CZ284677B6 - Použití těžko rozpustné soli heteropolykyseliny ke stanovení analytu, způsob stanovení a činidlo - Google Patents

Použití těžko rozpustné soli heteropolykyseliny ke stanovení analytu, způsob stanovení a činidlo Download PDF

Info

Publication number
CZ284677B6
CZ284677B6 CS905936A CS593690A CZ284677B6 CZ 284677 B6 CZ284677 B6 CZ 284677B6 CS 905936 A CS905936 A CS 905936A CS 593690 A CS593690 A CS 593690A CZ 284677 B6 CZ284677 B6 CZ 284677B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
heteropolyacid
sparingly soluble
analyte
carbon atoms
soluble salt
Prior art date
Application number
CS905936A
Other languages
English (en)
Inventor
Joachim Dr. Hönes
Hans Dr. Wielinger
Volker Dr. Unkrig
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of CS593690A3 publication Critical patent/CS593690A3/cs
Publication of CZ284677B6 publication Critical patent/CZ284677B6/cs

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G01N33/525—Multi-layer analytical elements
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/17—Nitrogen containing
    • Y10T436/173845—Amine and quaternary ammonium
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/17—Nitrogen containing
    • Y10T436/173845—Amine and quaternary ammonium
    • Y10T436/174614—Tertiary amine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/17—Nitrogen containing
    • Y10T436/173845—Amine and quaternary ammonium
    • Y10T436/175383—Ammonia

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Kromě použití těžkorozpustné soli heteropolykyseliny ke stanovení analytu se řešení týká způsobu stanovení analytu pomocí tvorby heteropolymodři. Analyt se nechá zreagovat s látkou, která vede k aromatickému aminu bohatému na elektrony, který se uvede do styku s těžko rozpustnou solí heteropolykyseliny. Řešení se rovněž týká odpovídajícího činidla.ŕ

