FI85143C

FI85143C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva purinderivat.

Info

Publication number: FI85143C
Application number: FI865075A
Authority: FI
Inventors: Michael Raymond Harnden; Paul Graham Wyatt
Original assignee: Beecham Group Plc
Priority date: 1985-12-13
Filing date: 1986-12-12
Publication date: 1992-03-10
Also published as: AU599066B2; ATE127466T1; MY101126A; PT83911A; JPS62181279A; NO166226C; PT83911B; DK595886A; HU200461B; NZ218598A; FI865075A; GR3018105T3; IL80947A; PL272031A1; DE3650384D1; DK166823B1; NO865014L; CA1296726C; NO865014D0; PL262930A1

Description

1 85143

Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten puriinijohdannaisten valmistamiseksi

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää antiviraalisesti aktiivisten yhdisteiden valmistamiseksi.

9- [ (2-hydroksietoksi)metyyli]guaniini (Acyclovir), 9-(1,3-dihydroksi-2-propoksimetyyli)-guaniini (DHPG) ja 9-(4-hydroksi-3-hydroksimetyylibut-l-yyli)guaniini, (julkaistu EP-A-141 927:ssä), ovat kaikki guaniinin johdannaisia, jotka ovat antiviraalisesti aktiivisia.

Uusi, rakenteellisesti erillinen yhdisteiden luokka on nyt keksitty, näiden yhdisteiden ollessa myös antiviraalisesti aktiivisia.

Esillä olevan keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut yhdisteet eroavat tekniikan tason mukaisista yhdisteistä puriiniosan N-9-asemaan sidotun happiatomin osalta. Keksinnön mukaisella menetelmällä saadut yhdisteet ovat keksinnöllisiä tekniikan tason yhdisteisiin nähden seuraa-vin perustein: i) Näiden yhdisteiden rakennetyyppi on erilainen, eli ne ovat alkoksijohdannaisia kun taas aiemmin tunnetut yhdisteet ovat alkyylijohdannaisia. Ei ole aivan yksinkertaista vaihtaa happiatomia keksinnön mukaisten yhdisteiden sivu-ketjussa. Mikäli tällainen vaihtaminen on mahdollista, saadaan keksinnön mukaisesti sivuketjuun 9-N-happisidos. Tekniikan tason julkaisuissa on yhdisteessä 9-N-hiilisi-dos, jolla on erilaiset sähköiset ominaisuudet suhteessa CH2-ryhmän vaikutukseen typpiatomiin.

ii) Keksinnön mukainen menetelmä yhdisteiden valmistamiseksi käsittää täysin erilaisen synteettisen ja loogisen perustan. Ei ole mahdollista suoraan sitoa yhdisteen sivu-ketjua puriiniosaan, kuten voidaan tehdään tekniikan tason 2 85 Ί 43 mukaisesti N-9-alkyyliyhdisteiden tapauksessa. Esillä olevan hakemuksen mukaisen yhdisteen puriiniosassa tulee olla N-O-sidos muodostettuna etukäteen syklisointia varten py-rimidiinirenkaan tai imidatsolirenkaan muodostamiseksi.

iii) On myöskin yllättävää, että esillä olevan hakemuksen menetelmällä saadulla yhdisteellä on antiviraalista vaikutusta perustuen N-O-sidokseen puriiniosan 9-typessä. Anti-viraalisen tehon osoittamiseksi on keksinnön mukaisella menetelmällä saadun yhdisteen BRL 44385 (vastaa hakemuksen sivulla 2 kohdassa (a) esitettyä yhdistettä) antiviraalista aktiivisuutta verrattu sen alkyylianalogin Acyclovir-yhdisteen aktiivisuuteen taulukossa 4 tämän patenttihakemuksen lopussa. Kuten taulukosta nähdään, BRL 44385 on kolme kertaa voimakkaampi kuin Acyclovir-yhdiste herpes simplex -tyyppejä 1 ja 2 vastaan, viisi kertaa voimakkaampi VZV:tä vastaan, 30 kertaa voimakkaampi Epstein-Barr-virusta vastaan ja tehoton cytomegalovirusta vastaan.

Esillä oleva keksintö koskee kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa: R4 /Vi I NH2 0 (I) CH-R-i CH-Ro r3 jossa kaavassa

Rl on vety tai CH20H; R2 on vety tai (kun R^ on vety) hydroksi tai CH20H; R3 on CH20H tai (kun R^ ja R2 ovat molemmat vetyjä) CH(0H)CH20H;

II

3 85143

Ra on vety, hydroksi, amino tai ORs, jossa Rs on Ci-e-alkyyli; ja jossa mikä tahansa OH-ryhmistä Reissä, R2:ssa ja/tai R3:ssa voi olla sen in vivo hydrolysoitavan O-asyylijohdannaisen muodossa.

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen sisällä on seuraavia yhdisteryhmiä: (a) Ri ja Ra ovat molemmat vetyjä ja R3 on CHaOH, ja niiden johdannaisia, kuten määriteltiin; (b) Ri on vety ja R2 ja R3 ovat molemmat CH2OH, ja niiden johdannaisia, kuten määriteltiin; (c) Ri on vety, R2 on hydroksi ja R3 on CHaOH, ja niiden johdannaisia, kuten määriteltiin; (d) Ri on CH2OH, R2 on vety ja R3 on CHaOH, ja niiden johdannaisia, kuten määriteltiin; (e) Ri ja Ra ovat molemmat vetyjä ja R3 on CH(OH)CHaOH, ja niiden johdannaisia, kuten määriteltiin.

Esimerkkeihin R5:stä kuuluvat metyyli, etyyli, n- ja isopropyyli. In vivo hydrolysoituvat O-asyylijohdannaiset ovat tavallisesti sellaisia, joissa yksi tai useampi OH-ryhmistä Rx:ssä, R2:ssa ja/tai R3:ssa muodostaa karboksyyliesteriryhmiä; kuten Ci-7-alkanoyyli ja bent-soyyli, jotka on valinnaisesti substituoitu yhdellä tai kahdella Ci_4-alkyyli-, Ci-4-alkoksi-, halogeeni-tai CF3-ryhmällä. Edullisesti karboksyyliesteriryhmät ovat Ci-?-alkanoyyliryhmiä, kuten asetyyli, propionyyli, butyryyli, heptanoyyli ja heksanoyyli, edullisimmin asetyyli tai propionyyli.

Silloin, kun Rx, R2 ja R3 yhdessä sisältävät enemmän kuin yhden OH-ryhmän, voi muodostua syklisiä asetaali-ryhmiä, kuten -0-C(Ci_3-alkyyli)2-0- tai syklinen karbonaatti, kuten -0-C0-0-.

4 85143

Otaksutaan, että kaavan (I) mukaisen yhdisteen sisällä olevat yhdisteryhmät, jotka ovat edullisia, ovat niitä, joita tätä ennen ilmaistiin ryhmillä (a) ja (b); ja että R* on edullisesti hydroksi tai vety.

Esimerkkejä kaavan (I) mukaisen yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävistä suoloista ovat happoadditiosuolat, joita on muodostettu farmaseuttisesti hyväksyttävän hapon kanssa, kuten suolahapon, ortofosforihapon ja rikkihapon kanssa. Farmaseuttisesti hyväksyttäviin suoloihin kuuluu myös niitä, jotka on muodostettu orgaanisten emästen kanssa, edullisesti amiinien kanssa, kuten etanoliamiinit tai diamiinit; ja alkalimetallien, kuten natrium ja kalium.

Joillakin kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on ainakin yksi asymmetrinen keskus, ja ne kykenevät sen vuoksi esiintymään useammassa kuin yhdessä stereoisomeerisessä muodossa. Keksintö käsittää kunkin näistä muodoista erikseen ja niiden seokset, mukaan lukien rasemaatit. Isomeerit voidaan erottaa tavanomaisesti kromatografisten menetelmien avulla tai käyttämällä erottelevaa ainetta. Vaihtoehtoisesti, voidaan yksittäisiä isomeerejä valmistaa asymmetrisen synteesin avulla käyttämällä kiraalisia välituotteita.

Lisäksi, kun R4 on hydroksi kaavassa (I), yhdiste esiintyy kaavan (IA) mukaisessa edullisessa tautomeerisessä muodossa: 5 85143 o λΝ\^ννη \ XN ^ 1T \ | NHa 0 (IA) CH-Ri CH-Ra

Ra

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet, mukaan lukien niiden alkalimetallisuolat, voivat muodostaa solvaatteja, kuten hydraatit, ja nämä luetaan mukaan kuuluviksi aina, kun kaavan (I) mukaiseen yhdisteeseen tai sen suolaan tässä yhteydessä viitataan.

On huomattava, että kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa R4 on muu kuin hydroksi, ovat esilääkeaineita kaavan (I) mukaisille yhdisteille, joissa R4 on hydroksi.

Keksintö koskee myös menetelmää kaavan (I) mukaisen yhdisteen tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, joka menetelmä käsittää kaavan (II) mukaisen yhdisteen saattamisen renkaanmuotoiseksi: 6 85143 //S^C0NH2 \ 1 I Nj=c-nhy 0 L (II> CH-R, ' CH-R, ’

V

jossa kaavassa L on lähtevä rikkiryhmä tai ΝΗ„, Υ on suojaava ryhmä ja ', R2' ja R,' ovat R^, R2 ja vastaavasti tai , R2 ja/tai R^, joissa OH-ryhmät on suojattu; ja sen jälkeen, silloin kun R. halutussa kaavan (I) mukaisessa yhdisteessä 4 on muu kuin hydroksi, R4~hydroksiryhmän muuttamisen klooriksi, jota seuraa joko (i) pelkistäminen niin, että R, on vety, *r (ii) kloorin korvaaminen NH^rlla, jolloin R „ on amino; tai (iii) reaktio OR^rn kanssa, jolloin R^ on OR^; ja suoiaryhmän Y poistamisen ja R^':n muuttamisen R^:ksi, R,':n R^^ksi ja R3':n R3:ksi silloin kun halutaan tai kun on tarpeen, ja valinnaisesti sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodostamiseksi tai patenttivaatimuksen 1 mukaisen vaihtoehdon (b) mukai- : sesti, tai O-asyy li johdannaisen muodostamisen.

Renkaan muotoon saattaminen, silloin kun L on lähtevä rikki-: ryhmä, voi tapahtua ammoniakin läsnäollessa neutraalissa : 1 iuo 11 i mes s a , kuten dimetyylif ormamidi ; tai edullisemmin emäk- sisissä olosuhteissa kuten 7M natriumhydroksidissa ja dimetyyli-sulfoksidissa; kohotetuissa lämpötiloissa 60-15C C, edullisesti 100-120°C.

L merkitsee sopivasti alkyylitioryhmiä, kuten metvylitio, etyylitio, n- ja iso-propyylitio. Edullisesti L on metvylitio.

Silloin kun L on NH2, tapahtuu reaktio edullisesti heikommin emäksisissä olosuhteissa, kuten IM natriumhydroksidissa, ** : kohotetuissa lämpötiloissa 80-150°C, edullisesti 100-L20°C.

7 85143 Y merkitsee sopivasti hydrolysoitavissa olevia suojaavia NH-ryhmiä, kuten bentsoyyli, joka valinnaisesti voi korvata, kuten tätä ennen kuvailtiin, R,.:n, silloin kun se on fenyyli.

Y on edullisesti bentsoyyli.

R^:n hydroksiryhmän muuttaminen klooriksi voidaan saada aikaan kloorauksen avulla käyttämällä reagenssia, kuten fosfori-oksikloridi, edullisesti tetraetyyliammoniumkloridin ja dime-tyylianiliinin (happoakseptorina) läsnäollessa CH^CN:ssä palautus jäähdytyksen lämpötiloissa, sen menetelmän mukaisesti, jota ovat kuvailleet M.J. Robins ja B. Uzanski, Can. J. Chem. 59, 2601 (1981).

Muodostuneen klooriyhdisteen pelkistäminen voidaan edullisesti saada aikaan käyttämällä katalyyttisiä menetelmiä, kuten palladiumhiiltä neutraalissa liuottimessa, kuten metanoli tai etanoli, palautusjäähdytyksen lämpötiloissa. Vetylähde voi olla syklohekseeni tai ammoniumformaatti. Menetelmä on analoginen sen kanssa, jota kuvaillaan EP-A-182024:n esimerkissä 1 tai sen menetelmän kanssa, jota kuvailevat T.A. Krenitsky et ai. Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 81_, 3209 (1984).

Muuttaminen niin, että R^ on amino, voidaan saada aikaan ta-vanomaisesti käsittelemällä ammoniakilla metanolissa autoklaavissa 100°C:ssa noin 7 tunnin ajan, tai vaihtoehtoisesti, natriumatsidin kanssa dimetyyliformamidissa, jolloin muodostuu atsidivälituotetta (jossa R^ on N^), jota seuraa tämän välituotteen pelkistäminen ammoniumformaatin/palladiumhiilen kanssa, metanolissa.

