FI63673C - Foerfarande foer framstaellning av gammaglobulin innehaollandeintravenoest applicerbart pyrogenfritt och haollbart seru mpoteinpreparat ur en proteinloesning av maenskoblod - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av gammaglobulin innehaollandeintravenoest applicerbart pyrogenfritt och haollbart seru mpoteinpreparat ur en proteinloesning av maenskoblod Download PDFInfo
- Publication number
- FI63673C FI63673C FI780212A FI780212A FI63673C FI 63673 C FI63673 C FI 63673C FI 780212 A FI780212 A FI 780212A FI 780212 A FI780212 A FI 780212A FI 63673 C FI63673 C FI 63673C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- weight
- iii
- globulin
- protein
- albumin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
- Y10S530/831—Cohn fractions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
ESSF^l [El (uiKUULUTUSJULKAISU £Ύ£η-ι JBa lBJ <"> utlAggninosskrift OOb/5 >V^v ^ (51) Kv.ik.Wa.3 A 61 K 37/02, 35/16 SUOMI-FINLAND (21) Pttanttlhakamui — PatmtamMutiftf 780212 (22) H»k*ml«ftlvi — AiwBknlngtdag 2U.01.78 * (23) Alkupiivt—GlMghuttdag 2^.01.78 (41) Tullut Julklsuksl — Bllvlt offtntHg 27 07 7ft
Patentti· ja rekisterihallitus _ . ' . (44) NlhtivUulpenon |a kuuLJulkitoun pvm. —
Patent- ocn registerstyrelsan Amotctn utbcd och uti^krtfun puMicurad 29. OU. 83 (32)(33)(31) *«uolk*u$ —Begird prlorhat 26.01.77
Sveitsi-Schweiz(CH) 93^/77> 17·03·77
Itävalta-Österrike(AT) A 1859/77 (71) Armour Pharmaceutical Company, 6991 East Camelback Road, Scottsdale,
Ari zona, USA(US) (72) Markus Radowitz, Krefeld, Saksein Liittotasavalta-Förhundsrepubliken lyskland(DE) (7I+) Leitzinger Oy (5I+) Menetelmä runsaasti geunmaglobuliinia sisältäväin laskimonsisäisesti applikoimiskelpoisen, pyrogeenittoman ja säilyväin seerumiproteiini-preparaatin valmistamiseksi ihmisveren proteiiniliuoksesta -Förfarande för framställning av gammaglobulin innehällande, intrave-nöst applicerbart, pyrogenfritt och hallbart serumproteinpreparat ur en proteinlösning av mänskoblod
Keksinnön kohteena on menetelmä runsaasti gammaglobuliinia sisältävän laskimonsisäisesti applikoimiskelpoisen, pyrogeenittoman ja säilyvän seerumiproteiini-preparaatin, joka sisältää vesipitoisessa isotonisessa liuoksessa liuotettuna proteiinia, valmistamiseksi ihmisveren proteiiniliuoksesta fraktioimalla tunnettua COHN-mene-telmää käyttäen veriplasmaa, josta hyytymistekijät on poistettu, jolloin saadaan eri fraktiointivaiheiden I-IV mukaisia jakeita ja supernatanttej a.
Seerumi proteiini-preparaatit ovat arvokkaita verijohdannaisias Näiden sisältämä albumiini toimii kuljetusproteiinina. Preparaatit sisältävät myös muita funktionaalisia proteiineja, kuten transferriiniä, koeruloplasmiinia, α-antitrypsiiniä ja erityisesti immunoglobuliinia. Merkityksellisiä ovat γ-globuliinin sisältämät vasta-aineet. Aiheuttamansa passiivi-immunisaation ansiosta ne sopivat profylaktisiin toimenpiteisiin ja auttavat verenhukan heikentämiä elimistöjä.
Jotta seerumiproteiini-preparaatti voitaisiin laskimonsisäisesti applikoida ihmisiin, sen on täytettävä kaksi tärkeää vaatimusta: 2 63673 1. Preparaatista on voitava valmistaa säilytystä kestävä tuote: 2. infektioita levittävät eliöt (virukset tai bakteerit) on voitava luotettavasti neutralisoida. Tämä koskee erityisesti virushepätiit-tista siirtäviä eliöitä.
Seerumiproteiini-preparaatteja käytetään yleensä vesiliuoksena/ jonka -elektrolyyttipitoisuus on elimistölle sopiva. Kokonaisproteiinipitoisuus on tavallisesti 5 painoprosenttia (so. 5000 mg 100 ml kohti).
Kirjallisuudesta tunnetaan menetelmä, jossa laskimonsisäisesti appli-koimiskelpoinen seerumiproteiini-preparaatti valmistetaan useassa vaiheessa suoraan ihmisen verestä (W. Stephan; "Hepatitis-Free and Stable Human Serum for Intravenous Therapy; XXIV th Sc. Meeting o£ the Blood Research Institute, Vox Sanguin., V. 20; (s. 442...457).
