FI98066C - Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivisia tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiinijohdannaisia - Google Patents

Description

98066

Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivisia tetrahydropyrrole? [1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiinijohdannai-sia - Förfarande för framställning av terapeutiskt aktiva tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-4-spiro-3'-pyrrolidinderi-5 vat Tämä keksintö koskee menetelmää valmistaa uusia tetrahydropyrrolo- [1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiinijohdannaisia, joilla on aldoosireduktaasia inhiboivaa aktiivisuutta.

10 EP-patenttijulkaisussa 365324-A kuvataan spiroisokinoliini-pyrrolidiinitetronit, joilla on kaava:

15 ^-NH

r1V^X^2 i>Vy m J*AAr3 20 ja niiden analogit, joissa fuusioitu bentseenirengas on korvattu fuusioidulla tiofeeni-, pyridiini- tai furaaniren-kaalla, jossa R1 ja R2 ovat toisistaan riippumatta vety, 25 alkyyli, joka sisältää 1-6 hiiliatomia, halogeeni, alempi alkoksi, joka sisältää 1-6 hiiliatomia, trifluorimetyyli, alempi alkyylitio, jossa alempi alkyyli sisältää 1-6 hiiliatomia, dialkyyliamino, jossa alkyyli sisältää 1-6 hiiliatomia, nitro, aryyli, tai aryyli(alempi alkyyli)oksi, 30 jossa aryyli sisältää 6-10 hiiliatomia ja alempi alkyyli sisältää 1-6 hiiliatomia; R3 on vety, alempi alkyyli, joka sisältää 1-6 hiiliatomia, aryyli, aryyli(alempi alkyyli) tai halogeenisubstitu-oitu aryyli(alempi alkyyli), jossa aryyli sisältää 6-10 35 hiiliatomia ja alempi alkyyli sisältää 1-6 hiiliatomia, asyyli tai heterosyklinen(alempi alkyyli), jolla on rakennekaava : 2 98066

5 -p4 O

V ”R V

10 jossa R4 on alempi alkyleeni, joka sisältää 1-3 hiiliatomia; X on alempi alkyleeni, joka sisältää 1-3 hiiliatomia, happi, rikki tai -NH-; Y ja Z ovat toisistaan riippumatta happi tai rikki; M ja W ovat toisistaan riippumatta 15 karbonyyli, tiokarbonyyli, sulfonyyli, sulfokso tai alempi alkyleeni, joka sisältää 1-2 hiiliatomia, sillä ehdolla, että M ja W eivät molemmat ole alempi alkyleeni kun X on -NH-, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat. Yhdisteiden kuvataan olevan käyttökelpoisia aldoosireduk-20 taasi-inhibiittoreina estämään tai hoitamaan diabetes mellitukseen liittyviä komplikaatioita.

Tämän keksinnön mukaan saadut yhdisteet ovat kemialliselta rakenteeltaan selvästi yllä olevan EP-patenttijulkaisun 25 yhdisteistä eroavia, ts., kuten tässä alla esitetystä kaavasta (I) ilmenee, keksinnön kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on perusytimenä pyrrolo[l,2 a]pyratsiinirengas, joka on selvästi erilainen kuin yllä mainitun EP-patenttijulkaisun perusydin.

30

Diabetespotilaita on hoidettu symptomaattisesti insuliinilla tai oraalisilla hypoglykeemisillä aineilla. Mikään näistä hoidoista ei kuitenkaan pysty palauttamaan täysin normaalia glykeemistä tilaa, ja diabetesin pitkällä aika-35 välillä kehittyy pitkäaikaiseen hyperglykemiaan liittyviä komplikaatioita, kuten harmaakaihia, verkkokalvosairautta, sarveiskalvosairautta, hermosairautta ja munuaissairautta.

3 98066

Sen vuoksi diabetesin komplikaatioiden alkamisen ja etenemisen estäminen on tulossa nykyajan yhdeksi tärkeimmäksi kohteeksi diabetes mellituksen hoidossa.

5 Polyolimetaboliareitin epänormaalisuuden oletetaan olevan tavallinen biokemiallinen yhteys erilaisten diabetes-komplikaatioiden patogeneesiin. Aldoosireduktaasi, polyolirei-tin avainentsyymi, katalysoi glukoosin konversiota sorbitoliksi. Glukoosin sisäänvirtaus diabeettisten komplikaatio!-10 den kohdekudoksiin (esimerkiksi verisuonet, ääreishermot, linssit ja munuaiset) on suurempi diabeetikoilla verrattuna sisäänvirtaukseen normaaleissa kudoksissa. Glukoosin kasvu aktivoi aldoosireduktaasia ja kiihdyttää siten sorbitolin muodostumista, mistä on seurauksena sorbitolin kerääntymi-15 nen näihin kudoksiin. Sorbitolin solunsisäisen kertymisen ajatellaan tuottavan hyperosmoottisen vaikutuksen, josta on tuloksena nesteen kertyminen, mikä puolestaan aiheuttaa soluvauriota ja aiheuttaa diabeettisten komplikaatioiden patogeneesiä [P.F. Kador et ai., Ann. Rev. Pharmacol.

20 Toxicol. 25. (1985) 691-714]. Niinpä ajatellaan, että yhdiste, jolla on aldoosireduktaasia inhiboivaa aktiivisuutta, on tehokas diabeettisten komplikaatioiden estoon ja hoitoon, ja useat tutkijat maailmassa ovat tutkineet erilaisia yhdistetyyppejä uuden aldoosireduktaasia inhiboivan aineen 25 kehittämiseksi. Tähän asti vain kaksi aldoosireduktaasia inhiboivaa ainetta, N-[[6-metoksi-5-(trifluorimetyyli)-1-naftalenyyli]tioksometyyli]-N-metyyliglysiini [yleisnimi: tolrestaatti, vertaa Merck Index, 11. painos, 9451 (1989)] ja (E,E)-5-(2-metyyli-3-fenyyli-2-propenylideeni)-4-okso-2-30 tiokso-3-tiatsolidiinietikkahappo [yleisnimi: epalrestaat-ti, vertaa Merck Index, 11. painos, 3556 (1989)] on saatavissa kaupallisesti joissain maissa. Näillä yhdisteillä ei kuitenkaan välttämättä ole riittävää aktiivisuutta [vertaa tämän jälkeen kuvatut kokeet, ja N. Simard-Duquesne, et.

35 ai., Metab. Clin. Exp. 34. (1985) 885-892]. Siten on etsitty uutta yhdistettä, jolla on voimakkaampi aldoosireduktaasia inhiboiva aktiivisuus vähäisemmällä toksisuudella.

4 98066 Tämän keksinnön keksijät ovat tutkineet intensiivisesti löytääkseen halutun uuden yhdisteen, jolla on ylivoimainen aldoosireduktaasia inhiboiva aktiivisuus vähäisemmällä toksisuudella, ja ovat tuloksena keksineet, että joillain 5 yhdisteillä, joissa on tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini- 4-spiro-3'-pyrrolidiiniydin, on halutut ominaisuudet.

Siten keksinnön kohteena on aikaansaada uusia tetrahydro-pyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiinijohdannai-10 siä, joilla on erinomainen aldoosireduktaasia inhiboiva aktiivisuus.

Keksinnön mukaiset tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiinijohdannaiset ovat kaavan (I) mukaisia 15 yhdisteitä: 7V-N^An J,2

20 R 5 ><c O M

4'\v 0 s^-NH O 1’ jossa 25 R1 on 4-asemassa ja on vety, halogeeni, trifluorimetyyli, alkyyli, 1-3 hiiliatominen alkyyli, 1-3 hiiliatominen alkoksi tai nitro, R2 on 2- tai 3-asemassa ja on vety, halogeeni tai 1-3 hiiliatominen alkoksi, ja 30 R3 on vety tai halogeeni.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja ovat mm. suolat epäorgaanisten emästen kanssa (esimerkiksi natrium-, kalium- ja ammonium-) ja suolat 35 orgaanisten emästen kanssa (esimerkiksi isopropyyliamiini, dietyyliamiini, etanoliamiini, trietanoliamiini, piperidii-ni ja lysiini).

5 98066

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet ja niiden suolat voivat olla hydraatin tai solvaatin muodossa, ja nämä hydraatit ja solvaatit kuuluvat myös keksintöön.

5 Sitä paitsi kaavan (I) mukaiset yhdisteet sisältävät ainakin yhden asymmetrisen hiiliatomin, ts., spiro-hiiliatomin pyrrolidiinirenkaan 3'-asemassa, ja siten voi esiintyä erilaisia stereoisomeerejä. Nämä stereoisomeerit ja niiden seokset ja raseemiset yhdisteet kuuluvat myös keksintöön.

10 Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden tapauksessa, jossa R1, R2 ja R3 ovat kaikki ryhmiä, jotka eivät sisällä asymmetristä hiiliatomia, yhdellä enantiomeerillä on voimakkaampi aldoo-sireduktaasia inhiboiva aktiivisuus kuin toisella enantiomeerillä.

15

Kautta selityksen ja patenttivaatimukset "halogeeni" merkitsee fluoria, klooria, bromia ja jodia. "Alkyyli" on metyyli, etyyli, propyyli tai isopropyyli.

20 "Alkoksi" on metoksi, etoksi, propoksi tai isopropoksi.

Ryhmä, jolla on kaava: _ o1 —cHo—\ y 25 κ \_i_/ R2 on esimerkiksi bentsyyli, 2-bromibentsyyli, 2-klooribent-syyli, 2-fluoribentsyyli, 3-bromibentsyyli, 3-klooribent- 30 syyli, 3-fluoribentsyyli, 4-bromibentsyyli, 4-klooribent-syyli, 4-fluoribentsyyli, 4-jodibentsyyli, 4-bromi-3-kloo-ribentsyyli, 4-bromi-2-fluoribentsyyli, 4-kloori-2-fluori-bentsyyli, 2,4-diklooribentsyyli, 3,4-diklooribentsyyli, 3,5-diklooribentsyyli, 2,4-dibromibentsyyli, 3,4-dibromi- 35 bentsyyli, 3,5-dibromibentsyyli, 2,4-difluoribentsyyli, 2-fluori-4-jodibentsyyli, 4-trifluorimetyylibentsyyli, 6 98066 4-metyylibentsyyli, 4-metoksibentsyyli, 3,4-dimetoksibent-syyli, 2,4-dimetoksibentsyyli ja 4-nitrobentsyyli.

Edullisia yhdisteitä ovat kaavan (I) mukaiset yhdisteet, 5 jossa R1 on vety tai halogeeni, R2 on halogeeni ja R3 on vety.

Edullisia kaavan (I) mukaisten yhdisteiden stereoisomeerejä ovat niiden raseemiset yhdisteet ja enantiomeerit, joilla 10 on voimakkaampi aldoosireduktaasia inhiboiva aktiivisuus muihin enantiomeereihin verrattuna.

Erityisiä esimerkkejä erityisen edullisista yhdisteistä ovat seuraavat yhdisteet ja niiden enantiomeerit, joilla 15 on muihin enantiomeereihin verrattuna voimakkaampi aldoosireduktaasia inhiboiva aktiivisuus: 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetroni, 20 2-(3,4-diklooribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]-pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini] -1,2',3,5'-tetroni, 2-(4-bromibentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyrat-25 siini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetroni, ja 2-(4-kloori-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetroni.

30 Edullisin yhdiste on kaavan (I') mukainen yhdiste:

F

35 ><^o \ / 0 o 98066 7

Erityisiä esimerkkejä mainituista edullisimmista yhdisteistä ovat seuraavat: 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-5 [1,2 -a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetroni, ja 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetronin 10 enantiomeeri, jolla on seuraava ominaiskierto: [a]”'5 = +1,96° (c = 1,02, etyyliasetaatti); [a] = -7,6° (c = 1,02, meta- noli) ; ja [a] 405 = -33,0° (c = 1,02, metanoli) .

