Dvije frakcije (Fl i F2) su skupljene i otapalo upareno. F1 (2.4 g) je kristalizirala iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 1.8 g spoja (4) (29%); tt. 123°C. F2 (0.9g) je kristalizirao iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.2 g spoja (5) (3%); tt. 120°C.
c) Pripravljanje
[image]
nBuLi 1.6M u heksanu (0.107 mol) dodan je kap po kap na -78°C u struji N2 smjesi intermedijara (6) (0.089 mol) u THF. Smjesa je miješana na -78°C 1 sat. Dodana je smjesa interm. 7 (150 ml) na -78°C u struji N2. Smjesa je miješana na -78°C 2 sata, dovedena do 0°C, izlivena u H2O i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), prof iltriran i otapalo upareno. Ostatak (31 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 85/15; 20-45 um). Dvije čiste frakcije su skupljene i njihova otapala uparena. Donos: 11 g spoja (7) (38%) i 8.2 g spoja (8) (28%).
d) Pripravljanje
[image]
Otopina klorometilbenzena (0.0069 mol) u dietileteru (8 ml) polagano je dodana suspenziji Mg (0.0069 mol) u maloj količini dietiletera. Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 30 minuta (nestanak Mg), zatim je ohlađena do 5°C. Polagano je dodana otopina interm. 27 (0.0027 mol) u THF (8 ml). Smjesa je miješana na 5°C 15 minuta, zatim na sobnoj temperaturi 2 sata, izlivena u H2O i profiltrirana preko dijatomejske zemlje. Talog je ispran s EtOAc. Filtrat je ekstrahiran s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (1 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko kromasila (eluens: CH2Cl2 100 do CH2Cl2/CH3OH 99/1; 15-40 um). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak (0.5 g, 56%) je kristalizirao iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.14 g spoja 503 (15%).
Primjer B4: primjeri modifikacija krajnje skupine
a) Pripravljanje
[image]
Smjesa
[image]
(spoja 8) (pripravljenog prema primjeru B3.c) (0.018 mol) u HCl 3N (60 ml) i THF (60ml) miješana je na 60°C preko noći. Smjesa je zalužena s 10% otopinom K2CO3 i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Donos: 4.6 g spoja (156) (82%).
b) Pripravljanje
[image]
Smjesa
[image]
(spoja 7) (pripravljenog prema primjeru B3.c) (0.0122 mol) u HCl 3N (40 ml) i THF (40 ml) miješana je i refluksirana preko noći, izlivena u vodu, zalužena s 10% K2CO3 i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 40/60; 15-40 um). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 2 g spoja (9) (52%); tt. 226°C.
c) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.0015 mol), 2-metoksietanamina (0.003 mol) i K2CO3 (0.003 mol) u DMF (5 ml) miješana je na 140°C 48 sati. Dodana je H2O. Smjesa je ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (1 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 60/40; 15-40 um). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Obje frakcije su odvojeno kristalizirale iz pentana. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.05 g spoja (10) (9%; tt. 115°C) i 0.057 g spoja (11) (10%; tt. 107°C).
d) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.0015 mol) u 2-(metiltio)etanamina (2 ml) miješana je na 120°C 8 sati. Dodan je 10% K2CO3. Smjesa je ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (2.2 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 70/30; 15-40 um). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Prva frakcija je kristalizirala iz dietiletera/petrol etera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.08 g spoja (12) (14%); tt. 120°C. Druga frakcija je kristalizirala iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.18 g spoja (13)(31%); tt. 125°C.
e) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.001507 mol), etiniltrimetilsilana (0.003013 mol), CuI (0.000151 mol) i Pd(PPh3)4 (0.000151 mol) u Af,iV-dietiletanamina (5 ml) miješana je na 100°C 24 sata. Dodana je voda. Smjesa je profiltrirana preko dijatomejske zemlje, isprana s EtOAc i filtrat ekstrahiran s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (1.3 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 85/15; 15-40 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak (0.3 g) je kristalizirao iz pentana. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.11 g spoja (14) (18%); tt. 114°C.
f) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (14) (0.013 mol) i KF (0.038 mol) u octenoj kiselini (50 ml) miješana je na sobnoj temperaturi 2 sata. Dodana je H20 te je smjesa ekstrahirana s dietileterom. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (4.4 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 70/30; 15-40 um). Jedna frakcija je skupljena i otapalo upareno. Ova frakcija (3 g, 73%) je kristalizirala iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 2.45 g spoja (15) (60%); tt. 132°C.
g) Pripravljanje
[image]
Smjesa
[image]
pripravljenih prema primjeru B.7.a) (0.0056 mol) u KOH [1M, H2O] (10 ml) i metanola (30 ml) miješana je na sobnoj temperaturi 1 sat, izlivena u vodu i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (2.2 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 85/15 do 70/30; 15-40 um). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Prva frakcija kristalizirala je iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.2 g spoja (15)(11%); tt. 133°C. Druga frakcija kristalizirala je iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.3 g spoja (17)(16%); tt. 128°C.
h) Pripravljanje
[image]
cis (spoja 18)
Smjesa spoja (4) (0.001205 mol), 2-propin-1-ola (0.002411 mol), Pd(PPh3)4 (0.000121 mol) i CuI (0.000121 mol) u N,N-dietiletanaminu (5 ml) miješana je na 100°C 2 sata. Dodana je voda. Smjesa je profiltrirana preko dijatomejske zemlje, isprana s EtOAc i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (0.7 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH 98/2; 15-40 um). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz petrol etera i dietil etera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.1 g spoja (18)(23%); tt. 113°C.
i) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.006027 mol) i KF (0.024108 mol) u DMSO (20 ml) miješana je na 140°C. Otapalo je upareno do suhog. Ostatak je očvrsnut u vodi i dietileteru. Smjesa je ekstrahirana s dietileterom. Organski sloj je odvojen, ispran s dietileterom, ispran sa zasićenom otopinom NaCl, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (1.7 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 85/15; 15-40 μm). Tri frakcije su skupljene i njihova otapala uparena. Prva frakcija kristalizirala je iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.21 g spoja (19)(11%); tt. 92°C. Druga frakcija kristalizirala je iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.33 g spoja (20)(17%); tt. 114°C.
j) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.003013 mol), acetil-klorida (0.003315 mol) i natrijeva jodida (0.006027 mol) u CH3CN (10 ml) miješana je i refluksirana 1 sat. Dodan je 10% K2CO3. Smjesa je ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (1 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 80/20; 15-40 μm). Dvije frakcije su skupljene i njihova otapala uparena. Prva frakcija kristalizirala je iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.12 g spoja (21); tt. 110°C.
k) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (21) (0.000898 mol), trimetilsilankarbonitrila (0.001347 mol) i Pd(PPh3)4 (0.00009 mol) u N,N-dietiletanaminu (5 ml) miješana je na 100°C 2 sata. Dodana je voda. Smjesa je ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (0.4 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 80/20; 15-40 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak (0.16 g, 62%) je kristalizirao iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.13 g spoja (22)(45%); tt. 138°C.
[image]
l) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.00603 mol), Pd(OAc)2 (0.000603 mol),'PPh3 (0.00904 mol) i K2CO3 (0.012054 mol) u CO (plin) i metanola (40 ml) miješana je na 90°C 8 sati pod tlakom CO od 5 bara. Dodana je H2O. Smjesa je ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (6 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH 100/0 do 98/2; 15-35 μm). Četiri frakcije (F1-F4) su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.13 g (cis) F1; 0.02 g F2 (cis, spoj 25); 0.055 g F3 (trans, 3%) i 0.11 g F4 (trans; spoj 26). F1 je kristalizirala iz petrol etera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.03 g spoja (23) (1%); tt. 91°C. F3 je kristalizirala iz petrol etera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.035 g spoja (24)(1%); tt. 99°C.
m) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.009 mol) i Zn (0.027 mol) u octenoj kiselini (30 ml) miješana je na 60°C 4 sata, profiltrirana preko dijatomejske zemlje, isprana s CH2Cl2, uparena do suhog, otopljena u CH2Cl2 i isprana s 10% K2CO3. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (4 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 75/25; 15-40 μm). Jedna frakcija je skupljena i otapalo upareno. Ova frakcija (1 g 37%) je kristalizirala iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: spoj (25); tt. 88°C.
n) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.001502 mol), Sn(CH3)4 (0.003004 mol) i Pd(PPh3)4 (0.00015 mol) u metilbenzenu (5 ml) miješana je i refluksirana 3 sata. Dodana je 10% K2CO3. Smjesa je ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (0.7 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 85/15; 15-40 um). Dvije frakcije (F1 i F2) su skupljene i njihova otapala uparena. Donos: 0.27 g (F1, početni materijal) i 0.14g (F2). F2 je kristalizirala iz pentana i petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.08 g spoja (27) (17%); tt.110°C.
o) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.001507 mol), tributiletenilstanana (0.002260 mol) i Pd(PPh3)4 (0.000151 mol) u dioksanu (5 ml) miješana je na 80°C 8 sati. Dodana je voda. Smjesa je profiltrirana preko dijatomejske zemlje, isprana s EtOAc i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (0.65 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 90/10; 15-40 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.07 g spoja (28) (14%); tt. 108°C.
p) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (5) (0. 001507 mol), trifenil(fenilmetil)stanana (0.002260 mol) i Pd(PPh3)4 (0.000151 mol) u dioksanu (5 ml) miješana je na 80°C 8 sati. Dodana je voda. Smjesa je ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (1.4 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/Et0Ac 96/4; 15-40 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak (0.38 g) je kristalizirao iz petroletera. Talog je odfiltriran i osušen. Donos: 0.16 g spoja (29) (28%); tt. 112°C.
q) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.001507 mol), tributil-2-tienilstanana (0.00226 mol) i Pd(PPh3)4 (0.0001507 mol) u dioksanu (5 ml) miješana je na 8 0°C 8 sati. Dodan je 10% K2CO3. Smjesa je ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (1.7 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 85/15; 15-40 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak (0.65 g) je kristalizirao iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.35 g spoja (30) (61%); tt. 142°C.
r) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.0015 mol), 3-tienil boronske kiseline (0.00226 mol), Pd(PPh3)4 (0.00015 mol) i dioksana miješana je i refluksirana 24 sata. Dodan je 10% K2CO3. Smjesa je ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (0.8 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 80/20/ 15-40 um). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak (0.4 g, 70%) je kristalizirao iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.39 g spoja (31)(68%); tt. 113°C.
s) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.003 mol), glicin metil ester monohidroklorida (0.0066 mol) i Pd(PPh)4 (0.0003 mol) u Et3N (2 ml) i toluena (10 ml) miješana je na 100°C pod tlakom CO od 5 bara 8 sati, profiltrirana preko dijatomejske zemlje, isprana s CH2Cl2 i uparena. Ostatak (2 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 80/20; 75-35 μm). Jedna frakcija je skupljena i otapalo upareno. Ova frakcija (1 g 80%) kristalizirala je iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.46 g spoja (32)(37%).
t) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.003 mol) i hidrazinkarboksaldehida (0.0045 mol) u 1-butanolu (15 ml) miješana je i refluksirana preko noći, izlivena u vodu i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 95/5/0.1; 15-40 μm). Dvije frakcije (F1 i F2) su skupljene i njihova otapala uparena. Donos: 0.3 g F1 i 0.3 g F2. F1 je kristalizirala iz CH3CN i dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.102 g spoja (33); tt. 224°C. F2 je kristalizirala iz CH3CN i dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.2 g spoja (34); tt. 185°C.
u) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja 4 (0.015 mol) i NaN3 (0.045 mol) u DMF (50 ml) miješana je na 140°C 2 sata. Dodan je 10% K2CO3 i smjesa ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak (6 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 60/40; 15-40 μm). Prva frakcija je skupljena i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 1.26 g spoja (35) (24%); tt. 160°C.
v) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (4) (0.009 mol) i tiouree (0.0099 mol) u etil alkoholu (30 ml) miješana je i refluksirana 12 sati te je polagano dodana otopina KOH (0.0149 mol) u H2O (5 ml). Smjesa je miješana i refluksirana 1 sat, izlivena u vodu i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (cikloheksan/EtOAc 70/30; 15-40 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 1.1 g F1 (37%) i 0.4 g F2 (13%). F1 kristalizirala iz 2-propanona. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: spoj (36). F2 je kristalizirala iz 2-propanona. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: spoj (37).
w) Pripravljanje
[image]
CH3I (0.0034 mol) polagano je dodana na sobnoj temperaturi otopini spoja (36) (0.0015 mol), spoja (37) (0.0015 mol) i K2CO3 (0.0034 mol) u acetonu (15 ml). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 8 sati. Dodana je voda i smjesa je ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (1.2 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 85/15; 15-40 um). Čiste frakcije su skupljene i otapalo je upareno. Donos: 0.6 g F1 (57%), i 0.18 g F2 (17%). F1 je kristalizirao iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.28 g spoja (38)(27%). F2 je kristalizirala iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.065g spoja (39)(6%).
x) Pripravljanje
[image]
Smjesa
[image]
spoja (41) pripravljenog prema primjeru B3.b (0.0014 mol) u HCl 3N (5 ml) i THF(5 ml) miješana je i refluksirana preko vikenda, zatim izlivena u H2O, zalužena s K2CO3 i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno.
Donos: 0.5 g F. Ova frakcija F je kristalizirala iz 2-propanona. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.35 g spoja (40) (74%) .
y) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (5) (0.045 mol), acetamida (0.90013 mol) i K2CO3 (0.225 mol) miješana je i refluksirana na 200°C 2 sata, ohlađena do sobne temperature, izlivena u H2O/CH2Cl2; i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno do suhog. Ostatak (14.4 g) je kristalizirao iz CH3OH. Talog je odfiltriran i isušen. Filtrat je uparen. Ostatak (11.27 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 96/4/0.1/ 15-35 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 4.2 g spoja (188) (65%) .
z) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (188) (0.00032 mol), benzojeve kiseline (1.5 ekviv., 0.00048 mol), 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil) karbodiimid.HCl (1:1) (1.5 ekviv., 0.00048 mol), N-hidroksibenzotriazola (1.5 ekviv., 0.00048 mol) i EtsN (1 ekviv., 0.00032 mol) u CH2Cl2 (2 ml) miješana je na sobnoj temperaturi 15 sati. Otapalo je upareno. Ostatak je pročišćen pomoću HPLC i frakcije produkta skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.066 g spoja (205) (49.50%).
aa) Pripravljanje
[image]
Smjesa interm. 20 (0.001507 mol) u HCl 3N (10 ml) i THF(10 mol) miješana je na sobnoj temperaturi 8 sati, zalužena s 10% K2CO3 i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (1.2 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 85/15;15-40 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak (0.4 g) je kristalizirao iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.3 g spoja (6) (58%); tt. 108°C.
ab) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja 213 (pripravljenog prema B4) (0.00305 mol) i CH3ONa (30% u CH3OH) (0.00916 mol) u CH3OH (25 ml) miješana je i refluksirana 15 sati zatim ohlađena do sobne temperature, izlivena u H2O i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno do suhog. Ostatak (1.1 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc; 40/60; 15-40 um). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.3 g F1 i 0.5 g F2 (50%) F2 je kristalizirala iz dietiletera/petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.26 g F1 je kristaliziralo iz pentana. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.19 g. Ova frakcija je pročišćena kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH; 98/2; 15-40 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.1 g. Ova je frakcija pročišćena kolonskom kromatografijom preko kromasila (eluens: CH3OH/H2O; 70/30). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.09 g. (9%). Ova frakcija kristalizirala je iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.08 g spoja 419 (8%).
Primjer B5
Pripravljanje
[image]
Jodometan (0.00456 mol) dodan je na 5°C smjesi spoja (9)(0. 0019 mol), spoja (8) (0.0019 mol) i tBuOK (0.00456 mol) u THF (30 ml) u struji N2. Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi preko noći, izlivena u H2O i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 65/35; 15-40 μm). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.35 g spoja (42) (30%; tt. 125°C) i 0.35 g spoja (43) (30%; tt. 116°C).
Primjer B6
a) Pripravljanje
[image]
NaH 60% (0.01068 mol) dodan je na 0°C u struji N2 smjesi spoja (8) i spoja (9) (0.0089 mol). Smjesa je miješana 30 minuta. Na 0°C dodan je etil bromoacetat (0.01068 mol). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 1 sat, hidrolizirana s vodom i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran i otapalo upareno. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 60/40; 15-40 μm). Željene frakcije (F1-F4) su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.11 g Fl; 0.13 g F2; 0.75g F3 i 0.8g F4.
F3 je kristalizirala iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: spoj (44); tt. 152°C.
F4 je kristalizirala iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: spoj (45); tt. 147°C.
b) Pripravljanje
[image]
Bromometilbenzen (0.007 mol) dodan je kap po kap na 0°C u struji N2 otopini spoja (8) i spoja (9) (0.0064 mol) i NaH 60% (0.007 mol) u DMF (40 ml). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 1 sat, hidrolizirana s vodom i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc 70/30; 15-40 um). Željene frakcije (F1-F4) su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.15 g Fl, 0.1 g F2, 0.6 g F3 (23%) i 0.8 g F4.
F3 je kristalizirala iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.13 g spoja (46); tt. 137°C. F3 je kristalizirala iz DIPE i petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: spoj (47); tt. 130°C.
Primjer B7
a) 3-Klorobenzenkarboperoksi kiselina (0.088 mol) dodana je na 0°C otopini spoja (48) (pripravljenog prema primjeru B2) (0.044 mol) u CH2Cl2 (2 00 ml) te je smjesa miješana na sobnoj temperaturi 12 sati. Smjesa je isprana s 10% K2CO3. Organski sloj je isušen (MgSO4), profiltriran, i uparen. Ostatak je rekristalizirao iz (C2H5)2O. Donos: 8.2 g cikloheksil(3-metil-6-kinolinil)metanon, 1-oksida (spoj 49)(69%).
b) 4-Metilbenzensulfonil klorid (0.043 mol) dodan je otopini spoja (49) (0.028 mol) u K2CO3(400 ml) i CH2Cl2 (400 ml) i smjesa miješana na sobnoj temperaturi 1 sat. Smjesa je ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je isušen (MgSO4), profiltriran, i uparen. Ostatak je rekristalizirao iz (C2H5)2O. Donos: 6.64 g 6-(cikloheksilkarbonil)-3-metil-2(IH)-kinolinona (spoj 50)(85%); tt. 256.1°C.
Primjer B8
a) Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja (7) (0.0229 mol), hidroksilamina (0.0252 mol) i N,N-dietiletanamina (0.0252 mol) u etanolu (100 ml) miješana je i refluksirana 6 sati, izlivena u vodu i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz CH3CN. Talog je odfiltriran i isušen. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/EtOAc 80/20; 15-40 um). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 2.8 g spoja (51) (36%; tt. 133°C) i 3 g spoja (52) (38%; tt. 142°C).
b) Pripravljanje
[image]
Hidrazin (0.41 mol) dodan je na sobnoj temperaturi otopini spoja (7) (0.015 mol) u etanolu (75 ml). Smjesa je miješana i refluksirana 1 noć, izlivena u vodu i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 98/2/0.1). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Ostatak je kristalizirao iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.8 g spoja (53) (15%); tt. 110°C.
Primjer B9
Pripravljanje
[image]
Procedura za spojeve 400, 401, 402, 403, 404 i 405. Smjesa interm. 21 (pripravljenog prema Ali) (0.000269 mol), amantadin hidroklorida (0.000404 mol; 1.5 ekv.), N'-(etilkarbon imidoil)-N,N-dimetil-1,3-propandiamin hidroklorida (0.000404 mol; 1.5 ekviv.), 1-hidroksi-1H-benzotriazola (0.000404 mol; 1.5 ekviv.) i Et3N (0.000269 mol) u CH2Cl3 (2 ml) miješana je na sobnoj temperaturi 12 sati. Otapalo je upareno. Ostatak je pročišćen s HPLC. Frakcije produkta su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.063 g spoja 520 (46.37%).
Primjer B10
Pripravljanje
[image]
Smjesa intermedijara 27 (0.002 6 mol) i intermedijara 2 6 (0.0026 mol) u EtOH (380 ml) i H2SO4 konc. (19 ml) miješana je i refluksirana 15 sati, ohlađena do sobne temperature, izlivena u ledenu vodu, zalužena s K2CO3 i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (17.9 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: cikloheksan/EtOAc; 80/20; 15-35 um). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.85 g F1, 1.1g F2 i 11.5 g F3. F1 i F2 kristalizirale su odvojeno iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.34 g spoja 233.
Primjer B11
Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja 22 (pripravljenog prema B4) (0.004 mol) u HCl (3N) (20 ml) i THF (20 ml) miješana je i refluksirana 8 sati, izlivena na led, zalužena s NH4OH i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (1.2 g) je pročišćen kolonskom -kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH/NH4OH; 93/7/0.5; 15-40 μm). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.5 g F1 (41%) i 0.4 g F2. F1 je kristalizirala iz petroletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.17 g spoja 511 (14%).
Primjer B12
Pripravljanje
[image]
Smjesa spoja 524 (pripravljenog prema B9a) (0.0018 mol) i KOH 85% (0.0094 mol) u EtOH (15 ml) miješana je i refluksirana 24 sata, izlivena u H2O i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/cikloheksan 80/20; 15-40 um). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.35 g F1 (64%) i 0.17 g (SM) F1 je kristaliziralo iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.33 g spoja 514 (60%) (tt. :185°C).
Primjer B13
Pripravljanje
[image]
Smjesa interni. 28 (0.019 mol), 2-benzofuranilboronske kiseline (0.028 mol), Pd(PPh3)4 (0.001 mol) i BHT (mala količina) u dioksanu (25 ml) i Na2CO3 [2] (25 ml) miješana je i refluksirana 8 sati i ekstrahirana s EtOAc. Vodeni sloj je zalužen s NH4OH i ekstrahiran s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (3.6 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH 99/1; 15-40 μm). Čiste frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 1.8 g (33%). Ova frakcija kristalizirala je iz 2-propanon/dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.39 g spoja 515 (7%) (tt.:134°C).
Primjer B14
Pripravljanje
[image]
Trietilsilan (0.0012 mol) polagano je dodan na sobnoj temperaturi otopini interm. 32 (0.004 mol) u CF3COOH (5 ml) i AcOH (10 ml). U struji N2 u obrocima je dodan NaBH4 (0.0012 mol). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 8 sati, izlivena na led, zalužena s K2CO3 i ekstrahirana s CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (1.2 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/CH3OH 99/1; 15-40 μm). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.5 g F1 (43%) i 0.4 g F2. F1 je otopljena u iPrOH.
Dodani su HCl/iPrOH (1 ekviv.). Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.32 g spoja 526 (tt.: 248°C).
Primjer B15
Pripravljanje
[image]
Smjesa interm. 33 (0.082 mol) i 3-kloro-2-etil-2-butenala (0.098 mol) u AcOH (200 ml) miješana je i refluksirana 8. sati. Otapalo je upareno do suhog. Ostatak je otopljen u CH2Cl2 i ispran s 10% K2CO3. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno. Ostatak (27 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: CH2Cl2/EtOAc 95/5 do 92/8; 15-35 μm). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 0.7 g F1 i 5.3 g F2. F1 je kristalizirala iz 2-propanona/dietil etera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 0.25 g spoja 471 (2%) (tt.: 140°C).
Primjer B16
Pripravljanje
[image]
nBuLi (0.0417 mol) dodan je kap po kap na -78°C otopini interm. 35 (pripravljenog prema A17.b) (0.0379 mol) u THF (200 ml) u struji N2. Smjesa je miješana 30 minuta. Dodana je kap po kap otopina 4-bromo-N-metoksi-N-metilbenzenacetamida (0.0568 mol) u THF (100 ml) na -78°C. Smjesa je miješana od -78°C do 0°C, izlivena u H2O i ekstrahirana s EtOAc. Organski sloj je odvojen, isušen (MgSO4), profiltriran, i otapalo upareno do suhog. Ostatak (20.9 g) je pročišćen kolonskom kromatografijom preko silikagela (eluens: toluen/EtOAc 60/40 do 50/50; 15-35 μm). Dvije frakcije su skupljene i otapalo upareno. Donos: 4 g frakcije 1 i 4 g frakcije 2 (28%). Frakcija 2 je kristalizirala iz dietiletera. Talog je odfiltriran i isušen. Donos: 1 g spoja 528 (tt. 195°C).
