JPH03191799A - 分析物を測定する方法及び測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、分析物（Ａｎａｌｙｔ）を測定するためにヘ
テロポリ酸の難溶性塩を使用することに関する。更に、
本発明はヘテロポリブルー形成を用いて分析物を測定す
る方法並びにこのために必要な試薬に関する。最後に、
本発明はまたヘテロポリブルー形成により分析物を測定
するための試薬を製造するためにヘテロポリ酸の難溶性
塩を使用することに関する。

［従来の技術〕 ヘテロポリ酸は少なくとも２個の異なった中心原子を有
する無機ポリ酸である。これらは部分的に混合した無水
物としての金属、例えばモリブデン、タングステン、バ
ナジウム及び非金属又は金属、例えば燐、珪素、ヒ素、
鉄、マンガン、コバルトの多塩基性酸素酸から生じる。

その例は燐モリブデン酸もしくは燐タングステン酸であ
る。ヘテロポリ酸は水溶性である。しかしながら、これ
らは酸性溶液中でのみ安定である。

モリブデン及びタングステンのヘテロポリ酸は、従来公
知の試薬である。これらはモリブデン酸塩又はタングス
テン酸塩で相応するヘテロポリ酸を形成しかつ引き続き
該ヘテロポリ酸を青色の色素、いわゆるヘテロポリブル
ーに還元することにより燐酸塩の測定及びまたヒ酸塩も
しくは珪酸塩の検出のために分析に使用される。該色は
５価と６価のモリブデン又はタングステンの間の電子移
動による光吸収に基づく。ヘテロポリ酸からなるヘテロ
ポリブルーは、それぞれ波長に依存して極めて広い吸収
極大を有する高い吸光度の色素である。このことは電荷
輸送吸収バンドに関して典型的である。

ヘテロポリブルーの形成により還元性化合物を検出する
ためのヘテロポリ酸は公知である。

Ｆ、　Ｆｅ１ｇ１著“５ｐｏｔ　Ｔｅ５ｔｓ　ｉｎ　Ｏ
ｒｇａｎｉｃ　Ａｎａｌｙｓｉｓ”Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ、第５版、　１
９５６゜第１２８〜１２９頁に、１２−モリブド燐酸は
多数の還元性物質によってモリブデンブルーに還元され
ることが記載されている。この検出反応は非特異性であ
るので、一定の選択性を達成するためには、検査すべき
試料をアルカリ性にしかつ引き続きエーテルで抽出する
ことが推奨される。その後、エーテル抽出物は特に芳香
族窒素塩基及びエーテル可溶性の中性物質を含有する。

酸性物質は水相内に溶解したままである。

Ｐ、　Ｂ、　ｌ５ｓｏｐｏｕｌａｓ著“Ｐｈａｒｍ、　
Ａｃｔａ、　Ｈｅ１ｖ。

６４．８２　（１８９７）から、０−ヒドロキノン構造
を含有する特定の医薬、例えばメチルドーパが硫酸溶液
中でモリブド燐酸に還元作用しかつモリブデンブルーを
形成することは公知である。

Ｍ、　Ｌ、　Ｍａｔｈｅｋｅ　ａｔ　ａ１、著“Ｃｌ１
ｎ、　Ｃｈｅｍ、”３３゜２１０９−２１１０（１９８
７）には、尿酸を検出するために燐タングステン酸を使
用することが記載されている。該タングステンブルーの
還元性形成は、尿酸の存在のインジケータとして利用さ
れる。

該検出反応は、還元作用する医薬の存在により妨害され
る。

Ｉｌｌ　Ｋｌｅｉｎ　ｅｔ　ａ１、著“Ｃｌ１ｎ、　Ｃ
ｈｅｍ、１２．８１６−８２３（１９６６）から、血清
又は血漿中のグルコースの測定が公知であり、該測定は
以下の反応順序を基礎とするニ ゲルコースをヘキサシアノ鉄（ＩＩＩ）カリウムにより
酸化する、その際形成されたヘキサシアノ鉄（Ｉ［）カ
リウムは燐モリブデン酸に還元作用しかつモリブデンブ
ルーを形成する。血清及び血漿は種々異なった量の尿酸
、医薬又はその他の還元作用する物質、例えばビルビリ
ン及びグルタチオンを含有することがあるので、この方
法ではそれらの妨害が予測される。

ヘテロポリ酸からのヘテロポリブルーの還元的形成を利
用する、従来公知の総ての分析法の欠点は、特にその都
度の検出反応の非特異性にある。極めて多数の還元性物
質は、同様にヘテロポリブルー形成を生じるので、妨害
作用することがある。付加的に、ヘテロポリ酸は酸性条
件下でのみ安定である。このことは使用範囲を著しく制
限する。特に物質の特異性検出及び特異性測定のための
ヘテロポリブルー形成と酵素性反応の組合せは、従来公
知でない。しかし、まさに体液例えば血液、血清、血漿
、尿等の成分の検出のためには、酵素性測定法がしばし
ば必要である。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明の課題は、ヘテロポリブルー形成を物質、特に体
液中の物質の検出反応及び測定反応としてかつ特に酵素
性反応工程と組合せて利用することであった。この場合
、還元作用随伴物質は妨害作用するべきでなく、かつ検
出及び測定反応は酵素性反応のために必要なｐＨ値で進
行すべきである。更に、検出及び測定反応は迅速に実施
することができるべきである。

［課題を解決するだめの手段］ 前記課題は。特許請求の範囲に記載した手段により解決
される。

ヘテロポリ酸の難溶性塩は有利に分析物の測定のために
、特に該分析物が電子富裕芳香族アミンであるか又は別
の物質と一緒にそのような物質を生じる際に、使用する
ことができることが判明した。

本発明によるヘテロポリブルー形成を用いて分析物を測
定する方法は、分析物を、電子富裕芳香族アミンを生成
する物質と反応させ、該アミンをヘテロポリ酸の難溶性
塩と接触させることを特徴とする。もちろん、本発明に
よる方法は、アミンの溶液をヘテロポリ酸の難溶性塩と
接触させることにより、電子富裕芳香族アミン自体の測
定のためにも採用することができる。

更に、本発明の基礎とした課題は、ヘテロポリブルー形
成により分析物を測定する試薬を製造するためにヘテロ
ポリ酸を使用することにより解決される。

本発明によれば、ヘテロポリブルー形成により分析物を
測定する試薬が提供され、該試薬は分析物と共に電子富
裕芳香族アミンを生成する物質、及びヘテロポリ酸の難
溶性塩又は接触するとそのような塩を生成する物質を含
有することを特徴とする。本発明による試薬は、直接電
子富裕アミンの測定のために利用すべき場合には、該試
薬がヘテロポリ酸の難溶性塩又は接触するとそのような
塩を生成する物質を液状媒体中又は担体結合した形で含
有しておれば十分である。

本発明によれば、分析物の測定のためにヘテロポリ酸の
難溶性塩を使用することができる。

本発明に基づくヘテロポリ酸の難溶性塩としては、特に
水又は水性媒体、例えば緩衝液、又は体液、例えば血液
、血清、血漿、尿又は唾液中に全く溶けないか又はごく
わずかに溶けるにすぎずかつこのことを試験及び発色条
件下で維持するような、ヘテロポリ酸の塩が理解される
。

