JPS601135A - 免疫グロブリン−ｇ−含有フラクシヨン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、少なくとも９０％の七ツマー■ｇＧ分子から
なると共に、また少なくとも９５％のガン°７グロブリ
ンからなる静脈内適用用のヒトまたは動物の血漿から得
られる免疫グロブリン−Ｇ−含有フラクションに関する
。

免疫グロブリン含有製剤は原発性および続発性免疫欠損
症、脛−または低ガンマグロブリン血症、。

抗体欠乏症候群、ウィルス感染症または細菌感染症の場
合に適用される。

ヒトマたは動物の血漿から免疫グロブリン含有製剤を得
るには、例えばエタノール沈澱法のように種々の方法が
既に知られている（　Ｊ、Ｌ、０ｎｃｌｅｙ。

Ｍ、　Ｍｅｌｉｎ、　Ｄ、Ａ、　Ｒｉｃｈａｒｔ、　Ｊ
、Ｗ、　Ｃａｍｅｒｏｎ。

およびＰ、Ｍ、Ｇｒｏｓｓ　Ｊ、　Ａｔｎ、　Ｃｈｅｍ
、７１　、５４１（１９４９）、並びにエタノール変法
Ｈ０Ｆ、Ｄｅｕｔｓ（ｈ。

Ｌ、　Ｊ、Ｇｏｓｔｉｎｇ、　ＲｏＡ、Ａｌｂｅｒｔｙ
　ＢよびＪ、Ｗ、　Ｗｉ　Ｈｉ　ａｍｓ　。

Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｌｔｅｍ、　１６４　、　１０９（１
９６４）、およびＰ、　Ｋ１５ｔｌｅｒおよびＨ，Ｎ１
ｔｓｃｂ＋ｎａｎｎ、　Ｖｏｘ　Ｓａｎｇｕｉｎｉｓｕ
、４１４（１９６２））。

更にまた、硫酸アンモニウムおよびポリエチレンクリコ
ールを用いて血漿から免疫グロブリンをａＪさせる方法
が知られている（　Ａ、　Ｐｏｌ　ｓｏｎ、　Ｃ；。

（１９６４））。また他の方法ではイオン交換樹脂を用
いることが示唆されている（　Ｅ、　Ａ、Ｐｅｔｅｒｓ
ｏｎおよびＩ−１，Ａ、５ｏｂｅｒ、　Ｊ、Ａｎ、Ｃｈ
ｅｍ、Ｓｏｃ、７８．７５１（１９５゛６））。

これらの方法は、得られた製剤が筋肉内適用にしか適さ
ないので不利である。これらの製剤は、静脈内に適用す
ると血管作用性の効果のような望ましくない副反応を示
す。

従って、副反応または副作用を減じるために、ペプシン
、プラスミン、パパインなどのような易溶性のタンパク
質分解酵素で目的の免疫グロブリン含有製剤を処理する
努力が成されて来た（西独特許第１．１４８．０３７号
）′。然しなから、この処理によって免疫グロブリンの
分子構造が変化し、その結果、生物学的半減期が短縮・
される。また、酵素の残基が製剤中に残り、そのために
製剤を汚。

染することが明らかになった。タンパク質分解による開
裂が進行する危険性が大きく、従って貯蔵性に乏しい。

西独公開特許第２９３６０４７号に、易溶性のυゼ水化
物またはポリオールの存在下に硫酸アンモニウムとポリ
エチレングリコールとを組合わせて精製を行なう静脈内
適用可能な免疫グロブリン製ｊＧＩＪの製法が記載され
ている。血管作用性の副作用がとり除かれたことは事実
であるが、静注適用の場合は安全性および再現性の見地
がらなお改善されることが望ましい。

その他の先行技術の中で、日本特許公報に公開された特
許公告第５６−７７２１号および第５６−１５２１５号
、および西独公開特許第３２２０３０９号に記載の、静
注適用可能な免疫グロブリン製剤の製造法にも言及して
おく必要があろう。