U tablicama 1 do 8 navedeni su spojevi formule (I-A) i (I-B) koji su pripravljeni prema jednom od gornjih primjera.
Tablica 1
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
Tablica 2
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
Tablica 3
[image]
[image]
[image]
Tablica 4
[image]
[image]
[image]
Tablica 5
[image]
[image]
Tablica 6
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
Tablica 7
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
Tablica 8
[image]
[image]
C. Pripravljanje radioaktivnooznačenih spojeva
C.1 [3H]-označeni spojevi
[image]
Pažljivo izmjerenoj količini paladija na ugljiku (10%, 0.872 mg) dodana je otopina spoja 498 (I, 0.919 mg, 2.4 μmol) i trietilamina (0.92 μl, 6.6 μmol) u natrijem osušenom tetrahidrofuranu (175 μl). Reakcijska tikvica koncentrirana je na uređaju za baratanje tricijem (eng. tritiation manifold system) i reakcijska smjesa pažljivo degazirana. Iz uranova tritida nastao je tricijev plin (19.5 Ci pri tlaku od 1017 mbar) te je pušten na smjesu koja se miješala na sobnoj temperaturi. Nakon 30 min, reakcijska smjesa je zamrznuta u tekućem dušiku te je suvišak tricijeva plina ponovo uhvaćen na uranovu spužvu. Otapalo je liofilizirano iz reakcijske smjese. Uveden je metanol (100 μl) te je liofiliziran kako bi se uklonio labilni tricij. Ova procedura ponovljena je još dvaput. Ostatak je umiješan u etanol, profiltriran preko GHP Acrodisk 13 mm syringe filtera te je osiromašen s etanolom na ukupni volumen 50.0 ml. It Sadržavao je 71 mCi radioaktivnosti sa [3H]-spojem 528(11) pri 67 % radiokemijskoj čistoći. Od ove količine, uzet je dio (5.0 ml) te je u obrocima temeljito pročišćen preparativnom HPLC (Kromasil KR 100-10, dimenzije kolone 4.6 mm ID x 300 mm). UV detekcija bila je na 265 nm. Elucija je izvedena izokratno s vodom-metanolom-acetonitrilom-diizopropilaminom (47:26.5:26.5:0.2; v/v/v/v) pri brzini toka od 2.0 ml/min. Frakcije koje su sadržavale produkt su kombinirane i koncentrirane u vakuumu na 30°C. Ostatak je otopljen u etanolu (5.0 ml) i ponovo koncentriran. Ova procedura ponovljena je još dvaput. Preostali dio na kraju je otopljen u etanolu (20.0 ml) i kao takav pohranjen. Šarža je sadržavala [3H]-spoj 528 (II) s ukupnom radioaktivnošću od 3.83 mCi pri čistoći od > 98% i specifičnoj aktivnosti od 25 Ci/mmol.
D. Farmakološki primjeri
D1. Prijenos signala u kloniranom mGlu1 receptoru štakora u CHO stanicama
CHO stanice u kojima je ekspresiran mGlu1 receptor stavljene sr. na prethodno obložene crne ploče od 96 jažica. Sljedeći dan, ispitivanjem baziranom na fluorescenciji ocijenjen je učinak predloženih spojeva na unutarstanični Ca2+ aktiviran glutamatom. Stanice su napunjene s Fluo-3 AM, ploče su inkubirane 1 sat na sobnoj temperaturi u mraku, stanice su isprane i predloženi spojevi dodavani na stanice 20 minuta. Nakon tog vremena inkubacije, za svaki ploču zabilježen je porast Ca2+ induciran glutamatom kao funkcija vremenafluorimetrijski pomoću optičkog fluorometrijskog čitača s pločom za istovremenu obradu velikog broja uzoraka (FLIPR, Molecular Devices Inc.). Jedinice relativne fluorescencije su zabilježene te su dobiveni grafovi prosječnih podataka četverostrukih jažica. Krivulje koncentracije odgovora konstruirane su bazirano na piku fluorescencije (maksimalni signal između 1 i 90 sekundi) za svaku koncentraciju testiranog spoja. Vrijednosti pIC50 su -log vrijednosti koncentracije testiranih spojeva što rezultira 50% inhibicijom povišenja unutarstaničnog Ca2+ induciranog glutamatom. Spojevi prema predloženom izumu pokazali su vrijednost od pIC50 od barem 5.
Spojevi koji su uključeni u tablice 1-8 pokazali su vrijednost PIC50 od barem 6.
Posebna grupa spojeva pokazala je vrijednost pIC50 između 7 i 8. To se odnosi na spojeve navedene u tablici 9.
Tablica 9:
[image]
[image]
Posebna grupa spojeva pokazala je vrijednost pIC50 od barem 8. To se odnosi na spojeve navedene u tablici 10.
Tablica 10:
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
D2. Eksperimenti vezanja in vitro s [3H]-radioaktivno označenim spojem prema izumu
Kao [3H]-radioaktivno označeni spojevi korišteni su: spoj 528, od sada pa nadalje označen kao [3H]spoj A, koji je ekvivalent spoja 432 radioaktivno označen tricijem.
U sljedećim odjeljcima bit će iznesena studija koja ilustrira uporabu radioaktivno označenih spojeva prema izumu.
Materijali
Svi reagensi za staničnu kulturu pribavljeni su od Invitrogen-a (Carlsbad, USA). Glutamat je pribavljen od Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI); [3H]kviskvalat (29Ci/mmol), [3H]Ro 48-8587 (53 Ci/mmol), myo-[3H]-inositol (22 Ci/mmol) i [35S]GTPyS (1030 Ci/mmol) pribavljeni su od Amersham (Paisley, UK). [3H]MK-801 (22.5 Ci/mmol) i [3H] CGP39653 (20-50 Ci/mmol) pribavljeni su od NEN (Zaventem, Belgija). GDP pribavljen je od Boehringer Manheim (Basel, Švicarska) i glicin od BioRad (CA, USA). [3H] L689560 (10-30 Ci/mmol), [3H] LY341495 (34.61 Ci/mmol), [3H]MPEP (50.2 Ci/mmol), (S)-4C3HPG, (1S,3R)-ACPD, (S)-3,5-DHPG, (S)-4CPG, AIDA, MCPG, MPEP, CPCCOEt, L-SOP i L-kviskvalna kiselina kupljeni su od Tocris Cookson (Essex, UK). BAY3 6-7620, NPS 2390 i fenciklidin sintetizirani su unutar kuće. Fluo-3-AM i pluronska kiselina dobiveni su od Molecular Probes (Leiden, Nizozemska). Probenecid, strihnin, D-serin i Triton X-100 kupljeni su od Sigma-Aldrich (Steinheim, Njemačka). Svi ostali reagensi bili su iz Merck-a (Darmstadt, Njemačka).
Transfekcija i kultura stanica
L929sA stanice u kojima je stabilno ekspresiran humani Glu1 receptor dobivene su kako je opisano u Lavreysen et al., Mol. Pharmacol. 61: 1244-1254,2002 i uzgojene u Glutamax-I mediju u kojem se nalazio 10% dijalizirani fetalni goveđi serum inaktiviran toplinom, 0.1 mg/ml streptomicin sulfat i 100 jedinica/ml penicilina. CHO-dhfr-stanice u kojima je stabilno ekspresiran mGlu1a, -2, -3, -4, -5 i -6 receptor štakora dobivene su ljubaznošću S. Nakanishi (Tokyo University, Japan) i uzgojene u DMEM s Glutamax-I s 10% dijaliziranim fetalnim goveđim serumom inaktiviranim toplinom, 0.4 mM L-prolina, 0.2 mg/ml streptomicin sulfata i 200 jedinica/ml penicilina. Stanice su čuvane u atmosferi od 37°C i 5% CO2.
Odgovor razine unutarstaničnog Ca2+ u stanicama u kojima je ekspresiran štakorski i humani mGlu1a receptor te u stanicama u kojima je ekspresiran mGlu5 receptor.
Razine unutarstaničnog kalcijeva iona ([Ca2+]i) u L929sA stanicama u kojima je ekspresiran humani mGlu1a receptor mjerene su fluorimetrijski pomoću optičkog fluorometrijskog čitača s pločom za istovremenu obradu velikog broja uzoraka (FLIPR, Molecular Devices, CA, USA), kako je opisano u Lavrevsen et al., Mol. Pharmacol. 61: 1244-1254, 2002. Ista procedura slijedila se za CHO-dhfr stanice u kojima je ekspresiran mGlula receptor štakora. Za mGlu5 receptor štakora, stanice su stavljene u količini od 30.000 stanica/jažici 2 dana prije eksperimenta.
IP odgovor u CHO-dhfr-stanicama u kojima je ekspresiran mGlu1a receptor štakora
Akumulacija IP mjerena je kako je opisano u Lavreysen et al., Mol. Pharmacol. 61: 1244-1254, 2002. Ukratko, stanice su stavljene u količini od 30,000 stanica/jažici na ploče od 24-jažice i označene s 2.5 μCi/ml myo-[3H]inositola preko noći. Na dan eksperimenta, stanice su isprane i inkubirane 10 min s 10 mM LiCl. Nakon 30 min inkubacije s rastućim koncentracijama [3H] spoja A, dodan je 1N HClO4 te su ploče stavljene na 4°C. Prije primjene ionske izmjenične kromatografije dodane su KOH/fosfatna otopina i otopina koje je sadržavala 30 mM Na2B4O7.10H2O i 3 mM EDTA.
Pripravljanje membrane iz CHO-dhfr-stanica u kojima je ekspresiran mGlula, -2, -3, -4, -5 i -6 receptor štakora
Konfluentne stanice isprane su u ledeno-hladnoj slanoj otopini puferiranoj fosfatom i pohranjene na -2 0°C sve do pripravljanja membrane. Nakon odmrzavanja, stanice su suspendirane u 50 mM Tris-HCl, pH 7.4 i skupljene centrifugiranjem 10 min na 23,500 g na 4°C. Stanice su razgrađene u 10 mM hipotoničnom Tris-HCl, pH 7.4. Nakon ponovnog centrifugiranja 20 min na 30,000 g na 4°C, pelet je homogeniziran s Ultra Turrax homogenizatorom u 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Koncentracije proteina mjerene su Bio-Rad ispitivanjem proteina koristeći goveđi serum albumin kao standard.
[35S]GTPγS vezanje na membrane iz CHO-dhfr-stanica u kojima je ekspresiran mGlu2, -3, -4 i -6 receptor štakora
Membrane su odmrznute na ledu i razrijeđene u 10 mM HEPES kiselini, 10 mM HEPES soli, pH 7.4, koja je sadržavala 100 mM NaCl, 3 mM MgCl2, 3 μM GDP i 10 μg/ml saponina. Smjese za ispitivanje sadržavale su 10 μg membranskog proteina i prethodno su inkubirane spojevima ili puferom 5 min na 37°C. Zatim je dodan glutamat te su smjese za ispitivanje dalje inkubirane 30 min na 37°C. Konačnoj koncentraciji od 0.1 nM dodatnih 30 min. dodavan je [35S]GTPγS na 37°C. Reakcije su prekinute brzom filtracijom kroz Unifilter-96 GF/B filterske ploče (Packard, Meriden, CT) pomoću 96-well Packard filtermate harvester-a. Filteri su 2 puta isprani s ledeno hladnim 10 mM NaH2PO4/10 mM Na2HPO4 puferom, pH 7.4. Radioaktivnost vezana na filter izmjerena je u Packard-ovom scintilacijskom i luminiscencijskom brojaču za mikroploče.
Vezanje radioaktivnog liganda na CHO-dhfr-membrane u kojima je ekspresiran mGlu1a receptor štakora
Vezanje [3H]spoja A. Nakon odmrzavanja, membrane su homogenizirane pomoću Ultra Turrax homogenizatora i suspendirane u ledeno-hladnom puferu za vezanje koji je sadržavao 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 1.2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, ako drugačije nije navedeno. Eksperimenti zasićenja ligandom izvedeni su pri vidljivoj ravnoteži vezanja (inkubacija 30 min) s 20 μg membranskog proteina i 10 koncentracija (0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1,2, 2.5, 5 i 10 nM) radioaktivnog liganda. Nespecifično vezanje ustanovljeno je u prisutnosti 1 uM spoja 135. Inkubacija je prekinuta brzom filtracijom usisavanjem preko GF/C filtera od staklenih vlakana koristeći ručnu jedinicu za filtraciju 40 jažica. Za mjerenje kinetike asocijacije, membrane su inkubirane na 4°C, 25°C ili 37°C u prisutnosti 2.5 nM [3H]spoja A 2, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90 ili 120 min, zatim je reakcija prekinuta brzom filtracijom pomoću ručne jedinice za filtraciju s 40 jažica. Kinetika disocijacije mjerena je dodavanjem, u različitim vremenima prije filtracije 1 μM spoja 135 membranama koje su prethodno inkubirane 30 min na 4°C ili 25°C u prisutnosti 2.5 nM [3H]spoja A. Filteri su premješteni u scintilacijske fijale i, nakon dodavanja Ultima-Gold MV, radioaktivnost skupljena na filterima izmjerena je u Packard-ovom scintilacijskom brojaču. Za eksperimente inhibicije, smjese za ispitivanje inkubirane su 30 min na 4 C u volumenu od 0.5 ml koji je sadržavao 10-20 μg membranskog proteina, odgovarajuće koncentracije testnih spojeva i 2.5 nM [3H]spoja A. Nespecifično vezanje definirano je kao iznad. Filtracija je izvedena pomoću Unifilter-96 GF/C filterskih ploča i 96-well Packard filtermate harvester-a. Nakon dodavanja microscint-O, radioaktivnost na filterima izmjerena je u Packard-ovom scintilacijskom i luminiscencijskom brojaču za mikroploče.
Vezanje [3H]kviskvalata. Odmrznute membrane homogenizirane su i suspendirane u ledeno-hladnom puferu za vezanje. Za eksperimente zasićenja, 30 μg membranskog proteina inkubirano je 1 h na 25°C s 10 koncentracija (1, 2, 5, 10, 20, 40, 60, 90, 120 i 150 nM) [3H]kviskvalata. Nespecifično vezanje određeno je u prisutnosti 1 mM L-glutamata. Vezan i slobodan radioaktivni ligand odvojen je brzom filtracijom preko GF/C filtera od staklenih vlakana pomoću ručne filtracije u 40 jažica. Za eksperimente inhibicije, 30 μg membranskog proteina inkubirano je 1 h na 25°C u volumenu od 0.5 ml koji je sadržavao odgovarajuće koncentracije testnih spojeva i konačnu koncentraciju od 10 nM [3H]kviskvalata. Filtracija je izvedena pomoću Unifilter-96 GF/C filterskih ploča i Packard filtermate harvester-a. Radioaktivnost uhvaćena na filterima izmjerena je kao gore.
Vezanje radioaktivnog liganda na CHO-dhfr-membrane u kojima je ekspresiran mGlu2, -3,- 4, -5 i -6 receptor štakora
Nakon odmrzavanja, membrane su homogenizirane pomoću Ultra Turrax homogenizatora i suspendirane u ledeno-hladnom puferu za vezanje koji je sadržavao 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 1.2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2. Za vezanje [3H] spoja A, korišteno je 20 do 160 μg membranskog proteina i konačna koncentracija od 20 nM [3H]spoja A. Kako je navedeno u poglavlju rezultata, za definiranje nespecifičnog vezanja upotrijebljene su različite lažne (slijepe) probe. Vrijeme inkubacije i temperatura kao i filtracija bili su kako je opisano za CHO-dhfr- membrane u kojima je ekspresiran mGlula receptor štakora. Ekspresija mGlu2, -3, -5 i mGluβ receptora štakora potvrđena je specifičnim vezanjem [3H] LY341495 (mGlu2, -3 i -6) ili [3H] MPEP (mGluδ). Za [3H] LY341495 vezanje, upotrijebljeno je 1 nM (mGlu2 i mGlu3) ili 10 nM (mGlu6)[3H] LY341495. Nespecifično vezanje određeno je pomoću 1 mM glutamata. Smjese za ispitivanje inkubirane su 30 min (mGlu2 i mGlu3) ili 60 min (mGlu6) na 4°C. Inkubacija je prekinuta filtracijom preko GF/B filtera od staklenih vlakana (Whatman, England) pomoću ručnog uređaja za filtraciju u 40 jažica. Za CHO-dhfr membrane u kojima je ekspresiran mGlu5 receptor, upotrijebljeno je 10 nM [3H] MPEP i 10 μM MPEP, kako bi se otkrilo nespecifično vezanje. Inkubacija je izvedena na 4°C 30 min. Vezani i slobodni radioaktivni ligandi razdvojeni su preko GF/C filtera od staklenih vlakana (Whatman, England) pomoću filtracijske jedinice za 40 jažica.