特にヘテロポリ酸の塩は、液状試料内で最大溶解可能な
量が専らその中に含まれる分析物の測定のために不十分
である程難溶性である。

驚異的にも、このようなヘテロポリ酸の難溶性塩は酸性
だけでなく、中性、及び特に約ｐＨ１Ｏまでの塩基性ｐ
Ｈ範囲内で安定であることが判明した。従って、たいて
いの酵素が活性であるｐＨ範囲内で安定であり、ひいて
はヘテロポリブルーを形成するために酵素性反応と組合
せて採用することができる。特に溶解されていない状態
では、本発明によるヘテロポリ酸の難溶性塩は高温でも
安定である。難溶性にもかかわらず、分析物は本発明に
よるヘテロポリ酸の塩で極めて急速に、即ち数秒ないし
数分間以内でヘテロポリブルー形成により確認しかつ測
定することができることが立証された。この場合、別の
自体で還元性作用物質による妨害を伴うことなく選択的
測定が可能である。このことは、特にまた約５５０から
１ｌ１００ｎを越えるまで及ぶ、形成されたヘテロポリ
ブルーの広い吸収極大のために、測定装置に特別の要求
が課せられずかつまた視覚で十分に追跡されるべきであ
る敏感な測定方法を可能にする。

本発明に基づき使用可能なヘテロポリ酸は、ヘテロ原子
として燐、ヒ素、珪素又はゲルマニウムを有するモリブ
デン、モリブデンとタングステン、バナジウムとモリブ
デン、又はバナジウムとモリブデンとタングステンのヘ
テロポリ酸の塩である。特に有利であるのは、燐及びヒ
素を有するモリブデンのヘテロポリ酸である。

燐は非金属として全く特に有利である。金属原子として
は、モリブデンが全く特に有利である。極めて好適なも
のは、１２−モリブド燐酸、１８−モリブドニ燐酸、１
２−モリブド燐酸、１８−モリブド燐酸、ｌｌ−モリブ
ド−１−バナド燐酸、ｌＯ−モリブド−２−バナド燐酸
及び９−モリブド−３−バナド燐酸の難溶性塩であり、
この場合１８−モリブドニ燐酸がその高い包収率に基づ
きモリブデンブルーに還元する際には特に有利である。

ヘテロポリ酸の難溶性塩は、そのカチオンがアンモニウ
ムイオンＮＨ，＋よりも大きいものである。有利なカチ
オンは、一般式Ｉ： Ｒ１Ｒ１Ｒ３Ｒ’Ｘ”　　　　（Ｉ） ［式中、Ｒ１，Ｒ＊、Ｒ３，Ｒ４は同じか又は異なって
おりかつアルキル基、アリール基又はアルアルキル基を
表すか、又は総ての基が同じでない場合には、水素原子
を表し、又はこの場合２つの基は一緒にアルキレン基を
形成し、かつＸは燐又は窒素原子を表す］で表すことが
できるアルキル基及びアルアルキル基において、アルキ
ルは１〜２２個の炭素原子、有利には１〜６個の炭素原
子を含有する、直鎖状又は枝分れ鎖状基である。アリー
ル基又はアルアルキル基中のアリールは、６〜ｌＯ個の
炭素原子を有する芳香族基を表す。特に好適であるのは
、フェニル基又はナフチル基である。

アルアルキル基として特に好適なものは、ベンジル基で
ある。

アルキレン基は、両者の末端とＸで結合された４〜６、
有利には４又は５個の炭素原子を有する飽和又は不飽和
炭化水素鎖である。一般式Ｉのカチオンは、上記のよう
なアルキレン基の２個を含有することができる。しかし
ながら、１個だけのアルキレン基が存在するのが有利で
ある。

一般式Ｉにおいて、Ｘは有利には窒素原子を表す。同様
に、ヘテロポリ酸の難溶性塩中の有利なカチオンも第四
ＮｊｉＸ子を含有する窒素複素芳香族化合物の群から選
択されるものであってよい。例えば、その窒素原子でア
ルキル、アリニル又はアルアルキル基を担持するピリジ
ン又はキノリンが挙げられ、この場合これらの基の定義
に関しては先に一般式■中の基Ｈ１，Ｒ１Ｒ３，Ｒ４に
関して定義したものが該当する。

本発明によるヘテロポリ酸の難溶性塩は、例えばヘテロ
ポリ酸を相応する塩基性物質と反応させることにより得
られる。一般に、このためには少なくとも１種の物質を
溶液として、有利には水溶液として使用する。しかしま
た、両者の塩成分を固体の形で液体、特に水性液に加え
るか、又はその逆の操作を行うことができる。

分析物とは、測定すべき物質と解される。本発明は、液
体、特に水性液体中に溶けて存在する物質のために特に
好適であることが判明した。特に有利には、体液、例え
ば血液、血漿、尿又は唾液中の物質の測定のためにヘテ
ロポリ酸の難溶性塩を使用することができる。この意味
において可能な分析物としては、例えばグルコース、コ
レステロール、ラクテート、ＮＡＤＨ又はエタノールが
挙げられる。原則的に本発明によれば、１種以上の別の
化合物と、その酸化還元電位及び動力学が、ヘテロポリ
酸の難溶性塩を数秒〜数分間、有利には３分間未満でヘ
テロポリブルーに還元することができる状態にあるよう
な物質に転化することができるか、又はそれ自体がその
ような物質であるようなあらゆる化合物を測定すること
ができる。驚異的にも、電子富裕芳香族アミンがこのこ
とを可能にすることが判明した。特に、この場合別の自
体で還元作用する化合物による妨害を伴うことなく選択
的測定が可能であることは、特に驚異的なことである。

電子富裕芳香族アミンとしては、アニリンよりも電子富
裕でありかつひいてはアニリンよりも強力な還元剤であ
る化合物であると解されるべきである。電子富裕芳香族
アミンは、標準水素電極に対して０．６ｖ未満、有利に
は０．４５Ｖ未満の厳選電位を有する。しかしながら、
厳選電位の大きさだけが決定的でない。更に、相応する
物質が急速に、即ちほぼ３分間以内で、ヘテロポリ酸の
難溶性塩をヘテロポリブルーに還元することができるこ
とが重要である。例えば、１個以上の＋Ｉ及び／又は十
Ｍ置換基、例えばヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、
アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アミノ
、モノアルキルアミノ及びジアルキルアミノ基を有する
総てのアニリン誘導体が該当するアルキル、アルコキシ
、アルキルチオ、モノアルキルアミノ及びジアルキルア
ミノ基は、そのアルキル基が１〜６個の炭素原子を有す
る炭化水素を形成する基であり、該炭化水素基はヒドロ
キシ基、場合により１力所以上で１〜６個の炭素原子を
有するアルキル基で置換されたアミノ基、ＰＯ，Ｒ２，
ＳＯ，Ｈ又はＣｏ、Ｈにより置換されていてもよい。酸
基Ｐ　Ｏｓ　Ｈ２、Ｓ　ＯｓＨ又はＧｏ、Ｈはそのまま
で又は塩の形でアンモニウム塩、アルカリ金属塩又はア
ルカリ土類金属塩として存在することができる。