Tämä tunnettu menetelmä suoritetaan seuraavina vaiheina: a) Verenantajan verestä poistetaan kiinteät ainesosat (verisolut, verihiutaleet), otetaan talteen luonnonseerumi ja tämän jälkeen otetaan talteen seerumi, jonka proteiini-konsentraatio on noin 7,5 % ja pH 7,2 -7,8.
b) Helposti denaturoituvan lipoproteiinin poistamiseksi lisätään 100 ml:aan seerumia 2,0 g Aerosil 2491/380 (Aerosil: Fa. Degussa-yhtiön kolloidaalisen piihapon suojattu tavaramerkki). Suspensiota sekoitetaan 4 tuntia 45°C:ssa, jäähdytetään ja sedimentti erotetaan sentrifugoimalla. Lipoproteiini on sitoutunut kvantitatiivisesti Aerosiliin, ja se poistetaan veriseerumista; c) Vielä jäljellä olevat hiutaleet poistetaan suodattamalla liuos hienosuodattimen läpi; d) Steriloimista varten liuokseen lisätään 5°C:ssa 0,3 g 6-propioni-laktonia 100 ml kohti (pH ,8,0) ja säteilytetään UV-valolla.
Saadun seerumin koostumus on seuraava (laskettuna 100 ml:n sisältämää 5000 mg kohti) : 63673 3
Aine Määrä Funktio
Albumiini 3060 Onkoottinen vaikutus, ravinto aineiden, vitamiinien, hormoo-nien, lääkeaineiden siirto.
IgG 820 Virusten ja bakteereiden vasta- aine.
IgA 185 Limakalvoja suojaava vasta-aine.
IgM 75 Bakteereiden ja toksiinien vasta- aine .
Esialbumiini 17 Tyroksiinin sitominen, a -antitrypsiini 162 Inhibitoorinen proteolyyttinen a2”makroglobuliini 141 entsyymi.
Haptoglobuliini 110 Vapaan hemoglobiinin sitominen ja siirtäminen.
Hemopeksiini 75 Vapaan hemin sitominen ja siirtäminen.
4*+
Transferriini 195 Fe :n siirtäminen.
Koeruloplasmiini 14 Cu+ :n siirtäminen peroksidaa- sina.
Kolinesterääsi 3,0 E/ml Sukkinyylikoliinin lohkaiseminen.
Taulukosta käy ilmi myös itse seerumiproteiini-preparaatin yksittäisten aineosien funktiot.
Tunnetun menetelmän mukaisesti valmistettu preparaatti on kaupan.
Sitä voidaan käyttää ilman komplikaatioita.
Valmistuksen ja käytön osalta on kuitenkin havaittu haitaksi se, että arvokkaan lähtöaineen - ihmisveren - vuoksi preparaatti on erittäin kallista eikä sitä ole käytettävissä riittävästi. Sitä paitsi erityisen tehokkaiden vasta-aineiden IgG, IgA, IgM pitoisuudet ovat suhteellisen alhaisia vastaten näiden aineiden pitoisuutta ih-misveressä.
Tavoitteena on siten tuoda esiin menetelmä, jolla voidaan valmistaa laskimonsisäisesti applikoimiskelpoista seerumiproteiini-prepa-raattia, jonk.£ lähtöaineet eivät ole yhtä kalliita ja harvinaisia. Toisena tavoitteena on mahdollisuus käyttää arvokkaiden seeru-miproteiini -preparaattien valmistuksessa sellaisia lähtöaineita, joita tähän· mennessä ei ole jalostettu tai on jalostettu vain riittämättömästi. Edelleen tavoitteena on nostaa erityisesti seerumin tehokkaiden vasta-aineiden tai muiden proteiinien pitoisuutta rasittamatta deellisesti valmistuskustannuksia.
4 63673 Tämä tavoite saavutetaan siten, että sekoitetaan ainakin kahta COHN-jakeista IV, III-l tai III-2 kemiallisesti ja fysiologisesti sopivaan kantajanesteeseen sellainen määrä, että albumiinin ja globuliinin osuus kokonaisproteiinipitoisuudesta laskettuna on 23-50 paino-% albumiinia 50 - 77 paino-% globuliinia jonka jälkeen preparaatti sinänsä tunnetusti stabiloidaan ja puhdistetaan sekä säädetään natriumkloridin avulla sen fysiologiset isotoniset olosuhteet ihmisverta vastaaviksi.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä seerumiproteiini-preparaattia ei valmisteta suoraan natiivista seerumista, vaan käytetään muita, veren fraktioinnissa esiintyviä fraktioinnin välituotteita. Tällöin käytetään tunnettuja ja tähän mennessä hyödyntämättömiä menetelmän tuotteita, ja yksinkertaisia menetelmävaiheita ja lisätään ihmisveressä olevien käyttökelpoisten tuotteiden hyödyntämistä. Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetään hyödyksi erityisesti sitä, että Cohn'in mukaisessa veren fraktioinnissa muodostuu tiettyjä jakeita, joita tähän mennessä ei ole voitu jatkokäsitellä tai on voitu jatkokäsitellä vain epätäydellisestä.
