FI69834C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara etr- eller tioetermerkaptoacylproliner - Google Patents

Description

\*4&ΙΓ*\ rgi m KUULUTUSJULKAISU ϊΟΟΎΛ ·θ3ΓΐΙ Β ” UTLÄGG NIN G SSKRIFT 07 0 04

C .... Patentti r.yonne-ttv ··&& («) p-t:-t :: :-:’ol-t CC.G.PG

(51) Kv.ik.4/lnt.Cl.4 C 07 D 207/16 SUOMI —FINLAND (21) Patenttihakemus — Pitentaniökning 792*»9δ (22) Hakemispäivä — Ansöknlngsdag 1 O . 08.79 (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 10· 08.79 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentlig 12.02.80

Patentti, ja rekisterihallitus Nihtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm. - , , , , flc

Patent- och registerstyrelsen ' ' Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad 3* . 1Z.O? (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus—Begärd prioritet 1 1 .08.78 usa(us) 932883 (71) E. R. Squibb 6 Sons, Inc., Lawrencevi11e-Princeton Road, Princeton,

New Jersey, USA(US) (72) Miguel Angel Ondetti, Princeton, New Jersey,

John Krapcho, Somerset, New Jersey, USA(US) (74) Oy Kolster Ab (5*0 Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten eetteri- ja tioeetteri- merkaptoasyy1iprol iin ien valmistamiseksi - Förfarande för framstälIning av terapeutiskt användbara eter- eiler tioetermerkaptoacylproliner

Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten eetteri- tai tioeetterimerkaptoasyyliproliinien valmistamiseksi, joiden yleinen kaava on I

XR1 R2 4 I I ^

R -S-CH2-CH-CO-N_C-COOH

jossa ryhmä -XR^ on sitoutunut proliinirenkaan 3- tai 4-ase- maan, X on happi- tai rikkiatomi, R* on C1_^-alkyyli- tai fe- nyyliryhmä, joka voi olla substituoitu halogeeniatomilla, R2 4 on vetyatomi tai C^_^-alkyyliryhmä ja R on vetyatomi tai C1_4-alkanoyyli- tai bentsoyyliryhmä, sekä niiden suolojen valmistamiseksi.

69834

Keksinnön mukaisesti valmistetut, kaavan I mukaiset eetteri- ja tioeetterimerkaptoasyyliproliinit ovat käyttökelpoisia hypertension vastaisina lääkeaineina.

US-patenttijulkaisusta 4 105 776 tunnetaan keksinnön mukaisille yhdisteille rakenteeltaan läheisiä yhdisteitä, joilla on saman tyyppinen aktiviteetti. Näiden tunnettujen yhdisteiden rakenne eroaa edellä esitetystä kaavasta I siinä, että niissä ei ole substituenttia XR^, vaan ne ovat joko substitu-oimattomia tai niissä on substituenttina hydroksi- tai alkyy-liryhmä. Tunnetuista yhdisteistä on merkittävin substituoi-maton yhdiste, jota markkinoidaan nimellä "Captopril" ja jonka kaava on CH, i J !

HS-CH2-CH-CO-N_COOH

1-(3-merkaptopropanoyyli)-D-proliini ("Captopril") tunnettu US-patentista 4 105 776. Tätä tunnettua yhdistettä on käytetty vertailuyhdisteenä jäljenpänä esitetyissä terapeuttisissa vertailukokeissa ja verrattu sitä keksinnön mukaisesti esimerkissä 13 valmistettuun 4-fenyylitioyhdisteeseen, jonka kaava on

S-C,HC

| O 3 CH3 i : : hs-ch2-ch-co-n____I_cooh 1-(D-3-merkapto-2-metyyli-oksopropyyli)-cis-4-fenyylitio-L-proliini.

Tällöin osoittautui, että viime mainitulla eli uudella yhdisteellä oli korkeampi aktiviteetti. Esimerkkeinä alkanoyyliryhmistä mainittakoon asetyyli, propionyyli, buty-ryyli ja isobutyryyli, jolloin asetyyli on edullisin.

Kaavan I mukaiset yhdisteet esiintyvät stereoisomeerei-nä tai niiden rasemaattisena seoksena. Näitä kaikkia voidaan vai- 3 69834 mistaa keksinnön mukaisella menetelmällä. Jäljenpänä esitetyssä synteesissä voidaan lähtöaineena käyttää rasemaattia tai jompaakumpaa enantiomeeriä. Jos lähtöaineena käytetään rasemaattia, voidaan lopputuotteen sisältämät stereoisomeerit erottaa tavanomaisin kromatografisin tai jakokiteytysmenetelmin. XR -ryhmä saa myös aikaan cis-transisomeriaa.

Proliinirenkaan asymmetrisellä keskuksella C^-atomissa on edullisesti L-konfiguraatio. Jos merkaptoasyylisivuketjussa on asymmetrinen keskus, on sillä D-konfiguraatio.

Uusista yhdisteistä ovat erittäin edullisia sellaiset kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa X on happi, on metyyli 2 . ...

tai etyyli, erikoisesti metyyli, R on vety tai metyyli, enkoi- . 1 ...

sesti metyyli, R on vety ja ryhmä XR on proliinirenkaan 4-ase-massa, varsinkin kun XR^-ryhmällä on cis-konfiguraatio.

Keksinnölle on tunnusomaista, että proliiniyhdiste, jonka kaava on II

.XR1 c^f><

I 3 II

HN I CCXJH

jossa R1 ja X tarkoittavat samaa kuin"edellä, liitetään kaavan III mukaiseen happoon tai sen reaktiokykyiseen johdannaiseen R2 r,4-s-ch2-!:h-cooh hi 2 4 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ja R' on C^_4~alkanoyy- li- tai bentsoyyliryhmä, sellaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R on ^-alkanoyyli- tai bentsoyyliryhmä, ja että saatu yhdiste haluttaessa hydrolysoidaan sellaisen yhdisteen saamisek- ii 12 si, jossa R on vetyatomi ja R , R ja X tarkoittavat samaa kuin edellä, ja että mahdollisesti saatu happo haluttaessa muutetaan suolaksi.

Tämä reaktio voidaan toteuttaa kytkentäreagenssin kuten disykloheksyylikarbodi-imidin tms. läsnäollessa tai happo voi- 4 69834 daan aktivoida muodostamalla seka-anhydridi, symmetrinen anhyd-ridi, happohalogenidi tai aktiivinen esteri tai voidaan käyttää Woodward'in K-reagenssia, N-etoksikarbonyyli-2~etoksi-l,2-dihydrokinoliinia tms. Asylointimenetelmistä on esitetty yhteenveto teoksessa Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), Voi XV, osa II, ss 1- (1974). On edullista saattaa kaavan III mukainen happohalogenidi, varsinkin happokloridi, reaktioon kaavan II mukaisen hapon kanssa.

Kaavan I mukainen yhdiste on edullista eristää ja puhdistaa kiteyttämällä, esimerkiksi muodostamalla disykloheksyy-liamiinisuola ja muuntamalla tämä suola sen jälkeen vapaaksi hapoksi käsittelemällä hapon, kuten happaman kaliumsulfaatin, vesiliuoksella.

Kaavan II mukaiset proliinilähtöaineet voidaan valmistaa eri tavoin. Esimerkiksi hydroksi- tai merkaptoproliini, jonka kaava on

XH

H2C'">S

7 ! (IV)

HN_C-COOH

H

asyloidaan asylointireagenssilla kuten etikkahapon anhydridil-lä, asetyylikloridilla, propionihapon anhydridillä, voihapon anhydridillä, bentsyyliklooriformiaatilla tms. niin, että typpi saadaan suojatuksi. Sen jälkeen liitetään R^-ryhmä siten, että kaavan IV mukainen yhdiste, jonka N on suojattu, saatetaan reaktioon halogenidin R^-hal kanssa, jossa hai tarkoittaa halogeenia, edullisesti jodia, hopeaoksidin, natriumhyd-ridin, natriumhydroksidin tms. läsnäollessa niin, että saadaan välituote, jonka kaava on XR1 i 1 , (V)

suojattu-N-C-COOR

i

H

II

5 69834

Kun kaavan V mukaiselle lähtöaineelle suoritetaan emäksinen hydrolyysi emäksen kuten bariumhydroksidin, natriumhydroksi-din, kaliumhydroksidin tms. avulla, saadaan ensin vapaa happo (COOH), ja kun sen jälkeen hydrolysoidaan epäorgaanisella hapolla, kuten rikkihapolla, saadaan kaavan II mukainen lähtöaine .

Toisessa kaavan II mukaisten proliinilähtöaineiden valmistusmenetelmässä tosyylioksiproliiniesteri, jonka N on suojattu, edullisesti metyyliesteri, jonka kaava on OTs Υ°·ί suojattu-N _C-COO-alkyyli

H

saatetaan reaktioon natriumsuolan kanssa, jonka kaava on R1-X-Na VII

jolloin saadaan välituote, jonka kaava on XR1

H C

j 1 (VIII) suojattu-N_C-COO-alkyyli

H

Kaavassa VI symboli Ts tarkoittaa ryhmää -S02-(o^-CH3 ja typen suojaryhmä on edullisesti bentsyylioksikarbonyyliryhmä tai sitten joku tavallinen asyylisuojaryhmä. Jos tässä reaktiossa tosylaattiryhmällä on cis-konfiguraatio, ryhmällä XR^ tulee olemaan trans-konfiguraatio, ja jos tosyylioksiryhmällä on trans-konfiguraatio, ryhmällä XR^ tulee olemaan cis-konfi-guraatio. Kaavan VIII mukaisesta välituotteesta poistetaan sen 6 69834 jälkeen alkyyliesteriryhmä ja sitten suoritetaan reaktio bro-mivedyn kanssa, jolloin saadaan kaavan II mukaisen proliini-reagenssin bromivetysuola, joka voidaan liittää kaavan III mukaiseen happoon tai edullisesti happokloridiin.

Kaavan II mukaiset proliinilähtöaineet, joissa X on rikki ja ryhmä XR1 on kiinnittynyt proliinirenkaan 3-asemaan, voidaan myös valmistaa siten, että 1,2-dehydroproliiniesteri, edullisesti tert.-butyyliesteri, jonka kaava on ! (IX) N ^-COO-alkyyli saatetaan reaktioon asylointireagenssin kuten bentsyylikloori-formiaatin, asetyylikloridin jne. kanssa, jolloin saadaan 4,5-dehydroyhdiste, jonka kaava on Γ ''il (x) suo jattu-N___jj__COO-alkyyli jota sen jälkeen käsitellään merkaptaanilla R^-SH, jolloin saadaan kaavan XI mukainen yhdiste 'S~r1 f i (xi) suojattu-N-----'-COO-alkyyli jossa ryhmällä -S-R^ on trans-konfiguraatio. Sen jälkeen poistetaan typen suojaryhmä ja alkyyliryhmä, jolloin saadaan haluttu lähtöaine.

Kaavan II mukaiset proliinilähtöaineet, joissa R^ on fenyyli, substituoitu fenyyli, fenyyli-alempi-alkyleeni tai substituoitu fenyyli-alempi-alkyleeni, voidaan myös valmistaa käsittelemällä kaavan IV mukaisen proliinin bentsyyliesteriä, jonka N on suojattu, alkoholilla R -OH trifenyylifosfiinin ja dietyyliatsodikarboksylaatin läsnäollessa noudattamalla julkaisussa Bittner et ai., Chemistry and Industry, 15 March 1975, 7 69834 s. 281 esitettyä menetelmää. Kun typen suojaryhmä ja bentsyy-liesteriryhmä poistetaan, saadaan kaavan II mukainen lähtöaine .

