FI83423C - Foerfarande foer framstaellning av gangliosidderivat. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av gangliosidderivat. Download PDFInfo
- Publication number
- FI83423C FI83423C FI892587A FI892587A FI83423C FI 83423 C FI83423 C FI 83423C FI 892587 A FI892587 A FI 892587A FI 892587 A FI892587 A FI 892587A FI 83423 C FI83423 C FI 83423C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mixture
- ganglioside
- ester
- alcohol
- methyl
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 269
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims description 192
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 114
- -1 Ganglioside Ester Chemical class 0.000 claims description 89
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 64
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 claims description 19
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 16
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000002723 alicyclic group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims 2
- 125000000094 2-phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims 1
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000002948 undecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 294
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 174
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 63
- 239000000047 product Substances 0.000 description 62
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 58
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 57
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 42
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 38
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 38
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 38
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 37
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 37
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 33
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 33
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 30
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 29
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 29
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 27
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 27
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 26
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 19
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 18
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 14
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 14
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 14
- QPJBWNIQKHGLAU-IQZHVAEDSA-N ganglioside GM1 Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 QPJBWNIQKHGLAU-IQZHVAEDSA-N 0.000 description 14
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 14
- WGTYBPLFGIVFAS-UHFFFAOYSA-M tetramethylammonium hydroxide Chemical compound [OH-].C[N+](C)(C)C WGTYBPLFGIVFAS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 13
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 13
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 11
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 11
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 11
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 11
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 11
- BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 1-heptanol Chemical compound CCCCCCCO BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 10
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 8
- BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N Phenethylamine Chemical compound NCCC1=CC=CC=C1 BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 8
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 7
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 7
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 7
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 7
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- ARXJGSRGQADJSQ-UHFFFAOYSA-N 1-methoxypropan-2-ol Chemical compound COCC(C)O ARXJGSRGQADJSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PFNHSEQQEPMLNI-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1-pentanol Chemical compound CCCC(C)CO PFNHSEQQEPMLNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 6
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 6
- 125000001549 ceramide group Chemical group 0.000 description 6
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 6
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 6
- MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N methylazanide Chemical compound [NH-]C MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YNOGYQAEJGADFJ-UHFFFAOYSA-N oxolan-2-ylmethanamine Chemical compound NCC1CCCO1 YNOGYQAEJGADFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QJQZRLXDLORINA-UHFFFAOYSA-N 2-cyclohexylethanol Chemical compound OCCC1CCCCC1 QJQZRLXDLORINA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 238000000039 preparative column chromatography Methods 0.000 description 5
- QDRKDTQENPPHOJ-UHFFFAOYSA-N sodium ethoxide Chemical compound [Na+].CC[O-] QDRKDTQENPPHOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000004919 3-methyl-2-pentyl group Chemical group CC(C(C)*)CC 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001089 [(2R)-oxolan-2-yl]methanol Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 4
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 4
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 4
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- MFRIHAYPQRLWNB-UHFFFAOYSA-N sodium tert-butoxide Chemical compound [Na+].CC(C)(C)[O-] MFRIHAYPQRLWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000003410 sphingosines Chemical class 0.000 description 4
- BSYVTEYKTMYBMK-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofurfuryl alcohol Chemical compound OCC1CCCO1 BSYVTEYKTMYBMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N tetramethylammonium Chemical compound C[N+](C)(C)C QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 description 3
- RJBDSRWGVYNDHL-XNJNKMBASA-N (2S,4R,5S,6S)-2-[(2S,3R,4R,5S,6R)-5-[(2S,3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-2-[(2R,3S,4R,5R,6R)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(E,2R,3S)-3-hydroxy-2-(octadecanoylamino)octadec-4-enoxy]oxan-3-yl]oxy-3-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-5-amino-6-[(1S,2R)-2-[(2S,4R,5S,6S)-5-amino-2-carboxy-4-hydroxy-6-[(1R,2R)-1,2,3-trihydroxypropyl]oxan-2-yl]oxy-1,3-dihydroxypropyl]-4-hydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[C@@H]2O[C@H](CO)[C@H](O[C@@H]3O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]3NC(C)=O)[C@H](O[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H](N)[C@H](O3)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H](N)[C@H](O3)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)C(O)=O)[C@H]2O)[C@H](O)[C@H]1O)[C@@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC RJBDSRWGVYNDHL-XNJNKMBASA-N 0.000 description 3
- OUWLXWZZZKYIIF-UHFFFAOYSA-N 2-methylpiperidine-1-carboxamide Chemical compound CC1CCCCN1C(N)=O OUWLXWZZZKYIIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZXNBBWHRUSXUFZ-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-2-pentanol Chemical compound CCC(C)C(C)O ZXNBBWHRUSXUFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 3
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 3
- IIEWJVIFRVWJOD-UHFFFAOYSA-N ethyl cyclohexane Natural products CCC1CCCCC1 IIEWJVIFRVWJOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 3
- 125000002421 ganglioside group Chemical group 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 3
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 3
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 3
- JSPCTNUQYWIIOT-UHFFFAOYSA-N piperidine-1-carboxamide Chemical compound NC(=O)N1CCCCC1 JSPCTNUQYWIIOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 1-Methylpiperazine Chemical compound CN1CCNCC1 PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004200 2-methoxyethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTRCSKDHALSCJJ-UHFFFAOYSA-N 3-methylpentan-2-ol;sodium Chemical compound [Na].CCC(C)C(C)O DTRCSKDHALSCJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- XXROGKLTLUQVRX-UHFFFAOYSA-N allyl alcohol Chemical compound OCC=C XXROGKLTLUQVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 2
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GCFAUZGWPDYAJN-UHFFFAOYSA-N cyclohexyl 3-phenylprop-2-enoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C=CC(=O)OC1CCCCC1 GCFAUZGWPDYAJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000030363 nerve development Effects 0.000 description 2
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- LMYJGUNNJIDROI-UHFFFAOYSA-N oxan-4-ol Chemical compound OC1CCOCC1 LMYJGUNNJIDROI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 229940067107 phenylethyl alcohol Drugs 0.000 description 2
- 125000000286 phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 2
- SBMSLRMNBSMKQC-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-1-amine Chemical compound NN1CCCC1 SBMSLRMNBSMKQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- LMHHRCOWPQNFTF-UHFFFAOYSA-N s-propan-2-yl azepane-1-carbothioate Chemical compound CC(C)SC(=O)N1CCCCCC1 LMHHRCOWPQNFTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 2
- WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N (-)-D-erythro-Sphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCC=CC(O)C(N)CO WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMSJFSOOQERIO-UHFFFAOYSA-N 1-bromodecane Chemical compound CCCCCCCCCCBr MYMSJFSOOQERIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XFGANBYCJWQYBI-UHFFFAOYSA-N 11-bromoundecan-1-ol Chemical compound OCCCCCCCCCCCBr XFGANBYCJWQYBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNWUEBIEOFQMSS-UHFFFAOYSA-N 2-Methylpiperidine Chemical compound CC1CCCCN1 NNWUEBIEOFQMSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNODDICFTDYODH-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxytetrahydrofuran Chemical compound OC1CCCO1 JNODDICFTDYODH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHHFUGFMQDIJKM-UHFFFAOYSA-N 2-methylpiperidin-1-amine Chemical compound CC1CCCCN1N UHHFUGFMQDIJKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQPGDDAKTTWVDD-UHFFFAOYSA-N 4-bromobutanenitrile Chemical compound BrCCCC#N CQPGDDAKTTWVDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMOXPMSKGOLSIF-UHFFFAOYSA-N 8-aminooctan-2-one Chemical compound CC(=O)CCCCCCN FMOXPMSKGOLSIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910014033 C-OH Inorganic materials 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910014570 C—OH Inorganic materials 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010454 Experimental Liver Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N N-acetyl-D-hexosamine Chemical class CC(=O)NC1C(O)O[C@H](CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N 0.000 description 1
- SUHQNCLNRUAGOO-UHFFFAOYSA-N N-glycoloyl-neuraminic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(NC(=O)CO)C(O)CC(=O)C(O)=O SUHQNCLNRUAGOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDJKUWYYUZCUJX-PGIATKPXSA-N N-glycoloylneuraminic acid Chemical class OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1OC(O)(C(O)=O)C[C@H](O)[C@H]1NC(=O)CO FDJKUWYYUZCUJX-PGIATKPXSA-N 0.000 description 1
- FDJKUWYYUZCUJX-UHFFFAOYSA-N N-glycolyl-beta-neuraminic acid Natural products OCC(O)C(O)C1OC(O)(C(O)=O)CC(O)C1NC(=O)CO FDJKUWYYUZCUJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDJKUWYYUZCUJX-KVNVFURPSA-N N-glycolylneuraminic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@](O)(C(O)=O)C[C@H](O)[C@H]1NC(=O)CO FDJKUWYYUZCUJX-KVNVFURPSA-N 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-TURZORIXSA-N N-hexadecanoylsphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-TURZORIXSA-N 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOSMNYMQXIVWKY-UHFFFAOYSA-N Propyl levulinate Chemical compound CCCOC(=O)CCC(C)=O QOSMNYMQXIVWKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- BLAKAEFIFWAFGH-UHFFFAOYSA-N acetyl acetate;pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1.CC(=O)OC(C)=O BLAKAEFIFWAFGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical group 0.000 description 1
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- AQNQQHJNRPDOQV-UHFFFAOYSA-N bromocyclohexane Chemical compound BrC1CCCCC1 AQNQQHJNRPDOQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 125000005265 dialkylamine group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001664 diethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N ethyl bromoacetate Chemical compound CCOC(=O)CBr PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 1
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003988 headspace gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001261 hydroxy acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229940035429 isobutyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 125000000686 lactone group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N n-propyl alcohol Natural products CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000007472 neurodevelopment Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- CELWCAITJAEQNL-UHFFFAOYSA-N oxan-2-ol Chemical compound OC1CCCCO1 CELWCAITJAEQNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004940 physical analysis method Methods 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- BITYAPCSNKJESK-UHFFFAOYSA-N potassiosodium Chemical compound [Na].[K] BITYAPCSNKJESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- LCDCPQHFCOBUEF-UHFFFAOYSA-N pyrrolidine-1-carboxamide Chemical class NC(=O)N1CCCC1 LCDCPQHFCOBUEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N sec-butyl acetate Chemical compound CCC(C)OC(C)=O DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- AOEKHRLNPVEHKG-UHFFFAOYSA-M sodium;oxolane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1CCCO1 AOEKHRLNPVEHKG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000005172 vertebrate brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
83423
Menetelmä gangliosidijohdannaisten valmistamiseksi
Esillä olevan keksinnön kohteena on patenttivaatimuksen 1 johdannon mukainen uusi menetelmä funktionaalisten gangliosidi johdannaisten, etenkin niiden estereiden, valmistamiseksi .
