CS228118B2

CS228118B2 - Production of mercaptoacylderivatives of substitutes prolines

Info

Publication number: CS228118B2
Application number: CS795462A
Authority: CS
Inventors: Miguel A Ondetti; John Krapcho
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1978-08-11
Filing date: 1979-08-09
Publication date: 1984-05-14
Also published as: FI69834B; LU81593A1; NL990024I1; FR2435469B1; AU530690B2; ZA793633B; ES483311A1; LU90403I2; NL193374C; IE48802B1; IN152712B; DE2932021A1; NL7906120A; PT70049A; FI69834C; BE878191A; PH15030A; FR2435469A1; CA1144930A; DE2932021C2

Description

Vynález se týká způsobu výroby nových etherů a thioetherů merkaptoacylprolinů, obecného vzorce I

ve kterém skupina X-Ri je navázána v poloze 3 nebo· 4 prolinového kruhu,

X představuje kyslík nebo síru,

R znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Ri představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinu, popřípadě substituovanou atomem halogenu, methylovou skupinou nebo methoxyskupinou,

R2 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 7 atomy uhlíku a

Rá představuje atom vodíku, alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzoylovou skupinu a jejich solí s bázemi.

Jako příklady shora zmíněných alkylo2 vých skupin lze uvést skupinu methylovou, ethylovou, propylovou, isopropylovou, butylovou, isobutylovou a terc.but^y^l^ovou, přičemž nejvýhodnějšími skupinami tohoto typu jsou methylová a ethylová skupina.

Výraz „atom halogenu“ zahrnuje čtyři obvyklé členy této skupiny, tj. atomy chloru, bromu, fluoru a jodu, přičemž chlor, brom a fluor jsou výhodnými · halogeny.

Sloučeniny obecného vzorce I obsahují centrum asymetrie na uhlíkovém atomu v poloze 2 prolinového kruhu.

V postranním řetězci obsahujícím merkaptoskupinu může být pochopitelně přítomno další centrum asymetrie, a to v závislosti na subslituenlu Rz. V souhlase s tím tedy mohou produkty obecného vzorce I existovat ve stereoisomerních formách nebo' v racemických směsích těchto forem. Všechny tyto formy spadají do rozsahu vynálezu. Při níže popsané syntéze je možno jako výchozí materiál, použít racemát nebo některý z enantiomerů. Pokud se při syntéze použije racemický výchozí materiál, je možno· stereoisomery obsažené ve výsledném produktu oddělit běžnou chromatografií nebo trakční krystalizací. V důsledku přítomnosti seskupení X-Ri může dojít rovněž k cis-trans isomerii.

S výhodou je centrum asymetrie v pro228118

220 3 linovém kruhu v L-konfiguraci a pokud se vyskytuje centrum asymetrie v merkaptoacylovém postranním řetězci, je toto další centrum asymeerie s výhodou v D-konfiguraci.

Výhodnými sloučeninami jsou ty látky obecného vzorce I, v němž

R znamená atom vodíku,

Ri představuje alkylovou skupinu s 1 až atomy uhlíku nebo fenylovou skupinu, popřípadě substituovanou methylovou skupinou, methoxyskupinou, atomem chloru nebo fluoru,

Rz znamená atom vodíku nebo methylovou skupinu nebo trifluormethylovou skupinu a

Ri představuje atom vodíku.

Jako meziprodukty jsou rovněž výhodné shora uvedené sloučeniny, v nichž Rá představuje acetylovou nebo benzoylovou skupinu, zejména skupinu acetylovou.

Nejvýhodnější jsou ty shora uvedené sloučeniny obecného vzorce I, v němž

X znamená atom kyslíku,

Ri představuje methylovou nebo ethylovou skupinu, zejména methylovou skupinu,

R2 představuje atom vodíku nebo methylovou skupinu, zejména methylovou skupinu,

R4 představuje atom vodíku a skupina —XRi je navázána v poloze 4 prolinového kruhu, a zejména pak ty sloučeniny, v nichž skupina ' —XRi je v cis-konfiguraci.

V souhlasu s vynálezem se sloučeniny obecného vzorce I a jejich soli s bázemi vyrábějí tak, že se prolinový derivát obecného vzorce II ve kterém ^**1 — HN--Í-COOR (ID

R, Ri a X mají shora uvedený význam, kondenzuje s kyselinou obecného vzorce III

R2

R1‘—S—CHž—CH—COOH (ΠΙ), ve kterém

Rž má shora uvedený význam a

R1‘ znamená alkanoylovou skupinu s 1 až atomy uhlíku nebo benzoylovou skupinu, vzniklý produkt, v němž Rd znamehá alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzoylovou skupinu, se popřípadě hydrolyzuje na odpovídající sloučeninu s atomem vodíku ve významu symbolu R4 a výsledný produkt se popřípadě převede na svoji sůl s bází.

Reakci sloučenin obecných vzorců II a III je možno uskutečnit v přítomnosti konden začního činidla, jako dicyklohexylkarbodiimidu apod., nebo je možno výchozí kyselinu obecného vzorce III aktivovat · převedením na smíšený anhydrid, symt^Urický anhydrid, halogenid kyseliny, aktivovaný ester, nebo· použitím Woodwardova činidla, Κ, N-ethoxykarbonyl-2-et:hoxy-l,2-dihydrochino'linu · apod. Přehled acylačních metod je uveden například v knize Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), díl XV, část II, str. 1 a další (197-4). S výhodou se reakci se sloučeninou obecného vzorce II podrobuje chlorid kyseliny obecného· vzorce III.

Esterové deriváty shora uvedeného obecného vzorce I, tj. ty sloučeniny, v nichž R představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, je možno převádět na volné kyseliny, tj. na sloučeniny s atomem vodíku ve významu symbolu R, a to obvyklým způsobem. Tak například v případě, že R znamená terc.butylovou skupinu, získá se odpovídající volná kyselina působením trifluoroctové kyseliny a anisolu.

Produkt obecného vzorce I se s výhodou izoluje a vyčistí krystalizací, například tak, že se převede na dicyklohexylamoniovou sůl, kterážto· sůl se pak znovu přemění na volnou kyselinu působením vodného roztoku kyseliny nebo kyselého činidla, jako hydrogensíranu draselného.

Hydrolýza, popřípadě amonolýza vedoucí ke sloučeninám obecného vzorce I s atomem vodíku ve významu symbolu R4, se provádí běžným způsobem.

Estery obecného vzorce I, v němž R znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, je možno získat z odpovídajících karboxylových kyselin, tj. z výše zmíněných sloučenin, v nichž R znamená atom vodíku, běžnými esterifikačními postupy, například esterifikací diazoalkanem, jako diazomethanem, l-alky--3-p-tolyttriazenem, jako 1-n-butyl-3-p-tolyltriazenem, apod.

Výchozí prolinové deriváty obecného vzorce II je možno připravit různými způsoby. Tak například se hydroxy- nebo merkaptoprolin obecného vzorce V

A HN—C—COOH ^H (V) k chránění dusíkového atomu acyluje acylačním činidlem, jako acetanhydridem, acetylchloridem, anhydridem kyseliny propionové, anhydridem kyseliny máselné, · benzylchlorformiátem apod. Reakcí sloučeniny obecného vzorce V, s chráněným dusíkovým atomem, s halogenidem obecného vzorce

Říhal, kde hal znamená atom halogenu, výhodně jodu, v přítomnosti kysličníku stříbrného, nattrumhydtrdu, hydroxidu sodného apod., se zavede zbytek ve významu symbolu Ri, za vzniku meziproduktu obecného vzorce VI

Alkalickou hydrolýzou meziproduktu obecného vzorce VI působením báze, jako hydroxidu barnatého, hydroxidu sodného, hydroxidu draselného apod., . se nejprve získá odpovídající volná kyselina (COOH) a pak hydrolýzou působením minerální . kyseliny, jako kyseliny sírové, se získá výchozí materiál obecného vzorce II.

Další způsob výroby výchozích prolinových derivátů obecného vzorce II spočívá v reakci esteru, s výhodou methylesteru, tosyloxyprolinového derivátu chráněného· na dusíku, obecného vzorce VII chr-N — C—C(^(^aXk (Vil) kde chr znamená chránící skupinu, alk představuje alkylovou skupinu a

Ts má níže uvedený význam, se sodnou solí obecného vzorce VIII

Ri—X—Na (VIII) za vzniku meziproduktu obecného vzorce IX и

chrN—C

XR — COOa-lk

H (IX)

V obecném vzorci VII představuje symbol Ts zbytek vzorce a chránící skupinou dusíku je buď benzyloxykarbonylová skupina, která je výhodná, nebo kterákoli jiná z běžně používaných acylových chránících skupin. Při této reakci v případě, že tosyloxyskupina je v cis-konfiguraci, vzniká produkt obsahující seskupení XRi v trans-konfiguraci a v případě, že tosyloxyskupina je v trans-konfiguraci, vzniká produkt obsahující seskupení XRi v cis-konfiguraci. Z meziproduktu obecného vzorce IX se pak odstraní alkylesterová skupina, načež se reakcí s bromovodíkem · získá hydrobromid výchozího prolinového· derivátu obecného vzorce II, který je pak možno kondenzovat s kyselinou obecného vzorce III nebo s výhodou, s chloridem této kyseliny. .

Výchozí prolinové deriváty obecného vzorce II, v němž X znamená atom síry a seskupení XRi je navázáno v poloze 3 prolinového zbytku, lze získat rovněž reakcí esteru, s výhodou terc.butylesteru, 1,2-dehydroprolinu, obecného vzorce X

(X) s acylačním činidlem, jako benzylchlorformiátem, acetylchloridem apod., za vzniku 4,5-dehydroderivátu obecného vzorce XI chr- o. СООйХЬ (XI) který se pak podrobí reakci · s merkaptanem obecného vzorce

Ri—SH za vzniku produktu obecného vzorce XII chr-N--1— COOaXk (λΙΙ) v němž seskupení —S—Ri je v trans-konfiguraci. . Chránící skupina na dusíku a alkylová skupina se pak odstraní, čímž se získá žádaný výchozí materiál.

Výchozí prolinové deriváty obecného vzorce II, v němž Ri znamená fenylovou skupinu. popřípadě substituovanou shora uvedeným způsobem, . lze rovněž získat reakcí benzylesteru N-chráněného prolinu obecného vzorce V s příslušným alkoholem obecného vzorce Ri—OH v přítomnosti trifenylfosfinu a diethylazodikarboxylátu, podle postupu, který popsali Bittner a spol., v Chemistry and Industry, str. 281 (15. 03. 75). Odštěpením chránící skupiny na dusíku a benzylesterové skupiny se pak získá výchozí materiál obecného vzorce II.

K získání dalších ilustrativních informací, pokud jde o přípravu výchozích látek a meziproduktů, je možno poukázat rovněž na následující publikace: Ondetti a spol., americké patenty č. 4 046 889, 4 105 776 a číslo

154 935; Neuberger, J. Chem. Soc., 1945, str. 429 — 432; Patchett a spol., J. Amer Chem. Soc. 79, str. 185 — 192 (1957); Baer a spol., Can. J. Biochem. and Phys., 37, str. 583 (1959); Sheehan a spol., J. Amer. Chem. Soc. 85, 3863 — 3865 (1963); Magerlein, J. Med. Chem. 10, str. 1161 — 1163 (1967). Postupy popsané v těchto publikacích je možno použít jako obecné metody pro syntézu a stereokonverzi sloučenin používaných ve smyslu vynálezu.

Další experimentální detaily jsou obsaženy v níže uvedených příkladech provedení, které popisují výhodná provedení a rovněž slouží jako modelové postupy к přípravě, jiných sloučenin podle vynálezu.

Sloučeniny podle vynálezu tvoří soli s velkou radou různých anorganických nebo organických bází. Solitvornými ionty odvozenými od těchto bází mohou být kovové ionty, například ionty hliníku, alkalických kovů, jako sodíku či draslíku, kovů alkalických zemin, jako vápníku či hořčíku, nebo ionty odvozené od aminů, z nichž je pro tyto účely známá celá řada, například aralkylaminy, jako dibenzylamin, N,N-dibenzylethylendiamin, nižší alkylaminy, jako methylamin, terc.butylamin, prokain, nižší alkylpiperidiny, jako N-ethylpiperidin, cykloalkylaminy, jako cyklohexylamin nebo dicyklohexylamin, 1-adamantanamin nebo benzathin. Dále přicházejí v úvahu soli odvozené od aminokyselin, jako od argininu, lysinu apod. Fyziologicky přijatelné soli, jako soli sodné či draselné, je možné použít v lékařství, jak je popsáno níže, a tyto soli jsou výhodné. Tyto a jiné soli, které nemusí být nutně fyziologicky přijatelné, jsou užitečné к izolaci a čištění produktů vhodných pro níže popsané účely, jak je ilustrováno v příkladech provedení na příkladech solí s dicyklohexylaminem a cyklohexylaminem. Soli se připravují reakcí sloučeniny ve formě kyseliny s ekvivalentem báze poskytující žádaný bazický iont, v prostředí, z něhož se sůl sráží nebo ve vodném prostředí s následující lyofilizací. Produkt ve formě volné kyseliny je možno ze soli získat běžnou neutralizací, například hydrogensíranem draselným, kyselinou chlorovodíkovou apod.

Sloučeniny podle vynálezu inhibují konverzi dekapeptidu angiotensinu I na angiotensin II a jsou proto užitečné к potlačování nebo zmírňování hypertenze. Sloučeniny podle vynálezu porušují postup renin - angiotensinogen -> angiotensin I - angiontensin II tím, že inhibují enzym přeměňující angiotensin I na angiontensin II a potlačují nebo eliminují vznik presorické látky angiotensinu II. Aplikací hypotensivně účinného množství prostředku obsahujícího jednu nebo několik sloučenin obecného vzorce I nebo jejich fyziologicky přijatelných solí tedy vede к redukci nebo zmírnění hypertenze u savců trpících touto chorobou.

К snížení krevního tlaku je vhodná jedno •

rázová dávka nebo výhodně dvě až čtyři dílčí denní dávky, které se pohybují v rozmezí zhruba od 0,1 do 100 mg účinné látky na kilogram a den, s výhodou od cca 1 do cca 50 mg/kg/den, jak naznačují modelové pokusy na zvířatech, které popsali S. L. Engel, T. R. Schaeffer, Μ. H. Waugh a B. Rubín v Proč. Soc. Exp. Biol. Med. 143, 483 (1973). Účinné látky se s výhodou aplikují orálně, lze je však podávat i parenterálně, jako subkutánně, intramuskulárně, intravenózně či intraperitoneálně.

