DK156054B

DK156054B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af n-(3-acylthio-2-methylpropanoyl)-prolinforbindelser eller salte heraf

Info

Publication number: DK156054B
Application number: DK273082A
Authority: DK
Inventors: Sadao Tanaka; Kiyonori Kuromaru; Yasuo Fujimura; Isao Matsunaga; Tomoyasu Iwaoka; Noriko Obatake; Junichiro Aono; Yoshikazu Hinohara; Hideki Nakano; Masafumi Fukushima; Hiroyuki Nabata; Kazushige Sakai; Shun-Ichi Hata
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1981-06-19
Filing date: 1982-06-17
Publication date: 1989-06-19
Also published as: FI75804C; DE3222779A1; DK273082A; NO156408B; IL65954A; CH651825A5; MX171888B; ES513277A0; KR840000488A; NL193282B; PT75076B; ES8307216A1; FI822171A0; HU188177B; ES8403868A1; SE453595B; KR890000769B1; FR2508040A1; ES520582A0; IT8267772A0

Description

DK 156054 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte N-(3-acyl-thio-2-methylpropanoyl)-prolinforbindelser med formlen CH3 5 I /

R-A-S-CHoCHCO-N

V-1’ I

COOH

hvori R er en til en α-aminogruppe i A bundet acyl-10 gruppe og er valgt blandt en cyclopropancarbonyl-, cyclohexancarbonyl- og adamantancarbonylgruppe, og A er en glycin-, sarcosin-, D-alanin-, D-leucin-, D-phenyl-alanin-, D-tryptophan-, D-phenylglycin-, D-methionin-eller D-glutaminrest, hvis a-carbonylgruppe danner en 15 thiolesterbinding med svovlatomet, eller farmaceutisk acceptable salte heraf med baser.

Lignende forbindelser som disse ved formel I repræsenterede forbindelser, f.eks. de, hvori R er en benzoyl-, acetyl- eller t-butyloxycarbonylgruppe, og A er 20 en L-a-aminosyre, er beskrevet i britisk patentansøgning nr. 2.050.359A. I europæisk patentansøgning (EP) 9.898A1 er der beskrevet forbindelser, hvori R er en benzoyl-, acetyl-, t-butyloxycarbonyl- eller cyclopentancarbonyl-gruppe eller lignende, og A er en L-a-aminosyre. I euro-25 pæisk patentansøgning nr. 35.383A1 er der beskrevet forbindelser, hvori R er en benzoylgruppe, og A er en D-phenylalany1gruppe. Der er imidlertid ingen kendt teknik omhandlende litteratur, som specielt beskriver forbindelserne med formlen I. De er derfor ikke-beskrevne, hidtil 30 ukendte forbindelser og er nyttige som farmaceutika, som det vil blive beskrevet nedenfor.

Gruppen CH^ i strukturformlen I har et asymme- -ch2chco- trisk carbonatom, således at gruppen kan være i D-form, 35 L-form eller DL-form, dvs. en blanding af D- og L-for-mer. Enhver af disse former falder under den foreliggende opfindelses omfang, og D- og DL-fornerne foretrækkes for deres biologiske virkning.

DK 156054B

2

Prolinresten -N i formel I kan være i D-

vJ

/

COOH

form, L-form eller DL-form, og enhver af disse former 5 falder under den foreliggende opfindelses omfang, idet L- og DL-formerne foretrækkes for deres biologiske aktivitet.

Som eksempler på farmaceutisk acceptable salte af prolinderivatet med formlen I kan der nævnes salte 10 med alkalimetaller, såsom natrium og kalium, salte med jordalkalimetaller, såsom calcium og magnesium, og salte med basiske aminosyrer, såsom arginin og lysin. Calciumsalte og lysinsalte foretrækkes.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendomme-15 lig ved, at man

a) omsætter en forbindelse med formlen II

CH3 R-A -S-CH2CHC00H 11

20 hvori R og A har de ovennævnte betydninger, eller et reaktivt derivat heraf, med en forbindelse med formlen III

HN III

25 N^—l COOR' hvori R' er et hydrogenatom eller en carboxylbeskyttende gruppe, eller et reaktivt derivat heraf i et indifferent organisk opløsningsmiddel ved mellem -50 og -20°C 30 og fjerner eventuelle beskyttelsesgrupper fra reaktionsproduktet, eller

b) omsætter en forbindelse med formlen IV

R-A-OH IV

hvori R og A har de ovennævnte betydninger, eller et 35 reaktivt derivat deraf med en forbindelse med formlen V

DK 156054B

3 CH3 \ n HS-CH2CHC0-N v

COOR

5 hvori R1 er et hydrogenatom eller en carboxyl-beskytten-de gruppe, eller et reaktivt derivat heraf i et indifferent organisk opløsningsmiddel ved mellem -50 og 20 °C og fjerner eventuelle beskyttelsesgrupper fra reaktionspro-1 o duktet, hvorefter man om ønsket omdanner en opnået forbindelse med formlen I til et farmaceutisk acceptabelt salt heraf med en base.

15 Når R' i formel III eller formel V er en carboxyl- beskyttende gruppe, kan den være en t-butylgruppe eller en med lavere alkyl substitueret silylgruppe og kan fjernes ved behandling med hydrogenfluorid, trifluoreddike-syre, hydrogenchlorid eller vand.

20 Der kan benyttes forskellige hensigtsmæssige udførelsesformer for fremgangsmåden ifølge opfindelsen som angivet i krav 2-5.

Det reaktive derivat af forbindelsen med formlen II er sådant, at carboxylgruppen, der indgår i reaktio-25 nen, er aktiveret. Carboxylgruppen kan aktiveres til enhver af de former, der almindeligvis anvendes ved peptidsynteser, såsom aktiverede amider, syrehalogenider, aktiverede estere og blandede syreanhydrider. Blandt disse former foretrækkes aktiverede estere med N-hydroxysuc- 30 cinimid, blandede syreanhydrider med kulsyremonoestere og aktiverede amider med carbonyldiimidazol. Carbodiimi-der, såsom dicyclohexylcarbodiimid, kan anvendes som kondensationsmiddel til dannelse af en amidbinding mellem carboxylgruppen og iminogruppen.

35 Det reaktive derivat af forbindelsen med formlen III er sådant, at iminogruppen i nævnte forbindelse er aktiveret. Iminogruppen kan være aktiveret ved en vil-

DK 156054 B

4 kårlig af de fremgangsmåder, som konventionelt anvendes på peptidsynteseområdet, f.eks. fremgangsmåden med indføring af en silylgruppe, såsom en trimethylsilylgruppe, "phosphazo-metoden" med anvendelse af en phosphorforbin-5 delse, såsom phosphortrichlorid [Ann. Chem., 572, 96 (1951)], phosphorsyrlingestermetoden med anvendelse af en phosphorsyrlingester, såsom tetraethylesteren af py-ro phosphor syr ling, eller "N-carboxyanhydrid-metoden" NCA-metoden).

10 Omsætningen ved fremgangsmåde a) kan udføres i et indifferent organisk opløsningsmiddel, såsom tetrahydro-furan, dioxan, dimethylformamid, hexamethyl-phosphor-triamid, chloroform, dichlormethan eller acetonitril. Omsætningen udføres som nævnt ved fra -50 til 20°C, for-15 trinsvis ved fra -30 til 10°C. Reaktionstiden varierer med reaktionstemperaturen, de forbindelser, der omsættes, og opløsningsmidlet, og den ligger almindeligvis mellem 0,5 og 48 timer, fortrinsvis mellem 1 og 6 timer.

20 Efter amiddannelsesreaktionen fjernes alle beskyt telsesgrupper i reaktionsproduktet ved en vilkårlig af de hertil egnede fremgangsmåder.

Slutproduktet kan isoleres fra reaktionsblandingen og renses ved en vilkårlig konventionel fremgangsmåde, 25 f-eks. ved hjælp af forskellige typer for chromatografi under anvendelse af silicagel, dextran—tværbundet polymer og porøse polymere, såsom af styrendivinylbenzen eller acrylsyreestere. Et passende udviklingsopløsningsmiddel kan vælges blandt chloroform, ethylacetat, metha-30 nol, ethanol, tetrahydrofuran, benzen, vand og acetonitril. Alternativt kan slutproduktet opnås ved først at isolere reaktionsproduktet i form af et organisk salt, såsom et dicyclohexylaminsalt, som derpå behandles med en syre, såsom saltsyre eller kaliumhydrogensulfat.

35 Den således opnåede forbindelse med formlen I har en carboxylgruppe på prolinstedet, således at den om ønsket er i stand til at danne salte med forskellige basi-

DK 156054 B

5 ske stoffer. Salte med farmaceutisk acceptable basiske stoffer er særlig vigtige. Sådanne salte kan fremstilles ved en konventionel fremgangsmåde, dvs. ved at behandle nævnte carboxylgruppe med en ækvimolær mængde af en vil-5 kårlig af de ovenfor anførte baser (f.eks. alkalimetaller, jordalkalimetaller og basiske aminosyrer).

Den som udgangsmateriale ved fremgangsmåde a) ifølge den foreliggende opfindelse anvendte forbindelse med formlen II kan let fremstilles ved følgende fremgangsmå-10 de:

En forbindelse med formlen VI

R-OH VI

hvori R har den ovennævnte betydning, eller et reaktivt derivat deraf i carboxylgruppen omsættes med en aminosy-15 re med formlen VII

h2n-a"-coor" VII

hvori A" er en aminosyrerest, der er ækvivalent med A minus gruppen NH eller C=0, og R" er et hydrogenatom eller en carboxylbeskyttende gruppe, eller et reaktivt de-20 rivat heraf, efterfulgt af fjernelse af R", hvis det er i en beskyttelsesgruppe, til dannelse af en forbindelse med formlen VIII

R-NH-A"-COOH VIII

hvori R og A" har de ovennævnte betydninger, hvorpå for-30 bindeisen med formlen VIII eller et reaktivt derivat her- af omsættes med en forbindelse med formlen IX

CH,

' IX

HS-CH2CHCOOR"' hvori R"' er et hydrogenatom eller en carboxylbeskytten-35 de gruppe, efterfulgt af fjernelse af R’" , hvis det er en beskyttelsesgruppe.

Som eksempler på det reaktive derivat i carboxylgruppen af forbindelsen med formlen VI kan der nævnes sådanne, som almindeligvis anvendes på peptidsynteseom-rådet, såsom aktiverede amider, syrehalogenider, aktiverede estere og blandede syreanhydrider.

Hvis R" i aminosyren med formlen VII er en beskyttelsesgruppe, kan der som fordelagtige eksempler her-

DK 156054 B

6 på nævnes en t-butylgruppe (der kan fjernes ved hjælp af hydrogenfluorid, trifluoreddikesyre eller hydrogenchlo-rid), en benzylgruppe (der kan fjernes ved katalytisk reduktion med palladium eller lignende), og lavere al-5 kylgrupper, såsom methyl og ethyl (der kan fjernes ved hydrolyse under alkaliske betingelser).