Gangliosidit ovat luonnontuotteita, joita sisältyy erilaisiin eläinten kudoksiin ja elimiin, ennen kaikkea keskushermostoon ja ääreishermostoon, mutta myös lisämunuaisten ytimeen, erytrosyytteihin, pernaan ja muuhun, mistä ne voidaan uuttaa puhdistetussa muodossa. On ollut mahdollista selvittää useimpien näin saatujen gangliosidien perusrakenne. Ne ovat glykosfingolipidejä, s.o. yhdisteitä, jotka muodostuvat oligosakkaridien ja sfingosinien ja sialihappo-jen määrätyn määrän yhteenliittymistä, ja joissa yksiköt liittyvät toisiinsa glukosidi- tai ketosidisidosten välityksellä. Tähän mennessä kirjallisuudessa esitetyt, puhtaassa muodossa saadut gangliosidit, eivät edusta yhtenäisiä kemiallisia yhdisteitä, lukuunottamatta mahdollisesti niiden sakkaridiosaa (oligosakkaridi), koska keramidi- ja sialikomponentit ovat melko vaihtelevia määrätyissä rajoissa. Vaikka viitataankin "puhtaisiin" gangliosideihin, tämä ilmaisu on siten tulkittava laajalti käsittämään gangliosi-dilajit, joissa vähintään yksi osa, esimerkiksi sakkaridiosa on yhtenäinen ja luonteenomainen kemialliselta kannalta. Otettaessa tämä huomioon, ennen kuin selitetään yksityiskohtaisemmin esillä olevan keksinnön taustaa, on hyödyllistä huomioida seuraava yleinen kaava, joka sisältää kaikkien niiden gangliosidien rakenteet, jotka on tähän asti saatu puhdistetussa muodossa, ja joka kaava esittää ne funktionaaliset ryhmät, jotka on funktionaalisesti modifioitu keksinnön mukaisesti(kaava I).
2 83423 HOOCmmm»/ siali— N miiiimiiOH /limuniOH happo , | | ........OH keramidi HOOC" Il Ö δ OH OH δ (X)
ÖH OLIGOSAKKARIDI OH
Tässä kaavassa oiigosakkariditähde, jonka muodostaa korkeintaan 5 monosakkaridia, on liitetty glukosidisidoksella kera-miditähteeseen ja yhteen tai useampaan sialihappotähteeseen, kumpikin yhtä monella suoralla glukosidisidoksella ja yhden tai useamman sellaisen sidoksen avulla, että jäljelle jäävät sialihappotähteet liittyvät yhteen ketosidisidoksilla. Kaava osoittaa sakkaridiosan, sialihappojen ja keramidin hydrok-syyliryhmät samoin kuin yllä mainitut glukosidisidokset sia-lihappojen ja keramidin kanssa ja sialihappojen karboksyyli-ryhmät. Sialihapoilla, jotka muodostavat osan kaavan I mukaisista gangliosideistä, on yleinen kaava II
H
λ- ° CH3OCNH /H—C—OH \ 1
/ %\ \ ,COOH
/ H—C-OH
x I jX di) JX ’CHjOH / Xh *1 3
OH
jossa yksi tai useampi primaarinen ja sekundaarinen hydrok-syyliryhmä voi olla myös asyloitu ja jossa asyyliryhmät johtuvat etikka- tai glykolihaposta. Gangliosideissä läsnä olevien sialihappojen määrä on tavallisesti 1-5.
Il 3 83423
Sialitähteet liittyvät oligosakkaridiin ketosidisidoksella, joka on muodostettu 2-asemassa olevalla hydroksyylillä oli-gosakkaridihydroksyylin kanssa. Kun useita sialihappoja liitetään yhteen, niiden molekyylit yhdistyvät ketosidisidok-silla, jotka on muodostettu kahden sialihappomolekyylin 2-ja 8-aseman hydroksyyleistä. Gangliosidien, mukaanlukien yllä esitettyjen puhdistettujen gangliosidien sialihapot ovat erilaisten kemiallisesti yhtenäisten happojen, kuten N-asetyylineuramiini- ja N-glykolyylineuramiinihappojen, joissa ensin mainittu on vallitseva ja yhden tai useamman niiden O-asyylijohdannaisen, kuten 8-0-asyylijohdannaisten seoksia.
Gangliosidejä on löydettävissä luonnossa metallisuoloina, kuten natriumsuoloina, ja tästä syystä sialihappojen karbok-syyli-funktio(t) on suolan muodossa. Gangliosidien vapaat muodot voidaan helposti saada käsittelemällä suoloja, kuten natriumsuoloja, happotyyppisellä ioninvaihtimella, käyttämällä esimerkiksi hartsia, kuten Dowex AG 50X8, H+-muotoa.
Kaavan I mukaisissa gangliosideissä oleva keramiditähde merkitsee yleensä erityistä N-asyylisfingosiniä, jonka kaava on ch2—o— ch2—o— CH—NH—asyyli CH—NH—asyyli
I I
CH—OH CH—OH
I I
CH CH2 % \ CH CH2
I I
(CH2)n—CH3 (CH2)n—CH} jossa n = 10 - 16 ja asyyli johtuu tyydyttynestä tai tyydyttymättömästä rasvahaposta, jossa on 16 - 22 hiiliatomia tai vastaavasta hydroksihaposta.
Oligosakkaridi koostuu korkeintaan 5 monosakkaridista tai niiden asyyliamiiniryhmä sisältävistä johdannaisista, etenkin heksooseista ja niiden yllä mainitun tyyppisistä johdan- 4 83423 naisista. Vähintään yksi glukoosi- tai galaktoosimolekyyli on kuitenkin aina läsnä oligosakkaridissa. Yleisin yllä mainittujen sokerien asyyliamiinijohdannaisena läsnä oleva tähde on N-asetyyligalaktoosiamiini tai N-asetyyliglukosamiini.
Kaavaan I sisältyvien gangliosidien rakenteen ja etenkin sakkaridiosien, sialihappojen ja keramidin välisten sidosten luonteen parempaa havainnollistamista varten on alla esitetty puhtaan Gi-gangliosidin kaava, joka sisältää vain yhden sialihapon (joka on esitetty N-asetyyliamiini- tai N-glykolyylineuramiinihapolla).
H
T v Jh-\
CM-CO-W/ CX> \COOM Y chqh N
h A
HO H /
CHpH OH J CHPH
\p-o-Jj/” \\ y* °\T°—ker“nidi h\oh h /ih h\ m /h h\ J h /h >sj\ oh h /h
m OH H M-CO-CH, H oh H OH
M V. M OH
On hyvin tunnettua, että gangliosidit ovat funktionaalisesti tärkeitä keskushermostossa ja äskettäin on osoitettu, että gangliosidit ovat käyttökelpoisia ääreishermostojärjestelmän patologioiden terapiassa. Gangliosidien terapeuttinen toiminta näyttää ennen kaikkea koostuvan hermosolun kehitysil-miön stimuloinnista ja niiden kalvoentsyymien aktivoinnista, jotka toimivat hermoärsykkeiden siirrossa, kuten entsyyminä +K+ )-ATPase . Gangliosidien stimuloima hermokehitys edistää vaurioituneen hermokudoksen toiminnallista toipumista.
Lisätutkimuksia on suoritettu sellaisten yhdisteiden löytämiseksi, jotka voisivat osoittautua tehokkaammiksi kuin gangliosidit hermojärjestelmän patologioiden terapiassa. Nämä tutkimukset ovat johtaneet siihen löytöön, että gangliosi-
II
5 83423 dien sisäiset esterit, joissa yksi tai useampi sakkaridi-osan hydroksyyli on esteröity yhdellä tai useammalla siali-happojen karboksyyliryhmillä (intramolekulaarinen reaktio), jolloin muodostuu yhtä monta laktonirengasta, ovat aktiivisempia kuin itse gangliosidit hermokehityksen edistämisessä ja kalvoentsyymien aktivoinnissa, jotka toimivat hermoärsyk-keiden siirrossa, kuten entsyymi Na+K+-ATPase (ks. US-patentti 4,476,119).
Nyt on löytetty gangliosidijohdannaisten toinen ryhmä, joKa merkitsee etuja verrattuna itse gangliosideihin sikäli, että niillä on pidentynyt aktiivisuusaika ("retard"-vaikutus”). Nämä yhdisteet ovat johdannaisia, joissa sialihappojen karboksyyliryhmä on funktionaalisesti modifioitu esteröimäl-lä tai muuntamalla ne amideiksi tai näiden estereiden ja amidien johdannaisiksi, joissa sakkaridiosan, sialihappojen ja keramidin hydroksyyliryhmät on myös esteröity orgaanisilla hapoilla, tai pikemmin asylaattijohdannaiset (joita yksinkertaisesti kutsutaan "asylaateiksi" tämän jälkeen ja etenkin "asetylaateiksi, pripionylaateiksi jne."). Näitä johdan-naisa on tarkemmin kuvattu kantahakemuksessa (FI-patentti-hakemus 852515) ja niihin kuuluvat myös gangliosidiyhdis-teet, joissa vain hydroksyyliryhmät on esteröity orgaanisilla hapoilla, s.o. ne sisältävät vapaita karboksyyliryhmiä.
Gangliosidien sialihapon karboksyylin kaksi metyyliesteriä on esitetty artikkelissa "Notes on improved procedures for the chemical modification and degradation of glycosphyngolipids" julkaisussa Journal of Lipid Research 21, 642-645 (1980), MacDonald et al. Nämä yhdisteet ovat ganglisiodien ja
Gm3 metyyliestereitä [(tässä käytetyt lyhenteet gangliosidien identifioimiseksi ovat niitä, joita on ehdottanut Sven-nerholm julkaisussa J. Neurochem. 1(), 613 (1963)]. Kuitenkaan MacDonald et ai. eivät mainitse mitään yhdisteiden biologisesta aktiivisuudesta. Gangliosidin Gm3 metyyliesteriä käytetään valmistettaessa sen yhtä perasylaattijohdannaista käytettäväksi reaktioiden erityisessä lohkomisessa tai yhdistelyssä. [Methods of Enzymology, 50, 137-140 (1978)].
6 83423
Yllä mainitussa artikkelissa julkaisussa Journal of Lipid Research MacDonald et ai. esittävät myös gangliosidien G^i ja Gj43 metyyliestereiden asetylointia, mutta eristämättä asy-loituja yhdisteitä.