アリールオキシ及びアリールチオ基は、５〜ｌＯ個の炭
素原子を有する基であり、この場合フェノキシ及びフェ
ニルチオ基が特に有利である。

アニリン誘導体としてはまた、置換されていない又はア
ルキル基によって１力所以上で置換されたアミン基を、
１個以上の芳香族及び／又は脂環式環と縮合環化された
芳香族環に担持する化合物が解されるべきである。この
場合、芳香族環としては、炭素芳香族系並びにまた複素
芳香族が該当する。例えば、縮合環化されたベンゼンも
しくはナフタリン環又は縮合環化されたピリジン環であ
る。

脂肪族環としては、５〜７、有利には５又は６個の炭素
原子を有する飽和又は不飽和脂環式％式％ アミノ基の可能な置換基は、１〜６個の炭素原子を有す
る炭化水素基であり、該炭化水素基はヒドロキシ基、場
合により１力所以上で１〜６個の炭素原子を有するアミ
ノ基、ＰＯｓＨｚ。

ＳＯ，Ｈ又はＣＯ□Ｈにより置換されていてもよい。酸
基ＰＯ，Ｈ，，ＳＯ，Ｈ又はＣｏ、Ｈはそのままで又は
塩の形でアンモニウム塩、アルカリ金属塩又はアルカリ
土類金属塩として存在することができる。

電子富裕芳香族アミンとして特に好適なものは、一般式
■： Ｅ式中、 Ｒ６はヒドロキシ又はアミノを表し、この場合アミノ基
は場合によりｌ又は２カ所でアルキル基により置換され
ており、かつアルキル基は場合によりヒドロキシ基、場
合により１力所以上でアルキル基によって置換されたア
ミノ基、ＰＯ，Ｒ２，Ｓｏ、Ｈ又はＣｏ２Ｈｊ：よッテ
置換されており、 Ｒ６及びＲ７は両者とも同じか又は異なっており、水素
原子又はアルキルを表し、この場合アルキル基は場合に
よりヒドロキシ基、場合により１力所以上でアルキル基
によって置換されたアミノ基、Ｐ　ＯｓＨｘ、　Ｓ　Ｏ
ｓＨ又はＣ０２Ｈによって置換されており、かつ Ｒ”、Ｒ″、Ｒ１０及びＲ１＋は同じか又は異なってお
り、水素原子、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、
アリールオキシ、アリールチオ、ハロゲン、カルボキシ
、カルボキシアルキル又はアルコキシカルボニルを表す
］の化合物である。

アルキル基及びアルキルチオ、カルボキシアルキル又は
アルコキシカルボニル基中の“アルキル”は、１〜６個
の炭素原子を有する炭化水素基である。特に有利である
のは、１〜３個の炭素原子を有する基である。

アルコキシ基は、同様に１〜６個の炭素原子を有する炭
化水素基である。特に有利であるのは１〜３個の炭素原
子を有する基である。アリールオキシ及びアリールチオ
基は、６〜１０個の炭素原子を有する基であり、この場
合フェノキシ及びフェニルチオ基が特に有利である。ハ
ロゲンはフッ素、塩素、臭素又はヨウ素を表す。塩素及
び臭素が特に有利なハロゲン置換基である。

酸基Ｐ　ＯｓＨ２，Ｓ　ＯｓＨ又はＣｏ、Ｈは、ソノま
まで又は塩の形でアンモニウム塩、アルカリ金属塩又は
アルカリ土類金属塩として存在することができる。

アンモニウム塩は、アンモニウムイオン：ＮＨ，＋を含
有するもの、又は１力所以上でアルキル、アリール又は
アルアルキル基によって置換されたアンモニウムカチオ
ンを含有するものである。アルキル及びアルアルキル基
中のアルキルは、１〜６個の炭素原子を有する炭化水素
基を表す。アリール及びアルアルキル基中のアリールは
、６〜ＩＯ個の炭素原子を有する芳香族環であり、この
場合にはフェニルが有利である。有利なアルアルキル基
はベンジルである。

アルカリ金属塩は、有利にはリチウム、ナトリウム又は
カリウムの塩である。アルカリ土類金属塩は、有利には
マグネシウム又はカルシウムの塩である。

電子富裕芳香族アミンは、直接的にヘテロポリ酸の難溶
性塩でヘテロポリブルーの形成によって測定することが
できる。しかしまた、別の物質との化学的もしくは酵素
的反応により該物質を化学料論的に電子富裕芳香族アミ
ンに転化する物質も測定することができる。例えば反応
体としては、電子富裕芳香族アミンの基礎骨格を既に自
体内に隠蔽しておりかつ測定すべき電子富裕芳香族アミ
ンとの化学的又は酵素的反応により遊離することができ
るような物質を使用することができる。特にこのような
物質としては、加水分解により電子富裕アミンを生じる
化合物が解される。例としては、電子富裕芳香族アミン
のアミド、エステル又はグリコシドが挙げられる。その
ようにして測定することができる分析物は、なかんずく
相応する基質の電子富裕芳香族アミンへの反応に触媒作
用する酵素、特にヒドロゲナーゼ例えばアミド結合及び
／又はペプチド結合を分解する酵素、カルボン酸結合、
燐酸結合又は硫酸結合であるにせよ、エステル結合を分
解する酵素、更にまた基の転移に触媒作用する基転移酵
素、例えばγ−グルタミルトンスフェラーゼである。

更に、例えば酵素的に酸化させることができる物質も測
定することができ、かつこの場合には電子受容体として
、反応により電子富裕芳香族アミンを生じるような化合
物が使用される。

なかんずく体液、例えば血液、血漿、血清、尿又は唾液
中の物質のためには、それぞれ特異的に一定の物質を識
別しかつこの物質を官能化する電子受容体の存在下に酸
化する多数の酸化還元性酵素が公知である。

例としては、７ラビン依存オキシダーゼ、例えばＬ−及
びＤ−アミノ酸オキシダーゼ、コレスレロールオキシダ
ーゼ、グルコースオキシダーゼ、グリセリンオキシダー
ゼ、ラクテートオキシダーゼ又はビルバートオキシダー
ゼ及び非ＮＡＤ　（Ｐ）依存デヒドロゲナーゼ、例えば
ピロロキノリン−キノン依存グルコースデヒドロゲナー
ゼが挙げられ或はまたデアホラーゼ（ＮＡＤＨ：ｄｙｅ
−酸化還元酵素）が挙げられる。

酸化還元性酵素の場合、特にオキシダーゼ及び非ＮＡＤ
　（Ｐ）依存デヒドロゲナーゼの場合には、酵素基質の
酵素性酸化により電子富裕芳香族アミンに還元される酵
素性酸化のための電子受容体が使用可能である。その際
には、酵素性酸化されるような物質は、生成する電子富
裕芳香族アミンとヘテロポリ酸の難溶性塩との接触によ
りヘテロポリブルーの形成によって検出及び測定するこ
とができる。

本発明に基づき有利な電子受容体としては、この関係に
おいて特に芳香族ニトロン化合物、オキシム及びヒドロ
キシルアミンが挙げられる。特に有利であるのは、芳香
族ニトロソ化合物及びオキシムである。全く特に有利で
あるのは、特に欧州特許公開第０３５４４４１号明細書
に記載されているようなニトロソ化合物及びオキシムで
ある。