Lisätietojen saamiseksi lähtöaineista ja välituotteista viitataan myös seuraaviin julkaisuihin: Ondetti et ai., USA:n patenttijulkaisut 4 046 889, 4 105 776 ja 4 154 935, Neuberger, J.Chem.Soc., 1945, ss. 429 - 432, Patchett et ai., J.Amer.Chem. Soc. 79, s. 185 - 192 (1957), Baer et ai., Can.J. Biochem and Phys., 37, s. 583 - 587 (1959), Sheenan et ai., J.Amer.Chem.Soc. 85, ss. 3863 - 3865 (1963), Magerlein, J.Med. Chem. 10, ss. 116 - 1163 (1967). Näissä selostettuja menetelmiä voidaan käyttää keksinnön mukaisten yhdisteiden syntetisointiin ja stereokonversioon.

Lisää yksityiskohtia löytyy esimerkeistä, joissa selostetaan edullisia toteutustapoja, ja jotka ovat myös malleja muiden ryhmän yhdisteiden valmistukselle.

Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet muodostavat emäksisiä suoloja useiden epäorgaanisten ja orgaanisten emästen kanssa. Tällaisista emäksistä johdettu suolanmuodostajaioni voi olla metalli-ioni, joita ovat esimerkiksi alumiini-ionit, al-kalimetalli-ionit kuten natrium- tai kaliumionit, maa-alkali-metalli-ionit kuten kalsium- tai magnesiumionit tai amiinisuo-laionit, joita tähän tarkoitukseen tunnetaan useita, ja joita ovat esimerkiksi aralkyyliamiinit kuten dibentsyyliamiini, Ν,Ν-dibentsyylietyleenidiamiini, alemmat alkyyliamiinit kuten metyyliamiini, tert.-butyyliamiini, prokaiini, alemmat alkyy-lipiperidiinit kuten N-etyylipiperidiini, sykloalkyyliamiinit kuten sykloheksyyliamiini tai disykloheksyyliamiini, 1-ada-mantaaniamiini, bentsatiini tai aminohapoista kuten arginii-nista, lysiinistä tms. johdetut suolat. Fysiologisesti hyväksyttävät suolat kuten natrium- tai kaliumsuolat ovat edullisia, sillä niitä voidaan käyttää lääketieteellisiin tarkoituksiin, kuten jäljempänä esitetään. Nämä ja muut suolat, jotka eivät välttämättä ole fysiologisesti hyväksyttäviä, ovat hyödyllisiä jäljempänä kuvattuihin tarkoituksiin sopivien tuotteiden eristämisessä ja puhdistamisessa, kuten esimerkeissä selostetut disykloheksyyliamiinisuola ja sykloheksyyliamiini- 8 69834 suola. Suolat valmistetaan siten, että yhdisteen happomuoto saatetaan reaktioon ekvivalenttisen määrän kanssa tarvittavan ionin antavaa emästä väliaineessa, jossa suola saostuu, tai vedessä ja sen jälkeen kylmäkuivaamalla. Vapaa happo voidaan saada suolasta tavanomaisilla neutralointimenetelmillä esimerkiksi natriumbisulfaatin, suolahapon jne. avulla.

Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet estävät dekapeptidi-angiotensiini I:n muuttumisen angiotensiini II:ksi ja ovat näin ollen hyödyllisiä liian korkean verenpaineen alentamiseen ja lievittämiseen. Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet häiritsevät reniini -> angiotensinogeeni -> angiotensiini I -> angiotensiini II-systeemiä siten, että ne inhi boivat angiotensiiniä muuntavaa entsyymiä ja siten vähentävät tai eliminoivat kokonaan angiotensiini II:n muodostumisen, joka on pressori. Näin ollen voidaan liian korkeasta verenpaineesta kärsivän nisäkkään verenpainetta alentaa tai lievittää antamalla verenpainetta tehokkaasti alentava annos seosta, joka sisältää yhtä tai useampaa kaavan I mukaista yhdistettä tai sen suolaa.

Eläinkokeilla on voitu osoittaa (S.L. Engel, T.R. Schaeffer, M.H. Waugh ja B. Rubin, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 143,483 (1973)), että verenpaineen alentamiseksi riittää yhtenä annoksena tai mielellään 2-4 annokseen jaettuna noin 0,1 - 100 mg kilogrammaa kohti vuorokaudessa, mielellään noin 1-50 mg kilogrammaa kohti vuorokaudessa. Aine on edullista antaa suun kautta, mutta voidaan antaa myös ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta kuten ihonalaisesti, lihaksensisäisesti, laskimonsisäisesti tai vatsaontelonsisaisesti.

Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää ve-renpaineenalentamistarkoituksessa saattamalla ne suun kautta tapahtuvaa antoa varten tablettien, kapselien tai eliksiirien muotoon ja ruuansulatuskanavan ulkopuolisesti tapahtuvaa antoa varten steriilien liuosten tai suspensioiden muotoon. Yhteensä noin 10 - 500 mg yhtä tai useampaa kaavan I mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa sekoitetaan tavallista farmaseuttista käytäntöä noudattaen yksikköan-nokseksi fysiologisesti hyväksyttävän apuaineen, kantimen,

II

9 69834 laimentimen, sidosaineen, säilöntäaineen, stabiloimisaineen, makuaineen jne. kanssa. Nämä seokset tai valmisteet sisältävät vaikuttavaa aineosaa niin paljon, että annos saadaan edellä mainitulle alueelle.

Tabletteihin, kapseleihin tms. sopivia apuaineita ovat mm. seuraavat: sidosaineina traganttikumi, arabikumi, maissi-tärkkelys tai gelatiini, laimentimina dikalsiumfosfaatti tai mikrokiteinen selluloosa, desintergaattoreina maissitärkkelys, perunatärkkelys, algiinihappo tms., liukuaineena esim. magne-siumstearaatti, makeutusaineina sakkaroosi, laktoosi tai sakka-riini ja makuaineina piparminttu, gaulteriaöljy tai kirsikka. Jos yksikköannosmuoto on kapseli, se voi edellä mainitun tyyppisten materiaalien lisäksi sisältää nestemäistä kanninta kuten rasvaöljyä. Erilaisia muita aineita voi olla läsnä päällysteinä tai muulla tavalla muuttamassa annosyksikön fysikaalista muotoa. Esimerkiksi tabletit voivat olla päällystettyjä sellakalla, sokerilla tai molemmilla. Siirappi tai eliksiiri voi sisältää vaikuttavaa yhdistettä, sakkaroosia makeutusai-neena, metyyli- ja propyyli-p-hydroksibentsoehappoa säilöntäaineena, väriainetta ja maunparannusaineena kirsikan tai appelsiinin makuainetta.

Ruiskeina annettaviksi tarkoitetut steriilit seokset voidaan valmistaa tavanomaisilla farmaseuttisilla menetelmillä liuottamalla tai suspendoimalla vaikuttava aine kantimeen kuten ruiskeisiin sopivaan veteen tai luonnossa esiintyvään kasviöljyyn kuten seesamiöljyyn, kookosöljyyn, maapähkinäöl-jyyn, pellavansiemenöljyyn jne.

Terapeuttiset vertailukokeet Määritettiin keksinnön mukaisesti esimerkissä 13 valmistetun yhdisteen ja tunnetun "Captopril"-yhdisteen inhiboiva vaikutus kaniinin keuhkosta eristettyyn augiotensiiniä muuttavaan entsyymiin sekä inhiboiva vaikutus augiotensiiniä I muuttavaan entsyymiin (ACE) marsun sykkyräsuolessa in vitro.

Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.

10 69834

Yhdiste Rakenne Aktiviteetti Aktiviteetti

Kaniinin keuhko Marsun sykky-ACE I_mM räsuoli ECcrimM

_______________i>(J_50 CH,

Vertailu ; 3 I ; "Captopril" HSCH2CHCO-N___1-COOH 20 20 S-C,HC i 6 5

Kek.muk. \ esimerkistä HSCH2CHCO-N_______l-COOH 8 3 13

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä ja edustavat edullisia toteutustapoja. Ne ovat myös malleja muiden ryhmän yhdisteiden valmistukselle, jotka voidaan valmistaa korvaamalla annetut reagoivat aineet sopivasti substituoiduilla analogeilla. Kaikki lämpötilat on annettu Celsius-asteina.

Esimerkki 1 1-(3-asetyylitio-l-oksopropyyli)-trans-4-metoksi-L-proliini a) N-asetyyli-trans-4-hydroksi-L-proliini Sekoitettuun suspensioon, jossa on 26,2 g (0,2 moolia) trans-4-hydroksi-L-proliinia 400 ml:ssa etikkahappoa, lisätään 26 ml etikkahapon anhydridiä. Kiinteä aine liukenee vähitellen, kun sekoitetaan 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Liuos siirretään 2 litran kolviin ja liuotin haihdutetaan kiertohaihdut-timessa 45 °C hauteessa. Kun siirappimainen jäännös (57,5 g) laimennetaan 100 ml:lla eetteriä, saadaan kiteinen kiinteä aine. Seosta pidetään jäähdytyksessä yön yli, kiinteä aine suodatetaan, pestään kylmällä eetterillä ja kuivataan eksi-kaattorissa. Kun tämä materiaali (35,7 g) hienonnetaan jauheeksi ja suspendoidaan 100 ml:aan eetteriä, jäähdytetään ja suodatetaan, saadaan 33,8 g (98 %) N-asetyyli-trans-4-hydrok-si-L-proliinia, 128 - 131 °C. Kun 0,5 g tätä materiaalia uu-delleenkiteytetään 5 ml:sta asetonitriiliä, saadaan 0,45 g väritöntä kiinteätä ainetta, sp. 130 - 132 °, -92°

II

69834 (c 1 % etanolissa).

b) N-asetyyli-trans-4-metoksi-L-proliinin metyylieste-ri

Seos, jossa on 30,0 g (0,17 moolia) N-asetyyli-trans-4-hydroksi-L-proliinia ja 130 g hopeaoksidia jauhetaan huhmaressa hienoksi seokseksi ja lisätään asetonin kanssa (300 ml) 1 litran kolviin. Sekoitettuun suspensioon lisätään pienissä erissä yhteensä 130 ml metyylijodidia ja seoksen lämpötila pidetään alle 40 °C:ssa kylmällä vesihauteella jäähdyttämällä. Seosta sekoitetaan 7 tuntia ja sen jälkeen sen annetaan seisoa yön yli. Kun kiinteä aine suodatetaan pois, pestään asetonilla ja suodos haihdutetaan kiertohaihduttimessa, saadaan 38,3 g siirappimaista jäännöstä. Kun tämä liuotetaan uudelleen 350 ml:aan asetonia ja käsitellään vielä 130 g:11a hopeaoksidia ja 130 ml:11a metyylijodidia, saadaan 41 g jäännöstä. Kun jäännös tislataan, saadaan 32,2 g tislettä, kp. 130 - 140 °C (0,3 mm). Kun digeroidaan 30 ml:aan sykloheksaania ja jäähdytetään, saadaan 31,4 g N-asetyyli-trans-4-metoksi-L-prolii-nin metyyliesteriä lähes värittömänä kiinteänä aineena, sp.

71 - 75 °C. Kun uudelleenkiteytetään 31 ml:sta etyyliasetaattia, saadaan 25,1 g (66 %) väritöntä kiinteätä ainetta, sp.

76 - 77 °C, ^<7^ -83° (c, 1 % etanolissa).

c) trans-4-metoksi-L-proliini

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 27,0 g (0,085 moolia) bariumhydroksidioktahydraattia 525 ml:ssa vettä (n. 3,3 N), lisätään 11,0 g (0,05 moolia) N-asetyyli-trans-4-metoksi-L-proliinin metyyliesteriä. Saatua liuosta sekoitetaan 18 -20 °C:ssa 3 tuntia, jäähdytetään ja käsitellään laimealla rikkihapolla (8,85 g väkevää rikkihappoa 20 ml:ssa vettä). Happaman suspension annetaan seisoa yön yli. Kun seos suodatetaan paksun "Celite"-kerroksen läpi, saadaan maitomainen suodos.

