FI86959B - Foerfarande foer odling av bordetella pertussis tohama (fas i)-stammen och foerfarande foer framstaellning av kikhostavaccin och ett blandat vaccin, som innehaoller kikhostatoxoid. - Google Patents
Foerfarande foer odling av bordetella pertussis tohama (fas i)-stammen och foerfarande foer framstaellning av kikhostavaccin och ett blandat vaccin, som innehaoller kikhostatoxoid. Download PDFInfo
- Publication number
- FI86959B FI86959B FI873083A FI873083A FI86959B FI 86959 B FI86959 B FI 86959B FI 873083 A FI873083 A FI 873083A FI 873083 A FI873083 A FI 873083A FI 86959 B FI86959 B FI 86959B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- pertussis
- cellulose
- toxoid
- vaccine
- bordetella pertussis
- Prior art date
Links
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 title claims abstract description 53
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 claims abstract description 127
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 105
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 77
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 77
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 76
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 63
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims abstract description 62
- 229940066827 pertussis vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 49
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 36
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims abstract description 22
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 53
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 32
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 27
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 18
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 15
- -1 inorganic acid ester Chemical class 0.000 claims description 12
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 10
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 10
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 10
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 9
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 8
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 8
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 8
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 10
- 150000001916 cyano esters Chemical class 0.000 claims 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims 2
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 claims 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 claims 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 229940108461 rennet Drugs 0.000 claims 1
- 108010058314 rennet Proteins 0.000 claims 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 claims 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 11
- 101710154643 Filamentous hemagglutinin Proteins 0.000 abstract description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 58
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 25
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 18
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 17
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 230000036541 health Effects 0.000 description 14
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 13
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 13
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 12
- 108010002885 Polygeline Proteins 0.000 description 11
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 11
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 11
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 10
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 9
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 9
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 9
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 9
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 7
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 7
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 7
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 7
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 6
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 5
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 3
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 3
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001078385 Homo sapiens Haptoglobin Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 description 2
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 description 2
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 102000050796 human HP Human genes 0.000 description 2
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000001272 neurogenic effect Effects 0.000 description 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 2
- WLJVNTCWHIRURA-UHFFFAOYSA-N pimelic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCC(O)=O WLJVNTCWHIRURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 101710110818 Dermonecrotic toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 102000014702 Haptoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108050005077 Haptoglobin Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 208000028207 Weil disease Diseases 0.000 description 1
- 206010047924 Wheezing Diseases 0.000 description 1
- SMEGJBVQLJJKKX-HOTMZDKISA-N [(2R,3S,4S,5R,6R)-5-acetyloxy-3,4,6-trihydroxyoxan-2-yl]methyl acetate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H]1[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H](O1)O)OC(=O)C)O)O SMEGJBVQLJJKKX-HOTMZDKISA-N 0.000 description 1
- NPOSZHMWEFFGNH-UHFFFAOYSA-N [N].OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl Chemical compound [N].OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl NPOSZHMWEFFGNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081735 acetylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 description 1
- 239000007465 bordet-gengou-medium Substances 0.000 description 1
- 229940052491 bordetella pertussis Drugs 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940052299 calcium chloride dihydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 235000012730 carminic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004106 carminic acid Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229940080423 cochineal Drugs 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 239000012502 diagnostic product Substances 0.000 description 1
- 229960005097 diphtheria vaccines Drugs 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 108010072542 endotoxin binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 229940050906 magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 description 1
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 231100000404 nontoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000003058 plasma substitute Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- RVUXIPACAZKWHU-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid;heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.OS(O)(=O)=O RVUXIPACAZKWHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 229960002766 tetanus vaccines Drugs 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/22—Processes using, or culture media containing, cellulose or hydrolysates thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/099—Bordetella
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/235—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bordetella (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K2039/10—Brucella; Bordetella, e.g. Bordetella pertussis; Not used, see subgroups
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
86959
Menetelmä Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kannan viljelemiseksi, ja menetelmä hinkuyskärokotteen ja hinku-yskätoksoidia sisältävän sekarokotteen valmistamiseksi -Förfarande för odling av Bordetella pertussis TOHAMA (fas I)-stammen och förfarande för framställning av kikhosta-vaccin och ett blandat vaccin, som innehäller kikhosta-toxoid Tämä keksintö koskee menetelmää Bordetella pertussisln viljelemiseksi. Tämä keksintö koskee myös hinkuyskä-toksoidia. Edelleen keksintö koskee rokotetta, joka sisältää hinkuyskätoksoidin aktiiviaineena. Tämän keksinnön mukainen menetelmä on edullinen viljelmän tuottamiseksi, joka sisältää lisääntyneen määrän seka-antigeenia, joka muodostuu hinkuyskätoksiinista ja hinkuyskä-filamentti-he-magglutiniinista. Viljelmästä seka-antigeeni voidaan eristää helposti. Tämän keksinnön mukainen hinkuyskätok-soidi saadaan vaikeuksitta seka-antigeenista, jonka vuoksi sitä voidaan valmistaa helposti alhaisilla kustannuksilla. Tämän keksinnön mukainen hinkuyskätoksoidi on erittäin tehokas aktiiviaine hinkuyskärokotteeseen ja diagnostinen aine hinkuyskän toteamiseksi.
Hinkuyskä on akuutti hengitystieinfektiosairaus, jonka aiheuttaa Bordetella pertussis-infektio. Hinkuyskä vai-: kuttaa keuhkoputkiin ja sen pieniin haaroihin ja sille on tunnusomaista räjähtävä yskä, joka päättyy hinkuvaan hengitykseen, tällainen yskä on sairaudelle ominainen ja kansanomaisesti sen on sanottu kestävän sata päivää. Tosiasiassa räjähtävä yskä toistuu uudestaan usean viikon kuluessa.
Erityisesti kun kyseessä on pieni lapsi, joka kärsii hinkuyskästä, esiintyy hengityssalpauskohtausyskää (an ap-nea-paroxysmal cough), johon joskus liittyy kouristus.
- Tämän sairauden estämiseksi on Japanissa vuodesta 1949 lähtien pienille lapsille annettu hinkuyskärokotus pian 2 86959 syntymän jälkeen. Tavanomaiset hinkuyskärokotteet sisältävät aktiiviaineena inaktivoituja bakteerisoluja, jonka vuoksi niillä rokotettaessa pyrkii esiintymään ei-toivot-tuja sivuvaikutuksia. Sivuvaikutuksina hyvin tunnettuja ovat esimerkiksi erilaiset paikalliset reaktiot hinkuyskärokotteen rokotuskohdassa, systeemiset oireet, kuten kuume, kärttyisyys, oksentelu ja ripuli, tilapäiset her-mokouristukset ja hermosyntyinen (neurogeeninen) shokki ja vakava enkefeliitti ja vastaavat. Toisaalta viime vuosina sairastuminen hinkuyskään ja siitä johtuvat kuolemat ovat huomattavasti vähentyneet johtuen parantuneista elinoloista ja kemoterapioiden kehittymisestä. Siitä huolimatta nykyään edellä mainitut sivuvaikutukset, jotka johtuvat rokotuksen antamisesta pikemmin kuin sairauden aiheuttamasta infektiovaarasta, ovat muodostuneet vakavaksi ongelmaksi. Kuitenkin on hyvin vaarallista, että rokotus hinkuyskää vastaan on lopetettu näiden sivuvaikutusten välttämiseksi. Tämä on käynyt ilmi viimeaikaisesta katkerasta kokemuksesta, kun monet lapsipotilaat ovat kuolleet hinkuyskään Japanissa ja Englannissa johtuen hinkuyskän luonnollisesta esiintymisestä, joka aiheutui rokotusten väliaikaisesta lopettamisesta. Näin ollen on oletettavaa, että hinkuyskärokotuksen suorittaminen on yhä tärkeätä ja välttämätöntä.
Tähän asti on esitetty monia aineita suojaavana antigeeninä, biologisesti aktiivisena aineena tai Bordetella pertussisin komponenttina. Tällaisista aineista voidaan mainita esimerkiksi lämpölabiili toksiini tai dermonek-roottinen toksiini; lämpölabiili agglutinogeeni; endotoksiini tai lipopolysakkaridi; filamentti-hemagglutiniini (F-HA); histamiini-sensitiivinen tekijä (histamine sensitizing factor = HSF); leukosytoosia tai lymfosytoosia edistävä tekijä (leucocytosis or lymphocytosis promoting factor = LPF); hinkuyskätoksiini (pertussis toxin = PT), jota myös kutsutaan nimellä lymfosytoosia edistävä tekijä I: 3 86959 - hemagglutiniini (LPF-HA); adjuvanttifaktori; adenylaat-tisyklaasi; saareketta aktivoiva tekijä (islet-activating factor); ulkomembraaniproteiini ja vastaavat.
Näistä aineista, tähän mennessä, filamentti-hemaggluti-niinia (jäljempänä usein merkitty "F-HA") ja hinkuyskä-toksiinia (jäljempänä usein merkitty "PT") on sovellettu käytännössä hinkuyskätoksoidin tai hinkuyskäkomponentti-rokotteen aktiiviaineina.
Kuten edellä mainittiin, on tunnettua, että tavanomaisilla rokotteilla on erilaisia sivuvaikutuksia, koska rokotteet sisältävät aktiiviaineena inaktivoituja bakteeri-soluja. Näin ollen kaikkialla maailmassa on voimakkaasti toivottu turvallisen ja tehokkaan rokotteen kehittämistä, Jolla olisi tasainen laatu ilman edellä mainittuja sivuvaikutuksia (Journal of American Medical Association, 1_25 (2), 51-252, 1984; Bulletin of the World Health Organization, 62(2), 241-248, 1985). Japanissa terveys- ja sosiaaliministeriö on jo hyväksynyt hinkuyskätoksoidin (puhdistettu, adsorboitu hinkuyskärokote), joka sisältää aktiiviaineena aineen, joka saadaan tekemällä myrkyttömäksi Bordetella pertusslslsta peräisin oleva suojaava antigeenifraktio (F-HA ja PT), ja tätä on markkinoitu syksystä 1981 lähtien. Rokotteen valmistusmenetelmien suhteen viitataan tässä esimerkiksi seuraaviin julkaisuihin: JP-patenttijulkaisu nro 57-5203, US-patentti nro 4 455 297, US-patentti nro 4,500,639, JP-hakemusjulkaisu nro 58-222032, JP-patenttijulkaisu nro 59-175439, EP-hakemusjulkaisu nro 121249, EP-hakemusjulkaisu nro 140386, JP-hakemusjulkaisu nro 60-218326, JP-hakemusjulkaisu nro 60-226822, JP-patenttijulkaisu nro 60-28277, JP-hakemusjulkaisu nro 60-237023, JP-hakemusjulkaisu nro 61-53224, EP-hakemusjulkaisu nro 175841, JP-hakemusjulkaisu nro 62-5922, US-patentti nro 4,029,766, US-patentti nro 4,551,429, jne.
4 86959
Edelleen komponenttirokotteen, jossa käytetään Bordetella pertusslslsta peräisin olevaa ainetta aktiiviaineena, valmistuksessa tunnetaan esimerkiksi soluseinän käyttö (JP-patenttijulkaisu nro 56-47167), saareketta aktivoivan tekijän käyttö (JP-hakemusjulkaisu nro 59-110626), ulko-membraaniproteiinin käyttö (EP-hakemusjulkaisu nro 4137, EP-hakemusjulkaisu nro 80021), adenylaattisyklaasiaktii-visuuden omaavan fraktion käyttö (EP-hakemusjulkaisu nro 162639), endotoksiinin käyttö (FR-hakemusjulkaisu nro 2356429) jne. Kuitenkin edellä mainituilla, tavanomaisilla menetelmillä on jokaisella ainakin yksi seuraavista haittatekijöistä.
(1) Tuotantokustannukset ovat korkeat, koska tarvitaan kalliita aineita.
(2) Aktiiviaineen saanto rokotetta varten on alhainen.
(3) Tuotettavan rokotteen turvallisuus, teho, yhtenäinen laatu ja stabiilisuus eivät ole tyydyttäviä.
Esimerkiksi US-patentissa nro 4,500,639, JP-hakemusjulkaisussa nro 59-175439, EP-hakemusjulkaisussa nro 121249 ja JP-patenttijulkaisussa nro 60-28277, jotka edellä on mainittu, esitetään, että PT- ja F-HA-saantojen lisäämiseksi, syklodekstriiniä, joka tunnetaan isäntäyhdisteenä, joka kykenee muodostamaan sulkeutuvia (inclusion) komplekseja, lisätään peruskasvualustaan Bordetella pertus-sisin viljelemiseksi. Kuitenkin tällä tekniikalla on seu-raavat haitat: (1) Käytettävä syklodekstriini on kallista.
(2) Tuotettu PT ja F-HA ovat liittyneenä syklodekstrii-niin kasvualustassa ja niiden erottaminen syklodekstrii-nistä ja puhdistaminen erittäin puhtaaksi on vaikeata.
5 86959
Toisin sanoen, tällainen tekniikka ei ole taloudellinen, koska tarvitaan kalliita aineita ja kalliita puhdistuslaitteita ja siinä käytetyt menetelmät ovat hyvin monimutkaisia ja vaivalloisia.
Tämän vuoksi on vaikeata saada hinkuyskärokotetta, joka olisi turvallinen ja tasalaatuinen. Lisäksi edellä mainitussa US-patentissa nro 4,551,429 esitetään, että Borde-tella pertusslsin peruskasvualustaan lisätään polyvinyy-lialkoholia samaa tarkoitusta varten kuin edellä on esitetty. Kuitenkaan tässä viitteessä ei ole kuvausta menetelmästä, jolla PT ja F-HA puhdistetaan erittäin puhtaaksi eikä kuvausta tuotetun PT:n ja F-HA:n laadusta ja tämän vuoksi on kyseenalaista että tämän viitejulkaisun mukaisesti saatu rokote sisältää erittäin puhdasta PT:tä ja F-HA:ta ja on tasalaatuinen.