本発明に基づきヘテロポリブルー形成により分析物の測
定を実施するためには、前記のように分析物を物質と反
応させ、電子富裕アミンに転化しかつヘテロポリ酸の難
溶性塩と接触させれば十分である。電子富裕芳香族アミ
ン自体が直接測定すべき分析物である場合には、該分析
物を前厄て化学的又は酵素的反応させることなくヘテロ
ポリ酸の難溶性塩と接触させる。

一般に、少なくともヘテロポリ酸の塩に専ら作用する電
子富裕芳香族アミンは、例えば水、緩衝液又は体液中の
溶解した形で、有利には水溶液で存在させる。測定すべ
き分析物それ自体が電子富裕芳香族アミンでない場合に
は、分析物と一緒に電子富裕芳香族アミンを発生させる
ために必要である化合物は同様に水性液体内で可溶性あ
るのが有利である。該化合物はヘテロポリ酸の難溶性塩
と接触させる前に試料に加えることができる。該化合物
はまたヘテロポリ酸の難溶性塩と一緒になって初めて又
は更には最後に初めて検査すべき試料と接触させること
ができる。どの順序を選択するかは、個々のケースに依
存しかつその都度実施すべき分析測定のための専門家に
よってその人の一般的知識に基づき又は若干の最適化実
験により決定することができる。電子富裕芳香族アミン
の製造のために必要な物質は、水性試料に固体で又は溶
解した形で加えることができる。

測定すべき分析物と一緒に電子富裕芳香族アミンを発生
する物質は、少なくと全部の試料を反応させることがで
きる程の量で試料と接触させるべきである。

ヘテロポリ酸の難溶性塩は固体物質として検査すべき試
料と接触させることができる。しかしまた、これは液体
、有利には水性液体中の懸濁液として存在することがで
き、この場合には測定を実施するために検査すべき試料
と混合する。測定すべき分析物が存在すると、水中にヘ
テロポリブルーが形成され、該ヘテロポリブルーはその
激しい色に基づき識別可能である。定量的測定のために
は、水中で難溶性のヘテロポリブルー並びに未反応ヘテ
ロポリ酸塩を液体から、例えば遠心分離により分離し、
引き続き適当な溶剤、例えばジメチルスルホキシド中に
溶解させかつ場合により標準溶液及び校正曲線を採用し
て分光分析によりヘテロポリブルー色素の濃度を測定し
、それにより最後に検出すべき分析物の濃度を測定する
ことも可能である。

ヘテロポリ酸の難溶性塩は、試料内存布するか又は形成
された電子富裕芳香族アミンが、測定すべき分析物もし
くは電子富裕芳香族アミンの量との定量的関係で設定す
ることができるヘテロポリブルー形成を行う程の量で存
在すべきである。従って原則的には、電子富裕芳香族ア
ミンの最大関連濃度までアミン量の上昇がヘテロポリブ
ルー量の増加を生じる程のヘテロポリ酸の難溶性塩を使
用しなければならない。

ヘテロポリブルー形成により分析物を測定するための本
発明による試薬は、分析物と電子富裕芳香族アミンを形
成する物質及びヘテロポリ酸の難溶性塩を含有する。こ
のような試薬は、例えば懸濁液又は凍結乾燥物、粉末混
合物として又は錠剤として圧縮成形して使用することが
できる。有効成分は並べて又は別々に存在することがで
き、この場合有効成分のそれぞれはその最も好ましい形
に加工されていてもよい。更に、本発明による試薬は、
そのまま使用できるヘテロポリ酸の難溶性塩としてでは
なく、専うこのような塩を調製するために必要な成分、
即ち例えばヘテロポリ酸と、カチオン性又は塩基性化合
物とを別々に含有することもできる。後者の場合には、
両者の成分を本発明による測定反応の直前に初めて接触
させ、その際初めて相応する塩を形成する。本発明によ
る試薬は、ヘテロポリ酸の難溶性塩を、それが大きな反
応性表面積を有するように、微細に分散した形で含有す
る場合が特に有利である。場合により、本発明による試
薬はなおまた別の薬剤、例えば緩衝剤及び助剤、例えば
湿潤剤、安定剤、賦形剤等を含有することができる。測
定すべき分析物自体が電子富裕芳香族アミンである場合
には、本発明による試薬のためには勿論、分析物と初め
て電子富裕芳香族アミンを形成する物質は不必要である
。

本発明による分析物の測定は、いわゆる乾式試験で全く
特に有利に構成される。乾式試験を実施するために適当
である装置は、当業者には例えば欧州特許公開第００１
６３８７号明細書、西独国特許出願公開第３２４７６０
８号明細書、欧州特許公開第０２６２４４５号又は同第
０２５６８０６号明細書から公知である。これらはテス
トキャリアと称される。この場合には、試験を実施する
ために必要な試薬は、乾燥した、即ち液体中に溶解され
ていない形で、例えばごく若干の可能な材料を挙げれば
、紙、欧州特許公開第００１６３８７号に基づく解放フ
ィルム、ガラス繊維フリース又は多孔性プラスチック膜
内又はその上、又は例えば相応するプラスチックフィル
ム、ゼラチン又はセルロースのような膨潤性材料内又は
その上に存在する。

試料液体をテストキャリアに載せるか又はテストキャリ
アを試料液体中に浸漬すると、テストキャリア内に液状
媒体が形成され、その内部で検出反応が進行する。該反
応によって誘発され発色は目視的に又は分光分析、例え
ば反射分光分析により評価することができる。

支持体結合した形の本発明による試薬を製造するために
は、支持体材料、例えば濾紙、セルロース又はプラスチ
ック７リースにテストキャリアを製造するために使用さ
れる必要な試薬を易揮発性の溶剤、例えば水、メタノー
ル、エタノール又はアセトン中の溶液及び／又は懸濁液
を含浸させる。この操作は１含浸工程で実施することが
できる。しばしば、含浸は数工程で実施するのが有利で
ある、この場合にはそれぞれ完成試薬の１つを含有する
溶液及び／又は懸濁液を使用することができる。従って
、例えば第１工程でヘテロポリ酸の難溶性塩の懸濁液か
らかつ第２工程で、測定すべき分析物と電子富裕芳香族
アミンを形成する物質、並びに場合により緩衝剤および
別の添加物を含有する物質を支持体材料に施すことがで
きる。そのようにして処理した支持体材料は、そのまま
使用してもよく又は自体公知方法で、−層取り扱い易く
するように、グリップに取り付けるが又は剛性のプラス
チックシートに接着することができる。

同じ支持体の数回含浸の代わりに、本発明による試薬は
、分析物測定を実施する際に相互に液体交換を可能にす
る接触を行う異なった支持体材料に分配することができ
る。

担体に結合した試料を製造するには、含浸の代わりに皮
膜形成体、即ちポリマー又はポリマー分散液から、公知
の製造方法例えばドクター塗布、ロールコーチング等に
基づき皮膜を形成することができる粘度である溶液を製
造することができる。この溶液に試薬及び場合により緩
衝物質及び助剤を混入する。被覆材料は、支持体に施し
、乾燥しかつ完成した皮膜を例えば試験条片に加工する
。