Seuraavat yhdisteet ja niiden enantiomeerit luetellaan myös 15 esimerkkeinä kaavan (I) mukaisista yhdisteistä, samoin kuin työesimerkkien yhdisteet, jotka esitetään tämän jälkeen.

2-(2-fluori-4-jodibentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetroni, 20 2-(4-bromi-3-klooribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'- tetroni, 25 2-(2,4-dibromibentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]- pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetroni, 2-(3,4-dibromibentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]-pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetroni, 30

Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa esimerkiksi seuraavilla menetelmillä.

Menetelmä (a):

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa saattamalla kaavan (II) mukaisen yhdisteen: 35 8 98066 r3\«s^COCX3 V-N COOR4 (>Vo 1111

)-NH

0 jossa R3 on edellä määritelty ja R4 on karboksisuojaryhmä, ja X on halogeeni, reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdis-10 teen kanssa: /^r1 h2n—ch2—^ y (iii) 15 R2 jossa R1 ja R2 ovat edellä määritellyt.

"Karboksisuojaryhmä" R4:ää varten yllä olevan kaavan (II) 20 mukaisessa yhdisteessä tarkoittaa kaikkia tavanomaisia suojaryhmiä, jotka voidaan poistaa helposti tavanomaisella tavalla kuten hydrolyysillä ja hydrogenolyysillä, joita tapoja tavallisesti käytetään peptidisynteesin alalla. Sopivia esimerkkejä hydrolyysillä poistettavista suojaryh-25 mistä ovat alemmat alkyyliryhmät kuten metyyli, etyyli ja propyyli, ja sopivia esimerkkejä hydrogenolyysillä poistettavista suojaryhmistä ovat bentsyyli, 4-metoksibentsyyli ja 4-nitrobentsyyli. Hydrogenolyysiin luetaan mukaan erilaiset tavat kuten katalyyttinen pelkistys ja katalyyttinen vaih-30 tohydrogenolyysi.

Kaavan (II) mukaisen yhdisteen ja kaavan (III) mukaisen yhdisteen reaktio suoritetaan tavallisesti liuottimessa, joka ei vaikuta reaktioon haitallisesti. Sopiva liuotin 35 voidaan valita esimerkiksi lähtöaineyhdisteiden tyypin mukaan, ja niitä ovat esimerkiksi aromaattiset hiilivedyt kuten bentseeni ja tolueeni; halogenoidut hiilivedyt kuten 9 98066 dikloorimetaani ja kloroformi; eetterit kuten tetrahydrofu-raani ja dioksaani; ja dimetyyliformamidi. Näitä liuottimia voidaan käyttää yksinään tai kahden tai useamman näistä yhdistelmänä. Yllä oleva reaktio suoritetaan edullisesti 5 emäksisen aineen läsnä ollessa, joihin luetaan mukaan esimerkiksi orgaaniset emäkset kuten trietyyliamiini, tributyyliamiini, di-isopropyylietyyliamiini, N-metyylimor-foliini, pyridiini ja Ν,Ν-dimetyylianiliini; ja epäorgaaniset emäkset kuten alkalimetallikarbonaatit (esimerkiksi 10 natriumkarbonaatti ja kaliumkarbonaatti), tai alkalimetal-livetykarbonaatit (esimerkiksi natriumvetykarbonaatti ja kaliumvetykarbonaatti). Vaihtoehtoisesti erityisen emäksisen aineen sijasta voidaan käyttää ylimäärää kaavan (III) mukaista yhdistettä. Reaktiolämpötila voi vaihdella riip-15 puen esimerkiksi lähtöaineyhdisteiden tyypeistä, mutta se on tavallisesti alueella noin 0 - noin 100°C, edullisesti alueella noin 25 - noin 70°C. Kaavan (III) mukaista yhdistettä voidaan myös käyttää happoadditiosuolan muodossa, joka muutetaan vapaaksi emäkseksi reaktiojärjestelmässä.

20

Jotkin kaavan (III) mukaisista yhdisteistä ovat kaupallisesti saatavia, ja muut voidaan valmistaa sinänsä tunnetulla menetelmällä. Kaavan (II) mukaiset yhdisteet ovat uusia ja voidaan valmistaa esimerkiksi seuraavassa reaktiokaavio-25 I:ssä esitetyllä menetelmällä.

10 98066

Reakt iokaavio-1 5 COOR4 + V-CH2COOR5 -► Vn^COOR4 I vaihe 1 f^COOR4 COOR4 COOR® (V) (VI) (VII) 10 d3 r3

R

--—► V-N^COOR4 -- VN COOR4 vaihe 2 fOOOR4 vaihe 3 f^COOR4 COOH CONH2 15 (VIII) (IX> r3x^ r3X^cocx3 _^ VN COOR4 ^ V-N COOR4 vaihe A Sy=o vaihe 5 Sj=0

20 NH —NH

O O

(X) 25 jossa R3, R4 ja X ovat edellä määritellyt, R5 on tert-bu- tyyli tai hydrogenolyysillä poistettava suojaryhmä, ja Y on halogeeni, sillä ehdolla, että kun R4 on hydrogenolyysillä poistettava suojaryhmä, R5 on tert-butyyli. 1

Kukin vaihe yllä olevassa Reaktiokaavio-I:ssä suoritetaan seuraavalla tavalla.

(Vaihe 1): 35 Kaavan (V) mukainen yhdiste voidaan valmistaa esimerkiksi menetelmällä, joka kuvataan julkaisussa J. Med. Chem. 21 (1978) 962-964.

11 98066

Kaavan (V) mukaisen yhdisteen ja kaavan (VI) mukaisen yhdisteen reaktio suoritetaan tavallisesti sopivassa liuot-timessa emäksisen aineen läsnä ollessa. Liuottimia ovat esimerkiksi sykloheksaani, bentseeni, tolueeni, ksyleeni, 5 tetrahydrofuraani, dioksaani, metanoli, etanoli, isopropyy-lialkoholi, pyridiini ja dimetyyliformamidi. Emäksinen aine on esimerkiksi alkalimetallit (esimerkiksi litium, natrium ja kalium), alkalimetallihydridit (esimerkiksi natriumhyd-ridi), alkalimetallihydroksidit (esimerkiksi natriumhydrok-10 sidi ja kaliumhydroksidi), alkalimetallikarbonaatit (esimerkiksi natriumkarbonaatti ja kaliumkarbonaatti), alkali-metallivetykarbonaatit (esimerkiksi natriumvetykarbonaatti ja kaliumvetykarbonaatti), ja alkalimetallialkoksidit (esimerkiksi natriummetoksidi, natriumetoksidi ja kalium-15 tertbutoksidi). Reaktio suoritetaan tavallisesti lämpötilassa noin -10 - noin 150°C.

(Vaihe 2): 20 "Hydrogenolyysillä poistettava suojaryhmä" ryhmälle R5 kaavassa (VII) tarkoittaa ryhmää, joka voidaan poistaa helposti katalyyttisellä pelkistyksellä tai katalyyttisellä vaihtohydrogenolyysillä, ja mukaan luetaan esimerkiksi bentsyyli, 4-nitrobentsyyli, ja 4-metoksibentsyyli.

25

Kaavan (VII) mukainen yhdiste, jossa R5 on tert-butyyli, voidaan muuttaa kaavan (VIII) mukaiseksi yhdisteeksi käsittelemällä trifluorietikkahapolla sopivassa liuottimessa kuten dikloorimetaani tai kloroformi. Reaktio suoritetaan 30 tavallisesti lämpötilassa noin 25 - noin 50°C.

Kaavan (VII) mukainen yhdiste, jossa R5 on hydrogenolyysillä poistettava suojaryhmä, voidaan muuttaa kaavan (VIII) mukaiseksi yhdisteeksi hydrogenoimalla katalysaattorin 35 kuten Raney-nikkelin tai Pd/C:n läsnä ollessa sopivassa liuottimessa, tai saattamalla vaihtoehtoisesti reagoimaan vedynlahjoittajan (esimerkiksi amrnoniumformiaatti tai 12 98066 syklohekseeni) kanssa katalysaattorin kuten Pd/C:n läsnä ollessa sopivassa liuottimessa. Liuotin on esimerkiksi vesi, metanoli, etanoli, etikkahappo, dioksaani ja tetra-hydrofuraani. Reaktio suoritetaan tavallisesti lämpötilassa 5 noin 25 - noin 80°C ilmakehän paineessa tai paineen alla.

(Vaihe 3):

Kaavan (VIII) mukainen yhdiste tai sen reaktiivinen johdan-10 nainen karboksyyliryhmässään saatetaan reagoimaan ammoniakin kanssa tavanomaisissa olosuhteissa, jotka soveltuvat amidointireaktioon, jolloin saadaan kaavan (IX) mukainen yhdiste.

15 Kaavan (VIII) mukaisen yhdisteen reaktiiviseen johdannaiseen karboksyyliryhmässä luetaan mukaan happokloridit ja aktiiviset esterit (esimerkiksi N-hydroksisukkinimidiesteri ja N-hydroksiftalimidiesteri). Kun käytetään itse kaavan (VIII) mukaista yhdistettä, reaktio suoritetaan tavallises-20 ti tavanomaisen kondensointireagenssin kuten disykloheksyy-likarbodi-imidin, l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)kar-bodi-imidihydrokloridin tai N,N'-karbonyylidi-imidatsolin läsnä ollessa. Reaktio suoritetaan tavallisesti sopivassa liuottimessa kuten bentseeni, tolueeni, dikloorimetaani, 25 kloroformi, tetrahydrofuraani, dioksaani, asetonitriili tai dimetyyliformamidi, lämpötilassa noin 0 - noin 150°C.

(Vaihe 4): 30 Yllä olevassa vaiheessa 3 saatu kaavan (IX) mukainen yhdiste alistetaan syklisointireaktiolle emäksisen aineen läsnä ollessa, jolloin saadaan kaavan (X) mukainen yhdiste. Reaktio voidaan suorittaa käyttämällä samaa emäksistä ainetta ja liuotinta kuin käytettiin tässä alla kuvatussa Menetel-35 mässä (b). Reaktio suoritetaan tavallisesti lämpötilassa noin -20 - noin 60°C.

13 98066 (Vaihe 5):

Yllä olevassa vaiheessa 4 saatu kaavan (X) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan trihalogeenietikkahalogenidin kanssa, 5 jolla on kaava: CX3COZ (jossa X on edellä määritelty, ja Z on halogeeni kuten kloori tai bromi) tai trihalogeenietik-ka-anhydridin kanssa, jolla on kaava: (CX3CO)20 (jossa X on edellä määritelty) sopivan liuottimen puuttuessa tai läsnä ollessa, jolloin saadaan kaavan (II) mukainen yhdiste.

10 Liuottimeen luetaan mukaan esimerkiksi dikloorimetaani, kloroformi, dietyylieetteri, tetrahydrofuraani ja dioksaa-ni. Reaktio voidaan suorittaa emäksisen aineen kuten orgaanisten emästen (esimerkiksi trietyyliamiini, pyridiini ja Ν,Ν-dimetyylianiliini), tai epäorgaanisten emästen (esimer-15 kiksi natriumkarbonaatti, kaliumkarbonaatti, natriumvety-karbonaatti ja kaliumvetykarbonaatti) läsnä ollessa. Reak-tiolämpötila on alueella noin 25 - noin 150°C.