Det reaktive derivat af aminosyren med formlen VII er sådant, at aminogruppen er aktiveret, og et så-10 dant derivat fremstilles ved en vilkårlig af de aktiveringsfremgangsmåder, der almindeligvis anvendes på peptidsyn teseområdet, såsom indføring af en silylgruppe (f.eks. en trimethylsilylgruppe), "phosphazo-metoden", phosphorsyrlingestermetoden og N-carboxyanhydrid-meto-15 den) .

Et carbodiimid, såsom dicyclohexylcarbodiimid, kan anvendes som kondensationsmiddel til dannelse af en amidbinding mellem forbindelsen med formlen VI og aminosyren med formlen VII.

20 Reaktionen kan udføres i et indifferent organisk opløsningsmiddel, såsom tetrahydrofuran, dioxan, dimeth-ylformamid, hexamethylphosphortriamid, chloroform, di-chlormethan eller acetonitril. Reaktionen udføres almindeligvis under afkøling eller ved stuetemperatur (-50 25 til 20°C), fortrinsvis fra -30 til 10°C. Reaktionstiden varierer med reaktionstemperaturen, forbindelserne, der skal omsættes, og opløsningsmidlet, og den ligger almindeligvis mellem 0,5 og 48 timer, fortrinsvis mellem 1 og 6 timer.

30 Dersom R" i formel VII er en beskyttelsesgruppe, kan den fjernes fra reaktionsproduktet ved en vilkårlig af de ovenfor beskrevne konventionelle fremgangsmåder.

Forbindelsen med formlen VIII kan isoleres fra reaktionsblandingen og renses ved en vilkårlig konven-35 tionel fremgangsmåde, f.eks. ved omkrystallisation af ethylacetat, n-hexan, acetone eller vand, eller ved forskellige typer for chromatografi, som det er beskrevet i forbindelse med isolering og rensning af forbindelsen med formlen I, eller ved dekomponering af et organisk

DK 156054 B

7 salt af reaktionsproduktet med en syre.

Forbindelsen med formlen VIII kan omsættes med forbindelsen med formlen IX ved at omsætte carboxylgrup-pen i den førstnævnte forbindelse med mereaptogruppen i 5 den sidstnævnte forbindelse i nærværelse af et kondensationsmiddel (dvs. carbodiimider, såsom dicyclohexylcar-bodiimid). Et reaktivt derivat af forbindelsen med formlen VIII kan omsættes med en forbindelse med formlen IX.

Som eksempler på det reaktive derivat af forbindelsen 10 med formlen VIII kan nævnes aktiverede amider, syrehalo-genider, aktiverede estere og blandede syreanhydrider. Aktiverede amider med carbonyldiimidazol foretrækkes.

Carboxylgruppen i forbindelsen med formlen IX kan være beskyttet eller ubeskyttet. Foretrukne beskyttel-15 sesgrupper er t-butyl og andre grupper, der kan fjernes under sure betingelser.

Thiolesterdannelsesreaktionen udføres i et indifferent organisk opløsningsmiddel, såsom tetrahydrofuran, dioxan, dimethylformamid, hexamethylphosphortriamid, 20 chloroform, dichlormethan og acetonitril. Reaktionen udføres almindeligvis under afkøling eller ved stuetemperatur (-50 til 20°C), fortrinsvis ved mellem -30 og 10°C, når forbindelsen med formlen VIII anvendes i form af et aktiveret amid eller syrehalogenid, og ved mellem -10 og 25 10°C, når nævnte forbindelse anvendes i form af et syre-anhydrid. Reaktionstiden varierer med reaktionstemperaturen, de forbindelser, der skal omsættes, og opløsningsmidlet, og den ligger almindeligvis mellem 0,5 og 48 timer, fortrinsvis mellem 1 og 6 timer. Efter thiolester-3Q dannelsesreaktionen fjernes R"1 fra reaktionsproduktet, hvis den er en beskyttelsesgruppe. Dersom beskyttelsesgruppen er en t-butylgruppe, kan den fjernes ved en konventionel fremgangsmåde, dvs. ved omsætning med hydrogenfluorid, trifluoreddikesyre eller hydrogenchlorid.

35 Slutforbindelsen kan isoleres fra reaktionsblan dingen og renses ved en vilkårlig konventionel fremgangsmåde, såsom omkrystallisation af et organisk opløsningsmiddel, såsom ethylacetat eller n-hexan, ved forskellige

DK 156054 B

8 typer for chromatografi som beskrevet i forbindelse med isolering og rensning af forbindelsen med formlen I, eller ved dekomponering af et organisk salt af reaktionsproduktet med en syre.

5 Det reaktive derivat af forbindelsen med formlen IV er sådant/ at carboxylgruppen, der indgår i reaktionen, er aktiveret. Carboxylgruppen kan aktiveres til en passende form, såsom aktiverede amider, syrehalogenider, aktiverede estere eller blandede syreanhydrider. Aktive-10 rede amider med carbonyldiimidazol foretrækkes. Carbodi-imider, såsom dicyclohexylcarbodiimid, kan anvendes som kondensationsmiddel til dannelse af en amidbinding ud fra carboxylgruppen og mercaptogruppen.

Reaktionen ved fremgangsmåde b) ifølge opfindel-15 sen mellem forbindelsen med formlen IV eller dens reaktive derivat og forbindelsen med formlen V udføres i et indifferent organisk opløsningsmiddel, såsom tetrahydro-furan, dioxan, dimethylformamid, hexamethylphosphortri-amid, chloroform, dichlormethan eller acetonitril. Reak-20 tionen udføres som nævnt ved fra -50 til 20°C, og fortrinsvis ved mellem -30 og 10°C, når forbindelsen med formlen IV anvendes i form af et aktiveret amid eller syrehalogenid, og ved mellem -10 og 10°C, når nævnte forbindelse anvendes i form af et syreanhydrid. Reak-25 tionstiden varierer med reaktionstemperaturen, de forbindelser, der skal omsættes, og opløsningsmidlet, og den ligger almindeligvis mellem 0,5 og 48 timer, fortrinsvis mellem 1 og 6 timer. Efter thiolesterdannelses-reaktionen fjernes alle beskyttelsesgrupper fra reak-30 tionsproduktet ved en vilkårlig af de for de respektive beskyttelsesgrupper nærmere anførte fremgangsmåder.

Slutforbindelsen kan isoleres fra reaktionsblandingen og renses ved en vilkårlig af de ovenfor beskrevne konventionelle fremgangsmåder, såsom forskellige typer 35 for chromatografi under anvendelse af silicagel, dex-tran-tværbundet polymer og porøse polymere såsom af styren -diviny Iben zen eller acrylsyreestere. Et passende udviklingsopløsningsmiddel kan vælges blandt chloroform,

DK 156054 B

9 ethylacetat, methanol, ethanol, tetrahydrofuran, benzen, vand og acetonitril. Alternativt kan slutforbindelsen opnås ved, at man først isolerer reaktionsproduktet i form af et organisk salt, såsom et dicyclohexylaminsalt, 5 som derefter behandles med en syre, såsom saltsyre eller kaliumhydrogensulfat.

De omhandlede slutforbindelser, nemlig prolinde-rivatet med formlen I og farmaceutisk acceptable salte heraf, forhindrer dannelsen af angiotensin II ud fra an-10 giotensin I ved at hæmme virkningei af angiotensinomdan-nende enzym. De er derfor nyttige til behandling af hypertension hidrørende fra angiotensin II og som et middel til behandling af hjerteinsufficiens.

Virkningen af nogle af de omhandlede slutforbin-15 delser med hensyn til at hæmme det angiotensinomdannende enzym måltes.

(1) Metode.

Et angiotensinomdannende enzym ekstraheredes fra en kaninlunge. En 0,111 M borsyre-Na2C02-pufferopløsning 20 (pH 8,3, 0,6 ml), 0,2 ml 0,111 M borsyre-Na2C02~puffer- opløsning (pH 8,3) indeholdende 25 mM benzoylglycylhi- stidylleucin (substrat) og 0,1 ml 0,111 M borsyre-Na9C0-.- — ft —ft ^ ^ pufferopløsning (pH 8,3) indeholdende 10 til 10 M af prøveforbindelser (13 af de omhandlede slutforbindel-25 ser angivet i nedenstående tabel) anbragtes i rørglas og preinkuberedes ved 37°C i 5 til 10 minutter. Derefter sattes der 0,1 ml af en opløsning af enzymet (acetonepulver) til hvert rørglas, og hver blanding inkuberedes ved 37°C i 30 minutter. Det ved hjælp af enzymet produ-30 cerede benzoylglycin ekstraheredes med ethylacetat i nærværelse af saltsyre, og mængden deraf bestemtes ved UV-absorption ved 228 nm. Enzymaktiviteten i nærværelse af prøveforbindelserne i forhold til aktiviteten i fraværelse af prøveforbindelserne (100) bestemtes. Den kon-35 centration af hver prøveforbindelse, ved hvilken den relative aktivitet af enzymet var 50%, betegnedes som den aktivitet for hver prøveforbindelse, der inhiberer aktiviteten af enzymet, og blev angivet som en I^Q-værdi.

10

DK 156054B

(2) Resultater.

Prøveforbindelse I^g — 5 Forbindelse nr. 1 1,6 x 10 _" " 2__4,8 x 10~7_ "_" 3__1,3 x 10~7_ _”_» 4__4,0 x 10~7_ _" " 5__1,8 x 10~7_ 10 ”_" 6__2,4 x 10~7_ _”_" 7__1,0 x 10~7_ _"_" 8__1,5 x 10~7_ _I_" 9__1,7 x 10~7_ "_" 10 4,8 x 10~8_ 15 "_" 11 1,7 x 10~7_ "_" 12 5,4 x 10~7_ 13 4,4 x 10~7

Forbindelse nr. 1 : N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-ala- nylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin nr. 2 : N-[3-(N-cyclopropancarbonyl-D-ala- nylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin nr. 3 : N-[3-(N-cyclohexancarbonylglycyl- 25 thio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin nr. 4 : N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-N-meth- ylglycylthio)-2-D-methylpropanoyl ]-L-prolin nr. 5 : N-[3-(N-cyclopropancarbonylglycyl- 30 thio)-2-D-methylpropanoyl]-L-pro- lin i nr. 6 : N-[3-(N-adamantancarbony]gIycylthio)* 2-D-methylpropanoyl]-L-prolin nr. 7 : N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-phe- 35 nylalanylthio)-2-D-methylpropano yl] -L-prolin 11

DK 156054B

Forbindelse nr. 8 : N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-leu- cylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin nr# 9 : N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-tryp- 5 tophylthio)-2-D-methylpropanoyl]- L-prolin nr. 10 : N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-phe- nylglycylthio)-2-D-methylpropanoyl] -L-prolin 10 nr. 11 : N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-methi- onylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin nr. 12 : N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-glu- taminylthio)-2-D-methylpropanoyl]-15 L-prolin nr. 13 : N-[3-(N-adamantancarbonyl-D-ala- nylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin.

Aktiviteten af de omhandlede slutforbindelser va-20 rer længere end for kendte forbindelser med en lignende aktivitet, f.eks. 3-mercapto-2-D-methylpropanoyl-L-pro-lin (konventionelt betegnet Captopril), således at den ønskede blodtrykregulering kan opnås med færre daglige administreringer. Captopril og andre kendte forbindel-25 ser bevirker et pludseligt fald i blodtrykket under det første tidsrum efter administrering, og dette kan udvikle sig til ortostatisk hypotensivt astheni [Lancet, vol.