［実施例］ 有利なテストキャリアの例は、第１図及び第６図に示さ
れている。その他の図面第２〜５図及び第７図は、第１
図もしくは第６図のテストキャリアで得られた、時間、
波長又は分析物濃度に対する反射の依存性を％で示す図
である。

以下の実施例は、ヘテロポリブルー形成により分析物を
測定するための可能な若干の方法変更形を示す。しかし
ながら、これらの実施例は本発明を制限するものではな
い。図面は実施例で詳細に説明する。

例１ １８−モリブデン燐酸塩でのグルコースの検出 第１図に示したテストキャリアを製造する。

該テストキャリアは、寸法２×３ｃｍを有する支持体シ
ートｌとして厚さ３５０μｍのポリエステルシート（Ｍ
ｅｌｉｎｅｘ、　Ｉ（ｊ　、西ドイツ国フラクフルト在
）からなる。該シートの中心に、直径６＋ｌｌｌ１１を
有する穴が設けられている。転写接着剤２を用いて、厚
さ２００μｍの透明なボリア−ボネートシート５　（Ｐ
ｏｋａｌｏｎ、　Ｋｏｎｚａ、西独内ラインフェルデン
在）、第１の試薬層４及び第２の試薬層３からなる試薬
支持体６は、この穴によって収容される試料液体がまず
第２の試薬層と接触するように支持体シート内の穴に固
定されている。試薬支持体は寸法２ＸＩＣ１＋を有する
。

試薬支持体６は以下のようにして製造する：第１の試薬
層： ２回蒸留した水　　　　　　　　１１３ｇｏ。２Ｍクエ
ン酸塩緩衝液、ＰＨ７，０中の２重量％のキサンタン（
Ｘａｎｔｈａｎ）　（Ｋｅｌｔｒｏｌ　Ｆ。

Ｋｅｌｃｏ、米国オクラホマ州）　　　　　　　３６．
３ｇプロピオ７アン（Ｐｒｏｐｉｏｆａｎ）　７０　Ｄ
　（ＢＡＳＦ。

西独国ルートピッヒスハーフエン）　　６９ｇ水中の１
５重量％ノニル硫酸ナトリウム１５＋ｍＱ ポリビニルピロリドン（Ｋｏｌｌｉｄｏｎ　２５．　Ｂ
ＡＳＦ、西独国ルートピッヒスハーフエン）６ｇ塩化テ
トラビチルアンモニウム　　　３．９９水１５ｇ中の１
８−モリブデン二燐酸（Ｇ。

Ｂｒａｕｅｒ　、“Ｈａｎｄｂｕｃｈ　ｄｅｒ　ｐｒＭ
ｐａｒａｔｓｖｅ　ａｎｏｒｇａ−ｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃ
ｈｅｍｉｅ”、　Ｅｎｋｅ出版社、シュツツガルト、１
９５４）　　　　　　　　　　　　　　　　　１２ｇセ
ラトム（Ｃｅｌａｔｏｍ）　ＭＷ　２５（Ｅａｇｌｅ　
Ｐｉｃｈｅｒ、米国、オハイオ州シンシナチ）　　　　
　６３ｇを均質な材料に攪拌しかつ厚さ１５０μｍで透
明なシート５上にドクタ塗布する。６０℃で１時間乾燥
する。

第２の試薬層： ２回蒸留した水　　　　　　　　　２０９二酸化チタン
ＲＮ　５６　（Ｋｒｏｎｏｓ−Ｔｉｔａｎ　ＧｍｂＨ，
西独間リバークーゼン）　　　　　　　　　１６９０．
２Ｍクエン酸塩緩衝液、ｐＨ６，０中の２重量％のＫｅ
ｌＬｒｏｌ　Ｆ（Ｋｅｌｃｏ、米国オクラホマ州）３６
．３９ プロピオ７アン７０　Ｄ　（ＢＡＳＦ、西独国ルートピ
ッヒスハーフエン）　　　　　　　　６９ｇ１５重量％
の水中のノニル硫酸ナトリウム１５＋＊Ｉ２ コリトン（Ｋｏｌｌｉｄｏｎ）　２５　（ＢＡＳＦ、西
独国ルートピッヒスバー７エン）　　　　　　　　　６
ｇ水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１８８ｇセラトムＭＷ　２５（Ｅａｇｌｅ　Ｐｉｃｈｅ
ｒ、米国、オハイオ州シンシナチ）　　　　　　　　　
　６３ｇ水２０ｇ中のＮ、Ｎ−ビス−（２−ヒドロキシ
エチル）−ｐ−ニトロソアニリンＸＨＣｌ００ｍ９ 水１２ｙ中のグルコースオキシダーゼ（２００Ｕ／１１
１ｇ） ２ｇ を均質な材料に攪拌しかつ厚さ４００μｍで第１の試薬
層の上にドクタ塗布する。気泡を軽い吹き付けにより除
去しかつ該被覆を６０°Ｃで１時間乾燥する。

時点ｔ−０で、ａ）グルコースＯｒｔｒｇ／旧、ｂ）グ
ルコース４７．５　＋ｌ１ｇ／ｄ１、　　ｃ　）グルコ
ース１０８．７　ｍｇ／ｄｉ、　　ｄ　）グルコース２
００．８　ｍｇ／ｄｉ及びｒ）グルコース７６６　ｍｇ
／ｄｉを有するヒトの血漿をそれぞれ前記のようにして
製造したテストキャリアに載せる。９５０ｎｍで、規約
反射率を％で測定する。第１の測定は、８秒後に行い、
その他の測定は４秒間周期で行う。時間（ｔ）秒に対す
る規約反射率（Ｒ）を％でプロットすると、第２図に示
した図表が得られる。発色及び規約反射率は既に最初の
測定でほぼ完全である。安定な最終値が生じ、該最終値
は開始後殆ど任意の時間で測定することができる。

前記のようにして製造した第１図に示したテストキャリ
アでグルコース濃度ａ　）　ＯＢ／ｄＬ。

ｂ）　　ｌ　ＯＯｍｇ／ｄｉ、　　ｃ）　２４　（１＋
ｇ／ｄｉ及び８００＋１ｇ／旧を有する試料を種々の波
長で測定しかつ波長（λ）　ｎｍに対する規約反射率（
Ｒ）を％で図表にすると、第３図が得られる。該図表に
作図されたスペクトルから明らかなように、５５０ｎｍ
〜１ｌ１００ｎ以上の任意の波長をグルコース濃度の測
定のために使用することができる。

極端に平坦なスペクトルのために、測定波長の変動に対
する許容差は極めて高い。

実施例２ １８−モリブド燐酸塩を用いたゲルコール検出の特異性 第１表に列記した妨害物質を、記載の濃度でａ）グルコ
ースＯｍｇ／ｄｉ　（Ｃグルコース−０）及びｂ）　グ
ル　コ　−　ス　１　１　０　　ｍｇ／ｄｌ　　（Ｃグ
ルコース−１１０＋ｘｇ／旧）を有するヒトの血漿に加
える。このようなヒトの血漿を実施例１で製造しかつそ
こに記載したような第１図によるテストキャリアで調査
すると、６６０ｎｍで表１に示す規約反射率（％Ｒ）が
見いだされる。