Kun kaavan (II) mukaisessa yhdisteessä ja/tai kaavan (III) 20 mukaisessa yhdisteessä yllä olevassa Menetelmässä (a) on 1 tai 2 asymmetristä hiiliatomia, konfiguraatio asymmet-ris(t)en hiiliatomi(e)n suhteen säilyy kaavan (I) mukaisessa lopputuotteessa. Ts. kaavan (II) mukaisesta yhdisteestä ja kaavan (III) mukaisesta yhdisteestä raseemisen yhdisteen 25 muodossa saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste raseemisen yhdisteen muodossa.

Kaavan (II) mukaisten yhdisteiden enantiomeerit, jossa R3 on vety, voidaan valmistaa esimerkiksi erottamalla seuraa-30 vassa Reaktiokaavio-II:ssa vaiheessa 3 saatu kaavan (XV) mukainen tuote kahdenlaisiksi enantiomeereiksi, muuttamalla kummankin enantiomeerin kaavan (X') mukaiseksi yhdisteeksi vaiheessa 4, minkä jälkeen seuraa alistaminen reaktiolle kuten vaiheessa 5 yllä olevassa Reaktiokaavio-I:ssä. Kaavan 35 (XV) mukaisen yhdisteen resoluutio kummaksikin enantiomee-riksi voidaan suorittaa esimerkiksi muodostamalla näiden diastereomeerisiä suoloja optisesti aktiivisen hapon kanssa 14 98066 tavanomaisella menetelmällä, erottamalla kahdenlaisiksi diastereomeerisuoloiksi ja muuttamalla sitten kummankin diastereomeerisuolan vastaavaksi vapaaksi emäkseksi. Yllä olevassa resoluutiossa käytetty optisesti aktiivinen happo 5 on esimerkiksi ( + )-kamferihappo, (IS) -{ + )- tai (lR)-(-)-kamferisulfonihappo, L-(+)- tai D-(-)-viinihappo, L- tai D-pyroglutamiinihappo, (S)-(-)- tai (R)-(+)-omenahappo, (S)-(+)- tai (R)-(-)-1,1'-binaftyyli-2,2'-diyylivetyfos-faatti, (-)- tai (+)-2'-nitrotartraniilihappo, D-(+)-tart-10 raniilihappo, (-)-dibentsoyyli-L-viinihappo, (+)-dibentso-yyli-D-viinihappo, ja (-)-diasetyyli-L-viinihappo.

Reaktiokaavio-II

15 F^HN^ .COOR4 , R6HN COOR4 T + Y-CH2COOR7 -- CN vaihe 1 COOR7 (XI) (XII) (XIII) 20 R6HN COOR4 H2N COOR4 —-- -- (*>0 vaihe 2 ft— NH vaihe 3 Λ-ΝΗ

O O

25 (XIV) (XV)

On ^ coor4 30 vaihe 4

O

(X’ ) jossa R4 ja Y on edellä määritelty, R6 on bentsyylioksikar-35 bonyyli tai tert-butoksikarbonyyli, ja R7 on karboksisuoja-ryhmä, sillä ehdolla, että kun R6 on bentsyylioksikarbonyy-li, R4 on hydrolyysillä poistettava suojaryhmä.

15 98066

Kukin vaihe yllä olevassa Reaktiokaavio-ll:ssa suoritetaan seuraavalla tavalla.

(Vaihe 1): 5

Kaavan (XI) mukainen yhdiste voidaan valmistaa lisäämällä suojaryhmä 2-amino-2-syaanietikkahappoesterin aminoryhmään tavanomaisella menetelmällä, jolloin mainittu 2-amino-2-syaanietikkahappoesteri valmistetaan menetelmällä, joka 10 kuvataan julkaisussa Chem. Ind. (Lontoo), 1980. 541-542.

Kaavan (XI) mukaisen yhdisteen ja kaavan (XII) mukaisen yhdisteen reaktio suoritetaan samalla tavalla kuin kuvataan Reaktiokaavio-I:ssä vaiheessa 1.

15 (Vaihe 2) :

Kaavan (XIII) mukaisen yhdisteen muuttaminen kaavan (XIV) mukaiseksi yhdisteeksi voidaan suorittaa tunnetulla mene-20 telmällä, jota tavallisesti käytetään nitriilin hydrolysoi-miseen amidiksi, esimerkiksi menetelmällä, joka kuvataan julkaisussa Synthesis 1980. 243-244.

(Vaihe 3): 25

Kaavan (XIV) mukaisen yhdisteen muuttaminen kaavan (XV) mukaiseksi yhdisteeksi voidaan suorittaa samalla tavalla kuin kuvattiin vaiheessa 2 Reaktiokaavio-I:ssä.

30 (Vaihe 4):

Kaavan (XV) mukaisen yhdisteen muuttaminen kaavan (X') mukaiseksi yhdisteeksi voidaan suorittaa tunnetulla menetelmällä, esimerkiksi menetelmällä, joka kuvataan julkai-35 sussa J. Med. Chem. 21 (1978) 962-964.

16 98066

Menetelmä (b):

Keksinnön kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan myös valmistaa syklisoimalla kaavan (IV) mukaisen yhdisteen: ^NX^O R2 (IV)

f COOR^I

10 · conh2 jossa R1, R2 ja R3 ovat edellä määritellyt ja R41 on karboksisuo-jaryhmä tai optisesti aktiivisen alkoholin alkyylitähde, sillä ehdolla, että kun R41 on optisesti aktiivisen alkoho-15 Iin alkyylitähde, konfiguraatio hiiliatomissa tetrahydro-pyrrolo[1,2-a]-pyratsiinirenkaan 4-asemassa on S tai R. Syklisointi voidaan suorittaa emäksisen aineen läsnä ollessa.

20 Optisesti aktiivisen alkoholin alkyylitähde R41:tä varten yllä olevassa kaavassa (IV) tarkoittaa ryhmää, joka on johdettu 1 tai useita asymmetrisiä hiiliatomeja sisältävästä optisesti aktiivisesta alkoholista poistamalla siitä hydroksiryhmän, ja mukaan luetaan esimerkiksi (-)- tai 25 (+)-mentyyli, (-)- tai (+)-1-fenyletyyli, (-)- tai (+)-2- butyy1i ja (-)-bornyy1i.

Syklisointi reaktio suoritetaan tavallisesti sopivassa liuottimessa. Sopivia esimerkkejä liuottimesta ovat aro-30 maattiset hiilivedyt kuten bentseeni ja tolueeni; eetterit kuten dietyylieetteri, tetrahydrofuraani ja dioksaani; ja dimetyyliformamidi. Tässä käytettyjä emäksisiä aineita ovat esimerkiksi alkalimetallit (esimerkiksi litium, natrium ja kalium), maa-alkalimetallit (esimerkiksi kalsium), alkali-35 metallihydridit (esimerkiksi natriumhydridi) , maa-alkalime-tallihydridit (esimerkiksi kalsiumhydridi), alkalimetalli-hydroksidit (esimerkiksi natriumhydroksidi ja kaliumhydrok- -a «il anti .>·«* * 17 98066 sidi), alkalimetallikarbonaatit (esimerkiksi natriumkarbonaatti ja kaliumkarbonaatti), alkalimetallivetykarbonaa-tit (esimerkiksi natriumvetykarbonaatti ja kaliumvetykar-bonaatti), ja alkalimetallialkoksidit (esimerkiksi natrium-5 metoksidi, natriumetoksidi, ja kaliumtertbutoksidi), orgaaniset litiumyhdisteet (esimerkiksi litiumbis(trimetyylisil-yyli)amidi, litiumdi-isopropyyliamidi ja n-butyylilitium), orgaaniset happosuolat (esimerkiksi natriumasetaatti), ja orgaaniset emäkset (esimerkiksi trietyyliamiini, pyridiini, 10 lutidiini ja 1,8-diatsabisyklo[5.4.0]undekaani). Reaktio suoritetaan tavallisesti lämpötilassa noin -78 - noin 25°C, edullisesti noin -78 - noin -20°C.

Kaavan (IV) mukaiset yhdisteet, jossa R41 on sama kuin R4, 15 ts. karboksisuojaryhmä, ovat uusia yhdisteitä ja voidaan valmistaa esimerkiksi menetelmällä, joka esitetään seuraa-vassa reaktiokaavio-III:ssa.

Reaktiokaavio-III

20 2 R%^COCX3 Yhdiste (III) V-N COOR4 TTV* κι roon4 ** ^ vaihe 1 ^ N COOR vaihe 2 C00R4 COOR4 (v) (XVI) 25

° R1 O

Yhdiste (VI) MR

Yl A -- «n Y ]| ή -- \,2 vaihe 3 Ν'^ςϊϊ'θ vaihe 4 3 0 COOR4 fcOOR4 B2 (XVII) COOR5 (XVIII) 35 ™ihe5 i coor4 r Λχχμ« R2 C00H conh2 (XIX> (IV) 5 18 98066 jossa R1, R2, R3, R4 ja R5 ovat edellä määritellyt, sillä ehdolla, että kun R4 on suojaryhmä, joka on poistettavissa hydro-genolyysillä, R5 on tert-butyyli.

Kukin vaihe yllä olevassa Reaktiokaavio-III:ssa suoritetaan seuraavalla tavalla.

(Vaihe 1): 10 Tämä vaihe voidaan suorittaa samalla tavalla kuin kuvattiin vaiheessa 5 Reaktiokaavio-I:ssä.

(Vaihe 2) : 15 Tämä vaihe voidaan suorittaa samalla tavalla kuin kuvattiin yllä olevassa Menetelmä (a):ssa, edullisesti inertissä ilmakehässä.

20 (Vaihe 3):

Kaavan (XVII) mukainen yhdiste ja kaavan (VI) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan samalla tavalla kuin kuvataan vaiheessa 1 Reaktiokaavio-I:ssä, jolloin saadaan kaavan 25 (XVIII) mukainen yhdiste. Reaktio suoritetaan edullisesti inertissä ilmakehässä.

(Vaihe 4): 30 Kaavan (XVIII) mukainen yhdiste voidaan muuttaa kaavan (XIX) mukaiseksi yhdisteeksi samalla tavalla kuin kuvataan vaiheessa 2 Reaktiokaavio-I:ssä.

(Vaihe 5):

Kaavan (XIX) mukainen yhdiste tai sen .reaktiivinen johdannainen karboksyyliryhmässä saatetaan reagoimaan ammoniakin 35 » i HUK l ‘ ·<*» 19 98066 kanssa samalla tavalla kuin kuvattiin vaiheessa 3 Reaktio-kaavio- I:ssä, jolloin saadaan kaavan (IV') mukainen yhdiste .

5 Kaavan (IV) mukaiset yhdisteet, jossa R41 on optisesti aktiivisen alkoholin kanssa, ovat uusia yhdisteitä ja voidaan valmistaa esimerkiksi menetelmällä, joka esitetään seuraavassa Reaktiokaavio-IV:ssä.

10 Reaktiokaavio-IV

p3 r3 R R Nfssj ^N^XOOR4 + R8OH -- Vnv COOR4 I . vaihe 1 I a COOR4 COOR8

15 (V) (VM

VrCH^R

——— r2 2 0 3 Vaihetta j COOR8 COOR5

(xviiiM

Diastereomeerien erotus 25 O r—Λ r1 O r -y R1 r2 r2 f "COOR8 f" COOR8 3 0 COOR5 COOR5 (XVIII1 a) (XVIII’b) | 2 vaihetta j 2 vaihetta 35 b3x^n-ch3^r R3x^VcH2-cy’ | COOR8 f COOR8 conh2 conh2 (iVa) (IV1 b) 20 98066 jossa R1, R2, R3, R4 ja R5 ovat edellä määritellyt, ja R8 on optisesti aktiivisen alkoholin alkyylitähde.

Kukin vaihe yllä olevassa Reaktiokaavio-IV:ssa suoritetaan 5 seuraavalla tavalla.