Asetylointia, joka suoritetaan lipidien etikkahappoanhydridi-pyridiinillä, jotka on uutettu Buffalo-rottien pernasta, maksasta ja munuaisista, Morris-hepatoomista ja fibroblasti-soluista, ovat esittäneet Terunobo Saito ja Sen-Itiroh Hako-mari julkaisussa Journal of Lipid Research, 12, 257-259 (1971). Kirjoittajat ovat eristäneet kromatografoimalla näihin lipideihin sisältyvien gangliosidien asetyloidun seoksen asyloidusta tuotteesta, yhdessä muiden glykolipidien kanssa, mutta identifioimatta mitään erityistä gangliosidiä. Amideista gangliosidin Gm3 substituoimaton amidi on esitetty [Ad.Exp. Med. Biol. 19_, 95 (1972)], mutta myöskään tässä tapauksessa ei ole mainittu mitään biologisista ominaisuuksista .
Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on saada aikaan uusi menetelmä yllä ja kantahakemuksessa 852515 esitettyjen uusien funktionaalisten gangliosidijohdannaisten, s.o. kaavassa I määriteltyjen gangliosidien tai niiden seosten karbok-syyliryhmien estereiden valmistamiseksi.
A. Gangliosidilähtöyhdisteet
Esillä olevan keksinnön avulla saadaan aikaan hyödyllisiä gangliosidijohdannaisia. Nämä uudet johdannaiset on johdettu modifioimalla funktionaalisesti karboksyyliryhmät, jotka ovat läsnä perusgangliosidirakenteessa. Tähän saakka saakka puhtaassa muodossa saadut gangliosidit voidaan esittää seu-raavalla kaavalla, joka korostaa myös esillä olevan keksinnön mukaisesti modifioituja funktionaalisia ryhmiä.
Il 7 83423 HOOCmmim/ siali- \uumuuiOH /muimiOH happo , 1 I ............ ( keramidi
HOOC’iniiiiii Ö Ö OH OH Ö (D
v_ s s = -OH OLIGOSAKKARIDI OH
Nämä gangliosidit, jotka muodostavat keksinnön mukaisten funktionaalisten johdannaisten lähtöaineet, ovat kaikki niitä, jotka voidaan uuttaa erilaisista eläinten elimistä ja kudoksista, etenkin keskus- ja ääreishermostojärjestelmän kudoksista, esimerkiksi aivoista, selkäydinnesteestä, lihaksista, plasmasta ja veriseerumista, munuaisista, lisämunuaisista, maksasta, pernasta, sulista ja erytrosyyteista tai leukosyyteistä. Lähtögangliosidit voivat myös olla kirjallisuudessa esitettyjä puhdistettuja, kuten sellaisia, jotka on uutettu selkärankaisten, etenkin nisäkkäiden, kuten ihmisen, nautakarjan, vasikan, rotan, hiiren kudoksista ja elimistä tai mikro-organismeista.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti nämä gangliosidiyhdisteet modifioidaan käsittelemällä gangliosidin sisäistä esteriä alkoholilla vastaavan esterin muodostamiseksi gangliosidin sisäisen esterin tai sen seoksen sialihappotähteiden karbok-syyliryhmissä, jolloin käsittely suoritetaan alkoholia vastaavan metallialkoholaatin läsnäollessa.
Valmistettavat esterit ovat etenkin monoestereitä monosialo-gangliosidien kohdalla ja polyestereitä polysialogangliosi-dien kohdalla, jolloin niissä on yhtä monta esteriryhmää, kuin karboksyyliryhmiä on läsnä molekyylissä, ja siitä syystä yhtä monta sialihapporyhmää kuin on läsnä.
Keksinnön mukaan gangliosidijohdannaiset valmistetaan modifioimalla "puhdistetut" yksilöllisesti luonnehditut ganglio- 8 83423 sidit tai modifioimalla gangliosidien seos, kuten monosialo-gangliosidien ja polysialogangliosidien seos. Ne seokset, joita käytetään keksinnön mukaiseen esteröintiin, esimerkiksi alla esimerkissä 3 esitetyn seoksen valmistamiseksi, sisältävät sekä monosialogangliosidejä että polysialoganglio-sidejä ja näissä seoksissa esteröidään kaikki karboksyyli-ryhmät, jolloin saadaan gangliosidijohdannaisia, jotka on kokonaan esteröity. Tässä selityksessä samoin kuin kanta-hakemuksessa 852515 käytetty käsite "esterit" tulisi tästä syystä tulkita siten, että se merkitsee täysin esteröityjä johdannaisia. Tämä koskee myös etenkin alla esitettyjen havainnollistavien esimerkkien johdannaisia, joita kutsutaan "estereiksi". Nämä esitykset tarkoittavat seoksia, jotka sisältävät polysialogangliosidejä, jotka on täysin esteröity kaikissa karboksyyliryhmissä.
Siten esillä oleva keksintö sisältää gangliosidien johdannaiset, jotka on joko johdettu yksinkertaisesta "puhtaasta" gan-gliosidistä tai gangliosidien seoksesta. Keksintö käsittää myös johdannaiset, jotka on saatu erilaisista gangliosidira-kenteista, etenkin koska gangliosidin rakenne voi vaihdella suhteessa sialihappotähteen, keramiditähteet tai oligosakkari-ditähteen määrän ja laadun suhteen.
Mitä tulee gangliosidien rakenteeseen perusgangliosidit voivat olla monosialo-, disialo-, trisialo-, tetrasialo- tai
II
9 83423 pentasialogangliosi.dejä, jolloin etusijalla olevat sialihapot ovat N-asetyylineuramiini- ja N-glykolineuramiinihappo. Sialihapot voivat olla myös asyloituja yhdessä niiden lateraali-ketjun hydroksyyleistä, kuten asemassa 8 olevassa hydroksyy-lissä, jos tämä asema ei ole jo varattu ketosidisidoksella, joka sitoo sen toiseen vierekkäiseen sialitähteeseen.
Keramidiosa voi vaihdella, yllä esitetyllä tavalla, ja myös mitä tulee keramidin osan muodostavien sfingosiinien hiili-atomiketjun pituuteen, joka voi olla 16 - 22 hiiliatomia. Lisäksi minkä tahansa asyylitähteen pituus voi myös vaihdella, etenkin samoissa rajoissa, eli se voi olla 16 - 22 hiiliatomia. Tästä poiketen keramiditähde voi vaihdella siten, että kaksoissfingosiinisidos voi puuttua tai olla läsnä ja tavallisesti tämä tähde on pääasiassa muodostunut tyydytty-mättömästä N-asyloidusta sfingosiinistä ja alhaisesta prosenttimäärästä vastaavaa tyydyttynyttä yhdistettä (joka voi kuitenkin olla noin 10 %). Asyyliryhmä voi olla myös johdettu alifaattisistä hydroksihapoista, joilla on yllä mainittu määrä hiiliatomeja eli 16 - 20. Eräs erittäin tärkeä gangliosidien ryhmä sisältää keramiditähteessä asyloituja sfingosiinejä, joiden ketjuissa on 18 tai 20 hiiliatomia ja vastaavia tyydyttyneitä yhdisteitä, kun taas niiden hyd-roksyyleillä substituoitumaton tyydyttynyt tai tyydyttymätön asyyliryhmä sisältää saman määrän hiiliatomeja eli 18 tai 20.
Kuten yllä on esitetty tämän keksinnön avulla valmistetaan toisaalta kaavan I mukaisten "puhtaiden" gangliosidien esterit, eli yllä esitetyn yhdenmukaisen koostumuksen omaavat johdannaiset, ja toisaalta erilaisista eläinten kudoksista uutemuodossa saatavien gangliosidiseosten esterit. Ensimmäisessä tapauksessa perusgangliosidit valmistetaan sopivimmin sellaisista, joissa oligosakkaridi koostuu korkeintaan 4 heksoositähteestä tai N-asetyyliheksoamiinista, koska ainakin yksi heksoositähde on läsnä ja joissa tämä sakkaridiosa on kemiallisesti yhtenäinen. Heksoosit valitaan edullisesti 10 83423 ryhmästä, joka koostuu glukoosista ja galaktoosista ja N-asetyyliheksosamiinit valitaan edullisesti ryhmästä, johon kuuluvat N-asetyyliglukosamiini ja N-asetyyligalaktosamiini (gangliosidiryhmä A). Tämän ryhmän gangliosidit ovat esimerkiksi sellaisia, jotka on uutettu selkärankaisten aivoista, kuten sellaisia, joita on esitetty artikkelissa "Gangliosides of the Nervous System" julkaisussa Glycolipid Methodology, Lloyd A. Witting Fd., American Oil Chemists' Society, Champaign, 111. 187-214 (1976) (ks. etenkin liitekuva 1), esimerkiksi gangliosidit Gm4» GM3, gM2' gM1"g1cNAc' gD2' GDla“Ga^NAc'GTlc' gQ' GT1 3a etenkin sellaisia, joissa oligosakkaridi sisältää vähintään yhden glukoosi- tai galaktoosi-tähteen ja yhden N-asetyyliglukosamiini- tai N-asetyyligalak-tosamiinitähteen, etenkin seuraavat (gangliosidiryhmä B) GM1
Gal (l-?3) GalNACd —>4 )Gal (1 —» 4 ) Glc (1 1) keramidi ®
NANA
GDla
Ga 1(1 —"f 3 ) Ga 1NAC (1 *—* 4 ) Ga 1(1 ? 4 ) G1 c (1 ——> 1) keramidi & Φ
NANA NANA
GDlb
Gal (1 3) Ga lNAC (1 4) Gal (1 4 )Glc (1 «> 1) keramidi ©
NANA
(?)
NANA
II
11 83423 GTlb
Gal (1 —^3)GalNAC(1 4 ) Gal (1 —> 4 )Glc (1 —♦ 1) keramidi Φ · (?)
NANA NANA
©
NANA
missä Glc merkitsee glukoosia, GalNAc merkitsee N-asetyyli-galaktosamiinia, Gal merkitsee galaktoosia ja NANA merkitsee N-asetyylineuramiinihappoa.
Jos gangliosidiseoksia käytetään lähtöaineena, seokset voivat koostua sellaisista, jotka saadaan suoraan uuttamalla gangliosidejä erilaisista eläinten kudoksista "kokonais gangliosidtuutteina tai niiden erilaisina jakeina. Tällaisia uutteita on esitetty kirjallisuudessa esimerkiksi yllä mainituissa kirjoituksissa tai myös kirjoituksessa "Extraction and i2 83423 analysis of materials containing lipidbound sialic acids" julkaisussa Glycolipid Methodology, Lloyd A. Wittig Ed., American Oil Chemists' Society, Champaign, 111., 159-186 (1976) ja saman kirjan kirjoituksessa "Gangliosides of the Nervous System" ss. 187-214. Eräät tärkeimmistä seoksista, joita käytetään esillä olevan keksinnön mukaisesti ovat gangliosidiuutteet, jotka saadaan hermoston kudoksista, etenkin aivoista ja jotka sisältävät gangliosidejä GM^, GDla, GDib ja GT^/ jotka mainittiin jo yllä. Tämän tyypin seoksia ovat esimerkiksi ne, jotka on esitetty esimerkissä 2.