OR^:n reaktio muodostuneen klooriyhdisteen kanssa voidaan toteuttaa käyttämällä, edullisesti, NaOR^:tä sopivassa liuotti-Y; messa, kuten metanoli tai etanoli, kun R,- on metyyli tai etyyli vastaavasti, 0-150°C:ssa, edullisesti noin 50°C:ssa. Mene-;;; telmä on analoginen EP-A-141927:n esimerkissä 15 kuvaillun ;·' menetelmän kanssa.

Y:n suojauksen poistaminen voi tapahtua tavanomaisen emäksisen hydrolyysin avulla, kuten natriumhydroksidin vesiliuoksessa 100°C:ssa.

8 85143 R1'' R2' R3’' siH°in kun ovat suojattuja OH-ryhmiä, suojaryhmä(t) ovat usein hydrogenolysoitavissa, kuten bentsyyli-ryhmä, joka valinnaisesti voi korvata R^:n, silloin kun se on fenyyli, mukaanlukien myös nitron valinnaisena substituent-tina.

Bentsyylisuojaryhmien poistaminen voidaan saada aikaan katalyyttisen hydrogenaation avulla käyttämällä palladiumhiiltä katalysaattorina (kun on muu kuin vety).

Muihin sopiviin suojaryhmiin lukeutuvat substituoidut bentsyyli-ryhmät, kuten p-metoksibentsyyli, jotka on poistettavissa käsittelemällä DDQ:n kanssa, jota on käytetty jäljempänä esimerkissä 8.

Toinen sopiva suojaryhmä on t-butyylidimetyylisilyyliryhmä, joka on poistettavissa 80 % etikkahapon avulla kohotetuissa lämpötiloissa, noin 90°C:ssa, tai käsittelemällä tetrabutyyli-ammoniumfluoridin kanssa liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, vallitsevassa lämpötilassa.

Toinen sopiva suojaryhmä on sellainen, jossa kahden OH-ryhmän tai hiiliatomin, cL·- tai /^-asemassa toisiinsa nähden, annetaan reagoida 2,2-dimetoksipropaanin kanssa, muodostaen 1,3-dioksolaani- tai 1,3-dioksaanirenkaan vastaavasti. Tämä ryhmä voidaan poistaa happohydrolyysin avulla.

Vaihtoehtoina R2':lle ja R ' :lle, kun ne ovat suojattuja OH-ryhmiä, ovat sellaiset, joissa kaksi OH-ryhmää vierekkäisissä hiiliatomeissa korvataan sidoksella; esimerkiksi, kun on vety, R2 on hydroksi ja R^ on CH20H; R^'CHR2'CHR^'0-on CH2=CH-CH2~0-. Diolin muodostuminen ("suojauksen poistaminen") voidaan saada aikaan tavanomaisesti, esimerkiksi, käyttämällä osmiumtetraoksidia, edullisesti katalyyttisesti N-metyylimorfOliini N-oksidin läsnäollessa.

il 9 85143

Farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja, O-asyylijohdannaisia ja fosfaattijohdannaisia voidaan valmistaa tavanomaisesti, esimerkiksi siten kuin on kuvailtu EP-A-141927:ssa ja EP-A-182024:ssa.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden asyylijohdannaisia voidaan valmistaa asyloimalla kaavan (I) mukainen valinnaisesti suojattu yhdiste alalla tunnettujen tavanomaisten asylointimene-telmien mukaisesti, ja silloin kun on tarpeen, poistamalla suojaus muodostuneesta yhdisteestä.

Asylointireäktio voidaan suoritta käyttämällä asyloivaa ainetta, joka sisältää sopivan karboksyylihapon asyyliryhmän.

Esimerkkejä asyloivista aineista, jotka ovat sopivia edellä olevaan menetelmään, ovat karboksyylihapot, happamet halogenidit, kuten kloridit tai happamet anhydridit, edullisesti anhydridit tai hapot.

Silloin kun asyloiva aine on karboksyylihappo, tulisi mukaan sisällyttää kondensaatiota edistävä aine, kuten disyklo-heksyylikarbodi-imidi, mutta tämä ei ole välttämätöntä silloin, kun asyloiva aine on happoanhydridi.

Asylointireaktiossa voi muodostua kaavan (I) mukaisen yhdisteen yksinkertainen asyylijohdannainen, tai johdannaisten seos, riippuen joukosta tekijöitä, kuten lähtöaineiden suhteellisista määristä ja kemiallisista luonteista, reaktion fysikaalisista olosuhteista ja liuotinsysteemistä. Mikä tahansa tällä tavalla syntynyt seos voidaan erottaa puhtaiksi komponenteikseen käyttämällä kromatografisia standardimenetelmiä.

Edellä kuvailtu keksinnön mukainen asylointimenetelmä voi tuottaa kaavan (I) mukaisten yhdisteiden mono-, di- tai tri-asyloituja johdannaisia käytettävän suojauksen/suojauksen poiston muodon mukaan. Seuraavassa on esimerkkejä tuotteista saatuna eri menetelmien avulla: ,0 851 43 (a) R]./R2/R3:ssa olevien OH-ryhmien asyloituja johdannaisia, kun kukin asyyliryhmä on sama ryhmä, voidaan saada kaavan (I) mukaisten yhdisteiden suoran asylaation kautta.

(b) Yhden hydroksyyliryhmän monoasetyloituja johdannaisia, kun R^, R^ ja R^ yhdessä sisältävät enemmän kuin yhden OH-ryhmän, voidaan saada kaavan (I) mukaisten yhdisteiden suojattujen välituotteiden asyloinnin avulla, joissa R^/R^/R^rn toiset -OH-ryhmät ovat molemmat suojattuja, esimerkiksi, monometoksitri-tyyli- tai trityyliryhmien avulla, ja myöhemmällä suojauksen poistamisella happokäsittelyn avulla. Di- tai tri-asyloituja johdannaisia, joissa asyyliryhmät ovat erilaisia, voidaan sitten valmistaa kuten kohdassa (a).

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden asyylijohdannaiset voidaan muuttaa kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi tavanomaisilla dessvlaa-tio- tai osittaisilla deasylaatiomenetelmillä. Esimerkiksi, reaktiota metanolisen ammoniakin kanssa voidaan käyttää saamaan aikaan täydellinen deasyloituminen kaavan (I) mukaisen yhdisteen tuottamiseksi, jonka kaikki OH-ryhmät on deasyloitu. Reaktio heikon emäksen kanssa, kuten kaliumkarbonaatti, voi : johtaa di- tai triasyloidun johdannaisen osittaiseen deasyloitu- : "·- miseen, jolloin muodostuu kaavan (I) mukaista yhdistettä, : : jossa vain yksi asyyliryhmä on läsnä.

. On oleva edullista, että R^rn muutokset, suojausten poistamiset ja johdannaisten muodostamiset voivat tapahtua missä tahansa halutussa tai tarpeellisessa järjestyksessä.

Kaavan (II) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa seuraavan **' reaktiokaavion mukaisesti: n 85143

Kaavio 1 4° ju.

_ ,„ur, ,-uo -OH__-> R,'CHR,'CHR 'ON I

R3 CHR2'CHR-l DEAD, PPh3 X 3 2 1 (III) ^ H-NNH-, .a.0 cr 0 - * GIH0 C-H-OCH^ 0 .

N^/ ‘ \/ v <f II «HCl N^NH <-2— R,'CHR-'CHRj^ONHj r3-chr2-chr1· o (v)2 or i) (ch3)2::ch(och3)2 ii) h?::cochc:;^?.hci PhCCNCS iii)BF,.(C2K5):0 VO o II " OM, X, 0:«2 * Aik I, NaCK ^

// il -> < H

'1 NHCNHCPh I N=C-NC:?h :.: : R31CHR21CHR^1 0 SO ' CHR2' CHR11 0 : **· I NH3 (2% DMSC:3sa) 0 V? .%>* <x I N=C-N0D?h

I U

R 'CHR'CHR ' 0 I

£ 1 ΝΗλ

Aik on alkyyliryhmä, kuten metyyli.

· • · · Näitä menetelmiä kuvaillaan yksityiskohtaisesti kuvauksissa 1 ja 6 tämän jälkeen.

12 851 43

Kaavan (III) mukaisia yhdisteitä tunnetaan tai niitä valmistetaan menetelmillä, jotka ovat analogisia niiden menetelmien kanssa, joita käytetään rakenteellisesti samanlaisten tunnettujen yhdisteiden valmistuksessa.

Kaavojen (II) ja (V) mukaiset välituotteet ovat uusia.

Kaavan (IV) mukaisten välituotteiden, muut kuin ne, joissa kaksi OH-ryhmää vierekkäisissä hiiliatomeissa korvataan sidoksella, otaksutaan olevan uusia.

Keksinnön mukaisesti annetaan lisäksi (edullisesti) käyttöön menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan, valmistamiseksi, joka menetelmä käsittää kaavan (VI) mukaisen yhdisteen klooriryhmän muuttamisen:

Cl /7

l:· I

: : 0 : CH-R, 1 CH-R 1 R3 ' —: jossa kaavassa R,. on vetv tai N-suojaryhmä, kuten C.. --alkanovv- o i - / li, ja R^’, R 2 ' ja R ^ ' ovat kuten tätä ennen määriteltiin, joko (i) hydrolyysin avulla, jolloin saadaan R, hvdroksina, (ii) pelkistämällä, jolloin saadaan kaavan (I) mukaista vh-distettä, jossa R. on vety, (iii) korvaamalla kloori Nuhilla, -*· jolloin on amino; tai (iv) reaktiossa OR-":n kanssa, : jolloin saadaan kaavan (I) mukaista yhdistettä, jossa on OR,., ja sen jälkeen R-,':n muuttamisen R^:ksi, R~'*n R,:ksi ja/tai R^':n Reiksi, kun on tarpeen, ja/tai valinnaisesti 13 851 43 sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan, taiO-asyylijohdannaisen muodostamisen.

Hydrolyysi (i) voidaan suorittaa käyttämällä vedellistä mine-raalihappoa, kuten suolahappo, tai edullisemmin käyttämällä orgaanista happoa, kuten muurahaishappo kohotetussa lämpötilassa, sopivasti 70-150°C:ssa, edullisesti 100°C:ssa.

Reaktiot (ii), (iii) ja (iv) edellä mainittuina voidaan suorittaa kuten tätä ennen kuvailtiin vastaavasti reaktioille (i), (ii) ja (iii) menetelmässä, jossa käytettiin kaavan (II) mukaista yhdistettä.

Sopivia merkityksiä suojatuille OH-ryhmille R^'rssa, R *:ssa R^':ssa ja menetelmiä ryhmien suojauksen poistamiseksi R^*:ssa, R2’:ssa ja Rj':ssa ja menetelmiä suolojen 3a jchdar.naisten suojauksen poistamiseksi ja muodostamiseksi kuvaillaan myös menetelmässä, jossa käytetään kaavan (II) mukaista yhdistettä.

Kaavan (VI) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa klooraamalla : vastaava kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R^ on nydroksi, tai, edullisemmin, kaavan (VII) mukaisesta yhdisteestä: :1: Cl ψ Tl j <v::> jossa kaavassa R on formyyli; reaktiolla kaavan (IV) mukaisen 6 yhdisteen kanssa, kuten tätä ennen määriteltiin, jota seura?.

*. kaavan (VIII) mukaisen muodostuneen yhdisteen saattaminen renkaan muotoon: \ Cl

.·. : RCHN L

Il (vt::)

A

R-, ’CHR-, 'CHR, OMH' mhR^ j ~ I o 14 851 43 jossa kaavassa R, on tormyyli; joko sopivan kondensoivan sykli-

O

seksi tekevän aineen kanssa, kuten dietoksimetyyliasetaatti tai trietyyliortoformaatti, tai yhtymisen avulla. Sopiviin olosuhteisiin, näitä reaktioita varten, lukeutuvat ne, jotka esitetään tämän jälkeen kuvauksissa 2-5.

Kaavan (VII) mukaista yhdistettä, jossa kaavassa R,. on formvvli, o voidaan valmistaa antamalla vastaavan kaavan (VII) mukaisen yhdisteen, jossa R, on vety, reagoida muurahaishapon ja asstan- 6 hydridin kanssa.

Kaavan (VII) mukainen yhdiste, jossa kaavassa R,. on vety,

O

2,5-diamino-4,6-diklooripyrimidiini, on tunnettu yhdiste, kuten kuvailivat C. Temole, Jr, B.H. Smith ja J.A. Montgomery, J. Org. Chem., 40 (21), 3141, 1975.

Kaavan (VI) mukaiset yhdisteet ovat uusia.

Edullisuutta lisää se, että keksintö antaa käyttöön menetelmän : kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, ioka menetelmä käsittää suojauksen poistamisen kaavan (I) mukaisesta vhdis-... teestä, jossa kaavassa kaikki hydroksvyliryhmät R,:ssä, .'** R2:ssa ja/tai R^tssa ovat suojatussa muodossa.

