FI65448C - Foerfarande foer framstaellning av bakteriostatiskt aktivt aemne - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av bakteriostatiskt aktivt aemne Download PDFInfo
- Publication number
- FI65448C FI65448C FI793195A FI793195A FI65448C FI 65448 C FI65448 C FI 65448C FI 793195 A FI793195 A FI 793195A FI 793195 A FI793195 A FI 793195A FI 65448 C FI65448 C FI 65448C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- hours
- ncib
- culture
- biomass
- filaments
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/10—General cosmetic use
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
Description
65448 erilaisilla lähdevettä käyttävillä valutusmenetelmillä. Samanlaista menetelmää käytetään nykyään Thermes Nationaux d*Aix-les-Bains Ranskassa. Käytetty laite muodostuu pystysuorasta betoniseinästä, jonka yläosassa on kouru. Kuuma lähdevesi, joka on johdettu putkilinjalla hyvin lähellä sijaitsevista lähteistä, tulee kouruun ja valuu alas seinän sivuja. Baregiinihiutaleet, joiden suuruusluokka on noin 1 cm, kiinnittyvät betonin karkeisiin osiin. Kiinnittyneistä hiutaleista kasvaa gelatiinimainen baregiinikalvo, joka aika ajoin otetaan talteen hankaamalla seinää kovalla harjalla. Veden lämpötila ja paikka, johon tämä seinä on asennettu, on lähellä lähteen tulolämpötilaa, so. suuruusluokkaa 43 - 47°C. Tuotto on erittäin alhainen. Se on noin 5 g baregiinia kuiva-aineena per neliömetri per kuukausi. Lisäksi siihen vaikuttaa sääolosuhteista riippuen monien tekijöiden vaihtelut.
Baregiinia on tutkittu mikrobiologisesti ja biokemianisesti. Nämä tutkimukset ovat paljastaneet rikkivedyn ja rikkiä sisältävien yhdisteiden metabolian, mutta eivät ole selvittäneet baregiinien terapeuttisten ominaisuuksien alkuperää. Baregiinissa tunnistetuista monista mikro-organismeista mainitaan usein Begqiatoa. Kirjallisuudessa harvoin mainitut Begqiatoa1n eristeviljelmät eivät kuitenkaan ole koskaan tehdyt baregiinista vaan lietteistä ja käytetyistä vesistä. Lisäksi nämä eristeviljelmät ovat osoittautuneet työläiksi ja vaikeiksi, ja eristettyjen mikro-organismien viljelmän saannot ovat olleet hyvin huonot johtuen mm. niiden heikkoudesta ja erittäin suuresta vesipitoisuudesta. Luonteenomaisena voidaan pitää julkaistua arvoa, jonka mukaan mikro-organismin, joka oli valmistettu sekoittamatta 48 tunnin aikan 28°C:ssa, tuorepaino oli 1,2 g per litra viljelymediumia, joka sisälsi 2 g hiivauutetta, 0,1 g natriumasetaattia ja aktiivista katalaasia.
Oheisen keksinnön tavoitteena on mahdollistaa bakteriostaattiselta aktiivisuudeltaan baregiinin kaltaisen aineen taloudellinen valmistaminen teollisessa mitassa.
Oheisen keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, että yhtä tai useampaa Begqiatoa-tyyppistä mikro-organismia uusista kannoista NCIB 114 18 - NCIB 114 25 viljellään 5-36 tuntia lämpötilassa 20 - 50°C ja pH-arvossa 6-8 sekoittaen aerobisissa olosuhteissa vesipitoisessa ravintoväliaineessa, joka sisältää 1 - 4 g hiiva-uutetta, 0,1 - 0,3 g kalsiumkloridia ja 0,2 - 1 g natrium- tai 3 65448 ammoniumasetaattia per litra vettä ja otetaan talteen bakterio-staattisesti aktiivinen biomassa ja/tai kasvuväliaine.
Beggiatoa-tyyppisen mikro-organismin biomassan ia myös mediumin, jossa se on valmistettu, on havaittu olevan bakteriostaattisesti aktiivisia. Lisäksi on havaittu, että mikro-organismin rikkoontuminen helposti ei ole esteenä sen tehokkaalle viljelemiselle voimakkaasti sekoitetussa mediumissa, ja että se lisääntyy myös silloin, kun filamentit, jotka se muodostaa, katkeavat moniin paloihin. Ennen kasvatusliuoksen ymppäämistä on jopa edullista homogenisoida Begg iatoa-tyyppisen mikro-organismin ymppi.