1, nr. 8, 115, p. 557 (10. marts 1979)], men de omhandlede slutprodukter har kun en mild hypotensiv virkning 30 i det første tidsrum efter administrering, og der er kun ringe mulighed for, at det udvikler sig til ortostatisk hypotensivt astheni. Medikamenter, såsom Captopril, der har en fri mercaptogruppe, giver forskellige bivirkninger, der kan tilskrives denne mercaptogruppe. For at 35 nævne nogle få er forstyrrelser i smagssansen, frembringelse af albumin i urinen, agranulocytosis og hudsygdomme ledsaget af feber blevet rapporteret i Lancet, vol. 1, 12

DK 156054B

nr. 8160, p. 150 (19. januar 1980), Lancet, vol. 2, nr.

8186, p. 129 (19. juli 1980), og South African Medical Journal, vol. 58, 172 (1980). På den anden side er thi-olesterbindingen i de omhandlede slutforbindelser uimod-5 tagelig for hydrolyse in vivo, og der er derfor kun ringe sandsynlighed for, at den danner en mercaptogruppe.

Der er derfor kun ringe mulighed for, at de omhandlede slutforbindelser forårsager de ovennævnte bivirkninger, der kan tilskrives mercaptogruppen.

10 Til supplering af det ovenstående skal det be mærkes, at de med de omhandlede forbindelser med formlen I nærmest beslægtede kendte forbindelser er de fra EP-9898A1 kendte forbindelser, og specielt de fra eksempel 35-43 i ΕΡ-9898ΑΊ kendte forbindelser. De 15 strukturmæssige forskelle mellem de således kendte forbindelser og de her omhandlede vil fremgå af nedenstående Tabel 1.

Tabel 1 20 CH3 r-a-s-ch9-ch-co-n^

COOH

-1-- 25 ' | R__A_

Forelig- /h\ -CO- glycin gende op- P^s-CO- sarcosin findelse a-D-amino- ( > -CO- ; \_y syre 30 I (nærmere I angivet i ____krav 1)

Eks.35 E>C0- L-Phe

Eks.36__"_j___glycin__ Éks.37 _ _ ; ” L-Trp_ EP-r Eks. 38 "_i_L-Tyr_ 35 9898A1 Eks.39__"__L-Ile_

Eks.40 " L-Leu

Eks.41 " L-His

Eks. 42__L-Val_ I Eks.43 " L-Ala ,

DK 156054 B

13

De kemiske og biologiske egenskaber af en repræsentativ forbindelse fremstillet ifølge foreliggende opfindelse og den dermed nærmest beslægtede, fra EP-9898A1 kendte forbindelse er anført i nedenstående 5 Tabel 2.

Tabel 2

CH.J

I 3 - r-a-s-ch9-ch-co-n ^ 10 -"

COOH

Porbin- (T) (2) In vitro delse R A I hydrolyse aeise K A ±50 tilbagevæ- 15 rende pro centmængde _____10 30 60(min.)

Ifølge opfindelsen r—< _7 „ <H>-CO- D-Ala 2,.6x10 ' 100 98 97

Eks.3 eller \_/ ' 20 ^5, 5_____ ΕΡ-9898ΑΊ v _7

Eks.43 [HV-CO- L_Ma 2,4x10 ' 71 56 53

Af de i Tabel 2 anførte forsøgsresultater fremgår det, at de ifølge opfindelsen fremstillede forbin-25 delser sammenlignet med de fra EP-9898A1 kendte forbindelser har omtrent samme aktivitetsniveau med hensyn til at hæmme angiotensinomdannende enzym, men er meget mere stabil mod hydrolyse ved A-S bindingen i den almene formel I. Ligesom ovenfor må det antages, at 30 tilstedeværelsen af den ved hydrolysen dannede frie mercaptogruppe -SH forårsager uønskede bivirkninger, såsom orthostatisk hypotensivt astheni, forstyrrelser i smagssansen, frembringelse af albumin i urinen, granulocytosis og hudsygdomme ledsaget af feber. De ifølge 35 opfindelsen fremstillede forbindelser udviser således meget lavere bivirkninger end de fra EP-9898A1 kendte forbindelser.

14

DK 156054B

Prøven φ til bestemmelse af Ι,-q i Tabel 2 udførtes som beskrevet ovenfor på side 9 under overskriften (1) Metode. Prøven ® til bestemmelse af hydrolysegraden i Tabel 2 udførtes som beskrevet nedenfor.

5

Prøvemetode φ

Colorimetri/In vitro enzymatisk hydrolyse

Inkuberingsblanding: 1 ml 5% rotteleverhomogenat (0,1 M kaliumphosphatpuffer, pH 7,4) plus 1 ml -2 10 prøveforbindelse 10 Mi samme phosphatpufferopløsning.

Prøvemetode: 100 /ol inkuberingsblanding blev udtaget fra mediet, og derefter tilsattes der 6 dråber 1,0 N HC1 og 5 ml ethylacetat. Efter mekanisk blanding i 10 15 min. og centrifugering i 10 min. blev ethylacetat- laget udtaget og inddampet. Remanensen opløstes i 1 ml vand, og derefter tilsattes der 6,5 μΐ 0,4 M phosphat-puffer (pH 6,85) og 5 /ti 5 x 10 ^M BIPM*^, og man lod blandingen henstå i 40 min. ved 0°C.

20 Bedømmelsen blev foretaget ved 310 nm excitation og 365 nm emission (grænse > 0,1^g SQ) X ) BIPM = N-[p-(2-benzimidazoyl)phenyl]-maleimid o X sr

'O^H3~0 SR

Η O H

BIPM fluorescens

Prolinderivaterne med formlen I og deres farmaceutisk acceptable salte kan formuleres til præparater 30 til oral administrering, såsom tabletter, kapsler, granuler, pulvere, syrupi og eliksirer, eller til sterile opløsninger eller suspensioner til parenteral administrering. Til dette formål kan farmaceutiske præparater fremstilles ud fra en eller flere af de omhandlede slutfor-35 bindeiser (som den aktive bestanddel) og farmaceutisk acceptable adjuvanter, såsom hjælpestoffer, bærere, bindemidler, stabilisatorer og smagsstoffer. Den daglige

DK 156054 B

15 dosis af de omhandlede slutforbindelser til voksne ligger fra 0,5 mg til 2 g, fortrinsvis fra ca. 1 til 500 mg, til oral administrering, og fra 0,1 til 600 mg, fortrinsvis fra ca. 0,3 til 300 mg, til parenteral administrering.

5 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler , hvoraf eksempel 1 og 2 beskriver fremstillingen af udgangsforbindelser, medens eksempel 3-19 beskriver fremstillingen af slutforbindelser.

10

Eksempel 1

Fremstilling af N-substituerede aminosyrer.

(a) 4,5 g D-alanin opløstes i 230 ml vandig 1 N Na2C03-opløsning under omrøring. Til opløsningen sattes 15 der dråbevis 100 ml tetrahydrofuran indeholdende 9,0 g cyclohexancarbonylchlorid ved 5 til 10°C, ved hvilken temperatur blandingen omrørtes i 30 minutter, hvorpå den omrørtes ved stuetemperatur i 1,5 timer. Derefter sattes der 2 N HC1 til reaktionsblandingen til indstil-20 ling af dens pH til mellem 1 og 2. Reaktionsblandingen ekstraheredes med ethylacetat, og det organiske lag vaskedes med mættet NaCl-opløsning og tørredes over magnesiumsulfat. Filtratet inddampedes i vakuum til opnåelse af en rå forbindelse. Ved omkrystallisation af ethylace-25 tat/n-hexan opnåedes 4,65 g N-cyclohexancarbonyl-D-ala-nin. [α]D = +26,6°.

(b) 3,0 g af en ester af adamantancarboxylsyre og N-hydroxysuccinimid opløstes i 30 ml tetrahydrofuran. Til opløsningen sattes 5 ml vand indeholdende 0,89 g D-ala- 30 nin og 1,1 g triethylamin, og blandingen omrørtes ved 5°C natten over. Efter fjernelse af tetrahydrofuran sattes der vand til remanensen, og der sattes endvidere 2 N HC1 til blandingen til indstilling af dens pH til mellem 1 og 2. Blandingen behandledes derefter som under (a) 35 ovenfor til opnåelse af 0,38 g N-adamantancarbonyl-D-alanin. [a]D = +11,6° (C=1,0 MeOH).

De nedenfor anførte forbindelser fremstilledes ved en af de under (a) og (b) beskrevne fremgangsmåder.

DK 156054B

H 1β O) *. ^ in ti ^ s 60 s 10 ε ‘ ' *4 o w Ί* οι - - o^>0—«O^tn^N ^ — o — - * *· “-m G PM- 00 tu σιίΰ in g - g O g O g HH! QM^QM^ -

<D O^OCO -O *0 ** O ro O rH O Η O -O O H 01 OH rO

iji ΓΟΗ COOcnOOOcOO * O “· 0 Η 0 ΜΗ <*>Η Ογ|λ Φ Q — > η S Hg HS Η S C^S in s tn g Q ^ Q - ui OKI + I I I + + UWU *·Η* φ w* k. «* k %» <. ' LO CN w' LO Γ0 0 Μ Pi II o II O II O II O 11 O II O II O Pi fe - -+> 01 2cn - * - « - - * S m S ni - ^ H g I to QH OH QH CH OH PH QH g I m g I O CO * w I in 00 i—1 II >—>11 —1 II 1—1 II i—>11 —>11 —> II I 04 <n I H o g

>1 g - » a o au au au au au au g-*g--0M

(ij ,_j h 00 —1 —*— <—>— —iw i_i w I—1 -— i_>w,_| Η ΓΟΗ Η Γ0 -P w

I G GGGGGGGG G

01 nj tdidididididtdid <e ©. g gggggggg g

H G GGGGGGGGG

Cu g m mmmmmiHmM-ι m οφο 00000000 o

01 Η G GGGGGGGG G

G Tj Td 'O’b'OO'dO'O'O Ό 0-H >1 ><>i >i>i>i>i>i>i >t

H g Λ ΑΧίχΙχΙΑΑΑέί A

4JW ·>(β ·· id * tf » td ·· id - nj *· <d *· (d ““io *· id

,14 tr Td G OG OG OG Ό II OG OM OG OG OG

id G G4J G-P G-P G-P G-P G-P G-P G-P G-P fl-P

Φ h (d Φ id Φ id o id o id o id o id o id o o o id o 05 G >-P >-P >-P >-P >-P >-p >+> >-p > -p >-p