Kuten on yleisesti tunnettua, vuonna 1979 WHO (Maailman terveysjärjestö) aloitti laajennetun rokotusohjelman (an Expanded Programme on Immunization = EPI) ja suorittaa nyt tätä ohjelmaa. Ohjelman tarkoituksena on antaa kaikkiaan 6 rokotusta, nimittäin hinkuyskärokotus, jäykkäkou-ristusrokotus, kurkkumätärokotus, tuberkuloosirokotus, . . poliorokotus ja tuhkarokkorokotus kaikille pikkulapsille maailmassa vuoteen 1990 mennessä (WHO Chronicle, 36(4) 131-152, 1982). Tämän ohjelman loppuunsaattamiseksi WHO kiirehtii rokotteiden kehittämistä, jotka ovat erinomaisia stabiilisuudeltaan ja kuuman kestäviä, ja joita voidaan käyttää tropiikissa, jossa ei ole jääkaappeja, sekä rokotteiden käyttöönottoa [WHO Technical Report Series, No. 673, 15, (1982)]. Lisäksi rokotteet, joiden tiitterit ·'. eivät alene vaikka ne pakastetaan, ovat myös erittäin käyttökelpoisia, koska rokotteita käytetään myös kylmillä alueilla. Sen vuoksi kaikkialla maailmassa on toivottu, että kehitettäisiin erittäin stabiileja rokotteita, jotka ovat erinomaisia sekä kuumankestävyydessä ja kylmänkes 6 86959 tävyydessä ja näin niitä voidaan käyttää ympäristön lämpötilassa millä tahansa trooppisilla ja kylmillä alueilla. Mitä tulee kuumuuden kestäviin rokotteisiin, niin tunnetaan esimerkiksi kuivatut rokotteet, kuten elävä virusrokote, inaktivoitu virusrokote, soluvapaa sekarokote, joka muodostuu inaktivoidusta bakteerista ja toksoidista (JP-hakemusjulkaisu nro 59-19682) ja vastaavat. Kuitenkin edellä mainitut, kuivatut rokotteet ovat huonoja stabii-lisuudeltaan siten, että sen jälkeen kun niitä on varastoitu 37eC:ssa noin kuukauden ajan, niiden tiitterit alentuvat lukemiin, jotka ovat niin alhaiset kuin 10 - 50 % verrattaessa rokotteiden tiittereihin ennen varastointia. Koska on voimakkaasti toivottu rokotteen kehittämistä, joka on äärimmäisen hyvä kuumankestävyydessä ja kylmän kestävyydessä ja pysyvä siten, että rokotteen tiitte-ri tuskin lainkaan alentuu, vaikka sitä säilytetään esimerkiksi lämpötilassa, joka on noin -20°C - noin 50eC useiden kuukausien ajan.
Lisäksi hinkuyskätoksoidi, joka saadaan tekemällä hinku-yskätoksiini myrkyttömäksi formaliinilla, on nyt kaupallisesti saatavissa mutta tällaisella toksoidilla on vakavia haittoja, koska toksoidi pyrkii palautumaan toksiseen tilaan varastoinnin kuluessa, jonka vuoksi varastoinnin jälkeen toksoidin turvallisuutta ei enää voida taata. Edellä mainitun toksoidin toksiseen tilaan tapahtuvan palautumisen estämiseksi on esitetty, että formaliinin sijasta käytettäisiin karbodi-imidiä myrkyttömäksi tekevänä aineena (JP-hakemusjulkaisu nro 62-5922). Kuitenkin karbodi-imidin käyttö on kyseenalaista, koska karbodi-imidin turvallisuutta ei ole vahvistettu.
Alalla on innokkaasti odotettu edellä mainittujen tavanomaisten rokotteiden haittojen ja epäedullisten seikkojen poistamista ja parannetun hinkuyskärokotteen kehittämis-;. tä.
7 86959 Tämän hakemuksen keksijät ovat suorittaneet laajoja ja intensiivisiä tutkimuksia edellä mainittujen ongelmien ratkaisemiseksi. Tuloksena on havaittu, että kun Borde-tella pertussista viljellään selluloosan ja/tai selluloo-sajohdannaisen läsnäollessa, PT:tä ja F-HA:ta voidaan tuottaa viljelmässä korkealla saannolla alhaisin kustannuksin ja näin saatu PT ja F-HA voidaan helposti puhdistaa viljelmästä. Edelleen on todettu, että hinkuyskätok-soidi, joka saadaan tekemällä myrkyttömiksi tällainen PT ja F-HA käyttäen formaliinia, ei muutu takaisin toksiseen tilaan. Lisäksi on todettu, että lisäämällä gelatiinia ja/tai gelatiinijohdannaista rokotteeseen, joka sisältää edellä saadun hinkuyskätoksoidin aktiiviaineena, tai se-karokotteeseen, joka sisältää hinkuyskätoksoidin ja antigeenin, joka on muu kuin hinkuyskätoksoidi, rokotteen stabiilisuus on huomattavasti parantunut.
Lisäksi on havaittu, että kun edellä mainitut rokotteet lyofilisoidaan, niiden stabiilisuus edelleen paranee.
Tämä keksintö on toteutettu perustuen edellä mainittuihin uusiin havaintoihin.
Näin ollen tämän keksinnön kohteena on uusi menetelmä Bordetella pertussisin viljelemiseksi, joka on tehokas tuottaen seka-antigeenia, joka sisältää PT:n ja F-HA:n, joita käytetään valmistettaessa hinkuyskärokotetta ja joita voidaan tuottaa Bordetella pertussis -viljelmässä lisääntynyt määrä alhaisin kustannuksin.
Tämän keksinnön avulla valmistetaan edelleen hinkuyskä-toksoidia, jota voidaan käyttää turvallisena, pysyvänä ja tehokkaana aktiiviaineena hinkuyskärokotteeseen.
Tämän keksinnön kohteena on edelleen menetelmä hinkuyskärokotteen valmistamiseksi, joka rokote on erinomainen kuumuuden kestävyyden ja kylmänkestävyyden suhteen, ja 8 86959 jota voidaan varastoida ympäristön lämpötilassa pidempiä aikoja.
Olennaisesti tämä keksintö koskee menetelmää Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kannan viljelemiseksi ravinto-alustassa, jolle menetelmälle on tunnusomaista, että hankitaan Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kanta ja viljellään mainittua Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kantaa noin 30°C - 37eC:ssa noin 20-80 tuntia ravinto-alustassa, joka sisältää ainakin yhden aineen, joka on selluloosa tai selluloosajohdannainen, konsentraatiossa noin 0,01 - noin 2 paino-% Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kannan viljelmän aikaansaamiseksi.
Tämän keksinnön mukaisesti saadaan myös seka-antigeeni, joka sisältää hinkuyskätoksiinin ja hinkuyskäfilamentti-hemagglutiniinin, ja joka saadaan erottamalla saatu viljelmä edellä mainittujen menetelmien mukaisesti super-natantiksi ja Bordetella pertussis -soluiksi ja puhdistamalla mainittu supernatantti.
Edelleen tämän keksinnön mukaisesti saadaan hinkuyskätok-soidi tekemällä edellä mainittu seka-antigeeni myrkyttömäksi.
Lisäksi tämän keksinnön mukaisesti saadaan adsorboitu hinkuyskärokote, joka sisältää tehokkaan, immunogeenisen määrän edellä mainittua hinkuyskätoksoidia, mainitun hin-kuyskätoksoidin ollessa adsorboituna apuaineeseen, ja ainakin yhden farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen, laimennusaineen tai täyteaineen.
Edelleen tämän keksinnön mukaisesti saadaan adsorboitu hinkuyskärokote, joka sisältää tehokkaan, immunogeenisen määrän edellä mainittua hinkuyskätoksoidia, mainitun hin-kuyskätoksoidin ollessa adsorboituna apuaineeseen, aina- 9 86959 kin yhden farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen, laimennusaineen tai täyteaineen ja stabiloimisaineen.
Tämän keksinnön mukaisesti saadaan myös sekarokote, joka sisältää tehokkaat, immunogeeniset määrät edellä mainittua hinkuyskätoksoidia, mainitun hinkuyskätoksoidin ollessa adsorboituna apuaineeseen, ainakin yhden antigeenin, joka on muu kuin mainittu hinkuyskätoksoidi, ja ainakin yhden farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen, laimennusaineen tai täyteaineen.
Edelleen tämän keksinnön mukaisesti saadaan sekarokote, joka sisältää tehokkaat, immunogeeniset määrät edellä mainittua hinkuyskätoksoidia, mainitun hinkuyskätoksoidin ollessa adsorboituna apuaineeseen, ja ainakin yhden tok-soidin, joka on muu kuin mainittu hinkuyskätoksoidi, mainitun ainakin yhden toksoidin ollessa adsorboitua apuaineelle; ainakin yhden farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen, laimennusaineen tai täyteaineen; ja stabiloimisaineen .
Tämä keksintö koskee myös menetelmää hinkuyskärokotteen tuottamiseksi, joka rokote sisältää tehokkaan, immunogee-nisen määrän hinkuyskätoksoidia, jossa menetelmässä (1) hankitaan Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kanta, (2) viljellään mainittua Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kantaa ravintoalustassa, joka sisältää ainakin yhden aineen, joka on selluloosa tai selluloosa johdannainen, Bordetella pertussis TOHAMA faasi I)-kannan viljelmän aikaansaamiseksi, (3) erotetaan mainittu viljelmä supernatantiksi ja Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kannan soluiksi ja mainittu supernatantti puhdistetaan se-ka-antigeenin saamiseksi, joka sisältää hinkuyskä- ίο 86 959 toksiinin ja hinkuyskä-filamentti-hemagglutinii-nin, (4) tehdään myrkyttömäksi mainittu seka-antigeeni hin-kuyskätoksoidin saamiseksi, (5) adsorboidaan mainittu hinkuyskätoksoidi apuaineeseen, ja (6) lisätään muodostuneeseen, apuaineeseen adsorboituun toksoidiin ainakin yksi farmaseuttisesti hyväksyttävä kantoaine, laimennusaine tai täyteaine ja stabiloimisaine.
Edelleen tämä keksintö koskee menetelmää sekarokotteen tuottamiseksi, joka rokote sisältää tehokkaat, immunogee-niset määrät hinkuyskätoksoidia ja ainakin yhden antigeenin, joka on muu kuin mainittu hinkuyskätoksoidi, jossa menetelmässä: (1) hankitaan Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kanta, (2) viljellään mainittua Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kantaa ravintoalustassa, joka sisältää ainakin yhden aineen, joka on selluloosa tai selluloosa johdannainen, Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kannan viljelmän aikaansaamiseksi, (3) erotetaan mainittu viljelmä supernatantiksi ja Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I)-kannan soluiksi ja mainittu supernatantti puhdistetaan se-ka-antigeenin saamiseksi, joka sisältää hinkuyskä-toksiinin ja hinkuyskä-filamentti-hemagglutinii-nin, (4) tehdään myrkyttömäksi mainittu seka-antigeeni hinkuyskätoksoidin saamiseksi, (5) adsorboidaan mainittu hinkuyskätoksoidi apuaineeseen , (6) lisätään muodostuneeseen hinkuyskätoksoldiin ainakin yksi antigeeni, joka on muu kuin mainittu, 11 86959 apuaineeseen adsorboitu hinkuyskätoksoidi, mainitun hinkuyskätoksoidin ja mainitun ainakin yhden antigeenin soeksen saamiseksi, ja (7) lisätään mainittuun seokseen ainakin yksi farmaseuttisesti hyväksyttävä kantoaine, laimennusaine tai täyteaine ja stabiloimisaine.
Seuraavassa tätä keksintöä selitetään yksityiskohtaisesti.
[1] Bordetella pertusslsin viljeleminen Tämän keksinnön menetelmän mukaisesti Bordetella pertus-sista viljellään ravintoalustassa, joka sisältää ainakin yhden aineen, joka on selluloosa tai selluloosajohdannai-nen.
Ravintoalustana voidaan käyttää tavallisesti Bordetella pertusslsin viljelemiseksi tunnettuja peruskasvualustoja. Tällaisina peruskasvualustoina voidaan mainita esimerkiksi Bordet-Gengou-alusta, Cohen-Wheler-alusta, Stainer-Scholte-alusta ja vastaavat [Advances in Applied Microbiology, Voi. 20, sivut 27-42 (1976]. Ravintoalusta, jota käytetään tässä keksinnössä, voi yleensä olla nestemäisessä muodossa. Vaihtoehtoisesti se voi olla myös kiinteässä muodossa. Ravintoalusta, jota käytetään tässä keksinnössä, sisältää ainakin yhden aineen, joka on selluloosa tai selluloosajohdannainen. Aineen konsentraatio ravintoalustassa on noin 0,01 - noin 2,0 paino/paino-%.
Selluloosajohdannaisina voidaan käyttää esimerkiksi selluloosan epäorgaanisia happoestereitä, selluloosan orgaanisia happoestereitä ja selluloosan eettereitä. Tyypillisiä esimerkkejä selluloosajohdannaisista ovat asetyyli-selluloosa, selluloosaksantogenaatti, selluloosapropio-naatti, selluloosaformiaatti, selluloosabutylaatti, sei- i2 86959 luloosasulfaatti, selluloosafosfaatti, selluloosa-ase-taattibutyraatti, metyyliselluloosa, etyyliselluloosa, bentsyyliselluloosa, trityyliselluloosa, syaanietyylisel-luloosa, karboksimetyyliselluloosa, karboksietyylisellu-loosa, aminoetyyliselluloosa, oksietyyliselluloosa, hyd-roksietyyliselluloosa, hydroksipropyyliselluloosa, hyd-roksipropyylimetyyliselluloosa ja asetyylisukkinyyli-hydroksipropyyli-metyyliselluloosa ja vastaavat. Lisäksi selluloosajohdannaisina voidaan käyttää myös esimerkiksi selluloosan estereitä korkeamman rasvahapon kanssa, selluloosan estereitä tyydyttymättömän rasvahapon kanssa, selluloosan estereitä kaksiemäksisen rasvahapon kanssa, selluloosan estereitä halogenoidun rasvahapon kanssa, selluloosan estereitä sulfonihapon kanssa, selluloosan estereitä aromaattisen karboksyylihapon kanssa, selluloosan estereitä karbamiinihapon kanssa, selluloosan ristikytkettyjä eettereitä ja selluloosan kationisia eettereitä mikäli ne eivät ole myrkyllisiä.
Viljely suoritetaan staattisesti siinä tapauksessa, että ravintoalusta on kiinteä. Toisaalta kun ravintoalusta on nestemäinen, viljely voidan suorittaa staattisesti ja vaihtoehtoisesti se voidaan tehdä myös sekoittamalla käyttäen kiertoravistelijaa, fermenttoritankkia, joka on varustettu sekoittimella, jne. Yleensä viljely voidaan suorittaa noin 30°C - noin 37°C:ssa noin 20 - noin 80 tunnin ajan. Näin saadaan Bordetella pertussis -viljelmä, joka sisältää seka-antigeenin, joka sisältää suuren määrän hinkuyskätoksiinia (PT) ja filamentti-hemagglutinii-nia (F-HA).
