FI68811C

FI68811C - Foerfarande foer framstaellning av ett nytt terapeutiskt anvaendbart prostaglandin-steroidhormon-konjugat

Info

Publication number: FI68811C
Application number: FI790281A
Authority: FI
Inventors: Satoru Enomoto; Kiro Asano; Humio Tamura; Hiromitsu Tanaka
Original assignee: Kureha Chemical Ind Co Ltd
Priority date: 1978-01-31
Filing date: 1979-01-29
Publication date: 1985-11-11
Also published as: NL7900071A; SE448872B; SE8305321D0; SE448871B; FI68811B; NL187485B; NO151087B; DK6179A; NO151087C; IT1110751B; DK159455B; IL56430A; SE8305324L; SE8305321L; SE441006B; FR2422686A1; SE8305323L; SE8305322L; SE448870B; FI790281A

Description

KUULUTUSJULKAISU B 11 UTLÄGGNINGSSKRIFT ° C ° c <«) 11 11 1935 (51) Kv.ik.*/int.ci.4 c 07 C 177/00, C 07 J 1/00, 5/00 SUOMI —FINLAND (21) Patenttihakemus — Patentansöknlng 790281 (22) Hakemispäivä — Ansökningsdag 29-01.79 (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 29-01 .79 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentllg 01 ,08.79

Patentti- ja rekisterihallitus Nähtäväksi panon ja kuul.julkaiiun pvm. - 31.07.85

Patent- och registerstyrelsen ' ' Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus—Begärd prloritet 31 -01 -78 29.08.78 Japani (JP) 9652/78, 104^/78 Toteennäytetty-Styrkt (71) Kureha Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha, No. 8, 1-chome, Nihonbashi Horidome-cho, Chuo-ku, Tokyo 103, Japani-Japan(jP) (72) Satoru Enomoto, Kanagawa-ken, Kiro Asano, Ibaraki-ken,

Humio Tamura, Ibaraki-ken, Hiromitsu Tanaka, Tokyo, Japani-Japan(JP) (7*0 Oy Kolster Ab (5*i) Menetelmä uuden, terapeuttisesti käyttökelpoisen prostaglandiini-steroidihormoni-konjugaatin valmistamiseksi - Förfarande för fram-ställning av ett nytt, terapeutiskt användbart prostaglandin--steroidhormon-konjugat

Keksinnön kohteena on menetelmä uuden, terapeuttisesti käyttökelpoisen prostaglandiini-steroidihormoni-konjugaatin valmistamiseksi, jolla on kaava (I) tai (I')

Z

j 0 0 1CH 2tr st (1 > i \ "

0R OR

Z 0 0 C^O-fCH^ C^-St (!·) r

I I

' I

OR OR

2 6 O 81 1 joissa R on vetyatomi tai asetyyiiryhmä. z on qr tai =0; n on 1 tai 2, m on 0, 1 tai 2, ja o-j. on kemiallinen ryhmä, joHa on kaava (II), (III), (IV) tai (y) 0 -0 / ! -0CI12-C -/ H ,C } , H C-r ·' V. /Λ V/Λ ,W h c > (II) (V < v (III) ! ‘ 0 ok1 HO .

-o ; | -o --\ :

HoC λ- : v dd ' v. m

HjC-k - Λ \ " 'v > dV) ^ (V) ' or1 joissa R1 on vetyatomi tai asetyyli-, propionyyli- tai bentsoyy" liryhmä.

Uusilla prostaglandiini-johdannaisilla on huomattavasti vähemmän sivuvaikutuksia kuin tunnetuilla prostaglandiini-johdannaisilla, mutta niiden fysiologinen aktiivisuus on yhtä hyvä kuin tunnetuilla prostaglandiini-johdannaisi11a.

Kuten on tunnettua, ihmisruumiissa on prostaglandiineja ja ne ovat tärkeitä fysiologisesti aktiivisia yhdisteitä, joilla on verenpainetta alentava, mahanesteen erittymistä estävä, keuhkoputkea laajentava ja verihiutaleiden yhteenliimautumista estävä vaikutus.

Tästä lähtien prostaglandiineista käytetään lyhennystä PG:t. PGE ja PGP omaavat tunnetusti eräitä erityisiä fysiologisia vaikutuksia, kuten kohdunkouristus ja keltarauhasen regeneraatio, ja ne ovat käyttökelpoisia synnytystä helpottavina, keskenmenoon raskauden alku- tai keskivaiheilla, istukan irtautumiseen synnytyksen jälkeen ja kuukautishäiriöiden kontrollia varten. (Brit.

3 68811

Med. J. 4 (1968) 618, Brit. Med. J. 4 (1968) 621, Amr. N.Y. Acad. Sci. 180 (1970) 456.

Niillä on myös vaikutusta naaraspuolisten nisäkkäisen kuukautiskiertoon, keskenmenoon ja hedelmöityksen ehkäisyyn.

Kuitenkin käyttökelpoiset prostagalandiinit aiheuttavat lääkkeenä annettuna pahoinvointia, oksentamista ja ripulia sekä lisäksi verenpaineen, pulssin ja hengityksen äkillisiä vaihteluita. Huolimatta siitä, että prostaglandiinien on odotettu olevan käyttökelpoisia lääkkeinä, niiden käyttö, on rajoitettu vain eri-koisterapiaan niiden aiheuttamien haittavaikutuksien vuoksi.

Uusilla kaavojen (I) ja (I1) mukaisilla prostaglandiini-johdannaisilla on huomattavasti vähemmän haittavaikutuksia kuin tunnetuilla prostaglandiinijohdannaisilla, mutta kuitenkin tunnettujen prostaglandiini-johdannaisten farmakologiset vaikutukset kuten kohdunkouristusta, keskenmenoa, keltarauhasdegeneraatiota stimuloiva ja nidaatiota estävä vaikutus on samanlainen. Niinpä uudet prostaglandiini-johdannaiset ovat ensiluokkaisen tehokkaita keskenmenoon, synnytyksen helpottamiseen, hedelmöittymisen parantuneeseen ehkäisyyn ja kuukautisten helpottamiseen.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle uusien prostaglandiini-johdannaisten valmistamiseksi on tunnusomaista, että prostaglandiini tai asetyloitu prostaglandiini, jolla on kaava (a) tai (b)

Z

i °

X ' C - OH

(a)

; I

OR OR

Z 2

I ^ ^ C - OH

CCCOh I *

i I

, ‘

OR OR

- 68811 joissa R ja Z merkitsevät samaa kuin kaavassa (I), saatetaan reagoimaan hydroksyyliryhmän kanssa, joka on 17- tai 21-asemassa steroidihormonissa, jolla on kaava (II1), (III'), (IV) tai (V) 0 _ H-0-/ I h-och2-c _/ j H^C V-\ H C \—: H 3 c · )—( (I1' } (III’ ) ^—/ i i \ OR 0

HO

H -0-/ I H-0 -- / I

HC '--Λ H - C y-- i "s Q „.,Ö (IV) ; \ -,

OR

joissa R"*" merkitsee samaa kuin kaavoissa (II) ja (IV), suoralla reaktiolla tai sitomalla sidosaineella, jolla on kaava X(CHo) C00H tai X(CH„) COX, 2 n 2 n * joissa n on 1 tai 2 ja X on halogeeniatomi-

Tyypilliset prostaglandiini-johdannaiset (I) voidaan luokitella seuraavasti: OH o ; i .

/‘-,, " C- yksikkö A, '•Sr' < !