-I I

Ό Η I I I I I I Η I I

•Η Ό Η Η Η Η Η Η H H

g0>i>i>i>i>i>iCi>i >1

•H,QGP!£GGG0G G

GG O O 0 0 0 0Λ 0 0

•ΗΦΛΛΛΛΛΛΜΛ A

GOOGGGGGGidG G

O OH id id id id id id O id KJ

•P G >1 O O 0 0 O 0 G 0 0

GiQXGGGGGGOa G

id>iOidfdididididftid id

+> XG X X X X X X 0 _ X _ X

M 00 φό ου φό od od od go od od

Id GH GtI G-rf GtI GtI GtI GtI Οι-H Λ-ri A -H

0 d ϋ OG OG OG OG OG OG OG OG OG P5 >1 >ιΌ HOHOHOHOHOHOHOHO H0 Λϋ·Η OH OH 0 Ή OH OH OH OH OH OH I H g >tA >i.G >ιΧ! >i,G >iA >i.G ΪηΛ >tA >ιΛ g Ό -Η 00 00 00 00 00 00 00 00 00

IQ

tn

G

id tjl i#—S /-> «"-"N <—N /-s *>—N ^ g Φ G njididididididid id QJrg·^ --------- '

G otd 1¾ S

G

•H

0 I I I I I I

>, p Q Q Q Q Q I

Η I I I I I I Η I I

OOi HHHHHH >iH H

>0>H S>t>i>i>i>iG >i >t

O >1 GGGGGGOG G

GG 000000Λ0 O

O O ΛΛΛΛΛΛΜΛ A

p G G GGGGGGtdG G

-POG (didtdidididoid id •HG id OOOOOOGO o

P><0 'GGG g GGG G Id G G

iqcqg id η id id id h id id a id id

G O Id X G X XGXOX X O X X

G G -P OidO O id O in O G 0 P O 0

£Q H G ΛΗΛ GG ,GH Jd-H G G OiG i! G G

Igid Oid O OQjOtnOGO-HO-HO 0-H

gid g HHHGHOHHHOHgHGHG -HW

id O >i 0-H 0-P O >1 O -H Old Old O-Η 00

Ό >i G >ιϋ >ιΟι >iG >ιΛ >ι·Ρ >ιΗ >1 O >i O

id OOOGO>iOOO-POGOidO>i OG

1 14G 10 IG IPG 10 IH II IH Ild

g g0.gHg-Pg&gggtngQgl7> gW

, 17 (1) rQ --- (0 °0 —s —s x ύύ in -

S-H P - - —S

a) o a a w tJl COtf r-t Φ P —— - υ a

CD — H CT\ CM

x a - -—

CO g CM CM

-H g I I O

co i in «vf σι >i a - - -

pH Η O CM CO

1 d m c3

·©. U

h d ft P M-l 0 0) 0

in η P

d τΙ Ό O -rH >1 Ηβ -3

-1-) in -'US

X & Ί3 to cd d ¢3 +)

Φ -H cd CD

ad > +>

rH

d o rd

U

u ca

Q) O

4J « d id id ft +) 0 o· s-ι *0 a ft-rj d) o >-) a η o w o ft >ΐΛ 0 o m td - d cd tn ^ g CD 5

<D

>-| old a e

H

CD % Ό 5 ® Λ 5-1 sj CD s g -P CD g

•Ή U S

4J >i ft .

CO CO pr

Λ O H

3 3 ft CO -H o ' jjj H d

2 cd ο -H

>1 O U >i I H S t7> 18

DK 156054B

Eksempel 1 (a) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-propansyre.

5,97 g N-cyclohexancarbonyl-D-alanin opløstes i 5 100 ml tørt tetrahydrofuran. Til opløsningen sattes 5,84 g carbonyldiimidazol ved mellem -20 og -15°C, og blandingen omrørtes ved denne temperatur i 1 time. Derefter tilsattes der 3,60 g 3-mercapto-2-D-methylpropansyre, og blandingen omrørtes ved mellem -15 og -10°C i 1 time og 10 derefter ved stuetemperatur i endnu 1 time. Blandingen inddampedes i vakuum til fjernelse af opløsningsmidlet.

Til remanensen sattes der 40 ml vand, og til blandingen sattes der 2 N HC1 til indstilling af dens pH til mellan 1 og 2. Blandingen ekstraheredes med ethylacetat, og det 15 organiske lag vaskedes 2 gange med mættet NaCl-opløsning og tørredes over magnesiumsulfat. Filtratet inddampedes i vakuum til opnåelse af en rå forbindelse. Ved omkrystallisation af ethylacetat/n-hexan opnåedes 7,50 g (83%) af den i overskriften anførte forbindelse som farveløse 20 prismatiske krystaller.

Smp. 149-152°C

[a]D = +46,4° (C=l,07, MeOH) NMR (CD3OD, 6): 1,20 (3H, d), 1,35 (3H, d), 1,20 - 2,0 (11H, m), 2,40 - 2,80 (IH, m), 25 3,05 (2H, m), 4,50 (IH, m) (b) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylglycylthio)-2-D-methylpropansyre.

Fremgangsmåde (a) ovenfor blev gentaget under anvendelse af 2,61 g N-cyclohexancarbonyl-D-phenylglycin, 30 1,95 g carbonyldiimidazol og 1,20 g 3-mercapto-2-D-meth-ylpropansyre. Der opnåedes 2,07 g (57%) af den i overskriften anførte forbindelse som en gul olie. fa]D = -48,7° (C=l,19, MeOH) NMR (CDC13, δ): 1,24 (3H, d) , 1,20 - 2,10 (11H, , 35 2,40 - 2,80 (IH, m), 3,10 (2H, m), 5,75 (IH, d), 6,40 - 6,80 (IH, m), 7,30 (5H, S), 8,90 (IH, S).

DK 156054 B

19 (c) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-leucylthio)-2-D-methyl-propansyre.

Fremgangangsirtåden under (a) blev gentaget under anvendelse af 2,41 g N-cyclohexancarbonyl-D-leucin, 1,95 5 g carbonyldiimidazol og 1,20 g 3-mercapto-2-D-methylpro-pansyre. Der opnåedes 2,40 g (70%) af den i overskriften anførte forbindelse som en olie.

[α]D = +12.2° (C=l,03, MeOH) NMR (CDC13, δ): 0,95 (6H, d), 1,28 (3H, d), 10 1,20 - 2,10 (11H, m), 2,40 - 2,80 (IH, m), 3,10 (2H, m), 4,70 (IH, m), 6,00 - 6,30 (IH, m), 9,20 (IH, S).

(d) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-glytaminylthio)-2-D-methyl-propansyre.

15 Fremgangsmåden under (a) ovenfor blev gentaget under anvendelse af 2,56 g N-cyclohexancarbonyl-D-glu-tamin, 1,95 g carbonyldiimidazol og 1,20 g 3-mercapto-2-D-methylpropansyre. Der opnåedes en prøve på 0,70 g (20%) af den i overskriften anførte forbindelse.

20 Smp. 146-149°C

[a]D = +10,8° (C=l,05, MeOH) NMR (CD3OD, δ): 1,20 (3H, d) , 1,20 - 2,10 (11H, ir), 2,30 (4H, m), 2,40 - 2,80 (IH, m), 3,05 (2H, m), 4,50 (IH, m) .

25 (e) 3-(N-Cyclopropancarbonyl-glycylthio)-2-D-methylpro-pansyre.

Fremgangsmåden under (a) ovenfor blev gentaget under anvendelse af 0,78 g N-cyclopropancarbonylglycin, 1,06 g carbonyldiimidazol og 0,66 g 3-mercapto-2-D-meth-30 ylpropansyre. Der opnåedes 0,70 g (52%) af den i overskriften anførte forbindelse som en olie.

[a]D = -33,8° (C=l,01, MeOH) NMR (CDC13, δ): 0,70 - 1,20 (4H, m), 1,25 (3H, d), 1,-30 - 1,80 (IH, m), 2,40 - 2,80 (IH, m) , 3,14 35 (2H, m), 4,20 (2H, d) , 7,30 (IH, S).

20

DK 156054B

(f) 3-(N-Adamantancarbonyl-glycylthio)-2-D-methylpropan-syre.

Fremgangsmåden under (a) ovenfor blev gentaget under anvendelse af 2,38 g N-adamantancarbonylglycin, 5 1,95 g carbonyldiimidazol og 1,20 g 3-mercapto-2-D-meth-ylpropansyre. Der opnåedes en prøve på 1,08 g (32%) af den i overskriften anførte forbindelse.

Smp. 132° (sønderdeling).

[<x]D = -8,3° (01,01, MeOH) 10 NMR (CD30D, δ): 1,25 (3H, d), "1,65 - 2,30 (15H,m), 2,40 - 2,80 (IH, m), 3,14 (2H, m), 4,06 (2H, d).

(g) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylalanylthio)-2-D-methylpropansyre.

Fremgangsmåden under (a) ovenfor blev gentaget 15 under anvendelse af 1,37 g N-cyclohexancarbonyl-D-phe-nylalanin, 1,0 g carbonyldiimidazol og 0,60 g 3-mercap-to-2-D-methylpropansyre. Der opnåedes 1,5 g (79%) af den i overskriften anførte forbindelse som en olie.

[aJD = +13,9° (01,02, MeOH) 20 NMR (CDC13, δ): 1,25 (3H, d), 1,20 - 2,0 (10H, m), 2,1 - 3,0 (2H, m), 3,0 - 3,4 (4H, m) , 4,95 (IH, t), 6,19 (IH, d), 7,24 (5H, S), 10,12 (IH, S).

(h) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-methionylthio)-2-D-methyl-propansyre.

25 Fremgangsmåden under (a) blev gentaget under an vendelse af 0,325 g N-cyclohexancarbonyl-D-methionin, 0,25 g carbonyldiimidazol og 0,15 g 3-mercapto-2-D-meth-ylpropansyre. Der opnåedes 0,29 g (64%) af den i overskriften anførte forbindelse som en olie.

30 [a] = -7,9° (01,0, MeOH) NMR (CDC13, δ): 1,26 (3H, d), 1,2 - 2,0 (10H, m), 2,09 (3H, S), 2,0 - 3,2 (8H, m) , 4,5 - 5,0 (IH, m), 6,62 (IH, d), 10,07 (IH, S).

35 (i) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-tryptophylthio)-2-D-methyl-propansyre.

Fremgangsmåden under (a) ovenfor blev gentaget under anvendelse af 0,157 g N-cyclohexancarbonyl-D-tryp-tophan, 0,1 g carbonyldiimidazol og 0,06 g 3-mercapto-2-

DK 156054 B

21 D-methylpropansyre. Der opnåedes Q,17 g (82%) af en gum-giagtig prøve af den i overskriften anførte forbindelse.

[a]D = -7,1° (0=1,0, MeOH) NMR (CDC13, δ): 1,26 (3H, d), 1,2 - 2,4 (11H, m), 5 2,5 - 2,9 (IH, m), 3,0 - 3,3 (2H, m), 3,35 (2H, d), 4,87 (IH, t), 6,4 - 6,9 (2H, bred S), 6,9 - 7,8 (5H, m), 10,5 (IH, S).

Eksempel 3 (a) N- [3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-10 propanoyl]-L-prolin.

1,51 g 3-(N-cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methylpropansyre opløstes i 40 ml tørt tetrahydrofuran.