Sloučeniny podle vynálezu je možno к snižování krevního tlaku používat ve formě prostředků, jako tablet, kapslí či elixírů pro orální aplikaci nebo sterilních vodných roztoků či suspenzí pro aplikaci parenterální. К přípravě jednotkové dávky, běžně známé z farmaceutické praxe, se zhruba 10 až 500 mil»gramů sloučeniny nebo směsi sloučenin obecného vzorce I, nebo jejich fyziologicky přijatelných solí, kombinuje s fyziologicky přijatelným ředidlem, nosičem, pojidlem, ochrannou látkou, stabilizátorem, chuťovou přísadou, popřípadě jinou pomocnou látkou. Zmíněné prostředky nebo preparáty obsahují takové množství účinné látky, aby se při jejich aplikaci dosáhlo vhodného dávkování ve shora uvedeném rozmezí.

Jako ilustrativní příklady materiálů, které je možno používat pro přípravu tablet, kapslí apod., je možno jmenovat pojidla, jako arabskou gumu, tragant, kukuřičný škrob nebo želatinu, nosiče, jako sekundární fosforečnan vápenatý nebo mikrokrystalickou celulózu, látky způsobující rozpad tablet, jako kukuřičný škrob, bramborový škrob, alginovou kyselinu apod., kluzné látky, jako stearát horečnatý, sladidla, jako sacharózu, laktózu nebo sacharin, chuťové přísady, jako silice máty peprné, libavková silice nebo višňové arúma. Pokud je jednotkovou dávkovači formou kapsle, může kromě materiálů shora uvedeného typu obsahovat ještě kapalný nosič, jako mastný olej. К povlékání nebo jiným modifikacím fyzikálních vlastností jednotkových dávkovačích forem je možno používat různé další materiály. Tak například tablety je možno povlékatšelakem, cukrem nebo oběma těmito materiály. Sirupy nebo elixíry mohou obsahovat účinnou látku, sacharózu jako sladidlo, methyl- a propylparabeny jako ochranné látky, barvivo a chuťové přísady, jako višňo vé nebo pomerančové aroma.

Sterilní prostředky pro injekční aplikaci je možno připravovat v souladu s běžnou farmaceutickou praxí rozpuštěním nebo suspendováním účinné látky v nosném prostředí, jako ve vodě pro injekce, v přírodním rostlinném oleji, jako v sesamovém oleji, kakaovém oleji, podzemnicovém oleji, bavlníkovém oleji apod.

Výhodná provedení způsobu podle vynálezu ilustrují následující příklady provedení. Tyto příklady slouží rovněž jako mode love příklady pro přípravu jiných sloučenin, které je možno vyrobit náhradou v příkladech uvedených reakčních složek příslušně substituovanými analogy.

Příklad 1

- (3-ace tylthio-l-oxopropy 1)-trans-4-methoxy-L-prolin

a) N-acetyl-trans-4-hydroxy-L-prolin

K suspenzi 26,2 g (0,2 mol] trans-4-hydroxy-L-probnu ve 400 ml kyseliny octové se za míchání přidá 26 ml acetanhydridu. Po dvouhodinovém míchání při teplotě místnosti se pevný materiál postupně rozpustí. Výsledný roztok se přenese do dvoulitrové baňky a rozpouštědlo se odpaří na rotační odparce při teplotě lázně 45 °C. Sirupovitý zbytek o hmotnosti 57,5 g se zředí 100 ml etheru, přičemž přejde na krystalickou látku. Po chlazení přes noc se pevný produkt odfiltruje, promyje se studeným etherem· a vysuší se v exikátoru. Takto získaný materiál o hmotnosti 35,7 g se rozpráškuje a suspenduje se ve 100 mletheru. Suspenze se ochladí a zfiltruje se, čímž se získá 33,8 g (98 %) N-aceLyl-trans-4-hydroxy-L-prolinu o tepiotě tání 128 až 131 °C. Po překrystaiování 0,5 g tohoto produktu z 5 ml acetonitrilu se získá 0,45 g bezbarvé pevné látky o teplotě tání 130 až 132 °C a optické rotaci [&]_d25 ~ —92° (c = 1 % v ethanolu).

b) Methylester N-acetyl-trans-4-methoxy-L-prolinu

Směs 30,0 g (0,17 mol) N-acetyl-trans-4-hydroxy-L-prolinu a 130 g kysličníku stříbrného se rozpráškuje v třecí misce a vzniklá homogenní směs se vnese do jednolitrové baňky obsahující 300 ml acetonu. K suspenzi. se za míchání po částech přidá 130 ml methyljodidu, přičemž se chlazením ve · vodní lázni určuje teplota pod 40 °C. Po· sedmihodinovém míchání se směs nechá přes noc stát, pevný materiál se odfiltruje, důkladně se promyje acetonem a filtrát se zahustí na rotační odparce. Sirupovitý zbytek o hmotnosti 38,3 g se znovu rozpustí ve 350 ml acetonu a znovu se na něj působí 130 g kysličníku stříbrného· a 130 ml methyljodidu, čímž se získá 41 g zbytku. Posledně zmíněný zbytek poskytne destilací 32,2 g destilátu vroucího při 130 až 140 °C/Pa. Po trituraci ve 30 ml cyklohexanu a ochlazení se získá 31,4 gramu téměř bezbarvého pevného methylesteru N-acetyl-trans-4-methoxy-L-prolinu o teplotě tání 71 až 75 °C, který po překrystalování z 31 ml ethylacetátu · poskytne 25,1 g (66 %) bezbarvého pevného produktu o teplotě tání 76 až 77 °C a optické rotaci [ajo²⁵ — —83 ° (c = 1 % v ethanolu).

c) trans-4-methoxy-L-prolin

K roztoku 27,0 g · [0,085 mol) oktahydrátu hydroxidu barnatého v 525 ml vody (cca 3,3 N) se za míchání přidá 11,0 g (0,05 mol) mediymsteru Nmcetyl-trans-4-methoxy-L-prolinu. Výsledný roztok se 3 hodiny míchá při teplotě 18 až 20 °C, pak se ochladí a přidá se k němu zředěná kyselina sírová (8,8 g koncentrované kyseliny sírové ve 20 ml vody). Kyselá suspenze se nechá přes noc stát, načež se zfiltruje přes vrstvičku křemeliny. Získaný mléčně zakalený filtrát se zahustí na rotační odparce při teplotě · 50 °C za použití vysoce účinné vývěvy. Získá se mléčný zbytek o hmotnosti 121 g, k němuž se přidá zředěná kyselina sírová (19,0 g koncentrované kyseliny sírové v 75 ml vody) a výsledná směs se 3 hodiny míchá za varu pod zpětným chladičem. Po ochlazení na 30 °C se k směsi po částech přidá 48 g oktahydrátu hydroxidu barnatého a pak se pH nastaví zředěnou kyselinou sírovou na hodnotu 6,0 až 4,0. Směs se nechá přes noc stát, pak se zfiltruje přes vrstvičku křemeliny a m'éčně zakalený filtrát se zahustí jako výše. Získá se 50 g bezbarvého suchého zbytku, který se tri turu je s 200 ml horkého chloroformu. Směs se k odstranění síranu barnatého zfiltruje přes vrstvičku křemeliny a mírně zakalený filtrát se zahustí na rotační odparce. Žeiatmovitý zbytek o· hmotnosti 17,7 g se suspenduje ve 100 ml etheru a suspenze se zfiltruje, čímž se získá 7,5 gramu (94 °/o) téměř bezbarvé pevné látky tající za rozkladu při 185 až 190 °C. Tento materiál · se suspenduje ve 30 ml teplého, acetonitrilu, suspenze se ochladí a zfiltruje se. Získá se 4,0 g (50 %) bezbarvého pevného trans-4-methoxy L-prolinu tajícího· za rozkladu při 209 až 211 °C o .optické rotaci [al_D25 = —75 ° (c — 1 % v ethanolu).

d) 1- (3-acetylthio-l-oxopropyl) -trans-4-metboxy-L-^rolin

K roztoku 3,5 g (0,024 mol) trans-4-methoxy-L-prolinu v 50 ml vody se za míchání a chlazení na 5 ^CC přidají 3 g uhličitanu sodného. K směsi se pak během 10 minut přidá roztok 4,0 · g (0,024 moll 3-acetylthiopropionelchloгidu v 5 ml etheru, přičemž v průběhu tohoto· přidávání se k udržení pH na hodnotě okolo 8,0 přidají 3 g uhličitanu sodného. Směs se ještě da'ší hodinu míchá za chlazení v ledu, načež se k ní přidá nejprve 25 ml vody a pak roztok 5 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové ve 25 ml vody (vývoj kysličníku uhličitého). Výsledný silně kyselý roztok se nasytí chloridem sodným a extrahuje se čtyřikrát 50 ml ethylacetátu. Organické fáze se spojí, vysuší se síranem horečnatým a po filtraci se rozpouštědlo odpaří. Získá se 6,0 g (90 %) bezbarvého· sirupovitého l-( 3-acetylthio-l-oxopnopy 1) -trar^s^_4-_mei^ř^o^x^^-L-prohnu. Tato· kyselina se rozpustí ve 25 ml ethylacetátu a k roztoku se přidá 4,7 g dicyklohexyl-

2,2 B11 8

12 aminu. Směs přejde na roztok, který rychle ztuhne. Rridá se .dalších 15 ml. ethyíacetátu, směs se digeruje za zahřívání na -parní lázni,, pak se ochladí a zfiltruje se. Získá se 8,7 g . dicykíohexylamoniové soli o teplotě tání 170 až 172 °C, která po krystalizaci ze 00 ml acetonitrilu, poskytne 8,3 g (75. °/o) bezbarvé pevné látky o teplotě tání 171 až 173 °C a optické rotaci [ala²⁵ = -^-35 ⁰ (c = = 1 % V:ethanolu).

Dicyklohexylaraoniová, sůl se převede na 1-(З-асеЬуИЬю-Ьох.оргору! ).-trans-4-№éthoxy-L-prolin tak, že. sp 8,0 g, soli,.suspenduje v 60 ml ethylacetátu; suspenze se ochladí v ledu a po částech se, к ní,přidá 60 mí Д0% roztoku hydrogonsíranu . draselného,. .Čiré vrstvy se oddělí a vodná, fáze se. dvakrát extrahuje 60 ml ethylacetátu. Qrgepické fáze se spojí,,vysuší se- síranem ,hořečnatým a po filtraci se·rozpouštědlo,odpaří..Získá se 4,6 g (80 %) bezbarvého,, sirupovitého produktu.

Příklad 2

1- (3-merkapto-l-oxopropyl) -trans-4-methoxy-L-prolin

К 4,6 g (0,017 mol) l-(3-acetylthio-l-oxopropyl )-trans-4-methoxyrL-prolinu získaného v příkladu 1 se přidá chladný roztok 9 mililitru koncentrovaného amoniaku ve 22 mililitrech, vody. Báze se zhruba za 30 minut rozpustí a výsledný roztok se pod argonem nechá 2 hodiny stát při teplotě místnosti. Reakční roztok se ochladí, extrahuje se. dvakrát vždy 25 ml ethylacetátu, ,ethylac^etátové extrakty se odloží, roztok se znovu.převrství 25 ml ethylacetátu a, okyselí se 17. ml směsi vody a kyseliny chlorovodíkové (1: 1). Směs se protřepe, vrstvy se oddělí a vodná fáze se extrahuje třikrát 25 mililitry,-ethylacetátu. Organické fáze se spojí, vyau,ší; se., síranem hořečnatým a po filtraci se rozpouštědlo odpaří na rotační -odparce.. Získá se 2,3 g (59 %) bezbarvého; sirupovitého 1- (3-merkapto 1-oxopropy 1 J-jrans-^methoxy-L-prolinu o optické . rotaci [«jo².⁵. = = —60° (с = 1 % v ethanolu) a Rf = 0,49 (silikagel, methanol, detekce nitroprosidovým činidlem).

Analýza pro:

CaHisNOdS. 1/4 H2O:

vypočteno:

C: 45,46 %, H: 6,57 %, N: 5,87 %,

Š: 13,48 %;

nalezeno:

C:.45,42 %, H: 6,78 %, N: ,5,96 %,

S: 13,27 O/o.

Dalších 1,1 g produktu ..(celkový, ..výtěžek 3,4 g, tj. 87 %) se získá nasycením vodné fáze chloridem sodným,a dvojnásobnou extrakcí vždy 25 ml ethylacetátu.

„ Sodná sůl se připraví tak, že se na sirupovitý materiál, působí ν,οΑηγπι roztokem hydrogenuhličitanu sodného a směs se lyofilizuje.

Příklad 3 trans-1- [ D-3- (acetylthio) -2-methy 1-1-oxopropyl] -3-methoxy-L-prolin

Roztok 4,3 g (0,029 moll; trans-4-methoxy-L-prolinu v 50 ml . vody se za míchání ochladí na 5 °C a přidá se к nějnu 3,0. g uhličitanu sodného, К výslednému -roztoku se během-10 ntiput přidá 5,2 g .(0,029 moí) D -3-(acetylthio )-2-.methylpropionylchloridu v 5 ml etheru, přičemž se pH periodickým přidáváním 3 g. uhličitanu sodného udržuje na hodnotě 8,0. Směs se 1,5 hodiny míchá za chlazení v.,jledq,,načež, se к nepřidá nejprve 25 ml-.vody .a .pak roztok 6 ml koncentrované.; kyseliny chlorovodíkové ve 25 ml vody , (vývoj kysličníku; uhličitého). Výsledný silně kyselý roztok . se čtyřikrát- extrahuje 50 mililitry, ethylacetátu, organické fáze se . spojí,, vysuší se síranem horečnatým a po filtraci se rozpouštědlo odpaří.. Získá, se 6,1 g (73 %,) .trans-1-[D-3- (acetylthio) -2rmethyl-i-Ox.pprop.yl ] -4.-methoxy-L-prolinu ve formě světležlutého sirupovitého zbytku. Tato kyselila se rozpustí v 50 ml ethylacetátu a k. roztoku se přidá roztok 4,0 g dlcyklohexylaminu ve 20 ml ethylacetátu.,. Zhruba, „během minuty začne z roztoku krystalovat produkt. Po chlazení přes noc se téměř bezbarvý pevný materiál odfiltruje a .vysuší se. Získá se 6,7 g produktu, o teplotě! tání 175 až 177 ^QC a optické rotaci [«Ь²⁵ =s=. —55° (с - 1 % v ethanolu). Po krystalizaci z 60 ml acetonitrilu se získá 5,6 g téměř bezbarvé pevné dicyklohexylamoniové, soli (41%) o teplotě tání 179 až 181 °C a optické rotaci [a]r,?⁵ — —62 ⁰(с = 1 % v ethanolu).

Dicyklohexylamoniová sůl se převede na volnou kyselinu tak, že se 5,5 g soli suspenduje v 50 ml ethylapetátu, suspenze se 0chladí v ledu a přidá se.к ní 50 ml 10% roztoku hydrogensíranu draselného. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se dvakrát extrahuje 50 ml ethylacetátu. Organické fáze se spojí, vysuší se..·síranem hořečnatým,. zfiltrují se a rozpouštědlo· s.eto,dpgří, .Získá se .3,4 g (41 procent)-.téměř -bezbarvého >sirupovitého trans-1- [ Ď-3-c (acetylthio ) -^rpiethyl-l^oxopropy.1 ] r4-met,hoxy-h-prolinu.

