FI98569C - Heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan käyttö analyytin määritykseen, vastaava määritysmenetelmä sekä tähän sopiva aine - Google Patents
Heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan käyttö analyytin määritykseen, vastaava määritysmenetelmä sekä tähän sopiva aine Download PDFInfo
- Publication number
- FI98569C FI98569C FI905925A FI905925A FI98569C FI 98569 C FI98569 C FI 98569C FI 905925 A FI905925 A FI 905925A FI 905925 A FI905925 A FI 905925A FI 98569 C FI98569 C FI 98569C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- heteropolyacid
- sparingly soluble
- molybdenum
- soluble salt
- electron
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
- G01N33/525—Multi-layer analytical elements
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/17—Nitrogen containing
- Y10T436/173845—Amine and quaternary ammonium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/17—Nitrogen containing
- Y10T436/173845—Amine and quaternary ammonium
- Y10T436/174614—Tertiary amine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/17—Nitrogen containing
- Y10T436/173845—Amine and quaternary ammonium
- Y10T436/175383—Ammonia
Description
98569
Heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan käyttö analyytin määritykseen, vastaava määritysmenetelmä ja tähän sopiva aine - Användning av ett svärlösligt sait av en heteropo-lysyra tili bestämning av en analyt, ett motsvarande be-5 stämningsförfarande samt ett därtill lämpligt medel
Keksintö koskee heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan käyttöä analyytin määritykseen. Lisäksi keksintö koskee 10 menetelmää analyytin määrittämiseksi heteropolysinisen muodostuksella, kuten myös tähän sopivaa ainetta. Lopulta keksintö koskee myös heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan käyttöä aineen valmistukseen analyytin määritykseen hetero-polysinisenmuodostuksella.
15
Heteropolyhapot ovat epäorgaanisia polyhappoja, joissa on vähintään 2 erilaista keskusatomia. Ne muodostuvat metallin, kuten molybdeenin, volframin, vanadiinin ja ei-metallin tai metallin, kuten fosforin, piin, arseenin, jodin, raudan, 20 mangaanin, koboltin moniemäksisistä happihapoista osittain seka-anhydrideinä. Esimerkkejä ovat fosforimolybdeenihappo tai fosforivolframihappo. Heteropolyhapot ovat vesiliukoisia. Ne ovat kuitenkin stabiileja vain happamassa liuoksessa.
: : 25
Molybdeenin ja volframin heteropolyhapot ovat kauan tunnettuja reagensseja. Niillä on analyyttistä käyttöä fosfaatin määrityksessä ja myös arsenaatin tai silikaatin osoituksessa vastaavien heteropolyhappojen muodostuksella molybdaatin *·’1 30 tai volframaatin kanssa ja heteropolyhapon seuraavalla pelkistyksellä siniseksi väriaineeksi, niin kutsutuiksi / heteropolysiniseksi. Väri perustuu valon absorptioon johtuen elektronien siirtymisestä 5- ja 6-arvoisen molybdeenin tai volframin välillä. Heteropolyhappojen heteropolysininen on 35 kulloinkin väriaine jolla on suuri ekstinktio, jolla on allonpituudesta riippuen hyvin laaja absorptionmaksimi.
Tämä on tyyypillistä varauksensiirtoabsorptiokaistalle.
2 98569
Heteropolyhapot pelkistyvien yhdisteiden osoittamiseksi heteropolysinisen muodostuksella ovat tunnettuja. Teoksessa "Spot Tests in Organic Analysis" kirjoittanut F. Feigl,
Elsevier Publishing Company, 5. painos, 1956, s. 128 ja 5 129 on kuvattu, että 12-molybdofosforihappo pelkistyy useil la aineilla molybdeenisiniseksi. Koska tämä osoitusreaktio on epäspesifinen, suositellaan määrätyn selektiivisyyden saavuttamiseksi tutkittavan näytteen säätämistä alkaliseen pH-arvoon ja seuraavaa uuttamista eetterillä. Sitten tämä 10 eetteriuute sisältää ennen kaikkea aromaattisia typpiemäksiä ja eetteriliukoisia neutraaleja aineita. Happamat aineet pysyvät vesifaasissa liuenneina.
Julkaisusta: P. B. Issopoulos; Pharm. Acta Helv* 64 (1989) 15 82 tunnetaan, että määrätyt lääkeaineet, jotka sisältävät o-hydrokinonirakenteen, kuten esimerkiksi metyylidopa, vaikuttavat rikkihappoa sisältävässä liuoksessa molybdofos-forihappoon pelkistävästi ja johtavat molybdeenisinisen muodostumiseen.
20
Julkaisussa: M. L. Matheke et ai.; Clin. Chem. 33 (1987) 2109-2110 kuvataan fosforivolframihapon käyttö virtsahapon osoittamiseen. Volframisinisen pelkistävä muodostuminen toimii virtsahapon läsnäolon indikaattorina. Osoitusreak-25 tiota häiritsee pelkistävästi vaikuttavan lääkeaineen läsnäolo.
Julkaisusta: B. Klein et ai.; Clin. Chem. 12 (1966) 816-823 tunnetaan seerumin tai plasman glukoosin määritys, joka ’’* 30 perustuu seuraavaan reaktion jaksoon: glukoosi hapetetaan kaliumheksasyanoferraatilla (III), jolloin muodostyunut kaliumheksasyanoferraatti (II) vaikuttaa pelkistävästi fosforimolybdeenihappoon ja johtaa molyb-35 deenisinisen muodostukseen. Koska seerumi ja plasma voivat sisältää erilaisia määriä virtsahappoa, lääkeaineita tai muita pelkistävästi vaikuttavia aineita, kuten esimerkiksi 3 98569 bilirubiinia ja glutationia, niiden häiritsevä vaikutus on esiohjelmoitava tässä menetelmässä.
Kaikilla tähän asti tunnetuilla analyyttisillä menetelmillä, 5 jotka käyttävät hyväksi heteropolysinisen pelkistävää muodostusta heteropolyhapoista on, ennen kaikkea kulloisenkin osoitusreaktion epäspesifisyys. Hyvin monet pelkistävät aineet voivat vaikuttaa häiritsevästi, koska ne samoin johtavat heteropolysinisen muodostumiseen. Lisäksi hetero-10 polyhapot ovat stabiileja vain happamissa olosuhteissa.
Tämä rajoittaa käyttöaluetta hyvin suuresti. Erityisesti heteropolysinisenmuodostumisen liittämistä entsymaattisiin reaktiovaiheisiin aineiden spesifistä osoittamista ja spesifistä määritystä varten ei ole tunnettu tähän mennessä.
15 Mutta juuri ainesosasten osoittamisessa kehonesteistä, kuten verestä, seerumista, plasmasta, ureasta ja vastaavista ovat entsymaattiset määritysmenetelmät usein välttämättömiä.
Keksinnön tehtävä oli hyödyntää heteropolysinisen muodostus-20 mistä aineiden, erityisesti kehonesteiden aineiden osoitus-ja määritysreaktiona ja erityisesti yhdistelmänä entsymaat-tisten reaktiovaiheiden kanssa. Pelkistävästä vaikuttavat epäpuhtaudet eivät saisi tällöin vaikuttaa häiritsevästi, ja osoitus- ja määritysreaktion pitäisi tapahtua entsymaat-25 tisten reaktioiden vaatimassa pH-arvossa. Lisäksi osoitus-ja määritysreaktio pitäisi voida suorittaa nopeasti.
Tämä tehtävä ratkaistaan patenttivaatimuksissa luonnehdituilla toimenpiteillä.
*.·* 30
Keksittiin, että heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa * voidaan edullisesti käyttää analyytin määritykseen, erityi- • * sesti silloin, kun analyytti on elektronirikas aromaattinen euniini tai se johtaa tällaiseen yhdessä toisen aineen kans-35 sa.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle analyytin määrittämiseksi heteropolysinisen muodostamisen avulla on tunnusomaista, 4 98569 että analyytti saatetaan reagoimaan aineen kanssa, joka johtaa elektronirikkaan aromaattisen amiinin muodostumiseen, ja tämä saatetaan kontaktiin heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan kanssa. Keksinnön mukainen menetelmä voidaan tietysti 5 muuttaa myös itse elektronirikkaan aromaattisen amiinin määritykseen, jolloin amiinin liuos saatetaan kontaktiin heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan kanssa.
Keksinnön perustana oleva tehtävä ratkaistaan sitäpaitsi 10 käyttämällä heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa aineen valmistamiseen analyytin määritykseen heteropolysinisen muodostuksella.
Keksinnön mukaisesti valmistetaan aine analyytin määrityk-15 seen heteropolysinisen muodostuksella, jolle aineelle on tunnusomaista, että se sisältää ainetta, joka johtaa analyytin kanssa elektronirikkaaseen aromaattiseen amiiniin, ja lisäksi heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa, tai kontaktissa tällaista suolaa tulokseksi antavia aineita. Jos 20 keksinnön mukaisen aineen on toimittava suoraan elektroni-rikkaan aromaattisen amiinin määrityksessä, riittää, että se sisältää heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa tai kontaktissa tällaista suolaa tulokseksi antavia aineita nestemäisessä väliaineessa tai kantajaan sidotussa muodossa. 25 Tämän keksinnön mukaisesti voidaan heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa käyttää analyytin määritykseen. Heteropolyhapon vaikealiukoiseksi suolaksi ymmärretään keksinnön mielessä ennen kaikkea sellainen heteropolyhapon suola, * * 30 joka ei liukene lainkaan tai liukenee vain hyvin niukasti veteen tai vesiväliaineisiin, kuten puskuri tai kehonesteet, / * kuten esimerkiksi veri, plasma, seerumi, virtsa tai sylki, • « *., ja tämä pysyy myös testi- ja värinmuodostusolosuhteissa.
Erityisesti on heteropolyhapon suola niin huonoliukoinen, : 35 ettei nestemäiseen näytteeseen enintään liukoinen määrä yksinään riittäisi sen sisältämän analyytin määritykseen.
5 98569
Yllättävällä tavalla on osoittautunut, että tällainen hete-ropolyhapon vaikealiukoinen suola ei ole stabiili ainoastaan happamalla, vaan myös neurtaalilla ja emäksisellä pH-alueel-la, erityisesti noin pH-arvoon 10. Siten sitä voidaan käyt-5 tää pH-alueilla, joilla useimmat entsyymit ovat aktiivisia, ja siten heteropolysinisen muodostamiseen yhdistelmänä entsymaattisten reaktioiden kanssa. Erityisesti ei-liukoi-sessa tilassa keksinnön mukainen heteropolyhapon vaikealiukoinen suola on myös korotetussa lämpötilassa stabiili.