Til opløsningen sattes der 0,61 g triethylamin og 0,65 g ethylchlorformiat ved -5°C under omrøring. 5 Minutter se-15 nere tilsattes der en opløsning af 0,58 g L-prolin og 0,61 g triethylamin i 5 ml vand, og blandingen omrørtes ved 0°C i 1 time og derefter ved stuetemperatur i 30 minutter. Blandingen inddampedes i vakuum til fjernelse af opløsningsmidlet. Efter tilsætning af vand til remanen-20 sen sattes der 2 N HCl til blandingen til indstilling af dens pH til mellem 1 og 2. Reaktionsblandingen ekstrahe-redes med ethylacetat, og det organiske lag vaskedes 2 gange med mættet NaCl-opløsning og tørredes over magnesiumsulfat. Filtratet koncentreredes i vakuum til fjernel-25 se af ethylacetat, og remanensen underkastedes chromato-grafi på silicagel under anvendelse af en blanding af chloroform og methanol (100:1 til 100:2) som eluerings-middel. Fraktioner indeholdende slutforbindelsen opsamledes og inddampedes i vakuum til opnåelse af 0,3 g af 30 en gummiagtig prøve af den i overskriften anførte forbindelse.

(b) Den samme forbindelse kunne fremstilles ved følgende fremgangsmåde.

6,03 g 3-(N-cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-35 methylpropansyre og 2,3 g N-hydroxysuccinimid opløstes i 50 ml tørt tetrahydrofuran. Til opløsningen sattes der 4,3 g dicyclohexylcarbodiimid ved mellem 0 og 5°C, og 22

DK 156054B

blandingen omrørtes natten over ved denne temperatur.

Efter reaktionen frafiltreredes bundfaldet, og det uopløselige materiale vaskedes med en lille mængde tetra-hydrofuran. Filtratet og vaskevæsken hældtes sammen og 5 fconoentreredes i vakuum..Hl remanensen sattes ethylacetat, og blandingen filtreredes. Ethylacetatopløsningen vaskedes med 0,5 N HC1, vand, vandigt Na2C03 og mættet NaCl-opløs-ning i den nævnte rækkefølge. Opløsningen tørredes over magnesiumsulfat og inddampedes i vakuum, og remanensen 10 størknede efter tilsætning af en blanding af ethylacetat og hexan (1:10). udbyttet af det faste produkt var 6,90 g (87%).

Smp. 113 - 116°C

[a]D = 14,2° (C=l,05, MeOH) 15 NMR (CDC13, δ): 1,38 (6H, d), 1,20 - 2,20 (llH,m), 2,82 (4H, S), 2,8 - 3,30 (3H, m), 4,75 (IH, m), 6,30 (IH, bred d).

3,98 g af den aktiverede ester opløstes i 40 ml tetrahydrofuran. Til opløsningen sattes en opløsning af 20 1,15 g L-prolin og 1,26 ml N-ethylmorpholin i 5 ml vand, og blandingen omrørtes natten over. Blandingen inddampedes i vakuum til fjernelse af opløsningsmidlerne, og der sattes vand til remanensen. Til blandingen sattes der 2 N HCl til indstilling af dens pH til mellem 1 og 2. Re-25 aktionsblandingen ekstraheredes med ethylacetat, og det organiske lag vaskedes med mættet NaCl-opløsning og tørredes over magnesiumsulfat. Filtratet inddampedes i vakuum. Remanensen underkastedes kolonnechromatografi på silicagel under anvendelse af en blanding af chloroform 30 og methanol (100:1 til 100:2) som elueringsmiddel. Det ved inddampning af eluatet i vakuum opnåede produkt (1,45 g) viste sig ved NMR-analyse at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

(c) Den i overskriften anførte forbindelse kunne også 35 fremstilles ved følgende fremgangsmåde.

4,52 g 3-(N-cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methylpropansyre opløstes i 5 ml thionylchlorid. Til opløsningen sattes der en dråbe dimethylformamid, og bian- 23

DK 156054B

dingen omrørtes ved stuetemperatur natten over. Blandingen inddampedes i vakuum til fjernelse af opløsningsmidlerne, og til remanensen sattes 2 ml tørt toluen., og blandingen inddampedes igen i vakuum til fjernelse af 5 opløsningsmidlet. Til remanensen sattes der 10 ml tørt tetrahydrofuran under omrøring. Tetrahydrofuranopløsningen indeholdende syrechloridet sattes dråbevis ved en temperatur på mellem 5 og 10°C under omrøring til 25 ml vand, hvori der var opløst 2,3 g L-prolin og 2,5 g 10 Na2C03· Blandingen omrørtes ved denne temperatur i 1 time og ved stuetemperatur i yderligere 2 timer. Reaktions-blandingen underkastedes ekstraktion med chloroform. Til det vandige lag sattes der 2 N HC1 til indstilling af dets pH til mellem 1 og 2. Efter ekstraktion med chloro-15 form vaskedes chloroformlaget 2 gange med mættet NaCl-opløsning og tørredes over magnesiumsulfat. Efter fjernelse af chloroformet underkastedes remanensen kolonne-chromatografi på silicagel under anvendelse af en blanding af chloroform og methanol (100:1 til 100:2) som elu-20 eringsmiddel. Efter inddampning i vakuum opnåedes der 1,6 g af et gummiagtigt stof. Stoffet viste sig ved NMR-analyse at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

(d) Den i overskriften anførte forbindelse kunne frem-25 stilles ved endnu en fremgangsmåde som beskrevet nedenfor.

3,01 g 3-(N-cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methylpropansyre og 1,71 g t-butylester af L-prolin opløstes i 50 ml tørt dichlormethan, og der sattes 2,15 g 30 dicyclohexylcarbodiimid til opløsningen under omrøring og afkøling med is. Blandingen omrørtes ved den samme temperatur i 1/2 time og henstilledes natten over ved 5°C. Reaktionsblandingen filtreredes, og det uopløselige materiale vaskedes med dichlormethan. Filtratet og va-35 skevæsken hældtes sammen og vaskedes med 1 N HC1, vand, 1 N NaHCOg og mættet NaCl-opløsning i den nævnte rækkefølge, tørredes over MgSo^ og inddampedes i vakuum til opnåelse af 4,3 g af en gummiagtig prøve af t-butylester 24

DK 156054B

af N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-propanoyl]-L-prolin. En 4,0 g prøve af esteren opløstes i 30 ml anisol, og der sattes 10 ml trifluoreddikesyre til opløsningen. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur 5il time og inddampedes i vakuum til fjernelse af overskud af trifluoreddikesyre. Remanensen underkastedes ko-lonnechromatografi på silicagel (kolonne: 2 x 35 cm) under anvendelse af en blanding af methanol og chloroform (1:100 til 3:100) som elueringsmiddel. Fraktioner inde-10 holdende slutforbindelsen opsamledes og inddampedes i vakuum til opnåelse af 3,4 g af et gummiagtigt stof. Dette stof viste sig ved NMR og tyndtlagschromatografi at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

De anvendte reaktanter, reaktionsopløsningsmidler 15 og fremgangsmåder til fremstilling af den i eksempel 3 i overskriften anførte forbindelse er anført i nedenstående tabel sammen med data vedrørende dens fysiske egenskaber. Andre forbindelser fremstilledes ved anvendelse af en af de i eksempel 3 (a) til (d) beskrevne fremgangs-20 måder, og nærmere oplysninger om den specielle fremgangsmåde er anført i nedenstående tabel sammen med data vedrørende slutforbindelsernes fysiske egenskaber. I tabellen angiver tallene efter tallene (1) og (2) i kolonnen med "Rf-værdi" de ved tyndtlagschromatografi opnåede Rf-25 værdier under anvendelse af henholdsvis CHCl^/MeOH/AcOH (2:1:0,003) og n-BuOH/AcOH/I^O (4:1:1) som elueringsmiddel.

DK 156054B

fH U3H 25 000 "tfoi tf SP ko ko e oo S *- * * *· * s |> o o o o o o * ØJ9 ?! S Θ a „« „ tf xxtf 0? ^tf jtf! E«'0'00^!«'0^ ^ Η Λ*ΰΗϋ!!ΐ!1ιΐ!ΐ!!ΐ!ω ,3 Η M ffl Æ η (Λ Æ^WMWfflWtd o ^ '-’G.gi g! ft ft ™ d.i£Ci£i3 kd> 3 *n°innmoin5 ^ ^ to σ> t-> '"t h f»3 m ro *p ro S cn — —· f\i » .. «. ·. -.—" CN - «· -Γ'·'— ^ - g I c\j ro ro m uo i rp rp ^ I cprprptnvp r-' 5 o 00 L0 I I I I IH HmlllmHOllllICTil z cNroinoLn^ooro cn ro Ό ^ o ro o CNicNinroor'rsLn kkktkkkk^^ ^ ^ ^ k ^ ^ ,-Ι,-Ι,-Ι^ίΝΐη^νβΓ' HHCNro^voc'i HHNfO^tnM^ k* «3 0 - ' 0 o ^ o o 0 o ^

\o «. ji) " »tfl H " W

Q *. H O OIHO *· H O

r- Η II Q) O II 0) 00 II <D

SJ L0OS HOS mos I—I I I ^ I ^ «k c H id (D ri ri ι Ό ri td ftrø m x!

OHO P

M g ri Q) I *>

β W >d g Η* ^ I S

0 &I >1 · · M >|H >i (d H ri Æ 0 o 0 Æg Æ ri o p H rd Ό ΌΗ P td ιί3^ Ό n>d Æ <D g td ω p ri o g h +} o fi (D 0) Id H HO (i) ri id 6 h p > Ό Tim P Ό > .

p d

H

g *d

fi I Η I I I

ri O H * ri H H ri ‘ Φ m >1 *d o >id fr'd i >ι"ΰ P ri χ Η I Ό Η X H XiH ri 5^·Η i d

β 0 a)g >iH Æ <Dg J)g 0 d§ >i-H

(d H Æ Η K g 0 ÆH ÆH H Æ Η K g P Æ OHOHH OH OH Æ P O j O j X 0 η Ό ri ri >1 h 'd H «d o td H-driri

rd H O O *d H ri OO OO HH ϋ Od-H

<U >1 >iÆ >1 o O >iÆ >iÆ >i g >iÆ >i 0 PS Λ OriÆOH ori Ori Æ ri o ri Æ o p HtdiriÆ Htd h (d po h td i ri <u ·ό o Z ω P *do d o (DH Όοζω tn d^ c id ¢) « « -—- ^~· ^ Τ' tnO (d Æ O Ό Td (d Æ

Og i S L ' S L· . L

ri t I H ri H gi Æ

fri (dHlH tdlH ΛΗ I

X >iH 0 X - - H P * >< ' —

o)a>,ri o 1 >i ri oriQH

Æ td Æ ft .riHÆft Æ0I>1 OHPI 0>iP I Orioi o ri H id ffl ri HO<DH H ft I ri <D Olgl 0>igl O I - d to >iQ I >ιΗ I I— >hQ O ft Η OIPH OtnPH 0 1 H 0

<D I Η I >ι I Η I >ι I Hri M

Z >iCM O 2 O S >iP ft

ri ^ ri i ΰ '"S1 S TS33S

H lO'-'ld lO^id I O tri >i H

X! coxioft ro Xi o ft roPriÆn

ri —‘riHO ·—‘riHO “riidPO

O i (d Æ ri i id Æ ri I ")ri Ji M

Iri ZOPft ZOPft ZOtdgft

DK 156054 B

Ή or- 26 η Γ'- I οο ο) 5J νο ιο ιο m οο j> «. ·. ^ * *· ι ο ο ο ο ο ο S øø Θ 0 0 MM ^ * a a τΐ al ω ΤΜ CM -- CM CM ® Ν JM -Η - cr< '— β »1 '-''-'HP - Hl -Η ο ^ m * /-»io μ Λϋ ^ - U øl ffi ro-i *n e\ »--', n > *»cn o cp— S cm ES'féfririHS1 δ-'Τοφί™ Mgåa 8 -°~ΓίΛ“ -a -""»hS - -“B'frøiP -10 i B&l«'t'8 o" 2 tST «V® 3 ^ g - - - , i“ s la-^Sau- l"«uu»al s Λ-5§§8§~Λ.

u a a a ® a j· a o^ a ! zz^zmziiiiiiz a cm in h a ^.oo μ μ1 σι ffl HnmHhouico 51 h. ι. κλι ^ *. hi I s. k tH > Μ ·* ·*

g i—1 iH CM '— £j S OV- HH-'gXIfiW r-lHCM^-tfCOlOCO

•k *· *· Q Ο O Ο O r-y 0 Oj-j r-, cn -a o *-a oo - a a ? is f ii ? ύ §1 j I Α - as ϋ I g| ål 1 11¾ !h |l I 1 III Hi a h la !>

'S

•i k ,,. i ,i 1 4 fi ! ft

S P ii i P

tfci o a ω -P -hu w g> λ ^ ^ 3 ai Λ O m 5^ — V_.

i*i A

a if,.s aa, 3 hil sil* llis sif?