Kun suodos väkevöidään kiertohaihduttimessa 50 °C:ssa käyttäen korkeavakuumipumppua, saadaan maitomainen jäännös, jonka paino on 121 g. Tähän materiaaliin lisätään laimeata rikkihappoa (19,0 g väkevää rikkihappoa 75 mlrssa vettä) ja palautusjäähdytetään 3 tuntia samalla sekoittaen. Seos jäähdytetään 30 °C:een ja sen jälkeen lisätään pienissä erissä kaikkiaan 48 g barium- 12 69834 hydroksidicktahydraattia ja sen jälkeen pH säädetään laimealla rikkihapolla välille 6,0 - 4,0. Seoksen annetaan seisoa yön yli ja sen jälkeen se suodatetaan paksun "Celite"-kerroksen läpi. Kun maitomainen suodos väkevöidään samoin kuin edellä, saadaan 50 g väritöntä kuivaa jäännöstä. Jäännös digeroi-daan 200 ml :11a kuumaa kloroformia ja bariumsulfaatti poistetaan suodattamalla "Celite"-kerroksen läpi. Kun hieman samea suodos väkevöidään kiertohaihduttimessa, saadaan hyytelömäi-nen materiaali (17,7 g), joka suspendoidaan 100 ml:aan eetteriä ja suodatetaan niin, että saadaan 7,5 g (94 %) lähes väritöntä kiinteätä ainetta, sp. 185 - 190 °C (hajoaa). Kun tämä materiaali suspendoidaan 30 ml:aan lämmintä asetonitriiliä, jäähdytetään ja suodatetaan, saadaan trans-4-metoksi-L-prolii-nia värittömänä kiinteänä aineena (4,0 g, 50 %), sp. 209 -211 ° (hajoaa), -75° (c, 1 % etanolissa).

d) 1-(3-asetyylitio-l-oksopropyyli)-trans-4-metoksi-L-proliini

Liuos, jossa on 3,5 g (0,024 moolia) trans-4-metoksi-L-proliinia 50 ml:ssa vettä jäähdytetään 5 °C:een samalla sekoittaen ja sen jälkeen lisätään 3 g natriumkarbonaattia. Tähän seokseen lisätään 10 minuutin kuluessa liuos, jossa on 4,0 g (0,024 moolia) 3-asetyylitiopropionyylikloridia 5 ml:ssa eetteriä, ja samanaikaisesti lisätään 3 g natriumkarbonaattia niin, että pH pysyy noin arvossa 8,0. Seosta sekoitetaan jää-hauteella vielä 1 tunti ja sen jälkeen lisätään ensin 25 ml vettä ja sen jälkeen liuos, jossa on 5 ml väkevää suolahappoa 25 ml:ssa vettä (vapautuu hiilidioksidia). Voimakkaasti hapan liuos kyllästetään natriumkloridilla ja uutetaan neljä kertaa 50 ml:11a etyyliasetaattia. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 6,0 g (90 %) väritöntä siirappimaista 1-(3-asetyylitio-l-oksopropyyli) -trans-4-metoksi-L-proliinia. Kun tämä happo liuotetaan 25 ml:aan etyyliasetaattia ja lisätään 4,7 g di-sykloheksyyliamiinia, saadaan liuos, joka kiinteytyy nopeasti. Kun lisätään 15 ml etyyliasetaattia ja seos digeroidaan höyryhauteella, jäähdytetään ja suodatetaan, saadaan 8,7 g disykloheksyyliamiinisuolaa, sp. 170 - 172 °. Kun kiteytetään 13 69834 60 ml:sta asetonitriiliä, saadaan 8,3 g (75 %) väritöntä kiinteätä ainetta, sp. 171 - 173 °C, -35° (c, 1 % etanolis sa) .

Disykloheksyyliamiinisuola muunnetaan 1-(3-asetyyli-tio-l-oksopropyyli)-trans-4-metoksi-L-proliiniksi siten, että 8,0 g suspendoidaan 60 ml:aan jäähauteella jäähdytettyä etyyliasetaattia ja lisätään pienissä erissä kaikkiaan 60 ml 10 % kaliumbisulfaattia. Kirkkaat kerrokset erotetaan ja vesikerros uutetaan kaksi kertaa 60 mlrssa etyyliasetaattia. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 4,6 g (80 %) väritöntä siirappia .

Esimerkki 2 1-(3-merkapto-l-oksopropyyli)-trans-4-metoksi-L-prolii- ni

Esimerkissä 1 saatuun 1-(3-asetyylitio-l-oksopropyyli)-trans-4-metoksi-L-proliiniin (4,6 g, 0,017 mooli) lisätään kylmä liuos, jossa on 9 ml väkevää ammoniakkia 22 ml:ssa vettä. Emäs liukenee noin 30 minuutissa ja näin saadun liuoksen annetaan seisoa (argonatmosfäärissä) 2 tuntia huoneenlämpötilassa. Tämä liuos jäähdytetään, uutetaan kaksi kertaa 25 ml:11a etyyliasetaattia ja etyyliasetaattiuute heitetään pois. Liuos kerrostetaan vielä 25 ml:11a etyyliasetaattia ja tehdään happamaksi 17 ml:lla suolahappoa (1:1). Seosta ravistellaan, erotetaan ja vesifaasi uutetaan kolme kertaa 25 ml:11a etyyliasetaattia. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin poistetaan kiertohaihduttimessa, saadaan 2,3 g (59 %) väritöntä siirappia, 1-(3-merkapto-l-oksopropyyli) -trans-4-metoksi-L-proliinia värittömänä siirappina, 25 o /ö<_7d -60 (c, 1 % etanolissa), 0,49 (metanoli silikagee- lissä, tehty näkyväksi nitroprussidi-reagenssilla).

Analyysi CgH^^NO^S · 1/4 I^O

laskettu: C 45,46 H 6,57 N 5,87 N 5,87 S 13,48 löydetty: C 45,42 H 6,78 N 5,96 S 13,27.

Tuotetta saadaan vielä 1,1 g (kaikkiaan 3,4 g, 87 %), kun vesifaasi kyllästetään natriumkloridilla ja uutetaan kaksi kertaa 25 ml:11a etyyliasetaattia.

14 69834

Natriumsuola saadaan käsittelemällä siirappi natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja kylmäkuivaamalla.

Esimerkki 3 trans-l-/T>-3- (asetyylitio) -2-metyyli-l-oksopropyyli_7- 4-metoksi-L-proliini

Liuos, jossa on 4,3 g (0,029 moolia) trans-4-metoksi-L-proliinia 50 ml:ssa vettä, sekoitetaan ja jäähdytetään 5 °C:een ja lisätään 3 g natriumkarbonaattia. Tähän liuokseen lisätään 10 minuutin kuluessa 5,2 g (0,029 moolia) D-3-(ase-tyylitio)-2-metyylipropionyylikloridia 5 ml:ssa eetteriä ja samanaikaisesti lisätään 3 g natriumkarbonaattia niin, että pH pysyy noin arvossa 8,0. Tätä seosta sekoitetaan jäähautees-sa noin 1,5 tuntia, lisätään 25 ml vettä ja sen jälkeen 6 ml väkevää suolahappoa 25 ml:ssa vettä (hiilidioksidia vapautuu). Näin saatu voimakkaasti hapan liuos uutetaan 50 ml :11a etyyliasetaattia neljä kertaa. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 6,1 g trans-l-/D-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyy-li_/-4-metoksi-L-proliinia vaaleankeltaisena siirappimaisena jäännöksenä. Tämä happo liuotetaan 50 ml:aan etyyliasetaattia ja sen jälkeen lisätään liuos, jossa on 4,0 g disykloheksyy-liamiinia 20 ml:ssa etyyliasetaattia. Tuote alkaa kiteytyä liuoksesta noin minuutin kuluessa. Kun seos pidetään jäähdytyksessä yön yli, lähes väritön kiinteä aine suodatetaan talteen ja kuivataan, saadaan 6,7 g tuotetta, sp. 175 - 177 °C, -55° (c, 1 % etanolissa). Kun kiteytetään 50 ml:sta asetonitriiliä, saadaan 5,6 g lähes väritöntä kiinteätä di-sykloheksyyliamiinisuolaa (41 %), sp. 179 - 181 °C, C'^1^ -62° (c, 1 % etanolissa).

Disykloheksyyliamiinisuola muunnetaan hapoksi siten, että 5,5 g suspendoidaan 50 ml:aan etyyliasetaattia, jäähdytetään jäähauteelia ja lisätään 50 ml 10 % kaliumbisulfaattia. Kerrokset erotetaan ja vesiosa uutetaan kaksi kertaa 50 ml:11a etyyliasetaattia. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 3,4 g (41 %) trans-l-^D-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopro-pyyli7-4-metoksi-L-proliinia lähes värittömänä siirappina.

li 15 69834

Esimerkki 4

Trans-4-metoksi-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-1-oksopropyy-li)-L-proliini 3,4 g:aan trans-l-/p-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-okso-propyyli7-4-metoksi-L-proliinia lisätään 8 ml väkevää ammoniakkia 20 ml:ssa vettä. Emäs liukenee noin 10 minuutissa ja näin saadun liuoksen annetaan seisoa huoneenlämpötilassa ar-gonatmosfäärissä 2 tuntia. Tämä liuos jäähdytetään, uutetaan 20 ml:lla etyyliasetaattia 2 kertaa, kerrostetaan 20 ml:lla etyyliasetaattia ja tehdään happamaksi 15 ml:11a suolahappoa (1:1). Tämä seos kyllästetään natriumkloridilla, kerrokset erotetaan ja vesifaasi uutetaan kolme kertaa 20 ml :11a etyyliasetaattia. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSC>4) , suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 2,9 g (100 %) lähes väritöntä trans-4-metoksi-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-L-proliinia, C^J q -80 (c, 1 % etanolissa), 0,53 (metanolissa silikageelillä, tehty näkyväksi nitro-prussidireagenssilla).

Analyysi C10H17NC>4S . 1/4 H20 laskettu: C 47,69 H 6,83 N 5,56 S 12,73 löydetty: C 47,90 H 6,84 N 5,85 S 12,76.

Esimerkki 5 trans-l-Z.D-3- (asetyylitio) -2-metyyli-l-oksopropyyli7“ 4-etoksi-L-proliini

Kun noudatetaan esimerkin 3 mukaista menetelmää, mutta korvataan trans-4-metoksi-L-proliini trans-4-etoksi-L-prolii-nilla (J.Med.Chem., 10, 1161 (1967)), saadaan trans-l-/D-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli/-4-etoksi-L-proliini. Tuote puhdistetaan disykloheksyyliamiinisuolana, sp. 170 -172 °C (kiteytetty isopropyylialkoholista) , -64° (c, 1 % etanolissa).

Kun tämä suola (7,75 g) muunnetaan vapaaksi hapoksi käsittelemällä kaliumbisulfaattiliuoksella esimerkissä 4 kuvatulla tavalla, saadaan 4,85 g trans-l-/D-3-(asetyylitio)- 2-metyyli-l-oksopropyyli7-4-etoksi-L-proliinia lähes värittömänä siirappina.

16 69834

Esimerkki 6 trans-4-etoksi-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyy-li)-L-proliini

Esimerkissä 5 saatuun materiaaliin (4,85 g) lisätään kylmä liuos, jossa on 9 ml väkevää ammoniakkia 22 ml:ssa vettä (argonatmosfäärissä). Kun seos käsitellään samoin kuin esimerkissä 4, saadaan 4,2 g (100 %) trans-4-etoksi-l-(D-3-mer- kapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-L-proliinia lähes värittömänä n _25 o siirappina, -80 (c, 1 % etanolissa), 0,64 (metano- lissa silikageelillä, tehty näkyväksi nitroprussidireagens-silla).