10 Huonoliukoisuudesta huolimatta on osoittautunut, että ana-lyytti voidaan osoittaa ja määrittää heteropolysinisen muodostuksella keksinnön mukaisella heteropolyhapon suolalla nopeasti, ts., muutaman sekunnin - muutaman minuutin sisällä. Tällöin selektiivinen määritys ilman muista sinänsä 15 pelkistävästä vaikuttavista aineista johtuvaa häiriötä on mahdollinen. Tämä sallii herkän mittausmenetelmän, joka erityisesti myös muodostuneen heteropolysinisen leveästä absorptionmaksimista johtuen, joka on alueella noin 550 -yli 1100 nm, ei aseta mittauslaitteille mitään erityisvaa-20 timuksia, ja joka on myös näköhavainnolla hyvin seurattavissa.
Keksinnön mukaisesti käytettävät heteropolyhappojen suolat ovat suoloja molybdeenin, molybdeenin ja volframin, vanadii-25 nin ja molybdeenin tai vanadiinin ja molybdeenin ja volfra-min heteropolyhapoista, joissa on heteroatomeina fosforia, arseenia, piitä tai germaniumia. Erityisen edullisia ovat molybdeenin heteropolyhapot fosforin tai arseenin kanssa. Fosfori on ei-metalllatomina aivan erityisen edullinen.
·,·· 30 Metalliatomina on molybdeeni aivan erityisen edullinen.
Erinomaisesti sopivat 12-molybdofosforihapon, 18-molybdodi-.· * fosforihapon, 12-molybdoarseenihapon, 18-molybdodiarseeni- '·' hapon, 11-molybdo-l-vanadofosforihapon, 10-molybdo-2-vanado- fosforihapon ja 9-molybdo-3-vanadofosforihapon vaikealiukoi-35 set suolat, jolloin 18-molybdodifos£orihappo on johtuen suuresta värisaannostaan pelkistyksessä molybdeenisiniseksi erityisen edullinen.
6 98569
Heteropolyhappojen vaikealiukoiset suolat ovat sellaisia, joiden kationit ovat suurempia, kuin ammoniumioni, NH4+. Edullisia kationeja voidaan esittää yleisellä kaavalla I
5 R1R2R3R4X+ (I) jossa
Rl, R2, R3, R^ jotka ovat samat tai erilaiset, ovat alkyy-li-, aryyli- tai aralkyyliryhmä, tai 10 vety, jos kaikki ryhmät eivät ole samoja, tai jossa 2 ryhmää muodostaa yhdessä alkyleeniryhmän, ja X on fosfori- tai typpiatomi.
Alkyyli- ja aralkyyliryhmissä 1-22 hiiliatomia, erikoises-15 ti 1 - 6 hiiliatomia sisältävää suoraketjuista tai haaroittunutta alkyyliryhmää. Aryyli aryyli- tai aralkyyliryhmissä tarkoittaa aromaattista ryhmää, jossa on 6 - 10 hiiliatomia. Erityisen edullisia ovat fenyyli tai naftyyli.
20 Aralkyyliryhmänä on erityisen edullisesti bentsyyliryhmä.
Alkyleeniryhmä on tyydyttynyt tai tyydyttymätön hiilivety-ketju, jossa on 4 - 6, edullisesti 4 tai 5 hiiliatomia, jotka ovat molemmilla päillä Xsään kiinnittyneitä. Yleisen 25 kaavan I mukaiset kationit voivat sisältää 2 tällaista alkyleeniryhmää. Erikoisesti on kuitenkin saatavissa 1 alkyleeniryhmä.
Yleisessä kaavassa I merkitsee X erikoisesti typpiatomia.
·.'* 30 Samoin voivat heteropolyhappojen vaikealiukoisten suolojen ;V edulliset kationit olla myös kvaternäärisen N-atomin sisäl- ,* ‘ tävien typpi-heteroaromaattien ryhmästä. Mainittakoon esi- • «
merkiksi pyridiini tai kinoliini, joiden typpiatomissa on alkyyli-, aryyli- tai aralkyyliryhmä, jolloin näiden ryhmien . : 35 määritelmiä koskevat saunoin edellä yleisessä kaavassa I
ryhmille R*, R2, R3 ja R* annetut määritelmät.
• i * 7 98569
Keksinnön mukainen heteropolyhapon vaikealiukoinen suola voidaan saada esimerkiksi saattamalla heteropolyhappo reagoimaan vastaavan emäksisen aineen kanssa. Tavallisesti tällöin käytetään ainakin yhtä ainetta liuoksena, erikoisesti 5 vesiliuoksena. Mutta molemmat suolakomponentit voidaan lisätä myös kiinteässä muodossa nesteeseen, erityisesti vesipitoiseen nesteeseen tai päinvastoin.
Analyyttinä on määritettävä aine. Keksintö on osoittautunut 10 erityisen sopivaksi aineille, jotka ovat liuenneina nesteessä, erityisesti vesipitoisessa nesteessä. Erityisen edullisesti heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa voidaan käyttää aineiden määritykseen kehonesteistä, kuten esimerkiksi verestä, plasmasta, seerumista, ureasta tai syljestä. Mahdol-15 lisinä analyytteinä tässä mielessä mainitaan esimerkiksi glukoosi, kolesteroli, laktaatti, NADH tai etanoli. Periaatteessa keksinnön mukaisesti voidaan määrittää kaikkia sellaisia yhdisteitä, jotka voidaan saaddaa reagoimaan yhdessä yhden tai useamman muun yhdisteen kanssa sellaisiksi aineik-20 si tai jotka itse ovat sellaisia aineita, jotka voivat re-dokspotentiaalinsa suhteen ja kinetiikkansa suhteen pelkistää heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan muutaman sekunnin - muutaman minuutin, edullisesti alle 3 minuutin sisällä : '· heteropolysiniseksi. Yllättävällä tavalla on osoittautunut, V': 25 että elektronirikkaat aromaattiset amiinit pystyvät tähän, v ; Ennen kaikkea se on yllättävää, koska tällöin on mahdollinen • · selektiivinen määritys ilman muista sinänsä pelkistävästi vaikuttavista yhdisteistä johtuvaa häiriötä.
• · · « · · • · · • · · 30 Elektronirikkaalla aromaattisella amiinilla ymmärretään yh-diste, joka on aniliinia elektronirikkaampi, ja joka siten • · · on aniliinia voimakkaampi pelkistin. Elektronirikkailla aro-’. maattisilla amiineilla on redokspotentiaali alle 0,6 V, edullisesti alle 0,45 V, normaalivetyelektrodia vastaan.
: :35 Redokspotentiaalin suuruus yksinään ei kuitenkaan ole rat- : .·. kaiseva. Tärkeää on lisäksi, että vastaava aine voi nopeas-ti, ts., alle noin 3 minuutin sisällä, pelkistää heteropo- 98569 8 lyhapon huonoliukoisen suolan heteropolysiniseksi. Kyseeseen tulevat esimerkiksi kaikki aniliinijohdannaiset, joissa on 1 tai useampia +1 tai/ja +M-substituentteja, kuten hydrok-si-, alkyyli-, alkoksi-, aryylioksi-, alkyylitio-, aryyli-5 tio-, amino-, monoalkyyliamino- ja dialkyyliaminoryhmät.
Alkyyli-, alkoksi-, alkyylitio-, monoalkyyliamino- ja dialkyyliaminoryhmät ovat ryhmiä, joissa alkyyli on hiilivety-ryhmä, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, joka voi puolestaan olla 10 substituoitu hydroksiryhmällä, mahdollisesti 1 tai 2 alkyylillä substituoidulla aminoryhmällä, PC^I^illa, S03H:lla tai C02H:lla. Happoryhmät PO3H2, SO3H ja CO2H voivat olla sellaisinaan tai suolamuodossa ammonium-, alkali- tai maa-alkalisuolana.
15
Aryylioksi- ja aryylitioryhmät ovat ryhmiä, joissa on 6 -10 hiiliatomia, jolloin erityisen edullisia ovat fenoksi-ja fenyylitioryhmät.
20 Aniliinijohdannaisilla ymmärretään myös yhdisteet, joissa on substituoimaton tai alkyylillä kerran tai useamman kerran substituioitu aminoryhmä aromaattisessa rengasjärjestelmässä, joka on anneloitu 1 tai useamman aromaattisen tai/ja alisyklisen renkaan kanssa. Aromaattisina renkaina tulevat 25 tällöin kyseeseen niin hiilivetyaromaattiset järjestelmät kuin myös heteroaromaatit. Esimerkkejä ovat anneloidut bentseeni- tai naftaliinirenkaat tai anneloitu pyridiiniren-gas.
30 Alisyklisillä renkailla ymmärretään tyydyttyneet tai tyydyt- • · · tymättömät sykloalifaatit, joissa on 5 - 7 hiiliatomia, erikoisesti 5 tai 6 hiiliatomia.
« «
Mahdollisia aminoryhmän alkyylisubstituentteja voivat olla 35 hiilivetyryhmät, joissa on 1 - 6 hiiliatomia, jotka toisaalta voivat olla substituoituja hydroksiryhmällä, mahdollisesti kerran tai useammin Ci_6-alkyylillä substituoidulla aminoryhmällä, P03H2illa, SC^Hilla ja CC^Hilla. Happoryhmät 9 98569 P03H2f SO3H ja CO2H voivat olla sellaisinaan tai suolamuo-dossa ammonium-, alkali- tai maa-alkalisuolana.
Erityisen sopivia elektronirikkaina aromaattisina amiineina 5 ovat yleisen kaavan II mukaiset yhdisteet R8 R9 r5^V_<R6 10 /“\ Xr7
Rio Rn jossa R8 on hydroksi tai amino, jolloin aminoryhmä on mahdollises-15 ti kerran tai kahdesti substituoitu alkyyliryhmällä, ja alkyyliryhmä puolestaan on mahdollisesti substituoitu hyd-roksiryhmällä, mahdollisesti kerran tai useammin alkyylillä substidulla aminoryhmällä, P03H2:lla, S03H:lla tai C02H:lla, R8 ja R^, jotka ovat samat tai erilaiset, ovat vety tai 20 alkyyli, jolloin alkyyliryhmä on mahdollisesti substituoitu hydroksiryhmällä, mahdollisesti kerran tai useammin alkyylillä substituoidulla aminoryhmällä, PC^^illa, SC^Hilla tai CC^Hilla, ja R8, R9, R*8 ja R11 ovat samoja tai erilaisia, ja ovat vety, 25 alkyyli, alkoksi, alkyylitio, aryylioksi, aryylitio, halo-geeni, karboksi, karboksialkyyli tai alkoksikarbonyyli.
