HU182554B - Process for producing preparation of serum protein for intravenous application - Google Patents
Process for producing preparation of serum protein for intravenous application Download PDFInfo
- Publication number
- HU182554B HU182554B HU78PA303A HUPA000303A HU182554B HU 182554 B HU182554 B HU 182554B HU 78PA303 A HU78PA303 A HU 78PA303A HU PA000303 A HUPA000303 A HU PA000303A HU 182554 B HU182554 B HU 182554B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- iii
- protein
- preparation
- albumin
- blood
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
- Y10S530/831—Cohn fractions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A találmány intravénásán alkalmazható szérumfehérje-készítmény előállítására szolgáló eljárásra vonatkozik, melynek során emberi vérfehérje-oldatból kiindulva olyan új, stabilizált, univerzálisan alkalmazható készítményt állítunk elő, amely vizes, izotóniás oldatban proteineket tartalmaz oldva, amely proteineknél a globulin albumin arány lényegesen magasabb megfelel a natív vérszéruménál.
A szérumfehérje-készítmények értékes vér-származékok. A bennük levő albumin transzport-proteinként szerepel. A készítmények olyan további funkcionális proteineket tartalmaznak, mint amilyenek a transzferrin, a cöruloplazmin, az aj-antitripszin és különösen az immunglobulinok. Jelentősek az antitestek, amelyek a γ-globulinban vannak. Az általuk kiváltott passzív immunizálás folytán alkalmasak profilaktikus felhasználásra és segítik a vérveszteség folytán legyengült szervezetet.
Az embereknél intravénásán alkalmazható szérumfehérje-készítménynek két fontos követelményt kell kielégítenie:
1. Az eljárásnak tárolható terméket kell eredményeznie;
2. A kórokozókat (vírusokat vagy baktériumokat) megbízhatóan semlegesíteni kell. Ez különösen a vírushepatitisz kórokozójára vonatkozik.
A szérumfehérje-készítményeket általában a stabil proteineknek a szervezet által elviselhető elektrolittartalmú vizes oldata formájában bocsátják rendelkezésre. Az összes protein-tartalom szokásosan 5 súlyszázalék (azaz 5000 mg 100 ml-re).
Az irodalomból ismeretes egy, intravénásán alkalmazható szérumfehérje-készítmény előállítására szolgáló eljárás, amelyben a szérumfehérjét többlépéses eljárással közvetlenül emberi vérből nyerik (W. Stephan; „Hepatitis-Free and Stable Humán Serum fór Intravenous Therapy; XXIV th Se. Meeting of the Blood Research Institute, Vox Sanguin., V. 20; 442— 457. oldalak).
Az ismert eljárás a következő lépésekből áll:
a) donor vérből az alakos elemek eltávolítása (vértestecskék, vérlemezkék) után természetes szérum nyerése és mintegy 7,5% protein-koncentrációjú 7,2—
7,8 pH-jú szérum nyerése.
b) A könnyen denaturálódó lipoproteinek eltávolítására 100 ml szérumra számolva 2,0 g Aerosil 2491/ 380-at adagolnak hozzá. (Az Aerosil a Degussa cég szilikagél termékének védjegye.) A szuszpenziót 45 °C-on 4 órán át keverik, lehűtik és az üledéket centrifugálják. A lipoproteinek kvantitatív mennyiségben megkötődnak az Aerosilen és elválnak a vérszérumtól.
c) Az oldatot a még jelenlevő lebegő részecskéktől finom szűrőn történő átszűréssel megszabadítják.
d) Sterilizálás céljából az oldathoz 5 °C-on 100 ml-re számolva 0,3 g β-propiolaktont adnak (pH = 8,0) és W-fénnyel besugározzák.
A nyert szérum összetétele a következő (100 ml térfogatban levő 5,000 g anyagra vonatkoztatva):
| Anyag: | Mennyi- Funkció: |
| albumin | ség: 3,060 g onkotikus hatékonyság, a |
| IgG | tápanyagok, vitaminok, hormonok, gyógyszerek szállítása 0,820 g vírusok és baktériumok |
| IgA | elleni antitest 0,185 g nyálkahártya védő anti- |
| IgM | test 0,075 g baktériumok és toxinok |
| prealbumin | elleni antitest 0,017 g tiroxin megkötés |
| aj-antitripszin | 0,162 g proteolitikus enzimek in- |
| a2-makroglobulin | 0,141 g hibitorai |
| haptoglobin | 0,110 g a szabad hemoglobin |
| hemopexin | megkötése és szállítása 0,075 g a szabad hemin megkö- |
| transzferrin | tése és szállítása 0,195 g az Fe2·*· szállítása |
| cöruloplazmin | 0,014 g a Cu2+ peroxidázként |
| kolinészteráz | való szállítása 3,0 E/ml a szukcinilkolin hasítása. |
A táblázatból kitűnik továbbá az egyes szérumfehérje-készítmény komponensek funkciója is.