Description

Použití těžko rozpustných solí heteropolykyselin, způsoby stanovení analytu a činidla pro tyto způsoby
Oblast techniky
Vynález se týká použití těžko rozpustných solí heteropolykyselin pro stanovení analytu a pro výrobu prostředku na stanovení analytu tvorbou heteropolymodři. Dále se vynález týká způsobů stanovení analytu pomocí tvorby heteropolymodři a konečně se také týká činidel k provádění těchto způsobů.
Dosavadní stav techniky
Heteropolykyseliny jsou anorganické polykyseliny s alespoň dvěma různými centrálními atomy. Vznikají z vícebázických kyslíkatých kyselin kovu, jako je molybden, wolfram a vanad a nekovu nebo kovu, jako je fosfor, křemík, arzen, jod, železo, mangan a kobalt, jako parciální směsné anhydridy. Jako příklady je možno uvést kyselinu fosformolybdenovou nebo fosforwolframovou. Heteropolykyseliny jsou ve vodě rozpustné. Jsou však stabilní pouze v kyselých roztocích.
Heteropolykyseliny molybdenu a wolframu jsou již dlouhou dobu známé reagencie. Jejich analytické použití se váže na stanovení fosforečnanů a také na důkaz arzeničnanů nebo křemičitanů za tvorby odpovídajících heteropolykyselin s molybdenanem nebo wolframanem a za následující redukce heteropolykyseliny na modré barvivo, takzvanou heteropolymodř. Zbarvení spočívá v absorpci světla přechodem elektronů mezi pětimocným a šestimocným molybdenem nebo wolframem. Heteropolymodř na bázi heteropolykyselin je vždy barvivo s vysokou extinkcí, které má v závislosti na vlnové délce velmi široké absorpční maximum. Toto je typické pro absorpční pásy transferu náboje.
Heteropolykyseliny pro důkaz redukujících sloučenin za tvorby heteropolymodři jsou známé.
V publikaci „Spot Tests in Organic Analysis” F. Fiegl, Elsevier Publishing Company, 5. vydání, 1956, str. 128 až 129, je popsáno, že se kyselina 12-molybdofosforečná redukuje mnoha redukujícími látkami na molybdenovou modř. Vzhledem ktomu, že tato důkazní reakce je nespecifická, doporučuje se pro docílení určité selektivity, aby se zkoušené vzorky zalkalizovaly a potom se extrahovaly etherem. Etherový extrakt obsahuje potom především aromatické dusíkaté báze a v etheru rozpustné neutrální látky. Kyselé látky zůstávají rozpuštěné ve vodné fázi.
Z publikace P. B. Issopoulos, Pharm. Acta Helv. 64, 82 (1989) je známo, že určitá léčiva, obsahující o-hydrochinonovou strukturu, jako například methyldopa, působí v roztoku v kyselině sírové redukčně na kyselinu molybdofosforečnou a způsobují tvorbu molybdenové modři.
V publikaci M. L. Matheke a kol., Clin. Chem. 33, 2109-2110 (1987) je popsáno použití kyseliny fosforwolframové pro důkaz kyseliny močové. Reduktivní tvorba wolframové modři slouží jako indikátor pro přítomnost kyseliny močové. Důkazní reakce je rušena přítomností redukčně působících léčiv.
Z publikace B. Klein a kol., Clin. Chem. 12, 816 - 823 (1966) je známé stanovení glukózy v séru nebo plazmě, které spočívá v následujících reakčních krocích:
Glukóza se oxiduje pomocí hexakyanoželezitanu draselného, přičemž vytvořený hexakyanoželeznatan draselný působí redukčně na kyselinu fosformolybdenovou a způsobuje tvorbu molybdenové modři. Vzhledem ktomu, že sérum a plazma může obsahovat různá množství
- 1 CZ 284677 B6 kyseliny močové, léčiv nebo dalších redukčně působících látek, jako je například bilirubin a glutathion, je jejich rušivý vliv při tomto postupu předprogramován.
Nevýhoda všech známých analytických metod, které využívají reduktivní tvorbu heteropolymodři z heteropolykyselin, spočívá především v nespecifitě těchto důkazních reakcí. Velmi mnoho redukujících substancí může působit rušivě, neboť rovněž vedou ke tvorbě heteropolymodři. Kromě toho jsou heteropolykyseliny stabilní pouze v kyselém prostředí. Toto velice silně omezuje rozsah použití.
Dosud není známé obzvláště spojení tvorby heteropolymodři s enzymatickými reakčními kroky pro specifický důkaz a pro specifické stanovení látek. Přímo pro důkaz součástí tělních tekutin, jako je krev, sérum, plazma, moč a podobně, jsou však často zapotřebí enzymatické způsoby stanovení.
Úkolem předloženého vynálezu tedy bylo využít tvorby heteropolymodři jako reakce pro důkaz a stanovení látek, obzvláště látek obsažených v tělních tekutinách, a obzvláště v kombinaci s enzymatickými reakčními kroky. Při tom nechají působit rušivě redukčně působící doprovodné látky a reakce pro důkaz a pro stanovení mají probíhat při hodnotách pH, potřebných pro enzymatické reakce. Kromě toho má být možné provádět reakce pro důkaz a pro stanovení rychle.
Výše uvedený úkol byl vyřešen použitím těžko rozpustných solí heteropolykyselin pro stanovení analytu.
Bylo zjištěno, že těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny se může výhodně použít pro stanovení analytu, obzvláště tehdy, když analyt je na elektrony bohatý amin nebo k takovému společně s dalšími látkami vede.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je použití těžko rozpustných solí heteropolykyselin, jejichž množství rozpustné v roztoku analytu samo o sobě pro stanovení analytu nepostačuje, pro stanovení analytu, kterým je na elektrony bohatý aromatický amin nebo látka, která v předběžné reakci s jednou nebo několika dalšími látkami k takovému aminu vede.
Jako těžko rozpustné soli heteropolykyseliny se s výhodou používá soli heteropolykyseliny molybdenu, molybdenu a wolframu s fosforem, arzenem, křemíkem nebo germaniem jako heteroatomy. Kationt této soli je s výhodou větší než amoniový iont.
Dále je předmětem vynálezu způsob stanovení analytu pomocí tvorby heteropolymodři, jehož podstata spočívá v tom, že se analyt nechá zreagovat s látkou, která vede k na elektrony bohatému aromatickému aminu, s nímž se uvede do styku těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny, jejíž množství, rozpustné v roztoku analytu, samo o sobě pro stanovení analytu nepostačuje.
Předmětem vynálezu je dále způsob stanovení na elektrony bohatého aminu pomocí tvorby heteropolymodři, jehož podstata spočívá v tom, že se roztok stanovovaného na elektrony bohatého aromatického aminu uvede do styku s těžko rozpustnou solí heteropolykyseliny.
Předmětem vynálezu jsou také činidla pro stanovení analytu výše uvedenými způsoby. Podstatou jednoho z těchto činidel je, že obsahuje látku, vytvářející s analytem na elektrony bohatý aromatický amin a těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny, nebo ktomu potřebné látky
-2CZ 284677 B6 a podstatou druhého je, že obsahuje těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny nebo pro její vznik potřebné látky v kapalném médiu nebo ve formě, vázané na nosič.
Konečně je předmětem vynálezu také použití těžko rozpustné soli heteropolykyseliny pro výrobu prostředku na stanovení analytu tvorbou heteropolymodři.
Pod označením „těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny se ve smyslu předloženého vynálezu rozumí taková sůl heteropolykyseliny, která je ve vodě nebo vodných médiích, jako jsou pufiy nebo tělní tekutiny, jako je například krev, plazma, sérum, moč nebo sliny, zcela nerozpustná nebo pouze velmi málo rozpustná a taková také zůstává za podmínek testu a tvorby zbarvení. Obzvláště je sůl heteropolykyseliny tak špatně rozpustná, že maximálně rozpustitelné množství v kapalném vzorku samotné nestačí pro stanovení v něm obsaženého analytu.
Překvapivě se ukázalo, že takováto těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny je stabilní nejen v kyselém prostředí, ale také v neutrální a bázické oblasti pH, obzvláště až asi pH 10. Může se tedy používat v oblastech pH, ve kterých je aktivní většina enzymů a tím se může využít tvorba heteropolykyseliny v kombinaci s enzymatickými reakcemi. Především v nerozpustném stavu jsou těžko rozpustné soli heteropolykyselin podle vynálezu stabilní také při zvýšených teplotách. Přes špatnou rozpustnost se ukázalo, že analyt se dá pomocí soli heteropolykyseliny podle předloženého vynálezu velice rychle, to znamená během několika málo sekund až několika málo minut, dokázat a stanovit v důsledku tvorby heteropolymodři. Při tom je možné selektivní stanovení bez rušení jinými redukčně působícími látkami. Toto dovoluje citlivá měřicí metoda, která obzvláště také kvůli širokému absorpčnímu maximu, které dosahuje od asi 550 až přes IlOOnm, nemá žádné zvláštní požadavky na měřicí přístroje a dá se také dobře vizuálně sledovat.
