CN110317757A - 一株具降胆固醇及富硒作用的植物乳杆菌hj-s2及其应用 - Google Patents
一株具降胆固醇及富硒作用的植物乳杆菌hj-s2及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一株具降胆固醇及富硒作用的植物乳杆菌HJ‑S2(Lactobacillusplantarum)及其应用，该菌株于2019年05月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17720；该菌株分离自生活在海平面300米以下的喙鲸(Beaked Whale)的肠道内脏，具降胆固醇且同时具有一定的富硒作用，对酸和胆盐有一定的耐受力，具有很好的安全性，可应用于药物、保健品、食品及饮料等领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物菌株及其应用，尤其涉及一株具有降胆固醇及富硒作用的海洋源植物乳杆菌HJ-S2(Lactobacillus plantarum) 及其应用。
背景技术
近几年，高血压、冠心病、动脉硬化等心脑血管疾病的发病率逐年上升，严重影响着人类的健康，据不完全统计，每年全球约有1750 万人死于心脑血管疾病，约占死亡总人数的33％。动脉粥样硬化及体内硒元素的缺失均是导致心脑血管疾病的重要原因。而同时高脂血症是导致动脉粥样硬化的重要危险因素之一。高脂血症是指血液中的一种或几种脂质水平异常。流行病学和临床研究表明，血清胆固醇水平和心脑血管疾病的发生呈明显正相关性，血清胆固醇水平每高出正常水平1mmol，导致心血管疾病的风险便增加约35％。因此在食物中强化硒含量，向人体补充硒元素，同时降低血清低密度胆固醇水平，作为防治一系列由硒缺乏和胆固醇水平过高所引起的各种疾病及保健的有效措施。
硒是人体所必需的微量元素，与人类的健康密切相关，在预防和抑制肿瘤、抗衰老，维持心血管系统的功能，预防动脉硬化和冠心病的发生等方面具有重要作用。如果机体细胞长期缺硒，那么与硒相关的代谢过程被阻滞后会带来一系列的疾病的发生。
乳酸菌普遍存在于人体与动物肠道中，其数量超过百万亿个，具有各种保健功效，常作为益生菌添加于食品中以增进人体健康。益生菌大多数是乳酸菌中的乳杆菌和双歧杆菌。据最近几年的研究资料表明，定居肠道中的有益乳酸菌群具有多种保健作用：维持微生态平衡和肠道机能，缓解乳糖不耐症，增强机体免疫力，改善肝功能，降低血清胆固醇，富硒作用，增强免疫功能以及抗肿瘤等作用。20世纪 70年代，研究大量饮用酸奶等发酵乳制品的非洲Massai人血清胆固醇，常饮酸乳的美国人，以及直接对酸乳的研究均发现乳酸菌具有降低人体血清胆固醇的作用。宋照军等研究发现对保加利亚菌，嗜热链球菌进行耐硒筛选，驯化，使其富硒率达72.8％。汪波等驯化培养出一株富硒率达到65.4％的嗜酸乳杆菌。潘道东等从市售乳制品中筛选出一株胆固醇脱除率为41.83％的乳酸乳球菌亚种LQ-12。唐雅茹等从内蒙古地区传统发酵乳制品分离筛选出一株体外降胆固醇能力达 55.71％的植物乳杆菌KLDSI.0386。已报道具降胆固醇作用的乳酸菌有嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌等乳杆菌。但目前国内外对同时具降胆固醇和富硒两种作用的乳酸菌的报道和专利件较少。
针对人们一系列的疾病，筛选出具有降胆固醇及富硒作用的益生菌，适量摄入此类益生菌可达到调节体内血脂水平，同时为人体提供做需的硒元素，并对预防心脑血管疾病的发生也很有意义。目前，从不同来源样品中筛选出益生菌并开发成相应保健品、食品以调节人体健康已成为近几年的研究热点，但尚未发现从海洋哺乳动物喙鲸中筛选出同时具有降胆固醇及富硒两种功能的植物乳杆菌。
发明内容
本发明的目的在于提供一株具降胆固醇及富硒作用的植物乳杆菌HJ-S2(Lactobacillus plantarum)，该菌株已于2019年5月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No.17720，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明植物乳杆菌HJ-S2(Lactobacillus plantarum)是从喙鲸肠道中分离并筛选得到的菌株，根据菌株形态学和生理生化特性，并采用16S rDNA法对该菌株进行测序分析，最终鉴定其为植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)。