紅 妨害物質　　　　最終濃度　　　　Ｃグルコ−Ｚ−Ｑ％
Ｒ ナシ（比較）　　　　　０　　　　　　６０．３ＮａＯ
Ｈ１ｍＭ　　　　　　５９．９ Ｒｍ　　　　　　　ｌｏｍｙ／ｄ　　　　　　　５９．
５２０ｍｇ／ｄｌ　　　　　　６０．１ ラクテート　　　１００ｍｇ／ｄ　　　　　　　５９．
７３００ｍｇ／ｄｌ　　　　　　６０．２ビルプリン　
　　１０ｍｇ／ｄｌ　　　　　　６０．０２０■／ｄｌ
　　　　　　６１．５ グルタチオン　　ｌ＋ｎＭ　　　　　　　　５９．３５
ｍＭ　　　　　　　　５９．４ メチルドーパ　　１０■／ｄｌ　　　　　　５９．５１
００ＩＩ１ｇ／ｄ　　　　　　　５９．０ドベシレート
　　２０＋ｕ／ｄ　　　　　　　５９．４ゲンチシン酸
　　５に／ｄｉ　　　　　　５９．６アスピリン　　　
５■／ｄ　　　　　　５９．９６−／ｄ　　　　　（資
）、０ ヒトの血漿内のグルコース濃度 Ｃグルコース−１１０ｍｇ／ｄ１ ％Ｒ ４３，０ ４２，５ ４２，４ ４２，４ ４３，２ ４２，８ ４２，７ ４３，０ ４３，０ ４３，８ ４３，１ ４２，１ ４１，８ ４３，０ ４２，１ ４２，０ （０及び１１ ０肩ｇ／旧）には関係なく、 重要な妨害は見られ ない。

実施例１に類似して製造し、かつ塩化テトラブチルアン
モニウム（これは比較テストキャリアのためには取り除
く）を使用するまで同一である第１図のテストキャリア
を用いると、再現性の著しく悪い、強度に変動する結果
が得られる、それというのも使用した１８−モリブドニ
燐酸は５．５よりも高いｐＨでは分解するからである。

更に、この場合には還元性物質は付加的な発色によって
妨害作用する。

実施例３ 実施例１の処方で１８−モリブドニ燐酸を同じ量の１２
−モリブド燐酸（Ｆｌｕｋａ、スイス国ブッホス）と代
えると、グルコースが存在すると、より暗色を発色する
テストキャリアが得られ、該テストキャリアは高いグル
コース濃度のために特に適当である。しかし既知の種々
異なったグルコース濃度（Ｃ）を有する試料を使用しか
つそれぞれの規約反射率（Ｒ）を６５０ｎｍで％で測定
すると、第４図の曲線が得られる。

９５０ｎｍで測定すると、同一の曲線が得られる類似し
た結果は、１２−モリブドひ素酸塩（■）、１８−モリ
ブドニヒ酸塩（Ｖ）、１１−モリブド−１−バナド燐酸
塩及び９−モリブド３−バナド燐酸塩を用いて得られる
。これらの化合物はすべて、Ｇ、　Ｂｒａｕｅｒ著“Ｈ
ａｎｄｂｕｃｈｄｅｒ　ｐｒａｐａｒａｔｉｖｅ　ａｎ
ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ”Ｅｎｋｅ出版
社、シュッツガルト（１９５４）に基づき製造すること
ができる。以下の表２は、ヘテロポリ酸の名称及び式並
びに相応するヘテロポリブルーの吸収極大を列記する。

表−」− 種々のヘテロポリ酸からのヘテロポリブルー出発物質　
　　　　　　　　　　　式 ヘテロポリ酸の吸収 極大 １２−そリブド燐酸　　　　　　　　　　　　Ｈｓ（Ｐ
１１０＋ｔ０４ｏ）Ｘｎ）１１０ナトリウム−１８−そ
りブＦ二燐酸塩　　　　　Ｎａｇ（ＰｔＭＯ＋ａＯａｇ
）”１４２ＨｔＯカリウＡ−１２−＋リブＦヒ酸塩（ｖ
）　　　　Ｋｘ（ＡｓＭｏ＋ｔＯ４ｏ）ＸｎＨ２０ナト
リウム−１８−そり１Ｆニヒ酸塩（ｖ）　　Ｎａｇ（＾
５ｔｌｏｎｏａＪＸ２３Ｈ１０１１−＋リブドートバナ
Ｆｔ１４ＷＩｔ　　　　　　　　Ｈ４（ＰＭｏｕＶ０４
ｏ）Ｘｎｌｌｔｏｌｏ−そラブド−２−バナＦ燐酸　　
　　　　　％（Ｐ１１ｏ＋ｏＶｚ０４．）　×ｎ１１２
０９−そリブＦ−３−／ｆｔＦ燐７１２　　　　　　　
　　　１１ｓ（ＰＭｏｅＶｓＯ＋ｏ）×ＩＩＨｔＯａ、
僅かな還元剤（グルコース） ｂ；大金の還元剤（グルコース） ７２５ｎ鳳 ６９３ｎ腫 ８４０ｎｍ”又は６５２ｎｍ’ ６７々１ 印５ｎｍ ６２０■ ８０ｒｕｓ 例４ ＮＡＤ（Ｐ）Ｈを測定するためのテストキャリア例１の
処方においてクルコースオキシダーゼを同じ量のディア
フォラーゼと代えると、ＮＡＤ　（Ｐ　）Ｈを検出する
ためのテストキャリアが得られる。既知の濃度のＮＡＤ
Ｈを有する試料からかつ該反応の６６０ｎｍでの％での
測定により、第５図に示す曲線が得られる。この曲線は
未知の濃度を測定するための校正曲線として利用するこ
とができる。

ＮＡＤ（Ｐ）依存デヒドロゲナーゼ、相当する基質及び
ＮＡＤ　（Ｐ）からＮＡＤ（Ｐ）Ｈを形成する方法は公
知である。従って、相当する前反応後に、該ＮＡＤＨテ
ストキャリアをデヒドロゲナーゼ基質の検出及びデヒド
ロゲナーゼ自体の検出のために利用することができる。

例５ ａ）テストキャリアの製造 第６図に示すテストキャリアを製造する。このテストキ
ャリアは、 ０．２Ｍクエン酸塩緩衝液、ｐＨ６，０ｒａＱ 水中の１０重量％のノニル硫酸ナトリウムＱｍ４ タルドラジン　　　　　　　　　　６０＋１ｇＮ、Ｎ−
ビスー（２−ヒドロキシエチル）−ｐ−ニトロソアニリ
ンＸＨＣｌ　　　　　０．１９水中の２０重量％の１８
−モリブドニ燐酸６．８ｍ（＋ 水中の２５重量％の塩化テトラメチルアンモニウム　　
　　　　　　　　　　　　　１ｇ５０＋ｎＭクエン酸塩
緩衝液、ｐＨ６，０中の５０重量％のコリトン２５　（
ＢＡＳＦ西独国西独トピッヒスハーフエン）　　　　　
　　　　７２ｇからなる均質な懸濁液からなる指示薬系
を吸引性の紙（Ｌａｎｇｆａｓｅｒ、　５ｃｈｏｅｌｌ
ｅｒ、西独間ゲルムバッハ）に含浸させかつ引き続き４
０℃で３０分間乾燥する。