Podle vynálezu použitelné soli heteropolykyselin jsou soli heterokyselin molybdenu, molybdenu a wolframu, vanadu a molybdenu nebo vanadu a molybdenu a wolframu s fosforem, arzenem, křemíkem nebo germaniem jako heteroatomy. Obzvláště výhodné jsou heteropolykyseliny molybdenu s fosforem nebo arzenem. Fosfor je jako nekovový atom nej výhodnější. Jako kovový atom je nejvýhodnější molybden. Zvláště vhodné jsou těžko rozpustné soli kyseliny 12molybdofosforečné, kyseliny 18-molybdodifosforečné, kyseliny 12-molybdoarzeničné, kyseliny 18-molybdodiarzeničné, kyseliny 11-molybdo-l-vanadofosforečné, kyseliny 10-molybdo-2vanadofosforečné a kyseliny 9-molybdo-3-vanadofosforečné, přičemž jako obzvláště výhodnou je třeba hodnotit na základě jejího vysokého barevného výtěžku při redukci na molybdenovou modř kyselinu 18-molybdodifosforečnou.
Těžko rozpustné soli heteropolykyselin mají s výhodou větší kationt než je amonný kationt NH4\ Jako výhodné je možno uvést kationy obecného vzorce I
R’R2R3R4X+ (I), ve kterém
R1, R2, R3 a R4 jsou stejné nebo různé a značí alkylovou skupinu s 1 až 22 atomy uhlíku, arylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku nebo aralkylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku v arylové části a 1 až 22 atomy uhlíku v alkylové části, nebo značí vodíkový atom, když nejsou všechny zbytky stejné, nebo dva zbytky společně tvoří alkylenovou skupinu se 4 až 6 atomy uhlíku, a
X značí atom fosforu nebo dusíku.
V alkylové skupině a aralkylové skupině značí alkyl přímý nebo rozvětvený alkylový zbytek s 1 až 22 uhlíkovými atomy, výhodně s 1 až 6 uhlíkovými atomy. Aryl v arylové skupině nebo
-3 CZ 284677 B6 aralkylové skupině značí aromatický zbytek se 6 až 10 uhlíkovými atomy, obzvláště výhodná je fenylová nebo naftylová skupina.
Jako aralkylová skupina je obzvláště výhodná benzylová skupina.
Alkylenová skupina je tvořena nasyceným nebo nenasyceným uhlovodíkovým řetězcem se 4 až 6 uhlíkovými atomy, výhodně se 4 nebo 5 uhlíkovými atomy, který je oběma svými konci vázán na X. Kationt obecného vzorce I může obsahovat dva takovéto alkylenové zbytky, výhodně však je přítomen pouze jeden alkylenový zbytek.
V obecném vzorci I značí X výhodně dusíkový atom. Rovněž tak mohou být výhodné kationty v těžko rozpustných solích heteropolykyselin vybrané ze skupiny dusíkatých heteroaromátů, obsahujících kvartémí dusíkový atom. Jako příklady je možno uvést pyridin nebo chinolin, které na svém dusíkovém atomu nesou alkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo aralkylovou skupinu, přičemž pro definici těchto zbytků rovněž přísluší významy, uvedené pro zbytky R1, R2, R3 a R4 v obecném vzorci I.
Nerozpustná sůl heteropolykyseliny podle předloženého vynálezu se může například získat reakcí heteropolykyseliny s odpovídající bázickou substancí. Zpravidla se ktomu používá jedna látka ve formě roztoku, výhodně ve formě vodného roztoku. Mohou se ale obě komponenty soli přidávat v pevné formě do kapaliny, obzvláště vodné kapaliny, nebo naopak.
Jako analyt se označuje stanovovaná látka. Jako obzvláště vhodný se vynález ukázal pro látky, které se vyskytují rozpuštěné v kapalině, obzvláště vodné kapalině. Obzvláště výhodně mohou být použity těžko rozpustné soli heteropolykyselin pro stanovení určitých látek v tělních tekutinách, jako je například krev, plazma, sérum, moč nebo sliny. Jako možné analyty jsou v tomto smyslu například glukóza, cholesterol, laktát, NADH nebo ethylalkohol. Zásadně mohou být podle předloženého vynálezu stanoveny všechny sloučeniny, které mohou být zreagovány s jednou nebo několika jinými sloučeninami na takové látky, nebojsou samy takovými látkami, které jsou s to vzhledem ke svému redox potenciálu a vzhledem ke své kinetice, redukovat těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny během několika málo sekund až několika minut, výhodně v době méně než tři minuty, na heteropolymodř. Překvapivě se ukázalo, že na elektrony bohaté aromatické aminy jsou tohoto schopné. Především je překvapivé, že při tom je možné selektivní stanovení, bez rušení jinými redukčně působícími sloučeninami.
Pod pojmem na elektrony bohatý aromatický amin se rozumí sloučenina, která je na elektrony bohatší než anilin a představuje tedy silnější redukční činidlo než je anilin. Na elektrony bohaté aromatické aminy mají redox potenciál menší než 0,6 V, výhodně menší než 0,45 V, proti normální vodíkové elektrodě. Velikost redox potenciálu samotného však není rozhodující. Kromě toho je důležité, aby odpovídající látka redukovala rychle, to znamená za méně než asi tři minuty, těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny na heteropolymodř. V úvahu přicházejí například všechny anilinové deriváty, které nesou jeden nebo několik +1 a/nebo +M substituentů, jako je hydroxylová skupina, alkylová skupina, alkoxylová skupina, aryloxyskupina, alkylthioskupina, arylthioskupina, aminoskupina, monoalkylaminoskupina a dialkylaminoskupina.
Alkylová skupina, alkoxylová skupina, alkylthioskupina, monoalkylaminoskupina a dialkylaminoskupina jsou zbytky, ve kterých značí alkyl uhlovodíkový zbytek s 1 až 6 uhlíkovými atomy, který může být substituován hydroxylovou skupinou, aminoskupinou, která je popřípadě jednou nebo několikrát substituovaná alkylovou skupinou s 1 až 6 uhlíkovými atomy, dále skupinou PO3H2, skupinou SO3H nebo skupinou CO2H. Zbytky kyselin PO3H2, SO3H a COOH se mohou vyskytovat jako takové nebo ve formě solí, obzvláště jako amonné soli, soli s alkalickými kovy nebo s kovy alkalických zemin.
-4CZ 284677 B6
Aryloxyskupiny a arylthioskupiny jsou zbytky se 6 až 10 uhlíkovými atomy, přičemž obzvláště výhodné jsou fenoxyskupina a fenylthioskupina.
Pod pojmem deriváty anilinu se rozumí sloučeniny, které nesou na aromatickém kruhovém systému nesubstituovanou aminoskupinu nebo aminoskupinu jednou nebo několikrát substituovanou alkylovou skupinou, přičemž tento aromatický kruhový systém je substituován jedním nebo několika aromatickými a/nebo alicyklickými kruhy. Jako aromatické kruhy při tom přicházejí v úvahu jak uhlovodíkové aromatické kruhové systémy, tak také heteroaromáty. Jako příklady je možno uvést anelované benzenové nebo naftalenové kruhy nebo anelovaný pyridinový kruh.
Pod pojmem alicyklické kruhy se rozumí nasycené nebo nenasycené cykloalifatické kruhy s 5 až 7 uhlíkovými atomy, výhodně s 5 nebo 6 uhlíkovými atomy.
Jako možné substituenty alkylové aminoskupiny mohou být například uhlovodíkové zbytky s 1 až 6 uhlíkovými atomy, které jsou substituovány hydroxylovou skupinou, aminoskupinou, která je jednou nebo několikrát substituovaná alkylovou skupinou s 1 až 6 uhlíkovými atomy, skupinou PO3H2, skupinou SO3H nebo skupinou CO2H. Kyselinové zbytky se mohou vyskytovat jako takové nebo ve formě solí, jako soli amonné, soli s alkalickými kovy nebo s kovy alkalických zemin.
Obzvláště vhodné jsou jako na elektrony bohaté aromatické aminy sloučeniny obecného vzorce II
(Π), ve kterém značí R5 hydroxylovou skupinu nebo aminoskupinu, přičemž aminoskupina je popřípadě jednou nebo dvakrát substituovaná alkylovou skupinou a alkylová skupina je popřípadě substituovaná hydroxylovou skupinou aminoskupinou, substituovanou popřípadě jednou nebo několikrát alkylovou skupinou, dále skupinou PO3H2, skupinou SO3H nebo skupinou CO2H,
R6 a R7, které jsou stejné nebo různé, vodíkový atom nebo alkylovou skupinu, přičemž alkylová skupina je popřípadě substituovaná hydroxylovou skupinou, aminovou skupinou, popřípadě jednou nebo několikrát substituovanou alkylovou skupinou, skupinou PO3H2, skupinou SO3H nebo skupinou CO2H, a
R8, R9, R10 a R11, které jsou stejné nebo různé, značí vodíkový atom, alkylovou skupinu, alkoxylovou skupinu, alkylthioskupinu, aryloxyskupinu, arylthioskupinu, atom halogenu, karboxylovou skupinu, karboxyalkylovou skupinu nebo alkoxykarbonylovou skupinu.
Alkylové skupiny a alkyly v alkylthioskupině, karboxyalkylové skupině a alkoxykarbonylové skupině představují uhlovodíkové zbytky s 1 až 6 uhlíkovými atomy. Obzvláště výhodné jsou zbytky s 1 až 3 uhlíkovými atomy.
-5 CZ 284677 B6
Alkoxylové zbytky obsahují rovněž 1 až 6 uhlíkových atomů, obzvláště výhodné jsou alkoxylové zbytky s 1 až 3 uhlíkovými atomy. Aryloxyskupiny a arylthioskupiny jsou zbytky se 6 až 10 uhlíkovými atomy, přičemž obzvláště výhodná je fenoxyskupina a fenylthioskupina. Atom halogenu představuje chlor, fluor, brom nebo jod. Jako halogenové substituenty jsou výhodné chlor a brom.
Zbytky kyselin PO3H2, SO3H nebo CO2H se mohou vyskytovat jako takové nebo ve formě solí, jako soli amonné, soli s alkalickými kovy nebo s kovy alkalických zemin.
