FI84075B - Foerfarande foer framstaellning av nya antracykliner. - Google Patents

Description

84075

Menetelmä uusien antrasykliinien valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää uusien antrasykliiniglykosidi-johdannaisten valmistamiseksi.

Tämän keksinnön mukaisesti saadaan antrasykliiniglykosi-deja, joilla on kaava (II)

0 OH

CH3O 6 OH

•ivj

OH

(II a ,b)

a: Rx = H b: Rx = H

jossa Rj tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyliryhmää, ja näiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja.

Kun saatetaan 3'-epi-daunorubisiinin (III) [F.Arcamone, A.Bargiotti, G.Cassinelli; DE-patentti 2752115 (1. kesäkuuta 1978)] 3'-aminoryhmä reagoimaan salisyylialdehydin kanssa veden ja asetonin seoksessa huoneen lämpötilassa, saadaan vastaava 3'-epi-N-salisylideenijohdannainen (IVc), joka käsittelemällä trifluorimetaanisulfonihappoanhydri-dillä vedettämässä metyleenikloridissa ja pyridiinin läsnäollessa tuottaa vastaavan 3'-epi-N-salisylideeni-4'-0-trifluorimetaanisulfonaatin (IVd). Tämä yhdiste liuotettuna metanoliin voidaan sen jälkeen saattaa alttiiksi sali-sylideeni-suojaryhmän happohydrolyysille p-tolueenisulfo-nihapolla huoneen lämpötilassa, jolloin saadaan trifluori- 2 84075 metaanisulfonaatti-poistoryhmän korvaamisen kautta, toivottu kaavan (Ia) mukainen yhdiste.

CH30 o OH .1 ·<& 3’ (Ia) Käsittelemällä saatu 31,41-epi-imino-daunorubisiinijohdan-nainen (la) trifluorietikkahappoanhydridillä saadaan vastaava, kaavan (Vili) mukainen N-trifluoriasetyylijohdannainen. Tämän yhdisteen reaktio katalyyttisen määrän kanssa rikkihappoa asetonissa tuottaa 41-deoksi-4'-epi-N-tri-fluoriasetyyli-3'-deamino-3'-hydroksi-daunorubisiinin (VIII), josta käsittelemällä vesipitoisella natriumhydroksidilla saadaan kaavan (Ha) mukainen yhdiste. Tyypillisesti N-tri-fluoriasetyyliryhmä voidaan poistaa lievällä alkalisella hydrolyysillä lämpötilassa, joka on 0 °C 0,1 N vesipitoisella natriumhydroksidilla. Kaavan (Ha) mukainen glykosi-di voidaan eristää hydrokloridinaan käsittelemällä kloori-vedyllä metanolissa.

Kaavan (Hb) mukainen yhdiste voidaan valmistaa bromaamal-la kaavan (Ha) mukainen yhdiste, jonka jälkeen muodostunut 14-bromijohdannainen käsitellään vesipitoisella nat-riumformiaatilla huoneen lämpötilassa menetelmällä, joka on esitetty US-patenttijulkaisussa No 3,803,124. Se voidaan myös eristää hydrokloridinaan samalla tavalla kuin kaavan (Ha) mukainen glykosidi.

Keksinnön mukaiset menetelmät on koottu kaikki jäljempänä esitettyyn reaktiokaavioon.

Erityisesti keksinnön mukaisesti valmistettavat yhdisteet ovat käyttökelpoisia kasvaimia estävinä aineina.

3 84075

Reaktlokaavlo O ?H O OH O Oh

CH40 o oh ^ „ ___ CHjO O OH q CHj° o OH J

NH, I _ NR. I ~„ 9

H0 (UI) B> (ivc-d) '' (|J

O OH O OH

(ϋΛέπο

--cjY^V

^ CVOH^Z^T1

V— HO

(vui) (v#0

c R2: oOHC6H4CH= R3: OH

d R2: oOHC6H4CH= R3: 0S02CF3 i R4: COCF3

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä.

ESIMERKKI 1 3’-epi-N-salisylideeni-daunorubisiini (IVc)

Liuosta, jossa oli 2 g 3’-epi-daunorubisiinia (III) seoksessa, jossa oli 80 ml vettä ja 20 ml asetonia, käsiteltiin huoneen lämpötilassa 0,5 ml:11a salisyylialdehydiä pH-ar-vossa 8. 10 minuutin kuluttua lisättiin etyyliasetaattia 4 84075 ja orgaaninen faasi erotettiin, pestiin vedellä kaksi kertaa, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin tyhjössä.