Alkyyliryhmät ja "alkyyli" alkyylitio-, karboksialkyyli- ja alkoksikarbonyyliryhmissä ovat hiilivetyryhmiä, joissa on 30 1-6 hiiliatomia. Erityisen edullisia ovat ryhmät, joissa • > · · [ on 1 - 3 hiiliatomia.
:‘\ Alkoksiryhmät ovat samoin hiilivetyryhmiä, joissa on 1 - 6 hiiliatomia. Erityisen edullisia ovat ryhmät, joissa on 1 ,35 - 3 hiiliatomia. Aryylioksi- ja aryylitioryhmät ovat ryhmiä, joissa on 6 - 10 hiiliatomian, jolloin fenoksi- ja fenyyli-tioryhmät ovat erityisen edullisia. Halogeeni on fluori, 10 98569 kloori, bromi tai jodi. Kloori ja bromi ovat edullisia halo-geenisubstituenttej a.
Happoryhmät P03H2, S03H tai C02H voivat olla sellaisinaan tai 5 suolamuodossa ammonium-, alkali- tai maa-alkalisuolana.
Ammoniumsuolat ovat sellaisia, jotka sisältävät ammoniumio-nin, NH4+, tai sellaisia, jotka sisältävät kerran tai useammin alkyyli-, aryyli- tai aralkyyliryhmillä substituoituja 10 ammoniumkationeita. Alkyyli alkyyli- ja aralkyyliryhmissä tarkoittaa hiilivetyryhmää, jossa on 1 - 6 hiiliatomia.
Aryyli aryyli- ja aralkyyliryhmissä on 6 - 10 hiiliatomia sisältävä aromaattinen rengasjärjestelmä, jolloin fenyyli on edullinen. Edullinen araikyyliryhmä on bentsyyli.
15
Alkalisuolat ovat erikoisesti litium-, natrium- tai kalium-suoloja. Maa-alkalisuoloja ovat erikoisesti magnesium- tai kalsiumsuoloja.
20 Elektronirikkaat aromaattiset amiinit voidaan määrittää heteropolyhapon vaikealiukoisella suolalla heteropolysini- senmuodostuksella välittömästi. Mutta voidaan määrittää myös aineita, jotka kemiallisella tai entsymaattisella . reaktiolla toisen aineen kanssa muuttavat tämän stökiömet- 25 risesti elektronirikkaaksi aromaattiseksi amiiniksi. Reak- tionpartnereina voidaan käyttää esimerkiksi sellaisia ainei- '·’ ta, joissa jo on itsessään elektroni rikkaan aromaattisen • · · ' amiinin perusrakenne, ja joissa se voidaan vapauttaa kemial- • · · lisella tai entsymaattisella reaktiolla määritettävän ·»» · 30 analyytin kanssa. Erikoisesti tässä ymmärretään sellaiset yhdisteet, jotka johtavat hydrolyysillä elektronirikkaaseen ;*·4< aromaattiseen amiiniin. Esimerkkeinä mainittakoon elektro- nirikkaiden aromaattisten amiinien amidit, esterit tai • · · glykosidit. Analyyttejä, jotka voidaan määrittää näin, ovat 35 erikoisesti entsyymit, jotka katalysoivat vastaavien substraattien reaktiota elektronirikkaiksi aromaattisiksi amiineiksi, erityisesti hydrolaasit, kuten amidisidoksia ja/tai peptidisidoksia lohkaisevat entsyymit, esterisidoksia - olivatpa ne sitten karboksyylihappo-, fosforihappo- tai 11 98569 rikkihapposidoksia - lohkaisevat entsyymit ja glykosidisia sidoksia lohkaisevat entsyymit, lisäksi myös transferaasit, jotka katalysoivat ryhmien siirtoja, kuten esimerkiksi^. -glutamyylitransferääsi.
5
Edelleen voidaan määrittää esimerkiksi myös aineita, jotka voidaan hapettaa entsymaattisesti, ja jolloin tällaisia yhdisteitä käytetään elektroniakseptoreina, jotka antavat pelkistyksen tuloksena elektronirikkaita aromaattisia amii-10 neja. Ennen kaikkea kehonesteiden, kuten veren, plasman, seerumin, virtsan tai syljen aineille tunnetaan suuri joukko oksidoreduktaaseja, jotka tunnistavat kulloinkin määritettävän aineen spesifisesti, ja hapettavat nämä aineet toimivan elektroniakseptorin läsnäollessa.
15
Esimerkkeinä mainittakoon flaviinista riippuvat oksidaasit, kuten L- ja D-aminohappo-oksidaasi, kolesterolioksidaasi, glukoosioksidaasi, glyseriini-3-fosfaattioksidaasi, laktaat-tioksidaasi tai pyruvaattioksidaasi, ja NAD(P):stä riippu-20 mattomat dehydrogenaasit, kuten pyrrolokinoliinikinonista riippuva glukoosidehydrogenaasi tai myös diaforaasi (NADH:dye-oksidoreduktaasi).
Oksidoreduktaasien, erityisesti oksidaasien ja NAD(P):sta 25 riippumattomien dehydrogenaasien tapauksessa entsymaattisis- .·.· sa hapetuksissa voidaan käyttää elektroniakseptoreita, jotka • * pelkistyvät entsyymisubstraatin entsymaattisella hapetuksella elektronirikkaaksi aromaattiseksi amiiniksi. Niin tällaiset aineet, jotka hapettuvat entsymaattisesti, voidaan 30 sitten osoittaa ja määrittää heteropolysinisen muodostuksel-4’ la saattamalla muodostuva elektronirikas aromaattinen amiini kontaktiin heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan kanssa.
• · Tässä yhteydessä keksinnön mielessä edullisina elektroniak-35 septoreina on mainittava erityisesti aromaattiset nitrosoyh-disteet, oksiimit ja hydroksyyliamiinit. Erityisen edullisia ovat aromaattiset mitrosoyhdisteet ja oksiimit. Aivan erityisen edullisia ovat erityisesti sellaiset nitrosoyhdisteet 12 98569 ja oksiimit, jotka on kuvattu EP-patenttihakemuksessa A-0354441.
Keksinnön mukaiseen analyytin määritykseen heteropolysinisen 5 muodostuksella riittää, että analyytti saatetaan edellä kuvatulla tavalla reagoimaan aineen kanssa elektronirikkaak-si aromaattiseksi amiiniksi muuttamiseksi ja saatetaan kontaktiin heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan kanssa.
Kun elektronirikas aromaattinen amiini itse on välittömästi 10 määritettävä analyytti, tämä saatetaan kontaktiin heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan kanssa ilman edeltävää kemiallista tai entsymaattista reaktioita.
Tavallisesti ainakin lopuksi heteropolyhapon suolaan vaikut-15 tava elektronirikas aromaattinen amiini on lienneessa muodossa, erikoisesti vesiliuoksessa, esimerkiksi vedessä, puskurissa tai kehonesteessä. Edullisesti sitten, jos määritettävä analyytti ei itse ole elektronirikas aromaattinen amiini, on yhdessä analyytin kanssa elektronirikkaan aro-20 maattisen amiinin valmistukseen välttämätön yhdiste samoin vesipitoisessa nesteessä. Ne voidaan lisätä näytteeseen ennen saattamista kontaktiin heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan kanssa. Mutta se voidaan myös saattaa ensin kontaktiin yhdessä heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan kanssa 25 tai jopa vasta viimeisenä tutkittavan näytteen kanssa. Va- littu järjestys riippuu yksittäisestä tapauksesta, ja ämmät-timies voi päättää sen ylseisen ammattitietojensa mukaan kulloinkin suoritettavan analyyttimäärityksen mukaan tai vähäisin optimoivin kokein. Elektronirikkaan aromaattisen 30 amiinin valmistukseen välttämätön aine voidaan lisätä vesi- • · · * ' pohjaiseen näytteeseen kiinteänä tai liuotetussa muodossa.
• I
• « • :*·. Yhdessä määritettävän analyytin kanssa elektronirikasta aromaattista amiinia tulokseksi antavaa ainetta on saatet-35 tava näytteen kanssa kontaktiin ainakin niin suuri määrä, että koko analyytti voidaan saattaa reagoimaan. Edullisesti käytetään 2 - 10-kertaista ylimäärää.
13 98569
Heteropolyhapon vaikealiukoinen suola voidaan saataa tutkittavan näytteen kanssa kontaktiin kiinteänä aineena. Mutta se voi olla myös suspensiona nesteessä, edullisesti vesipitoisessa nesteessä, jolloin suspensio sitten sekoitetaan 5 tutkittavan näytteen kanssa. Määritettävän analyytin läsnäollessa muodostuu veteen vaikealiukoista heteropolysinistä, joka on intensiivisestä väristään johtuen tunnistettavissa. Kvantitatiivista määritystä varten on mahdollista erottää veteen vaikealiukoinen heteropolysininen samoin kuin reagoi-10 maton heteropolyhappossuola nesteestä, esimerkiksi sentri- fugoimalla, liuottaa seuraavaksi sopivaan liuottimeen, kuten esimerkiksi dimetyylisulfoksidiin ja mitata heteropolysini-nen-väriaineen konsentraatio fotometrisesti mahdollisesti vakioliuosten tai kalibrointikäyrien avulla ja siten viime-15 kädessä määrittää osoitettavan analyytin konsentraatio.
Heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa on oltava läsnä niin suuri määrä, että näytteessä läsnäoleva tai muodostunut elektronirikas aromaattinen amiini johtaa heteropolysinisen 20 muodostukseen, jota voidaan käyttää kvantitatiivisessa yhteydessä määritettävän analyytin tai elektronirikkaan aromaattisen amiinin kanssa. Periaatteessa on siksi käytettävä niin paljon heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa, että elektronirikkaan aromaattisen amiinin korkeimpaan 25 asiaankuuluvaan konsentraatioon asti amiinimäärän kasvu V johtaa heteropolysinisen määrän lisääntymiseen.