1 I

OH 6h 6881 1 5 OCOCH3 o ! il . , \ C- yksikkö Αή i ! i ·-

I I

0C0CH3 0C0CH3

0 O

]i s; /C- yksikkö

: I

1 1

OH OH

0 1 x - Ί / Xj Χ'·-τ-'·· C- yksikkö A^ V'v Λ· · — OCOCH3 DC0CH3 0 0 I! ii \ \\ C- yksikkö s 1 \

OH OH

0 O

ij il

C- yksikkö AI

< l .

-r V: V

t l ococh3 ococh3 6 68811 -o-Hp |.j (-4_I yksikkö Bj —1 on 0 / \_ yksikkö β>

O

OCOCH3 °pj 3 / \_ yksikkö β"

Q

ococn2cn3 -o-n

HoC->—(

O / \ HI

( ) \ yksikkö Bj

^OCO -Q

7 68811 O _( - O - Clio- C-/ H3cVl '—( y yksikkö n · II3C·)—( ^ \\

O

Ryhmä I Aj - Ώγ A\ - A2 - Bj A'2 - Bj A3-Bj A’3-Bl

Ai - Bi A\ - B^ A2 - B\ A2 - Bj A3-B1} . A'3-B'l

Aj - B' 1 A] - β'ι A2 - b'i ä2 - β’ι Αβ-Β"! A'3-B''i

Aj - B"; A\ - B"j A2 - B"| A2 - ΒΪ' A3-B”! A13-B'" ^ A1 - B2 A'i - B2 A2 - B2 A2 - B2 A3-B2 A1 3 -B2

Ryhmä II

OOOO I! Il II < Il

Aj-OfCHgfoC-Bj Ai-OfCH^C-B! A2-0(CII2 >äC“ B{ A2-OfCH2-)FiC-B1 OOOO M , n , H . , " .

Aj-OfCH^C-Bj A1-0(CH2->nC-B1 A2-OfCH2^hC-B1 A2-OfC H2^rC-Bi

OOOO

ArO{CH2)-yb-B'i Aj-CHCI^^nC-B'i Α2-0(0Η2^η0-Bj Ag-O^CH^C-Bj

OOOO

Aj-OfCI-^^C-B'J' A'j-CMCIi^C-B'i" Α2-Ο(0Η2-)ρ;0-b'" A2-0(CH2-^C-b'i

O O O O

il 1 il 11 . 11

Aj-CXCI-Ig-^C-Bg ArO(CII2>~C-B2 A^OfCHg)^-B2 A2-CKCH2 ^C-B2

O O

A 3-0-(0112^71^-^1 A13-O—(Cl^'triC - B1 9 9 A^-O-fCH^-hrt-B', A^-O-iCII^C-B'·,

d Q - " O

A3-0-{CH2)FrC-B"1 A' 3-0-fCH2)n t-B"i

O O

A3-0-{CII2-)pj-C-B"' j A'3-O—(CHjr)^ Ο-Β"*!

9 O

A3-0-(Cl Ι2-)ή0-Β2 A’3-0-{CIT2VC-B2 (n= ltai 2)

Yksikkö voidaan korvata yksiköllä, jolla on kaava (IV) tai (V) : a 68811 o HO ,

; c-Q

<_>Λ Ολ «3-η m (IV) 0 (V) \ i

OR

joissa R1 on vetyatomi tai asetyyli-, propionyyli- tai bentsoyyli-ryhmä.

Ryhmän II yhdisteet ovat erityisen tärkeät.

Tyypillisiin prostaglandiini-johdannaisiin, joilla on kaava (I), kuuluvat estra-1,3 , 5(10)-trieeni-3-hydroksi-17-oksi-karbonyylimetyyli-9 ·*·, Hoi, lS'k-trihydroksi-S (cis)-13 (trans ) -prosta-dienoaatti (PGF^E) tai PGFE), estra-1,3,5(10)-trieeni-3-hydroksi- 17-oks ikarbonyylietyyli-9 <*, lloi, 15<R.-trihydroks i-5 (cis)-13( trans ) -prostadienoaatti, estra-1,3,5(10)-trieeni-3-hydroksi-17-oksikar-bonyylimetyyli-9c<, ll<X,15<X-triasetoksi-5 (cis ) -13 (trans )-prostadienoaatti (PGFE-3AC); estra-1,3,5(10)-trieeni-3-hydroksi-17-oksi-karbonyylietyyli-9^,ll,oil5 -triasetoksi-5 (cis)-13( trans ) -prostadienoaatti ; estra-1,3,5(10)-trieeni-3-asetoksi-17-oksikarbonyyli-metyyli-9x, 1H., 15«£-triasetoksi-5 (cis )-13(trans )- prostadienoaatti ( PGFE-4AC) ; ja estra-1,3,5( 10)-trieeni-3-asetoksi-17-oksikarbonyy-lietyyli-9.it ,lleL, 15«(,-triasetoksi-5 Ccis ) -13(trans )-prostadienoaatti.

Edullisesti prostaglandiinijohdannaiset (I) valmistetaan käyttämällä lähtöaineina 9oo,ll*:,15oö-trihydroksi-5 (cis )-13( trans )-prostadienonihappoa (tästä lähtien PGF,^) ja estradiolia.

Lähtöaineineina voidaan käyttää myös esimerkiksi seuraavia prostaglandiinijohdannaisia PGE^, PGE^ ja PGF-^, (KAGAKu TO SEI-BUTSU Voi. 15 No. 2 sivut 80-88; 1977).

9 6881 1

OH

Λ ^ COOH

PGFi, . / : Τ 0Η in

OH

»

ρρ·ρ S' Τ s--COOH

2·χ \ 1 .,

1 I

0Η ΟΗ Ο

H COOH

PGEi ccccr, I ^ γ

ÖH OH

Λ ^co., PGE2 ν \ '

1 I

OH OH

6881 1 10

Sidosaine voi olla yhdiste, jolla on kaava X(CH0) C00H tai X(CH„) COX z n z n joissa n on 1 tai 2; ja X on halogeeniatomi, kuten ex, -monokloori-etikkahappo, oo -monobromietikkahappo tai /3 -monobromipropio-nihappo; tai >χ -monoklooriasetyylikloridi tai<^-monobromiasetyyli-bromidi. Näitä sidonta-aineita voidaan käyttää konventionaalisella kemiallisella tavalla.

Steroidihormonina käytetään esimerkiksi estradiolia, estri-diolia tai progesteronia tai steroidihormoni-johdannaista, jolla on konjugoiva ryhmä, 9ll-xi515,^-trihydroksi-5 (cis)-13 (trans )-prostadienonihapon tai sen suolan kanssa.

Steroidihormoni-johdannainen, jolla on sidosryhmä, voidaan helposti valmistaa antamalla steroidin hormonin, kuten estra-diolin, reagoida edellä mainitun sidosaineen kanssa.

Sidosaineen tulisi reagoida valitun steroidihormonin 17-tai 21-asemassa olevan OH-ryhmän kanssa.

Steroidihormonin, kuten estradiolin, reaktio sideaineen kanssa suoritetaan edullisesti liuottimessa, kuten vedettömässä tetrahydrofuraanissa, edullisesti aproottisessa liuottimessa.

Prostaglandiinia käytetään tavallisesti sen suolan, erityisesti hopeasuolan, muodossa.

On mahdollista asetyloida prostaglandiini ennenkuin se saatetaan reagoimaan steroidihormonin tai sen johdannaisen kanssa.

Reaktio prostaglandiinin metallisuolan ja steroidihormoni- johdannaisen välillä voidaan suorittaa sekoittamalla ne liuottimessa, kuten DMS0:ssa, pimeässä.

Asetyloitaessa etikkahapon anhydridiä lisätään inertissä liuottimessa, kuten pyridiinissä.

Reaktiolämpötila voi olla noin huoneenlämpötila, joskin sitä voidaan vaihdella.