Analyysi C^H^gNO^S

laskettu: C 50,55 H 7,33 N 5,36 S 12,27 löydetty: C 50,34 H 7,34 N 5,39 S 12,11 Esimerkki 7 cis-l-^.D-3- (asetyylitio) -2-metyyli-l-oksopropyyli7-4-metoksi-L-proliini a) N-karbobentsyylioksi-cis-4-hydroksi-L-proliini Kun 10 g (0,038 moolia) N-karbobentsyylioksi-4-keto- L-proliinia liuotetaan 300 ml:aan metanolia ja pelkistetään julkaisussa JACS 79,189 (1957) kuvatulla tavalla liuoksella, jossa on 5,8 g (0,15 moolia) natriumboorihydridiä 20 ml:ssa vettä, saadaan 8,7 g vaahtomaista tuotetta. Tämä materiaali liuotetaan 30 ml:aan etanolia, käsitellään 3,5 g:lla syklo-heksyyliamiinia, joka on liuotettu pieneen määrään etanolia, ja laimennetaan 500 ml:ksi eetterillä. Kun ympätään ja hierretään, kiteinen sykloheksyyliamiinisuola erottuu nopeasti ja saadaan 10,8 g tuotetta, sp. 163 - 165 °. Kun tämä sykloheksyyliamiinisuola käsitellään sen jälkeen 30 ml :11a 2N suolahappoa ja uutetaan etyyliasetaatilla (4 x 50 ml), saadaan 8 g N-karbobentsyylioksi-cis-4-hydroksi-L-proliinia lasimaisena aineena.

b) N-karbobentsyylioksi-cis-4-metoksi-L-proliinin me-tyyliesteri

Kun N-karbobentsyylioksi-cis-4-hydroksi-L-proliini (13,9 g, 0,052 moolia) käsitellään 40 g:lla hopeaoksidia ja 40 ml:11a metyylijodidia (2 kertaa) asetonissa (ensin 100 ml, n 17 69834 sitten 120 ml) esimerkissä 1(b) kuvatulla tavalla, saadaan 17,5 g (100 %) N-karbobentsyylioksi-cis-4-metoksi-L-proliinin metyyliesteriä keltaisena öljynä.

c) N-karbobentsyylioksi-cis-4-metoksi-L-proliini

Liuokseen, jossa on 17,5 g (n. 0,052 moolia) N-karbo- bentsyylioksi-cis-4-metoksi-L-proliinin metyyliesteriä 135 ml:ssa metanolia, lisätään tipoittain välillä -1 - +4 °C 32 ml (0,064 moolia) 2N natriumhydroksidia ja näin saatua seosta pidetään 1 tunti 0 °C:ssa ja yön yli huoneenlämpötilassa. Noin puolet liuottimesta poistetaan kiertohaihduttimessa, liuos laimennetaan 300 ml:11a vettä, pestään eetterillä (pesuliuos heitetään pois), pH säädetään 12,5 ml:11a suolahappoa (1:1) arvoon 2 samalla jäähdyttäen ja uutetaan etyyliasetaatilla ( 4 x 150 ml). Kun uutteet yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 15 g oranssinkeltaista siirappia. Siirappi liuotetaan 60 ml:aan etanolia, lisätään liuos, jossa on 6 g sykloheksyyliamiinia 10 ml:ssa etanolia, ja laimennetaan 900 ml :11a eetteriä. Kun ympätään ja hierretään, erottuu kiteinen N-karbobentsyylioksi-cis-4-metoksi-L-prolii-nin sykloheksyyliamiinisuola, jonka paino on 10,2 g, kun on jäähdytetty yön ajan, sp. 148 - 150 ° (jähmettymispiste 144 °), 2 6 Z°S7D -35u (c, 1 % etanolissa). Kun uudelleenkiteytetään 40 ml:sta asetonitriiliä, saadaan 8,8 g lähes väritöntä kiinteätä ainetta, sp. 150 - 152 ° (jähmettymispiste 145 °), Ζ/ΚΖρ6 -34° (c, 1 % etanolissa).

Kun sykloheksyyliamiinisuola käsitellään suolahapolla, saadaan 6,9 g (48 %) N-karbobentsyylioksi-cis-4-metoksi-L-proliinia vaaleankeltaisena viskoosina siirappina, -32° (c, 1 % etanolissa).

d) cis-4-metoksi-L-proliini

Seos, jossa on 6,8 g N-karbobentsyylioksi-cis-4-metok-si-L-proliinia, 210 ml metanoli-vesiseosta (2:1) ja 2,3 g 5 % Pd-C, laitetaan 4 tunniksi hydrauslaitteeseen 294 kPa vetypai-neessa. Kun seoksesta suodatetaan katalyytti pois ja suodos haihdutetaan, saadaan 3,15 g ruskehtavaa kiinteätä ainetta, sp. 218 - 220 ° (hajoaa). Kun näyte kiteytetään metanoli-eet-teriseoksesta, saadaan väritöntä cis-4-metoksi-L-proliinia, 18 69834 sp. 224 - 226 ° (hajoaa), -42° (c, 1 % metanolissa).

Analyysi CgH^NO^ laskettu: C 49,64 H 7,64 N 9,65 löydetty: C 49,63 H 7,71 N 9,54 e) cis-l-^D-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-4-metoksi-L-proliini

Cis-4-metoksi-L-proliini (3 g, 0,021 moolia) ja seos, jossa on 4,2 g (0,023 moolia) D-3-asetyylitio-2-metyylipro-pionyylikloridia 5 ml:ssa eetteriä, saatetaan reaktioon keskenään 60 ml:ssa vettä natriumbikarbonaatin läsnäollessa esimerkissä 3 kuvatulla tavalla. Tarvitaan noin 20 ml 25 % (pai-no/tilav.) natriumbikarbonaattiliuosta, jotta pH saadaan aluksi arvoon 8,5 ja sen jälkeen pidetyksi välillä 7,5 - 8,4 asy-loinnin ajan. Saatu epäpuhdas viskoosi tuote (6,4 g) liuotetaan 50 ml:aan etyyliasetaattia ja liuokseen lisätään 3,9 g disykloheksyyliamiinia 20 ml:ssa etyyliasetaattia. Kun liuoksesta kiteytynyt tuote suodatetaan talteen ja kuivataan, saadaan 6,6 g disykloheksyyliamiinisuolaa, sp. 172 - 174 ° (jäh-mettymispiste 170 °) , /3^7^ -60° (c, 1 % etanolissa) . Kun 6.5 g tätä materiaalia uudelleenkiteytetään 35 ml:sta aseto-nitriiliä, saadaan 6 g väritöntä kiinteätä disykloheksyyliamiinisuolaa, sp. 173 - 175 ° (jähmettymispiste 170 °), (^ -60° (c, 1 % etanolissa).

Analyysi ci2Hi9N05S·ci2H23N

laskettu: C 61,24 H 9,00 N 5,95 S 6,81 löydetty: C 61,16 H 8,81 N 5,95 S 6,67.

Esimerkin 3 mukaista menetelmää noudattamalla disyklo-heksyyliamiinisuola muunnetaan hapoksi suspendoimalla 5,9 g suolaa 60 ml:aan etyyliasetaattia, jäähdyttämällä jäähauteel-la ja käsittelemällä 60 ml :11a 10 % kaliumbisulfaattia. Kerrokset erotetaan ja vesifaasi uutetaan neljä kertaa 50 ml:11a etyyliasetaattia. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 3.5 g (60 %) väritöntä cis-l-ZP-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7~4-metoksi-L-proliinia, sp. 90 - 92 ° (hierretty eetterillä), Zp<7q^ -139° (c, 1 % etanolissa), 0,63 (metanolissa silikageelillä).

li 19 69834

Analyysi ci2Hi9N05S

laskettu: C 49,81 H 6,62 N 4,84 löydetty: C 49,85 H 6,66 N 4,97.

Esimerkki 8 cis-4-metoksi-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-1-oksopropyy-li)-L-proliini

Kun cis-l-Zp-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-4-metoksi-L-proliini (2,9 g, 0,01 moolia) hydrolysoidaan esimerkissä 4 kuvatulla tavalla 15 ml:ssa vettä, joka sisältää 6,5 ml väkevää ammoniakkia, saadaan 2,3 g (93 %) erittäin viskoosia cis-4-metoksi-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopro-pyyli)-L-proliinia, joka muuttuu vahamaiseksi seisoessaan, -88° (c, 1 % etanolissa).

Esimerkki 8a cis-4-metoksi-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-L-proliinin 1 adamantaaniamiinisuola ,

Kun liuokseen, jossa on 0,55 g (0,0022 moolia) cis-4-metoksi-1-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-L-proliinia 15 ml:ssa etyyliasetaattia, lisätään argonatmosfäärissä lämmin liuos, jossa on 0,34 g (0,0022 moolia) 1-adamantaaniamii-nia 10 ml:ssa etyyliasetaattia, suola saostuu. Kun seosta pidettiin 3 tuntia kylmässä, väritön kiinteä aine suodatetaan talteen argonatmosfäärissä (liuotin irtoaa vaivalloisesti), pestään pienellä määrällä kylmää etyyliasetaattia ja kuivataan vakuumissa 20 tunnin ajan, saadaan 0,7 g (79 %) cis-4-metoksi-1-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-L-proliinin 1-adamantaaniamiinisuolaa, sp. 215 - 217 ° (jähmettymispiste 210 °, hajoaa 220 °C:ssa), -60 (c, 1 % metanolissa) .

Esimerkki 9 trans-l~ZT>-3- (asetyylitio) -2-metyyli-l-oksopropyyli7-4-propoksi-L-proliini a) N-asetyyli-trans-4-propoksi-L-proliinin propyylies-teri

Kun 30 g N-asetyyli-trans-4-hydroksi-L-proliinia esimerkistä 1(a) saatetaan reaktioon hopeaoksidin (110 g) ja pro-pyylijodidin (110 ml) kanssa 300 ml:ssa asetonia esimerkin 1(b) mukaisella tavalla, saadaan 19,6 g (41 %) vaaleankeltais- 20 69834 ta N-asetyyli-trans-4-propoksi-L-proliinin propyyliesteriä, kp. 155 - 165 ° (0,2 mm).

b) N-asetyyli-trans-4-propoksi-L-proliini

Kun liuos, jossa on 6 g (0,15 moolia) natriumhydroksi-dia 150 ml:ssa vettä, lisätään 19,4 g:aan (0,075 moolia) N-asetyyli-trans-4-propoksi-L-proliinin propyyliesteriä, saadaan vaaleanoranssi liuos. Liuoksen annetaan seisoa huoneenlämpötilassa yön yli, sen jälkeen uutetaan 60 ml:11a etyyliasetaattia (pesuliuos heitetään pois), sitten tehdään happamaksi suolahapolla (1:1), sitten kyllästetään natriumklori-dilla ja uutetaan kolme kertaa 50 ml:11a kloroformia. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 12,6 g ruskeata öljyä, öljy liuotetaan 80 mlraan etyyliasetaattia ja lisätään liuos, jossa on 10,7 g disykloheksyyliamiinia 20 ml:ssa etyyliasetaattia. Suola kiteytyy huoneenlämpötilassa. Kun seoksen annetaan seistä yön yli jäähdytyksessä ja sen jälkeen disykloheksyyliamii-nisuola suodatetaan talteen ja pestään kylmällä etyyliasetaatilla, saadaan 17,3 g lähes väritöntä kiinteätä disykloheksyy-liamiinisuolaa, sp. 148 - 153 °C. Kun tämä materiaali uudelleen-kiteytetään 125 ml:sta etyyliasetaattia, saadaan 14,5 g väritöntä disykloheksyyliamiinisuolaa, sp. 157 - 159 °, -30° (c, 1 % etanolissa).

Analyysi C^qH^NO^· C12H23N

laskettu: C 66,63 H 10,17 N 7,07 löydetty: C 66,47 H 10,22 N 7,06.