Ilmaisua "Beggiatoa-tyyppinen mikro-organismi" käytetään tarkoituksellisesti koko selityksessä ilmaisun "Beggiatoa-suvun mikro-organismi" asemesta. Beggiatoa-suku kuuluu "liukubakteereiden" luokkaan, Cytophagales-lahkoon, Beggiatoaceae-heimoon (vrt. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8. painos, Waverly Press, Baltimore, U.S.A., 1974, sivut 112-114. Kuten tästä alan teoksesta voidaan havaita, tämän suvun mikro-organismien luokittelu on suureksi osaksi vahvistamatonta luotettavan informaation puutteen vuoksi. Kyseessä olevien mikro-organismien luokittelun epävarmuudesta johtuen ei ole sopivaa käyttää niin täsmällistä tieteellistä termiä kuin "suku". Oheisen keksinnön yhteydessä ilmaisulla "Beggiatoa-tyyppinen mikro-organismi" tarkoitetaan siten filamenttimaisia bakteereita, jotka ovat tyypillisiä rikkipitoisille maaperille ja vesille ja joiden välittömät filamentit liikkuvat liukumalla ja jotka ovat muodostuneet soluket-juista, kuten Beggiatoa-sukuun luokiteltuja bakteereita.
Begg iatoa-tyyppinen mikro-organismi saadaan parhaiten eristämällä baregiinista. Tällaisen eristämisen on havaittu olevan mahdollista käyttämällä erästä tiettyä menettelytapaa. Lisäksi on havaittu, että saatuja kantoja voidaan viljellä ja että niillä on tehokas bakterio-staattinen aktiivisuus. Lopuksi on havaittu, että myös niiden säily-tysongelma voidaan tyydyttävästi ratkaista.
Kannan eristämiseksi baregiininäyte voidaan asettaa geloosia sisältävälle ravintomediumille ja inkuboida sitä 5-36 tuntia lämpötilassa 25 - 50°C. Tämän jälkeen eristetään vyöhyke, jossa Beg^iatoa-tyyppisen mikro-organismin filamentit ovat puhtaita, ja asetetaan geloosia sisältävälle ja ensimmäisen kanssa identtiselle ravintomediumille.
4 65448
Inkubointi, eristäminen ja viljeleminen edelleen voidaan toistaa kaksi tai kolme kertaa.
Tällä menetelmällä eristettiin kahdeksan kantaa, jotka tallennettiin 12.7.1978 NCIB-kokoelmaan (National Collection of Industrial Bacteria, Aberdeen, Skotlanti), ja joilla on annettu numerot NCIB 114 18 - 114 25. Oheisen keksinnön mukainen menetelmä voidaan siten toteuttaa käyttämällä esimerkiksi vähintään yhtä näistä kahdeksasta kannasta.
Eristämiseen käytetty geloosia ravintomedium sisältää parhaiten 1 - 4 g hiivauutetta ja 10 - 20 g agaria per litra vettä.
Vesipitoinen ravintomedium, jota parhaiten käytetään mikro-organismien viljelemiseen, sisältää 1 - 4 g hiivauutetta, 0,1 - 0,3 g kalsiumkloridia ja 0,2 - 1 g natrium- tai ammoniumasetaattia per litra vettä. Käytetty vesi on parhaiten kuuman lähteen rikkipitoista vettä.
Viljelmän suojelemiseksi mediumiin voidaan myös lisätä katalaasia, esimerkiksi 5-20 kansainvälistä yksikköä (IU) per ml. Mikro-organismia voidaan viljellä 5-36 tuntia lämpötilassa 20 - 50°C ja pH-arvossa 6-8. Sitä viljellään parhaiten 8-10 tuntia lämpötilassa 30 - 40°C ja neutraalissa pH-arvossa.
Oheisen keksinnön mukaisella menetelmällä saatua bakteriostaatti-sesti aktiivista ainetta voidaan käyttää sellaisenaan tai esimerkiksi iholle tarkoitetun kosmeettisen tuotteen ainesosana. Biomassaa voidaan säilyttää kuivatussa muodossa. Parhaiten se kuivataan pakkaskuivaamalla helpon rikkoutuvuutensa ja alhaisen kuiva-ainepitoisuutensa vuoksi .
Oheinen keksitö voidaan paremmin ymmärtää seuraavien havainnollistamiseksi annettujen esimerkkien avulla. Seuraavissa esimerkeissä käytetään systemaattisesti "Beggiatoa" nimeä ilmaisun "Beggiatoa-tyyppinen mikro-organismi" asemesta kuitenkin ilmaisun kanssa synonyymisesti.
65448 5
Esimerkki 1 (Kantojen eristäminen)
Thermes Nationaux d'Aix-les-Bains'stä otettu tuore baregiinihiutale asetetaan petrimaljan keskelle, joka sisältää 20 ml seuraavan reseptin mukaisesti valmistettua geloosimediumia:
Hiivauute (Difco) 2 g
Agar (Bacto-Difico) 15 g
Kuuman lähteen suodatettu vesi
Aix'sta 100 ml
Tislattu vesi 900 ml
Malja asetetaan ylösalaisin 30-asteiseen kaappiin 30 tunniksi. Sen jälkeen se tutkitaan makroskooppisesti (pieni suurennos) Beqqiatoa1 lie luonteenomaisten spiraalirakenteiden havaitsemiseksi. Nämä rakenteet johtuvat näiden mikro-organismien kyvystä liikkua liukumalla. Eräät näistä voidaan nähdä jopa paljaalla silmällä. Mikroskooppisen tutkimuksen avulla havaitaan myös vyöhykkeet, joissa Beggiatoa-filamen-tit näyttävät olevan puhtaita. Yksi näistä vyöhykkeistä eristetään käyttämällä steriiliä spaattelia ja asetetaan uudelle agar-levylle, jolla on sama koostumus kuin ensimmäisellä. Tällöin on huolellisesti asetettava Beggiatoa-filamentteja sisältävä pinta uuden agar-levyn puhtaalle pinnalle. Sen jälkeen maljaa inkuboidaan uudelleen 24 tuntia 30°C:ssa. Eristäminen, jatkoviljely ja inkubointi toistetaan kaksi kertaa. Näin saadaan Beqqiatoa1n puhdas viljelmä.