酵素を別々の紙（Ｌａｎｇｆａｓｅｒ、　５ｃｈｏｅｌ
ｌｅｒ、西独間ゲルムバッハ）の上に置く。故紙に、０
．２Ｍ燐酸塩緩衝剤、ｐＨ７，０５０９水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４８９水中
の１０重量％のノニル燐酸ナトリウム’２ａＱ ディア７オラーゼ（１５Ｕ／１１９凍結乾燥物）６ｇ アルコールデヒドロゲナーゼ（２５０Ｕ／＊ｇ凍結乾燥
物）　　　　　　　　　　　　　　　２ｇの溶液を含浸
さ、かつ引き続き４０℃で２０分間乾燥する。こうして
製造した指示薬紙１３及び酵素紙１２をそれぞれ１４Ｘ
６ｍ＋ｉ大きさのストリップに切断する。

厚さ３５０μｍ１　長さ９．８ｃｍ及び輻０．６ｃｍの
ポリエステルシート（Ｍｅｌｉｎｅｘ、　ＩＣＩ、西独
間７ラクフルト）に、面重量２５　ｇ／ｆｆ”を有する
長さ１６ｍｍ、輻６Ｉｌ１ｍ及び厚さ０．２５ｍ＋＊の
ガラス繊維フリースを輸送フリース１４として、面重量
６０　ｇ／ｍ”を有する輻６ｔａｒｓ、長さ６＋＋ＩＩ
ｌ！及び厚さ７００μｍのガラス繊維フリースを赤血球
分離フリース１５として並びに寸法５　Ｘ　８ｔｎｍ及
びメツシュ幅２８０μｍを有する５ｃｒｙｎｅｌ　ＰＥ
２８０ＨＣｒｏｔ”’（Ｚｔｌｒｉｃｈｅｒ　Ｂｅｕｔ
ｅｌｔｕｃｈｆａｒｂｉｋ　ＡＧスイス国ルツシェリコ
ン）からなる保護ネットを熔融接着剤テープを用いて第
６図に示されているように固定する。酵素紙１２及び指
示薬紙１３を、厚さ２００μｍ１長さ１５ｍｍ及び輻５
＋ｍ＋＊の透明ポリカーボネートシート（Ｐｏｋａｌｏ
ｎ、　Ｌｏｎｚａ、西独間ライン７エルド）１１と一緒
に熔融接着剤ｍ１９を用いて指示シート７の上に、１１
．１２及び１３が接触せず、但し圧力により相互に、ま
た輸送シート１４内に存在する液体と接触させることが
できるように固定する。

ｂ）エタノールの測定 ａ）で製造した第６図のテストキャリアの保護ネット１
６の上に血液３２μａを載せる。６０秒間後に、透明な
シート１１を押して酵素紙１２及び指示薬紙１３を輸送
７リース１４及びその中に存在する血清に押し付ける。

１２秒間後に、規約反射率（％）を６４２ｎｍで透明シ
ート１１を透過して測定する。血液中の既知の、但し種
々異なったエタノール濃度を使用すると、第７図に示し
た曲線が得られる。この曲線を試料内の未知のエタノー
ル濃度を測定するために利用することができる。

例６ β−ガラクトーシダーゼ（ＥＣ３，２，１，２３）の測
定 以下の溶液を調製する： 緩衝剤：Ｑ、１ＭのＨＥＰＥＳ、　２０　ｍＭの塩化マ
グネシウム、ｐＨ６，８ 基買：水中の５０ｍＭのｐ−アミノフェニルβ−ガラク
トシド（“Ｏｒｇａｎ　ｉｋｕｍ”、ＶＥＤ　Ｄｅｕｔ
ｓｃｈｅｒＶｅｒｌａｇ　ｄｅｒ　Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈ
ａｆｔ、第１５版、ベルリン（１９７６））に基づきｐ
−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシドからＰｄ／炭
素に接触させて水素添加することにより製造） 中和剤＝ＩＮ苛性ソーダ溶液 指示薬：水中１８−モリブドニ燐酸１００１１１ｇ／ｒ
ａＱ及びフェニル−トリメチル−アンモニウムクロリド
５０　ｒａｙ／ｌａｎ 酵素：緩衝液中１８０Ｕ／＋Ｑ（記載の酵素活性は、培
養基として０−ニトロフェノールガラクトシドの使用に
関する。） 試験のために、反応容器内で以下の物質を混合する： 緩衝液　　　　　７８００μａ 指示薬　　　　　　１００μａ 中和剤　　　　　　　２０μｇ 基質　　　　　　　１００μａ 酵素　　　　　　ａ）Ｏ，ｂ）　ｌｕＱ、ｃ）２ｐＱ、
　ｄ）　３’ｕＱ、　ｅ）　４ｕＱ、　　ｆ）　５μ！
４１／２分間培養した後に、ｌ／２分間遠心分離し、上
澄みを捨て、沈降物をジメチルスルホキシド１１中に溶
かしかつ即座に吸光度を測定する。結果は表３に示す。

表３ 酵素ｔｉａ　　　　　　　酵素Ｕ／ｙｎＱ　　　　　　
　Ｅ（８００ｎｍ）０　　　　　　　　　　０　　　　
　　　　　０．０６５１　　　　　　　　　　０．１８
　　　　　　　　０．５７１２　　　　　　　　　０．
３６　　　　　　　　０．２４５３　　　　　　　　　
０．５４　　　　　　　　１．６９７４　　　　　　　
　　　０．７２　　　　　　　　２．３５０５　　　　
　　　　　　０．９０　　　　　　　　２．９０７これ
らの値から得られる校正曲線は、未知の試料内のβ−ガ
ラクトシダーゼ含量を検出するために使用することがで
きる。

例７ アルカリ性ホス７エターゼ（ＥＣ３，１，３１）の測定 例６の処方で基質として５０ｍＭのｐ−アミノフェニル
ホスフェート（Ｌ、Ｈ，Ｄａ　Ｒｉｓｍｅｒ、　Ｃ，Ｆ
。

Ｍｅａｒｅｓ、　Ｂｉｏｃｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２０．
　１６０６（１９８１）に基づき製造）を使用しかつ緩
衝液として１Ｍジェタノールアミン、１ｍＭ塩化マグネ
シウム、０゜１　ｍＭ塩化亜鉛、ｐ　Ｈ９，８を使用す
ると、酵素アルカリ性ホス７エターゼの測定を行うこと
ができる。既知の酵素濃度で、例６と同様に酵素濃度と
８００ｎｍでの吸光濃度との間の線状関係を見出すこと
ができる。

