FI84074C - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara gangliosidderivat. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara gangliosidderivat. Download PDFInfo
- Publication number
- FI84074C FI84074C FI852515A FI852515A FI84074C FI 84074 C FI84074 C FI 84074C FI 852515 A FI852515 A FI 852515A FI 852515 A FI852515 A FI 852515A FI 84074 C FI84074 C FI 84074C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- ganglioside
- mixture
- ester
- carbon atoms
- residue
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 398
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims description 348
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 181
- -1 heterocyclic amine Chemical class 0.000 claims description 135
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 74
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 72
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 70
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 64
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 61
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 claims description 49
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 43
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 41
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 41
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 37
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 37
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 35
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 34
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 32
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 28
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 25
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 25
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 25
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 claims description 18
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 14
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims description 12
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 claims description 12
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 12
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 11
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N Phenethylamine Chemical compound NCCC1=CC=CC=C1 BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 10
- PFJKOHUKELZMLE-VEUXDRLPSA-N ganglioside GM3 Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@@H]([C@H](O)/C=C/CCCCCCCCCCCCC)NC(=O)CCCCCCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 PFJKOHUKELZMLE-VEUXDRLPSA-N 0.000 claims description 10
- DILRJUIACXKSQE-UHFFFAOYSA-N n',n'-dimethylethane-1,2-diamine Chemical compound CN(C)CCN DILRJUIACXKSQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 10
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 claims description 9
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 claims description 9
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 9
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N benzylamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 claims description 8
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 8
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 8
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 125000005265 dialkylamine group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 7
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 7
- YNOGYQAEJGADFJ-UHFFFAOYSA-N oxolan-2-ylmethanamine Chemical compound NCC1CCCO1 YNOGYQAEJGADFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000002723 alicyclic group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 6
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 claims description 6
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims description 5
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- LIWAQLJGPBVORC-UHFFFAOYSA-N ethylmethylamine Chemical compound CCNC LIWAQLJGPBVORC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N butan-1-amine Chemical compound CCCCN HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 4
- PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 1-Methylpiperazine Chemical compound CN1CCNCC1 PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims description 3
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 2
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims 3
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims 2
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims 2
- 125000000094 2-phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims 2
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000002948 undecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 2
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 claims 1
- 150000007933 aliphatic carboxylic acids Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims 1
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 claims 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 claims 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 424
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 262
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 108
- 239000000047 product Substances 0.000 description 99
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 87
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 63
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 62
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 59
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 58
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 57
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 57
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 55
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 54
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 52
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 49
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 46
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 46
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 35
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 33
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 33
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 28
- QPJBWNIQKHGLAU-IQZHVAEDSA-N ganglioside GM1 Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 QPJBWNIQKHGLAU-IQZHVAEDSA-N 0.000 description 27
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 26
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 20
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 18
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 17
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 17
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 16
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 16
- 230000006870 function Effects 0.000 description 16
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 15
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 15
- MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N methylazanide Chemical compound [NH-]C MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- WGTYBPLFGIVFAS-UHFFFAOYSA-M tetramethylammonium hydroxide Chemical compound [OH-].C[N+](C)(C)C WGTYBPLFGIVFAS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 13
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 12
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 12
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 12
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 12
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 11
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 11
- BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 1-heptanol Chemical compound CCCCCCCO BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 10
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 10
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 10
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 10
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 9
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 8
- QKIUAMUSENSFQQ-UHFFFAOYSA-N dimethylazanide Chemical compound C[N-]C QKIUAMUSENSFQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000039 preparative column chromatography Methods 0.000 description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical compound CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 7
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 7
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000001549 ceramide group Chemical group 0.000 description 7
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 7
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 7
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 7
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- ARXJGSRGQADJSQ-UHFFFAOYSA-N 1-methoxypropan-2-ol Chemical compound COCC(C)O ARXJGSRGQADJSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PFNHSEQQEPMLNI-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1-pentanol Chemical compound CCCC(C)CO PFNHSEQQEPMLNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 6
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 6
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 6
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 6
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QJQZRLXDLORINA-UHFFFAOYSA-N 2-cyclohexylethanol Chemical compound OCCC1CCCCC1 QJQZRLXDLORINA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 5
- 239000001089 [(2R)-oxolan-2-yl]methanol Substances 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- JPYQFYIEOUVJDU-UHFFFAOYSA-N beclamide Chemical compound ClCCC(=O)NCC1=CC=CC=C1 JPYQFYIEOUVJDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- UZBQIPPOMKBLAS-UHFFFAOYSA-N diethylazanide Chemical compound CC[N-]CC UZBQIPPOMKBLAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 125000002421 ganglioside group Chemical group 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 5
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 5
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- BSYVTEYKTMYBMK-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofurfuryl alcohol Chemical compound OCC1CCCO1 BSYVTEYKTMYBMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 description 4
- 125000004919 3-methyl-2-pentyl group Chemical group CC(C(C)*)CC 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 4
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 4
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- XUWVIABDWDTJRZ-UHFFFAOYSA-N propan-2-ylazanide Chemical compound CC(C)[NH-] XUWVIABDWDTJRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- QDRKDTQENPPHOJ-UHFFFAOYSA-N sodium ethoxide Chemical compound [Na+].CC[O-] QDRKDTQENPPHOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MFRIHAYPQRLWNB-UHFFFAOYSA-N sodium tert-butoxide Chemical compound [Na+].CC(C)(C)[O-] MFRIHAYPQRLWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000003410 sphingosines Chemical class 0.000 description 4
- QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N tetramethylammonium Chemical compound C[N+](C)(C)C QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OUWLXWZZZKYIIF-UHFFFAOYSA-N 2-methylpiperidine-1-carboxamide Chemical compound CC1CCCCN1C(N)=O OUWLXWZZZKYIIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZXNBBWHRUSXUFZ-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-2-pentanol Chemical compound CCC(C)C(C)O ZXNBBWHRUSXUFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 3
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 3
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 3
- GCFAUZGWPDYAJN-UHFFFAOYSA-N cyclohexyl 3-phenylprop-2-enoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C=CC(=O)OC1CCCCC1 GCFAUZGWPDYAJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- IIEWJVIFRVWJOD-UHFFFAOYSA-N ethyl cyclohexane Natural products CCC1CCCCC1 IIEWJVIFRVWJOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 3
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 3
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N n-propyl alcohol Natural products CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- JSPCTNUQYWIIOT-UHFFFAOYSA-N piperidine-1-carboxamide Chemical compound NC(=O)N1CCCCC1 JSPCTNUQYWIIOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- LCDCPQHFCOBUEF-UHFFFAOYSA-N pyrrolidine-1-carboxamide Chemical compound NC(=O)N1CCCC1 LCDCPQHFCOBUEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 3
- KWGRBVOPPLSCSI-WPRPVWTQSA-N (-)-ephedrine Chemical compound CN[C@@H](C)[C@H](O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 2
- RJBDSRWGVYNDHL-XNJNKMBASA-N (2S,4R,5S,6S)-2-[(2S,3R,4R,5S,6R)-5-[(2S,3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-2-[(2R,3S,4R,5R,6R)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(E,2R,3S)-3-hydroxy-2-(octadecanoylamino)octadec-4-enoxy]oxan-3-yl]oxy-3-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-5-amino-6-[(1S,2R)-2-[(2S,4R,5S,6S)-5-amino-2-carboxy-4-hydroxy-6-[(1R,2R)-1,2,3-trihydroxypropyl]oxan-2-yl]oxy-1,3-dihydroxypropyl]-4-hydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[C@@H]2O[C@H](CO)[C@H](O[C@@H]3O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]3NC(C)=O)[C@H](O[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H](N)[C@H](O3)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H](N)[C@H](O3)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)C(O)=O)[C@H]2O)[C@H](O)[C@H]1O)[C@@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC RJBDSRWGVYNDHL-XNJNKMBASA-N 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004200 2-methoxyethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTRCSKDHALSCJJ-UHFFFAOYSA-N 3-methylpentan-2-ol;sodium Chemical compound [Na].CCC(C)C(C)O DTRCSKDHALSCJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006542 Bulbar palsy Diseases 0.000 description 2
- PXJSOHJWFXIQHF-BTJKTKAUSA-N CN(C)CCN.OC(/C=C\C(O)=O)=O Chemical compound CN(C)CCN.OC(/C=C\C(O)=O)=O PXJSOHJWFXIQHF-BTJKTKAUSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 2
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 2
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- XXROGKLTLUQVRX-UHFFFAOYSA-N allyl alcohol Chemical compound OCC=C XXROGKLTLUQVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 2
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- GIVLTTJNORAZON-HDBOBKCLSA-N ganglioside GM2 (18:0) Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 GIVLTTJNORAZON-HDBOBKCLSA-N 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 150000001261 hydroxy acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N n-hexanoic acid Natural products CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 230000030363 nerve development Effects 0.000 description 2
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000007472 neurodevelopment Effects 0.000 description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- CELWCAITJAEQNL-UHFFFAOYSA-N oxan-2-ol Chemical compound OC1CCCCO1 CELWCAITJAEQNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMYJGUNNJIDROI-UHFFFAOYSA-N oxan-4-ol Chemical compound OC1CCOCC1 LMYJGUNNJIDROI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940067107 phenylethyl alcohol Drugs 0.000 description 2
- 125000000286 phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 201000002241 progressive bulbar palsy Diseases 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMHHRCOWPQNFTF-UHFFFAOYSA-N s-propan-2-yl azepane-1-carbothioate Chemical compound CC(C)SC(=O)N1CCCCCC1 LMHHRCOWPQNFTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- XFNJVJPLKCPIBV-UHFFFAOYSA-N trimethylenediamine Chemical compound NCCCN XFNJVJPLKCPIBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 2
- KJIOQYGWTQBHNH-UHFFFAOYSA-N undecanol Chemical compound CCCCCCCCCCCO KJIOQYGWTQBHNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 2
- WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N (-)-D-erythro-Sphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCC=CC(O)C(N)CO WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical compound CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMSJFSOOQERIO-UHFFFAOYSA-N 1-bromodecane Chemical compound CCCCCCCCCCBr MYMSJFSOOQERIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 1-hexanamine Chemical compound CCCCCCN BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MXZROAOUCUVNHX-UHFFFAOYSA-N 2-Aminopropanol Chemical compound CCC(N)O MXZROAOUCUVNHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNWUEBIEOFQMSS-UHFFFAOYSA-N 2-Methylpiperidine Chemical compound CC1CCCCN1 NNWUEBIEOFQMSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNODDICFTDYODH-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxytetrahydrofuran Chemical compound OC1CCCO1 JNODDICFTDYODH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHHFUGFMQDIJKM-UHFFFAOYSA-N 2-methylpiperidin-1-amine Chemical compound CC1CCCCN1N UHHFUGFMQDIJKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JIDPHLLCKDISON-UHFFFAOYSA-N 2h-pyran-4-ol Chemical compound OC1=CCOC=C1 JIDPHLLCKDISON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQPGDDAKTTWVDD-UHFFFAOYSA-N 4-bromobutanenitrile Chemical compound BrCCCC#N CQPGDDAKTTWVDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMOXPMSKGOLSIF-UHFFFAOYSA-N 8-aminooctan-2-one Chemical compound CC(=O)CCCCCCN FMOXPMSKGOLSIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 206010010254 Concussion Diseases 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 208000010454 Experimental Liver Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N N-acetyl-D-hexosamine Chemical class CC(=O)NC1C(O)O[C@H](CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N 0.000 description 1
- FDJKUWYYUZCUJX-PGIATKPXSA-N N-glycoloylneuraminic acid Chemical class OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1OC(O)(C(O)=O)C[C@H](O)[C@H]1NC(=O)CO FDJKUWYYUZCUJX-PGIATKPXSA-N 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-TURZORIXSA-N N-hexadecanoylsphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-TURZORIXSA-N 0.000 description 1
- 208000009032 Obstetric Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 208000003435 Optic Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241001387976 Pera Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 229920002396 Polyurea Polymers 0.000 description 1
- QOSMNYMQXIVWKY-UHFFFAOYSA-N Propyl levulinate Chemical compound CCCOC(=O)CCC(C)=O QOSMNYMQXIVWKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008765 Sciatica Diseases 0.000 description 1
- 241000906446 Theraps Species 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- MIUIRGGKIICMBP-NFOZDHADSA-N [27-oxo-27-[[(2s,3s,4r)-1,3,4-trihydroxyoctadecan-2-yl]amino]heptacosyl] octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)CCCCCCCCCCCCCC MIUIRGGKIICMBP-NFOZDHADSA-N 0.000 description 1
- BLAKAEFIFWAFGH-UHFFFAOYSA-N acetyl acetate;pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1.CC(=O)OC(C)=O BLAKAEFIFWAFGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N anhydrous collidine Natural products CC1=CC=NC(C)=C1C HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 159000000032 aromatic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- XYOVOXDWRFGKEX-UHFFFAOYSA-N azepine Chemical compound N1C=CC=CC=C1 XYOVOXDWRFGKEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- AQNQQHJNRPDOQV-UHFFFAOYSA-N bromocyclohexane Chemical compound BrC1CCCCC1 AQNQQHJNRPDOQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- MSZJEPVVQWJCIF-UHFFFAOYSA-N butylazanide Chemical compound CCCC[NH-] MSZJEPVVQWJCIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940048864 ceramide 1 Drugs 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASKHTHDBINVNFJ-UHFFFAOYSA-N chlorosulfonyloxyethane Chemical compound CCOS(Cl)(=O)=O ASKHTHDBINVNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N collidine Natural products CC1=CC=C(C)C(C)=N1 UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N d-ephedrine Natural products CNC(C)C(O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 150000002085 enols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002179 ephedrine Drugs 0.000 description 1
- PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N ethyl bromoacetate Chemical compound CCOC(=O)CBr PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- DDRPCXLAQZKBJP-UHFFFAOYSA-N furfurylamine Chemical compound NCC1=CC=CO1 DDRPCXLAQZKBJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 1
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 238000003988 headspace gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- HVTICUPFWKNHNG-UHFFFAOYSA-N iodoethane Chemical compound CCI HVTICUPFWKNHNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035429 isobutyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000686 lactone group Chemical group 0.000 description 1
- 201000010901 lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000002689 maleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002691 malonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002780 morpholines Chemical class 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 1
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- DUZPCMXUYQIWCZ-UHFFFAOYSA-N n'-(3-phenylpropyl)methanediimine Chemical compound N=C=NCCCC1=CC=CC=C1 DUZPCMXUYQIWCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LUKVNUBQLMJEOI-UHFFFAOYSA-N n-benzyl-n'-propan-2-ylmethanediimine Chemical compound CC(C)N=C=NCC1=CC=CC=C1 LUKVNUBQLMJEOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXSXRABJBXYMFT-UHFFFAOYSA-N n-hexylhexan-1-amine Chemical compound CCCCCCNCCCCCC PXSXRABJBXYMFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 230000002232 neuromuscular Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000006576 neuronal survival Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N ouabain Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C[C@@]2(O)CC[C@H]3[C@@]4(O)CC[C@H](C=5COC(=O)C=5)[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@@H]3[C@@]2(CO)[C@H](O)C1 LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001769 paralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N pentanoic acid group Chemical class C(CCCC)(=O)O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004940 physical analysis method Methods 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- BITYAPCSNKJESK-UHFFFAOYSA-N potassiosodium Chemical compound [Na].[K] BITYAPCSNKJESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 1
- BHRZNVHARXXAHW-UHFFFAOYSA-N sec-butylamine Chemical compound CCC(C)N BHRZNVHARXXAHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- NESLWCLHZZISNB-UHFFFAOYSA-M sodium phenolate Chemical compound [Na+].[O-]C1=CC=CC=C1 NESLWCLHZZISNB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003444 succinic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N sym-collidine Natural products CC1=CN=C(C)C(C)=C1 GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- BRNULMACUQOKMR-UHFFFAOYSA-N thiomorpholine Chemical compound C1CSCCN1 BRNULMACUQOKMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004886 thiomorpholines Chemical class 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000005172 vertebrate brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
- C07H15/10—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical containing unsaturated carbon-to-carbon bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
84074
Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten gangliosidijohdannaisten valmistamiseksi
Esillä oleva keksintö liittyy uusiin terapeuttisesti käyttökelpoisiin gangliosidijohdannaisiin. Etenkin keksintö koskee menetelmää uusien gangliosidien esteri- ja amidijohdannaisten sekä perasetyloitujen johdannaisten valmistamiseksi.
Gangliosidit ovat luonnontuotteita, joita sisältyy erilaisiin eläinten kudoksiin ja elimiin, ennen kaikkea keskushermostoon ja ääreishermostoon, mutta myös lisämunuaisten ytimeen, erytrosyytteihin, pernaan ja muuhun, mistä ne voidaan uuttaa puhdistetussa muodossa. On ollut mahdollista selvittää useimpien näin saatujen gangliosidien perusrakenne. Ne ovat glykosfingolipidejä, s.o. yhdisteitä, jotka muodostuvat oligosakkaridien ja sfingosiinien ja sialihappo-jen määrätyn määrän yhteenliittymistä, ja joissa yksiköt liittyvät toisiinsa glukosidi- tai ketosidisidosten välityksellä. Tähän mennessä kirjallisuudessa esitetyt, puhtaassa muodossa saadut gangliosidit eivät edusta yhtenäisiä kemiallisia yhdisteitä, lukuunottamatta mahdollisesti niiden sakkaridiosaa (oligosakkaridi), koska keramidi- ja sialikomponentit ovat melko vaihtelevia määrätyissä rajoissa. vaikka viitataankin "puhtaisiin" gangliosideihin, tämä ilmaisu on siten tulkittava laajalti käsittämään gangliosi-dilajit, joissa vähintään yksi osa, esimerkiksi sakkaridiosa on yhtenäinen ja luonteenomainen kemialliselta kannalta. Otettaessa tämä huomioon, ennen kuin selitetään yksityiskohtaisemmin esillä olevan keksinnön taustaa, on hyödyllistä huomioida seuraava yleinen kaava, joka sisältää kaikkien niiden gangliosidien rakenteet, jotka on tähän asti saatu puhdistetussa muodossa, ja joka kaava esittää ne funktionaaliset ryhmät, jotka on funktionaalisesti modifioitu keksinnön mukaisesti (kaava I).
2 84074 HOOCiinimii/ siali- \ mummiOH /iminmOH happo = = '“'""""OH keramidi 1 = Ξ » ' = = = = (I)
HOOC'Iiiiiiiii O O OH OH O
^-------== ~ = _ V
ÖH OLIGOSAKKARIDI ÖH
Tässä kaavassa oligosakkariditähde, jonka muodostaa korkeintaan 5 monosakkaridia, on liitetty glukosidisidoksella kera-miditähteeseen ja yhteen tai useampaan sialihappotähteeseen, kumpikin yhtä monella suoralla glukosidisidoksella ja yhden tai useamman sellaisen sidoksen avulla, että jäljelle jäävät sialihappotähteet liittyvät yhteen ketosidisidoksilla, Kaava osoittaa sakkaridiosan, sialihappojen ja keramidin hydrok-syyliryhmät samoin kuin yllä mainitut glukosidisidokset sia-lihappojen ja keramidin kanssa ja sialihappojen karboksyyli-ryhmät. Sialihapoilla, jotka muodostavat osan kaavan I mukaisista gangliosideistä, on yleinen kaava II
H
A-o CO3CONH /H—C—OH N. 1
/ i\ X ,COOH
J / H—c—OH λΧ
9CH2OH
4I 3
OH
jossa yksi tai useampi primaarinen ja sekundaarinen hydrok-syyliryhmä voi olla myös asyloitu ja jossa asyyliryhmät johtuvat etikka- tai glykolihaposta. Gangliosideissä läsnä olevien sialihappojen määrä on tavallisesti 1-5.
3 84074
Sialitähteet liittyvät oligosakkaridiin ketosidisidoksella, joka on muodostettu 2-asemassa olevalla hydroksyylillä oli-gosakkaridihydroksyylin kanssa. Kun useita sialihappoja liitetään yhteen, niiden molekyylit yhdistyvät ketosidisidok-silla, jotka on muodostettu kahden sialihappomolekyylin 2-ja 8-aseman hydroksyyleistä. Gangliosidien, mukaanlukien yllä esitettyjen puhdistettujen gangliosidien sialihapot ovat erilaisten kemiallisesti yhtenäisten happojen, kuten N-asetyylineuramiini- ja* N-glykolyylineuramiinihappojen, joissa ensin mainittu on vallitseva ja yhden tai useamman niiden O-asyylijohdannaisen, kuten 8-O-asyylijohdannaisten seoks ia.
Gangliosidejä on löydettävissä luonnossa metallisuoloina, kuten natriumsuoloina, ja tästä syystä sialihappojen karbok-syyli-funktio(t) on suolan muodossa. Gangliosidien vapaat muodot voidaan helposti saada käsittelemällä suoloja, kuten natriumsuoloja, happotyyppisellä ioninvaihtimella, käyttämällä esimerkiksi hartsia, kuten Dowex AG 50X8, H+-muotoa.
Kaavan I mukaisissa gangliosideissä oleva keramiditähde merkitsee yleensä erityistä N-asyylisfingosiniä, jonka kaava on CH2—O— CH?—O— CH—NH—asyyli CH—NH—asyyli
CH—OH CH—OH
I I
CH CH2 % \ CH CHj
I I
(CHj)n—CHj (CHj)n-CHj jossa n = 10 - 16 ja asyyli johtuu tyydyttynestä tai tyydyttymättömästä rasvahaposta, jossa on 16 - 22 hiiliatomia tai vastaavasta hydroksihaposta.
Oligosakkaridi koostuu korkeintaan 5 monosakkaridista tai niiden asyyliamiiniryhmä sisältävistä johdannaisista, etenkin heksooseista ja niiden yllä mainitun tyyppisistä johdan- 4 84074 naisista. Vähintään yksi glukoosi- tai galaktoosimolekyyli on kuitenkin aina läsnä oligosakkaridissa. Yleisin yllä mainittujen sokerien asyyliamiinijohdannaisena läsnä oleva tähde on N-asetyyligalaktoosiamiini tai N-asetyyliglukosamiini.
Kaavaan I sisältyvien gangliosidien rakenteen ja etenkin sakkaridiosien, sialihappojen ja keramidin välisten sidosten luonteen parempaa havainnollistamista varten on alla esitetty puhtaan G^-gangliosidin kaava, joka sisältää vain yhden sialihapon (joka on esitetty N-asetyyliamiini- tai N-glykolyylineuramiinihapolla).
M
v H A-0 niV-CO-N /ooh \coom Y £hoh \ r\ CHiOir /
H\h m/J
HO H / ai2on nijoii ^ o ch2oh r V-ϊΓνγτΎ·. r V—“ H\OjH h/h h\1 h/h m/h Xn\|h Y h m Oh h M-CO-CH, H OM M 044
H V· H OH
On hyvin tunnettua, että gangliosidit ovat funktionaalisesti tärkeitä keskushermostossa ja äskettäin on osoitettu, että gangliosidit ovat käyttökelpoisia ääreishermostojärjestelmän patologioiden terapiassa. Gangliosidien terapeuttinen toiminta näyttää ennen kaikkea koostuvan hermosolun kehitysil-miön stimuloinnista ja niiden kalvoentsyymien aktivoinnista, jotka toimivat hermoärsykkeiden siirrossa, kuten entsyymi-(Na+K+)-ATPase. Gangliosidien stimuloima hermokehitys edistää vaurioituneen hermokudoksen toiminnallista toipumista.