(Vaihe 1):

Kaavan (V) mukaisen yhdisteen ja kaavan R8OH mukaisen yh-10 disteen reaktio (jossa R8 on edellä määritelty) suoritetaan tavallisesti katalysaattorin läsnä ollessa. Katalysaattori on mm. esterinvaihtoreaktiossa tavallisesti käytetty, esimerkiksi rikkihappo, bentseenisulfonihappo, p-tolueenisul-fonihappo, natrium, kalium, natriummetoksidi, ja tetraetyy-15 lititanaatti. Reaktio suoritetaan tavallisesti lämpötilassa noin 25 - noin 200°C, edullisesti 100 - noin 200°C.

[Kaavan (V') mukaisen yhdisteen muuttaminen kaavan (XVIII') mukaiseksi yhdisteeksi] : 20

Muuttaminen voidaan suorittaa samalla tavalla kuin kuvattiin vaiheissa 1-3 Reaktiokaavio-III:ssa.

[Kaavan (XVIII') mukaisen yhdisteen erotus kummaksikin 25 diastereomeeriksi]:

Kaavan (XVIII') mukainen yhdiste saadaan edellä olevassa vaiheessa kahden diastereomeerityypin seoksena. Tämä yhdiste voidaan erottaa kahdeksi diastereomeerien tyypiksi, ts.

30 kaavan (XVIII'a) mukaiseksi yhdisteeksi ja kaavan (XVIll'b) mukaiseksi yhdisteeksi tavanomaisilla menetelmillä, kuten jaekiteytys ja pylväskromatografia.

[Kaavan (IV'a) mukaisen yhdisteen ja kaavan (IV'b) mukaisen 35 yhdisteen valmistaminen]: 21 98066

Kaavan (XVIII'a) mukaisen yhdisteen ja kaavan (XVIII'b) mukaisen yhdisteen muuttaminen kaavan (IV'a) mukaiseksi yhdisteeksi ja kaavan (IV'b) mukaiseksi yhdisteeksi, vastaavasti, voidaan suorittaa samalla tavalla kuin kuvataan 5 vaiheissa 4 ja 5 Reaktiokaavio-III:ssa.

Yllä olevilla menetelmillä tuotetut tuotteet voidaan eristää ja puhdistaa tavanomaisilla menetelmillä, kuten kroma-tografialla, uudelleenkiteytyksellä tai uudelleensaostuk-10 sella.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet, jossa R3 on vety, voidaan muuttaa vastaaviksi yhdisteiksi, jossa R3 on halogeeni, saattamalla reagoimaan halogenointireagenssin kuten halo-15 geenin (esimerkiksi kloori tai bromi) tai sulfuryyliklori-din kanssa. Reaktio suoritetaan edullisesti sopivassa liuottimessa kuten rikkihiili, dikloorimetaani, kloroformi, 1,2-dikloorietaani tai dimetyyliformamidi, lämpötilassa noin -20 - noin 100°C. Reaktio voidaan myös suorittaa alu-20 miniumkloridin läsnä ollessa.

Kun kaavan (II) mukaista yhdistettä, jossa R3 on halogeeni, ja joka valmistetaan halogenoimalla kaavan (II) mukaista yhdistettä jossa R3 on vety, käytetään lähtöaineyhdisteenä 25 Menetelmässä (a), voidaan halogeeni lisätä eri asemaan kuin tuotteessa, joka saadaan halogenoimalla yllä mainittua kaavan (I) mukaista yhdistettä, jossa R3 on vety. Kaavan (II) mukainen yhdiste, jossa R3 on vety, voidaan halogenoi-da tavanomaisella tavalla kuten esitetään vertailuesimer-30 keissä 22 ja 23 tässä alla.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa suoloikseen käsittelemällä tavalliseen tapaan epäorgaanisilla tai orgaanilla emäksillä. Sopivia esimerkkejä epäorgaanisista 35 ja orgaanisista emäksistä ovat alkalimetallihydroksidit, -karbonaatit tai -vetykarbonaatit (esimerkiksi natrium- tai kalium-), ammoniumhydroksidi, isopropyyliamiini, dietyyli- 22 98066 amiini, etanoliamiini, piperidiini ja lysiini. Tämä reaktio suoritetaan tavallisesti lämpötilassa noin 0 - noin 25°C sopivassa liuottimessa. Liuottimia ovat esimerkiksi alemmat alkoholit (esimerkiksi metanoli, etanoli, ja isopropyylial-5 koholi), etyyliasetaatti, asetonitriili, dioksaani, ja tolueeni, tai näiden seos.

Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden farmakologiset aktiivisuudet kuvataan seuraavilla kokeilla, jotka suoritettiin 10 keksinnön mukaisilla edustavilla yhdisteillä.

Seuraavia yhdisteitä käytettiin vertailuyhdisteenä:

Epalrestaatti: aldoosireduktaasi-inhibiittori, joka on 15 kaupallisesti saatavissa Japanissa, ja (+-)-Sorbiniili: aldoosireduktaasi-inhibiittori, jonka kemiallinen nimi on 6-fluori-2,3-dihydrospiro[4H-l-bentso-pyraani-4,4'-imidatsolidiini]-2',5'-dioni [vertaa Merck 20 Index, 11. painos, 8679 (1989)].

Testi 1 Aldoosireduktaasia inhiboiva aktiivisuus (in vitro) : 25 Tämä testi suoritettiin menetelmällä, jonka on kuvannut S. Hayman ja J.H. Kinoshita [J. Biol. Chem. 240 (1965) 877-882] .

Raakaentsyymiliuoksen valmistus 30

Linssejä, jotka eristettiin sian silmistä (Tokyo Sibaura Zouki Co., Ltd., Japani), homogenisoitiin 5 mM fosfaatti-puskurilla (pH 7,4), joka sisälsi 2 mM merkaptoetanolia, ja sentrifugoitiin 10 min ajan nopeudella 10200 g. Seuraavaksi 35 supernatantti saostettiin vaiheittain ammoniumsulfaatilla 30-%, 40-% ja 60-% saturaatiolla. Sakka 60-% saturaatiolla liuotettiin homogenisointipuskuriin ja käytettiin raakaent- 23 98066 syymivalmisteena. Entsyymiaktiivisuuden yksikkö määriteltiin entsyymin määräksi, joka hapetti 1 μιηοΐ NADPH/min seuraavissa määritysolosuhteissa.

5 Entsvvmimääritvs

Vakioreaktioseos käsitti 100 mM fosfaattipuskuria (pH 6,5), 0,2 mM NÄDPH, 1,5 mM D,L-glyseraldehydiä, 0,4 M litiumsul-faattia, entsyymiliuosta (7,0 mU/ml), ja testiyhdisteitä 10 eri konsentraatioissa. Reaktioseosta inkuboitiin 37°C:ssa, ja absorbanssin alenemista 340 nmrllä tarkkailtiin spektro-fotometrillä (Hitachi 150-20). Entsyymiaktiivisuus laskettiin perustuen absorbanssin alenemisnopeuteen 1 min aikana alkaen kohdalla 1 min entsyymireaktion alkamisen jälkeen.

15 Logaritmisen konsentraatio/vaste-käyrän kaavioista arvioitiin yhdisteiden konsentraatio, joka vaaditaan entsyymiaktiivisuuden 50-% inhibitioon (IC50) . Tulokset esitetään taulukossa 1.

20 Taulukko 1 Aldoosireduktaasia inhiboiva aktiivisuus

Testi- IC50 (μΜ) Testi- IC50 (μΜ) yhdiste_yhdiste_ 1* 0,050 13 0,11 25 2 0,033 15 0,11 3 0,099 16 0,041 4 0,061 17 0,052 5 0,031 18 0,037 6 0,12 19 0,050 30 7 0,033 20 0,10 8 0,047 22 0,039 9 0,080 24 0,023 10 0,072 26 0,040 11 0,052 27 0,035 35 12 0,046

Epalrestaatti 0,073 (±)-Sorbiniili 3,8 24 98066 *) Testiyhdisteiden numerot viittaavat esimerkkien numeroihin, ja esimerkiksi testiyhdiste 1 on esimerkissä 1 saatu yhdiste. Kaikki testiyhdisteet yllä olevassa taulukossa ja myös toinen taulukko tässä alla ilmaistaan samalla lailla.

5

Kuten taulukossa 1 esitetään, tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden aldoosireduktaasia inhiboiva aktiivisuus oli huomattavasti voimakkaampi kuin (±)-sorbiniilin, ja useimmat niistä olivat yhtä tehokkaita tai tehokkaampia kuin 10 epalrestaatti.

Testi 2 Sorbitolin kertymistä inhiboiva aktiivisuus (in vivo) : 15 Käytettiin koiraspuolisia Wistar-rottia (200 - 250 g) kulloinkin 4 eläimen ryhmissä. Rotat tehtiin diabeettisiksi yhdellä ainoalla i.v.-injektiolla streptotsotosiinia (40 mg/kg), joka oli juuri liuotettu fysiologiseen suolaliuokseen.

20

Yhden viikon kuluttua diabetesin indusoimisesta rotille annettiin oraalisesti testiyhdisteitä, suspendoituina 0,5-% traganttiliuokseen, kerran päivässä 5 päivän ajan. Rotista eristettiin lonkkahermot 4 tuntia viimeisen annon jälkeen, 25 ja kudoksista määritettiin sorbitolipitoisuus entsymaatti-sella fluorospektrofotometrisellä menetelmällä, jonka on kuvannut R.S. Clement et ai. [Science 166 (1969) 1007-1008] , käyttäen sorbitolidehydrogenaasia lampaan maksasta entsyymivalmisteena. Testiyhdisteiden aktiivisuus ilmoitet-30 tiin prosentuaalisena sorbitolinkertymisen estona määrätyillä annoksilla, laskettuna seuraavan kaavan mukaisesti.

Esto-% = (S - T)/(S - N) x 100 35 S: Sorbitolipitoisuus lonkkahermossa diabeettisessa kontrollissa 25 98066 T: Sorbitolipitoisuus lonkkahermossa diabeettisista rotista, jotka saivat testiyhdisteitä N: Sorbitolipitoisuus lonkkahermosta normaaleista rotista.

5

Tulokset esitetään taulukossa 2.

Taulukko 2 Sorbitolin kertymistä estävä aktiivisuus 10 Testivhdiste_Annos (mq/kq/päivä)_Esto (%) 1 30 114,6 1.0 104,7 2 30 97,1 15 3,0 30,5 3 30 69,1 4 10 73,5 20 1,0 47,2 5 30 99,4 3.0 44,2 25 6 30 55,8 7 30 104,6 3.0 69,7 30 8 3,0 104,7 10 30 98,0 3.0 33,3 35 11 30 65,8 15 30 102,2 3.0 7,4 40 16 1,0 61,0 22 1,0 107,3 0,3 77,6 1 24 30 111,8 _LcJ_70,9

Epalrestaatti 200 5,7 50 (+)-sorbiniili 30 106,9 3.0 60,7 26 98066

Kuten taulukossa 2 esitetään, tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä oli huomattavasti voimakkaampi sorbitolin kertymisen estävä aktiivisuus kuin epalrestaatilla. Esimerkkien 1, 4, 5, 7, 8, 16, 22 ja 24 yhdisteet olivat yhtä 5 tehokkaita tai tehokkaampia kuin (±)-sorbiniili. Lisäksi esimerkkien 1 (21) ja 22 yhdisteiden vaikutus oli pitkäkestoinen .

Testi 3 Akuutti toksisuus: 10 Käytettiin koiraspuolisia ddY-hiiriä (18 - 25 g) kulloinkin 5 eläimen ryhmissä. Eläimille annettiin oraalisesti annoksella 1 g/kg esimerkkien l (21) ja 22 yhdisteitä 0,5-% traganttilluokseen suspendoituina. Kuolleisuutta tarkkail-15 tiin 7 päivän ajan annon jälkeen. Yksikään hiiristä ei kuollut tämän ajanjakson aikana.