Saatu tuote voidaan puhdistaa eluoimalla pylväskromato-grafialla silikageelillä joidenkin orgaanisten liuottimien kanssa.

Il 11 6881 1

Seuraavaksi esitetään muutamia esimerkkejä prostaglandiini-johdannaisten (I) valmistamiseksi.

(1) PGFE:tä voidaan valmistaa öljypitoisena aineena antamalla BrCt^CQBrin reagoida estradiolin 17-asemassa olevan OH-ryh-män kanssa, jolloin saadaan estra-1,3,5(10)-trieeni-3-oli-17-bromi-asetaattia ensimmäisellä reaktiolla ja sen jälkeen edellä saadun tuotteen reaktiolla PGF2^:n karboksyyli-ryhmän metallisuolan kanssa DMS0:n kaltaisessa liuottimessa pimeässä lopullisella reaktiolla.

(2) PGFE-4AC:tä voidaan valmistaa öl jypitoisena aineena antamalla BrCH^COBrrn reagoida estradiolin 17-asemessa olevan OH-ryhmän kanssa, jolloin saadaan estra-1,3,5(10)-trieeni-3-oli-17-bromiasetaattia ensimmäisellä reaktiolla ja toisena reaktiona edellä saadun tuotteen reaktio PGF2^:n karboksyyliryhmän metalli-suolan kanssa (Ag-suola) DMS0:n kaltaisessa liuottimessa pimeässä ja sen jälkeen antamalla erotetun toisen reaktiotuotteen reagoida etikkahapon anhydridin kanssa liuottimessa, kuten pyri-diinissä.

(3) PGFE-3AC:tä voidaan valmistaa öljypitoisena aineena asetyloimalla PGF2ej^ etikkahapon anhydridillä inertissä liuottimessa, kuten pyridiinissä, ja muuttamalla asetyloidun PGF2^:n happo-osan asetyloidun PGF2Qjjn metallisuolaksi (hopeasuolaksi) ja sen jälkeen antamalla saadun asetyloidun PGF2(;3jjn metallisuolan reagoida estra-1,3,5(10)-trieeni-3-oli-17-bromiasetaatin kanssa.

(4·) Käytettäessä estra-1,3,5(10 )-trieeni-3-oli-17-bromi-propionaattia estra-1,3,5(10)-trieeni-3-oli-17-bromlasetaatin si-jasta saadaan vastaavat tuotteet.

(5) PGF2Q£:n ja estradiolin konjugaatti voidaan valmistaa bromaamalla estradiolin 17-asemessa oleva 0H-ryhmä PBr,-:llä inertissä liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, ja antamalla tuotteen reagoida prostaglandiinin metallisuolan (hopeasuolan) kanssa inertissä liuottimessa, kuten DMS0:ssa. Muut johdannaiset voidaan valmistaa samalla menetelmällä.

Näiden tuotteiden rakenteet vahvistetaan IR-spektrillä, alkuaineanalyysillä ja NMR:llä.

12 6 8 81 1 Näillä tuotteilla on seuraavia sivuvaikutuksia: PGFE:n, PGFE-4AC:n ja PGFE-3A:n akuutti myrkyllisyys (LD^q) mitattiin laskimonsisäisilla injektioilla annoksina 400 mg/kg kymmenellä ICR-JCL-naarashiirellä (4 viikon ikäisiä).

Kaikki kymmenen (10) hiirtä säilyvät elossa. Huomioiden, että PGF^rn LD^q on 56 mg/kg on selvää, että PGFE, PGFE-4AC ja PGFE-3A ovat huomattavasti turvallisempia.

Raskaana olevan hiiren sydämen tiheälyöntisyys , hengitys-käyrä ja sydänkäyrä mitataan ennen ja jälkeen PGF^.rn, PGFE:n, PGFE-4AC:n ja PGFE-3A:n annostelua biofysiografialla 180-4(4ch) (San-ei Sokuki K.K:n valmistama).

Tuloksena vastakohtana tosiasialle, että epänormaaleja vaikutuksia havaitaan selvästi annettaessa PGF^ra, ei epänormaaleja vaikutuksia esiinny PGFErn, PGFE-4AC:n ja PGFE-3A:n kohdalla.

Sivuvaikutuskokeiden mukaisesti on havaittu, että PGFE:llä, PGFE-4AC:llä ja PGFE-3A:lla on riittävän alhainen myrkyllisyys ja vähentyneet sivuvaikutukset.

PGFE:n, PGFE-4AC:n ja PGFE-3A:n keskenmeno-tehokkuus mitataan farmakologisina vaikutuksina sopivilla annoksilla ja annostelutavoilla käyttäen raskaana olevaa ICR-JCL-hiirtä.

Tuloksista ilmenee, että PGFE:llä, PGFE-4AC:llä ja PGFE-3A:lla on huomattavasti parempi vaikutus verrattaessa PGF^iaan.

Keskenmeno on epätäydellinen annosteltaessa PGF2oC.:a an- — 8 ^ noksina 15)? (4,24 x 10 moolia)/hiiri 4 päivän ajan, mutta tyydyttäviä tuloksia saavutetaan käyttämällä PGFE:tä, PGFE-4AC:tä ja PGFE-3A:ta samoina tai pienempinä annoksina.

PGF2<^:n 9, 11 ja 15-asemissa olevat hydroksyyliryhmät ovat aktiivisia asemia ja kun hydroksyyli-ryhmät asetyloidaan, sitä yleensä pidetään inaktiivisena.

Kuitenkin PGFE-4AC:n ja PGFE-3A:n asetyloidut hydroksyyliryhmät omaavat hämmästyttävästi huomattavasti paremman vaikutuksen.

Seuraavassa kuvataan uusien prostaglandiini-johdannaisten terapeuttisia ominaisuuksia vertailukokein.

I3 6881 1 PGFE:n fysiologisten aktiviteettien mittaaminen:

Estradiolin ja PGFE:n sitoutumisfunktio jäniksen kohtuun mitattiin kilpailureseptorikokeella.

Estradioli, jossa oli tritium-atomi (3^) ympättiin jäniksen kohtuun sen sitomiseksi, jonka jälkeen estradiolia tai PFE:tä lisättiin systeemiin, jotta voitaisiin mitata vapaan 3 H-estradiolin määrä, jonka korvasi lisätty estradioli tai PGFE. Tulokset on esitetty kuviossa 1. Kuten kuviosta 1 käy ilmi, on havaittu, että PGFErllä on sama sitoutumisfunktio estrogeeni-reseptoriin kuin estradiolilla itsellään.

Lääkkeiden aiheuttama kohdunkouristus havaittiin samalla menetelmällä käyttäen oksitoksiinia. 5/'PGF2(^:ta tai 5-5 0 y1-PGFE : tä aiheuttivat kohdunkouristusta laskimonsisäisinä injektioina rotilla. Edellisessä tapauksessa aiheutettiin sydämen pysähtyminen, kun taas jälkimmäisessä tapauksessa sydämen toiminta oli normaalia, vaikka 50^ konjugaattia annettiin, eikä sivuvaikutuksia havaittu.

PGFE aiheutti hitaammin kohdunkouristusten alkamisen verrattuna PGF2^:aan. Tämä seikka osoittaa, että kohtuun selektiivisesti absorboitunut PGFE hydrolysoitui vapaaksi PGF^^jksi.

Keskenmenoa tutkittiin raskaana olevilla ICR-JCL-hiirillä antamalla lääkettä jatkuvasti 4 päivän ajan ja antamisen sivuvaikutukset tutkittiin myös.