ι &*S* Hlå HU

Η I ri I H IH I >ι I H Qd ω a >1CM >1 S S S ^'3 & ό vs i 9 rc 1 g rSfi g å a|3l alii νΙ|Ί g g o ? ^ g o? ft aofiiii*

DK 156054 B

S S3 27 S3

Li ·* * O * ^ .

S O O r* O O O ; λ Q Θ Θ Θ .

^ .g*1 i 8^ , ?5A, s ·8*ίί8Ί§8 S^^gEe8^ i®iS'as'8 .

UjT! sitvvii.k. ^ Lj r»*fc k k ^ t. J-J £Q * * * * * ϊ, ÆgggflOmM Λ5§”{§8” ; t Si“iS§i9 SS;Hi°S§ iCniWH ! ϋ ro ro I m ro in I ro ro rp Η ΐ co I i I wrorO ro Η o I I I m o Hl l c^j l I lo .

pi HromcoroLnroa'i <7iforoinroo<y>ro cn ro ro ro o t'- !

*«g I

g γΗρ-κμομοιοι^οο oHHNro'finh η H ro ro oo ^ σ\ h» ' h* O *-> ·» s o o «»i ffi O o >—> - * h? - xs :- vi a s 48 ΐ as s il H § $ λ,ι s ! . .

il 1 i i S é i « « 5 S é 4? i? ' I « i ss ai a all a^i

Isa! ϋ sål aåP I

I j g |0 I S ' ^ »S 8 i j "B & i s g ύ 3 s fly 1 fife! S, ί S å &8 $3 såsl "8 3*|Ι χ,; * i 1 is |i mi ti till i Φ |1 8-h <u »S ^ o is ra α)υ b o s 5i 5 ΰ g1 fO (1) '-—S <~N <—S *-“> ',~~? O* O*

CnO nj ϋ T3 rd Λ fd Λ U

ri~ w w w w h i, Λ il ί il i IM ml 1|^ s tflt pi till h στ-a σ ξΓ i q h υ i h g φ IHÆM I Η I >i I Η Π 9 •Q S >1? ft. SfrSj^rj I Al Alot ά-δϋΐΊ I ii§ll Ϊ8ί!&

DK 156054 B

. „ CO (N

'S r-~ ro 28 5 § mr^ ^ ld ώ° m ^ *· -

I θβ^ øf ~å I

~ ~ $ Q <? ^ M| V_. o3 ^ c3 >- --'Ml >·λι«λ *· - ΓΊ M| ,,ι °8 ^ °3 “ S’-08¾1^¾¾1¾ S1 rd oj τ) ro ^ Ό *· cm ~ s^ggggggQ grg8JggfigggJK -g^øafiu ».Li «* *» *» i*. V W fc. *. Lj M *»*·*·*·>** - M^MMMMMMW ΜΛ^ΜΜΜΜΜΜΗ Λ c* Μ Μ Μ Μ tn ΓΟ *φ H^rOCNfOrH -31 H (O N (N Η ^ Η CO CM ΓΟ Π

0 MM Μ M

q onm'jnmhOH οηπσι^ποοοο n'TNfflhOri Μ ν'—· v V V V V V v —'—1 vvvvvv vvvv — h HCMrorO'ico Η H cm op rp lo r- ,Νηη'ίΐ' I o I I I I I 1 CO I O CM I I I I I I in i—1 1 I I I I <30

pi vocM-^'cri'sDrocicM·^ (θ<Ν·'3<''3ισ')ΐηΗΗ'3,'3< cm Ό cm ^ ro H

g ΟΗι-ΙΗΟίΓΟΓΟΡ-ΟΟ OrlrlrlrlM^^^^ Η H CN CO 00 VØ CO

O *. *> * CO o0 O O O Ος

*.ν>υ Γ" * M "Μ* * M

»Q § n ? n ? p h id $ i i ή 11¾ i|| 1 i

8 3 «3 ifi ? <d fl £ +» -O

Sj Ti

φ I -Η I

t jj j, Ί2 1 JjI ‘1 'S Sh m i 3¾ o % &§ 5¾

* Mb s m M

III S 81 38 ft g> ~ (3 d) ^ λ o τ3 g>j λ 3 S ^ u s

* ,3 .S

1 4 i 1« 5 1S 1 I Η I >1 IH! >1 β H Dj

O >iCM O O >1·^ Q 3 L

a ogjLg US-3i I Κι·? a &·@-3 §„ &·§ å &1¾¾ s i is Is ill’ll έ||| I Xå$p a 1111 a||| i mis nits ϊύι

DK 156054B

^ CM oo 29 U ^ m *» •k <§i§ s

O) CM

~~g‘ 8 *tes 10 rr ff kb *. *>. ·* s 1 -6 s a 6 - 3 3 cd cd tå cd ^ro cii£ dd H ® LO CM <7\ <T> 0 '— ' ' ' s *· ^ cm ro m ^ r*

_ O I I 1 I I

(¾ cm co in m h vo *gj ^ *.<*.*. w g η h cm m sr in 0 o'c 0 * ffi =? B tt UJ I «w" aj k.’H i || i || S s-

Sri H 3 "d t3 ω 4-> m q d> ·& φ 3 3 Ά Η +ΙΉ > a al o +j m

5 f—I

1 I

0) 6 E <u 15 II “ u i fe ^ iiil 1 5^1¾

Ό -5.¾ I

μ h b1 aj j 0) pi g 1 tø >i O 1 <—?

Η O I Q H

J i-ri i ^

|j S Q

« illl fi åSSS,

DK 156054 B

30

Eksempel 4

Der dannedes forskellige salte ud fra de i eksemplerne 3 og 5 fremstillede prøver af N-[3-(N-cyclohexan-carbonyl-D-alanylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin.

5 (a) Ca-salt.

En 3,98 g prøve af den i eksempel 3 eller 5 fremstillede forbindelse opløstes i 40 ml methanol. Til opløsningen sattes der 0*84 g calciumacetat-hydrat, og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 1 time. Det u-10 opløselige stof frafiltreredes, og filtratet inddampedes i vakuum. Til remanensen sattes der chloroform, og blandingen filtreredes og inddampedes i vakuum. Til remanensen sattes der diethylether, og blandingen filtreredes og lufttørredes til opnåelse af 3,40 g af et kaliumsalt 15 af forbindelsen ifølge eksempel 3 eller 5. [a]D = -47,2° (C=1,0, MeOH).

(b) Mg-salt.

Fremgangsmåden under (a) blev gentaget under anvendelse af 3,09 g af den i eksempel 3 eller 5 fremstil-20 lede forbindelse og 0,772 g magnesiumacetat-tetrahydrat.

Der opnåedes 2,42 g af et magnesiumsalt af forbindelsen ifølge eksempel 3 eller 5. [a]Q = -46,6 (C=1,0, MeOH).

(c) Lysinsalt.

En 1,19 g prøve af den i eksempel 3 eller 5 frem-25 stillede forbindelse opløstes i 22 ml methanol. Til opløsningen sattes der 0,416 g lysin, og blandingen omrør-tes ved stuetemperatur i 1 time og inddampedes i vakuum.

Til remanensen sattes der chloroform, og blandingen fil-treredes og inddampedes i vakuum. Til remanensen sattes 30 der dimethylether, og produktet frafiltreredes med sugning til opnåelse af 1,54 g af et lysinsalt af forbindelsen ifølge eksempel 3 eller 5. [α]β = -23,1° (C=1,0,

MeOH).

(d) Na-salt.

35 En 2,27 g prøve af den i eksempel 3 eller 5 frem stillede forbindelse opløstes i 25 ml methanol. Til opløsningen sattes 0,514 g natriumacetat, og blandingen om- 31

DK 156054 B

rørtes ved stuetemperatur i 30 minutter og inddampedes i vakuum. Til remanensen sattes 200 ml af en blanding af methanol og chloroform (3:100 v/v) , og den opnåede blanding filtreredes og inddampedes i vakuum. Remanensen op-5 løstes i methanol, og opløsningen filtreredes og inddampedes i vakuum. Til remanensen sattes ethylacetat, og produktet filtreredes med sugning til opnåelse af et Nasalt af forbindelsen ifølge eksempel 3 eller 5 (1,85 g).

[a]Q = -26,7° (C=l,0, MeOH).

10 (e) Dicyclohexylaminsalt.

En 13,1 g prøve af forbindelsen ifølge eksempel 3 eller 5 opløstes i 120 ml acetonitril. Til opløsningen sattes 6 ml dicyclohexylamin under omrøring. Blandingen omrørtes yderligere i 30 minutter og henstilledes deref-15 ter natten over. Bundfaldet frafiltreredes med sugning og lufttørredes. De opnåede rå krystaller suspenderedes i 300 ml acetonitril, og suspensionen opvarmedes under tilbagesvaling i 30 minutter. Suspensionen afkøledes, og krystallerne frafiltreredes med sugning og lufttørredes 20 til opnåelse af et dicyclohexylaminsalt af forbindelsen ifølge eksempel 3 eller 5 (12,2 g). [a]D = -24,5° (C=1,0,

MeOH).

Eksempel 5 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methylpro-25 panoyl]-L-prolin.