[2] Seka-antigeenin, joka sisältää PT:n ja F-HA:n, tal-teenottaminen ja puhdistaminen:
Seka-antigeeni, joka sisältää PT:n ja F-HA:n, saadaan edellä mainitusta viljelmästä erottamalla viljelmä super- t.
i3 86959 natantiksi ja Bordetella pertussis -soluiksi ja puhdistamalla supernatantti. viljelmän erottaminen supernatan-tiksi ja soluiksi voidaan tehdä hyvin tunnetulla, tavanomaisella menetelmällä, kuten sentrifugoimalla alhaisella tai suurella nopeudella. Sen jälkeen näin saatu supernatantti puhdistetaan. Puhdistusta suoritettaessa voidaan käyttää tavanomaisia menetelmiä yhdessä. Tällaisina tavanomaisina menetelminä voidaan mainita esimerkiksi alhaisella nopeudella suoritettu sentrifugointi, suurella nopeudella suoritettu sentrifugointi, ultrasentrifugoin-ti, suoloitus, seostaminen orgaanisella liuottimena, jne., adsorptiokäsittely adsorbentilla, kuten hiilijau-heella ja erilaisilla geeleillä, dialyysi, suodatus, ult-rasuodatus ja vastaavat. Kuten edellä kuvattiin, puhdistettaessa tämän keksinnön mukaista seka-antigeenia ei tarvita mitään monimutkaisia, hankalia ja kalliita menetelmiä, kuten elektroforeesia ja affiniteettipylväskroma-tografiaa. Tämän vuoksi seka-antigeeni voidaan saada tehokkaasti alhaisilla kustannuksilla verrattuna tavanomaisiin menetelmiin. Näin saatu antigeeni sisältää PT:tä ja F-HA:ta painosuhteessa noin 1:1. Sekä PT:n että F-HA:n, jotka sisältyvät seka-antigeeniin, paino voidaan määrittää menetelmän mukaan, joka kuvataan myöhemmin vertailu-esimerkissä 9.
Seka-antigeeni on käyttökelpoinen - ei ainoastaan raaka-aineena hinkuyskärokotteen valmistamiseksi - vaan myös hinkuyskän diagnostisoimiseksi.
[3] Hinkuyskätoksoidin valmistus:
Edellä saatu seka-antigeeni tehdään myrkyttömäksi tavanomaisella menetelmällä. Esimerkiksi antigeenin myrkyttömäksi tekeminen voidaan suorittaa seuraavalla tavalla. Seka-antigeeniin, joka sisältää PT:n ja F-HA:n, lisätään inaktiivinen aine, kuten formaliini ja sekoitetaan riit 14 86959 tävästi antigeenin tekemiseksi myrkyttömäksi. Sen jälkeen muodostunut seos dialysoidaan inaktivoivan aineen poistamiseksi. Saadusta dialysaatista hinkuyskätoksoidi voidaan saada tavanomaisella menetelmällä, kuten lyofilisoimalla, seostamalla käyttäen orgaanista liuotinta, jne.
[4] Alkuperäisen hinkuyskärokoteliuoksen valmistus:
Edellä saatu dialysaatti, joka sisältää hinkuyskätoksoi-din, laimennetaan fosfaattipuskurilla, jne. siten, että hinkuyskätoksidin konsentraatioksi muodostuneessa seoksessa tulee noin 40 - noin 60 pg-proteiinityppeä per ml. Näin saatua liuosta käytetään alkuperäisenä hinkuyskä-rokoteliuoksena .
[5] Adsorboidun hinkuyskärokotteen valmistus:
Edellä saatu, alkuperäinen hinkuyskärokoteliuos laimennetaan puskurilla, kuten fosfaattipuskurilla, ja muodostuneeseen laimennokseen lisätään apuaine, jolloin hinkuys-kätoksidi adsorboituu apuaineeseen. Esimerkiksi alkuperäinen hinkuyskärokoteliuos voidaan laimentaa 1/75 M fosfaattipuskurilla ja muodostuneeseen seokseen voidaan lisätä aluminiumhydroksidigeeliä apuaineena, siten että lisätyn geelin konsentraatioksi tulee noin 0,1 - 0,8 mg/ml. Apuaineena voidaan käyttää myös saostusapuaineita (precipitating depositary adjuvants), kuten kalsiumfos-faattigeeliä, aluminiumfosfaattigeeliä, aluminiumsulfaat-tia, alumiinidioksidia ja bentoniittia ja antigeenituo-tantoa indusoivia apuaineita, kuten muramyylipeptidijohdannaisia, polynukleotideja, Krestiinia ja pikibaniilia. Seoksesta geeli, joka adsorboi hinkuyskätoksoidin, saadaan esimerkiksi sentrifugoimalla, jne., ja muodostuneeseen geeliin lisätään ainakin yksi farmaseuttisesti hyväksyttävä kantoaine, täyteaine tai laimennusaine, esimerkiksi puskuri, kuten fosfaattipuskuri.
15 86959
Sen jälkeen näin saatu hinkuyskärokoteliuos, joka sisältää geeliin adsorboitunen hinkuyskätoksoidin, kaadetaan erikseen pienen astiaan, kuten ampulliin ja pienpulloon ja suljetaan. Näin on saatu puhdistettu, adsorboitu hinkuyskärokote, joka sisältää adsorboituneen hinkuyskätoksoidin tehokkaana immunogeenisena määränä antaen tartuntaa vastustavan kyvyn henkilölle, joka saa rokotuksen. Hinkuyskätoksoidin tällainen tehokas, immunogeeninen määrä rokotteessa voi olla noin 7 - noin 15 pg proteiini-typpeä per ml. Ei ole edullista käyttää hinkuyskätoksoi-dia määränä, joka on enemmän kuin 15 pg proteiinityppeä per ml, koska mitään huomattavaa lisäystä immunisaatio-vaikutuksessa ei saavuteta mutta rokotusvalmisteen kustannukset kohoavat. Ei myöskään ole edullista käyttää hinkuyskärokotetta määränä, joka on vähemmän kuin noin 7 pg proteiinityppeä per ml, koska toivottu immunisaa-tiovaikutus ei aina heti synny. Tuotetun rokotteen laatua on tutkittu artikkelin "Adsorbed Pertussis Vaccine" mukaan, Japanin terveys- ja sosiaaliministeriön tiedonannossa nro 159, "Minimum Requirements for Biological Products". Näin tuotettu, adsorboitu hinkuyskärokote on neste. Adsorboitu hinkuyskärokote voidaan lyofilisoidaan adsorboidun hinkuyskärokotteen saamiseksi kuivatussa muo-• ’ dossa. Tällaisella kuivatulla, adsorboidulla hinkuyskäro kotteella on parempi kuumankestävyys ja kylmänkestävyys. Lyofilisointi voidaan tehdä yleensä tavanomaisella menetelmällä, sen jälkeen kun nestemäinen, adsorboitunut hinkuyskärokote on laitettu astiaan, kuten pienpulloon tai ampulliin. Lyofilisoimisen jälkeen typpikaasua johdetaan astiaan, joka sisältää kuivatun rokotteen, jonka jälkeen astia suljetaan. Sen jälkeen kuivattu rokote varastoidaan. Stabiilisuuden kannalta katsottuna on edullista, että varastoinnin aikana adsorboitu hinkuyskärokote on kuivatussa muodossa.
Edelleen tämän keksinnön mukaisesti hinkuyskätoksoidin stabiilisuuden lisäämiseksi rokotteessa, voidaan stabi- 16 86959 loimisainetta lisätä adsorboituun hinkuyskärokotteeseen, joka on nestemäisessä muodossa. Stabiloimisaineista, joita voidaan käyttää tässä keksinnössä, voidaan mainita gelatiini ja gelatiinijohdannaiset. Gelatiinia ja gelatiini johdannaisia voidaan käyttää pelkästään tai yhdistelmänä. Gelatiinina voidaan käyttää esimerkiksi puhdistettua gelatiinia, joka on Japanin farmakopean mukaista ja vastaavia. Gelatiinijohdannaisina voidaan käyttää esimerkiksi Gelysatea® (valmistaja ja myyjä BBL Co., Ltd., USA), Physiogelia®, Neoplasmagelia®, Gelifundolia®, Haemacce-lia® (valmistaja ja myyjä Hoechst AG, Länsi-Saksa) (jota myös kutsutaan polygeliiniksi), jne. Edellä mainittujen gelatiinijohdannaisten yksityiskohtia kuvataan julkaisussa Developments in Biological Standardization, julkaisija S. Karger, 48, 207-234 (1981).
Näistä Haemaccelia voidaan käyttää kaikkein mieluimmin, koska Haemaccelin turvallisuus on varmistettu ja Haemaccelia käytetään verisubstituuttina tai plasmasubstituut-tina ihmisille. Edellä mainittua stabiloimisainetta voidaan lisätä nestemäiseen, adsorboituun hinkuyskärokotteeseen sellaisena määränä, että stabiloimisaineen konsent-raatioksi muodostuneessa seoksessa voi tulla noin 0,1 -noin 5,0 painoprosenttia.
Käytettäessä kahta tai useampaa erilaista stabiloimisainetta, niitä lisätään sellaisena määränä, että niiden kokonaismäärä tulee edellä mainittujen rajojen sisälle.
Edelleen edellä mainitun stabiloimisaineen lisäksi tarpeen mukaan voidaan lisätä nestemäiseen hinkuyskärokotteeseen ainakin yksi tavanomainen tunnettu stabiloimisai-ne, esimerkiksi sokereita, kuten glukoosia, fruktoosia, galaktoosia, sakkaroosia ja laktoosia ja aminohappoja, kuten glysiiniä, alaniinia, lysiiniä, arginiinia ja glutamiinia. Tällaista stabiloimisainetta voidaan lisätä 17 86959 sellainen määrä, että kunkin stabiloimisaineen konsent-raatio muodostuneessa seoksessa voi olla noin 0,1 - noin 8,0 painoprosenttia.
Näin tuotettu hinkuyskärokote sisältää stabiloimisaineen nestemäisessä muodossa. Nestemäinen hinkuyskärokote voidaan lyofilisoida edellä mainitulla tavalla, jolloin saadaan adsorboitu hinkuyskärokote kuivatussa muodossa, joka sisältää stabiloimisaineen. Stabiilisuuden kannalta varastoinnin aikana on edullista, että adsorboitu hinkuyskärokote sisältää stabiloimisaineen, joka on kuivatussa muodossa.
Edellä mainitun adsorboidun hinkuyskärokotteen laatua, joko nestemäisessä muodossa tai kuivassa muodossa, voidaan tutkia edellä mainitun tiedotteen nro 159 mukaisesti, jonka on julkaissut Japanin terveys- ja sosiaaliministeriö.
[6] Sekarokotteen valmistus: Tämän keksinnön mukainen rokote voidaan valmistaa sekarokotteen muodossa, joka sisältää tämän keksinnön mukaisen, adsorboidun hinkuyskätoksoidin ja ainakin yhden antigeenin, joka on muu kuin tämä hinkuyskätoksoidi. Antigeeninä, joka on muu kuin tämä hinkuyskätoksoidi, voidaan käyttää mitä tahansa antigeeniä, joita tavallisesti käytetään vastaavien rokotteiden aktiiviaineina, mikäli tällaisten muiden antigeenien ja hinkuyskätoksoidin sivuvaikutukset ja haitalliset reaktiot eivät ole additiivisesti tai synergistisesti lisääntyneet käytettäessä hinkuyskä-toksoidia ja tällaisia muita antigeenejä yhdistelmänä, eivätkä hinkuyskätoksoidin ja tällaisten muiden antigeenien antigeenisyydet ja immunogeenisyydet ole alentuneet hinkuyskätoksoidin ja muiden antigeenien välillä tapahtuvan vuorovaikutuksen seurauksena. Antigeenien, joita voi ie 86959 daan sekoittaa hinkuyskätoksoidin kanssa, lukumäärä tai laatu ei ole rajoitettu, sikäli kuin sivuvaikutukset ja haitalliset reaktiot eivät lisäänny additiivisesti tai synergistisesti, eikä hinkuyskätoksoidin eikä tällaisten antigeenien antigeenisyys ja immunogeenisyys ole alentunut kuten edellä mainittiin. Yleensä kahdesta kuuteen antigeeniä, muuta kuin hinkuyskätoksoidia, voidaan sekoittaa hinkuyskätoksoidin kanssa. Antigeeneinä, joita voidaan sekoittaa tämän keksinnön mukaisen hinkuyskätoksoidin kanssa, voidaan mainita esimerkiksi myrkyttömäksi tehdyt antigeenit, inaktivoidut antigeenit tai toksoidit, jotka ovat peräisin seuraavista: kurkkumätäbakteeri, jäykkäkouristusbakteeri, lavantautibakteeri, pikkulavan-tautibakteeri, kolerabakteeri, gonokokki, meningokokki, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coll, Haemophilus influenza, streptokokki ryhmä A ja ryhmä B, streptococcus pneumoniae, pneumokokki, Legionella, Rickettsia prowaze-kll, Rickettsia reckettsll, leptospira, Leptospira inte-rohaemorrhaqla (Weilin taudin patogeeni), malariaparasii-tit, Coccldioldes immltis, maksamato, toksoplasma, trypa-nosooma, leismania, hepatiitti-B-virus, japanilainen ai-votulehdusvirus, influenssavirukset tyypit A ja B, pa-rainfluenssavirus, AIDS-virus, Trlmeresurus-laj iin kuuluvien käärmeiden myrkyt ja vastaavat.
Edelleen yleisesti tunnettuja, keinotekoisia antigeenejä voidaan myös käyttää. Edellä mainitut antigeenit voivat olla adsorboituna apuaineeseen. Apuaineena voidaan käyttää edellä mainittuja.
Tämän keksinnön mukainen sekarokote voidaan valmistaa seuraavalla tavalla. Alkuperäinen hinkuyskärokoteliuos, joka sisältää hinkuyskätoksoidin, saadaan kuten edellä kohdassa [4] kuvattiin. Erikseen tavanomaisen menetelmän mukaisesti valmistetaan liuokset, joista jokainen sisältää hinkuyskätoksoidin kanssa sekoitettavaksi tarkoitetun i9 86959 antigeenin. Sen jälkeen alkuperäiseen hikuyskärokote-liuokseen, joka sisältää hinkuyskätoksoidin, lisätään liuos tai liuokset, joista jokainen sisältää antigeenin, joka on muu kuin hinkuyskätoksoidi. Sen jälkeen muodostuneeseen seokseen lisätään ainakin yksi farmaseuttisesti hyväksyttävä kantoaine, laimennusaine tai täyteaine. Tämän keksinnön mukainen sekarokote valmistetaan siten, että sekarokote voi sisältää hinkuyskätoksoidia tehokkaan, immunogeenisen määrän, eli noin 7-15 /^g proteii- niantigeenia per sekarokotteen ml ja tehokkaan, immunogeenisen määrän kutakin antigeeniä, muuta kuin hinkuyskätoksoidia. Jokaisen antigeenin, muun kuin hikuyskätoksoi-din, tehokas, immunogeeninen määrä vaihtelee antigeenila-jin mukaisesti.