Disykloheksyyliamiinisuola (14,4 g) muunnetaan vapaaksi hapoksi siten, että suola hienonnetaan ensin jauheeksi, sitten suspendoidaan 100 ml:aan etyyliasetaattia ja suspensio käsitellään pienissä erissä kaikkiaan 100 ml:11a 10 % kaliumbi-sulfaattia. Orgaaninen faasi erotetaan ja vesifaasi uutetaan kaksi kertaa 100 ml:11a etyyliasetaattia. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 6,7 g (41 %) N-asetyyli-trans-4-propoksi-L-proliinia vaaleanruskeana nestemäisenä aineena.

c) trans-l-£D-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-4-propoksi-L-proliini li 21 69834 N-asetyyli-trans-4-propoksi-L-proliiniin (6,4 g, 0,03 moolia) lisätään liuos, jossa on 10 g väkevää rikkihappoa 100 ml:ssa vettä, ja näin saatua liuosta palautusjäähdytetään 3 tuntia samalla sekoittaen. Sitten liuos jäähdytetään 15 °C:een, lisätään pienissä erissä 12 g natriumkarbonaattia niin, että pH saa arvon 8,0, sen jälkeen lisätään 10 minuutin kuluessa liuos, jossa on 5,4 g (0,03 moolia) D-3-asetyylitio-2-metyy-lipropionyylikloridia 5 ml:ssa eetteriä, ja samanaikaisesti lisätään 7 g natriumkarbonaattia niin, että pH pysyy noin arvossa 8,0. Sen jälkeen seosta sekoitetaan jäähauteella 30 minuuttia ja huoneenlämpötilassa 1 tunti. Kun tuote sen jälkeen erotetaan ja puhdistetaan disykloheksyyliamiinisuolana esimerkin 3 mukaisella menetelmällä, saadaan 6,3 g tuotetta, sp.

165 - 167 ° (asetonitriilistä) , -56° (c, 1 % etanolis sa) .

Analyysi: C^H^NOgS-C^H^N

laskettu: C 62,62 H 9,30 N 5,61 S 6,43 löydetty: C 62,35 H 9,48 N 5,88 S 6,45. Disykloheksyyliamiinisuola (6,1 g) muunnetaan vapaaksi hapoksi siten, että suola suspendoidaan 60 ml:aan etyyliasetaattia, jäähdytetään jäähauteella ja lisätään 60 ml 10 % ka-liumbisulfaattia. Kerrokset erotetaan ja vesifaasi uutetaan kaksi kertaa 60 ml:11a etyyliasetaattia. Kun orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan (MgSO^), suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan 4,0 g (42 %) trans-1-/TD-3- (asetyylitio) -2-metyyli-l-oksopropyyli7-4-propoksi-L-proliinia lähes värittömänä siirappina.

Esimerkki 10 1-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-trans-4-pro-poksi-L-proliini

Kun hydrolysoidaan 4,0 g trans-l-/"D-3- (asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli/-4-propoksi-L-proliinia esimerkin 4 mukaisella tavalla liuoksella, jossa on 8 ml väkevää ammoniakkia 20 mlrssa vettä, saadaan 3,42 g (97 %) 1-(D-3-merkapto- 2-metyyli-l-oksopropyyli)-trans-4-propoksi-L-proliinia lähes värittömänä siirappina, (p^J^ -72 (c, 1 % etanolissa).

69834 22

Analyysi C12H2NC>4S 1/4 H20 laskettu: C 51,49 H 7,74 N 5,05 S 11,46 löydetty: C 51,66 H 7,76 N 5,94 S 10,51.

Esimerkki 11 cis-4-(4-fluorifenoksi)-1-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-L-proliini a) cis-4-(4-fluorifenoksi)-L-proliini

Liuokseen, jossa on 8,4 g (0,024 moolia) N-karbobents-oksi-trans-4-hydroksi-L-proliinin bentsyyliesteriä (Baer et ai., Can.J. Biochem. & Phys., 37, 583 (1959)). 4,0 g (0,036 moolia) 4-fluorifenolia ja 9,27 g (0,036 moolia) trifenyyli-fosfiinia 75 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, lisätään tipoittaan tunnin kuluessa 6,2 g (0,036 moolia) dietyyliatso-dikarboksylaattia 25 ml:ssa tetrahydrofuraania. Liuosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa yön ajan. Sitten seos haihdutetaan kuiviin ja jäännökseen lisätään 100 ml eetteriä. Tri-fenyylifosfiinin ja dietyyliatsodikarboksylaatin muodostama sakka suodatetaan pois. Pylväskromatografisessa erotuksessa (silikageeli) saadaan 8,1 g seosta, joka sisältää noin 70 % N-karbobentsoksi-cis-4-(4-fluorifenoksi)-L-proliinin bentsyyliesteriä.

7,5 g edellä saatua seosta sisältävä liuos hydrataan 98 kPa paineessa (huoneenlämpötila) käyttäen katalyyttinä 0,8 g 10 % Pd/C. Reaktion kuluessa muodostuu valkoinen sakka. Kun vedyn imeytyminen on lakannut, seos suodatetaan ja sakka-kakku uutetaan kolme kertaa 125 ml:11a kuumaa metanolia. Kun metanoliliuos haihdutetaan kuiviin, saadaan 3,2 g cis-4-(4-fluorifenoksi)-L-proliinia, sp. 235 - 236 °.

Analyysi C^^H^2FNO^·1/3 H20 laskettu: C 57,14 H 5,48 N 6,06 F 8,22 löydetty: C 56,94 H 5,19 N 5,94 F 7,97.

b) 1-/T5-3- (asetyylitio) -2-metyyli-l-oksopropyyli7-cis-4-(4-fluorifenoksi)-L-proliini

Huoneenlämpötilassa olevaan liuokseen, jossa on 2,25 g (0,01 moolia) cis-4-(4-fluorifenoksi)-L-proliinia 125 ml:ssa

II

23 6 9 8 3 4 kuivaa pyridiiniä, lisätään 1,0 g (0,01 moolia) trietyyliamiinia ja 2 g (0,11 moolia) D-3-(asetyylitio)-2-metyylipropionyyliklo-ridia. Seosta sekoitetaan yön yli huoneenlämpötilassa ja sen jälkeen se haihdutetaan kuiviin. Jäännös sekoitetaan veteen, peitetään eetterillä ja tehdään happamaksi 10 % suolahapolla.

Kun vesikerros pestään useaan kertaan eetterillä, eetterikerrok-set yhdistetään, pestään vedellä, kuivataan (Na^SO^) ja haihdutetaan kuiviin, saadaan 3,9 g jäännöstä. Kun jäännös kromatogra-foidaan 250 ml:aan silikageeliä eetterillä, saadaan jae, joka sisältää halutun tuotteen. Kun pylväs pestään metanolilla ja pesuliuos kromatografoidaan uudelleen lyhyessä silikageelipyl-väässä, saadaan lisää tuotetta. Kun tämä menettely toistetaan vielä kerran, saadaan 1,2 g puhdasta 1-Zd-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-cis- 4-(4-fluoritenoksi)-L-proliinia.

c) cis-4-(4-fluoritenoksi)-1-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-L-proliini 1,2 g l-/D-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli/-cis-4-(4-fluorifenoksi)-L-proliinia liuotetaan 25 ml:aan meta-nolia ja lisätään 5 ml väkevää ammoniakkia argonatmosfäärissä 40 minuutin kuluessa. Haihtuvat aineosat tislataan pois ja jäännös peitetään etyyliasetaatilla. Vesikerros tehdään happamaksi 10 % suolahapolla. Kerrokset erotetaan ja happokerros pestään etyyliasetaatilla. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset tislataan vedellä (2 x) ja kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella (2 x) ja kuivataan (Na^O^). Kun liuotin tislataan pois, saadaan 1,1 g cis-4-(4-fluorifenoksi)-1-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-okso-propyyli)-L-proliinia.

Analyysi: ,-H^FNO^ . 1/3^0 laskettu: C 54,05 H 5,70 N 4,20 F 5,70 S 9,60 löydetty: C 54,04 H 5,71 N 4,05 F, 5,40 S 9,61. Ohutkerrosanalyysissä tuotteen R^-arvoksi tuli 0,30, kun ilmaisijoina olivat Uv-valo, SH-reagenssi (keltainen täplä) ja vanil- 2 5 o liini (keltainen täplä). -80 (c, 1 % kloroformissa).

24 69834

Esimerkki 12 cis-4-(4-fluorifenyylitio)-l-(D-3-merkapto-2-metyyli- 1-oksopropyyli)-L-proliini

Kun noudatetaan esimerkin 11 menettelyä, mutta kohdassa (a) 4-fluorifenoli korvataan ekvivalenttisella määrällä 4-fluo-rifenyylimerkaptaania, saadaan cis-4-(4-fluorifenyylitio)-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-1-oksopropyyli)-L-proliini. Sp. 242-243° (hajoaa) adanamtaaniamiinisuolana uudelleen kiteytyksen jälkeen eetterillä laimennetusta kloroformi/metanoli-seoksesta (1:1).

-51,8° (c = 0,5 % metanolissa. Vapaa happo ZpC7^ = -42,5° (c = 1 % abs. etanolissa.

Esimerkki 13 1-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-cis-4-fenyyli- tio-L-proliini a) N-karbobentsyylioksi-cis-4-fenyylitio-L-proliinin metyyliesteri 0,85 g (0,037 moolia) natriummetallia liuotetaan 40 ml:aan absoluuttista etanolia. Saatuun liuokseen lisätään samalla sekoittaen ensin 3,7 ml (0,036 moolia) tiofenolia ja sen jälkeen 7,5 g (0,017 moolia) N-karbobentsyylioksi-trans-4-tosyylioksi-L-pro-liinin metyyliesteriä (J.Am.Chem.Soc., 79, 191 (1957)). Jälkimmäinen yhdiste liukenee vähitellen, mutta pian liukenemisen jälkeen erottuu kiinteä tuote. Seosta sekoitetaan 4 tuntia ja sen jälkeen sen annetaan seisoa yön yli huoneenlämpötilassa ja suurin osa etanolista poistetaan kiertohaihduttimessa. Suurimmaksi osaksi kiinteätä jäännöstä sekoitetaan dikloorimetaania (120 ml) ja veden (60 ml) kanssa. Kerrokset erotetaan (emulsioiden rikkomiseksi lisätään hieman metanolia) ja vesifaasi uutetaan dikloorimetäänillä (2 x 60 ml). Kun yhdistetty orgaaninen faasi pestään 100 ml :11a kyllästettyä natriumkloridiliuos-ta, kuivataan (MgSO^) ja liuotin haihdutetaan, saadaan 6,5 g (100 %) N-karbobentsyylioksi-cis-4-fenyylitio-L-proliinin metyyliesteriä vaaleankeltaisena viskoosina öljynä.

Il 25 69834 b) N-karbobentsyylioksi-cis-4-fenyylitio-L-proliini Osassa (a) saatu metyyliesteri (6,5 g, 0,017 moolia) liuotetaan 55 ml:aan metanolia, lisätään pienissä erissä -l-+4°C:ssa 13 ml (0,026 moolia) 2N natriumhydroksidia, sekoitetaan 0°C:ssa 1 tunti ja pidetään huoneenlämpötilassa noin 16 tuntia. Noin puolet liuottimesta haihdutetaan kiertohaihdutti-messa, jäähdytetty liuos laimennetaan 100 ml :11a vettä, pestään 60 ml:11a eetteriä (pesuliuos heitetään pois), kerrostetaan 70 ml:11a etyyliasetaattia, sekoitetaan, jäähdytetään ja tehdään happamaksi 4,8 ml :11a 1:1 suolahappoa. Kerrokset erotetaan, vesifaasi uutetaan etyyliasetaatilla (3 x 40 ml) ja yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivataan (MgSO^) ja haihdutetaan ja saadaan 5,9 g vaaleankeltaista viskoosia öljyä. Öljy liuotetaan 30 ml:aan etanolia, lisätään 1,9 g sykloheksyyliamiinia 3 ml:ssa etanolia ja laimennetaan 330 ml:ksi eetterillä. Ympättäessä erottuu kiteinen sykloheksyyliamiinisuola. Kun seosta jäähdytetään noin 16 tuntia, saadaan 5,3 g tuotetta, sp. 148-151° (jähmettymispiste 135°). Kun tämä materiaali sekoitetaan 1,5 g:aan aikaisemmassa kokeessa saatua tuotetta, sekoitetaan 200 ml:ssa kiehuvaa asetonitriiliä ja jäähdytetään, saadaan 6,3 g väritöntä sykloheksyyliamiinisuolaa, sp. 152-155°C (jähmettymispiste 137°) “29° (c, 1 % etanolissa).