Esimerkki 2 (Kantojen säilyttäminen)
Esimerkissä 1 kuvatulla tavalla eristetään 10 kantaa. Ne eroavat toisistaan filamenttiensa halkaisijan, liukumisnopeuksiensa ja agarilla muodostuvien pesäkkeiden muotojensa puolesta. Niitä voidaan onnistuneesti säilyttää kolmella eri tavalla riippuen siitä, tarvitaanko lyhytaikaista, pitkähköä tai pitkää säilytystä.
2.1) Lyhytaikainen säilytys: Agar-levy säilytetään jääkaapissa 4°C:ssa, jolloin on huolehdittava, että petrimalja on tiiviisti suljettu. Kanta siirretään joka 10. päivä, koska agarilla on taipumus kuivua.
2.2) Pitkähkö säilytys: Valmistetaan puolittain nestemäinen medium, jonka koostumus on: 65448
Hiivauute 2 g
CaCl-2 0,1 g
Natriumasetaatti 0,5 g
Agar 2 g
Suodatettu kuuman lähteen vesi 1000 ml
Mediumin steriloinnin jälkeen siihen lisätään sienikatalaasia 10 IU/ml. Katalaasiliuos steriloidaan etukäteen suodattamalla kylmänä Millipore-suodattimen läpi, jonka huokoskoko on 0,22 u halkaisijaltaan.
Pieni pala Beggiatoa sisältävää agaria laitetaan koeputkeen, joka sisältää 10 ml mediumia, ja inkuboidaan 30°C:ssa. Beggiatoa kasvaa koeputken yläosassa. Putkea säilytetään 3 viikkoa 30°C:ssa. Sen jälkeen viljelmää siirretään 0,1 ml per koeputki.
2.3.) Pitkäaikainen säilytys: Esimerkissä 3 kuvatulla tavalla valmistetaan 24 tuntia vanha viljelmä sekoitetussa mediumissa. Sentrifu-goinnin jälkeen sakka pestään steriilillä Ringer'in liuoksella.
Sakka jäädytetään ja pakkaskuivataan. Sitä säilytetään useita kuukausia jääkaapissa tiiviisti suljetussa astiassa. Filamentin palaset pystyvät kehittymään dehydratoinnin jälkeen.
Esimerkki 3 (Kantojen viljeleminen) 3.1. Ymppi
Esimerkissä 1 kuvatulla tavalla saadusta levystä leikataan pieni 3 agar-pala (5 mm ). Se laitetaan 500 ml:n pulloon, joka sisältää 100 ml seuraavaa mediumia:
Hiivauute 4 g
Kalsiumkloridi 0,2 g
Ammoniumasetaatti 1 g
Suodatettu kuuman 1 ahteen vesi 1000 ml 7 6 5 4 4 8 Tämän mediumin pH-arvo on 6,6. Pullo laitetaan pyörivään sekoitus-laitteeseen, jonka pyörimisnopeus on 150 kierr./min. ja pyörimissäde I, 25 cm ja johon se jätetään 16 tunniksi 30°C:een. Saatu viljelmä homogenisoidaan 15 - 30 sekuntia Sorvali Omnimixer-sekoittimessa steriileissä olosuhteissa. Homogenisoitu viljelmä muodostaa ympin.
3.2. Viljely 5 ml edellä saatua ymppiä laitetaan 500 ml pulloon, joka sisältää 100 ml samaa mediumia kuin mitä käytettiin ympin valmistuksessa. Pulloa inkuboidaan 24 tuntia 30°C:ssa pyörivässä sekoitus laitteessa. Saadaan 0,8 g Beggiatoa kuiva-aineena per litra viljelmää. Toistamalla toimenpide eri kannoilla ja muuttamalla olosuhteita annetuissa rajoissa saadaan 12,5 - 2 g kuivaa Beggiatoa per litra viljelmää.
3.3. Kasvun mittaaminen
Bakteeriviljelmillä käytettyä tavanomaista nefelometria-menetelmää ei voida käyttää Beggiatoa'11a tämän hiutaleimaisen kasvun vuoksi, vaan menetelmää on tässä tapauksessa sovellettava. Viljelynäytteet otetaan joka toinen tunti ja homogenisoidaan Sorvali Omnimixer-sekoi ttimella . Spektrofotometrilla määritetään niiden optinen tiheys aallonpituudella 600 nm. Homogeniositu näyte sedimentoituu vain hitaasti, joten siitä saadaan luotettava lukema. Kasvua voidaan siten seurata suoraan solujen lukumäärän avulla.