Sen jälkeen kun 9,2 ml 50 % etanoli-suolaliuos-liuosta, joka sisälsi PGFE:tä annoksina lOj'*' ja 30 VVhiiri tai PGF^^jaa annoksina 15 )^7hiiri (ekvimolaarinen PGFE:n 30f- kanssa), oli laskimonsisäisesti injektoitu hiiriin kerran päivässä 3 päivän ajan, jatkettiin ryhmän, jolle oli annettu lääkettä, kasvattamista keskenmenon varmistamiseksi, kunnes kontrolliryhmä, jolle oli annettu vain etanoli-suolaliuos-liuosta, synnytti.

Tulokset olivat seuraavat :

Taulukko 1 it 6 8 81 1 Näyte Annos ( Ϋ~/hiiri) Synnytykset Keskenmeno (5 hiirtä vaikutus-% ryhmässä)

Kontrolli 50 % etanoli- suolaliuos _0_ 5 0_

Vertailu R^j^-liuos 15 5 0

Keksinnön PGFE-liuos 10 0 100 __30__0 100_

Raskaana olevien hiirien synnyttäneiden

Keskenmenon tehokkuus = hiirien määrä_x 100

Raskaanaolevien hiirien määrä PGFE-3AC:n ja PGFE-4AC :n sivuvaikutuskoe:

Mitattiin akuutti myrkyllisyys (LD^g) ja biofysiografilla epänormaali sydämen tiheälyöntisyys, hengityskäyrä ja sydänkäyrä.

Mitattaessa LD^g-arvoa käytettiin 10 ICR-JCL naarashiir-tä (4 viikon ikäisiä) yhtenä ryhmänä. Laskimonsisäisesti injektoitiin 0,2 ml 50 % etanolisuolaliuosta, joka sisälsi keksinnön mukaista lääkettä, useina annoksina 7 päivän aikana, jotta olisi saatu LDt-g-arvo Litchfiel-Wilcoxon graafisella menetelmällä.

Tuloksena oli, että kaikki hiiret säilyivät hengissä, eikä abnormaalisuutta havaittu edes annettaessa 400 mg/kg PGFE-3AC:tä tai PGFE-4AC:tä, mikä on 7 kertaa PGF2^:n LD^g (56 mg/kg). Niinpä niiden LD50 ovat liian korkeita suoraan mitattaviksi. Tämä osoittaa, että tuotteet PGFE-3AC ja PGFE-4AC ovat huomattavan vähän myrkyllisiä.

Sydänkäyrä mitattiin biofysiografilla 180-4 (4 ch) (San-ei Sokuki K.K:n valmistama) raskaana olevilta (6:s päivä) ICR-JCL-hiiriltä 3 minuuttia kunkin näytteen antamisen jälkeen.

Kokeessa 0,2 ml 50% etanoli-suolaliuosta injektoitiin laskimonsisäisesti hiiriin annoksina 30 J^/hiiri. Vertailuna PGF2<>^:a käytettiin myös näytteenä (annos 15 ^“/hiiri).

Mittausten tulokset on esitetty kuvioissa 2-5, joissa mV on annettu ordinaatilla ja aika (sekuntteja) on abskissana ja taulukkonopeus oli 250 mm/sek.

15 6881 1

Kuviossa 2 esitetään sydämen tiheälyöntisyys, hengitys-käyrä ja sydänkäyrä injektoitaessa 0,2 ml 50% etanoli-suolaliuosta laskimonsisäisesti.

Kuviossa 3 esitetään sydämen tiheälyöntisyys, hengityskäyrä ja sydänkäyrä injektoitaessa 0,2 ml 50% etanoli-suolaliuosta laskimonsisäisesti sisältäen PGF2^:a annoksina 15 V^/hiiri.

Kuviossa 4 esitetään sydämen tiheälyöntisyys, hengityskäyrä ja sydänkäyrä injektoitaessa 0,2 ml 50% etanoli-suolaliuosta sisältäen PGFE-4AC:tä annoksina 30 ^"/hiiri laskimonsisäisesti.

Kuviossa 5 esitetään sydämen tiheälyöntisyys, hengitys-käyrä ja sydänkäyrä injektoitaessa 0,2 ml 50% etanoli-suolaliuosta sisältäen PGFE-3AC:tä annoksina 30 VVhiiri.

Mittausten tuloksista käy ilmi, että sydämen tiheälyöntisyys, hengityskäyrä ja sydänkäyrä PGF2<s^:n (kuvio 3) annostelemi-sen jälkeen poikkeaa epänormaalista kontrolliryhmän vastaavista (kuvio 2). Kuitenkin sydämen tiheälyöntisyys, hengityskäyrä ja sydänkäyrä PGFE-4AC:n ja PGFE-3AC:n annostelemisen jälkeen (kuviot 4 ja 5) ovat oleellisesti samanlaiset kuin kontrolliryhmän vastaavat. Niinpä PGFE-3AC ja PGFE-4AC ovat edullisia lääkeaineita, koska ne eivät aiheuta abnormaaleja oireita. Esillä olevan keksinnön mukaiset muut prostaglandiinijohdannaiset osoittivat myös vastaavaa vaikutusta.

PGFE-3AC:n ja PGFE-4AC:n keskenmenokoe

Esillä olevan keksinnön mukaisten lääkeaineiden vaikutusta keskenmenoon verrattuna sitä PGF^rn vaikutukseen tutkittiin antamalla jatkuvasti kuudennella raskauspäivällä oleville ICR-JCL-hiirille annoksia. Sen jälkeen kun 2 ml 50% etanoli-suola-liuosta, joka sisältää joko PGFE-3AC:tä, PGFE-4AC:tä tai oli annettu hiirille kerran päivässä 4 päivän ajan laskimonsisäisenä injektiona ja ihonalaisena injektiona jollakin annoksella, jatkettiin niiden kasvattamista, jotta voitaisiin vahvistaa lääkkeitä saaneiden keskenmeno, kunnes kontrolliryhmä, jolle oli annettu vain etanoli-suolaliuosta, synnytti.

Tulokset on esitetty taulukoissa 2 ja 3. Kuten koetuloksista selviää, on PFFE-3AC:n ja PGFE-4AC:n vaikutus keskenmenoon huomattavasti parempi kuin tunnetun yhdisteen P^^^ 16 6881 1

Taulukko 2: Keskenmenokoe injektoimalla ihonalaisesti: Näyte Annos ( Ϋ~ /hiiri) Synnytykset Keskenmeno (5 hiirtä vaikutus-% _ryhmässä)_

Kontrolli 5 % etanoli- _suolaliuos_0_5__0_

Vertailu PGF2 15 5 0 _”_30_4_20__ v , . . K PGFE-4AC 15 0 100

Keksintö " 30 0 100 PGFE-3AC 15 0 100

Taulukko 3: Keskenmenokoe injektoimalla laskimonsisäisesti: Näyte Annos Synnytykset Keskenmeno ( ^/hiiri) (5 hiirtä vaikutus-% _ryhmässä)_ w ,_,,. 5 % etanoli- n 1 suolaliuos 0 50

Vertailu 2,5 5 0 " 5,0 5 0 _"_ 15,0 4 20 PGEE-4AC 2,5 3 40 " 5,0 0 100

Keks uitöpGpE_ 3 AC 1)Q 4 2Q

" 2,5 2 60 " 5,0 0 100

Muiden esillä olevan keksinnön mukaisten prostaglandiini-johdannaisten vaikutuskoe keskenmenoon Tämän keksinnön mukaiset lääkkeet liuotettiin oliiviöljyyn useina konsentraatioina, jotta saavutettaisiin niiden tehokkaat annokset keskenmenon suhteen (100 % tehokkuus). 0,2 ml liuosta injektoitiin ihonalaisesti raskaana oleviin ICR-JCL-hiiriin (5 hiirtä yhdessä ryhmässä).