Lisätutkimuksia on suoritettu sellaisten yhdisteiden löytämiseksi, jotka voisivat osoittautua tehokkaammiksi kuin gangliosidit hermojärjestelmän patologioiden terapiassa. Nämä tutkimukset ovat johtaneet siihen löytöön, että gangliosi- 5 84C74 dien sisäiset esterit, joissa yksi tai useampi sakkaridi-osan hydroksyyli on esteröity yhdellä tai useammalla siali-happojen karboksyyliryhmillä (intramolekulaarinen reaktio), jolloin muodostuu yhtä monta laktonirengasta, ovat aktiivisempia kuin itse gangliosidit hermokehityksen edistämisessä ja kalvoentsyymien aktivoinnissa, jotka toimivat hermoärsyk-keiden siirrossa, kuten entsyymi Na+K+-ATPase (ks. US-patentti 4,476,119).
Esillä olevan keksinnön mukaisesti on nyt löydetty ganglio-sidijohdannaisten toinen ryhmä, joka merkitsee etuja verrattuna itse gangliosideihin sikäli, että niillä on pidentynyt aktiivisuusaika ("retard"-vaikutus ). Nämä yhdisteet ovat johdannaisia, joissa sialihappojen karboksyyliryhmä on funk-tionaalisesti modifioitu esteröimällä tai muuntamalla ne amideiksi tai näiden estereiden ja amidien johdannaisiksi, joissa sakkaridiosan, sialihappojen ja keramidin hydrok-syyliryhmät on myös esteröity orgaanisilla hapoilla, tai pikemmin asylaattijohdannaiset (joita yksinkertaisesti kutsutaan "asylaateiksi" tämän jälkeen ja etenkin "asetylaateiksi, propionylaateiksi jne."). Keksinnön mukaiset johdannaiset sisältävät myös gangliosidijohdannaisia, joissa vain hydrok-syyliryhmät on esteröity orgaanisilla hapoilla, s.o. ne sisältävät vapaita karboksyyliryhmiä.
Gangliosidien sialihapon karboksyylin kaksi metyyliesteriä on esitetty artikkelissa "Notes on improved procedures for the chemical modification and degradation of glycosphyngolipids" julkaisussa Journal of Lipid Research 21, 642-645 (1980), MacDonald et ai. Nämä yhdisteet ovat ganglisiodien Gjuji ja Gm3 metyyliestereitä [(tässä käytetyt lyhenteet gangliosidien identifioimiseksi ovat niitä, joita on ehdottanut Sven-nerholm julkaisussa J. Neurochem. 1J), 613 ( 1963)]. Kuitenkaan MacDonald et ai. eivät mainitse mitään yhdisteiden biologisesta aktiivisuudesta. Gangliosidin Gm3 metyyliesteriä käytetään valmistettaessa sen yhtä perasylaattijohdannaista käytettäväksi reaktioiden erityisessä lohkomisessa tai yhdistelyssä. [Methods of Enzymology, _50, 137-140 (1978 )].
6 8 4 G 7 4
Yllä mainitussa Journal of Lipid Research-lehden kirjoituksessa MacDonald et ai. esittävät myös gangliosidien GMi ja GM3 metyyliestereiden asylointia, mutta eristämättä asyloi-tuja yhdisteitä.
Teranubo Saito ja Sen-Itiroh Hakomori selostavat Journal of Lipid Research-lehdessä [12 (1971), 257-259] Buffalo rottien pernasta, maksasta ja munuaisista, Morris-hepatoomista sekä fibroblastisoluista uutettujen lipidien asetylointia etikka-happoanhydridi-pyridiinillä. He ovat eristäneet kromatograa-sisesti näihin lipideihin sisältyvien gangliosidien asetyloi-dun seoksen asyloidusta tuotteesta, yhdessä muiden glyko-lipidien kanssa, tunnistamatta mitään erityistä gangliosidiä. Amideista gangliosidin GM3 substituoimaton amidi on esitetty [Ad. Exp. Med. Biol. 19 (1972), 95]. Tässäkään tapauksessa ei ole mainittu mitään tuotteen biologisista ominaisuuksista.
Keksinnön tarkoituksena on saada aikaan menetelmä kaavan (Ia)
ROOO"""" ' siali_ ^ »nmnnnOX ( »»·»“»« OX
happo Ξ = 1UUU.1111OX keramidi < — S ► < — ROOC muiiiiij O Ö qx οχ δ (Ia)
Öx OLIGOSAKKARIDI OX
mukaisten gangliosidien esteri- ja amidijohdannaisten sekä perasyloitujen johdannaisten valmistamiseksi. Keksinnön mukaan edellytetään, että kaavan (Ia) mukainen esterijohdannainen on muu kuin gangliosidien GMi, GM2, GM3 tai GDia me-tyyliesteri, että amidijohdannainen on muu kuin gangliosidin GM3 amidi sekä etteivät R ja X samanaikaisesti merkitse vetyä. Kaavan substituenttien määritelmien osalta viitattakoon vaatimuksen 1 johdantoon sekä alla esitettävään selvitykseen. Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, mikä on esitetty patenttivaatimuksen 1 tunnusmerkkiosassa.
7 84074 A. Ganqliosidilähtöyhdisteet
Esillä oleva keksintö käsittää uusia hyödyllisiä gangliosi-dijohdannaisia. Nämä uudet johdannaiset on johdettu modifioimalla funktionaalisesti karboksyyli- ja/tai hydroksyyli-ryhmät, jotka ovat läsnä perusgangliosidirakenteessa. Tähän saakka puhtaassa muodossa saadut gangliosidit voidaan esittää seuraavalla kaavalla, joka korostaa myös esillä olevan . keksinnön mukaisesti modifioituja funktionaalisia ryhmiä.
HOOCmmmi/ siali- \ mmmuiOH ( happo Ξ = ‘"'OH keramidl HOOC»‘i««mn g Ö OH OH Ö
OH OLIGOSAKKARIDI ÖH
Nämä gangliosidit, jotka muodostavat keksinnön mukaisten funktionaalisten johdannaisten lähtöaineet, ovat kaikki niitä, jotka voidaan uuttaa erilaisista eläinten elimistä ja kudoksista, etenkin keskus- ja ääreishermostojärjestelmän kudoksista, esimerkiksi aivoista, selkäydinnesteestä, lihaksista, plasmasta ja veriseerumista, munuaisista, lisämunuaisista, maksasta, pernasta, suolista ja erytrosyyteista tai leukosyyteistä. Lähtögangliosidit voivat myös olla kirjallisuudessa esitettyjä puhdistettuja, kuten sellaisia, jotka on uutettu selkärankaisten, etenkin nisäkkäiden, kuten ihmisen, nautakarjan, vasikan, rotan, hiiren kudoksista ja elimistä tai mikro-organismeista.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti nämä gangliosidiyhdisteet modifioidaan modifioimalla funktionaalisesti hydroksyyli-ja/tai karboksyyliryhmät lähtögangliosidimolekyylissä uusien gangliosidijohdannaisten valmistamiseksi. Keksinnön mukaiset uudet johdannaiset saadaan etenkin (a) alistamalla karboksyyliryhmät esteröintiin tai muuntamalla ne amidiksi ja/tai (b) asyloimalla gangliosidissä läsnä olevat hydroksyyliryhmät.
8 84074
Esterit ja amidit, jotka ovat keksinnön mukaisia uusia johdannaisia, ovat etenkin monoestereitä tai monoamideita mono-sialoganglisidien kohdalla ja polyestereitä tai polyamideja polysialogangliosidien kohdalla, jolloin niissä on yhtä monta esteri- tai amidiryhmää kuin karboksyyliryhmiä on läsnä molekyylissä ja siitä syystä yhtä monta sialihapporyhmää kuin on läsnä.
Keksinnön mukaiset gangliosidijohdannaiset voidaan valmistaa modifioimalla "puhdistetut" yksilöllisesti luonnehditut gan-gliosidit tai modifioimalla gangliosidien seos, kuten mono-sialogangliosidien ja polysialogangliosidien seos. Seoksissa, joita käytetään esteröintiin tai amideiksi tapahtuvaan muuntoon keksinnön mukaisten aktiivisten yhdisteiden valmistamiseksi, kuten esimerkiksi alla esimerkissä 3 esitetyn seoksen valmistamiseksi, joka sisältää sekä monosialogang-liosidejä että polysialogangliosidejä, kaikki karboksyyliryh-mät modifioidaan ja saadaan johdannaisia, jotka on kokonaan esterÖity tai muunnettu amideiksi. Tässä käytetty käsite "esterit tai amidit" tulisi siten tulkita siten, että ne mer-kisevät tässä mielessä täysin esteröityjä tai amideiksi muunnettuja. Tämä koskee myös etenkin alla esitettyjen havainnollistavien esimerkkien johdannaisia, joita kutsutaan tässä yksinkertaisesti "estereiksi tai amideiksi". Nämä esitykset tarkoittavat seoksia, jotka sisältävät polysialogan-gliosidejä, jotka on täysin esteröity tai muunnettu amideiksi kaikissa karboksyyliryhmissä.
Siten esillä oleva keksintö sisältää gangliosidien johdannaiset, jotka on joko johdettu yksinkertaisesta "puhtaasta" gan-gliosidistä tai gangliosidien seoksesta. Keksintö käsittää myös johdannaiset, jotka on saatu erilaisista gangliosidira-kenteista, etenkin koska gangliosidin rakenne voi vaihdella suhteessa sialihappotähteen, keramiditähteen tai oligosakka-riditähteen määrän ja laadun suhteen.
Mitä tulee gangliosidien rakenteeseen perusgangliosidit voivat olla monosialo-, disialo-, trisialo-, tetrasialo- tai 9 8 4 G 7 4 pentasialogangliosidejä, jolloin etusijalla olevat sialihapot ovat N-asetyylineuramiini- ja N-glykolineuramiinihappo. Sialihapot voivat olla myös asyloituja yhdessä niiden lateraali-ketjun hydroksyyleistä, kuten asemassa 8 olevassa hydroksyy-lissä, jos tämä asema ei ole jo varattu ketosidisidoksella, joka sitoo sen toiseen vierekkäiseen sialitähteeseen.
Keramidiosa voi vaihdella, yllä esitetyllä tavalla, ja myös mitä tulee keramidin osan muodostavien sfingosiinien hiili-atomiketjun pituuteen, joka voi olla 16 - 22 hiiliatomia. Lisäksi minkä tahansa asyylitähteen pituus voi myös vaihdella, etenkin samoissa rajoissa, eli se voi olla 16 - 22 hiiliatomia. Tästä poiketen keramiditähde voi vaihdella siten, että kaksoissfingosiinisidos voi puuttua tai olla läsnä ja tavallisesti tämä tähde on pääasiassa muodostunut tyydytty-mättömästä N-asyloidusta sfingosiinistä ja alhaisesta prosenttimäärästä vastaavaa tyydyttynyttä yhdistettä (joka voi kuitenkin olla noin 10 %). Asyyliryhmä voi olla myös johdettu alifaattisista hydroksihapoista, joilla on yllä mainittu määrä hiiliatomeja eli 16 - 20. Eräs erittäin tärkeä gangliosidien ryhmä sisältää keramiditähteessä asyloituja sfingosiinejä, joiden ketjuissa on 18 tai 20 hiiliatomia ja vastaavia tyydyttyneitä yhdisteitä, kun taas niiden hyd-roksyyleillä substituoitumaton tyydyttynyt tai tyydyttymätön asyyliryhmä sisältää saman määrän hiiliatomeja eli 18 tai 20.
Kuten yllä on esitetty esillä olevan keksinnön kohteena ovat toisaalta kaavan I mukaisten "puhtaiden" gangliosidien funktionaaliset johdannaiset, eli johdannaiset, joissa on yhdenmukainen koostumus kuten yllä on esitetty, ja toisaalta gan-gliosidiseosten funktionaaliset johdannaiset uutemuodossa, kuten ne saadaan erilaisista eläinten kudoksista. Ensimmäisessä tapauksessa perusgangliosidit valmistetaan sopivimmin sellaisista, joissa oligosakkaridi koostuu korkeintaan 4 heksoositähteestä tai N-asetyyliheksoamiinista, koska vähintään yksi heksoositähde on läsnä ja joissa tämä sakkaridiosa on kemiallisesti yhtenäinen. Heksoosit valitaan edullisesti 10 84074 ryhmästä, joka koostuu glukoosista ja galaktoosista ja N-asetyyliheksosamiinit valitaan edullisesti ryhmästä, johon kuuluvat N-asetyyliglukosamiini ja N-asetyyligalaktosamiini (gangliosidiryhmä A). Tämän ryhmän gangliosidit ovat esimerkiksi sellaisia, jotka on uutettu selkärankaisten aivoista, kuten sellaisia, joita on esitetty artikkelissa "Gangliosides of the Nervous System" julkaisussa Glycolipid Methodology, Lloyd A. Witting Fd., American Oil Chemists' Society, Champaign, 111. 187-214 (1976) (ks. etenkin liitekuva 1), esimerkiksi gangliosidit Gm4> Gm3, Gm2, Gm1-G1cNAc, Gd2, GDla-Ga^NAc'GTlc' gQ' GT1 3a etenkin sellaisia, joissa oligosakkaridi sisältää vähintään yhden glukoosi- tai galaktoosi-tähteen ja yhden N-asetyyliglukosamiini- tai N-asetyyligalak-tosamiinitähteen, etenkin seuraavat (gangliosidiryhmä B) GM1
Gal (1 -*3 )GalNAC( 1 —>4)Gal(l—>4)Glc(l—^1) keramidi ©
NANA
GDla
Ga 1 (1 t 3) Ga 1NAC (1 —* 4 ) Ga 1 (1 —? 4 ) G1 c (1 —? 1) keramidi Φ Φ
NANA NANA
GDlb
Gal(l -V 3)GalNAC(l **4)Gal(l 4)Glc(l 1) keramidi ©
NANA
(I)
NANA
11 84074 GTlb
Gal (1 -*3)GalNAC(l 4)Gal(l 4)Glc(l -♦ 1) keramidi © - Φ
NANA NANA
©
NANA
missä Glc merkitsee glukoosia, GalNAc merkitsee N-asetyyli-galaktosamiinia, Gal merkitsee galaktoosia ja NANA merkitsee N-asetyylineurami inihappoa.
Jos gangliosidiseoksia käytetään lähtöaineena esillä olevan keksinnön mukaisissa funktionaalisissa muunnoissa, seokset voivat koostua sellaisista, jotka saadaan suoraan uuttamalla gangliosidejä erilaisista eläinten kudoksista "kokonais"-gangliosidiuutteina tai niiden erilaisina jakeina. Tällaisia uutteita on esitetty kirjallisuudessa esimerkiksi yllä mainituissa artikkeleissa tai myös artikkelissa "Extraction and 12 84074 analysis of materials containing lipidbound sialic acids" julkaisussa Glycolipid Methodology, Lloyd A. Wittig Fd., American Oil Chemists' Society, Champaign, 111. 159-186 (1976) ja saman kirjan artikkelissa "Gangliosides of the Nervous System", pp. 187-214. Eräät tärkeimmistä seoksista, joita käytetään esillä olevan keksinnön mukaisesti, ovat gangliosidiuutteet, jotka saadaan hermoston kudoksista, etenkin avoista ja jotka sisältävät gangliosidejä G^i, GDia, Goib ia GTlb' jotka mainittiin jo yllä. Tämän tyypin seoksia ovat esimerkiksi esimerkissä 2 esitetyt.
B. Keksinnön gangliosidijohdannaisten tyypit
Eriteltyinä tämän jälkeen ovat erityiset alkoholi-, amidi-ja asyylifunktiot, jotka sopivat etenkin erittäin mielenkiintoisten keksinnön mukaisten uusien yhdisteiden valmistamiseksi ja nämä funktionaaliset ryhmät on otettava huomioon sekä "puhtaina" yhteinäisten gangliosidien että seoksien, etenkin tässä esitettyjen kohdalla.
Jokaisessa yllä mainitussa gangliosidiryhmässä sialitähtei-den karboksyyliryhmät ovat läsnä esillä olevan keksinnön erään tehtävän mukaisesti esteröidyssä muodossa tai amidien muodossa.
1. Esteröinti
Uusien gangliosidijohdannaisten esteriryhmät ovat johdetut alifaattisista alkoholeista, etenkin sellaisista, joissa on korkeintaan 12 ja etenkin 6 hiiliatomia, tai aralifaattisis-ta alkoholeista, joissa on sopivimmin ainoastaan yksi bent-seenirengas, joka on mahdollisesti substituoitu 1-3 alemmalla alkyyliryhmällä (¢1-4), esimerkiksi metyyliryhmällä ja joissa on maksimaalisesti 4 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa, tai aiisyklisistä tai alifaattis-alisyklisistä alkoholeista, joissa on vain yksi sykloalifaattinen rengas ja korkeintaan 14 hiiliatomia, tai heterosyklisistä alkoholeista, joissa on korkeintaan 12 ja etenkin 6 hiiliatomia ja 13 84074 joissa on vain yksi heterosyklinen rengas, joka sisältää atomin, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu N, O ja S. Esillä olevan keksinnön mukaisten gangliosidijohdannaisten karboksyylifunktioiden amidiryhmät ovat ammoniakista tai jostakin amiinista, sopivimmin korkeintaan 12 hiiliatomia omaavasta amiinista johdetut.
Yllä mainitut alkoholit ja amiinit voivat olla substituoitu-ja tai substituoitumattomia, etenkin funktioilla, jotka on valittu ryhmästä, jonka muodostavat hydroksyyli-, amiini-, alkoksyyliryhmät, joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyyli-, karboksyyli- tai karbyylioksi- (kuten karbonyyli-metoksi tai karbonyylietoksi)-ryhmissä, joissa on korkeintaan 4 atomia alkyyli-, alkyyliamiini- tai dialkyyliamiini-tähteessä, jossa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyyleissä, ja jotka voivat olla tyydyttyneitä tai tyydyttymättömiä, etenkin niissä on ainoastaan yksi kaksoissidos. Alkoholit, jotka esteröivät esillä olevan keksinnön mukaisten ganglio-sidien karboksyylifunktiot, voivat olla monovalenttisiä tai polyvalenttisia, etenkin bivalenttisia. Alifaattisista alkoholeista etusijalla ovat sellaiset alemmat alkohoilit, joissa on korkeintaan 6 hiiliatomia, kuten metyylialkoholi, etyylialkoholi, propyyli- ja isopropyylialkoholi, n-butyyli-alkoholi, isobutyylialkoholi, tert-butyylialkoholi ja kahden-arvoisista alkoholeista etyleeniglykoli ja propyleeniglyko- li. Aralifaattisista alkoholeista etusijalla ovat sellaiset, joissa on ainoastaan yksi bentseenitähde, kuten bentsyyli-alkoholi ja fenetyylialkoholi; alisyklisistä alkoholeista etusijalla ovat sellaiset, joissa on vain yksi sykloalifaat-tinen rengas, kuten sykloheksyylialkoholi (sykloheksanoli) tai terpeenialkoholit, kuten metanoli, karvometanoli tai jokin terpineoleista tai terpinenoleista tai piperitoleista. Heterosyklisistä alkoholeista etusijalla ovat tetrahydrofu-ranoli tai tetrahydropyranoli. Karboksyyligangliosidiryhmien esteröintiin voidaan käyttää myös substituoituja alifaatti-sia alkoholeja, esimerkiksi sellaisia, joissa on amiinifunk-tioita, kuten aminoalkoholeja, kuten sellaisia, joissa on i4 8 4 C 7 4 korkeintaan 4 hiiliatomia, ja etenkin aminoalkoholeja, joissa on dialkyyli-(C^_4)-amiiniryhmä, kuten dietyyliamino-etanolia.
2. Amidien valmistus
Karboksyylifunktiot, jotka muunnetaan amidiryhmäksi esillä olevan keksinnön mukaisesti, johtuvat joko ammoniakista (ja amidi on tässä tapauksessa substituoimaton amidi -CONH2) tai primaarisista tai sekundaarisista amiineista, etenkin sellaisista, jotka sisältävät korkeintaan 12 hiiliatomia. Nämä amiinit voivat olla aromaattisia, heterosyklisiä tai alisyk-lisiä, mutta edullisesti ne ovat alifaattisia. Esillä olevan keksinnön pääasiallisena tarkoituksena on saada aikaan sellaisten alifaattisten amiinien karboksyylijohdannaiset, joissa on korkeintaan 12 hiiliatomia, ja näissä amiineissa voi olla avoimet, suorat tai haarautuneet ketjut tai ne voivat olla syklisiä, kuten 1-6 hiiliatomia sisältävistä alkyyleistä johdetut alkyyliamiinit, kuten metyyliamiini, etyyliamiini, etyylimetyyliamiini, propyyliamiini, butyyli-amiini, heksyyliamiini, dimetyyliamiini, dietyyliamiini, di-isopropyyliamiini, diheksyyliamiini tai bentsyyliamiini. Nämä amiiniryhmät voivat edelleen olla substituoidut amiinilla, alkyyliryhmässään korkeintaan 4 hiiliatomia sisältävällä alkyyliamiini- tai dialkyyliamiiniryhmällä, tai hydroksyyliryhmällä tai alkyyliryhmässään korkeintaan 4 hiiliatomia sisältävällä alkoksiryhmällä, kuten dimetyyli-aminoetyyliamiini, dimetyyliaminopropyyli-l-amiini ja 6-hydroksiheksyyli-l-amiini, tai alkyleeniamiinilla, joka on johdettu 3-6 hiiliatomia käsittävän suoran ketjun tai vastaavan 1-3 metyyliryhmällä substituoidun ketjun omaavasta alkyleeniryhmästä, kuten pyrrolidiini, piperidiini tai atsepiini. Näiden amiinien alkyyli- tai alkyleeniryhmät voivat myös olla katkaistut hiiliatomiketjussa tai substituoidut muilla heteroatomeilla, etenkin typpiatomeilla, ja keksinnön mukaiset amidit ovat tässä tapauksessa johdetut di-amiineista, kuten etyleenidiamiinista, trimetyleenidiamii-nista, piperatsiinistä; tai jos alkyyli- tai alkyleeniryh- is 84074 mien tulee olla katkaistut tai substituoidut happi- tai rik-kiatomeilla/ amidit ovat aminoalkoholijohdannaisia, kuten aminoetanoli tai aminopropanoli tai ne ovat morfoliinin tai tiomorfoliinin johdannaisia. Nämä ryhmät sisältävät siten esim. yllä mainitun tyyppisiä alkyyliamiineja esim. yllä mainitun tyypin alkyyliamiineja ja dialkyyliamiineja, joissa on 1 - 6 hiiliatomia, ja jotka on edellä substituoitu alkyy-liosissa muilla amiini-, alkyyliamino- tai dialkyyliamino-ryhmillä, joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyyliryhmis-sä, tai hydroksyyli- tai alkoksyyliryhmillä, joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyyliryhmissä, kuten dimetyyli-aminoetyyliamino-, 3-dimetyyliaminopropyyli-l-amino-tai 6-hydroksiheksyyli-l-aminoryhmät. Edellä mainittujen ryhmien A ja B gangliosidien ja etenkin niiden seosten yllä eritellyt esterit ja amidit ovat erityisellä sijalla esillä olevassa keksinnössä.