処理は不動性のプラスミンまたは不動性のペプシンで行
なわれるが、この場合、製剤が好ましくない高い抗補体
活性を有するため、得られた結果はなお満足できない。

本発明は上述の不都合と困蕪とを回避しようとするもの
であって、ヒトまたは動物の血漿から、静注適用が可能
で副作用が無い免疫グロブリン倉荷フラクションを提供
することを目的としている。

除かれるべき副作用としては、白血球減少症ぢよび気管
支痙儀の副作用も含まれる。更にまた、本発明による免
疫グロブリン−Ｇ−含有フラクションは非常に低い抗補
体活性を示すものである。

この目的は、該フラクションが最低９０％は機能的に無
きすなＩＶＧ分子からなる本発明法により達成される。

機能的に無きすな１．Ｇ分子の測定はタンパク質入セフ
ァロース法に従って行なわれる（　ＦＥＢＳＬｅｔｔｅ
ｒｓ　、　２８巻、１９７２年、７３頁以下、Ｈｏｌｌ
ｊｅＪｍ、　Ｋ、ＨｊｅＪｍ　、Ｊ、５ｊ−ｏｑｕｊｓ
ｔ、　”　黄色ブドウ球菌から得られるタンパク質Ａ５
アフイニテイ・クロマトグラフィーによるその溶解およ
び免疫グロブリン類の単離用の免疫溶剤としてのその用
途つ。

この方法は黄色ブドウ球菌から得られるタンパク質Ａが
亜群サブグループ■ｇＧ１．２および４から成るＩ、Ｇ
　分子と相互作用を起こし、結合するという事実に基づ
いている。機能的に活性な位置はＩｇＧ　分子のＨ鎖に
属するＣＨ２およびＣＨ３部位である。

ゲル諷過法による分子量測定から、Ｖｅ／Ｖｏが１．３
０〜２．２０の混合画分をあるタンパク質濃度に調製し
、この製剤の蛋白質１０７１１＆をタンパク質Ａセファ
５φ　即ち不動化したタンパク質Ａｌ０ｍ１上でクロマ
トグラフする。結合したＩｇＧ１．２および４はクエン
酸ナトリウム・クエン酸緩衝液（ｐＨ３，０）で溶離さ
せる。次いで、結合したおよび非結合のＩｇＧを計算す
る。

好ましい実施態様として、本発明に係るフラクションは
Ｉ　Ｃｌ−１５０単位を中和するのに要するタンパク質
が４０〜以下とならない程度の低い抗補体活性を有する
。

この特徴的な特性の測定は、’　Ｐｕｂｌ　ｉｃ　Ｈｅ
ａｌ　ｔｈＭｏｎｏｇｒａｐｈ　”　ｐ６７４　；　”
標準補体固定法および微量試験ヘノ適応”　Ｗａｓｈｉ
ｎｇｔｏｎ、　（１９６５年〕、およびＥ、Ａ、　Ｋａ
））ａｌおよびＭ、　Ｍａｙｅｒ　；　”実験免疫化学
′第２版、Ｔｈｏｒｎａｓ　Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ　
（１９５１年）に従って行なわれる。

電気泳動法による測定で、本発明によるフラクションは
最低９５％のガンマグロＺ゛リンが検出される。この測
定はＭｉｃｈａｅｌ　Ｄ、　Ｇｅｂｏｔｔ　、ベックマ
ンマイクロゾーン電気泳動マニュアル、　Ｂｅｃｋｍａ
ｎＩｎｓｔｒｕ＋ｎｅｎｔｓ、　Ｉｎｃ、　（１９７７
−年）、０１５−０８３６３０−Ｃにより効果的に行な
われる。

更に、本発明により得られた免疫グロブリン−Ｇ−含有
フラクションの特徴は、その薬理学的性質にある。即ち
、以下に示す特徴的な成績によって示されるように、血
管作用性、白血球減少作用性および気管支痙東性物質を
実質的に含有していない、： ａ）　４匹の犬を使用した試験における平均値で示され
る血管作用性の効果、即ち、最高３０％の血圧の低下が
体重光たり５００ＭＱ／Ｋｇ以上の投与量でのみ初めて
検出でき、 ｂ）　４匹の犬を使用した試験における平均値で示され
る白血球減少効果、即ち、最高５０％の白血球数の減少
が体重光たり５００　＋＋ｙ／Ｋｇ以上の投与量でのみ
初めて検出でき、また ｃ）　４匹のモルモットを使用した試験における平均値
で示される気管支痙幸効果、即ち、最高３０％の呼吸圧
の増加が体重光たり５００　Ｍｌ／　／　Ｋｇ以上の投
与量でのみ初めて検出できる。