Keksinnön mukainen aine analyytin määritykseen heteropolysinisen muodostuksella sisältää ainetta, joka johtaa analyy-30 tin kanssa elektronirikkaaseen aromaattiseen amiiniin, ja « · heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa. Tällainen aine voidaan saattaa käyttöä varten esimerkiksi suspensioksi ;‘v tai lyofilisaatiksi, jauheseokseksi tai puristaa tabletiksi.
Ainesosaset voivat olla rinnakkain tai erillään, jolloin 35 jokainen ainesosasista voi olla muokattu tarkoituksenmukai- simpaan muotoonsa. On myös kerrassaan mahdollista, ettei keksinnön mukainen aine sisällä käyttövalmista heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa, vaan ainoastaan erillään 14 98569 tällaisen suolan valmistukseen välttämättömät komponentit, ts., esimerkiksi heteropolyhappoa ja kationista tai emäksistä yhdistettä, jotka molemmat saatetaan kontaktiin vasta välittömästi ennen keksinnön mukaista määritysreaktiota ja 5 sitten vasta tuottavat vastaavan suolan. Erityisen edullista on, että keksinnön mukainen aine sisältää heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa hienojakoisessa muodossa niin, että sillä on suuri reaktiivinen pinta-ala. Keksinnön mukainen aine voi mahdollisesti sisältää myös muita reagensseja, 10 kuten puskuria ja apuaineita, kuten esimerkiksi kostutusai-netta, stabilointiaineitarungonmuodostajaa ja vastaavia.
Jos määritettävä analyytti itse on elektronirikas aromaattinen amiini, ei keksinnön mukaista ainetta varten tietenkään tarvita ainetta, joka ensin johtaa analyytin kanssa 15 elektronirikkaaseen aromaattiseen amiiniin.
Keksinnön mukainen analyytin määrityksen suoritus sopii aivan erityisen edullisesti niin kutsutun kuivatestin kanssa. Ammattimies tuntee kuivatestin suoritukseen tarkoitetut : 20 laitteet esimerkiksi patenttihakemuksista EP-A-0016387, DE-A-3247608, EP-A-0262445 tai EP-A-0256806. Niitä voidaan kutsua testikantajiksi. Tällöin testin suorittamiseen vaadittavat reagenssit ovat kuivassa, ts., ei nesteeseen liuotetussa muodossa, esimerkiksi imukykyisen materiaalin sisäl-25 lä tai pinnalla, kuten esimerkiksi paperin, EP-patenttihake-muksen A-0016387 mukaisen avoimen kalvon, lasikuitumaton tai huokoisen muovimembraanin, vain joitain mahdollisia materiaaleja mainiten, tai myös turpoamiskykyisen materiaalin, kuten esimerkiksi vastaavan muovikalvon, gelatiinin tai ·.·* 30 selluloosan sisällä tai päällä.
.· Lisättäessä näytenestettä testikantajaan tai upotettaessa '· ’ testikantaja näytenesteeseen muodostuu testikantajassa nestemäinen ympäristö, jonka sisällä osoitusreaktio käynnis-35 tyy. Reaktion aiheuttama värinmuodostus voidaan arvostella näköhavainnolla tai fotometrisesti, esimerkiksi heijastus-fotometrisesti.
15 98569
Keksinnön mukaisen aineen valmistamiseksi kantajaansidottuun muotoon sopivaa kantajamateriaalia, kuten suodatinpaperia, selluloosaa tai keinokuitumattoa kyllästetään vaadittavien, testikantajien valmistukseen käytettyjen reagenssien liuok-5 silla ja/tai suspensioilla helposti haihtuvissa liuottimis-sa, kuten esimerkiksi vesi, metanoli, etanoli tai asetoni.
Tämä voi tapahtua 1 kyllästysvaiheessa. Usein on tarkoituksenmukaista suorittaa kyllästäminen useammassa vaiheessa, jolloin käytetään liuoksia ja/tai suspensioita, jotka sisäl-10 tävät kulloinkin osan valmiin aineen ainesosista. Niin kantajamateriaalille voidaan esimerkiksi ensimmäisessä vaiheessa lisätä suspensiosta heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa ja toisessa vaiheessa liuoksessa ainetta, joka johtaa määritettävän analyytin kanssa elektronirikkaaseen, 15 aromaattiseen amiiniin, samoin kuin mahdollisesti puskuria ja muita lisäaineita. Näin käsiteltyä kantajamateriaalia voidaan käyttää sellaisenaan tai liimata sinänsä tunnetulla tavalla varsiin tai jäykille muovikalvoille, jotta se olisi paremmin käsiteltävissä.
20
Saman kantajamateriaalin useampikertaisen kyllästyksen sijasta voidaan keksinnön mukaisen aineen reagenssit jakaa myös erilaisille kantajamateriaaleille, jotka saatetaan analyyttimäärityksen suorituksessa nesteenvaihdon mahdollis-25 tavaan kontaktiin.
Kantajaan sidottujen testiaineiden valmistukseen voidaan kyllästämisen sijasta valmistaa myös kalvonmuodostajista, ts., polymeereistä tai polymeeridispersioista, valmistaa ·; * 30 liuoksia, jotka ovat niin viskooseja, että niistä voidaan : . valmistaa kalvoja tunnetuilla valmistusmenetelmillä, kuten .* ’ pyyhkäisyterillä, telapäällystyksellä ja vastaavilla. Näihin '· * liuoksiin reagenssit ja mahdollisesti puskuriaineet ja apuaineet lisätään. Pinnanpäällystysmassat lisätään kan-35 tajakalvoille, kuivataan ja valmiit kalvot valmistetaan esimerkiksi testisuikaleiksi.
16 98569
Esimerkkejä edullisista testikantajista esitetään kuvissa 1 ja 6. Muissa kuvissa 2 - 5 ja 7 kuvataan kaaviokuvia, joissa esitetään heijastumisen riippuvuudet prosentteina ajasta, aallonpituudesta tai analyyttikonsentraatiosta, 5 jotka kaaviokuvat saatiin kuvan 1 tai kuvan 6 mukaisilla testikantajilla.
Yksitellen kuvissa esitetään: 10 Kuva 1: poikkileikkaus edullisesta testikantajasta
Kuva 2: kaaviokuva, jossa esitetään heijastuksen riippuvuus prosentteina ajasta yksikössä sekunti näytteen lisäyksen jälkeen kuvan 1 mukaiseen testikantajaan näytteillä a) -15 f), joilla on kulloinkin erilaiset glukoosikonsentraatiot.
Kuva 3: kaaviokuva, jossa esitetään heijastuksen riippuvuus prosentteina mittausaallonpituudesta [nm] näytteille a) - f), joilla on erilaiset glukoosikonsentraatiot käytettäessä 20 kuvan 1 mukaista testikantajaa.
Kuva 4: kaaviokuva, jossa esitetään heijastuksen riippuvuus prosentteina glukoosikonsentraatiosta kuvan 1 mukaisella testikantajalla mitattaessa.
25
Kuva 5: kaaviokuva, jossa esitetään heijastuksen riippuvuus prosentteina NADH-konsentraatiosta kuvan 1 mukaisella testikantajalla mitattaessa.
30 Kuva 6: poikkileikkaus toisesta edullisesta testikantajasta.
Kuva 7: kaaviokuva, jossa esitetään heijastumisen riippuvuus :prosentteina etanolikonsentraatiosta kuvan 6 mukaisella testikantajalla mitattaessa.
Seuraavat esimerkit esittävät joitain mahdollisista menetel-mämuunnelmista analyytin määrittämiseksi heteropolysinisen muodostamisella. Ne eivät kuitenkaan näissä suoritusmuodois- 35 17 98569 sa rajoita keksintöä. Kuvat selvitetään lähemmin esimerkeissä .
Esimerkki 1 5 Glukoosin osoittaminen 18-molybdodifosfaatilla
Valmistetaan kuvan 1 mukainen testikantaja. Se koostuu 350 μιη paksusta polyesterifoliosta (Melinex, ICI, Frankfurt,
Saksan Liittotasavalta) kantajafoliona (l), jolla on mitat 2x3 cm. Folion keskellä on aukko, jonka halkaisija on 6 10 mm. Siirtoliimaajan (2) avulla on reagenssikantaja (6), joka koostuu 200 μιη paksusta läpinäkyvästä polykarbonaatt if oliosta (5) (Pokalon, Lonza, Rheinfelden, Saksan Liittotasavalta) , ensimmäisestä reagenssikerroksesta (4) ja toisesta rea-genssikerroksesta (3) kiinnitetty kantajafoliossa olevan 15 aukon päälle niin, että tämän aukon läpi syötetty näyteneste tulee ensin kontaktiin toisen reagenssikerroksen kanssa. Reagenssikantajan koko on 2 x 1 cm.
Reagenssikantajan (6) valmistus tapahtuu seuraavasti: 20
Ensimmäinen reagenssikerros: 113 g kahdesti tislattua vettä, 36,3 g 2 paino-% ksantaania (Keltrol F, Kelco, Oklahoma, 25 USA) 0,2 M sitraattipuskurissa, pH 7,0 V : 69 9 propiofaani 70 D (BASF, Ludwigshafen, Saksan Liit- ;#· · totasavalta) 15 ml 15-paino-% natriumnonyylisulfaattia vedessä • · · 6 g polyvinyylipyrrolidonia (Kollidon 25, BASF, 30 Ludwigshafen, Saksan Liittotasavalta) ;·. 3,9 g tetrabutyyliammoniumkloridia • · · 12 g 18-molybdodifosforihappoa (valmistettu tavalla, • « · jonka on kuvannut: G. Brauer, "Handbuch der präpa-rativen anorganischen Chemie", Enke-Verlag, Stutt-35 gart, 1954) 15 g:ssa vettä 63 g Celatom MW 25®:tä (Eagle Picher, Cincinnati, Ohio, USA) 18 98569 sekoitetaan homogeeniseksi massaksi ja levitetään pyyhkäisy-terällä 150-μπι paksuiseksi läpinäkyvälle foliolle (5). Kuivataan 1 tunti 60 °C:ssa.