3. Asylointi
Keksintö käsittää myös tässä esitettyjen estereiden ja amidien sakkaridiosan, sialihappojen ja keramidin hydroksyy-leissä perasyloidut johdannaiset. Näissä johdannaisissa asyyliryhmät voivat olla alifaattisista, aromaattisista, aralifaattista, alisyklisistä tai heterosyklisistä hapoista johdetut; sopivimmin ne ovat johdetut alifaattisista, aromaattisista, aralifaattisista, alisyklisistä tai heterosyklisistä hapoista, joissa on korkeintaan 10 hiiliatomia ja etenkin 6 atomia, kuten muurahais-, etikka-, propionihapos-ta, butyyri- tai valeriaanahapoista ja kaproni- tai kaprii-nihaposta. Ne voivat olla johdetut myös hapoista, joissa on esimerkiksi sama määrä hiiliatomeja, mutta jotka on substituoitu etenkin hydroksihapoilla, kuten maitohapolla, aminohapoilla, kuten glysiinillä, tai kaksiemäksisillä hapoilla, kuten meripihka-, maloni- tai maleiinihapoilla. Aromaattisista hapoista sellaiset ovat etusijalla, joissa on ainoastaan yksi bentseenirengas, etenkin bentsoehappo ja sen johdannaiset, joissa on metyyli-, hydroksyyli-, amiini- tai karboksyyliryhmiä, kuten p-aminobentsoehappo, salisyylihappo ie 84074 tai ftaalihappo. Keksinnön mukaisessa menetelmässä nämä hapot saatetaan reagoimaan niiden anhydridin muodossa esteröi-dyn tai vapaan karboksyyliryhmän sisältävän gangliosidin hydroksyyliryhmän kanssa tapahtuvaa reagointia varten.
Keksintö käsittää myös gangliosidien perasyloidut johdannaiset ja niiden yllä esitetyt seokset, joissa kuitenkin on vapaita karboksyylifunktioita. Myös näiden johdannaisten kohdalla erittäin tärkeitä ovat sellaiset asyloidut johdannaiset, jotka johtuvat yllä esitetyistä hapoista. Mitä tulee myös perasyloituihin johdannaisiin, joissa on vapaita tai esteröityjä karboksyylifunktioita, tai jotka ovat amidien muodossa, gangliosidijohdannaiset tai ryhmät A ja B ovat erittäin tärkeitä kuten niiden seoksetkin, etenkin sellaiset, joissa on asyyliryhmiä ja edellä mainittujen estereiden tai amidien johdannaiset. Tästä syystä eräs uusien gangliosidi johdannaisten erityisen edullinen ryhmä, on sellainen, joka käsittää gangliosidiestereitä ja -amideita ja niiden hydroksyyliryhmissä perasyloituja johdannaisia samoin kuin mainittujen vapaassa muodossa esiintyvien gangliosidien perasyloidut johdannaiset, joissa on karboksyylifunktioita. Näissä johdannaisissa esteriryhmät voivat olla johdetut alkoholeista kuten alifaattisista alkoholeista, joissa on korkeintaan 6 tyydyttynyttä hiiliatomia, jotka ovat substituoi-mattomia tai substituoituja hydroksyyli- tai korkeintaan 4 hiiliatomin omaavilla alkoksyyliryhmillä, amiiniryhmällä tai alkyyliryhmässä korkeintaan 4 hiiliatomia omaavilla alkyyli-amino- tai dialkyyliaminoryhmillä, karboksyyliryhmillä, alkyylitähteessä korkeintaan 4 hiiliatomia omaavilla karb-alkoksyyliryhmillä; ja vastaavista alkoholeista, joissa on korkeintaan yksi kaksoissidos; aralifaattisista alkoholeista, joissa on ainoastaan yksi bentseenirengas, jotka ovat substituoimattomia tai substituoituja 1-3 metyyliryhmällä; sykloalifaattifaattisista tai alifaattis-sykloalifaattisista alkoholeista, joissa on yksi sykloheksaanirengas, jotka ovat substituoimattomia tai substituoituja 1-3 metyyliryhmällä ja joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia alifaattisessa osassa; ja tetrahydrofuranolista tai tetrahydropyranolista.
i7 84074
Erityisen edullisten johdannaisten amidiryhmät on johdettu ammoniakista tai alkyyliamiineista, dialkyyliamiineista tai alkyleeniamiineista, joissa on korkeintaan 6 hiiliatomia alkyyliryhmissä ja 4 - 8 hiiliatomia alkyleeniryhmissä ja joissa alkyyli- tai alkyleeniryhmät voi olla katkaistu hii-liatomiketjussa heteroatomeilla, jotka voivat olla typpi-, happi- tai rikkiatomeja, ryhmänä voi olla imiini-NH typpi-atomin läsnäollessa, joka on substituoitu korkeintaan 4 hiiliatomia sisältävällä alkyylillä ja/tai ne voi olla substituoitu amiini-, alkyyliamiini- tai dialkyyliamiiniryhmillä, joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyyliryhmissä, tai hydroksyyli- tai alkoksyyliryhmillä, joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyyliryhmissä, tai aralifaattisilla amiineilla, joissa on ainoastaan yksi bentseenirengas, joka voi olla substituoitu korkeintaan 3 metyyliryhmällä ja jossa on korkeintaan 4 hiiliatomia alifaattisessa osassa.
Asyyliryhmät, jotka esteröivät hydroksyylit näissä erityisen edullisissa johdannaisissa, ovat johdetut alifaattisista hapoista, jotka on tyydytettyneitä tai tyydyttymättömiä ja joissa on korkeintaan 6 hiiliatomia ja jotka voi olla myös substituoitu funktionaalisella ryhmällä, kuten hydroksyyli-, amiini- tai karboksyyliryhmällä, tai näiden suolalla. Nämä erityisen edulliset johdannaiset, ja etenkin yllä mainittujen ryhmien A ja B gangliosidit ja myös gangliosidiseoksen, esimerkiksi ryhmien A ja B johdannaiset (joissa on tässä eritellyt funktionaaliset ryhmät) ovat erityisen mielenkiintoisia esillä olevan keksinnön mukaisten farmaseuttisten koostumusten aineosina. Esillä olevan keksinnön uusista, farmaseuttisten valmisteiden kannalta erityisen tärkeistä yhdisteistä, seuraavassa mainittavat ovat erityisen tärkeitä: - gangliosidin G^i etyyliesteri - gangliosidin GmI propyyliesteri - gangliosidin Gmi isopropyyliesteri - gangliosidin GmI normaali butyyliesteri - gangliosidin Gmi isobutyyliesteri - gangliosidin GmI tert-butyyliesteri ιβ 84074 - gangliosidin G^i sykloheksyyliesteri - esterit, jotka vastaavat tässä esitettyjä ja jotka sisältävät gangliosidin GDib gangliosidin G^i sijasta, - yllä esitetyt esterit, jotka sisältävät gangliosidin Goia gangliosidin GM^ sijasta, - tässä esitetyt esterit, jotka sisältävät gangliosidin GTlb gangliosidin G^ sijasta, - yllä mainittujen estereiden perasetylaatit - yllä mainittujen estereiden perprionilaatit - yllä mainittujen estereiden per-n-butyrylaatit - yllä mainittujen estereiden permaleinylaatit - yllä mainittujen estereiden permalonylaatit - yllä mainittujen estereiden persukkinylaatit - gangliosidien GmI* GDlb' GDla* GTlb Perasetylaatit - ja samojen gangliosidien perpropionylaatit, per-n-butyrylaatit, permalonylaatit, persukkinylaatit ja permaleinylaatit - gangliosidin Gmi amidi - gangliosidin Goia amidi - gangliosidin Goib am*^i - gangliosidin GTlb aroidi - gangliosidien Gmi* GDlb' GDla' GTlb metyyliamidi, etyyli-amidi, propyyliamidi ja samoin näiden gangliosidien amidit, jotka johtuvat dimetyyliamiinista, dietyyliamiinista, pyrrolidiinistä, piperidiinistä, piperatsiinistä, morfo-liinistä, tiomorfoliinistä, yllä mainittujen amidien perasetylaatit, perpropionylaatit, per-n-butyrilaatit, permalonylaatit, permaleinylaatit ja persukkinylaatit, perusgangliosideinä G^i^tä, Gola:ta' G^^itä, GT^^:tä sisältävien gangliosidiseosten ja etenkin esimerkissä 2 esitetyn seoksen metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, tert-butyyli-, bentsyyli-, allyyli-, etoksikarbonyyli-metyyliesterit, perusgangliosideinä G^i^tä, GD^a:ta, GDlb:ta» GTlb:ta sisältävien gangliosidien ja etenkin esimerkin 2 mukaisesti valmistetun seoksen substituoimaton amidi, metyyliamidi, etyyliamidi, bentsyyliamidi, isopro-pyyliamidi, dimetyyliamidi, dietyyliamidi, dimetyyliamino- 19 84074 propyyliamidi, dimetyyliaminoetyyliamidi, etanoliamidi, perusgangliosideinä GMi:tä, GD^a:ta, GDib:tä, Ginistä sisältävän gangliosidiseoksen ja etenkin esimerkin 2 mukaisesti valmistetun seoksen perasetyloidut, per-n-butyryloi-dut, perpropionyloidut, permaleinyloidut, permalonyloidut, persukkinyloidut johdannaiset.
Uusista esillä olevan keksinnön mukaisista yhdisteistä, joissa on vapaita karboksyylifunktioita, kuten gangliosidien, esimerkiksi ryhmien A ja B gangliosidien perasylaateista, voidaan valmistaa metallisuoloja, jotka muodostavat samoin keksinnön osan. Metallisuoloja voidaan valmistaa myös muista keksinnön johdannaisista, joissa on vapaa happofunktio, kuten kaksiemäksisten happojen kanssa muodostetuista perasy-loiduista estereistä tai amideista. Edelleen suolat, jotka on saatu gangliosidijohdannaisten happolisäyksellä, joissa on vapaa amiinifunktio, muodostavat samoin keksinnön osan, kuten aminoalkoholien kanssa muodostetut esterit. Metalli-suoloista erityisen edullisia ovat sellaiset, joita voidaan käyttää terapiassa, kuten alkali- tai maa-alkalimetallien suolat, kuten kalium-, natrium-, ammonium-, kalsium, magne-siumsuolat, tai maametallien, kuten alumiinin suolat, mutta myös orgaanisten emästen kanssa muodostetut suolat, kuten primaariset, sekundaariset tai tertiaariset alifaattiset, aromaattiset tai heterosykliset amiinit, kuten metyyliamii-ni, etyyliamiini, propyyliamiini, piperidiini, morfoliini, efedriini, furfuryyliamiini, koliini, etyleenidiamiini, aminoetanoli.
Hapoista, jotka pystyvät muodostamaan suoloja gangliosidi-johdannaisten kanssa lisäämällä happoa keksinnön mukaisesti, ovat erityisen edullisia vetyhapot, kuten kloorivetyhappo, bromivetyhappo, fosforihapot, rikkihappo, alemmat alifaattiset hapot, joissa on korkeintaan 7 hiiliatomia, kuten muurahais-, etikka- tai propioni-, meripihka- ja maleiinihappo. Terapeuttisesti sopimattomia happoja, kuten pikriinihappoa voidaan käyttää uusien gangliosidijohdannaisten puhdistukseen ja ne muodostavat keksinnön osan. Johtuen 20 8 4 0 7 4 uusien vapaassa muodossa ja suolojensa muodossa esiintyvien yhdisteiden läheisestä suhteesta tämän keksinnön selityksen tarkoituksena on sisältää molemmat muodot, ellei vastakkaista ole esitetty.
Tämän keksinnön mukaiset uudet gangliosidiesterit ja -amidit ovat yleensä amorfisia, värittömiä tai harmahtavia jauheita, jotka voidaan melko onnistuneesti liuottaa veteen ja polaarisiin liuottimiin, kuten alempiin aiifaattisiin alkoholei-hin, esimerkiksi metyyli-, etyyli- tai propyylialkoholiin, tai myös ketoneihin, kuten asetoniin tai amideihin, kuten dimetyyliformamidiin tai sulfoksideihin, kuten dimetyylisul-foksidiin, tai eettereihin, kuten dioksaaniin tai tetrahyd-rofuraaniin. Niiden johdannaisten liukenevuus veteen on kuitenkin huomattavasti pienempi, joiden hydroksyyliryhmät on asyloitu, kun se taas on parempi yllä mainittuihin orgaanisiin liuottimiin. Farmaseuttisten valmisteiden valmistamiseksi liuosten muodossa parenteraalista käyttöä varten sopivimmat liuottimet valitaan joka kerta uusien yhdisteiden enemmän tai vähemmän hydrofiilisen tai lipofiilisen luonteen mukaisesti.
Valmistusmenetelmät
Esillä olevaan keksintöön kuuluu myös yllä esitettyjen uusien gangliosidijohdannaisten tai jo tunnettujen johdannaisten valmistusmenetelmät. Nämä menetelmät ovat toisaalta tavanomaisia, jo tunnettuja menetelmiä karboksyylihappojen uusien estereiden tai amidien valmistamiseksi tai hydroksyyli-ryhmien asyloimiseksi uusien asyylijohdannaisten valmistamiseksi lukuunottamatta niitä menetelmiä, joilla olisi vaikutus gangliosidiemäksen muuttumiseen, kuten sellaiset, joissa käytetään erittäin happamia aineita tai sellaiset, jotka joka tapauksessa suoritetaan aikalisissä tai happamissa hydrolysoivissa olosuhteissa, tai myös ne menetelmät, jotka voivat saada aikaan sakkaridiosan hydroksyyliryhmien ei-toivotun alkyloinnin. Toisaalta keksinnön kohteena on myös uusi valmistusmenetelmä sekä uusia että tunnettuja estereitä varten, joka menetelmä gangliosidien sisäisistä estereistä, kuten myöhemmin esitetään.
2i 8 4074
Vaikka keksintö käsittää niiden gangliosidijohdannaisten valmistuksen, joissa on esteröityjä funktionaalisia karboks-yyliryhmiä tai jotka ovat amidien muodossa ja myös näiden johdannaisten hydroksyyliryhmissä asyloitujen johdannaisten valmistuksen, on toisaalta mahdollista tällä tavalla modifioida sekä vapaiden gangliosidien, s.o. joissa on vapaita hydroksyylifunktioita, että gangliosidien karboksyylifunkti-oita, joissa on jo asyloituja hydroksyylifunktioita. Toisaalta on mahdollista asyloida hydroksyylifunktiot jo esteröidyissä johdannaisissa tai amidi johdannaisissa. Keksinnön mukaisesti on myös mahdollista asyloida hydroksyyli-funktiot yksinään jättäen karboksyylifunktiot vapaiksi.
Tästä syystä esillä olevan keksinnön mukaisesti gangliosidi tai jokin sen perasyloiduista johdannaisista esteröidään karboksyyliryhmissä tai nämä muunnetaan amideiksi tai näiden gangliosidijohdannaisten tai vapaita karboksyylifunktioita sisältävien gangliosidien hydroksyyliryhmät asyloidaan. Jos on toivottavaa, saadut suolaksi muodostettavat yhdisteet muunnetaan niiden suoloiksi.
1. Karboksyyliryhmien esteröinti:
Menetelmistä, jotka tunnetaan karboksyyliestereiden valmistamiseksi, mainittakoon ne, joita käytetään gangliosidien Gmi ja GM3 jo tunnettujen metyyliestereiden valmistamiseksi ja joita on esitetty yllä mainitussa artikkelissa julkaisussa Journal of Lipid Research, 21, 642-645 (1980). Tämän artikkelin mukaisesti on mahdollista saada gangliosidien karboksyyliryhmien estereitä saattamalla ne reagoimaan sen alkoholin kanssa, jonka esteri on valmistettava, ioninvaih-timen, esimerkiksi hartsin, kuten Dowex 50:n läsnäollessa. Saanto on pieni sisäisten estereiden samanaikaisen muodostumisen ja pitkien reaktioaikojen (2-3 päivää) vuoksi.
Samaa menetelmää käytetään esimerkiksi myös yllä mainitussa Methods of Enzymology-julkaisun [5JD, 137-140 ( 1978)] mukai- 22 8 4 074 sessa artikkelissa GM3~gangliosidin metyyliestereiden valmistamiseen. Tämän tyyppinen osittainen esteröinti voidaan selvästi saada myös, vaikkakin pienemmällä saannolla, ilman hartsia. Paitsi Dowex-50-hartsia voidaan myös käyttää muita happamia ioninvaihtimia, jotka kykenevät muuntamaan sellaiset gangliosidit vapaiksi gangliosideiksi, jotka, kuten jo mainittiin, ovat läsnä yleensä ja etenkin uutteissa suolojen, erityisesti natriumsuolojen, muodossa. Tämä gangliosidisuo-lojen muunto vapaiksi gangliosideiksi soveltuu myös kaikkiin muihin yllä tässä esitettyihin tavanomaisiin menetelmiin karboksyylifunktion modifioimiseksi funktionaalisesti, kuten amidien valmistusmenetelmiin. Kuitenkin paras menetelmä, joka on esitetty yllä mainitussa artikkelissa, on esteröidä karboksyyli tai karboksyylit, jotka ovat yleensä läsnä gan-gi iosideissä, laskemalla halutun alkoholin alkoholipitoinen liuos hartsin, kuten Dowex-50Wx8 (100-200 mesh H-muoto), läpi ja käsitellä samaan alkoholiin liuotettu eluaatti vastaavalla diatsometaanilla. Esitetyssä erityistapauksessa gan-gliosidien Gmi ja GM3 esterit valmistetaan tällä tavalla metanoli- ja diatsometaanikäsittelyllä, jolloin päästään erittäin hyvään saantoon.
Erään toisen gangliosidikarboksyylien estereiden valmistusmenetelmän mukaan käsitellään gangliosidin metallisuolaa eetteröintiaineella. Käytetään alkali- tai maa-alkalimetal-lien suoloja tai myös jotain muuta metallisuolaa. Eetteröin-tiaineena voidaan käyttää sinänsä kirjallisuudesta tunnettuja, etenkin erilaisten epäorgaanisten happojen tai orgaanisten sulfonihappojen, kuten vetyhappojen estereitä, toisin sanoen hiilivetyhalogenideja, kuten metyyli-, etyylijodidia jne. tai hiilivetyjen neutraaleja tai happamia sulfaatteja, sulfiitteja, karbonaatteja, silikaatteja, fosfiitteja tai hiilivetysulfonaatteja, kuten metyylin bentso- tai p-tolueenisulfonaattia tai metyylin tai etyylin kloorisulfo-naattia. Reaktio voidaan suorittaa sopivassa liuottimessa, kuten alkoholissa, sopivimmin sellaisessa, joka vastaa karboksyyliryhmään liitettävää alkyyliryhmää, mutta voidaan 23 84074 käyttää myös ei-polaarisia liuottimia, kuten ketoneja, eet-tereitä, kuten dioksaania tai dimetyylisulfoksidia.
Uudessa menetelmässä, joka on tunnusomainen esillä olevalle keksinnölle gangliosidiestereiden valmistamiseksi, ja jota voidaan käyttää sekä uusien keksinnön mukaisten gangliosi-dien valmistukseen että jo tunnettujen estereiden valmistukseen, käsitellään sisäinen gangliosidiesteri halutun alkoholin ja sen jonkin vastaavan alkoholaatin seoksella. Reaktio voidaan suorittaa alkoholin kiehumispistettä vastaavassa lämpötilassa. Voidaan käyttää myös alhaisempia lämpötiloja, mutta tässä tapauksessa reaktioajat ovat pitempiä. On myös mahdollista, mikä kuitenkin haittaa erittäin hyvää saantoa ja lyhyitä reaktioaikoja, käsitellä sisäinen esteri juuri asiaankuuluvalla alkoholilla sopivimmin sen kiehumispistettä vastaavassa lämpötilassa. Sisäisiä estereitä on esimerkiksi selitetty yllä mainitussa belgialaisessa patentissa n:o 894024 ja US-patentissa 4,476,119.
Alkoholaatteina käytetään sopivimmin alkalimetallialkoho-laatteja, etenkin natriumalkoholaattia.
2. Amidien valmistus:
Esillä olevan keksinnön mukaiset uudet gangliosidiamidit voidaan valmistaa sinänsä tunnetuilla menetelmillä, etenkin seuraavilla menetelmillä.
a) gangliosidien sisäisten estereiden reaktio ammoniakin tai amiinien kanssa.
b) gangliosidien karboksyyliestereiden reaktio ammoniakin tai amiinien kanssa.
c) gangliosidihappojen aktivoitujen karboksyyliryhmien reaktio ammoniakin tai amiinien kanssa.
Reaktio a), joka on esitetty gangliosidin Gm3 amidin valmistuksen yhteydessä (katso yllä) voidaan suorittaa käsittelemällä suoraan, liuottimessa tai ilman sitä, sisäistä gang-liosidiesteriä ammoniakin tai amiinin kanssa, jonka amidi on valmistettava. Reaktio voidaan suorittaa melko alhaisissa 24 84074 lämpötiloissa, kuten -5 - +10°C:ssa, mutta sopivimmin käytetään huoneenlämpötilaa tai korkeampaa lämpötilaa, esimerkiksi 30 - 120°C. Liuottimina voidaan käyttää ketoneja, aromaattisia hiilivetyjä, dimetyyliformamidia, dimetyylisulfok-sidia, dioksaania tai tetrahydrofuraania.
Reaktio b) suoritetaan sopivimmin kohdassa a) esitetyissä olosuhteissa. Paitsi esillä olevalle keksinnölle selitettyjä estereitä voidaan käyttää myös muita estereitä, kuten fenolien kanssa muodostettuja estereitä.
Karboksyyliryhmän aktivoimiseksi kohdan c) mukaisessa reaktiossa käytetään sinänsä peptidikemiassa tunnettuja menetelmiä välttäen sellaisia, jotka vaativat olosuhteita, jotka ovat liian happamia tai emäksisiä, mikä voisi aiheuttaa gan-gi iosidimolekyylin hajoamisen. Jos lähtögangliosidejä käytetään esimerkiksi natriumsuolojen muodossa, on suositeltavaa käsitellä ensin suola ioninvaihdinhartsilla, kuten Dowexilla tai jollakin muulla happamalla ioninvaihtimella. Esimerkiksi on mahdollista käyttää kondensointimenetelmää karbodi-imidien, kuten disykloheksyylikarbodi-imidin, bentsyyli-isopropyylikarbodi-imidin tai bentsyylietyylikarbodi-imidin läsnäollessa, 1-hydroksibentsotriatsolin läsnäollessa tai kondensointia N,N'-karbonyylidi-imidatsolin läsnäollessa.
3. Hydroksyyliryhmien asylointi:
Sakkaridi-, sialiosan tai keramidin hydroksyyliryhmien asylointi tapahtuu myös tavalla, joka on sinänsä jo tunnettu, esimerkiksi asyloimalla asylointiin käytetyn hapon halogeni-dilla tai anhydridillä, sopivimmin tertiaarisen emäksen, kuten pyridiinin tai kollidiinin läsnäollessa. Reaktio voi tapahtua alhaisessa lämpötilassa, kuten huoneenlämpötilassa, antaen happojohdannaisen, kuten anhydridin reagoida melko pitkän aikaa, 12 - 24 tuntia esimerkiksi, tai hieman korkeammassa lämpötilassa, kuten 50 - 100°C:ssa muutaman tunnin.
Keksintö käsitttää myös uusien johdannaisten valmistusmenetelmien muunnelmat, joissa menetelmä keskeytetään määrätyssä 25 84074 pisteessä tai joissa valmistus aloitetaan väliyhdisteellä ja suoritetaan loppuvaiheet tai joissa lähtötuotteet muodostetaan in situ.