Il 17 6881 1

Sen jälkeen kun yksi ihonalainen injektio, 0,2 ml liuosta, oli annettu raskaana oleville ICR-JCL-hiirille neljäntenä päivänä, niiden kasvattamista jatkettiin, jotta voitaisiin vahvistaa lääkkeitä saaneiden ryhmien keskenmenot, kunnes kontrolliryhmä, jolle on annettu vain öljyä, synnytti.

Taulukko 4

Keskenmeno käyttäen yhtä ihonalaista injektiota Näyte Annos Synnytykset Keskenmeno- __mooli/hiiri___yeikutus-%

Kontrolli Oliiviöljy 0 50 PGE2 8.5x10 ^mooli 5 0

Vertailu ____ PGF2 Ä 8.5x10 ^moolia 5 0 PGFE-BA 5.6x10 ^moolia 1 80 PGFE-3AC-BA 5.6x10 ^moolia 0 100

Keksintö Tö PGFE-Pr 5.6x10 moolia 1 80 PGFP 8.5x10 ^moolia 1 80 PGFP-3AC 8.5x10 ^moolia 0 100 PGE2E-BA 5.6x10 ^moolia 1 80 PGE2E-2AC-BA 5.6x10 ^moolia 0 100 PGE-^E-BA 5.6x10 ^moolia 1 80 PGE-.E-2AOBA 5.6x10 ^moolia 0 100 1 ' x J-i·---- 6881 1 18

Esillä olevan keksinnön mukaiset prostaglandiini-johdan-naiset (I) voidaan muuttaa haluttuun muotoon injektiona, suun kautta tapahtuvaa annostelua, vaginan sisäistä annostelua tai si-velyä varten. Esimerkiksi ne muutetaan kiinteiden koostumuksien muotoon, kuten tableteiksi, jauheeksi, rakeiksi tai kapseleiksi, tai nestemäiseen muotoon, kuten siirapiksi suun kautta tapahtuvaa annostelua varten.

Jos kyseessä on kiinteä koostumus vaginan sisäistä annostelua varten, esillä olevan keksinnön mukainen tuote voidaan sekoittaa vahan, korkeamman rasvahapon tai korkeamman alkoholin, joilla on sopiva sulamispiste sulaakseen vaginassa, ja jos on tarpeen hajoittamista edistävän aineen, jolla on sopiva viskositeetti, kanssa.

Injektion ollessa kyseessä esillä olevan keksinnön mukainen tuote liuotetaan veteen ja jos on tarpeen, sopivaan lisäaineeseen kuten etanoliin, pinta-aktiivisiin aineisiin, emulsioiviin aineisiin, suolaliuos-stabilisoijiin, pH-säätäjiin ja ravintoaineisiin.

Esillä olevan keksinnön mukaisen tuotteen pitoisuus on edullisesti korkeampi kuin 0,0025 paino-% injektiota varten; ja korkeampi kuin 0,1 paino-% suun kautta annettaville koostumuksille .

Esillä olevan keksinnön mukaisen tuotteen annos on 0,1 -500 yug mg/päivä/raskaana oleva nainen, edullisesti 0,001-50 mg/päi-vä/raskaana oleva nainen ja soveltuva annos voidaan myös määrätä annostelutavan ja raskaudentilan mukaan.

Muutamia esimerkkejä esitetään keksinnön havainnollistamiseksi .

Esimerkki 1

Estra-1,3,5(10)-trieeni-3-hydroksi-17-oksi-karbonyyli-metyyli-9«c, lLx, 15<\-trihydroksi-5 (cis )-13( trans )-prostadienoaatin (PGFE) ja 9o(,llX,15<\-trihydroksi-5(cis)-13(trans)-prostadienonihapon (PGF^) kalium- tai hopea-suolojen valmistaminen (a) PGF0(x:n kaliumsuolan valmistaminen 1 ml vettä lisättiin 0,1053 g:aan (2,98 x 10 mooliin) PGF2^:a ja seosta sekoitettiin +1—-2°C:ssa ja seokseen lisättiin 19 6881 1 hitaasti 1 ml vesipitoista liuosta, joka sisälsi 0,0205 g K0H:a.

Liete muuttui kirkkaaksi liuokseksi sekoitettaessa noin tunnin ajan ja pH oli välillä 7,5-8,5.

(b) PGF?^:n hopeasuolan valmistaminen 0,05301 g AgNOgta liuotettiin pieneen määrään vettä ja liuos lisättiin vesipitoiseen liuokseen, jossa oli PGF^in kalium-suolaa pimeässä.

Liuosta sekoitettiin noin 15 minuuttia valkoisen PGF„ .:n hopeasuolan saostamiseksi. Sen jälkeen kun valkoinen saostuma oli suodatettu, talteenotettu saostuma pestiin vedellä, jonka jälkeen eetterillä. Sen jälkeen kuivaamalla huoneen lämpötilassa alennetussa paineessa saatiin 0,1085 g valkeaa hopeasuolaa. (Saanto: 79,14%).

Estra-1,3,5(10 )-trieeni-3/?> -oli-17/3> -bromiasetaatin valmistaminen: 10 g estradiolia liuotettiin 400 ml:aan vedetöntä tetra-hydrofuraania (THF), ja sen jälkeen lisättiin 8,8 g vedetöntä pyridiiniä.

Liuosta, jossa oli 74 g hiilitetrakloridia 22,5 g:ssa ca(.-bromiasetyylibromidia, lisättiin tipoittain estradiolin liuokseen -5 ...-7°C:ssa. Seosta säilytettiin yli yön reaktion jatkamiseksi. Reaktion päätyttyä saostuma suodatettiin ja liuotin tislattiin pois suodoksesta.

Jäännös liuotettiin eetteriin ja kiteytettiin uudelleen, jolloin saatiin estra-1,3,5,(10)-trieeni-3,17^-dibromiasetaattia.

Sen jälkeen 2g;tuotetta liuotettiin 900 ml: aan metanolia ja jäähdytettiin -5°C:een ja lisättiin tipoittain vesipitoista liuosta, joka sisälsi 0,2 g K^CO^ia.

30 minuutin kuluttua lisättiin 1,000 ml vettä liuokseen ja saatu saostuma erotettiin ja kuivattiin. Alkuaineanalyysillä ja IR-spektrillä vahvistettiin, että aine oli estra-1,3,5(10)-tri-eeni-3y2> - oli-17/2 -bromiasetaattia.

PGF^ofin hopeasuolan reaktio estra-1.3.5 (10 )-trieeni-3/3>- oli-17/3> -bromiasetaatin kanssa: 0,1085 g (2,35 x 10 4 moolia) PGF^^n hopeasuolaa liuotettiin 2 kuutiosenttimetriin dimetyylisulfoksidia (DMS0) pimeässä, jonka jälkeen lisättiin 0,1000 g estra-1,3,5(10)-3/½-oli-17/^-bromiasetaattia ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 päivää. Saostunut hopeabromidi poistettiin ja jäljelle jäänyt liuos 2o 6881 1 muutettiin emulsioksi jäähdytetyssä tilassa lisäämällä 20 ml vettä. Sentrifugaalisella erottamisella emulsiosta saatiin vaalean keltainen öljypitoinen tuote.