3.4. Kuivapainon määrittäminen
Tavanomainen kuivaus uunissa ei anna Beggiatoa'11a toistettavia tuloksia. Tämä johtuu luultavasti sen erittäin suuresta vesipitoisuudesta. Tästä syystä toistettavien tulosten saamiseksi pakkas-kuivataan kulloinkin vähintään 400 ml viljelmää.
3.5. Bakteriostaattisen aktiivisuuden määrittäminen
Public Health Laboratory Service Comittee'in kehittämä bakteriostaat-tisen aktiivisuuden tavanomainen arviointimenetelmä, the British Med.
J. 408 (1965), ei anna Beggiatoa1 n erityistapauksessa tyydyttäviä 8 6 5 4 4 8 tuloksia, koska testi suoritetaan koeputkissa. Koska Beggiatoa on ehdottoman aerobinen, koeputkessa saatavissa olevan hapen konsentraa-tio ei ole riittävä. Menetelmää sovelletaan siten niin, että hapen siirtoa lisätään käyttämällä sekoitettuja pulloja.
50 ml pulloista, joista kukin sisältää 18 ml ravintoliuosta (Nutrient Broth Difco), valmistetaan kolme sarjaa. Kukin ensimmäisen ja toisen sarjan pullo siirrostetaan 0,4 ml:11a patogeenisen kannan 24 tuntia vanhaa viljelmää. Käytetyt kolme patogeenistä kantaa ovat Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Escherichia coli ATCC 11755 ja Staphylococcus aureus ATCC 12600.
Bakteriostaattisesta tuotteesta valmistetaan näytteet sentrifugoi-malla viljelmä, joka on saatu esimerkissä 3.2. kuvatulla tavalla kasvatusajan ollessa kuitenkin vain 8 tuntia. Sentrifugoitu biomassa homogenisoidaan ja suspendoidaan uudelleen fysiologiseen liuokseen, jonka tilavuus on yhtä suuri kuin sentrifugoinnin jälkeen saadun yläfaasin tilavuus. Sekä biomassaa sisältävä fysiologinen liuos että yläfaasi jaetaan kahden ml näytteisiin.
2 ml homogenisoitua biomassaa sisältävää fysiologista liuosta lisätään ensimmäisen sarjan pulloihin. Toisen sarjan pulloihin lisätään pelkästään 2 ml fysiologista liuosta. Kolmannen sarjan pulloihin, joita ei ole siirrostettu patogeenillä, lisätään 2 ml fysiologista liuosta, joka sisältää homogenisoitua biomassaa.
Pulloja inkuboidaan 37°C:ssa pyörivässä sekoituslaitteessa. 16 tunnin kuluttua mitataan niiden optinen tiheys aallonpituudella 600 nm. Parametrit A, B ja C tarkoittavat vastaavien ensimmäisen, toisen ja kolmannen sarjan pullojen optisten tiheyksien mittaustuloksia.
Ero A-C vähennetään B:stä ja jaetaan sen jälkeen B:llä ja kerrotaan 100:11a, jolloin saadaan biomassan bakteriostaattinen aktiivisuus inhibitio-crosenttina.
Yläfaasin bakteriostaattinen aktiivisuus määritetään samalla tavoin lisäämällä ensimmäisen ja toisen sarjan pulloihin 2 ml yläfaasia sen sijaan, että lisättäisiin 2 ml homogenisoitua biomassaa sisältävää fysiologista liuosta.
9 65448
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa Taulukko:
Patogeeninen Biomassa aktiivisuus Yläfaasin aktiivisuus agenssi_(inhibitio-%)_(inhibitio-%)_ P. aeruginosa 70 41 S. auerus 100 45 E. coli 70 11
Esimerkki 4 (vertailu)
Luonnon baregiinin bakteriostaattinen aktiivisuus määritetään vertailun vuoksi esimerkissä 3.5. kuvatulla tavalla. 16 tunnin inku-boinnin jälkeen P. aeruginosa, S. auerus ja E. coli bakteereille saadaan vastaaviksi inhibitio-prosenteiksi 100, 83 ja 96. Ts. oheisen keksinnön mukaisen biomassa bakteriostaattinen aktiivisuus on lähes yhtä suuri kuin baregiinin. Tämä on merkittävä tulos ottaen huomioon, että oheisen keksinnön mukaista biomassaa voidaan valmistaa teollisesti suurella saannolla, kun taas baregiinia voidaan saada ainoastaan hitaasti ja hyvin pieninä määrinä. Keksinnön mukaisen supernatantin aktiivisuus on myös mielenkiintoinen, vaikka se onkin alhaisempi.
Esimerkki 5 (NCIB-kannat)
Esimerkissä 1 kuvatulla tavalla eristettiin 8 kantaa. Nämä 8 kantaa talletettiin 12.7.1978 NCIB-kokoelmaan (National Collection of Industrial Bacteria, Aberdeen, Skotlanti), jolloin ne, kuten jo mainittiin, saivat numerot NCIB 114 18 - 114 25. Nämä kannat voidaan karakterisoida niiden kasvuominaisuuksien, morfologian viljeltäessä W 65448 agarilla ja nestemäisessä mediumissa ja niiden hakteriostaattisen aktiivisuuden perusteella.