Esimerkki 1: Gangliosidin G^i metyyliesteri 5 g gangliosidin G^l sisäinen esteri (3,27 mmoolia) liuotetaan 200 ml:aan vedetöntä seosta, jossa on metyleenikloridia ja metanolia suhteessa 4:1. Lisätään 176 mg (3,27 mmoolia) natriummetylaattia, joka on liuotettu 50 ml:aan vedetöntä metanolia ja seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 2 tunnin ajan. Reaktion loputtua seos neutraloidaan vedettömällä Dowex AG 50x8-hartsilla (H+-muoto), hartsi erotetaan suodattamalla ja pestään metanolilla ja liuos haihdutetaan kuivaten. Jäännös otetaan 50 ml:aan metyleenikloridi/metanolia 1:1 ja reaktiotuote saostetaan kaatamalla se 250 ml:aan asetonia. Raaka tuote (4,9 g) puhdistetaan preparatiivisella korkeapainekromatografiällä 60 H Merck-silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformi/metanoli/isopropanoli/am-moniumkarbonaatti-seosta (2 %) 1140:820:180:140. Puhtaat fraktiot kerätään, haihdutetaan kuiviin, liuotetaan uudelleen 15 ml:aan kloroformi/metanolia 1:1 ja tuote saostetaan 75 ml:11a asetonia. Tämä tuote on gangliosidin G**], metyyli-esteri. Saanto 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm-^:ssä. Silikageelilevyillä suoritettu kromatografia kloroformi/metanoli/CaCl2:11a 0,3 %:ssa 55:45:10 ja määritetty Ehrlich-reagenssilla (Rf 0,72) osoitti tuotteen olevan yhtenäinen tuote ja vapaa lähtötuotteena käytetystä sisäisestä esteristä (Rf 0,75) ja gangliosidistä Gj4i (Rf 0,65). Käsittelemällä Na2C03?n 0,lN-liuoksella 60°:ssa tunnin ajan esterisidos lohkeaa, jolloin saadaan alkutuote, 26 84074
Esimerkki 2; Gangliosidi-seoksen (GA-seoksen) valmistus uuttamalla naudan aivokudoksesta ja sisäisten estereiden vastaavan seoksen valmistus (jota käytetään useissa seuraavissa esimerkeissä
Naudan aivokuori, joka on poistettu eläimestä, homogenisoidaan fosfaattipuskurissa, pH 6,8; 6 tilavuusosaa tetrahydro-furaania lisätään ja muodostunut seos sentrifugoidaan. Emä-• liuosta uutetaan uudelleen kaksi kertaa tetrahydrofuraanil la. Sentrifugoinnin jälkeen ei-polaariset aineet poistetaan erottamalla ne etyylieetterin avulla ja vesipitoinen tetrahydrof uraanikerros johdetaan ioninvaihtopylväälle, joka on tasapainotettu 50 %:lla etanolia. Bariumhydroksidia ja neljä tilavuusosaa jääkylmää etanolia lisätään pylväästä peräisin olevaan poisteeseen.
18 tunnin jälkeen kylmissä olosuhteissa sakka kerätään ja sitten se tehdään hieman happamaksi kloorivetyhapolla, kun se on liuotettu veteen. Näin saatu liuos dialysoidaan ja pakastekuivataan. Saanto on tässä kohdassa noin 0,6 mg raakaa gangliosidiseosta/g käytettyä hermokudosta. Pakastekui-vatettu jauhe dispergoidaan 20 tilavuusosaan kloroformin ja metanolin 2:l-seosta, saatu liuos suodatetaan, kunnes se on täysin kirkas, ja sitten se erotetaan lisäämällä 0,2 tilavuusosaa kaliumkloridin vedessä olevaa liuosta 0,88 %:ssa.
Ylempi kerros erotetaan, dialysoidaan ja pakastekuivatetaan. Lopullinen saanto on 0,3 mg puhdistettua gangliosidisuolojen seosta/g aivokudosta.
5 g yllä esitetyn menetelmän mukaisesti saatua seosta liuotetaan 50 ml:aan DMSOtta. 4 g styreenityyppistä vedetöntä hartsia (sulfonihappoa) (50-100 mesh H+-muoto) lisätään seokseen ja muodostunutta järjestelmää sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Tämä käsittely ioninvaihtohartsilla muuntaa kaikki suolaksi muodostetut karboksyyliryhmät. Täydellinen muunto suoritetaan sopivalla fysikaalisella analyysimenetelmällä, kuten atomiabsorptiolla. Hartsi suodatetaan 27 84 0/4 sitten imulla ja liuosta käsitellään 1,5 g:lla disyklo-heksyylikarbodi-imidiä ja jätetään seisomaan tunnin ajaksi. Saostunut disykloheksyyliurea poistetaan suodattamalla ja muodostuva liuos käsitellään 100 ml:11a 0:ta, mikä saostaa valmistetut sisäiset gangliosidiesterit.
Saanto on 4,6 g sisäisten estereiden seosta (noin 90-95 % teoreettisesta arvosta). Sisäisten esteri johdannaisten läsnäolo vahvistetaan infrapunaspektroskopialla ja ohutkerros-kromatografiällä. KBr-tableteilla suoritettu IR-spektro-metria: esteröivä laktonisidos antaa vyön 1750 cm_^:ssä. Ohutkerroskromatografia: silikageelilevyllä, kehitysliuotin: CHCl3/MeOH/CaCl2 0,3 % (55:45:10, t/t/t), sisäisen esteri-seoksen Rf on 0,7 - 0,85. Lopullisten tuotteiden Rf on suurempi kuin lähtöaineen seoksen Rf; siten kromatografia osoittaa lähtöaineen poissaolon. Käsittelemällä Na2C03:n 0,1 N-liuoksella 60°:ssa tunnin ajan esterisidokset lohkaistaan ja on mahdollista saada lähtögangliosidien alkuseos.
Saatu gangliosidiseos voidaan fraktioida erillisiin osiin, jotka edustavat olennaisesti puhtaita gangliosidejä (yleisessä selityksessä käytetyssä mielessä), käyttämällä piihappopylväitä ja eluoimalla metanoli-kloroformi-seoksel-la. Tällä tavalla saadaan koostumus, joka sisältää keskimäärin noin 40 % gangliosidiä GDla, 21 % gangliosidiä GMl/ 19 % gangliosidiä G«rib ja 16 % gangliosidiä Gpib·
Esimerkki 3: Ganqliosidiseoksen metyyliestereiden seos 5 g gangliosidien (saatu uuttamalla naudan aivokudosta esimerkissä 3 esitetyllä tavalla) seoksen sisäisten este-reiden seosta liuotetaan 200 ml:aan vedetöntä metyleeniklo-ridin ja metanolin 4:l-seosta. Lisätään 318 mg (5,86 mmoo-lia) natriummetylaattia, joka on liuotettu 50 ml:aan vedetöntä metanolia ja seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 2 tunnin ajan. Reaktion raakatuote eristetään sitten esimerkissä 1 esitetyllä tavalla (4,9 g). Raakatuote puhdistetaan sitten kromatografoimalla Sephadex-DEAE-asetaatti- 28 84074 muodossa A-25 käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 30:60:8-seosta. Sekoitetut neutraalit fraktiot haihdutetaan, dialysoidaan vedessä, haihdutetaan jälleen kuiviin, jäännökset liuotetaan 15 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml:11a asetonia. Saanto: 4,3 g. KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm-1:ssä. Kroma-tografia, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoitti tuotteen, joka on gangliosidien metyyliestereiden seos ja jonka Rf on 0,72-0,85 gangliosidien seoksen Rf 0. 2-0,70).
Täydellinen muuntoesteröinti voidaan suorittaa määrittämällä molekyyliosuudet alkoksi- ja sialiryhmien välillä, jotka saadaan suorittamalla metyylialkoholin kvantitatiivinen "head space"-kaasukromatografia sen jälkeen kun ne on käsitelty Na2CO;j:n 0,1 N-liuoksella tunnin ajan, jolloin kaikki esterisidokset lohkeavat, ja Svennerholmin menetelmällä N-asetyylineuramiinihapon määrittämiseksi.
Esimerkki 4: Gangliosidin Gj,q etyyliesteri
Gangliosidin Gmi etyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin etyylialkoholia ja natriumetylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja etylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan etyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gfjl-gangliosi-din etyyliesterin saanto: 4,3 g. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 1, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,80, ja Gfii-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi NaC03:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin G^l.
29 84074 IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm“l:ssä.
Esimerkki 5; Gangliosidien seoksen etyyliestereiden seos
Etyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 3 metyyliestereiden seoksen yhteydessä käyttämällä kuitenkin etyylialkoholia ja natriumetylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 318 mg (5,86 mmoolia) natriumetylaattia.
Dowex-hartsin pesu suoritetaan etyylialkoholilla ja saatu jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 mitään kloroformin ja etanolin l:l-seosta.
Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun etyyliesteri-seoksen saanto: 4,5 g. IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm“^-:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metanolinja tetrametyyliammoniu-min hydroksidin IM 55:45:10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvona 0,50-0,75 (gangliosidi-seos 0,20-0,60).
Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 3.
Esimerkki 6: Gangliosidin G^i isopropyyliesteri Tämä johdannainen valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin isopro-pyylialkoholia ja natriumisopropylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja isopropylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan isopropyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 mitään metyleenikloridin ja isopropanolin 1:1- so 84074 seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gmi-gangliosidin isopropyyliesterin saanto: 4,2 g.
Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 1, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,85 ja GfQ-gangliosidin tai sen sisäisen esterin puuttumisen. Hydrolyysi Na2C>3:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI; iR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen este-risidoksen 1750 cm-l;ssä.
Esimerkki 7: Ganqliosidiseoksen isopropyyliestereiden seos Tämä johdannaisseos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 3 metyyliestereiden seoksen yhteydessä käyttämällä kuitenkin isopropyylialkoholia ja natriumisopro-pylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 537 mg (6,52 mmoolia) natriumisopropylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan isopropyylialkoholilla ja saatu jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml saan kloroformin ja isopropanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla käyttämällä kuitenkin kromatografisena eluenttina kloroformin, isopropyylialkoholin ja veden 20:60:8-seosta. Puhdistettujen isopropyyliestereiden seoksen saanto: 4,3 g.
Kromatografoimalla esimerkissä 5 esitetyllä tavalla tuotteen Rf on 0,40-0,80 (ganliosidiseoksen 0,20-0,60). IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen este-rivyön 1750 cm“^:ssä. Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 3 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 8: Gangliosidin Gmi tert-butyyliesteri 3l 84074 Tämä johdannainen valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin tert-butyylialkoholia ja natrium-tert-butylaattia metyyli-alkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja tert-butylaattia esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tert-butyylialkoholi11a ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuo- · tetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja tert-butanolin 1:1-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistetun G^i-gang-liosidin tert-butyyliesterin saanto: 4,1 g.
Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 1, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,71 ja Gfli-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen. Hydrolyysi Na2C03:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin Gmi.
IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen esterinvyön 1750 cm~l:ssä.
Esimerkki 9: Gangliosidien seoksen tert-butyyliestereiden seos Tämä seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 3 metyyliestereiden seoksen yhteydessä käyttämällä kuitenkin tert-butyylialkoholia ja natrium-tert-butylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 628,6 mg natrium-tert-butylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tert-butyyli-alkoholilla ja saatu jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja tert-butanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla käyttämällä kuitenkin kromatografisena eluenttina kloroformin ja tert-butyylialkoholin l:l-seosta. Puhdistettujen tert-butyyliestereiden saanto: 4,1 g. IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen esterisidok- 32 8 4 C 7 4 sen 1750 emeissä. Kromatografoituna esimerkissä 5 esitetyllä tavalla tuotteen Rf on 0,25-0,70. Täydellinen reaktio suoritetaan esimerkissä 3 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 10: Gangliosidin G^i bentsyyliesteri 5 g gangliosidin G^i kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 mitään DMSOtta ja liuokseen lisätään 1,58 g (12,5 mmoolia) bentsyylikloridia ja. 2,08 g (12,5 mmoolia) KI:tä. Tämän annetaan reagoida typessä 24 tunnin ajan 25°C:ssa. Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin ja veden (2:1) välillä DMSOtn ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 mitään kloroformin ja bentsyylialkoholin l:l-seosta ja reaktiotuote saostetaan 250 ml:11a asetonia.
Näin saatu raakatuote (5,3 g) puhdistetaan sitten prepara-tiivisella kromatografiällä silikageelilevyillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 65:32:7-seosta.
Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 mitään klorformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan bentsyylieste-rin saanto: 4,8 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektri osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä ja UV-spektroskopia, joka suoritetaan absoluuttisessa etyylialkoholissa osoittaa kolme maksimia 250, 255 ja 261 nmtssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2!n (0,3 %) 60:35 :8-seoksella ja kloroformin/metanolin ja ammoniakin 2,5 N 55 :45:12-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi ja sen Rf on 0,65 ja vastaavasti 0,53 ja se on vapaa G(4i-lähtötuot-teesta (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45).
Käsittely Na2C03:n 0,1N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtötuotteet *gM1 ja bentsyylialkoholi).
Esimerkki 11; Ganqliosidien seoksen bentsyyliestereiden seos 33 84074 5 g suoloiksi muodostettujen gangliosidien (kaliumsuolojen) seosta, joka on saatu uuttamalla naudan aivokudosta esimerkissä 2 esitetyllä tavalla vaihtamalla tämän jälkeen natrium kaliumilla (ioninvaihto), liuotetaan 100 ml:aan DMSOita ja liuokseen lisätään 3,3 g (26,0 mmoolia) bentsyylikloridia ja 216 g (13,0 mmoolia) KI:tä. Seos jätetään reagoimaan typessä 48 tunnin ajaksi 25°:ssa. Reaktion lopussa liuos jaetaan n-butanolin/I^O: n välillä (2:1) DMSOrn ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja bentsyylialkoholin l:l-seosta ja tuote saostetaan 250 ml :11a asetonia. Näin saatu raaka-tuote puhdistetaan asetaattimuodossa olevalla Sephadex-DEAE-kromatografiällä käyttämällä liuottimena kloroformin, meta-nolin ja veden 30:60:8-seosta.
Eluoidut neutraalit fraktiot sekoitetaan, vapautetaan liu-ottimesta haihduttamalla ja jäännös otetaan 15 ml :11a kloroformin ja isopropanolin l:l-seosta ja puhdistettujen bentsyyliestereiden seos saostetaan 75 ml :11a asetonia. Saanto: 4,9 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektrometria osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm“l:ssä ja UV-spektroskopia, joka suoritetaan absoluuttisessa etyylialkoholissa, osoittaa kolme maksimia 250, 255 ja 261 nm:ssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl3:n seoksella (0,3 %, 60:25:8) ja kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5N 55 :45 :10-seoksella ja määriteltynä Ehlich-reagenssilla tuotteen Rf-arvoksi osoittautuu 0,40 -0,70 ja vastaavasti 0,29 - 0,53 (alkuperäiselle gangliosi-diseokselle 0,05 - 0,40 ja vastaavasti 0,12 - 0,46).
Täydellinen reaktio suoritetaan esimerkissä 3 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 12: Gangliosidin Gmi allyyliesteri 34 84C74 5 g gangliosidin G^i kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 mlraan DMS0:ta ja liuokseen lisätään 453,7 g (3,75 irnnoo-lia) allyylibromidia ja 625 mg (3,75 mmoolia) Kiitä. Tämän annetaan reagoida 48 tunnin ajan 25°C:ssa.
Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin/I^Oin (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 mlraan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja reaktiotuote saostetaan 250 ml:11a asetonia.
Näin saatu raakatuote (5,1 g) puhdistetaan sitten prepara-tiivisella kromatografiällä silikageelilevyillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60 :35 :8-seosta.
Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 mitään klorformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan allyyliesterin saanto: 4,5 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektrometria osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm”^:ssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2Jn (0,3 %) 60:40:9-seoksella ja kloroformin/metanolin ja ammoniakin 2,5N 55 :45 :10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi, jonka Rf on 0,56 ja vastaavasti 0,39 ja se on vapaa GMl"lähtötuotteesta (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,42).
Käsittely Na2C03:n 0,1 N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtötuotteet gangliosidin GMi ja allyylialkoholin.
Esimerkki 13: Gangliosidin G^i etoksikarbonyylimetyyliesteri 35 8 4 074 5 g gangliosidin Gmi kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan DMSO:ta ja liuokseen lisätään 2,12 g (12,5 nunoolia) etyylimonobromiasetaattia ja 2,08 g (12,5 mmoolia) KI:tä. Se jätetään reagoimaan typessä 24 tunnin ajan 25°C:ssa. Liuos jaetaan n-butanolin ja veden (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 mitään kloroformin ja me-tanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 250 ml :11a asetonia. Saanto 4,8 g.
Raakatuote puhdistetaan sitten preparatiivisella pylväskro-matografiällä silikageelilevyillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:32:7-seosta. Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan 15 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml:11a asetonia. Saanto: 2,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektrometria osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2sn (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi, jonka Rf on 0,64, ja se on vapaa GMi-lähtötuotteesta (Rf 0,40).
Käsittely Na2CC>3:n 0,1N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa alkuperäisen gangliosidin Gmi·
Esimerkki 14: Gangliosidin Gmi amidi 5 g gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) suspen-doidaan 100 ml:aan vedetöntä isopropyylialkoholia. Suspensiota sekoitetaan alhaisessa lämpötilassa (-5°) ja kuivaa ammoniakkia kuplitetaan sitten sen läpi vedettömissä olosuhteissa 3 tunnin ajan.
36 84074
Reaktion lopussa liuotin eliminoidaan haihduttamalla ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja metanolin 1:1-seosta ja tuote saostetaan 250 ml :11a asetonia.
Raaka tuote (4,9 g) käsitellään 100 ml :11a Na2C03:a (1 %) 30 minuutin ajan 25°C:ssa jäännösesteriryhmien hydrolysoimi-seksi, dialysoidaan vedessä, haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja sitten se puhdistetaan preparatiivisella pylväskroma-tografialla silikageelillä käyttämällä liuottimena ensin kloroformin, metanolin ja i^Om 60:40:9-seosta ja toisena liuottimena kloroformin, metanolin ja H20sri 55 :45 :10-seosta . Puhtaat, eluoidut fraktiot haihdutetaan kuluviin, jäännös liuotetaan 15 ml:aan kloroformi/metanolia 1:1 ja amidi saostetaan 75 ml:lla asetonia. Saanto: 4,8 g.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja määritettynä resorsi-noli-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi (Rf 0,10 ja vastaavasti 0,32) ja vapaaksi Gj^stä (Rf 0,35 ja vastaavasti 0,65).
Esimerkki 15: Ganqliosidiseoksen amidien seos 5 g gangliosidien sisäisten estereiden esimerkissä 2 esitetyllä tavalla saatetaan reagoimaan ammoniakin kanssa esimerkissä 14 esitetyllä tavalla ja saostetaan asetonilla samoin esimerkissä 14 esitetyllä tavalla. NaCC>3:lla edellisessä esimerkissä esitetyllä suoritetun hydrolyyttisen käsittelyn jälkeen raakatuote puhdistetaan seuraavasti.
Hydrolyysillä saatu tuote dialysoidaan vettä vasten, liuos haihdutetaan tyhjössä, jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin, metanolin ja H20:n 30:60:8-seosta ja sitten se puhdistetaan preparatiivisellä kromatografiällä Sephadex-DEAE-A-25:llä, asetaattimuoto, käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 30:60:8-seosta.
Eluoidut neutraali fraktiot haihdutetaan kuiviin, dialysoidaan, haihdutetaan jälleen vielä kerran, liuotetaan 15 37 84C74 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja amidien seos saostetaan 75 ml :11a asetonia. Saanto: 4,8 g.
IR-spektroskopia ei osoita enää tyypillistä esterivyötä 1750 cm“l;ssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2Jn (0,3 %) 55:45 :10-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla tuotteen Rf on 0,01 - 0,10 ja vastaavasti 0,55 - 0,45 (alkuperäisen gangliosidin seos, Rf: 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,20 - 0,70).
Esimerkki 16: Gangliosidin G^i metyyliamidi 5 g gangliosidin G^l sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) suspen-doidaan 25 ml:aan vedetöntä metyyliamiinia astiassa, joka on varustettu palautusjäähdyttimellä, -25°C:ssa vedettömissä olosuhteissa. Suspensio pidetään sekoituksessa huoneenlämpö-tilassa 3 tunnin ajan. Reaktion lopussa liuotin eliminoidaan haihduttamalla ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 250 ml:11a asetonia .
Näin saatu raaka tuote (4,9 g) käsitellään 100 ml :11a Na2CC>3:a (1 %) 30 minuutin ajan 25°C:ssa jäännösesteriryhmien hydrolysoimiseksi ja dialysoidaan sitten vedessä. Liuos haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja sitten se puhdistetaan pre-paratiivisella kromatografiällä Sephadex DEAE A-25:llä, ase-taattimuoto, käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 30:60:8-seosta.
Sekoitetut eluoidut fraktiot haihdutetaan kuiviin, dialysoidaan, haihdutetaan jälleen, liuotetaan 15 ml:aan klorofor-mi/metanolia 1:1 ja metyyliamidi saostetaan 75 ml:11a asetonia. Saanto: 4,8 g.
IR-spektroskopia ei osoittanut tyypillistä esterivyötä 1750 cm"^·: ssä .
38 84074
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55 :45 :10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaC^sn (0,3%) 55:45:10-seoksella ja määritettynä resorsinoli-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi, jonka Rf on 0,13 ja vastaavasti 0,72 ja vapaaksi Gf,ji:stä (Rf 0,35 ja vastaavasti 0,65).
Esimerkki 17; Ganqliosidiseoksen metyyliamidiseos 5 g sisäisten estereisen seosta, jota käytettiin esimerkissä 15, käsitellään metyyliamiinilla, kuten edellisessä ja esimerkissä, ja reaktiotuote käsitellään ja eristetään samalla tavalla kuin siinä esimerkissä. Puhtaan tuotteen (käytetyn gangliosidiseoksen metyyliamiidien seoksen) saanto on 4,8 g.
Edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla määritetyt Rf-arvot ovat 0,01-0,10 ja vast. 0,20 ja 0,45 (alkuperäisten gangliosidien seos: Rf 0,15-0,70 ja vastaavasti 0,20-0,70). IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin edellisessä esimerkissä.
Esimerkki 18: Gangliosidin G^i etyyliamidi Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin Gf^ sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta etyyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja noudatetaan samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 4,8 g puhdasta gangliosidin G^i etyyliamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa Gmistä ja sen Rf on 0,19 ja vastaavasti 0,75 (GmI5n Rf O/ 35 3a vastaavasti 0,65).
Esimerkki 19: Ganqliosidiseoksen etyyliamidiseos 39 84074 Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta etyyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 4,8 g gangliosidiseoksen etyyliamidien seosta.
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaC^sn (0,3 %) 60:35 :8-seok-sella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,11 - 0,24 ja vastaavasti 0,35 - 0,55 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05 - 0,40).
Esimerkki 20: Gangliosidin G^i butyyli-2-amidi 5 g gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) liuotetaan 25 ml:aan vedetöntä pyridiiniä. Liuokseen lisätään 12,5 ml 2-butyyliamiinia ja seos pidetään sekoituksessa vedettömissä olosuhteissa 24 tunnin ajan.