本发明的另一目的是提供植物乳杆菌HJ-S2在制备降胆固醇药品、保健品、食品及饮料中的应用。
进一步地，所述食品包括发酵果蔬汁，所述植物乳杆菌活化后按 6％的接种量接种至果蔬汁内，初始菌落数控制在107CFU/mL。
本发明的又一目的是提供一种降胆固醇菌粉，所述降胆醇菌粉包括植物乳杆菌HJ-S2(Lactobacillus plantarum)，其制备包括以下步骤：
(1)挑取植物乳杆菌HJ-S2菌落至10mL MRS液体培养基中， 37℃摇床培养24h进行活化；将活化后菌液按3％接种量接种至15 mL MRS液体培养基中制备种质液，37℃摇床培养24h；将种质液以 3％接种量接种至2L的MRS液体培养基中进行扩大培养，37℃摇床培养24h；所得菌体发酵液10000r、4℃条件下离心10min，弃上清液，收集菌体沉淀，用无菌0.9％生理盐水漂洗菌体2次，即得到植物乳杆菌HJ-S2菌泥；
(2)冻干保护剂含有15％脱脂奶粉，7％海藻糖，5％蔗糖，3％谷氨酸钠。将上述保护剂溶于水中，110℃灭菌15min备用；
(3)将上述制备的植物乳杆菌HJ-S2菌泥与保护剂溶液按1:5 的比例充分混合，于-80℃条件下预冻8h，使其均匀冻结在容器内壁上，然后进行真空冷冻干燥，干燥20-24h后，得到植物乳杆菌HJ-S2 降胆固醇菌粉。
本发明的有益效果：
本发明从喙鲸肠道中分离筛选获得的植物乳杆菌HJ-S2降胆固醇能力达到56.92％；经过富硒驯化后，富硒达到50.21％-65.14％左右；且对酸和高胆盐有很好的耐受性，对常见的抗生素敏感，具有很好安全性，并对维持肠道微生物菌群平衡具有一定作用。
因此，本发明菌株能够应用于开发制备改善动物或人类肠胃道细胞内菌群、降低血清胆固醇、提供硒元素，提高机体免疫力的药品、食品或饮料，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为本发明植物乳杆菌HJ-S2的菌落形态。
图2为本发明植物乳杆菌HJ-S2的菌体形态。
图3为本发明植物乳杆菌HJ-S2的系统发育树。
图4为OPA法测得的胆固醇标准曲线。
图5为本发明植物乳杆菌HJ-S2富硒浓度标准曲线。
图6为本发明植物乳杆菌HJ-S2对胆盐的耐受性结果。
具体实施方式
以下结合具体实施，并参照附图，对本发明作进一步详细说明。
实施例一：菌株的分离和初筛
1、菌株的分离纯化
本发明中的植物乳杆菌从生活在深海300米以下的喙鲸肠道中分离筛选得到。
从喙鲸肠道中采集样品，取10g样品经研钵研磨后的研磨液于摇床上震荡30min，将研磨液在10mL无菌生理盐水中进行梯度稀释从10-1至10-6。在超净工作台中吸取200μL研磨液涂布于 MRS-CaCO3琼脂平板上，置于恒温培养箱37℃培养48h，挑选产生明显溶钙圈的单菌落进行多次纯化，斜面保藏备用。
2、菌落的形态观察、过氧化氢酶实验
2.1革兰氏染色：挑取平板上的菌落进行涂片、固定、结晶紫染色、媒染、脱色、水洗、番红复染，干燥，油镜镜检。
2.2过氧化氢酶实验：用牙签蘸取待测菌于载玻片上，用滴管吸取少量15％H2O2直接滴于待测菌上进行实验，若不产气泡则为过氧化氢酶阴性。
最终保藏革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性菌株，筛选出10株乳酸菌，菌株接种至MRS液体培养基后加入50％甘油，-80℃冰箱保存备用。
实施例二：菌株的功能筛选
菌株的降胆固醇能力的测定
MRS-CHOL培养基：MRS培养基54g，胆固醇1.0g，吐温20mL，牛胆盐3.0g。将1.0g胆固醇置于20mL吐温80中加热至沸腾后使其溶解，随后趁热缓慢倒入培养基中，呈胶束溶液状态，此培养基的颜色呈不透明的淡黄色。配制好的培养基在121℃灭菌20min后趁热将试管晃动或上下颠倒振荡，以使该胶状物完全溶解，置于室温中自然冷却，放置备用。