Seuraavassa taulukossa on esitetty viljelmien optiset tiheydet 5, 10 ja 24 tunnin kuluttua, kun kutakin näitä kantoja kasvatettiin esimerkissä 3.2. kuvatulla tavalla. Taulukossa on myös annettu 24 tunnin kuluttua saadut biomassat ja biomassojen bakteriostaattinen aktiivisuus 8 tunnin viljelyn jälkeen mainitun kolmen patogeenisen kannan P. aeruginosa, S. auerus ja E, coli suhteen. Sen jälkeen kullekin kannalle on annettu erikseen morfologiset ominaisuudet.
Kanta Optinen tiheys Biomassa (g kuiva- NCIB n:o 5 tunnin 10 tunnin 24 tunnin ainetta/1) _kuluttua kuluttua_kuluttua__ 114 18_0,237_0,713_0,583_0,91_ 114 19_0,352_0,621_0,514_0,95_ 114 20_0,147_0,447_0,709_0,95_ 114 21_0,160_0,402_0,646_0,95_ 114 22_0,289_0,364_0,305_0,75_ 114 23_0,360_0,496_0,378_0,69_ 114 24_0,217_0,737_0.587_0,59_ 114 25_0,395_0,981_0,383_1,11_ 11
Taulukko (jatkoa) ö5448
___ I
Kanta Aktiivisuus NCIB n:o (inhibitio-%) P.aeruginosa S. aureus E. coli 114 18 100 76 100 114 19 100 96 74 114 20 100 96 44 114 21 100 98 100 114 22 68 89 84 114 23 73 87 25 114 24 57 80 27 114 25 100 91 90 12 65448
Morfologiat NCIB 114 18:
Agar ilia: Muodostaa suuria erillisiä pesäkkeitä, joiden halkaisija on 8 - 15 mm ja joissa on valkoinen keskus ja läpikuultavat reunat. Mikroskooppinen tutkimus (x 100): Pesäke muodostuu selvästi näkyvistä, tiiviskierteisistä spiraaleista.
Nesteviljelmässä: Homogeeninen viljelmä. Mikroskoopinen tutkimus (x 400): Pitkiä filamentteja, koko 80 x 1,8 μ, jotka välistä muodostuneet lyhyistä, selvistä basilleista. Ei kasaantumista. Erittäin vähän heijastavia sulkeumia.
NCIB 114 19:
Aqarillat Muodostaa valkoisia erillisiä pesäkkeitä, joiden halkaisija on 4 - 8 mm ja joilla on epämääräiset reunat. Pesäkkeen keskiosasta ulottuu säteettäisesti tähden muotoisena paksuna kuituja, jotka eivät kuitenkaan ulotu reunoille asti. Mikroskooppinen tutkimus (x 100): Pesäkkeen reunat muodostuvat tiiviskierteisistä fila-menteista.
Nestemäisessä viljelmässä: Homogeeninen viljelmä. Mikroskooppinen tutkimus (x 400): Erittäin lyhyitä erillisiä filamentteja, koko 3,6 x 0,9 μ, jotka erittäin selvät kapenemat jakavat osiin.
Ei heijastavia sulkeutumia. Muodostaa kasautumia.
NCIB 114 20
Agarilla: Muodostaa litteitä, läpikuultamattomia erillisiä pesäkkeitä, joiden halkaisija on 2 - 5 mm ja joilla on rimpsumaiset reunat. Mikroskooppinen tutkimus (x 100): Pesäkkeet koostuvat filamenttipaloista, jotka muodostavat huonosti kehittyneitä spiraaleja.
13 65448
Nestemäisessä viljelmässä: Homogeeninen viljemä. Mikroskooppinen tutkimus (x 400) : ei filamentteja. Pitkiä basilleja, joiden koko on 9 x 1,4 μ ja jotka sisältävät muutamia heijastavia sulkeumia.
NCIB 114 21:
Agarillat Muodostaa erillisiä pesäkkeitä, joiden halkaisija on 4 - 7 mm ja joilla on hyvin samankaltainen raja kuin kannalla NCIB 114 19, mutta valkoisempi. Pesäkkeiden reunat ovat läpikuultavia. Mikroskooppinen tutkimus (x 100): Ei näkyviä spiraaleja.
Nestemäisessä viljelmässä: Homogeeninen viljelmä. Mikroskooppinen tutkimus (x 400)t Kuva samanlainen kuin kannalla NCIB 114 20.
Ei filamentteja, pitkiä basilleja, joiden koko on 18 x 1,4 μ ja jotka sisältävät muutamia heijastavia sulkeumia. Ei kasautumia.
NCIB 114 22:
Aqarilla: Ei muodosta koskaan erillisiä pesäkkeitä. Peittää koko pinnan läpikuultavilla mykoidisäikeillä. Mikroskooppinen tutkimus (x 100): Säikeet muodostuvat useista filamenteista.