Reaktion lopussa liuotin haihdutetaan ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saoste-taan 250 ml:lla asetonia.
Näin saatu raaka tuote (5,2 g) käsitellään 100 ml :11a Na2CC>3:a (1 %) 30 minuutin ajan 25°C:ssa jäännösesteriryh-mien hydrolysoimiseksi, dialysoidaan vettä vasten, dialysoi-tu liuos haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja sitten se puhdistetaan preparatiivisella kromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 110:40:6-seosta. Puhtaat, eluoidut fraktiot sekoiteaan, liuos haihdutetaan kuiuviin, jäännös liuotetaan 15 ml:aan kloroformin ja isopropanolin l:l-seosta ja butyyliamidi saos tetaan 75 ml :11a asetonia. Saanto: 4,7 g.
IR-spektroskopia ei osoita enää tyypillistä esterivyötä 1750 cm“l:ssä.
40 8 4 G 7 4
Kromatografia silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 60:40:9-seoksella ja määritettynä resorsinoli-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi ja vapaaksi gan-gliosidistä Gmi ja sen Rf on 0,30 ja vastaavasti 0,50 (GM^:n Rf 0,42 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 21: Gangliosidin Gmi bentsyyliamidi 5 g gangliosidin Gmi sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) liuotetaan 20 ml:aan vedetöntä pyridiiniä ja liuokseen lisätään 396 mg (3,27 mmoolia) bentsyyliamiinia ja liuos pidetään sitten sekoituksessa vedettömissä olosuhteissa 24 tunnin ajan.
Reaktion lopussa liuotin eliminoidaan haihduttamalla ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 250 ml :11a asetonia.
Näin saatu raaka tuote (5,1 g) puhdistetaan esimerkissä 16 esitetyllä tavalla, jolloin saantona saadaan 4,6 g puhdasta bentsyyliamidigangliosidiä.
IR-spektroskopia ei osoittanut tyypillistä esterivyötä 1750 cm"^:ssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seoksella nähdään, että tuote on yhtenäinen ja vapaa Gmi^stä ja sen Rf-arvo on 0,32 ja 0,69 (GMl:n Rf= ja 0,40).
Esimerkki 22: Gangliosidiseoksen bentsyyliamidien seos Tämä seos valmistetaan lähtemällä 5 g:sta esimerkissä 2 käytettyä gangliosidiseosta ja 792 mg:sta (7,4 mmoolia) bentsyyliamiinia edellisessä esimerkissä käytetyn gangliosidin Gmi bentsyyliamidin valmistusmenetelmän mukaisesti. Saadun raakatuotteen puhdistus suoritetaan edellisen esimerkin mukaisesti. Saanto on 4,8 g.
4i 84074 IR-spektroskopia ja kromatografia silikageelilevyillä suoritetaan edellisen esimerkin mukaisesti. Rf-arvot ovat 0,10 -0,42 ja vastaavasti 0,55 - 0,71 (alkugangliosidiseos, 0,01 -0,15 ja vastaavasti 0,05 - 0,40).
IR-spektroskopia ei osoita enää tyypillistä esterivyötä 1750 cm"^:ssä.
Esimerkki 23: Gangliosidin isopropyyliamidi 5 g gangliosidin Gmi sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) liuotetaan 25 mitään vedetöntä isopropyyliamiinia ja seos pidetään sekoituksessa vedettömissä olosuhteissa 24 tunnin ajan.
Reaktion lopussa liuotin haihdutetaan ja jäännös otetaan 50 mitään kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saoste-taan 250 mltlla asetonia.
Saatu raaka tuote (4,8 g) käsitellään 100 mltlla Na2CC>3tn liuoksella (1 %) 30 minuutin ajan 25°Ctssa jäännösesteri-sidosten hydrolysoimiseksi ja dialysoidaan sitten vedessä. Dialysoitu liuos haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja puhdistetaan preparatiivisella kromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5N 60:40:9-seosta. Puhtaat eluoidut fraktiot sekoitetaan, liuotetaan 15 mitään kloroformi/metanolia Iti ja metyyliami-di saostetaan 75 mltlla asetonia. Kromatografoituna silikageelilevyillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5 N 60t40t9-seosta ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60t35t8-seosta ja määritettynä resorsi-noli-reagenssilla, nähdään, että isopropyyliamidi (4,2 g) on yhtenäinen ja vapaa Gj^itstä ja sen Rf on 0,25 ja vastaavasti 0,66 (Gmi:n 0,42 ja vastaavasti 0,40).
IR-spektroskopia ei osoita enää tyypillistä esterivyötä 1750 cm-l;ssä.
Esimerkki 24: Gangliosidin G^i dimetyyliamidi 42 8 4 C 7 4 5 g gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) liuotetaan 25 ml:aan dimetyyliamiinia. Seos pidetään sekoituksessa vedettömissä olosuhteissa alhaisessa lämpötilassa (-5°) 24 tunnin ajan. Reaktion lopussa seos käsitellään Na2CC>3:lla ja puhdistetaan edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla käyttämällä kuitenkin ensimmäisenä kromatografiän liuottimena kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5N 60:40:9-seosta ja toisena liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:40:9-seosta. Dimetyyliamidi painaa 4,6 g.
Spektroskopiset ja kromatografiset tutkimukset suoritetaan samalla tavalla kuin edellisessä esimerkissä. Tuote osoittautuu yhtenäiseksi ja sen Rf on 0,20 ja vastaavasti 0,46 ja se on vapaa G^isstä (Rf 0,42 ja vastaavasti 0,40). IR-spektroskopia ei osoittanut mitään esterivyötä 1750 cm“^:ssä.
Esimerkki 25: Ganqliosidiseoksen dimetyyliamidiseos Tämä seos valmistetaan lähtemällä 5 g:sta esimerkissä 2 esitettyjen gangliosidien sisäisten estereiden seosta ja 20 ml:sta vedetöntä dimetyyliamiinia edellisessä esimerkissä esitetyn menetelmän mukaisesti. Tämän jälkeinen käsittely suoritetaan samoin edellisessä esimerkissä käytetyllä tavalla lukuunottamatta preparatiivistä kromatografiaa, joka suoritettiin Sephadex DEAE A-25:llä, asetaattimuoto, käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 30:60:8-seosta.
IR-spektroskopia ja kromatografia suoritetaan edellisen esimerkin mukaisesti.
Rf-arvot ovat 0,15 - 0,50 ja vastaavasti 0,40 - 0,56 (alkuperäinen gangliosidiseos 0,15 - 0,60 ja vastaavasti 0,05 -0,40).
Esimerkki 26: Gangliosidin Gmi dietyyliamidi 43 84074 Tämä yhdiste valmistetaan samalla tavalla kuin esimerkin 24 mukainen dimetyyliamidi lähtemällä 5 g:sta gangliosidin G^i sisäistä esteriä ja 25 mlssta vedetöntä dietyyliamiinia. Puhdistus suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 23. Saanto: 4,7 g. Kromatografinen tutkimus suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 23 ja se osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja sen Rf on 0,29 ja vastaavasti 0,50 ja se on vapaa GM].:stä. IR-spektroskopia ei osoita mitään esterikais-taa 1750 cm"^:ssä.
Esimerkki 27: Gangliosidiseoksen dietyyliamidiseos Tämä seos valmistetaan lähtemällä 5 g:sta esimerkissä 2 käytettyjen sisäisten estereiden gangliosidien seosta ja 20 ml:sta vedetöntä dietyyliamiinia edellisen esimerkin mukaisesti. Puhdistus suoritetaan samoin kuin esimerkin 25 seoksen dimetyyliamidin puhdistus. Saanto: 5,0 g.
Rf-arvot (määritettynä edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla) ovat 0,18 - 0,55 ja vastaavasti 0,43 - 0,60. IR-spektroskopia ei osoita mitään esterikaistaa 1750 cm"l:ssä.
Esimerkki 28: Gangliosidin GMj etyylimetyyliamidi Tämä yhdiste valmistetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 24 lähtemällä 5 g:sta GMi~gangliosidiä ja 25 ml:sta etyyli-metyyliamiinia. Puhdistus suoritetaan samoin kuin edellisessä esimerkissä. Saanto: 4,7 g.
Kromatografia silikageelilevyillä suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 24 ja tuote osoittautuu yhtenäiseksi ja vapaaksi G^listä. Rf= 0,25 ja vastaavasti 0,48. IR-spektroskopia ei osoita enää tyypillistä esterivyötä 1750 cm-^:ssä.
44 84074
Esimerkki 29: Gangliosidin G^i 3-dimetyyliaminopropyyli-l-amidi 5 g gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) liuotetaan 20 mitään vedetöntä pyridiiniä ja liuokseen lisätään 675 mg (6,6 mmoolia) 3-dimetyyliaminopropyyli-l-amiinia. Seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 24 tunnin ajan. Tuote eristetään edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla ja puhdistetaan esimerkissä 28 esitetyllä tavalla. 3-dimetyyli-aminopropyyli-l-amidin saanto: 4,9 g.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5 N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 55:45:10-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi ja vapaaksi Gm:stä ja sen Rf-arvot ovat 0,02 ja vastaavasti 0,06 (GmI:n Rf 0,45 ja vastaavasti 0,65).
Esimerkki 30: Gangliosidin GmI 3-dimetyyliaminopropyyli-l-amidin maleaatti 5 g gangliosidin Gm 3-dimetyyliaminopropyyli-l-amidia, joka on saatu esimerkiksi edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla, liuotetaan 100 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja liuokseen lisätään 400 mg (3,44 mmoolia) maleiinihappoa.
Pidetään tunnin ajan sekoituksessa huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen liuos haihdutetaan tyhjössä ja jäännös otetaan 25 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saos-tetaan 200 ml:11a asetonia. 3-dimetyyliaminopropanoli-l-ami-din maleaatin saanto 5,2 g.
Esimerkki 31: Ganqliosidiseoksen 3-dimetyyliaminopropyyli-l-amidiseos 5 g esimerkissä 2 esitettyjen gangliosidien sisäisten este-reiden seosta liuotetaan 20 ml:aan vedetöntä pyridiiniä ja liuokseen lisätään 1,51 g (14,8 mmoolia) 3-dimetyyliami- 45 84074 nopropyyli-l-amiinia ja seosta sekoitetaan vedettömissä olosuhteissa 24 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Tämän jälkeinen käsittely suoritetaan esimerkissä 29 esitetyllä tavalla. Puhdistetun gangliosidiseoksen 3-dimetyyliaminopropyyli-l-amidin saanto on 5,1 g.
Kromatografia silikageelilevyillä, joka suoritetaan esimerkissä 29 esitetyllä tavalla, antaa seuraavat Rf-arvot: 0,01 - 0,05 ja vastaavasti 0,01 - 0,10 (alkuperäisen gangliosidiseoksen Rf-arvot 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,20 -0,70).
Esimerkki 32: Gangliosidiseoksen 3-dimetyyliaminopropyyli-l-amidiseoksen maleaatti 5 g gangliosidiseoksen 3-dimetyyliaminopropyyli-l-amidien seosta, joka on valmistettu edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla, liuotetaan 100 ml:aan kloroformin ja metano-lin l:l-seosta ja liuokseen lisätään 697 mg (6 mmoolia) maleiinihappoa. Tunnin kestävän, sekoituksessa ja huoneenlämpötilassa tapahtuvan reaktion jälkeen liuos haihdutetaan tyhjössä kuiviin ja jäännös otetaan 25 mlraan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 200 ml :11a asetonia. Maleiinisuolan saanto 5,3 g.
Esimerkki 33: Gangliosidin G^i dimetyyliaminoetyyliamidi 5 g gangliosidin G^ sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan vedetöntä kloroformin ja isopropanolin l:l-liuosta ja sitten lisätään 537 mg (6,5 mmoolia) dimetyyliaminoetyyliamiinia.
Liuosta sekoitetaan vedettömissä olosuhteissa 24 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Näin saadun raaka tuotteen eristys ja puhdistus suoritetaan esimerkissä 31 esitetyllä tavalla, jolloin saantona saadaan 4,9 g.
Tuote, joka kromatografoidaan edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla, osoittautuu yhtenäiseksi ja sen Rf-arvot 46 84074 ovat 0,11 ja vastaavasti 0,14. IR-spektroskopia ei osoita mitään vyötä 1750 cm“l;ssä.
Esimerkki 34: Gangliosidin Gpijl dimetyyliaminoetyyliamidin maleaatti 5 g gangliosidin G^i dimetyyliaminoetyyliamidia, joka on saatu edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla, liuotetaan 100 ml jaan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja liuokseen lisätään 400 mg (3,44 mmoolia) maleiinihappoa. Pidetään tunnin ajan huoneenlämpötilassa sekoituksessa, minkä jälkeen liuos haihdutetaan tyhjössä ja jäännös otetaan 25 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 200 ml:11a asetonia. Saanto: 5,2 g.
Esimerkki 35: Gangliosidiseoksen dimetyyliaminoetyyliamidi-seos 5 g esimerkissä 2 esitettyjen gangliosidiseoksen sisäisten estereiden seosta liuotetaan 50 ml:aan vedetöntä kloroformin ja isopropanolin l:l-seosta ja liuokseen lisätään 955 mg (0,8 mmoolia) dimetyyliaminoetyyliamiinia. Liuosta pidetään huoneenlämpötilassa vedettömissä olosuhteissa 24 tunnin ajan.
Tämän jälkeinen raakatuotteen eristys ja puhdistus suoritetaan esimerkissä 33 esitetyllä tavalla. Kromatografia sili-kageelilevyillä, joka suoritetaan esimerkissä 33 esitetyllä tavalla, antaa Rf-arvot: 0,01 - 0,14 ja vastaavasti 0,01 -0,16 (alkuperäisen gangliosidiseoksen Rf-arvot 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,20 - 0,70). IR-spektroskopia ei osoita mitään esterivyötä 1750 cm“^:ssä.
Esimerkki 36: Gangliosidiseoksen dimetyyliaminoetyyliamidien maleaatti 5 g edellisessä esimerkissä esitettyä gangliosidien dimetyyliaminoetyyliamidien seosta liuotetaan 100 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja liuokseen lisätään 697 mg (6 mmoolia) maleiinihappoa.
47 £4074
Tunnin kuluttua, jolloin liuosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa, seos haihdutetaan tyhjössä kuiviin ja jäännös otetaan 25 mitään kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saos-tetaan 200 ml :11a asetonia. Saanto: 5,3 g maleaattia.
Esimerkki 37: Gangliosidin GM]_ etanoliamidi 5 g gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan vedetöntä kloroformin ja isopropanolin l:l-liuosta ja liuokseen lisätään 397,2 mg (6,5 mmoolia) etanoliamiinia. Seos pidetään vedettömissä olosuhteissa sekoituksessa huoneenlämpötilassa.
Reaktiotuotteen eristys ja puhdistus suoritetaan esimerkissä 33 esitetyllä tavalla, jolloin saadaan 4,9 g puhdasta tuotetta.
Kromatografia silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35 :8-seoksella ja määritettynä resor-sinolireagenssilla osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa G^i^stä ja sen Rf-arvot ovat 0,12 ja vastaavasti 0,49.
Esimerkki 38: Ganqliosidiseoksen etanoliamidien seos Tämä seos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 2 käytetyn gan-gliosidiseoksen sisäisten estereiden seosta, liuotettuna 20 ml:aan vedetöntä pyridiiniä, ja 671 mg:sta (10,8 mmoolia) etanoliamiinia. Seosta sekoitetaan 24 tunnin ajan huoneenlämpötilassa .
Reaktion raakatuotteen eristys ja puhdistus suoritetaan edellisen esimerkin mukaisesti. Saanto 5,2 g.
Kromatografia silikageelilevyillä suoritetaan edellisen esimerkin mukaisesti ja saadaan Rf-arvot 0,09 - 0,56 ja vastaavasti 0,25 - 0,55. IR-spektroskopia ei osoita mitään tyypillistä esterivyötä 1750 cm-l;ssä.
Esimerkki 39: Gangliosidin Gmi 6-hydroksiheksyyli-1-amidi 48 84074 5 g gangliosidin Gj^l sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) liuotetaan 20 mlraan vedetöntä pyridiiniä ja lisätään 762 mg (6,5 mmoolia) 6-hydroksiheksyyli-l-amiinia. Se jätetään reagoimaan sekoittaen 24 tunnin ajaksi huoneenlämpötilassa vedettömissä olosuhteissa. Reaktion raakatuotteen eristys suoritetaan esimerkissä 28 esitetyllä tavalla. Jäännösesteriryh-mien hydrolyysi ja dialyysi suoritetaan esimerkissä 12 esitetyllä tavalla ja puhdistettu tuote seostetaan asetonilla edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla. Saanto: 4,3 g.
Kromatografia silikageelilevyillä käyttämällä liuottimina kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5 N 60:40:9-seok-sella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla osoittaa tuotteen yhtenäiseksi ja vapaaksi G(4i:stä ja sen Rf-arvot ovat 0,40 ja vastaavasti 0,80 (GMlJn Rf 0,42 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 40: Gangliosidin Gmi perasyloidut johdannaiset 5 g gangliosidin G^i natriumsuolaa (3,19 mmoolia) liuotetaan 50 mlraan vedetöntä pyridiiniä ja liuokseen lisätään 25°:ssa 25 ml juuri tislattua etikkahappoanhydridiä.
Liuos pidetään sitten sekoituksessa 72 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktion lopussa liuos haihdutetaan tyhjössä kuiviin ja jäännös jaetaan jääkylmän veden (100 ml) ja etyyliasetaatin (200 ml) välillä.
Etyyliasetaatti pestään sitten kylmällä HClrllä 1,0 M, veden ja NaHCC^m 1.0 M liuoksilla. Orgaaniset kerrokset kuivataan sitten natriumsulfaatilla, haihdutetaan tyhjössä ja jäännös puhdistetaan preparatiivisella pylväskromatogra-fialla silikageelillä käyttämällä eluenttiliuottimena di-kloorimetaanin, etyyliasetaatin ja isopropanolin 70:30:7-liuosta. Puhtaat fraktiot sekoitetaan. Haihdutetaan kuiviin, liuotetaan uudelleen 20 mlraan etyyliasetaattia ja tuote sa-ostetaan 100 ml :11a n-heksaania.
49 84074
Kromatografoituna silikageelilevyillä käyttämällä dikloori-metaanin, etyyliasetaati ja metanolin 70:30:1-seosta ja etyyliasetaatin ja isopropanolin 95:5-seosta ja määritettyn Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi ja sen Rf-arvot ovat 0,47 ja vastaavasti 0,28.
Esimerkki 41: Gangliosidiseoksen perasyloitu johdannainen 5 g esimerkissä 2 esitettyä natriumsuolojensa muodossa olevaa gangliosidiseosta liuotetaan 25 ml:aan vedetöntä pyri-diiniä ja liuokseen lisätään 25 ml etikkahappoanhydridiä. Seos pidetään sekoituksessa 72 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktion lopussa liuos haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja jäännös jaetaan jääkylmän veden (100 ml) ja etyyliasetaatin (200 ml) välillä, etyyliasetaatti pestään kylmällä HCl:llä, 1,0 N, vedellä ja NaHCC^in liuoksella, 1,0 M.
Orgaaniset kerrokset kuivataan sitten natriumsulfaatilla, haihdutetaan tyhjössä ja jäännös otetaan 20 ml:aan etyliase-taattia ja tuote saostetaan 100 mlraan normaaliheksaania. Saanto: 4,4 g.
Kromatografia, joka suoritetaan edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla, antaa seokselle Rf-arvoiksi 0,01 - 0,46 ja vastaavasti 0,01 - 0,36.
Esimerkki 42: Gangliosidin G^i perasyloitu johdannainen 5 g (3,17 mmoolia) gangliosidin Gmi metyyliesteriä liuotetaan 50 mlraan vedetöntä pyridiiniä ja liuokseen lisätään 25°:ssa 25 ml juuri tislattua etikkahappoanhydridiä ja seos pidetään sekoituksessa 72 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktion lopussa liuos haihdutetaan tyhjössä ja jäännös jaetaan jääkylmän veden (100 ml) ja etyyliasetaatin (200 ml) välillä. Etyyliasetaatti pestään kylmällä HClrllä, 1,0 M, vedellä ja NaHCC>3:n liuoksella, 1 M. Orgaaniset kerrokset kuivataan natriumsulfaatilla, haihdutetaan tyhjössä ja jäännös puhdistetaan preparatiivisellä kromatografiällä silika-geelipylväällä käyttämällä liuottimena dikloorimetaanin, etyyliasetaatin ja isopropanolin 70 :30:45-seosta .
so 84074
Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 20 ml:aan etyylieetteriä ja saostetaan 100 ml:ssa n-heksaania. Saantona 4,5 g GMi-gangliosidin metyyliesterin perasyloitua johdannaista. Kromatografia silikageelilevyillä dikloorimetaanin, etyyliasetaatin ja metanolin 70:30:10-seoksella ja etyyliasetaatin ja isopropanolin 95:5-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja sen Rf-arvot ovat 0,47 ja vastaavasti 0,28.
Esimerkki 43: Gangliosidiseoksen metyyliesteriseoksen perasyloitu johdannainen 5 g esimerkissä 2 esitettyjen gangliosidiseoksen metyylies-tereiden seosta (ks. myös esimerkki 3) asetyloidaan esimerkissä 40 esitetyllä tavalla. Asetylointituotteen puhdistus suoritetaan myös esimerkissä 40 esitetyllä tavalla, jolloin saantona on 5,4 g esimerkin 3 metyyliesteriseoksen perasyloitua johdannaista.
Kromatografia suoritetaan edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla ja se osoittaa Rf-arvoiksi 0,23 - 0,54 ja 0,01 -0,52.
Esimerkki 44: Gangliosidin G^i amidin perasetyloitu johdannainen Lähtemällä 5 g:sta (3,20 mmoolia) GMi~gangliosidin amidia, joka on 50 mlrssa vedetöntä pyridiiniä valmistetaan asety-loitu johdannainen esimerkissä 42 esitetyllä tavalla. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 41 esitetyllä tavalla käyttämällä kuitenkin kromatografointiin liuottimena di-kloorimetaanin ja isopropanolin 95:5-seosta. Saanto: 4,4 g GMl-9angli°sidin puhdasta perasetyloitua johdannaista.
Tuote osoittautuu yhtenäiseksi kromatografoitaessa edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla ja sen Rf-arvot ovat 0,43 ja vastaavasti 0,48.
51 84074
Esimerkki 45; Gangliosidiseoksen amidiseoksen perasetyloitu johdannainen 5 g esimerkissä 15 esitettyjen gangliosidiamidien seosta, joka on liuotettu 50 ml:aan vedetöntä pyridiiniä, asetyloi-daan 25 ml :11a vedetöntä etikkahappoanhydridiä edellisessä esimerkissä esitetyllä tavalla. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 42 esitetyllä tavalla, jolloin saadaan 4,9 g esimerkin 15 gangliosidiamidien perasetyloitua johdannaista.
Kromatografoituna samoissa olosuhteissa kuin edellisessä esimerkissä yhdisteen Rf-arvot ovat 0,11-0,45 ja vast. 0,01-0,50.
Esimerkki 46: Gangliosidin Gmi fenyylietyyliesteri
Gmi5n fenyylietyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin fenetyylialkoholia ja natriumetylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia moolimääriä sisäistä esteriä ja natriumfenyylietylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu fenyylietyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 mlraan metyleenikloridin ja fenyylialkoholin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,1 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun G^i-gangliosi-din fenyylietyyliesterin saanto: 4,3 g.