Tämä sykloheksyyliamiinisuola suspendoidaan 25 ml:aan etyyliasetaattia, sekoitetaan ja lisätään 25 ml IN suolahappoa.

Kun muodostuu kaksi kirkasta kerrosta, ne erotetaan ja vesi-faasi uutetaan etyyliasetaatilla (3 x 25 ml). Kun yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivataan (MgSO^) ja liuotin haihdutetaan, saadaan 5,0 g (65 %) N-karbobentsyylioksi-cis-4-fenyylitio-L-proliinia lähes värittömänä, hyvin viskoosina siirappina.

c) cis-4-fenyylitio-L-proliinihydrobromidi N-karbobentsyylioksi-cis-4-fenyylitio-L-proliiniin (4,9 g, 0,014 moolia) lisätään 25 ml bromivedyn etikkahappoliuosta (30-32 %), suljetaan löysästi ja sekoitetaan magneetin avulla.

Kun oranssinkeltainen liuos laimennetaan tunnin kuluttua 2 50 ml :11a eetteriä, tuote saostuu ensin raskaana öljynä, joka vähitellen kiteytyy ympättäessä, raavittaessa ja jäähdytettäessä. Kun seosta sekoitetaan jäähauteella 1 tunti, sakka suodatetaan 26 69834 typpiatmosfäärissä, pestään eetterillä, suspendoidaan tuoreeseen eetteriin, jäähdytetään noin 16 tuntia ja suodatetaan uudelleen, saadaan 3,2 g (77 %) cis-4-fenyylitio-L-proliinihydrobromidia värittömänä kiinteänä aineena, sp. 106-109° (jähmettymispiste 99°), "3° (c, 1 % metanolissa).

d) l-/t>-3- (asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-cis-4-fenyylitio-L-proliini

Kun 3,0 g (0,0094 moolia) cis-4-fenyylitio-L-proliini-hydrobromidia ja 2,0 g (0,011 moolia) D-3-asetyylitio-2-metyyli-propionyylikloridia saatetaan reaktioon keskenään 25 ml:ssa vettä esimerkissä 1(d) kuvatulla tavalla (käyttämällä noin 15 ml natriumkarbonaatin 20 % liuosta pH:n pitämiseksi välillä 8,0-8,4), saadaan 3,8 g vaaleankeltaista viskoosia öljyä. Disykloheksyyli-amiinisuola (valmistettu 30 ml:aan etyyliasetaattia käyttäen 1,8 g disykloheksyyliamiinia) painaa 2,9 g (eristetty kahdessa erässä), sp. 184-188° (jähmettymispiste 180°). Kun hierretään 15 ml:ssa asetonitriiliä, saadaan 2,4 g väritöntä kiinteätä disykloheksyy-liamiinisuolaa, sp. 184-186° (jähmettymispiste 180°), -75° (c, 1 % etanolissa).

Kun tämä disykloheksyyliamiinisuola käsitellään 30 ml:11a 10 % kaliumbisulfaattia ja uutetaan etyyliasetaattiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, saadaan 2,0 g (59 %) lasimaista 1-/D-3(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-cis-4-fenyylitio-L-proliinia.

e) 1-(D-3-merkapto-2-metyyli-1-oksopropyyli)-cis-4-fenyylitio-L-proliini

Kun 1-ZD-3-(asetyylit io)-2-metyyli-1-oksopropyy1i,7-cis-4-fenyylitio-L-proliini (2,0 g, 0,0042 moolia) käsitellään liuoksella, jossa on 3,5 ml väkevää ammoniakkia 8,5 ml:ssa vettä esimerkin 2 mukaisesti (tuotteen kiinteä ammoniumsuola seottuu reaktioseoksesta), saadaan 1,35 g (100 %) viskoosia siirappimaista 1-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-cis-4-fenyylitio-L-proliinia, -43° (c, 1 % etanolissa).

Esimerkki 14 1-(D-3-merkapto-2-metyyli-1-oksopropyy1i)-cis-4-(4-kloorit enyylitio)-L-proliini

Kun noudatetaan esimerkin 13 menettelyä, mutta tiofenoli

II

27 69834 korvataan ekvivalenttisella määrällä 4-kloorifenyylimerkaptaania kohdassa (a), saadaan l-(D-3-merkapto-2-metyyli-oksopropyyli)-cis-4-(4-kloorifenyylitio)-L-proliini.

Sp. 241-242 (hajoaa) adanamtaaniamiinisuolana uudelleen kiteyttämisen jälkeen eetterillä laimennetusta kloroformi/meta-noliseoksesta (1:) - 55,4° (c = 0,5 % metanolissa) vapaa r is happo = -38,1° (c = 1 % abs. etanolissa.

Esimerkki 15 trans-l-(3-merkapto-l-oksopropyyli)-3-metyylitio-D,L- proliini a) 1,2-dehydroproliinin tert.-butyyliesteri Välillä -5 - 0°C pidettyyn sekoitettuun liuokseen, jossa on 34,2 g (0,20 moolia) proliinin tert.-butyyliesteriä 600 ml:ssa eetteriä, lisätään tipoittain 10 minuutin kuluessa 21,7 g (23,9 ml, 0,20 moolia) juuri valmistettua tert.-butyylihypokloriittia (Org. Sym.Coll.Voi. V, 184 (1973)). Lisäyksen aikana lämpötila pidetään välillä -5-0°C. Lisäyksen jälkeen liuosta sekoitetaan tässä lämpötilassa vielä 5 minuuttia.

Voimakkaasti sekoitettuun liuokseen lisätään nopeasti ('V 3-5 min) liuos, jossa on 7,8 g (0,20 moolia) kaliumia juuri tislatussa kuivassa (CaH2) tert.-butanolissa. Lisäyksen jälkeen reaktioseoksen lämpötila on noin 18°. Reaktioastia poistetaan jäähdytyshauteelta ja sekoitetaan 30 minuuttia. Reaktioseos suodatetaan "Celiten" (piimää) läpi ja suodos haihdutetaan vakuumis-sa. Jäännös sekoitetaan eetteriin ja pestään useaan kertaan vedellä. Kun eetteriliuos kuivataan ja väkevöidään vakuumissa, saadaan 31,6 g keltaista nestettä. Kun lisätään hieman hydrokinonia ja epäpuhdas tuote tislataan, saadaan 22,4 g 1,2-dehydropropiinin tert.-butyyliesteriä (66 %), kp. 60-62°/0,l mm.

b) l-bentsyylioksikarbonyyli-4,5-dihydro-lH-pyrroli-2-karboksyylihapon tert.-butyyliesteri

Liuos, jossa on 16,9 g (0,1 moolia) 1,2-dehydropropiinin tert.-butyyliesteriä 70 ml:ssa dikloorimetaania, jäähdytetään -10°C:een argonatmosfäärissä. Siihen lisätään tipoittain 30 minuutin kuluessa liuos, jossa on 14,2 ml (0,1 moolia, kp. 62-64°/ 0,4 mm) juuri tislattua bentsyyliklooriformiaattia 70 ml:ssa dikloorimetaania. Seosta sekoitetaan jäähdytyksen alaisena vielä 28 69834 30 minuuttia ja sen jälkeen siihen lisätään 20 minuutin kuluessa liuos, jossa on 15,22 g (0,1 moolia) 1,5-diatsabisykloZi> · 4 . Q7un-dec-5-eeniä 70 ml:ssa dikloorimetaania. Sen jälkeen jäähdytys-haude poistetaan ja seosta sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa. Kun liuos pestään kahdesti kylmällä laimealla suolahapolla ja kerran kyllästetyllä natriumkarbonaattiliuoksella ja haihdutetaan vakuumissa, saadaan 18,2 g (60 %) 1-bentsyylioksikarbonyy-li-4,5-dihydro-lH-pyrroli-2-karboksyylihapon tert.-butyylieste-riä vaaleankeltaisena öljynä.

c) trans-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-metyylitio-D,L-pro-liinin tert.-butyyliesteri

Liuokseen, jossa on 18,2 g (0,06 moolia) 1-bentsyylioksi-karbonyyli-4,5-dihydro-lH-pyrroli-2-karboksyylihapon tert.-bu-tyyliesteriä 180 ml:ssa kuivaa metanolia, lisätään 3,24 g (0,06 moolia) natriummetoksidia ja jäähdytetään jäähauteella. Liuoksen annetaan kuplia metaanitiolia hitaasti 30 minuutin ajan.

Seosta sekoitetaan yön yli argonatmosfäärissä huoneenlämpötilassa. Lisätään laimeata etikkahapon vesiliuosta, kunnes liuos on hieman hapanta. Liuoksen läpi annetaan kuplia argonia tunnin ajan ja sen jälkeen se haihdutetaan lähes kuiviin vakuumissa. Kun jäännökseen lisätään etyyliasetaattia ja liuos pestään kahdesti kyllästetyllä natriumkarbonaattiliuoksella, kuivataan ja liuotin haihdutetaan pois vakuumissa, saadaan 17 g keltaista öljyä. Kun öljy kromatografoidaan käyttämällä 300 g silikageeliä ja petroli-eetteri-eetteriseosta (4:1), saadaan 11,1 g trans-l-bentsyylioksi-karbonyyli-3-metyylitio-D,L-proliinia värittömänä öljynä.

d) trans-3-metyylitio-D,L-proliini 8,4 g (0,024 moolia) trans-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-metyylitio-D,L-proliinia käsitellään 45 ml:11a 4N bromivetyhap-poa etikkahapossa. Seosta sekoitetaan 1 tunti huoneelämpötilassa ja sen jälkeen se kuivataan vakuumissa. Lisätään pieni määrä vettä ja pestään kahdesti eetterillä. Liuos kaadetaan pylvääseen, josa on 300 ml ioninvaihtohartsia ja vettä lasketaan läpi, kunnes eluaatti ei ole enää hapanta. Sen jälkeen tuote eluoidaan puskurilla pH 6,5 (pyridiini-asetaattivesiliuos). Kun ninhydrii-nille positiiviset jakeet yhdistetään ja lycf ilisoidaan, saadaan 3,4 g (88 %) valkoista höytyvää. Kun tästä materiaalista otettu 29 6 9 8 3 4 näyte kiteytetään metanolista, saadaan trans-3-metyylitio-D,L-proliini, sp. 196-200° (haj.) (jähmettymispiste 192°).

Analyysi CgH^^O^NS

laskettu: C 44,70 H 6,88 N 8,69 S 19,89 löydetty: C 44,53 H 7,10 N 8,61 S 19,95.

e) trans-l-/3-(asetyylitio) -l-oksopropyyliJ7-3-metyylitio-D,L-proliini 3.05 g (0,019 moolia) trans-3-metyylitio-D,L-proliinia liuotetaan 19 ml:aan IN natriumkarbonaattia ja laimennetaan 10 ml :11a vettä. Liuos jäähdytetään jäähauteella ja siihen lisätään samalla nopeasti sekoittaen liuos, jossa on 3-asetyyli-tiopropionyylikloridia 20 ml:ssa eetteriä. pH pidetään arvossa 8 lisäämällä IN natriumkarbonaattiliuosta. 30 minuutin kuluttua pH pysyy vakiona, kun 45 ml natriumkarbonaattiliuosta on lisätty. Kerrokset erotetaan ja vesikerros pestään kerran eetterillä. Kun vesikerros tehdään sen jälkeen happamaksi 10 % natriumbisulfaattiliuoksella ja tuote uutetaan etyyliasetaattiin, kuivataan ja liuotin haihdutetaan vakuumissa, saadaan 5,2 g öljyä. Tämä materiaali kromatografoidaan 150 g:ssa silikageeliä käyttämällä eluointiin etyyliasetaattia. Näin saadaan 3,85 g hieman epäpuhdasta trans-l-/3-(asetyylitio)-l-oksopropyyli.7-3-metyylitio-D,L-proliinia.