挑取纯化后乳杆菌菌落，转接至MRS液体培养基中，37℃、24h 菌株活化，重复活化2次。将活化后的菌株以2.0％的接种至 MRS-CHOL培养基，37℃摇床培养24h，以未接种的培养基为对照组，37℃摇床培养24h，离心5000r/min、4℃、10min后取上清液测定其胆固醇清除能力。
1.1邻苯二甲醛法(OPA)标准曲线的绘制
配置胆固醇标准液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg/mL(以冰乙酸作溶剂)，准确吸取胆固醇标准液1mL，混合酸(浓硫酸：冰乙酸＝1:1)10ml，1.0mg/mL OPA 0.5mL试剂(以无水乙醇作溶剂)充分混合均匀，静置10min。空白对照以1mL无水乙醇代替胆固醇溶液，于550nm波长下测定吸光值，以胆固醇浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，计算出其线性回归方程为 y＝0.9824x+0.0231，相关系数为R2＝0.9942，标准曲线如图4所示。
1.2乳酸菌降胆固醇能力的测定
挑取纯化后乳酸菌菌落，接种至MRS液体培养基中，37℃、24h 菌株活化，重复活化2次，接着进行接种菌液至MRS液体培养基中富集培养20h，以4000r/min，4℃条件下离心10min，收集菌体。然后用无菌PBS缓冲溶液稀释菌体，将待测菌体调至2.0×108CFU/mL 后以2.0％的接种量接种至MRS-CHOL培养基，37℃摇床培养24h，菌液离心5000r/min、4℃、10min后取上清液测定其胆固醇含量，以未接种的MRS-CHOL培养基为空白对照组，采用邻苯二甲醛(OPA) 法测定乳酸菌的胆固醇降解率，重复实验3次求平均值。
胆固醇降解率按以下公式计算：
胆固醇降解率(％)＝(1-A/B)×100
式中：A为实验组发酵上清液中的胆固醇浓度；
B为对照组发酵上清液中的胆固醇浓度。
筛选出一株降解胆固醇能力最强的菌株，菌株编号为HJ-S2，其降解率达到30.62％
实施例三：菌株的鉴定
1、菌落特征及显微镜下形态
植物乳杆菌HJ-S2在MRS琼脂培养基37℃、48h培养后，观察菌株的平板上形态，该菌株菌落直径0.5～2mm，颜色为乳白色，菌落湿润，边缘整齐，呈圆形突起，结果如图1。革兰氏染色，于显微镜油镜下观察细菌形态特征，其为无芽孢的革兰氏阳性杆菌，圆端直杆状，单个，成对或成短链状，兼性厌氧，结果如图2。
2、菌株的生理生化及API50CHI实验(法国梅里埃公司)
植物乳杆菌HJ-S2为革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，不水解淀粉，不液化明胶，不产硫化氢，发酵葡萄糖产酸不产气，吲哚实验阴性，乙醇甲基甲醇试验阴性，具体结果见表1。
API50鉴定结果表明该菌株为植物乳杆菌。
表1植物乳杆菌HJ-S2的生理生化及微生物学特性
3、菌株的16S rDNA测序分析
对菌株HJ-S2进行16SrDNA基因序列测定，测定结果在NCBI 数据库中比对，鉴定结果为植物乳杆菌(L.plantarum)，构建了植物乳杆菌HJ-S2的系统发育树，系统发育树如图3所示，菌株的序列如序列表SEQ ID NO：1所示。
综合上述结果，乳酸菌HJ-S2被鉴定为植物乳杆菌 (L.plantarum)。
实施例四：植物乳杆菌HJ-S2的耐硒及富硒作用驯化
1、富硒能力测定
硒含量测定：3，3’-氨基联苯胺比色法
硒含量标准曲线的绘制：
硒标准溶液：称取0.1g硒，置于50mL小烧杯中，加入1:1盐酸 10mL，加热溶解，转移至100mL容量瓶中定容。此溶液1mL含1mg 硒，用时稀释成1mL含10μg的硒。
准确吸取10μg/mL的硒标准液0.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、 8.0mL、10.0mL，加入100mL三角烧瓶中，加蒸馏水至35mL。加入 5g/100m LEDTA-2Na溶液1m L，摇匀，并用体积比1:1盐酸调节酸调节pH值2.5左右，各加0.5％DAB溶液4m L，摇匀，置于暗处反应30min，再用5％NaOH，调节pH值至中性，加入分液漏斗中，并加入10m L甲苯振荡2min，静置分层，去水层，收集甲苯层于比色皿中，于420nm波长处测定吸光度，平行测定3次，计算吸光度的平均值。以硒含量做横坐标，吸光度作纵坐标绘制硒标准曲线，计算出其线性回归方程为y＝0.0888x+0.0091，相关系数为R2＝0.9996，如图5所示。