Az ismert eljárás szerint előállított készítmény a kereskedelemben kapható. Komplikációmentesen alkalmazható.
Az előállítás és alkalmazás szempontjából azonban hátrányos, hogy az értékes kiindulási anyag — emberi vér — folytán a készítmény nagyon költséges és nem áll kielégítő mértékben rendelkezésre, ezenkívül hogy a különösen hatásos IgG, IgA és IgM antitest-tartalom ezen anyagoknak az emberi vérben levő koncentrációjának megfelelően viszonylag csekély.
A 19 20 423 számú NSZK-beli közzétételi irat eljárást ismertet vérplazma és vérszérum frakcionálására, melynek során albumint, a- és β-globulint és hemopigmenteket állítanak elő. Az elválasztott frakcióban a fehérje-koncentráció víz hozzáadásával változtatható. A denaturált hőérzékeny globulinok és károsodott hemopigmentek elválasztását hőkezeléssel és hidrogénperoxidos kezeléssel végzik. Az eljárással tehát stabil plazma fehérjeoldatot kapnak, mely hemopigmenteket és hőre érzékeny globulinokat nem tartalmaz. Ezen szabadalmi leírásban nem tesznek említést a Cohn-frakciók keveréséről, és olyan szérum fehérje-készítmény .előállításáról, amelyekben a hatékony antitestek aránya — mely a gamma-globulintartalom függvénye — magasabb.
Az 572 745 számú svájci szabadalmi leírás eljárást ismertet plazma proteinek frakcionálására. Bizonyos globulinoknak a kiindulási anyagból polietilén-glikollal történő kiesapása után a csapadékot kation- illetve anioncserélőkön végzett abszorpciós és deszorpciós lépések után, majd ezt követő kicsapás után az egyes alkotórészeket az eluátumokból frakcionálják. így például stabil IgG-oldatot kapnak, amely klinikai célokra alkalmas. Ezen hivatkozás ugyancsak nem említ re3
-2182554 zisztenciafokozó szert, melyet a Cohn-eljárás frakcióiból állítanak elő.
A 161 940 számú magyar szabadalmi leírás szerint vérplazma protein frakciókat állítanak elő a proteinoknak az izoelektromos ponton történő egymás utáni kicsapásával, speciális kicsapószer (2-etoxi-6,9-diamino-akridin) alkalmazásával.
A fent hivatkozott irodalmi források egyike sem ismerteti a találmány szerinti eljárás lényegét, melynek során a Cohn-frakcionálási eljárás egyes frakcióinak keverésével állítottunk elő magas globulin-tartalmú és így javított hatású készítményt.
Ebből adódik az a feladat, hogy az intravénásán alkalmazható szérumfehérje-készítmény előállítására egy olyan eljárást dolgozzunk ki, melynél a kiindulási anyagok kevésbé költségesek és ritkák. Az eljárásnak lehetővé kell tennie, hogy olyan kiindulási anyagokat is felhasználjunk az értékes szérumfehérje-készítmények előállítására, amelyeket eddig nem, vagy csak nem kielégítően lehetett feldolgozni. További feladat, hogy a szérum hatékony antitest- vagy egyéb proteintartalmát specifikusan megnöveljük anélkül, hogy lényegesen növelnénk az előállítási költségeket.
Ezen feladat megoldása azáltal válik lehetővé, hogy a nevezett eljárásnál kiindulási anyag gyanánt olyan humán-vérplazma frakciókat alkalmazunk, amelyeket a humán-szérumból egy vagy több frakcionálási lépés alkalmazása után nyertünk. Ezek a lépések az egyes vérprotein-komponensek dúsítására, illetve izolálására szolgálnak, miközben ezek a komponensek lényegében véve natív formájukban megmaradnak. A találmány szerint úgy járunk el, hogy a Cohn-frakcionálási eljárás III/l és/vagy III/2 frakcióit, valamint az I, II és/vagy IV frakciókat valamely kémiailag és fiziológiailag megfelelő hordozóanyagban oly módon keverjük össze hogy az albumin-globulin arány 23—50:50—77 súly% között legyen, majd a kapott készítményt önmagában ismert módon tisztítjuk és stabilizáljuk.
A találmány szerinti eljárásnál a Cohn-féle vérfrakcionálásnál eddig nem vagy csak tökéletlenül tovább feldolgozható bizonyos frakciók felhasználhatók.
A Cohn-féle eljárás a vérplazma etanol lecsapószerrel, meghatározott hőmérsékleti, pH, ionerősség és etanol-tartalom értékek mellett történő frakcionálásán alapul. A Cohn-féle eljárás például a következő irodalmi helyeken található meg: <T. Amer. Chem. Soc., 72, 465—474 (1950), J. Amer. Chem. Soc., 68, 459—475 (1946), valamint a 2390074 és a 2469193 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírások.