Kuvaavana esimerkkinä tämän keksinnön mukaisen sekarokotteen valmistuksesta esitetään seuraavassa hinkuyskätoksoidin, kurkkumätätoksoidin ja jäykkäkouristustoksoidin sisältävän sekarokotteen valmistus. Tavanomaisella menetelmällä saadusta kurkkumätäsauvabakteeri-viljelmästä eristetään kurkkumätä-(diphteria)toksoidi ja puhdistetaan tavanomaisella, tunnetulla menetelmällä. Pääasiassa samalla tavalla kuin kuvataan kohdassa [3] alkuperäinen puhdistettu kurkkumätätoksoidi tehdään myrkyttömäksi ja alkuperäinen kurkkumätärokoteliuos valmistetaan olennaisesti samalla tavlla kuin edellä kohdassa [4] on esitetty. Erikseen valmistetaan alkuperäinen jäykkäkouristusro-koteliuos jäykkäkouristussauvabakteeri-viljelmästä olennaisesti samalla tavalla kuin juuri edellä mainittiin. Hinkuyskätoksoidina käytetään alkuperäistä hinkuyskäroko-teliuosta, joka saatiin edellä kohdassa [3]. Jokaiseen näin saatuun, aluperäiseen rokoteliuokseen lisätään apuaine, jolloin saadaan alkuperäiset, adsorboidut rokote-liuokset. Näin saadut, adsorboidut rokoteliuokset sekoitetaan sellaisessa suhteessa, että hinkuyskätoksoidin, kurkkumätätoksoidin ja jäykkäkouristustoksoidin konsent- 20 86959 raatioiksi tulee noin 21 - noin 45 yg proteiinityppeä per ml, noin 90 Lf/ml ja vastaavasti noin 21 Lf/ml. Näin on saatu sekarokote, joka sisältää adsorboidun hinkuyskä-toksoidin, adsorboidun kurkkumätätoksoidin ja adsorboidun jäykkäkouristustoksoidin. Näin saatuun sekarokotteeseen voidaan lisätä ainakin yksi stabiloimisaine, joka on gelatiini tai gelatiinijohdannainen sellaisena määränä, että stabiloimisaineen konsentraatioksi tulee noin 0,1 -noin 5,0 painoprosenttia.
Edellä saatu sekarokote lyofilisoidaan kuivatun sekaro-kotteen valmistamiseksi. Näin saatu, kuivattu sekarokote sisältää edellä mainittua stabiloimisainetta sellaisen määrän, että kun sekarokote liuotetaan veteen siten, että saadaan vesipitoinen liuos, joka sisältää hinkuyskätok-soidia konsentraatiossa noin 7 - noin 15 yg proteiinityppeä per ml, stabiloimisaineen konsentraatioksi tulee noin 0,1 - noin 5 painoprosenttia. Näin tuotetun rokotteen laatua tutkitaan artikkelin "Mixed Adsorbed Vaccine for Pertussis, Diphtheria and Tetanus" mukaisesti, Japanin terveys- ja sosiaaliministeriön tiedonannossa nro 159, "Minimum Requirements for Biological Products". Tämän keksinnön mukainen sekarokote ei ole rajoitettu edellä mainittuun sekarokotteeseen, vaan sellainen voidaan valmistaa sekoittamalla tämän keksinnön mukainen hinkuyskätoksoidi, minkä tahansa edellä mainitun antigeenin kanssa.
Yleensä tämän keksinnön mukainen rokote voidaan sisällyttää ja sulkea pienpulloon, ampulliin tai vastaaviin. Tämän keksinnön mukainen rokote voidaan yleensä annostaa nesteenä tai suspensiona. Siinä tapauksessa, että rokote on kuivatussa muodossa, rokote liuotetaan tai suspendoi-daan steriloituun, tislattuun veteen ennen annostusta. Hinkuyskätoksoidin konsentraatio tämän keksinnön mukaisessa rokotteessa voi yleensä olla noin 7 - noin 15 yg 2i 86959 proteiinityppeä per ml, kuten edellä mainittiin. Yleensä rokote voidaan annostaa subkutaanisesti. Rokotteen annos henkilöä kohden voi yleensä olla noin 0,5 ml. Rokotetta voidaan yleensä annostaa kolme kertaa noin kolmen - kahdeksan viikon aikavälein ja sen jälkeen noin vuoden -puolentoista vuoden kuluttua annostetaan vielä kerran.
[7] Diagnostinen valmiste hinkuyskän toteamiseksi
Kuten edellä mainittiin tämän keksinnön mukainen seka-antigeeni on käyttökelpoinen myös hinkuyskän diagnostisoimiseksi, erityisesti immunologisessa diagnostiikassa hinkuyskäinfektioiden havaitsemiseksi ja sen määrittämiseksi, kärsivätkö potilaat hinkuyskästä vai eivät. Yleensä diagnostisen valmisteen valmistamiseksi hinkuyskälle, tämän keksinnön mukainen seka-antigeeni erotetaan kahteen komponenttiin, nimittäin PTrhen ja F-HA:han, ja kumpaakin sekä PT:tä että F-HA:ta käytetään yksinään diagnoosissa. Seka-antigeenin erottaminen PT:hen ja F-HA:hän voidaan yleensä suorittaa tavanomaisella menetelmällä, kuten hyd-roksiapatiittipylväskromatografisesti. Kumpaakin sekä PT:tä että F-HA:ta voidaan tehokkaasti käyttää ELISA-diagnoosissa (Enzyme-linked immunosorbent assay), käänteisessä passiivisessa hemagglutinaatio-reaktiotestissä ja muissa erilaisissa testeissä, joissa antigeenin tai vasta-aineen leimaamiseen käytetään fluoroivaa pigmenttiä, entsyymiä, radio-isotooppia tai vastaavaa. Yleisesti diagnostista käyttöä varten sekä PT että F-HA voidaan erikseen sisällyttää ja sulkea pienpulloon tai pieneen koeputkeen. Vaihtoehtoisesti kumpikin, sekä PT että F-HA, voidaan myös erikseen adsorboida tavallisen suodatinpaperin, membraanin tai mikrolevyn pinnalle.
Tällä menetelmällä on seuraavat edut.
(1) Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä Bordetella pertussis -bakteerin viljelemiseksi voidaan saada viljel- 22 86959 mä, joka sisältää seka-antigeenin, jossa on lisääntynyt määrä PT:tä ja F-HA:ta. Edelleen tämän menetelmän mukaisesti tällainen viljelmä voidaan saada alhaisilla kustannuksilla verrattaessa sellaisiin, jotka saadaan tavanomaista tekniikkaa käyttäen, kuten tekniikalla, jossa Bordetella pertusslsta viljellään syklodekstriinin läsnäollessa, koska selluloosa ja selluloosajohdannaiset, joita käytetään tässä keksinnössä, ovat helposti saatavissa alhaisilla kustannuksilla.
(2) PT:n ja F-HA:n painosuhde tämän keksinnön mukaisessa seka-antigeenissa, jossa PT ja F-HA ovat raaka-aineita tämän keksinnön mukaisen rokotteen aktiiviaineiksi, on noin 1:1. Tämä on edullista, koska tehokkuuden kannalta on hyvä, että hinkuyskärokote sisältää toksoidit, jotka vastaavasti on johdettu PT:stä ja F-HA:sta painosuhteessa noin 1:1, ja tällainen hinkuyskärokote voidaan tehokkaasti ja työtä säästäen valmistaa tämän keksinnön mukaisesta seka-antigeenista.
(3) Viljelyn jälkeen selluloosa ja selluloosajohdannaiset voidaan helposti poistaa viljelmästä ja siten voidaan helposti ja tehokkaasti saada erittäin puhdasta PT:tä ja F-HA:ta alhaisin kustannuksin.
(4) Näin saadut PT ja F-HA ovat yhtenäisiä laadultaan ja sen vuoksi tämän keksinnön mukainen hinkuyskätoksoidi, joka saadaan PT:stä ja F-HA:sta tavanomaisella myrkyttömäksi tekevällä menetelmällä, jossa käytetään formaliinia, on myös tasalaatuinen. Edelleen tämän keksinnön mukainen hinkuyskätoksoidi ei muutu takaisin myrkylliseen tilaan säilytyksen aikana. Sen vuoksi tämä toksoidi on erinomainen stabiilisuudeltaan ja turvallisuudeltaan.
(5) Tämän keksinnön mukaisen, kuivatun rokotteen, joka sisältää stbailoimisaineena ainakin yhden aineen, joka on li 23 86959 gelatiini tai sen johdannainen, tiitteri ei laske varastoitaessa 3 vuoden ajan lämpötilassa, joka on -20°C -37°C ja yli 3 kuukautta 50*C:ssa. Tämän keksinnön mukainen, kuivattu rokote on erittäin pysyvä ja helppo käsitellä.
Seuraavassa tätä keksintöä kuvataan yksityiskohtaisesti, viitaten seuraaviin vertailuesimerkkeihin ja esimerkkeihin, joiden ei pidä katsoa rajoittavan tämän keksinnön piiriä.
Viite-esimerkki 1
Muunnetun Stainer-Scholte-kasvualustan valmistus:
Ensimmäisen ryhmän komponentit, jotka jäljempänä esitetään, ja toisen ryhmän komponentit, jotka myös on esitetty jäljempänä, liuotetaan erikseen sopiviin tilavuuksiin tislattua vettä kahden liuoksen valmistamiseksi. Sen jälkeen liuos, jossa on ensimmäisen ryhmän komponentit, steriloidaan autoklaavilla. Toisaalta liuos, joka sisältää toisen ryhmän komponentit, steriloidaan suodattamalla. Ennen käyttöä molemmat steriloidut liuokset sekoitetaan ja seokseen lisätään steriloitua vettä niin, että seoksen kokonaistilavuudeksi tulee 10 1.
Ensimmäisen ryhmän komponentit: natriumkloridia 25,0 g natriumdivetyfosfaattia 5,0 g magnesiumkloridi-heksahydraattia 1,0 g kalsiumkloridi-dihydraattia 0,2 g kuparisulfaatti-pentahydraattia 0,005 g kasaminohappoa 100,0 g L-proliinia 2,4 g natriumglutamaattia 100,0 g tris 15,3 g 24 86 959
Toisen ryhmän komponentit: L-kystiiniä 0,4 g rauta(2)sulfaatti-heptahydraattia 0,1 g askorbiinihappoa 0,2 g niasiinia 0,4 g
Viite-esimerkki 2
Parannetun Pope-kasvualustan valmistus:
Alustalla on seuraava koostumus ja sitä käytetään autoklaavilla suoritetun steriloinnin jälkeen.
kalsiumkloridia 0,6 g dinatriumvetyfosfaattia 1,0 g L-kystiiniä 0,15 g maltoosia 31,0 g liuosta II1) 4,0 g lihalientä1) 1000,0 ml
Huomautus: l) Liuoksen II koostumus on seuraava: magnesiumsulfaattia 2,25 g kuparisulfaattia 0,5 g mangaanikloridia 0,15 g sinkkisulfaattia 0,4 g β-alaniinia 1,15 g nikotiinihappoa 1,15 g pimeliinihappoa 0,075 g kloorivetyhappoa 30,0 ml tislattua vettä 1000,0 ml
Lihaliemi valmistetaan seuraavalla tavalla. 17 litraan tislattua vettä lisätään 5,1 kg hienonnettua lihaa. Muodostuneen seoksen annetaan seistä yön yli. Sen jälkeen näin saadun seoksen lämpötila nostetaan ja pidetään 25 86 9 59 60°C:ssa vesihauteella ja seokseen lisätään 6,2 kg papa-iinia [valmistaja Merck & Co., Inc., USA (valkuaisen-hydrolysointikyky 1:350)] ja seosta hämmennetään 2 tuntia hienonnetun lihan digeroimiseksi seokseen. Sen jälkeen muodostunutta seosta kuumennetaan 90-95eC:ssa 10 minuutin ajan. Sitten seokseen lisätään Celiteä suodatusapuaineek-si ja saatu seos suodatetaan käyttäen suodatuspaperia. Näin saatua suodosta käytetään lihaliemenä.
viite-esimerkki 3
Parannetun ΡΙΙ-kasvualustan valmistus:
Kasvualustalla on seuraava koostumus ja sitä käytetään autoklaavilla suoritetun steriloimisen jälkeen: sydänuutetta1) 15,0 g polypeptonia1) 20,0 g natriumkloridia 5,0 g magnesiumsulfaattia 0,2 g dinatriumvetyfosfaattia 0,16 g kaliumdivetyfosfaattia 0,1 g glukoosia 7,5 g pelkistettyä rautaa 0,25 g tislattua vettä 1000,0 ml
Huomautus: 1) Sydänuutetta valmistaa ja myy Nissui Pharmaceutical Co., Ltd., Japani.
Polypeptonia valmistaa ja myy Daigo Eioy Kagaku Co., Ltd., Japani.
26 86 959
Viite-esimerkki 4 Fosfaattipuskurin valmistus:
Fosfaattipuskuri valmistetaan sekoittamalla vesipitoinen dinatriumvetyfosfaattiliuos, jolla on toivottu konsent-raatio, vesipitoisen kaliumdivetyfosfaattiluoksen kanssa, jonka konsentraatio on sama kuin dinatriumvetyfosfaatti-liuoksen, sellaisessa tilavuussuhteessa, että muodostuneella seoksella on haluttu pH.
Viite-esimerkki 5
Fosfaattipuskuroidun suolaliuoksen (PBS) valmistus: PBS valmistetaan liuottamalla dinatriumvetyfosfaatti ja kaliumdivetyfosfaatti liuokseen, jossa on 6,8 g/1 nat-riumkloridia, niin että muodostuneella liuoksella on haluttu pH.
Viite-esimerkki 6
Bakteerien solukonsentraation määrittäminen:
Bakteerien solukonsentraatio kasvualustassa määritetään mittaamalla sameus (turbidimetrisesti). Käytetään kolori-metria, joka on mallia Junior II (valmistaja ja myyjä Coleman Co., Ltd., USA). Bakteerien solukonsentraatio viljelmässä määritetään viljelmän sameuden perusteella vertaamalla tunnetun solukonsentraation omaavan standar-dibakteeriliuoksen [saatavissa Japanin kansanterveysins-tituutista (National Institute of Health, Japan)] sameuteen. Viljelmän solukonsentraatio ilmoitetaan yksikkönä IOU/ml (IOU = International Opacity Unit).