IR-spektroskopinen tutkimus, joka suoritetaan KBr-table-teilla osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm~l;ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,90 ja GMi~gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C03:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaen gangliosidin GmI· 52 84074
Esimerkki 47: Ganqliosidiseoksen fenyylietyyliestereiden seos
Fenyylietyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin fenetyylialkoholia ja natriumfe-nyylietylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 844,8 mg (5,86 mmoolia) nat-riumfenyylietylaattia . Dowex-hartsin pesu suoritetaan fenyy-lietyylialkoholilla ja saatu jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 mitään kloroformin ja fenyylietyylialkoholin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterovyön 1750 cm-^:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55 :45 :10-seok-sella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,65 - 0,887 (gangliosidiseos 0,2 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 48: Gangliosidin G^i 2-sykloheksyylietyyliesteri
Gflisn 2-sykloheksyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 2-sykloheksyylietanolia ja natrium-2-sykloheksyyli-etylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja 2-sykloheksyylietylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-syklo-heksyylietyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleeniklo-ridin ja 2-sykloheksyylietanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,1 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esi- tetyllä tavalla. Puhdistetun GMl-gangliosidin 2-syklohek- syylietyyliesterin saanto: 4,3 g.
53 84074 KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“l:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,92, ja GMi~gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C>3:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI.
Esimerkki 49: Ganqliosidien seoksen 2-sykloheksyylietyyli-esteriseos 2-sykloheksyylietyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin 2-sykloheksyylietanolia ja natrium- 2-sykloheksyylietylaattia metyylialkoholin ja natriummety-laatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 880,3 mg (5,86 mmoolia) natrium-2-sykloheksyylietylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-sykloheksyylietyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 mlraan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,3 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-l;ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin IM 55:45:10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,67 - 0,90 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 50: Gangliosidin G^i mentyyliesteri 54 84074
GmI^11 mentyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin mentolia ja natriummetylaattia metyylialkoholin ja natrium-metylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia moolimääriä sisäistä esteriä ja nat-riummentylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan mentyylialkoholin ja metyleeniklordin 1:l-seoksella ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja mentolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 3,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun GMi“9angliosidin mentyyliesterin saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm"^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,93 ja GMi~9angliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C03:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI·
Esimerkki 51: Ganqliosidiseoksen mentyyliesterien seos
Mentyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin mentolia ja natriummentylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 1038,8 mg (5,86 mmoolia) natriummentylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan mentyylialkoholin ja metylee-nikloridin 1:l-seoksella ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,3 g.
55 84C74 KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm~ljssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-seoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,70 - 0,93 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 52: Gangliosidin G^i tetrahydrofurfuryyliesteri GM1:n tetrahydrofurfuryyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin tetrahydrofurfuryylialkoholia ja natriumtetrahyd-rofurylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja natriumtetrahydrofurfyry-laattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tetrahydrofurfuryylialkoholilla ja jäännös, joka saadaan haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan mety-leenikloridin ja tetrahydrofurfuryylialkoholin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,0 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun GMl~gangliosidin tetrahydrofurfuryyliesterin saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,72, ja GM^-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na203:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI.
Esimerkki 53: Ganqliosidien seoksen tetrahydrofurfuryyli-esteriseos
Tetrahydrofurfuryyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin tetrahydrofurfuryylialkoholia ja nat- 56 84074 riumtetrahydrofurfurylaattia metyylialkoholin ja natriumme-tylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 727,5 mg (5,86 mmoolia) natriumtetrahydrofurfurylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tetrahydrofurfuryylialkoholilla ja jäännös, joka saadaan haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 mlraan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin IM 55:45:10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,45 -0,68 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoeste-röinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 54: Gangliosidin Gmi tetrahydro-2H-pyran-4-yyli-esteri GMl:n tetrahydro-2H-pyran-4-yyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin tetrahydro-2H-pyran-4-olia ja natrium-tetrahydro-2H-pyran-4-ylaattia metyylialkoholin ja natrium-metylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-tetrahydro-2H-pyran-4-ylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tetrahydro-2H-pyran-4-olilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 mlraan metyleenikloridialkoholia 1:1. Raaka-tuotteen saanto on 5,1. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun GM^-gangliosidin tetrahydro-2H-pyran-4-yyliesterin saanto: 4,3 g.
KBr-tableteilla suoritettu iR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm~^-:ssä. Tuotteen kro- 57 84074 matografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,73, ja Gjyn~gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C03:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa ganglio-sidin Gmi.
Esimerkki 55: Ganqliosidien seoksen tetrahydro-2H-pyran-4-yyliestereiden seos
Tetrahydro-2H-pyran-4-yyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyy-liestereiden seos käyttämällä kuitenkin tetrahydro-2H-pyran- 4-olia ja natrium-tetrahydro-2H-pyran-4-ylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesi-hauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 727,5 mg (5,86 mmoolia) natrium-tetrahydro-2H-pyran- 4-ylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tetrahydro-2H-py-ran-4-yylillä ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun raakatuotteen saanto: 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,5 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-seok-sella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,48 - 0,72 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 56: Gangliosidin G^i 1-heptyyliesteri 58 8 4074
GmI50 1-heptyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 1-heptanolia ja natrium-l-heptylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-l-heptylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 1-heptyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml saan metyleenikloridin ja 1-heptanolian l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 3,9 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun GM^-gangliosidin 1-heptyylieste-rin saanto: 4,3 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm~^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,89, ja GMi-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na203iHa esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI.
Esimerkki 57: Gangliosidien seoksen 1-heptyyliestereiden seos 1-heptyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin 1-heptanolia ja natrium-l-heptylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesi-hauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 809,8 mg (5,86 mmoolia) natrium-l-heptylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 1-heptyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,3 g.
59 84074 KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-l;ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin IM 55:45:10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,68 -0,90 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoeste-röinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 58: Gangliosidin Gmi 2-metyyli-l-pentyyliesteri
Gmi:n 2-metyyli-l-pentyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 2-metyyli-l-pentanolia ja natrium-2-metyyli-l-pen-tylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-2-metyyli-l-penty-laattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-metyyli-l-pentyyli-alkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan mety-leenikloridin ja 2-metyyli-l-pentanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,1 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gj4i_gangliosi-din 2-metyyli-l-pentyyliesterin saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-1:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,90, ja Gjuji-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2CC>3:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaan gangliosidin gmi·
Esimerkki 59: Gangliosidien seoksen 2-metyyli-l-pentyyli-estereiden seos 2-metyyli-l-pentyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyylieste-reiden seos käyttämällä kuitenkin 2-metyyli-l-pentanolia ja 60 84C74 natrium-2-metyyli-l-pentylaattia metyylialkoholin ja nat-riummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 727,7 mg (5,86 mmoolia) natrium-2-metyyli-l-pentylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-metyyli-l-pentyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-seok-sella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,70 - 0,93 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 60: Gangliosidin Gmi 3-metyyli-2-pentyyliesteri GMl:n 3-metyyli-2-pentyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 3-metyyli-2-pentanolia ja natrium-3-metyyli-2-pen-tylaaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-3-metyyli-2-penty-laattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 3-metyyli-2-pentyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan mety-leenikloridin ja 3-metyyli-2-pentanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,1 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun GM]_-gangliosidin 3-metyyli-2-pentyyliesterin saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm~^-:ssä. Tuotteen kro- 61 84074 matografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,92, ja GMl-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na203:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin Gmi.
Esimerkki 61: Ganqliosidien seoksen 3-metyyli-2-pentyyli-estereiden seos 3-metyyli-2-pentyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin 3-metyyli-2-pentanolia ja natrium--3-metyyli-2-pentanolia ja natrium-3-metyyli-2-pentylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 727,7 mg (5,86 mmoolia) natrium-3-metyyli-2-pentylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 3-metyyli-2-pentyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-liuok-sella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,72 - 0,95 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 62: Gangliosidin G^i 2-metoksietyyliesteri GMl:n 2-metoksietyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 2-metoksietanolia ja natrium-2-metoksietylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia mooli- 62 84074 määriä sisäistä esteriä ja natrium-2-metoksietylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-metoksi-etyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 mlraan metyleenikloridin ja 2-metoksietanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gm-gangliosidin 2-metoksietyyliesterin saanto: 4,3 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,77 ja GMi“9angliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C03illa esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa ganglio-sidin GmI·
Esimerkki 63: Gangliosidien seoksen 2-metoksietyylieste-reiden seos 2-metoksietyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin 2-metoksietanolia ja natrium-2-metoksietylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 574,9 mg (5,86 mmoolia) nat-rium-2-metoksietylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-metoksietyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin KBr-pelleteillä ja se osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“l;ssä. Kun se kromatografoi-daan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metanolin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-seoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,51-0,78 (gangliosidiseos 0,20-0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 64: Gangliosidin G^l l-metoksi-2-propyyliesteri 63 84074
GmI:n l-metoksi-2-propyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin l-metoksi-2-propanolia ja natrium-l-metoksi-2-pro-pylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-l-metoksi-2-propy-laattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 1- metoksi-2-propyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan mety-leenikloridin ja l-metoksi-2-propanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun G^i-gangliosidin 2- metoksietyyliesterin saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm~^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,81, ja Gjui-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na203:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI.
Esimerkki 65: Ganqliosidien seoksen l-metoksi-2-propyylies-tereiden seos l-metoksi-2-propyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin l-metoksi-2-propanolia ja natrium-1-metoksi-2-propylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 657,0. mg (5,86 mmoolia) natrium-l-metoksi-2-propylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan l-metoksi-2-propyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,3 g.
64 84074 KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-l:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin IM 55:45:10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,52 -0,80 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoeste-röinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 66: Gangliosidin Gmi sykloheksyyliesteri 5g gangliosidin Gmi kaliumsuolaa (3,4 mmoolia) liuotetaan 50 ml saan DMSOsta ja liuokseen lisätään 661,5 mg (3,75 mmoolia) bromisykloheksaania ja 625 mg (3,75 mmoolia) Kiitä. Tämän annetaan reagoida 48 tunnin ajan 25°C:ssa. Reaktion lopussa liuos jaetaan n-butanolin ja I^Otn välillä (2:1) DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml saan kloroformin ja me-tanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 250 ml :11a asetonia. Näin saatu raakatuote (5,2 g) puhdistetaan sitten prepara-tiivisella pylväskromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:35:8-seosta. Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 ml saan klorformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan sykloheksyy-liesterin saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spekroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^-:ssä. Kr oma togr af oi tuna silikageelilevyillä kloroformin, metanolina ja ja CaCl2:n (0,3 %) 60:40:9-seoksella ja kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5 N 55:45:10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi ja sen Rf on 0,70 ja vastaavasti 0,58 ja se on vapaa GMi-lähtötuotteesta (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45). Käsittely Na2CC>3:n 0,1 N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtögangliosidin G^i·
Esimerkki 67: Gangliosidin G^l undekyyliesteri 65 6 4 0 7 4 5 g gangliosidin G^l kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml jaan DMSO:ta ja liuokseen lisätään 882,1 mg (3,75 mmoolia) 1-bromiundekaania ja 625 mg (3,75 mmoolia) KI:tä. Tämän annetaan reagoida 48 tunnin ajan 25°C:ssa. Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin/H20:n (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja metanolin 1^-seosta ja reaktiotuote saostetaan 250 ml:11a asetonia. Näin saatu raakatuote (5,3 g) puhdistetaan sitten preparatiivisella pylväskromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:35:8-seosta . Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 ml:aan klorformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml:11a asetonia. Puhtaan undekyyliesterin saanto: 4,9 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm"l:ssä. Kromatografoituna silika-geelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaC^in (0,3 %) 60:40:9-seoksella ja kloroformin/metanolin ja ammoniakin 2,5N 55 :45 :10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssil-la tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi, jonka Rf on 0,68 ja vastaavasti 0,56 ja se on vapaa GM]_-lähtötuotteestä (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45). Käsittely Na2C03:n 0,1 N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtögangliosidin G^i.
Esimerkki 68: Gangliosidin GmI 1-hydroksiundekan-ll-yyli-esteri 5 g gangliosidin G^i kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan DMSOtta ja liuokseen lisätään 0,42 mg (3,75 mmoolia) 11-bromi-l-undekanolia ja 625 mg (3,75 mmoolia) KI:tä. Tämän annetaan reagoida 48 tunnin ajan 25°C:ssa. Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin/H20:n (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdute- 66 8 4 0 7 4 taan kuiviin ja jäännös otetaan 50 mitään kloroformin ja me-tanolin l:l-seosta ja reaktiotuote saostetaan 250 ml :11a asetonia. Näin saatu raakatuote (5,3 g) puhdistetaan sitten preparatiivisella pylväskromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:35:8-seosta. Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 mitään klorformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan 11-hydroksiundekan-ll-yliesterin saanto: 4,8 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm"^:ssä. Kromatografoituna silika-geelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaC^m (0,3 %) 60:40:9-seoksella ja kloroformin/metanolin ja ammoniakin 2,5N 55:45:10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssil-la tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi, jonka Rf on 0,65 ja vastaavasti 0,52 ja se on vapaa Gjji-lähtöganglio-sidista (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45). Käsittely Na2C03:n 0,1 N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidok-sen lohkaisun ja tuottaa alkugangliosidin GM^<
Esimerkki 69: Gangliosidin Ghq syanobutyr-4-yyliesteri 5 g gangliosidin G^i kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan DMSO:ta ja liuokseen lisätään 550 mg (3,75 mmoolia) 4-bromibutyronitriiliä ja 625 mg (3,75 mmoolia) KI:tä. Jätetään reagoimaan 48 tunniksi 25°C:ssa. Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin ja H20:n (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 250 ml:11a asetonia. Näin saatu raakatuote (5,1 g) puhdistetaan sitten preparatiivisella pylväskromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:35:8-seosta.
Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 ml:aan kloroformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan syanobutyr-4-yyliesterin saanto 4,6 g.
67 84074 KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm~l;ssä. Kromatografoituna silika-geelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:40:9-scoksella ja kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5N 55:45:10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi ja sen Rf on 0,42 ja vastaavasti 0,45 ja se on vapaa G^-lähtögangliosidistä (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45). Käsittely Na2CC>3:n 0,1 N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtögangliosidin Gmi·
Esimerkki 70: Gangliosidin Gmi pyrrolidiiniamidi Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin Gmi sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta pyrrolidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja noudatetaan samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,1 g puhdasta gangliosidin Gmi pyrrolidiiniamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa GMlJStä ja sen Rf on 0,29 ja vastaavasti 0,46 (GmIsh Rf 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 71: Gangliosidiseoksen pyrrolidiiniamidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 grsta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 mlrsta pyrrolidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 4,9 g gangliosidiseoksen pyrroliidiniamidien seosta.
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageeli-levyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla,· osoittivat arvoja 0,08 - 0,40 ja vastaavasti 0,35 - 0,48 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05 - 0,40).
68 84074
Esimerkki 72: Gangliosidin GM^ piperidiiniamidi Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta piperidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja samaa puhdistusmenetelmää noudatetaan myös. Saadaan saantona 5,2 g puhdasta gangliosidin G^i piperidiiniamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa GMl:stä ja sen Rf on 0,30 ja vastaavasti 0,50 (GmI:n Rf 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 73: Ganqliosidiseoksen piperidiiniamidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 gssta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta piperidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,1 g gangliosidiseoksen piperidiiniamidien seosta. Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seok-sella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,10 - 0,42 ja vastaavasti 0,37 - 0,50 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05 -0,40) .
Esimerkki 74: Gangliosidin G^l tetrahydrofurfuryyliamidi Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta tetrahydrofur-furyyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja samaa puhdistusmenetelmää noudatetaan myös. Saadaan saantona 5,3 g puhdasta gangliosidin G^i tetrahydrofurfuryyliamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa 84074 olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa Gj^jstä ja sen Rf on 0,33 ja vastaavasti 0,52 (GMl^n Rf 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 75; Gangliosidiseoksen tetrahydrofurfuryyliamidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta tetrahydrofurfuryyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,2 g gangliosidiseoksen tetrahydrofurfu-ryyliamidien seosta.
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seok-sella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,12 - 0,45 ja vastaavasti 0,40 - 0,57 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05 -0,40).
Esimerkki 76: Gangliosidin Gmi 2-metyylipiperidiiniamidi Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin G^l sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta 2-metyylipipe-ridiiniamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja samaa puhdistusmenetelmää noudatetaan myös. Saadaan saantona 5,2 g puhdasta gangliosidin Gmi 2-metyylipiperidiiniamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa Gmi^stä ja sen Rf on 0,33 ja vastaavasti 0,54 (GMl^n Rf 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 77: Gangliosidiseoksen 2-metyylipiperidiiniamidien seos 70 84 074 Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta 2-metyylipiperidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,4 g gangliosidiseoksen 2-metyylipiperidiini-amidien seosta.
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageelilevyil-lä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksel-la ja kloroformin, metanolin ja CaCl2iO (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,14 - 0,46 ja vastaavasti 0,39 - 0,59 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05 -0,40).
Esimerkki 78: Gangliosidin G^l 1-metyylipiperatsiiniamidi Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin Gj,ji sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta 1-metyyli-pi-peratsiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja noudatetaan samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,1 g puhdasta gangliosidin GmI 1-metyylipiperatsiiniamidia. IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 metyy-liamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa G^i^stä ja sen Rf on 0,04 ja vastaavasti 0,08 (GmI:n Rf 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 79: Gangliosidiseoksen 1-metyylipiperatsiini- amidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta 1-metyylipiperatsiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,5 g gangliosidiseoksen 1-metyylipiperatsiini-amidien seosta.
71 84074
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageeli-levyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,01 - 0,06 ja vastaavasti 0,01 - 0,12 (ganglio-sidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05-0,40).
Esimerkki 80: Gangliosidin Gmi 2-fenyylietyyliamidi Tämä valmistetaan 5 g:sta gangliosidin G^l sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta 2-fenyylietyyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja samaa puhdistusmenetelmää noudatetaan myös. Saadaan saantona 5,3 g puhdasta gangliosidin Gmi 2-fenyylietyyliamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa Gwi:stM ja sen Rf on 0,33 ja vastaavasti 0,73 (GmI:n Rf 0,35 3a vastaavasti 0,40).
Esimerkki 81: Ganqliosidiseoksen 2-fenyylietyyliamidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta 2-fenyylietyyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,5 g gangliosidiseoksen 2-fenyylietyyli-amidien seosta.
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageelilevyil-lä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksel-la ja kloroformin, metanolin ja CaCl2*n (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,12 - 0,44 ja vastaavasti 0,60 - 0,78 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05-0,40) .
72 84C74
Farmaseuttiset valmisteet
Kuten yllä on esitetty, esillä olevan keksinnön eräänä kohteena ovat myös farmaseuttiset valmisteet, jotka sisältävät aktiivisena aineosana yhtä tai useampaa yllä esitettyä uutta gangliosidijohdannaista, etenkin sellaisia, jotka on johdettu gangliosidiryhmistä A ja B samoin kuin edellä erityisesti mainittuja. Edelleen esillä olevan keksinnön mukaiset farmaseuttiset valmisteet sisältävät esteröityjä johdannaisia tai amideja ja niiden asyloituja johdannaisia mukaanlukien jo tunnetut ja yllä esitetyt uudet johdannaiset. Etenkin etusijalla ovat gangliosidien GM^ ja GM3 metyyliesterit ja niiden perasyloidut johdannaiset samoin kuin gangliosidin Gm3 amidi.
Keksinnön mukaiset farmaseuttiset valmisteet voivat olla oraaliseen, rektaaliseen, parenteraaliseen, paikalliseen tai intradermaaliseen käyttöön tarkoitettuja valmisteita. Ne ovat siitä syystä kiinteässä tai puolikiinteässä muodossa, kuten pillereinä, tabletteina, gelatiinipäällysteisinä kapseleina, kapseleina, suppositorioina tai pehmeinä gelatiinikapseleina. Parenteraaliseen käyttöön on mahdollista käyttää muotoja, jotka on tarkoitettu käytettäviksi int-ramuskuläärisesti, subkutaanisesti tai interdermaalisesti tai jotka on tarkoitettu infuusioiksi tai intravenöösisiksi injektioiksi, ja jotka voidaan tästä syystä valmistaa aktiivisen aineosan liuoksina tai aktiivisten yhdisteiden pakas-tekuivattuina jauheina, jotka lisätään yhteen tai useampaan farmaseuttisesti sopivaan täyteaineeseen tai laimentimeen, jotka sopivat yllä mainittuihin käyttötarkoituksiin ja joiden osmoottisuus on sellainen, että se sopii yhteen fysiologisten nesteiden kanssa. Paikalliskäyttöön voidaan käyttää valmisteita, jotka ovat suihkeen, kuten nenäsuihkeen muodossa, emulsiovoiteen muodossa tai tooppiseen käyttöön tarkoitetun (vedettömän) voiteen muodossa, sopivasti valmistetuilla laastareilla intradermaalista käyttöä varten. Keksinnön mukaisia valmisteita voidaan antaa ihmisille tai eläimille. Sopivimmin koostumusten tulisi sisältää 0,01 - 10 % aktii- 73 8 4 0 7 4 vista aineosaa liuosten, suihkeiden, emulsiovoiteiden ja vedettömien voiteiden kohdalla ja 1 - 100 % ja sopivimmin 5 -50 % aktiivista yhdistettä kiinteiden valmisteiden yhteydessä. Annettava annoksen suuruus määräytyy lääketieteellisen indikaation, halutun vaikutuksen ja valitun antotavan mukaan. Esimerkit 82 - 83 esittävät keksinnön mukaisia farmaseuttisia valmisteita.
Esimerkki 82: Farmaseuttiset valmisteet injektioliuoksina
Valmiste n;o 1: - yksi 2 ml pienpullo sisältää - aktiivista aineosaa mg 5 - natriumkloridia mg 16 - sitraattipuskuria, pH 6 pyrogeenivapaaksi tislatussa vedessä g.b.a.ml 2
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkkien 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ja 24 mukainen gangliosidijohdannainen .
Valmiste n:o 2; - yksi 2 ml pienpullo sisältää - aktiivista aineosaa mg 50 - natriumkloridia mg 16 - sitraattipuskuria, pH 6 pyrogeenivapaaksi tislatussa vedessä g.b.a.ml 2
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkkien 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38 ja 39 mukainen gangliosidi johdannainen.
Valmiste n;o 3: - yksi 4 ml pullo sisältää - aktiivista aineosaa mg 100 - natriumkloridia mg 32 - sitraattipuskuria, pH 6 pyrogeenivapaaksi tislatussa vedessä g.b.a.ml 4
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkkien 20-39 mukainen gangliosidijohdannainen.
74 84074
Valmisteet n:ot 1, 2 ja 3 voidaan antaa suoraan eläimille tai ihmisille jollakin esitetyllä tavalla. Yhdisteet voivat sisältää myös muita aktiivisia aineosia.
Esimerkki 83: Farmaseuttiset valmisteet, jotka on valmistettu kaksoispulloissa Tässä esimerkissä esitetyt valmisteet valmistetaan kaksoispulloissa. Ensimmäinen pullo sisältää aktiivisen aineen pakastekuivatun jauheen muodossa, sen määrät voivat olla 10 - 90 paino-%, yhdessä farmaseuttisesti sopivan täyteaineen kanssa, glysiinin tai mannitolin kanssa. Toinen pullo sisältää liuottimen, kuten natriumkloridin liuoksen tai sitraat-tipuskurin.