A leíráshoz tartozó folyamatábrán bemutatjuk az egyes eljáráslépéseket. A folyamatábrán az „etanol... mindig térfogatszázalékokat jelent, amelyet 25 °C-on mérünk. A kiindulási plazmát véradók véréből nyerjük. Minden esetben 500 ml humán vért 50 ml 4%-os nátrium-citrát-oldatban fogunk fel. Először elválasztjuk a plazmától a vér alakos elemeit.
A folyamatábra „a” lépésében a plazmából eltávolítjuk a nyers fibrinogént oly módon, hogy hideg 53,3%-os etanolt adunk hozzá 8% koncentrációig. A hőmérsékletet. —2,5 °C—3,0 °C értéken tartjuk. 4
A „Pl” csapadékot — fibrinogén — centrifugálással távolítjuk el. Az ,,S 1” szupernatánst dolgozzuk fel tovább.
A „b” lépés ismét 53,3%-os etanolnak a felül levő ,,S 1” szupernatánshoz való hozzáadását jelenti egészen addig, míg a folyadékban 18—25% etanol-koncentrációt érünk el. A hőmérsékletet —5 °C-on tartjuk és a pH-értéket 5,8-ra állítjuk be. Kiválik a „P 2” csapadék, melyet II/III frakcióként vagy γ-globulinfrakcióként jelölünk. Ez a csapadék tartalmazza az immunglobulinokat és az egyéb fiziológiailag fontos proteineket. A „P 2” csapadékot —5 °C-on végzett centrifugálással távolítjuk el. A felül levő „S 2” szupernatánst dolgozzuk fel tovább.
A „e” lépés az „S 2” szupernatáns további kezelését tartalmazza. Az etanol-koncentrációt 40%-ra állítjuk be. A „b” lépéshez hasonlóan a hőmérsékletet —7°Cra és a pH-értéket 5,8-ra állítjuk be. Centrifugálás útján nyerjük a ,,P 3” csapadékot, amelyet IV-frakciónak is neveznek. Az utóbbi tartalmazza az a- és a β-globulinokat. A felül levő folyadékot, az ,,S 3” szupernatánst kezeljük azután tovább. Ehhez a következő körülményeket tartjuk be: hőmérséklet —7 °C, pH=4,8 és az etanol-koncentráció = 40%. Ekkor a „P 4” csapadék, az úgynevezett nyers albumin válik ki, amit önmagában ismert módon tisztítunk és sterilizálunk. A felül álló folyadékot, az ,,S 4” szupernatánst elöntjük.
A II/III γ-globulin-frakciót a következő lépésekkel dolgozzuk fel tovább:
A „P 2” csapadékot 7,0—7,4 pH-jú citrát-foszfátpufferrel felvesszük. A hőmérséklet 15 °C-os. Ekkor 3% polietilénglikol 4000, illetve 2,5% polietilénglikol 6000 jelű terméket adunk hozzá.
A gyakorlatban alkalmazott polietilénglikol nem illékony polietilénglikolok keverékéből áll, amelyek mind vízben, mind szerves oldószerekben oldhatók és molekulasúlyuk a 4000-től 20 000-ig terjedő tartományban van. Az ilyen 4000 közepes molekulasúlyú polietilénglikolok keverékét jelölik „polietilénglikol 1000”-nek.
Alapos keverés és 1/2—4 órás reakcióidő után a keveréket centrifugáljuk. Ekkoraz „S 5” szupernatánst és a III—1 frakciót („P 5” csapadék) kapjuk. Az „S 5” szupernatánst módosított körülmények között (pH = 4,6; polietilénglikol 4000 mintegy 5,5%-ig; hőmérséklet =15 °C) mégegyszer kezeljük és frakcionáljuk. Ekkor a III—2 frakciót („P 6” csapadék) valamint az ,S 6” szupernatánst kapjuk, amely főként az IgG immunglobulint tartalmazza. A III—1 és III—2 frakciók globulinjai lényegesen feldúsultak az IgG, IgA és IgM immunglobulinokban. Továbbá az a^antitripszin, az a2-haptoglobin, a cöruloplazmin, a transzferrin és a hemopexin feldúsult formában van jelen.
A III—1 és III—2 frakciókat általában nem dolgozzuk fel tovább. Ezek nagy mennyiségben állnak rendelkezésre, mivel a vérből elsősorban az albumint nyerik ki, és a γ-globulinok csak alárendelt szerepet játszanak.
A találmány szerinti eljáráshoz kiindulási anyag-3182554 ként különösen a leírt frakcionálási eljárás IV, valamint III—1 és III—2 frakcióit („P 3”, „P 5” és „P 6” csapadék) alkalmazzuk.