Edullisia menetelmiä suojauksen poistamiseksi, kuten tätä ennen kuvailtiin, ovat suojaavien bentsyyliryhmien hvdraus (kun R4 on muu kuin vety), suojaavien p-metoksifcentsyvli-*:**: ryhmien DDQ-poistaminen, t-butyylidimetyylisilyyliryhmän e'·*: poistaminen ja (milloin on tarkoituksenmukaista) yhdisteen hapettaminen, jossa OH-ryhmät viereisissä hiiliatomeissa "" korvataan sidoksella. 1

Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat hyödyllisiä virusten aiheut- tamien infektioiden hoitamisessa, erityisesti herpesvirusten, kuten herpes simplex laji 1, herpes simplex laji 2; varicella zoster-virusten; ia myös lentivirusten kuten visnavirus ja ihmisen immuunikatovirus.

is 85143

Kuvaus 1 (Välituotteita esimerkkiä 1 varten, menetelmä A) (a) N-(3-bentsyyliokslprop-1-oksi)ftaali-imidi Dietyyliatsodikarboksylaattia (15,6 ml, 99,4 mmoolia) lisättiin liuokseen, jossa oli 3-bentsyylioksi-l-propanolia (15 g, 90,4 mmoolia), N-hydroksiftaali-imidiä (14,7 g, 90,1 mmoolia) ja trifenyylifosfiinia (23,7 g, 90,4 mmoolia) tetrahydrofuraa-nissa (450 ml). 16 tunnin kuluttua 20°C:ssa liuotin poistettiin alipaineessa ja jäännös kromatografoitiin piihappogeelillä (eluoituna heksaani:asetonin kanssa, 3:1), jolloin saatiin ot-sikkoyhdistettä keltaisena öljynä (27,8 g, 99 %).

ie 85143 1H NMR: 0 (CDC13) 2,05 (2H, kvintetti, J = 6Hz, CH2CH2CH_), 3,70 (2H, t, J = 6 Hz, CH^OCH^h), 4,35 (2H, t, J = 6Hz, CH2ON), 4,50 (2H, s, CH2Ph), 7,35 (5H, S, CH2?h), 7,85 (4H, 3, ftaali-imidin protoneja).

(b) 3-bentsyylioksiprop-l-oksiamiinihydrokloridi Liuosta, jossa oli N-(3-bentsyylioksiprop-l-oksi)ftaali-imidia (27 g, 86,8 mmoolia) ja hydratsiinihydraattia (4,2 rl, 86,8 mmoolia) etanolissa (200 ml), kuumennettiin palautus jäähdytyksen lämpötilassa 1 tunnin ajan, jäähdytettiin ja lisättiin sitten 3 %:seen natriumkarbonaattiliuokseen (500 ml). Vesiliuos uutettiin eetterin kanssa, yhdistetyt eetteriuutteet kuivattiin (magnesiumsulfaatti), ja haihdutettiin siirapiksi. Eteeristä suolahappoa lisättiin, ia saatu valkoinen kiinteä aine erotettiin suodattamalla, pestiin eetterillä ~a kuivattiin, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (15,2 g, 81 h).

*Η NMR: “ /TCD,).S07 1,80 (2H, kvintetti, J = f Hz, CHnCH.JH.), 3,50 (2H, t, J = oHz, CH2OCH2Ph), 4,10 (2H, t, J = 5Hz, CH-IN), 4,40 (2H, s, CHjPh), 7,30 (5H, s, Ar), 11,20 (3H, cr.s, NH -“' .

: (c) 5-amino-l-( 3-bentsyylioksiprcp-l-oksi )-4-kar'coksamidc • *— imidatsoli____________

Seosta, jossa oli 3-bentsyylioksiprop-l-oksiamiinihydroklcridia ;(11,1 g, 51,0 mmoolia), etyyli-N-(karbamoyylisvaani)metyyliforr-. imidaattia (8,8 g, 70,3 mmoolia), eetteriä (300 ml) ja metano- lia (200 ml), sekoitettiin 20°C:ssa 24 tuntia. Eetteri poistettiin alennetussa paineessa, ja metanolia sisältävää liuosta keitettiin palautus jäähdyttäen 16 tuntia. Metanolin ooistsri-sen yhteydessä saatu jäännös kromatoqrnfoitiin piihacpogee-‘ Iillä (eluoitu kloroformin kanssa, sitten kloroformi-etanolin, 19:1). Uudelleenkitevtvksessä asetoni-petrolieetteristä (ke.

.***. 60-80°C) saatiin otsikkoyhdistettä (2,2 q, 15 ) , sd. 139-1- LT.

UV: (EtOH) 264 U 13,400)nm. IR: ,« av 3330, 3330, 3_'"0, 3210, 3100, 1570, 1535, 1555, 1495, 1455, 1420 cm . lH y-*S: cH /rCD3),so7 1,98 (2H, kvintetti, J = o,3, ό,·5Ηη, H..' , 17 851 43 3,59 (2H, t, J = 6,3Hz CH2OCH2Ph), 4,22 (2H, t, J = 6,6Hz, CH2ON), 4,49 (2H, s, O^Ph), 5,81 (2H, br.s, CNH^, 6,71 (2H, br.s, CONH2), 7,34 (6H, m, Ph, H-2). Todettu: C, 58,02: H, 6,31; N, 19,33 %; m/e, 290.1378. C14H18N'403 tarvitsee: C, 57,91; H, 6,26; N, 19,30 %; m/e, 290.1379.

(d) 5-(N1-bentsoyylitiokarbamoyy1i)amino-l-(3-eentsyylioksi- prop-l-oksi)imidatsoli-4-karboksamidi_

Bentsoyyli-isotiosyanaattia (1,0 ml, 7,6 mmoolia) asetonissa (100 ml) lisättiin liuokseen, jossa oli 5-amino-1-(3-bentsyy 1i-oksiprop-l-oksi)imidatsoli-4-karboksamidia (2,0 g, 6,5 mmoc-lia) kuumassa asetonissa (200 ml). Liuosta keitettiin palautus jäähdyttäen 6 tuntia, jäähdytettiin, haihdutettiin alipaineessa, ja jäännös kromatocrafoitiin piihappogeelillä (eluoitiin kloroformilla ja sitten kloroformi-etanolin kanssa, 20:1), mikä tuotti otsikkovhdistettä (3,0 g, 96 %), IR: V (KBr) 3470, 3300, 3130, 1670, 1525, 1435 cm-1.

LH NMR: <fH /TCD3)2SO/ 1,93 (2H, kvintetti, J = 6,2Hz, CH2CH2CH2), 3,54 (2H, t, J = 6,3Hz, CH2CCH„?h), 4,39 (4H, m, CH2ON, CH2Ph), 7,12 (IK, CONH) , 7,25 (6H, m, PhCH?, CON’H) , : 7,54 (2H, t, 2 protonia PhCO), 7,63 (1H, t, 1 protoni PhCO', 8,10 (3H, m, H-2, 2 protonia PhCO) , 11,95 (2 H, br.s, 2 x NH'.

; (e) 5-( N 1 -bentsoyyli-S-metyylitiokarbamoyyli ) amino-1-( 3- bentsyylioksiprop-l-oksi ) imidatsoli-4-karboksamidi Seosta, jossa oli 5-(N'-bentsoyylitiokarbamoyyli)amino-l-(3-"·*·" bentsyylioksiprop-l-oksi) imidatsoli-4-karboksamidia (2,9 a, 6,4 mmoolia), O,IN natriumhvdroksidiliuosta (100 ml) ia metyyli-: ‘ jodidia (0,64 ml; 10,3 mmoolia), sekoitettiin 2C°C:ssa 16 tun-: tia, ja liuoksen pH säädettiin sitten arvoon pH 5 jääetikalla.

Useiden uuttamisten jälkeen kloroformin kanssa, yhdistetyt uutteet kuivattiin (magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin siirapiksi. Pylväskromatografia piihappogeelillä (eluoituna kloroformi-etanolin kanssa, 30:1) antoi otsikkoyhdistottä O·:' (2,7 g, 88,7 %) .

18 851 43 IR: n) (KBr) 3460, 3300, 3200, 3160, 1675, 1650,1635, ΓΠαΧ - .

1595, 1540, 1520, 1490, 1415 cm"1. iH MMR: o' /TCD,),S07 2,10 (2H, kvintetti, J = 6,3Hz, CH2£H2CH2)( 2,50 (3H, s, SCH3), 3,70 (2H, t, J = 6,3Hz, CH-OCH^h), 4,40 (2H, t, J = 6,3 Hz, CH2ON), 4,55 (2H, s, CH^Ph), 7,50 (11H, CH2£h, 3 protonia COPh, H-2, CONH2), 8,00 (2H, m, 2 protonia CCPh), 11,"5 (IH, br.s, HN-C=N).

(f) 9-(3-bentsyy1joksiorop-1-oksi)guaniini 5-(N'-bentsoyyli-S-metyylitiokarbamoyyli)amino-l-(3-centsyyli-oksiprop-l-oksi)imidatsoli-4-karboksamidia (0,75 g, 1,63 mmoolia) käsiteltiin 2 % ammoniakin kanssa dimetyyliformar.idis-sa (35 ml) 120°C:ssa teräsastiassa 6 tuntia. Liuotin poisret-tiin alipaineessa, jolloin saatiin siirappia, joka liuotettiin sitten IN natriumhydroksidiin ja kuumennettiin iOO^C:ssa 2 tuntia. Jäähdytetty reaktioseos tehtiin happamaksi pH-arvoor. : väkevöidyn suolahapon kanssa. Saatu saostuma otettiin taimeen, pestiin usealla eetterierällä ja uudelleenkiteytetti in vedelli-sestä metanolista, mikä tuotti 9-(3-bentsyylioksicroc-l-oksi'-guaniinia valkoisina kiteinä (120 mg, 25 -$) .

IR: V} (KBr) 3340, 3180, 2680, 1695, 1640, 1595, 1475 c~-i.

1H NMR: ö'h /jCD-^SO/ 1,93 (2 H, kvintetti, J = 6,3, ö.äHz.

... CH2CH2CH2), 3,58 (2H, t, J = 6,3 Hz, CH2OCH7?h), 4,23 (2H, :, ·- J = 6,6Hz, CH2ON), 4,48 (2H, s, CH Ph), 6,61 (2H, br.s, MH. ' , : 7,33 (5H, m, Ar), 7,91 (1H, s, H-S), 10,67 (IH, br.s, H-i)~

Todettu: C, 57,08; H, 5,41; N, 22,25 %. C^.H^.N.O, tarvitsee :|-V c' 51A2; H, 5,44; N, 22,21 ’S.

.... j Kuvaus 2 (välituotteet esimerkkiä 1 varten, menetelmä 3 .·*.·. ja esimerkkeihin 2 ja 4) (a) 4,6-dikloori-2,5-diformamidicvrimidiin i '211 Asetanhvdridiä (40 ml) lisättiin tipoittain 10 minuutin kulues- sa seokseen, jossa oli 2,5-diamino-4,6-diklooricyrimidiini \ (8,0 g, 44,7 mmoolia) ja muurahaishappoa (100 ml) O^Crssa. Seosta sekoitettiin 20°C:ssa 4 tuntia, haihdutettiin kuivn.Nsi 19 851 43 ja haihdutettiin samalla tolueenin kanssa. Kiinteytyminen asetoniheksaanista tuotti otsikkoyhdistettä (6,1 g, 60 °4).

IR: (KBr) 3230, 1715, 1580, 1575, 15 50, 1485, 1415 en'1.

max

Todettu m/e 233.9695 ; CcH.N,0„C1- tarvitsee 233.9709 .

6 4 4 z 2 (b) 6-(bentsyylioksiprop-1-oksiamino)-4-kloori-2,5-diform- amidipyrimidiini_

Seosta, jossa oli 4,6-dikloori-2,5-diformamidipvrimidiiniä (5,4 g, 23,0 mmoolia), 3-bentsyylioksiprop-l-oksiamiinia (4,14 g, 23,0 mmoolia), trietyyliamiinia (10 ml) ja dioksaa-nia (50 ml), sekoitettiin palautus jäähdytvskeittämisen lämpötilassa 3 tuntia, jäähdytettiin, suodatettiin ja haihdutettiin kuivaksi. Kolonnikromatografia piihappogeelillä (eluoi-tuna kloroformi-etanolilla, 25:1) antoi otsikkoyhdistettä (4,38 g, 50 S).

IR: \) (KBr) 3243, 1692, 1589, 1570, 1473, 1420 cm"1.