5 Toinen reagenssikerros: 20 g kahdesti tislattua vettä, 16 g titaanidioksidia RN 56 (Kronos-Titan GmbH,
Leverkusen, Saksan Liittotasavalta) 10 36,3 g 2-paino-% Keltrol F®:ää (Kelco, Oklahoma, USA) 0,2 M sitraattipuskurissa, pH 6,0 69 g Propiofan 70 D®:tä (BASF, Ludwigshafen, Saksan
Liittotasavalta) 15 ml 15-paino-% natriumnonyylisulfaattia vedessä 15 6 g Kollidon 25®:tä (BASF, Ludwigshafen, Saksan Liitto tasavalta) 188 g vettä 63 g Celatom MW 25®:tä (Eagle-Picher, Cincinnati, Ohio, USA) 20 400 mg Ν,Ν-bis(2-hydroksietyyli)-p-nitrosoaniliin x HCl:ää 20 g:ssa vettä 2 g glukoosioksidaasia (200 U/mg) 12 g:ssa vettä sekoitetaan tasaiseksi massaksi ja levitetään pyyhkäisyte- 25 rällä 400-μιη paksuiseksi ensimmäiselle reagenssikerrokselle.
Ilmakuplat poistetaan kevyellä puhalluksella, ja päällystet- iii tä kuivattiin 1 tunti 60 °C:ssa.
• · · · • · · i : »·« •Ί': Ajanhetkellä t = 0 lisätään ihmisplasmaa, jossa on a) 0 mg 30 glukoosia/dl, b) 47,5 mg glukoosia/dl, c) 108,7 mg glukoo- ;·, sia/dl, d) 200,8 mg glukoosia/dl, e) 392,3 mg glukoosia/dl • · · *...t ja f) 766 mg glukoosia/dl kulloisellekin edellä kuvatulla • · · \ tavalla valmistetulle testikantajalle. Heijastuskyky mita taan 950 nm:llä yksikössä %. Ensimmäinen mittaus tapahtuu 8 35 s kuluttua, muut mittaukset 4 s välein. Merkittäessä heijastuskyky (R) prosentteina ajan (t) funktiona yksikössä sekuntia saadaan kuvan 2 mukainen kaaviokuva. Värinmuodostus ja heijastuskyvyn tarkastaminen on jo ensimmäisellä mittauk- 19 98569 sella melkein täydellinen. Tulokseksi saadaan stabiili loppuarvo, joka voidaan mitata lähes mielivaltaisena ajanhetkenä alun jälkeen.
5 Jos kuvan 12 mukaisella testikantajalla, joka on valmistettu edellä kuvatulla tavalla, mitataan erilaisilla aallonpituuksilla näytteitä, joilla on glukoosikonsentraatio a) 0 mg/dl, b) 100 mg/dl, c) 240 mg/dl ja d) 800 mg/dl, ja heijastuskyky (R) prosentteina merkitään yksikössä nm esitetyn aallonpi-10 tuuden (A.) funktiona kaaviokuvaan, saadaan kuva 3. Kuten siinä kuvatut spektrit selvittävät, voidaan glukoosikon-sentraation mittaukseen käyttää mielivaltaisia aalonpituuk-sia välillä 550 ja yli 1100 nm. Äärimmäisen tasaisesta spektristä johtuen mittausaallonpituuksien heilahtelujen 15 toleranssi hyvin korkea.
Esimerkki 2 18-molvbdodifosfaatilla tapahtuvan alukoosinosoituksen spesifisyys 20 Taulukossa 1 esitettyjä häiritseviä aineita lisätään ilmaistuissa konsentraatioissa ihmisplasmaan, jossa on a) 0 mg glukoosia/dl (Cq^uc = 0) ja b) 110 mg glukoosia/dl (Cq^uc = 110 mg/dl). Jos tällaista ihmisplasmaa tutkitaan kuvan 1 mukaisella testikantajalla, joka on valmistettu ja kuvattu 25 esimerkissä 1, saadaan 660 nm:11a taulukossa 1 ilmoitetut heijastuskykyarvot prosentteina (% R).
• · < « 9 · 1 · • · 20 98569
Taulukko 1
häiritsevä loppukon- Cq^uc = 0 Cqiuc = 110 mg/dl 5 aine sentraatio % R % R
ei lainkaan 0 60,3 43,0 vertailu) 10 NaOH 1 inM 59,9 42,5 virtsahappo 10 mg/dl 59,5 42,4 20 mg/dl 60,1 42,4 15 laktaatti 100 mg/dl 59,7 43,2 300 mg/dl 60,2 42,8 bilirubiini 10 mg/dl 60,0 42,7 20 mg/dl 61,5 43,0 20 glutationi 1 mM 59,3 43,0 5 mM 59,4 43,8 metyylidopa 10 mg/dl 59,5 43,1 25 100 mg/dl 59,0 42,1 dobesylaatti 20 mg/dl 59,4 41,8 gentisiini- 50 mg/dl 59,6 43,0 30 happo aspiriini 5 mg/dl 59,9 42,1 60 mg/dl 60,0 42,0 35
Riippumatta ihmisplasmassa olevista glukoosikonsentraatiois-ta (0 ja 110 mg/dl) ei havaittu lainkaan merkittäviä häiriöitä.
40 Kuvan 1 mukaisella testikantajalla, joka valmistetaan esi-·. merkille 1 analogisesti, ja joka on identtinen siellä kuva- .V tun testikantajan kanssa vertailun vuoksi pois jätettyyn ]· · tetrabutyyliammoniumkloridin lisäykseen asti, saadaan hyvin *. 1 huonosti toistettavia, voimakkaasti hajoavia tuloksia, koska 45 käytetty 18-molybdodifosforihappo hajoaa pH-arvoissa yli 5,5. Lisäksi vaikuttavat pelkistävät aineet tässä häiritsevästi värinmuodostumisen lisääntymisellä.
21 98569
Esimerkki 3
Testikantaia glukoosin osoittamiseen 12-molvbdofosfaattiin perustuen
Jos esimerkin 1 reseptissä 18-molybdodifosforihappo kor-5 vataan samalla määrällä 12-molybdofosforihappoa (Fluka,
Buchs, Sveitsi), saadaan testikantaja, jolla on huonompi värinmuodostus glukoosin läsnäollessa, ja joka sopii erityisen hyvin suuremmille glukoosikonsentraatioille. Käyttäen näytteitä, joilla on erilaiset mutta tunnetut glukoosikon-10 sentraatio (C) ja mittaamalla kulloinenkin heijastuskyky (R) prosentteina 650 nm:11a saadaan kuvan 4 mukainen käyrä. Mitattaessa 950 nm:11a saadaan identtinen käyrä.
Samanlaisia tuloksia saadaan 12-molybdoarsenaatilla (V), 18-15 molybdodiarsenaatilla (V), 11-molybdo-l-vanadofosfaatilla, 10-molybdo-2-vanadofosfaatilla ja 9-molybdo-3-vanadofos-faatilla, jotka kaikki voidaan valmistaa tavalla, jonka on kuvannut: G. Brauer, "Handbuch der präparativen anorganis-chen Chemie", Enke-Verlag, Stuttgart (1954). Seuraavassa 20 taulukossa 2 esitetään heteropolyhapon nimi ja kaava, samoin kuin vastaavan heteropolysinisen absorptiomaksimi.
Taulukko 2 25 heteropolysininen erilaisista heteropolyhapoista * · lähtöaine kaava heteropolysinisen absorptiomaksimi 12-molybdofosforihappo ^(Plto^O^) x nH2<> 725 nm ... 30 • natrium-18-molybdodifoafaatti ^6^2^18^21 x 42 H2° 693 “* • « *,· kalium-12-molybdoari«naatti (V) K3<AeMo12<>40) x nH O 840* tai 652 nmb • ♦ natrium-18-molybdodiareenaatti (V) Na.<Aa„Mo, o „) x 23 H„0 672 nm .' " 11 -molybdo- 1-vanadof OB f orihappo H4(PMo11VO<(J) x nHjO 665 nm 35 1 °-molyWo-2-vanadof o· f orihappo x nH2° 620 "" 9-molybdo-3-vanadofoeforihappo Hj(PMo9V301Q) X nHjO 780 nm a: vähän pelkistysainetta (glukoosia) b: paljon pelkistysainetta (glukoosia) 22 98569
Esimerkki 4
Testikantaia NAD (P) H:n määritystä varten Jos esimerkin 1 reseptissä glukoosioksidaasi korvataan samalla määrällä diaforaasia, saadaan testikantaja NAD(P)H:n 5 osoittamista varten. Näytteistä, joissa on tunnettu NADH- konsentraatio ja mittaamalla reaktio prosentteina 660 nm:11a saadaan tulokseksi kuvan 5 mukainen käyrä. Tämä käyrä voi toimia standardikäyränä tuntemattomien NADH-konsentraatioi-den määrityksessä.
10
Menetelmät NAD(P)H:n muodostamiseksi NAD(P)-riippuvasta dehydrogenaasista, vastaava substraatti ja NAD(P) ovat tunnettuja. Sen vuoksi NADH-testikantajaa voidaan hyödyntää vastaavan esireaktion jälkeen dehydrogenaasisubstraattien 15 osoittamiseen tai itse dehydrogenaasien osoittamiseen.
Esimerkki 5
Testikantaia etanolin määritykseen alkoholidehvdroaenaasin ia diaforaasin samoin kuin 18-molvbdodifosfaatin avulla 20 a) Testikantajän valmistus
Valmistetaan kuvan 6 mukainen testikantaja. Tämä testikan-taja rakennetaan niin, että indikaattorijärjestelmä, joka koostuu homogeenisesta suspensiosta, jossa on 25 4 ml 0,2 M sitraattipuskuria, pH 6,0 10 ml 10-paino-% natriumnonyylisulfaattia vedessä 60 mg tartraatsiinia 0,1 g N,N-bis(2-hydroksietyyli)-p-nitrosoaniliini x HClrää 6,8 ml 20-paino-% 18-molybdodifosforihappoa vedessä 30 1 g 25-paino-% tetraetyyliammoniumkloridia vedessä «M* 72 g 5-paino-% Kollidon 25:tä (BASF, Ludwigshafen, Saksan Liittotasavalta) 50 mM sitraattipuskurissa, pH 6,0 imeytetään imukykyiseen paperiin (Langfaser, Schoeller, .35 Germsbach, Saksan Liittotasavalta) ja kuivataan seuraavaksi 30 min ajan 40 eC:ssa.
23 98569
Entsyymit on varastoitu erilliseen paperiin (Langfaser,
Schoeller, Germsbach, Saksan Liittotasavalta). Paperiin imeytetään liuosta, jossa on 5 50 g 0,2 M fosfaattipuskuria, pH 7,0 48 g vettä 2 ml 10-paino-% natriumnonyylisulfaattia vedessä 6 g diaforaasia (15 U/mg lyofilisaattia) 2 g alkoholidehydrogenaasia (250 U/mg lyofilisaatti), 10 ja kuivataan seuraavaksi 40 °C:ssa 20 min ajan. Näin valmistettu indikaattoripaperi (13) ja entsyymipaperi (12) leikataan kulloinkin 14 x 6 mm kokoisiksi suikaleiksi.