B. Esterit
Uusien gangliosidijohdannaisten esteriryhmät ovat johdetut alifaattisista alkoholeista, etenkin sellaisista, joissa on korkeintaan 12 ja etenkin 6 hiiliatomia, tai aralifaattisis-ta alkoholeista, joissa on sopivimmin ainoastaan yksi bent-seenirengas, joka mahdollisesti on substituoitu 1-3 alemmalla alkyyliryhmällä (Ci_4), esimerkiksi metyyliryhmällä ja joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa, tai alisyklisistä tai alifaattis-alisyklisistä alkoholeista, joissa on vain yksi sykloalifaattinen rengas ja korkeintaan 14 hiiliatomia, tai heterosyklisistä alkoholeista, joissa on korkeintaan 12 ja etenkin 6 hiiliatomia ja joissa on vain yksi heterosyklinen rengas, joka sisältää typpi-, happi- tai rikkiheteroatomin.
Yllä mainitut alkoholit voivat olla substituoituja tai subs-tituoitumattomia, etenkin funktioilla, jotka on valittu ryhmästä, jonka muodostavat hydroksyyli-, amiini-, alkoksyyli-ryhmät, joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyyli-, karb-oksyyli- tai karbyylioksi- (kuten karbonyylimetoksi tai karbonyylietoksi)-ryhmissä, joissa on korkeintaan 4 atomia alkyyli-, alkyyliamiini- tai dialkyyliamiinitähteessä, jossa on korkeintaan 4 hiiliatomia alkyyleissä, ja jotka voivat olla tyydyttyneitä tai tyydyttymättömiä, etenkin niissä on ainoastaan yksi kaksoissidos. Alkoholit, jotka esteröivät esillä olevan keksinnön mukaisten gangliosidien karboksyyli- li i3 83423 funktiot, voivat olla monovalenttisia tai polyvalenttisia, etenkin bivalenttisia. Alifaattisista alkoholeista etusijalla ovat sellaiset alemmat alkoholit, joissa on korkeintaan 6 hiiliatomia, kuten metyylialkoholi, etyylialkoholi, propyy-li- ja isopropyylialkoholi, n-butyylialkoholi, isobutyyli-alkoholi, tert-butyylialkoholi ja kahdenarvoisista alkoholeista etyleeniglykoli ja propyleeniglykoli. Aralifaattisis-ta alkoholeista etusijalla ovat sellaiset, joissa on ainoastaan yksi bentseenitähde, kuten bentsyylialkoholi ja fen-etyylialkoholi, alisyklisistä alkoholeista etusijalla ovat sellaiset, joissa on vain yksi sykloalifaattinen rengas, kuten sykloheksyylialkoholi (sykloheksanoli) tai terpeeni-alkoholit, kuten metanoli, karvometanoli tai jokin terpineo-leista tai piperitoleista. Heterosyklisistä alkoholeista etusijalla ovat tetrahydrofuranoli ja tetrahydropyranoli. karboksyyligangliosidiryhmien esteröintiin voidaan käyttää myös substituoituja alifaattisia alkoholeja, esimerkiksi sellaisia, joissa on amiinifunktioita, kuten aminoalkohole-ja, kuten sellaisia, joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia, ja etenkin aminoalkoholeja, joissa on dialkyyli-(Ci_4)-amiinryhmä, kuten dietyyliaminoetanolia.
Esillä olevan keksinnön mukaan valmistettavista uusista esterijohdannaisista erityisen tärkeitä farmaseuttisten valmisteiden kannalta ovat mm. seuraavat: - gangliosidin Gmi etyyliesteri - gangliosidin Gmi propyyliesteri - gangliosidin Gmi isopropyyliesteri - gangliosidin Gmi normaali butyyliesteri - gangliosidin Gmi isobutyyliesteri - gangliosidin Gmi tert-butyyliesteri - gangliosidin Gmi sykloheksyyliesteri - esterit, jotka vastaavat tässä esitettyjä ja jotka sisältävät gangliosidin G^ib gangliosidin Gmi sijasta, - yllä esitetyn esterit, jotka sisältävät gangliosidin Gpia gangliosidin Gmi sijasta, - tässä esitetyt esterit, jotka sisältävät gangliosidin G-rib gangliosidin Gmi sijasta, sekä i4 83423 perusgangliosideinä G^i^tä, Gpiita, G^ieitä ja G<pib:^^ sisältävien gangliosidiseosten ja etenkin esimerkissä 2 esitetyn seoksen metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, tert-butyyll-, bentsyyli-, allyyli, etoksikarbonyylimetyyli-esterit.
Valmistettavien yhdisteiden ominaisuuksien osalta viitattakoon kantahakemukseen 852515, jossa niitä on täsmällisemmin kuvattu.
C. Estereiden valmistus
Uudessa menetelmässä, joka on tunnusomainen esillä olevalle keksinnölle gangliosidiestereiden valmistamiseksi ja jota voidaan käyttää sekä uuisen kantahakemuksessa 852515 esitettyjen johdannaisten että jo tunnettujen estereiden valmistukseen, käsitellään, kuten yllä mainittiin, sisäinen gang-liosidiesteri halutun alkoholin ja sen johnkin vastaavan al-koholaatin seoksella. Reaktio voidaan suorittaa alkoholin kiehumispistettä vastaavassa lämpötilassa. Voidaan käyttää myös alhaisempia lämpötiloja, mutta siinä tapauksessa reaktioajat ovat pitempiä. On myös mahdollista, mikä kuitenkin haittaa erittäin hyvää saantoa ja lyhyitä reaktioaikoja, käsitellä sisäinen esteri vain vastaavalla alkoholilla edullisesti sen kiehumispistettä vastaavassa lämpötilassa.
Sisäisiä estereitä on esimerkiksi selitetty BE-patenttijulkaisussa 894025 sekä US-patenttijulkaisussa 4.476.119.
Alkoholaatteina keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetään alkalimetallialkoholaatteja, etenkin natriumalkoholaattia.
Il 15 83423
Keksintöä ryhdytään seuraavassa lähemmin tarkastelemaan ei-rajoittavien suoritusmerkkien avulla.
Esimerkki 1: Gangliosidin G^i metyyliesteri 5 g gangliosidin G^l sisäinen esteri (3,27 mmoolia) liuotetaan 200 ml:aan vedetöntä seosta, jossa on metyleenikloridia ja metanolia suhteessa 4:1. Lisätään 176 mg (3,27 mmoolia) natriummetylaattia, joka on liuotettu 50 ml:aan vedetöntä metanolia ja seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 2 tunnin ajan. Reaktion loputtua seos neutraloidaan vedettömällä Dowex AG 50x8-hartsilla (H+-muoto), hartsi erotetaan suodattamalla ja pestään metanolilla ja liuos haihdutetaan kuivaten. Jäännös otetaan 50 ml:aan metyleenikloridi/metanolia 1:1 ja reaktiotuote saostetaan kaatamalla se 250 ml:aan asetonia. Raaka tuote (4,9 g) puhdistetaan preparatiivisella korkeapainekromatografiällä 60 H Merck-silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformi/metanoli/isopropanoli/am-moniumkarbonaatti-seosta (2 %) 1140:820:180:140. Puhtaat fraktiot kerätään, haihdutetaan kuiviin, liuotetaan uudelleen 15 ml:aan kloroformi/metanolia 1:1 ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Tämä tuote on gangliosidin Gm metyyli-esteri. Saanto 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm~^:ssä. Silikageelilevyillä suoritettu kromatograf ia kloroformi/metanoli/CaCl2 J Ha 0,3 %:ssa 55:45:10 ja määritetty Ehrlich-reagenssilla (Rf 0,72) osoitti tuotteen olevan yhtenäinen tuote ja vapaa lähtötuotteena käytetystä sisäisestä esteristä (Rf 0,75) ja gangliosidistä GMi (Rf 0,65). Käsittelemällä Na2C03:n 0,lN-liuoksella 60°:ssa tunnin ajan esterisidos lohkeaa, jolloin saadaan alkutuote, Gjji.
* ♦ · I *· * ie 83423
Esimerkki 2: Gangliosidi-seoksen (GA-seoksen) valmistus uuttamalla naudan aivokudoksesta ja sisäisten estereiden vastaavan seoksen valmistus (jota käytetään useissa seuraavissa esimerkeissä
Naudan aivokuori, joka on poistettu eläimestä, homogenisoidaan fosfaattipuskurissa, pH 6,8; 6 tilavuusosaa tetrahydro-furaania lisätään ja muodostunut seos sentrifugoidaan. Emä-liuosta uutetaan uudelleen kaksi kertaa tetrahydrofuraanilla. Sentrifugoinnin jälkeen ei-polaariset aineet poistetaan erottamalla ne etyylieetterin avulla ja vesipitoinen tetrahydrof uraanikerros johdetaan ioninvaihtopylväälle, joka on tasapainotettu 50 %:lla etanolia. Bariumhydroksidia ja neljä tilavuusosaa jääkylmää etanolia lisätään pylväästä peräisin olevaan poisteeseen.
18 tunnin jälkeen kylmissä olosuhteissa sakka kerätään ja sitten se tehdään hieman happamaksi kloorivetyhapolla, kun se on liuotettu veteen. Näin saatu liuos dialysoidaan ja pakastekuivataan. Saanto on tässä kohdassa noin 0,6 mg raakaa gangliosidiseosta/g käytettyä hermokudosta. Pakastekui-vatettu jauhe dispergoidaan 20 tilavuusosaan kloroformin ja metanolin 2:l-seosta, saatu liuos suodatetaan, kunnes se on täysin kirkas, ja sitten se erotetaan lisäämällä 0,2 tilavuusosaa kaliumkloridin vedessä olevaa liuosta 0,88 %:ssa.
Ylempi kerros erotetaan, dialysoidaan ja pakastekuivatetaan. Lopullinen saanto on 0,3 mg puhdistettua gangliosidisuolojen seosta/g aivokudosta.
5 g yllä esitetyn menetelmän mukaisesti saatua seosta liuotetaan 50 ml:aan DMSOrta. 4 g styreenityyppistä vedetöntä hartsia (sulfonihappoa) (50-100 mesh H+-muoto) lisätään seokseen ja muodostunutta järjestelmää sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Tämä käsittely ioninvaihtohartsilla muuntaa kaikki suolaksi muodostetut karboksyyliryhmät. Täydellinen muunto suoritetaan sopivalla fysikaalisella analyysimenetelmällä, kuten atomiabsorptiolla. Hartsi suodatetaan
II
n 83423 sitten imulla ja liuosta käsitellään 1,5 g:lla disyklo-heksyylikarbodi-imidiä ja jätetään seisomaan tunnin ajaksi. Saostunut disykloheksyyliurea poistetaan suodattamalla ja muodostuva liuos käsitellään 100 ml :11a 0:ta, mikä saostaa valmistetut sisäiset gangliosidiesterit.