Amonné soli jsou takové, které obsahují amoniový iont NH/, nebo takové, které obsahují amoniové kationty, jednou nebo několikrát substituované alkylovou skupinou, arylovou skupinou nebo aralkylovou skupinou. Alkyl v alkylové a aralkylové skupině značí uhlovodíkový zbytek s 1 až 6 uhlíkovými atomy. Aryl v arylové skupině a aralkylové skupině značí aromatický kruhový systém se 6 až 10 uhlíkovými atomy, přičemž výhodná je fenylová skupina. Výhodný aralkylový zbytek je benzylová skupina.
Jako soli s alkalickými kovy je možno jmenovat obzvláště soli lithné, sodné a draselné. Výhodně soli s kovy alkalických zemin jsou soli hořečnaté a vápenaté.
Na elektrony bohaté aromatické aminy je možno bezprostředně stanovit za pomoci těžko rozpustné soli heteropolykyseliny tvorbou heteropolymodři. Mohou se stanovit látky, které se chemickou nebo enzymatickou reakcí s dalšími látkami stechiometricky převedou na aromatický amin, bohatý na elektrony. Například se mohou jako reakční složky použít takové látky, které již v sobě základní strukturu na elektrony bohatého aromatického aminu obsahují, přičemž se tento amin z uvedené látky chemickou nebo enzymatickou reakcí se stanovovaným analytem může uvolnit. Výhodně se pod takovýmito látkami rozumí takové sloučeniny, které hydrolýzou poskytují na elektrony bohatý aromatický amin. Jako příklady je možno uvést amidy, estery nebo glykosidy na elektrony bohatých aromatických aminů.
Analyty, které mají být stanovovány, jsou výhodně enzymy, které katalyzují reakce odpovídajících substrátů na aromatické aminy, bohaté na elektrony, obzvláště hydrolázy. Jako příklady je možno jmenovat enzymy, štěpící amidové vazby a/nebo peptidové vazby, esterové vazby, což jsou vazby karboxylových kyselin, kyseliny fosforečné nebo kyseliny sírové, a enzymy, štěpící glykosidické vazby. Dále se jedná také o transferázy, které katalyzují přenos skupin, jako je například gama-glutamyltransferáza.
Dále je také možno například stanovovat látky, které se mohou enzymaticky oxidovat, přičemž se jako akceptory elektronů používají takové sloučeniny, které redukcí poskytují na elektrony bohaté aromatické aminy. Především pro látky, obsažené v tělních tekutinách, jako je krev, plazma, sérum, moč nebo sliny, je znám velký počet oxidoreduktáz, které vždy specificky určité látky rozeznají a v přítomnosti akceptoru elektronů tyto látky oxidují.
Jako příklady je možno uvést na flavinu závislé oxidázy, jako je oxidáza L a D aminokyselin, cholesteroloxidáza, glukózooxidáza, glycerol-3-fosfátoxidáza, laktátoxidáza nebo pyruvátoxidáza a na NAD(P) nezávislé dehydrogenázy, jako je na pyrrolochinolin-chinonu závislá glukózodehydrogenáza, nebo také diafráza (NADH: dye-oxidoreduktáza).
V případě oxidoreduktáz, obzvláště u oxidáz a na NAD(P) nezávislých dehydrogenáz, je možno pro enzymatickou oxidaci použít akceptory elektronů, které se enzymatickou oxidací enzymového substrátu redukují na aromatický amin, bohatý na elektrony. Tak se mohou dokázat a stanovit potom takové látky, které se enzymaticky oxidují uvedením vzniklého aromatického aminu, bohatého na elektrony, do styku s těžko rozpustnou solí heteropolykyseliny za vzniku heteropolymodři.
-6CZ 284677 B6
Jako výhodné akceptory elektronů ve smyslu předloženého vynálezu je možno v této souvislosti jmenovat obzvláště aromatické nitrososloučeniny, oximy a hydroxylaminy. Obzvláště výhodné jsou aromatické nitrososloučeniny a oximy. Zcela zvláště výhodné jsou takové nitrososloučeniny a oximy, které jsou popsané v EP přihlášce č. EP-A-0354 441.
Pro stanovení analytu tvorbou heteropolymodři podle předloženého vynálezu postačí, když se analyt výše popsaným způsobem nechá reagovat se sloučeninou na aromatický amin, bohatý na elektrony, načež se tento kontaktuje s těžko rozpustnou solí heteropolykyseliny. Když je na elektrony bohatý aromatický amin samotný bezprostředně stanovovaným analytem, uvádí se tento bez předchozí chemické nebo enzymatické reakce ve styk s těžko rozpustnou solí heteropolykyseliny.
Zpravidla se alespoň nakonec vyskytuje na elektrony bohatý aromatický amin, působící na těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny, v rozpuštěné formě, výhodně ve vodném roztoku, například rozpuštěný ve vodě, v pufru nebo v tělní tekutině. Výhodně je v případě, že stanovovaný analyt není sám na elektrony bohatým aromatickým aminem, sloučenina nutná společně s analytem k přípravě aromatického aminu, bohatého na elektrony, rozpustná ve vodných kapalinách. Vodná kapalina se může přidávat ke vzorku před kontaktováním s těžko rozpustnou solí heteropolykyseliny. Může se ale také uvést do kontaktu teprve společně s těžko rozpustnou solí heteropolykyseliny nebo dokonce nakonec se zkoumaným vzorkem. Jaké pořadí se zvolí, je závislé na jednotlivých případech a může být odborníky zvoleno v závislosti na prováděném analytickém stanovení na základě všeobecných odborných poznatků nebo na základě provedených orientačních pokusů. Látka, potřebná pro přípravu na elektrony bohatého aromatického aminu, se může do vodného vzorku přidávat v pevné nebo rozpuštěné formě.
Látka, poskytující společně se stanovovaným analytem na elektrony bohatý aromatický amin, se musí se vzorkem kontaktovat v tak velikém množství, aby se mohl veškerý analyt přivést k reakci. Výhodně se tato látka přidává ve dvou až desetinásobném přebytku.
Těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny se může uvádět do kontaktu se zkoumaným vzorkem ve formě pevné látky. Může se ale také použít ve formě suspenze v kapalině, výhodně ve vodné kapalině, přičemž se potom pro provádění stanovení tato suspenze smísí se zkoumaným vzorkem. Za přítomnosti stanovovaného analytu se tvoří ve vodě těžko rozpustná heteropolymodř, která je na základě svého intenzivního zbarvení zjistitelná.
Pro kvantitativní stanovení je možné oddělit ve vodě těžko rozpustnou heteropolymodř, jakož i nezreagovanou sůl heteropolykyseliny, od kapaliny, například centrifugací, potom ji rozpustit ve vhodném rozpouštědle, jako je například dimethylsulfoxid, a fotometricky měřit koncentraci barviva na bázi heteropolymodři za použití standardních roztoků nebo kalibrační křivky a tím konečně stanovit koncentraci zjišťovaného analytu.
Těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny musí být přítomna v tak velikém množství, aby ve vzorku přítomný nebo vytvořený na elektrony bohatý aromatický amin byl všechen převeden na heteropolymodř, která je v kvantitativní souvislosti s množstvím stanovovaného analytu, popřípadě aromatického aminu, bohatého na elektrony. Zásadně se proto musí přidat tolik těžko rozpustné soli heteropolykyseliny, aby až k nejvyšší relevantní koncentraci aromatického aminu, bohatého na elektrony, zvýšené množství aminu vedlo ke zvětšení množství heteropolymodři.
Činidlo podle předloženého vynálezu pro stanovení analytu tvorbou heteropolymodři obsahuje látku, která reakcí s analytem vede k aromatickému aminu, bohatému na elektrony, a těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny. Takovéto činidlo se může používat například ve formě suspenze nebo jako lyofilizát, práškovitá směs nebo jako směs, slisovaná do tablet. Jednotlivé součásti se mohou vyskytovat vedle sebe nebo odděleně, přičemž se každá ze součástí může zpracovávat ve své nej účelnější formě. Je také možné, že činidlo podle předloženého vynálezu
-7 CZ 284677 B6 neobsahuje přímo ve vodě těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny, ale obsahuje odděleně pouze nutné komponenty pro přípravu této soli, totiž například heteropolykyselinu a kationtickou nebo bazickou sloučeninu, které se uvedou ve styk teprve bezprostředně před reakcí, probíhající při stanovení podle vynálezu, a potom teprve poskytují odpovídající sůl heteropolykyseliny. Obzvláště výhodné je, když činidlo podle předloženého vynálezu obsahuje těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny v jemně rozmělněné formě, takže má velký reaktivní povrch. Činidlo podle předloženého vynálezu může popřípadě obsahovat ještě další reagencie, například pufry a pomocné látky, jako jsou smáčedla, stabilizátory a podobně. Když je stanovovaným analytem samotný na elektrony bohatý aromatický amin, není pro činidlo podle předloženého vynálezu potřebná samozřejmě žádná látka, která by teprve s analytem vedla k aromatickému aminu, bohatému na elektrony.
Obzvláště výhodné se ukázalo provedení stanovení podle předloženého vynálezu za použití takzvaného suchého testu. Zařízení, která jsou vhodná pro provádění tohoto suchého testu, jsou například popsána vEP-A 16 387, DE-A32 47 608, EP-A 262 445 nebo EP-A256 806. Mohou být označována jako nosič testu. Látky, potřebné pro provádění testu v suché formě, to znamená nerozpuštěné v kapalině, se uloží například do nebo na savý materiál, jako je například papír, otevřený film podle EP-A 16 387, rouno ze skleněných vláken nebo porézní plastová membrána, aby se jmenovaly alespoň některé možné materiály, nebo do nebo na bobtnavý materiál, jako je například odpovídající plastový film, želatina nebo celulóza.