血管作用性効果は次の方法で測定する：実験動物（両性
の雑種〕は麻酔下に頚静脈および頚動脈を切開する。麻
酔前に最低１２時間の絶食時間を設ける。試験物質毎に
、筋注用の標準免疫クロプリン（″′標準物質′）を頚
動脈から投与し、体重光たり５０１１Ｑ／　Ｋｇの投与
量で最低３０％の血管作用性効果（血圧低下）を示ｔこ
とが保証された犬を４匹つつ必要とする。この筋注用標
準免疫グロブリンはＪ　、Ｌ、　０ｎｃｌｅｙ　、　Ｍ
、　Ｍｅｌ　ｉｎ、　ｌ）、Ａ。

Ｒｉｃｌｌａｒｔ、　、Ｊ、Ｗ、Ｃａｍｅｒｏｎ　−Ｍ
よびＰ、　Ｍ、Ｇｒｏｓｓが最初に示した方法に従って
調製する（　Ｊ、　Ａｍ。

ＣＣｌ１ｅ、Ｓｏｃ、ヱ１．５４１（１９４９））、標
準物質に対して何の反応も示さない犬は比較試験に使用
することはできない。

標準物質から１６０〜を採り、注射用蒸留水に溶解して
全ｔ　１　ｍｌとし、等強性ＮａＣｇ溶液で１６．７ｔ
ｑ　／　ｙｎｌに希釈する。溶解した材料は４時間以内
に使用する。

本発明による静脈注射用免疫グロブリン−Ｇ／を注射用
蒸留水１ｍｌ中に、タンパク質１６５πｙを含有するよ
うに溶解する。溶解した材料は４時間以内に使用する。

動物は不ンブタール（パルピッレート）の４０ｙｒｔｙ
　／　ｉ（ｇ、静注１回投与により麻酔し、分岐した外
頚静脈を下顎下縁の位置で切開し、これにカテーテルを
つなぐ。次いで、頚動脈を同様な皮膚切開により露出さ
せ、これにカテーテルをつなぐ。動脈の切開術施行後、
安定した初期値を得るため３０分間待機する。圧トラン
スジューサーを使用し、深部静脈カテーテルを介して中
心静脈血圧を測定し、また浅い動脈カテーテルを介して
動脈血圧を測定する。動脈カテーテルから、最初に本発
明の免疫グロブリン−Ｇ静注用を、次いで標準物質を注
射丈る口 実験を行なう全期間を通じて、動脈カテーテル・カラ圧
トランスジューサーにより収縮期および拡張期血圧を記
録する。

試験物質および標準物質を注射するのに先立って、血圧
平均値（収縮期および拡張期〕および白血球数の平均値
を測定する。試験物質の注射後２０分間の血圧を測定す
ることにより、最高の血圧低下を１則定する。

本発明による免疫グロブリン−Ｇ静注用の血管作用性効
果を、犬の体重光たり５００　Ｍ／／／Ｋｇを注射し、
４匹の犬の平均収縮期圧および拡張期圧の低下を筋注用
標準物質の血圧低下効果を％て比較することにより確認
する。

白血球減少活性の測定は次の手法により実施する： 試験動物（両性の雑種犬〕を麻酔し、頚静脈および頚動
脈を切開する。麻酔前に最低１２時間の絶食期間を設け
る。試験物質毎に、標準筋注用免疫グロブリン〔標準物
質〕を頚動脈から投与し、体玉当たり５０ｍｆ／／ＫＨ
の投与量で最低５０％の白血球減少症作用（白血球の減
少）を示すことが保証された犬を４匹づつ必要とする。