Saanto on 4,6 g sisäisten estereiden seosta (noin 90-95 % teoreettisesta arvosta). Sisäisten esteri johdannaisten läsnäolo vahvistetaan infrapunaspektroskopialla ja ohutkerros-kromatografiällä. KBr-tableteilla suoritettu IR-spektro-metria: esteröivä laktonisidos antaa vyön 1750 cm_1:ssä. Ohutkerroskromatografia: silikageelilevyllä, kehitysliuotin: CHCl3/MeOH/CaCl2 0,3 % (55:45:10, t/t/t), sisäisen esteri-seoksen Rf on 0,7 - 0,85. Lopullisten tuotteiden Rf on suurempi kuin lähtöaineen seoksen Rf; siten kromatografia osoittaa lähtöaineen poissaolon. Käsittelemällä Na2C03:n 0,1 N-liuoksella 60°:ssa tunnin ajan esterisidokset lohkaistaan ja on mahdollista saada lähtögangliosidien alkuseos.
Saatu gangliosidiseos voidaan fraktioida erillisiin osiin, jotka edustavat olennaisesti puhtaita gangliosidejä (yleisessä selityksessä käytetyssä mielessä), käyttämällä piihappopylväitä ja eluoimalla metanoli-kloroformi-seoksel-la. Tällä tavalla saadaan koostumus, joka sisältää keskimäärin noin 40 % gangliosidiä GDia, 21 % gangliosidiä GMl/ 19 % gangliosidiä G<pib ja ig % gangliosidiä Gon,.
Esimerkki 3: Gangliosidiseoksen metyyliestereiden seos 5 g gangliosidien (saatu uuttamalla naudan aivokudosta esimerkissä 3 esitetyllä tavalla) seoksen sisäisten este-reiden seosta liuotetaan 200 ml:aan vedetöntä metyleeniklo-ridin ja metanolin 4:l-seosta. Lisätään 318 mg (5,86 mmoo-lia) natriummetylaattia, joka on liuotettu 50 ml:aan vedetöntä metanolia ja seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 2 tunnin ajan. Reaktion raakatuote eristetään sitten esimerkissä 1 esitetyllä tavalla (4,9 g). Raakatuote puhdistetaan sitten kromatografoimalla Sephadex-DEAE-asetaatti- ia 83423 muodossa A-25 käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 30:60:8-seosta. Sekoitetut neutraalit fraktiot haihdutetaan, dialysoidaan vedessä, haihdutetaan jälleen kuiviin, jäännökset liuotetaan 15 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Saanto: 4,3 g. KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm_l;ssä. Kroma-tografia, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoitti tuotteen, joka on gangliosidien metyyliestereiden seos ja jonka Rf on 0,72-0,85 gangliosidien seoksen Rf 0. 2-0,70).
Täydellinen muuntoesteröinti voidaan suorittaa määrittämällä molekyyliosuudet alkoksi- ja sialiryhmien välillä, jotka saadaan suorittamalla metyylialkoholin kvantitatiivinen "head space"-kaasukromatografia sen jälkeen kun ne on käsitelty Na2CC>3:n 0,1 N-liuoksella tunnin ajan, jolloin kaikki esterisidokset lohkeavat, ja Svennerholmin menetelmällä N-asetyylineuramiinihapon määrittämiseksi.
Esimerkki 4: Gangliosidin G^i etyyliesteri
Gangliosidin Gjyji etyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin etyylialkoholia ja natriumetylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja etylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan etyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gm-gangliosi-din etyyliesterin saanto: 4,3 g. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 1, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,80, ja Gjii-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi NaCC>3:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin Gjm.
Il 19 83423 IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm“l:ssä.
Esimerkki 5: Gangliosidien seoksen etyyliestereiden seos
Etyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 3 metyyliestereiden seoksen yhteydessä käyttämällä kuitenkin etyylialkoholia ja natriumetylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 318 mg (5,86 mmoolia) natriumetylaattia.
Dowex-hartsin pesu suoritetaan etyylialkoholilla ja saatu jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta.
Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun etyyliesteri-seoksen saanto: 4,5 g. IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 emeissä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metanolinja tetrametyyliammoniu-min hydroksidin IM 55:45:10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvona 0,50-0,75 (gangliosidi-seos 0,20-0,60).
Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 3.
Esimerkki 6: Gangliosidin Gjm isopropyyliesteri Tämä johdannainen valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin isopro-pyylialkoholia ja natriumisopropylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja isopropylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan isopropyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja isopropanolin 1:1- 20 83423 seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun G^i" gangliosidin isopropyyliesterin saanto: 4,2 g.
Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 1, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,85 ja Gm-gangliosidin tai sen sisäisen esterin puuttumisen. Hydrolyysi Na203:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI. IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen este-risidoksen 1750 cm”^:ssä.
Esimerkki 7: Gangliosidiseoksen isopropyyliestereiden seos Tämä johdannaisseos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 3 metyyliestereiden seoksen yhteydessä käyttämällä kuitenkin isopropyylialkoholia ja natriumisopro-pylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 537 mg (6,52 mmoolia) natriumisopropylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan isopropyylialkoholilla ja saatu jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja isopropanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla käyttämällä kuitenkin kromatografisena eluenttina kloroformin, isopropyylialkoholin ja veden 20:60:8-seosta. Puhdistettujen isopropyyliestereiden seoksen saanto: 4,3 g.
Kromatografoimalla esimerkissä 5 esitetyllä tavalla tuotteen Rf on 0,40-0,80 (ganliosidiseoksen 0,20-0,60). IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen este-rivyön 1750 cm--^:ssä. Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 3 esitetyllä tavalla.
li
Esimerkki 8: Gangliosidin G^l tert-butyyliesteri 21 83423 Tämä johdannainen valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin tert-butyylialkoholia ja natrium-tert-butylaattia metyyli-alkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja tert-butylaattia esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tert-butyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja tert-butanolin 1:1-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistetun G^-gang-liosidin tert-butyyliesterin saanto: 4,1 g.
Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 1, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,71 ja Gwi-gangliosidin ja sen si_ säisen esterin puuttumisen. Hydrolyysi Na2C03:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI. IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen esterinvyön 1750 cm~l:ssä.
Esimerkki 9: Ganqliosidien seoksen tert-butyyliestereiden seos Tämä seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 3 metyyliestereiden seoksen yhteydessä käyttämällä kuitenkin tert-butyylialkoholia ja natrium-tert-butylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 628,6 mg natrium-tert-butylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tert-butyyli-alkoholilla ja saatu jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja tert-butanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla käyttämällä kuitenkin kromatografisena eluenttina kloroformin ja tert-butyylialkoholin l:l-seosta. Puhdistettujen tert-butyyliestereiden saanto: 4,1 g. IR-spektri, joka suoritetaan KBr-tableteilla, osoittaa tyypillisen esterisidok- 22 8 3 4 2 3 sen 1750 cm“^:ssä. Kromatografoituna esimerkissä 5 esitetyllä tavalla tuotteen Rf on 0,25-0,70. Täydellinen reaktio suoritetaan esimerkissä 3 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 10: Gangliosidin G^i bentsyyliesteri 5 g gangliosidin G^i kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan DMSO:ta ja liuokseen lisätään 1,58 g (12,5 mmoolia) bentsyylikloridia ja 2,08 g (12,5 mmoolia) KI:tä. Tämän annetaan reagoida typessä 24 tunnin ajan 25°C:ssa. Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin ja veden (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja bentsyylialkoholin l:l-seosta ja reaktiotuote saostetaan 250 ml :11a asetonia.
Näin saatu raakatuote (5,3 g) puhdistetaan sitten prepara-tiivisella kromatografiällä silikageelilevyillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 65:32:7-seosta.
Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 ml:aan klorformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan bentsyylieste-rin saanto: 4,8 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektri osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-1:ssä ja UV-spektroskopia, joka suoritetaan absoluuttisessa etyylialkoholissa osoittaa kolme maksimia 250, 255 ja 261 nm:ssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja kloroformin/metanolin ja ammoniakin 2,5 N 55:45:12-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi ja sen Rf on 0,65 ja vastaavasti 0,53 ja se on vapaa GMl"lähtÖtuot-teesta (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45).
Käsittely Na2C03:n 0,1N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtötuotteet (GM^ ja bentsyylialkoholi ).
Esimerkki 11: Ganqliosidien seoksen bentsyyliestereiden seos 23 83423 5 g suoloiksi muodostettujen gangliosidien (kaliumsuolojen) seosta, joka on saatu uuttamalla naudan aivokudosta esimerkissä 2 esitetyllä tavalla vaihtamalla tämän jälkeen natrium kaliumilla (ioninvaihto), liuotetaan 100 ml:aan DMSOrta ja liuokseen lisätään 3,3 g (26,0 mmoolia) bentsyylikloridia ja 216 g (13,0 mmoolia) KI:tä. Seos jätetään reagoimaan typessä 48 tunnin ajaksi 25°:ssa. Reaktion lopussa liuos jaetaan n-butanolin/H20:n välillä (2:1) DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja bentsyylialkoholin l:l-seosta ja tuote saostetaan 250 ml :11a asetonia. Näin saatu raaka-tuote puhdistetaan asetaattimuodossa olevalla Sephadex-DEAE-kromatografiällä käyttämällä liuottimena kloroformin, meta-nolin ja veden 30:60:8-seosta.
Eluoidut neutraalit fraktiot sekoitetaan, vapautetaan liu-ottimesta haihduttamalla ja jäännös otetaan 15 ml :11a kloroformin ja isopropanolin l:l-seosta ja puhdistettujen bentsyyliestereiden seos saostetaan 75 ml:lla asetonia. Saanto: 4,9 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektrometria osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm“^:ssä ja UV-spektroskopia, joka suoritetaan absoluuttisessa etyylialkoholissa, osoittaa kolme maksimia 250, 255 ja 261 nm:ssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl3:n seoksella (0,3 %, 60:25:8) ja kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5N 55:45:10-seoksella ja määriteltynä Ehlich-reagenssilla tuotteen Rf-arvoksi osoittautuu 0,40 -0,70 ja vastaavasti 0,29 - 0,53 (alkuperäiselle gangliosi-diseokselle 0,05 - 0,40 ja vastaavasti 0,12 - 0,46).
Täydellinen reaktio suoritetaan esimerkissä 3 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 12: Gangliosidin G^i allyyliesteri 24 83423 5 g gangliosidin G^i kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan DMSO:ta ja liuokseen lisätään 453,7 g (3,75 mmoolia) allyylibromidia ja 625 mg (3,75 mmoolia) Kiitä. Tämän annetaan reagoida 48 tunnin ajan 25°C:ssa.
Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin/f^Oin (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 mliaan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja reaktiotuote saostetaan 250 ml :11a asetonia.
Näin saatu raakatuote (5,1 g) puhdistetaan sitten prepara-tiivisella kromatografiällä silikageelilevyillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:35:8-seosta.
Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 mliaan klorformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan allyyliesterin saanto: 4,5 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektrometria osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:40:9-seoksella ja kloroformin/metanolin ja ammoniakin 2,5N 55 :45 :10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi, jonka Rf on 0,56 ja vastaavasti 0,39 ja se on vapaa Gf4i-lähtötuotteesta (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,42).
Käsittely Na2C03:n 0,1 N liuoksella öO^issa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtötuotteet gangliosidin G^i ja allyylialkoholin.
Il
Esimerkki 13: Gangliosidin Gmi etoksikarbonyylimetyyliesteri 25 83423 5 g gangliosidin Gmi kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan DMSOrta ja liuokseen lisätään 2,12 g (12,5 mmoo-lia) etyylimonobromiasetaattia ja 2,08 g (12,5 mmoolia) KI:tä. Se jätetään reagoimaan typessä 24 tunnin ajan 25eC:ssa. Liuos jaetaan n-butanolin ja veden (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja me-tanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 250 ml:lla asetonia. Saanto 4,8 g.
Raakatuote puhdistetaan sitten preparatiivisella pylväskro-matografiällä silikageelilevyillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:32:7-seosta. Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan 15 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Saanto: 2,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektrometria osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-1:ssä.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2sn (0,3 %) 60:35 :8-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi, jonka Rf on 0,64, ja se on vapaa Gj^-lähtötuotteesta (Rf 0,40).
Käsittely Na2C03:n 0,1N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa alkuperäisen gangliosidin Gmi ·
Esimerkki 14: Gangliosidin Gmi amidi 5 g gangliosidin Gmi sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) suspen-doidaan 100 ml:aan vedetöntä isopropyylialkoholia. Suspensiota sekoitetaan alhaisessa lämpötilassa (-5°) ja kuivaa ammoniakkia kuplitetaan sitten sen läpi vedettömissä olosuhteissa 3 tunnin ajan.
26 83 423
Reaktion lopussa liuotin eliminoidaan haihduttamalla ja jäännös otetaan 50 mitään kloroformin ja metanolin 1:1-seosta ja tuote saostetaan 250 ml :11a asetonia.
Raaka tuote (4,9 g) käsitellään 100 ml:11a Na2CC>3:a (1 %) 30 minuutin ajan 25°C:ssa jäännösesteriryhmien hydrolysoimi-seksi, dialysoidaan vedessä, haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja sitten se puhdistetaan preparatiivisella pylväskroma-tografialla silikageelillä käyttämällä liuottimena ensin kloroformin, metanolin ja H20:n 60:40:9-seosta ja toisena liuottimena kloroformin, metanolin ja H20*n 55:45:10-seosta. Puhtaat, eluoidut fraktiot haihdutetaan kuluviin, jäännös liuotetaan 15 ml:aan kloroformi/metanolia 1:1 ja amidi saostetaan 75 ml :11a asetonia. Saanto: 4,8 g.
Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja määritettynä resorsi-noli-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi (Rf 0,10 ja vastaavasti 0,32) ja vapaaksi G^l^stä (Rf 0,35 ja vastaavasti 0,65).
Il
Esimerkki 15: Gangliosidin fenyylietyyliesteri 27 83423 GMl:n fenyylietyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin fenetyylialkoholia ja natriumetylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia moolimääriä sisäistä esteriä ja natriumfenyylietylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu fenyylietyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja fenyylialkoholin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,1 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun GMi~gangliosi-din fenyylietyyliesterin saanto: 4,3 g.
IR-spektroskopinen tutkimus, joka suoritetaan KBr-table-teilla osoittaa tyypillisen esterisidoksen 1750 cm“^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,90 ja GMi~gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C03:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaen gangliosidin GmI- 28 83423
Esimerkki T6; Gangliosidiseoksen fenyylietyyliestereiden seos
Fenyylietyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin fenetyylialkoholia ja natriumfe-nyylietylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 844,8 mg (5,86 mmoolia) nat-riumfenyylietylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan fenyy-lietyylialkoholilla ja saatu jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja fenyylietyylialkoholin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterovyön 1750 cm“^:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-seok-sella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,65 - 0,887 (gangliosidiseos 0,2 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 17; Gangliosidin G^i 2-sykloheksyylietyyliesteri G^iin 2-sykloheksyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 2-sykloheksyylietanolia ja natrium-2-sykloheksyyli-etylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja 2-sykloheksyylietylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-syklo-heksyylietyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleeniklo-ridin ja 2-sykloheksyylietanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,1 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esi- 29 83423 tetyllä tavalla. Puhdistetun G^i-gangliosidin 2-syklohek-syylietyyliesterin saanto: 4,3 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-l;ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,92, ja G^i-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na203:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI.
Esimerkki Ί8: Gangliosidien seoksen 2-sykloheksyylietyyli-esteriseos 2-sykloheksyylietyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin 2-sykloheksyylietanolia ja natrium- 2-sykloheksyylietylaattia metyylialkoholin ja natriummety-laatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 880,3 mg (5,86 mmoolia) natrium-2-sykloheksyylietylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-sykloheksyylietyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,3 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“-*-:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin IM 55:45:10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,67 - 0,90 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 19: Gangliosidin G^l mentyyliesteri 30 83423
Gmijo mentyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin mentolia ja natriummetylaattia metyylialkoholin ja natrium-metylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia moolimääriä sisäistä esteriä ja nat-riummentylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan mentyylialkoholin ja metyleeniklordin 1:1-seoksella ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja mentolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 3,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun GMl”9an9li°sidin mentyyliesterin saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm”l;ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,93 ja Gfli-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2CC>3:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin Gmi ·
Esimerkki 20. Gangliosidiseoksen mentyyliesterien seos
Mentyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin mentolia ja natriummentylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 1038,8 mg (5,86 mmoolia) natriummentylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan mentyylialkoholin ja metyleenikloridin 1:l-seoksella ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,3 g.
Il 31 83423 KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-l;ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-seoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,70 - 0,93 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 21: Gangliosidin G^i tetrahydrofurfuryyliesteri G^m tetrahydrofurfuryyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin tetrahydrofurfuryyliä ja natriumtetrahydrofury-laattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja natriumtetrahydrofurfyry-laattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tetrahydrofurfuryylialkoholilla ja jäännös, joka saadaan haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan mety-leenikloridin ja tetrahydrofurfuryylialkoholin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,0 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gni~gangliosidin tetrahydrofurfuryyliesterin saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm~^-:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,72, ja G^^-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C>3:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin GmI.
Esimerkki 22: Gangliosidien seoksen tetrahydrofurfuryyli-esteriseos
Tetrahydrofurfuryyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin tetrahydrofurfuryylialkoholia ja nat- 32 83423 riumtetrahydrofurfurylaattia metyylialkoholin ja natriumme-tylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 727,5 mg (5,86 mmoolia) natriumtetrahydrofurfurylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tetrahydrofurfuryylialkoholilla ja jäännös, joka saadaan haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml jaan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-ljssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin IM 55 :45 :10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,45 -0,68 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoeste-röinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 23; Gangliosidin Gmi tetrahydro-2H-pyran-4-yyli-esteri GMl:n tetrahydro-2H-pyran-4-yyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin tetrahydro-2H-pyran-4-olia ja natrium-tetrahydro-2H-pyran-4-ylaattia metyylialkoholin ja natrium-metylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-tetrahydro-2H-pyran-4-ylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tetrahydro-2H-pyran-4-olilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 mitään metyleenikloridialkoholia 1:1. Raaka-tuotteen saanto on 5,1. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gm-gangliosidin tetrahydro-2H-pyran-4-yyliesterin saanto: 4,3 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm”^:ssä. Tuotteen kro-
II
33 83423 matografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,73, ja G^i-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C03:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa ganglio-sidin Gmi·
Esimerkki 24; Ganqliosidien seoksen tetrahydro-2H-pyran-4-yyliestereiden seos
Tetrahydro-2H-pyran-4-yyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyy-liestereiden seos käyttämällä kuitenkin tetrahydro-2H-pyran- 4-olia ja natrium-tetrahydro-2H-pyran-4-ylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesi-hauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 727,5 mg (5,86 mmoolia) natrium-tetrahydro-2H-pyran- 4-ylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan tetrahydro-2H-py-ran-4-yylillä ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun raakatuotteen saanto: 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 3 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,5 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm"^:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-seok-sella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,48 - 0,72 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 25: Gangliosidin Gmi 1-heptyyliesteri 34 83423
Gmi: n 1-heptyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 1-heptanolia ja natrium-l-heptylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-l-heptylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 1-heptyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja 1-heptanolian l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 3,9 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gwi-gangliosidin 1-heptyylieste-rin saanto: 4,3 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,89, ja G^i-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na203*Ha esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin Gmi.
Esimerkki 26; Gangliosidien seoksen 1-heptyyliestereiden seos 1-heptyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin 1-heptanolia ja natrium-l-heptylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesi-hauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 809,8 mg (5,86 mmoolia) natrium-l-heptylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 1-heptyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,3 g.
Il 35 83423 KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“3-:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin IM 55 :45:10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,68 -0,90 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoeste-röinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 27. Gangliosidin G^i 2-metyyli-l-pentyyliesteri
GmI:n 2-metyyli-l-pentyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 2-metyyli-l-pentanolia ja natrium-2-metyyli-l-pen-tylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-2-metyyli-l-penty-laattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-metyyli-l-pentyyli-alkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan mety-leenikloridin ja 2-metyyli-l-pentanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,1 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gfli-gangliosi-din 2-metyyli-l-pentyyliesterin saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm"^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,90,ja Gwi-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C03illa esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaan gangliosidin Gjkji ·
Esimerkki 28; Ganqliosidien seoksen 2-metyyli-l-pentyyli-estereiden seos 2-metyyli-l-pentyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyylieste-reiden seos käyttämällä kuitenkin 2-metyyli-l-pentanolia ja 36 83423 natrium-2-metyyli-l-pentylaattia metyylialkoholin ja nat-riummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 727,7 mg (5,86 mmoolia) natrium-2-metyyli-l-pentylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-metyyli-l-pentyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm”^:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-seok-sella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,70 - 0,93 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 29: Gangliosidin Gmi 3-metyyli-2-pentyyliesteri GMl:n 3-metyyli-2-pentyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 3-metyyli-2-pentanolia ja natrium-3-metyyli-2-pen-tylaaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-3-metyyli-2-penty-laattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 3-metyyli-2-pentyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan mety-leenikloridin ja 3-metyyli-2-pentanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 5,1 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gjm-gangliosidin 3-metyyli-2-pentyyliesterin saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Tuotteen kro 37 83423 matografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,92, ja GMi-gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi ^203:11a esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin Gmi.