Reaktiotuote kromatografoitiin 42 g silikageelillä sekoitetussa liuottimen (sykloheksaani, etyyliasetaatti ja etanoli tilavuussuhteessa 45:45:10) kanssa, jotta saataisiin puhdasta ainetta saannolla 68,95 %. Vahvistettiin, että tuote oli PGF0,:n ja estradiolin konjugaatti, jolla oli seuraava kaava:

OH

OHO

c— o —c —c —o —pgf2*e OH 0H \—/\

O

Oli PGF2^:n ja estradiolin konjugaatti Alkuaine analyysi:

C H

Laskettu (%) 72.07 8.71 Löydetty (%) 71.60 8.00 IR spektri: (cm 3400. 2920. 2850, 1735, 1610, 1580. 1495, 1440, 1378, 1 350, 1280, 1215, 1140, 1075, 1040, 1020, 1000, 9G0, 920, 915, 865, 810 780, 720 21 6881 1

Esimerkki 2 PGF0 j:n ja estradiolin konjugaatin valmistaminen 1 g estradiolia liuotettiin 65 ml:aan tetrahydrofuraania, jossa oli 5 g CaC03:a ja 5,0 g Piirittä lisättiin 30 minuutin ajan samalla sekoittaen -4°C:ssa ja seosta sekoitettiin edelleen 30 minuuttia -4°C:ssa, jonka jälkeen sekoittamista jatkettiin 20 minuuttia 0°C:ssa ja 3,5 tuntia 20°C:ssa reaktion tapahtumiseksi. Reaktioseos kaadettiin NaHCO^Jn vesipitoiseen liuokseen (0°C:ssa). Tuote uutettiin eetterillä ja puhdistettiin asetonilla (0,7 g puhdistettua tuotetta).

Puhdistetun tuotteen (bromidin) annettiin reagoida esimerkissä 1 valmistetun PGF^-Agin kanssa, jolloin saatiin seuraava konjugaatti: ?H O .

( PGF?f|E( suora sidos) ÖII 0H '

OH

IR spektri: (cm ^) 3400, 2920, 2850, 1735, 1600, 1570, 1500, 1440, 1378, 1350, 1280, 1215, 1140, 1080, 1040, 1020, 1000, 955, 918, 910, 870, 810, 780, 712.

Fysiologinen aktiviteetti mitattiin aikaisemmin kuvatulla tavalla käyttäen saatua konjugaattia. Tulos vahvisti, että konjugaatti oli sitoutunut estrogeeni-reseptoriin aiheuttaen kohdun-kouristuksen.

Esimerkki 3 PGE?:n ja progesteronin koniueaatti: 3,3 g 11-desoksikortikosteronia progesteronin johdannaisena liuotettiin sekoitettuun liuottimeen, jossa oli 200 ml vedetöntä THF:ää ja 10 ml vedetöntä pyridiiniä, ja liuosta pidettiin -5...

-7°C:ssa.

22 6881 1 ll-desoksikortisosteronin liuokseen lisättiin tipoittain liuosta, jossa oli 0,3 g o£-bromiasetyylibromidia 80 g:ssa CCl^:ä. Seosta sekoitettiin ja pidettiin huoneen lämpötilassa yhden yön.

Reaktion päätyttyä saostuma suodatettiin ja liuotin tislattiin pois suodoksesta ja jäännös kiteytettiin uudelleen eetteristä.

IR-spektrissä ei havaittu 21-asemessa olevaan OH-ryhmään perustuvaa absorptiota ja esteri-sidoksen tunnusomainen absorptio havaittiin 1735 cm ^:ssä.

Alkuaineanalyysin ja IR-spektrin tuloksista vahvistettiin, että ςΛ-bromiasetyyli-ryhmä oli liittynyt ll-desoksikortisosteronin 21-asemessa olevaan OH-ryhmään.

Saadun tuotteen annettiin reagoida esimerkissä 1 valmistetun PGE2~Ag:n kanssa, jolloin saatiin PGE2:n ja progesteronin konjugaatti (PGE2P).

UV-absorptiospektrissä havaittiin tunnusomainen konjugoi-dun karbonyyli-ryhmän absorptio 2^1 nm:ssä.

Fysiologinen aktiviteetti mitattiin aikaisemmin kuvatulla tavalla käyttäen saatua konjugaattia. Tulos vahvistaa, että konjugaatti oli sitoutunut estrogeeni-reseptoriin aiheuttaen kohdunkouristusta.

roEzP O ° ? /-, O i| Il il / ^.~^^^C-0-CHz-C-0-CHrC—

Vvr^ \J~\

OH OH H3C

O

Esimerkki *4

Estra-1,3,5(10)-trieeni-3-asetoksi-17-oksikarbonvvlir metyyli-9^,11,^, 15<^-triasetoks i-5 (cis )-13( trans) prostadienoaatin valmistaminen PGF^tn kalium- ja hopeasuola sekä estra-1,3,5(10)-tri-eeni-3-oli-17-bromiasetaattia valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti 23 6881 1 ja PG^2<JL:n h°Peasu°lan reaktio estra-1,3,5(10)-trieeni-3-oli-17-bromiasetaatin kanssa suoritettiin esimerkin 1 menetelmällä.

PGF^tn ja estradiolin konjugaatin asetylointi: 10 ml:n kartiopulloon laitettiin 0,0290 g PGF2o£:n ja estradiolin konjugaattia (PGFE) ja lisättiin 0,5 ml vedetöntä pyridiiniä sen liuottamiseksi, ja sen jälkeen lisättiin 0,15 ml etikkahapon anhydridiä ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yksi yö. Reaktion päätyttyä liuotin poistettiin 45°C:ssa alennetussa paineessa, jolloin saatiin 0,0351 g PGF2(jjn ja estradiolin asetyloitua konjugaattia (PGFE-4AC), joka on öljypitoinen tuote. Alkuaineanalyysillä ja IR-spektrillä vahvistettiin, että tuotteella oli seuraava rakenne.

OCOCH3 p O (PGFE-4AC) ÖCOCH, ' N V_/ -5 OCOCH3 r~i OCOCH3

Alkuaineanalyysi:

C H

Laskettu (%) 69.06 7,91 Löydetty (%) 68.8 8.0 IR spektri: (cm 2920, 2850, 1735, 1610, 1593, 1580, 1490, 1430, 1375, 1230, 1150, 1010, 960, 890, 865, 820, 793, 780, 750, 705, 676.

2" 6881 1

Esimerkki 5:

Estra-1,3,5(10)-trieeni-3-hydroksi-17-oksikarbonyylime-tyyli-9 Hot, 15«&-triasetoksi-5( cis )-13 (trans)-prostadienoaatin valmistaminen 0,1008 g PGF2^:a liuotettiin 1,0 ml:aan vedetöntä pyri-diiniä, jonka jälkeen lisättiin 0,3 ml etikkahapon anhydridiä ja seosta säilytettiin yksi yö. Reaktion päätyttyä pyridiini ja etikkahapon anhydridi poistettiin 40°C:ssa alennetussa paineessa ja jäännös pestiin vedellä ja öljypitoinen tuote erotettiin.

Sen jälkeen lisättiin 2 ml vettä ja 3 ml etanolia, jonka jälkeen 0,0185 g kaliumhydroksidia lisättiin reaktion tapahtumiseksi samalla jäähdyttäen vedellä tunnin ajan. Hopeanitraattiliuosta, joka oli valmistettu liuottamalla AgNO^ra 0,01515 g 2 mitään vettä, lisättiin reaktioseokseen reaktion jatkamiseksi edelleen tunnilla pimeässä, jolloin saatiin 0,1140 g asetyloidun PGF2ö(j:n asetyloidun hopeasuolaa.

0,11 g asetyloidun PGF^in hopeasuolaa liuotettiin 2 mitään DMSOtta, jonka jälkeen lisättiin 0,10 g estra-1,3,5(10)- 3-oli-17-bromiasetaattia ja annettiin reagoida 48 tuntia pimeässä. Reaktion päätyttyä AgBr poistettiin suodattamalla G-4 suodattimen läpi. Suodos sekoitettiin 20 ml tn kylmää vettä kanssa ja saatu öljypitoinen tuote erotettiin sentrifugaalisella erottimella.