Při nanesení zkoušené kapaliny na nosič testu nebo při namočení nosiče testu do zkoušené kapaliny se v nosiči testu vytvoří kapalné prostředí, ve kterém probíhá důkazní reakce. Reakcí způsobená tvorba barviva se může vyhodnotit vizuálně nebo fotometricky, například pomocí reflexní fotometrie.
Pro výrobu činidla podle předloženého vynálezu ve formě, zabudované do nosiče, se vhodný nosný materiál, jako je například filtrační papír, celulóza nebo rouno z plastových vláken, impregnuje roztoky a/nebo suspenzemi sloučenin, potřebných pro přípravu tohoto činidla, v lehce těkavých rozpouštědlech, jako je například voda, methylalkohol, nebo aceton. Toto se může provádět při všech impregnačních krocích. Často je účelné provádět impregnaci ve více krocích přičemž se používají roztoky a/nebo suspenze, které vždy obsahují pouze část složek hotového činidla. Tak se může například v prvním stupni nanést na nosný materiál suspenze těžko rozpustné soli heteropolykyseliny a ve druhém stupni se nanese roztok látky, která se stanovovaným analytem poskytuje na elektrony bohatý aromatický amin, jakož i popřípadě pufr a jiné přísady. Takto zpracovaný nosný materiál se může použít jako takový, nebo se známým způsobem nalepí na držátka nebo proužky plastové fólie, aby byl lépe použitelný.
Namísto několikanásobné impregnace stejného nosného materiálu se mohou sloučeniny činidla podle předloženého vynálezu rozdělit na různé nosné materiály, které se při provádění analytického stanovení uvedou do kontaktu, umožňujícího výměnu kapaliny.
Pro výrobu testovacích činidel, zabudovaných na nosiči, je možno namísto impregnovaných nosičů také vyrobit roztoky z filmotvomých prostředků, to znamená z polymerů nebo z disperzí polymerů, které jsou tak viskózní, že se z nich pomocí známých způsobů, jako je stírání, navalování a podobně, dají vyrobit filmy. Do těchto roztoků se zabudují složky činidla a popřípadě pufry a pomocné látky. Získaná hmota se nanese na nosnou fólii, usuší a hotový film se například zpracuje na testovací proužky.
-8CZ 284677 B6
Přehled obrázků na výkresech
Příklady výhodných testů na nosiči jsou znázorněny na obr. 1 a 6. Na ostatních obrázcích 2 až 5 a 7 jsou znázorněny diagramy závislosti reflexe v procentech na času, vlnové délce nebo analytické koncentraci, dosažené pomocí testů na nosiči podle obr. 1, popřípadě 6.
Jednotlivě uvedené obrázky znázorňují:
obr. 1 průřez výhodným testem na nosiči, obr. 2 diagram, ukazující závislost reflexe v procentech na času v sekundách po nanesení vzorku na test na nosiči podle obr. 1 pro vzorky a) až f) se vždy různou koncentrací glukózy;
obr. 3 diagram závislosti reflexe v procentech na měřené vlnové délce v nanometrech pro vzorky a) až f) s různými koncentracemi glukózy při použití testu na nosiči podle obr. 1;
obr. 4 diagram závislosti reflexe v procentech na koncentraci glukózy při měření s testem na nosiči podle obr. 1;
obr. 5 diagram závislosti reflexe v procentech na koncentraci NADH při měření s testem na nosiči podle obr. 1;
obr. 6 průřez dalším výhodným testem na nosiči, a obr. 7 diagram závislosti reflexe v procentech na koncentraci ethylalkoholu při měření s testem na nosiči podle obr. 6.
Následující příklady provedení ukazují některé možnosti způsobů stanovení analytu tvorbou heteropolymodři. Neznamenají však žádné omezení vynálezu na tyto formy provedení. Obrázky jsou v příkladech blíže objasněny.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Důkaz glukózy 18-molybdodifosfátem
Vyrobí se test na nosiči podle obr. 1. Sestává z polyesterové fólie o tloušťce 350 pm (Melinex, ICI, Frankfurt, SRN) jako nosné fólie (1) o rozměrech 2x3 cm. V centru fólie se nachází otvor o průměru 6 mm. Pomocí transfemího lepidla 2 se upevní nosič 6 reagencií, sestávající z 200 pm silné transparentní polykarbonátové fólie 5 (Pokalon, Lonza, Rheinfelden, SRN), první reagenční vrstvy 4 a druhé reagenční vrstvy 3, přes otvor nosné fólie 1 tak, aby vzorek kapaliny, nanášený přes tento otvor, přišel do styku nejprve s druhou reagenční vrstvou 3. Nosič 6 reagencií má rozměr 2 x 1 cm.
Výroba nosiče 6 reagencií probíhá následujícím způsobem:
-9CZ 284677 B6 první reagenční vrstva:
113 g dvakrát destilované vody,
36,3 g 2% xantanu (hmotn.) (Keltrol F, Kelco, Oklahoma, USA) ve 0,2 M citrátovém pufru, pH 7,0, g Propiofanu (BASF, Ludwigshafen, SRN), ml 15% (hmotn.) nonylsulfátu sodného ve vodě, g propylvinylpyrrolidonu (Kollidon 25, BASF, Ludwigshafen, SRN),
3,9 g tetrabutylamoniumchloridu, g kyseliny 18-molybdodifosforečné (vyrobena podle G. Bauer, „Handbuch der práparativen anorganischen Chemie“, Enke-Verlag, Stuttgart, 1954) v 15 g vody, a g Celatomu MW 25 (Eagle Picher, Cincinnati, Ohio, USA), se rozmíchá do homogenní hmoty a rozetře se na tloušťku 150 pm na transparentní fólii 5. Tato vrstva se nechá usušit při teplotě 60 °C po dobu jedné hodiny.
Druhá reagenční vrstva:
g dvakrát destilované vody, g oxidu titaničitého RN 56 (Kronos-Titan GmbH, Leverkusen, SRN),
36,3 g 2% (hmotn.) Keltrolu F (Kelco, Oklahoma, USA) v 0,2 M citrátovém pufru, pH 6,0, g Propiofanu 70 D (BASF, Ludwigshafen, SRN), ml 15% (hmotn.) nonylsulfátu sodného ve vodě, g Kollidonu 25 (BASF, Ludwigshafen, SRN),
188 g vody, g Celatomu 25 MW (Eagle-Picher, Cincinnati, Ohio, USA),
400 mg N,N-bis-(2-hydroxyethyl)-p-nitrosoanilinu x x HC1 ve 20 g vody, a g glukózoxidázy (200 U/mg) ve 12 g vody, se rozmíchá na homogenní směs a rozetře se v tloušťce 400 pm na první reagenční vrstvu. Vzduchové bubliny se odstraní a druhá vrstva se suší při teplotě 60 °C po dobu jedné hodiny.
V čase t = 0 se na výše popsaným způsobem vyrobený test na nosiči nanese lidská plazma s a) 0 mg glukózy/dl, b) 47,5 mg glukózy/dl, c) 108,7 mg glukózy/dl, d) 200,8 mg glukózy/dl, e) 392,3 mg glukózy/dl a f) 766 mg glukózy/dl. Při 950 nm se měří reemise v %. První měření se provádí po osmi sekundách, další měření ve čtyřsekundových intervalech. Při vynesení reemise (R) v procentech proti sobě (t) v sekundách se získá diagram podle obr. 2. Tvorba barvy a pokles reemise je již při prvním měření prakticky úplný. Výsledkem je stabilní konečná hodnota, která se může naměřit prakticky v libovolné době po startu.
Když se použije test na nosiči podle obr. 1, vyrobený způsobem popsaným výše, a vzorky s koncentrací glukózy a) 0 mg/dl, b) 100 mg/dl, c) 240 mg/dl a d) 800 mg/dl se měří při různých vlnových délkách a nanese se reemise (R) v procentech proti vlnové délce (lambda) v nm do diagramu, získá se obr. 3. Jak již bylo řečeno, mohou se pro měření koncentrace glukózy použít libovolné vlnové délky v rozmezí 550 až více než IlOOnm. Kvůli velmi plochému spektru je tolerance pro výkyvy měření vlnové délky velmi vysoká.
- 10CZ 284677 B6
Příklad 2
Specifita důkazu glukózy s 18-molybdodifosfátem
Rušivé látky, uvedené v tabulce 1, se v udaných koncentracích přidají do lidské plazmy s a) 0 mg glukózy/dl (CGiu = 0) a b) 110 mg glukózy/dl (CGlu =110 mg/dl). Když se takováto lidská plazma zkouší pomocí testu na nosiči podle obr. 1, který je popsán a vyroben podle příkladu 1, zjistí se reemisní hodnoty v procentech (% R), měřeno při 660 nm, které jsou uvedené v tabulce 1.
Tabulka 1
rušivá látka konečná konc. CGiu - 0 %R CG]u =110 mg/dl %R
žádná (srovn.) 0 60,3 43,0
NaOH 1 mM 59,9 42,5
kyselina močová 10 mg/dl 59,5 42,4
20 mg/dl 60,1 42,4
laktát 100 mg/dl 59,7 43,2
300 mg/dl 60,2 42,8
bilirubin 10 mg/dl 60,0 42,7
20 mg/dl 61,5 43,0
glutathion 1 mM 59,3 43,0
5 mM 59,4 43,8
methyldopa 10 mg/dl 59,5 43,1
100 mg/dl 59,0 42,1
dobesylat 20 mg/dl 59,4 41,8
kyselina gentisová 50 mg/dl 59,6 43,0
kyselina acetylsalicylová 5 mg/dl 59,9 42,1
60 mg/dl 60,0 42,0
Nezávisle na koncentraci glukózy v lidské plazmě (0 a 110 mg/dl) nebylo zjištěno žádné signifikantní rušení.
S testem na nosiči podle obr. 1, který byl vyroben analogicky jako je popsáno v příkladě 1 a který je identický s tam popsaným testem na nosiči až na přídavek tetrabutylamoniumchloridu, který je pro srovnávací test na nosiči vynechán, se dosáhne těžko reprodukovatelných a silně rozptýlených výsledků. Použitá kyselina 18-molybdofosforečná se totiž při pH vyšším než 5,5 rozkládá. Kromě toho zde způsobují redukující látky další rušivé zbarvení.
-11 CZ 284677 B6
Příklad 3