15 350 μπι paksulle, 9,8 cm pitkälle ja 0,6 cm leveälle polyes- terifoliolle (Melinex, ICI, Frankfurt, Saksan Liittotasavalta) kiinnitetään kuljetuskuitumatoksi (14) 16 mm pitkä, 6 mm leveä ja 0,25 mm paksu lasikuitumatto, jonka neliömässä on 25 g/m^, punasolujenerotuskuitumatoksi (15) 6 mm leveä, 20 6 mm pitkä ja 700 μπι paksu lasikuitumatto, jonka neliömassa on 60 g/m2, samoin kuin suojaverkko (16) Scrynel PE280HC rot^:stä (Ziiricher Beuteltuchfabrik AG, Riischlikon, Sveitsi), jolla on mitat 6 x 8 mm ja silmäkoko 280 μπι, sulatelii-masuikaleen (18) avulla kuvassa 6 esitetyllä tavalla. Ent-25 syymipaperi (12) ja indikaattoripaperi (13) kiinnitetään yhteen 200 μπι paksulla, 15 mm pitkällä ja 6 mm leveällä läpinäkyvällä polykarbonaattifoliolla (Pokalon, Lonza, Rheinfelden, Saksan Liittotasavalta) (11) sulateliimapisa-ralla (19) kantajafoliolle (17) niin, että , että (11), 30 (12) ja (13) eivät ole kosketuksissa, mutta voidaan paina- . . maila saattaa niin keskenään kuin myös nestekontaktiin kuljetuskuitumatossa (14) olevan nesteen kanssa.
• · « · b) Etanolin määritys 35 Kohdassa a) valmistetulle, kuvan 6 mukaiselle testikantajal-le lisätään suojaverkolle (16) 32 μΐ verta. 60 sekunnin kuluttua painetaan paineella läpinäkyvällä foliolla (11) entsyymipaperia (12) ja indikaattoripaperia (13) kuljetus- 24 98569 kuitumatolle (14) ja siinä olevalle seerumille. 120 sekunnin kuluttua heijastuskyky prosentteina 642 nmrllä mitataan läpinäkyvän folion (11) läpi. Käyttämällä tunnettuja mutta erilaisia etanolikonsentraatioita veressä saadaan kuvan 7 5 mukainen käyrä. Tätä käyrää voidaan käyttää standardikäyränä tuntemattoman etanolikonsentraation määrittämiseen näytteestä.
Esimerkki 6 10 j3-qalaktosidaasin f EC 3.2.1.23) määrittäminen Käytetään seuraavia liuoksia: puskuri: 0,1 M HEPES, 20 mM magnesiumkloridi, pH 6,8 substraatti: 50 mM p-aminofenyyli-/3-galaktosidi (valmistettu 15 p-nitrofenyyli-/3-D-galaktosidista hydraamalla vedyllä
Pd/C:llä tavalla, joka on kuvattu teoksessa "Organikum", VEB Deutscher Verlag der Wissenschaften, 15. painos, Berliini 1976) vedessä neutralisaattori: 1 N natriumhydroksidi 20 indikaattori: 100 mg/ml 18-molybdodifosforihappoa ja 50 mg/ml fenyylitrimetyyliammoniumkloridia vedessä entsyymi: 180 U/ml puskurissa (ilmoitettu entsyymiaktiivisuus viittaa o-nitrofenoligalaktosidin käyttöön substraattina) 25
Testiin sekoitetaan yhteen reaktiomittaan: puskuri 780 μΐ indikaattori 100 μΐ 30 neutralisaattori 20 ui • ·« * . . substraatti 100 μΐ *·* # entsyymi a) 0, b) 1 μΐ, c) 2 μΐ, d) 3 μΐ, e) 4 μΐ, f) 5 μΐ 4,5-min inkuboinnin jälkeen sentrifugoidaan 0,5 minuuttia, . V 35 päällä oleva kerros heitetään pois, kerrostunut aine liuotetaan 1 ml:aan dimetyylisulfoksidia, ja mitataan ekstinktio (E) heti. Saadaan taulukossa 3 esitetyt tulokset.
25 98569
Taulukko 3 μΐ entsyymiä U/ml entsyymiä E (800 nm) 5--- 0 0 0,065 1 0,18 0,571 2 0,36 1,245 3 0,54 1,697 10 4 0,72 2,350 5 0,90 2,907 Näistä arvoista tulokseksi saatavaa standardikäyrää voidaan 15 käyttää tuntemattomien näytteiden j3-galaktosidaasipitoisuu-den selville saamiseen.
Esimerkki 7
Alkalisen fosfataasin fEC 3.1.3.11 määritys 20 Jos esimerkin 6 reseptissä käytetään substraattina 50 mM p-aminofenyylifosfaattia (valmistettu menetelmällä, jonka ovat kuvanneet: L. H. De Riemer ja C. F. Meares; Biochemistry . . 20 (1981) 1606), ja puskurina 1 M dietanoliamiinia, 1 mM
magnesiumkloridia, 0,1 mM sinkkikloridia, pH 9,8, niin sen 25 avulla tapahtua alkalinen fosfataasi-entsyymin määritys. Tunnetuilla entsyymkonsentraatioilla saadaan esimerkin 6 tavoin lineaarinen riippuvuus entsyymikonsentraation ja ekstinktion välillä 800 nm:11a.
30 Esimerkki 8
Testikanta-ia ^-alutamvvlitransferaasin /EC 2.3.2.2¾ osoittamiseen
Valmistetaan testikantaja esimerkille 1 analogisesti, kui-. . tenkin seuraavin muutoksin: \ , 35 Toisessa reaktiovaiheessa puskuri (2 paino-% Keltrol F:ää v*. 0,2 M sitraattipuskurissa, pH 6,0) korvataan 2 paino-%
Keltrol F:llä vedessä, N,N-bis-(2-hydroksietyyli)-p-nitro-soaniliini x HC1 ja glukoosioksidaasi jätetään pois. Siir-täjäliiman (2) ja toisen reagenssikerroksen (3) väliin 40 sijoitetaan substraatilla imeytettyä paperia, joka valmistetaan seuraavalla tavalla: 26 98569
Teepussipaperiin (12 g/m2) imeytetään liuosta, jossa on 250 mM glysyyliglysiiniä ja 20 mM -L-glutamyyli-3-karbok-syyli-l,4-fenyleenidiamiinia (valmistettu EP-patenttihake-muksen A-0103823 mukaan) 250 mM Trispuskurissa, pH 7,6, ja 5 kuivataan 20 min ajan 50 °C:ssa.
0,1 M Trispuskuriin, jossa on 10 mg/ml naudanseerumialbumii-nia, pH 7,5, valmistetaan laimennossarja ^--glutamyylitrans-feraasista. 10 μΐ tätä liuosta lisätään edellä kuvatun 10 testikantajän päälle. 1 min kuluttua 37 °C:ssa mitataan taulukossa 4 esitetyt heijastuskykyarvot prosentteina aallonpituudella 950 nm.
Taulukko 4 15 entsyymikonsentraatio heijastuskyky 950 nm: 11a U/ml %:na 20 0 59,0 0,245 57,0 0,471 55,5 1,31 52,7 2,77 49,7 25 4,93 45,8 7,39 42,2 9,85 39,0 30 Näin saatua käyrää voidaan käyttää hyväksi nesteen tuntemattoman -glutamyylitransferaasipitoisuuden määrityksessä1
Esimerkki 9
Testikantaia happaman fosfataasin fEC 3.1.3.2) osoittamiseen 35 Esimerkille 8 analogisesti saadaan testikantaja happaman :Y fosfataasin osoittamiseen, kun teepussipaperiin imeytetään / ' 10 mM p-aminofenyylifosfaattia (valmistettu menetelmällä, • » jonka ovat kuvanneet: L. H. De Riemer ja C. F. Meares, Biochemistry 20 (1981) 1606) 0,1 M sitraattipuskurissa, pH 40 5,0.
Claims (14)
1. Heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan käyttö analyytin määritykseen, tunnettu siitä, että analyytti on elektroniri-kas aromaattinen amiini tai johtaa sellaiseen muun aineen 5 kanssa.
2. Menetelmä analyytin määrittämiseksi heteropolysinisen-muodostuksen avulla, tunnettu siitä, että analyytti saatetaan reagoimaan aineen kanssa, joka johtaa aromaattiseen 10 elektronirikkaaseen amiiniin, joka saatetaan kontaktiin heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan kanssa.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään vaikealiukoista suolaa molybdeenin, mo- 15 lybdeenin ja voifrämin, vanadiinin ja molybdeenin tai vanadiinin ja molybdeenin ja volframin heteropolyhaposta, jossa on fosforia, arseenia, piitä tai germaniumia heteroatomina.
4. Förfarande enligt nägot av patentkraven 2 eller 3, kän-netecknat av att som svärlösligt sait av en heteropolysyra används ett sädant, vars katjon är större an ainmoniumj onen.
5 5. Förfarande enligt nägot av patentkraven 2 tili 4, kän- netecknat av att som svärlösligt sait av en heteropolysyra används ett sädant med en katjon med den allmänna fontein R!R2R3R4X+ (I) 10 där R1, R2, R3 och R4 är lika eller olika och vardera betecknar en alkyl-, aryl- eller aralkylgrupp, eller väte, när inte alla grupperna är lika, eller 15 ocksä bildar tvä grupper tillsammans en alkylengrupp, och X betecknar en fosfor- eller kväveatom.
4. Patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukainen menetelmä, tunnet-20 tu siitä, että heteropolyhapon vaikealiukoisena suolana käytetään sellaista suolaa, jonka kationi on ammoniumionia suurempi . ; , 5. Jonkin patenttivaatimuksista 2-4 mukainen menetelmä, '! 25 tunnettu siitä, että heteropolyhapon vaikealiukoisena suola- na käytetään suolaa, jonka kationi on yleisen kaavan I mu- • · · 1 # kainen • · · • · · • · · · • · « R^R^X4 (I) •V : 3 0 jossa : R1, R2, R3, R4 ovat samat tai erilaiset ja ovat alkyyli-, • · · aryyli- tai aral kyy li ryhmä tai vety, kun kaikki ryhmät eivät ole samoja tai 35 jossa 2 ryhmää muodostaa yhdessä alkyleeniryhmän ja X on fosfori- tai typpiatomi. 98569
6. Förfarande enligt nägot av patentkraven 2 tili 4, kän-netecknat av att som svärlösligt sait av en heteropolysyra 20 används ett sädant med en katjon ur gruppen av kvaternära kvävehaltiga heteroaromater. . . 7. Förfarande för bestämning av en elektronrik aromatisk amin genom bildning av heteropolyblätt, kannetecknat av att / 25 en lösning av den elektronrika aromatiska amin som skall * . bestämmas bringas i kontakt med ett svärlösligt sait av en • » · heteropolysyra. • · » « • · · • · · *.* * 8. Medel för bestämning av en analyt genom bildning av 30 heteropolyblätt, kännetecknat av att det innefattar ett äm-ne, som tillsammans med analyten ger en elektronrik aroma-:T: tisk amin, samt ett svärlösligt sait av en heteropolysyra eller ämnen som föranleder tili bildning av ett svärlösligt sait av en heteropolysyra.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 2-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että heteropolyhapon vaikealiukoisena suolana käytetään suolaa, jonka kationi on valittu kvaternisoitu-jen typpiheteroaromaattien joukosta. 5
7. Menetelmä elektronirikkaan aromaattisen amiinin määrittämiseksi heteropolysinisenmuodostuksella, tunnettu siitä, että määritettävän elektronirikkaan aromaattisen amiinin liuos saatetaan kontaktiin heteropolyhapon vaikealiukoisen 10 suolan kanssa.
8. Aine analyytin määrittämiseksi heteropolysinisenmuodos-tuksella, tunnettu siitä, että se sisältää ainetta, joka johtaa analyytin kanssa elektronirikkaaseen aromaattiseen 15 amiiniin ja sisältää heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa tai aineita, jotka johtavat heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan muodostumiseen.
9. Medel enligt patentkrav 8, kännetecknat av att det in-nehäller ett svärlösligt sait av en heteropolysyra av molyb-den, av molybden och volfram, av vanadin och molybden eller 35 98569 av vanadin, molybden och volfram, med fosfor, arsenik, kisel eller germanium som heteroatom.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen aine, tunnettu siitä, 20 että se sisältää vaikealiukoista suolaa molybdeenin, molybdeenin ja volframin, vanadiinin ja molybdeenin tai vanadiinin ja molybdeenin ja volframin heteropolyhaposta, jossa on heteroatomina fosforia, arseenia, piitä tai germaniumia. ·, : 25 10. Patenttivaatimuksen 8 tai 9 mukainen aine, tunnettu siitä, että se sisältää heteropolyhapon vaikealiukoisena • · · * . suolana sellaista suolaa, jonka kationi on suurempi kuin * « t ··· 1 ammoniumioni. • · · · • · « V 1 30 li. Jonkin patenttivaatimuksista 8-10 mukainen aine, tun nettu siitä, että se sisältää heteropolyhapon vaikealiukoi-: sena suolana sellaista suolaa, jonka kationi on yleisen kaa- :1♦1: van I mukainen 3. r'r2r3r4x+ (I) jossa 98569 R1, R2, R1, R2 ovat samat tai erilaiset ja ovat alkyyli-, aryyli- tai aralkyyliryhmä tai vety, kun kaikki ryhmät eivät ole samoja tai jossa 2 ryhmää muodostaa yhdessä alkyleeniryhmän ja X on 5 fosfori- tai typpiatomi.
10. Medel enligt nägot av patentkraven 8 och 9, kanneteck-5 nat av att det som svärlösligt sait av en heteropolysyra innehäller ett sädant, vars katjon är större än ammoniumjo-nen.
11. Medel enligt nägot av patentkraven 8 tili 10, kanne- 10 tecknat av att det som svarlösligt sait av en heteropolysyra innehäller ett sädant med en katjon med den allmänna formeln r'r2r3r4x+ (I) 15 där R1, R2, R3 och R4 är lika eller olika och vardera betecknar en alkyl-, aryl- eller aralkylgrupp, eller väte, när inte alla grupperna är lika eller ocksä bildar tvä grupper tillsammans en alkylengrupp, och X 20 betecknar en fosfor- eller kväveatom.
12. Medel enligt nägot av patentkraven 8 tili 10, känne- . tecknat av att det som svarlösligt sait av en heteropolysyra : innehaller ett sadant med en katjon ur gruppen av kvaternära 25 kvävehaltiga heteroaromater. • · ·
12. Jonkin patenttivaatimuksista 8-10 mukainen aine, tunnettu siitä, että se sisältää heteropolyhapon vaikealiukoisena suolana sellaista suolaa, jonka kationi on valittu kva- 10 ternisoitujen typpiheteroaromaattien joukosta.
13. Medel för bestämning av en elektronrik aromatisk amin • · genom bildning av heteropolyblätt, kännetecknat av att det • I* V : innefattar ett svarlösligt sait av en heteropolysyra eller 30 ämnen som föranleder tili bildning av ett svärlösligt sait !#jt; av en heteropolysyra. • · · • « · • * ·
13. Aine elektronirikkaan aromaattisen amiinin määrittämiseen heteropolysinisenmuodostuksella, tunnettu siitä, että se sisältää heteropolyhapon vaikealiukoista suolaa tai ai- 15 neita, jotka johtavat heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan muodostumiseen kantajaan sidotussa muodossa.
14. Heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan käyttö aineen valmistukseen elektronirikkaan aromaattisen amiinin määri- 20 tystä varten heteropolysinisenmuodostuksella. l. Användning av ett svärlösligt sait av en heteropolysyra för bestämning av en analyt, kannetecknad av att analyten är 25 en elektronrik aromatisk amin eller tillsammans med ett an- ' . nat ämne ger en sädan. • · · • · · • · · · • » · *·.·* 2. Förfarande för bestämning av en analyt med hjälp av • · · * bildning av heteropolyblätt, kännetecknat av att analyten 30 bringas att reagera med ett ämne, vilket ger en elektronrik : aromatisk amin, som bringas i kontakt med ett svärlösligt sait av en heteropolysyra. Förfarande enligt patentkrav 2, kännetecknat av att ett 35 svärlösligt sait av en heteropolysyra av molybden, av molyb- 2 den och volfram, av vanadin och molybden eller av vanadin, molybden och volfram, med fosfor, arsenik, kisel eller germanium som heteroatom, används. 98569
14. Användning av ett svärlösligt sait av en heteropolysyra för framställning av ett medel för bestämning av en elekt- 35 ronrik aromatisk amin genom bildning av heteropolyblätt.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3940010 | 1989-12-02 | ||
| DE3940010A DE3940010A1 (de) | 1989-12-02 | 1989-12-02 | Verwendung eines schwer loeslichen salzes einer heteropolysaeure zur bestimmung eines analyts, entsprechendes bestimmungsverfahren sowie hierfuer geeignetes mittel |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI905925A0 FI905925A0 (fi) | 1990-11-30 |
| FI905925A FI905925A (fi) | 1991-06-03 |
| FI98569B FI98569B (fi) | 1997-03-27 |
| FI98569C true FI98569C (fi) | 1997-07-10 |
Family
ID=6394747
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI905925A FI98569C (fi) | 1989-12-02 | 1990-11-30 | Heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan käyttö analyytin määritykseen, vastaava määritysmenetelmä sekä tähän sopiva aine |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5240860A (fi) |
| EP (1) | EP0431456B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0687790B2 (fi) |
| KR (1) | KR950001124B1 (fi) |
| CN (1) | CN1030735C (fi) |
| AT (1) | ATE118552T1 (fi) |
| AU (1) | AU628688B2 (fi) |
| CA (1) | CA2031238C (fi) |
| CZ (1) | CZ284677B6 (fi) |
| DE (2) | DE3940010A1 (fi) |
| DK (1) | DK0431456T3 (fi) |
| ES (1) | ES2069661T3 (fi) |
| FI (1) | FI98569C (fi) |
| GR (1) | GR3015363T3 (fi) |
| HU (1) | HU212120B (fi) |
| IE (1) | IE65537B1 (fi) |
| IL (1) | IL96473A (fi) |
| MX (1) | MX23524A (fi) |
| NO (1) | NO300244B1 (fi) |
| NZ (1) | NZ236249A (fi) |
| PL (1) | PL166907B1 (fi) |
| PT (1) | PT96029B (fi) |
| RU (1) | RU2052819C1 (fi) |
| SK (1) | SK280136B6 (fi) |
| YU (1) | YU227790A (fi) |
| ZA (1) | ZA909625B (fi) |
Families Citing this family (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3940010A1 (de) * | 1989-12-02 | 1991-06-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verwendung eines schwer loeslichen salzes einer heteropolysaeure zur bestimmung eines analyts, entsprechendes bestimmungsverfahren sowie hierfuer geeignetes mittel |
| DE4311464A1 (de) * | 1993-04-08 | 1994-10-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur kolorimetrischen Bestimmung eines Analyten mit einer PQQ-abhängigen Dehydrogenase |
| DE4311460A1 (de) * | 1993-04-08 | 1994-10-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur kolorimetrischen Bestimmung eines Analyten mittels Benzylalkoholdehydrogenase und einem chromogenen Redoxindikator |
| DE4338811A1 (de) * | 1993-11-15 | 1995-05-18 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verwendung von Teststreifen zur Bestimmung der UV-Intensität oder zur Vorbestimmung der sonnenbrandfreien Aufenthaltsdauer in der Sonne sowie hierfür geeignetes Testsystem und Teststreifenpackung |
| US5696193A (en) * | 1994-04-25 | 1997-12-09 | Clinical Diagnostic Systems, Inc. | Immunoassay elements comprising polymers containing vandium IV (V+4) ions |
| US5601997A (en) | 1995-02-03 | 1997-02-11 | Tchao; Ruy | Chemotaxis assay procedure |
| US20060008494A1 (en) * | 1997-02-21 | 2006-01-12 | The Regents Of The University Of California | Complete inactivation of infectious proteins |