Cohn'in menetelmä perustuu siihen, että veriplasma fraktioidaan käyttämällä saostimena etanolia olosuhteissa, joissa tarkkaan on määrätty lämpötila, pH-arvo, ionivahvuus ja etanolipitoisuus. COHN-menetelmä on kuvattu esimerkiksi seuraavissa julkaisuissa:
Cohn, E.J. et ai. jJ.Amer.Chem. Soc. 72 (1950); 465...474 Cohn, E.J. et ai. jJ.Amer.Chem. Soc. 68 (1946); 459...475 USA-patentit 2 390 074 ja 2 469 193
Menetelmän eri vaiheet on esitetty mukaanliitetyssä virtauskaaviossa. "Etanoli %:lla" tarkoitetaan tällöin aina 25°C:ssa mitattuja tilavuusprosentteja. Lähtöaineena käytetty plasma saadaan verenluovuttajien verestä. 500 ml ihmisverta otetaan 50 ml:aan 4-pro-senttista natriumsitraattiliuosta. Seuraavaksi plasmasta erotetaan kiinteät aineosat; useiden verenluovuttajien plasma yhdistetään.
Juoksukaavion vaiheessa a erotetaan plasmasta raakafibrinogeeni si-
II
5 63673 ten, että lisätään 53,3-prosenttista kylmää etanolia 8 % konsentraa-tioon asti. Lämpötila pidetään välillä -2,5 - -3,0°C. Sakka P 1 -fibrinogeeni - erotetaan sentrifugoimalla. Supernatantti S 1 käsitellään edelleen.
Vaiheessa b lisätään edelliseen supernatanttiin S 1 uudelleen 53,3-prosenttista etanolia, kunnes nesteen etanolikonsentraatio on 18 -25 %. Lämpötila pidetään -5°C:ssa ja pH-arvo säädetään 5,8. Sakka P 2 saostuu, ja sitä kutsutaan jakeeksi II/III tai γ-globuliini-jakeeksi. Tämä sakka sisältää immunoglobuliinin ja muita fysiologisesti tärkeitä proteiineja. Sakka P 2 erotetaan sentrifugoimalla -5°C:ssa. Sakan päälle jäänyt supernatantti S 2 käsitellään edelleen.
Vaiheessa c käsitellään supernatantti S 2 uudelleen. Etanolikonsent-raatio säädetään 40 %:ksi. Vaiheen b mukaisesti säädetään lämpötila ja pH-arvo vastaavasti -7°C:ksi ja 5,8:ksi. Sentrifugoimalla saadaan sakka P 3, jota kutsutaan jakeeksi IV. Tämä sisältää Φ- ja /3-glo-buliinin. Sakan päälle jäänyt neste, supernatantti S 3, käsitellään tämän jälkeen edelleen. Tätä varten se pidetään lämpötilassa -7°C pH-arvossa 4,8 ja etanolikonsentraatiossa 40 %. Tällöin saostuu sakka P 4, nk. raaka-albumiini, joka sinänsä tunnetulla tavalla puhdistetaan ja steriloidaan. Sakan päälle jäänyt neste, supernatantti S 4, heitetään pois.
Y -globuliinijae II/III jatkokäsitellään seuraavissa vaiheissa:
Sakka P 2 otetaan sitraatti-fosfaatti-puskuriin, pH 7,0 - 7,4. Lämpötila on 15°C. Lisätään 3 % polyetyleeniglykolia (PEG 4000 tai 2,5 % polyetyleeniglykolia 6000).
Käytännössä käytetty PEG on seos, joka sisältää haihtumattomia polyetyleeniglykoleja, jotka liukenevat sekä veteen että orgaanisiin nesteisiin ja joiden molekyylipaino on alueella 4000 - 20.000. Polyetyleeniglykoli 4000:ksi kutsutaan tällaisten polyetyleenigly-kolien seosta, jonka keskimääräinen molekyylipaino on 4000.
63673 6
Perinpohjaisen sekoittamisen ja 1/2 - 4 tunnin reaktioajan jälkeen sentrifugoidaan seos, jolloin muodostuu supernatantti S 5 ja jae III - 1 (sakka P 5). Supernatantti S 5 käsitellään vielä kerran ja fraktioidaan modifioiduissa olosuhteissa (pH 4,6; PEG 4000 noin 5,5 % asti; T = 15°C). Muodostuu jae III - 2 (sakka P 6) ja supernatantti S 6, joka sisältää pääasiassa immunoglobuliinia IgG. Jakeiden III - 1 ja III - 2 globuliinit ovat oleellisesti rikastuneet immunoglobu-liinien IgG, IgA ja IgM suhteen. Myös οί^-antitrypsiiniä, (^-hapto-globuliinia, koeruloplasmiinia, tranferriiniä ja hemopeksiiniä on mukana rikastuneet määrät.
Jakeita III - 1 ja III - 2 ei yleensä enää käsitellä. Niitä on käytettävissä suuret määrät, koska ensisijassa albumiini otetaan talteen verestä ja 'γ-globuliineilla on vähäisempi merkitys.
Keksinnön mukaisen menetelmän lähtötuotteina käytetään erityisesti kuvatun fraktiointimenetelmän jakeita IV sekä III - 1 ja III - 2 (sakat P 3, P 5, P 6).
Nämä sekoitetaan määrätyissä suhteissa niin, että seos sisältää koko-naisproteiinista laskettuna 23 - 50 % albumiinia ja 50 - 77 % globuliinia. Mainitun suhteen puitteissa on tällöin mahdollista säätää samat arvot kuin mitä esiintyy natiivissa seerumiproteiinissa.