Příklad 4 trans-4-met)ioxy-l;(PT3-pjerkapto-2-methy 1-1-oxoprop.yl.) -L-proíin

К 3,4 g trans-1-[D-3-(acetylthio )-2-methyl-l-oxopropylIr.á^npthoxy-p^RUnu se přidá chladný roztok 8 ml koncentrovaného amoniaku ve 20 ml vody. Báze se během zhruba 10 minut rozpustí, výsledný roztok se . pod argonem nechá 2 hodiny stát při teplotě místnosti, pak se ochladí, dvakrát se extrahuje 20 ml ethylacetátu, převrství se 20 ml ethylacetátu a okyselí se 15 ml směsi vody a kyseliny chlorovodíkové (1:1). Výsledná směs se nasytí chloridem sodným, vrstvy se oddělí a vodná fáze se třikrát extrahuje 20 ml ethylacetátu. Organické fáze se spojí, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se rozpouštědlo odpaří. Získá se 2,9 gramu (100 °/o) téměř bezbarvého trans-4-methoxy-l-[D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyl]-L-prolinu o optické rotaci [α]ϋ²⁵ = — —80° (c = 1 % v ethanolu] a Rf = — 0,53 (methanol, silikagel, detekce nitroprusidovým činidlem].

Analýza pro:

C10H17NO4S . 1/4 HžO:

vypočteno:

C: 47,69 %, H: 6,83 %, N: 5,56 %,

S: 12,73 %;

nalezeno:

0: 47,90 0/0, H: 6,84 %, N: 5,85 '%,

S: 12,76 %.

Příklad 5 trans-1-[ D-3-(acetylthm]-2-mcthyl-Toxopropyl ] -4-ethoxy-L-pr olin

Za použití postupu popsaného v příkladu 3 se náhradou trans-4-methoxy-L-prolinu ekvivalentním množstvím trans 4-ethoxy-L-prolinu [J. Med. Chem., 10, 1161 (1967]] získá trans-1- [ D-3- (acetylthio) -2-methyl-l-oxopropyl] -4-ethoxy-L-prolin. Produkt se vyčistí převedením na dicyklohexylamonioivou sůl tající po krystalizaci z isopropylalkoholu při 170 až 172 °C o optické rotaci [«]d²5 = —64 ° (c = 1 % v ethanolu).

7,75 g této soh se působením ro-ztoku hydrogensíranu draselného, za použití postupu popsaného v příkladu 4, převede na volnou kyselinu. Získá se 4,85 g téměř bezbarvého sirupovitého trans-1- [ D-3- (acetylthio ] -2-me thyl-l-oxopr opyl ]-4-ethoxy-L-pr olinu.

Příklad 6 trans-4-ethoxy-l- (D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopro pyl ] -L-prolin

K 4,85 g produktu získaného v příkladu 5 se pod argonem přidá chladný roztok 9 mililitrů koncentrovaného amoniaku ve 22 mililitrech vody. Analogickým zpracováním směsi jako v příkladu 4 se získá 4,2 g (100 procent] téměř bezbarvého sirupovitého tran$-4-ethoxy-l-(D-3-mrrkapto-2-methyl-l-oxopropylj-L-prolinu o optické rotaci [α]ο²⁵ = —80 ° (c = 1 % v ethanolu] a Rf se rovná 0,64 (methanol, silikagel, detekce nitroprusidovým činidlem].

Analýza pro:

C11H19NO4S:

vypočteno:

C: 50,55 0/0, H: 7,33 %, N: 5,36 %,

S: 12,27 °/o;

nalezeno:

C: 50,34 %, H: 7,34 %, N: 5,39 %,

S: 12,11 %.

Příklad 7 cis-1- [ D-3- (acetylthio ]-2-methyl-l-oxopropyl ] -4-methoxy-L-prolin a ] N-benzyloxykarbonyl-cis-4-hydroxy-Lprolin g (0,038 mol] N-benzyloxykarbonyl-4-keto-L-prolinu se rozpustí ve 300 ml methanolu a postupem popsaným v J. Am. Chem. Soc. 79, 189 (1957] se redukuje za použití 5,8 g (0,15 mol] natriumborohydridu ve 20 ml vody. Získá se 8,7 g pěnovitého produktu, který se rozpustí ve 30 ml ethanolu, k roztoku se přidá 3,5 g cyklohexylaminu v malém množství ethanolu a výsledný roztok se zředí etherem na objem 500 mililitrů. Po naočkování a poškrábání stěn nádoby skleněnou tyčinkou se rychle vyloučí krystalická cyklohexylamoniová sůl. Výtěžek soli činí 10,8 g, teplota tání 163 až 165 °C. Na tuto cyklohexylamoniovou sůl se působí 30 ml 2 N kyseliny chlorovodíkové a směs se extrahuje čtyřikrát vždy 50 ml ethylacetátu. Získá se 8 g N-benzyloxykarbonyl-cis-4-hydroxy-L-prolinu ve formě sklovitého materiálu.

b] Methylester N-benzyloxykarbonyl-cis-4-methoxy-L-prolinu

Analogickým postupem jako. v příkladu 1 (b] se na 13,9 g (0,052 mol] N-benzyloxykarbonyl-cis-4-hydroxy-L-profinu působí dvakrát vždy 40 g kysličníku stříbrného a 40 ml methyljodidu, a ’ to nejprve ve 100 ml acetonu a pak ve 120 ml acetonu. Získá se

17,5 g (100 %] methylesteru N-benzyloxykarbonyl-cis-4-methoxy-L-prolinu ve formě žlutého oleje.

c] N-benzyloxykarbonyl-cis-4-methoxy-L-prolínu

17,5 g (cca '0,052 mol] methylesteru N-benzyloxykarbonyl-cis-4-methoxy-L-prolinu se rozpustí ve 135 ml methanolu, k roztoku se při teplotě od —1 do 4 C přidá 32 ml [0,064 mol) 2 N hydroxidu sodného a směs se nechá stát nejprve 1.hodinu při teplotě 0°C a pak přes noc při teplotě místnosti. Po odpaření zhruba poloviny rozpouštědla na rotační odparce se výsledný roztok zředí 300 ml vody, promyje se etherem (promývací kapaliny se odloží), za chlazení se okyselí 12,5 ml směsi vody a kyseliny chlorovodíkové (1:1) na pH 2 a extrahuje se čtyřikrát vždy 150 ml ethylacetátu. -Extrakty se spojí, vysuší se síranem horečnatým, zfiltrují se a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 15 g oranžověžlutého sirupu, který se rozpustí v 60 ml ethanolu. К roztoku se přidá 6 g cyklohexylaminu v 10 ml ethanolu a směs se zředí etherem na objem 900 ml. Po naočkování a poškrábání stěn nádoby skleněnou tyčinkou se vyloučí krygt^Jipká, cyklohexylamoniová sůl N-benzyloxykarbonyl-cis-4-methoxy-.L-prolinu. Po chlazení přes noc se získá 10,2 g produktu o te,plotě. tání 148 až 150°C (natává při 144°C) a optické rotaci [a]D²⁶ = —35 ° (c = 1 % v-.ethanolu), který po překrystalování ze 40 ml acetonitrilu poskytne 8,8 g téměř bezbarvého pevného produktu o teplotě tání 15,0 až 152 stupňů. Celsia (natává při. 145 °,C) a_;.optické rotaci [a]d⁶² — —34 ° (c — 1 % v .ethanolu).

Působením kyseliny chlorovodíkové na cyklohexylamoniovou sůl se získá 6,9 ,g. (48 procent) N-benzyloxykarbonyl-cis-4-m,ethoxy-L-prolinu ve formě světležlutého viskózního sirupu o optické rotaci [«Id²⁶ = —32° (с = 1 % v ethanolu).

d) cis-4-methoxy-L-proiin

Směs 6,8 g N-benzyloxykarbonyl-cis-4-methoxy-L-prolinu, 210 ml směsí .methanolu a vody (2:1) a 2,3 g 5-й paládia na uhlí se hydrogenuje v hydrogenační aparatuře 4 hodiny za tlaku vodíku 0,3. MPa. Výsledná směs se filtrací zbaví katalyzátoru a filtrát se odpaří. Získá se 3,15 g našedlé pevné látky tající za rozkladu při 218 až 220 °C. Po krystalizaci vzorku produktu ze směsi methanolu se získá bezbarvý cis-4-methoxy-L-prolin tající za rozkladu při 224 až 226 °C o optické rotaci [<α]ο²⁵ = —42° (c = 1 % v methanolu).

Analýza pro:

CeHnNOó:

vypočteno:

C: 49,64 %, H: 7,64 %, N: 9,65 %;

ΓΊ Q 1 Л7 βΤΊ ΓΥ·

C: 49,63 %, H: 7,71 %, N: 9,54 %.

e) cís-1- [ D-3- (acetylthio) -2-methyl-l-oxopropy 1 ] -4-methoxy-L-prolin

Pqstupein, popsaným v,příkladu 3, se 3 g (0,021 mol). cis-4imeťhoxy-Í-prol:nu a 4,2 g (0,023 mol) D-3-acetylthio-2-methylpropionylchlpridu v 5 ml ethery, nechá reagovat v 60 ml vody, v přítomností hydpogenuhličitanu sodného, K, nastavení pH na počátku reakce nadhodnotu 8,5 а к udržení hodnoty pH během acylace na 7,5 až 8,4 je zapotřebí zhruba 20 ml· 25% (hjnptnost/objem) uhličitanu sodného., Výsledný surový viskózní produkt o hmotnosti 6,4 g se rozpustí v 50 íyililitrech-ethylacetátu а к roztoku se přidá 3,9 g dicykloliexy.laminu ve 20 ml ethylacetátu. Produkt, který z roztoku vykrystaluje, se- odfiltruje a vysuší, čímž se získá 6,6 g_; dicyklůhexylampniové; soli o teplotě tání 172 a? 174 °C: (patává při 170 °C). o optické rotaci, [a],)²⁶ -= —60° (с = 1 % v ethanolu); 6,5 g tohoto,.materiálu poskytne po překrystalování ze 35 ml acetonitriiu 6 g bezbarvé pevné dicyklohexylamoniové soli o teplotě tání 173 až 175 °C . (natává při 170 stupňů Celsia) o optické rotaci [a]_D ²³ — = —60° (c = 1 % v ethanolu).

Analýza pro:

C12H19NO0S. C12H23N;

vypočteno:

C: 61,24 %, H: 9,00 %, N: 5,95 %,

S: 6,81 %;

nalezeno:

C: 61,16 %, H: 8,81 %, N:.5,95 %,

S: 6,67 %.

Za použití postupu, popsaného v příkladu 3 se dicyklohexylamoniová sůl převede na volnou kyselinu, a to tak, že se 5,9 g soli suspenduje v 60 ml ethylaaetátu, suspenze se ochladí v ledu a přidá se к ní 60 mí 10% roztoku hydrogen.síranu draselného. Vrstvy se oddělí a v,odná fáze se· extrahuje čtyřikrát vždy 50. ml ethylacetátu. Organické fáze se spojí,· vysuší se,.síranem hořečnatým a po filtraci se rozpouštědlo .odpaří. Získá se 3,5 g (60 %,) bezbarvého cis-l-[D-3 (acetylthio ) -2-methyl-l-oxopropyl j-4-methoxy-t-prolinu, tajícího po trituraci s etherem při 90 až-92 °C o,. optické rotaci [a j o²⁶ = = —139° (c = 1 % v ethanolu) a R_f = = 0,63 (methanol, silikagel).

Analýza pro:

C12H19NO5S;

vypočteno:

C;· 49,81 %, Hi 6,62 %, N: 4,84 %;

nalezeno:

C: 49,85 %, H: 6,66 %, N: 4,97 %.

Příklad 8 cis-4-methoxy-l- (D- 3-me rkapto-2-methy 1-1-oxopropyl) -L-prolin

Postupem popsaným v příkladu 4 se 2,9 g (0,01 mol) cis-l-[D-3-(acetylthiO‘ )-2-methyl-1-oxopropyl ] -4-methoxy-L-prolinu hydrolyzuje v 15 ml vody obsahující 6,5 ml koncentrovaného amoniaku. Získá se 2.3 g (93 procent) neobyčejně viskózního cis-4-methoxy-l-(D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prclinu, který stáním přejde na voskovkou hmotu. Produkt má optickou rotaci [a]D²⁶ = —88 ° (c = 1 % v ethanolu).

Příklad 8a

1-adamantanamoniová sůl cis-4-methoxy-l- (D- 3-m erkap to-2-me thyLl-ox opropyl) -Lprolinu

K roztoku 0,55 g (0,0022 mol) cis-4-methoxy-1- (D-3-merkapto-2-methyl-l-oxcιprcpyl)-L-prolinu v 15 ml ethylacetátu se v argonové atmosféře přidá teplý roztok 0,34 gramu (0,0022 mol) 1-adamantanaminu v 10 ml ethylacetátu, čímž se vysráží sůl. Po tříhodinovém chlazení se bezbarvý pevný produkt pod argonem odfiltruje (materiál houževnatě zadržuje rozpouštědlo), promyje se malým množstvím studeného ethy^cetátu a 20 hodin se suší ve vakuu. Získá se 0,7 g (79 %) 1-adamantanamoniové soli cis-4-methoxy-l-(D-3-meI'kaptΏ-2-]I]ethyl-lc)xopropyl)-L-prolinu o teplotě tání 215 až 217 stupňů Celsia (slinuje při 210 °C, rozkládá se při 220 °C) o optické rotaci [a]_D ²8 = —60 ° (c = 1 % v methanolu).

Příklad 9 cis-4- (4-fluorfenoxy) -1- (D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopr opyl) -L-prolin

a) c ’^:s-4-(4-fluorfenoxy-L-prolín

K roztoku 8,4 g (0,024 mol) benzylesteru N-benzyloxykarbonyl-trans-4-hydroxy-L-prolinu [viz Baer a spol. Can. J. Biochem. and Phys, 37, 583 (19519)], 4,0 g (0,036 mol) 4-fluorfenolu a 9,27 g (0,036 mol) trifenylfosfinu v 75 ml suchého trtrahydrc-uranu se během 1 hodiny přikape 6,2 g (0,036 mol) dirthylazodikarboxylátu ve 25 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, pak se odpaří k suchu a k odparku se přidá 100 ml etheru. Vysrážený trifenylfosfin a diethylazodikarboxylát se odfiltrují a chromatografují na sloupci siFkagelu se získá 8,1 g směsi obsahující cca 70 % benzylesteru N-benzyloxykarbonyl-cis-4- (4-fluorfenoxy) -L-prolinu.

Roztok 7,5 g shora uvedené směsi obsahující benzylester se v přítomnosti 0,8 g 10% paládia na uhlí jako katalyzátoru hydrogenuje při teplotě místnosti za tlaku 0,1 MPa.

Během reakce se tvoří bílá sraženina. Po odeznění spotřeby vodíku se směs zfiltruje a filtrační koláč se třikrát digeruje vždy se 125 ml horkého methanollu. Odpařením methanol · ckého roztoku k suchu se získá 3,2 g c^:s-4-í4-flucгfrncxy)-L-pгclinu o teplotě tání 235 až 236 °C.