Jäännös hierrettiin ensin heksaanin kanssa salisyylialde-hydin jäännösten poistamiseksi, sen jälkeen kerättiin ja kuivattiin tyhjössä 30 °C:ssa, saatiin kaavan (IVc) mukainen yhdiste melkein kvantitatiivisella saannolla. Ohutle-vykromatografisesti (TLC) Rf = 0,21 käytettäessä Kieselgel F 254 (Merch)-levyä ja eluointlaineena liuotinseosta CH2Cl2-asetoni (8/2, til./til.).

ESIMERKKI 2 3'-deamino-41-deoksi-3'-epi-4'-epi-3',41-epi-imino-dauno-rubisiini (Ia)

Liuokseen, jossa oli 2 g 3'-epi-N-salisylideeni-daunorubi-siinia (IVc) 20 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania ja 2 ml: ssa kuivaa pyridiiniä -10 °C:ssa, lisättiin liuos, jossa oli 0,8 ml trifluorimetaanisulfonihapon anhydridiä 10 ml: ssa dikloorimetaania. Yhden tunnin jälkeen -10 °C:ssa seos laimennettiin dikloorimetaanilla ja pestiin vedellä, kylmällä 0,1 M kloorivetyhapolla, kylmällä vesipitoisella, 5-prosenttisella natriumvetykarbonaatilla tai vedellä. Orgaaninen faasi kuivattiin vedetttömällä natriumsulfaatilla, suodatettiin ja liuotin poistettiin tyhjössä, saatiin kaavan (IVd) mukainen yhdiste. Ohulevykromatografisesti (TLC) Rf oli 0,50 käytettäessä Kieselgel F 254 (Merch)-levyä ja eluointiaineena liuotiseosta Cl^C^-asetoni (95/5 til./ til.).

Raakatuote liuotettiin 50 ml:aan metanolia ja lisättiin 0,2 g p-tolueenisulfonihappomonohydraattia. Liuosta pidettiin huoneen lämpötilassa 1 tunti, sen jälkeen lisättiin 100 ml vettä ja uutettiin pienellä määrällä dikloorimetaa- 5 84075 nia. Vesipitoisen faasin pH säädettiin 0,1 M natriumhyd-roksidilla arvoon 8 ja lisättiin dikloorimetaania. Orgaaninen faasi erotettiin, pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja liuotin haihdutettiin pieneen tilavuuteen.

Seos puhdistettiin kromatografisesti piihappogeelipylvääs-sä, joka oli puskuroitu pH-arvoon 7, käyttäen eluenttina dikloorimetaani-etanolia. Tuotteen (Ia) sisältävä eluaatti pestiin vedellä, haihdutettiin tyhjössä, otettiin talteen pieneen määrään dikloorimetaania ja kiteytettiin. FD MS 509 [M+]; sul.p. 135-137 °C. Rf = 0,38 TLC:ssä Kieselgel F 254 (Merck), eluointiaineena seos CH2CI2-CH3OH-CH3COOH-H20 (30/4/1/0,5 til./til.).

1H-NMR (200 MHz, CDCI3): 8,02 (dd, J = 1,1, 7,7 Hz, 1H, H-l) 7,76 (dd, J = 7,7, 7,7 Hz, 1H, H-2) 7,37 (dd, J = 1,1, 7,7 Hz, 1H, H-3) 5.31 (dd, J = 3,0, 4,8 Hz, 1H, H-l') 5.17 (dd, J = 2,0, 3,6 Hz, 1H, H-7) 4.32 (gd, J = <1, 6,7 Hz, 1H, H-5') 4,07 (S, 3H, OCH3-4) 3.17 (dd, J = 19,2 Hz, 1H, H-lOe) 2,95 (d, J = 19,2 Hz, 1H, H-lOax) 2,46 (ddd, J = 2,0, 2,0 15,0 Hz, 1H, H-8e) 2.43 (s, 3H, COCH3) 2,30 (ddd, J = 1,5, 4,3, 6,4 Hz, 1H, H-3') 1,9-2,0 (m, 2H, H-8ax, H-2'ax) 1,87 (ddd, J = 1,5, 3,0, 14,6 Hz, H-2'e) 1.44 (d, J = 6,7 Hz, 3H, CH3-5')· 6 84075 ESIMERKKI 3 3'-deamino-4'-deoksi-3'-hydroksi-4'-epi-4'-amino-daunoru-bisiini (Ha)