On myös mahdollista nostaa erityisesti IgM ja IgA osuutta lisäämällä vastaavasti enemmän globuliinijaetta tai jakeita III - 1 ja III - 2.
Eräässä suositellussa menetelmän suorittamistavassa lähdetään siitä, että keittosuolaliuokseen tai sopivaan puskuriliuokseen suspendoidaan seuraavat määrät jakeita IV, III - 1 ja III - 2 (sedimenttejä):
Jae IV 25 - 80 paino-%
Jae III - 1 5 - 70
Jae III - 2 5 - 70 laskettuna 100 % kokonaisproteiinipitoisuudesta.
il » 7 63673 Määrätyssä suhteessa sekoitetut ja sopivaan puskuri- tai suolaliuokseen suspendoidut aineet esipuhdistetaan. Esipuhdistuksessa poistetaan o<- ja β-globuliini-alueen lipiditaktorit adsorboimalla ne sopiviin adsorptioaineisiin (Aerosii^, bentoniitti ja muut pii-happopitoiset kompleksiyhdisteet).
Lopuksi tuote suodatetaan, dialysoidaan ja säädetään tiettyyn liuos-konsentraatioon. Mitään erityistä sterilointia ei yleensä tarvita.
Se voidaan kuitenkin suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla. Esimerkiksi virusten poistamiseksi on käytetty kahta menetelmää: a) Pastöroidaan kuumentamalla 10 tuntia 60°C:ssa.
Tämän menetelmän haittana on, että monet seerumiproteeinit denaturoituvat näissä olosuhteissa.
b) Yhdistetään (3-propionilaktonikäsittely ja UV-säteilytys (LoGrippo'n menetelmä; Fed. Proceedings 15, s. 518, 1959).
Tällä menetelmällä voidaan steriloida seerumeja ja plasmoja suojaavissa olosuhteissa, jolloin kuitenkaan ei paranneta säilytyksen kestävyyttä.
Sen jälkeen, kun lähtökomponenttien seos on säädetty tiettyyn pro-teiinipitoisuudeen ja proteiinien suhteeseen, se käsitellään keksinnön mukaisessa menetelmässä oleellisesti samalla tavoin kuin seerumi tunnetussa menetelmässä (W. Stephan, ks. edellä s. 2). Yllättäen on mahdollista tällä tavoin saada seerumivalkuaisaine-preparaatti, jonka tehokkuus on parempi kuin tunnettujen preparaattien johtuen mm. siitä, että se sisältää enemmän immunoglobuliineja IgM tai IgA.
Luonnollisesti on mahdollista poistaa yksittäisistä jakeista helposti denaturoituvat aineet ja tämän jälkeen sekoittaa, väkevöidä ja stabiloida puhdistetut aineet.
Kun käytetään adsorbointiaineita, niin konsentraatio on parhaiten 200 - 500 mg piihappoa kokonaisproteiinin grammaa kohti ja lämpötila on korkeintaan 50°C. Aineet sekoitetaan hyvin keskenään ja tämän jälkeen erotetaan lipoproteiineja sisältävä adsorptioaine.
8 63673
Edellä mainitun mukaisesti parhaat arvot saavutetaan lämpötiloissa 20 - 50°C ja pH-arvoissa välillä 6,5 ja 8.
Keksintöä selvennetään seuraavan esimerkin avulla:
Esimerkki 300 litraan keittosuolaliuosta (tislattu vesi, joka sisältää 1,7 painoprosenttia natriumkloridia, pH säädetty arvoon 4,6 0,2 n suolahapolla) - jota seuraavassa kutsutaan li-uottimeksi - lisätään ja suspendoidaan 10 kp Cohn-jaetta IV, jonka proteiini-analyysi on seuraava: 55 % .albumiini 10 % a^-globuliini 8 % a2~globuliini 15 % β-globuliini 12 % γ-globuliini
Jae IV sisältää noin 50 % kuiva-ainetta (valkuainen, suolat) ja 50 % jäännöskosteutta (H20, jäännösetanoli).
Edelleen lisätään 5 kp Cohn-jaetta III-l (alajae), jonka kiinteiden aineiden koostumus on seuraava (painoprosenttia): 15 % albumiini 2 % c^-globuliini 13 % a2-globuliini 17 % β-globuliini 53 % γ-globuliini ja suspendoidaan 5 kp Cohn-alajaetta II1-2, jonka analyysi on: 8 % albumiini 3 % a^-globuliini 9 % a2~globuliini 25 f β-glöbuliini 55 % γ-globuliini
Kuiva-aineen ja jäännöskosteuden suhde on kaikissa jakeissa käytännöllisesti katsoen sama.
Il 9 6 367 3 20 kp "märkiä" jakeita suspendoidaan liuottimeen ja sekoitetaan. Tällöin pH-arvo pidetään vakiona arvossa 4,6. Jakeiden sisältämät, liukoiset aineet joutuvat liuottimeen. Lisäksi mukana olevat liukenemattomat ainekset muodostavat samentuman. Liukenemattomien ainesten määrä on noin 12 painoprosenttia laskettuna kuiva-aineen kokonaismäärästä. Liukenemattomiin aineisiin kuuluu erityisesti denaturoitunut globuliini ja myös lipoproteiinit, joita ei käytetä menetelmän seuraavissa vaiheissa ja ne poistetaan sentrifugoimälla.