Analýza pro:

C11H12FNO3 . 1/3 H2O:

vypočteno:

C: 57,14 %, H: 5,48 %, N: 6,06 %,

F 8,22 %, nalezeno:

C: 56,94 %, H: 5,19 %, N: 5,94 %,

F: 7,97 %.

b ] 1- [ D-3- (acetylthio) -2-methyl-l-oxopropyl] -cis-4- (4-fluoгfrnoxy)-L-prc-m

K suspenzi 2,25 g (0,01 mol) cis-4-(4-fluorfrnoxy)-L-pI^,olinu ve 125 ml suchého pyridinu se při teplotě místnosti přidá 1,0 g (0,01 mol) trirthylaminu a 2 · g (0,011 mol) D-3- (acetylthio) -2-methylpr cpicnylchlcridu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, pak se odpaří k suchu, zbytek se vyjme vodou, roztok se převrství etherem a okyselí se 10% kyselinou chlorovodíkovou. Vodná vrstva se znovu extrahuje etherem, etheric^ vrstvy se spojí, promyjí se vodou a po vysušení síranem sodným se odpaří k suchu. Získá se 3,9 g zbytku, který chromatografií na 250 ml silikagelu za použití etheru jako elučního činidla poskytne frakci obsahující žádaný produkt. Sloupec se vymyje methan-olem a tento methanolický eluát se znovu chromatografuje na krátkém sloupci silikagelu, čímž se získá další podíl produktu. Tento postup se opakuje ještě jednou. Celkem se získá 1,2 g č^:stého l-[D-3-

- (acetylthio) -2-methyl-l-cxoprcpyl] -cis-4-

- (4-f •luo-rfenoxy) -L-prolinu.

c) cis-4-(4-fHho-íenoxy )-l- (D-3-merkapo-Z-meChy 1-1-oxopropyl) -L-prolin

1,2 g -[ [ D-3-(acetytthiol-2-methylll-oxo· propyl ] (4-f luorrrncxy) -L-prolinu ' se rozpustí ve 25 ml methanolu a roztok se v argonové atmosféře nechá 40 minut reagovat s 5 ml koncentrovaného roztoku amoniaku. Těkavé podíly se odpaří, zbytek se převrství ethy^c^tem a vodná vrstva se okyselí 10% · kyselinou chlorovodíkovou. Vrstvy se oddělí a kyselá vrstva se promyje rthylacrtátrm. Spojené organické vrstvy se dvakrát vytřepou vodou, dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Odpařením rozpouštědla se získá 1,1 g pevného pěnovitého zbytku obsahujícího cis-4- (4-:fluorfenoxy) -1- (D-3-merkapto-2-methyl-l-cxcpropyl) -L-prolin.

Analýza pro:

C15H18FNO4S . 1/3 H2O:

vypočteno:

C: 54,05 %, H: 5,70 %, N: 4,20 %,

F: 5,70 %, S: 9,60 %, nalezeno:

G: 54,04 %, H: 5,71 %, N: 4,05 %,

F: 5,40 %, S: 9,61 %.

Při chromatografií na tenké vrstvě iíiá produkt R_f = 0,30 [detekce prováděna UV-zářením, SH činidlem (žlutá skvrna) a vanilinem (žlutá skvrna)]; [a]_D2⁵ = —80° (c = = 1 % v chloroformu).

Příklad 10

1- (D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyl) -cis-4-fenylthio-L-prolin

a) Melhylester N-benzy-rxykaIbonyl-cis-4-fenylthio-L-prolinu

0,85 g (0,037 mol) kovového sodíku se rozpustí ve 40 ml absolutního ethanolu a k roztoku se za míchání přidá nejprve 3,7 ml (0,036 mol) thiofenolu a pak 7,5 g (0,017 mol) methylesteru N-benzyloxykarbonyl· -trans-4-tosyloxy-L-prolinu [viz J. Am. Chem. Soc., 79, 191 (1957)]. Posledně zmíněná sloučenina postupně přejde do roztoku, brzy poté se však začne vylučovat pevný produkt. Po čtyřhodinovém míchání a následujícím stání přes noc při teplotě místnosti se většina ethanolu odpaří na rotační odparce a převážně pevný zbytek se rozmíchá se 120 mililitry dichlormethanu a 60 ml vody. Vrstvy se · oddělí (k rozražení emulze se přidá malé množství methanolu) a vodná fáze se extrahuje · dvakrát vždy 60 ml dichlormethanu. Spojené organické fáze se promyjí 100 mililitry nasyceného roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 6,5 g (100 °/o) methylesteru N-benzyloxykarbony--cis-4-fenylthio-L-prolinu ve formě žlutého viskózního oleje.

b) N-benzyloxykarbonyl-cis-4-fenylthio-L-prolin

6,5 g (0,017 mol) meUhylesteru připraveného v odstavci a) se rozpustí v 55 ml methanolu, k roztoku se při teplotě od —1 do 4 °C postupně přidá 13 ml (0,026 mol) 2 N hydroxidu sodného, směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 °C a pak se nechá zhruba 16 hodin stát při teplotě místnosti. Po odpaření zhruba poloviny rozpouštědla na rotační odparce se Ochlazený roztok zředí 100 ml vody, promyje se 60 ml etheru (promývací kapalina se odloží), převrství se 70 ml ethylacetátu a za míchání a chlazení se okyselí 4,8 ml směsi kyseliny chlorovodíkové a vody v poměru 1:1. Po oddělení fází se vodná vrstva extrahuje ještě třikrát vždy 40 ml dalšího ethylacetátu, spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým a odpaří se. Získá se 5,9 g nažloutlého viskózního oleje, který se rozpustí ve 30 ml ethanolu, k roztoku se přidá 1,9 g cyklohexylaminu ve 3 ml ethanolu a směs se zředí etherem na objem 330 ml. Po naočkování se vyloučí krystalická cyklohexylamoniová sůl, která po cca šestnáctihodinovém chlazení taje při 148 až 151 °C (slinuje při 135 °C) a má hmotnost 5,3 g. Tento materiál se spojí s 1,5 g identického produktu z předcházejícího pokusu, směs se rozmíchá s 200 ml vroucího acetonitrilu a ochladí se. Získá se 6,3 g bezbarvé cyklohexylamoniové soli o teplotě tání 152 až 155 °C [slinuje při 137 °C) a optické rotaci [a]D²⁶ = —24° (c = 1 % v ethanolu).

Tato cyklohexylamoniová sůl se suspenduje ve 25 ml ethylacetátu a k suspenzi se za míchání přidá 25 ml 1 N kyseliny chlorovodíkové. Jakmile se vytvoří dvě čiré vrstvy, oddělí se a vodná fáze se ještě třikrát extrahuje vždy 25 ml ethylacetátu. Spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 5,0 g (65 %) N-benzylrxykarbony--cis-4-feny-thio-L-prolinu ve formě téměř · bezbarvého, velmi viskózního sirupu.

c J cis-4-f enylthio-L-prolinhydrobr^omid

K 4,9 g (0,014 mol) N-benzyloxykarbonyl-cis-4-fenylthio-L-prolinu se přidá 25 ml 30 až 32% bromovodíku v kyselině octové, reakční nádoba se volně uzavře a směs se míchá magnetickým míchadlem. Po 1 hodině se oranžověžlutý roztok zředí etherem na objem 250 ml, přičemž se vysráží produkt ve formě těžkého· oleje, který po naočkování, tritu^ci a ochlazení postupně zkrystaluje. Po jednohodinovém míchání za chlazení v ledu se materiál pod dusíkem odfiltruje, promyje se etherem, suspenduje se v čerstvém etheru, zhruba 16 hodin se ch'adí a pak se znovu odfiltruje. Získá se 3,2 g (77 procent) bezbarvého pevného cis-4-fenylthio-L-prolinhydIobromidu o teplotě tání 106 až 109 °C (slinuje při 99 °C) o optické rotaci [a]D²⁶ — —3° [c = 1 % v methanolu).

d) 1-) D-3- (acetylthio) -2-methyl-l-oxopropyl ] -cis-4-f enylthio-L-prolin

Analogickým postupem jako v příkladu 1 (d) se reakcí 3,0 g (0,0094 mol) cis-4-feny-thio-L-prolinhydrohromidu a 2,0 g (0,011 mol) D-S-acetylthio^-methylpropi.onylchloridu ve 25 ml · vody (za použití cca 15 ml 20% roztoku uhličitanu sodného k udržení pH na hodnotě 8,0 až 8,4) získá 3,8 g světležlutého viskózního oleje. Dicyklohexylamoniová sůl tohoto· produktu (připravená ve 30 ml ethylacetátu za použití 1,8 g di cyklohexylaminu), izolovaná ve dvou podílech, má hodnotu 2,9 g a taje při 184 až 188 stupňů Celsia (slinuje při 180 °C). Po trituraci s 15 ml acetonitrilu se získá 2,4 g bezbarvé pevné dicyklohexylamoniové soli o teplotě tání 184 až 186 °C (slinuje při 180 ° Celsia) o optické rotaci [«]d26 = —75 ° (_cje rovno 1 °/o v ethanolu).

Analogickým postupem jako v příkladu se reakcí této dicyklohexylamoniové soli se 30 ml 10% roztoku hydrogensíranu draselného a extrakcí ethylacetátem získá· 2,0 gramu (59 %) sklovitého l-[D-3-(acetylthio) -2-me thyM-oxopr opyl ] -cis-4-f enylthio-L-prolinu.

e) 1- (D-S-merkapto^-meíhyl-l-oxopropy 1) -cis-4-fenylthio-L-prolin

Analogickým postupem jako v příkladu se reakcí 2,0 g (0,0042 mol) l-[D-3-(acetylthio) -2-meehyl-l-oxopr opyl ] -cis-4-f enylthio-L-proíinu s 3,5 ml koncentrovaného amoniaku v 8,5 ml vody (pevná amonná sůl produktu se z reakční směsi vyloučí) získá se 1,35 g (100 %] viskózního sirupovitého 1- (D-^-nm^el^aptO-2-^rm^eih^lll-o:^co^ir^ip^l) -cis-4-fenylthio-L-pro'linu o optické rotaci [a]_D26 = —43 ° (c = 1 % v ethanolu).

Příklad 11 trans-1- (3-me rkapto-l-o x opropyl) -3-methylthio-D,L-prolin

a) terc.butylester 1,2-dehydroprolinu

K roztoku 34,2 g (0,20 mol) terc.butylesteru prolinu v 600 ml etheru se za míchání při teplotě od —5 do 0°C přikape během 10 minut 21,7 g (23,9 ml, 0,20 mol) čerstvě připraveného terc.butylhypochloritu [viz Org. Syn., Coll. Vol. V, 184 (1973)]. Během přidávání se teplota udržuje v rozmezí —5 až 0 °C. Po skončeném přidávání se roztok při shora uvedené teplotě míchá ještě dalších 5 minut.

K intenzívně míchanému roztoku se pak rychle · (cca 3 až 5 minut) přidá roztok 7,8 g [0,20 mol) draslíku v čerstvě destilovaném terc.butanolu vysušeném nad hydridem vápníku. Po skončeném přidávání činí teplota reakční směsi cca 18 °C. Reakční baňka se vyjme z chladicí lázně a její · obsah se 30 minut míchá. Reakční směs se zfiltruje přes křemelinu a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyjme etherem a roztok se několikrát promyje vodou. Etherický roztok se vysuší a zahustí ve vakuu na žlutý kapalný zbytek o hmotnosti 31,6 g. Po přidání stopového množství hydrochinonu se surový produkt podrobí destilaci, při níž se získá 22,4 g (66 %) terc-butylesteru prolinu o teplotě varu 60 až 62 °C 13 Pa.

b) terc.butylester l-benzyloxykarbonyl-4,5-dihydro-l^H-pyrrOl^-2-kai'ř^oxylové kyseliny

Roztok 16,9 g (0,1 mol) terc.butylesteru 1,2-yehoproprolinu v 70 ml dichlormethanu se pod · argonem ochladí na —10 °C a během 30 minut se k němu přikape roztok 14,2 ml (0,1 mol) čerstvě destilovaného benzylchlorformiátu (teplota varu 62 až 64°C/53 · Pa) v 70 ml dichlormethanu. Směs se za chladu míchá ještě dalších 30 minut, načež se k ní během 20 minut přidá roztok 15,22 g (0,1 mol] l,5-diazabicyklo[ 5,4,0 ]undec-5-enu v ml dichlormethanu. Chladicí lázeň se odstraní, směs se · 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, načež se promyje dvakrát studenou zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a jednou nasyceným roztokem uhličitanu sodného. Odpařením výsledného· roztoku ve vakuu se získá 18,2 g (60 %) terc.butylesteru l-benzyloxykarbonyl-4,5--^ iro-lH-pyrrol-2-karboxylové kyseliny ve formě světležlutého oleje.

c) terc.butylester trans-l-benzyloxykarbonyl-3-methylthio-D,L-pro-linu

K roztoku 18,2 g (0,06 mol) terc.butylesteru lrbenzyloxykarbonyl-4,5-dihydro-lH-pyiTol-2-karboxylové kyseliny ve 180 ml suchého methanolu se přidá 3,24 g (0,06 mol) methoxidu sodného, směs se ochladí v ledu a po dobu 30 minut se do ní pomalým proudem uvádí plynný methanthiol. Výsledná směs se pod argonem míchá přes noc při teplotě místnosti, načež se do ní až do mírně kyselé reakce přidává zředěná vodná kyselina octová. Po jednohodinovém uvádění proudu argonu se roztok odpaří ve vakuu až téměř k suchu, k odparku se přidá ethylacetát, výsledný roztok se dvakrát promyje nasyceným roztokem uhličitanu sodného, vysuší se a zbaví se rozpouštědla odpařením ve vakuu. Získá se 17 g žlutého olejovitého materiálu, který chromatografií na 300 g silikagelu za použití směsi petroletheru a etheru (4:1) poskytne 11,1 g trans-1-benzyloxykarbonyl-3-methylthio-D,L-prolinu ve formě bezbarvého oleje.

d) trans-3-methylthio-D,L-pro-]in

K 8,4 g (0,024 mol) trans-l-benzyloxykarbonyl-3-methylthio-D,L-prolinu se přidá 45 mililitrů 4 N bromovodíkové kyseliny v kyselině octové. Po)· jednohodinovém míchání při teplotě místnosti se výsledný roztok odpaří ve vakuu a zbytek se po· přidání malého množství vody dvakrát promyje · etherem. Vodný roztok se nanese na sloupec 300 mililitrů iontoměniče a sloupec se promývá vodou tak dlouho, až eluát již nereaguje silně kysele. Produkt se pak vymyje vodným pyridin-acetátovým pufrem o pH 6,5. Frakce pozitivní na ninhydrin se spojí a lyofilizací poskytnou 3,4 g (88 %) materiálu ve formě bílého chmýří. Malý vzorek tohoto materiálu se krystaluje z methanolu, čímž se získá trans-3-methylthic-D,L prolin tající za rozkladu při 196 až 200 °C (slinuje při 192 °C).