Nestemäisessä viljelmässä: Homogeeninen viljelmä, jossa esiintyy muutamia pieniä kasautumia 6. tunnin jälkeen. Mikroskooppinen tutkimus (x 400): Pitkiä erillisiä filamentteja, joiden koko 90 x 1,4 - 1,9 p. Selvästi erottuvat kuroumat jakavat filamentit pitkiin yksiköihin.
Hyvin vähän heijastavia sulkeumia.
NCIB 114 23:
Aqarilla: Samanlainen kuin kanta NCIB 114 22. Ei erillisiä pesäkkeitä. Tiheitä ja selvemmin näkyviä mykoidinauhoja. Mikroskooppinen tutkimus (x 100): Selvempiä säikeitä, koska ne muodostuvat suuremmasta filamenttimäärästä.
65448
Nestemäisessä viljelmässä! Muodostaa suuria hiutaleita (kasautumia). Mikroskooppinen tutkimus (x 400) : Paljon lyhyempiä filamentteja kuin kannalla NCIB 114 22. Hyvin selvät kuroumat jatkavat filamentit paloiksi. Pituus 9 - 10 x 1,8 μ. Heijastavia sulkeumia tulee hyvin nopeasti näkyviin 5 tunnin kuluttua.
NCIB 114 24i
Aqarillat Samanlainen kuin kanta NCIB 114 23. Ei erillisiä pesäkkeitä. Mykoidisäikeitä. Mikroskooppinen tutkimus (x 100): Säikeet muodostuvat suuresta filamenttimäärästä.
Nestemäisessä viljelmässä: Muodostaa suuria hiutaleita (kasautumia). Mikroskooppinen tutkimus (x 400): Pitkiä filamentteja, joiden koko 140 x 1,8 μ ja jotka muodostavat pitkiä kimppuja. Ei näkyviä kurou-mia. Heijastavat sulkeumat kehittyvät myöhään (10 tunnin jälkeen).
NCIB 114 25ϊ
Agarilla; Muodostaa läpikuultamattomia erillisiä pesäkkeitä, halkaisija 2-6 mm. Mikroskooppinen tutkimus (x 100): Filamenttien muodostamat pesäkkeet koostuvat erillisistä soluista ja muodostavat tiiviitä spiraaleja.
Nestemäisessä viljelmässä: Homogeeninen viljelmä. Mikroskooppinen tutkimus (x 400): Lyhyitä homogeenisia filamentteja, koko 4 x 1,4 μ. Vähän heijastavia sulkeumia.
Claims (4)
1. Bakteriostaattisesti aktiivisen aineen valmistusmenetelmä, tunnettu siitä, että yhtä tai useampaa Beqqiatoa-tyyppistä mikro-organismia uusista kannoista NCIB 114 18 - NCIB 114 25 viljellään 5-36 tuntia lämpötilassa 20 - 50°C ja pH-arvossa 6-8 sekoittaen aerobisissa olosuhteissa vesipitoisessa ravinto-väliaineessa, joka sisältää 1 - 4 g hiivauutetta, 0,1 - 0,3 g kalsiumkloridia ja 0,2 - 1 g natrium- tai ammoniumasetaattia per litra vettä ja otetaan talteen bakteriostaattisesti aktiivinen biomassa ja/tai kasvuväliaine.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ennenkuin vesipitoinen ravintoväliaine siirrostetaan Beggiatoa-tyyppisen mikro-organismin ympillä, ymppi homogenisoidaan.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mikro-organismia kasvatetaan 8-10 tuntia lämpötilassa 30 - 40°C ja neutraalissa pH-arvossa.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että biomassa otetaan talteen ja pakkaskuiva-taan. 1 Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vesi on kuuman lähteen rikkipitoista vettä.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH1123078 | 1978-11-01 | ||
| CH1123078A CH634877A5 (fr) | 1978-11-01 | 1978-11-01 | Procede de preparation d'une substance presentant une activite bacteriostatique. |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI793195A FI793195A (fi) | 1980-05-02 |
| FI65448B FI65448B (fi) | 1984-01-31 |
| FI65448C true FI65448C (fi) | 1984-05-10 |
Family
ID=4371398
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI793195A FI65448C (fi) | 1978-11-01 | 1979-10-15 | Foerfarande foer framstaellning av bakteriostatiskt aktivt aemne |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4419449A (fi) |
| JP (1) | JPS56109589A (fi) |
| AT (1) | AT365234B (fi) |
| AU (1) | AU528629B2 (fi) |
| BE (1) | BE879360A (fi) |
| CA (1) | CA1123355A (fi) |
| CH (1) | CH634877A5 (fi) |
| CS (1) | CS213399B2 (fi) |
| DD (1) | DD147251A5 (fi) |
| DE (1) | DE2941310C2 (fi) |
| DK (1) | DK149781C (fi) |
| ES (1) | ES485566A1 (fi) |
| FI (1) | FI65448C (fi) |
| FR (1) | FR2440403A1 (fi) |
| GB (1) | GB2034687B (fi) |
| GR (1) | GR73004B (fi) |
| HK (1) | HK11384A (fi) |
| HU (1) | HU180030B (fi) |
| IL (1) | IL58451A (fi) |
| IT (1) | IT1164025B (fi) |
| LU (1) | LU81771A1 (fi) |
| MX (1) | MX5937E (fi) |
| MY (1) | MY8400264A (fi) |
| NL (1) | NL7908024A (fi) |
| SE (1) | SE443996B (fi) |
| SG (1) | SG34583G (fi) |