Supernatanttineste on hieman sameaa ja väriltään kellertävää.
pH-arvoksi säädetään 7,4 lisäämällä 0,2 n natriumhydroksidia. Liuokseen lisätään puhdasta, kolloidaalista piihappoa, kunnes sen konsen-traatio on 5 painoprosenttia, minkä jälkeen sekoitetaan. Neste lämmitetään 45°C:een (noin 1° minuutissa) ja pH-arvo pidetään vakiona.
Kun loppulämpötila 45°C on saavutettu, nestettä sekoitetaan 4 tuntia. Menetelmän tämän vaiheen aikana säilymättömät proteiinit sitoutuvat piihappoon ja muodostavat sakan, joka poistetaan sentri-fugoimalla.
Sentrifugoinnista saatu neste kirkastetaan suodattamalla aktiivihii-lisuodattimen (valmistaja Seitz AKS-suodatin) läpi. Suodos on tämän jälkeen kirkas, meripihkan keltainen neste. Neste väkevöidään noin 25 %:iin lähtötilavuudesta diakonsentrointimenetelmän avulla (Milli-pore-kasettisysteemi, membraanin huokossuuruus 10.000 Daltöniä). Liuoksen proteiinin kokonaiskonsentraatio on tämän vaiheen jälkeen noin 3,4 - 4,5 painoprosenttia.
Analyysi osoittaa, että diakonsentrointivaihe on poistanut konsentraa-tista oleellisesti kaikki ne veren osat, joiden molekyylipaino on pienempi kuin 10.000. Näihin kuuluvat erityisesti ne ainekset, jotka eivät ole suotavia proteiinikonsentraatissa, mm. vasoaktiivisen vaikutuksen omaavat oligopeptidit.
Mainittujen "epäpuhtauksien" lopullista poistamista ja elektrolyytti-määrän säätämistä varten konsentraatti lopuksi dialysoidaan 0,9-pai-noprosenttista natriumkloridiliuosta vastaan, jonka tilavuus on kolminkertainen. Dialysoinnissa käytetään samaa laitetta ja samoja membraa-neja kuin konsentroinnissa.
10 63673
Seuraavaksi suoritetaan uusi konsentrointivaihe, jonka lopussa proteiinin kokonaiskonsentraatio on 6 - 10 %. Tämän jälkeen säädetään natriumkloridiliuoksen avulla fysiologiset isotoniset olosuhteet vastaamaan ihmisverta ja proteiinin loppukonsentraatio säädetään 5 painoprosentiksi.
Esimerkin mukaisesti saadun proteiinin analyysiarvot ovat seuraavat:
Taulukko 2 (laskettuna 100 ml kohti)
Proteiini 5.000 mg
Albumiini 1.925 mg
IgG 1.500 mg
IgA 380 mg
IgM 285 mg
Saatu liuos suodatetaan lopuksi kirkkaaksi itiöt poistavan suodattimen (EKS II; Seitz, Kreunznach) läpi. Liuos suodatetaan steriiliksi membraanisuodattimella.
Preparaatti on nyt valmis ja sopii annettavaksi laskimonsisäisesti.
Il n 6 367 3 ΓΤΤΊΕ7
I 3 H M (Q +J
_ ΛΌ O 3 sm 3 OH C x o3 Cu 3 -H C hm t· m M <u to __ - <u e > ex l-ι M *+) ·Η H φ