残留无机硒含量的测定：在装有40mL液体培养基为的250mL 三角瓶中，以5％接种量接入驯化后的富硒菌株，测定富硒能力。取适量样品，10000r，30min离心，取20mL上清，加蒸馏水至35mL，处理步骤如上，取1mL样品溶液测定其吸光度，代入标准曲线中得相应的硒含量。
有机硒含量＝总硒含量-残留无机硒含量
富硒率(有机硒转化率)％：＝(有机硒含量/总硒含量)×100
2、富硒实验
从斜面上挑取适量菌体于生理盐水制成菌悬液，加入加硒量为10μg/mL，含有CaCO3的番茄酵母培养基中，混匀倒平板，37℃，24h 培养，观察溶钙圈的大小，乳酸菌的耐硒能力与透明圈大小呈正相关，根据透明圈大小判断植物乳杆菌HJ-S2的耐硒能力，结果显示此菌株在培养基中产生的了一定的透明圈，确定为耐硒菌种。
3、耐硒驯化
根据植物乳杆菌HJ-S2的生长情况选择加硒时间，植物乳杆菌在 4-12h处于对数期，12-20h处于稳定期，对数生长期菌体代谢旺盛，转化率高，选择第6h为加硒时间，培养时间为18h。
斜面上挑取菌株HJ-S2，活化菌株后按照加硒时间依次接种到硒浓度为10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL的MRS 培养基中，进行硒浓度梯度驯化。37℃培养12h，根据菌液颜色变化确定适宜硒浓度，20μg/mL时红色加深，15μg/mL微红，10μg/mL红色不明显，为避免过多无机硒转化为单质硒，确定15μg/mL为最佳硒浓度。
经富硒及耐硒驯化实验后植物乳杆菌HJ-S2的富硒率为52.31％。
实施例五：植物乳杆菌HJ-S2的耐受性测定
1、耐酸性测定
用1mol/L盐酸将MRS液体培养基的pH值分别调为2.0、3.0、 4.0、5.0、121℃灭菌15min。将二次活化后的菌液按2％(v/v)接种量接种于上述MRS培养基中，以普通液体MRS(pH 6.4)培养基作对照，于37℃培养1h、2h、3h后取样，采用稀释涂布平板法测定活菌数，以log CFU/mL记，测定活菌率，实验重复3次。菌株HJ-S2 在pH为2.0、3.0、4.0、5.0的培养基中活菌率分别为50.52％、60.82％、 70.16％、95.82％，表明菌株对酸性环境有一定的耐受性。
2、耐胆盐测定
将二次活化的菌液按2％(v/v)接种量接种于含有3g/L高胆盐 MRS液体培养基中，于37℃恒温培养24h，每两小时取样测定OD600，以不加胆盐的MRS培养基为对照组，绘制菌株在不同条件下的生长曲线，比较分析胆盐浓度对菌株生长状况的影响，实验重复3次。结果如图6所示，乳酸菌HJ-S2对0.3％的胆盐具有较强的耐受力，为该菌能在肠道内存活并发挥作用提供了理论基础。
3、抗生素耐受性测定
本实验选用10种抗生素，采用滤纸片法进行实验。目标菌株按 1％的接种量接入MRS液体培养基，37℃培养至对数生长期，按1％的添加量将菌悬液与灭菌后保持50℃未凝固的MRS琼脂培养基混匀，制作平板。选取8种常用的药敏纸片：四环素、氨苄西林、卡那霉素、庆大霉素、青霉素，链霉素，红霉素，利福平，无菌镊子夹取放至已凝固的含菌液的MRS平板上，37℃培养48h，测量抑菌圈大小，进行3重复平行试验，求平均值。结果判定参照《CLSI抗菌药物敏感性试验标准》，结果见表2
表2乳酸菌的抗生素敏感性结果
S代表敏感，R代表抗性
随着抗生素在临床治疗的广泛应用，乳酸菌的耐药性越来越严重，长期摄入耐药性的乳酸菌会给临床治疗带来很大困难。本发明所提供的植物乳杆菌HJ-S2对常见的抗生素敏感，不会对人体造成危害。
实施例六：
利用植物乳杆菌HJ-S2制备具降低胆固醇功能的发酵果蔬汁。
1、发酵果蔬汁的加工工艺流程：
原料→清洗→处理(去皮、去核、修整、切分)→闪蒸→打浆→调配→均质→灭菌→接种→密闭发酵→后熟→罐装→冷藏
2、实验操作
(1)原料：选取新鲜的胡萝卜和苹果
(2)清洗处理：将水果清洗，去皮，苹果去核，切成小块。