5,98 g N-cyclohexancarbonyl-D-alanin opløstes i 80 ml tørt tetrahydrofuran. Til opløsningen sattes 5,84 g carbonyldiimidazol ved -18°C under omrøring, medens blandingen afkøledes med is. Blandingen omrørtes ved den-30 ne temperatur i 1 time, og derefter sattes der 6,29 g N-(3-mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-prolin til blandingen, hvorefter der omrørtes ved -18°C i 30 minutter og derr efter ved stuetemperatur i 1 time. Efter endt reaktion inddampedes blandingen i vakuum til fjernelse af opløs-35 ningsmidlet. Til remanensen sattes 50 ml vand, og der sattes 2 N HC1 til blandingen til indstilling af dens pH til mellem 1 og 2. Blandingen ekstraheredes med ethylacetat,

., DK 156054 B

32 og ethylacetatlaget vaskedes med mættet NaCl-opløsning, tørredes over MgSO^ og inddampedes i vakuum. Til remanensen sattes 120 ml acetonitril og derefter 6 ml dicyclo-hexylamin (DCHA). Blandingen omrørtes ved stuetemperatur 5 i 1 time. Efter henstand natten over frafiltreredes bunch faldet og lufttørredes til opnåelse af et råt DCHA-salt (14,35 g). Det rå salt suspenderedes i 300 ml acetonitril, og suspensionen opvarmedes under tilbagesvaling i 30 minutter. Efter afkøling opsamledes bundfaldet ved frasug-10 ning og lufttørredes til opnåelse af et hvidt DCHA-salt (12,20 g). DCHA-saltet (12,20 g) suspenderedes i 90 ml ethylacetat, og til suspensionen sattes 60 ml 0,5 N vandig KHSO^-opløsning, og blandingen omrystedes. Det organiske lag vaskedes med destilleret vand, tørredes over 15 MgSO^ og inddampedes i vakuum til opnåelse af et gummi-agtigt stof (8,64 g). Stoffet viste sig ved NMR-analyse og tyndtlagschromatografi at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

NMR(CDC13, δ) Rf-værdL

3,4-3,9 (2H, m, 0¾), XV 0,71 4.0- 5,0 (2H, m, CH), 25 6,0-6,5 (IH, m, Mi), 7,31 (IH, S, C02H),

Eksempel 6 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-glycylthio)-2-D-methylpropa-30 noy1]-L-prolin.

1,02 g N-cyclohexancarbonylglycin opløstes 10 ml tørt tetrahydrofuran. Til opløsningen sattes 20 ml tørt tetrahydrofuran indeholdende 1,07 g carbonyldiimidazol ved -20°C under omrøring, medens blandingen afkøledes 35 med is. Blandingen omrørtes ved denne temperatur i 1 time, og derefter tilsattes der 6 ml tørt tetrahydrofuran 33

DK 156054 B

indeholdende 1,09 g N- (3-mercapto-2-D-methylpropanoyli)-L-prolin, hvorefter der omrørtes ved -20°C i 30 minutter og derefter ved stuetemperatur i 1 time. Efter endt reaktion inddampedes blandingen i vakuum til fjernelse af 5 opløsningsmidlet. Remanensen underkastedes kolonnechro-matografi på silicagel (kolonne: 2 x 35 cm) under anvendelse af en blanding af methanol og chloroform (1:100 til 3:100) som elueringsmiddel. Fraktioner indeholdende slutforbindelsen hældtes sammen og inddampedes i vakuum til 10 opnåelse af et gummiagtigt stof (1,16 g). Stoffet viste sig ved NMR-analyse og tyndtlagschromatografi at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

NMR(CDClj, δ) Rf-værd.

15 1,21 (3H, bred d, QU , 1.35- 2,5 (14H, m, qg), 2,6-3,3 (4H, m, (¾ & Og)/2)0,60 3,4-3,9 (2H, m, OLJ, 4,0-4,7 (3H, m, QT& qU/2)0,68 6.35- 7,1 (IH, m, NH), 9.01 (IH, S, C0?H_ 20

Eksempel 7 N-[3-(N-Cyclopropancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methylpro-panoyl]-L-prolin, 25 635 mg N-cyclopropancarbonyl-D-alanin og 0,70 ml triethylamin opløstes i 14 ml tørt tetrahydrofuran. Til opløsningen sattes 0,48 ml ethylchlorformiat ved -15°C under omrøring, medens blandingen afkøledes med is. Blandingen omrørtes ved denne temperatur i 15 minutter, og 30 derefter tilsattes der 1,09 g N-(3-mercapto-2-D-methyl-propanoyl)-L-prolin og 10 ml tørt tetrahydrofuran indeholdende 0,70 ml triethylamin, hvorefter der omrørtes ved ~15°C i 15 minutter og derefter ved 5°C natten over.

Efter endt reaktion inddampedes blandingen i vakuum ved 35 30 til 35°C til fjernelse af opløsningsmidlet. Til remanensen sattes 10 ml vand, og der sattes 2 N HC1 til blandingen til indstilling af dens pH til mellem 1 og 2.

Blandingen ekstraheredes med chloroform, og chloroform- 34

DK 156054 B

laget vaskedes med mættet NaCl-opløsning, tørredes over MgSO^ og inddampedes i vakuum. Remanensen underkastedes kolonnechromatografi på silicagel (kolonne: 2 x 35 cm) under anvendelse af en blanding af methanol og chloroform 5 (1:100 til 3:100) som elueringsmiddel. Fraktioner inde holdende slutforbindelsen hældtes sammen og inddampedes i vakuum til opnåelse af et gummiagtigt stof (395 mg).

Dette stof viste sig ved NMR-analyse og tyndtlagschroma-tografi at være identisk med den i overskriften anførte 10 forbindelse.

NMR(CDCl3, δ) Rf-værd 0,6-1,0 (4H, m, (¾), 1.20 (3H, bred d, CH ),

1,42 (3H, d, OL), J

15 1,4-1,9 (IH, mT CH), φθ,53 1,9-2,4 (4H, m, (¾), 2,5-3,3 (3H, m, qf& OL)J00,60 3.4- 3,8 (2H, m, OL), A .4,1-5,0 (2H, m, CHJ/ 6.4- 7,0 (IH, m, NH), 20 7,45 (IH, S, 002H)

Eksempel 8 N- [3- (N-Cyclohexancarbonyl-N.-methylglycylthio) -2-D-meth-ylpropanoyl]-L-prolin.

25 Fremgangsmåden ifølge eksempel 6 blev gentaget med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstattedes med N-cyclohexancarbonyl-N-methylglycin (1,09 g), carbonyldiimidazol (1,09 g) og N-(3-mercapto-2-D-methyl- propanoyl)-L-prolin (1,09 g). Der opnåedes et gummiag-30 tigt stof (0,76 g), og det viste sig ved NMR-analyse og tyndtlagschromatografi at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

NMR(CDC13, δ) Rf-værd 1.21 (3H, bred d %) 35 1,3-2,4 (14H, m, %7, 2.4- 3,3 (4H, m, æ & 0^),0,)0,66 3.22 (3H, S, CEL), 3,3-3,8 (2H, m, cL), <2)0,62 4,0-4,7 (3H, m, ΟΓ& OL), 9,75 (IH, S, CO^)

. DK 156054B

35

Eksempel 9 N-[3-(N-Cyclopropancarbonylglycylthio)-2-D-methylpropa-noyl]-L-prolin.

Fremgangsmåden ifølge eksempel 6 blev gentaget 5 med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstattedes med N-cyclopropancarbonylglycin (0,96 g), carbo-nyldiimidazol (1,09 g) og N-(3-mercapto-2-D-methylpropa-noyl)-L-prolin (1,09 g). Der opnåedes et gummiagtigt stof (0,4 g), og det viste sig ved NMR-analyse og tyndt-10 lagtchromatografi at være identisk med den i overskrifter anførte forbindelse.

NMR (CDCl^, 6) Rf-vaercti.

0,6-1,0 (4H, m, OL), 1.20 (3H, bred d, CH,), 15 1,4-1,9 (IH, m, CH), _ 1.9- 2,4 (4H, m, OL), ©0,47 2.6- 3,3 (3H, m, CH& QU, 3.3- 3,9 (2H, m, OL), ©0,53 3.9- 4,7 (3H, m, C3f& %), 7.2- 8,0 (IH, m, NH),

8,48 (IH, S, G02hF

20-

Eksempel 10 N-[3-(N-Adamantancarbonylglycylthio)-2-D-methylpropano-yl]-L-prolin.

25 Fremgangsmpden ifølge eksempel 6 blev gentaget med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstattedes med N-adamantancarbonylglycin (1,42 g), carbonyldi-imidazol (1,09 g) og N-(3-mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-prolin (1,09 g). Der opnåedes et gummiagtigt stof (1,7 30 g)/ og det viste sig ved NMR-analyse og tyndtlagschro-matografi at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

NMR(CDC13", 6) Rf-værd.

1.21 (3Η, bred d, OL.), 1.6- 2,4 (19H, m, CH5 CH-) 35 2,2-3,2 (3H, m, CH & cCT©0,58 3.4- 3,8 (2H, m, (¾), 3.9- 4,7 (3H, m, qT& CH-) ©0,72 6.3- 7,0 (IH, m, I®, 8,19 (IH, S, C02H)

DK 156054B

36

Eksempel 11 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylalanylthio)-2-D-meth-ylpropanoyl]-L-prolin.

Fremgangsmåden ifølge eksempel 6 blev gentaget 5 med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstattedes med N-cyclohexancarbonyl-D-phenylalanin (1,54 g), carbonyldiimidazol (1,09 g) og N-(3-mercapto-2-D-methyl-propanoyl)-L-prolin (1,09 g). Der opnåedes et gummiag-tigt stof (0,97 g), og det viste ved NMR-analyse og 10 tyndtlagschromatografi at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

NMR(CDC13, 6) Rf-værd 1,20 (3H, bred d, CHJ, 1.2- 2,5 (14H, m, O€f, 15 2,5-3,3 (6H, m, CH & CELj,©0,64 3.3- 3, 6 (2H, m, (fL), ^ 4,0-5, 3 (2H, m, c|7, ©0,82 5,7-6,4 (IH, m, 1®}, 7,29 (5H, S, aromatisk), 7,5-7,9 (IH, bred S, CD£) 20

Eksempel 12 N-[3-(N-C^clohexancarbonyl-D-leucylthio)-2-D-methylpropa-noyl]-L-prolin.

Fremgangsmåden ifølge eksempel 6 blev gentaget 25 med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstattedes med N-cyclohexancarbonyl-D-leucin (1,20 g), carbonyldiimidazol (0,97 g) og N-(3-mercapto-2-D-methylpropano-yl)-L-prolin (0,98 g). Der opnåedes et gummiagtigt stof (1,17 g), og det viste sig ved NMR-analyse og tyndtlags-30 chromatografi at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

37

DK 156054 B

NMR (CDCLj, 6) Rf-værdi 0,93 (6H, df OL), 1,21 (3H, bredd, CHJ, 1,30-2,5 (17H, m, CH & CHJQOjBl 5 2,5-3,3 (4H, m, CH & CH.S, 3,3-3,9 (2H, m, (¾), ©0,73 4,0-5,0 (2H, m, CH), 5,95-6,5 (IH, m, NH) , 7,30 (IH, S, 002g) 10 Eksempel 13 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-tryptophylthio)-2-D-methyl-propanoyl]-L-prolin.