Kuten yllä olevista kokeellisista tuloksista ilmenee, kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on erinomainen aldoosire-20 duktaasia inhiboiva aktiivisuus vähäisemmällä toksisuudella, ja siten ne ovat käyttökelpoisia aineina diabeettisten komplikaatioiden hoitamiseen. Niitä voidaan myös käyttää estämään ja hoitamaan erilaisia komplikaatioita, jotka liittyvät diabetes mellitukseen nisäkkäissä mukaan lukien 25 ihmisen, kuten harmaakaihia, verkkokalvosairautta, sar-veiskalvosairautta, hermosairautta tai munuaissairautta.

Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan antaa mitä hyvänsä reittiä, kuten oraalista reittiä, parenteraalista reittiä, 30 intrarektaalista reittiä, tai paikallisesti, mutta edullisesti oraalista reittiä. Keksinnön mukaisten yhdisteiden kliininen annos voi vaihdella esimerkiksi yhdisteiden tyyppien, antoreittien, sairauksien vakavuuden ja potilaiden iän mukaan, mutta se on tavallisesti ihmisellä alueella 35 0,01 - 20 mg/kg/päivä, edullisesti 0,05 - 10 mg/kg/päivä.

27 98066

Tavallisesti keksinnön mukaiset yhdisteet annetaan potilaille farmaseuttisen koostumuksen muodossa, joka sisältää ei-toksisen ja tehokkaan määrän yhdisteitä. Tavallisesti farmaseuttinen koostumus valmistetaan sekoittamalla aktii-5 viset yhdisteet tavanomaisten farmaseuttisesti hyväksyttävien väliaineiden tai laimennusaineiden kanssa, jotka ovat aktiivisten yhdisteiden kanssa reagoimattomia.

Sopivia esimerkkejä väliaineesta ja laimennusaineesta ovat 10 laktoosi, glukoosi, mannitoli, dekstriini, tärkkelys, sakkaroosi, magnesiumaluminometasilikaatti, synteettinen aluminiumsilikaatti, kiteinen selluloosa, karboksimetyyli-selluloosanatrium, hydroksipropyylitärkkelys, karboksime-tyyliselluloosakalsium, ioninvaihtohartsi, metyyliselluloo-15 sa, gelatiini, arabikumi, hydroksipropyyliselluloosa, vähän substituoitu hydroksipropyyliselluloosa, hydroksipropyyli-metyyliselluloosa, polyvinyylipyrrolidoni, polyvinyylialko-holi, kevyt vedetön piihappo, magnesiumstearaatti, talkki, karboksyylivinyylipolymeeri, titaniumoksidi, sorbitaaniras-20 vahappoesterit, natriumlauryylisulfaatti, glyseriini, glyseriinirasvahappoesterit, puhdistettu lanoliini, glyse-rogelatiini, polysorbaatti, makrogoli, kasvisöljyt, vaha, nestemäinen parafiini, valkoinen vaseliini, ei-ioniset pinta-aktiiviset aineet, propyleeniglykoli ja vesi.

25

Farmaseuttinen koostumus voi olla tablettien, kapseleiden, rakeiden, jauheiden, siirappien, suspensioiden, peräpuikkojen, voiteiden, geelien, tarravalmisteiden, injektioiden tai silmälääketieteellisten liuosten annosmuodossa. Nämä 30 valmisteet voidaan valmistaa tavanomaisella tavalla. Neste-valmiste voi olla kiinteän valmisteen muodossa, joka voidaan muuttaa nestemuotoon käytettäessä, ts. se liuotetaan tai suspendoidaan käytettäessä veteen tai mihin hyvänsä muuhun sopivaan väliaineeseen. Tabletit ja rakeet voidaan 35 päällystää tavalliseen tapaan tavanomaisella päällystysai-neella.

28 98066 Nämä farmaseuttiset koostumukset voivat sisältää keksinnön mukaista yhdistettä määrän 0,01 paino-% tai yli, edullisesti 1 - 70 paino-%, koostumuksen koko painosta. Lisäksi nämä koostumukset voivat sisältää yhtä tai useaa muuta farma-5 seuttisesti aktiivista valmistusainetta, kuten oraalista hypoglykeemistä ainetta.

Farmaseuttista koostumusta, joka sisältää aktiivisena valmistusaineena keksinnön mukaista yhdistettä, joka sovel-10 tuu diabeettisten komplikaatioiden estoon tai hoitoon, voidaan käyttää yhdessä insuliinin tai minkä hyvänsä muun oraalisen hypoglykeemisen aineen kuten gliklatsidin, gli-benklamidin, tolbutamidin, asetoheksamidin tai glymidiini-natriumin kanssa.

15

Esimerkit Tätä keksintöä kuvataan seuraavilla esimerkeillä ja vertai-luesimerkeillä, mutta keksintöä ei pitäisi ymmärtää näihin 20 rajoittuvaksi. Yhdisteet tunnistettiin näissä esimerkeissä alkuaineanalyysillä, massaspektrillä, IR-spektrillä, NMR-spektrillä, HPLC:llä (high performance liquid chromatography) ja vastaavilla tavoilla.

25 Esimerkki 1 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrro-lo [1,2- a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini] -1,2',3,5'-tetronin valmistus: 30

Seosta, jossa oli 2-etoksikarbonyyli-2-(2-triklooriasetyy-lipyrrol-l-yyli)sukkinimidia (14,8 g), 4-bromi-2-fluori-bentsyyliamiinihydrokloridia (10,2 g) ja trietyyliamiinia (9,0 g, 12,3 ml) vedettömässä dimetyyliformamidissa 35 (150 ml) sekoitettiin 25°C:ssa 20 tuntia. Reaktioseos kaadettiin 5 % suolahappoon ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väke- 29 98066 voitiin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin silikagee-lillä käyttämällä kloroformia eluointiaineena. Otsikkoyh-distettä sisältävät jakeet ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanis-5 ta, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (6,5 g, 43,6%) värittöminä kiteinä, sp.: 192-193°C.

NMR spektri (DMSO-dg, 200 MHz): <5 3,56 (s, 2H, -CH2CO-), 5,00 (dd, 2H, J=21,0 Hz, 15,0 Hz, -CH2-Ar), 6,52 (dd, 1H, J=4,0 Hz, 2,8 Hz, pyrroli-H), 7,12 (dd, 1H, J=3,8 Hz, 1,4 10 Hz, pyrroli-H), 7,14 (t, 1H, J=8,2 Hz, Ar-H), 7,36 (dd, 1H, J=8,4 Hz, 2,0 Hz, Ar-H), 7,54 (dd, 1H, J=9,8 Hz, 2,0 Hz, Ar H), 7,72 (dd, 1H, J=2,6 Hz, 1,6 Hz, pyrroli-H), 12,18 (s, 1H, NH).

IR spektri (KBr, cm'1) : 3230, 3120, 1785, 1720, 1700, 1650, 15 1330, 1320.

Esimerkki 2 2-(2-Klooribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]-20 pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetronin valmistus:

Seosta, jossa oli 2-etoksikarbonyyli-2-(2-triklooriasetyy-lipyrrol-l-yyli)sukkinimidia (2,4 g), 2- klooribentsyyli-25 amiinia (1,1 g) ja trietyyliamiinia (1,3 g, 1,8 ml) vedettömässä dimetyyliformamidissa (15 ml) sekoitettiin 25°C:ssa 20 tuntia. Reaktioseos kaadettiin 5 % suolahappoon ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa.

30 Jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä kloroformia eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (0,96 g, 45,7%) värittöminä 35 kiteinä, sp.: 156-158°C.

Esimerkit 3-18 98066 30

Seuraavat taulukossa 3 luetellut yhdisteet valmistettiin olennaisesti esimerkissä 2 kuvatulla tavalla käyttämällä 5 vastaavaa amiinia 2-klooribentsyyliamiinin sijasta esimerkissä 2. Etyyliasetaatti/n-heksaanista uudelleenkoteyttämi-sen jälkeen kaikki yhdisteet saatiin värittöminä kiteinä.

Taulukko 3 10

? CH

(i f >K

VnJ^o r2 15 ^7=0

^-NH

o

Esimerkki__sulamispiste (°C) 20 3 H H 157-159 4 H 2-F 166-168 5 H 3-C1 161-163 6 4-F H 189-190 7 4-Cl H 195-198 25 8 4-Br H 158-160 9 4-CF3 H 182-183,5 10 4-F 2-F 221,5-223 11 4-CH3 H 154-158 12 4-OCH3 H 184-185 30 13 4-OCH3 3-OCH3 191-193 14 4-OCH3 2-OCH3 166-168 15 4-N02 H 211,5-213 (haj.) 16 4-Cl 2-F 196-199 17 H 2-Br 226-229 35 18 H 3-Br 152-153

Esimerkki 19 31 98066 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-7-kloori-[1,2,3,4-tetrahydropyrrole» [1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-5 1,2',3,5'-tetronin valmistus:

Seosta, jossa oli 2-(4-kloori-2-triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)-2-etoksikarbonyylisukkinimidia (2,1 g), 4-bromi-2-fluoribentsyyliamiinihydrokloridia (1,5 g) ja trietyyli-10 amiinia (1,9 g, 2,6 ml) vedettömässä dimetyyliformamidissa (30 ml) sekoitettiin 25°C:ssa 20 tuntia. Reaktioseosta käsiteltiin olennaisesti oleellisesti esimerkissä 2 kuvatulla tavalla. Tuote kiteytettiin uudelleen etyyliasetaat-ti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (1,2 g, 15 52,2%) värittöminä kiteinä, sp.: 227-229°C.

Esimerkki 20 7-Bromi-2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli) [1,2,3,4-tetrahydro-20 pyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetronin valmistus:

Seosta, jossa oli 2-(4-bromi-2-triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)-2-etoksikarbonyylisukkinimidia (2,1 g), 4-bromi-2-25 fluoribentsyyliamiinihydrokloridia (1,3 g) ja trietyyli- amiinia (1,6 g, 2,2 ml) vedettömässä dimetyyliformamidissa (30 ml) sekoitettiin 25°C:ssa 20 tuntia. Reaktioseosta käsiteltiin olennaisesti esimerkissä 2 kuvatulla tavalla. Tuote kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, 30 jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (1,2 g, 52,2%) värittöminä kiteinä, sp.: 112-114°C.

Esimerkki 21 35 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo- [1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetronin valmistus (sama yhdiste kuin esimerkissä 1): 32 98066

Sekoitettu liuos, jossa oli 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)- 4-karbamoyylimetyyli-l,3-diokso-l,2,3,4 -tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-karboksyylihappoetyyliesteriä (1,9 g) vedettömässä dimetyyliformamidissa (15 ml) jäähdytettiin 5 -20°C:een, ja sitten natriumhydridiä (63% dispersio mine raaliöljyssä, 0,29 g) lisättiin annoksittain. Saatua seosta sekoitettiin -20°C:ssa 15 minuuttia, kaadettiin 5 % suolahappoon ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipainees-10 sa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä kloroformi/metanolia (500:1) eluointiaineena. Otsikkoyhdis-tettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaat-ti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (0,6 g, 15 40,0%) värittöminä kiteinä, sp.: 192-193°C.