(3)闪蒸：采用闪蒸的方式灭酶、1～3min、121℃处理，迅速排气。
(4)打浆：按照胡萝卜：水(重量比)＝1:1的比例，将胡萝卜和水适量逐渐放入研钵中进行研磨，进行粗磨和细磨各一次。苹果用打浆机打至果肉均匀。
(5)调配均质：按胡萝卜汁15％，苹果汁30％，蔗糖10％制成果蔬混合汁，加入0.4％的稳定剂CMC混合均匀，采用两段均质法，先低压(15MPa),后高压(25MPa)，使果蔬颗粒直径粒径为2～ 3μm。
(6)灭菌冷却：将调配好的复合果蔬汁在100℃下保温15min，冷却至40℃左右。
(7)接种发酵：在无菌条件下，将活化好的植物乳杆菌HJ-S2 按6％的接种量接种至复合果蔬汁内，初始菌落数控制在107 CFU/mL。37℃条件下恒温发酵24h。
(8)后熟：发酵结束后，放入4℃冰箱中3h。
(9)罐装、冷藏：后熟完成后，罐装到250mL的灭菌玻璃瓶中，送至冷库进行冷藏。
实施例七：
利用植物乳杆菌HJ-S2制备降胆固醇菌粉。
1、植物乳杆菌HJ-S2菌泥的制备
挑取植物乳杆菌HJ-S2菌落至10mL MRS液体培养基中，37℃摇床培养24h进行活化。将活化后菌液按3％接种量接种至15mL MRS液体培养基中制备种质液，37℃摇床培养24h。将种质液以3％接种量接种至2L的MRS液体培养基中进行扩大培养，37℃摇床培养24h。所得菌体发酵液10000r、4℃条件下离心10min，弃上清液，收集菌体沉淀，用无菌0.9％生理盐水漂洗菌体2次，即得到植物乳杆菌HJ-S2菌泥。
2、保护剂的制备
冻干保护剂含有15％脱脂奶粉，7％海藻糖，5％蔗糖，3％谷氨酸钠。将上述保护剂溶于水中，110℃灭菌15min备用。
3、植物乳杆菌HJ-S2菌粉的制备
将上述制备的植物乳杆菌HJ-S2菌泥与保护剂溶液按1:5的比例充分混合，于-80℃条件下预冻8h，使其均匀冻结在容器内壁上，然后进行真空冷冻干燥，干燥20-24h后，即可得到植物乳杆菌HJ-S2 菌粉。将所得菌粉用生理盐水复水后，测得植物乳杆菌HJ-S2菌粉中活菌数为1.0×109～5.0×109CFU/g。
以上列举的仅是本发明的若干个实施例。本发明不限于以上实施例。
序列表
<110> 自然资源部第三海洋研究所
<120> 一株具降胆固醇及富硒作用的植物乳杆菌HJ-S2及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1406
<212> DNA
<213> 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)
<400> 1
cgaactctgg tattgattgg tgcttgcatc atgatttaca tttgagtgag tggcgaactg 60
gtgagtaaca cgtgggaaac ctgcccagaa gcgggggata acacctggaa acagatgcta 120
ataccgcata acaacttgga ccgcatggtc cgagcttgaa agatggcttc ggctatcact 180
tttggatggt cccgcggcgt attagctaga tggtggggta acggctcacc atggcaatga 240
tacgtagccg acctgagagg gtaatcggcc acattgggac tgagacacgg cccaaactcc 300
tacgggaggc agcagtaggg aatcttccac aatggacgaa agtctgatgg agcaacgccg 360
cgtgagtgaa gaagggtttc ggctcgtaaa actctgttgt taaagaagaa catatctgag 420
agtaactgtt caggtattga cggtatttaa ccagaaagcc acggctaact acgtgccagc 480
agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt gtccggattt attgggcgta aagcgagcgc 540
aggcggtttt ttaagtctga tgtgaaagcc ttcggctcaa ccgaagaagt gcatcggaaa 600