| SU (1) | SU1090263A3 (fi) |
| ZA (1) | ZA795509B (fi) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2693654B1 (fr) | 1992-07-20 | 1994-08-26 | Oreal | Médicament, notamment immunomodulateur, contenant des enveloppes ou fractions d'enveloppes de bactéries filamenteuses non photosynthétiques et non fructifiantes, et sa préparation. |
| FR2700172B1 (fr) * | 1992-07-20 | 1995-07-13 | Oreal | Procede de culture de bacteries filamenteuses non photosynthetiques et non fructifiantes. |
| FR2719768B1 (fr) * | 1994-05-10 | 1996-06-14 | Oreal | Utilisation d'extraits de bactéries filamenteuses comme agents cosmétiques contre le vieillissement cutané. |
| FR2721208B1 (fr) * | 1994-06-16 | 1996-08-02 | Oreal | Composition à usage topique contenant un antioxidant et un extrait bactérien, et utilisation de cette composition. |
| FR2746646B1 (fr) * | 1996-03-27 | 1998-05-15 | Oreal | Composition apaisante comprenant un extrait vegetal et un extrait bacterien |
| RU2188029C2 (ru) * | 1995-09-07 | 2002-08-27 | Л'Ореаль | Применение экстракта из нефотосинтезирующей нитчатой бактерии и содержащая его композиция |
| FR2746642B1 (fr) * | 1996-03-27 | 1998-05-15 | Oreal | Composition apaisante comprenant un extrait bacterien |
| FR2738485B1 (fr) * | 1995-09-07 | 1997-11-14 | Oreal | Utilisation d'au moins un extrait d'au moins une bacterie filamenteuse non photosynthetique en tant qu'antagoniste de substance p |
| FR2762782B1 (fr) | 1997-05-05 | 1999-06-11 | Oreal | Composition comprenant un milieu de culture de micro-organisme et utilisation |
| FR2879452B1 (fr) * | 2004-12-21 | 2007-07-06 | Oreal | Utilisation d'un extrait de bacterie filamenteuse non photosynthetique non fructifiante en tant qu'agent modulant l'adhesion de microorganismes cutanes |
| FR2915898B1 (fr) | 2007-05-10 | 2009-06-12 | Oreal | Procede de preparation d'actifs sur eau thermale et compositions les contenant |
| FR2918887B1 (fr) * | 2007-07-17 | 2009-08-28 | Oreal | Utilisation d'au moins un extrait bacterien cultive sur eau thermale pour la chute des cheveux |
| FR2918883B1 (fr) * | 2007-07-17 | 2010-01-15 | Oreal | Utilisation d'un extrait bacterien cultive sur une eau thermale pour le traitement des peaux seches |
| FR2918885B1 (fr) * | 2007-07-17 | 2009-08-28 | Oreal | Utilisation d'extrait de bacterie cultivee sur eau thermale pour diminuer les poches et/ou les cernes perioculaires |
| FR2918886B1 (fr) * | 2007-07-17 | 2010-01-08 | Oreal | Utilisation d'au moins un extrait bacterien cultive sur eau thermale pour le traitement des peaux, muqueuses et cuirs chevelus sensibles |
| FR2918884B1 (fr) * | 2007-07-17 | 2010-01-15 | Oreal | Utilisation d'extraits bacteriens cultives sur eau thermale comme agent anti-rougeur |
| GB2474041A (en) * | 2009-10-02 | 2011-04-06 | Omorovicza Cosmetics Ltd | Cosmetic composition comprising thermal mineral water |
| FR2965277B1 (fr) * | 2010-09-23 | 2012-10-19 | Thermanence Bio | Procede et installation de production en masse de plancton, dit thermal, sur au moins un support de culture dispose a l'interieur d'un bassin comportant au moins une entree et une sortie de fluide |
| ES2702293T3 (es) * | 2012-06-13 | 2019-02-28 | Eucodis Bioscience Gmbh | Catalasa en medios de cultivo |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1372620A (fr) * | 1963-08-07 | 1964-09-18 | Fr Des Cosmetiques Biolog Soc | Produit utilisable en cosmétologie, sa préparation et ses applications |
| FR1536017A (fr) * | 1967-09-06 | 1968-08-09 | Nouvelles compositions cosmétiques à base de dérivés planctoniques | |
| LU70601A1 (fi) * | 1974-07-24 | 1976-05-31 | ||
| FR2283223A1 (fr) * | 1974-08-26 | 1976-03-26 | Synthelabo | Procede de culture industrielle de sulfuraires en vue, notamment, d'une utilisation dermatologique et cosmetologique |
-
1978
- 1978-11-01 CH CH1123078A patent/CH634877A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1978-12-06 FR FR7834334A patent/FR2440403A1/fr active Granted
-
1979
- 1979-10-10 LU LU81771A patent/LU81771A1/fr unknown
- 1979-10-11 DE DE2941310A patent/DE2941310C2/de not_active Expired
- 1979-10-11 BE BE0/197605A patent/BE879360A/fr not_active IP Right Cessation