Esimerkki 22 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-20 [1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetro- nin enantiomeerin valmistus (esimerkin 1 tai 21 yhdisteen enantiomeeri A):

Sekoitettu liuos, jossa oli 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-25 4-karbamoyylimetyyli-l,3-diokso-l,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-karboksyylihappo-(-)-mentyyliesteriä (diastereomeeri A) (26,7 g) vedettömässä tetrahydrofuraanissa (120 ml) jäähdytettiin -78°C:een, ja sitten litium-bis(trimetyylisilyyli)amidia (1 M liuos tetrahydrofuraanis-30 sa, 93 ml) lisättiin tipoittain yli 7 minuutin ajan, samalla kun argonvirta johdettiin seokseen. Saatua seosta sekoitettiin -78°C:ssa 5 minuuttia, kaadettiin kylmään ammonium-kloridin vesiliuokseen, tehtiin happameksi laimealla suolahapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet pestiin 35 kyllästetyllä natriumkloridi vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä 33 98066 kloroformi/metanolia (200:1) eluointiaineena. Otsikkoyhdis-tettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliase-taatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä 5 (14,0 g, 72,2%) värittöminä kiteinä, sp.: 187-189°C.

Enantiomeerinen puhtaus määriteltiin analyyttisesti HPLCrlla, ULTRON ES-OVM 6φ x 150 mm (Shinwa kakoh. Japani) ja sen todettiin olevan suurempi kuin 99%.

10 [a]n7,5 = +1,96° (c=l,02, etyyliasetaatti) [a] 28 _ -7,6° (c=l,02, metanoli) [oi) 405 = -33,0° (c=l, 02, metanoli)

Esimerkki 23 15 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetro-nin enantiomeerin valmistus (esimerkin 1 tai 21 yhdisteen enantiomeeri B): 20

Esimerkin 22 menetelmä toistettiin paitsi, että 2-(4-bromi -2-fluoribentsyyli)-4-karbamoyylimetyyli-l,3-diokso-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-karboksyylihappo-(-)-mentyyliesteriä (diastereomeeri B) (22,2 g) käytettiin 25 vastaavan diastereomeeri A:n sijasta. Otsikkoyhdistettä (11,3 g, 69,7%) saatiin värittöminä kiteinä, sp.: 187-189°C (uudelleenkiteytetty etyyliasetaatti/n-hek-saanista).

30 Enantiomeerinen puhtaus määriteltiin analyyttisesti HPLC:llä, ULTRON ES-OVM pylväs 6φ x 150 mm ja sen todettiin olevan suurempi kuin 99%.

[aio7·5 = +1,67° (c=l, 02, etyyliasetaatti) [of] d8 = -6,1° (c=l,02, metanoli) 35 [or] 4os = -33,2° (c = l,02, metanoli)

Esimerkki 24 34 98066 2-(3,4-Diklooribentsyyli) -[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini] -1,2',3,5'-tetro-5 nin valmistus:

Esimerkin 21 menetelmä toistettiin paitsi, että 4-karbamo-yylimetyyli-2-(3,4-diklooribentsyyli)-1,3-diokso-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-karboksyylihappobent-10 syyliesteriä käytettiin 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-4-karbamoyylimetyyli-1,3-diokso-1,2,3,4- tetrahydropyrrolo-[1,2—a]pyratsiini-4-karboksyylihappoetyyliesterin sijasta. Otsikkoyhdistettä saatiin värittöminä kiteinä, sp.: 221-223°C (uudelleenkiteytetty etyyliasetaatti/n-hek-15 saanista).

Esimerkki 25 6-Bromi-2-(2-klooribentsyyli)[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-20 [1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetro- nin valmistus:

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2-(2-klooribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyr-25 rolidiini]-1,2',3,5'-tetronia (0,5 g) kloroformissa (80 ml) lisättiin annoksittain vedetöntä alumiinikloridia (0,93 g) 25°C:ssa, minkä jälkeen lisättiin tipoittain liuosta, jossa oli bromia (0,48 g) kloroformissa (4 ml). Saatua seosta sekoitettiin 25°C:ssa 15 tuntia, kaadettiin jääveteen ja 30 uutettiin kloroformilla. Uutteet kuivattiin natriumsulfaa-tilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin keskipaineinen pylväskromatografiakäsittely laitteella Diaion CHP-20P (tavaramerkki) [suurihuokoinen polymeeri (75-150 μιη) ; Mitsubishi Kasei Corp., Japan], käyttämällä 35 61% asetonitriiliä eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-hek- . 98066 35 saanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (0,37 g, 60,7%) värittöminä kiteinä, sp.: 201-203°C.

Esimerkki 26 5 6-Bromi-2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)[1,2,3,4-tetrahydro-pyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetronin valmistus: 10 Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2-(4-bromi-2-fluoribent-syyli) [1,2,3,4 -tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,23,5'-tetronia (0,9 g) kloroformissa (350 ml) lisättiin annoksittain vedetöntä alumiinikloridia (1,4 g) 25°C:ssa, minkä jälkeen lisättiin tipoittain liuos, 15 jossa oli bromia (0,68 g) kloroformissa (7 ml). Saatua seosta sekoitettiin 50°C:ssa 15 tuntia, kaadettiin jääve-teen ja uutettiin kloroformilla. Uutteet kuivattiin nat-riumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin keskipaineinen pylväskromatografiakäsittely 20 laitteella Diaion CHP 20P käyttämällä 61 % asetonitriiliä eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (0,34 g, 30,9%) värittöminä kiteinä, 25 sp.: 209-211°C (haj.).

Esimerkki 27 2 -(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-6-kloori-[1,2,3,4 -tetrahydro-30 pyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetronin valmistus:

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli) -[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-35 3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetronia (0,9 g) kloroformissa (350 ml) lisättiin annoksittain sulfuryylikloridia (0,68 g) 25°C:ssa. Saatua seosta sekoitettiin 25°C:ssa 4 tuntia, 36 9 8 0 6 6 kaadettiin jääveteen ja uutettiin kloroformilla. Uutteet kuivattiin natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin keskipaineinen pylväskromatogra-fiakäsittely laitteella Diaion CHP 20P käyttämällä 50 % 5 asetonitriiliä eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanis-ta, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (0,56 g, 50,9%) värittöminä kiteinä, sp.: 207-209°C.

10

Edellisissä esimerkeissä käytetyt lähtöaineet valmistettiin seuraavasti.

Vertailuesimerkki 1 15 2-(Pyrrol-1-yyli)malonihappodibentsyyliesterin valmistus:

Liuokseen, jossa oli 2-(pyrrol-1-yyli)malonihappodietyyli-esteriä (75,7 g) bentsyylialkoholissa (200 ml) lisättiin 20 tetraetyylititanaattia (3,0 g), ja saatua seosta sekoitettiin HOoC:ssa 15 tuntia. Bentsyylialkoholi poistettiin alipaineessa, minkä jälkeen jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaani/etyyliasetaattia (10:1) eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet 25 yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (102,5 g, 87,3%) värittöminä kiteinä, sp.: 48,5-49°C.

30 Vertailuesimerkki 2 2-(Pyrrol-1-yyli)malonihappoetyyli-(-)-mentyyliesterin valmistus: 35 Seokseen, jossa oli 2-(pyrrol-1-yyli)malonihappodietyylies-teriä (300,0 g) ja (-)-mentolia (417,0 g) lisättiin tetraetyylititanaattia (10,0 g), ja saatua seosta sekoitettiin 37 . 98066 HO°C:ssa 19 tuntia. (-)-Mentoli poistettiin alipaineessa, minkä jälkeen jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaani/etyyliasetaattia (50:1) eluointiai-neena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja 5 haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (142,0 g, 31,8%) värittömänä öljynä.

Vertailuesimerkki 3 10 2-Bentsyylioksikarbonyylimetyyli-2-(pyrrol-1-yyli)maloni- happodietyyliesterin valmistus:

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2-(pyrrol-1-yyli)maloni-happodietyyliesteriä (53,0 g) vedettömässä dimetyyliform-15 amidissa (300 ml) lisättiin annoksittain natriumhydridiä (63% dispersio mineraaliöljyssä, 10,0 g) jäissä jäähdyttäen. Saatua seosta sekoitettiin 25°C:ssa 30 minuuttia ja siihen lisättiin bentsyylibromiasetaattia (70,1 g). Sekoitettiin 25°C:ssa 15 tuntia, minkä jälkeen reaktioseos kaa-20 dettiin veteen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaani/etyyliasetaattia (10:1) eluointiai-neena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja 25 haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (80,0 g, 91,0%) värittömänä öljynä.

Vertailuesimerkki 4 30 2-Karboksimetyyli-2-(pyrrol-1-yyli)malonihappodietyylieste rin valmistus:

Seosta, jossa oli 2-bentsyylioksikarbonyylimetyyli-2- (pyrrol -l-yyli)malonihappodietyyliesteriä (80,0 g) dioksaanis-35 sa (150 ml) hydrattiin 10 % palladium/hiilellä (500 mg) 40°C:ssa. Kun laskettu määrä vetyä absorboitui, katalyytti erotettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin alipai- - 98066 38 neessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (48,7 g, 80,2%) värittöminä kiteinä, sp.: 93-94°C.

5 Vertailuesimerkki 5 2-Karbamoyylimetyyli-2-(pyrrol-1-yyli)malonihappodietyyli-esterin valmistus: 10 Seosta, jossa oli 2-karboksimetyyli-2-(pyrrol-1-yyli)malo-nihappodietyyliesteriä (36,0 g), N-hydroksisukkinimidia (16,1 g) ja l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidihydrokloridia (29,2 g) dikloorimetaanissa (200 ml) sekoitettiin 25°C:ssa 1 tunti, minkä jälkeen lisättiin 15 7,8 % (w/w) ammoniakkia asetonitriilissä (110 ml). Saatua seosta sekoitettiin 25°C:ssa 1 tunti ja väkevöitiin alipaineessa samassa lämpötilassa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos pestiin 5 % suolahapolla ja sitten kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin 20 vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (29,0 g, 80,8%) värittöminä kiteinä, sp.: 94-95°C.

25 Vertailuesimerkki 6 2-Etoksikarbonyyli-2-(pyrrol-1-yyli)sukkinimidin valmistus:

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2-karbamoyylimetyyli-2-30 (pyrrol-1-yyli)malonihappodietyyliesteriä (29,0 g) vedettö mässä dimetyyliformamidissa (30 ml) lisättiin annoksittain natriumhydridiä (63% dispersio mineraaliöljyssä, 4,3 g) jäissä jäähdyttäen. Saatua seosta sekoitettiin jäissä jäähdyttäen 1 tunti, kaadettiin 5 % suolahappo/jääveteen ja 35 uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös 98066 39 kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaa-ni/etyyliasetaattia (2:1) eluointlaineena. Otsikkoyhdistet-tä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (23,0 g, 94,7%) 5 värittömänä öljynä.

Vertailuesimerkki 7 2-Etoksikarbonyyli-2-(2-triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)-10 sukkinimidi·1/2 dimetyyliformamidin valmistus:

Liuokseen, jossa oli 2-etoksikarbonyyli-2-(pyrrol-1-yyli)-sukkinimidia (18,0 g) kloroformissa (40 ml) lisättiin tri-klooriasetyylikloridia (42,0 g,) ja saatua seosta refluk-15 soitiin 67 tuntia. Reaktioseos väkevöitiin alipaineessa, ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos pestiin 10 % natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja sitten kyllästetyllä natriumkloridi vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös 20 kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaa- ni/etyyliasetaattia (4:1) eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Värittömänä öljynä saatua raakatuotetta käsiteltiin dimetyyliformamidilla (5 ml) sen kiteyttämiseksi. Uudel-25 leenkiteyttämällä etyyliasetaatti/n-heksaanista saatiin otsikkoyhdistettä (28,5 g, 89,3%) värittöminä kiteinä, sp.: 94-97°C.