27 8 6 959
Viite-esimerkki 7 F-HA-tiitterikoe:
Erytrosyytit saadaan 3 päivää vanhoista kanoista. Erytro-syytit kiinnitetään formaliinilla ja formaliinilla kiinnitetyt erytrosyytit suspendoidaan 1/75 M PBSrään, jossa on 0,1 paino/til.-% naudan seerumialbumiinia, 0,001 pai-no/til.-% gelatiinia ja 0,1 paino/til.-% natriumnitridiä, erytrosyyttikonsentraation ollessa 0,6 til./til.-%. Näytteelle, josta F-HA-tiitteri on määritettävä, suoritetaan kahdennuslaimennus. Kumpaakin saatuun laimennokseen lisätään yhtä suuret tilavuudet edellä mainittua erytrosyyt-tisuspensiota, jonka jälkeen sekoitetaan. Sen jälkeen kumpaakin muodostunutta seosta tarkastellaan paljaalla silmällä, sen toteamiseksi, onko liuoksessa tapahtunut täydellinen hemagglutinaatio vai eikö. Havaintotuloksista saadaan suurin laimennossuhde, jossa vielä on tapahtunut täydellinen hemagglutinaatio. Näytteen F-HA-tiitteri määritetään näin saadun suurimman laimennossuhteen käänteisarvona ja ilmoitetaan yksikkönä HAU. Näytteen laimentamiseksi käytetään 1/75 M PBS:ää, jossa on 0,2 paino/til.-% naudan seerumialbumiinia.
Viite-esimerkki 8 PT-tiitterikoe
Ihmisen haptoglobiinia (valmistaja ja myyjä Green Cross Corporation, Japani) liuotetaan natriumkarbonaattipusku-riin (pH 9,6) niin, että ihmisen haptoglobiinin lopulliseksi konsentraatioksi tulee 2 pg/ml. Näin saadun seoksen annetaan seistä 4eC:ssa yön yli polystyreenistä valmistetulla mikrolevyllä (valmistaja ja myyjä Greiner Co., Ltd., Länsi-Saksa) niin, että haptoglobiini adsorboituu ja immobilisoituu mikrolevylle. Käyttäen näin saatua 28 36959 haptoglobiini-immobilisoitua mikrolevyä yhdessä anti-PT-kaniiniseerumin ja alkalisen fosfataasi-sitoutuneen anti-kaniini igG:n kanssa testataan näytteen PT-tiitteri tavanomaisella, tunnetulla ELlSA-menetelmällä. Testin tulos on automaattisesti luettavissa ELISA:n lukulaitteelta (valmistaja ja myyjä Dinatech Co., Ltd., USA) ja tuloksen laskee elektroninen tietokone jolloin PT-tiitteri saadaan. PT-tiitteri ilmoitetaan ELISA U/ml.
Anti-PT-kaniiniseerumi saadan seuraavalla tavalla.
PT adsorboidaan aluminiumfosfaatille ja injektoidaan kaniiniin subkutaanisesti. Noin 40 päivää myöhemmin kanista otetaan verta, joka sentrifugoidaan. Näin saadaan anti-PT-kaniiniseerumi. Alkalinen fosfataasi-sitoutunutta anti-kaniin IgG:tä valmistaa ja myy Miles-Yeda Co., Ltd., Israel.
Viite-esimerkki 9 F-HA:n ja PT:n painosuhteen määrittäminen
Menetelmä (A): Käyttäen F-HA:n ja PT:n standardinäyttei-tä, joilla on tunnetut aktiivisuudet ja proteiinimäärät ja puhtaus noin 100 % (saatavissa Japanin kansanterveys-instituutista) testataan näytteen vastaavat F-HA- ja PT-aktiivisuudet tavanomaisella, tunnetulla ELISA-menetel-mällä ja näin saatujen aktiivisuksien perusteella lasketaan F-HA:n ja PT:n painosuhde.
Menetelmä (B): Happamissa olosuhteisa näytteelle suoritetaan polyakryyliamidigeeli-elektroforeesi. Sen jälkeen näin saatu geeli värjätään Coomassie Brilliant Bluella PT- ja F-HA-juovien tekemiseksi näkyviksi. Sitten geelille suoritetaan geelin optisen tiheyden määrittäminen juovien pinta-alojen mittaamiseksi. Jokaisen F-HA- ja PT-juovan pinta-alasta lasketaan F-HA:n ja PT:n painosuhde.
29 86959
Molempien edellä mainituilla menetelmillä (A) ja (B) saatujen, laskettujen painosuhteiden perusteella määritetään lopullisesti F-HA:n ja PT:n painosuhde.
Viite-esimerkki 10
Endotoksiinin määrän määrittäminen
Endotoksiinin määrän määrittämiseksi näytteessä käytetään Limulus-testipakkausta Wako (valmistaja ja myyjä Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japani). Limulus-testissä käytetään Limulus-amebosyyttilysaattia (LAL).
Viite-esimerkki 11
Toksoidin toksiiniksi muuttumisen negatiivinen testi
Testi suoritetaan hiiren leukosyyttejä sisältävällä testillä ja histamiinin herkkyystestillä, jotka on määritelty artikkelissa "Pertussis vaccine", Japanin terveys-ja sosiaaliministeriön tiedotteessa ro 159, "Minimum Requirements for Biolocial Products".
Viite-esimerkki 12
Testi sekä kurkkumätätoksoidin että jäykkäkouristustok-soidin tiittereiden määrittämiseksi
Tavanomaisen hiutale (flocculation) testin mukaisesti käyttäen standardi anti-toksiinia (saatavissa Japanin kansanterveysinstituutilta), testattiin sekä kurkkumätätoksoidin että jäykkäkouristustoksoidin tiitterit. Tiit-terit esitetään Lf/ml:na.
30 8 6 959
Viite-esimerkki 13
Rokotteen toksoiditiitterin määrittäminen in vivo (A) Hinkuyskätoksoidin tiitteri testataan hiiren aivojensisäistä altistusta mittaavalla menetelmällä.
(B) Kurkkumätätoksoidin tiitteri testataan kaniinin ihonsisäisellä inj ektiomenetelmällä.
(C) Jäykkäkouristustoksoidin tiitteri testataan toksiini-altistusmenetelmällä immunoiduissa marsuissa ja immunoi-duissa hiirissä.
Edellä mainittujen testien suhteen viitataan artikkeleihin "Purified adsorbed pertussis vaccine", "Adsorbed diphtheria toxoid" ja "Adsorbed tetanus toxoid", jotka sisältyvät Japanin terveys- ja sosiaaliministeriön tiedonantoon nro 159, "Minimum Requirements for Biological Products". Edellä mainituilla testeillä saadut tiitterit ilmoitetaan yksiköissä IU/ml (IU = International Unit).
Viite-esimerkki 14
Proteiinitypen määrän määrittäminen Näytteeseen lisätään trikloorietikkahappoa proteiinin saostamiseksi. Näin saostettu proteiini kerätään ja proteiinitypen määrä määritetään tavanomaisella, tunnetulla mikro-Kj eldahl-menetelmällä.
Esimerkki 1 [Bordetella pertussis kannan TOHAMA (faasi I) viljeleminen] 141 litraa.liuosta, joka sisältää edellä mainitun ensimmäisen ryhmän komponentit, modifoitua Stainer-Scholte- 3i 56959 kasvualustaa varten määrä, joka on tarpeellinen 150 litran kasvualustaa valmistamiseksi, valmistetaan viite-esimerkin l kuvauksen mukaisesti. Sen jälkeen liuos laitetaan fermentoritankkiin, jonka kapasiteetti on 200 litraa ja joka on varustettu sekoituslavalla ja sen pohja ilmastusputkella ilman johtamiseksi tankkiin. Sen jälkeen tankissa oleva liuos steriloidaan 120eC:ssa 30 minuutin ajan paineessa, jonka jälkeen jäähdytetään. Steriloituun liuokseen lisätään 1 500 ml steriloitua liuosta, jossa on edellä mainitun toisen ryhmän komponentit modifioitua Stainer-Scholte-kasvualustaa varten määränä, joka on tarpeellinen 150 litran kasvualustaa valmistamiseksi, ja 7 500 ml steriloitua 2 paino/paino-%:ista metyylisellu-loosaliuota ja sekoitetaan, jolloin muodostuu nestemäinen kasvualusta, joka sisältää metyyliselluloosaa konsentraa-tiossa 0,10 painoprosenttia.
Sen jälkeen näin valmistettu kasvualusta ympätään Borde-tella pertussis kannalla TOHAMA (faasi I) niin, että kannan lopulliseksi solukonsentraatioksi tulee 0,5 IOU/ml. Kantaa TOHAMA (faasi I) säilytetään Japanin kansanter-veysinstituutissa ja se on saatavissa instituutista. Tämä kanta on myös talletettu talletuslaitokseen Institute for Fermentation, Osaka, Japani, talletusnumerolla IFO-14073 sekä American Type Culture Collection-talletuslaitokseen numerolla ATCC 53793. Sen jälkeen muodostunutta kasvualustaa viljellään 35eC:ssa 48 tunnin ajan, samalla sekoittaen ja ilmastaen. Kasvualustan sekoittaminen suoritetaan pyörittämällä sekoituslapaa 220 kierr./min ja kasvualustan ilmastaminen suoritetaan johtamalla ilmaa virtausnopeudella 50 1/min ilmastusputken läpi, joka on asennettu fermentoritankin pohjaan.
Erikseen olennaisesti samat, edellä esitetyt menetelmä-vaiheet toistetaan, paitsi että metyyliselluloosan kon-sentraatiota kasvualustassa vaihdellaan, kuten taulukossa 1 on esitetty.
ο δ o r n 32 u & . ' ~ :> 24 tunnin ja 48 tunnin kuluttua inkuboinnin aloituksesta viljelmästä otetaan 50 ml:n näytteet. Näytteistä määritetään kannan solukonsentraatio ja F-HA-tiitteri sekä PT-tiitteri menetelmillä, jotka on kuvattu viite-esimerkeissä 6, 7 ja 8. Tulokset on esitetty taulukossa 1. Kuten taulukosta 1 käy ilmi, metyyliselluloosan lisääminen nostaa huomattavasti F-HA:n ja PT:n saantoja. Toisin sanoen F-HA:n ja PT:n saannot ovat noin 10 - 100 kertaa suuremmat kuin ne arvot, jotka saadaan F-HA:lie ja PT:lle silloin, kun metyyliselluloosaa ei lisätä kasvualustaan. Edelleen F-HA:n painosuhteen PT:hen havaitaan olevan noin 1:1.
Taulukko 1
Lisätyn metyy- Inkuboinnin Solu- liselluloosan aloituk-, konsen- F-HA- PT-Tiitteri
konsentraatio sesta kulunut traatio Tiitteri (ELISA
(paino/paino-%) aika (tunnit) (IOU/ml) (HAU) U/ml) ei yhtään 24 37 4 110 48 115 2 160 0,02 24 50 1 6 550 48 128 512 1800 0,10 24 48 64 740 48 130 2048 2550 0,50 24 53 64 710 48 140 2048 2100
Esimerkki 2 (F-HA:n ja PT:n puhdistaminen) Käyttäen jatkuvatoimista sentrifuugia, sentrifugoidaan esimerkissä 1 saatu Bordetella pertussis -viljelmä, 13 500 kierr./min virtausnopeuden ollessa 800 ml/min su-pernatantin saamiseksi. Sen jälkeen 10 litraan superna- 33 86959 tanttia lisätään 4 kg ammoniumsulfaatti suoloituksen suorittamiseksi, tällöin liuoksessa muodostuu saostuma. Seos, johon saostuma muodostuu, sentrifugoidaan seoksen erottamiseksi saostumaan ja supernatanttiin ja sakka kerätään. Kerätty sakka liuotetaan 0,05 M fosfaattipuskuriin, joka sisältää 1 M natriumkloridia, ja näin saatu seos laitetaan sakkaroosiliuokseen, jonka sakkaroositi-heysgradientti on 5 - 15 paino/paino-%, ja siirretään sentrifuugiputkeen, jonka jälkeen sentrifugoidaan 33 000 kierr./min 20 tuntia käyttäen vyöhyke (zonal) sentrifuu-gia. Sentrifugoinnin jälkeen liuos, joka saadaan edellä mainitulla sentrifugoinnilla, jaetaan 30 fraktioon vastaavien sakkaroosikonsentraatioidensa järjestyksessä alhaalta ylöspäin. 30 fraktiosta fraktiot 14-22 kerätään fraktiona, joka sisältää puhdistetun hinkuyskäantigeenin, ja käytetään jatkoprosesseissa. Puhdistetun hinkuyskäantigeenin F-HA-tiitteri, PT-tiitteri ja viite-esimerkeissä 8, 9 ja 10. Tuloksena todetaan, että jos esimerkissä 1 saadun viljelmän katsotaan sisältävän F-HA-, PT- ja endo-toksiinitiitterit 100 %:na, F-HA:n ja PT:n saannot vyöhy-kesentrifugoinnin jälkeen ovat 60 % ja vastaavasti 57 %, kun taas endotoksiinin, joka jää poistumatta, prosenttiosuus on 0,001 % (99,999 % endotoksiinista on poistunut).
Esimerkki 3 [Alkuperäisen hinkuyskätoksoidin (tämän jälkeen usein merkitty "P") valmistus]
Puhdistettu hinkuyskäantigeenifraktio, joka saatiin esimerkissä 2, laimennetaan 1/20 M fosfaattipuskurilla laimennetun liuoksen valmistamiseksi, joka sisältää 50,0 pg/ml proteiinityppeä, joka on peräisin edellä mainitusta fraktiosta. Sen jälkeen laimennettuun liuokseen lisätään formaliinia ja L-lysiiniä niin, että formaliinin ja L-lysiinin lopullisiksi konsentraatioiksi tulee 0,4 til./til.-% ja vastaavasti 0,05 moolia. Saatua seosta sekoitetaan, jonka jälkeen kuumakäsitellään 35eC:ssa 20 34 86959 päivää, seoksen sisältämien antigeenien, toisin sanoen F-HA:n ja PT:n tekemiseksi myrkyttömiksi. Näin saatu seos dialysoidaan 4eC:ssa 24 tuntia 1/20 M fosfaattipuskuria vastaan, formaliinin ja L-lysiinin poistamiseksi. Muodostunutta dialysaattia käytetään alkuperäisen hinkuyskätok-soidi (P) liuoksena.
Esimerkki 4 (Nestemäisen, adsorboidun hinkuyskärokotteen valmistus)
Alkuperäinen, esimerkissä 3 saatu P-liuos laimennetaan 1/40 M fosfaattipuskurilla (pH 6,0) niin, että proteiini-typen konsentraatioksi tulee 10 pg/ml. Muodostuneeseen liuokseen lisätään aluminiumfosfaattigeeliä sellainen määrä, että aluminiumfosfaattigeelin konsentraatioksi tulee 0,2 mg Al/ml. Muodostunutta seosta sekoitetaan 4eC:ssa 5 tuntia hinkuyskätoksoidin adsorboimiseksi geeliin. Sen jälkeen seos sentrifugoidaan käyttäen sentri-fuugia (valmistaja ja myyjä Kokusan Enshinki Co., Ltd., Japani) 2 000 kierr./min 4*C:ssa 20 minuutin ajan, jolloin muodostuu geelikerros, joka kerätään. Kerätty geeli-kerros suspendoidaan 1/75 M fosfaattipuskuriin (pH 6,5), niin että hinkuyskätoksoidin ja aluminiumfosfaattigeelin lopullisiksi konsentraatioiksi tulee 10 yg proteiinityp-peä/ ml ja vastaavasti 0,2 mg Al/ml. Sen jälkeen muodostuneeseen suspensioon lisätään sakkaroosia, L-arginiinia ja Haemaccelia (valmistaja ja myyjä Hoechst Co., Ltd., Länsi-Saksa) tässä järjestyksessä niin, että niiden lopullisiksi konsentraatioiksi tulee 3 paino/til.-%, 1 paino/ til.-% ja vastaavasti 2 paino/til.-%. Sen jälkeen 'saatu seos laitetaan 10 ml:n pulloihin määrän ollessa 10 ml/ pullo, näin saadaan nestemäinen, adsorboitu hinkuys-kätoksoidi.