3 to M to EM
m VO 4-) 3 r-4 3 O,
ft ft - O -P - M <U
3 O 01 » Φ e!
r—I (N -H ·Μ 3 ·Μ φ H
I I M) Ό 4-> 4-) $ 3 ,— H H ' " 11
H I— H
3 H H
λ: <u <u (0 3 3 CO i-D h3
m vo -H
co co c •H >i
•Η ·Η -H H
4-> ,———| 4-) H {I
4-) U 4-> 3 -P
d 0 » in C Λ ·Ρ 3 m « - 3 Ο ή
4J H "SJ· in 4-> HM
3 3 Ov :3 C II II II__C O Λί
M M CO
<U φ 3 λ; a o a I -p 3 a W 3 S3 CO H CU ft CO H -n 3 __ 6 M - —»
3 ______ CM
1-1 ft ft Ή N— H <U HU CO ^ 0) H O CM (#> ft ft tn h m - ft
'-'O \ H f- | CO
“ d ””” (_| _J_ __^_J ___ 3 H -H H II II II II H >
M M
A! <U X) dl · U <U <D
3 3 -M 3 a 4-) M 3 3 en (-3 cm )-d h αω ft co co 3 Λ o τ>
H CM CO
CO CO CO CO
H H H H
4J _____ -P -P 4-> -P — 4J 4-) 4-) u c u <#> cuc#> c u ^ c O (N # 30» 30» 30» 3 CO * 4J in - σν 4-) C' - O 4J Is» - O 4-) I Γ~ » 3 I in H 3 I in 3 I TT Π3 — -— d - -— C - -L £ - . ...... c
II II II M II II II M II || Il M II II II M
<U <D CU O)
• Oi · dl * CU · CU
a-p 3 a-p 3 a -p p a-p 3
E-> SftW CO E-I O.W CO E-I OiW CO H CU W CO
Claims (2)
1. Menetelmä runsaasti gammaglobuliinia sisältävän laskimonsisäisesti applikoimiskelpoisen, pyrogeenittoman ja säilyvän see-rumiproteiini-preparaatin, joka sisältää vesipitoisessa, isotonisessa liuoksessa liuotettuna proteiinia, valmistamiseksi ihmisveren proteiiniliuoksesta fraktioimalla tunnettua COHN-menetelmää käyttäen veriplasmaa, josta hyytymistekijät on poistettu, jolloin saadaan eri fraktiointivaiheiden I-IV mukaisia jakeita ja supernatantteja, tunnettu siitä, että sekoitetaan ainakin kahta COHN-jakeista IV, III-l tai III-2 kemiallisesti ja fysiologisesti sopivaankantajahesteeseen sellainen määrä, että albumiinin ja globuliinin osuus kokonaisproteiinipitoisuudesta laskettuna on 23-50 paino-% albumiinia 50 - 77 paino-% globuliinia jonka jälkeen preparaatti sinänsä tunnetusti stabiloidaan g1 puhdistetaan sekä. säädetään'natri-umkloridin avulla sen fysiologiset isotoniset olosuhteet ihmisverta vastaaviksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suspendoidaan seuraavat määrät COHN-jakeita IV, III-l ja III-2 sopivaan keittosuola- tai puskuriliuokseen: jae IV 25 - 80 paino-%, edullisesti 40 - 60 paino-% jae III-l 5-70 paino-%, edullisesti 20 - 30 paino-% jae III-2 5-70 paino-%, edullisesti 20 - 30 paino-% laskettuna kokonaisproteiinipitoisuudesta, jolloin suspendoitu kuiva-aine sisältää 23 - 50 % albumiinia ja 50 - 77 % globuliinia. II Ί··1
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH93477 | 1977-01-26 | ||
| CH93477 | 1977-01-26 | ||
| AT185977 | 1977-03-17 | ||
| AT0185977A AT367297B (de) | 1977-03-17 | 1977-03-17 | Verfahren zur herstellung eines serumeiweiss-pr[parates |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI780212A FI780212A (fi) | 1978-07-27 |
| FI63673B FI63673B (fi) | 1983-04-29 |
| FI63673C true FI63673C (fi) | 1983-08-10 |
Family
ID=25597003
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI780212A FI63673C (fi) | 1977-01-26 | 1978-01-24 | Foerfarande foer framstaellning av gammaglobulin innehaollandeintravenoest applicerbart pyrogenfritt och haollbart seru mpoteinpreparat ur en proteinloesning av maenskoblod |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4216205A (fi) |
| JP (1) | JPS5396315A (fi) |
| AR (1) | AR220328A1 (fi) |
| AU (1) | AU522413B2 (fi) |
| BE (1) | BE863278A (fi) |
| DD (1) | DD133632A5 (fi) |
| DE (1) | DE2801123C2 (fi) |
| DK (1) | DK152334C (fi) |
| EG (1) | EG13119A (fi) |
| ES (1) | ES466385A1 (fi) |
| FI (1) | FI63673C (fi) |
| FR (1) | FR2378524A1 (fi) |
| GB (1) | GB1597204A (fi) |
| HU (1) | HU182554B (fi) |
| IE (1) | IE46304B1 (fi) |
| IL (1) | IL53856A (fi) |
| IN (1) | IN147713B (fi) |
| NL (1) | NL7800606A (fi) |
| PL (1) | PL124730B1 (fi) |
| SE (1) | SE447204B (fi) |
| SU (1) | SU786854A3 (fi) |
| YU (1) | YU16578A (fi) |
| ZA (1) | ZA78295B (fi) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2492269A2 (fr) * | 1980-01-10 | 1982-04-23 | Ionics | Appareil d'electrodialyse et procede de fractionnement de melanges de proteines |
| US4322275A (en) * | 1980-01-10 | 1982-03-30 | Ionics Incorporated | Fractionation of protein mixtures |
| US4321192A (en) * | 1980-01-10 | 1982-03-23 | Ionics Incorporated | Fractionation of protein mixtures by salt addition followed by dialysis treatment |
| US4351710A (en) * | 1980-01-10 | 1982-09-28 | Ionics, Incorporated | Fractionation of protein mixtures |
| EP0072843A1 (en) * | 1981-02-18 | 1983-03-02 | University Patents, Inc. | Precipitation of proteins |
| US4452893A (en) * | 1981-08-03 | 1984-06-05 | Cutter Laboratories, Inc. | Cell growth medium supplement |