| US6719988B2 (en) | 1997-02-21 | 2004-04-13 | The Regents Of The University Of California | Antiseptic compositions for inactivating prions |
| US6617119B2 (en) | 1997-02-21 | 2003-09-09 | The Regents Of The University Of California | Assay for specific strains of multiple disease related conformations of a protein |
| US6221614B1 (en) | 1997-02-21 | 2001-04-24 | The Regents Of The University Of California | Removal of prions from blood, plasma and other liquids |
| US6620629B1 (en) | 1997-02-21 | 2003-09-16 | The Regents Of The University Of California | Method for detecting prions |
| US6720355B2 (en) | 1997-02-21 | 2004-04-13 | The Regents Of The University Of California | Sodium dodecyl sulfate compositions for inactivating prions |
| US6121050A (en) * | 1997-08-29 | 2000-09-19 | Han; Chi-Neng Arthur | Analyte detection systems |
| US6432893B1 (en) * | 1998-08-21 | 2002-08-13 | Senju Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for removal of protein from contact lenses |
| KR100311854B1 (ko) * | 1998-10-29 | 2001-12-28 | 신한길 | 지하수자동관측시스템 |
| DE19945828B4 (de) | 1999-09-24 | 2011-06-01 | Roche Diagnostics Gmbh | Analysenelement und Verfahren zur Bestimmung eines Analyten in Flüssigkeit |
| US6645359B1 (en) | 2000-10-06 | 2003-11-11 | Roche Diagnostics Corporation | Biosensor |
| JP3845413B2 (ja) | 2001-06-08 | 2006-11-15 | エフ ホフマン−ラ ロッシュ アクチェン ゲゼルシャフト | 体液サンプリング装置およびこのような装置とともに使用される試験媒体カセット |
| US6659966B2 (en) | 2001-11-15 | 2003-12-09 | Roche Diagnostics Corporation | Fluid sampling apparatus |
| DE10163775A1 (de) | 2001-12-22 | 2003-07-03 | Roche Diagnostics Gmbh | Analysensystem zur Bestimmung einer Analytkonzentration unter Berücksichtigung von proben- und analytunabhängigen Lichtintensitätsänderungen |
| US6759190B2 (en) * | 2002-06-15 | 2004-07-06 | Acon Laboratories, Inc. | Test strip for detection of analyte and methods of use |
| US7572237B2 (en) * | 2002-11-06 | 2009-08-11 | Abbott Diabetes Care Inc. | Automatic biological analyte testing meter with integrated lancing device and methods of use |
| DE10303265A1 (de) | 2003-01-28 | 2004-07-29 | Roche Diagnostics Gmbh | Fluorimetrische Bestimmung von Analyten durch ein intramolekulares Quencher-Fluorophor-Konjugat |
| DE10304448A1 (de) | 2003-02-04 | 2004-08-12 | Roche Diagnostics Gmbh | Fluorimetrische Bestimmung von Analyten durch Amin-N-Oxide als Redoxindikatoren |
| DE10346863A1 (de) * | 2003-10-09 | 2005-05-04 | Roche Diagnostics Gmbh | On-Board-Kontrolle für Analyseelemente |
| CN103558369B (zh) | 2004-12-13 | 2015-09-09 | 拜尔保健有限公司 | 用于测量生物液体中的分析物的自我限定大小的组合物和检验设备 |
| WO2006094104A2 (en) | 2005-03-01 | 2006-09-08 | Molecular Probes, Inc. | Chemical probe compounds that become fluorescent upon reduction, and methods for their use |
| EP1868502B1 (en) * | 2005-04-04 | 2010-07-07 | Facet Technologies, LLC | Narrow-profile lancing device |
| US7955484B2 (en) * | 2005-12-14 | 2011-06-07 | Nova Biomedical Corporation | Glucose biosensor and method |
| US8008068B2 (en) * | 2008-02-29 | 2011-08-30 | Light Pointe Medical, Inc. | Nonhemolytic optical sensor with enhanced reflectance |
| US20090219509A1 (en) * | 2008-02-29 | 2009-09-03 | Hiroshi Nomura | Optical sensor with enhanced reflectance |
| CN104870982B (zh) | 2012-12-20 | 2019-02-15 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用于评估医学测量曲线的方法 |
| EP2936155B1 (en) | 2012-12-20 | 2018-12-12 | Roche Diabetes Care GmbH | Method for analyzing a sample of a body fluid |
| EP2781919A1 (en) | 2013-03-19 | 2014-09-24 | Roche Diagniostics GmbH | Method / device for generating a corrected value of an analyte concentration in a sample of a body fluid |
| WO2016003685A1 (en) | 2014-06-30 | 2016-01-07 | 3M Innovative Properties Company | Photochromic articles containing a polyoxometalate and methods of making same |
| WO2016003683A1 (en) | 2014-06-30 | 2016-01-07 | 3M Innovative Properties Company | Photochromic articles containing polyoxometalate derivatives and methods of making same |
| CN106573910B (zh) | 2014-08-22 | 2020-08-28 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 氧化还原指示剂 |
| KR102372113B1 (ko) | 2016-10-05 | 2022-03-07 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 다중 분석물 진단 테스트 엘리먼트들을 위한 검출 시약들 및 전극 배열들, 그리고 그것을 사용하는 방법들 |
| EP3339431A1 (en) | 2016-12-22 | 2018-06-27 | Roche Diabetes Care GmbH | Glucose dehydrogenase variants with improved properties |
| CN111801425B (zh) | 2018-02-28 | 2024-02-23 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于连续分析物测量的生物相容性涂层 |
| CN108508064B (zh) * | 2018-03-22 | 2020-08-14 | 中国科学院上海硅酸盐研究所 | 文物表面可溶盐含量的检测设备 |
| CN109394782B (zh) * | 2018-12-03 | 2020-10-20 | 中北大学 | 胆固醇衍生物改性多钼氧簇杂化物及其制备和应用 |
| CN110813339A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-02-21 | 吉林师范大学 | 一种缺陷杂多蓝/TiO2复合可见光合成氨催化剂的制备方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT630626A (fi) * | 1959-05-15 | |||
| JPS5637050A (en) * | 1979-09-04 | 1981-04-10 | Ube Ind Ltd | Preparation of catalyst for preparing unsaturated acid |
| JPS5963198A (ja) * | 1982-10-01 | 1984-04-10 | Toyo Jozo Co Ltd | 酵素を用いる定量法 |
| US4935346A (en) * | 1986-08-13 | 1990-06-19 | Lifescan, Inc. | Minimum procedure system for the determination of analytes |
| DE3630999A1 (de) * | 1986-09-12 | 1988-03-17 | Boehringer Mannheim Gmbh | Mehrschichtiger testtraeger |
| US4952495A (en) * | 1987-06-08 | 1990-08-28 | Eastman Kodak Company | Hydrolyzable compounds which release electron transfer agents and analytical use of same |
| DE3826922A1 (de) * | 1988-08-09 | 1990-02-22 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur kolorimetrischen bestimmung eines analyten mittels enzymatischer oxidation |
| DE3940010A1 (de) * | 1989-12-02 | 1991-06-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verwendung eines schwer loeslichen salzes einer heteropolysaeure zur bestimmung eines analyts, entsprechendes bestimmungsverfahren sowie hierfuer geeignetes mittel |
-
1989
- 1989-12-02 DE DE3940010A patent/DE3940010A1/de not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-11-26 IL IL9647390A patent/IL96473A/en not_active IP Right Cessation
- 1990-11-26 AU AU66949/90A patent/AU628688B2/en not_active Expired
- 1990-11-28 EP EP90122728A patent/EP0431456B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-28 YU YU227790A patent/YU227790A/sh unknown
- 1990-11-28 NZ NZ236249A patent/NZ236249A/xx unknown
- 1990-11-28 DK DK90122728.0T patent/DK0431456T3/da active
- 1990-11-28 DE DE59008475T patent/DE59008475D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-28 PL PL90287991A patent/PL166907B1/pl unknown
- 1990-11-28 ES ES90122728T patent/ES2069661T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-28 AT AT90122728T patent/ATE118552T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-11-29 PT PT96029A patent/PT96029B/pt not_active IP Right Cessation
- 1990-11-29 SK SK5936-90A patent/SK280136B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1990-11-29 MX MX2352490A patent/MX23524A/es unknown
- 1990-11-29 CZ CS905936A patent/CZ284677B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-11-30 JP JP2330826A patent/JPH0687790B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-30 FI FI905925A patent/FI98569C/fi active IP Right Grant
- 1990-11-30 HU HU908021A patent/HU212120B/hu unknown
- 1990-11-30 NO NO905202A patent/NO300244B1/no not_active IP Right Cessation
- 1990-11-30 RU SU904894061A patent/RU2052819C1/ru active
- 1990-11-30 ZA ZA909625A patent/ZA909625B/xx unknown
- 1990-11-30 CA CA002031238A patent/CA2031238C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-30 IE IE431790A patent/IE65537B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-01 KR KR1019900019765A patent/KR950001124B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-12-01 CN CN90109693A patent/CN1030735C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-03 US US07/620,697 patent/US5240860A/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-04-13 US US08/045,203 patent/US5382523A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-10-12 US US08/321,512 patent/US5521060A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-03-10 GR GR950400522T patent/GR3015363T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI98569C (fi) | Heteropolyhapon vaikealiukoisen suolan käyttö analyytin määritykseen, vastaava määritysmenetelmä sekä tähän sopiva aine | |
| CA1339058C (en) | Process and agent for the colorimetric determination of an analyte by means of enzymatic oxidation | |
| Li et al. | A cholesterol biosensor based on entrapment of cholesterol oxidase in a silicic sol‐gel matrix at a prussian blue modified electrode | |
| Sotomayor et al. | Development of an enzymeless biosensor for the determination of phenolic compounds | |
| JP2003232789A (ja) | 安定化したテトラゾリウム試薬組成物およびこれを使用するための方法 | |
| KR101694982B1 (ko) | 전기화학적 바이오센서 | |
| EP1964928B1 (de) | Chinone als Mediatoren für photometrische Teste | |
| WO2018062542A1 (ja) | 電子メディエーター修飾酵素並びにそれを用いた酵素電極、分光学的分析キット及び酵素試験紙 | |
| EP0606296B1 (en) | Reagents and assay methods including a phenazine-containing indicator | |
| JP5380888B2 (ja) | グルコースの定量方法ならびに定量組成物 | |
| JP2005118014A (ja) | 分析方法およびそれに用いる試薬 | |
| Schmidt | Oxygen-independent oxidases: a new class of enzymes for application in diagnostics | |
| EP3126493B1 (en) | High load enzyme immobilisation by crosslinking | |
| JPS6259782B2 (fi) | ||
| JP2775847B2 (ja) | フルクトサミン測定用試薬 | |
| Li et al. | Amperometric Sensor Based on Neutral Red‐Doped Silica Nanoparticles Coupled with Microdialysis for the Measurement of Glutamate in the Rat Striatum |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |
|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |