JPH0579649B2

JPH0579649B2 -

Info

Publication number: JPH0579649B2
Application number: JP57186885A
Authority: JP
Inventors: Kei Enu Jii Hooru; Ei Fuooneru Maikeru
Original assignee: Cutter Laboratories Inc
Current assignee: Bayer Corp
Priority date: 1981-10-29
Filing date: 1982-10-26
Publication date: 1993-11-04
Also published as: ATA394982A; DE3238620A1; US4391801A; JPS5883630A; AT385661B

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規の安定な血漿蛋白質（plasma
protein）画分及びその製造方法の提供に関する
ものであり且つそれを目的としている。特に本発
明の目的は、実質的に酢酸イオンを含有していな
い（人の）血漿蛋白質画分及び実質的に血圧降下
成分を含有していない、かかる画分を取得するこ
とにある。本発明のその他の目的は、以下の説明
によつて明白となるであろうが、この説明中で部
及び百分率は、特に他のことわりがない限りは重
量による。熱処理した人の血漿蛋白質画分（PPF）、たと
えば米国特許第2958628号に記載のもの、たとえ
ばシヨツク、低蛋白血症（hypoprote−inemia）
などのような、血漿増量剤の使用を必要とする状
態の治療用として広く用いられている。通常の人
の保存血漿は、どちらかというと高い割合で相同
血清黄疸（homologous serum jaundice）のビ
ールスによる感染をもたらすということが見出さ
れて以来、安定な人のPPFの必要が認識されて
いる。大部分の場合に、PPFは、副作用を最低限と
するために、低速度で患者に投与する。しかしな
がら、最近、比較的高い速度でPPF溶液を注入
した患者に、著るしい血圧の降下と冠状動脈流の
変化（以下血管拡張活性（vasodepressor
activity）と記す）が認められた。この血管拡張
活性は多くの患者に対してきわめて危険である。人のPPF中の“血管拡張物質”（depressor
substance）の存在は、米国特許2958628号（以
下′628と記す）中に認められている。血管拡張活
性は画分−１によるものとされ、ヒンクら
〔Hink et al，Vox Song.，２，174〜186
（1957）〕はPPFの溶液からの画分−１の除去
は血管拡張活性の低下した材料を与えることを記
している。血管拡張活性の低下は米国特許第3876775号
（以下′775と記す）によつてもまた達成された。
この特許の発明者は、血圧拡張物質は1000〜
10000の分子量を有するポリペプチドであつて、
主として殺菌のためにPPF溶液を加熱する間に
生じるものと記している。′775の方法において
は、熱処理したPPFの溶液を、表面活性吸着剤、
陽イオン交換樹脂、限外過膜またはゲル過粒
子と接触させている。米国特許第4251510号においては、蛋白質画分
に血管拡張活性を付与することが認められている
ブラジキニン、キニノゲン及びプレカリクレイン
活性化物質を実質的に含有していない血漿蛋白質
画分を記している。この特許の方法においては、
ヒンクの上澄液プラスを、中性で、珪酸質物
質によつて、固有のキニノゲンのブラジキニンへ
の完全な転化を生じさせるために充分な時間にわ
たつて処理する。次いで、ヒンクの画分−１か
ら分離したのち、血漿蛋白質画分を再構成し、カ
ルボキシペプチダーゼによるブラジキニンの実質
的に完全な分解を生じさせるために充分な時間保
ち、次いで限外過及び／または透析過によつ
て、エタノール及び残存ブラジキニンを除去す
る。次いで、残留液をカプリル酸ナトリウム、Ｎ
−アセチル−dl−トリプトフアン、炭酸ナトリウ
ム、塩化ナトリウム、及び酢酸ナトリウムで構成
せしめる。最近、ジヤーナルオブダイアリシス、第２
巻、第３号、235〜242頁（1978）及びトランスア
クシヨンオブザアメリカンソサエテイー
オブアーテイフイシヤルインターナルオ
ルガンス、第23巻、399〜405頁（1977）中で、腎
臓疾患の血液透析治療における固定ベースとして
用いるときに、酢酸イオンが血圧の低下を生じさ
せることが示された。酢酸ナトリウムは、現在のPPF（人の）の工業
的な製造において用いられている。酢酸ナトリウ
ムは、安定剤と共に、溶出液−１から沈澱させ
た湿つたペーストの乾燥によつて得た乾燥粉末の
溶液に対して、人のPPFの溶液の濃度を医療用
途に必要な範囲内、すなわち、１リツトル当り
130〜160ミリ当量に増大させるために加える。われわれは、PPFの溶液中の酢酸イオンの存
在は血管拡張作用をもたらすことを見出した。い
いかえれば、人のPPF中で、公知の血管拡張剤
の不在において、酢酸イオンは血圧の低下と冠状
動脈流の増大を与える。この問題に対する一解決
方法は、PPFの製造中の酢酸イオンの添加を避
けて、たとえば塩化ナトリウムのような、別のナ
トリウムイオン源をPPFの溶液中に加えること
によつて、そのナトリウム濃度を上記の範囲内に
上げるということであつた。しかしながら、われ
われは、このようにして得た材料はなお血管拡張
作用を示すことを見出した。われわれの研究は、上澄液−１から沈澱させ
た人のPPFの溶液を、そのナトリウムイオン濃
度の調節のために酢酸ナトリウムを添加しなかつ
た場合にも、その溶液は驚くべきことに約2.5〜
５ミリ当量／の酢酸イオン（内因性酢酸イオ
ン）を含有していることを明らかにした。この内
因性酢酸イオンは、人のPPF製造のための特許
の方法、すなわち、′628の方法において用いた酢
酸塩緩衝剤系から由来するものと思われる。上記の問題に対処して、われわれは血管拡張活
性を実質的に有しておらず且つ酢酸イオンを実質
的に含有していない、すなわち、PPF溶液１リ
ツトル当り約２ミリ当量未満の酢酸イオンを含有
するに過ぎない、すなわち血管拡張量の酢酸イオ
ンを含有していない、安定な人のPPFを調製し
た。本発明の方法においては、酢酸イオンを含有す
る人のPPFの溶液に対して透析過を適用する
ことによつて、酢酸イオンを除去する。次いで、
人のPPFを安定化し、酢酸イオンの不在で必要
な特定の濃度としたのち殺菌する。本発明の第一の利点は、この改良した人の
PPFは、有害な血管拡張作用を示すことなく比
較的高い注入速度で患者に投与することができる
ということである。その結果として、本発明の方
法によつて製造したPPFの溶液は、一層広い用
途に使用することができ、且つ一層多くの人がこ
の有用な血漿増量剤による利益を享受することが
できる。本発明の方法のための出発材料は、血管拡張量
の酢酸イオンを含有する血漿蛋白質画分である。
たとえば、好適な出発材料は′628の方法（参考の
ためにここに挙げる）によつて取得した上澄液
−１から沈澱させた（人の）血漿蛋白質画分であ
る。血漿蛋白質画分（人）、すなわちPPF（人）
は、米国食品及び医薬品局（FDA）21CFR64090
により′628の製品に対して適用された公式名であ
る。PPF（人）は、少なくとも83％のアルブミン
と17％以下のアルフア及びベータグロブリン並び
に１％未満のガンマグロブリンを含有する。本発
明の方法は、たとえばリバノール硫酸アンモニウ
ム方法のような他の方法によつて、且つ公知の他
の源泉、たとえば全血及び胎盤血から、製造した
血漿蛋白質画分に対しても、適用することができ
る。通常は、人の血漿蛋白質画分は、肝炎の危険
を避けるために、すなわち、非肝炎感染性ならし
めるために、何らかの安定剤の存在で殺菌（熱処
理）する。本発明の方法の適用に際しては、′628の上澄液
−１を、先ずその上澄液のエタノール含量を約
30パーセントとし且つ公知のようにしてPHを約
4.6に下げることによつて処理して、血漿蛋白質
画分の沈澱したペーストを取得する。このペース
トと薬剤学的に受容しうる水中に懸濁させると、
後にそれは溶解する。本発明の方法に従つて、こ
の溶液に公知の手順による透析過を施す。その
ためには、溶液を、10000の分子量カツトオフ値
を有する膜、すなわち、約10000よりも低い分子
量を有する物質は透過するが約10000よりも高い
分子量を有する物質は透過させない膜を通過させ
る。限定する目的なしに例として挙げると、本発
明のこの段階において使用することができる適当
な膜は、アミコンPM10及びアミコンUM10（アミ
コンコーポレーシヨン、レキシントン、マサチユ
ーセツツ）、ミリポアPTGC（ミリポアコーポレ
ーシヨン、ベツドフオード、マサチユーセツツ）、
ロミコンPM10（ロミコンコーポレーシヨン、
ウイコバーン、マサチユーセツツ）などである。
一般に、溶液は、混合物の凍結温度よりも高いが
細菌の生長を促進するほど高くはない温度、すな
わち、約０〜35℃、好ましくは２〜10℃の範囲の
温度で、膜を透過させる。酢酸イオン濃度が約２
ミリ当量／未満、好ましくは１ミリ当量／未
満、更に好ましくは人の血液血漿中に一般に認め
られる濃度、すなわち、0.2〜0.65ミリ当量／、
に低下するまで透析過を継続する。一般に、１
〜24時間がこの結果を達成するために充分であ
る。この時間は試料の量と膜の表面積に依存し、
試飲量が大で且つ表面積が小さいほど、透析過
時間が長くなる。この間に、当初の溶液、すなわ
ち、透析過の適用前の溶液１部当りに約３〜７
部の透析過液を集める。われわれは、当初の溶
液１部当りに５部の透析過液を集めたのちに、
透析過は99％を超える効率となることを認めて
いる。残留液は、酢酸イオンを実質的に含有して
いない人のPPFを含有する。残留液を、次いで“最終容器”状態を確立する
ために、次のように処理する：PPF（人）製品を
安定化するために、カプリル酸ナトリウムとＮ−
アセチル−dl−トリプトフアンを、FDAによつ
て制定された限界に従つて、残留液に加える。更
に、炭酸ナトリウムを加えることによつてPHを少
なくともFDAの制定した範囲内、すなわち、約
6.4〜7.4、好ましくは約6.7〜7.3に調節する。最
後に、FDAが規定するように、約130〜160ミリ
当量／のナトリウムイオン濃度を与えるために
十分な塩化ナトリウムを残留液に加える。特に、
安定化及びPHとイオン濃度の調節は、酢酸イオン
の不在において行なうことに注意すべきである。このようにして得た残留液及び生成物は、それ
ぞれの物質について下記の濃度を有している：ナ
トリウムイオン、130〜160ミリ当量／；塩素イ
オン100〜150ミリ当量／；カプリル酸イオン、
3.2〜4.8ミリ当量／；Ｎ−アセチル−dl−トリ
プトフアンイオン、3.2〜4.8ミリ当量／；カリ
ウムイオン２ミリ当量／未満；蛋白質、4.7〜
5.3％；及び酢酸イオン、約２ミリ当量／未満、
残留液は、１当り約0.5g以下の珪藻土の存在
で、非アスベストフイルターを通じて過するこ
とによつて、明澄化する。明澄化した溶液を少な
くとも約48時間約２〜10℃に保ち且つ55〜65℃に
約２〜３時間加熱したのち、凍結させずに10℃以
下に冷却する。熱処理した溶液を、通常は約0.20
ミクロンの大きさの絶対フイルターを通じる過
によつて無菌とする。無菌の全材料を無菌の最終
容器中に無菌的に入れ且つ約60℃に約10時間加熱
してそれを殺菌する。 ′628の手順によつて得た溶出液−１からの沈
澱後に、PPF（人）のペーストを乾燥し、次いで
乾燥した粉末の、通常は約５％PPF（人）の、水
溶液を調製することもまた、本発明の範囲内であ
る。このPPF（人）の水溶液に上記のような透析
過を施して、酢酸イオン濃度を約２ミリ当量／
未満、好ましくは１ミリ当量／未満に低下さ
せる。次いで、溶液を安定化し、且つPPF（人）
の懸濁液に対して先に記したように、適当なPHと
イオン濃度に調節する。然るのち、溶液を前記の
ように加熱して、それを殺菌する。比較的好適性の小さい本発明の実施形態におい
ては、前記のペーストまたは粉末を水溶液として
処方して、それを適当な試薬の添加によつて最終
容器条件とし、明澄化したのち、減菌過する。
溶液を約60℃で約10時間加熱して、それを殺菌す
る。殺菌後に溶液を前記の条件下に透析過し
て、実質的に酢酸イオンを含有しないようにす
る。最終容器条件を再び確保して、材料を無菌の
最終容器中に入れる。生成物中の酢酸イオンの不在を確実とするため
の別の方法は、′628の方法の全体にわたつて非酢
酸緩衝系を用いることである。いいかえれば、′
628のPH調節段階において、同特許の方法の酢酸
ナトリウム−酢酸系の代りに、薬剤学的に許容し
うる非酢酸緩衝系を用いる。このようにして、約
２ミリ当量／未満の酢酸イオン濃度を有する安
定な人のPPF生成物を取得することができる。いうまでもなく、たとえばブラジキニン、プレ
カリクレイン活性化物質などのような公知の血管
拡張因子を、必要に応じて除去することによつ
て、生成物が実質的に血管拡張活性を有していな
いことを確実にすることは重要である。これは、
たとえば従来の文献の記述に際して先に参照した
もののような公知の手順によつて達成することが
できる。透析過手順は、ブラジキニンを含有す
るPPFからそれを除くということに注意するこ
とは重要である。実施例本発明を、安芸の例証として実施例によつて、
更に実証する。これらの実施例において研究した
血漿蛋白質画分は、ヒンクの方法（′628）によつ
て取得したPPF（人）である。この生成物は、こ
こに参考として挙げる、連邦規定の法規の題目21
の640.91及び640.92項中に示されるような組成物
に対する規格に合致する。動物モデル：生理学的実験においては、犬を、30mg／Kgのナ
トリウムペントバルビタール（ネムブタール、ア
ボツトラボラトリーズ）の静脈内注射によつて
麻酔し、挿管し、仰臥させ、且つ室内空気を送つ
た。右側大腿部の静脈切開を行ない、且つ静脈と
動脈の両方にカニユーレを挿入した。前者にスト
ツプコツクを取付けて、試験溶液を、追加の麻酔
剤と共に、その中に送り、後者に全身的な血圧の
記録のためのグラス７型ポリグラフと適当な増幅
器に接続したスタツトハムp23db血圧変換器を取
付けた。左胸を開いて、左前の降下する冠状動脈に、ス
タツトハム流量計のプローブを取付けた。このプ
ローブを、ポリグラフチヤート上に図を画く出力
を有するスタツトハムPS2002型血流計に接続し
た。系が安定状態に達したとき、少なくとも５分
の間隔を置いて、静脈中に60ml／分の速度で注入
を行なつた。正確な評価を得るために、すべての
結果を、比較対照値の百分率として表わした。酢酸イオンの分析酢酸イオンは、バーグマイヤー（“酵素的分析
方法”、第１巻112頁、1974）に記されている酵素
的な分析法によつて定量した。これは酢酸塩のア
セチル−補酵素Ａへの転化に基づいており、次い
でそれをオキサロ酢酸塩と反応させて、クエン酸
とする。酵素反応におけるニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドの還元による340nmにおける吸
光度の増大は、酢酸塩濃度に比例する。実施例１ ′628の生成物中の内因性酢酸塩 ′628の生成分を多くの実験（Ａ−Ｆ）で調製
し、それぞれを上記の方法によつて酢酸イオン濃
度に対して分析する。その結果を下表に要約す
る。試料酢酸イオン（ミリ当量／）Ａ 3.56 Ｂ 3.22 Ｃ 3.61 Ｄ 2.44 Ｅ 2.51 Ｆ 4.75 実施例２透析過と限外過の比較特許の方法に従つて、′628の製品を、アセトン
洗浄し、風乾した粉末として、製造した。注射用
の水柱のこの粉末の５％溶液（２）、試料Ｇ、
を調製した。この溶液の１部分（500ml）（試料）を、′775
の実施例９に略述した手順に従つて限外過にか
けた。限外過の間に溶液の量は100mlに減じた。上記の溶液の500mlずつの２部分を、アミコン
PM10膜を用いて透析過した。透析過は、全