| US4391801A (en) * | 1981-10-29 | 1983-07-05 | Cutter Laboratories, Inc. | Plasma protein fraction substantially free of acetate ions |
| US4439421A (en) * | 1982-08-30 | 1984-03-27 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Stabilized gamma globulin concentrate |
| DE3245591C2 (de) * | 1982-12-09 | 1986-11-06 | Schott Glaswerke, 6500 Mainz | Verfahren zur fraktionierten Auftrennung von Stoffgemischen mit Membranen |
| US4486282A (en) * | 1983-02-22 | 1984-12-04 | University Patents, Inc. | Precipitation of proteins from salt-containing proteinaceous fluids employing a desalting treatment, and use thereof in selective plasmapheresis |
| DE3344656A1 (de) * | 1983-12-09 | 1985-06-13 | Lentia GmbH Chem. u. pharm. Erzeugnisse - Industriebedarf, 8000 München | Verfahren zur herstellung einer serumproteinloesung |
| US5420250A (en) * | 1990-08-06 | 1995-05-30 | Fibrin Corporation | Phase transfer process for producing native plasma protein concentrates |
| CA2066374C (en) * | 1991-04-19 | 2002-01-29 | Paul E. Segall | Solution for perfusing primates |
| CN1055095C (zh) * | 1992-12-11 | 2000-08-02 | 上海莱士血制品有限公司 | 白蛋白的纯化方法 |
| PT701455E (pt) | 1993-06-04 | 2001-09-27 | Biotime Inc | Solucao semelhante a plasma |
| US6680305B1 (en) | 1993-06-04 | 2004-01-20 | Biotime, Inc. | Physiologically acceptable aqueous solutions and methods for their use |
| US6300322B1 (en) | 1993-06-04 | 2001-10-09 | Biotime, Inc. | Plasma-like solution |
| US6627393B2 (en) | 1993-06-04 | 2003-09-30 | Biotime, Inc. | Solutions for use as plasma expanders and substitutes |
| US5945272A (en) | 1993-06-04 | 1999-08-31 | Biotime, Incorporated | Plasma expanders and blood substitutes |
| US6218099B1 (en) | 1994-06-03 | 2001-04-17 | Biotime, Inc. | Methods and compositions for use in perfusion applications |
| US6589223B1 (en) | 1999-02-03 | 2003-07-08 | Biotime, Inc. | Method and compositions for use in perfusion applications |
| US6441144B1 (en) * | 1999-05-20 | 2002-08-27 | Alpha Therapeutic Corporation | Method for repairing dual virally inactivated immune globulin for intravenous administration |
| US6596262B2 (en) * | 2001-02-15 | 2003-07-22 | Aeropharm Technology Incorporated | Modulated release particles for aerosol delivery |
| US6806355B2 (en) * | 2001-08-14 | 2004-10-19 | Statens Serum Institut | Purification process for large scale production of Gc-globulin, the Gc-globulin produced hereby, a use of Gc.globulin and a Gc-globulin medicinal product |
| CA2742994A1 (en) * | 2008-11-12 | 2010-05-20 | Baxter International Inc. | Purification of butyrylcholinesterase using membrane adsorption |
| US8796430B2 (en) | 2010-05-26 | 2014-08-05 | Baxter International Inc. | Method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield |
| WO2011150284A2 (en) | 2010-05-26 | 2011-12-01 | Baxter International Inc. | Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide |
| AU2010202125B1 (en) | 2010-05-26 | 2010-09-02 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | A method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield |
| CN110054685A (zh) * | 2019-04-26 | 2019-07-26 | 兰州兰生血液制品有限公司 | 一种静注人免疫球蛋白（pH4）低温乙醇组分Ⅲ的生产方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1207477A (en) * | 1969-04-29 | 1970-10-07 | Ts I Gematologii I Perelivania | Plasma proteins solution |
| US3770631A (en) * | 1971-06-29 | 1973-11-06 | Baxter Laboratories Inc | Clarification of blood serum and plasma |
| JPS5620287B2 (fi) * | 1972-06-19 | 1981-05-13 | ||
| US4073886A (en) * | 1973-01-30 | 1978-02-14 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Blood fractionation process using block copolymers of ethylene oxide and polyoxypropylene |
| US3850903A (en) * | 1973-06-21 | 1974-11-26 | S Mankarious | Plasma volume expander prepared from cohn iv precipitate using block copolymers of ethylene oxide and polyoxypropylene |
| DE2459291C3 (de) * | 1974-12-14 | 1981-06-04 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrombin- Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen |
-
1978
- 1978-01-12 DE DE2801123A patent/DE2801123C2/de not_active Expired
- 1978-01-16 SE SE7800443A patent/SE447204B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-01-16 IE IE88/78A patent/IE46304B1/en unknown
- 1978-01-17 ZA ZA00780295A patent/ZA78295B/xx unknown
- 1978-01-18 NL NL7800606A patent/NL7800606A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-01-19 GB GB2285/78A patent/GB1597204A/en not_active Expired
- 1978-01-20 IL IL53856A patent/IL53856A/xx unknown
- 1978-01-20 AU AU32600/78A patent/AU522413B2/en not_active Expired