Pieni näyte liuotetaan eetteriin ja muunnetaan disyklohek-syyliamiinisuolaksi, joka uudelleenkiteytetään etyyliasetaatista, ja saadaan trans-l-Z3-(asetyylitio)-l-oksopropyyli7-3-metyylitio-D ,L-proliinin disykloheksyyliamiinisuola, sp. 153-157°.

Analyysi C^H^O^NS . (CgH^^NH

laskettu: C 58,44 H 8,53 N 5,89, S 13,57 löydetty: C 58,77 H 8,57 N 5,68 S 13,74.

f) trans-1-(e-merkapto-l-oksopropyyli)-metyylitio-D,L-proliini 2.05 g (0,007 moolia) trans-l-Z3-(asetyylitio)-l-oksopro-pyyli7-3-metyylitio-D,L-proliinia jäähdytetään jäähauteella argonatmosfäärissä ja sen jälkeen lisätään kylmä argonilla kyllästetty seos, joka sisältää 7 ml vettä ja 7 ml väkevää ammoniakkia. Seosta sekoitetaan 30 minuuttia 0°C:ssa ja sen jälkeen se 30 698 34 tehdään happamaksi suolahapolla. Kun tuote uutetaan etyyliasetaattiin, kuivataan ja liuotin haihdutetaan vakuumissa, saadaan 1,85 g materiaalia, joka osittain kiteytyy seisoessaan. Kun hierretään eetterin kanssa, saadaan 1,0 g (57 %) valkoista kiteistä tuotetta. Kun uudelleenkiteytetään etyyliasetaatista (5 ml), saadaan 0,85 g trans-1-(3-merkapto-l-oksopropyyli)-3-metyylitio-D,L-proliinia, sp. 89-93°.

Analyysi CgH^^O^NS

laskettu: C 43,35 H 6,06 N 5,62 S 25,72 löydetty: C 43,36 H 6,27 N 5,54 S 25,91.

Esimerkki 16 (cis )-4-(1,l-dimetyylietoksi)-l-(D-3-merkapto-2-metyyli- 1-oksopropyyli)-L-proliini a) N-karbobentsyylioksi-cis-4-(1,1-dimetyylietoksi)-L-proliinimetyyliesteri

Liuosta, joka sisälsi 6 ,0 g (0,021 mol) N-karbobentsyyli-oksi-cis-4-hydroksi-L-proliinimetyyliesteriä ja 60 ml metyleeni-kloridia pantiin Parr-laitteeseen, sekoitettiin magneettisesti, jäähdytettiin kuivajää/isopropanolikylvyssä, minkä jälkeen käsiteltiin noin 40 ml :11a nesteytettyä isobutyleeniä ja sitten 0,7 5 ml :11a väkevää rikkihappoa. Laite suljettiin ja reaktioseok-sen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan jatkuvasti sekoittaen.

Ei esiintynyt havaittavaa paineen nousua. Kun oli sekoitettu huoneenlämpötilassa 4 vuorokautta, laite avattiin ja liuos (80 ml) laimennettiin 120 ml :11a metyleenikloridia ja pestiin liuoksella, jossa oli 5 g natriumbikarbonaattia 100 ml:ssa vettä. Vesifaasi takaisinuutetaan 50 ml :11a metyleenikloridia, orgaaniset kerrokset yhdistetään ja kuviataan (MgSO^), ja liuotin haihdutetaan pois, jolloin saadaan 7,5 g N-karbobentsyylioksi-cis-4-(l,1-di-metyylietoksi)-L-proliinimetyyliesteriä vaaleankeltaisena öljynä .

/ixj7^5 = 46° (c, 1 % kloroformissa TCL (silikageelissä: R^.

0,62 (etyyliasetaatti) R^ 0,43 (7:1 bentseeni/etikkahappo)

Visualisoitu UV:llä I^-höyryllä b) N-karbobentsyylioksi-cis-4-(1,1-dimetyylietoksi)-L-proliini

Sekoitettu liuos metyyliesterituotetta kohdasta a) (7,2 g 0,02 mol) 15 ml:ssa eetteriä jäähdytettiin jäävedellä li 3i 69834 ja liuosta käsiteltiin annoksittain 42 ml:lla (0,042 mol) jääkylmää natriumhydroksidia. Kun oli sekoitettu ja jäähdytetty kaikenkaikkiaan 6 tuntia poistettiin kylmäkylpy ja sekoitusta jatkettiin yli yön huoneenlämpötilassa. Kirkas liuos pestiin 40 ml:lla eetteriä (pesuneste heitettiin pois), kerrostettiin 40 ml:lla etyyliasetaattia, sekoitettiin, jäähdytettiin ja tehtiin happameksi 8 ml :11a 6 N suolahappoa. Faasit erotettiin ja vesifaasi uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 40 ml), orgaaniset faasit yhdistettiin ja kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin 6,8 g vaaleankeltaista viskoosista öljyä. Tämä öljy liuotettiin 50 ml:aan asetonitriiliä ja liuosta käsiteltiin kuumalla liuoksella, joka sisälsi 3,2 g 1-adamantaa-niamiinia ja 20 ml asetonitriiliä. Kiinteä adamantaaniamiinisuo-la erotettiin nopeasti. Suolaa jäähdytettiin yli yön, sitten tämä väritön suola suodatettiin typpikehässä, pestiin kylmällä asetonitriilillä ja eetterillä ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 8,8 g N-karbobentsyylioksi-cis-4-(1,1-dimetyylietoksi)-L-proliini-adamantaaniamiinisuolaa, sp. 228-230°C (hajoaa), jäh-mepiste 215°C.

- -28° (c, 1 % metanolissa)

Analyysi ^N. 0 ,25^0 laskettu: C 67,96 H 8,56 N 5,87 löydetty: C 67,77 H 8,54 N 5,93.

Käsiteltäessä saatu adamantaaniamiinisuolaa (8,5 g) hapolla saatiin 5,5 g N-karbobentsyylioksi-cis-4-(1,1-dimetyylietoksi ) -L-proliinia melkein värittömänä viskoosisena siirappina TLC: 0,20 (85 :15 tolueeni/etikkahappo silikageelillä visualisoitu ^-höyryllä tai PMA:lla lämmön kanssa, c) cis-4-(l,1-dimetyylietoksi)-L-proliini N-karbobentsyylioksituote kohdasta b) (5,5 g 0,017 mol) hydrattiin 165 ml:ssa 2:1 metanoli/vesi-seosta 3 atm. vety-kehässä kun läsnä oli 1,7 g 5-prosenttista palladiumhiili-kata-lysaattoria, jolloin saatiin 3,2 g tahmeaa, osittain kiinteää tuotetta. Tämä tuote suspendoitiin 30 ml:aan asetonitriiliä, hierrottiin;ja jäähdytettiin yli yön, jolloin saatiin 1,35 g cis-4-(1,1-dimetyylietoksi)-L-proliinia värittömänä kiinteänä 32 69834 aineena, sp. 240-242°C (hajoaa, ennen hajoamista värjäytyen asteittain tummaksi ja sintrautuen). fr<J^)S= -36° (c, 0,5 % metanolissa) .

Analyysi CgH^NOg’ 0 , 2 5H^O

laskettu: C 56,37 H 9,20 N 7,31 löydetty: C 56,26 H 9,27 N 7,26.

d) l-/D-3-(asetyylitio) -2 -metyyli-oksopropyylij7-cis-4-(1,1-dimetyylietoksi-L-proliini cis-4-(l,l-dimetyylietoksi)-L-proliini kohdasta c) (1,3 g 0,0069 mol) saatettiin reagoimaan liuoksen kanssa, jossa oli 1,4 g (0,0078 mol) D-3-asetyylitio-2-metyylipropionyyliklo-ridia ja 20 ml vettä, kun läsnä oli natriumbikarbonaattia kuten esimerkissä 3 on kuvattu. Tällöin saatiin 2,2 g melkein väritöntä viskoosista öljyä. Saatu raakatuote liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia ja liuosta käsiteltiin seoksella, jossa oli 1,3 g disykloheksyyliamiinia 20 ml:ssa etyyliasetaattia. Tuote kiteytyi luoksesta. Tuote suodatettiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 2,65 g disykloheksyyliamiinisuolaa, sp. 181-183°C, jäh-mepiste 170°C.

Z.0ö7^5= -62° (c, 1 % etanolissa)

Analyysi ^5H25N05S·C12H23N

laskettu: C 63,24 H 9,44 N 5,46 S 6,25 löydetty: C 63,22 H 9,61 N 5,41 S 6,02.

Toimimalla kuten esimerkissä 3 muutettiin 2,4 disykloheksyyliamiinisuolaa hapoksi suspendoimalla etyyliasetaattiin, jäähdyttämällä jääkylvyssä ja käsittelemällä 30 ml :11a 10-pro-senttista kaliumbisulfaattia. Kerrokset erotettiin ja vesifaasi uutettiin 25 ml :11a etyyliasetaattia (4 kertaa). Liuotin haihdutettiin pois ja materiaalia, joka oli seistessä osittain kiteytynyt, hierrettiin 20 ml:n kanssa heksaania kiteytymisen saattamiseksi loppuun ja jäähdytettiin, jolloin saatiin 1,3 g l-ZD-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-cis-4-(1,1-dimetyy1letoksi )-L-proliinia värittömänä kiinteänä aineena, sp. 96-98°C, jäh-mepiste 93°C.

- -109° (c, 1 % etanolissa)

II

69834 33

Analyysi laskettu: C 54,36 H 7,60 N 4,23 S 9,63 löydetty: C 53,92 H 7,73 N 4,30 S 9,29.

e) cis-4-(l,1-dimetyylletoksi)-1-(D-3-merkapto-2-metyy-li-l-oksopropyyli)-L-proliini 1- /T)-3- (ase tyylit io) -2-metyyli-l-oksopropyyli7-cis-4-(1,l-dimetyylietoksi)-L-proliini kohdasta d) (1,3 g 0,0039 mol) hydrolysoitiin seoksella, jossa oli 2,6 ml väkevää ammonium-hydroksidia ja 6 ml vettä, jolloin saatiin 1,1 g lasimaista jäännöstä. Seistessä ilmestyi tuotteeseen kidealkioita. Tämä materiaali peitettiin 8 ml :11a eetteriä, ympättiin ja hierrettiin. Sitä mukaa kuin lasi liukeni erottautui vähitellen kiteistä kiinteää ainetta. Kun oli annettu seistä 2 tuntia huoneenlämpö-tilassa lisättiin 20 ml heksaania ja seosta jäähdytettiin yli yön argonkehässä. Liuotin poistettiin, jolloin saatiin 1,0 g väritöntä kiinteää cis-4-(1,1-dimetyylietoksi)-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-okso-propyyli)-L-proliinia, sp. 106-108° (jähmepiste 10 3°C).

= -78° (c, 1 % metanolissa)

Analyysi C^g^gNO^S * 0 ,25H90 laskettu: C 53,12 H 8,06 N 4,77 S 10,91 löydetty: C 53,30 H 8,28 N 4,76 S 10,70.