Otsikossa mainittu yhdiste valmistettiin lähtemällä kaavan (Ia) mukaisesta atsiridiinista. 1 g kaavan (Ia) mukaista yhdistettä muutettiin N-trifluoriasetyylijohdannaiseksi (Vili) käsittelemällä 1,2 ml:11a trifluorietikkahappoan-hydridiä vedettömässä metyleenidikloridissa. Jatkotyöskentelyn jälkeen raakatuote (TLCtssä Rf-arvo 0,7 käytettäessä Kieselgel F 254 (Merck)-levyä, eluointiaineena liuotinseos CH2Cl2-asetoni (4/1, til./til.)] liuotettiin 20 ml:aan asetonia ja käsiteltiin katalyyttisellä määrällä rikkihappoa 10 °C:ssa.

Seos laimennettiin 200 ml :11a metyleenidikloridia, pestiin vedellä, vesipitoisella 5-prosenttisella natriumvetykarbo-naatilla ja vedellä. Liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännös puhdistettiin piihappogeelipylväässä käyttäen eluointiaineena metyleenidikloridia, saatiin 0,7 g puhdasta yhdistettä (Vili).

TLC:ssä Rf-arvo 0,21, käytettäessä Kieselgel F 254 (Merck)-levyä, eluointiaineena liuotinseos C^C^-asetoni (4/1, til./til.).

Kaavan (Vili) mukainen tuote liuotettiin hitaasti vesipitoiseen 0,1 N natriumhydroksidiin 0 °C:ssa N-trifluoriase-tyylisuojaryhmän hydrolyysin suorittamiseksi. Tunnin kuluttua 0 °C:ssa liuoksen pH säädettiin arvoon 8,6 käyttämällä 0,1 N kloorivetyhappoa ja uutettiin metyleenidiklo-ridilla. Liuotin haihdutettiin, saatiin 0,5 g:n jäännös, joka muutettiin käsittelemällä metanolisella kloorivedyllä 41-deoksi-4'-amino-4'-epi-3'-deamino-3'-hydroksi-daunorubi-siinin hydrokloridiksi (Ha). MS FD 527 [M+]; sul.p. 153 ° C (haj.).

7 84075 TLC:ssä Rf-arvo 0,18 käyttäessä Kieselgel F 254 (Merck)-levyä, eluointiaineena liuotinsysteemi CH2CI2-CH3OH-CH3-C00H-H20 (30/4/1/0,5 til./til.).

1H-NMR (200 MHz, CDCl3): 8,02 (dd, J = 0,9, 8,5 Hz, 1H, H-l) 7,77 (dd, J = 8,5, 8,5 Hz, 1H, H-2) 7,38 (dd, J = 0,9, 8,5 Hz, 1H, H-3) 5,52 (dd, J = <1, 4,0 Hz, 1H, H-l') 5,28 (dd, J = 1,8, 4,0 Hz, 1H, H-7) 4,07 (S, 3H, OCH3-4) 3.69 (dg, J=6,3, 9,5 Hz, 1H, H-5') 3,51 (ddd, J=4,8, 9,5, 11,6 Hz, 1H, H-3') 3,22 (dd, J = 1,9, 18,9 Hz, 1H, H-lOe) 2,94 (d, J = 18,9 HZ, 1H, H-lOax) 2,40 (s, 3H, COCH3) 2,2-2,4 (m, 1H, H-8ax) 2.30 (dd, J=9,5, 9,5 Hz, 1H, H-4’) 2,0-2,2 (m, 2H, H-8e, H-2'e) 1.70 (ddd, J = 4,0, 4,6, 13,2 Hz, 1H, H-2'ax) 1.31 (d, J= 6,3 Hz, 3H, CH3-5').