- 1978-01-23 US US05/871,620 patent/US4216205A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-01-24 DD DD7800203381A patent/DD133632A5/xx unknown
- 1978-01-24 EG EG41/78A patent/EG13119A/xx active
- 1978-01-24 FI FI780212A patent/FI63673C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-01-24 YU YU00165/78A patent/YU16578A/xx unknown
- 1978-01-25 BE BE2056636A patent/BE863278A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-01-25 DK DK035478A patent/DK152334C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-01-25 IN IN98/CAL/78A patent/IN147713B/en unknown
- 1978-01-25 HU HU78PA303A patent/HU182554B/hu unknown
- 1978-01-25 PL PL1978204214A patent/PL124730B1/pl unknown
- 1978-01-25 AR AR270851A patent/AR220328A1/es active
- 1978-01-25 FR FR7802028A patent/FR2378524A1/fr active Granted
- 1978-01-26 SU SU782572351A patent/SU786854A3/ru active
- 1978-01-26 ES ES466385A patent/ES466385A1/es not_active Expired
- 1978-01-26 JP JP778978A patent/JPS5396315A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK35478A (da) | 1978-07-27 |
| BE863278A (nl) | 1978-05-16 |
| JPS6241211B2 (fi) | 1987-09-02 |
| IN147713B (fi) | 1980-06-07 |
| EG13119A (en) | 1981-03-31 |
| JPS5396315A (en) | 1978-08-23 |
| IE780088L (en) | 1978-07-26 |
| SE7800443L (sv) | 1978-07-27 |
| ZA78295B (en) | 1978-12-27 |
| YU16578A (en) | 1983-10-31 |
| DD133632A5 (de) | 1979-01-17 |
| SE447204B (sv) | 1986-11-03 |
| PL124730B1 (en) | 1983-02-28 |
| SU786854A3 (ru) | 1980-12-07 |
| FI780212A (fi) | 1978-07-27 |
| AR220328A1 (es) | 1980-10-31 |
| FR2378524B1 (fi) | 1983-02-04 |
| US4216205A (en) | 1980-08-05 |
| FI63673B (fi) | 1983-04-29 |
| FR2378524A1 (fr) | 1978-08-25 |
| IE46304B1 (en) | 1983-04-20 |
| DE2801123A1 (de) | 1978-07-27 |
| AU522413B2 (en) | 1982-06-03 |
| DK152334C (da) | 1988-07-25 |
| DK152334B (da) | 1988-02-22 |
| DE2801123C2 (de) | 1986-01-02 |
| NL7800606A (nl) | 1978-07-28 |
| AU3260078A (en) | 1979-07-26 |
| GB1597204A (en) | 1981-09-03 |
| HU182554B (en) | 1984-02-28 |
| IL53856A (en) | 1981-03-31 |
| PL204214A1 (pl) | 1978-09-25 |
| ES466385A1 (es) | 1978-10-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI63673C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av gammaglobulin innehaollandeintravenoest applicerbart pyrogenfritt och haollbart seru mpoteinpreparat ur en proteinloesning av maenskoblod | |
| AU622436B2 (en) | Chromatographic separation of plasma proteins | |
| JP2544619B2 (ja) | 生体物質からの脂質可溶性処理化学薬品の除去方法 | |
| JP5178518B2 (ja) | 超高収率静注免疫グロブリン製剤 | |
| JPH01294629A (ja) | ハロゲン化炭化水素により不安定生物混合物からプロセス化学薬品を抽出する方法 | |
| JPS601135A (ja) | 免疫グロブリン−ｇ−含有フラクシヨン | |
| WO2007030244A2 (en) | An ultra-high yield intravenous immune globulin preparation | |
| FI72653B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett faktor viii(ahf)-koncentrat. | |
| CA2018511C (en) | Process for the preparation of purified albumin solutions | |
| ES2213760T3 (es) | Preparacion de globulina de suero inmunizante inyectable por via intravenosa con virus inactivado. | |
| US4739039A (en) | Method for preparing antihemophilic factor (AHF) by cold precipitation and for improving solubility of recovered AHF product | |
| US8293242B2 (en) | Ultra-high yield of alpha-1-anti-trypsin | |
| ES2215164T3 (es) | Composicion acuosa proteica, glicoproteina contenida en ella, procedimiento de obtencion y utilizaciones. | |
| EP0873362B1 (de) | VERFAHREN ZUR TRENNUNG VON IgG und IgA | |
| JPS6242887B2 (fi) | ||
| MacKAY et al. | Quantitative recovery, selective removal and one‐step purification of human parotid and leukemic lysozymes by immunoadsorption | |
| RU2140287C1 (ru) | Способ получения альбумина | |
| TW577924B (en) | A process for the production of virus-inactivated immunoglobuoin and albumin from frozen plasma | |
| RU2238106C2 (ru) | Препарат внутривенного противоаллергического иммуноглобулина и способ его получения | |
| Brummelhuis | Ethanol fractionation of human plasma: An overview | |
| RU2189833C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
| RU2492176C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ IgG, IgM И IgA ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ | |
| RU2006141874A (ru) | Препарат гетерологичного антирабического иммуноглобулина для внутривенного и внутримышечного введения и способ его получения | |
| WO2019070108A1 (es) | Proceso de alto rendimiento para la producción de antivenenos de fragmentos f (ab') 2 de anticuerpos | |
| Gammelgaard et al. | Aluminium in human albumin solutions |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ARMOUR PHARMACEUTICAL COMPANY |