標準物質に対して何の反応も示さない犬は比較試験に使
用できない。

試験動物ぢよび試験物質の調枯は先に記したのと同様の
方法で行なう。

白血球数を調べるために血液検体を採取する。

最初の血液検体は、血液４０μｌ！をアイソトーンＩＩ
　（Ｃｏｕｌｔｅｒ　）　２０ｍｌおよびザポグロビ７
　（ｃｏｕｓｔｅｒ）６滴と混合し、クールター計数器
中で測定する。

その後、更に引続いて１０．１５．１６．１７．１８お
よび１９分後に血液検体を採取し、白血球数を６１１定
する。次に、静注用免疫グロブリンＧの゛免疫グロブリ
ン５００１１１＆／体重Ｋｇを頚動脈から９０秒以内に
速やかに注射する。注射後、１．２．３．４．５．７．
１Ｏ１１５および２０分後に更に血液検体を採取吏る。

２０分後、標準物質の免疫グロブリン５０■／体重職を
９０秒以内に注射する。

再び１．２．３．４．５．７．１０．１５および２０分
後に血液検体を採取する。

検体注射後、ｌ、２．３．４．５．７．１０゜１５およ
び２０分後に採取した血液検体を評価することにより、
白血球数の最大の減少値を確定する。

静注用免疫グロブリンＧの白血球減少効果は、それを犬
の体重光たり５００　ｆｆ＆／Ｋｇの割合で注射し、４
匹の犬の平均白血球減少を筋注用標準物質の白血球減少
効果と％で比較することにより測定する。

モルモットにおける気管支痙肇（呼吸気圧増加〕効果は
次の手法により実施される： 試験動物（雄モルモット）は麻酔下に喉頭部の気管を切
開する。挿管後、レスピレータを使用し、試験動物はそ
の体重に相応した呼吸量で、８０７分の呼吸数で呼吸さ
せる。次いで同様の皮膚切開により頚動Ｊ派を露出させ
る。検体物質を動脈内投与し、呼吸圧を連続的に測定す
る。

この試験には、実験室で飼育した体重５００〜７００ｇ
の雄性モルモットを使用する。試験物質毎に、標準筋注
用免疫グロブリン（標準物質）を頚動脈的に適用した場
合１体重光たり５０’ｌｌＦ／Ｋｇの投与量で最低３０
％の呼吸気圧の増加を示すことが保証された４匹のモル
モットを必要とする。

標準物質に対して何の反応も示さないモルモットは比較
試験に使用できない。

標準物質から１６０１１Ｉｇを採り、注射用蒸留水に溶
解して全ａｌゴとし、等損性ＮａＣ１溶液で１６、７　
ｍｆ／／　Ｍｌに希釈する。溶解した材料は４時間以内
に使用する。

本発明による静注用免疫グロブリン−Ｇを注射用蒸留水
ｌ　ｗｔｌ中にタンパク質１６５りを含有する様に溶解
する。溶解した材料は４時間以内に使用する。

動物を麻酔し、喉頭部の気管を切開し、これに気管カニ
ユーレを装着する。レスビレ−ターを使用し、試験動物
はその体重に相応した呼吸量で、８０７分の呼吸数で呼
吸させる。バーバードポン７’６８１をレスビレ−ター
として使用する。

その後、同様の皮膚切開により頚動脈を露出し、これに
カテーテルをつなぐ。呼吸気圧はＴ−字管で呼吸気管に
連結したトランスジューサーを介して効果的に記録され
る。

切開術施行後、安定した初期値を得るため少なくとも１
０分間待機する。その後、ゼロ点を定め、更に２〜３分
後に静注用免疫グロブリン−Ｇ１５０ｒＲｇ／体重Ｋｇ
を頚動脈的に９０秒以内にカテーテルから注入する。

２０分後に、体重当たり５０〜／Ｋｇの標準物質を９０
秒以内に頚動脈的。に注入する。

検体注射後２０分間の呼吸気圧の最大増加値をめ、これ
を初期平均値と比較する。

静注用免疫グロブリン−Ｇの気管斐痙彎効果を、モルモ
ットの体重当たり５００＃／Ｋｇを頚動脈的注 に注射し、４匹のモルモットの平均呼吸気圧を筋。

用免疫グロブリン−Ｇ（標準物質）の呼吸気圧増ＩＪ口
効果と饅で比較することにより確認する。

本発明に係る、最適の、副作用の無い免疫グロブリン−
Ｇ−含有フラクションは、ヒトまたは動物の血液から得
られた両分を、水不溶性担体材料と結合させた膵臓酵素
、例えばトリプシン、キモトリプシンまたは膵臓プロテ
アーゼで処理し、所望により、処理した画分を更に分別
し、濃縮に掛けることにより製造される。