1H NMR: e'H £(002)280/ 1,38 (2H, kvintetti, J = c,3Hz, CH2CH2CH2) 3'57 (2H/ J = 6<3Hz- CH?0CH2?h), 3,95 CH, t, 6,3Hz , CH ONH), 4,47 (2H, s, CH^Ph), 7,32 (5H, m, ?h) , S, 14 :.: I (1H, s, CHONH), 9,26 (1H, s, CHONH) , 9,42 (1H, or.s, 0?0 f vaihdettavissa, NHOCH2) , 10,5 3 (2H, br.s, 2 x NHCHO) .

(c) 9-( 3-bentsyylioksiprop-l-oksi )-6-kloori-2-formamidi- . puriini _ .-.-, 6 - ( 3-bentsyylioksiprop-l-oksiamino )-4-kloori-2,5-dif ormamidi- pyrimidii.nia (4,3 g, 11,3 mmoolia) dietoksinetyyliasetaatissa (40 ml) keitettiin 120°C:ssa 2,5 tuntia. Seos jäähdytettiin sitten ja haihdutettiin siirapiksi. Jäännös liuotettiin metanoliin (40 ml) ja konsentroi tuun ammoniakkiveteen (5 ml). Liuosta sekoitettiin sitten 30 minuutin ajan 20°C:ssa, haihdu-tettiin alipaineessa, ja jäännös haihdutettiin samalla metar.o-lin kanssa. Kolonnikromatografiällä piihappogeeli1la (elu^i-tuna kloroformi-metanolilla, 50:1) saatiin utsikkoyhdis tet tä (3,93 g, 95 ’i) .

2o 85143 IR: ^ max 3120' 3080, 1700, 1615, 1580, 1500, 1435 cm-1.

ΧΗ NMR: SH (CDC13) 2,15 (2H, kvintetti, J = 6Hz, CH^CH CK?}, 3,75 (2 H, t, J = 6 Hz, CH2OCH2Ph), 4,55 (4H, m, CH20N, CH2Ph), 7,40 (5H, m, Ph) , 8,10 (1H, s, H-8), 8,40 (1H, d, J = 10 Hz, D20 vaihdettavissa, NHCHO), 9,60 (1H, d, J = 10Hz, NHCHO).

(d) 2-amino-9-( 3-bentsyylio'Ksiprop-l-oksi )-6-etoks jouriini Liuosta, jossa oli 9-(3-bentsyylioksiprop-l-oksi)-5-kloori-2-formamidipuriinia (500 mg, 1,38 mmoolia) 0,4M natriumetoksi-dissa etanolissa (10 ml), keitettiin 80°C:ssa 2,5 tuntia.

Seos jäähdytettiin sitten ja haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin veteen (20 ml), ja liuoksen pH säädettiin arvoon 7 laimean suolahapon kanssa. Vesiliuosta uutettiin kloroformin kanssa (2 x 20 ml), ja yhdistetyt uutteet pestiin veden kanssa (10 ml), kuivattiin (magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin alennetussa paineessa. Koionnikromatografia cii-happogeelillä (elucituna kloroformi-etanolilla,50:1) tuotti otsikkovhdistettä (390 mg, 31 %).

IR: v (KBr) 3353, 3217, 1552, 1611, 1579, 1505, 1451, 1445.

max _ 1407 cm'1. 1H NMR: Sti /TCD,)230/ 1,35 (3H, t, J = 7,2Hz, : .·. ^3CH20)' 1>95 (2H' kvintetti, J = 6,3, 6,6Hz, CrUCr^CH.,) , I" : 3,60 (2H, t, 6,3 Hz) , 4,37 (2H, t, J = 6,6Hz, CH2ON), 4,42 : " (2H, kvartetti, J = 7,2Hz, CH3£H20), 4,48 (2H, s, CH„Ph), 5,55 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2>, 7,33 (5H, m, PhI, 3,07 : (1H, s, H-8) .

Kuvaus 3 (välituotteita esimerkkiin 5) (a) 6-(3-bentsyylioksi-2-bentsyylioksimetvyliprop-l-oksi- amino)-4-kloori-2,5-diformamicipyrimidiini_

Seosta, jossa oli 4,6-dikloori-2,5-dif ormamidipyrimidiiniä (kuvausesimerkistä la) (3,3 g, 14,0 mmoolia), 3-bentsyylioksi-“!!! 2-bentsyylioksimetyylicrop-l-oksiamiinia (4,2 g, 14,0 mmoolia), “ trietyyliamiinia (5,8 ml, 41,ö mmoolia) ja dioksaania (100 m_), sekoitettiin lOO°C:ssa 2,5 tuntia. Jäähdytetty reaktioseos suodatettiin, ja saostuma otettiin talteen ja pestiin dioksaanm ii 21 85143 kanssa (2 x 25 ml). Suodos ja pesunesteet yhdistettiin ja haihdutettiin siirapiksi. Kolonnikromatografia piihappogeeli 1 lä (eluoituna kloroformi-etanolin kanssa, 50:1) tuotti otsikko-yhdistettä (4,9 g, 70 %).

IR: J (KBr) 3240, 2910, 2860, 1590, 1585, 1555, 1475, 1420 cm 1H NMR: cH /^CD^SO/ 2,29 (1H, kvintetti, J = 6.0, 5,6Hz, CH), 3,56 (4H, d, J » 5,6Hz, 2 :< CH^CCH^h), 3,:-4 (2H, d, J = 6,OHz, CH2ON) 4,46 (4H, s, 2 x CH-Ph), 7,20 (1CH, n, 2 x Ph), 9,28 (1H, br.s, NCHO), 9,42 (1H, br.s, NCHO), 10,35 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, 2 x NHCHO).

(b) 9-(3-bentsyy1ioksi-2-bentsyylioksimetyyliprop-1-oksi)- 6-kloori-2-formamidipuriini_ 6-(3-bentsyy1ioksi-2-bentsyylioksimetyyliprop-1-oksiamino) - 4- kloori-2,5-diformamidicyrimidiiniä (4,8 g, 9,6 mmoolia) ja dietoksimetyyliasetaattia (50 ml) sekoitettiin 120°C:ssa 1,5 tuntia, jäähdytettiin ja haihdutettiin alennetussa paineessa.

Jäännöstä metanolissa (SO ml) ja konsentroidussa ammoniakkiliuo-N- sessa (2 ml) sekoitettiin 20°C:ssa 30 minuuttia, liuotin ccis- : .·. tettiin alennetussa paineessa, ja jäännös mvötähaihdutettii:·.

* · « * ~ metanolin kanssa. Kolonnikromatograf ia piihappogeelillä ]... (elutoituna kloroformilla ja sitten kloroformi-etanolilla, .“I 50:1) antoi otsikkovhdistettä (4,11 g, 89 %).

IR: (KBr) 3110, 2900, 2860, 1700, 1610, 1575, 1500 • » (ΠβΛ .

1440 cm-1. n NMR: tf H /TCD3) 2so7 2,40 (1H, kvintetti, J = 6.1, 6,7Hz, CH), 3,54 (4H, J = 6,7Hz, 2 x CH,OCH,?h), 4,50 5H. *:**: m, CH2ON, 2 x CH2Ph), 7,30 (10H, m, 2 x CH2?h) , 9,36 (LH, s.

OCHNH), 11,31 (1H, s, NHCHO). Todettu: C, 59,44 ; H, 5,09; \ N, 13,62 %. C24H24N-04C1.0,5Et0H tarvitsee: C, 59,45; H, 5,40; N, 13,87 %.

• · • · • * · * *:* Kuvaus 4 (välituotteita esimerkkeihin 6, 7 ja 26)

Seuraavia välituotteita valmistettiin samalla tavalla kuin selostettiin kuvauksissa 2 ja 3.

22 85 1 43

Kaava R^' R,' R3' Rg Sp. °C

(VIII) H CHO 170-181 (VI) H 'TaQ H 137-9 (VI) H OH CH2OH H 173-5

Kuvaus 5 (välituotteita esimerkkeihin 8 ja 9)

Kaava R, 1 R-,' R R, _ 1 2 3 o (IV) CH2OCH2Ar H CH2OCH2Ar - öljy (VIII) CH2OCH2Ar H CH2OCH2Ar CHO vaahto (VI) CH2OCH2Ar H CH2OCH2Ar H kirkas lasimainer.

(VI) CH2OCH2Ar H CH2OCH2Ar CHO kirkas lasimainer.

Ar= —QCH3

Kuvaus 6 (välituotteita esimerkkiin 1, menetelmä A, vaihtoehtoinen menetelmä kuvaukselle 1) : .·. (a) N 1 -3-bentsyylioksiprop-l-oksi-N, N-dimetyylimetaani- II" * Imidamidi ____ "... Liuosta, jossa oli 3-bentsyylioksiprop-l-oksiamiinia (1,83 g, *···' 10 mmoolia) N,N-dimetyyliformamididimetyyliasetaalissa (15 ml), : sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin di-:kloorimetaaniin (30 ml) ja pestiin vedellä (2 x 30 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin (MgSO^) ja liuotin poistettiin, jolloin ·;··· saatiin N-3-bentsyylioksiprop-l-oksi-N , N-dimetvviimetaani- imidamidia (2,1 g, 93 %).

IR: \) mav (filmi) 309C, 3060, 3030, 2930, 2860, 1630, 1495, 1480, 1450, 1440, 1410, 1390, 1380, 1365, 1320, 1250, 1205, ··* 1105, 1075, 1065, 1030, 990, 950, 930, 910, S45, 740, 700 cm"1; 1H NMR: 0’H (CDC13) 1,95 (2H, m, CH0), 2,76 (6H, rf, 2 x CH.' , 3,5 7 (2K, t, J = 6.5Hz, Cd,), 3,95 (2H, . J = 5,5Hz, :»2) .

li 23 85 143 4,51 (2H, s, CH2), 7,3 (5H, m, CgH ) , 7,61 (1H, s, CH); m/z 236 (M+, 5 %), 163 (5), 145 (25), 130 (20), 107 (35), 101 (5), 92 (10), 91 (100), 89 (15), 72 (15), 71 (50), 69 (15), 65 (15), 57 (15); M+ todettu 236.1527; ci3H2oN2°2 tarv^tsee 236.1524.

(b) 2-/N-(3-bentsyylioksiprop-l-oksi)iminometyyli7amino-2- s yaan i-ase t amidi_______

Liuosta, jossa oli 2-amino-2-syaaniasetamidihydrokloridia (5,38 g, 40 mmoolia) ja N'-3-bentsyylioksiprop-l-oksi-N,N-dimetyylime taani-imid am idia (8,7 g, 39 mmoolia) metanolissa (35 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 22 tuntia. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa, ja jäännöstä käsiteltiin etyyliasetaatin (200 ml) ja suolaliuoksen (1 ml) kanssa. Etyyli-asetaattiliuos dekantoitiin, öljymäinen jäännös pestiin etyyliasetaatin kanssa (50 ml), ja yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgS04). Liuotin poistettiin alipaineessa, ja jäännös-öljy pestiin heksaanin kanssa (3 x 50 ml), heksaanikerros dekantoitiin, ja jäännös liuotettiin lämpimään kloroformiin (40 ml) ja käsiteltiin heksaanin kanssa (150 ml). Seosta pakastettiin -18°C:ssa 1 tunti, orgaaninen faasi dekantoitiin, ja jäännösöljy kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin * saatiin 2-/N- ( 3-bentsyylioksiprop-l-oksi ) iminometyyliTamine-2-syaaniasetamidia (8 g, 70 %) .

[*:' IR: O (filmi) 3340, 3190, 3090, 3060, 3030, 2930, 2870,

• · * fflclX

-*Y 2800, 1700, 1660, 1600, 1495, 1455, 1380, 1370, 1215, 1100, 'y;: 1075, 1030, 980, 910, 860, 750, 700 cm”1; 1H NMR: J'k /TCD3)2S07 1,86 (2H, m, CHj), 3,53 (2H, m, CH,), 3,84 (0,2SH.

t, J = 6,5Hz, CH2), 3,94 (1,72H, t, J = 6,5Hz, CHJ, 4,46 (2H, s, CH2), 5,06 (0,14H, d, J = 8Hz, CH) , 5,23 (0,86H, d, J = 8Hz, CH), 6,76 (1H, d, J = 10,5Hz, CH), 6,95 (1H, dd, J s= 10,5 ja 8Hz, D.,0 vaihdettavissa MH), 7,2-7,4 (5H, m, C i-i.i ... ’ J A o e ' Ύ 7,95 (2H, br.s, D?0 vaihdettavissa NH2) ; m/z 290 (M+, 10 ·”·ί , 215 (3 ) , 199 (5), 198 (10), 182 (5), 169 ( 5), 163 (lo), 125 (10), 123 (10), 107 (35), 106 (10), 105 ( 10), 92 (15), 91 (100), 79 (10), 71 (10), 65 (10), 44 (15). Todettu: O, 54,06; H, 5,97; M, 17,64 .¾ M+ 290.1369.

24 851 43 C14H17N4°3*1,15H2° tarvi-tsee: c. 54,23; H, 5,27; M 18,07 ?i.

M+ 290.1376.