Olennaisesti samat edellä esitetyt menetelmävaiheet toistetaan, paitsi että Haemaccelin konsentraatiota vaihdel- l· 35 86959 laan. Muutamia näin valmistetuista pulloista käytetään säilytystestien suorittamiseksi, joka kuvataan jäljempänä sovellutusesimerkissä 1.
Todetaan, että näin saatu hinkuyskätoksoidi läpäisee erilaiset Japanin terveys- ja sosiaaliministeriön tiedonantoon nro 159 "Minimum Requirements for Biological Products" sisältyvän artikkelin "Purified Adsorbed Pertussis Toxoid" mukaiset testit.
Esimerkki 5 (Kuivatun, adsorboidun hinkuyskärokotteen valmistus)
Olennaisesti samat menetelmävaiheet kuin esimerkissä 4 on esitetty, toistetaan geelin muodostamiseksi, johon hinkuyskätoksoidi adsorboidaan. Muodostunut geeli suspendoi-daan 1/75 M fosfaattipuskuriin (pH 6,5) suhteessa siten, että muodostuneen suspension lopullisksi tilavuudeksi tulee yksi viidesosa hinkuyskätoksoidiliuoksen tilavuudesta ennen toksoidin adsorboimista geeliin, ja muodostuneeseen suspensioon lisätään sakkaroosia, L-arginiinia ja Haemac-celia tässä järjestyksessä sellaisina määrinä, että kun lisätään vettä muodostuneeseen suspensioon 10 ml:n suspension saamiseksi, sakkaroosin, L-arginiinin ja Haemac-celin konsentraatiot suspensiossa tulevat olemaan 3 pai-no/til.-%, 1 paino/til.-% ja vastaavasti 2 paino/til.-%. Näin saatu suspensio laitetaan 10 ml:n pulloihin, määrän ollessa 2,0 ml per pullo. Muutamia näin saaduista pulloista käytetään säilymistestin suorittamiseksi, joka kuvataan jäljempänä sovellutusesimerkissä l, ja loput pulloista lyofilisoidaan kuivatun, adsorboidun hinkuyskärokotteen valmistamiseksi. Lyofiliointi suoritetaan seuraa-valla tavalla. Adsorboitua hinkuyskätoksoidisuspensiota pulloissa jäädytetään -43°C:ssa 3 tunnin ajan. Sen jälkeen jäätynyttä suspensiota lyofilisoidaan 2-4 x 10~2 millibaarin paineessa, peräkkäin -30eC:ssa 53 tuntia ja 36 86959 30°C:ssa 8 tuntia käyttäen lyofilisaattori mallia L-80V, valmistaja ja myyjä Edwards Co., Italia.
Olennaisesti samat menetelmät, jotka on mainittu edellä, toistetaan, paitsi että lisätyn Haemaccelin konsentraa-tiota vaihdellaan, kuivatun, adsorboidun hinkuyskätoksoi-din saamiseksi.
Näin saatu, kuivattu, adsorboitu hinkuyskärokote jokaisessa pullossa suspendoidaan steriiliin, tislattuun veteen, niin että lopulliseksi tilavuudeksi tulee 10 ml. Todetaan, että tämä toksoidisuspensio läpäisee erilaiset Japanin terveys- ja sosiaaliministeriön tiedonannon nro 159 "Minimum Requirements for Biological Products" sisältyvän artikkelin "Purified Adsorbed Pertussis Toxoid" mukaiset testit.
Viite-esimerkki 15 [Kurkkumätätoksoidin (diphtheria toxoid, tämän jälkeen merkitty MD":llä) valmistus
Kurkkumätäbakteerin (diphtheria bacillus) kanta Park Williams (ATCC 13812) ympätään 150 litraan parannettua Pope-kasvualustaa, joka on kuvattu viite-esimerkissä 2, kasvualusta on fermentoritankissa, jonka kapasiteetti on 200 litraa, jollaista käytettiin esimerkissä 1, ja viljellään samalla ilmastaen, ilmastusnopeuden olessa 700 ml/min ja sekoitetaan sekoituslavan pyörimisnopeuden ollessa 200 kierr./min SS’Crssa 48 tunnin ajan. Inkuboinnin jälkeen muodostuneelle viljelmälle suoritetaan jatkuvatoiminen sentrifugointi, käyttäen sentrifuugia malli CSA8 (valmistaja ja myyjä Westfalia Co., USA) huoneen lämpötilassa, 9160 kierr./min ja virtausnopeus 3 1/min, supernatantin valmistamiseksi. Yhteen litraan supernatanttia lisätään 3 g Celiteä suodatusapuaineeksi, jonka jälkeen suodatetaan käyttäen suodatuspaperia, suodoksen valmistamiseksi. Sen jälkeen suodos tiivistetään käyttäen ultrasuodatus- 37 86959 membraania (Module SIP 3013, valmistaja ja myyjä Asahi Chemical Co., Ltd., Japani; katkaisu-molekyylipaino 6000), suodoksen tilavuuden pienentämiseksi yhteen kahdeskymmenesosaan. Muodostunut suodos puhdistetaan. Puhdistus suoritetaan seuraavlla tavalla. Tiivistettyyn suo-dokseen lisätään 0,5 paino/til.-% aktiivihiilijauhetta ja sentrifugoidaan supernatantin saamiseksi. Supernatanttiin lisätään kyllästettyä, vesipitoista ammoniumsulfaattili-uosta, supernatantti/ammoniumsulfaatti-liuoksen tilavuus-suhteen ollessa 40:60, suolan muodostumisen aikaansaamiseksi, tällöin muodostuu sakka. Sakka kerätään ja liuotetaan 0,02 M fosfaattipuskuriin (pH 7,0), jonka jälkeen dialysoidaan 0,02 M fosfaattipuskuria vastaan (pH 7,0) yön yli. Näin saatu dialysaatti siirretään DEAE-pylvää-seen. Sen jälkeen käyttäen eluenttina 0,04 M fosfaatti-puskuria (pH 7,0), eluoidaan DEAE-pylväs puhdistetun D-liuoksen saamiseksi eluaattina. Puhdistamisen jälkeen puhdistettu tuote tehdään myrkyttömäksi, olennaisesti samalla tavalla kuin esimerkissä 3, alkuperäisen D-liuoksen valmistamiseksi.
Viite-esimerkki 16 [Jäykkäkouristustoksoidin (tetanus toxoid, jäljempänä merkitty "T":llä) valmistus] 150 litran parannettua ΡΙΙ-kasvualustaa, joka on kuvattu viite-esimerkissä 3, laitetaan fermentoritankkiin, jollaista käytettiin vaiheessa 1, ja ympätään jäykkäkouris-tusbakteerin Tetanus bacillus kannalla Harvard (ATCC 10779), jonka jälkeen viljellään anaerobisissa oloissa 35°C:ssa 4 päivää, samalla tankkiin johdetaan typpikaasua virtausnopeudella 5 1/min ilmastusputken läpi, joka on asennettu fermentoritankin pohjaan. Yhteen litraan muodostunutta viljelmää lisätään 3 g Celiteä suodatusapuai-neeksi, jonka jälkeen sekoitetaan ja suodatetaan käyttäen suodatuspaperia. Näin saatuun suodokseen lisätään, samalla sekoittaen, formaliinia niin, että formaliinin lopul- 38 86959 liseksi konsentraatioksi tulee 0,4 til./til.-%. Muodostuneen seoksen annetaan seistä 35eC:ssa 4 päivää jäykkäkou-ristustoksiinin tekemiseksi myrkyttömäksi seoksessa. Myrkyttömäksi tekemisen jälkeen saatu liuos puhdistetaan pääasiassa samalla tavalla kuin viite-esimerkissä 15 on esitetty alkuperäisen T-liuoksen saamiseksi.
Esimerkki 6 [Puhdistetun, adsorboidun kurkkumätä-hinkuyskä- jäykkäkouristus (tämän jälkeen usein meritty "DPT":nä) sekarokotteen valmistus]
Alkuperäiset P-, D- ja T-liuokset, jotka saatiin esimerkeissä 3, 6 ja 7, laimennetaan jokainen vastaavasti 1/20 M PBS:llä niin, että antigeenipitoisuudeksi tulee 30 yg proteiinityppeä/ml kun kyseessä on P, 90 Lf/ml D:n ollessa kyseessä ja 21 Lf/ml T:llä. Sen jälkeen jokaiseen saaduista liuoksista lisätään aluminiumfosfaattigeeliä olennaisesti samalla tavalla kuin esimerkissä 4, jokaisen toksoidin adsorboimiseksi geelille. Sen jälkeen yhtä suuret tilavuudet vastaavia, mudostuneita liuoksia sekoitetaan. Lopuksi seokseen lisätään sakkaroosia, L-arginiinia ja Haemaccelia tässä järjestyksessä niin, että sakkaroo-... sin, L-arginiinin ja Haemaccelin lopullisiksi konsentraa- tioiksi tulee 2 paino/paino-%, l paino/paino-% ja vastaavasti 1 paino/paino-%. Muodostunut DPT-sekaliuos laitetaan 10 ml:n pulloihin, määrän ollessa 10 ml per pullo. Todetaan, että tämä rokote läpäisee Japanin terveys- ja sosiaaliministeriön tiedonannon nro 159 "Minimum Requirements for Biological Products" sisältyvän artikkelin "Purified Adsorbed Mixed Vaccine for Pertussis, Diphtheria and Tetanus" mukaiset erilaiset testit.
l· ” 86959
Esimerkki 7 (Puhdistetun, kuivatun, adsorboidun DPT-sekarokotteen valmistus)
Alkuperäiset P-, D- ja T-liuokset, jotka saatiin esimerkeissä 3, 6 ja 7, laimennetaan jokainen vastaavasti 1/20 M PBSrllä niin, että antigeeni-pitoisuudeksi tulee 30 yg proteiinityppeä/ml P:lle, 90 Lf/ml D:lle ja 21 Lf/ml T:lle. Sen jälkeen jokaiseen muodostuneeseen toksoidi-liuokseen lisätään aluminiumfosfaattigeeliä olennaisesti samalla tavalla kuin esimerkissä 4, jokaisen toksoidin adsorboimiseksi geeliin.
Muodostuneesta seoksesta geeli, johon jokainen toksoidi on adsorboitunut, saadaan oleellisesti samalla tavalla kuin esimerkissä 4. Jokainen muodostuneista geeleistä suspendoidaan 1/75 M fosfaattipuskuriin (pH 6,5) suhteessa siten, että muodostuneen suspension lopulliseksi tilavuudeksi tulee yksi viidesosa jokaisen toksoidiliuoksen tilavuudesta ennen toksoidin adsorbointia geeliin olennaisesti samalla tavalla kuin esimerkissä 5. Näin saadaan P-, D- ja T-suspensiot. Sen jälkeen yhtä suuret tilavuudet vastaavia P-, D- ja T-suspensioita sekoitetaan. Lopuksi seokseen lisätään sakkaroosia, L-arginiinia ja Hae-maccelia tässä järjestyksessä, sellaisina määrinä, että kun muodostuneeseen seokseen lisätään vettä, jotta saadaan 10 ml suspensiota, sakkaroosin, L-arginiinin ja Hae-maccelin konsentraatioiksi liuoksessa tulee 2 paino/pai-no-%, 1 paino/paino-% ja vastaavasti 1 paino/paino-%. Muodostunut suspensio laitetaan 10 ml:n pulloihin, määrän ollessa 20 ml per pullo ja lyofilisoidaan olennaisesti samalla tavalla kuin esimerkissä 5 on esitetty, puhdistetun, kuivatun, adsorboidun DPT-sekarokotteen saamiseksi. Todetaan, että rokote läpäisee Japanin terveys- ja sosiaaliministeriön julkaisun nro 159 "Minimum Requirements ..· for Biological Products" sisältyvän artikkelin "Purified
Adsorbed Mixed Vaccine for Pertussis, Diphtheria and Tetanus" mukaiset testit.
40 869 59
Sovellutusesimerkki 1 (Säilytystesti)
Jokaiselle esimerkeissä 4, 5, 6 ja 7 valmistetulle rokotteelle suoritetaan säilyvyystesti -20eC:ssa, 4*C:ssa, 25°C:ssa, 37eC:ssa ja 50*C:ssa 36 kuukauden ajan. Tämän ajanjakson kuluessa jokaisesta rokotteesta otetaan ajoittain näytteet ja näytteiden tiitterit määritetään oleellisesti samalla tavalla kuin viite-esimerkissä 13 esitetään. Edelleen pääasiallisesti samalla tavalla kuin viite-esimerkissä 11, näytteet tutkitaan sen varmentamiseksi, että ei ole tapahtunut toksoidin muuttumista takaisin toksiseen tilaan.
Edelleen erät nestemäisiä, adsorboituja rokotteita jäädytetään -20°C:ssa ja sulatetaan huoneen lämpötilassa. Tämä jäädyttämis- ja sulattamismenetelmä toistetaan 10 kertaa. Sen jälkeen näytteistä määritetään rokotteen tiitteri olennaisesti samalla tavalla kuin viite-esimerkissä 13. Tuloksena havaittiin, että tämän keksinnön mukaiset rokotteet ovat erittäin pysyviä jäädytys-sulatus-oloissa.
(A) Säilyvyystestin tulokset esimerkeissä 4 ja 5 tuotetuille rokotteille, on esitetty taulukoissa 2 ja 3. Tämän keksinnön mukaiset rokotteet, jotka sisältävät Haemacce-lia stabiloimisaineena, ovat erittäin pysyviä eikä niillä esiinny toksoidin muuttumista takaisin toksiseen tilaan säilyttämisen aikana.