Tuote kromatografoitiin 42 g silikageelillä sekoitetun liuottimen kanssa (sykloheksaani, etyyliasetaatti ja etanoli tilavuus suhteessa 45 i 45110). Puhdistettu tuote oli öljy.

Alkuaineanalyysillä ja IR-spektrillä vahvistettiin, että tuotteella on seuraava kaava.

08811 OCOCH, Λ (PGFE-3AC) :-5 o o /V.''\e===^\^s' c-O-CHy—C—O-/ Ιΐ3°/ öcocH-i : \ / jOCOCH3 >γΗ

OH

Alkuaine analyysi:

C H

Laskettu (%) 69.70 8.08 Löydetty (%) 68.90 8.0 IR spektri: (cm 3400, 2920, 2850, 1735, 1610, 1580, 1500, 1440, 1370, 1230, 1145, 1080, 1020, 960, 915, 865, 812, 790, 780, 725 26 6881 1

Esimerkki 6 0,1 g (2,17 x 10 4 moolia) PGF2o^ . Ag-suolaa liuotettiin 1 ml:aan vedetöntä DMS0:ta ja 0,13 g (2,60 x 10-t+ moolia) 3-bentsoyylioksi-l,3,5(10)-trieeni- 17/5 -monobromiasetaattia lisättiin pimeässä ja annettiin reagoida huoneen lämpötilassa.

Reaktion päätyttyä AgBr erotettiin ja suodos jäähdytettiin ja sekoitettiin veden kanssa ja tuote erotettiin öljypitoise-na aineena pohjalle sentrifugaalisella erottamisella.

Öljypitoinen tuote kuivattiin tyhjössä kuivauslaittees-sa ja liuotettiin sekoitettuun liuottimeen, jossa oli etyyliasetaattia, sykloheksaania ja etanolia (45:45:10) ja liuos johdettiin silikageeli-kolonnin läpi, jolloin saatiin 0,12 g PGFE-BE:ta (saanto 71,8 %) .

PGFE-BA

Oli O O

lt II / . c-o-ch9-c-o-( ' 1-I3C-V-J_ ότι OH ' \ /

V

C II o o-co-f) 47 62 9 V=/ molekyylipaino 770

Alkuaineanalyysi: q H

Laskettu (%) 73.25 8.05 Löydetty (%) 73.01 7.98 IR spektri: (cm *") 3400, 2920, 2840, 1735, 1600, 1580, 1490, 1450, 1418, 1380, 1350, 1260, 1208, 1170, 1145, 1078. 1060, 1020, 1000, 960, 910, 890, 874, 812, 796, 780, 698, 680, 610 27 6881 1

Esimerkki 7 21,0 mg (2,73 x 10 ^ moolia) PGFE-BA:ta liuotettiin 0,5 ml:aan vedetöntä pyridiiniä ja lisättiin 0,15 ml etikkahapon anhydridiä ja seos jäähdytettiin jäällä reaktion tapahtumiseksi ja reaktioseos säilytettiin yhden yön. Reaktion päätyttyä liuotin tislattiin pois tyhjiössä 40°C:ssa ja jäännös liuotettiin sekoitettuun liuottimeen, jossa oli etyyliasetaattia ja sykloheksaa-nia (50:30 tilavuusosaa) ja liuos johdettiin läpi silikageeli-kolonnin, jolloin saatiin 23,5 mg PGFE-3AC-BA:ta (saanto 96,31%).

PGFE-3AC-BA

OCOCIIo

; d O O

c-o-cii,-c-o-f~ OCOCH3öOCCH3 M^) o-co-^y

Alkuaineanalyysi:

C H

Laskettu (%) 71.0 7.59 Löydetty (%) 71.2 7.62 IR spektri: (cm"^) 2920, 2850, 1735, 1600, 1580, 1490, 1450, 1425, 1370, 1240, 1170, 1145, 1078, 1060, 965, 915, 890, 705, 680.

28 6881 1

Esimerkki 8 0,1 g (2,17 x 10 4 moolia) PGF2^. Ag-suolaa liuotettiin 1 ml:aan vedetöntä DMS0:ta ja sen jälkeen lisättiin 0,114 g (2,6 x 10 4 moolia) 3-propionyylioksi-l,3,5(10)-trieeni-17 monoasetaattia pimeässä ja annettiin reagoida huoneen lämpötilassa 3 päivää. Reaktion päätyttyä AgBr erotettiin ja suodos sekoitettiin veden kanssa ja tuote erotettiin öljypitoisena aineena . huoneen lämpötilassa sentrifugaalisella erottamisella.

Öljypitoinen tuote liuotettiin sekoitettuun liuottimeen, jossa oli etyyliasetaattia, sykloheksaania ja etanolia (45:45:10 tilavuusosaa) ja liuos johdettiin silikageeli-kolonnin läpi, jolloin saatiin öljypitoinen tuote, joka vahvistettiin olevan PGFE-PR alkuaineanalyysillä ja IR-spektrillä.

PGFE-PR

OH O O

Os^cc"°'CH2"'°H^fL

014 OH VY

ococ2h5 molekyylipaino 722 Alkuaineanalyysi:

C H

Laskettu (%) 71.47 8.59 Löydetty (%) 71.30 8.55 IR-spektri: (cm ^) 3400, 2920, 2840, 1735, 1600, 1590, 1580, 1490, 1430, 1373, 1230, 1150, 1010, 960, 890, 820, 793, 780, 750 29 6 8 81 1

Esimerkki 9 -4 0,145 g (2,60 x 10 moolia) ll-deoksikortikosteroni-21-bromiasetaattia ja 0,1 g (2,17 x 10 moolia) PGF^· Ag-suolaa annettiin reagoida 1 ml:ssa vedetöntä DMS0:ta pimeässä 3 päivän ajan, jolloin saatiin 1,3 g öljypitoista tuotetta, joka vahvistettiin PGF-P:ksi alkuaineanalyysillä ja IR-spektrillä.

PGFP

PH O O O

1 11 11 1' /—I

C-O-CH-sCO-CHo-C —(

0,1 0H

b C43,I64°9

Alkuaineanalyysi:

C H

Laskettu (%) 71.27 8.84 Löydetty (%) 71.50 8.62 IR-spektri: (cm ^) 3420, 2950, 2920, 2850, 1750, 1725, 1665, 1612, 1450, 1420, 1385, 1320, 1270, 1230, 1190, 1145, 1080, 1050, 965, 940, 910, 860, 780, 760, 720, 680

Esimerkin 7 mukaisen menetelmän mukaan käyttäen PGF-P:tä lähtöaineena suoritettiin osittainen asetylointi, jolloin saatiin öljypitoinen tuote, joka vahvistettiin PGF-P-3AC:ksi alkuaine-analyysillä ja IR-spektrillä.

30 6 881 1

PGFP-3AC

OCOCH3 O o o i " 11 11 / C-O-CH^-C- 0-CH9-C -{ ococHo: '—( )

3OCOCH3 H3C/A

Alkuaineanalyysi: ^

C H

Laskettu (%) 68.77 8.77 Löydetty (%) 69.00 8.52 IR-spektri: (cm 3000, 2950, 2920, 1750, 1735, 1705, 1610, 1580, 1430, 1405, 1385, 1368, 1320, 1270, 1230, 1190, 1145, 1080, 1050, 965, 940, 910, 860, 780, 760, 720, 680

II

6881 1 31

Esimerkki 10 0,1 g (2,17 x 10-l+ moolia) PGE2Ag-suolaa liuotettiin 1 mitään vedetöntä DMSOtta, jonka jälkeen lisättiin 0,13 g 3-bentsoyylioksi-l ,3,5( 10 )-trieeni-17yi!> -monobromiasetaattia pimeässä ja annettiin reagoida huoneen lämpötilassa 3 päivää. Reaktion päätyttyä tuote puhdistettiin, jolloin saatiin 0,12 g väritöntä öljypitoista tuotetta, joka vahvistettiin PGE^E-BAiksi alkuaineanalyysillä ja IR-spektrillä.