(c) 5-amino-l-(3-bentsyylioksiprop-l-oksi)-4-karboksamidi- imidatsoli_

Liuokseen, jossa oli 2-/N-(3-bentsvylioksiprop-l-oksi)iminc-metyyliamino-2-syaanissetamidia (2 g, 5,9 mmoolia) kuivassa dimetoksietaanissa (150 ml) kuivan typpiatmosfäärin alla, lisättiin booritrifluoridieteraattia (0,85 ml, 6,9 mmoolia). Liuosta kuumennettiin 60°C:ssa 1 tunti, jäähdytettiin huoneen lämpötilassa, ja liuotin poistettiin alipaineessa. Jäännös jaettiin osiin kloroformin (100 ml) ja natriumbikarbonaatti-liuoksen (100 ml) välillä. Vesifaasi uutettiin kloroformin kanssa (30 ml), yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MciC.). ja liuotin poistettiin. Jäännös kromatografoitiin piihappo-geelillä, eluoiden kloroformi-metanolin kanssa, 20:1, jolloin saatiin 5-amino-l-(3-centsyylioksiprop-l-oksi)-4-karboksamiii-imidatsolia (1,25 g, 53 ’=).

Kuvaukset 7 ja 8 (kiraaliset välituotteet esimerkkiin 14) ; ( R ) -isomeerejä :*- Kaava R^ R2' R3' (IV) CH2OBz H CH205z ZE7d5 = + 1C’~° /. (V) CH2OBz H CH2OEz kumia :Y: (II) CH2OBz H CH2OSz lasia /L = MeS 7 Bz = CH,C-K_ /7 = PhC02_7 valmistettiin samalla tavalla kuin kuvailtiin kuvauksissa Y.‘ 1 ja 6.

..*7 Esimerkin 14 mukaisen yhdisteen suojattua fcentsyylioksimuotca valmistettiin kaavan (II) mukaisesta yhdisteestä: sp. .314-215 25 851 43

Kuvaukset 7 ja 9 (välituotteet esimerkkiin 15) (S)-isomeerejä

Kaava R ' R ' R ’ R

_ 1 l j _o_ (IV) CH2OBz H CH2OBz - = -12,2° (VIII) CH2OBz h CH2OBz CHO öljy (VI) CH2OBz h CH2OBz CHO öljy valmistettiin samalla tavalla kuin mitä selostettiin kuvauksissa 2 ja 3.

Kuvaus 10 (välituotteita esimerkkeihin 16-19)

Kaava R^' R2' R3' Rg CH- CH, ! I ' (IV) H 0 0 ch2 ' ch2

(VIII) H 00 CHO

Ch7><~''''· CH?

I I

(VI) H 00 CHO

·*’ valmistettiin samalla tavalla kuin mitä selostettiin kuvauk sissa 2 ja 3.

Kuvaus 11 (välituotteita esimerkkiin 20) *·* * 2-amino-9-(2,2-dimetyyli-l,3-dioksan-5-yylimetoksi-6-metoksi- ··· puriinia valmistettiin kuvauksen 10 mukaisesta yhdisteestä (VI) samalla tavalla kuin mitä kuvailtiin kuvauksissa 2 ja 3.

Kuvaus 12 (välituotteita esimerkkiin 21) *· 2,6-diamino-9-(2,2-dimetyyli-l,3-dioksan-5-yyli-metoksi)- puriinia valmistettiin kuvauksen 10 mukaisesta yhdisteestä 26 851 43 (VI), kuumentamalla ammoniakin kanssa autoklaavissa.

Kuvaus 13 (välituotteita esimerkkeihin 10 ja 22-24)

Kaava R^ ' 1 ' Rg

Me I t

(VIII) H K CH20 Si Bu CHO

Me

(VI) H H ’ · CHO

valmistettiin samalla tavalla kuin mitä selostettiin kuvauksissa 2 ja 3.

Esimerkin 10 mukaisen yhdisteen t-butyylidimetyylisilyloksi-suojaryhmää valmistettiin edellä olevasta yhdisteestä (VI).

Kuvaus 14 (välituotteita esimerkkiin 27) (R)-isomeerejä

Kaava R,' R ' R,' R,.

_ 1 l j o

• · I

i.: : I

CH2 CH2 vaalean I I keltainen : (IV) H O O - neste “V vaalean (VIII) H '' CHO keltainen neste

(VI) H '· CHO

valmistettiin samalla tavalla kuin kuvailtiin kuvauksissa .·*.*. 2 ja 3.

Kuvaus 15 (välituotteita esimerkkeihin 28-29) li 27 85 1 43

Kaava R^ R^ Ρ-3' R6 (IV) H H CH=CH_ - valkoisia levyjä (HCl-suola) (VIII) H H CH=CH2 CHO vaalean keltaista kiinteätä ainetta

(VI) H H CH=CH2 H

(VI) H H CH(OH)CH2OH H

valmistettiin samalla tavalla kuin selostettiin kuvauksissa 2 ja 3 .

Esimerkit

Seuraavia yhdisteitä valmistettiin tätä ennen kuvailtujen menetelmien mukaisesti 0 : i : ” CH-R.

CH-R_ ; I 2 ::V r3 28 85 1 43

Esimerkin n:o Κχ R2 &3 £4

1 UH CH2OH OH

2 H H CH20C0CH3 OH

3 H H Ch20COC0H5 OH

4 H H CH2OH OC2h5

5 H CH20H CH2OH OH

6 H OH Ch2OH OH

7 H OH Oi2OH H

8 Crt2OH H CH2OH OH

9 CH2OH H CH2OH H

10 H H CH2OH H

11 H H ΟΗ2ΟΟΟθ5Ηχχ OH

12 CH2OCOCH3 H CH2OCOCH3 h 13 CH2COCjH7 h CH2COC387 h 14 (R)- CH2OH H CH2OH ΌΗ

15 (S)- CH2OH h CH20H OH

16 h CH2OH Ch2OH H

: 17 H CH2OC0CH3 CH2OCOCH3 H

18 H CH2OCOC2H5 CH2OCOC2ri5 H

! —. 19 H CH20COCbH5 CH20C0C<>H5 H

20 H CH2OH CH2OH OCH3 21 H CH2OH CH2OH NH2

22 H H CH2OCOCh3 H

23 H M CH2OCOC5rix χ H

24 H H CH2OCOCbrt5 H

25 (8)- CH2OCOCH3 H CH2OCOCH3 OH ‘ : 26 H OH CH20H OCH3

27 (R)- H OH CH2OH OH

. 28 H H CHOHCri20H OH

-.29 H H ChoHCH2OH H

30 (K)- H OH CH2OH H

- 31 (S)- h OH CH2uH OH

Kaikki rakenteet varmistettiin spektroskooppisella analyysillä (IR, UV, ^"H nmr ja massaspektroskopia) ia analysoimalla.

29 851 43

Esimerkki 1 9-(3-hydroksiprop-l-oksi)guaniini

O

/γΑ|Η H0(CH2)30

Menetelmä A

Seosta, jossa oli 9-(3-bentsyylioksiprop-l-oksi)guaniinia (140 mg; 0,44 mmoolia), 10 % palladiumhiiltä (200 mg), vettä (20 ml), 5N suolahappoa (10 ml) ja etanolia (10 ml), sekoitettiin 20°C:ssa vetyatmosfäärin alla 45 minuuttia. Katalysaattori suodatettiin pois, liuoksen pH säädettiin arvoon pH 7 ja liuos haihdutettiin kuivaksi alennetussa paineessa. Jäännös kiteytettiin vedestä, jolloin saatiin 42 mg valkoista kiinteää ainetta, joka uudelleenkiteytettiin vielä kerran vedestä, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä (23 mg, 23 %).

1H NMR: /TCD3)2S07 1,80 (2H, kvintetti, J = 5,3, 5,5 Hz, CH2CH2CH2), 3,55 (2H, kvartetti, J = 5,50, 5,77Kz, CH2OH), 4,32 (2H, t, J = 6,6Hz, CH2ON), 4,57 (1H, t, J = 5,0, 5,5Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,57 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH?), : 7,91 (1H, s, H-8), 10,63 (1H, br.s, D20 vaihdettavissa, H-l).

"V Todettu: C, 41,33; H, 5,20; N, 3,24 %. CgH ^.03.0,4 H20 tarvitsee C, 41,33; H, 5,13; N, 30,14 %.

Menetelmä B

’·’** 9- ( 3-bentsyylioksiprop-l-oksi ) -6-kloori-2-f ormamidipur iinia : (3,40 g, 9,41 mmoolia) 30 %:ssa muurahaishapossa (100 ml) keitettiin 100°C:ssa 1 tunti. Reaktioseos jäähdytettiin sit-ten, ja sitä sekoitettiin 10 % palladiumhiilen kanssa (2,0 g) vetyatmosfäärissä 20°C:ssa 45 minuuttia. Katalysaattorin cois-tamisen jälkeen, liuotin haihdutettiin, ja jäännöstä käsitei-:.’-j tiin veden (50 ml) ja konsentroidun ammoniakkiveden kanssa (4 ml) lOO°C:ssa 15 minuuttia. Liuos jäähdytettiin sitten 3a 30 8 5 1 43 haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännöksen uudelleen-kiteytys vedestä antoi 9-(3-hydroksiprop-l-oksi)guaniinia (800 mg, 33 %).

NMR: <T H /TCD^^SO/ 1,80 (2 H, kvintetti, J = 6,3, 6,6Hz, ch2C^2CH2)' 3,55 (2H> kvartetti, J = 5,50, 5,8Hz, C^OH) , 4,32 (2H, t, J = 6,6Hz, CH20N), 4,57 (1H, t, J = 5,5Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,57 (2H, br.s, D^O vaihdettavissa, NH2), 7,91 (1H, s, H-8), 10,53 (1H, br.s, D20 vaihdettavissa, H-l).

Esimerkki 5 9-(3-hydroksi-2-hydroksimetyyliprop-l-oksi)guaniini

O

11

c4H

0 ΐΗ2 CH(CH2OH)2

Seosta, jossa oli 9-(3-bentsyylioksi-2-bentsyylioksimetyvli-• prop-l-oksi)-2-furmamidi-ö-klooripuriinia (2,5 g, 5,2 mmoolia) ;·. ja 80 %:sta muurahaishappoa (100 ml), sekoitettiin 100°C:ssa .*·. 1 tunti, jäähdytettiin, ja 10 % palladiumhiiltä (2,0 g) lisät- tiin. Seosta sekoitettiin sitten vetyatmosfäärissä 45 mir.uut-"· · tia. Katalysaattori poistettiin, ja liuos haihdutettiin aienne- tussa paineessa. Saatua jäännöstä kuumennettiin vedessä .·.· (100 ml) kunnes kiehuminen alkoi. Konsentroitua ammoniakki- vettä (4 ml) lisättiin, ja liuosta kuumennettiin sitten :*" vielä 15 minuuttia, jäähdytettiin ja haihdutettiin alennetussa paineessa. Uudelleenkiteytys vedestä (hiili) antoi 9-(3-hydroksi-2-hydroksimetyyliprop-l-oksi Jguaniinia (430 mg, 32 -'i).

C.: IR: \) (KBr) 3380, 3183, 1679, 1637, 1605, 1541, 1479, 1395 cm-1. iH NMR: C H /TCD-^SO/ 1'94 (1H' m' CH * * 3'53 ^.

'7: 2 x CH20H), 4,26 (2H, d, J - 6,3Hz), 4,57 (2H, t, J = 5,2Ht, D20 vaihdettavissa, 2 x OH), 6,58 (2H, br.s, NH.,), 7,92 (IH, s, il 31 85143 H-8), 10,64 (1H, br.s, D20 vaihdettavissa, H-l). Todettu: C, 42,08; H, 5,15; N, 27,41 %. C9H13N504 tarvitsee: C, 42,34; H, 5,14; N, 27,44 %.

Esimerkkien 6, 8, 15, 27, 28 ja 31 yhdisteitä valmistettiin (valmistetaan) samalla tavalla kuin kuvailtiin kuvauksessa 2 ja esimerkissä 1, menetelmä B.

Esimerkin 14 yhdistettä valmistettiin samalla tavalla kuin kuvauksessa 1 ja esimerkissä 1, menetelmä A.

Esimerkkien 2, 3, 11, 12, 13, 17, 18, 19, 22, 23, 24 ja 25 yhdisteitä valmistettiin asyloimalla vastaavaa esimerkki-yhdistettä, joka sisälsi vapaita OH-ryhmiä R!/R2/R3:ssa. Esimerkkien 7, 9, 10, 16, 29 ja 30 yhdisteitä valmistettiin pelkistämällä 6-klooriyhdistettä, jossa 2-aminoryhmä ja OH-ryhmät Rj/R2/R3:ssa ovat valinnaisesti suojatussa muodossa (katso kaava (VI), kuvaukset 5, 10 ja 13); ja sen jälkeen, tarvittaessa, poistamalla suojaus Ri/R2/R3:lta ja/tai 2-aminoryhmäItä.