- 1979-10-12 DK DK431979A patent/DK149781C/da active
- 1979-10-12 AT AT0667579A patent/AT365234B/de not_active IP Right Cessation
- 1979-10-15 SE SE7908516A patent/SE443996B/sv not_active IP Right Cessation
- 1979-10-15 FI FI793195A patent/FI65448C/fi not_active IP Right Cessation
- 1979-10-15 IL IL58451A patent/IL58451A/xx not_active IP Right Cessation
- 1979-10-15 GR GR60260A patent/GR73004B/el unknown
- 1979-10-16 ZA ZA00795509A patent/ZA795509B/xx unknown
- 1979-10-17 GB GB7936050A patent/GB2034687B/en not_active Expired
- 1979-10-26 IT IT50674/79A patent/IT1164025B/it active
- 1979-10-29 AU AU52264/79A patent/AU528629B2/en not_active Ceased
- 1979-10-29 CA CA338,662A patent/CA1123355A/fr not_active Expired
- 1979-10-29 MX MX798459U patent/MX5937E/es unknown
- 1979-10-29 HU HU79NE622A patent/HU180030B/hu not_active IP Right Cessation
- 1979-10-30 CS CS797378A patent/CS213399B2/cs unknown
- 1979-10-30 JP JP14040979A patent/JPS56109589A/ja active Granted
- 1979-10-31 DD DD79216588A patent/DD147251A5/de not_active IP Right Cessation
- 1979-10-31 SU SU792836784A patent/SU1090263A3/ru active
- 1979-10-31 ES ES485566A patent/ES485566A1/es not_active Expired
- 1979-11-01 NL NL7908024A patent/NL7908024A/nl not_active Application Discontinuation
-
1981
- 1981-02-02 US US06/230,421 patent/US4419449A/en not_active Expired - Lifetime
-
1983
- 1983-06-17 SG SG345/83A patent/SG34583G/en unknown
-
1984
- 1984-02-09 HK HK113/84A patent/HK11384A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-12-30 MY MY264/84A patent/MY8400264A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI65448C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av bakteriostatiskt aktivt aemne | |
| Parhad et al. | Effect of pH on survival of Escherichia coli | |
| Villar et al. | Isolation and characterization of Pediococcus halophilus from salted anchovies (Engraulis anchoita) | |
| Iturriaga | Bacterial activity related to sedimenting particulate matter | |
| CN110317757A (zh) | 一株具降胆固醇及富硒作用的植物乳杆菌hj-s2及其应用 | |
| Pine et al. | Studies of the Morpholoǵical, Physioloǵical, and Biochemical Characters of Actinomyces bovis | |
| CN109880758A (zh) | 一种植物乳杆菌诱变菌株及其诱变方法和应用 | |
| Sulmiyati et al. | The chaaracteristics yeast isolated from commercial Kefir Grain, Indonesia | |
| de Winder et al. | Crinalium epipsammum sp. nov.: a filamentous cyanobacterium with trichomes composed of elliptical cells and containing poly-β-(1, 4) glucar (cellulose) | |
| JP3321591B2 (ja) | 新規微生物、微生物共生体、培養方法及びこれを用いた水処理方法 | |
| CN110499264B (zh) | 一株降解油脂的蒙氏假单胞菌及其应用 | |
| Huang et al. | Screening of flocculant-producing strains by NTG mutagenesis | |
| DE69923208T2 (de) | Hitzestabiles collagen-abbauendes enzym, mikroorganismus und verfahren zu dessen herstellung | |
| Fitriani et al. | Isolation and characterization of schmutzdecke in slow sand filter for treating domestic wastewater | |
| Trick et al. | Characterization of Herpetosiphon spec.—A gliding filamentous bacterium from bulking sludge | |
| Salhani et al. | Improved quantification of aggregated bacteria by combined enzymatic and mechanical treatment of flocs and biofilm from a rotating drum bioreactor | |
| Hook et al. | Isolation, characterization, and emendation of description of Angiococcus disciformis (Thaxter 1904) Jahn 1924 and proposal of a neotype strain | |
| JP3455749B2 (ja) | 新規微生物 | |
| CN117683673A (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及其改善皮肤状况的应用 | |
| Antonić et al. | Antimicrobial activity of natural soaps tested by Bioscreen methodology | |
| Halls et al. | The microbial associations developing on experimental trickling filters irrigated with domestic sewage | |
| Mathias et al. | Isolation and Identification of Bioflocculants from Wastewater at Girei and Yola North, Adamawa State, Nigeria | |
| Emtiazi et al. | Novel filamentous spore‐forming iron bacteria causes bulking in activated sludge | |
| AT373623B (de) | Verfahren zur herstellung eines stoffs mit bakteriostatischer aktivitaet | |
| JP2000245444A (ja) | 新規微生物の培養方法及びこれを用いた水処理方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: SOCIETE DES PRODUITS NESTLE S.A. |