4i 86 959
Taulukko 2
Stabllolmisalne Säily- Tiitteri (iu/ml) Muuttu- (paino/paino-%) tysläm- Säilytysaika minen
Adsor- Sakka- L-ar- Hae- pötHa (kuukausia) takaisin boldun roosl g1- mac- (°C) 1 6 12 toksl- rokotteen niini cel seen muoto_tilaan 4 - - 34,5 el 3) 3 1 - 4 - - 34,5 el
Neste ^ 3 1 2 4 -- 35,0 e1 50 3,2 <1 <1 el 3 1 - 50 8,0 5,4 <1 e1 _3 1 2 50 27,3 25,0 7,6 e1 4 - - 34,0 e1 3 1 0 4 - - 35,5 e1 3 1 2 4 - 40,8 el 3 1 0,5 4 - - 38,1 ei
Kuivattu 2) 3 1 0,1 4 35,0 e1 - - 50 10,2 5,4 <1 ei 3 1 0 50 20,3 10,1 2,5 ei 312 50 40,0 38,0 35,1 el 3 1 0,5 50 35,8 35,0 30,0 e1 _3 1 0,1 50 30,8 20,0 8,6 el
Huomautus: 1) Rokote saatu esimerkissä 4. Tiitteri säilytyksen alkaessa on 41,0 IU/ml.
2) Rokote saatu esimerkissä 5. Tiitteri säilytyksen alkaessa on 41,0 IU/ml.
3) Toksoldi ei ole muuttunut takaisin toksiseen tilaan säilytyksen aikana.
42 86959
Taulukko 3
Stabiloimisaine Säily- Tiitteri(lU/ml)_ Muuttu- (paino/paino-t) tysläm- Säilytysaika (kuu- mlnen
Adsor- Sakka- L-ar- Hae- pöt11 a kausia) takaisin boldun roosl g1- mac- (°C) 0 12 24 36 toksl- rokotteen n11 n 1 cel seen muoto_________tilaan -20 26,8 18,8 14,1 10,3 e1
Neste - - 4 " 24,5 21,0 15,4 e1 25 24,2 20,0 13,2 e1 _37 5,2 2,3 <1 el 3 1 1 -20 26,7 23,5 22,0 22,1 e1
Neste ^3 11 4 " 24,1 22,8 21,5 el 3 1 1 25 " 22,7 20,4 20,8 el _3 1 1 37 " 10,2 6,8 5,4 el -20 26,0 19,1 18,2 17,8 e1
Kuivattu - - 4 18,7 17,5 17,4 e1 25 15,7 12,2 10,8 e1 _37 14,2 8,6 6,3 e1 3 1 1 -20 26,2 25,1 24,2 24,3 e1
Kuivattu 2> 3 11 4 " 26,0 24,4 25,0 e1 3 1 1 25 25,4 24,0 23,7 e1 _3 1 1 37 M 24,8 24,0 23.5 el
Huomautus: 1) Rokote saatu esimerkissä 4, 2) Rokote saatu esimerkissä 5.
(B) Adsorboidut sekarokotteet, jotka sisältävät hlnkuys-kätoksoldln, kurkkumätätoksoldln ja jäykkäkourlstustok-soldln ja jotka saatiin esimerkeissä 6 ja 7, testataan jokaisen toksoldln tiitterin suhteen menetelmällä, joka on kuvattu viite-esimerkissä 13. Tulokset on esitetty taulukossa 4. Esimerkeissä 6 ja 7 saadut rokotteet, jotka sisältävät jokainen Haemaccella stabiloimi saineena, ovat 43 86959 erittäin pysyviä eikä toksoidi muutu takaisin myrkylliseen tilaan säilytyksen aikana.
Taulukko 4
Adsorboi* Säilytys- _Tiitteri (IU/ml)_ dun ro- lärrpötila Säilytysaika (kuukausi) kotteen Toksoidi o muoto ( C) 0 6 12 24 36
Pertussis- 4eC 13,5 13,1 12,0 11,2 11,1 toksoidi 25°C " 12,8 11,0 10,6 10,3 37°C " 12,5 8,0 4,2 <1 1} Diphtheria- 4eC 120 122 115 113 111
Neste toksoidi 25eC " 120 117 112 109 37eC " 90 60 50 30
Tetanus- 4eC 50,0 49,9 49,5 49,2 49,3 toksoidi 25*C „ 47t6 46^? 46^4 44^8 37eC " 40,8 30,3 22,1 10,3
Pertussis- 4eC 14,0 13,8 13,5 13,3 13,2 toksoidi 2 5eC " 13,7 13,6 13,4 13,1 37°C " 13,5 13,4 13,2 13,0 :: Diphtheria- 4eC 125 128 125 121 119
Kuivat- toksoidi 25eC " 122 117 115 114 tu 37eC " 125 124 118 112
Tetanus- 4eC 56,7 56,7 56,3 56,1 56,3 toksoidi 25oC .. 56f5 56f4 56,2 56,1 _37*C " 56,4 56,2 56,0 55,8
Huomautus: 1) Rokote saatu esimerkissä 8.
2) Rokote saatu esimerkissä 9.
44 86959
Sovellutusesimerkki 2 (Tämän keksinnön mukaisten rokotteiden turvallisuus, tehokkuus ja tasalaatuisuus) Tämän keksinnön mukaisten rokotteiden turvallisuuden ja tehokkuuden toteamiseksi turvallisuus- ja tiitteritestit suoritetaan käyttäen hiiriä ja marsuja, Japanin terveys-ja sosiaaliministeriön tiedonannossa nro 159 kuvattujen menetelmien mukaisesti, kuten on mainittu viite-esimerkeissä 4, 5, 8 ja 9. Tämän keksinnön mukaisten rokotteiden tasalaatuisuuden tutkiminen perustuu F-HA:n painosuhteeseen PT:hen ja tiheystutkimuksen tulokseen, joka säädän oleellisesti samalla tavalla kuin viite-esimerkissä 9 on esitetty. Tuloksena havaittiin, että tämän keksinnön mukaiset rokotteet ovat erinomaisia turvallisuudeltaan ja tehokkuudeltaan sekä tasalaatuisia.
Esimerkki 8 (Diagnostinen valmiste hinkuyskälle)
Puhdistetun hinkuyskäantigeenifraktion, jollainen saadaan esimerkissä 2, pH säädetään arvoon 8,6 ja suoritetaan hydroksiapatiittipylväskromatografointi, jolloin PT:n annetaan kulkeutua pylvään läpi, jolloin saadaan PT-frak-. - tio. Sen jälkeen pylvääseen adsorboitunut F-HA otetaan talteen eluoimalla eluentilla, jossa on 1/20 M fosfaatti-puskuria sisältäen 1 M NaClrää, jotta saadaan F-HA-frak-tio. Näin saatujen F-HA- ja PT-fraktioiden vasta-aine-tiitterit määritetään. Fraktiot ovat käyttökelpoisia erittäin puhtaana diagnostisena valmisteena hinkuyskäin-fektion havaitsemiseksi.
Claims (13)
1. Förfarande för odling av en Bordetella pertussis T0HA-MA (fas I) -stam i ett näringsmedium, kännetecknat därav, att man anskaffar Bordetella pertussis TOHAMA (fas I) -stammen och odlar den nämnda Bordetella pertussis TOHAMA (fas I) -stammen i ca 30 °C - 37 °C i ca 20-80 timmar i ett näringsmedium, som innehäller ätminstone en substans vald av cellulosa och cellulosaderivat, i en koncentra-tion av ca 0,01 - ca 2 vikt-% för att erhälla en odling av Bordetella pertussis TOHAMA (fas I) -stammen.
1. Menetelmä Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kannan viljelemiseksi ravintoalustassa, tunnettu siitä, että hankitaan Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kanta ja viljellään mainittua Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kantaa noin 30 °C - 37 °C:ssa noin 20-80 tuntia ravintoalustassa, joka sisältää ainakin yhden aineen, joka on selluloosa tai selluloosajohdannainen, konsentraatios-sa noin 0,01 - noin 2 paino-% Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kannan viljelmän aikaansaamiseksi.
2. Förfarande enligt patentkravet 1, kännetecknat därav, att det nämnda cellulosaderivatet är en oorganisk syraes-ter av cellulosa, en organisk syraester av cellulosa el-ler en eter av cellulosa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu selluloosajohdannainen on selluloosan epäorgaaninen happoesteri, selluloosan orgaaninen happoesteri tai selluloosan eetteri.
3. Förfarande för framställning av en kikhostavaccin, som innehäller en effektiv immunogenisk mängd av kikhostato-xoid, kännetecknat därav, att man (1) anskaffar Bordetella pertussis TOHAMA (fas I) -stammen, 49 86959 (2) odlar den nämnda Bordetella pertussis TOHAMA ( fas I) -stammen i ett näringsmedium, som innehäller ätmins-tone en substans vald av cellulosa och cellulosade-rivat för att erhälla en odling av Bordetella pertussis TOHAMA ( fas I) -stammen, (3) separerar den nämnda odlingen till supernatant och celler av Bordetella pertussis TOHAMA (fas I) -stammen och renar nämnda supernatant för att erhälla en blandad antigen, som innehäller kikhostatoxin och kikhosta-f ilament-hemagglutinin, (4) detoxifierar den nämnda blandade antigenen för att erhälla en kikhostatoxoid, (5) adsorberar den nämnda kikhostatoxoiden pä en adju-vans, och (6) tillsätter den bildade, pä adjuvansen adsorberade toxoiden ätminstone ett farmaceutiskt godtagbart bärarämne, utspädningsmedel eller fyllnadsmaterial och stabiliseringsmedel.
3. Menetelmä hinkuyskärokotteen valmistamiseksi, joka sisältää tehokkaan immunogeenisen määrän hinkuyskätoksoi-dia, tunnettu siitä, että (1) hankitaan Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kanta, (2) viljellään mainittua Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kantaa ravintoalustassa, joka sisältää ainakin yhden aineen, joka on selluloosa tai selluloosajohdannainen, Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kannan viljelmän aikaansaamiseksi, (3) erotetaan mainittu viljelmä supernatantiksi ja Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kannan soluiksi ja mainittu supernatantti puhdistetaan seka-antigee-nin saamiseksi, joka sisältää hinkuyskätoksiinin ja hinkuyskä-filamentti-heroagglutiniinin, (4) tehdään myrkyttömäksi mainittu seka-antigeeni hinku-yskätoksoidin saamiseksi, 46 86959 (5) adsorboidaan mainittu hinkuyskätoksoidi apuaineeseen, ja (6) lisätään muodostuneeseen, apuaineeseen adsorboituun toksoidiin ainakin yksi farmaseuttisesti hyväksyttävä kantoaine, laimennusaine tai täyteaine ja stabi-loimisaine.
4. Förfarande enligt patentkravet 3, kännetecknat därav, att det i steget (2) nämnda cellulosaderivatet är en oor-ganisk syraester av cellulosa, en organisk syraester av cellulosa eller en eter av cellulosa.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (2) mainittu selluloosajohdannainen on selluloosan epäorgaaninen happoesteri, selluloosan orgaaninen happoesteri tai selluloosan eetteri.
5. Förfarande enligt patentkravet 3, kännetecknat därav, att den i steget (2) nämnda ätminstone ena substansen ingär i näringsmediet i en koncentration av ca 0,01 - ca 2 viktprocent.
5. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (2) mainittua ainakin yhtä ainetta on ravintoalustassa konsentraatiossa noin 0,01 - noin 2 painoprosenttia.
6. Förfarande enligt patentkravet 3, kännetecknat därav, att det i steget (6) nämnda stabiliseringsmedlet är ätminstone ett medel valt av gelatin och gelatinderivat. 1 2 3 Förfarande enligt patentkravet 1, kännetecknat därav, 2 att det i steget (6) nämnda stabiliseringsmedlet tillsät- 3 tes den nämnda toxoiden i en sädan mängd, att koncentra-tionen av det nämnda stabiliseringsmedlet i den bildade so 86959 blandningen blir ca 0,1 - ca 5,0 viktprocent.
6. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (6) mainittu stabiloimisaine on ainakin yksi aine, joka on gelatiini tai gelatiinijohdannainen.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (6) mainittua stabiloimisainetta lisätään mainittuun toksoidiin sellainen määrä, että mainitun stabiloimisaineen konsentraatioksi muodostuneessa seoksessa tulee noin 0,1 - noin 5,0 painoprosenttia.
8. Förfarande enllgt nägot av patentkraven 3-7, känne-tecknat därav, att blandningen, som bildas efter steget (6) lyofiliseras ytterligare.
8. Jonkin patenttivaatimuksista 3-7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheen (6) jälkeen muodostunut seos lisäksi lyofilisoidaan. 1 Menetelmä sekarokotteen tuottamiseksi, joka sisältää tehokkaat, immunogeeniset määrät hinkuyskätoksoidia ja ainakin yhtä antigeeniä, joka on muu kuin mainittu hinkuyskätoksoidi, tunnettu siitä, että 47 8 6 9 5 9 (1) hankitaan Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kanta, (2) viljellään mainittua Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kantaa ravintoalustassa, joka sisältää ainakin yhden aineen, joka on selluloosa tai selluloosa johdannainen, Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kannan viljelmän aikaansaamiseksi, (3) erotetaan mainittu viljelmä supernatantiksi ja Bordetella pertussis TOHAMA (faasi I) -kannan soluiksi ja mainittu supernatantti puhdistetaan seka-antigee-nin saamiseksi, joka sisältää hinkuyskätoksiinin ja hinkuyskä-filamentti-hemagglutiniinin, (4) tehdään myrkyttömäksi mainittu seka-antigeeni hinku-yskätoksoidin saamiseksi, (5) adsorboidaan mainittu hinkuyskätoksoidi apuaineeseen, (6) lisätään muodostuneeseen hinkuyskätoksoidiin ainakin yksi antigeeni, joka on muu kuin mainittu, apuaineeseen adsorboitu hinkuyskätoksoidi, mainitun hinkuys-kätoksoidin ja mainitun ainakin yhden antigeenin seoksen saamiseksi, ja (7) lisätään mainittuun seokseen ainakin yksi farmaseuttisesti hyväksyttävä kantoaine, laimennusaine tai täyteaine ja stabiloimisaine.
9. Förfarande för producering av ett blandat vaccin, som innehäller effektiva immunogena mängder av kikhostatoxoid och ätminstone en antigen, som är annan än den nämnda kikhostatoxoiden, kännetecknat därav, att man (1) anskaffar Bordetella pertussis TOHAMA (fas I) -stam-men, (2) odlar den nämnda Bordetella pertussis TOHAMA (fas I) -stammen i ett näringsmedium, som innehäller ätminstone en substans vald av cellulosa och cellulosade-rivat för att erhälla en odling av Bordetella pertussis TOHAMA (fas I) -stammen, (3) separerar den nämnda odlingen till supernatant och celler av Bordetella pertussis TOHAMA (fas I) -stammen och renar nämnda supernatant för att erhälla en blandad antigen, som innehäller kikhostatoxin och kikhosta-filament-hemagglutinin, (4) detoxifierar den nämnda blandade antigenen för att erhälla en kikhostatoxoid, (5) adsorberar den nämnda kikhostatoxoiden pä en adju-vans, (6) tillsätter den bildade kikhostatoxoiden ätminstone en antigen, som är annan än den nämnda, pä en adju-vans adsorberade kikhostatoxoiden, för att erhälla en blandning av den nämnda kikhostatoxoiden och nämnda ätminstone ena antigen, och (7) tillsätter den nämnda blandningen ätminstone ett farmaceutiskt godtagbart bärarämne, utspädningsmedel eller fyllnadsmaterial och stabiliseringsmedel. 1 Förfarande enligt patentkravet 9, kännetecknat därav, si 86959 att det i steget (2) nämnda cellulosaderivatet är en oor-ganisk syraester av cellulosa, en organisk syraester av cellulose eller en eter av cellulosa.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (2) mainittu selluloosajohdannainen on selluloosan epäorgaaninen happoesteri, selluloosan orgaaninen happoesteri tai selluloosan eetteri.