Esimerkki 30,: Gangliosidien seoksen 3-metyyli-2-pentyyli-estereiden seos 3-metyyli-2-pentyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin 3-metyyli-2-pentanolia ja natrium--3-metyyli-2-pentanolia ja natrium-3-metyyli-2-pentylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 727,7 mg (5,86 mmoolia) natrium-3-metyyli-2-pentylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 3-metyyli-2-pentyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,3 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-1:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-liuok-sella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,72 - 0,95 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 31: Gangliosidin Gjh 3-metoksietyyliesteri
Gulin 2-metoksietyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin 2-metoksietanolia ja natrium-2-metoksietylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samanlaisia mooli- 38 83423 määriä sisäistä esteriä ja natrium-2-metoksietylaattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-metoksi-etyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan metyleenikloridin ja 2-metoksietanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun G^i-gangliosidin 2-metoksietyyliesterin saanto: 4,3 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, jonka Rf on 0,77 ja GMi"<?angliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C03:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa ganglio-sidin GmI·
Esimerkki 32; Ganqliosidien seoksen 2-metoksietyylieste-reiden seos 2-metoksietyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 mukainen metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin 2-metoksietanolia ja natrium-2-metoksietylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 574,9 mg (5,86 mmoolia) nat-rium-2-metoksietylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 2-metoksietyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin KBr-pelleteillä ja se osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^-:ssä. Kun se kromatografoi-daan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metanolin ja tetrametyyliammoniumin hydroksidin IM 55:45:10-seoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuote omaa Rf-arvoina 0,51-0,78 (gangliosidiseos 0,20-0,60). Täydellinen muuntoesteröinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
li
Esimerkki 33: Gangliosidin Gjm l-metoksi-2-propyyliesteri 39 8 3 4 2 3
Gmi:n l-metoksi-2-propyyliesteri valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 1 metyyliesteri käyttämällä kuitenkin l-metoksi-2-propanolia ja natrium-l-metoksi-2-pro-pylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä samoja moolimääriä sisäistä esteriä ja natrium-l-metoksi-2-propy-laattia kuin esimerkissä 1. Dowex-hartsin pesu suoritetaan 1- metoksi-2-propyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan mety-leenikloridin ja l-metoksi-2-propanolin l:l-seosta. Raaka-tuotteen saanto on 4,9 g. Puhdistus suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla. Puhdistetun Gjm-gangliosidin 2- metoksietyyliesterin saanto: 4,2 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopinen tutkimus osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“^:ssä. Tuotteen kromatografinen analyysi, joka suoritetaan esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoittaa yhtenäisen yhdisteen läsnäolon, Rf 0,81, ja GjKji_gangliosidin ja sen sisäisen esterin puuttumisen (Rf 0,65 ja vastaavasti 0,75). Hydrolyysi Na2C>3:lla esimerkissä 1 esitetyllä tavalla tuottaa gangliosidin Gmi.
Esimerkki 34. Gangliosidien seoksen l-metoksi-2-propyylies-tereiden seos l-metoksi-2-propyyliestereiden seos valmistetaan ja eristetään samalla tavalla kuin esimerkin 2 metyyliestereiden seos käyttämällä kuitenkin l-metoksi-2-propanolia ja natrium-1-metoksi-2-propylaattia metyylialkoholin ja natriummetylaatin sijasta ja kuumentamalla vesihauteen päällä ja käyttämällä 5 g sisäisten estereiden seosta ja 657,0 mg (5,86 mmoolia) natrium-l-metoksi-2-propylaattia. Dowex-hartsin pesu suoritetaan l-metoksi-2-propyylialkoholilla ja jäännös, joka on saatu haihduttamalla suodatettu aine, liuotetaan 50 ml:aan kloroformin ja etanolin l:l-seosta. Raakatuotteen saanto on 5,2 g. Puhdistus suoritetaan samoin esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Puhdistetun esteriseoksen saanto: 4,3 g.
40 83423 KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm“l:ssä. Kun se kromatografoidaan silikageelilevyillä juuri valmistetulla kloroformin, metano-lin ja tetrametyyliammoniumin IM 55:45:10-liuoksella ja määritetään Ehrlich-reagenssilla, tuotteen Rf-arvoina on 0,52 -0,80 (gangliosidiseos 0,20 - 0,60). Täydellinen muuntoeste-röinti suoritetaan esimerkissä 2 esitetyllä tavalla.
Esimerkki 35: Gangliosidin G^i sykloheksyyliesteri 5g gangliosidin kaliumsuolaa (3,4 mmoolia) liuotetaan 50 ml saan DMSOsta ja liuokseen lisätään 661,5 mg (3,75 mmoolia) bromisykloheksaania ja 625 mg (3,75 mmoolia) KIstä. Tämän annetaan reagoida 48 tunnin ajan 25°C:ssa. Reaktion lopussa liuos jaetaan n-butanolin ja I^Osn välillä (2:1) DMSOsn ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml saan kloroformin ja me-tanolin lsl-seosta ja tuote saostetaan 250 ml :11a asetonia. Näin saatu raakatuote (5,2 g) puhdistetaan sitten prepara-tiivisella pylväskromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60s35 s8-seosta. Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 ml saan klorformin ja isopropanolin lsl-seosta ja tuote saostetaan 75 ml s 11a asetonia. Puhtaan sykloheksyy-liesterin saanto: 4,4 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spekroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-l:ssä. Kromatografoituna silikageelilevyillä kloroformin, metanolina ja ja CaCl2:n (0,3 %) 60:40:9-seoksella ja kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5 N 55:45:10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi ja sen Rf on 0,70 ja vastaavasti 0,58 ja se on vapaa Gf4i“lähtötuotteesta (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45). Käsittely Na2C03:n 0,1 N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtögangliosidin G^i·
II
Esimerkki 36: Gangliosidin G^i undekyyliesteri 4i 83423 5 g gangliosidin G^i kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan DMSOrta ja liuokseen lisätään 882,1 mg (3,75 mmoolia) 1-bromiundekaania ja 625 mg (3,75 mmoolia) KI:tä. Tämän annetaan reagoida 48 tunnin ajan 25°C:ssa. Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin/H20:n (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja metanolin 1^-seosta ja reaktiotuote saostetaan 250 ml:11a asetonia. Näin saatu raakatuote (5,3 g) puhdistetaan sitten preparatiivisella pyiväskromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:35 :8-seosta . Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 ml:aan klorformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan undekyyliesterin saanto: 4,9 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm-1:ssä. Kromatografoituna silika-geelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaC^sn (0,3 %) 60:40:9-seoksella ja kloroformin/metanolin ja ammoniakin 2,5N 55 :45 :10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssil-la tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi, jonka Rf on 0,68 ja vastaavasti 0,56 ja se on vapaa GMi"lähtötuotteesta (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45). Käsittely Na2CC>3:n 0,1 N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtögangliosidin Gmi.
Esimerkki 37: Gangliosidin Gmi 1-hydroksiundekan-ll-yyli-esteri 5 9 gangliosidin G^i kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan DMSO:ta ja liuokseen lisätään 0,42 mg (3,75 mmoolia) 11-bromi-l-undekanolia ja 625 mg (3,75 mmoolia) KI:tä. Tämän annetaan reagoida 48 tunnin ajan 25°C:ssa. Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin/H20:n (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdute- 42 83423 taan kuiviin ja jäännös otetaan 50 mlraan kloroformin ja me-tanolin l:l-seosta ja reaktiotuote saostetaan 250 ml :11a asetonia. Näin saatu raakatuote (5,3 g) puhdistetaan sitten preparatiivisella pylväskromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:35:8-seosta. Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 ml:aan klorformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan 11-hydroksiundekan-ll-yliesterin saanto: 4,8 g.
KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm~^-:ssä. Kromatografoituna silika-geelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:40:9-seoksella ja kloroformin/metanolin ja ammoniakin 2,5N 55:45:10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssil-la tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi, jonka Rf on 0,65 ja vastaavasti 0,52 ja se on vapaa Gjnn-lähtöganglio-sidista (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45). Käsittely Na2C03:n 0,1 N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidok-sen lohkaisun ja tuottaa alkugangliosidin G^i.
Esimerkki 38: Gangliosidin G^i syanobutyr-4-yyliesteri 5 g gangliosidin G^i kaliumsuolaa (3,14 mmoolia) liuotetaan 50 ml:aan DMSO:ta ja liuokseen lisätään 550 mg (3,75 mmoolia) 4-bromibutyronitriiliä ja 625 mg (3,75 mmoolia) KI:tä. Jätetään reagoimaan 48 tunniksi 25eC:ssa. Reaktion loputtua liuos jaetaan n-butanolin ja H20:n (2:1) välillä DMSO:n ja suolojen eliminoimiseksi. Butanoliliuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformin ja metanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 250 ml:lla asetonia. Näin saatu raakatuote (5,1 g) puhdistetaan sitten preparatiivisella pylväskromatografiällä silikageelillä käyttämällä liuottimena kloroformin, metanolin ja veden 60:35:8-seosta.
Puhtaat fraktiot sekoitetaan, haihdutetaan, liuotetaan uudelleen 15 ml:aan kloroformin ja isopropanolin l:l-seosta ja tuote saostetaan 75 ml :11a asetonia. Puhtaan syanobutyr-4-yyliesterin saanto 4,6 g.
Il 43 83423 KBr-tableteilla suoritettu IR-spektroskopia osoittaa tyypillisen esterivyön 1750 cm”l:ssä. Kromatografoituna silika-geelilevyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:40:9-seoksella ja kloroformin, metanolin ja ammoniakin 2,5N 55 :45 :10-seoksella ja määritettynä Ehrlich-reagenssilla tuote osoittautuu yhtenäiseksi yhdisteeksi ja sen Rf on 0,42 ja vastaavasti 0,45 ja se on vapaa Gj^j-lähtögangliosidistä (Rf 0,40 ja vastaavasti 0,45). Käsittely Na2C03:n 0,1 N liuoksella 60°:ssa tunnin ajan saa aikaan esterisidoksen lohkaisun ja tuottaa lähtögangliosidin Gmj_ .
Esimerkki 39: Gangliosidin GmI pyrrolidiiniamiini Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta pyrrolidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja noudatetaan samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,1 g puhdasta gangliosidin Gmi pyrrolidiiniamiinia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa Gni:stä ja sen Rf on 0,29 ja vastaavasti 0,46 (GMi:n Rf 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 40; Gangliosidiseoksen pyrrolidiiniamidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta pyrrolidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 4,9 g gangliosidiseoksen pyrroliidiniamidien seosta.