Esimerkkien 4, 20 ja 26 yhdisteitä valmistettiin antamalla sopivan 0R5-ionin reagoida sopivan 6-klooriyhdisteen kanssa, jossa 2-aminoryhmä ja OH-ryhmät R^ssä, R2:ssa ja/tai R3:ssa ovat valinnaisesti suojatussa muodossa (katso kuvaus 2 (c) ja (d) ja kuvaus 11).

Esimerkin 21 yhdistettä valmistettiin happohydrolysoimalla kuvauksen 12 mukaista vastaavaa 6-klooriyhdistettä.

Esimerkeissä 2-4 ja 6-30 valmistettujen yhdisteiden fysi-kaaliskemialliset tiedot on luetteloitu seuraavassa:

Esimerkki 2: IR: (KBr) 3330, 3168, 1736, 1696, 1648, 1602, 1589, 1391 cm'1. NMR: 6H [ (CD3)2SO] 1,98 (2H, kvintetti, 0 J = 6,3, 6,6Hz, CH2CH2CH2), 2,02 (3H, s, CH3 CO), 4,17 (2H, 32 851 43 o t, J = 6,6Hz, CHaON), 4,32 (2H, t, J = 6,3Hz, CH,0 C CH3), 6,60 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa NH2), 7,94 (1H, s, H-8), 10,69 (1H, br.s, DzO vaihdettavissa, H-l). Todettu C, 44,99; H, 4,93; N, 26,20 %; M+ 267,0964. Ci0H13N5Oa vaatii C, 44,93; H, 4,91; N, 26,21 %; M+ 267,0968.

Esimerkki 3: IR: (KBr) 3393, 3200, 1714, 1700, 1639, 1595, 1582, 1391 cm"1. XH NMR: 6H [ (CD3)2SO] 2,13 (2H, kvintetti, J = 6,3Hz, CH,CH,CH?) . 4,43 (2H, t, J = 6,6Hz, CH2), 4,46 (2H, t, J = 6,3Hz, CH2), 6,60 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 7,53 (2H, m, 2 PhC02:n protonia), 7,67, (1H, m, 1 PhC02:n protoni), 7,97 (1H, s, H-8), 7,97 (1H, m, 2 PhC02:n protonia), 10,72 (1H, br.s, D20 vaihdettavissa, H-l). Todettu C, 54,52; H, 4,72; N, 20,98 %; M+ 329,1126. Ci5H15N5Oa vaatii C, 54,70; H, 4,60; N, 21,27 %; M+ 329,1124.

Esimerkki 4 s IRs Vgmx (KBr) 3376, 3326, 3205, 1649, 1611, 1581, 1509, 1454, 1402 cm'1. XH NMR: SH [(CD3)2SO] 1,35 (3H, dd, J = 6,9, 7,1Hz, CH-»CH,0) . 2,50 (2H, kvintetti, J = 6,3, 6,6Hz, CH2), 3,56 (2H, dt, J = 5,2, 6,3Hz, CHjOH), 4,35 (2H, t, J = 6,6Hz, CH2ON), 4,45 (2H, kvartetti, J = 6,9, 7,1Hz, OCH2CH3), 4,61 (1H, t, J = 5,2Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,56 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 8,09 (1H, s, H-8). Todettu C, 47,16; H, 5,92; N, 27,60 %. Ci0H15N5O3 vaatii C, 47,41; H, 5,98; N, 27,65 %.

Esimerkki 6: UV! Kux (H20) 252 (6 12,600) nm; IR: (KBr) 3330, 1690, 1640, 1605, 1540, 1475 cm"1. lH NMR: SH [(CD3)2SO] 3,39 (2H, m, C&OH), 3,72 (1H, m, CHOH), 4,10 (1H, dd, J = 10,7, 7,6Hz, CH2ON), 4,33 (1H, dd, J * 10,5, 3,3Hz, CH2ON), 4,70 (1H, t, J = 5,7Hz, OH), 5,15 (1H, d, J = 5,2Hz, OH), 6,62 (2H, br.s, HN2), 7,90 (1H, s, H-8), 10,58 (1H, br.s, NH); m/z 241 (M+, 3 %), 210 (2), 167 (27), 151 (100), 109 (20),

II

33 85 1 43 61 (47). Todettu C, 38,85; H, 4,66; N, 29,14 %. M+ 241,0813. C8HnN50A vaatii C, 39,84; H, 4,60; N, 29,03 %.

M+ 241,0811.

Esimerkki 7: UV: λΜΧ (H20) 221 (G 25,600), 305 (G 7,000) nm; IR: (KBr) 3670, 3420, 3310, 3200, 1650, 1620, 1570, 1520, 1480, 1425 cm'1. lH NMRs SH [(CD3)2SO] 3,41 (2H, m, CHjOH), 3,76 (1H, m, CHOH), 4,18 (1H, dd, J = 7,6, 10,7Hz, CH2ON), 4,39 (1H, dd, J = 3,2, 10,7Hz, CH2ON), 4,72 (1H, t, J = 5,6Hz, OH), 5,15 (1H, d, J = 5,2Hz, OH), 6,72 (2H, br.s, NH2), 8,27 (1H, s, H-8), 8,59 (1H, s, H-6). Todettu C, 42,17; H, 4,91; N, 31,07 %; M+ 225,0865. C8HnN503 vaatii C, 42,67; H, 4,92; N, 31,10 %; M+ 225,0862.

Esimerkki 8 s UV: (H20) 252 (G 12,400) ja 265 (mutka, G 9,740) nm; IR: (KBr) 3360, 3200, 1735, 1690, 1640, 1600, 1540, 1475 ja 1400 cm'1. !H NMR: SH [(CD3)2SO] 1,82 (2H, dq, Jq = 6,5Hz ja Jd = 1,8Hz, 3'-H), 3,56 (4H, m, l'-H ja 4'-H), 4,34 (1H, m, 2'-H), 4,63 (1H, t, J = 5,4Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 4,97 (1H, t, J = 6,1Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,59 (2H, s, D20 vaihdettavissa, 2-NH2), 7,87 (1H, s, 8-H) ja 10,67 (1H, s, D20 vaihdettavissa, 1-H). Todettu C, 40,33; H, 5,32; N, 26,03 %. C9H13N504.0,7H20 vaatii C, 40,36; H, 5,42; N, 26,15 %.

Esimerkki 9: UV: λ„.χ (H20) 222 (G 24,100) ja 304 (G 7,020) nm; IR: (KBr) 3330, 3210, 3070, 1655, 1640, 1580, 1510, 1480 ja 1435 cm'1, ‘h NMR: SH [(CD3)2SO] 1,84 (2H, q, J = 6,4Hz, 3'-H), 3,58 (4H, m, l'-H ja 4'-H), 4,42 (1H, m, 2'-H), 4,63 (1H, t, J = 5,2Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 4,98 (1H, t, J = 5,9Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,70 (2H, s, D20 vaihdettavissa, 2-NH2), 8,23 (1H, s, 8-H) ja 8,59 (1H, s, 6-H) . Todettu C, 45,13; H, 5,47; N, 29,30 %. C9H13N503 vaatii C, 45,18; H, 5,48; N, 29,27 %.

34 851 43

Esimerkki 10: IR: Vjjax (KBr) 3340, 3210, 1655, 1615, 1570, 1510, 1430 cm'1. NMR: SH [(CD3)2SO] 1,84 (2H, kvintetti, J = 6,5Hz, CHzCi^CHz), 3,58 (2H, q, J = 6,5, 5,2Hz, C&OH), 4,39 (2H, t, J = 6,5Hz, CH2ON), 4,62 (1H, t, J = 5,2Hz, OH), 6,71 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 8,31 (1H, s, H-8), 8,59, (1H, H-6). Todettu C, 45,89; H, 5,38; N, 33,85 %, C8HuN502 vaatii C, 45,92; H, 5,31; N, 33,49 %.

Esimerkki 11: IRs v*** (KBr) 3337, 3172, 2957, 2933, 1696, 1646, 1599, 1587, 1390 cm'1. XH NMR: SH [ (CD3)2SO] 0,84 (3H, t, J = 6,9Hz, CH3) 1,24 (4H, m, CH^CHoCH,) . 1,51 (2H, kvintetti,

O

CCH,CH,CH,CH,CH·,). 1,98 (2H, kvintetti, J = 6,6, 6,3Hz,

O

OCHzCHaCHzO) 2,29 (2H, t, J = 7,4Hz, CH2CO), 4,19 (2H, d-d, J = 6,6, 6,3Hz, CH2ON), 4,32 (2H, d-d, J = 6,6, 6,3Hz,

O

CH2OC), 6,58 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2) 7,93 (1H, s, H-8), 10,66 (1H, br.s, D20 vaihdettavissa, H-l). Todettu C, 51,74; H, 6,61; N, 21,49 %. C^H21N504 vaatii C, 51,99; H, 6,56; N, 21,66 %.

Esimerkki 12: IR: Vmax (KBr) 3400, 3310, 3190, 1735, 1640, 1615, 1585, 1505, 1470 ja 1430 cm'1. lH NMR: SH [(CD3)2SO] 2,0-2,5 (8H, m, 3'-H ja 2 x CH3), 4,21 (1H, dd, J = 12,7Hz ja 5,8Hz, 1r-H), 4,32 (1H, dt, Jd = 10,9Hz ja Jt = 5,4Hz, 4'-H), 4,54 (1H, dd, J = 12,9Hz ja 2,8Hz, l'-H), 4,63 (1H, m, 2'-H), 4,81 (1H, ddd, J = 11,3Hz, 9,4Hz ja 4,4Hz, 4'-H), 5,16 (2H, s, D20 vaihdettavissa, 2-NHz), 7,96 (1H, s, 8-H) ja 8,67 (1H, s, 6-H). Todettu C, 48,15; H, 5,23; N, 21,51 %, C13H17N505 vaatii C, 48,29; H, 5,30; N, 21,66 %.

Esimerkki 13: IR: Vaax (KBr) 3400, 3310, 3190, 2970, 1735, 1640, 1615, 1580, 1505, 1470 ja 1430 cm'1. NMR: SH [ (CD3)2SO] 0,94 (6H, t, J = 7,4Hz, 2 x CH3), 1,64 (4H, m, 2 x CH,CH,), 2,09 li 35 851 43 (1H, m, 3'-H), 2,17 (1H, m, 3'-H), 2,30 (4H, q, J = 7,1Hz, 2 x CH2CO), 4,21 (1H, dd, J = 23,6Hz ja 5,5Hz, l'-H), 4,33 (1H, dt, Jd = 11,0Hz ja Jt = 5,4Hz, 4'-H), 4,55 (1H, dd, J = 12,8Hz ja 2,9 Hz, l'-H), 4,62 (1H, m, 2'-H), 4,79 (1H, ddd, J = 11,3Hz, 9,1Hz ja 4,7Hz, 4'-H), 5,14 (2H, s, D20 vaihdettavissa, 2-NH2), 7,95 (1H, s, 8-H) ja 8,66 (1H, s, 6 —H). Todettu C, 53,45; H, 6,66; N, 18,34 %. C17H23N3O3 vaatii C, 53,82; H, 6,64; N, 18,46 %.

Esimerkki 14: UV: λΜΧ (EtOH) 252, 270nm (s); XH NMR: SH [(CD3)2SO] 1,80 (2H, m, CH2), 3,55 (4H, m, 2 x CH2), 4,35 (1H, m, CH), 4,64 (1H, t, J = 5Hz, D20 vaihdettavissa OH), 5,00 (1H, t, J = 6Hz, D20 vaihdettavissa OH), 6,67 (2H, s, D20 vaihdettavissa, NH2), 7,87 (1H, s, CH), 10,76 (1H, br.s., D20 vaihdettavissa, NH); m/z 255 (M+, 2 %), 221 (10), 178 (15), 167 (20), 165 (10), 152 (10), 151 (35), 150 (5), 135 (5), 108 (10), 91 (10), 75 (55), 58 (60), 57 (100), 45 (50), 43 (60). M+ havaittu 255,0968. C9H13N50« vaatii M+ 255,0967.

Esimerkki 15: UV: 252 (€ 13040), 270 (s); IR: v,^ (KBr) 3364, 3298, 3243, 3199, 3133, 2959, 1710, 1690, 1644, 1610, 1600, 1578, 1529, 1474, 1410, 1385, 1368, 1323, 1257, 1226, 1206, 1167, 1124, 1068, 1055, 1025, 1015, 968, 948, 867, 849, 781, 696cm'1. 'h NMR: SH [(CD3)2SO] 1,80 (2H, m, CH2), 3,55 (4H, m, 2 x CH2), 4,30 (1H, m, CH), 4,63 (1H, t, J = 5Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 4,98 (1H, t, J = 6 Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,60 (2H, s, D20 vaihdettavissa, NH2), 7,86 (1H, s, CH, 10, 70 (1H, s, D20 vaihdettavissa, NH). Todettu C, 40,90; H, 5,16; N, 26,72 %. C9H13N50«. 0,5H20 vaatii C, 40,90; H, 5,34; N, 26,50 %.