11. Förfarande enligt patentkravet 9, kännetecknat därav, att den i steget (2) nämnda ätminstone ena substansen ingär i näringsmedlet 1 en koncentration av ca 0,01 - ca 2 viktprocent.
11. Patenttivaatimuksen 9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (2) mainittua ainakin yhtä ainetta on ravintoalustassa konsentraatiossa noin 0,01 - noin 2 painoprosenttia.
12. Förfarande enligt patentkravet 9, kännetecknat därav, att det i steget (6) nämnda stabiliseringsmedlet är ät-minstone ett medel valt av gelatin och gelatinderivat.
12. Patenttivaatimuksen 9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (7) mainittu stabiloimisaine on 48 86 959 ainakin yksi aine, joka on gelatiini tai gelatiinijohdannainen.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (7) mainittua stabiloimisainetta lisätään mainittuun toksoidiin sellainen määrä, että mainitun stabiloimisaineen konsentraatioksi muodostuneessa seoksessa tulee noin 0,1 - noin 5,0 painoprosenttia.
14. Jonkin patenttivaatimuksista 9-13 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheen (7) jälkeen muodostunut seos lisäksi lyofilisoidaan.
13. Förfarande enligt patentkravet 12, kännetecknat därav, att det i steget (7) nämnda stabiliseringsmedlet tillsättes den nämnda toxoiden i en sädan mängd, att kon-centrationen av det nämnda stabiliseringsmedlet i den bildade blandningen blir ca 0,1 - ca 5,0 viktprocent. 1 Förfarande enligt nägot av patentkraven 9-13, kännetecknat därav, att blandningen, som bildas efter steget (7) lyofiliseras ytterligare.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10236087 | 1987-04-24 | ||
| JP10236087 | 1987-04-24 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI873083A0 FI873083A0 (fi) | 1987-07-13 |
| FI873083A FI873083A (fi) | 1988-10-25 |
| FI86959B true FI86959B (fi) | 1992-07-31 |
| FI86959C FI86959C (fi) | 1992-11-10 |
Family
ID=14325294
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI873083A FI86959C (fi) | 1987-04-24 | 1987-07-13 | Foerfarande foer odling av bordetella pertussis tohama (fas i)-stammen och foerfarande foer framstaellning av kikhostavaccin och ett blandat vaccin, som innehaoller kikhostatoxoid |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4849358A (fi) |
| EP (1) | EP0287732B1 (fi) |
| KR (1) | KR900007644B1 (fi) |
| AT (1) | ATE96036T1 (fi) |
| CA (1) | CA1337859C (fi) |
| DE (1) | DE3787887T2 (fi) |
| DK (1) | DK365287A (fi) |
| ES (1) | ES2059380T3 (fi) |
| FI (1) | FI86959C (fi) |
| NO (1) | NO172188C (fi) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2596413B1 (fr) * | 1986-03-27 | 1988-06-10 | Merieux Inst | Nouveaux milieux de culture de bacteries appartenant au genre bordetella, contenant des derives etherifies de polymeres de d-glucose, et leur application |
| US5101019A (en) * | 1987-05-22 | 1992-03-31 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for removing pertussis endotoxin, a pertussis toxoid and its production |
| JP2849632B2 (ja) * | 1988-04-08 | 1999-01-20 | 社団法人北里研究所 | ワクチン製剤 |
| US5000952A (en) * | 1988-08-02 | 1991-03-19 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford, Jr. University | Polypeptide pertussis toxin vaccine |
| CA1341123C (en) * | 1988-10-27 | 2000-10-17 | David A. Relman | Filamentous hemagglutinin of b. pertussis |
| JP2706792B2 (ja) * | 1988-11-29 | 1998-01-28 | 財団法人化学及血清療法研究所 | 百日咳毒素のトキソイド化法 |
| US5578308A (en) * | 1990-02-12 | 1996-11-26 | Capiau; Carine | Glutaraldehyde and formalin detoxified bordetella toxin vaccine |
| US5474900A (en) * | 1990-03-16 | 1995-12-12 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Process for preparing purified syphilis antigen from Treponema palljdum |
| US5718909A (en) * | 1991-02-18 | 1998-02-17 | Medscand Ab | Sheet containing carbohydrate derivative for removal of E. coli |
| AU2088992A (en) * | 1992-05-05 | 1993-11-11 | Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University, The | Stabilized live vaccine |
| CN1147259A (zh) * | 1994-04-28 | 1997-04-09 | 武田药品工业株式会社 | 分离百日咳杆菌保护性组分的方法 |
| DE19803453A1 (de) * | 1998-01-30 | 1999-08-12 | Boehringer Ingelheim Int | Vakzine |
Family Cites Families (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB512196A (en) * | 1937-08-19 | 1939-08-30 | Lederle Lab Inc | Method of preparing pertussis toxin and toxoid |
| US2359388A (en) * | 1941-02-13 | 1944-10-03 | Lederle Lab Inc | Method of preparing pertussis toxin and toxoid |
| DE2461439C3 (de) * | 1974-12-24 | 1980-03-20 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur Herstellung eines schützenden Antigens von Bordetella Pertussis sowie jenes enthaltendes Mittel |
| FR2356429A1 (fr) * | 1976-06-28 | 1978-01-27 | Bertoye Renee | Procede de preparation d'endo-antigenes de bordetella pertussis et bordetella parapertussis utiles notamment au traitement de la coqueluche |
| EP0004137B1 (en) * | 1978-02-17 | 1981-11-11 | National Research Development Corporation | Immunogenic cell envelope preparations |
| US4247452A (en) * | 1978-03-01 | 1981-01-27 | The Secretary Of State For Defence In Her Britannic Majesty's Government Of The United Kingdom Of Great Britain And Northern Ireland | Purification of pertussis haemagglutinins |
| JPS5647167A (en) * | 1979-09-26 | 1981-04-28 | Ricoh Co Ltd | Facsimile transmitter |
| JPS581482B2 (ja) * | 1980-06-11 | 1983-01-11 | 中松 義郎 | 無加熱反射ライト |
| JPS5750925A (en) * | 1980-09-12 | 1982-03-25 | Takeda Chem Ind Ltd | Preparation of pertussis toxoid |
| US4500639A (en) * | 1981-10-15 | 1985-02-19 | Teijin Limited | Culturing Bordetella in media containing etherified cyclodextrin |
| US4474758A (en) * | 1981-11-19 | 1984-10-02 | American Cyanamid Company | Haemophilus influenzae type b and pertussis outer membrane component combined vaccine |
| FR2522268A1 (fr) * | 1982-02-26 | 1983-09-02 | Green Cross Corp | Vaccin anti-ourlien vivant et procede pour le stabiliser |
| JPS58222032A (ja) * | 1982-06-18 | 1983-12-23 | Teijin Ltd | 百日咳毒素のサブユニツト蛋白 |
| JPS59110626A (ja) * | 1982-12-17 | 1984-06-26 | Kaken Pharmaceut Co Ltd | Ｂ−オリゴマ−含有百日咳ワクチンおよびその製造方法 |
| HU188847B (en) * | 1983-02-22 | 1986-05-28 | Human Oltoanyagtermeloe Es Kutato Intezet,Hu | Process for producing liophylized combined vaccines |
| JPS59175439A (ja) * | 1983-03-23 | 1984-10-04 | Teijin Ltd | 繊維状赤血球凝集素の製法 |
| CA1213234A (en) * | 1983-03-30 | 1986-10-28 | Akihiro Ginnaga | Method for the production of ha fraction containing protective antigens of bordetella pertussis and pertussis vaccine |
| US4551429A (en) * | 1983-09-15 | 1985-11-05 | American Home Products Corporation | Stimulation of antigen production by Bordetella pertussis |
| JPS6098988A (ja) * | 1983-11-01 | 1985-06-01 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Ｌｐｆ−ｈａの精製法 |
| JPS60226822A (ja) * | 1984-04-25 | 1985-11-12 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 線維状赤血球凝集素の精製方法 |
| US4563303A (en) * | 1984-04-14 | 1986-01-07 | Judicial Foundation The Chemosero-Therapeutic Research Institute | Method for purification of filamentous hemagglutinin |
| JPS60237027A (ja) * | 1984-05-07 | 1985-11-25 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 線維状赤血球凝集素の精製方法 |
| JPS60218326A (ja) * | 1984-04-14 | 1985-11-01 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 線維状赤血球凝集素の精製方法 |
| GB8412207D0 (en) * | 1984-05-12 | 1984-06-20 | Wellcome Found | Antigenic preparations |
| JPS6176422A (ja) * | 1984-09-22 | 1986-04-18 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 百日ぜきコンポ−ネントワクチンおよび百日ぜき・ジフテリア・破傷風混合ワクチンの製造方法 |
| GB8512972D0 (en) * | 1985-05-22 | 1985-06-26 | Univ Glasgow | Vaccine production |
| GB8601279D0 (en) * | 1986-01-20 | 1986-02-26 | Public Health Lab Service | Purification of pertussis antigens |
| FR2596413B1 (fr) * | 1986-03-27 | 1988-06-10 | Merieux Inst | Nouveaux milieux de culture de bacteries appartenant au genre bordetella, contenant des derives etherifies de polymeres de d-glucose, et leur application |
| US4705686A (en) * | 1986-05-09 | 1987-11-10 | American Cyanamid | Process for the preparation of acellular Bordetalla pertussis vaccine |
| US4699786A (en) * | 1986-05-09 | 1987-10-13 | American Cyanamid Company | Enhanced large scale cultivation of bordetella pertussis cells for vaccine production using lactoglobulin |
| JP2537042B2 (ja) * | 1986-11-27 | 1996-09-25 | 社団法人北里研究所 | ボルデテラ・ブロンキセプチカ感染症生菌ワクチン用原株の製造法および生菌ワクチン |
| JPH0628277A (ja) * | 1992-07-10 | 1994-02-04 | Nec Software Ltd | ファイル転送装置 |
| JP3240711B2 (ja) * | 1992-11-11 | 2001-12-25 | ソニー株式会社 | Ｙ／ｃ分離フィルタ装置 |
-
1987
- 1987-07-09 CA CA000541661A patent/CA1337859C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-13 AT AT87306165T patent/ATE96036T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-07-13 EP EP87306165A patent/EP0287732B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-13 DE DE87306165T patent/DE3787887T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-13 ES ES87306165T patent/ES2059380T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-13 FI FI873083A patent/FI86959C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-07-13 NO NO872919A patent/NO172188C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-07-14 DK DK365287A patent/DK365287A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-07-14 US US07/073,134 patent/US4849358A/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-30 KR KR1019870008356A patent/KR900007644B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI86959C (fi) | 1992-11-10 |
| DE3787887D1 (de) | 1993-11-25 |
| EP0287732B1 (en) | 1993-10-20 |
| KR900007644B1 (ko) | 1990-10-17 |
| ATE96036T1 (de) | 1993-11-15 |
| KR880012238A (ko) | 1988-11-26 |
| NO872919D0 (no) | 1987-07-13 |
| DK365287D0 (da) | 1987-07-14 |
| ES2059380T3 (es) | 1994-11-16 |
| NO172188B (no) | 1993-03-08 |
| NO872919L (no) | 1988-10-25 |
| NO172188C (no) | 1993-06-16 |
| FI873083A0 (fi) | 1987-07-13 |
| US4849358A (en) | 1989-07-18 |
| FI873083A (fi) | 1988-10-25 |
| CA1337859C (en) | 1996-01-02 |
| DK365287A (da) | 1988-10-25 |
| DE3787887T2 (de) | 1994-02-10 |
| EP0287732A1 (en) | 1988-10-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU714493B2 (en) | Multivalent DTP-polio vaccines | |
| US20090258397A1 (en) | METHOD OF PRODUCING MENINGOCOCCAL MENINGITIS VACCINE FOR NEISSERIA MENINGITIDIS SEROTYPES A, C, Y, and W-135 | |
| FI86959B (fi) | Foerfarande foer odling av bordetella pertussis tohama (fas i)-stammen och foerfarande foer framstaellning av kikhostavaccin och ett blandat vaccin, som innehaoller kikhostatoxoid. | |
| ES2335133T3 (es) | Procedimiento de fermentacion para la produccion de toxina de la difteria. | |
| US9040058B2 (en) | Fermentation media free of animal-derived components for production of diphtheria toxoids suitable for human vaccine use | |
| ES2359806T3 (es) | Vacunas contra la tos ferina acelulares y procedimientos de preparación de las mismas. | |
| UA119244C2 (uk) | Бактеріальна вакцина і спосіб її одержання | |
| KR101617464B1 (ko) | Ｉｐｖ―ｄｐｔ 백신 | |
| US5139776A (en) | Method for culturing Bordetella pertussis, a pertussis toxoid and a pertussis vaccine | |
| JP3035712B2 (ja) | 新規なワクチンおよびそのための方法 | |
| JP2743177B2 (ja) | 百日咳菌の培養方法、及び百日咳トキソイドとその混合ワクチン | |
| CN103110943B (zh) | 一种可替代氢氧化铝的新型疫苗佐剂 | |
| BR112014017416B1 (pt) | Processo de preparação de uma combinação vacinal contendo pelo menos dois antígenos capazes de se adsorverem sobre o óxi-hidróxido de alumínio e composição vacinal | |
| AU6227499A (en) | Vaccine preparations containing attenuated toxin | |
| EP2592137A1 (en) | Fermentation media free of animal-derived components for production of diphtheria toxoids suitable for human vaccine use | |
| WO2020043874A1 (en) | Conjugated haemophilus influenzae vaccine using bordetella outer membrane vesicle | |
| RU2184775C2 (ru) | Поливалентная вакцина против лептоспироза человека и способ ее получения | |
| WO2013188936A1 (pt) | Meio para diagnostico laboratorial da leptospirose e vacina contra leptospirose animal | |
| Mary | PROCEEDINGS OF LOCAL BRANCHES OF THE SOCIETYOF AMERICAN BACTERIOLOGISTS | |
| AU2013203663A1 (en) | Fermentation media free of animal-derived components for production of diphtheria toxoids suitable for human vaccine use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Owner name: THE RESEARCH FOUNDATION FOR MICROBIAL |
|
| MA | Patent expired |