Vezanje [3H]spoja A na moždane membrane štakora.
Pripravljanje tkiva. Mužjaci Wistar štakora (~200 g) žrtvovani su dekaptiranjem. Brzo su uklonjeni mozgovi i korteks, hipokampus, striatum i mali mozak odmah secirani. Svježe tkivo je homogenizirano s Ultra Turrax-om u 20 volumena 50 mM Tris-HCl, pH 7.4 i tkivo centrifugirano na 23,500 g 10 min. Nakon homogenizacije pomoću DUAL homogenizatora, membrane su dvaput isprane centrifugiranjem na 23,500 g 10 min. Završni plet je suspendiran u 10 volumena 50 mM Tris-HCl, pH 7.4 i zamrznut na -80°C.
Ispitivanje vezanja in vitro. Nakon odmrzavanja, membrane iz korteksa, mali mozak, striatum i hipokampus štakora su ponovo homogenizirane pomoću DUAL-a i suspendirane u ledeno-hladnom puferu za vezanje koji je sadržavao 50 mM Tris-HCl, 1.2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, pH 7.4. Ispitivanje vezanja izvedeno je u ukupnom volumenu od 0.5 ml koji je sadržavao 2.5 nM [3H] spoja A i membranski alikvot što je odgovaralo 40 μg cerebralnih membrana, 60 μg hipokampalnih membrana, 80 μg striatalnih membrana ili 150 μg membrana korteksa. Specifično vezanje izračunato je kao razlika između ukupnog vezanja i vezanja izmjerenog u prisutnosti 1 μM spoja 135. Nakon 30 min. inkubacije na 4°C, označene membrane su isprane i pobrane brzom vakuum filtracijom preko Whatman GF/C filtera od staklenih vlakana koristeći filtraciju u 40 jažica i radioaktivnost skupljena na filterima izmjerena kao iznad.
Vezanje [3H]Ro 48-8587, [3H]L689560, [3H]CGP39653 i [3H]MK-801 na membrane mozga štakora.
Pripravljanje tkiva. Mužjaci Wistar štakora (~200 g) žrtvovani su dekaptiranjem. Brzo su uklonjeni mozgovi i prednji mozak odmah seciran. Tkivo je homogenizirano s Ultra Turrax-om u 20 volumena ledeno-hladne H20 te je centrifugirano na 48,000 g 20 min. Nakon homogenizacije pomoću DUAL homogenizatora, membrane su isprane centrifugiranjem na 48,000 g 10 min. Pelet je zatim suspendiran u 20 volumena 50 mMTris-HCl, pH 7.4 koji je sadržavao 0.04% Triton X-100 i ponovo centrifugiran na 48,000 g 20 min. Završni pelet je zamrznut na -80°C.
Ispitivanje vezanja in vitro. Na dan eksperimenta, pelet je odmrznut, ispran i ponovo homogeniziran pomoću DUAL-a u ledeno-hladnom 50 mM Tris-acetatu, pH 7.4. Uvjeti ispitivanja za različite radioaktivne ligande bili su kako slijedi. Konačna koncentracija membrane u ispitivanju bila je 20 mg/ml (masa mokre tvari) za [3H]Ro 48-8587 i [3H]L689560 te 10 mg/ml (masa mokre tvari) za [3H]CGP39653 i [3H] MK-801. Korištene su koncentracije radioaktivnog liganda od 2 nM [3H]Ro 48-8587, 2 nM [3H]L689560, 2 nM [3H]CGP39653 i 3 nM [3H]MK-801. Inkubacija je izvedena u prisutnosti 1 mM KSCN za vezanje [3H]Ro 48-8587, 100 μM strihnina za [3H]L689560 i 1 μM glicina + 1 M glutamata za [3H] MK-801. Nespecifično vezanje određeno je u prisutnosti 1 mM glutamata za vezanje [3H]Ro 48-8587 i [3H]CGP39653. Za vezanje [3H]L689560 i [3H]MK-801, upotrijebljeni su redom 100 uM D-serin ili 10 uM fenciklidin kako bi se definiralo nespecifično vezanje. Uzorci za ispitivanje inkubirani su 1 h na 37°C, 2 h na 4°C, 30 min na 25°C i 1 h na 4°C redom za vezanje [3H]Ro 48-8587, [3H]L689560, [3H]CGP39653 i [3H]MK-801. Nakon inkubacije, vezani i slobodni radioaktivni ligand je odvojen pomoću filtracije u 40 jažica. Radioaktivnost skupljena na filterima izmjerena je kao iznad.
Vezanje [3H]spoja A i autoradiografija na sekcijama mozga štakora.
Pripravljanje tkiva. Mužjaci Wistar štakora (~200 g) žrtvovani su dekaptiranjem. Brzo su uklonjeni mozgovi iz lubanje i brzo zamrznuti u 2-metilbutananu (-40°C) ohlađenom na suhom ledu. Mozgovi su pohranjeni na -70°C do sekcije. Izrezani su sagitalni presjeci od dvadeset mikrometara pomoću Leica C3050 kriostatskog mikrotoma (Leica Microsvstems, Wetzlar, Germanv) i kriostatski rezovi položeni su na SuperFrost Plus mikroskopska stakalca (Menzle-glaser, Germany). Sekcije su zatim čuvane na -70°C do uporabe.
Autoradiografija receptora. Sekcije su odmrznute i isušene u struji hladnog zraka, preinkubirane (3x5 min) u 50 mM Tris-HCl, 1.2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 0.1% BSA pH 7.4 na sobnoj temperaturi. Sekcije su zatim inkubirane 60 min na sobnoj temperaturi, u puferu koji je sadržavao 50 mM Tris-HCl, 1.2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 0.1 % BSA (pH 7.4) i 1.5 nM [3H] spoja A. Nespecifično vezanje određeno je dodavanjem 1 uM spoja 135 u inkubacijskom puferu. Nakon inkubacije, suvišak radioaktivnog liganda je ispran (3x5 min) u ledeno-hladnom puferu koji je sadržavao 50 mM Tris-HCl, 1.2 mM MgCl2 i 2 mM CaCl2, zatim brzim umakanjem u hladnu destiliranu vodu. Sekcije su isušene u struji hladnog zraka, a zatim izložene [3H]Hyperfilm-u (Amersham, UK) 6 tjedana na sobnoj temperaturi. Filmovi su razvijeni ručno u Kodak D19 i fiksirani s Kodak Readvmatic. Neke sekcije izložene su Fuji ploči za optičku obradu 2 dana na sobnoj temperaturi i optički ispitane pomoću Fujix Bass 2000 uređaja za prikaz fosforescencije.
Analiza podataka i statistika
Analiza podataka načinjena je pomoću GraphPad Prism programa (GraphPad Prism Software, Inc., San Diego, CA). Eksperimenti vezanja zasićenjem analizirani su nelinearnom regresijskom analizom. Krivulje inhibicije podešene su pomoću nelinearne regresijske analize tako da odgovaraju jednadžbi kompeticije liganada za jedno vezno mjesto na receptoru: Y= dno+((vrh-dno)/l+10x-LogIC50). Vrijednosti Ki izračunate su pomoću Cheng-Prusoff jednadžbe: Ki =IC50/[1+([C]/KD)] gdje je C koncentracija radioaktivnog liganda i KD je konstanta disocijacije radioaktivnog liganda (Cheng i Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3108, 1973). Opažene on(kob) i off(koff) brzine izračunate su iz krivulja asocijacije-disocijacije redom pomoću jednadžbe asocijacije jedne faze i jednadžbe raspada u Prism programu. kon je izračunat oduzimanjem koff od kob i dijeljenjem s koncentracijom radioaktivnog liganda. Za statističku procjenu podataka vezanja korišten je dvostrani Studentov t-test: *p < 0.05, ** p < 0.01 i ***p < 0.001. Za analizu podataka iz IP eksperimenata korišteni su Dunnettov t-test i zatim 2-strana analiza varijance (s koncentracijom spoja i eksperimentom ako faktorima).
Rezultati
Selektivnost i način antagonizma spoja A prema mGlu1 receptoru.
U CHO-dhfr- stanicama u kojima je ekspresiran mGlu1a receptor štakora, spoj A je inhibirao povećanje [Ca2+] i inducirano glutamatom s vrijednošću IC50 od 21.6 ± 5.0 nM (n=4; slika 1A) i ispostavilo se da je oko 8 puta moćniji nego trenutno opisan specifični antagonist mGlu1 receptora BAY 36-7620 (IC50 = 161 ± 38 nM, n = 3) i 500 puta moćniji od CPCCOEt (IC50 = 10.3 ± 0.8 μM, n = 3), koji su na isti način testirani. Za humani mGlu1a receptor, spoj A imao je vrijednost IC50 od 10.4 ± 4.7 nM (n = 3). Spoj A nije inhibirao glutamatom induciran Ca2+ prijenos signala mGlu5 receptora štakora koji je ekspresiran u CHO-dhfr- stanicama, koje su testirane sve do koncentracije od 10 μM. Vrijednosti IC50 inhibicije glutamatom (30 μM)-inducirane aktivacije [35S]GTPγS bile su iznad 30 μM kod rekombinantnih mGlu2, -3, -4 ili -6 receptora štakora. U [35S]GTPγS ispitivanjima, spoj A nije pokazao antagonističku aktivnost prema bilo kojem od mGlu receptora sve do koncentracije od 30 μM. Dodatno, istraženo je da li bi spoj A mogao djelovati kao pozitivni alosterični modulator na jednom od ovih tipova mGlu receptora. Za to smo izveli kruvulje koncentracije glutamata-odgovora dodavanjem samog glutamata ili zajedno s 10 μM spoja A. ispitivanja [35S]GTP7S na rekombinantnim mGlu2, -3, -4 ili -6 receptorima štakora pokazala su da EC50 glutamata nije izmijenjena i da vrijednost Emax glutamata nije porasla nakon dodavanja spoja. Vrijednost EC50 i Emax glutamatom-inducirane mobilizacije unutarstaničnih Ca2+ također se nije promijenila u stanicama u kojima je ekspresiran mGlu5 receptor štakora kada je dodan spoj A zajedno s glutamatom (podaci nisu prikazani). Zajedno ovi podaci isključuju agonističko, antagonističko ili pozitivnu alosteričko djelovanje na mGlu2, -3, -4, -5 i -6 receptore. Studije vezanja radioaktivno vezanog liganda na prednji mozak pomoću [3H]Ro-488587, [3H] L689560, [3H]CGP39653 i [3H]MK-801 otkrile su da se spoj A redom nije vezao na AMPA receptor, niti se vezao na glicin, glutamat ili vezno mjesto unutar ionskog kanala NMDA receptora (testirano sve do koncentracije od 10 μM). Za analizu kako spoj A inhibira aktivaciju glutamata mGlu1 receptora, uspoređena je mobilizacija Ca2+ kao odgovor na glutamat u odsutnosti i prisutnosti spoja A (slika 1B). Prisutnost spoja A nije samo uzrokovana pomakom udesno na krivulji koncentracije-odgovora glutamata, već je također rezultat dramatičnog smanjenja maksimalnog odgovora izazvanog agonistom, otkrivajući da je antagonizam spojem A bio nekompetitivan. Potpuna inhibicija inGlu1a receptorom posredovanog prijenosa signala opažena je u prisutnosti 100 nM-1 uM spoja A. Kako bi se ispitalo da li bi spoj A mogao djelovati kao inverzni agonist, mjerili smo bazalnu akumulaciju IP u mGlula receptoru štakora koji se nalazio u CHO-dhfr- stanicama u prisutnosti spoja A. Slika 1 C pokazuje da postoji jasno smanjenje proizvodnje IP s porastom koncentracije spoja A. Ovo smanjenje bilo je statistički značajno (p < 0.05) kao off 1 μM spoja A, pri kojem se bazalna akumulacija IP smanjila za 24 4 %. Pronađeno je maksimalno smanjenje od 33 3 % kada je korišten 100 μM spoja A. Ovi podaci ukazuju da spoj A zaista može djelovati kao inverzni agonist prema mGlu1a receptoru.
Karakterizacija vezanja [3H] spoja A na mGlula receptor štakora u CHO-dhfr" membranama.
Specifično vezanje 2.5 nM[3H] spoja A na 4°C na mGlu1a receptor štakora u CHO-dhfr- membranama bilo je proporcionalno količini membranskog proteina i linearno se povećalo između 10 i 50 μg membranskog proteina po ispitivanju (slika 2). Nespecifično vezanje definirano je pomoću 1 uM spoja 135 kao inhibitora. Spoj 135 identificiran je kao specifični antagonist mGlu1 receptora snage od 7.2 ± 1.2 nM (n=3) za obrat glutamatom inducirane mobilizacije [Ca2+]i. Uz 20 μg proteina po ispitivanju, specifično vezanje [3H] spoja A bilo je ~92% ukupnog vezanja; u tipičnim uvjetima ispitivanja, ukupno i nespecifično vezanje bilo je redom u području od 3,800 i 300 DPM.
Dodavanje 1.2 mM MgCl2 i 2 mM CaCl2 uzrokovalo je umjereni porast specifičnog vezanja (podaci nisu prikazani). Daljnje dodavanje NaCl (10-100-300 mM) nije imalo učinka. Dok se specifično vezanje smanjilo za 22% na pH 6, povećanje pH sve do 10 nije imalo učinka (podaci nisu prikazani). Kinetike asocijacije mjerene su kako je opisano u materijalima i postupcima.
Smanjenje temperature inkubacije na 4 C, dramatično je pospješilo specifično vezanje, dok je slabo vezanje pronađeno na 37°C (slika 3). Asocijacija [3H] spoja A na membranu bila je ekstremno brza. Na 4°C, inkubacija od 2 min već je rezultirala u specifičnom vezanju koje je odgovaralo oko 70% količine vezane u ravnoteži. Maksimalno vezanje dosegnuto je unutar 5 min inkubacije za svaku temperaturu inkubacije. Analiza krivulja asocijacije rezultirala je opaženim konstantama brzine asocijacije (kob) redom od 0.6285, 2.571 i 1.523 min-1 na 4°C, 25°C i 37°C. Kinetike disocijacije također su bile brze (slika 4). Na 25°C, radioaktivni ligand disocirao se već u 2 min nakon dodavanja 1 μM spoj 135 reakcijskim cjevčicama. Brza kinetika disocijacije na 25°C nije nam omogućila izračunavanje točne konstante brzine disocijacije (koto). Do disocijacije je došlo postupno kada su uzorci inkubirani na 4°C. [3H]spoj A potpuno je premješten unutar približno 45 min nakon dodavanja suviška spoja 135. Analiza krivulje disocijacije na 4°C rezultirala je u koff od 0.1249 min-1. kon (kob-koff/koncentracija radioaktivnog liganda) na 4°C bila je 0.1007 nM-1 min-1.
Eksperimenti zasićenja ligandom izvedeni su pri ravnoteži vidljivog vezanja (30 min inkubacije) i s 10 koncentracija radioaktivnog liganda. Slika 5 prikazuje krivulju disocijacije i Scatchardov dijagram vezanja [3H] spoja A na mGlu1a receptor štakora u CHO-dhfr- membranama. Scatchardovi dijagrami bili su linearni, što ukazuje na prisutnost jednog mjesta koje se može zasititi i ima veliki afinitet prema vezanju. Nelinearna regresijska analiza pravokutne hiperbole otkrila je Bmax od 6512 ± 1501 fmola/mg proteina i KD 0.90 ± 0.14 nM (n=3). Serije agonista i antagonista mGlu1 receptora testirane su na inhibiciju vezanja [3H]spoja A na mGlu1 receptor štakora u CHO-dhfr- membranama. Krivulje inhibicije za neke antagoniste prikazane su na slici 6, i vrijednosti Ki svih testiranih spojeva navedene su u tablici 11.