Näiden kahden pullon sisällöt sekoitetaan välittömästi ennen käyttöä ja aktiivisen aineen pakastekuivattu jauhe liukenee nopeasti, jolloin saadaan injektioliuos. Pullot, jotka sisältävät aktiivisen aineen jäädytyskuivatun jauheen, ovat esillä olevan keksinnön parhaimpana pidetty muoto.
Järjestelmä n;o 1; a. yksi pakastekuivattu 2 ml pullo sisältää: - aktiivista ainetta mg 5 - glysiiniä mg 30 b. yksi 2 ml liuotinpienpullo sisältää - natriumkloridia mg 16 - sitraattipuskuria pyrogeenivapaassa vedessä q.b.m. ml 2
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkkien 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ja 24 mukainen gangliosidijohdannainen.
Järjestelmä n:o 2: a. yksi 3 ml pakastekuivatettu pienpullo sisältää: aktiivista ainetta mg 5 mannitolia mg 40 75 8 4 0 7 4 b. yksi 2 ml pienpullo liuotinta sisältää natriumkloridia mg 16 sitraattipuskuria pyrogeenivapaassa vedessä q.b.a. ml 2
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkeissä 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ja 13 esitetty gangliosidijohdannainen.
Järjestelmä n:o 3 a. yksi pakastekuivatettu 3 ml pienpullo sisältää: aktiivista ainetta mg 50 glysiiniä mg 25 b. yksi 3 ml pienpullo liuotinta sisältää: natriumkloridia mg 24 sitraattipuskuria py-rogeenivaapaassa vedessä q.b.a. ml 3
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkeissä 14, 15, 16, 17, 21, 37, 38 ja 39 esitetty gangliosidijohdannainen.
Järjestelmä n:o 4 a. yksi pakastekuivatettu 3 ml pienpullo sisältää: aktiivista ainetta mg 50 mannitolia mg 20 b. yksi 3 ml pienpullo liuotinta sisältää: natriumkloridia mg 24 sitraattipuskuria pyrogeenivapaassa vedessä q.b.a. ml 3
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkeissä 10 - 13 esitetty gangliosidijohdannainen.
Järjestelmä n:o 5 a. yksi pakastekuivatettu 5 ml pienpullo sisältää: aktiivista ainetta mg 150 glysiiniä mg 50 76 84074 b. yksi 4 ml pienpullo sisältää: natriumkloridia mg 32 sitraattipuskuria pyro-geenivapaassa vedessä q.b.a. ml 4
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkeissä 14 - 39 esitetty gangliosidijohdannainen.
Järjestelmä n:o 6 a. yksi pakastekuivatettu 5 ml pullo sisältää: aktiivista ainetta mg 100 mannitolia mg 40 b. yksi 4 ml pienpullo liuotinta sisältää: natriumkloridia mg 32 sitraattipuskuria pyro-geenivapaassa vedessä q.b.a. ml 4
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkeissä 5-9 esitetty gangliosidijohdannainen.
Järjestelmä n:o 7 a. yksi 3 ml pullo sisältää: steriiliä mikronoitua aktiivista ainetta mg 40 b. yksi 3 ml pienpullo liuotinta sisältää:
Tween 80 mg 10 natriumkloridia mg 24 fosfaattipuskuria pyro-geenivapaassa vedessä q.b.a. ml 3
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkeissä 40 - 45 esitetty gangliosidijohdannainen.
Järjestelmä n:o 8 a. yksi 5 ml pullo sisältää: steriiliä mikronoitua aktiivista ainetta mg 100 77 84074 b. yksi 4 ml pienpullo liuotinta sisältää:
Tween 80 mg 15 soijalesitiiniä mg 5 natriumkloridia mg 36 sitraattipuskuria pyro-geenivapaassa vedessä q.b.a. ml 4
Aktiivinen aine voi olla jokin esimerkeissä 40 - 45 esitetty gangliosidi johdannainen.
Terapeuttinen aktiivisuus
Kaikki yllä esitetyt uudet gangliosidijohdannaiset ja etenkin ryhmien A ja B gangliosidit ja yllä esitetyt yhdisteet sisältävät esillä olevan keksinnön mukaisten farmaseuttisten valmisteiden aktiivisia aineosia. Edelleen nämä farmaseuttiset valmisteet voivat sisältää yllä esitetyn tyyppisiä ja jo kirjallisuudesta tunnettuja gangliosidejä, kuten gangliosi-din metyyliesteriä tai sen perasyloitua johdannaista.
Keksintö sisältää myös kaikkien näiden gangliosidijohdannaisten, sekä uusien että jo tunnettujen sovellutuksen terapeuttiseen käyttöön.
Kuten yllä on esitetty, gangliosidien ja joidenkin johdannaisten, kuten esillä olevan keksinnön mukaisten terapeuttinen toiminta johtuu hermosolujen kehitysilmiön stimuloinnista, minkä johdosta on mahdollista saada aikaan hermoärsyk-keiden regeneroituminen. Esimerkiksi annettaessa in vivo esimerkissä 2 esitetyllä tavalla naudan aivoista saatua gan-gliosidiseosta (GA-seosta) saadaan aikaan rottien lonkkahermon kehittymistä murtumisen jälkeen ja siten se voi edistää hermon sähköisen aktiivisuden regenerointia hermomuskulääri-sellä liitostasolla.
Koska hermosolun viejähaaran kehitystä voidaan pitää paikallisena neuronaalisena lajitteluna, biokemiallista mekanismia, jolla gangliosidimolekyylit tuottavat tämän vaikutuksen, tutkittiin perustuen niiden vaikutukseen solulajitteluun 78 8 4 074 käyttämällä feokromosytoma PCi2:n soluviljelyjä in vitro. Gangliosidien lisäys hermon kasvutekijään (NGF), joka on PCi2-solujen lajittelun aiheuttaja, PCi2-v;Qle]-yss^ stimuloi hermokehitystä. Tämän vaikutuksen voidaan katsoa edistävän gangliosidien liittymistä hermokalvoon, mikä saa aikaan sen toiminnallisten ominaisuuksien, s.o. entsymaattisten aktiivisuuksien modifioinnin. Todellakin gangliosidien liittäminen hermokalvoon pystyy stimuloimaan (Na+, K+)-ATPasen aktiivisuutta. Tämän entsyymin kalvoon liittyvän aktivioin-nin tärkeyden havainnollistamiseksi tulisi muistaa, että muutamat kirjoittajat katsovat hermosolujen eloonjäännin ja siten jaottelun viljelyssä johtuvan tämän entsyymin aktivoinnista NGF:n toimesta. Toisaalta tämän entsyymin päärooli sähköisessä aktiivisuudessa on hyvin tunnettu, koska se osallistuu ionimekanismiin, joka on alttiina hermoimpulssien levittymiselle keskusviivakalvoa pitkin.
Perustuen yllä esitettyihin menetelmiin tehtiin määritelmiä uusien esillä olevan keksinnön mukaisten gangliosidien farmakologisista PCi2-so^-u^ssa hermosolun viejähaaraa kehittävistä aktiivisuuksista. Esitetään myös joillakin johdannaisilla (Na+, K+)-ATPasella saatuja tuloksia.
Ganqliosidijohdannaisten vaikutus hermosolun viejähaaran ke-hitykseen PCi2-soluissa Aineet ia menetelmät PCi2“Solusukupolven (johdettu alaklooni lA:sta) toimitti Dr. P. Calissano (C.N.R. Laboratory of Cellular Biology, Rooma).
Soluja (100.000/levy) pidettiin 37°C:ssa Heraeus-inkubaatto-rissa (5 % C02sa ja 95 %:n ilmankosteus) ja asetettiin uudelleen 60 mm:n Falcon Integrid-levyille kollageeni-alustalle seuraavan viljelyväliaineen läsnäollessa: 85 % RPM 1640 (Gibco), 10 % kuuma-aktivoitua ekviiniseerumia, 5 % vasikansikiöseerumia (Gibco), 50 U/ml penisilliiniä ja 25 mg/ml streptomysiiniä. Solut pestiin sitten kolme kertaa seerumivapaassa apuaineessa. Kolmen pesun jälkeen soluja 79 84074 inkuboitiin seerumivapaassa apuaineessa 50 ng/ml:n kanssa NGFiä ja keksinnön mukaisella gangliosidijohdannaisella tai vertailuna käytetyn gangliosidiseoksen kanssa 10“^M-konsen-traatioissa. Seerumivapaan apuaineen lisäys NGF:n (50 ng/ml) kanssa keskeyttää solujen proliferaation ja muodostaa hermosolun viejähaarojen muodotumista ja jaottelua kolmantena päivänä. Tämä vaikutus arvioitiin laskemalla solujen määrä, joissa oli hermosolun viejähaaroja kolmantena päivänä.
Tulokset
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa 1 käyttämällä vertailuna arvoja, jotka saatiin gangliosidiseoksella, jotka oli saatu esimerkissä 2 esitetyllä menetelmällä, ja yhdellä ainoalla monosialogangliosidifraktiolla GmI· 80 84074 TAULUKKO 1
Esillä olevan keksinnön mukaisten gangliosidien ja niiden johdannaisten vaikutukset hermosolujen viejähaaran kehittymiseen PCj^-soluissa·
Yhdiste Konsentraatio hermosolujen viejähaaroja sisältävien solujen %-mää-rä kolmantena päivänä
Kontrollit 21,5
Gangliosidiseos GA 10“®M 39,5 (ks. Esim. 2)
Monosialogangliosidi Gjui M 34,8 GA:n metyyliesteri « 32,8
GmI*n metyyliesteri n 35,7 GA:n etyyliesteri " 34,9 G(4i:n etyyliesteri h 37,1 GA:n isopropyyliesteri » 37,3
Gmimi isopropyyliesteri << 37,0 GA:n tert.-butyyliesteri « 29,5
GmI5n tert.-butyyliesteri n 32,3 GA:n bentsyyliesteri » 31,4
GmiJn bentsyyliesteri ·· 28,3 GA:n allyylyesteri " 34,1
GmI:n allyylyesteri « 31,5 GMl:n etoksikarbonyylimetyyliesteri n 27,3 GA:n amidi " 36,3 GMl:n amidi n 33,3 GA:n metyyliamidi " 40,0 GA:n etyyliamidi " 35,0 81 84074 TAULUKKO 1 (jatkuu)
Yhdiste Konsentraatio hermosolujen viejähaaroja sisältävien solujen %-mää-rä kolmantena päivänä
GmI:n etyyliamidi " 32,2 GA:n bentsyyliamidi " 26,7 G(4i:n bentsyyliamidi " 30,8
Gmi*0 isopropyyliamidi " 31,4 GA:n dimetyyliamidi " 29,3
GmISO dimetyyliamidi ” 34,3 GA:n dietyyliamidi " 25,0
Gj4l · n dietyyliamidi " 28,5 GMl:n etyylimetyyliamidi " 35,3 GA:n 3-dimetyyliaminopropyyli- 1-amidi " 32,9
GmI:n 3-dimetyyliaminopropyyli- 1-amidi " 37,3 GMl:n dimetyyliaminoetyyliamidi " 34,8 GA:n etanoliamidi " 38,3 GMl:n etanoliamidi " 41,2 GMl:n 6-hydroksiheksyyli-l-amidi " 36,4
Perasyloitu GA-seos " 28,5
Perasyloitu G^ " 30,2
Perasyloidun GA:n metyyliesteri " 33,6
Perasyloidun GMl:n metyyliesteri " 29,4
Perasyloidun GA:n amidi " 25,3
Perasyloidun Gmi*0 amidi " 31,4 β2 84074
Gangliosidijohdannaisten vaikutukset hermokalvojen (Na+, K+)-ATPaseen
Aineet ja menetelmät a. Raa'an mitokondriaalisen fraktion valmistus rotan aivoista (fraktio P2):
Menetelmä, jota käytettiin P2-valmistamiseksi, oli otettu julkaisusta Morgan e coll., Biochem. Biophys. Acta 241, 37 (1971). (Erilaiset toiminnot suoritettiin 0°-4°C:ssa; xg-arvot ovat keskimääräisiä keskipakoisvoimia).
Täysikasvuisilta koiraspuolisilta Sprague Dawley-rotilta (toimittaja Charles River) (ruumiinpaino 150-175 g) poistettiin pää ja niiden aivot poistettiin välittömästi ja pestiin jääkylmässä isotonisessa liuoksessa. Pikkuaivojen poistamisen jälkeen aivot homogenoitiin suorittamalla 12 ylösalaisliikettä moottorikäyttöisessä lasisessa Teflon-homogenisaattorissa (osoitettu säteittäinen välys 0,25 mm; 800 kierr./min.) käyttämällä 4 tilavuusosaa homogenointili-uosta (0,32M sakkaroosia, joka sisälsi 1 mM kaliumfosfaatti-puskuria ja 0,1 nM dinatrium-EDTA:ta, pH 7,27). Homogenoitua ainetta, joka oli suodatettu hienon harsokankaan neljän kerroksen läpi, lingottiin 1000 rpmsssä 15 minuutin ajan. Muodostuva pelletti pestiin homogenointiliuoksen samalla alkumää-rällä ja lingottiin yllä esitetyllä tavalla. Koottuja super-natantteja lingottiin 17.500 rpm:ssä 25 minuutin ajan (keskipakoisvoiman näitä olosuhteita käytettiin hermopäätteiden maksimikehittymisen aikaansaamiseksi fraktiossa) ja pelletti pestiin neljä kertaa homogenointiaineen 9 tilavuu-sosalla (joka kerta) ja lingottiin (17.500 rpm. 25 minuutin ajan).
Lopullinen pelletti, joka tunnetaan "P2-fraktiona", sisältää sen pääkomponenttina koko mitokondrio- ja hermopäätteet. Lopullinen pelletti suspendoitiin uudelleen homogeenisesti homogenointiliuoksen sopivalla määrällä lasi- ja Teflon-homogenisaattorilla ja käytettiin välittömästi testissä. Materiaalin säilyttämisen aiheuttamien vaihtelevuuksien vält- 83 84074 tämiseksi tuoreet P2~fraktiot valmistettiin ennen jokaista käyttöä. P2-fraktioiden valmisteiden gangliosidipitoisuus oli 33,9 + 2,8 (S.D.) n moolia sialihappoa/mg proteiinia.
b. ATPase-entsyymin aktivointi ATPase-aktiivisuus mitattiin spektrofotometrialla Wallickin et al.:n mukaisesti [J. Pharm. Exptl. Therap. 189, 434 (1974)]. Reaktioseos sisälsi, mikäli toisin ei ole esitetty: 50 mM sakkaroosia, 0,2 mM dinatrium-EDTA:ta (saatettu pH-arvoon 7,4), 100 mM NaCl:a, 5 mM MgC^:3» 10 mM KCl:a, 2 mM fosfo(enoli)puryvaatin monokaliumsuolaa (PEP) (saatettu pH-arvoon 7,4), 3 mM ATPrtä, 50 mM TRIS-HCl:a, pH 7,4), 0,33 mM NADH:ta, pyruvaatti-kinaasia (PK) (30 g/ml) ja laktaatti-dehydrogenaasia (LDH) (10 g/ml) 3 ml:n lopullisessa tilavuudessa ja lopullisen pH-arvon ollessa 7,2. Reaktio aloitettiin lisäämällä 50-75 ^ig (proteiinina) P2~fraktiota. (Na+, K+)ATPase-aktiivisuus määritettiin koko ATPase-aktiivisuuden ja riippuvaisen ATPase Mg2+jaktiivisuuden välisellä erotuksella mitattuna Oubainin 3 x 10~5M:n läsnäollessa. Jokaista yksittäistä testiä varten aika oli 3-5 minuuttia. ATPase-aktiivisuus ilmaistiin kansainvälisenä yksikkönä (I.U.) (yumoolia hydrolysoitua ATP:tä/mg proteiinia/min.). Gangliosidijohdannaisten aktiivisuus (50 nM) annosteltiin suorittamalla hermokalvojen inkubointi 37°C:ssa kahden tunnin kuluessa.
Tulokset
Vertailevien ATPase-aktiivisuuden tutkimusten tulokset on esitetty taulukossa 2.
84 84074 TAULUKKO 2
Gangliosidien ja niiden johdannaisten vaikutukset hermokal-von (Na+, K+)ATPaseen
Tuote Konsentraatio %-kasvu (Na+, K+) ATPase aktiivisuudessa
Kontrollit 50 100
Gangliosidiseos GA
GA (katso Esim. 2) 50 142
Gmi 50 133 GA:n metyyliesteri 50 128 GA:n amidi 50 139
GmI:n metyyliesteri 50 132
GmI:n amidi 50 128
Tulisi huomata, että esillä olevan keksinnön mukaisilla gan-gliosidijohdannaisilla on ajaltaan pidentyneempi vaikutus verrattuna gangliosideihin ja tästä syystä ne ovat käyttökelpoisia hidastetun vaikutuksen omaavina lääkeaineina.
Tämä ilmiö havainnollistetaan esimerkiksi seuraavilla gan-gliosidiestereiden absorption kinetiikan kokeilla.
Gangliosidijohdannaisten in vivo-verijakaantuminen 1. Luokiteltujen tuotteiden valmistus
Luokiteltu gangliosidi valmistettiin Suzuki et al.:n mukaisesti [J. Lipid Res. lji, 687-690 (1972 )] Ghidoni et al.:n modifioimalla tavalla [Ital. J. Biochem. 2_3, 320-328 (1974)]. Etyyli- ja isopropyyliesterit valmistettiin esteröimällä tämä luokiteltu gangliosidi. Mitattiin sekä gangliosidin että estereiden ominaisradioaktiivisuus .
85 84074 2. Eläinten käsittely
Swiss-hiiriä, jotka oli toimittanut Charles River (Calco) ja jotka painoivat 20-25 kg, käsiteltiin intravenöösisesti 10 ^uC:llä tuotetta. 2-4-8-12-16 tuntia antamisen jälkeen eläimet tapettiin poistamalla päät ja niiden veri koottiin hepa-rinoituihin pulloihin. Haihtumaton radioaktiivisuus määritettiin verinäyttäissä Packard TRICARB-tuikeilmaisimella ja sitten identifioitiin vertaamalla ^H-gangliosideihin ja estereihin TLCsllä (ohutkerroskromatografiällä).
3. Tulokset
Sen jälkeen kun oli annettu intravenöösisesti tritiumilla käsiteltyä (tritiated) gangliosidiä, kineettinen käyrä oli bifaasinen laskien t/2 noin kolmesta tunnista, minkä jälkeen tapahtui hidas eliminointivaihe, joka pysyi vakiona 16. tuntiin asti. GMl“9an9li°sidin etyyli- ja isopropyyliesterin kanssa tuotteen tasot, jotka identifioitiin ensin, eivät saavuttaneet maksimia, joka oli havaittu luonnollisella tuotteella, mutta aikaa myöden ne saavuttivat korkeammat maksimit ja pysyivät tällä tasolla kauemmin. Tällä tavalla on olemassa jakelumäärän kasvu ja terapeuttisten annosten säilymisajan kasvu.
• GM1 O Gjq etyyliesteri 6000- P^a J \ a Gmi isopropyyliesteri ^ 4000- I j^ \ X_ -c 2000-
f -o--O
0· f ..... 1 » i ...........
0 4 β 12 16
Aika (tunnit) 86 84074
Yllä esitetyistä farmaseuttisista ominaisuuksista johtuen esillä olevan keksinnön mukaisia gangliosidijohdannaisia voidaan käyttää erilaisissa terapioissa hermoston patologioiden hoitamiseksi, etenkin ääreishermoston ja keskushermoston terapioissa.
Keksinnön kohteena on etenkin gangliosidijohdannaisten terapeuttinen käyttö, jotka yllä on mainittu, kuten gangliosi-dien A ja B johdannaisten ryhmien käyttö ja yksityiskohtaisesti mainittujen johdannaisten käyttö ja kaikkien näiden johdannaisten antaminen esitetyissä annoksissa. Etenkin näitä gangliosidijohdannaisia voidaan käyttää ääreishermoston patologioiden terapiassa, jotka ovat alkuperältään traumaattisia, puristavia, generatiivisiä tai toksis-infektiivi-siä, joissa on tarpeen stimuloida hermoregeneroitumista ja hermomuskuläärisen toiminnan regeneroitumista ja keskushermoston patologioissa, jotka ovat alkuperältään traumaattisia, anoksisia, degeneratiivisiä tai toksis-infektiivisiä, joissa on tarpeen stimuloida neuronaalista kehittymisilmiötä toiminnallisen regeneroinnin aikaansaamiseksi. Hidasvaikuttei-sen vaikutuksensa ansiosta esillä olevan keksinnön mukaisilla gangliosidijohdannaisilla on selvä etu verrattuna itse gangliosideihin, joita on tähän asti käytettyy lääkeaineina yllä esitetyissä tapauksissa.
Annostelut riippuvat halutusta vaikutuksesta ja valitusta antotavasta. Anto suoritetaan tavallisesti intramuskulääri-sesti, subkutaanisesti, intravenöösisesti, intradermaalises-ti tai pulmonaalisesti, mieluummin sopivasti puskuroidussa vesipitoisessa apuaineessa. Aineen farmaseuttinen säilytys-muoto on tässä tapauksessa pienpullo, joka sisältää johdannaisen liuoksen, mahdollisesti muiden apuaineiden kanssa kuten on esitetty esillä olevan keksinnön mukaisten farmaseuttisten valmisteiden yhteydessä. Terapeuttista tai mahdollisesti myös profylaktista parenteraalista käyttöä varten annos voi olla 0,05 - 5 mg aktiivista ainetta/kg ja etenkin 0,05 - 2 mg/kg.
•4 \ 87 84074
Vaikkakin keksinnön mukaiset uudet terapeuttiset sovellutukset sopivat yleisesti kaikkiin patologioihin, jotka liittyvät hermoärsykkeiden johtamiseen keskus- ja ääreishermostossa, seuraavat patologiat ovat etenkin mielenkiintoisia: ret-robulbaarinen optinen hermotulehdus, silmän liikehermojen paralysia, kolmoishermon hermotulehdus, Bellin halvaus ja naamahermon paralysia, ääreishermojen traumaattiset vammat, diabeettinen ja alkoholin aiheuttama monihermotulehdus, obstetrinen paralysia, paralyyttinen lonkkahermotulehdus, lii-kehermosairaudet (motoneuron diseases), myelopatinen musku-läärinen amyotrofis-atrofinen lateraalinen skleroosi, progressiivinen bulbaarinen paralysia, vakava myastenia, Lamber Eaton-syndrooma, muskuläärinen dystrofia, synaptisen hermostollisen siirron huonontuminen keskushermostossa ja ääreishermostossa ja tajunnan, kuten sekavuustilojen, aivotärähdysten, tromboosin, embolismin parannukset.