Esimerkki 16: IR: v,,,., (KBr) 3336, 3203, 1647, 1618, 1578, 1430cm'1. lH NMR: SH [(CD3)2S0] 1,97 (1H, m, CH), 3,55 (4H, m, 2 x CH^OH) . 4,33 (2H, d, J = 6,3Hz, CH2ON), 4,59 (2H, t, J = 5,3Hz, D20 vaihdettavissa, 2 * OH), 6,70 (2H, t, br.s, D20 36 851 43 vaihdettavissa, NH2), 8,30 (1H, s, H-8), 8,59 (1H, s, H-6). Todettu C, 45,05; H, 5,63; N, 29,44 %; M+ 239,1022. C9H13N503 vaatii C, 45,17; H, 5,49; N, 29,28 %; M+ 239,1018.

Esimerkki 17: IR: ν^χ (KBr) 3328, 3191, 1740, 1652, 1618, 1581, 1513, 1432 cm'1. lE NMR: SH [(CD3)zS0] 2,03 (6H, s, 2 x CH3), 2,50 (m, CH(CH3)2SO), 4,20 (4H, m, 2 x 0^00=0), 4,39 (2H, d, J = 6,3Hz, CH20N), 6,68 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 8.32 (1H, s, H-8), 8,60 (1H, s, H-6). Todettu C, 48,34; H, 5,30; N, 21,57 %; M+ 323,1225. Ci3H17N505 vaatii C, 48,29; H, 5,31; N, 21,66 %; M+ 323,1230.

Esimerkki 18: IR: v„x (KBr) 3382, 3313, 1740, 1641, 1619, 1575, 1429 cm1. !H NMR: SH [(CD3)2SO] 1,02 (6H, t, J = 7,4Hz, 2 x CH3), 2.33 (4H, kvartetti, J = 7,4Hz, 2 x CH2 C=0), 4,22 (4H, m, 2 x CH20C=0), 4,39 (2H, d, J = 6,3Hz, CH2ON), 6,68 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 8,32 (1H, s, H-8), 8,60 (1H, s, H-6). Todettu C, 51,20; H, 6,04; N, 19,94 %; M+ 351,1525. C15H2iN505 vaatii C, 51,26; H, 6,04; N, 19,93 %; M+ 351,1543.

Esimerkki 19: IR: vMX (KBr) 3327, 1721, 1617, 1576, 1426 cm'1. lK NMR: SH [(CD3)2SO] 2,83 (1H, m, CH), 4,60 (6H, m, 3 x CH2), 6,64 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 7,51 (4H, t, aromaattinen), 7,65 (2H, t, aromaattinen), 7,97 (4H, d, aromaattinen), 8,39 (1H, s, H-8), 8,60 (1H, s, H-6). Todettu C, 61,56; H, 4,79; N, 15,56 %. C23H21N505 vaatii C, 61,73; H, 4,74; N, 15,65 %.

Esimerkki 20: IR: v,^ (KBr) 3332, 3213, 1617, 1584, 1509, 1491 cm'1. *H NMR: SH [(CD3)2SO] 1,95 (1H, m, CH), 3,53 (4H, m, 2 x CHzOH), 3,96 (3H, s, OCH3), 4,29 (2H, d, J = 6,3Hz, CH20N), 4,59 (2H, t, J = 5,2Hz, D20 vaihdettavissa 2 x OH), 6,60 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 8,09 (1H, s, H-8).

li 37 851 43

Todettu C, 44,51; H, 5,68; N, 26,14 %; M+ 269,1127.

C10H15N5O4 vaatii C, 44,60; H, 5,63; N, 26,01 %; M+ 269,1124.

Esimerkki 21: IR: νωχ (KBr) 3356, 3208, 1663, 1628, 1600, 1482, 1445, 1409 cm"1. NMR: SH [(CD3)2SO] 1,95 (1H, m, CH) , 3,54 (4H, m, 2 x CH2OH), 4,27 (2H, d, J = 6,3Hz, OCH2ON), 4,62 (2H, t, J = 5,3Hz, D20 vaihdettavissa 2 x OH), 5,92 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, 6-NH2), 6,80 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, 2-NH2) , 7,92 (1H, s, H-8). Todettu C, 39,76; H, 5,90; N, 31,32%; M+ 254,1124. C9H14N603.0,9H20 vaatii C, 39,96; H, 5,90; N, 31,07 %; M+ 254,1127.

Esimerkki 22: IR: (KBr) 3311, 3154, 1721, 1665, 1614, 1572, 1432 cm"1. *H NMR: SH [(CD3)2SO] 2,02 (4H, m, CH3CH), 4,20 (2H, t, J = 6,5Hz, CH20C=0), 4,39 (2H, t, J = 65,3Hz, CH2ON), 6,70 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 8,32 (1H, s, H-8), 8,59 (1H, s, H-6) . Todettu M+ 251,1013. Ci0H13N5O3 vaatii M+ 251,1018.

Esimerkki 23: IR: Vguu, (KBr) 3337, 3187, 1724, 1656, 1616, 1578, 1511, 1429 cm"1. *H NMR: SH [(CD3)2SO] 0,84 (3Η, t, J = 6,8Hz, CH3), 1,24 (4Η, m, CH,CH,CH,) . 1,52 (2Η, m, CH,CH,C=Q^ . 2,01 (2H, kvintetti, J = 6,6, 6,3Hz, QCHoCH,CH,0) . 2,30 (2H, t, J = 7,3Hz, CH2C=0), 4,21 (2H, t, J = 6,6Hz, CH20C=0), 4,39 (2H, t, J = 6,3 Hz, CH2ON), 6,70 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 8,32 (1H, s, H-8), 8,59 (1H, s, H-6). Todettu C, 54,78; H, 6,96; N, 22,99%; M+ 307,1656. C14H21N503 vaatii C, 54,70; H, 6,90; N, 22,79 %; M+ 307,1644.

Esimerkki 24: IR: (KBr) 3351, 3324, 3195, 1713, 1646, 1620, 1573, 1511, 1430 cm _1. XH NMR: SH [(CD3)2SO] 2,17 (2H, kvintetti, J = 6,3Hz, CH2CH2CH2) , 4,50 (4H, m, CH2ON, CH20C=0) , 6,68 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 7,53 (2H, m, aromaattinen), 7,67 (1H, m, aromaattinen) 7,99 (2H, m, aromaatti- 38 85 1 43 nen), 8,35 (1H, s, H-8), 8,60 (1H, s, H-6). Todettu C, 56,51; H, 4,74; N, 21,86%; M+ 313,1176. Ci5H15N503.0,3H20 vaatii C, 56,52; H, 4,94; N, 21,98 %; M+ 313,1175.

Esimerkki 25: IR: Vnax (KBr) 3430, 3310, 3200, 3120, 3015, 2930, 2900, 2850, 2790, 2740, 1740, 1720, 1700, 1630, 1600, 1535, 1475, 1430, 1380, 1375, 1320, 1240, 1225, 1160, 1115, 1065, 1055, 1010, 960, 945, 900, 890, 860, 825, 780 cm'1. lE NMR: 6H [(CD3)2SO] 62,02 (8H, m, 2 x CH3 plus CH2), 4,17 (4H, m, 2 x CH2), 4,61 (1H, m, CH), 6,47 (2H, s, DzO vaihdettavissa, NH2), 7,90 (1H, s, CH), 10,69 (1H, s, D20 vaih dettavissa, NH). Todettu C, 44,50; H, 5,04; N, 19,95%. C13H17N5O6.0,5H2O vaatii C, 44,82; H, 5,21; N, 20,11 %.

Esimerkki 26: IR: (KBr) 3400, 3220, 1620, 1590, 1500, 1480, 1400 cm'1. NMR: 6H [(CD3)2SO] 3,40 (2H, m, CH^H) , 3,75 (1H, m, CHOH), 3,96 (3H, s, CH3), 4,13 (1H, q, J = 7,7, 10,5Hz, CH20N), 4,36 (1H, q, J = 3,3, 10,5Hz, CH20N), 4,71 (1H, t, J = 5,8Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 5,18 (1H, d, J = 5,2Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,64 (2H, br.s, NH2), 8,07 (1H, s, H-8). “/z 255 (M+, 31 %). Todettu C, 40,95; H, 5,40; N, 26,62%; M+ 255,0965. C9H13N50/>. 0,5H20 vaatii C, 40,91; H, 5,34; N, 26,51%; M+ 255,0967.

Esimerkki 27: UV: λ*** (H20) 252 (G 12,200) nm, IR: (KBr) 3340, 3190, 1690, 1640, 1600, 1540 cm'1. JH NMR: 6H [(CD3)2SO] 3,39 (2H, m, CHzOH), 3,73 (1H, m, CH), 4,10 (1H, q, J = 7,7, 10,5Hz, CH2ON), 4,32 (1H, q, J = 3,3, 10,5Hz, CH2ON), 4,70 (1H, t, J = 5,6Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 5,15 (1H, d, J = 5,0Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,62 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 7,90 (1H, s, H-8). 10,55 (1H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH). ”/z 241 (M+, 2 %). Todettu C, 37,91; H, 4,80; N, 28,11%; M+ 241,0797. C8HnN50«.0,5H20 vaatii C, 38,39; H, 4,82; N, 28,00%; M+ 241,0807.

il 39 8 5 1 43

Esimerkki 28: UV: (H20) 252 (6 12,900) nm, IR: νΜΧ (KBr) 3330, 3170, 1690, 1640, 1600, 1540, 1475cm'1. lH NMR: SH [(CD3)2SO] 1,64 (1H, ra, CHzCHzON), 1,88 (1H, m, CH2CH2ON), 3,31 (2H, m, CH2OH), 3,61 (1H, m, CHOH), 4,34 (2H, m, CH2ON), 4,58 (1H, t, J = 5,5Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 4,64 (1H, d, J = 4,9Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,59 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 7,91 (1H, s, H-8), 10,38 (1H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH). m/z 255 (M+, 10 %). Todettu C, 40,78; H, 5,31; N, 26,66%; M+ 255,0968. C9H13N504.0,5H20 vaatii C, 40,91; H, 5,34; N, 26,51%; M+ 255,0967.

Esimerkki 29: UV: λ*** (H20) 221 (G 24,700), 305 (G 7100) nm, IR: v,,** (KBr) 3420, 3310, 3200, 1640, 1620, 1580, 1520, 1480, 1450 cm'1. lK NMR: SH [(CD3)2S0] 1,65 (1H, m, CH,CH,ON) . 1,91 (1H, m, CHiCHiON) . 3,32 (2H, m, CH2OH), 3,63 (1H, m, CHOH), 4,41 (2H, m, CllzON), 4,59 (1H, t, J = 5,7Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 4,71 (1H, d, J = 5,2Hz, D20 vaihdettavissa, OH), 6,71 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NHZ), 8,30 (1H, s, H-8), 8,59 (1H, s, H-6). Todettu C, 44,94; H, 5,56; N, 29,01%; M* 239,1022. C9H13N503 vaatii C, 45,18; H, 5,48; N, 29,28%; M+ 239,1018.

Esimerkki 30: IR: vm (KBr) 3380, 3320, 3200, 1650, 1620, 1580, 1520 cm*1. XH NMR: SH [(CD3)2SO] 3,40 (2H, m, CH2OH), 3,77 (1H, m, CHOH), 4,18 (1H, q, J - 7,6, 10,5Hz, CH2ON), 4,39 (1H, q, J = 3,3, 10,5Hz, CH2ON), 4,73 (1H, m, D20 vaihdettavissa, OH), 5,16 (1H, m, D20 vaihdettavissa, OH), 6,72 (2H, br.s, D20 vaihdettavissa, NH2), 8,27 (1H, s, H-8), 8,59 (1H, s, H-6).

Antiviraalinen aktiivisuus I. Plakkien reduktiotesti herpes simplex -viruksille 1 ia 2 Soluja (Vero tai MRC-5) kasvatettiin tiheäksi massaksi 24-kuoppaisilla multimaljoilla (kuopan halkaisija = 1,5 cm). Yksisolukerrokset, joista alusta oli poistettu, infektoitiin 40 851 43 kukin suunnilleen 50:llä infektiivisellä partikkelilla herpes simplex-virusta 1 (HSV-1; kanta HFEM) tai herpes simplex-virus ta 2 (HSV-2; kanta MS) 100 ^ulissa fosfaattipuskuroitua saliinia. Virus adsorboitiin 1 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Adsorption jälkeen, jäännössiirros poistettiin kustakin kuopasta ja korvattiin 0,5 ml:lla alustaa Eagle’s MEM, joka sisälsi 5 -% vastasyntyneen vasikan seerumia ja 0,9 % agaroosia (A37). Kun agaroosi oli jähmettynyt, lisättiin koeyhdisteen laimennuksia, jotka oli preparoitu alustaan Eagle's MEM (sisältäen 5 % vastasyntyneen vasikan seerumia), kunkin kuopan saadessa 0,5 ml:r. nes-tekerroksen. Testiyhdiste laimennettiin, jotta saataisiin seuraa-va konsentraatioiden sarja: 200, 60, 20, 6 ....0,06 ^ug/ml; loppukonsentraatiot määrityksessä olivat sen vuoksi alueella välillä 100 ^,ug/ml ja 0,03 ^ug/ml. Infektoituja viljelmiä inkuboitiin 37°C:ssa kostutetussa, 5 % CO^ta sisältävässä ilmassa kunnes plakit olivat selvästi näkyviä (2 tai 3 päivää Vero-soluilla, tavallisesti 1 päivä MRC-5-soluilla).

2. Plakkien reduktiotesti varicella zoster-viruksille MRC-5-soluja kasvatettiin tiheäksi massaksi 24-kuoppaisilla : multimaljoilla (kuopan halkaisija = 1,5 cm). Kukin yksisclu- :·. kerros, joista alusta oli poistettu, infektcitiin suunnilleen ... 50:llä inf ektiivisellä partikkelilla varicella zoster-virusra (VZV; Ellen-kanta) 100 ^,ul:ssa f osf aattipuskuroi tua saliinis.

· Virus adsorboitiin 1 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Acscr?- tion jälkeen, jäännössiirros poistettiin kustakin kuopasta ja korvattiin 0,5 ml:lla Eagle's MEM-alustaa, joka sisälsi 5 % vastasyntyneen vasikan seerumia ja 0,9 % agaroosia (A37'.

·:**: Kun agaroosi oli jähmettynyt, lisättiin koeyhdisteen laimenr.uk- siä, jotka oli preparoitu Eagle's MEM-alustaan (sisälsi 5 '.· lämmöllä inaktivoitua vasikan sikiön seerumia), kunkin kuopan saadessa 0,5 ml:n nestekerroksen. Koeyhdiste oli laimennettu seuraavan konsentraatiosarjän saamiseksi: 200, 60, 20, 6....1,-r u* yUg/ml; loppukonsentraatiot määrityksessä olivat sen vuoksi alueella välillä 100 ^ug/ml ja 0,03 ^ug/ml. Infektoituva viljelmiä inkuboitiin 37°C:ssa kosteutetussa ilmassa, joka sisälsi 5 " C0?:ta kunnes plakit olivat selvästi näkyviä (5 tai 6 päivää).

il 41 85143

Viljelmät kohdista 1 ja 2 kiinnitettiin viralliseen salii-niin, agaroosikerrokset pestiin huolellisesti pois ja sitten yksisolukerrokset värjättiin karbolifuksiinilla. Plakkien laskemiseksi käytettiin stereomikroskooppia. Koeyhdisteen IC5Q laskettiin (lääkeaineen pitoisuus, joka inhiboi plakkien lukumäärää 50 %:lla verrattuna plakkien lukumäärään, joka todettiin viruskontrollin yksisolukerroksissa). Lisäksi, yksi-solukerroksia tarkasteltiin lääkeaineen indusoiman svtotoksisuu-den osoittamiseksi; minimipitoisuus, jossa sytotoksisuutta esiintyy merkittiin muistiin.

3. CPE-inhibitiotesti (replikoivat solut) herpes simplex- virukselle 1_^ MRC-5-soluja (Eagle's MEM-alustassa, joka sisälsi 5 % vastasyntyneen vasikan seerumia), infektoitiin suspensiossa herpes simplex virus l:n kanssa, kanta SC16 (suunnilleen yksi iniektii-vinen partikkeli per 10 solua). Sata mikrolitraa infektoitua solususpensiota (joka sisälsi suunnilleen 2 x 1C' solua) annosteltiin kuhunkin 96-kuocpaisen mikrotiitterimaljän kuoppaan, joka malja sisälsi yhtä suuren tilavuuden koelääkeainetta : alustassa (Eagle's MEM-alusta sisältäen 5 " vastasyntyneen vasikan seerumia) pitoisuuksissa, jotka olivat alueella 200-[.-· 0,09 ^ug/ml (3-kertaiset laimennusvaiheet) ; loppukonsentraatiot olivat sen vuoksi alueella välillä 100-0,045 ^uc/ml. Maljoja ’*-* inkuboitiin sitten 37°C:ssa kosteutetussa ilmassa, joka sisälsi 5 % C02:ta, 3 päivää kunnes viruksen indusoima sytopaattinen vaikutus (CPE) kontrollikuopissa saavutti 100 %. Maljat kiinnitettiin viralliseen saliiniin ja värjättiin karbolifuksii-*:**: nilla. Maljoja tarkasteltiin sitten jotta havaittaisiin, mikä pitoisuus koevhdistettä alensi viruksen indusoimaa C?E:tä 50 %:lla (IC^q>· Maljat, joissa oli infektoimattornia soluja, **;; käsiteltiin vertailun vuoksi koeyhdisteen minimikonsentraation määrittämiseksi, joka aiheutti sytotoksisuutta.

42 851 43 4. CPE-inhibitiotesti (vakiintunut yksisolukerros) lenti-viruksille 3 x 10 lampaan suonipunossolua (SCP) maljattiin 96-kuoppaisen mikrotiitterimaljän erillisiin kuoppiin 100 ^ul:ssa Eagle's MEM-alustaa, jossa oli Hankin suoloja sisältäen 10 % lämpöinakti-voitua vasikan sikiön seerumia (FCS). Kun yksisolukerrokset olivat vakiintuneet (1 tai 2 kasvupäivän kuluttua), ne pestiin 200 yulrlla säilytysalustaa (Eagle’s MEM Hankin suoloilla sisältäen 0,5 % FCS:ää) ja infektoitiin 100 ^,ul:lla visna-virusta (kanta K184) säilvtysalustassa (30 TCID.^/ml). Koe-näytteet laimennettiin säilytysalustalla vielä 95-kuoppaisille mikrotiitterimal joille yli alueen 200-0,09 ^ug/ml 3-kertaisten laimennusvaiheiden kautta. 100 yul laimennettuja näytteitä siirrettiin sitten suoraan viruksilla infektoiduille vksisolukerrok-sille (lopullinen konsentraatioalue oli sen vuoksi IC0-0,045 ^ug/ml) ja inkuboitiin 37°C:ssa kosteutetussa, 5 CO,:ta sisältävässä inkubaatiossa, kunnes viruksen incusoima CPE oli maksimaalinen käsittelemättömissä virusinfektoiduissa kontrolleissa (tavallisesti 12-14 päivää). Maljat kiinnitettiin virallisen saliinin kanssa ja värjättiin kristallivioletil- la. Viruksen indusoima CPE arvosteltiin sitten mikrcskooppi- ' sesti ja näytteen minimikonsentraatio, joka antoi täydellisen ... suojan yksisolukerroksille (MIC), määritettiin.

li «3 851 43

Tuloksia

IC,_ ( ,ug/ml)a MIC

_50 '_ (/ug/tnl)

Esimerkki Herpes simplex Herpes simplex Varicella Visna n:o Type 1 virus Type 2 virus Zoster virus vires HFEM- SCI6- MS- MS- Ellen- K1S4- kanta kanta kanta kanta kanta kanta

Vero- MRC-5 Vero- MRC-5 MRC-5 SCP- so- so- so- so- soluissa soluissa _ luissa luissa luissa luissa ______ _ 1 0,4,0,2 1,0,0,3, 0,3,0,2 0,1 0,8,0,3 3,0 0,2 2 4,3 0,4,0,6 1,1 3 2,8 1,2 2,1 4 100 67 21 5 1,5 1,8,1,8 1,5,1,5 1,5 2,9 0,1 6 8,6 1,9 1,6 0,7 2,3 10 7 100 57 8 11 30 11 0,7 0,1 0,1 14 100 15 7,4 i aJokainen numero on arvo, joka saatiin yksinkertaisessa kokeessa.

Toksisuus : : : Pitoisuuksissa 30 ^ug/ml saakka, ei yksikään yhdisteistä ollut : sytotoksinen infektoimattomille soluille, joita käytettiin kaikissa testeissä.

44 851 43

Taulukko 4

Yhdisteiden BRL 44385 ja Acyclovir antiviraalisen aktiivisuuden vertailu soluviljelmässä 0

fVV

\ N ^VNH2 - 1 BRL 44385 O CH2

OH—Y Acyclovir CH2 O

X

IC50 (pg/ml)

Virus3 Solut BRL 44385 Acyclovir HSV-1 (HFEM) Vero 0,3 0,9 HSV-1 (SC-16) MRC-5 0,4 1,4 HSV-2 (MS) Vero 0,2 0,5 HSV-2 (MS) MRC-5 0,2 0,6 VZV (Ellen) MRC-5 0,8 3,8 EBV P3HR-1 0,3 10 CMV (AD169) MRC-5 >100 28 MRC-5b 85 >100 a IC50-arvo mitattuna HSV-1:lie (HFEM) Vero-soluissa, HSV-2:lie (MS) Vero- ja MRC-5-soluissa ja VZV:lle (Ellen) ja CMV:lle (AD169) MRC-5-soluissa saatiin pintapelkistävissä mittauksissa. IC5Q-arvo mitattuna HSV-1:lie (SC-16) MRC-5-soluissa tehtiin virus indusoi tuvan sytopaattisen vaikutuksen inhiboimiseksi. IC50-arvo EBV:lie saatiin fluoresoivalla vasta-ainemittauksella kapsi-di-antigeeniekspression inhibition määrittämiseksi.

b Infektoitumattomien solujen kasvun inhibointi 72 tunnissa.

li

Claims

45 851 43

1. Menetelmä kaavan (I) mukaisen terapeuttisesti aktiivisen puriinijohdannaisen tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi: R4 (/ ί -N N | NHa 0 (I) CH-Ri CH-Ra Ra jossa kaavassa Ri on vety tai CHaOH; R2 on vety tai (kun Ri on vety) hydroksi tai CHaOH; R3 on CH2OH tai (kun Ri ja R2 ovat molemmat vetyjä) CH(OH)CHaOH; R* on vety, hydroksi, amino tai 0RS, jossa Rs on Ci-e-alkyy- li; ja jossa mikä tahansa OH-ryhmistä Ri:ssä, R2:ssa ja/tai R3:ssa voi olla sen in vivo hydrolysoitavan O-asyylijohdannaisen muodossa, tunnettu siitä, että menetelmä käsittää a) kaavan (II) mukaisen yhdisteen saattamisen renkaanmuo-toon: N*. .CONH2 ’ (X XN=C-NHY I I

0 L (II) CH-Ri' CH-Ra' Ra' 46 85 1 43 jossa kaavassa L on lähtevä rikkiryhmä tai NH2, Y on suoja-ryhmä ja Ri', R2' ja R3' ovat Ri, R2 ja R3 vastaavasti tai Rif Ra ja/tai R3, joissa OH-ryhmät on suojattu; ja sen jälkeen, silloin kun R4 halutussa kaavan (I) mukaisessa yhdisteessä on muu kuin hydroksi, R4-hydroksiryhmän muuttamisen klooriksi, mitä seuraa joko (i) pelkistäminen, jolloin R4 on vety, (ii) kloorin korvaaminen NH2:lla, jolloin R* on amino; tai (iii) reaktio ORs-sn kanssa, jolloin R* on 0RS; ja suojaryhmän Y poistamisen ja Ri':n muuttamisen Risksi, R2':n muuttamisen R2:ksi ja R3':n muuttamisen R3:ksi silloin kun halutaan tai on tarpeen, tai b) kaavan (VI) mukaisen yhdisteen klooriryhmän muuttamisen: Cl C*A | NHR6 0 (VI) CH-Ri' CH-R2' Ra' jossa kaavassa Re on vety tai N-suojaryhmä, ja Ri', R2' ja R3' ovat patenttivaatimuksen 1 mukaiset, joko (i) hydrolyy-sin avulla, jolloin R4 on hydroksina, (ii) pelkistämisen avulla, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R-» on vety, (iii) korvaamalla kloori NH2:lla, jolloin R4 on amino; tai reaktiolla OR5-:n kanssa, jolloin saadaan kaavan (I) mukaista yhdistettä, jossa R4 on 0RS, ja sen jälkeen Ri':n muuttamisen Rx:ksi, R2':n muuttamisen R2:ksi ja/tai R3':n muuttamisen R3:ksi, kun on tarpeen, ja/tai valinnaisesti sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan tai johdannaisen muodostamisen. li 47 851 43

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, jossa kaavassa (I) R^ on vety, R2 on vety, CH2OH tai CH20-asyyli, R3 on CH2OH tai CH20-asyyli, joissa asyyli on in vivo hydrolysoituva asyyliryhmä, ja R4 on hydroksi tai vety, tunnettu siitä, että syklisoidaan vastaavasti substituoitu lähtöaine.