Tablica 11; Snaga različitih agonista i antagonista mGlu1 receptora u inhibiciji vezanja spoja A na mGlu1a receptor štakora u CHO-dhfr- membranama. Vrijednosti Ki i Hillovi koeficijenti su srednja vrijednost ± SD 3-4 nezavisna eksperimenta.
[image]
Zamjetljivo, svi ligandi koji se vežu na mjesto vezanja glutamata, tj. glutamat, kviskvalat, 1S, 3R-ACPD, (S)-3,5-DHPG, LY-367385, (S)-4C3HPG, (S)-4CPG, MCPG i AIDA nisu inhibirali vezanje [3H]spoja A. Nasuprot tome, nekompetitivni antagonisti mGlu1 receptora CPCCOEt, BAY 36-7620, NPS 2390 i spoj A inhibirali su vezanje [3H]spoja A na mGlu1a receptor štakora u CHO-dhfr- membranama snagom koja je općenito bila u skladu sa njihovom snagom da inhibiraju funkciju mGlu1 receptora. Spoj A i NPS 2390 pokazali su najviši afinitet, uz Ki od 1.35±0.99 i 1.36±0.50 nM, redom. BAY 36-7620 također je inhibirao vezanje pri nanomolarnim koncentracijama, dok se CPCCOEt premjestio pri mikromolarnim koncentracijama.
Također smo ispitali specifičnost vezanja [3H]spoja A na mGlu1 prema mGlu2, -3, -4, -5, i -6 receptorima. Pomoću [3H] LY341495 pronađeno je 95, 98 i 40% specifično vezanje kada su upotrijebljene membrane pripravljene iz CHO-dhfr" stanica u kojima je ekspresiran mGlu2, mGlu3, ili mGlu6 receptor, redom. Kao pozitivna kontrola upotrijebljen je [3H] MPEP za mGluδ receptor te je proizveo 95% specifično vezanje na mGlu6 receptor štakora kojeg su sadržavale membrane. Ukupno vezanje 20 nM [3H] spoja A na membrane pripravljene iz CHO-dhfr- stanica u kojima je ekspresiran mGlu2, -3, -4, -5, ili -6 receptor nije bilo više nego vezanje na membrane divljeg tipa CHO-dhfr- stanica, niti je bilo više od nespecifičnog vezanja na Glu1a receptor štakora u CHO-dhfr- membranama. Nadalje, specifično vezanje [3H]spoja A na te membrane ispitano je koristeći različite lažne (slijepe) probe: 1 μM spoja 135, za kojeg se očekuje da se veže na isto mjesto kao spoj A, glutamat i L-SOP, koji se vežu na džep (utor) za vezanje glutamata i MPEP koji se veže na alosteričko mjesto na mGlu5 receptoru (vidi tablicu 12). Niti jedna od ovih lažnih (slijepih) proba nije premjestila [3H] spoj A. Ovi podaci zajedno pokazuju specifičnost [3H]spoja A prema mGlu1 receptoru u odnosu na podtipove mGlu2, -3, -4, -5 i -6 receptora.
Tablica 12: [3H]spoj A je specifičan za mGlu1 receptor u odnosu na mGlu2, -3, -4, -5 ili -6 receptor. Specifično vezanje 20 nM [3H] spoja A na 40 μg membrana iz divljeg tipa (CHO-dhfr-) stanica ili iz CHO-dhfr- stanica u kojima je ekspresiran mGlu2, -3, -4, -5 ili -6 receptor štakora uspoređeno je s vezanjem 10 nM [3H]spoja A na 20 μg mGlu1a receptora štakora CHO-dhfr- membrana. Za definiranje nespecifičnog vezanja upotrijebljeni su različiti spojevi. Podaci specifičnog vezanja (SB) iz mGlula receptora štakora CHO-dhfr-membrana predstavljaju srednju vrijednost ± SD 3 eksperimenta izvedenih dvaput. Ostali SB podaci predstavljaju dvostruka određivanja iz jednog eksperimenta (ND= nije određeno).
[image] a 1 mM glutamata upotrijebljeno je za određivanje nespecifičnog vezanja
b 0.1 mM L-SOP upotrijebljeno je za određivanje nespecifičnog vezanja
c 10 uM MPEP upotrijebljeno je za određivanje nespecifičnogvezanja
Usporedba s vezanjem [3H] kviskvalata. Eksperimenti vezanja zasićenjem izvedeni su pomoću 30 μg proteina po inkubatu i 10 koncentracija (1, 2, 5, 10, 20, 40, 60, 90, 120 i 150 nM) agonista mGlu1 receptora [3H]kviskvalata (slika 7). Podešavanje krivulja otkrilo je jedno vezno mjesto s vrijednostima KD i Bmax od 22.0 ± 10 nM i 3912 ± 436 fmola/mg proteina, redom (n=3). Jasno je da se [3H]spoj A vezao na mGlu1A s puno višim afinitetom nego [3H]kviskvalat. Broj veznih mjesta označenih s [3H]kviskvalatom bio je ~60% broja veznih mjesta označenih sa [3H]spojem A. Procijenjeno je inhibicijsko djelovanje istih spojeva na vezanje [3H] kviskvalata na mGlu1a receptor štakora u CHO-dhfr- membranama. Snage inhibicije testiranih agonista i antagonista kao i Hillovi koeficijenti sažeti su u tablici 13. U tom slučaju, spojevi za koje je poznato da pokazuju kompetitivno međudjelovanje s glutamatom, inhibirali su vezanje [3H]kviskvalata, dok CPCCOEt, BAY 36-7620 i NPS 2390 nisu utjecali na vezanje [3H]kviskvalata. Također spoj A nije premjestio vezanje [3H]kviskvalata na mGlu1a receptor. Kompetitivni ligandi mGlu1 receptora premjestili su vezanje [3H]kviskvalata sa sljedećim poretkom po snazi: kviskvalat > glutamat > LY367385 > (S)-3,5-DHPG > (S) -4C3HPG > 1S, 3R-ACPD > (S)-4CPG > AIDA > MCPG.
Tablica 13: Snage različitih agonista i antagonista mGlu1 pri inhibiciji vezanja [3H]kviskvalata na mGlu1a receptor štakora CHO-dhfr- membrana. Vrijednosti Ki i Hillovih koeficijenata predstavljaju srednju vrijednost ± SD 2 nezavisna eksperimenta.
[image]
Priroda kompeticije između vezanja CPCCOEt, BAY 36-7620, NPS 2390 i [3H]spoja A
Činjenica da su nekompetitivni spojevi svi premjestili vezanje [3H]spoja A binding ne utječući na vezanje [3H]kviskvalata ukazala je da su ti antagonisti vezani na mjesto drugačije od mjesta vezanja glutamata. Kako bi se ocijenilo da li se referentni spojevi CPCCOEt, BAY 36-7620, NPS 2390 i novoidentificirani antagonist mGlu1 receptora spoj A natječu za isto mjesto ili međusobno isključiva mjesta, izvedeni su eksperimenti zasićenja sa koncentracijama [3H] spoja A od 0.2 do 20 nM u odsutnosti i prisutnosti CPCCOEt (30 uM), BAY 36-7620 (100 nM) i NPS 2390 (10 nM). Prisutnost ovih natjecatelja nije utjecala na vrijednosti Bmax, ali je uzrokovala značajni porast vrijednosti KD [3H]spoja A (tablica 14). Ovo je prikazano na slici 8, na kojoj su ucrtani podaci primjenom linearne regresije. Na Scatchardovim dijagramima, dobivene linije doista se stapaju na isti prekid na X-osi (tj. vrijednost Bmax).
Tablica 14: KD i Bmax vrijednosti dobivene iz analize krivulja vezanja zasićenjem [3H]spoja A dobivenih u odsutnosti i prisutnosti antagonista mGlu1 receptora CPCCOEt (30 uM), BAY 36-7620 (100 nM) i NPS 2390 (10 nM). Vrijednosti su srednje vrijednosti ± SD iz 3 pojedinačna eksperimenta. Statistička analiza načinjena je Studentovim t-testom (dvostranim): **p < 0.01 i ***p < 0.001.
[image]
Vezanje [3H]spoja A binding u membranama mozga štakora i sekcije
Koristili smo specifični radioaktivni ligand [3H] spoja A mGlu1 receptora kako bi se ispitalo vezanje receptora na različita područja mozga štakora. Pripravljene su membrane korteksa, striatuma, malog mozga i hipokampusa štakora te je mjereno vezanje [3H]spoja A. Nespecifično vezanje u odnosu na ukupno vezanje bilo je 10% u malom mozgu, 30% u hipokampusu i 25% u korteksu i striatumu. Vrijednosti KD i Bmax određene su za svako područje mozga (tablica 15). Vrijednosti KD bile su oko 1 nM za sve strukture. Vrijednosti Bmax bile su značajno različite među različitim područjima. [3H] spoj A označio je zamjetljivo velik broj mGlu1 receptora u malom mozgu. U striatumu i hipokampusu označeno je oko 16% broja mjesta pronađenih u malom mozgu. Samo 11% broja veznih mjesta u malom mozgu bilo je vezano na korteks štakora. Važno je da je također inkubacija s 10 μM strukturno nepovezanog spoja BAY 36-7620 maksimalno inhibirala vezanje [3H]spoja A (slika 9). Selektivni spoj MPEP za mGlu5 receptor MPEP (testiran sve do 30 μM) nije utjecao na vezanje [3H]spoja A moždane membrane štakora, ponovo pokazujući selektivnost spoja A prema mGlu1 receptoru.
Pomoću autoradiografije radioaktivnog liganda, ispitali smo raspodjele vezanja [3H] spoja A u moždanim sekcijama štakora (slika 10). Autoradeiografija [3H] spoja A istražena je u sagitalnim presjecima mozga štakora; nespecifično vezanje određeno je pomoću spoja 135 (slika 10, panel A). Vrlo visoko specifično vezanje opaženo je u molekularnom sloju malog mozga. Blagi signal opažen je u CA3 polju i girusu dentatusu hipokampalne formacije, talamusu, olfaktornom tuberkulumu, amigdali i retikularnom dijelu supstancije nigre (crne jezgre). Moždani korteks, kaudalni (stražnji) dio putamena, ventralni dio paliduma,_nukleus akumbens pokazali su niže označavanje. Također je inkubacija s BAY 36-7620 potpuno inhibirala vezanje [3H]spoja A na sekcije mozga štakora (slika 10, panel C).
Tablica 15: Konstante ravnoteže vezanja [3H]spoja A na membrane iz korteksa, hipokampusa, striatuma i malog mozga štakora. Vrijednosti KD i Bmax predstavljaju srednju vrijednost, ± SD, dobivenu iz 3 nezavisna eksperimenta.
[image]
Diskusija
Sve do sada, pronađeno je samo nekoliko selektivnih antagonista za mGlu1 podtip receptora. Pokazalo se da je mGlu1 receptor selektivno blokiran s CPCCOEt (Litschig et al., Mol. Pharmacol. 55: 453-461, 1999) i BAY 36-7620 sa snagom koja varira od mikromolarnih za CPCCOEt (6.6 μM) do visoko nanomolarnih koncentracija za BAY 36-7620 (160nM). U ovoj studiji, spoj A identificiran je kao novi antagonist mGlu1 receptora s niskom nanomolarnom funkcionalnom antagonističkom snagom prema mGlu1a receptoru štakora (21.6 nM) i humanom mGlu1a receptoru (10.4 nM). Ustanovljeno je da je antagonističko djelovanje spoja A nekompetitivno, budući se maksimalna aktivacija Glu1 receptora inducirana glutamatom smanjila u prisutnosti spoja A. Opaženo povećanje u EC5o glutamata u prisutnosti spoja A može se objasniti prisutnošću zauzetih receptora. Pri niskim koncentracijama nekompetitivnog antagonista, krivulja koncentracije-odgovora bit će pomaknuta u desno budući je potrebno više agonista kako bi se kompenzirali "nezauzeti" receptori koji su blokirani antagonistom. Ove koncentracije antagonista neće još utjecati na maksimalni odgovor agonista, dok će više koncentracije antagonista na kraju potisnuti maksimalni odgovor (Zhu et al., J. Pharm. Tox. Meth. 29: 85-91, 1993). Ovaj fenomen također je opisan za BAY 36-7620 (Carroll et al., Mol. Pharmacol. 59: 965-973, 2001) i CPCCOEt (Hermans et al., Neuropharmacology 37: 1645-1647, 1998). Naši podaci dalje pokazuju da spoj A može djelovati kao inverzni agonist prema mGlu1a receptoru i da spoj A djeluje selektivno prema mGlu1 receptoru s obzirom na ostale podtipove mGlu receptora i ionotropne receptore glutamata. Podaci prijenosa signala pokazali su da spoj A ne pokazuje agonističko, antagonističko ili pozitivno alosteričko djelovanje na mGlu2, -3, -4, -5 i -6 receptore, a studije vezanja radioaktivnog liganda otkrile su da se [3H]spoj A ne veže na mGlu2, -3, -4, -5 i -6 receptor, isključujući nadalje mogućnost da spoj A djeluje kao neutralni ligand na bilo kojem od tih podtipova receptora. Nedostatak selektivnih radioaktivnih liganda mGlu1 receptora zajedno sa zanimljivim farmakološkim svojstvima spoja A bili su razlozi koji se nisu mogli zanemariti za označavanje spoja A istraživanje mGlu1 receptora u studijama vezanja.
Vezanje [3H]spoja A ispunilo je sve zahtjeve za ligandom pogodnim za studiju svojstava vezanja, farmakologiju i raspodjelu mGlu1 receptora. Najprije su studije vezanja [3H] spoja A izvedene na mGlu1a receptoru štakora CHO-dhfr-membrana. Specifično vezanje bilo je jako visoko i poraslo je linearno s koncentracijom proteina (slika 2). Specifično vezanje imalo je umjereni porast u prisutnosti MgCl2 i CaCl2, dok je vezanje smanjeno za 22% na pH 6 i povišenje pH na njega nije utjecalo. S obzirom na učinke pH na vezanje, vrijedno je spomenuti izračunata fizikokemijska svojstva spoja A: izračunati pKa i clogP su redom 6.2 i 4.5. Na pH 7.4, stupanj ionizacije spoja A je stoga vrlo nizak (samo 5.9 %). Postotak ionizacije dalje se smanjuje na višem pH (1.6 % na pH 8, 0.2 % na pH 9 i bez protoniranja na pH 10). Vrijednost clogD ostaje 4.5 od pH 7.4 do pH 10. Na pH 6, međutim, 61.3 % spoja A je u protoniranom obliku. Sukladno tome, clogD pada na 4.1. Donja granica vezanja liganda u ioniziranom obliku ukazuje da neionizirani ligand ima najviši afinitet vezanja. Ovo je značajno i u suprotnosti je s pronalascima za ligande za mono-aminske receptore vezane na G protein (npr. dopaminski receptor), koji su često jake baze i vežu se u kationskom obliku. Za takve spojeve, pokretačka sila za vezanje na receptor je elektrostatske prirode (Van de Waterbeemd et al., J. Med. Chem. 29: 600-606, 1986). Naši podaci mogu ukazati da međudjelovanja nisu pokretačka sila u vezanju na receptor, i da također nema doprinosa učinaka površine iona. Dodatno, premda je spoj A jaki lipofilni spoj, jako nisko nespecifično vezanje [3H] spoja A moglo bi biti zbog činjenice da ne može doći do nikakvog elektrostatskog međudjelovanja između neioniziranog oblika spoja A i negativno nabijene stanične membrane. Vezanje je bilo ovisno o temperaturi, i bitno se povećalo na 4°C (slika 3). Uslijed svoje brze kinetike asocijacije i disocijacije, brzo je dosegnuta ravnoteža vezanja. [3H] spoj A označio je očito jednu populaciju mjesta s vrlo visokim afinitetom (KD = 0.90 ± 0.14 nM). Nasuprot tome, [3H]kviskvalat, sve do sada odabrani radioaktivni ligand mGlu1 receptora, pokazao je puno veću vrijednost KD od 22.0 ± 10 nM, koja se mogla dobro korelirati s vrijednošću 37 nM dobivenu u Mutel et al., J. Neurochem, 75: 2590-2601, 2000. Osim značajno višeg afiniteta, [3H] spoj A označio je značajno više (~40%) veznih mjesta nego [3H] kviskvalat. Pronađene su vrijednosti Bmax od 6512 ± 1501 fmola/mg proteina i 3912 ± 436 fmola/mg proteina redom za [3H]spoj A i [3H]kviskvalat. To odstupanje može se objasniti na temelju vezanja receptora na G protein. Agonisti olakšavaju vezanje receptora na G protein, što rezultira konformacijom receptora s visokim afinitetom prema agonistima. Prema ovoj teoriji, potpuni agonist kao što je kviskvalat pretežno bi označio visokoafinitetno ili stanje receptora vezano na G protein. Antagonist bi imao jednaki afinitet za vezane i nevezane receptore, i prema tome za oba stanja receptora, visokog i niskog afiniteta. Naš izum da Bmax za [3H] spoj A je značajno viši nego za [3H] kviskvalat je u skladu s ovom teorijom.