体でそれぞれ６〔試料Ｈ(2)〕及び５〔試料Ｈ(1)〕容
量の交換のために、注射用の水に対して行なつ
た。各試料についての酢酸イオン濃度を、前記の方
法によつて定量した。その結果を下表に要約す
る。試料酢酸イオン濃度（ミリ当量／）Ｇ出発材料 2.95 Ｈ透析過 (1) ５容量の交換 0.59 (2) ６容量の交換 0.15 Ｉ限外過 1.97 実施例３実施例Ｇ及びＨ(2)の血管拡張活性を、前記の動
物モデルを用いて測定した。10ミリ当量／（試
料Ｊ）及び20ミリ当量／（試料Ｋ）の酢酸ナト
リウム（NaAc）の添加を伴なう試料Ｇをも試験
した。結果を下表に示す。比較としてはアルブミ
ン（人）（５％）を用いた。

【表】

Claims

【特許請求の範囲】１ 83パーセント以上のアルブミンと17パーセン
ト以下のアルフア及びベータグロブリンから成
り、酢酸イオン濃度が血漿蛋白質画分１リツトル
当たり２ミリ当量未満である安定な人の血漿蛋白
質画分。２さらに血管拡張活性を有していない、特許請
求の範囲第１項記載の画分。３更に他の血管拡張成分を含有していない、特
許請求の範囲第１項記載の画分。４更に安定剤を含有する、特許請求の範囲第１
項記載の画分。５安定剤がアセチルトリプトフアンナトリウ
ム、Ｎ−アセチルトリプトフアン及びカプリル酸
ナトリウムから成る群から選ばれる特許請求の範
囲第４項記載の画分。６さらに非−肝炎伝染性である、特許請求の範
囲第１項記載の画分。７ 83パーセント以上のアルブミンと17パーセン
ト以下のアルフア及びベータグロブリンから成
り、酢酸イオン濃度が血漿蛋白質画分１リツトル
当たり２ミリ当量未満である無菌水溶液状の安定
な人の血漿蛋白質画分。８血管拡張活性を有していない、急速な静脈内
注入に適する、特許請求の範囲第７項記載の無菌
水溶液状の安定な人の血漿蛋白質画分。９５パーセントの安定な血漿蛋白質を含有す
る、特許請求の範囲第７項記載の無菌水溶液状の
安定な人の血漿蛋白質画分。１０ 6.4〜7.4のPH及び130〜160ミリ当量／１の
ナトリウムイオン、100〜150ミリ当量／１の塩素
イオン、血漿蛋白質画分を安定化する量のカプリ
ル酸イオン及びＮ−アセチル−d1−トリプトフ
アンイオン、２ミリ当量／１未満のカリウムイオ
ンを包含し且つ4.7〜5.3パーセントの蛋白質を含
有する組成を有する、特許請求の範囲第７項記載
の無菌水溶液状の安定な人の血漿蛋白質画分。１１酢酸イオン濃度が0.2〜0.65ミリ当量／１
である、特許請求の範囲第７項記載の無菌水溶液
状の安定な人の血漿蛋白質画分。１２血管拡張活性を有していない、特許請求の
範囲第７項記載の無菌水溶液状の安定な人の血漿
蛋白質画分。１３他の血管拡張成分を含有していない、特許
請求の範囲第７項記載の無菌水溶液状の安定な人
の血漿蛋白質画分。１４ 83パーセント以上のアルブミンと17パーセ
ント以下のアルフア及びベータグロブリンから成
り、酢酸イオン濃度が血漿蛋白質画分１リツトル
当たり２ミリ当量未満である安定な人の血漿蛋白
質画分の製造方法において、酢酸イオンを含有す
る安定な人の血漿蛋白質画分の水溶液を、酢酸イ
オンの通過は許すが、該血漿蛋白質のすべての通
過を阻止する能力を有する透析濾過膜と、溶液中
の酢酸イオン濃度が血漿蛋白質画分の水溶液１リ
ツトル当たり２ミリ当量未満になるまで１〜24時
間接触させる段階を包含することを特徴とする方
法。１５透析濾過膜が10000未満の分子量を有する
物質の通過は許すが、10000以上の分子量を有す
る物質の通過は阻止する能力を有するものであ
る、特許請求の範囲第１４項記載の方法。１６更に該水溶液を、膜との接触後に、60℃の
温度において、加熱して殺菌する段階を包含す
る、特許請求の範囲第１４項記載の方法。１７酢酸イオンを包含する安定な人の血漿蛋白
質画分の水溶液を、酢酸イオンの通過は許すが、
該血漿蛋白質のすべての通過を阻止する能力を有
する透析濾過膜と、水溶液中の酢酸イオン濃度が
0.2〜0.65ミリ当量／１に減少するまで１〜24時
間接触させる、特許請求の範囲第１４項記載の方
法。