水不溶性担体材料として、セファロース４Ｂゲルを使用
するのが有利である。

所望ならば、タンパク質沈澱剤を用いて望ましくない夾
雑物質を除去した後、水不溶性担体材料と結合させた酵
素で処理した免疫グロブリン含有画分から純化免疫グロ
ブリンを沈澱させ、最終製品に加工することができる。

特に、下記の精製手段および濃縮手段を組合わせること
により好結果が得られることがわかった。

・Ｏ″ＣＣ以下度でエタノールで処理することによりヒ
トまたは動物の血漿から免疫グロブリン含有沈澱を沈澱
させる； ・緩衝液を用いて沈澱を抽出し、更に、得られた溶液か
ら、エタノールで処理してペースト状免疫グロブリン濃
縮物を回収する； ・この濃縮物を透析によって精製する；・このようにし
て精製した免疫グロブリン含有画分を、約３７°Ｃに上
昇した温度で、トリプシン。

キモトリプシンまたは膵臓プロテアーゼから選ばれる不
動性酵素で処理する； ・このように処理したフラクションから、実質的にＩｇ
Ｇから成る精製免疫グロブリンを、タンパク質沈澱剤、
望ましくはポリエチレングリコールによって沈澱させる
；そして ・該沈澱を溶解し、その溶液を滅菌ｐ過し、最後に凍結
乾燥する。

本発明に係るフラクションの製造に関し、以下に作業手
順および実施例を挙げ、更に詳細に説明する。

不動性酵素の調製に関する作業手順。

作業手順　１： セファロース４ｎ−ゲル（ファルマシア）ＩＮを蒸留水
４ｅ中で洗滌後、ブロムシアン２００ｇのアセトニトリ
ル１００＋ｌ溶液とｐＨ１１，０で混合する。反応混合
物は水浴で冷却する。液層を除いた後、ゲルヲ０．２モ
ルＮ　ａ　ＨＣＯａ　ｌ　Ａ’に溶解したトリプシン８
００〜と混合する。結合しなかったトリフシンは、沖過
によって、ゲルに結合したトリプシンから分離する。

不動性トリプシンを１モルのグリシン溶液１ｅと混合し
た後、０．２モルＮ　ａ　ＨＣＯａ溶液でタンパク質が
無くなる才で完全に洗滌する。最後に不動性トリプシン
を０．９％ＮａＣ／溶液ｌｅに懸濁させる−これはその
まま免疫グロブリンとのインキュベーションに使用され
る。

作業手順　２ニ トリプシンの代わりに膵臓プロテアーゼ（メルク）を使
用し、作業手順ｌと同様の方法で不溶性酵素が製造され
る。

作業手順　３ニ トリプシンの代わりにアルファ・キモトリプシン（ジグ
マノを使用し、作業手順ｌを反復する。

免疫グロブリン−Ｇ含有フラクションの製造に関する実
施例・を゛以下に拳げる。

実施例１： ヒト血漿を８％エタノールとｐｌ−１７，２、−２℃の
温度で混合する。沈澱を分子し、エタノール濃度を２５
％まで上昇させ、同時昏こ温度を一６°Ｃまで低下させ
る。免疫グロブリンを含有する沈澱をリン酸・酢酸緩衝
液で抽出することにより更に精製し、ｐＨ５，４、−２
°Ｃの温度で１２％エタノールと混合する。

沈澱（アルファー、およびベーターグロブリンヲ合有〕
を捨’？ｉ。ＰＩ−１７，２、−１０°Ｃｏ）温度テ、
上澄液のエタノール濃度を２５％に上昇させる。

沈澱したペースト状の免疫グロブリンを採集し、エタノ
ールを透析により除去する。

その後、硫酸アンモニウム１７０ｆ／（ｌを透析物にｐ
ｌ−１６，２５で加え、沈澱を分離して除く。更に、　
ｐＨ，７，２で上澄液に硫酸アンモニウムを濃度２８０
９／（ｌになるまで加える。沈澱を水に溶解口、透析し
て硫酸アンモニウムを除く。