PGE2E-BA

? O o

Jl ^ " il / C-O-CH0-C-O-( OH ÖII '—( y (y C47H61°9 OCO{3 molekyylipaino 768 Alkuaineanalyysi:

C H

Laskettu (%) 73.43 7.81 Löydetty (%) 73.12 7.89 IR-spektri: (cm 3420, 3000, 2950, 2920, 2850, 1735, 1705, 1585, 1490, 1450, 1418, 1380, 1368, 1350, 1235, 1145, 1090, 1018, 965, 890, 780, 720, 700, 680

Esimerkin 7 mukaisen menetelmän mukaan, paitsi että käytetään lähtöaineena PGE2E-BA:ta, suoritettiin osittainen asetylointi huoneenlämpötilassa, jolloin saatiin öljypitoinen tuote, joka vahvistettiin PGE2E-2AC-BA:ksi alkuaineanalyysillä ja IR-spektrillä.

6881 1 32

PGE2E-2AC-BA

o o o ^ " Il / C-O-CH0-C-O-< OCOCIfc OCOCH3 M3)

(~S

ocof} C51H64°11 molekyylipaino 852 Alkuaineanalyysi:

C H

LasKettu (%) 71.83 7.51 Löydetty (%) 72.03 7.59 IR-spektri: (cm *") 2950, 2920, 2850, 1735, 1705, 1583, 1490, 1448, 1415, 1381, 1368, 1350, 1235, 1143, 1090, 1020, 970, 890, 780, 720, 698, 680 33 6 8 81 1

Esimerkki 11 0,1 g PGE^Ag-suolaa liuotettiin 1 ml:aan vedetöntä DMS0:ta, jonka jälkeen lisättiin 0,13 g 3-bentsoyylioksi-l,3,5(10)-trieeni-17/3-monobromiasetaattia pimeässä ja annettiin reagoida huoneen lämpötilassa 3 päivää. Reaktion päätyttyä tuote puhdistettiin, jolloin saatiin 0,12 g väritöntä tuotetta, joka vahvistettiin PGE^E-BA:ksi alkuaineanalyysillä ja IR-spektrillä.

o o O

λ /C-O-CHo -C-O-( — -¾ OH OH \—< 9 o-co-f) C47H62°9 molekyylipaino 770

Alkuaineanalyysi: ^

Laskettu (%) 73.24 8.05 Löydetty (%) 73.12 7.89 IR-spektri: (cm 3420, 3000, 2950, 2920, 2850, 1735, 1705, 1585, 1490, 1450, 1418, 1380, 1368, 1350, 1235, 1145, 1090, 1018, 965, 890, 780, 720, 700, 680

Esimerkissä 7 esitetyn menetelmän mukaisesti, paitsi käyttäen PGE^E-BA:ta lähtöaineena, suoritettiin osittainen asylointi huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin öljypitoinen tuote, joka vahvistettiin yhdisteeksi PGE-^E-2AC-BA alkuaineanalyysillä ja IR-spektrillä.

34 6 8 81 1

PGEjE-ZAC-BA

O O

? n H /—

Ovvw ·4ν 0coch„ ' y y ococh3 o-co-f) C51H66°1 1 molekyylipaino 854 Alkuaineanalyys i:

C H

Laskettu (%) 71.66 7.73 Löydetty (%) 72.03 7.59 IR-spektri: (cm”^) 2950, 2920, 2850, 1735, 1705, 1583, 1490, 1448, 1415, 1381, 1368, 1350, 1235, 1143, 1090, 1020, 970, 890, 780, 720, 698, 680

Claims

35 6881 1 Patenttivaatimus Menetelmä uuden, terapeuttisesti käyttökelpoisen prosta-glandiini-steroidihormooni-konjugaatin valmistamiseksi, jolla on kaava (I) tai (I1) f 0 0 / | t.0-fCH2) n ’C-^bt I i OR 0R Z 0 0 C^-tCH^ CJ^St (I ’) I J OR OR joissa R on vetyatomi tai asetyyliryhmä; Z on......'"Ί OR tai =0; n on 1 tai 2; m on 0, 1 tai 2, ja St on kemiallinen ryhmä, jolla on kaava (II), (III), (IV) tai (V) Γ\ -OCH -C -\ 'q-s *Q-s νγ ,iin Q OR1 ° H0_ 'T~ -0 —\ H.C_\ VJ ' o ^ OR1 36 6881 1 joissa R*· on vetyatomi tai asetyyli-, propionyyli- tai bentsoyy-liryhmä, tunnettu siitä, että protaglandiini tai asetyloi-tu prostaglandiini, jolla on kaava (a) tai (b) Z 0 -^^C-OH (a) | ( OR OR * s A C-OH (h) t I , OR OR joissa R ja Z merkitsevät samaa kuin kaavassa (I), saatetaan reagoimaan hydroksyyliryhmän kanssa, joka on 17- tai 21-asemassa steroidihormonissa, jolla on kaava (II'), (III'), (IV) tai (V) 0 H-0 _/H H-OCH^A- H3C H3C Ύ, A (II1) ^ ( (III') ^ { OR1 0 H0_ H-°Y] H-0-(^ H3CM H3C"M AA ,iv'W ,
0. OR 37 6881 1 joissa merkitsee samaa kuin kaavoissa (II) ja (IV), suoralla reaktiolla tai sitomalla sidosaineella, jolla on kaava X(CH_) COOH tai X(CH„) COX 2 n 2 n joissa n on 1 tai 2 ja X on halogeeniatomi. 6881 1 38 Förfarande för framställning av ett nytt, terapeutiskt an-vändbart prostaglandin-steroidhormon-konjugat, med formeln (I) eller (I*) L oo OR OR z 0 0 Xj ..^CÄKCH^ &-KSt <:1 ·» I i • I OR OR väri R är en väteatom eller acetylgrupp; Z är ·>-'»ίιι| OR eller =0; n är 1 eller 2; ra är 0, 1 eller 2, och St är en keraisk grupp med formeln (II), (III), (IV) eller (V) /— 0 , n / » / u \ -OCH„-C—( H3cVA 2 H3A— Ui) / Λ M, ««» Q OR1 ° y— H0 v-, H3cVi "3γ"Ι ,.¾ (IV) \ ζ \-Χ λ o OR1 li 6881 1 39 väri R är en väteatom eller en acetyl-, propionyl- eller bensoyl-grupp, kännetecknat därav, att ett prostaglandin eller ett acetylerat prostaglandin med formeln (a) eller (b) Z ?, Λ- - ' C-OH (a) ) t OR OR z ° i ^ ^ C-OH (b) 1 * OR OR väri R och Z betecknar sarana som i formeln (I), omsätts med hvdr-oxylgrupp i 17- eller 21-ställning av ett steroidhormon som har (II') f (II'), (IV) eller (V) O /- H-θΧΠ < )~\ \-(Λ W H3t( (hm 4 /) \__y x·-—( (in') b OR HO^. H-0 —/ | H-°^I h3C^ 1 H3Cd7 H^V / , /\ \ / V _n ' { (V) " \ 1 (IV) O OR