Test na nosiči pro důkaz glukózy na bázi 12-molybdofosfátu
Když se v receptuře z příkladu 1 nahradí kyselina 18-molybdodifosforečná stejným množstvím kyseliny 12-molybdofosforečné (Fluka, Buchs, Švýcarsko), tak se získá test na nosiči se slabší tvorbou barvy za přítomnosti glukózy, což je obzvláště vhodné pro vyšší koncentrace glukózy. Při použití vzorků o různé, ale známé, koncentraci glukózy (C) a když se měří vždy reemise (R) v procentech při 650 nm, získá se křivka podle obr. 4. Když se měří reemise při 950 nm, získá se identická křivka.
Podobné výsledky se získají s 12-molybdoarzeničnanem, 18-molybdodiarzeničnanem, 11molybdo-l-vanadofosforečnanem, lQ-molybdo-2-vanadofosforečnanem a 9-molybdo-3-vanadofosforečnanem, přičemž všechny tyto sloučeniny je možno připravit podle G. Brauer, „Handbuch der práparativen anorganischen Chemie“, Enke-Verlag, Stuttgart (1954). V následující tabulce 2 jsou uvedeny názvy a vzorce heteropolykyselin, jakož i absorpční maxima odpovídajících heteropolymodří.
Tabulka 2
heteropolymodř z různých heteropolykyselin výchozí látka vzorec absorpční max. heteropolymodří
kyselina 12-molybdofosforečná H3(PMo]204o) x n H2O 725 nm
18-molybdodifosforečnan sodný Na6(P2Mo18O62)x42 H2O 693 nm
12-molybdoarzeničnan draselný K3(AsMo)204o) x n H2O 840 nma)652nmb)
18-molybdoarzeničnan sodný Na6(As2Mo]8O62) x 23 H2O 672 nm
kyselina 11-molybdo-l-vanadofosforečná H4(PMohV04o) x n H2O 665 nm
kyselina 10-molybdo-2-vanadofosforečná H5(PMo10V204o) x n H2O 620 nm
kyselina 9-molybdo-3-vanadofosforečná H6(PMo9V3Oio) x n H2O 780 nm
a) málo redukčního činidla (glukózy),
b) mnoho redukčního činidla (glukózy).
Příklad 4
Test na nosiči pro stanovení NAD(P)H
Když se v receptuře podle příkladu 1 nahradí glukózoxidáza stejným množstvím diaforázy, získá se test na nosiči pro stanovení NAD(P)H. Ze vzorků o známé koncentraci NADH a měření reakce v procentech při 660 nm se získá křivka, znázorněná na obr. 5. Tato křivka může sloužit jako kalibrační křivka pro stanovení neznámých koncentrací NADH.
Metody pro tvorbu NAD(P)H z NAD(P) - závislé dehydrogenázy, odpovídající substrát aNAD(P) jsou známé. Po odpovídající předběžné reakci se může test na nosiči použít pro důkaz substrátů dehydrogenázy nebo k důkazu dehydrogenáz samotných.
- 12CZ 284677 B6
Příklad 5
Test na nosiči pro stanovení ethylalkoholu pomocí alkoholdehydrogenázy a diaforázy, jakož i 18-molybdodifosforečnanu
a) Výroba testu na nosiči
Vyrobí se test na nosiči podle obr. 6. Tento test je sestaven tak, že indikátorovým systémem, sestávajícím z ml 0,2 M citrátového pufru, pH 6, ml 10% (hmotn.) nonylsulfátu sodného ve vodě, mg tartazinu,
0,1 g N,N-bis-(2-hydroxyethyl)-p-nitrosanilinu x HCI,
6,8 ml 20% (hmotn.) kyseliny 18-molybdodifosforečné ve vodě, g 25% (hmotn.) tetraethylamoniumchloridu ve vodě, g 5% (hmotn.) Kollidonu 25 (BASF, Ludwigshafen, SRN) v 50 mM citrátového pufru, pH 6,0, je napuštěn savý papír (Langfaser, Schoeller, Germsbach, SRN) a tento je potom po dobu 30 minut při teplotě 40 °C usušen.
Enzymy se nacházejí na zvláštním papíře (Langfaser, Schoeller, Germsbach, SRN). Tento papír je nasycen roztokem, sestávajícím z g 0,2 M fosfátového pufru, pH 7,0, g vody, ml 10% (hmotn.) nonylsulfátu sodného ve vodě, g diaforázy (15 U/mg lyofilizátu), a g alkoholdehydrogenázy, a potom vysušen po dobu 20 minut při teplotě 40 °C. Takto vyrobený indikátorový papír 13. a enzymový papír 12 se nastříhají na proužky o velikosti 14x6 mm.
Na polyesterovou fólii o síle 350 pm, délce 9,8 cm a šířce 0,6 cm (Melinex, ICI, Frankfurt, SRN) se pomocí proužku tavného lepidla 18 připevní 16 mm dlouhý, 6 mm široký a 0,25 mm silný pásek rouna ze skleněných vláken o plošné hmotnosti 25 g/m2 jako transportní rouno (14), dále 6 mm široký, 6 mm dlouhý a 700 pm silný proužek rouna ze skleněných vláken o plošné hmotnosti 60 g/m2 jako oddělovací rouno (15) erythrocytů a ochranná mřížka 16 ze Scrynelu PE280HC rotR (Ziiricher Beuteltuchfabrik AG, Riischlikon, Švýcarsko) o rozměrech 6x8 mm a velikosti ok 280 pm, jak je znázorněno na obr. 6. Enzymový papír 12 a indikátorový papír 13 se společně s 200 pm silnou, 15 mm dlouhou a 6 mm širokou transparentní polykarbonátovou fólií U (Pokalon, Lonza, Rheinfelder, SRN) připevní pomocí kapky tavného lepidla 19 na nosnou fólii 17 tak, aby polykarbonátová fólie 11. enzymový papír 12 a indikátorový papír 13 nebyly ve styku, tlakem však se mohou dostat jak do vzájemného styku, tak do kontaktu s kapalinou, která se nachází v transportním rounu 14.
b) Stanovení ethylalkoholu
Na testu na nosiči, připraveném podle odst. a) a znázorněném na obr. 6, se na ochrannou mřížku nanese 32 pl krve. Po uplynutí 60 sekund se tlakem na transparentní fólii 11 přitlačí enzymový papír 12 a indikátorový papír 13 na transportní rouno 14 a na zde se nacházející
- 13 CZ 284677 B6 sérum. Po 120 sekundách se přes transparentní fólii 11 změří reemise v procentech při 642 nm. Při použití známých ale různých koncentrací ethylalkoholu v krvi se získá křivka podle obr. 7. Tato křivka může sloužit jako kalibrační křivka pro stanovení neznámých koncentrací ethylalkoholu ve vzorku.
Příklad 6
Stanovení beta-galaktosidázy (EG 3.2.1.23)
Používají se následující roztoky:
pufr: 0,1 M HEPES, 20 mM chlorid hořečnatý, pH 6,8,
substrát 50 mM p-aminofenyl-beta-galaktosid (vyrobený z p-nitrofenyl-beta-D-galaktosidu hydrogenací vodíkem na palladiu na uhlí podle „Organikum“, VEB Deutscher Verlag der Wissenschafiten, 15. vydání, Berlín 1976) ve vodě,
neutrál izátorl N hydroxid sodný,
indikátor lOOmg/ml kyseliny 18-molybdodifosforečné a 50 mg/ml fenyl-trimethylamoniumchloridu ve vodě, a
enzym 180 U/ml v pufru (udávaná enzymová aktivita se vztahuje na použití o-nitrofenolgalaktosidu jako substrátu).
Pro provedení testu se v jedné reakční nádobě smísí:
pufr 780 μΐ
indikátor 100 μΐ
neutralizátor 20 μΐ
enzym a)0, b)l,c) 2, d)3,e) 4, f) 5 μΐ.
Po inkubaci po dobu 4 1/2 minuty se směs zcentrifuguje po dobu 30 sekund, horní vrstva se slije, sediment se rozpustí v 1 ml dimethylsulfoxidu a ihned se změří extinkce (E). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.
Tabulka 3
μΐ enzymu U/ml enzymu E (800 nm)
0 1 2 3 4 5 0 0,065 0,18 0,571 0,36 1,245 0,54 1,697 0,72 2,350 0,90 2,907
Hodnoty, vyplývající z této kalibrační křivky, mohou být použity pro zjišťování obsahu betagalaktosidázy v neznámých vzorcích.
-14CZ 284677 B6
Příklad 7
Stanovení alkalické fosfatázy (EC 3.1.3.1)
Když se v receptuře podle příkladu 6 použije jako substrát 50 mM p-aminofenylfosfát (vyrobený podle L. H. De Riemer, C. F. Meares, Biochemistry 20, 1606 (1981)) a jako pufr 1 M diethanolamin, 1 mM chloridu hořečnatého, 0,1 mM chloridu zinečnatého při pH 9,8, potom se může uvedeným způsobem stanovovat enzym alkalická fosfatáza. Pomocí známých koncentrací enzymu se zjistí jako v příkladu 6 lineární souvislost mezi koncentrací enzymu a extinkcí při 800 nm.
Příklad 8
Test na nosiči pro důkaz gama-glutamyltransferázy (EC 2.3.2.2)
Test na nosiči se zhotoví analogicky jako je popsáno v příkladě 1, avšak s následujícími změnami:
Ve druhé reagenční vrstvě se pufr (2 % hmotnostní Keltrolu F ve 0,2 M citrátovém pufru, pH 6) nahradí 2 % hmotnostními Keltrolu F ve vodě a N,N-bis-(2-hydroxyethyl)-p-nitrosoanilin x x HC1 a glukózoxidáza se vypustí. Mezi transfemí lepidlo 2 a druhou reagenční vrstvu 3 se zařadí papír napuštěný substrátem, připravený následujícím způsobem:
Jemný savý papír (papír na čajové pytlíky) (12 g/m2) se nasytí roztokem 250 mM glycylglycinu a20mM gama-L-glutamyl-3-karboxyl-l,4-fenylendiaminu (připraveného podle EP-A 103 823) ve 250 mM tris-pufru pH 7,6, načež se potom po dobu 20 minut suší při teplotě 50 °C.
V 0,1 M tris-pufru s 10 mg/ml albuminu z hovězího séra o pH 7,5 se připraví zřeďovací řada gama-glutamyltransferázy. 10 μΐ tohoto roztoku se nanese na výše popsaný test na nosiči. Po jedné minutě se při teplotě 37 °C naměří hodnoty reemise v procentech při vlnové délce 950 nm, uvedené v následující tabulce 4.
Tabulka 4 koncentrace enzymu U/ml reemise při 950 nm v %
0,245
0,471
1,31
2,77
4,93
7,39
9,85
50,0
57,0
55,5
52.7
49.7
45.8
42,2
39,0
Tímto způsobem získaná křivka se může využít ke stanovení neznámých obsahů gamaglutamyltransferázy v kapalinách.
- 15 CZ 284677 B6
Příklad 9
Test na nosiči pro důkaz kyselé fosfatázy (EC 3.1.3.2)
Analogicky jako v příkladě 8 se získá test na nosiči pro důkaz kyselé fosfatázy, když se jemný savý papír nasytí lOmM p-aminofenylfosfátu (vyrobeného podle L. H. De Riemer, C. F. Meares, Biochemistry 20,1606 (1981)) v 0,1 M citrátového pufru, pH 5,0.