透析終了後、免疫グロブリン溶液のイオン強度を０．１
５に調節する。

作業手順ｌにより得られた不動性トリプシン３０肩ｌと
免疫グロブリン１００ｇを調製し、３７’Ｃで７２時間
処理する。不動性トリプシンを除いた後、処理した免疫
グロブリンを１３５ｆ、／ｅのポリエチレングリコール
４０００により沈澱させる。沈澱を０．９％Ｎ　ａ　Ｃ
ｌに溶解し、滅菌沖過し、容器に充填し、凍結乾燥して
、貯蔵できるようにする。

実施例２： 免疫グロブリン含有画分の回収は実施例１と同様にして
行なう。インキュベーションは、作業手順２によって調
製した不動性膵臓プロテアーゼを用いて行なう。免疫グ
ロブリン１．００１をゼラチン様不動性膵臓プロテアー
ゼ７０ｍ１で処理し、３７°Ｃで７０時間維持する。ゲ
ルを除いた後、上澄液に７５　ｆ／ｌのポリエチレング
リコール４０００を混合し、不純物を含む沈澱は捨てる
。

更に、上澄〆夜にポリエチレングリコール４０００を最
終飄度が８５　（１／　ｅとなるまで追加する。生成す
る沈１１ｉは捨てる。

ポリエチレンＪＡ度を、１３５　Ｆ／／ｌとなるまで増
加すると、精製免疫グロブリンが沈澱するので実施例１
と同様に貯蔵できるようにする。

実施例３： 免疫グロブリン−Ｇフラクションの回収を実施例１と同
様の方法で実施し、不動性アルファキモトリプシン処理
を３７°Ｃで７２時間行なう。

実施例１〜３に従い調製した本発明の免疫グロブリン−
Ｇ−含有フラクションのデータ、即ち、モノマーＩ　ｇ
　０分子の含量、機能的に損なわれていないＩ　ｇ　Ｇ
　分子の含有鼠、抗補体活性および電気泳動法により分
離されるガンマグロブリンの含量は次に記載したように
測定した。これらの値は下記の諸表および添付した第１
図に示す。

第１図は指示した条件下での１５０〜４００ｍ１の溶出
曲線および相対的溶出容置Ｖ　ｅ／Ｖ　ｏ　を示す。

曲線は個々の山分の２８０　ｎｍの吸光度で測定したタ
ンパク質含阻を示している。

下記の第１表は、曲線で包含される個々の部分について
実施されたゲル浸透クロマトグラフィーによるＶｅ／Ｖ
ｏ比を示す。これより明らかなように、１．３０〜２．
２０（７）範囲＋７）　Ｖｅ／Ｖｏ　比ハ９０　％以上
である。

第１表　ゲル浸透クロマトグラフィー Ｖｅ／Ｖ。

１．０−１．２９　１．３０−２．２０　２．２１−２
．７０実施例１　痕跡　９２．４％　７．６％実施例２
　９３．２％　６．８％ 実施例３　９１．８％　８．２％ 第２表はタンパク質Ａに結合しているＩ　ｇ　Ｇ　分子
と結合していないＩ、０分子の割合を示したもので、結
合型分子は機能が損なわれていない分子に相当する。こ
れより明らかなように、全フラクションの中の機能的ｔ
こλ（ξきずなＩ、０分子の含量は９０％以−Ｆである
。

第２表　タンパク質入−セファロースを用いたアフイニ
テイクロマトグラフイー 第３表は抗補体活性と電気泳動の値を示しており、この
表から、すべての実施例の製剤ではＣＨ−５０単位を中
和するのに免疫グロブリン−Ｇ含有フラクション５　Ｑ
　ＴＪＩｆ／以上の抗補体活性価を必要とし、また電気
泳動の測定から、純粋なガンマグロブリンの値は９７％
以−りであることが明らかになった。