Claims (16)
1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten yleiskaavan (la) ROOC",,mmf ^ iiiiiimniOX (OX happo = = '““"»‘"OX keramidi ' Ξ Ξ ' < s Rooc limuni^ 5 Ö J OX OX ÖX OLIGOSAKKARIDI ÖX mukaisten gangliosidien esteri- ja amidijohdannaisten sekä perasyloitujen johdannaisten valmistamiseksi, jossa kaavassa R on vety tai a) enintään 12 hiiliatomia sisältävän alifaattisen alkoholin tähde, enintään 12 hiiliatomia sisältävän aralifaattisen alkoholin tähde, jossa on vain yksi bentseenirengas, joka on mahdollisesti substituoitu 1-3 Ci_4-alkyyliryhmällä, enintään 12 hiiliatomia sisältävän heterosyklisen alkoholin tähde, jossa on typpi-, rikki- tai happiheteroatomin sisältävä hetero-syklinen rengas, enintään 14 hiiliatomia sisältävän alisyklisen alkoholin tähde tai enintään 14 hiili-atomia sisältävän alifaattis-alisyklisen alkoholin tähde, jossa on vain yksi sykloalifaattinen rengas, jolloin mainitut alkoholitähteet voivat olla substi-tuoituja hydroksyyli-, amiini- tai alkoksyyliryh-mällä, jossa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyylissä, karboksyyli- tai karbyylioksiryhmällä, jossa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyylissä tai alkyyliamiini-tai dialkyyliamiiniryhmällä, jossa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyylissä, tai b) ammoniakin tähde, enintään 12 hiiliatomia sisältävän 89 84074 alifaattlsen amiinin tähde, enintään 12 hiiliatomia sisältävän aromaattisen amiinin tähde, enintään 12 hiiliatomia sisältävän heterosykllsen amiinin tähde, jossa on typpi-, rikki- tai happiheteroatomi, enintään 12 hiiliatomia sisältävän alisyklisen amiinin tähde tai sellaisen aralifaattisen amiinin tähde, jossa on vain yksi bentseenirengas, joka on mahdollisesti substituoitu 1-3 Ci_4-alkyyliryhmällä ja jossa on enintään 4 hiiliatomia alifaattisessa osassa, jolloin mainitut amiinitähteet voivat olla subs-tituoituja amiinilla, alkyyliryhmässään korkeintaan 4 hiiliatomia sisältävällä alkyyliamiini- tai di-alkyyliamiiniryhmällä, hydroksiryhmällä tai alkyyliryhmässään korkeintaan 4 hiiliatomia sisältävällä alkoksiryhmällä, tai alkyleeniamiiniryhmällä, joka on johdettu 3-6 hiiliatomia käsittävän suoran ketjun tai vastaavan 1-3 metyyliryhmällä substituoi-dun ketjun omaavasta alkyleeniryhmästä, X on vety, enintään 10 hiiliatomia sisältävän alifaatti-sen karboksyylihapon tähde, enintään 10 hiiliatomia sisältävän aromaattisen karboksyylihapon tähde, enintään 10 hiiliatomia sisältävän aralifaattisen karboksyylihapon tähde, enintään 10 hiiliatomia sisältävän alisyklisen karboksyylihapon tähde tai enintään 10 hiiliatomia sisältävän heterosykllsen karboksyylihapon tähde, edellyttäen, että mainittu esterijohdannainen on muu kuin gangliosi-dien GM^, GM2, GM3 tai GDia metyyliesteri, mainittu amidijohdannainen on muu kuin gangliosidin GM3 amidi ja R ja X eivät samanaikaisesti merkitse vetyä, tunnettu siitä, että A) yleiskaavan (Ia) mukaisten esterijohdannaisten valmistamiseksi saatetaan gangliosidin tai sen perasyloidun johdannaisen metallisuola reagoimaan sellaisen eetteröintiaineen 90 84074 kanssa, joka sisältää gangliosidien sialihappotähteiden karboksyyliryhmiin esterisidoksella liitettävän hiilivedyn, B) yleiskaavan (Ia) mukaisten esterijohdannaisten valmistamiseksi käsitellään gangliosidin sisäistä esteriä alkoholilla vastaavan esterin muodostamiseksi gangliosidin sialihappo-tähteissä, C) yleiskaavan (Ia) mukaisten amidijohdannaisten valmistamiseksi käsitellään gangliosidiä tai gangliosidin sisäistä esteriä tai gangliosidin karboksyyliesteriä ammoniakilla tai amiinilla, tai D) yleiskaavan (Ia) mukaisten perasyloitujen johdannaisten valmistamiseksi käsitellään gangliosidiä tai gangliosidin esteri- tai amidijohdannaista asyloivalla aineella emäksen läsnäollessa.
2. Patenttivaatimuksen 1 vaihtoehdon A mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että eetteröintiaineena käytetään hiilivetyhalogenidia.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että metallisuolana käytetään natrium- tai kaliumsuola.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että gangliosidin, gangliosidien seoksen tai niiden perasyoitujen johdannaisten metallisuolan käsittely suoritetaan aproottisessa liuottimessa 20 - 120eC:n lämpötilassa.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnet- t u siitä, että liuottimena käytetään dioksaania tai DMSO:ta.
6. Patenttivaatimuksen 1 vaihtoehdon B mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käsittely suoritetaan alkoholia vastaavan metallialkoholaatin läsnäollessa.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että alkoholina käytetään alifaattista alkoholia, 9i 84074 jossa on korkeintaan 12 hiiliatomia; aralifaattista alkoholia, jossa on ainoastaan yksi bentseenirengas, joka on mahdollisesti substituoitu 1-3 Ci_4-alkyyliryhmällä ja jossa on korkeintaan 4 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa; heterosyklistä alkoholia, jossa on korkeintaan 12 hiiliatomia ja ainoastaan yksi heterosyklinen rengas, joka sisältää heteroatomin, joka on N, S, tai O; tai Ci_i4-alisyklista tai alifaattis-alisyklistä alkoholia.
8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että alkoholina käytetään metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, n-butyyli-, isobutyyli-, tert-butyyli-, undekyyli-, hydroksidekyyli-, heptyyli-, 2-metyyli-l-pentyyli-, allyyli-, etoksikarbonyylimetyyli-, metoksietyyli-, l-metoksi-2-propyyli-, fenetyyli-, syklo-heksyyli-, mentyylitetrahydrofurfuryyli-, tetrahydropyra-nyyli- tai syanobutyryylialkoholia.
9. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että hiilivetyhalogenidin hiilivetyryhmä on metyyli, etyyli, propyyli, isopropyyli, n-butyyli, isobutyyli, tert-butyyll, undekyyli, hydroksidekyyli, heptyyli, 2-metyyli-l-pentyyli, allyyli, etoksikarbonyylimetyyli, metoksietyyli, l-metoksi-2-propyyli, bentsyyli, fenetyyli, sykloheksyyli, mentyyli, tetrahydrofurfuryyli, tetrahydropy-ranyyli tai syanobutyryyli.
10. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että alkoholaattina käytetään alkoholin alkali-metallialkoholaattia.
11. Patenttivaatimuksen 1 vaihtoehdon C mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että amiinina käytetään alifaattista amiinia, jossa on korkeintaan 12 hiiliatomia ja avoimia tai syklisiä ketjuja, tai aralifaattista amiinia, jossa on ainoastaan yksi bentseenirengas, joka on valinnanvaraisesti substituoitu 1-3 Ci_4-alkyyliryhmällä ja jossa on korkeintaan 4 hiiliatomia alifaattisessa osassa. 92 84074
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että amiinina käytetään metyyliamiinia, etyyli-amiinia, propyyliamiinia, isopropyyliamiinia, dimetyyliamiinia, dietyyliamiinia, butyyliamiinia, pyrrolidiinia, piper-diiniä, 2-metyylipiperdiinia, piperatsiinia, 1-metyylipiper-atsiinia, etanoliamiinia, bentsyyliamiinia, etyylimetyyli-amiinia, dimetyyliaminopropyyli-l-amiinia, dimetyyliamino-etyyliamiinia, 6-hydroksiheksyyli-l-amiinia, tetrahydrofur-furyyliamiinia tai 2-fenyylietyyliamiinia.
13. Patenttivaatimuksen 1 vaihtoehdon D mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että asylointiaineena käytetään Ci_io-alifaattista karboksyylihappoa, tai aromaattista karboksyylihappoa, joka on bentsoehappo tai sen johdannainen, joka on substituoitu metyyli-, hydroksyyli-, amiini-tai karboksiryhmillä.
14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että asylointiaineena käytetään etikka-happoa, propionihappoa, voihappoa, maleiinihappoa tai meri-pihkahappoa.
15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että emäksenä käytetään tertiaalista emästä.
16. Patenttivaatimuksen 1 vaihtoehdon D mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että asylointiaineena käytetään an-hydridiä ja emäksenä tertiääristä amiinia. 93 84074
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI892587A FI83423C (fi) | 1984-07-03 | 1989-05-26 | Foerfarande foer framstaellning av gangliosidderivat. |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT4849284 | 1984-07-03 | ||
| IT48492/84A IT1199116B (it) | 1984-07-03 | 1984-07-03 | Derivati di gangliosidi |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI852515A0 FI852515A0 (fi) | 1985-06-26 |
| FI852515L FI852515L (fi) | 1986-01-04 |
| FI84074B FI84074B (fi) | 1991-06-28 |
| FI84074C true FI84074C (fi) | 1991-10-10 |
Family
ID=11266890
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI852515A FI84074C (fi) | 1984-07-03 | 1985-06-26 | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara gangliosidderivat. |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4713374A (fi) |
| EP (1) | EP0167449B1 (fi) |
| JP (1) | JPS6163691A (fi) |
| KR (1) | KR880001232B1 (fi) |
| CN (2) | CN1021333C (fi) |
| AR (1) | AR242219A1 (fi) |
| AT (1) | ATE58739T1 (fi) |
| AU (1) | AU578706B2 (fi) |
| BE (1) | BE902750A (fi) |
| CA (1) | CA1263954A (fi) |
| CH (1) | CH670645A5 (fi) |
| DE (1) | DE3580710D1 (fi) |
| DK (2) | DK289885A (fi) |
| ES (3) | ES8706711A1 (fi) |
| FI (1) | FI84074C (fi) |
| FR (1) | FR2567131B1 (fi) |
| GR (1) | GR851573B (fi) |
| HU (2) | HU199860B (fi) |
| IE (1) | IE59376B1 (fi) |
| IL (1) | IL75640A0 (fi) |
| IN (1) | IN164786B (fi) |
| IT (1) | IT1199116B (fi) |
| LU (1) | LU85972A1 (fi) |
| MX (1) | MX163384B (fi) |
| NO (1) | NO164545C (fi) |
| NZ (1) | NZ212540A (fi) |
| PH (1) | PH27021A (fi) |
| PL (2) | PL151829B1 (fi) |
| PT (1) | PT80724B (fi) |
| YU (1) | YU46603B (fi) |
| ZA (1) | ZA854807B (fi) |
Families Citing this family (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1177863B (it) * | 1984-07-03 | 1987-08-26 | Fidia Farmaceutici | Una miscela gangliosidica come agente terapeutico capare di eliminare il dolore nele neuropatie periferiche |
| IT1199116B (it) * | 1984-07-03 | 1988-12-30 | Fidia Farmaceutici | Derivati di gangliosidi |
| AU582758B2 (en) * | 1984-06-28 | 1989-04-13 | Mect Corporation | Sialic acid derivatives, galactose derivatives and method for producing the same |
| JPS6168418A (ja) * | 1984-09-11 | 1986-04-08 | Kanto Ishi Pharma Co Ltd | 去痰薬 |
| US4769362A (en) * | 1985-10-01 | 1988-09-06 | Trustees Of Boston University | Increased vascular perfusion following administration of lipids |
| FR2598434B1 (fr) * | 1986-05-12 | 1988-09-16 | Pf Medicament | Nouveaux immunomodulateurs obtenus par hemisynthese a partir d'un polysaccharide bacterien isole d'une souche mutante non capsulee de klebsiella pneumoniae |
| EP0508493A1 (en) * | 1986-08-06 | 1992-10-14 | Mect Corporation | Ganglioside related compounds and method of producing the same |
| JPS6368526A (ja) * | 1986-09-11 | 1988-03-28 | Mect Corp | シアリルグリセライドからなる神経障害疾患治療剤 |
| NZ222192A (en) * | 1986-10-20 | 1991-03-26 | Kanto Ishi Pharma Co Ltd | Glycolipid containing n-glycolylneuraminic acid, and preparation thereof |
| FR2614306B1 (fr) * | 1987-04-22 | 1989-07-28 | Pf Medicament | Nouveau derive de d.25, procede de preparation, utilisation a titre d'agent immunostimulant et compositions pharmaceutiques le contenant. |
| JP2517293B2 (ja) * | 1987-06-25 | 1996-07-24 | メクト株式会社 | 細胞、組織修復剤 |
| IT1212041B (it) * | 1987-11-02 | 1989-11-08 | Fidia Farmaceutici | Gangliosidi esteri interni come agenti terapeutici capaci di eliminare il dolore nelle neuropatie periferiche |
| US5169636A (en) * | 1988-03-17 | 1992-12-08 | Nippon Fine Chemical Co., Ltd. | Liposomes |
| IT1224513B (it) * | 1988-07-19 | 1990-10-04 | Fidia Farmaceutici | Uso terapeutico del derivato estere isopropilico del monosialogangliosi de in patologie ad interessamento nervoso con componente infiammatoria |
| DE3840044A1 (de) * | 1988-11-27 | 1990-06-07 | Behringwerke Ag | Glykosphingolipide mit kopplungsfaehiger gruppe im sphingoidanteil, ihre herstellung und verwendung |
| US6407072B1 (en) * | 1988-12-02 | 2002-06-18 | Fidia S.P.A. | Lysoganglioside derivatives |
| IT1232175B (it) * | 1989-07-27 | 1992-01-25 | Fidia Farmaceutici | Analoghi semisintetici di gangliosidi |
| IT1232176B (it) * | 1989-07-27 | 1992-01-25 | Fidia Farmaceutici | Derivati di-lisogangliosidi |
| IN172427B (fi) * | 1989-11-14 | 1993-07-24 | Fidia Spa | |
| IT1238346B (it) * | 1989-11-14 | 1993-07-13 | Gangliosidi modificati e loro derivati funzionali. | |
| DK238190D0 (da) * | 1990-10-03 | 1990-10-03 | Lundbeck & Co As H | Depotderivater |
| IT1251540B (it) * | 1991-05-31 | 1995-05-17 | Fidia Spa | Uso di un derivato gangliosidico. |
| WO1993002686A1 (en) * | 1991-07-31 | 1993-02-18 | The Regents Of The University Of California | Gangliosides with immunosuppressive ceramide moieties |
| IT1253832B (it) * | 1991-08-01 | 1995-08-29 | Fidia Spa | Derivati di gangliosidi |
| US5637569A (en) * | 1991-11-11 | 1997-06-10 | Symbicom Aktiebolag | Ganglioside analogs |
| IT1254706B (it) | 1991-12-23 | 1995-10-09 | Fidia Spa | Uso terapeutico del ganglioside gm1 nel trattamento del danno al midollo spinale |
| DE4204907A1 (de) * | 1992-02-14 | 1993-08-19 | Reutter Werner | Neuartige glykokonjugate mit n-substituierten neuraminsaeuren als mittel zur stimulierung des immunsystems |
| IT1254280B (it) | 1992-03-13 | 1995-09-14 | Fidia Spa | Composizioni farmaceutiche comprendenti monosialoganglioside gm1 o un suo derivato atte al trattamento della malattia di parkinson |
| AU7831594A (en) * | 1993-09-09 | 1995-03-27 | Duke University | A method of promoting cellular function |
| US5567684A (en) * | 1994-09-14 | 1996-10-22 | The Regents Of The University Of California | Synthetic ganglioside derivatives |
| IT1302530B1 (it) * | 1998-12-16 | 2000-09-05 | Fidia Spa In Amministrazione S | Processo di preparazione del ganglioside gm3 e dei suoi lisoderivati apartire dal ganglioside gm1. |
| AU2002330968B2 (en) | 2001-08-17 | 2007-03-22 | Neose Technologies, Inc. | Chemo-enzymatic synthesis of sialylated oligosaccharides |
| AU2002326805B2 (en) | 2001-08-29 | 2009-01-22 | Seneb Biosciences, Inc. | Novel synthetic ganglioside derivatives and compositions thereof |
| NZ542148A (en) | 2003-03-06 | 2008-05-30 | Neose Technologies Inc | Methods and compositions for the enzymatic synthesis of gangliosides |
| JP2007003173A (ja) * | 2005-05-26 | 2007-01-11 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 冷蔵庫 |
| US7943750B2 (en) | 2007-06-18 | 2011-05-17 | Laboratoire Medidom S.A. | Process for obtaining pure monosialoganglioside GM1 for medical use |
| EP2173166A4 (en) * | 2007-07-03 | 2010-08-11 | Childrens Hosp & Res Ct Oak | POLYSIALIC ACID DE-N-ACETYLASE HEMMER AND METHOD OF USE THEREOF |
| CA2690440A1 (en) * | 2007-07-03 | 2009-01-08 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Oligosialic acid derivatives, methods of manufacture, and immunological uses |
| AU2008272785B2 (en) | 2007-07-03 | 2014-06-12 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Polysialic acid derivatives, methods of production, and uses in enhancing cancer antigen production and targeting |
| US20120035120A1 (en) | 2009-03-25 | 2012-02-09 | Seneb Biosciences, Inc. | Glycolipids as treatment for disease |
| CN102575275A (zh) | 2009-09-01 | 2012-07-11 | Lz治疗公司 | 用于提取和纯化神经节苷脂的方法 |
| WO2013109929A1 (en) | 2012-01-20 | 2013-07-25 | Garnet Biotherapeutics, Inc. | Methods of ganglioside production |
| AU2014233521A1 (en) * | 2013-03-15 | 2015-08-20 | Garnet Biotherapeutics, Inc. | Ganglioside compositions |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4098995A (en) * | 1976-07-12 | 1978-07-04 | American Cyanamid Company | Polygalactosido-sucrose poly(h-)sulfate salts |
| FR2478104B1 (fr) * | 1980-03-17 | 1986-08-08 | Merieux Inst | Nouveaux derives de gangliosides, leur preparation et leur application |
| US4435389A (en) * | 1980-07-07 | 1984-03-06 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Composition for promoting growth of bifidobacteria |
| EP0045338B1 (fr) * | 1980-08-05 | 1986-11-05 | LABORATOIRES DEBAT Société anonyme dite: | Utilisation des glycosylglucanes en gastroentérologie dans le traitement des colopathies |
| US4476119A (en) * | 1981-08-04 | 1984-10-09 | Fidia S.P.A. | Method for preparing ganglioside derivatives and use thereof in pharmaceutical compositions |
| US4469795A (en) * | 1981-08-26 | 1984-09-04 | Edward Ginns | Radioassay for monosialoglycosphingolipid (GM1) ganglioside concentration |
| NL8104293A (nl) * | 1981-09-17 | 1983-04-18 | Ihc Holland Nv | Werkwijze voor het opzuigen van grond of slib met een sleepzuiger alsmede sleepzuiger voor het toepassen van de werkwijze. |
| CH658458A5 (fr) * | 1981-12-17 | 1986-11-14 | Lucchini Lab Sa | Procede pour l'obtention du lacto-n-norhexaosyl ceramide. |
| EP0146810A3 (de) * | 1983-12-05 | 1987-05-13 | Solco Basel AG | Verfahren zur Herstellung von Sphingosinderivaten |
| IT1199116B (it) * | 1984-07-03 | 1988-12-30 | Fidia Farmaceutici | Derivati di gangliosidi |
-
1984
- 1984-07-03 IT IT48492/84A patent/IT1199116B/it active
-
1985
- 1985-06-25 MX MX85205775A patent/MX163384B/es unknown
- 1985-06-25 NZ NZ212540A patent/NZ212540A/xx unknown
- 1985-06-25 FR FR858509634A patent/FR2567131B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1985-06-26 YU YU107285A patent/YU46603B/sh unknown
- 1985-06-26 IL IL75640A patent/IL75640A0/xx unknown
- 1985-06-26 HU HU852498D patent/HU199860B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-06-26 EP EP85401291A patent/EP0167449B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-26 IE IE160885A patent/IE59376B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-06-26 AU AU44208/85A patent/AU578706B2/en not_active Ceased
- 1985-06-26 ES ES544574A patent/ES8706711A1/es not_active Expired
- 1985-06-26 US US06/749,092 patent/US4713374A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-26 FI FI852515A patent/FI84074C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-06-26 LU LU85972A patent/LU85972A1/fr unknown
- 1985-06-26 NO NO852565A patent/NO164545C/no unknown
- 1985-06-26 DE DE8585401291T patent/DE3580710D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-26 DK DK289885A patent/DK289885A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-06-26 IN IN477/CAL/85A patent/IN164786B/en unknown
- 1985-06-26 ZA ZA854807A patent/ZA854807B/xx unknown
- 1985-06-26 PH PH32459A patent/PH27021A/en unknown
- 1985-06-26 CA CA000485372A patent/CA1263954A/en not_active Expired
- 1985-06-26 GR GR851573A patent/GR851573B/el unknown
- 1985-06-26 AT AT85401291T patent/ATE58739T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-06-26 HU HU852498A patent/HUT38652A/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-06-27 AR AR85300832A patent/AR242219A1/es active
- 1985-06-27 PL PL1985261619A patent/PL151829B1/pl unknown
- 1985-06-27 KR KR1019850004587A patent/KR880001232B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-06-27 PT PT80724A patent/PT80724B/pt not_active IP Right Cessation
- 1985-06-27 JP JP60142362A patent/JPS6163691A/ja active Pending
- 1985-06-27 PL PL1985254207A patent/PL151289B1/pl unknown
- 1985-06-27 CN CN85104937A patent/CN1021333C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1985-06-27 BE BE1/11279A patent/BE902750A/fr not_active IP Right Cessation
- 1985-06-27 CN CN91102374A patent/CN1021574C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1985-07-02 CH CH2837/85A patent/CH670645A5/fr not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-02-28 ES ES552826A patent/ES8802055A1/es not_active Expired
-
1987
- 1987-09-11 US US07/095,223 patent/US4849413A/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-12-16 ES ES557807A patent/ES8801925A1/es not_active Expired
-
1992
- 1992-06-12 DK DK078592A patent/DK78592A/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI84074C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara gangliosidderivat. | |
| EP0433112B1 (en) | Modified gangliosides and the functional derivatives thereof | |
| MIMAKI et al. | Steroidal saponins from the underground parts of Hosta longipes and their inhibitory activity on tumor promoter-induced phospholipid metabolism | |
| Kaneko et al. | Structure of a new neuritogenic‐active ganglioside from the sea cucumber Stichopus japonicus | |
| EP0373039B1 (en) | New lysoganglioside derivatives | |
| Higuchi et al. | Biologically active glycosides from Asteroidea, XXXI. Glycosphingolipids from the starfish Asterias amurensis versicolor Sladen, 2. Structure and biological activity of ganglioside molecular species | |
| Kaneko et al. | Structure of neuritogenic active ganglioside from the sea cucumber Stichopus japonicus | |
| EP0410881A2 (en) | Semisynthetic ganglioside analogues | |
| EP0410883B1 (en) | Di-lysogangliosides derivatives | |
| Iwasaki et al. | Identification and determination of absolute and anomeric configurations of the 6‐deoxyaltrose residue found in polysialoglycoprotein of Salvelinus leucomaenis pluvius eggs: The first demonstration of the presence of a 6‐deoxyhexose other than fucose in glycoprotein | |
| FI83423B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av gangliosidderivat. | |
| US6407072B1 (en) | Lysoganglioside derivatives | |
| Yamada et al. | Isolation and structure of biologically active gangliosides from the sea cucumber Holothuria pervicax | |
| Tsuchihashi et al. | Synthesis of a glioma-related ganglioside, O-Ac GM3 having 3-O-Ac ceramide and its substrate property toward hydrolases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: FIDIA S.P.A. |