例８ 例１と同様に、但し以下の点を変更してテストキャリア
を製造する。

第２の試薬層においては、緩衝液（０，２Ｍクエン酸塩
緩衝液、ＰＨ６，０中のＫｒｅｔｏｌ　Ｆ　２重量％）
を水中のＫｒｅｔｏｌ　Ｆ　２重量％と代え、ＮＮ−ビ
ス＝（２−ヒドロキシエチル）−ｐ−ニトロソアニリン
ＸＨＣｌ及びグルコースオキシダーゼを省く。転写接着
剤２と第２の層３の間に、以下のように製造した基質を
含浸させた紙を挿入する： ティーバック紙（１２ｙ／ｒｘ２）に、２５０ｍＭトリ
ス緩衝液、ｐＨ７，６中の２５０ｍＭグリセリン及び２
０ｍＭγ−Ｌ−グルタミル−３−カルボキシル−１，４
−フェニレンジアミン（欧州特許公開第１０３８２３号
明細書に基づき製造）の溶液を含浸させかつ５０℃で２
０分間乾燥する。

牛の血清アルビミンｌ　Ｏｍｇ／ｒａＱを有する０、１
Ｍトリス緩衝液、ｐＨ７，５中で、γ−グルタミルトラ
ンスフェラーゼの希釈列を製造する。

この溶液１０μＱを前記と同様なテストキャリアに載せ
る。１分間後に、３７℃で表４に示した規約反射率（％
）が９５０ｎｍの波長で測定される。

表　　４ 酵素濃度 Ｕ／ｍＱ ０．２４５ ０．４７１ １．３１ ２．７７ ４．９３ ７．３９ ９．８５ ９５０ｎｍでの規約反射率 ％ ５９．０ ５７．０ ５５．５ ５２．７ ４９．７ ４５．８ ４２．２ ３９．０ こうして得られた曲線は、液体中の未知のγグルタミル
トランスフェラーゼ含量を測定するために利用すること
ができる。

例９ 例８と同様にして、ティーバック紙に０．１Ｍクエン酸
塩緩衝液、ｐＨ５−０中のｌＱｍＭｐアミノフェニルホ
スフェート（Ｌ、Ｈ，ＤｅＲｉｅｍｅｒ、　Ｃ，Ｆ、　
Ｍｅａｒｅｓ、　Ｂｉｏｃｃｈｅ＋ｏｉｓｔｒｙ　２０
．１６０６（１９８１）に基づき製造）を含浸させれば
、酸性ホスファターゼを検出するためのテストキャリア
が得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明による有利なテストキャリアの断面図、
第２図はそれぞれ異なったグルコース濃度を有する試料
ａ）〜ｆ）に関して第１図のテストキャリアに試料を載
せた後の時間（秒）に対する反射率（％）の依存性を示
す図、第３図は第１図のテストキャリアを使用して種々
異なったグルコース濃度を有する試料ａ）〜ｆ）に関す
る測定波長（ｎｍ）に対する反射率（％）の依存性を示
す図、第４図は第１図のテストキャリアを用いた測定の
際のグルコース濃度に対する反射率（％）の依存性を示
す図、第５図は第１図のテストキャリアを用いた測定の
際のＮＡＤＨ濃度に対する反射率（％）の依存性を示す
図、第６図はもう１つのテストキャリアの断面図、第７
図は第６図のテストキャリアを用いた測定の際のエタノ
ール濃度に対する反射率（％）の依存性を示す図である
。 ｌ・・・支持シート、２・・・転写接着剤、３・・・第
２の試薬層、４・・・第１の試薬層、５・・・ポリカー
ボネートシート、６・・・試薬支持体、１１・・・ポリ
カーボネートシー１−１１２・・・酵素紙、１３・・・
指示薬紙１４・・・輸送シート、１５・・・赤血球分離
フリース、１６・・・保護ネット、１７・・・支持シー
ト、１８・・・熔融接着剤テープ、１９・・・熔融接着
剤滴殆３図 χ［ｎｍＪ 地４図 革１図 ＊２図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヘテロポリブルー形成を用いて分析物を測定する方
   法において、分析物を、電子富裕芳香族アミンを生成す
   る物質と反応させ、該アミンをヘテロポリ酸の難溶性塩
   と接触させることを特徴とする分析物を測定する方法。 ２、ヘテロ原子として燐、ヒ素、珪素又はゲルマニウム
   を有するモリブデン、モリブデンとタングステン、バナ
   ジウムとモリブデン、又はバナジウムとモリブデンとタ
   ングステンのヘテロポリ酸の難溶性塩を使用する請求項
   １記載の方法。 ３、ヘテロポリ酸の難溶性塩として、カチオンがアンモ
   ニウムイオンよりも大きいものを使用する請求項１又は
   ２記載の方法。 ４、ヘテロポリ酸の難溶性塩として、一般式 I Ｒ＾１
   Ｒ＾２Ｒ＾３Ｒ＾４Ｘ＾＋（ I ） ［式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾４は同じか又は
   異なっておりかつアルキル基、アリール基又はアルアル
   キル基を表すか、又は総ての基が同じでない場合には、
   水素原子を表し、又はこの場合２つの基は一緒にアルキ
   レン基を形成し、かつＸは燐又は窒素原子を表す］で示
   されるカチオンを有するものを使用する請求項１から３
   までのいずれか１項記載の方法。 ５、ヘテロポリ酸の難溶性塩として、第四級化窒素ヘテ
   ロ芳香族化合物の群から選択されるカチオンを有するも
   の使用する請求項１から３までのいずれか１項記載の方
   法。 ６、ヘテロポリブルー形成を用いて電子富裕な芳香族ア
   ミンを測定する方法において、測定すべき電子富裕芳香
   族アミンの溶液をヘテロポリ酸の難溶性塩と接触させる
   ことを特徴とする、分析物を測定する方法。 ７、ヘテロポリブルー形成を用いて分析物を測定する試
   薬において、該試薬が分析物と共に電子富裕芳香族アミ
   ンを生成する物質、及びヘテロポリ酸の難溶性塩又はそ
   のために必要な物質を含有することを特徴とする、分析
   物の測定試薬。 ８、ヘテロ原子として燐、ヒ素、珪素又はゲルマニウム
   を有するモリブデン、モリブデンとタングステン、バナ
   ジウムとモリブデン、又はバナジウムとモリブデンとタ
   ングステンのヘテロポリ酸の難溶性塩を含有する請求項
   ７記載の測定剤。 ９、ヘテロポリ酸の難溶性塩として、カチオンがアンモ
   ニウムイオンよりも大きいものを含有する請求項７又は
   ８記載の測定試薬。 １０、ヘテロポリ酸の難溶性塩として、一般式 I Ｒ＾
   １Ｒ＾２Ｒ＾３Ｒ＾４Ｘ＾＋（ I ） ［式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾４は同じか又は
   異なっておりかつアルキル基、アリール基又はアルアル
   キル基を表すか、又は総ての基が同じでない場合には、
   水素原子を表し、又はこの場合２つの基は一緒にアルキ
   レン基を形成し、かつＸは燐又は窒素原子を表す］で示
   されるカチオンを有するものを含有する請求項７から９
   までのいずれか１項記載の測定剤。 １１、ヘテロポリ酸の難溶性塩として、第四級化窒素ヘ
   テロ芳香族化合物の群から選択されるカチオンを有する
   もの含有する請求項７から９までのいずれか１項記載の
   測定試薬。 １２、ヘテロポリブルー形成により電子富裕芳香族アミ
   ンを測定する試薬において、該試薬がヘテロポリ酸の難
   溶性塩又はそのために必要な物質を液状媒体中に又は担
   体結合した形で含有することを特徴とする、分析物の測
   定試薬。