第３表 実施例１〜３に従い調製した本発明に係る免疫ガンマグ
ロブリン−Ｇフラクションの薬理学的特性値およびデー
タ、即ち犬の試験による血管反応性の効果および白血球
減少効果、およびモルモットの試験による気管支連撃を
、先に記載した通りに測定した暮これらの値を以下の表
に示す。

第４表　本発明に係る製剤を体重Ｋｇ当たり５００りの
割合で注射した後の４匹の犬の初期値に対する平均血圧
の値（％） 第５表　本発明に係る製剤を体重Ｋｇ当たり５００■の
割合で注射した後の４匹の犬の初期値に対する平均白血
球数（％） 第６表　本発明に係る製剤を体重Ｋｇ当たり５００ｍｇ
の割合で注射した後の４匹のモルモットの初既知の筋注
用免疫グロブリン含有製剤に対して本発明の静注用免疫
グロブリン−Ｇ含有フラクションが優れている点は、添
イリシた第■〜第■図から明らかとなる。

第Ｈ図には４匹の犬の各収縮期および拡張期に測定した
血圧曲線を表わしており、横軸には各動物の体重光たり
の投与量をｙｔｔｙ　７Ｋｇで示した。実線で表わされ
るＡ−Ｂの部分は、本発明の静注用免疫グロブリン−Ｇ
含有製剤の投与による血圧の推移に４：目当する。Ａ、
Ｃの曲線の推移（実線および破線）は筋注用標準物質の
適用による血圧曲線の推移に相当する。筋注用標準物質
は体重光たり５ｎｒｙ　／　Ｋｇの適用により血圧が３
０％低下するのに対し、本発明による製剤は体重光たり
５００　Ｍ！／Ｋｇの投与において初めて同じ低下が見
られる。即ち、他はすべて同じ条件下で、本発明による
静注用免疫グロブリンは、既知の筋注用製剤よりも最低
１００倍小さい血管反応性の効果を有することは明らか
である。

第１１１図は太における白血球減少効果の、本発明によ
る静注用製剤と標準化した筋注用標準製剤との比較を４
匹の動物の平均で明らかにしたものである。Ａ、Ｂの実
線部分は静注用免疫グロブリン−Ｇ含有製剤を表わし、
Ａ、Ｃの曲線（実線および破線〕は筋注用標準物質の適
用による血圧曲線の推移を示している。筋注用標準物質
の適用により白血球は５０％だけ減少するが、一方、本
発明に係る製剤の適用では体重光たり５００７１７１１
／　Ｋｇの投与量で初めてこの減少が見られる。即ち、
他の条件をすべて同じにすると、静圧用免疫グロブリン
−Ｇｉ有製剤は既知の筋注用製剤よりも白血球減少効果
が最低１０００倍少ないことが明らかであるＯ 同様に、第１Ｖ図はモルモットにおける気管支連繋効果
の比較試験を表わしており、Ａ、Ｂの曲線（実線〕の推
移は本発明による静圧用製剤に１・目当し、Ａ、Ｃの曲
線（実線および破線）の推移は標準化した筋注用製剤に
（°目当している。呼吸気圧の３０％の増加は、既知の
筋注用製剤では体重光たり２ｍｌ／／Ｋｇの投与量で既
に発現するが、−万、静性用静注では同様の増加は体重
当たり５００Ｍｇ／Ｋｇの投与量で初めて観察される。

即ち、本発明に係る製剤の気管支痙ψ効果は２５０倍低
い。

化学的組成２よび薬理的性質により、本発明に係る免疫
グロブリン−Ｇ＠有フラクションは原発性および続発性
免疫欠損症、無−または低ガンマグロブリン血症、抗体
欠乏症候群、ウィルス感染症または細ｍ惑染症、および
自己免疫疾患または免疫複合体病の治療への使用に著し
く適している。