Analýza pro:

CeHnOzNS:

vypočteno:

C: 44,70 %, H: 6,88 %, N: 8,69 %,

S: 19,89 %;

nalezeno:

C: 44,53 %, H: 7,10 %, N: 8,61 %, S: 19,95 %.

e ] trans-1- [ 3- (acetylthio) -1-oxopropyl ] -3-methylthio-D,L-prolin

3,05 g (0,019 mol) trans-3-methylthio-D,L-prolinu se rozpustí v 19 ml 1 N roztoku uhličitanu sodného a roztok se zředí vodou na objem 10 ml. Výsledný roztok se ochladí v ledu a za rychlého míchání se k němu přidá roztok 3-acetylthiopropionylchloridu ve 20 ml etheru, přičemž se přidáváním 1 N uhličitanu sodného udržuje pH na · hodnotě 8. Po 30 minutách se pH již nemění a k reakční směsi se přidá 45 ml roztoku uhličitanu sodného. Vrstvy se oddělí, vodná vrstva se ještě jednou promyje etherem, pak se okyselí 10% roztokem hydrogensíranu draselného a produkt se extrahuje ethylacetátem. Extrakt se vysuší a odpaří ve vakuu. Získá se 5,2 g olejovitého materiálu, který po chromatografii na 150 g silikagelu za použití ethylacetátu jako elučního činidla poskytne 3,85 g ještě poněkud znečištěného trans-1- [ 3- (acetylthio) -1-oxopropyl ] -3-methylthio-D,L-proJinu.

Malý vzorek produktu se rozpustí v etheru a převede se na dicyklohexylamoniovou sůl, která se překrystaluje z ethylacetátu. Získá se . dicyklohexylamoniová sůl trans-1- [ 3- (acetylthio) -1-oxopropyl ] -3-methy lthio-D,L-prolinu, tající při 153 až 175 “C.

Analýza pro:

C11H17O1NS . (CeHn)2NH:

vypočteno:

C: 58,44 %, N: 8,53 %, N: 5,83 %,

S: 13,57 %;

nalezeno:

C: 58,77 %, H: 8,57 %, N: 5,68 %, S: 13,74 %.

f) trans-1- (3-merkapto-l-oxopropyl) -3-methylthio-D,L-prolin

2,05 g (0,007 mol) trans-l-[3-(acetylthio)-1-oxopropyl]-3-methylthio-D,L-prolinu se pod argonem ochladí v ledu a přidá se k němu studená, argonem nasycená směs 7 mililitrů vody a 7 ml koncentrovaného amoniaku. Po třicetiminutovém míchání při teplotě 0 °C se roztok okyselí kyselinou chlorovodíkovou a produkt se extrahuje ethylacetátem. ' Extrakt se vysuší a zbaví se rozpouštědla odpařením ve vakuu. Získá se 1,85 gramu materiálu, který stáním částečně zkrystaluje. Po trituraci s etherem se získá 1,0 g (57 %) bílého krystalického produktu, který po překrystalování z 5 ml ethylacetátu poskytne 0,85 g trans-1-(3-merkapto-l-oxopropyl) -3-methylthio-D,L-prolinu o teplotě tání 89 až 93 °C.

Analýza pro:

C9H15O3NS2:

vypočteno:

C: ·43,35 %, H: 6,06 %, N: 5,62 %,

S: 25,72 %;

nalezeno:

C: 43,35· %, H: 6,27 %, N: 5,54 %,

S: 25,91 %.

Příklad 12 cis-4- (1,1-dimetthy lethoxy) -1- (D -3-merkapto-2-methy 1-l-oxopropyl)-L-pr olin

a) Methylestr г N-benzyloxykarbnnyl-cis--- (1,l--dimelhylethoxy) -L-prolinu

Do Parrova autoklávu se předloží roztok 6,0 g (0,021 mol) mtthyltsttru N-benzylooykarbonnl-cis-4-hydroxy-L-prolinu v · 60 ml methylenchioridu, za míchání magnetickým míchadlem se autokláv ochladí v · lázni tvořené pevným oxidem uhličitým v isopropylalkoholu a vnese se · do něj nejprve cca 40 mililitrů zkapalněného isobutylenu a pak 0,75 ml koncentrované kyseliny sírové. Autokláv se uzavře a reakční směs se za neustálého míchání nechá ohřát na teplotu místnosti, přičemž nedojde k žádnému měřitelnému vzestupu tlaku. Reakční směs se 4 dny míchá při teplotě místnosti, pak se autokláv otevře, reakční roztok o objemu 80 ml se zředí 120 ml methnlen-hlbrldu a promyje se roztokem 5 g hndrbgenuhličitanu sodného ve 100 ml vody. Vodná fáze se extrahuje 50 ml methylenchioridu, organické vrstvy se spojí, vysuší se síranem · horečnatým a rozpouštědlo se odpaří. Získá se

7,5 g methylesteru N-benzyl·oxykarbonnl-c's-4-(-,l-dimethyltthoxy)-L-pro]inu ve formě světležlutého oleje o optické rotaci [ab²⁵ — = —46° (c — 1 % v chloroformu). Při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu má produkt Rf = 0,62 (tthnla-ttát) a Rf = = 0,43 (benzen — kyselina octová 7:1). Detekce se provádí jodovými párami a UV-zářením.

b) N-benzyloxykarbonyl-cis-4- [ 1,1-dimethylethoxy )-L-prolin

Roztok 7,2 g (0,02 mol) methylesteru připraveného v odstavci a) v 15 ml etheru se ochladí ve směsi ledu a vody a po částech se k němu přidá 42 ml [0,042 mol) ledově chladného 1 N roztoku hydroxidu sodného. Směs se za chlazení míchá celkem 6 hodin, pak se chladicí lázeň odstraní a v míchání se _ pokračuje přes noc při teplotě místnosti. Výsledný čirý roztok se promyje 40 ml etheru (promývací kapaliny se odloží), převrství se 40 ml ethylacetátu a za míchání a chlazení se okyselí 8 ml 6 N kyseliny chlorovodíkové. Po oddělení se vodná fáze ještě třikrát extrahuje vždy ' 40 ml ethylacetátu, organické vrstvy se spojí, vysuší se síranem horečnatým a rozpou.š'těd¹o se odpaří. Získá se 6,8 g světležlutého viskózního· o'eje, který se rozpustí v 50 ml acetonitrilu a k roztoku se přidá' teplý roztok 3,2 g 1-adamantanaminu ve 20 ml acetonitrilu, přičemž se rychle vysráží pevná adamantanamoniová sůl. Po chlazení pres noc se bezbarvá sůl pod dusíkem odfiltruje, promyje se studeným acetonitrilem a etherem a vysuší se ve vakuu. Získá se 8,8 g adamantamoniové soli N-benzyloxykarbonyl-cis-4-(71-dimethyleíhoxy J-L-prolinu, tající za rozkladu při 228 až 230 °C, o optické ro-taci (a]n²5 — —28 ° (c== 1 % v methanolu).

Analýza pro:

C1.7H23NO5. CíoHí7N . 0,25 HO:

vypočteno:

С: 67,96 %, H: 8,56 %, N: 5,87 %;

nalezeno:

С: 67,77 %, H: 8,54 %, N: 5,93 %.

Působením kyseliny na 8,5 g shora uvedené adamantanamoniové soli se získá 5;5 gramu N-benzyloxykarbonyl-cis-4- (1,1-dimethylethoxy )-L-prolinu ve formě téměř bezbarvého viskózního sirupu, který při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu v systému toluen — kyselina octová (85 : : 15) má Rf — 0,20 (detekce jodovými párami nebo fosfomolybdenovou kyselinou a záhřevem).

c) cis ' 4- (7,7-dimethylethoxy) --L-prolin

5,5 g (0,017 mol) N-benzyloxykarbonylderivátu připraveného v odstavci b) se ve 165 ml směsi methanolu a vody (2:7) hydrogenuje za tlaku vodíku 0,3 MPa v přítomnosti 1,7 g 5% paládia na uhlí jako katalyzátoru. Získá se 3,2 g lepivého, částečně pevného produktu. Tento materiál se suspenduje ve 30 ml acetonitrilu a po trituraci se přes noc chladí. Získá se 1,35 g cis-4-(1,1-dimethylethoxy )-L-p’olinu ve formě bezbarvé pevné látky tající za rozkladu při 24Q až 242 °С, přičemž tání předchází postupně tmavnutí a slinování. [ajo²'5 = —36° (c = == 0,5 % v methanolu).

Analýza' pro:

C9Hí7NO3.0,25 IfeO:

vypočteno:

С: 56,37 %, H: 9,20 %, N: 7,31 %;

nalezeno¹:

С: 56,26 %, II: 9,27 %, N: 7,26 %.

d) 1- [ D-3- (acetylthio) -2-methyl-l-oxopropyl ] -cis-4- (1,7-dimethylethoxy) -L-prolin

Analogickým postupem jako v příkladu 3 se 1,3 g (0,0069 mol) cis-4-(7,7-dimeihylethoxy )-L-prolinu z odstavce c) nechá reagovat s 1,4 g (0,0078 mol) D-3 acetylthio-2-methylpropionylchloridu ve 20 ml vody v přítomnosti hydrogenuhličitanu sodného. Získá se 2,2 g téměř bezbarvého viskózního oleje. Tento surový produkt se rozpustí v 50 ml ethylacetátu a k roztoku se přidá 1,3 g dicyklohexylaminu ve 20 ml ' ethylacetátu. Produkt vykrystalovaný z reakčního roztoku se odfiltruje a vysuší se. Získá se 2,65 g dlcyklohexylamoniové soli o teplotě tání 181' až 183 °C (slinuje od 170 °С) o optické rotaci [a]_D25 = —62 ° (c = 1 % v ethanolu). Trituraci tohoto materiálu s 15 ml horkého acetonitrilu s následujícím ocďazením se získá 2,4 g bezbarvé pevné dicyklohexylamoniové soli o teplotě tání 183 až 185 °C (slinuje od 175 °С) o optické rotaci («)d²⁵ = — —65 ^o (c = 1 v ethanolu).

Analýza pro:

C75H25NO5S . C12H23N:

vypočteno:

С: 63,24 %, H: 9,44 %, N: 5,46 %,

S: 6,25 %;

nalezeno:

С: 63,22 %, H; 9.61 %. N: 5,41 %,

S: 6,02 %.

Za použití postupu popsaného v příkladu 3 se 2,4 g této dicyklohexyjamoniové soli převede na volnou kyselinu tak, že se sůl suspenduje v ethylacetátu a k suspenzi se za chlazení v ledu přidá 30 ml 10% roztoku hydrogensíranu sodného. Vrstvy se oddělí a vodná fáze se čtyřikrát extrahuje vždy 25 mililitry ethylacetátu. Po odpaření rozpouštědla se zbytek, který stáním, částečně zkrystaluje, roztírá pod 10 ml etheru k dokončení krystalizace, pak se směs zředí 20 ml hexanu a po trituraci se ochladí. Získá se 1,3 gramu 7-(r-3-(acetylthio·) -^--^(^l^lbyl-l-oxopropyl ] -cis-4- (7,1-d im ethylethoxy) -L-prolinu ve formě bezbarvé pevné látky o teplo tě tání 96 až 98 °C (slinuje od 93 °C) o optické rotaci [a]_D ²⁵ = —109 ° (c = 1 % v ethanolu).

Analýza pro:

CisHžsNOjS:

vypočteno:

C: 54,36 %, H: 7,60 %, N: 4,23 %,

S: 9,68 %.

nalezeno:

C: 53,92 %, H: 7,73 %, N: 4,30 %,

S: 9,29 %.

e) cis~4- (1,1-dimethylethoxy]-1- (D -3-merkapto-2-neihyl-l-oxopropyl)-L-proiin

1,3 g (0,0039 mol] l-[D-3-(acetylthio]-2-methyl-1 - oxopropyl] -cis-4- (1,1-dimethylethoxyj-L-prollnu z části d) se hydrolyzuje 2,6. ml koncentrovaného hydroxidu amonného v 6 ml vody , za vzniku 1,1 g sklovitého zbytku, v němž se při stání objeví zárodečné krystalky. Tento produkt se převrství 8 ml etheru, naočkuje se a trituruje. Současně s postupným rozpouštěním sk'ovitého materiálu se postupně vylučuje krystalický pevný produkt. Po 2 hodinách při teplotě místnosti se přidá 20 ml hexanu a směs se přes noc chladí pod argonem. Po< odpaření rozpouštědla se získá 1,0 g bezbarvého- pevného cis-4- (1,1-dimethylethoxy) -1- (D-3 -merkápto-2-methyl-l-oxopropyl) -L-prolinu o tep'o - tě tání 106 až 108 C o optické rotaci -a]_D25 = —78 ° (c — 1 % v ethanolu).

Analýza pro:

C15H23N4S . 0,25 H2O:

vypočteno:

C: 53,12 θ/o, H: 8,06 %, N: 4,77 %,

S: 10,91 %;

nalezeno:

C: 53,30 %, H: 8,28 %, N: 4,76 %,

S: 10,70 θ/о.

Příklad 13

Sůl cis-4-[ (4fluorfenyl)thio)-1-(D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-p.LO1inu s L-argininem - (1:1)

a) Methylester trans---[D-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl ] -4-hydrexy-L-pr olinu

56,05 g (0,25 mol) D-3- (benzo уИ-ШорЗ-methylpropanové kyseliny se suspenduje v

62,5 ml toluenu. Teplota se sníží na 15 °C, k suspenzi se přidá 0,386 ml dimethylformamidu a pak se za - míchání v jediné dávce přidá 32,7 g (0,25 mol 4- 10% nadbytek) thionylchloridu. Teplota reakční směsi se sníží na 12 °C, nádoba používaná k odměřování thionylchloridu se vypláchne 21,2 ml toluenu, který se přidá k reakční směsi, jejíž teplota se postupně zvýší na 35 °C a na této výši se udržuje ještě 1 hodinu. Výsledná směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, pak se rozpouštědlo a nadbytek thionylchloridu oddestilují, zbytek se dvakrát promíchá se 100 ml toluenu a toluen se odpaří. Získá se 63,4 g chloridu D-3-(benzoylthio )-2-methylpropanové kyseliny.

Ve 250 ml vody se při pH 5,8 rozpustí 32,7 g (0,25 molj L-4hydroxyproiinu., načež se přidáním zhruba 60 ml 10% uhličitanu sodného upraví pH na hodnotu 9,3. Roztok se zahřeje na 30 °C a během 1 hodiny se k němu při teplotě 30 °G a za udržování pH na 9,0 současně přidává 75 ml toluenového roztoku obsahujícího 63 g chloridu D-3- (benzoylthio) -2-methyIpropanové kyseliny a 10% roztok uhličitanu sodného ve vodě. Výsledný roztok se při pH 9 míchá 1,5 hodiny, pak se toluenová vrstva oddělí a vodná vrstva se silně okyselí koncentrovanou kyselinou ch'orovodíkovou. Krystalický pevný materiál se odfiltruje, promyje se vodou a vysuší se na vzduchu. Získá se 71,4 g traDS-l-[D-3-(benzoylthio-2-methyl-l-oxopropylJ-é-hydroxy-L-prolinu -o teplotě tání 195 až 196 °C. Po překrystalování z alkoholu se teplota tání zvýší na 196 až 197 °'C. Produkt má -«]d²⁵ = —139 - ° (c = = 1 %, methanol).

Analýza pro:

C16H19NO0S:

vypočteno:

N: 4.15 .%, C: 56,95 %, H: 5,67 %,

S: 9,50 %;

nalezeno:

N; 3,96 %, C: 56,56 %, H: 5,77 %,

S: 9,50 %.

Roztok - - 33,7 g (0,1 mo¹) trans - l-[D-3- (benzoy.lthio·) -2-methy M-oxopropyl ] -4 - hydroxy-L-.prolinu a 500 mg p-toluensulfonové kyseliny v 1 litru methanolu se zhruba 18 hodin mírně vaří pod zpětným chladičem. Po odpaření methanolu se získá 37 g viskózního zbytku, který se rozpustí v 1400 ml etheru. Etherlcký roztok se promyie dvakrát 250 ml vody, dvakrát 250 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jednou 250 mililitry roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a ether se odpaří. Po trituraci s petroletherem se získá 27,3 gramu krystalického produktu o teplotě tání 64 až 65 °C. Tento produkt poskytne po překrystalování z etheru methylester trans-1- [ D-3- (benzoylthio.) -2-methy М-охар™^ ] -4-hydroxy-L-prolmu o- teplotě tání 65,5 až °C o optické rotaci [ab²⁵ — - -158 ° (c — — 1 %, methanol).

Analýza pro:

C17H21NO5S:

vypočteno:

C: 58,10 Oo, II: 6,02 %, N: 3,99 %,

S: 9,12 0/_o; nalezeno:

C: 57,96 %, ll: 6,09 %, N: 3,96 %,

S: 9,11 0/0.

b) N- (p-fluorfenylthio)sukcinimid

Za použití postupu, který popsali Y. Abe a spol. v Bull. Chem. Soc. Japan, sv. 46, str. 1898 (1973), se na suspenzi 12,1 g (90,8 mmol) Nchlorsukcinimidu v 500 ml benzenu pod dusíkem, působí roztokem 9,7 g (75,7 mmol) p-fluorthiofenolu v 90 ml benzenu. Dojde k mírnému vzestupu teploty a reakční směs se žlutooranžově zbarví. Po 75 minutách se roztok ochladí na 15 °C a během 25 minut se k němu přidá 9,19 g [90,8 mmol) triethylaminu v 90 ml benzenu. Chladicí 'lázeň se odstraní, reakční směs se 45 minut míchá, pak se zfiltruje, organický roztok se promyje 'třikrát vždy 150 ml vody, roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Získá se 15,8 g surového produktu, který po překrystalování ze směsi chloroformu a hexanu poskytne 11,6 g N-(p-fiuorfenylthio jsukcinimidu o teplotě tání 130 až 138 °C.

c) Methylester cis-l- [D-3-(benzoylthio)2-methyl-l-oxopropyl ] -4- [ (4-fluorfenyl) thio ] -L-prolinu

K roztoku 11,0 g (48,8 mmol) N-(p-fluorfenylthiojsukcinimidu ve 200 ml benzenu se v dusíkové atmosféře přidá 9,87 g (48,8 mmol) tri-n-butylfosfinu ve 25 ml benzenu. Vzniklý tmavě zbarvený roztok se 10 minut míchá při teplotě místnosti a pak se k němu přidá 15,6 g (44,4 mmol) methylesteru trans-1- [ D-3- (benzo ylthio) -2-methyl-l-oxopropyl]-4-hydr oxy-L-pr olinu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, zředí se 200 ml etheru, promyje se čtyřikrát vždy 75 ml vody, roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se

32,6 g surového produktu, který se adsorbuje na cca 70 g sůikagelu a chromatografuje se na sloupci 450 g silikagelu připraveném ve směsi stejných dílů diethyletheru a hexanu. Sloupec se vymývá nejprve dvěma litry směsi stejných dílů diethyletheru a hexanu pak dvěma litry směsi diethyletheru a hexanu v poměru 2:1a nakonec samotným etherem. Nejlepší frakce obsahující produkt se spojí a po odpaření se z nich získá 16,7 g methylesteru cis-1- [ D-3- [ benzoylthio) -Z-methyM-oxopro py ll -4-[ (4-fluorfenyl)th.lo]-L-proliuu ve formě oleje o opťcké rotaci [<s[_r/25 = —30,2° (c — =- 1 %, chloroform).

d] Sůl cis-4-[ (4-fluorfenyl)thio]-l-(.D-3-Inerkapto-2-methyt-l-oxorropyl) -L-prolinu s L-argininem (1:1)

Roztok 15,7 g (34,0 mmol) methylesteru cis-1-[D-3-(beuzoylthiΌ )-2-methyl-1-oxopropyl]-4-[ (4-fluorfenyl) thio]-L-prolinu ve směsi 50 ml methanolu a 150 ml tetrahydrofuranu se v dusíkové atmosféře ochladí v ledu a k tomuto studenému roztoku se během 10 minut přidá 71,4 ml 1 N vodného roztoku hydroxidu, sodného. Chladicí lázeň se odstraní, reakční směs se 5,5 hodiny míchá při teplotě místnosti, pak se zředí 300 ml vody a promyje se třikrát vždy 200 ml etheru. Vodná vrstva se pod dusíkem ochladí v ledu, okyselí se koncentrovanou vodnou kyselinou chlorovodíkovou na pH 1 až 2 a extrahuje se třikrát vždy 200 ml etheru. Spojené organické extrakty se promyjí nejprve 200 ml vody, pak roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem horečnatým a. rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, Získá se 11.7 gramu surového produktu, který se rozpustí v etheru a přidá se k němu methanollcký roztok 5,66 g (37,4 mmol] 1-adamantanaminu. Po zředění etherem se získá 15,2 g adamantanamoniové soli, která se překrystaluje tak, že se rozpustí ve směsi stejných dílů chloroformu a methanolu, a roztok se zředí etherem. Tímto postupem se získá 13,3 gramu adamantanamoniové soli tající za rozkladu při 238 až 240 °C. Po dalších dvou krystalizacích z rozpouštědlového -systému chloroform — methanol — ether se získá

10,6 g adamantanamoniové soli cis-4-[(4-f luorf enyl )th^;o]-1-( D-3-merkapto-2-methyl-1-oxopropyl)-L-prolrnu o teplotě tání 242 až 243 °C (rozklad) a optické rotaci [a]o²⁵ = = —51,13° (c =- 0,5 %, methanol).

Vzorek této adamantanamoniové soli se extrahuje ethylacetátem z 1 N vodné kyseliny chlorovodíkové, čímž se získá cis-4-[(4-fluorfenyl) thio- ] -1- (D-3-merkapto-2 - methyl-l-oxopropylj-L-prolin o optické rotací [a]D²5 = —42,5 ° (c = 1 %, absolutní ethanol).

K intenzívně míchané směsi 20 ml 1 N kyseliny chlorovodíkové, 40 ml vody a 60 ml ethylacetátu se po částech přidá 8,0 g (16,2 mmol) adamantanaminiové soli cis-4-[(4-f luorf enyl) thio- )-1-( D-3-merkapto-2-methyl-1-oxopropyl]-I.-prolinu. Tento postup se provádí pod dusíkem za chlazení v ledu. Vodná vrstva se extrahuje ještě dvakrát vždy 60 ml ethylacetátu, spojené organické extrakty se promyjí zředěnou vodnou kyselinou chlorovodíkovou, vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořec

28 118 natým a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 5,78 g uvolněné kyseliny ve formě surového olejovitého materiálu, který se rozpustí ve směsi 40 ml ethylacetátu a 10 mililitrů etheru. Roztok se v dělicí nálevce protřepe s roztokem 2,68 g (15,4 mmol) L-argininu v 50 ml vody, vodná vrstva se znovu promyje etherem, 15 minut se odpařuje na rotační odparce za nízkého· tlaku a pak se přes noc lyofilizuje. Získá se 7,97 g soli cis-4-[ (4—luorf eny l)thiolj-1-( D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyl]-L-prohnu s L-argininem (1:1) o optické rotaci [ajn²⁵ — = —42,7° (c == 1 %, voda).

Analýza pro:

CuHuFNOjSs. C6H14N4O2:

vypočteno:

C: 47,08 %, H: 6,40 %, N: 13,08 %,

S: 11,97 %, F: 3,55 %, SH: 6,17 %;

nalezeno:

C: 47,21 %, H: 6,74 %, N: 13,28 %,

S: 11,71 %, F: 3,38 %, SH: 5,98 %.

Příklad 14

Sůl cis-4- (4-chlorfenyl)thlo]-l-(D-3-mnrkapio-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolinu s L-argininem (1:1)

a) N-(p-chlorfenylthio)snkcin:inid ^analogickým způsobem jako popsali Y. Aba a spol. (viz výše uvedenou citaci) se k 4,3 g (33,2 mmol) N-chlorsukcinimidu a 1800 ml ' benzenu přidá roztok 40,0 g (27,7 mmol) p-chlorthiolenolu ve 360 ml benzenu. Po 1 hodině se vzniklý oranžově zbarvený roztok ·ochladí na 15 °C a během 15 minut se k němu přidá 33,6 g (33,2 mmol) triethylaminu ve 360 ml benzenu. Chladicí lázeň se odstraní a reakční směs se ještě dalších 45 minut níchá při teplotě místnosti. Výsledná směs se zfiltruje, organická fáze se promyje třikrát vždy 500 ml vody, 500 ml roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 55,1 g surového produktu, který trituraci s 900 ml petroletheru poskytne 42,0 g N-(p-chlorfenylthiojsukcinimidu o teplotě tání 135 až 152 °C.

b) Methylester cis-l-[D-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl ] -4- [(4-c hlorf eny 1) thio·]-L-prolinu

K roztoku 15,1 g (62,3 mmol) M-(p-ch:orfenylthio)sukcinimidu ve 250 ml benzenu se v dusíkové atmosféře při teplotě místnosti přidá roztok 12,6 g (62,3 mmol) tri-n · butylfosfinu ve 25 ml benzenu. Po 10 minutách se přidá 20 g (56,9 mmol) methylesteru tL'aQs-l-[D-3-(benzoylthio'j-2-methyl-l-oxopropyl]-4-hydroxy · L-prolinu a reakce se . nechá pod dusíkem při teplotě místnosti probíhat 2 dny. Reakční směs se zředí 300 mililitry etheru, promyje se čtyřikrát vždy 100 ml vody, roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 46 g surového materiálu, který se adsorbuje zhruba na 75 g s · likagelu a chromatografuje se na sloupci 450 g silikagelu. Sloupec se připraví v etheru a etherem se rovněž vymývá. Frakce obsahující produkt se spojí a odpaří se, čímž se získá 27,2 g produktu, z něhož se 0,48 g rychle chromatografuje na 25 g si^ikagtlu (EM9385). · Tento sloupec se připraví v methylenchloridu a vymývá se nejprve · methylenchloridem a pak směsí methylenchloridu a ethylacetátu 18 :1. Získá se 0,28 g methylesteru cis-l-[D-3-(benzoylthio) · 2-methyl-l-oxopropyl)-4-[ (4-chlorfenyl) thio]-L-pro!inu o optické rotaci [a]_D25 = —86,6 ° (c == 1 %, chloroform).

c) Sůl cis-4-[ (4-chlorfепуЦШ!o]-l-(D-3-metrkapto-2-methyl-l-oxopropyl) -L-prolinu s L- arginiупm (1:1)

Roztok 24,3 g (50,8 mmol) methylesteru cis-1- [ D-3- (benzoylthio ] -2-methyl-l-oxopropyl]-4-[ [4-chlorfeуyl]thio] · ·L-prolinu ve směsi 80 ml methanolu · a 220 ml tetrahydrofuranu se pod dusíkem ochladí v ledu a během 10 minut se k ní přidá 106 ml 1 N vodného· roztoku hydroxidu sodného. Chladicí lázeň se odstraní, reakční směs se 5,5 · hodiny míchá při teplotě místnosti, pak se zředí 500 ml vody a promyje se třikrát vždy 300 ml etheru. Vodný roztok se ochladí pod dusíkem v ledu a koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou, se okyselí na pH 1 až 2. Směs se extrahuje třikrát vždy 500 ml etheru, spojené etherické extrakty se promyjí 400 ml vody a roztokem chloridu sodného, · vysuší se síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Získá se 18,2 g surového produktu, který so rozpustí v etheru a k tomuto roztoku se přidá methanolický roztok 8,5 g (55,9 mmol] 1 · adamantanaminu. Směs se zředí etherem na objem cca 1 litr, 1,5 hodiny se chladí v chladničce a pak se zfiltruje. Získá se 20,1 g adamantanamoniové soli o teplotě tání 239 až 242 °C. Tento materiál se rozpustí ve směsi stejných dílů chloroformu a methanolu a roztok se zředí etherem, čímž se získá 15,3 g 1-adamantanamoniové soli cis-4- [ (4-chlorf enyl) thio]-l- (D-3-merkapto-2 -mnthylι--oxopropyl) -L-prolinu o teplotě tání 240 až 241 C (rozklad) o optické rotaci [a/r⁵ — —55,-4° (c ~ 0,5 %, methanol).

Malý vzorek této adamantanamoniové soli (0,5 g; 0,98 mmol] se roztřepe mezi vodnou kyselinu chlorovodíkovou a ethylacetát, čímž se získá odpovídající volná kyselina o optické rotaci [a^ = —38,1 ° (c — 1 %, absolutní ethanol).

К intenzívně míchané směsi 18,8 ml 1 N vodné kyseliny chlorovodíkové,-30 ml vody a 50 ml ethylacetátu se po částech přidá 8 g [15,6 mmol) adamantanamoni-ové soli připravené výše. Roztok se chladí v ledu a udržuje se v dusíkové atmosféře. Po> rozpuštění všech pevných podílů se vodná vrstva extrahuje dvakrát vždy 50 ml ethylacetátu, organické extrakty se spojí/ promyjí se 30 ml 0,5 N vodné kyseliny chlorovodíkové, 30 ml vody a nakonec roztokem chloridu sodného. Roztok se vysuší síranem horečnatým a zahustí se ve vakuu, čímž se získá 5,6 g uvolněné kyseliny. Tato kyselina se rozpustí ve směsi 50 ml ethylacetátu a 15 ml etheru a protrepe se s roztokem 2,57 g (14,8 mmol) L-argininu v 65 ml vody. Vodná vrstva se promyje 50 ml etheru a přes noc se lyofilizuje. Získá se 8,0 g soli cis-4-[ (4-chlorfenyl )thio]-l-(D-3-merkapto-2-methyll-oxopropyi)-L-prolinu s L-argininem (1 : 1), o optické rotaci [a]_D ²⁵ = —44,3 stupně (с 1 °/o, voda).