Fremgangsmåden ifølge eksempel 6 blev gentaget med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstatte-15 des med N-cyclohexancarbonyl-D-tryptophan (1,75 g), car-bonyldiimidazol (1,09 g) og N-(3-mercapto-2-D-methylpro-panoyl)-L-prolin (1,09 g). Der opnåedes et gummiagtigt stof (0,8 g), og det viste sig ved NMR-analyse og tyndt-lagschromatografi at være identisk med den i overskrif-20 ten anførte forbindelse.

NMR (CDC13, 6} Rf-værdi

1,15 (3H, bred d,_q|X

1,3-2,4 (14H, m, Cgj, 2,5-3,9 (8H, m, CH_S CEL), _ 25 4,1-4,7 (IH, m, CH), ©0,58 4,7-5,2 (IH, m, CH), _ 6,0-6,4 (2H, m, NH), ©0,82 6,95-7,9 (5H, m, aromatisk), 8,80 (IH, bred S, COH)_ 30 Eksempel 14 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylglycylthio)-2-D-meth-ylpropanoyl]-L-prolin.

Fremgangsmåden ifølge eksempel 6 blev gentaget· med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstatte-35 des med N-cyclohexancarbonyl-D-phenylglycin (1,30 g), carbonyldiimidazol (0,97 g) og N~(3-mercapto-2-D-methyl-propanoyl)-L-prolin (0,98 g). Der opnåedes et gummiag-

DK 156054B

38 tigt stof (0,35 g), og det viste sig ved NMR-analyse og tyndtlagschromatografi at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

NMR (CDC13, 6) Rf -værdi 5 1,18 (3H, bred d, (¾), 1,3-2,5 (14H, m, CoJ, 2,5-3,8 (6H, m, ofl 0^)/^)0,58 4,2-4,7 (IH, m, CH), 5,62 (IH, d, CH), ©0,83 6,53 (IH, d, MI), 7,37 (5H, S, aromatisk), 10 8,90 (IH, S, CO^)

Eksempel 15 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-methionylthio)-2-D-methyl-propanoyl]-L-prolin.

15 Fremgangsmåden ifølge eksempel 6 blev gentaget med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstattedes med N-cyclohexancarbonyl-D-methionin (1,30 g), car-bodiimidazol (1,09 g). og N-(3-mercapto-2-D-methylpropa-noyl)-L-prolin (1,09 g). Der opnåedes et gummiagtigt 20 stof (0,59 g), og det viste sig ved NMR-analyse og tyndt-lagschromatografi at være identissk med den i overskriften anførte forbindelse.

NMR (CDCl^, 6) Rf-vænH

25 1,23 (3H, bred d, OL), l, 5-2,4 (16H, m, OL·), 2,10 (3H, S, CH.,) ,*2,59 (2H, t, CEL·), 277-3,3 (4Η,φθ,60 m, CH_& cfu) , 3,3-3,9 (2H, m, QU, 470-5,1 (2H, m, ©0,77 CH), 5,49 (IH, d, NH), 30 7,81 (IH, S, C02g)

Eksempel 16 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-glutaminylthio)-2-D-methyl-propanoyl]-L-prolin.

35 Fremgangsmåden ifølge eksempel .6 blev gentaget med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstatte- 39

DK 156054 B

des med N-cyclohexancarbonyl-D-glutamin (o,5 g), carbo-nyldiimidazol (0,41 g) og N-(3-mercapto-2~D-methylpropa-noyl)-L-prolin (0,41 g).

Der opnåedes et gummiagtigt stof (0,3 g), og det 5 viste sig ved NMR-analyse og tyndtlagschromatografi at være identisk med den i overskriften anførte forbindelse.

NMR (CDCly 6) Rf-værdi.

1,20 (3H, bred d, CEL), 10 1,3-2,5 (16H, m , CH?), φθ,42 2.5- 3,2 (6H, m, OJ_&UL), 3,3-3,9 (2H, m, OL) ©0,48 4,1-4,9 (2H, m, Oif, 5.6- 7,6 (4H, m, NH & COjH) 15 Eksempel 17 N-[3-(N-Adamantancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methylpropa-noyl]-L-prolin.

Fremgangsmåden ifølge eksempel 6 blev gentaget med den forskel, at N-cyclohexancarbonylglycin erstatte-20 des med N-adamantancarbonyl-D-alanin (1,2 g), carbonyl-diimidazol (0,97 g) og N-(3-mercapto-2-D-methylpropano-yl)-L-prolin (0,98 g). Der opnåedes et gummiagtigt stof (1,02 g), og det viste sig ved NMR-analyse og tyndtlagschromatografi at være identisk med den i overskriften an-25 førte forbindelse.

NMR (CDC13, 6) Rf-værdi 1,21 (3H, bred d, CEL), l, 41 (3H, d, OL), 176-2,4 (19H, m, æ,),"1,4-3,2 (3HJØ0,63 30 m, CH & OLJ, 3,4-3,9 (2H, breds, cS), 4,1-5,0 (2Η,φθ,67 m, CH), 675-6,8 (IH, bred S, NH), 8,10 (IH, S, C02H)

DK 156054 B

40

Eksempel 18

Dicyclohexylaminsalt af N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin.

(1) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-5 propansyre (241 g) suspenderedes i tørt dichlormethan (1,3 liter). Til suspensionen sattes der dråbevis tri-ethylamin (117 ml) ved -15°C under omrøring, og derefter tilsattes der dråbevis pivaloylchlorid (104 ml) ved unda: -5°C under omrøring, og blandingen omrørtes yderligere i 10 30.minutter.

(2) L-Prolin (101 g) suspenderedes i tørt dichlormethan (1,2 liter). Til suspensionen sattes der dråbevis trimethylsilylchlorid (112 ml) ved -15°C under omrøring, og derefter tilsattes der dråbevis triethylamin (122 ml) 15 ved under -5°C under omrøring, og blandingen omrørtes yderligere ved -15°C i 30 minutter. Til den opnåede blanding sattes den under (1) fremstillede opløsning, og blandingen omrørtes under afkøling i 15 minutter og derefter ved stuetemperatur i 1 time. Efter endt reak-20 tion sattes der koldt destilleret vand (1 liter) til reaktionsblandingen under afkøling, og derefter tilsattes der dråbevis koncentreret saltsyre (90 ml). Blandingen omrørtes i 10 minutter, og det organiske lag fraskiltes, vaskedes 2 gange med mættet NaCl-opløsning og tørredes 25 over magnesiumsulfat. Til filtratet sattes der dicyclo-hexylamin (326 ml) og acetonitril (800 ml), og blandingei omrørtes i 30 minutter. Derefter tilsattes der 4 800 ml portioner acetonitril med 10 minutters mellemrum, og man lod den opnåede blanding henstå natten over ved 5°C.

30 Bundfaldet frafiltreredes med sugning og lufttørredes til opnåelse af en rå prøve af den i overskriften anførte forbindelse. Den rå prøve opløstes i dichlormethan (3 liter) i varm tilstand og filtreredes. Filtratet omrørtes ved stuetemperatur i 30 minutter, og der tilsattes 35 endnu 4 750 ml portioner acetonitril med 10 minutters mellemrum, og man lod den opnåede blanding henstå natten over ved 5°C. Bundfaldet frafiltreredes og lufttørredes til opnåelse af en farveløs prøve af den i overskriften

DK 156054B

41 anførte forbindelse (404 g). Smp. 19Q-191°c, [a] = -24,5° (01,0, MeOH)..

Eksempel 19

Calciumsalt af N-[3-(N-cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-5 2-D-methylpropanoyl]-L-prolin.

En 404 g prøve af det i eksempel 18 fremstillede dicyclohexylaminsalt suspenderedes i ethylacetat (2 liter) , og· til suspensionen sattes 0,5 N KHSO^-opløsning (2,5 liter), og blandingen omrørtes i 10 minutter. Det 10 organiske lag fraskiltes, vaskedes med destilleret vand og tørredes over magnesiumsulfat. Filtratet inddampedes i vakuum, og remanensen opløstes i acetone (1,2 liter).

Til acetoneopløsningen sattes destilleret vand (1,2 liter) og calciumcarbonat (36,6 g), og blandingen omrør-15 tes kraftigt ved 40°C i 1 time. Efter afkøling filtreredes blandingen, og filtratet inddampedes i vakuum. Den opnåede sirup suspenderedes i acetone (1 liter), og opløsningen omrørtes i 5 timer. Bundfaldet filtreredes med sugning, lufttørredes og vakuumtørredes derefter til op-20 nåelse af den i overskriften anførte forbindelse som et hvidt pulver (212 g). [α]β = -47,2° (0=1,0, MeOH).

Claims

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af N-(3-acylthio-2-methylpropanoyl)-prolinforbindelser med formlen I 5 f3 R-A-S-CH2CHCO-N i COOH hvori R er en til en α-aminogruppe i A bundet acylgrup-10 pe og er valgt blandt en cyclopropancarbonyl-, cyclo-lohexancarbonyl- og adamantancarbonylgruppe, og A er en glycin-, sarcosin-, D-alanin-, D-leucin-, . D-phenyl-alanin-, D-tryptophan-, D-phenylglycin-, D-methionin-eller D-glutaminrest,hvis a-carbonylgruppe danner en 15 thiolesterbinding med svovlatomet, eller farmaceutisk acceptable salte heraf med baser, kendetegnet ved, at man a) omsætter en forbindelse med formlen II 20 ch3 R-A -s-ch2chcooh II hvori R og A har de ovennævnte betydninger, eller et 25 reaktivt derivat heraf med en forbindelse med formlen III HN ^— III COOR' hvori R1 er et hydrogenatom eller en carboxylbeskyttende 30gruppe, eller et reaktivt derivat heraf i et indifferent organisk opløsningsmiddel ved mellem -50 og 20°C og fjerner eventuelle beskyttelsesgrupper fra reaktionsproduktet, eller b) omsætter en forbindelse med formlen IV

35 R-A-OH IV hvori R og A har de ovennævnte betydninger, eller et DK 156054 B reaktivt derivat deraf med en forbindelse med formlen V CH3 i3 r~\ HS-CH2CHCO-N V 5

5 COOR' hvori R' er et hydrogenatom eller en carboxyl-beskytten-de gruppe, eller et reaktivt derivat heraf i et indifferent organisk opløsningsmiddel ved mellem -50 og 20°C og fjerner eventuelle beskyttelsesgrupper fra reaktions- 10 produktet, hvorefter man om ønsket omdanner en opnået forbindelse med formlen I til et farmaceutisk acceptabelt salt heraf med en base.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at det reaktive derivat af forbindelsen med formlen II eller IV er et aktiveret amid, syrehalogenid, aktiveret ester eller blandet syreanhydrid.

3. Fremgangsmåde .ifølge krav 1, kendeteg- 20. e t ved, at forbindelsen med formlen II eller IV omsættes med henholdsvis forbindelsen med formlen III eller et reaktivt derivat heraf eller forbindelsen med formlen V i nærværelse af et carbodiimid.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1a), kende- 25. e g n e t ved, at det reaktive derivat af forbindelsen med formlen III har en silylgruppe indført i imino-gruppen i nævnte forbindelse.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det indifferente organiske opløsningsmid- 30 del er tetrahydrofuran, dioxan, dimethylformamid, hexa-methylphosphortriamid, chloroform, dichlormethan eller acetonitril.