Vertailuesimerkki 8 30 2-(2-Triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)malonihappodietyylies-terin valmistus:

Liuokseen, jossa oli 2-(pyrrol-1-yyli)malonihappodietyyli-35 esteriä (100,0 g) kloroformissa (100 ml) lisättiin trikloo-riasetyylikloridia (161,4 g), ja saatua seosta refluksoi-tiin 15 tuntia. Reaktioseos väkevöitiin alipaineessa, ja 40 98066 jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos pestiin 10 % natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja sitten kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös 5 kiteytettiin uudelleen isopropyylieetteristä, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (146,4 g, 89,0%) värittöminä kiteinä, sp. 67-69°C.

Vertailuesimerkki 9 10 2-(2-Triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)malonihappoetyyli-(-)-mentyyliesterin valmistus:

Liuokseen, jossa oli 2-(pyrrol-l-yyli)malonihappoetyyli-15 (-)-mentyyliesteriä (64,0 g) kloroformissa (80 ml) lisät tiin triklooriasetyylikloridia (69,0 g), ja saatua seosta refluksoitiin 7 tuntia. Reaktioseos väkevöitiin alipaineessa, ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos pestiin 5 % natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja sitten kylläste-20 tyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa.

Jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä n-hek-saani/etyyliasetaattia (50:1) eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin 25 alipaineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (87,0 g, 94,9%) värittömänä öljynä.

Vertailuesimerkki 10 30 2-(Triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)malonihappodibentsyylies- terin valmistus:

Vertailuesimerkin 8 menetelmä toistettiin paitsi, että 2-(pyrrol-l-yyli)malonihappodibentsyyliesteriä käytettiin 35 2-(pyrrol-l-yyli)malonihappodietyyliesterin sijasta. Otsik koyhdistettä saatiin värittöminä kiteinä, sp.: 74-76°C (uudelleenkiteytetty etyyliasetaatti/n-heksaanista).

41

Vertailuesimerkki 11 98066 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-1,3-diokso-1,2,3,4-tetrahyd-ropyrrolo [1,2-a] pyratsiini-4-karboksyylihappoetyyliesterin 5 valmistus:

Seosta, jossa oli 2-(2-triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)malo-nihappodietyyliesteriä (40,0 g), 4-bromi-2-fluoribentsyyli-amiinihydrokloridia (29,0 g) ja trietyyliamiinia (54,8 g, 10 75,0 ml) vedettömässä dimetyyliformamidissa (100 ml) sekoi tettiin typpivirran alla 70°C:ssa 1 tunti. Jäähdyttämisen jälkeen, reaktioseos kaadettiin into 5 % suolahappoon ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa. Jään-15 nös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (38,0 g, 86,0%) värittöminä kiteinä, sp.: 114-115°C.

Vertailuesimerkki 12 20 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-1,3-diokso-l, 2,3,4-tetrahyd-ropyrrolo [1,2-a] pyratsiini-4-karboksyylihappo- (-) -mentyy-liesterin valmistus: 25 Seosta, jossa oli 2-(2-triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)ma-lonihappoetyyli-(-)-mentyyliesteriä (87,0 g), 4-bromi-2-fluoribentsyyliamiinihydrokloridia (53,0 g) ja trietyyliamiinia (66,4 g, 91,0 ml) vedettömässä dimetyyliformamidissa (200 ml) sekoitettiin typpivirran alla 75°C:ssa 2 tun-30 tia. Reaktioseos väkevöitiin alipaineessa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos pestiin 5 % kylmällä suolahapolla ja sitten kyllästetyllä natriumkloridin vesi-liuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen 35 metanolista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (74,0 g, 78,7%) värittöminä kiteinä, sp.: 98-99°C.

42

Vertailuesimerkki 13 98066 2-(3,4-Diklooribentsyyli)-1,3-diokso-1,2,3,4 -tetrahydropyr-rolo [1,2-a]pyratsiini-4-karboksyylihappobentsyyliesterin 5 valmistus:

Seosta, jossa oli 2-(2-triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)malo-nihappodibentsyyliesteriä (30,0 g), 3,4-diklooribentsyyli-amiinia (11,7 g) ja trietyyliamiinia (18,4 g, 25,0 ml) 10 vedettömässä dimetyyliformamidissa (70 ml) sekoitettiin typpivirran alla 70°C:ssa 2 tuntia. Jäähdyttämisen jälkeen reaktioseos kaadettiin 5 % suolahappoon ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natriumsul-faatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös kromatogra-15 foitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaani/etyyliase- taattia (3:1) eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (16,0 g, 59,5%) värittö-20 minä kiteinä, sp.: 104-106°C.

Vertailuesimerkki 14 4-Bentsyylioksikarbonyyli-2-(3,4-diklooribentsyyli)-1,3-25 diokso-1,2,3,4 -tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-etikka-happo-tert-butyyliesterin valmistus:

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2-(3,4-diklooribentsyyli) -1,3-diokso-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-30 4-karboksyylihappobentsyyliesteria (9,4 g) vedettömässä dimetyyliformamidissa (40 ml) lisättiin annoksittain nat-riumhydridiä (63% dispersio mineraaliöljyssä, 0,7 g) jäissä jäähdyttäen, samalla kun typpivirta johdettiin seokseen. Saatua seosta sekoitettiin 25°C:ssa 1 tunti ja siihen li-35 sättiin tert-butyylibromiasetaattia (4,3 g). Seosta sekoitettiin 25°C:ssa 15 tuntia, kaadettiin veteen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natrium- 43 98066 sulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös kromato-grafoitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaani/etyyliase-taattia (20:1) eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa.

5 Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanis-ta, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (9,2 g, 78,0%) värittöminä kiteinä, sp.: 86-88°C.

Vertailuesimerkki 15 10 2-(4-Bromi-2-fluoribent syyli)-4-etoks ikarbonyyli-1,3 -diok-so-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a] pyratsiini-4-etikkahap-po-tert- butyyliesterin valmistus: 15 Seosta, jossa oli 2-(2-triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)- malonihappodietyyliesteriä (25,0 g), 4-bromi-2-fluoribent-syyliamiinihydrokloridia (17,8 g) ja trietyyliamiinia (22,5 g, 30,8 ml) vedettömässä dimetyyliformamidissa (100 ml) sekoitettiin typpivirran alla 70°C:ssa 1 tunti ja 20 väkevöitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin vedettömään dimetyyliformamidiin (100 ml) ja sekoitettuun liuokseen lisättiin typpivirran alla annoksittain natriumhydridiä (63 % dispersio mineraaliöljyssä, 5,6 g) jäissä jäähdyttäen. Saatua seosta sekoitettiin 25°C:ssa 1 tunti ja siihen 25 lisättiin tert-butyylibromiasetaattia (31,6 g). Seosta sekoitettiin 25°C:ssa 15 tuntia, kaadettiin veteen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaa-30 ni/etyyliasetaattia (8:1) eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (28,7 g, 81,3%) värittömänä öljynä.

35

Vertailuesimerkki 16 98066 44 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-4-(-)-mentyylioksikarbonyyli- 1,3-diokso-l,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-5 etikkahappo tert-butyyliesterin diastereomeerin valmistus (diastereomeeri Aja diastereomeeri B) : (1) Seosta, jossa oli 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-1,3-diokso-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo(1,2-a] pyratsiini-4-karbok- 10 syylihappo- (-)-mentyyliesteriä (67,0 g), vedetöntä kalium-karbonaattia (36,0 g) ja tert-butyylibromiasetaattia (33,0 g) vedettömässä dimetyyliformamidissa (200 ml) sekoitettiin typpivirran alla 70°C:ssa 2,5 tuntia. Liukenemattomat ainekset poistettiin suodattamalla, minkä jälkeen suo-15 dos kaadettiin veteen ja uutettiin etyyliasetaatilla.

Uutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen n-hek-saanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (diastereomeeri 20 A) (23,5 g, 28,8%) värittöminä kiteinä, sp.: 99-100°C.

Diastereomeerinen puhtaus määriteltiin analyyttisesti HPLC:11a, CAPCELL PAK C18 4,60 x 150 mm (Shiseido Co.,

Ltd., Japani) ja sen todettiin olevan suurempi kuin 99 %.

25 [a] d6 = -24,8° (c=l,01, etanoli) (2) Edellisen diastereomeerin A erottamisen jälkeen saatu emäliuos haihdutettiin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, käyttämällä n-heksaa- 30 ni/dikloorimetaania (1:1) eluointlaineena, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (diastereomeeri B) (26,7 g, 32,7%) värittömänä öljynä.

Diastereomeerinen puhtaus määriteltiin edellisen menetelmän 35 mukaisesti ja sen todettiin olevan suurempi kuin 99 %.

Vertailuesimerkki 17 98066 45 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-4-etoksikarbonyyli-l,3-diok-so-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a] pyratsiini-4-etikkahapon 5 valmistus:

Seosta, jossa oli 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-4-etoksika-bonyyli-1,3-diokso-l,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyrat-siini-4-etikkahappo-tert-butyyliesteriä (28,7 g) ja tri-10 fluorietikkahappoa (125,1 g, 84,5 ml) dikloorimetaanissa (100 ml) refluksoitiin 3 tuntia ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä kloroformia eluointlaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös 15 kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (21,4 g, 83,6%) värittöminä kiteinä, sp.: 142-144°C.

Vertailuesimerkki 18 20 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-4-(-)-mentyylioksikarbonyyli- 1,3-diokso-l,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-etikkahapon diastereomeerin valmistus (diastereomeeri A ja diastereomeeri B): 25 (1) Seosta, jossa oli 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-4-(-)-mentyylioksikarbonyyli-1,3 -diokso-1,2,3,4-1etrahydropyrro-lo[1,2-a]pyratsiini-4-etikkahappo-tert-butyyliesteriä (diastereomeeri A) (30,0 g) ja trifluorietikkahappoa (112,5 g, 30 76,0 ml) vedettömässä dikloorimetaanissa (120 ml) refluk soitiin 1,5 tuntia ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin asetonitriilin ja tolueenin seokseen. Saatu liuos haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin otsikko-yhdistettä (diastereomeeri A) (27,3 g, kvantitatiivinen) 35 ruskeana öljynä.

46 98066 (2) Toistamalla edellinen menetelmä käyttämällä 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-4-(-)-mentyylioksikarbonyyli-1,3-diokso-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-etikkahappo-tertbutyyliesteriä (diastereomeeri B) (26,7 g) vastaavan 5 diastereomeerin A sijasta saatiin otsikkoyhdistettä (diastereomeeri B) (23,7 g, kvantitatiivinen).

Vertailuesimerkki 19 10 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-4-karbamoyylimetyyli-1,3-di- okso-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-karbok-syylihappoetyyliesterin valmistus:

Seosta, jossa oli 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-4-etoksi-15 karbonyyli-1,3-diokso-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2 - a] py- ratsiini-4-etikkahappoa (21,4 g), N-hydroksisukkinimidia (5,8 g) ja l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidihydrokloridia (10,5 g) dikloorimetaanissa (150 ml) sekoitettiin 25°C:ssa 20 1 tunti, ja 7,8 % (w/w) ammoniakkia asetonitriilissä (40 ml) lisättiin. Saatua seosta sekoitettiin 25°C:ssa 1 tunti, kaadettiin 5 % suolahappoon ja uutettiin dikloori-metaanilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natriumsulfaa-25 tiliä ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (18,5 g, 86,4%) värittöminä kiteinä, sp.: 190-192°C.