Analýza pro:

C15H18CINO5S2. CsHnNdOj:

vypočteno:

C: 45,09 %, H: 6,27 θ/ο, N: 12,52 %,

S: 11,46 %, Cl: 6,34 %, SH: 5,91 %;

nalezeno:

C: 45,34 0/0, Η: 6,34 %, N: 12,57 %,

S: 11,48 %, Cl: 6,12 %, SH: 5,44 %.

Příklad 15

Sůl cis-1- (D-2-merkapto-2-methyl-loxopropyl)-4-[ (4-methylfenyl)thio]-L-prolinu s L-argininem (1:1)

a) Methylester cis 1-[D-3-(benzoylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-4- [ (4-methylf enyl)thio]-L-prolinu

К roztoku 20 g (56,8 mmol) methylesteru trans-1- [ D-3- (benzoylthio) -2-methyl 1-oxopropyl]-4-hydroxy-L-prolinu a 15,4 g (62,5 mmol) p-tolyldisulfidu ve 120 ml benzenu se v dusíkové atmosféře při teplotě místnosti přidá během 5 minut roztok 12,6 gramu (62,5 mmol) tri-n butylfosfinu ve 20 mililitrech benzenu. Reakční směs se nechá přes noc stát, pak se zředí 300 ml diethyletheru, organický roztok se promyje třikrát vždy 100 ml vody a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Získá se 49 g surového produktu. Tento materiál se adsorbuje na 75 g silikagelu a aplikuje se na sloupec 450 gramů silikagelu připravený, ve směsir stejných dílů hexanu a etheru. Sloupec se vymývá nejprve směsí stejných dílů» hexanu a etheru (3 litry), pak 2 litry směsi ethe ru a hexanu v poměru 2:1a nakonec čistým etherem. Nejlepší frakce obsahující produkt se spojí a získá se z nich 14,6 g methylesteru cis-1- [ D-3- (benzoylthio) 2-methyl-l-oxopropyl | -4- [ (4-methylfenyl)thio ] -L-prolinu. Malý vzorek tohoto, materiálu se rychle přechromatografuje na silikagelu (EM9385) za použití směsi methymnchloridu a ethylacetátu jako elučního činidla. Takto vyčištěný produkt má optickou rotaci [a]o²⁵ = —70,8 ° [c = 1 %, chloroform).

b) Sůl cis -1- (D-3-merkapto-2-rnethyl-l-oxopropyl)-4~[ (4-methylfenyl)thio 1-L-prolinu s L-argininem (1:1)

К ledem ochlazenému roztoku 13,0 gramu (28,4 mmol) methylester u cis-1-[D-3-(benzoylthio )-2-methyl~l-oxopropyi ] -4- [ (4-methylfenyljthio]-L-prolinu ve směsi 40 ml methanolu a 130 ml tetrahydrofuranu se za kontinuálního uvádění dusíku přidá během 10 minut 59,6 ml 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného. Po skončeném přidávání se chladicí lázeň odstraní, reakční směs se pod dusíkem 5,5 hodiny míchá při teplotě místnosti, pak se zředí 250 ml vody a dvakrát se promyje vždy 200 ml etheru. Vodná vrstva se ochladí pod dusíkem v ledu, koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou se okyselí na pH 1 až 2 a extrahuje se třikrát vždy 200 ml etheru. Spojené organické extrakty se promyjí 200 ml v-ody a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Získá se 10,6 g bezbarvého olejovitého produktu, který je podle chromatografie na tenké vrstvě téměř jednotný. Tento produkt se rozpustí v etheru а к tomuto roztoku se přidá roztok 4,72 gramu (31,2 mmol) 1-aclamantanaminu ve 20 ml methanolu. Rychle proběhne vysrážení, směs se zředí etherem na celkový objem zhruba 700 ml a sůl se · odfiltruje. Po trituraci s teplou směsí methanolu a etheru se získá 12,4 g adamantanamoniové· soli tající za rozkladu při 237 až 240 °0. Tato sůl se překrystamje tak, že se· rozpustí v minimálním množství směsi stejných dílů chloroformu a methanolu, a roztok se zředí ehterem. Po desetinrnulovém stání při teplotě místnosti se pevný produkt odfiltruje a vysuší. Získá se 8,2 g adamantanamoniové soli o teplotě tání 240 až 241 °C (rozklad) o optické rotaci [a]n²⁵ —58,0° (c = 0,5 °/o, methanol).

Malý vzorek táto adamantanamoniové soli se roztřepe mezi vodnou kyselinu chlorovodíkovou a ethylacetát, čímž se získá cis-1- (D-3- merkapto-2-methy l-l-oxopropyl-4-[ (4-methylfenyl)thio]-I.-prolin ve formě oleje o optické rotaci [α]_υ ²⁵= —45,1 °c = 1 %, absolutní ethanol).

К směsi 17,1 ml 1 N vodné kyseliny chlorovodíkové, 30 ml vody a 50 ml ethylacetátu se v něko.ika dávkách přidá 7,0 g (14,3 mmol) shora připravené adarnantanamonio vé soli. Během přidávání se roztok chladí v ledu a udržuje se v argonové atmosféře. Po rozpuštění veškeré soli se vrstvy oddělí, vodná vrstva se ještě dvakrát extrahuje vždy 50 ml ethylacetátu a extrakty se spojí s ethylacetátovou vrstvou. Organická fáze se promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodo<u a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu, čímž se získá volná kyselina, která se rozpustí ve směsi 40 ml ethylacetátu a 10 ml etheru. Roztok se protřepe s roztokem 2,37 g (13,6 mmol) L-argininu v 50 ml vody, vodná vrstva se promyje 50 ml etheru a lyofilizuje se. Získá se sůl c^:s-l-(D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyl )-4-( (4-methylfenyl)thio]-L-prolinu a L-argininem (1 : : 1) o optické rotaci [a]o²⁵ =- —45,3 ° (c = 1 %, voda).

Analýza pro:

CiGH2iNChS2. C3H1N1O2:

vypočteno:

C: 49,69 %, H: 7.01 °/o, N: 13,17 %,

S: 12,06 %, SH: 6,22 %;

nalezeno:

C: 49,55 %, H: 7,04 %, N: 13,28 %, S: 11,73 °/o, SH: 5,97 %.

Příklad 16

Sůl cis-1- (D-3-merkap to-2-methy 1-1-oxopr opyl)-4-[ (4-methoxyfenyl)thiol-L-prolinu s L-argininem (1:1)

a) N- (p-methoxyfenylthio) sukcinimid

К směsi 17,1 g (128 mmol) N-ch'.crsukcinimidu a 700 ml benzenu se přidá roztok 15 gramů (107 mmol) p-methoxythiofenolu ve 125 ml benzenu. Po 75 minutách se výsledný oranžově zbarvený roztok ochladí na 15 °C a během 25 minut se к němu přidá 13,0 g (128 mmol) triethylaminu ve 125 ml benzenu. Chladicí lázeň se odstraní, reakční směs se ještě dalších 45 minut míchá při teplotě místnosti, pak se zfiltruje. organický roztok se promyje třikrát vždy 200 ml vody a 200 ml roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 27,0 g surového produktu, který po překrystalování ze směsi chloroformu a hexanu poskytne 21,2 g N-(p-methoxyfenyl)sukcinimidu o teplotě tání 100 až 106 °C.

b) Methylester cis-1- [ D-3- (benzoylthio) -2-methyl-l-oxopropyl 1-4-(( 4-methoxyf enyl) thiol-L-proliau

К roztoku 14,0 g (59,1 mmol) N-(p-metlioxyfenylthiojsukcinimidu ve 250 ml ben zenu se při teplotě místnosti pod dusíkem přidá 12,0 g (59,1 mmol) tri-n-butylfosfinu rozpuštěného ve 25 ml benzenu. Po 10 minutách se přidá 18,9 g (53,7 mmol) methylesteru trans-1- [ D - 3 - (benzoylthio) -2-methyl-l-oxopropyl]-4-hydroxy-L-prolinu, reakční směs se nechá pod dusíkem 25 hodin stát při teplotě místnosti, pak se zředí 300 ml etheru, promyje se třikrát vždy 100 ml vody a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 40 g surového materiálu, který se adsorbuje zhruba na 80 g siiikagelu a chromatografuje se na sloupci 450 g silikagelu. Sloupec se připraví ve směsi hexanu a etheru (4:1) a vymývá se nejprve touto směsí, pak směsí hexanu a etheru v poměru 2:1a nakonec směsí stejných dílů hexanu a etheru. Nejlepší frakce s obsahem produktu se spojí a získá se z nich 20,6 g produktu. Malý vzorek této látky (0,5 g) se dále čistí rychlou chromatografií na 50 g silikagelu (EM9385), přičemž tento sloupec se připraví v etheru a etherem se rovněž vymývá. Ze spojených nejlepších frakcí obsahujících produkt se získá 480 mg methylesteru cis-1- [ D-3- (benzoylthio) -2-me thyl-1-oxopropyl] -4-[ (4-methoxyfenyl)thio ] -L-prolinu o optické rotaci [a]_D ²⁵ = 66,9 ° (c = -- 1, ch oroform).

c) Sůl cis-1- (D-3-merkapto -2-methyl-l-oxo propy )-4-[ (4-methoxyfenyl)thio]-L-prolinu s L-argininem (1:1)

Roztok 20,1 g (42,4 mmol) methylesteru cis-1- [ D 3 (benzoylthio )-2-methy !-l-oxopropyl]-4-[ (4-methoxyfenyl) thio 1-L-prolinu ve směsi 70 ml methanolu a 200 ml telrahydrofuranu se pod dusíkem ochladí v Jedu a během 10 minut se к němu přidá 89 ml 1 N vodného hydroxidu sodného. Chlad-cí lázeň se oddělí, reakční směs se 5,5 hodiny míchá při teplotě místnosti, pak se zředí 500 ml vody a promyje se třikrát vždy 300 ml etheru. Vodný roztok se pod dusíkem ochladí v Jedu, okyse-í se koncentrovanou kyse’inou chlorovodíkovou na pH 1 a extrahuje se třikrát vždy 500 ml etheru. Spojené etherické extrakty se promyjí 400 ml vody a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Získá se 14,8 g surového produktu, který se rozpustí v etheru а к tomuto roztoku se přidá roztok 6,34 g (42 mmol) 1-adamantanaminu v methanolu. Směs se zředí etherem na objem cca 1 litru, nechá se 10 minut stát při teplotě místností a zfiltruje se. Získá se 17,8 gramu adamantanamoniové soli, tající za rozkladu při 235 až 236 °C. Tento materiál se za mírného záhřevu rozpustí ve směsi stejných dílů chloroformu a methanolu a roztok se zředí etherem. Toto překrystalování se opakuje ještě dvakrát. Získá se 12,2 g 1-adamantanamoniové soli cis-1-(D-3-merkapto-2-methyl-l oxopropyl)-4-[ (4-methoxyfe-

2,2 nyi)thioj-L-prolinu o teplotě, .· tání ·· 237· · až 239 °C (rozklad, o optické rotaci [a]_O ²⁵ = — —52,8° (c — 0,5.%, methanol).

Malý vzorek této 1-adamantanamoniové soli 500 mg; 0,99 mmol) se roztřepe mezi vodnou · kyselinu chlorovodíkovou arethylacetát, přičemž se získá odpovídající volná kyselina o optické rotaci [ajo²⁵ — —36,8 ° (c = 1 %, absolutní ethanol).

K intenzívně míchané směsi 27,2 ml · 1 N vodné kysel · ily chlorovodíkové, 45 ml · · vody a 75 ml ethylacetátu se po · · částech · · přidá

11.5 g (22,7 mmol) shora získané · 1-adamantanamoniové so · i, přičemž - roztok · se ..•-ch¹adí v ledu a udržuje se · v, dusíkové · atmosféře. Po rozpuštění všeho · · pevného · · materiálu se vodná vrstva ještě · dvakrát · . extrahuje ·· vždy 75 ml ethylacetátu, organické extrakty se f spojí, promyjí se 50 ml 0,5 · N vodné· kyše i ·ny chlorovodíkové, 50 ml vody a , · nakonec roztokem chloridu ·sodného. Výsledný . roz» tok se vysuší ·síranem^hořečnatým a zahustí se ve ·vakuu. · Získá se · 8,2· g volné kyseliny, která se · rozpustí ve směsi 75 · · ml ethylacetátu a · 20 ml etheru, a · tento · roztok· se · protřepe · s · roztokem 3,76 g · (21,6 · mmol) · L · argininu ve 100 ml vody. · Vodná vrstva se · promyje 75 ml etheru · a · přes · noc se· lyofilizuje. Získá se 11,2 g · soli cíStl-(D--3-me.rkapto-2-methyl-l-oxopropyl )-4-(( 4-methoxyfenyl J thio-j-L-prolinu s L-argininem (1:1) · o · optické rotaci [«jo²5 =· —46,0 ° (c · · = 1 · · %, voda).

Analýza pro:

CysHsiNOiS СШ ; 4N4O2:

vypočteno:

C: 47,93 %, H: 6,84 %, N: 12,70 %,

S: 11,63 %, SH: 6,00 %;

nalezeno:

C: 47,99 %, H: 6,61 %, N: 12,66 %,

S: 11,62 %, SH: 6,00 %.

Příklad 17 * cis-1- [ D-3- (benzoylthio) -2-methyl-l-oxopropyl ] -4- (f enylthio) -L-pr olin * 9,9 g · (0,031 mol) cis-4-fenylthio-L-prolinu se suspenduje ve 100 ml vody (pH 5,6) a hodnota pH se přidáním cca 20 ml 10%o roztoku hydrogenuhličitanu · sodného upraví na 10,2, čímž suspenze přejde · · na čirý · · roztok. Hodnota pH se pak přidáním zhruba

4.5 ml · koncentrované · ·kyseliny · · chlorovodíkové · · upraví · na 9,5· a k roztoku · se · při· teplotě 30°C · přidá 8,1 g (0,033· . mol) chloridu D-3- (benzoyUhio) -2-methylpropanové kyseliny ve 30 ml · toluenu, · současně se 100 · ml 10% · · rpztoku · hydrogepuhličitanu, · sodného, jímž se pH udržuje na hodnotě 9,3. Po přidání asi čtvrtiny chloridu kyseliny se začne

118 tvořit · slizovitá:· sraženina, která ve - ... ·směsi přetrvává . po · · celou · reakční · dobu. . -Reakční směs se 2,5· hodiny míchá při pH 9,3, načež se v přítomností ethylacetátu. s'Ině okyselí přidáním 20% · kyseliny chlorovodíkové. · Vodná · · vrstva se · extrahuje dvakrát vždy 350 ml ethyiac-etátu,·. ·spojené ^.organické vrstvy se promyjí · 300 · ml nasyceného roztoku chloridu · sodného a vysuší se síranem · hořečnatým. Po odpaření· · rozpouštědla se · získá 11,8 g surového · produktu ve · · formě · pěnovité pevné-látky.