Dojmljiv izum u ovoj studiji je da prirodni agonist glutamat i također kviskvalat nisu mogli inhibirati vezanje [3H]spoja A binding na mGlu1a receptor štakora CHO-dhfr- membrana, dok su CPCCOEt, BAY 36-7620, NPS 2390 i spoj A, poznati kao nekompetitivni antagonisti, svi inhibirali vezanje [3H] spoja A do iste maksimalne razine (slika 6). Inhibicija vezanja [3H] spoja A s potonjim spojevima slijedila je sigmoidne krivulje s Hillovim koeficijentima od oko 1.0 (tablica 11), što nije dalo nikakve naznake za vezanje na višestruka mjesta. Važno je spomenuti da iako je za definiranje nespecifičnog vezanja upotrijebljen strukturno povezan analogon, slično nisko nespecifično vezanje dobiveno je s nepovezanim spojevima kao što su BAY 36-7620 kada se koristi pri 1 μM ili više u rat mGlu1a receptoru štakora CHO-dhfr- membrana (slika 6). Za [3H]kviskvalat, sve strukture nalik aminokiselini, poznate kao kompetitivni ligandi, mogle su premjestiti [3H]kviskvalat s njegovog mjesta vezanja. Inhibicijske snage kviskvalata, glutamata, LY367385, (S)-3,5-DHPG, (S)-4C3HPG, 1S,3R-ACPD, (S)-4CPG, AIDA i MCPG (tablica 13) bile su u skladu s vrijednostima objavljenim u Mutel et al. J. Neurochem. 75: 2590-2601, 2000. Nasuprot tome, gornji nekompetitivni spojevi nisu utjecali na njegovo vezanje. Za CPCCOEt je objavljeno da ne utječe na vezanje [3H]glutamata na membrane iz stanica u kojima je ekspresiran mGlu1a receptor (Litschig et al., Mol. Pharmacol. 55: 453- 461, 1999). Nadalje, navedeno je da se CPCCOEt ne veže na mjesto vezanja glutamata, ali djeluje na Thr815 i Ala818 u transmembranskoj domeni VII. Za CPCCOEt je izneseno da sprečava receptorski prijenos signala ometanjem intramolekularnog međudjelovanja između izvanstanične domene vezane glutamatom i transmembranske domene VII. Caroll et al. u Mol. Pharmacol. 59: 965-973, 2001 pokazali su da BAY 36-7620 nije premjestio [3H] kviskvalat iz džepa (utora) za vezanje glutamata. Pokazalo se da transmembranske uzvojnice 4 do 7 imaju presudnu ulogu u vezanju BAY 36-7620. Naši eksperimenti inhibicije izvedeni sa [3H] spojem A i [3H] kviskvalatom ukazuju da se CPCCOEt, BAY 36-7620, NPS 2390 vežu na isto mjesto kao spoj A. Eksperimenti zasićenja pomoću [3H] spoja A u odsutnosti i prisutnosti 30 μM CPCCOEt, 100 nM BAY 36-7620 i 10 nM NPS 2390 dalje podupiru slutnju da se ovi spojevi vežu na ista ili međusobno isključiva mjesta. Vrijednosti KD su značajno porasle, dok je vrijednost Bmax bila nepromijenjena (tablica 14). Ovi rezultati ukazuju da premda se afinitet [3H] spoja A smanjuje, visoke koncentracije [3H]spoja A još mogu premjestiti vezanje drugog spoja s njegovog veznog mjesta, što je tipično svojstvo kompetitivnog međudjelovanja. Konačno, naši podaci podržavaju slutnju da CPCCOEt, BAY 36-7620, NPS 2390 i spoj A djeluju na mjesto koje je različito od džepa (utor) za vezanje glutamata, po svoj prilici se natječu za isti transmembranski segment VII.
Prethodne skupine studija vezanja I mGlu receptora u mozgu izvedene su pomoću [3H]glutamata ili [3H]kviskvalata (Schoepp i True, Neurosci. Lett. 145: 100-104, 1992, Wright et al., J. Neurochem. 63: 938-945, 1994; Mutel et al., J. Neurochem. 75: 2590-2601, 2000). Ovi radioaktivni ligandi imaju nedostatak jer označavaju više od jednog tipa receptora glutamata. Prema tome, inkubacijskom puferu trebali su se dodati selektivni inhibitori kako bi se spriječilo označavanje na ostalim podtipovima metabotropnih ili ionotropnih receptora glutamata. Do danas ne postoji radioaktivni ligand dostupan za specifično istraživanje vezanja i raspodjele mGlu1 receptora. Specifično označavanje mGlu1 receptora [3H] spojem A čini ga naročito korisnim za istraživanje mGlu1 receptora u mozgu štakora ili čovjeka. Eksperimenti u kojima su korištene membrane korteks, hipokampus, striatuma i malog mozga štakora otkrili su da je specifično vezanje [3H]spoja A, definirano u prisutnosti 1 μM spoja 135, bilo veliko, posebno u malom mozgu (samo 10 % nespecifično vezanje). Eksperimenti zasićenja pokazali su da je [3H]spoj A ponovo s vrlo visokim afinitetom vidljivo označio jedno vezno mjesto. Pronađene su vrijednosti KD od oko 1 nM za sva različita područja mozga (tablica 15). Pronađena je upadljiva razlika vrijednosti Bmax: velika populacija mjesta vezanja bila je označena u malom mozgu, dok su u hipokampusu, striatumu i korteksu otkrivene umjerene do niske razine ekspresije receptora.
Zbog svoje specifičnosti, [3H]spoj A pokazao se naročito prikladnim za istraživanje raspodjele mGlu1 receptora u sekcijama mozga pomoću autoradiografije radioaktivnog liganda. Autoradiogarfaija mGlu1 receptora otkrila je da je najviša razina mGlu1 specifičnog vezanja bila u molekularnom sloju malog mozga. Sloj zrnatih stanica bio je jako slabo označen. Ove rezultate također su pronašle Mutel et al. u J. Neurochem. 75: 2590-2601, 2000 koji su istražili raspodjelu I mGlu receptora pomoću [3H]kviskvalata. U hipokampalnoj formaciji, u CA3 dendritičnom polju zajedno s molekularnim slojem girusa dentatusa označavanje je bilo obilno. Područje CA1 pokazalo je vrlo slabo vezanje [H]spoj a A, što je u skladu s imunohistokemijskim podacima iz Lujan et al., Eur. J. Neurosci. 8: 1488-1500, 1996 i Shigemoto et al., J. Neurosci. 17: 7503-7522, 1997, koji su pokazali da CA1 dendritična polja, specifična na protutijelo za mGlu5 receptor, ali ne specifična za Glu1 receptorsko protutijelo donijela intenzivno imunooznačavanje. Eksperimenti autoradiografije pomoću [3H]kviskvalata zaista su otkrili obojenje i u CA1 i CA3 području hipokampusa, što ukazuje redom na vezanje i na Glul i mGlu5 receptor (Mutel et al., J. Neurochem. 75: 2590-2601, 2000). Vezanje [3H]spoja A također je bilo prilično visoko u talamusu, olfaktornom tuberkulumu, amigdali i retikularnom dijelu supstancije nigre te nešto niže u cerebralnom korteksu, kaudalnom dijelu putamena, nukleusu akumbensu i ventralnom dijelu paliduma. Ista struktura označena je pomoću [3H]kviskvalata (Mutel et al., J. Neurochem. 75: 2590-2601, 2000). Imunocitokemijski rezultati na staničnoj lokalizaciji mGlula receptora, pomoću protutijela selektivnog za mGlu1a receptor, također su općenito bili u skladu s našim podacima (Martin et al., Neuron. 9: 259-270, 1992). Budući se za [3H]spoj A očekuje da označi sve do danas poznate varijante mGlu1 receptora nastale naizmjeničnim sparivanjem eksona mGlu1 gena, raspodjela 1 takve varijante može se međutim razlikovati od one koju smo radioaktivno označili. Primjerice, u području CA3 i kaudalnog (stražnjeg) dijela putamena, koji su označeni radioaktivnim ligandom, pronađena je imunoreaktivnost mGlu1b receptora, ali ništa ili malo imunoreaktivnosti mGlu1a receptora (Martin et al., Neuron. 9: 259-270, 1992; Shigemoto et al., J. Neurosci. 17: 7503-7522, 1997; Ferraguti et al., J. Comp. Neur. 400: 391-407, 1998). Važan trenutak u pokazivanju identiteta mjesta označenih [3H]spojem A bio je izum da je strukturalno različit spoj BAY 36-7620 također potpuno premjestio vezanje [3H]spoja A na moždane membrane štakora (slika 9) kao i na moždane sekcije (slika 10), dajući dobru garanciju da je inhibirano vezanje u potpunosti receptor specifično i da nije povezano sa strukturalnom skupinom radioaktivnog liganda.
U ovoj prijavi, pokazali smo da je [3H]spoj A odličan radioaktivni ligand za studiju mGlu1 receptora u heterolognom ekspresijskom sustavu, homogenatima mozga štakora i moždanim sekcijama. Možemo zaključiti da zbog svog minimalnog nespecifičnog vezanja, njegovog velikog afiniteta prema i vezanju i istaknute selektivnosti, [3H]spoj A je ligand kojeg treba odabrati za daljnje istraživanje mGlu1 receptora. [3H] spoj A otvara mogućnosti za detaljnjije iistraživanje substanične i stanične lokalizacije mGlu1 receptora te za studiju funkcionalne uloge i regulacije receptora u različitim područjima.
Popis slika
Sl.1 Antagonistički profil spoja A. Inhibicija glutamatom (30 μM)-inducirane mobilizacije Ca2+ u CHO-dhfr- stanicama u kojima je ekspresiran mGlu1a receptor prikazana je na slici 1A. Podaci su izraženi kao postotak signala uz korištenje 30 μM glutamata, koji je postavljen na 100 % i predstavljaju srednju vrijednost ± SD 3 eksperimenta. Sl. 1B prikazuje krivulju koncentracije-odgovora glutamata pojedinačno ili zajedno s 20 nM, 30 nM, 60nM, 100 nM i 1 μM spoja A. Vrijednosti predstavljaju srednju vrijednost ± SD trostrukih određivanja unutar 1 eksperimenta. Dodatni eksperiment pokazao je iste rezultate. Sl. 1C pokazuje bazalnu IP akumulaciju u spoja A pri čemu su se koncentracije povećavale. Vrijednosti su izražene kao postotak proizvodnje IP u prisutnosti otapala, koja je postavljena na 100 % i predstavljaju srednju vrijednost ± SD 3 eksperimenta ponovljenih četiri puta.
Sl. 2 Specifično vezanje [3H] spoja A je linearno s obzirom na količinu membranskog proteina. 10 do 50 μg mGlula receptora štakora CHO-dhfr- membrana inkubirano je 30 min na ledu s 2.5 nM [3H]spoja A. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD trostrukih određivanja i dobiveni su iz reprezentativnog eksperimenta.
Sl. 3 Krivulja asocijecije vremenskog tijeka vezanja [3H] spoja A na mGlu1a receptor štakora CHO-dhfr- membrane. Kinetika asocijacije izmjerena je dodavanjem 2.5 nM [3H]spoja A u različitim vremenima prije filtracije i određena je na 3 različite temperature. Podaci predstavljaju srednju vrijednost ± SD 3 nezavisna eksperimenta izvedena dvaput.
Sl. 4 Vremenski tijek disocijacije [3H]spoja A na mGlu1a receptor CHO-dhfr- membrane na 4°C i 25°C. Uzorci su inkubirani 30 min na 4°C ili 25°C, zatim je dodan suvišak spoja 135 te je slijedila brza filtracija u vrijeme naznačeno za svaku vremensku točku. Podaci predstavljaju srednju vrijednost ± SD 2 nezavisna eksperimenta izvedena dvaput.
Sl. 5 Krivulja reprezentativnog vezanja zasićenjem i Scatchardov dijagram vezanja [3H]spoja A na mGlu1a receptor štakora CHO-dhfr- membrana. Specifično vezanje (SB) dobiveno je izračunavanjem razlike između ukupnog vezanja (TB) i nespecifičnog vezanja (BL), mjereno u prisutnosti 1 μM spoja 135. Za svaki eksperiment, vremenske točke određene su duplo. Eksperiment je ponovljen 3 puta.
Sl. 6 Inhibicija vezanja 2.5 nM [3H]spoja A na mGlu1a receptor CHO-dhfr- membrana različitim antagonistima mGlu receptora. Vremenske točke predstavljaju % ukupnog vezanja i one su srednja vrijednost ± SD 3-4 pojedina eksperimenta.
Sl. 7 Krivulja reprezentativnog vezanja zasićenjem i Scatchardov dijagram vezanja [3H]kviskvalata na mGlu1a receptor štakora CHO-dhfr- membrana. Za svaki eksperiment vremenske točke određene su duplo. Eksperiment je ponovljen 2 puta.
Sl. 8 Krivulje vezanja zasićenjem i Scatchardovi dijagrami vezanja [3H]spoja A na mGlu1a receptor CHO-dhfr- membrana u odsutnosti i prisutnosti CPCCOEt (30 μM), BAY 36-7620 (100 nM) i NPS 2390 (10 nM). Prikazani graf je predstavnik 3 nezavisna eksperimenta. Podaci su izraženi u specifično vezanim nM. Za svaki eksperiment, vremenske točke određene su u duplikatu.
Sl. 9 Inhibicija vezanja 2.5 nM [3H]spoja A na moždane membrane štakora s BAY 36-7620. Vremenske točke predstavljaju % ukupnog vezanja te su srednja vrijednost ± SD 2 pojedina eksperimenta.
Sl. 10: Vezanje [3H]spoja A na sagitalnim presjecima mozga štakora pomoću autoradiografije. Panel A je reprezentativna sekcija koja pokazuje ukupno vezanje s 1.5 nM [3H]spoja A. Panel B je reprezentativna i susjedna sekcija koja pokazuje nespecifično vezanje s 1.5 nM [3H]spoja A u prisutnosti 1 μM spoja 135. Panel C je reprezentativna sekcija koja pokazuje nespecifično vezanje s 1.5 nM [3H] spoja A u prisutnosti 10 μM BAY 36-7620. Sekcije iz panela A i izložene su [3H]Hyperfilm-u, dok je sekcija iz panela C izložena Fuji ploči za optičku obradu uzoraka. Th, talamus; SNr, retikularni dio supstancije nigre (crne jezgre); CA3, CA3 područje hipokampusa; Dg; girus dentatus hipokampalne formacije; Cer; mali mozak; Cp, kaudalni dio putamena ; Cx, cerebralni korteks, Ot, olfaktorni tuberkulum, Am, amigdala, Vp, ventralni dio paliduma, Na, nukleus akumbens.