ctgggaaact tgagtgcaga agaggacagt ggaactccat gtgtagcggt gaaatgcgta 660
gatatatgga agaacaccag tggcgaaggc ggctgtctgg tctgtaactg acgctgaggc 720
tcgaaagtat gggtagcaaa caggattaga taccctggta gtccataccg taaacgatga 780
atgctaagtg ttggagggtt tccgcccttc agtgctgcag ctaacgcatt aagcattccg 840
cctggggagt acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg 900
gtggagcatg tggtttaatt cgaagctacg cgaagaacct taccaggtct tgacatacta 960
tgcaaatcta agagattaga cgttcccttc ggggacatgg atacaggtgg tgcatggttg 1020
tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttattat 1080
cagttgccag cattaagttg ggcactctgg tgagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg 1140
tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt gctacaatgg 1200
atggtacaac gagttgcgaa ctcgcgagag taagctaatc tcttaaagcc attctcagtt 1260
cggattgtag gctgcaactc gcctacatga agtcggaatc gctagtaatc gcggatcagc 1320
atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc atgagagttt 1380
gtaacaccca aagtcggtgg ggtaac 1406
Claims (6)
1.一株具降胆固醇及富硒作用的植物乳杆菌HJ-S2(Lactobacillus plantarum)，其特征在于，所述菌株于2019年05月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17720。
2.如权利要求1所述的植物乳杆菌在制备降胆固醇药品中的应用。
3.如权利要求1所述的植物乳杆菌在制备保健食品中的应用。
4.如权利要求1所述的植物乳杆菌在食品中的应用。
5.如权利要求4所述的植物乳杆菌在食品中的应用，其特征在于，所述食品包括发酵果蔬汁，所述植物乳杆菌活化后按6％的接种量接种至果蔬汁内，初始菌落数控制在107CFU/mL。
6.一种降胆固醇菌粉，其特征在于，所述降胆醇菌粉包括植物乳杆菌HJ-S2(Lactobacillus plantarum)，其制备包括以下步骤：
(1)挑取植物乳杆菌HJ-S2菌落至10mL MRS液体培养基中，37℃摇床培养24h进行活化；将活化后菌液按3％接种量接种至15mL MRS液体培养基中制备种质液，37℃摇床培养24h；将种质液以3％接种量接种至2L的MRS液体培养基中进行扩大培养，37℃摇床培养24h；所得菌体发酵液10000r、4℃条件下离心10min，弃上清液，收集菌体沉淀，用无菌0.9％生理盐水漂洗菌体2次，即得到植物乳杆菌HJ-S2菌泥；
(2)冻干保护剂含有15％脱脂奶粉，7％海藻糖，5％蔗糖，3％谷氨酸钠。将上述保护剂溶于水中，110℃灭菌15min备用；
(3)将上述制备的植物乳杆菌HJ-S2菌泥与保护剂溶液按1:5的比例充分混合，于-80℃条件下预冻8h，使其均匀冻结在容器内壁上，然后进行真空冷冻干燥，干燥20-24h后，得到植物乳杆菌HJ-S2降胆固醇菌粉。
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