Esimerkki 17 (cis)-l-/t>-3-(bentsoyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli/-4-(fenyylitio)-L-proliini 9,9 g (0,031 mol) cis-4-fenyylitio-L-proliinia suspendoi-tiin 100 ml:aan vettä (pH 5,6) ja pH säädettiin arvoon 10,2 lisäämällä noin 20 ml 10-prosenttista natriumbikarbonaattia siten, että saatiin kirkas liuos. Sitten pH säädettiin arvoon 9,5 lisäämällä noin 4,5 ml väkevää kloorivetyhappoa. Liuos pidettiin 30°C:ssa kun lisättiin 8,1 g (0,033 mol) (D)-3-(bentsoyylitio)-2-metyylipropaanihappokloridia 30 ml:ssa tolueenia samanaikaisesti 100 ml:n kanssa 10-prosenttista natriumbikarbonaattia pH:n pitämiseksi arvossa 9,3. Kun oli lisätty noin 1/4 happo-kloridista, alkoi muodostua limainen saostuma, joka pysyi koko reaktion ajan. Kun reaktioseosta oli sekoitettu pH-arvossa 9,3 2,5 tunnin ajan, reaktioseos tehtiin voimakkaasti happamaksi 34 69834 lisäämällä 20-prosenttista kloorivetyhappoa etyyliasetaatin läsnäollessa. Vesifaasi uutettiin kaksi kertaa 350 ml:n annoksilla etyyliasetaattia ja yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin 300 ml :11a kyllästettyä natriumkloridiliuoksella ja kuivattiin (MgSO^). Liuotin poistettiin, jolloin saatiin 11,8 g vaahtomais-ta kiinteää raakatuotetta. Nämä 11,8 g vaahtomaista kiinteää raakatuotetta liuotettiin 70 ml:aan asetonitriiliä ja liuokseen lisättiin noin 6 g disykloheksyyliamiinia 25 ml:ssa eetteriä. Muodostui vapaasti valkoinen kiteinen saostuma. Seoksen annettiin seistä yli yön kylmähuoneessa ja sitten kiinteä aine suodatettiin ja pestiin eetterillä, jolloin saatiin (cis-l-ZD-3-(bent-soyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-4-(fenyylitio)-L-proliini-disykloheksyyliamiinisuola (1:1).

Analyysi 2H2 S2 · c-^2^2 3^ laskettu: C 66,85 H 7,59 N 4,59 löydetty: C 66,33 H 7,30 N 4,48.

Hieman kosteata disykloheksyyliamiinisuolaa sekoitettiin 2,5 tunnin ajan seoksessa, jossa oli 300 ml etyyliasetaattia ja 200 ml 10-prosenttista kaliumbisulfaattia. Muodostui 2 kirkasta kerrosta. Vesikerros uutettiin kaksi kertaa 200 ml:n annoksella etyyliasetaattia. Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgSO^). Liuotin poistettiin, jolloin saatiin 10,1 g vaahtomaista kiinteää (cis)-l-./D-3-(bentsoyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-4-(fenyylitio)-L-proliinia, sp. 42-44°C.

- -36,5° (c = l, metanoli) .

Analyys i c22h23no4s2 laskettu: C 60,87 H 5,46 N 3,23 löydetty: C 60,75 H 5,35 N 3,17

Esimerkki 18 (cis-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)-3-fenok-si-D,L-proliini a) 3-fenoksi-l,2-dehydroproliini-l-butyyliesteri Seosta, jossa oli 9,25 g (50 mmol) 1,2-dehydroproliini-l-butyyliesteriä ja 70 ml tolueenia, kuumennettiin yhdessä 8,9 g:n (50 mmol) kanssa n-bromisukkinimidiä palautusjäähdyttäen samalla valottaen aurinkolampulla (noin 5 cm:n päästä) yh- li 35 69834 den tunnin ajan. Tänä aikana muodostui sukkinimidiä; sen jälkeen reaktioseos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan. Sukkinimidi suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin kuiviin. Jäännös tislattiin 80°C:ssa, jolloin saatiin 3,5 g raakaa 3-bromi-l,2-dehydro-proliini-l-butyyliesteriä.

Seosta, jossa oli saatu raaka 3-bromi-l,2-dehydroproliini-1-butyyliesteri ja 3,9 g (13 mmol) talliumfenoksidia 30 mlrssa vedetöntä dimetyyliformamidia, sekoitettiin huoneenlämpötilassa argonkehässä 24 tunnin ajan. Liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännöstä laimennettiin eetterillä kun saostui talliumbromidia, joka poistettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin öljy, joka puhdistettiin tislaamalla. Kun oli tislattu 2 tuntia paineessa 0,005 mm ja lämpötilassa 80°C, oli tislauskolonniin jäänyt 1,48 g 3-fenoksi-l , 2-dehydroproliini-1-butyyliesteriä.

b) (cis)-3-fenoksi-D,L-proliini

Seosta, jossa oli 1,48 g 3-fenoksi-l ,2-dehydro-proliini-1-butyyliesteriä, 5 ml IN natriumhydroksidia ja 20 ml 80-prosent-tista dioksaania (vedessä), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tunnin ajan. Liuottimet poistettiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin 25 ml:aan vettä ja liuosta käsiteltiin 168 mg:11a nat-riumboorihydridiä yhden tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Seos tehtiin happamaksi pH-arvoon 6 lisäämällä 2N kloorivetyhappoa; liuosta pidettiin 0°C:ssa 16 tunnin ajan, minkä jälkeen saostui noin 25 mg (trans)-3-fenoksi-D,L-proliinikiteitä. Nämä suodatettiin pois. Suodoksesta poistettiin suolat "Dowex"®50 Wx8 kolonnissa (2,5 x 30 m) käyttämällä IN ammoniumhydroksidia elu-ointiaineena. UV-aktiiviset jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 616 mg kiinteää (cis)-3-f enoksi-D ,L-proliinia c) (cis-l-ZD-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7- 3-fenoksi-D,L-proliini

Saadut 616 mg (cis)-3-fenoksi-D,L-proliinia lietettiin 20 ml:aan vettä 5°C:ssa ja pH säädettiin arvoon 8,0 kiinteällä natriumkarbonaatilla. Lietteeseen lisättiin 550 mg (2,5 mmol) D-3-asetyylitio-2-metyylipropanoyylihappokloridia 1 ml:ssa eet- 36 6 9 8 3 4 teriä. Reaktioseoksen pH pidettiin arvossa 7,3-8,2 seuraavan 1,5 tunnin ajan lisäämällä natriumkarbonaattia. Reaktioseos pestiin etyyliasetaatilla (2 x 20 ml) ja tehtiin happameksi pH arvoon 2 lisäämällä 10-prosenttista kloorivetyhappoa ja uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 50 ml). Uutteet yhdistettiin, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 810 mg öljyä. Tämä öljy puhdistettiin flash-kromatografoimalla silikageelillä (LP-1, 300 ml) käyttämällä eluointiaineina 10-20-prosenttisia etikkahappo/tolueeniseoksia. Saatiin 530 mg (cis)-1-iD-3-(asetyylitio)-2-metyyli-oksopropyyliy~3-fenoksi-D,L-pro-liinia d) (cis)-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-1-oksopropyyli ) -3-fe-noks i-D,L-proliini 530 mg (cis)-l-/b-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopro-pyylv'-S-fenoksi-DjL-proliinia liuotettiin argon-kehässä ammo-niakki/vesi-seokseen (50:50), josta oli kaasu poistettu antamalla argon-kaasun kuplia seoksen lävitse 15 min ajan. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tunnin ajan. Hieman samaan liuokseen pH säädettiin arvoon 6,5 väkevällä kloorivety-hapolla (kehitettyi hieman lämpöä). Liuos uutettiin metyleeni-kloridilla (2 x 25 ml). Sen jälkeen pH säädettiin arvoon 1 ja liuos uutettiin vielä metyleenikloridilla (3 x 50 ml). Uutteet yhdistettiin, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 410 mg lasimaista yhdistettä. Trituroitiin kloroformilla, jolloin tapahtui kiteytyminen. Kiinteä aine kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatin ja heksaanin seosesta, jolloin saatiin 261 mg (cis)-l-(D-3-merkapto-2-metyyli-l-oksopropyyli)- 3-fenoksi-D,L-proliinia , sp. 134-135°C.

Analyysi laskettu: C 58 ,23 H 6,19 N 4,53 S 10,36 löydetty: C 58 ,07 H 6,18 N 4,45 S 10,16.

Esimerkki 19 a) 1-/D- 3- (ase tyylit io) -2-metyyli-l-oksopropyyli,7-cis-4-me tyylitio-L-proliini

Liuosta,jossa oli 4,67 g (0,029 mol) cis-4-metyylitio-L-proliinia ja 50 ml vettä, sekoitettiin ja jäähdytettiin 11 37 698 34 5°C:seen. Sitten liuokseen lisättiin 3 g natriumkarbonaattia. Tätä liuosta käsiteltiin 5,2 g:lla (0,029 mol) D-3-(asetyyli-tio)-2-metyylipropionyylikloridia 5 ml:ssa eetteriä 10 min ajan lisäämällä aika ajoin 3 g natriumkarbonaattia pH:n pitämiseksi arvossa noin 8,0. Seosta sekoitettiin jääkylvyssä 1,5 tunnin ajan. Seokseen lisättiin 25 ml vettä ja sitten liuosta, jossa oli 6 ml väkevää kloorivetyhappoa ja 25 ml vettä (kehittyi CO^-kaasua). Saatu vahvasti hapan liuos uutettiin 50 ml :11a etyyliasetaattia (4 kertaa). Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin (MgSO^), suodatettiin ja liuotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin otsikkoyhdiste.

b) 1- (D-3-merkapto-2-metyyli-l-okso-propyyli)-cis-4-metyylitio-L-proliini 3,2 g:aan 1-/D-3-(asetyylitio)-2-metyyli-l-oksopropyyli7-cis-4-metyylitio-L-proliinia lisättiin kylmä liuos, jossa oli 8 ml väkevää ammoniumhydroksidia ja 20 ml vettä. Emäs liukeni noin 10 min aikana. Saadun liuoksen annettiin seistä argon-kehässä huoneenlämpötilassa 2 tuntia. Liuos jäähdytettiin, uutettiin 20 ml :11a etyyliasetaattia (2 kertaa), kerrostettiin 20 mlrlla etyyliasetaattia ja tehtiin happameksi 15 ml:lla 1:1 kloorivetyhappoa. Tämä seos kyllästettiin natriumkloridilla, kerrokset erotettiin ja vesifaasi uutettiin 20 mlrlla etyyliasetaattia (3 kertaa). Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin (MgSO^), suodatettiin ja liuotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin otsikkoyhdiste, sp. 1-adamantaaniamiinisuolana 198-201°C (hajoaa).

-20° (c, 1 % metanolissa).

Claims (1)

1. 38 69834 Patenttivaatimus Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten eetteri-tai tioeetterimerkaptoasyyliproliinien valmistamiseksi, joiden yleinen kaava on I XR1 . f R -S-CH2-CH-CO-N_C-COOH jossa ryhmä -XR1 on sitoutunut proliinirenkaan 3- tai 4-ase-maan, X on happi- tai rikkiatomi, R1 on C1_4-alkyyliryhmä tai fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu halogeeniatomilla, R1 2 on vetyatomi tai C-^-alkyyliryhmä ja R3 on vetyatomi tai C^_4~alkanoyyli- tai bentsoyyliryhmä, sekä niiden suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että proliiniyhdiste, jonka kaava on II XR1 C 3 II HN--COOH jossa R1 ja X tarkoittavat samaa kuin edellä, tai sen suola liitetään kaavan III mukaiseen happoon tai sen reaktiokykyi-seen johdannaiseen R1 ,4 f R' -s-ch2-ch-cooh III 4 2 iossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ia R' on C, .-alkano- J 1-4 yyli- tai bentsoyyliryhmä, sellaisen yhdisteen saamiseksi, 3 jossa R on C^^-alkanoyyli- tai bentsoyyliryhmä, ja että saatu yhdiste haluttaessa hydrolysoidaan sellaisen yhdisteen saa- 4 12 miseksi, jossa R on vetyatomi ja R , R ja X tarkoittavat samaa kuin edellä, ja että saatu happo haluttaessa muutetaan suolaksi.