30 Vertailuesimerkki 20 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-4-karbamoyylimetyyli-l,3-diokso-1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-karbok-syylihappo-(-)-mentyyliesterin diastereomeerin valmistus 35 (diastereomeeri A ja diastereomeeri B) : 98066 47 (1) Liuokseen, jossa oli 2-(4-bromi-2-fluoribentsyyli)-4-(-) -mentyylioksikarbonyyli-1,3-diokso-l,2,3,4-tetrahydropyr-rolo[1,2-a]pyratsiini-4-etikkahappoa (diastereomeeri A) (27,3 g) vedettömässä dikloorimetaanissa (80 ml) lisättiin 5 tionyylikloridia (14 ml). Saatua liuosta refluksoitiin 2 tuntia ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin dikloorimetaaniin (80 ml) ja liuos väkevöitiin alipaineessa. Liuokseen, jossa oli jäännöstä dikloorimetaanissa (100 ml) lisättiin 7 % (w/w) ammoniakkia asetonitriilissä 10 (50 ml) jäissä jäähdyttäen. Saatua seosta sekoitettiin 25°C:ssa 30 minuuttia ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaat-15 ti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (diastereomeeri A) (26,7 g, 97,8%) värittöminä kiteinä, sp.: 207-209°C.

(2) Toistamalla edellinen menetelmä käyttämällä 2-(4-bromi-20 2-fluoribentsyyli)-4-(-)-mentyylioksikarbonyyli-1,3-diokso- 1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-etikkahappoa (diastereomeeri B) (23,7 g) vastaavan diastereomeerin A sijasta saatiin otsikkoyhdistettä (diastereomeeri B) (22,2 g, 93,7%), sp.: 122-123°C (uudelleenkiteytetty etyyliasetaat-25 ti/n-heksaanista).

Vertailuesimerkki 21 4-Karbamoyylimetyyli-2-(3,4-diklooribentsyyli)-1,3-diokso-30 1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-karboksyyli- happobentsyyliesterin valmistus:

Vertailuesimerkki 17 menetelmä toistettiin paitsi, että 4-bentsyylioksikarbonyyli-2-(3,4-diklooribentsyyli)-1,3-35 diokso-l,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-etikka-happo-tert-butyyliesteriä käytettiin 2-(4-bromi-2-fluori-bentsyyli)-4-etoksikarbonyyli-1,3-diokso-l, 2,3,4 -tetrahyd- 98066 48 ropyrrolo[1,2-a]pyratsiini-4-etikkahappo-tert-butyylieste-rin sijasta. Saatiin 4-bentsyylioksikarbonyyli-2-(3,4-diklooribentsyyli)-1,3-diokso-l,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[l,2-a]pyratsiini-4-etikkahappoa. Tuotetta käsiteltiin 5 olennaisesti vertailuesimerkin 19 mukaisella tavalla, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä, sp.: 134-136°C (uudel-leenkiteytetty etyyliasetaatti/n-heksaanista).

Vertailuesimerkki 22 10 2-(4-Kloori-2-triklooriasetyyli-pyrrol-l-yyli)-2-etoksikar-bonyylisukkinimidin valmistus:

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2-etoksikarbonyyli-2-(2-15 triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)sukkinimidia (6,0 g) kloroformissa (50 ml) lisättiin tipoittain liuos, jossa oli sulfuryylikloridia (4,8 g) kloroformissa (5 ml) jäissä jäähdyttäen. Saatua seosta sekoitettiin jäissä jäähdyttäen 30 minuuttia, kaadettiin veteen ja uutettiin kloroformilla. 20 Uutteet kuivattiin natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaani/etyyliasetaattia (2:1) eluointiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyy-25 liasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (2,5 g, 41,7 %) värittöminä kiteinä, sp.: 182-185°C.

Vertailuesimerkki 23 30 2-(4-Bromi-2-triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)-2-etoksikar- bonyylisukkinimidin valmistus:

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2-etoksikarbonyyli-2-(2-triklooriasetyylipyrrol-l-yyli)sukkinimidia (6,0 g) kloro-35 formissa (30 ml) lisättiin tipoittain liuos, jossa oli bromia (6,9 g) kloroformissa (18 ml) jäissä jäähdyttäen. Saatua seosta sekoitettiin jäissä jäähdyttäen 30 minuuttia, 49 98066 kaadettiin natriumbikarbonaatin vesiliuokseen ja uutettiin kloroformilla. Uutteet kuivattiin natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin silika-geelillä käyttämällä kloroformi/metanolia (2000:1) eluoin-5 tiaineena. Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (2,4 g, 36,4%) värittöminä kiteinä, sp.: 196-198°C.

10

Vertailuesimerkki 24 2-Bentsyylioksikarbonyyliamino-2-syanoetikkahappoetyylies-terin valmistus: 15

Sekoitettuun seokseen, jossa oli 2-amino-2-syanoetikkahap-po-etyyliesteriä (19,7 g) ja pyridiiniä (12,2 g) vedessä (123 ml) lisättiin annoksittain bentsyylioksikarbonyyliklo-ridia (27,9 g) jäissä jäähdyttäen. Saatua seosta sekoitet-20 tiin jäissä jäähdyttäen 1 tunti. Saostuneet kiteet otettiin talteen, pestiin hyvin vedellä ja uudelleenkiteytettiin etanolista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (24,2 g, 60,2%) värittöminä kiteinä, sp.: 111-112°C.

25 Vertailuesimerkki 25 2-Bentsyylioksikarbonyyliamino-2-syanomeripihkahappodietyy-liesterin valmistus: 30 Natriumetoksidiliuokseen, joka valmistettiin natriumista , (2,11 g) ja etanolista (400 ml), lisättiin vuorotellen 2-bent syy1ioksikarbonyy1iamino-2-syanoet ikkahappoetyy1ie s-teriä (24,0 g) ja etyylibromiasetaattia (15,3 g). Saatua seosta sekoitettiin 25°C:ssa 3 tuntia ja väkevöitiin ali-35 paineessa. Jäännös laimennettiin vedellä ja uutettiin kloroformilla. Uutteet pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa, joi- so 98066 loin saatiin otsikkoyhdistettä (31,6 g, 99%) värittömänä öljynä.

Vertailuesimerkki 26 5 2-Bentsyylioksikarbonyyliamino-2-etoksikarbonyylisukkinimi-din valmistus:

Liuos, jossa oli 2-bentsyylioksikarbonyyliamino-2-syanome-10 ripihkahappodietyyliesteriä (15,4 g) dikloorimetaanissa (50 ml) jäähdytettiin jäähaudelämpötilaan ja sitten lisättiin vuorotellen 30 % vetyperoksidia (21 ml), tetrabutyy-liammoniumvetysulfaattia (3,0 g) ja 20% natriumhydroksidin vesiliuosta (16,6 ml). Saatua seosta sekoitettiin jäissä 15 jäähdyttäen 30 minuuttia ja sitten 25°C:ssa l tunti. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännöstä kuumennettiin 80°C:ssa 1,5 tuntia, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (11,5 g, 81,2%), joka kiteytettiin 20 uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaanista, jolloin saatiin puhdas tuote, sp.: 105-106°C.

Vertailuesimerkki 27 25 2-Amino-2-etoksikarbonyylisukkinimidi:

Liuosta, jossa oli 2-bentsyylioksikarbonyyliamino-2-etoksi-karbonyylisukkinimidia (60,0 g) etikkahapossa (350 ml) hyd-rattiin 10 % palladium/hiilellä (6 g) 25°C:ssa. Kun lasket-30 tu määrä vetyä absorboitui, katalyytti erotettiin suodattamalla ja suodos väkevöitiin alipaineessa. Jäännös laimennettiin vedellä, pH säädettiin arvoon noin 7 kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatil-35 la ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen etanolista, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (12,8 g, 37%) värittöminä kiteinä, sp.: 107-108°C.

si 98066

Vertailuesimerkki 28 2-Etoksikarbonyyli-2-(pyrrol-1-yyli)-sukkinimidin valmistus (sama yhdiste kuin vertailuesimerkissä 6): 5

Liuokseen, jossa oli 2-amino-2-etoksikarbonyylisukkinimidia (7,0 g) etikkahapossa (35 ml) lisättiin 2,5-dimetoksitetra-hydrofuraania (5,0 g). Saatua seosta refluksoitiin 50 minuuttia ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännös laimennettiin 10 etyyliasetaatilla, pestiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja sitten vedellä, ja kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alipaineessa, minkä jälkeen jäännös kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä n-heksaani/etyyliasetaattia (2:1) eluointiaineena.

15 Otsikkoyhdistettä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (8,0 g, 90%) värittömänä öljynä.

Esimerkki 28 20 per 1,000 tablettia 2 -(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2 — a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'tetro- nin enantiomeeri A (esimerkin 22 yhdiste) ......... 1 g maissitärkkelys ................................. 25 g 25 laktoosi ......................................... 58 g kiteinen selluloosa .............................. 11 g hydroksipropyyliselluloosa ........................ 3 g laimea vedetön piihappo ........................... 1 g magnesiumstearaatti ............................... 1 g 30 Edelliset komponentit sekoitetaan, granuloidaan ja tehdään tavanomaisella menetelmällä 1,000 tabletiksi, joista kukin painaa 100 mg.

52 98066

Esimerkki 29 fine granules 2-(4-Bromi-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetro-5 ni (esimerkin 1 tai 21 yhdiste) ........................ 10 g maissitärkkelys .................................... 220 g laktoosi ........................................... 730 g hydroksipropyyliselluloosa ......................... 30 g 10 laimea vedetön piihappo ............................ 10 g

Edelliset komponentit sekoitetaan ja tehdään pieniksi rakeiksi tavanomaisella menetelmällä.

15

Claims (5)

1. 53 98066 . 1. Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivisia tetrahyd ropyrrole» [1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiinijohdan-5 naisia, jolla on kaava O CCxs Y - }~NH O 15 jossa R1 on 4-asemassa ja on vety, halogeeni, trifluorimetyyli, 1-3 hiiliatominen alkyyli, 1-3 hiiliatominen alkoksi tai nitro, R2 on 2- tai 3-asemassa ja on vety, halogeeni tai 1-3 20 hiiliatominen alkoksi, ja R3 on vety tai halogeeni, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, tunnettu siitä, että 25 a) saatetaan yhdiste, jolla on kaava r3\^/COCX3 V-N\/COOR4 30 (II) \ >° }-NH O 35 jossa R3 tarkoittaa samaa kuin edellä, R4 on karboksia suojaava ryhmä ja X on halogeeni, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava 54 98066
2. 5 H2N CH2 __^ (III) -r2 10 jossa R1 ja R1 tarkoittaa samaa kuin edellä, tai b) syklisoidaan yhdiste, jolla on kaava O y-—R1 (IV) 20 conh2 jossa R1, R1 ja R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, ja R41 on karboksia suojaava ryhmä tai optisesti aktiivisen alkoholin 25 alkyylijäännös, edellyttäen, että kun R41 on optisesti aktiivisen alkoholin alkyylijäännös, tetrahydropyrrolo-[1,2-a] pyratsiinirenkaan 4-asemassa olevan hiilitomin konfiguraatio on S tai R, emäksisen aineen läsnäollessa, ja kun saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R2 on 30 vety, valinnaisesti halogenoidaan tuote, minkä jälkeen valinnaisesti muunnetaan tuote sen halutuksi farmaseuttiseksi suolakseen. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 2-(4-35 bromi-2-fluoribentsyyli)- [1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]-pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetronia, 2 tunnettu siitä, että käytetään vastaavia lähtöaineita. 55 98066
3. 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 2-(3,4-diklooribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo-[1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetro-ni, tunnettu siitä, että käytetään vastaavia 5 lähtöaineita.
4. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 2-(4-bromibentsyyli)- [1,2,3,4-tetrahydropyrrolo[1,2-a]pyratsii-ni-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetroni, t u n - 10. e t t u siitä, että käytetään vastaavia lähtöaineita.
5. 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 2- (4-kloori-2-fluoribentsyyli)-[1,2,3,4-tetrahydropyrrolo- [1,2-a]pyratsiini-4-spiro-3'-pyrrolidiini]-1,2',3,5'-tetro-15 ni, tunnettu siitä, että käytetään vastaavia lähtöaineita. 56 98066