Claims (14)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použití těžko rozpustných solí heteropolykyselin, jejichž množství rozpustné v roztoku analytu samo o sobě pro stanovení analytu nepostačuje, pro stanovení analytu, kterým je na elektrony bohatý aromatický amin nebo látka, která v předběžné reakci s jednou nebo několika dalšími látkami k takovému aminu vede.
  2. 2. Způsob stanovení analytu pomocí tvorby heteropolymodři, vyznačující se tím, že se analyt nechá zreagovat s látkou, která vede k na elektrony bohatému aromatickému aminu, s nímž se uvede do styku těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny, jejíž množství rozpustné v roztoku analytu samo o sobě pro stanovení analytu nepostačuje.
  3. 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se použije těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny molybdenu, molybdenu a wolframu, vanadu a molybdenu nebo vanadu a molybdenu a wolframu s fosforem, arzenem, křemíkem nebo germaniem jako heteroatomy.
  4. 4. Způsob podle nároku 2 nebo 3, vyznačující se tím, že se jako těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny použije taková sůl, jejíž kationt je větší než amoniový iont.
  5. 5. Způsob podle některého z nároků 2až4, vyznačující se tím, že se jako těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny použije taková sůl, jejíž kationt odpovídá obecnému vzorci I
    R*R2R3R4X+ (I), ve kterém
    R1, R2, R3 a R4 jsou stejné nebo různé a značí alkylovou skupinu s 1 až 22 atomy uhlíku, arylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku nebo aralkylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku v arylové části a 1 až 22 atomy uhlíku v alkylové části, nebo značí vodíkový atom, když nejsou všechny zbytky stejné, nebo dva zbytky společně tvoří alkylenovou skupinu se 4 až 6 atomy uhlíku, a
    X značí atom fosforu nebo dusíku.
  6. 6. Způsob podle některého z nároků 2až4, vyznačující se tím, že se jako těžko rozpustná sůl heteropolykyseliny použije taková sůl, jejíž kationt je ze skupiny kvartemizovaných dusíkatých heteroaromátů.
    - 16CZ 284677 B6
  7. 7. Způsob stanovení na elektrony bohatého aminu pomocí tvorby heteropolymodři, vyznačující se tím, že se roztok stanovovaného na elektrony bohatého aromatického aminu uvede do styku s těžko rozpustnou solí heteropolykyseliny.
  8. 8. Činidlo pro stanovení analytu způsobem podle nároku 2, vy z n a č uj í c í se tím, že obsahuje látku, vytvářející s analytem na elektrony bohatý aromatický amin a těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny, nebo k tomu potřebné látky.
  9. 9. Činidlo podle nároku 8, vyznačující se tím, že obsahuje těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny molybdenu, molybdenu a wolframu, vanadu a molybdenu nebo vanadu, molybdenu a wolframu a fosfor, arzen, křemík nebo germanium jako heteroatomy.
  10. 10. Činidlo podle nároku 8 nebo 9, vyznačující se tím, že jako těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny obsahuje takovou sůl, jejíž kation je větší než amonný iont.
  11. 11. Činidlo podle některého z nároků 8 až 10, vyznačující se tím, že jako těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny obsahuje takovou sůl, jejíž kationt odpovídá obecnému vzorci I
    R‘R2R3R4X+ (I), ve kterém
    R1, R2, R3 a R4 jsou stejné nebo různé a značí alkylovou skupinu s 1 až 22 atomy uhlíku, arylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku nebo aralkylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku v arylové části a 1 až 22 atomy uhlíku v alkylové části, nebo značí vodíkový atom, když nejsou všechny zbytky stejné, nebo dva zbytky společně tvoří alkylenovou skupinu se 4 až 6 atomy uhlíku, a
    X značí atom fosforu nebo dusíku.
  12. 12. Činidlo podle některého z nároků 8 až 10, vyznačující se tím, že jako těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny obsahuje takovou sůl, jejíž kationt je ze skupiny kvartémích dusíkatých heteroatomů.
  13. 13. Činidlo pro stanovení na elektrony bohatého aromatického aminu způsobem podle nároku 7, vyznačující se tím, že obsahuje těžko rozpustnou sůl heteropolykyseliny nebo pro její vznik potřebné látky v kapalném médiu nebo ve formě vázané na nosič.
  14. 14. Použití těžko rozpustné soli heteropolykyseliny pro výrobu prostředku na stanovení analytu tvorbou heteropolymodři.
CS905936A 1989-12-02 1990-11-29 Použití těžko rozpustné soli heteropolykyseliny ke stanovení analytu, způsob stanovení a činidlo CZ284677B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3940010A DE3940010A1 (de) 1989-12-02 1989-12-02 Verwendung eines schwer loeslichen salzes einer heteropolysaeure zur bestimmung eines analyts, entsprechendes bestimmungsverfahren sowie hierfuer geeignetes mittel