ESIMERKKI 4 3'-deamino-3'-hydroksi-4'-deoksi-4'-epi-4'-amino-doksoru-bisiini (Hb) 0,5 kaavan (Ha) mukaista yhditettä liuotettiin metanolin ja dioksaanin seokseen. Liuos käsiteltiin kuten US-paten-tissa No 3,803,124 on kuvattu, ensin bromilla 14-bromijoh-dannaisen valmistamiseksi ja sen jälkeen vesipitoisella natriumformiaatilla otsikossa mainitun yhdisteen valmistamiseksi .

Tämä muutettiin hydrokloridikseen käsittelemällä metanoli-sella kloorivedyllä.

8 84075 FD MS 543 [M+], TCL Kieselgel F 254 (Merck)-levy, liuotin-systeeminä CH2Cl2-CH30H-CH3-C00H-H20 (30/4/1/0,5 til./ til.), Rf-arvo 0,10.

BIOLOGINEN AKTIIVISUUS

Keksinnön mukaisesti valmistettavien, kaavan Ha mukaisten uusien antrasykliiniglykosidien sytotoksinen aktiivisuus testattiin "in vitro" HeLa-soluja, P388-, P388/DX-, LoVo-ja LoVo/DX-soluja vastaan.

Altistusaika yhdisteelle: 24 tuntia/vertailu daunorubisii-niin.

Tulokset esitetty taulukossa l.

Yhdisteet, testattaessa "in vivo" P388-askiittileukemiaa ja Gross-leukemiaa vastaan, osoittivat hyvää kasvaimia estävää aktiivisuutta verrattuna daunorubisiiniin, erityisesti annostettaessa oraalisesti.

Tulokset on annettu taulukoissa 2 ja 3.

9 84075

<*- X I

o :o — o o 4-> o cnj ro +j > oo cg :<o o ε —I qj f— c QJ o +-> r— p» +j o <u o ·ι- o > n ix ιλ o «a· ro :ro e _· X to e ^ (O 3 3 .—. e rc ·— — Ό X 3 '— o to O 4J «Ί x, o m +-> +-> :<o oo ro ro ίο 3 cl c: ·—. co γ-l <vi i_ r— :o •r· r— ro ^ o C ε O- O) m m •r- x > :«j m •I- σ> Cl ro ιλ c :ro :o -n r— w 1/1 >,3 _q ^—. en l/ι ro 3ου :to co *— S- m 00 mm s- <0 00 00 » *> :ro -e e ci-iro o «o- :ro 3 <u 3 Cl. *- CVJ ε +J rO >— <0 3 3 s- o το zk; ·— 3

1 3 O e M

0 1— in QJ e: C +-> ro I— 3 •1- e: 3-r-o 1/1 ε qj r- ε 3

rö p» "t-j O <U m <tJ

1 .o 3 vt .x e a.

o m <n«— 1— ro 3 3 X «J- _l L— V- o 4-» n— <u on e: xi ai m 3 ε >— x <u 3) v- C 3C p QJ ro ‘Λ _J Q. IrO e O -X CO ex ·-“

3) <D :tö QJ on 3 CO E

«C » · · 1/1 :to QJ ro e -e J— - Oi -r- Q. r— CC QJ ··“ «o- Z E :o in 10 aj >> co 4-> V-

•f- C l/> 00 ·!- E

tn 10 qj 1 ro +-> -e +-*

X C 1— = Q-C-r-C

0 3 <0 Ό <U <U

J_ +J -1- 4-> +j +j +-1 -o +j e o :<o «n :ro m >,10 ·«- -* ·Γ- X -r-

JZ S- m r- l. ITI l. nn W

IL. O QJ OJ OJ QJ M Q> - qj m jz -Sz u sz 1— u ro > e +j ·—

1 ro ··-·<- QJ QJ OJ QJ QJ

•f- I/) rO J= Q. 1—· 1— 1— O1— m 3 +j T- QJ p· 1— I— r- X 3 e QJ *r- *r— 't— «o *“ ow iopXccc:ec QJ τ- P- >r ·«-* T- ·— O "r· Ό > ai 10 ο > ·ι- ·»- ·- e ,r- I f- +J χν.$-ΙΛΙΛιΛ·ΡΜ - *τ— in o +* Q 'n 'r- 'n U *r