【図面の簡単な説明】

は筋注用標準物質および本発明の静注用免疫グロブリン
−Ｇ含有製剤の投与量と収縮期血圧（Ａｌおよび拡張期
血圧（Ｂｌとの関係を示すグラフ、第■図は筋注用標準
物質および本発明の静注用免疫グロブリン−Ｇ含有製剤
の投与量と白血球数の減少との関係を示すグラフ、第■
図は筋注用標準物質および本発明の静注用免疫グロブリ
ン−Ｇｆｉ有製剤の投写機と呼吸圧の変化との関係を示
すグラフである。 特許出願人　イムノ・アクチェンゲゼルシャフト・フユ
ール・ヘミシューメデイ ツイニツシエ・プロデュクテ 代　理　人　弁理士　青白　葆　外１６第１　図 第■図（Ｂ） 昭和５９年７月１２日 １、事件の表示 昭和５９年特許願第　５０８０３　万 ２、発明の名称 免疫グロブリン−Ｇ−含有フラクション３補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　オーストリア国１２２１）ウィーン、インダスト
リーストラッセ°７２番 名称　イムノ・アクチェンゲゼルシャフト・７ユール・
ヘミシューメチ゛イツイニツシェ・プロデュクテ４、代
理人 住所　大阪府大阪市東区本町２−ＩＯ木釘ビル内７、補
正の内容 １、明細書中、次の箇所を補正致します。 １）発明の詳細な説明の欄 イ）第２５頁第３行記載の「第■〜第■図」を、「第２
〜第４図」と補正する。 口）第２５頁第５行記載の「第■図」を、「第２図」と
補正する。 ハ）第２５頁第２０行記載のｒｔＩ＆ｎｔ図」を、「第
３図」と補正する。 二）第２６頁第１４行記載の「第■図」を、「第４図」
と補正する。 ２）図面の簡単な説明の欄 イ）Ｊ３２７頁第１１行記載のＩｆｊＳＩ図」を、［１
図」と補正する。 口）第２７頁第１２行記載のｒｍｕ図１を、「第２図」
と補正する。 ハ）第２７頁第１５行記載のｒＰｔＳ１１１図」を、「
第３図」と補正する。 二）第２７頁第１８行記載の「第■図」を、「第４図」
と補正する。 ２、図面を別紙の通り補正致します。 以上 第１図 第２図（Ａ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■、少なくとも９０゛％のモノマー免疫グロブリン゛−
   Ｇ分子からなると共に、また、少なくとも９５外のガン
   マグロブリンからなる静脈投与に適したヒトまたは動物
   の血漿から得られる免疫グロブリン−Ｇ−含有フラクシ
   ョンであって、少なくとも９０％の機能的に無きずな免
   疫グロブリン−０分子を含有することを特徴とする免疫
   グロブリン−Ｇ−含有フラクション。 ２、　該フラクションが、 謹）犬の試験において、４匹の動物の平均値で。 最高３０％の血圧低下を示す血管反応性の効果が、体嘆
   当たりｓ　ｏ　ｏ　ＦＮｙ／ＫｇＪｌ上の投与量でのみ
   初めて検出でき、 ｂ）犬の試験において、４匹の動物の平均値で、最高５
   ０％の白血球数の減少をボす白血球減少効果が、体改当
   たり５００〜／　Ｋｇ以上の投与量でのみ初めて検出で
   き、また リ　モルモットの試験において、４匹の動物の平均値で
   、最高３０％の呼吸気圧の増加を示す気管支痙彎効果が
   、体電当たり５００〜／Ｋｇ以−ヒの投与量でのみ初め
   て検出できる、という特徴を持った実質的に血管反応性
   および白血球減少作用性、並びに気管支痙十性の物質を
   含有しない第１項に記載した免疫グロブリン−〇−含有
   フラクション。 ３、原発性および続発性免疫欠損症、無−また　゛は低
   ガンマグロブリン血症、抗体欠乏症候群、ウィルス感染
   症または細菌感染症、並びに自己免疫疾患および免疫複
   合体病の治療に使用される第１項または第２項に記載し
   た免疫グロブリン−Ｇ−含有フラクションを必須成分と
   する医薬。 ４、原発性および続発性免疫欠損症、部−または低ガン
   マグロブリン血症、抗体、欠損症候群、ウィルス感染症
   または細菌感染症、並びに自得免疫疾患ぢよび免疫複合
   体病の治療を目的とする第１項または第２項に記載した
   免疫グロブリン“Ｇ−含有フラクションの使用方法。