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS593690A3 CS593690A3 (en) 1992-03-18
CZ284677B6 true CZ284677B6 (cs) 1999-01-13

Family

ID=6394747

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS905936A CZ284677B6 (cs) 1989-12-02 1990-11-29 Použití těžko rozpustné soli heteropolykyseliny ke stanovení analytu, způsob stanovení a činidlo

Country Status (26)

Country Link
US (3) US5240860A (cs)
EP (1) EP0431456B1 (cs)
JP (1) JPH0687790B2 (cs)
KR (1) KR950001124B1 (cs)
CN (1) CN1030735C (cs)
AT (1) ATE118552T1 (cs)
AU (1) AU628688B2 (cs)
CA (1) CA2031238C (cs)
CZ (1) CZ284677B6 (cs)
DE (2) DE3940010A1 (cs)
DK (1) DK0431456T3 (cs)
ES (1) ES2069661T3 (cs)
FI (1) FI98569C (cs)
GR (1) GR3015363T3 (cs)
HU (1) HU212120B (cs)
IE (1) IE65537B1 (cs)
IL (1) IL96473A (cs)
MX (1) MX23524A (cs)
NO (1) NO300244B1 (cs)
NZ (1) NZ236249A (cs)
PL (1) PL166907B1 (cs)
PT (1) PT96029B (cs)
RU (1) RU2052819C1 (cs)
SK (1) SK280136B6 (cs)
YU (1) YU227790A (cs)
ZA (1) ZA909625B (cs)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3940010A1 (de) * 1989-12-02 1991-06-06 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung eines schwer loeslichen salzes einer heteropolysaeure zur bestimmung eines analyts, entsprechendes bestimmungsverfahren sowie hierfuer geeignetes mittel
DE4311464A1 (de) * 1993-04-08 1994-10-13 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur kolorimetrischen Bestimmung eines Analyten mit einer PQQ-abhängigen Dehydrogenase
DE4311460A1 (de) * 1993-04-08 1994-10-13 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur kolorimetrischen Bestimmung eines Analyten mittels Benzylalkoholdehydrogenase und einem chromogenen Redoxindikator
DE4338811A1 (de) * 1993-11-15 1995-05-18 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von Teststreifen zur Bestimmung der UV-Intensität oder zur Vorbestimmung der sonnenbrandfreien Aufenthaltsdauer in der Sonne sowie hierfür geeignetes Testsystem und Teststreifenpackung
US5696193A (en) * 1994-04-25 1997-12-09 Clinical Diagnostic Systems, Inc. Immunoassay elements comprising polymers containing vandium IV (V+4) ions
US5601997A (en) 1995-02-03 1997-02-11 Tchao; Ruy Chemotaxis assay procedure
US20060008494A1 (en) * 1997-02-21 2006-01-12 The Regents Of The University Of California Complete inactivation of infectious proteins
US6719988B2 (en) 1997-02-21 2004-04-13 The Regents Of The University Of California Antiseptic compositions for inactivating prions
US6617119B2 (en) 1997-02-21 2003-09-09 The Regents Of The University Of California Assay for specific strains of multiple disease related conformations of a protein
US6221614B1 (en) 1997-02-21 2001-04-24 The Regents Of The University Of California Removal of prions from blood, plasma and other liquids
US6620629B1 (en) 1997-02-21 2003-09-16 The Regents Of The University Of California Method for detecting prions
US6720355B2 (en) 1997-02-21 2004-04-13 The Regents Of The University Of California Sodium dodecyl sulfate compositions for inactivating prions
US6121050A (en) * 1997-08-29 2000-09-19 Han; Chi-Neng Arthur Analyte detection systems
US6432893B1 (en) * 1998-08-21 2002-08-13 Senju Pharmaceutical Co., Ltd. Method for removal of protein from contact lenses
KR100311854B1 (ko) * 1998-10-29 2001-12-28 신한길 지하수자동관측시스템
DE19945828B4 (de) 1999-09-24 2011-06-01 Roche Diagnostics Gmbh Analysenelement und Verfahren zur Bestimmung eines Analyten in Flüssigkeit
US6645359B1 (en) 2000-10-06 2003-11-11 Roche Diagnostics Corporation Biosensor
JP3845413B2 (ja) 2001-06-08 2006-11-15 エフ ホフマン−ラ ロッシュ アクチェン ゲゼルシャフト 体液サンプリング装置およびこのような装置とともに使用される試験媒体カセット
US6659966B2 (en) 2001-11-15 2003-12-09 Roche Diagnostics Corporation Fluid sampling apparatus
DE10163775A1 (de) 2001-12-22 2003-07-03 Roche Diagnostics Gmbh Analysensystem zur Bestimmung einer Analytkonzentration unter Berücksichtigung von proben- und analytunabhängigen Lichtintensitätsänderungen
US6759190B2 (en) * 2002-06-15 2004-07-06 Acon Laboratories, Inc. Test strip for detection of analyte and methods of use
US7572237B2 (en) * 2002-11-06 2009-08-11 Abbott Diabetes Care Inc. Automatic biological analyte testing meter with integrated lancing device and methods of use
DE10303265A1 (de) 2003-01-28 2004-07-29 Roche Diagnostics Gmbh Fluorimetrische Bestimmung von Analyten durch ein intramolekulares Quencher-Fluorophor-Konjugat
DE10304448A1 (de) 2003-02-04 2004-08-12 Roche Diagnostics Gmbh Fluorimetrische Bestimmung von Analyten durch Amin-N-Oxide als Redoxindikatoren
DE10346863A1 (de) * 2003-10-09 2005-05-04 Roche Diagnostics Gmbh On-Board-Kontrolle für Analyseelemente
CN103558369B (zh) 2004-12-13 2015-09-09 拜尔保健有限公司 用于测量生物液体中的分析物的自我限定大小的组合物和检验设备
WO2006094104A2 (en) 2005-03-01 2006-09-08 Molecular Probes, Inc. Chemical probe compounds that become fluorescent upon reduction, and methods for their use
EP1868502B1 (en) * 2005-04-04 2010-07-07 Facet Technologies, LLC Narrow-profile lancing device
US7955484B2 (en) * 2005-12-14 2011-06-07 Nova Biomedical Corporation Glucose biosensor and method
US8008068B2 (en) * 2008-02-29 2011-08-30 Light Pointe Medical, Inc. Nonhemolytic optical sensor with enhanced reflectance
US20090219509A1 (en) * 2008-02-29 2009-09-03 Hiroshi Nomura Optical sensor with enhanced reflectance
CN104870982B (zh) 2012-12-20 2019-02-15 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于评估医学测量曲线的方法
EP2936155B1 (en) 2012-12-20 2018-12-12 Roche Diabetes Care GmbH Method for analyzing a sample of a body fluid
EP2781919A1 (en) 2013-03-19 2014-09-24 Roche Diagniostics GmbH Method / device for generating a corrected value of an analyte concentration in a sample of a body fluid
WO2016003685A1 (en) 2014-06-30 2016-01-07 3M Innovative Properties Company Photochromic articles containing a polyoxometalate and methods of making same
WO2016003683A1 (en) 2014-06-30 2016-01-07 3M Innovative Properties Company Photochromic articles containing polyoxometalate derivatives and methods of making same
CN106573910B (zh) 2014-08-22 2020-08-28 豪夫迈·罗氏有限公司 氧化还原指示剂
KR102372113B1 (ko) 2016-10-05 2022-03-07 에프. 호프만-라 로슈 아게 다중 분석물 진단 테스트 엘리먼트들을 위한 검출 시약들 및 전극 배열들, 그리고 그것을 사용하는 방법들
EP3339431A1 (en) 2016-12-22 2018-06-27 Roche Diabetes Care GmbH Glucose dehydrogenase variants with improved properties
CN111801425B (zh) 2018-02-28 2024-02-23 豪夫迈·罗氏有限公司 用于连续分析物测量的生物相容性涂层
CN108508064B (zh) * 2018-03-22 2020-08-14 中国科学院上海硅酸盐研究所 文物表面可溶盐含量的检测设备
CN109394782B (zh) * 2018-12-03 2020-10-20 中北大学 胆固醇衍生物改性多钼氧簇杂化物及其制备和应用
CN110813339A (zh) * 2019-11-29 2020-02-21 吉林师范大学 一种缺陷杂多蓝/TiO2复合可见光合成氨催化剂的制备方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT630626A (cs) * 1959-05-15
JPS5637050A (en) * 1979-09-04 1981-04-10 Ube Ind Ltd Preparation of catalyst for preparing unsaturated acid
JPS5963198A (ja) * 1982-10-01 1984-04-10 Toyo Jozo Co Ltd 酵素を用いる定量法
US4935346A (en) * 1986-08-13 1990-06-19 Lifescan, Inc. Minimum procedure system for the determination of analytes
DE3630999A1 (de) * 1986-09-12 1988-03-17 Boehringer Mannheim Gmbh Mehrschichtiger testtraeger
US4952495A (en) * 1987-06-08 1990-08-28 Eastman Kodak Company Hydrolyzable compounds which release electron transfer agents and analytical use of same
DE3826922A1 (de) * 1988-08-09 1990-02-22 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur kolorimetrischen bestimmung eines analyten mittels enzymatischer oxidation
DE3940010A1 (de) * 1989-12-02 1991-06-06 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung eines schwer loeslichen salzes einer heteropolysaeure zur bestimmung eines analyts, entsprechendes bestimmungsverfahren sowie hierfuer geeignetes mittel

Also Published As

Publication number Publication date
JPH0687790B2 (ja) 1994-11-09
RU2052819C1 (ru) 1996-01-20
EP0431456B1 (de) 1995-02-15
EP0431456A1 (de) 1991-06-12
CN1052376A (zh) 1991-06-19
MX23524A (es) 1993-10-01
DE59008475D1 (de) 1995-03-23
PT96029B (pt) 1998-02-27
ATE118552T1 (de) 1995-03-15
IL96473A0 (en) 1991-08-16
DK0431456T3 (da) 1995-07-17
KR950001124B1 (ko) 1995-02-11
ZA909625B (en) 1991-10-30
IL96473A (en) 1995-03-15
SK280136B6 (sk) 1999-08-06
GR3015363T3 (en) 1995-06-30
HUT56631A (en) 1991-09-30
PT96029A (pt) 1991-09-13
FI905925A0 (fi) 1990-11-30
CA2031238A1 (en) 1991-06-03
FI98569B (fi) 1997-03-27
HU908021D0 (en) 1991-06-28
US5240860A (en) 1993-08-31
YU227790A (sh) 1992-12-21
HU212120B (en) 1996-02-28
NO905202L (no) 1991-06-03
NZ236249A (en) 1993-02-25
FI905925A (fi) 1991-06-03
JPH03191799A (ja) 1991-08-21
US5521060A (en) 1996-05-28
CA2031238C (en) 1995-10-24
US5382523A (en) 1995-01-17
FI98569C (fi) 1997-07-10
NO905202D0 (no) 1990-11-30
AU6694990A (en) 1991-06-06
KR910012717A (ko) 1991-08-08
IE904317A1 (en) 1991-06-05
DE3940010A1 (de) 1991-06-06
PL166907B1 (pl) 1995-07-31
ES2069661T3 (es) 1995-05-16
CN1030735C (zh) 1996-01-17
NO300244B1 (no) 1997-04-28
AU628688B2 (en) 1992-09-17
CS593690A3 (en) 1992-03-18
IE65537B1 (en) 1995-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ284677B6 (cs) Použití těžko rozpustné soli heteropolykyseliny ke stanovení analytu, způsob stanovení a činidlo
EP1312922B1 (en) Stabilized tetrazolium reagent compositions with nitrite and methods for using the same
CA1339058C (en) Process and agent for the colorimetric determination of an analyte by means of enzymatic oxidation
CA2069946C (en) Redox mediator reagent and biosensor
CA1296243C (en) Controlled hue test device
EP1964928B1 (de) Chinone als Mediatoren für photometrische Teste
Szente et al. Non-chromatographic analytical uses of cyclodextrins
EP0317070A2 (en) Digital colorimetric quantitative assay system
EP0606296B1 (en) Reagents and assay methods including a phenazine-containing indicator
WO2018062542A1 (ja) 電子メディエーター修飾酵素並びにそれを用いた酵素電極、分光学的分析キット及び酵素試験紙
JP2005118014A (ja) 分析方法およびそれに用いる試薬
US5776779A (en) Integral multi-layer element for analyzing bile acid sulfate
EP3126493B1 (en) High load enzyme immobilisation by crosslinking
EP0259133A2 (en) Use of organic buffers to reduce dehydroascorbic acid interference in analytical methods
JP3889834B2 (ja) 還元型ニコチンアミド補酵素の測定用試薬およびそれを用いた測定方法並びに測定用試験片
JPH0635966B2 (ja) チオール化合物を検出するのに有用な分析試薬、及びそれを用いた検出方法
JP3980683B2 (ja) 還元型ニコチンアミド補酵素の測定用試薬および測定方法
CA1206077A (en) Sensitive enzymatic creatinine assay
Guilbault Use of immobilized enzymes in chemical analysis

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20101129