»Q-+J <1- •'-jCOjOJO-QU -Q

I X TO O 3 3 3 ro 3

OSJ JC. «XCUUUuU

C >· M 10 O Ο O O O

•r- o οοειηι/iinc: m

EU C *r- 3 χ X X QJ

ro -P CT-3ZOOOO O

QJ *r- rO E — TO Ό VJ fO "O

Ό > OC ro

I Z M " · ' ' PL ' L PL PL

-C Opi ra JO O TD QJ >4- ΓΟ <r- 10 84075 TAULUKKO 2

Vaikutus P388 askiittileukemiaa5 vastaan b c d

Yhdiste annos T/C% myrkytys kuolemat DNR 2,9 155 0/10 4.4 170 8/10 FCE 24782/ XOO-0333 1,96 155 0/10 2,9 150 0/10 4.4 140 9/10 6,6 100 10/10 aKokeet suoritettiin CDF^-hiirillä, joihin siirrostettiin 106 leukemiasolua i.p.

bKäsittely i.p. yksi päivä kasvainsiirrostuksen jälkeen cKäsiteltyjen hiirien keskimääräinen elinaika/kontrollien keskimääräinen elinaika x 100 ^Arvioitu ruumiinavaushavaintojen perusteella.

11 84075 TAULUKKO 3

Vaikutus Gross-leukemiaaa vastaan bed Yhdiste annos T/C% myrkytys- mg/kg kuolemat DNR 10 165 0/20 15 192 2/20

Ila 8,2 175 0/20 11.5 230 0/10 16,1 240 0/10 22.5 130 0/10 aKokeet suoritettiin CH3~hiirillä, joihin siirrostettiin 2 x 10® 1eukemiasolua i.v.

käsittely i.v. yksi päivä kasvainsiirrostuksen jälkeen käsiteltyjen hiirien keskimääräinen elinaika/kontroll 1-hiirien keskimääräinen elinaika x 100 ^Arvioitu ruumiinavaushavaintojen perusteella.

Claims (6)

1. Menetelmä yleisen kaavan II mukaisten antrasykliinigly-kosidien valmistamiseksi

0 OH CH-0 0 OH 1 'φ OH (II) jossa kaavassa tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyli-ryhmää, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoad-ditiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) 3'-amino-3’-epi-daunorubisiini, liuotettuna veden ja asetonin seokseen, saatetaan reagoimaan salisyylialdehydin kanssa, b) näin saatu vastaava 3'-epi-N-salisylideenijohdannainen saatetaan reagoimaan trifluorimetaani-sulfonihappoanhydri-din kanssa vedettömässä dikloorimetaanissa ja kuivan pyri-diinin läsnäollessa, c) näin saadulle 3'-epi-N-salisylideeni-4'-O-trifluorime-taanisulfonaatille, liuotettuna metanoliin, suoritetaan salisylideenisuojaryhmän happohydrolyysi huoneenlämmössä p-tolueenisulfonihapolla, d) näin saatu 3'-deamino-4'-deoksi-3'-epi-4'-epi-3',4'-epi-imino-daunorubisiini muutetaan käsittelemällä trifluo-rietikkahappoanhydridillä, i3 84075 e) näin saatu vastaava N-trifluoriasetyylijohdannainen saatetaan reagoimaan katalyyttisen määrän kanssa rikkihappoa, f) näin saadulle 4'-deoksi-4'-epi-N-trifluoriasetyyli-31 -deamino-3'-hydroksi-daunorubisiinille suoritetaan 0 eC:ssa N-suojaryhmän lievä alkalinen hydrolyysi.

2. Patenttivaatimuksen l mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että saatu kaavan II mukainen yhdiste, jossa R-L tarkoittaa vetyatomia, edelleen käsitellään metanoli-sella kloorivedyllä ja tuote eristetään vastaavana hydro-kloridina.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että saatu hydrokloridi muutetaan 14-bromijoh-dannaiseksi saattamalla se reagoimaan bromiliuoksen kanssa, ja saatu 14-bromijohdannainen hydrolysoidaan käyttäen natriumformiaatin vesiliuosta.

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että kaavan II mukainen yhdiste, jossa Rj^ on hydroksyyliryhmä, saadaan vapaana emäksenä.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että lisäksi suoritetaan vaihe, jossa saatu vapaa emäs muutetaan vastaavaksi hydrokloridiksi.

6. 3'-deamino-4'-deoksi-3'-epi-4'-epi-3',4'-epi-imino-dau-norubisiini. i4 84075