11,8 g· [0,027 mol) tohoto pěnoyitého pevného produktu se · ·rozpustí · v · 70 ml acetonitrilu a k roztoku se přidá cca · 6 · g dicyklohexylaminu ve 25 ml etheru, přičemž se okamžitě vyloučí bílá krystalická, · · sraženina. Směs se nechá přes noc stát ve studené místnosti, pak se pevný produkt, · odfiltruje a promyje se etherem. Získá se sůl cis-1- [ D-3- (benzovlthio) -2-methyl-l-oxop.ropyl j -4- (fenylthio)-L-prolinu s dicyklohexylamínem (1 : 1).

Analýza pro:

CžxHxsNOjSz . C12H23M:

vypočteno:

C: 66,85 %, H: 7,59 %, N: 4,59· %;

nalezeno:

’ C: 66,33 %, H: 7,30 %, N: 4,48 %.

Mírně, vlhká · dicyklohexylamoniová sůl se 2,5 · hodiny míchá ve . směsi 300 · ml · ethylacetátu a 200 ml 10% roztoku · hydrogensíranu draselného^ Vzniknou dvě čiré · vrstvy. · Vodná · vrstva - se-ex.trahuje dvakrát.vždy · 200 ml ethylacetátu, · · spojené · organické · · podíly se vysuší síranem · hořečnatým . a · · rozpouštědlo se. · odpaří.· · · Získá se · 10,1 · g· · pěnovitého pevného· cis-1-[D-3- (benzoylthio)-2-methyl-l--oxopropyíj-4-(fenylthio)-L-pr olinu o · · teplotě · tání · · 42 až · · 44 . °C o · · optické: rotaci [a]_D ²⁵ = == —36,5 0 · · (c = · l%, methanol).

Analýza pro:

C22H23NO4S2:

vypočteno:

C: 60,87 %, H: 5,46 · %, N: 3,23 %, nalezeno:

C: 60,75 %, H: 5,35 %, N: 3,17 %.

Příklad 18

Sůl cis-1- [ D-3- [ benzcylthio) -2-methyl-l-oxopropyl]-4-.(fenyl.thio)-L-pr olinu s · L-argininem (1:1)

K roztoku 2,3 g (0,0054 mol) cis-1-[D-3-

- (bmzoylthio) -2-methyl-l-oxopropyl ] -4- (fenylthioj-L-prolinu ve 100 ml methanolu se přidá 0,941 g (0,0054 mol) L-argininu. Zhruba po desetimlnutovém míchání vznikne čirý roztok. Reakční směs se zhruba 5 hodm míchá při teplotě místnosti, pak se rozpouštědlo odpaří a pevný zbytek se ^iteruje s etherem. Filtrací se získá 2,5 g soli cis-1-

- [ D-3- (benzoylthio) · 2-methyl-l-oxopropyl] -4-(fenylthio)-L-prolinu s L-argininem (1 : : 1), která při zahřívání měkne při teplotě 105 °C a za rozkladu taje při 110 až 112 °C. Produkt má optickou rotaci [ a ] -25 = —278 ° (c = 1 %, methanol).

Analýza pro:

C22H22NO.1S2 . C6H14N4O2:

vypočteno:

C: 54,88 %, H: 6,25 %, N: 11,43 %,

S: 10,47 %;

nalezeno:

C: 54,44 %, H: 6,21 %, N: 11,60 %,

S: 10,40 %.

Příklad 19

Sodná sůl cis-l-[D-(3-benzoy-lhio)-2-methyl-l-oxopropyl 1 -4- ^пуНШю)-L-prolinu (1:1)

Roztok 4,29 g (0,01 mol) cis-l-[D-3-(benzoyHhio ) -2-methyl-l-oxopropyl ] -4- (fenyl) -L-prolinu ve 25 ml methanolu se smísí s roztokem 0,540 g (0,01 mol) methoxidu sodného ve 25 ml methanolu. Po přidání zhruba 50 mi etheru a asi po desetiml-notovém míchání se začne tvořit sraženina. Směs se nechá přes noc stát v chladné místnosti, želatinovitý pevný materiál se odfiltruje, promyje se etherem a vysuší se v exsikátoru. Získá se 2,5 g sodné soli cis-l-[D-3-(benzoylthio ) -2-methyl-l-oxopropyl 1-4-( f enylthio) -L-prolinu (1:1) o teplotě tání · 218 až 220 stupňů Celsia (rozklad) o optické rotaci [a]_D25 = —105,2 ° (c == 1 %, voda).

Analýza pro:

C22H22NO4S2 . Na:

vypočteno:

C: 57,36 %, H: 5,03 0/o, N: 3,04 %,

Na: 4,99 %;

nalezeno:

C: 57,62 %, H: 5,08 %, N: 3,01 %,

Na: 4,68 %.

Příklad 20 cis-1- (rD3-morkapto-2-met.hyl-l oxOpropyl ] -3-fenoxy-D_;L-proli.n

a) Terc.butylester 3-fenoxy-l,2-dehydroprollnu

Směs 9,25 g (50 mmol) terc.buly¹rsΐrru 1,2-yehodroprOlmu v 70 ml toluenu a 8,9 g (50 mmol) С-bromsukclnimidu se 1 hodinu zahřívá · k varu pod zpětným chladičem za ozařování žárovkou na denní světlo umístěnou ve vzdálenosti cca 5 cm. Během této doby vznikne sukcinimid. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, sukcinimid se odfiltruje a filtrát se odpaří k suchu. Destilací zbytku při teplotě 80 °C se získá 3,5 g surového terč, butylesteru 3-brom-l.2 · dehydroprolinu.

Směs tohoto surového terobutylesteru 3-brom-l^-dehydroprolinu a 3,9 g (13 mmol) fenoxidu thalnatého ve 30 ml suchého dimethylformamidu se 24 hodiny míchá pod argonem při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zředí etherem, čímž se vysráží bromid thalnatý, který · se odfiltruje. Zahuštěním filtrátu se získá olejovitý materiál, který se čistí destilací. Po> dvouhodinovém zahřívání na 80 °C za tlaku 0,67 Pa zbude v 1rsli-acní baňce 1,48 g trrc.bulylrstrru 3-fenoxy-l,2-1ehy1roprolinu.

b) · cis-3-fenoxy-D,Lprolin

Směs 1,48 g terč, butylesteru 3-fenoxy-l,2-1ehy1roproliru_? 5 ml 1 N hydroxidu sodného a 20 ml 80% vodného dioxanu se 4 hodiny míchá při teplotě místnosti, pak se rozpouštědlo odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí ve 25 ml vody a k roztoku se při teplotě místnosti během 1 hodiny přidá 168 mg nalriumborohydrldu. Výsledná směs se 2 N kyselinou chlorovodíkovou okyselí na pH 6 a reakční roztok se 16 hodin chladí na 0 °C, přičemž se z něj vysráží zhruba 25 mg krystalického trans-3-fenoxy-D, L-prolinu. Tyto krystaly se odfiltrují a filtrát se odsolí na sloupci iontoměnlče Dowex 50 Wx8 (2,5 X X 30 cm) za použití 1 N hydroxidu amonného jako e-ucního činidla. Frakce aktivní v UV záření se spojí a zahuštěním se z nich získá 616 mg pevného cis-3-frnoxy-D,L-pro linu.

c) cis-1- [ D-3- (acetylthio) -2-methyl-l-oxopropyll-3-fenoxy-D,L-prolin

616 mg cis-3-frno'xy-D,L-proИnu se při teplotě 5 °C suspendu je ve 20 ml vody a hodnota pH se pevným uhličitanem sodným upraví na 8,0. Přidá se roztok 550 mg (2,5 mmol) chloridu D-3-acerylthio-2-merhylpropanové kyseliny v 1 ml etheru a přidáváním uhliči tanu sodného se pH reakční směsi po následující 1,5 hodiny udržuje v rozmezí 7,3 až 8,2. Výsledná směs se promyje dvakrát vždy 20 ml ethylacetátu, 10% kyselinou chlorovodíkovou se okyselí na pH 2 a extrahuje se třikrát vždy 50 ml ethylacetátu. Extrakty se spojí, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí se. Získá se 810 mg olejovitého materiálu, který se čistí rychlou chromatografií na 300 ml silikageíu za použití směsí toluenu s 10 až 20 % kyseliny octové jako elučních činidel. Získá se 530 mg cis 1-[D-3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-3-fenoxy-D,L-prolinu.

d) cis-1 (D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyl)-3-fenoxy-D,L-prolin

530 mg cís-l-[D-3-(acetylthio]-2-methyl-l¹ -oxopropyl]-3-fenoxy-D,L-prolinu se pod argonem rozpustí ve směsi stejných dílů koncentrovaného hydroxidu amonného a vody ? (zbavené plynů patnáctiminutovým uváděním argonu) a 1,5 hodiny se míchá. Mírně zakalený roztok se koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou okyselí na pH 6,5 (dochází к mírnému záhrevu) a extrahuje se dvakrát vždy 25 ml methylenchloridu. Hodnota pH se upraví na 1 a roztok se znovu extrahuje třikrát vždy 50 ml methylenclťoridu. Extrakty se spojí a po vysušení síranem hořečnatým se zahustí. Získá se 410 mg sklovitého materiálu, který se triturací s chloroformem přivede ke krystalizaci. Pevný produkt poskytne po překrystalování ze směsi ethylacetátu a hexanu 261 mg cis-1-

- (D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyl) -3-fenoxy-D,L-prolinu o teplotě tání 134 až 155 stupňů Celsia.

Analýza pro:

C15H19NO4S:

vypočteno:

C: 58,23 %, H: 6,19 %, N: 4,53 %,

S: 10,36 %;

nalezeno:

C: 58,07 %, H: 6,18 %, N: 4,45 %, ' S: 10,16 %.

Příklad 21

Z níže uvedených složek se připraví 1000 tablet, z nichž každá obsahuje 100 mg 1-

- (D-3-merkapto-l-oxopropyl) -trans-4-methoxy-L-prolinu ve formě sodné soli.

složka	množství
sodná sůl l-(3-merkapto-l-oxopro-
pyl)-trans-4-methoxy-L-pro
linu	100 g
kukuřičný škrob	50 g
želatina	7,5 g
Avicel (mikrokrystalická celuló-
za)	25 g
stearát horečnatý	2,5 g

Sodná sůl l-(D-3-merkapto-l-oxopropyl)-trans-4-methoxy-L-prolinu a kukuřičný škrob se smísí s vodným roztokem želatiny, směs se vysuší a rozmělní se na jemný prášek, který se po smísení s Avicelem a stearátem hořečnatým granuluje. Z granulátu se na tabletovacím lisu vyrobí 1000 tablet, z nichž každá obsahuje 100 mg účinné složky.

Příklad 22

Postupem popsaným v příkladu 21 se vyrobí tablety, z nichž každá obsahuje 200 mg 1- (D-3'merkapto-2-methyl-l-oxopropyl) -trans-4-methoxy-L-prolinu.

Příklad 23

Z níže uvedených složek se vyrobí 1000 tablet, z nichž každá obsahuje 200 mg sodné soli 1- (D-3-merkapto-2-methy 1-1 oxopropyl) -cis-4-methoxy-L-prolinu.

složka množství sodná sůl l-(D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropy 1) -cis-4-methoxy-L-prolinu 50g iaktóza 25g

Avicel 38g kukuřičný škrob 15g stearát hořečnatý 2g

Sodná sůl l-(D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyi)-cis-4-methoxy~L-prolinu, Iaktóza a Avicel se smísí, pak se к směsi přimísí kukuřičný škrob a nakonec se přidá stearát hořečnatý. Ze suché směsi se na tabletovacím lisu vylisuje 1000 tab.et o hmotnosti 130 mg, z nichž každá obsahuje 50 mg úč nné látky. Tablety se pak povlékají roztokem methylcelumzy (Methocel E 15) obsahující jako barvivo lak s obsahem žlutí č. 6.

Příklad 24

Směsí níže uvedených složek se naplní dvojdílné želatinové kapsle č. 1 tak, že každá kapsle obsahuje 100 mg sodné soli 1-(D-3-merkapto -2-methyl-l-oxopropyl) -cis-4-methoxy-L-prolinu.

složka množství sodná sůl l-(D-3-merkapto-2-methyl-l-oxopropyl) -cis-4-methoxy-L-prolinu 100mg stearát hořečnatý 7mg laktóza USP 193mg

Příklad 25

Níže popsaným postupem se z následujících složek připraví injekční roztok.

složka množství

trans-4-methoxy-l-(D-3-merkapto-2-
-methyl-l-oxopropyl) -L-
-prolin	500 g
methylparaben	5 g
propylparaben	1 g	«
chlorid sodný	25 g
voda pro injekce doplnit do	1 litru	F
PŘEDMĚT vynalezu

Claims

Způsob výroby merkaptoacylderivátů substituovaných prolinů, obecného vzorce I

R-S-CHrCH-CO-N — C — COOR * ^L H (I) ve kterém skupina X-Ri je navázána v poloze 3 nebo 4 prolinového kruhu,

X představuje kyslík nebo síru,

R znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Ri představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinu, popřípadě substituovanou atomem halogenu, methylovou skupinou nebo methoxyskupinou,

R2 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 7 atomy uhlíku a

R4 představuje atom vodíku alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzoylovou skupinu, a jejich solí s bázemi, vyznačující se tím, že se proilinový derivát obecného vzorce II

Účinná látka, ochranné látky a chlorid sodný se rozpustí ve 3 Pírech vody pro injekce a roztok se doplní na objem 5 litrů. Roztok se zfiltruje přes sterilní filtr a asepticky se plní do předem vysterilizovaných lahviček, které se uzavřou vysterilizovanými gumovými uzávěry. Každá lahvička obsahuje 5 ml roztoku pro injekce o koncentraci 100 mg účinné látky v každém ml roztoku.

Obdobně jako v příkladech 21 až 25 je možno upravovat na lékové formy produkty ze všech příkladů provedení.

ve kterém

R, Ri а X mají shora uvedený význam, kondenzuje s kyselinou obecného vzorce III

R2

Rf—S-- CH?—CH—COOH (III) ve kterém

R2 má shora uvedený význam a

Rd‘ znamená alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzoylovou skupinu, přičemž tato kondenzace se provádí v přítomnosti kondenzačního činidla, jajko dicyklohexylkarbodiimidu, nebo za použití aktivované formy kyseliny obecného vzorce IIÍ, jako anhydridu či halogenidů této kyseliny, vzniklý produkt obecného vzorce I, v němž Ri znamená alkanoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzoylovou skupinu a zbývající obecné symboly mají shora uvedený význam, se popřípadě hydrolyzuje na odpovídající produkt obecného vzorce I, v němž Rá znamená atom vodíku a zbývající obecné symboly mají shora uvedený význam, a výsledný produkt se popřípadě převede na svoji sůl s bází.