Claims (20)

1. Radioaktivno označeni spoj, naznačen time, da ima Formulu (I-A)* ili (I-B)* [image] njegov N-oksidni oblik, farmaceutski prihvatljivu adicijsku sol, kvaterni amin i stereokemijski izomerni oblik, pri čemu X predstavlja O; C(R6)2 s tim da je R6 vodik, aril ili C1-6 alkil moguće supstituiran s amino ili mono- ili di(C1-6alkil)amino; S ili N-R7 s tim da je R7 amino ili hidroksi; R1 predstavlja C1-6alkil; ari; tienl; kinolinil; cikloC3-12alkil ili (cikloC3-12alkil)C1-6alkil pri čemu cikloC3-12alkilna skupina može sadržavati dvostruku vezu i pri čemu se jedan ugljikov atom u cikloC3-12alkilnoj skupini može zamijeniti s kisikovim atomom ili NR8-skupinom uz R8 je vodik, benzil ili C1-6alkiloksikarbonil; pri čemu jedan ili više vodikovih atoma u C1-6alkilnoj skupini ili u acikloC3-12alkilnoj skupini može biti zamijenjen s C1-6alkilom, hidroksiC1-6alkilom, haloC1-6alkilom, aminoC1-6alkilom, hidroksi, C1-6alkiloksi, arilC1-6alkiloksi, halo, C1-6alkiloksikarbonilom, arilom, amino, mono-ili di(C1-6alkil)amino, C1-6alkiloksikarbonilamino, halo, piperazinilom, piridinilom, morfolinilom, tienilom ili dvovalentnim radikalom formule -O-, -O-CH2-O ili -O-CH2-CH2-O-; ili radikal formule (a-1) [image] u kojem je Z1jednostruka kovalentna veza, O, NH ili CH2; Z2 je jednostruka kovalentna veza, O, NH ili CH2; n je cijeli broj 0, 1, 2 ili 3; i u kojem se svaki vodikov atom u fenilnom prstenu nezavisno može zamijeniti s halo, hidroksi, C1-6alkilom, C1-6alkiloksi ili hidroksiC1-6alkilom; ili X i R1 mogu se uzeti zajedno s ugljikovim atomom na kojeg su X i R1 vezani kako bi se oblikovao radikal formule (b-1), (b-2) ili (b-3); [image] R2 predstavlja vodik; halo; cijano; C1-6alkil; C1-6alkiloksi; C1-6alkiltio; C1-6alkilkarbonil; C1-6alkiloksikarbonil; C1-6alkilkarboniloksiC1-6alkil; C2-6alkenil; hidroksiC2-6alkenil; C2-6alkinil; hidroksiC2-6alkinil; tri(C1-6alkil)silanC2-6alkinil; amino; mono- ili di(C1-6alkil)amino; mono- ili di (C1-6alkiloksiC1-6alkil) amino; mono- ili di(C1-6alkiltioC1-6alkl)amino; aril; arilC1-6alkil; arilC2-6alkinil; C1-6alkiloksiC1-6alkilaminoC1-6alkil; aminokarbonil moguće supstituiran s C1-6alkilom, C1-6alkiloksiC1-6alkilom, C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkilom ili piridinilC1-6alkilom; heterocikl izabran između tienila, furanila, pirolila, tiazolila, oksazolila, imidazolila, izotiazolila, izoksazolila, pirazolila, piridila, pirazinila, piridazinila, pirimidinila, piperidinila i piperazinila, moguće N-supstituiran s C1-6alkiloksiC1-6alkilom, morfolinilom, tiomorfolinilom, dioksanilom ili ditianilom; radikal -NH-C(=O)R9 u kojem R9 predstavlja C1-6alkil moguće supstituiran s cikloC3-12alkilom, C1-6alkiloksi, C1-6alkiloksikarbonilom, arilom, ariloksi, tienilom, piridinilom, mono- ili di(C1-6alkil)amino, C1-6alkiltio, benziltio, piridiniltio ili pirimidiniltio; cikloC3-12alkilom; cikloheksenilom; amino; arilcikloC3-12alkilamino; mono- ili -di(C1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksikarbonil)amino; mono- ili di(C2-6alkenil)amino; mono- ili di(arilC1-6alkil)amino; mono- ili diarilamino; arilC2-6alkenilom; furanilC2-6alkenilom; piperididinilom; piperazinilom; indolilom; furilom; benzofurilom; tetrahidrofurilom; indenilom; adamantilom; piridinilom; pirazinilom; arilom; arilC1-6alkiltio ili radikalom formule (a-1); sulfonamid -NH-SO2-R10 u kojem R10 predstavlja C1-6alkil, mono-ili polihaloC1-6alkil, arilC1-6alkil, arilC2-6alkenil, aril, kinolinil, izoksazolil ili di(C1-6alkil)amino; svaki R3 i R4 nezavisno predstavlja vodik; halo; hidroksi; cijano; C1-6alkil; C1-6alkiloksi; C1-6alkiloksiC1-6alkil; C1-6alkilkarbonil; C1-6alkiloksikarbonil; C2-6alkenil; hidroksiC2-6alkenil; C2-6alkinil; hidroksiC2-6alkinil; tri(C1-6alkil)silanC2-6alkinil; amino; mono- ili di(C1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksiC1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiltioC1-6alkil)amino; aril; morfolinilC1-6alkil ili piperidinilC1-6alkil; ili R2 i R3 mogu se uzeti zajedno i oblikovati -R2-R3, koji predstavlja dvovalentni radikal formule -(CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)6-, -CH=CH-CH=CH-, -Z4-CH=CH-, -CH=CH-Z4-, -Z4-CH2-CH2-CH2-, CH2-Z4-CH2-CH2-, -CH2-CH2-Z4-CH2-, -CH2-CH2-CH2-Z4-, -Z4-CH2-CH2-, -CH2-Z4-CH2- ili -CH2-CH2-Z4-, uz Z4 je O, S, SO2 ili NR11 pri čemu je R11 vodik, C1-6alkil, benzil ili C1-6alkiloksikarbonil; i pri čemu je svaki dvovalentni radikal moguće supstituiran s C1-6alkilom. ili R3 i R4 mogu se uzeti zajedno i oblikovati dvovalentni radikal formule -CH=CH-CH=CH- ili -CH2-CH2-CH2-CH2-; R5 predstavlja vodik; cikloC3-12alkil; piperidinil; okso-tienil; tetrahidrotienil, arilC1-6alkil; C1-6alkiloksiC1-6alkil; C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkil ili C1-6alkil moguće supstituiran radikalom C(=O)NRxRy, u kojem su Rx i Ry, svaki nezavisno, vodik, cikloC3-12alkil, C2-6alkinil ili C1-6alkil moguće supstituiran s cijano, C1-6alkiloksi, C1-6alkiloksikarbonilom, furanilom, pirolidinilom, benziltio, piridinilom, pirolilom ili tienilom; Y predstavlja O ili S; ili Y i R5 mogu se uzeti zajedno i oblikovati =Y-R5- koji predstavlja radikal formule -CH=N-N= (c-1); -N=N-N= (c-2); ili -N-CH=CH- (c-3); aril predstavlja fenil ili naftil moguće supstituiran s jednim ili više supstituenata izabranih između halo, hidroksi, C1-6alkila, C1-6alkiloksi, feniloksi, nitro, amino, tio, C1-6alkiltio, haloC1-6alkila, polihaloC1-6alkila, polihaloC1-6alkiloksi, hidroksiC1-6alkila, C1-6alkiloksiC1-6alkila, aminoC1-6alkila, mono- ili di(C1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkil)aminoC1-6alkila, cijano, -CO-R12, -CO-OR13, -NR13SO2R12, -SO2-NR13R14, -NR13C(O)R12, -C(O)NR13R14, -SOR12, -SO2R12; pri čemu svaki R12, R13 i R14 nezavisno predstavlja C1-6alkil; cikloC3-6alkil; fenil; fenil supstituiran s halo, hidroksi, C1-6alkilom, C1-6alkiloksi, haloC1-6alkilom, polihaloC1-6alkilom, furanilom, tienilom, pirolilom, imidazolilom, tiazolilom ili oksazolilom; i kada je R1-C(=X) skupina vezana na poziciju drugačiju od pozicije 7 ili 8, tada se spomenuta pozicija 7 i 8 može supstituirati s R15 i R16 pri čemu bilo jedan ili oba R15 i R16 predstavlja C1-6alkii, C1-6alkiloksi ili R15 i R16 uzeti zajedno mogu oblikovati dvovalentni radikal formule -CH=CH-CH=CH-.
2. Radioaktivno označeni spoj u skladu sa zahtjevom 1, naznačen time, da X predstavlja O, C(R6)2 s tim da je R6 vodik ili aril; ili N-R7 s tim da R7 je amino ili hidroksi; R1 predstavlja C1-6alkil; aril; tienl; kinolinil; cikloC3-12alkil ili (cikloC3-12alkil)C1-6alkil pri čemu cikloC3-12alkilna skupina može sadržavati dvostruku vezu i pri čemu se jedan ugljikov atom u cikloC3-12alkilnoj skupini može zamijeniti s kisikovim atomom ili NR8-skupinom s tim da R8 je vodik, benzil ili C1-6alkiloksikarbonil; pri čemu jedan ili više vodikovih atoma u C1-6alkilnoj skupini ili u cikloC3-12alkilnoj skupini može biti zamijenjen s C1-6alkilom, haloC1-6alkilom, hidroksi, C1-6alkiloksi, arilC1-6alkiloksi, halo, arilom, mono- ili di (C1-6alkil) amino, C1-6alkiloksikarbonilamino, halo, piperazinilom, piridinilom, morfolinilom, tienilom ili dvovalentnim radikalom formule -O-, -O-CH2-O ili -O-CH2-CH2-O-; ili radikal formule (a-1) [image] u kojem Z1je jednostruka kovalentna veza, O ili CH2; Z2 je jednostruka kovalentna veza, O ili CH2; n je cijeli broj 0, 1, ili 2; i u kojem se svaki vodikov atom u fenilnom prstenu nezavisno može zamijeniti s halo ili hidroksi; ili X i R1 mogu se uzeti zajedno s ugljikovim atomom na kojeg su X i R1 vezani kako bi se oblikovao radikal formule (b-1), (b-2) ili (b-3); [image] R2 predstavlja vodik; halo; cijano; C1-6alkil; C1-6alkiloksi; C1-6alkiltio; C1-6alkilkarbonil; C1-6alkiloksikarbonil; C2-6alkenil; hidroksiC2-6alkenil; C2-6alkinil; hidroksiC2-6alkinil; tri(C1-6alkil) silanC2-6alkinil; amino; mono- ili di(C1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksiC1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiltioC1-6alkl)amino; aril; arilC1-6alkil; arilC2-6alkinil; C1-6alkiloksiC1-6alkilaminoC1-6alkil; aminokarbonil moguće supstituiran s C1-6alkiloksi-karbonilC1-6alkilom; heterocikl izabran između tienila, furanila, tiazolila i piperidinila, moguće N-supstituiran s morfolinilom ili tiomorfolinilom; radikal -NH-C(=O)R9 u kojem R9 predstavlja C1-6alkil moguće supstituiran s cikloC3-12alkilom, C1-6alkiloksi, C1-6alkiloksikarbonilom, arilom, ariloksi, tienilom, piridinilom, mono- ili di(C1-6alkil)amino, C1-6alkiltio, benziltio, piridiniltio ili pirimidiniltio; cikloC3-12alkil; cikloheksenil; amino; arilcikloC3-12alkilamino; mono- ili -di(C1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkil)amino; mono- ili di(C1-6alkiloksikarbonil)amino; mono- ili di(C2-6alkenil)amino; mono- ili di(arilC1-6alkil)amino; mono- ili diarilamino; arilC2-6alkenil; furanilC2-6alkenil; piperididinil; piperazinil; indolil; furil; benzofuril; tetrahidrofuril; indenil; adamantil; piridinil; pirazinil; aril; ili radikal formule (a-1); sulfonamid -NH-SO2-R10 u kojem R10 predstavlja C1-6alkil, mono- ili polihaloC1-6alkil, arilC1-6alkil, ili aril; svaki R3 i R4 nezavisno predstavlja vodik; C1-6alkil; C1-6alkiloksiC1-6alkil; C1-6alkiloksikarbonil; ili R2 i R3 mogu se uzeti zajedno i oblikovati -R2-R3, koji predstavlja dvovalentni radikal formule -(CH2)4-, -(CH2)5-, -Z4-CH=CH-, -Z4-CH2-CH2-CH2- ili -Z4-CH2-CH2- uz Z4 je O, S, SO2 ili NR11 pri čemu je R11 vodik, C1-6alkil, benzil ili C1-6alkiloksikarbonil; i pri čemu je svaki dvovalentni radikal moguće supstituiran s C1-6alkilom; ili R3 i R4 mogu se uzeti zajedno i oblikovati dvovalentni radikal formule -CH=CH-CH=CH- ili -CH2-CH2-CH2-CH2-; R5 predstavlja vodik; piperidinil; okso-tienil; tetrahidrotienil, arilC1-6alkil; C1-6alkiloksikarbonilC1-6alkil ili C1-6alkil moguće supstituiran s radikalom C(=O)NRxRy, u kojem su Rx i Ry, svaki nezavisno, vodik, cikloC3-12alkil, C1-6alkinil ili C1-6alkil moguće supstituiran s cijano, C1-6alkiloksi, C1-6alkiloksikarbonilom; Y predstavlja O ili S; ili Y i R5 mogu se uzeti zajedno i oblikovati =Y-R5- koji predstavlja radikal formule -CH=N-N= (c-1); ili -N=N-N= (c-2); aril predstavlja fenil ili naftil moguće supstituiran s jednim ili više supstituenata izabranih između halo, C1-6alkiloksi, feniloksi, mono- ili di(C1-6alkil)amino i cijano; i kada je R1-C(=X) skupina vezana na poziciju drugačiju od pozicije 7 ili 8, tada se spomenuta pozicija 7 i 8 može supstituirati s R15 i R16 pri čemu bilo jedan ili oba R15 i R16 predstavlja C1-6alkil ili R15 i R16 uzeti zajedno mogu oblikovati dvovalentni radikal formule -CH=CH-CH=CH-.
3. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-2, naznačen time, da X predstavlja O; R1 predstavlja C1-6alkil; cikloC3-12alkil ili (cikloC3-12alkil)C1-6alkil, pri čemu se jedan ili više vodikovih atoma u C1-6alkilnoj skupini ili u cikloC1-6alkilnoj skupini može zamijeniti s C1-6alkiloksi, arilom, halo ili tienilom; R2 predstavlja vodik; halo; C1-6alkil ili amino; svaki R3 i R4 nezavisno predstavlja vodik ili C1-6alkil; ili R2 i R3 mogu se uzeti zajedno i oblikovati -R2-R3-, koji predstavlja dvovalentni radikal formule -Z4-CH2-CH2-CH2- ili -Z4-CH2-CH2- uz Z4 je O ili NR11 pri čemu je R11 C1-6alkil; i pri čemu svaki dvovalentni radikal može biti supstituiran s C1-6alkilom; ili R3 i R4 mogu se uzeti zajedno i oblikovati dvovalentni radikal formule -CH2-CH2-CH2-CH2-; R5 predstavlja vodik; Y predstavlja O; i aril predstavlja fenil moguće supstituiran s halo.
4. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-3, naznačen time, da je dio R1-C (=X) povezan s kinolinskim ili kinolinonskim članom na položaju 6.
5. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-4, naznačen time, da spoj sadrži barem jedan radioaktivni atom.
6. Radioaktivno označeni spoj u skladu sa zahtjevom 5, naznačen time, da je radioaktivni izotop izabran iz skupine 3H, 11C i 18F.
7. Radioaktivno označeni spoj u skladu sa zahtjevom 6, naznačen time, da je spoj bilo koji od spojeva (a), (b), (c), (d) i (e) : [image]
8. Radioaktivno označeni spoj u skladu sa zahtjevom 6, naznačen time, da je taj spoj spoj (a).
9. Radioaktivni pripravak za davanje sisavcima, naznačen time, da sadrži terapeutski djelotvornu količinu radioaktivno označenog spoja u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-8 i farmaceutski prihvatljivi prijenosnik ili razrjeđivač.
10. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-8 ili pripravak u skladu sa zahtjevom 9, naznačen time, da je za uporabu u dijagnostičkom postupku.
11. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-8 ili pripravak u skladu sa zahtjevom 9, naznačen time, da se dijagnostički postupak sastoji u označavanju ili identificiranju mGlu1 receptora u biološkom materijalu.
12. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-8 ili pripravak u skladu sa zahtjevom 9, naznačen time, da se označavanje sastoji od unošenja radioaktivno označenog spoja u biološki materijal i da se identificiranje sastoji u otkrivanju emitiranja iz radioaktivno označenog spoja.
13. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-8 ili pripravak u skladu sa zahtjevom 9, naznačen time, da se dijagnostički postupak sastoji u praćenju da li testni spoj praćenje da li testni spoj ima sposobnost zauzimanja ili vezivanja na receptor mGlu1 u biološkom materijalu.
14. Radioaktivno označeni spoj ili pripravak u skladu s bilo kojim od zahtjeva 11-13, naznačen time, da je biološki materijal izabran iz skupine uzoraka tkiva, plazmatskih fluida, tjelesnih tekućina, dijelova tijela ili organa koji potječu od toplokrvnih životinja i toplokrvnih životinja kao takvih, posebno ljudi.
15. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-8 ili pripravak u skladu sa zahtjevom 9, naznačen time, da služi za izradu dijagnostičkog alata za označavanje ili identificiranje mGlu1 u biološkom materijalu.
16. Uporaba radioaktivno označenog spoja ili pripravka u skladu sa zahtjevom 15, naznačena time, da se označavanje sastoji od unošenja radioaktivno označenog spoja u biološki materijal i da se identificiranje sastoji u otkrivanju emitiranja iz radioaktivno označenog spoja.
17. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-8 ili pripravak u skladu sa zahtjevom 9, naznačen time, da služi za izradu dijagnostičkog alata za praćenje da li testni spoj ima sposobnost zauzimanja ili vezivanja na receptor mGlu1 u biološkom materijalu.
18. Radioaktivno označeni spoj u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-8 ili pripravak u skladu sa zahtjevom 9, naznačen time, da je za izradu dijagnostičkog alata za predočavanje organa, tako da se dostatna količina radioaktivno označenog spoja u skladu s bilo kojim od zahtjeva 1-8 ili pripravka unese u prikladnom pripravku u biološki materijal, pri čemu se spomenuti radioaktivno označeni spoj veže na mjesta receptora mGlu1 u biološkom materijalu; i otkrivanje emitiranja iz radioaktivno označenog spoja.
19. Uporaba radioaktivno označenog spoja ili pripravka u skladu sa zahtjevom 18, naznačena time, da je za izradu dijagnostičkog alata za predočavanje organa, pri čemu se to predočavanje izvodi primjenom Pozitronske Emisijske Tomografije (PET).
20. Uporaba radioaktivno označenog spoja ili pripravka u skladu s bilo kojim od zahtjeva 15 do 19, naznačena time,, da je biološki materijal izabran iz skupine uzoraka tkiva, plazmatskih fluida, tjelesnih tekućina, dijelova tijela i organa koji potječu od toplokrvnih životinja i toplokrvnih životinja kao takvih, posebno ljudi.
HR20040870A 2002-03-29 2004-09-21 Radiolabelled quinoline and quinolinone derivatives and their use as metabotropic glutamate receptorligands HRP20040870A2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP02076254 2002-03-29
PCT/EP2003/003240 WO2003082350A2 (en) 2002-03-29 2003-03-26 Radiolabelled quinoline and quinolinone derivatives and their use as metabotropic glutamate receptor ligands