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageeli-levyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,08 - 0,40 ja vastaavasti 0,35 - 0,48 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05 - 0,40).
Esimerkki 41: Gangliosidin Gjji piperidiiniamidi 44 83423 Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin G^l sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta piperidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja samaa puhdistusmenetelmää noudatetaan myös. Saadaan saantona 5,2 g puhdasta gangliosidin G^i piperidiiniamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa G^itstä ja sen Rf on 0,30 ja vastaavasti 0,50 (GMl:n 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 42: Gangliosidiseoksen piperidiiniamidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta piperidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,1 g gangliosidiseoksen piperidiiniamidien seosta. Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35 :8-seok-sella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,10 - 0,42 ja vastaavasti 0,37 - 0,50 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05 -0,40).
Esimerkki 43. Gangliosidin G^l tetrahydrofurfuryyliamidi Tämä johdannainen valmistetaan 5 grsta gangliosidin Gmi sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta tetrahydrofur-furyyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja samaa puhdistusmenetelmää noudatetaan myös. Saadaan saantona 5,3 g puhdasta gangliosidin Gmi tetrahydrofurfuryyliamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa
II
45 83423 olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa G^tstä ja sen Rf on 0,33 ja vastaavasti 0,52 (GMl^n Rf 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 44: Gangliosidiseoksen tetrahydrofurfuryyliamidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 mlrsta tetrahydrofurfuryyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,2 g gangliosidiseoksen tetrahydrofurfu-ryyliamidien seosta.
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageelilevyillä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksella ja kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seok-sella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,12 - 0,45 ja vastaavasti 0,40 - 0,57 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05 -0,40).
Esimerkki 45: Gangliosidin G^i 2-metyylipiperidiiniamidi Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 mlrsta 2-metyylipipe-ridiiniamiinia saunalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja samaa puhdistusmenetelmää noudatetaan myös. Saadaan saantona 5,2 g 1 puhdasta gangliosidin G^i 2-metyylipiperidiiniamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat saunat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa G^tstä ja sen Rf on 0,33 ja vastaavasti 0,54 (G(4i:n Rf 0,35 ja vastaavasti 0,40).
« 83423
Esimerkki 46: Ganqliosidiseoksen 2-metyylipiperidiiniamidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta 2-metyylipiperidiiniä samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,4 g gangliosidiseoksen 2-metyylipiperidiiniamidien seosta.
Rf-arvot, määritettynä kromatografoinaalla silikageelilevyil-lä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksel-la ja kloroformin, metanolin ja CaC^sn (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,14 - 0,46 ja vastaavasti 0,39 - 0,59 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05 -0,40).
Esimerkki 47: Gangliosidin G^i 1-metyylipiperatsiiniamidi Tämä johdannainen valmistetaan 5 g:sta gangliosidin G^i sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta 1-metyyli-pi-peratsiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja noudatetaan samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,1 g puhdasta gangliosidin G^i 1-metyylipiperatsiiniamidia. IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 metyy-liamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa G^iistä ja sen Rf on 0,04 ja vastaavasti 0,08 (GMl:n 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 48; Ganqliosidiseoksen 1-metyylipiperatsiini-amidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta 1-metyylipiperatsiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,5 g gangliosidiseoksen 1-metyylipiperatsiini-amidien seosta.
47 83423
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageeli-levyillä kloroformin, metanolin ja CaCl2:n (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,01 - 0,06 ja vastaavasti 0,01 - 0,12 (ganglio-sidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05-0,40).
Esimerkki 49: Gangliosidin G^i 2-fenyylietyyliamidi Tämä valmistetaan 5 g:sta gangliosidin sisäistä esteriä (3,27 mmoolia) ja 25 ml:sta 2-fenyylietyyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 16 ja samaa puhdistusmenetelmää noudatetaan myös. Saadaan saantona 5,3 g puhdasta gangliosidin Gjuji 2-fenyylietyyliamidia.
IR-spektroskooppiset arvot ovat samat kuin esimerkin 16 me-tyyliamidin kohdalla ja kromatografinen tutkimus samoissa olosuhteissa kuin siinä esimerkissä osoittaa tuotteen olevan yhtenäinen ja vapaa Gm:stä ja sen Rf on 0,33 ja vastaavasti 0,73 (GmI:n 0,35 ja vastaavasti 0,40).
Esimerkki 50: Ganqliosidiseoksen 2-fenyylietyyliamidien seos Tämä johdannaisseos valmistetaan 5 g:sta esimerkissä 17 käytettyjen gangliosidien sisäisten esterien seosta ja 25 ml:sta 2-fenyylietyyliamiinia samalla tavalla kuin esimerkissä 17, samoin käytetään samaa puhdistusmenetelmää. Saadaan saantona 5,5 g gangliosidiseoksen 2-fenyylietyyliamidien seosta.
Rf-arvot, määritettynä kromatografoimalla silikageelilevyil-lä kloroformin, metanolin ja ammoniakin 4N 55:45:10-seoksel-la ja kloroformin, metanolin ja CaC^sn (0,3 %) 60:35:8-seoksella ja määritettynä resorsinolireagenssilla, osoittivat arvoja 0,12 - 0,44 ja vastaavasti 0,60 - 0,78 (gangliosidien alkuperäisseoksen Rf 0,15 - 0,70 ja vastaavasti 0,05-0,40).
Claims (3)
1. Menetelmä yleiskaavan (ia) ROOCiiinimi/'siali-v itmimiiiOH /'imimiiOH happo E e luumun OH keramidi ..... ‘«H 5 Ö OH OH Ö ( J) OH OLIGOSAKKARIDI OH mukaisten gangliosidien esterijohdannaisten valmistamiseksi, jossa kaavassa R on korkeintaan 12 hiiliatomia sisältävän alifaattisen alkoholin tähde, korkeintaan 12 hiiliatomia sisältävän aralifaattisen alkoholin tähde, jossa on vain yksi bentseenirengas, korkeintaan 12 hiiliatomia sisältävän heterosyklisen alkoholin tähde, jossa on typpi-, rikki- tai happiheteroatomin sisältävä heterosyklinen rengas, korkeintaan 14 hiiliatomia sisältävän alisyklisen alkoholin tähde, tai korkeintaan 14 hiiliatomia sisältävän alifaattis-alisykli-sen alkoholin tähde, joka sisältää vain yhden syklo-alifaattisen renkaan, jolloin edellä mainitut tähteet voivat olla valinnanvaraisesti substituoidut, tunnettu siitä, että käsitellään gangliosidin sisäistä esteriä alkoholilla vastaavan esterin muodostamiseksi gangliosidin sisäisen esterin tai sen seoksen siali-happotähteiden karboksyyliryhmissä, jolloin käsittely suoritetaan alkoholia vastaavan metallialkoholaatin läsnäollessa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että alkoholina käytetään alifaattista alkoholia, jossa on korkeintaan 12 hiiliatomia; aralifaattista alkoholia, jossa on ainoastaan yksi bentseenirengas, joka on mah- II « 83423 dollisesti substituoitu 1-3 Ci_4-alkyyliryhmällä ja jossa on korkeintaan 4 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa; heterosyklistä alkoholia, jossa on korkeintaan 12 hiiliatomia ja ainoastaan yksi heterosyklinen rengas, joka sisältää heteroatomin, joka on N, S, tai O; tai Ci_i4-alisyklista tai alifaattis-alisyklistä alkoholia.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että alkoholina käytetään metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, n-butyyli-, isobutyyli-, tert-butyyli-, undekyyli-, hydroksidekyyli-, heptyyli-, 2-metyyli-l-pentyyli-, allyyli-, etoksikarbonyylimetyyli-, metoksietyyli-, l-metoksi-2-propyyli-, bentsyyli-, fen-etyyli-, sykloheksyyli-, mentyyli-, tetrahydrofurfuryyli-, tetrahydropyranyyli- tai syanobutyryylialkoholia. so 83423
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT4849284 | 1984-07-03 | ||
| IT48492/84A IT1199116B (it) | 1984-07-03 | 1984-07-03 | Derivati di gangliosidi |
| FI852515A FI84074C (fi) | 1984-07-03 | 1985-06-26 | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara gangliosidderivat. |
| FI852515 | 1985-06-26 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI892587A0 FI892587A0 (fi) | 1989-05-26 |
| FI892587L FI892587L (fi) | 1989-05-26 |
| FI83423B FI83423B (fi) | 1991-03-28 |
| FI83423C true FI83423C (fi) | 1991-07-10 |
Family
ID=26157779
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI892587A FI83423C (fi) | 1984-07-03 | 1989-05-26 | Foerfarande foer framstaellning av gangliosidderivat. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FI (1) | FI83423C (fi) |
-
1989
- 1989-05-26 FI FI892587A patent/FI83423C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI892587A0 (fi) | 1989-05-26 |
| FI83423B (fi) | 1991-03-28 |
| FI892587L (fi) | 1989-05-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI84074B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara gangliosidderivat. | |
| AU683026B2 (en) | Novel shingoglycolipid and use thereof | |
| DE69431839T2 (de) | Methode zur synthese von amino-deoxy-disacchariden und amino-deoxy-oligosacchariden | |
| DE69228692T2 (de) | Methode zur enzymatischen synthese von kohlenhydraten | |
| US4868292A (en) | Preparation of monosialoganglioside | |
| DE69523889T2 (de) | Gangliosid gm3 analog mit einem an der position 9 fluorierten sialinsäurerest und zwischenstufe dafür | |
| DE3789043T2 (de) | N-Glykoneuraminsäure enthaltendes Glykolipid und Verfahren zu dessen Herstellung. | |
| EP0373039B1 (en) | New lysoganglioside derivatives | |
| FI83423C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av gangliosidderivat. | |
| US4785084A (en) | Method of preparing peracetyl oxazolines | |
| US5220008A (en) | Oligosaccharide inhibitors for influenza virus | |
| EP0410883B1 (en) | Di-lysogangliosides derivatives | |
| US6245902B1 (en) | C-glycoside analogs and methods for their preparation and use | |
| Compostella et al. | The mammalian sulfated glycolipid sulfatide: Synthesis and biological implications | |
| Tsuchihashi et al. | Synthesis of a glioma-related ganglioside, O-Ac GM3 having 3-O-Ac ceramide and its substrate property toward hydrolases | |
| AU1060200A (en) | Carbohydrates and methods for their synthesis | |
| Le Blayb et al. | Synthesis and In Vitro Activities of a Spacer-containing Glycophospholipid Ligand of a Lipopolysaccharide Receptor Involved in Endotoxin Tolerance | |
| CA2433856A1 (en) | Alkylated inositolglycans and their use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: FIDIA S.P.A. |