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HRP20040870A2 true HRP20040870A2 (en) 2005-06-30

Family

ID=28459531

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HR20040870A HRP20040870A2 (en) 2002-03-29 2004-09-21 Radiolabelled quinoline and quinolinone derivatives and their use as metabotropic glutamate receptorligands

Country Status (19)

Country Link
US (1) US7517517B2 (hr)
EP (1) EP1492571A2 (hr)
JP (1) JP4573533B2 (hr)
KR (1) KR101061561B1 (hr)
CN (1) CN1642580B (hr)
AU (1) AU2003226737B2 (hr)
BR (1) BR0308945A (hr)
CA (1) CA2479109C (hr)
EA (1) EA009334B1 (hr)
HK (1) HK1079700A1 (hr)
HR (1) HRP20040870A2 (hr)
IL (1) IL164299A (hr)
MX (1) MXPA04009435A (hr)
NO (1) NO330688B1 (hr)
NZ (1) NZ535438A (hr)
PL (1) PL218788B1 (hr)
UA (1) UA78548C2 (hr)
WO (1) WO2003082350A2 (hr)
ZA (1) ZA200407820B (hr)

Families Citing this family (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7344702B2 (en) 2004-02-13 2008-03-18 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Contrast agents for myocardial perfusion imaging
JP4864717B2 (ja) 2003-11-20 2012-02-01 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ ポリ（ａｄｐ−リボース）ポリメラーゼインヒビターとしての７−フェニルアルキル置換２−キノリノンおよび２−キノキサリノン
BRPI0416206A (pt) 2003-11-20 2006-12-26 Janssen Pharmaceutica Nv 2-quinolinonas e 2-quinoxalinonas substituìdas por 6-alquenila e 6-fenilalquila como inibidores de polimerase de poli(adp-ribose)
EA010592B1 (ru) * 2003-12-10 2008-10-30 Янссен Фармацевтика Н.В. 6-замещённые циклогексилалкил 2-замещённые хинолиноны и 2-хиноксалиноны в качестве ингибиторов поли(adp-рибоза)полимеразы
TWI301760B (en) * 2004-02-27 2008-10-11 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Tetrahydroquinolinones and their use as antagonists of metabotropic glutamate receptors
US7550482B2 (en) 2004-02-27 2009-06-23 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Tetrahydroquinolones and their use as modulators of metabotropic glutamate receptors
WO2005108370A1 (ja) 2004-04-16 2005-11-17 Ajinomoto Co., Inc. ベンゼン化合物
US7485283B2 (en) 2004-04-28 2009-02-03 Lantheus Medical Imaging Contrast agents for myocardial perfusion imaging
AU2005259190B2 (en) 2004-06-30 2011-05-12 Janssen Pharmaceutica N.V. Quinazolinedione derivatives as PARP inhibitors
ES2563954T3 (es) 2004-06-30 2016-03-16 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de ftalazina como inhibidores de PARP
EA012416B1 (ru) 2004-06-30 2009-10-30 Янссен Фармацевтика Н.В. Производные замещенного 2-алкилхиназолинона как ингибиторы parp
US20060074083A1 (en) * 2004-10-05 2006-04-06 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Cyclic and acyclic propenones for treating CNS disorders
WO2006094639A1 (en) * 2005-03-04 2006-09-14 F.Hoffmann-La Roche Ag Pyridine-2-carboxamide derivatives as mglur5 antagonists
US7824659B2 (en) 2005-08-10 2010-11-02 Lantheus Medical Imaging, Inc. Methods of making radiolabeled tracers and precursors thereof
AR059898A1 (es) 2006-03-15 2008-05-07 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de 3-ciano-piridona 1,4-disustituida y su uso como moduladores alostericos de los receptores mglur2
TW200845978A (en) * 2007-03-07 2008-12-01 Janssen Pharmaceutica Nv 3-cyano-4-(4-tetrahydropyran-phenyl)-pyridin-2-one derivatives
TW200900065A (en) 2007-03-07 2009-01-01 Janssen Pharmaceutica Nv 3-cyano-4-(4-pyridinyloxy-phenyl)-pyridin-2-one derivatives
AU2008223793B2 (en) 2007-03-08 2012-08-23 Janssen Pharmaceutica Nv Quinolinone derivatives as PARP and TANK inhibitors
BRPI0811844A2 (pt) * 2007-05-21 2014-11-18 Reviva Pharmaceuticals Inc Composto, e, método para tratar um paciente
AU2008297877C1 (en) 2007-09-14 2013-11-07 Addex Pharma S.A. 1,3-disubstituted-4-phenyl-1 H-pyridin-2-ones
BRPI0816767B8 (pt) 2007-09-14 2021-05-25 Addex Pharmaceuticals Sa composto 4-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2h,1'h-[1,4']bipiridi¬nil-2'-onas 1',3'-dissubstituídas, composição farmacêutica e uso dos mesmos
US8252937B2 (en) 2007-09-14 2012-08-28 Janssen Pharmaceuticals, Inc. 1,3-disubstituted 4-(aryl-X-phenyl)-1H-pyridin-2-ones
ES2448870T3 (es) 2007-10-26 2014-03-17 Janssen Pharmaceutica, N.V. Derivados de quinolina como inhibidores de PARP
US8785486B2 (en) * 2007-11-14 2014-07-22 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Imidazo[1,2-A]pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of mGluR2 receptors
DK2257315T3 (da) 2008-02-29 2020-01-27 Lantheus Medical Imaging Inc Kontrastmidler til anvendelser omfattende perfusionsbilleddannelse
RU2490260C2 (ru) 2008-03-27 2013-08-20 Янссен Фармацевтика Нв Тетрагидрофенантридиноны и тетрагидроциклопентахинолиноны в качестве ингибиторов parp и ингибиторов полимеризации тубулина
ATE513818T1 (de) 2008-03-27 2011-07-15 Janssen Pharmaceutica Nv Chinazolinonderivate als tubulinpolymerisationshemmer
ES2439291T3 (es) 2008-09-02 2014-01-22 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Derivados de 3-azabiciclo[3.1.0]hexilo como moduladores de receptores de glutamato metabotrópicos
EP2346505B1 (en) 2008-10-16 2014-04-23 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Indole and benzomorpholine derivatives as modulators of metabotropic glutamate receptors
WO2010060589A1 (en) 2008-11-28 2010-06-03 Ortho-Mcneil-Janssen Pharmaceuticals, Inc. Indole and benzoxazine derivatives as modulators of metabotropic glutamate receptors
CN107261159B (zh) 2009-04-15 2021-01-12 兰休斯医疗成像公司 使用抗坏血酸稳定化放射性药物组合物
CN102439008B (zh) 2009-05-12 2015-04-29 杨森制药有限公司 1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶衍生物及其用于治疗或预防神经和精神病症的用途
NZ596053A (en) 2009-05-12 2013-05-31 Janssen Pharmaceuticals Inc 1,2,4-triazolo[4,3-a]pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of mglur2 receptors
MY153913A (en) 2009-05-12 2015-04-15 Janssen Pharmaceuticals Inc 7-aryl-1,2,4-triazolo[4,3-a]pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of mglur2 receptors
SG183134A1 (en) 2010-02-08 2012-09-27 Lantheus Medical Imaging Inc Methods and apparatus for synthesizing imaging agents, and intermediates thereof
ES2536433T3 (es) 2010-11-08 2015-05-25 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Derivados de 1,2,4-triazolo[4,3-a]piridina y su uso como moduladores alostéricos positivos de receptores mGluR2
US8993591B2 (en) 2010-11-08 2015-03-31 Janssen Pharmaceuticals, Inc. 1,2,4-triazolo[4,3-a] pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of MGLUR2 receptors
US9271967B2 (en) 2010-11-08 2016-03-01 Janssen Pharmaceuticals, Inc. 1,2,4-triazolo[4,3-a]pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of mGluR2 receptors
EP2877166B1 (en) * 2012-07-27 2018-02-28 Biogen MA Inc. 1-[7-(cis-4-methyl-cyclohexyloxy)-8-trifluoromethyl-naphthalen-2-ylmethyl]-piperidine-4-carboxylic acid derivatives as autotaxin (ATX) modulators for treating inflammations and autoimmune disorders
AU2013203000B9 (en) 2012-08-10 2017-02-02 Lantheus Medical Imaging, Inc. Compositions, methods, and systems for the synthesis and use of imaging agents
BR112015007159A2 (pt) * 2012-09-28 2017-07-04 Bayer Cropscience Ag compostos heterocíclicos que contêm azoto para o controle de doenças de plantas
AR093017A1 (es) 2012-10-16 2015-05-13 Janssen Pharmaceutica Nv MODULARES DE RORgT DE QUINOLINILO UNIDOS POR METILENO
JP6250686B2 (ja) 2012-10-16 2017-12-20 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． Ｒｏｒγｔのヘテロアリール結合させたキノリニルモジュレータ
JP6251277B2 (ja) 2012-10-16 2017-12-20 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． ＲＯＲ−ガンマ−ｔのフェニル結合キノリニルモジュレーター
JO3368B1 (ar) 2013-06-04 2019-03-13 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات 6، 7- ثاني هيدرو بيرازولو [5،1-a] بيرازين- 4 (5 يد)- اون واستخدامها بصفة منظمات تفارغية سلبية لمستقبلات ميجلور 2
JO3367B1 (ar) 2013-09-06 2019-03-13 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات 2،1، 4- ثلاثي زولو [3،4-a] بيريدين واستخدامها بصفة منظمات تفارغية موجبة لمستقبلات ميجلور 2
WO2015039003A1 (en) * 2013-09-13 2015-03-19 Georgia State University Research Foundation, Inc. Modulating drug effects against metabotropic glutamate receptor with extracellular calcium
US9624225B2 (en) 2013-10-15 2017-04-18 Janssen Pharmaceutica Nv Quinolinyl modulators of RORγt
ES2770727T3 (es) 2013-10-15 2020-07-02 Janssen Pharmaceutica Nv Moduladores de quinilonila enlazados a alquilo de ROR(gamma)t
US9403816B2 (en) 2013-10-15 2016-08-02 Janssen Pharmaceutica Nv Phenyl linked quinolinyl modulators of RORγt
US9328095B2 (en) 2013-10-15 2016-05-03 Janssen Pharmaceutica Nv Heteroaryl linked quinolinyl modulators of RORgammat
US10555941B2 (en) 2013-10-15 2020-02-11 Janssen Pharmaceutica Nv Alkyl linked quinolinyl modulators of RORγt
US9221804B2 (en) 2013-10-15 2015-12-29 Janssen Pharmaceutica Nv Secondary alcohol quinolinyl modulators of RORγt
US9284308B2 (en) 2013-10-15 2016-03-15 Janssen Pharmaceutica Nv Methylene linked quinolinyl modulators of RORγt
DK3096790T3 (da) 2014-01-21 2019-10-07 Janssen Pharmaceutica Nv Kombinationer omfattende positive allosteriske modulatorer eller orthosteriske agonister af metabotrop glutamaterg subtype 2-receptor og anvendelse af disse
DK3431106T3 (da) 2014-01-21 2021-03-15 Janssen Pharmaceutica Nv Kombinationer omfattende positive allosteriske modulatorer eller orthosteriske agonister af metabotrop glutamaterg subtype 2-receptor og anvendelse af disse
CN105949190B (zh) * 2016-07-04 2018-06-29 烟台凯博医药科技有限公司 一种制备1，8-萘啶及衍生物的方法
CN110872252B (zh) * 2019-12-12 2021-06-29 北京成宇化工有限公司 3-甲基喹啉-8-磺酰氯的制备方法

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2526232A (en) * 1946-10-21 1950-10-17 Parke Davis & Co Substituted hydantoins and methods for obtaining the same
GB1013224A (en) * 1962-06-21 1965-12-15 Ici Ltd Heterocyclic aminoethanols
JPS5566560A (en) * 1978-11-14 1980-05-20 Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd Quinolone derivative
US4348398A (en) * 1980-12-23 1982-09-07 Merck Sharp & Dohme (I.A.) Corp. Quinolinyl ethanolamines
EP0062001B1 (de) * 1981-03-24 1987-05-27 Ciba-Geigy Ag Acyl-chinolinonderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung, diese enthaltende pharmazeutische Präparate und ihre Verwendung
GB8307831D0 (en) * 1983-03-22 1983-04-27 Fujisawa Pharmaceutical Co Triazine derivatives
JPH0776838B2 (ja) * 1988-10-05 1995-08-16 富士ゼロックス株式会社 電子写真感光体及び画像形成方法
US4931270A (en) 1988-07-07 1990-06-05 Nelson Research & Development Method for detecting dopaminergic diseases using fluorine-18 radiolabelled D2 dopamine receptor ligands
PH31245A (en) * 1991-10-30 1998-06-18 Janssen Pharmaceutica Nv 1,3-Dihydro-2H-imidazoÄ4,5-BÜ-quinolin-2-one derivatives.
US5441963A (en) * 1991-12-20 1995-08-15 Merrell Dow Pharmaceuticals Potentiation of NMDA antagonists
US5475007A (en) * 1993-05-28 1995-12-12 The Regents Of The University Of California 1,2,3,4-tetrahydroquinoline-2,3,4-trione-3 or 4-oximes and the use thereof
JPH0733743A (ja) * 1993-07-22 1995-02-03 Kyorin Pharmaceut Co Ltd ２−アリール−４−キノリノール誘導体
US5597922A (en) * 1994-07-29 1997-01-28 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University And The University Of Oregon Glycine receptor antagonist pharmacophore
AU3414295A (en) 1994-08-19 1996-03-14 Nps Pharmaceuticals, Inc. Methods and compounds active at metabotropic glutamate receptors useful for treatment of neurological disorders and diseases
JPH08295690A (ja) * 1995-04-26 1996-11-12 Tokuyama Corp クロメン化合物
AU1529297A (en) * 1996-01-24 1997-08-20 Warner-Lambert Company Method of imaging amyloid deposits
US5958919A (en) * 1996-09-20 1999-09-28 Washington University Treatment of presymptomatic alzheimer's disease to prevent neuronal degeneration
US6204292B1 (en) * 1997-07-18 2001-03-20 Georgetown University Bicyclic metabotropic glutamate receptor ligands
JP2001524468A (ja) * 1997-11-21 2001-12-04 エヌピーエス ファーマシューティカルズ インコーポレーテッド 中枢神経系疾患を治療するための代謝調節型グルタミン酸受容体アンタゴニスト
BR9913315A (pt) * 1998-08-27 2001-05-22 Pfizer Prod Inc Derivados de quinolin-2-ona úteis como agentes anticâncer
JP2000169450A (ja) * 1998-09-30 2000-06-20 Kyorin Pharmaceut Co Ltd ６―アリ―ルキノリンカルボン酸誘導体とその付加塩及びそれらの製造方法
UA71592C2 (uk) * 1998-12-23 2004-12-15 Янссен Фармацевтика Н.В. Похідні 1,2-анельованого хіноліну, спосіб їх одержання (варіанти), фармацевтична композиція, що їх містить, проміжна сполука та спосіб її одержання
TR200201297T2 (tr) * 1999-02-11 2002-06-21 Pfizer Products Inc. Antikanser maddeleri olarak faydalı heteroaril-ikame edilmiş kinolin-2-on türevleri.
EP1262195A4 (en) * 2000-03-07 2003-05-21 Takeda Chemical Industries Ltd VASOACTIVE AGENTS
PL360677A1 (en) * 2000-10-02 2004-09-20 Janssen Pharmaceutica N.V. Metabotropic glutamate receptor antagonists

Also Published As

Publication number Publication date
CN1642580A (zh) 2005-07-20
IL164299A (en) 2010-11-30
AU2003226737A1 (en) 2003-10-13
NO20044635L (no) 2004-10-27
CN1642580B (zh) 2010-05-26
US7517517B2 (en) 2009-04-14
EA009334B1 (ru) 2007-12-28
HK1079700A1 (en) 2006-04-13
CA2479109C (en) 2011-08-02
JP4573533B2 (ja) 2010-11-04
US20060083676A1 (en) 2006-04-20
UA78548C2 (en) 2007-04-10
MXPA04009435A (es) 2005-01-25
PL371607A1 (en) 2005-06-27
BR0308945A (pt) 2005-01-04
WO2003082350A2 (en) 2003-10-09
NO330688B1 (no) 2011-06-06
WO2003082350A3 (en) 2004-03-04
EP1492571A2 (en) 2005-01-05
JP2005524679A (ja) 2005-08-18
KR20040093711A (ko) 2004-11-08
IL164299A0 (en) 2005-12-18
PL218788B1 (pl) 2015-01-30
CA2479109A1 (en) 2003-10-09
AU2003226737B2 (en) 2008-09-04
KR101061561B1 (ko) 2011-09-02
EA200401285A1 (ru) 2005-02-24
NZ535438A (en) 2006-08-31
ZA200407820B (en) 2005-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HRP20040870A2 (en) Radiolabelled quinoline and quinolinone derivatives and their use as metabotropic glutamate receptorligands
CA2815120A1 (en) Radiolabelled mglur2 pet ligands
Pichika et al. Nicotinic α4β2 receptor imaging agents: part II. Synthesis and biological evaluation of 2-[18F] fluoro-3-[2-((S)-3-pyrrolinyl) methoxy] pyridine (18F-nifene) in rodents and imaging by PET in nonhuman primate
Labas et al. Synthesis, evaluation and metabolic studies of radiotracers containing a 4-(4-[18F]-fluorobenzyl) piperidin-1-yl moiety for the PET imaging of NR2B NMDA receptors
US6241964B1 (en) F-18 radiolabeled neurokinin-1 receptor antagonists
KR20230008183A (ko) 진단을 위한 신규한 화합물
US6416735B1 (en) Ligands for α-7 nicotinic acetylcholine receptors based on methyllcaconitine
JP2017537917A (ja) 放射標識されたｍＧｌｕＲ２ ＰＥＴリガンド
Maisonial et al. Synthesis, radiofluorination and pharmacological evaluation of a fluoromethyl spirocyclic PET tracer for central σ1 receptors and comparison with fluoroalkyl homologs
Mu et al. Synthesis and pharmacological evaluation of [11C] granisetron and [18F] fluoropalonosetron as PET probes for 5-HT3 receptor imaging
Roger et al. Synthesis, radiosynthesis and In vivo evaluation of 5-[3-(4-Benzylpiperidin-1-yl) prop-1-ynyl]-1, 3-dihydrobenzoimidazol-2-[11C] one, as a potent NR1A/2B subtype selective NMDA PET radiotracer
US5154913A (en) Radioiodinated benzamines method of their use as radioimaging agents
WO1998049900A1 (en) Haloisoquinoline carboxamide
US20160045625A1 (en) [11c] and [18f] labeled 1,3-diphenyl-5-(pyrimidin-2-yl)-pyridin-2(1h)-one derivatives and their use for pet imaging of the ampa receptor
Lohith et al. Evaluation in monkey of two candidate PET radioligands,[11C] RX‐1 and [18F] RX‐2, for imaging brain 5‐HT4 receptors
Khare et al. N-(3-Iodophenyl) trozamicol (IPHT) and related inhibitors of vesicular acetylcholine transport: synthesis and preliminary biological characterization
Ishiwata et al. Synthesis and evaluation of 5-HT3 receptor antagonist [11C] KF17643
Thominiaux et al. Radiosynthesis of (E)-N-(2-[11C] methoxybenzyl)-3-phenyl-acrylamidine, a novel subnanomolar NR2B subtype-selective NMDA receptor antagonist
Milicevic Sephton et al. Synthesis and biological evaluation of quinoxaline derivatives for PET imaging of the NMDA receptor
KR101579496B1 (ko) ｍＧlｕＲ5의 표식용 방사성 조성물
CA2499825C (en) Radiolabeled neurokinin-1 receptor antagonists
이보은 Identification of a PET radioligand for metabotropic glutamate receptor subtype 1 (mGluR1) imaging in rat brain
RuszkIEWICZ et al. Metabolites of [* FIAltanserin: Implications for Kinetic Modeling

Legal Events

Date Code Title Description
A1OB Publication of a patent application
ARAI Request for the grant of a patent on the basis of the submitted results of a substantive examination of a patent application
ODRP Renewal fee for the maintenance of a patent

Payment date: 20140210

Year of fee payment: 12

OBST Application withdrawn