Ezeket meghatározott arányokban keverjük össze és az össz-proteinre vonatkoztatva 23—50% albumin, illetve 50—77% globulin arányt állítunk be. Ily módon a III—1 és III—2 frakció megfelelő növelésével az IgM és IgA formájú globulinok mennyiségét specifikusan megnöveljük.
Egy előnyös eljárásváltozatnál a IV, III—1 és TII—2 frakciókat (üledékek) konyhasó-oldatban, illetve alkalmas puffer-oldatban mindenkor a 100%-nak megfelelő össz-proteintartalomra vonatkoztatva a következő mennyiségekben szuszpendáljuk:
IV frakció: 30—80 súlyszázalék,
III—1 frakció: 5—70 súlyszázalék,
III—2 frakció: 5—70 súlyszázalék.
Az is lehetséges, hogy a szérumfehérje-készítményt csak a III—1, III—2 vagy a IV frakcióból nyerjük, és hogy ezeket a specifikus plazmaproteinekkel történő dúsítás céljára az egyes frakciókból stabil, oldott formájú készítményként állítsuk elő. Éppen így, egyedi előállítással a III—1, III—2 és a IV frakciókat tartalmazó végtermékekből a kívánt keverési arányokat állíthatjuk elő az egyes frakciókat tartalmazó készítmények kombinálása útján.
A meghatározott arányban összekevert és alkalmas puffer- vagy só-oldatban szuszpendált anyagokat előtisztításnak vetjük alá. Az előtisztításában az a- és β-globulin-tartomány lipid faktorait alkalmas adszorbensen végzett adszorbeáltatással (Aerosil, bentoni vagy egyéb kovasav-tartalmú komplex vegyületek) eltávolítjuk.
Ezt követően a terméket tisztára szűrjük, dializáljuk és elvégezzük az oldat töményítését. Külön sterilizálás általában nem szükséges. Ha azonban szükséges, azt önmagában ismert módon elvégezhetjük. Például a vírusok eltávolítására két eljárást alkalmazhatunk:
a) Pasztörizálás 60 °C-on 10 órán át történő melegítéssel. Ennek az eljárásnak az a hátránya, hogy ilyen körülmények között számos szérumprotein denaturálódik.
b) A β-propiolakton-kezelés és az UV-besugárzás kombinálása (LoGrippo eljárása; Eed. Procedings 75, 518. [1959]). Ez az eljárás lehetővé teszi szérumok és plazmák kíméletes körülmények között történő sterilizálását, miközben azonban a tárolásállóság nem növekszik.
Lényegében a találmány tárgyát képező eljárás szerint a kiindulási komponensek keverékét meghatározott protein tartalomra és meghatározott protein arányra történő beállítás után hasonló eljárásnak vetjük alá, mint amilyen a szérumra ismeretes (lásd a bevezetőben megadott irodalmi helyet). A találmány szerinti eljárással egy olyan új szérumfehérje-készítményt nyerünk, amely nagyobb IgM, illetve IgA immunglobulin-tartalmán alapulva hatásában az ismert készítményeket túlszárnyalja.
Magától értetődően lehetőség van arra is, hogy az egyes frakciókat szabadítsuk meg a denaturálódásra hajlamos komponensektől, és ezt követően keverjük, töményítsük és stabilizáljuk a tisztított anyagokat.
Az adszorbenssel végzett munkát előnyösen 200— 500 mg szilikagél g össz-protein koncentrációnál cs 5 50 °C-ig terjedő hőmérsékleten végezzük. Az anyagokat alaposan összekeverjük, és ezt követően a lipoproteineket felvett adszorbenst leválasztjuk.
Megállapítottuk, hogy 20 és 50 °C közötti hőmérsékleteknél, illetve 6,5 és 8 közötti pH-értékeknél lehet a legjobb eredményeket elérni.
A találmány megvilágítására szolgálnak a következő kiviteli példák:
1. példa
300 1 konyhasó-oldathoz (1,7 súlyszázalék nátriumklorid-tartalmú desztillált víz, melyet 0,2 n sósavoldattal 4,6 pH-ra állítunk be) 10 kg következő össze20 tételű IV Cohn-frakciót adunk, és szuszpenziót képezünk:
55% albumin,
10% a1-globulin,
8% a2-globulin,
15% β-globulin,
12% γ-globulin.
A IV frakció mintegy 50% szilárd anyagot (fehérje, sók) és 50% maradék nedvességet (víz, maradék etanol) tartalmaz.
Hozzáadunk továbbá 5 kg következő szilárd komponens összetételű (súlyszázalékban) III—1 Cohnfrakciót (szubfrakció):
15% albumin,
2% aj-globulin,
13% a2-globulin,”
17% S-globulin,
53% γ-globulin, és 5 kg következő összetételű III—2 Cohn-frakciót (szubfrakció):
8% albumin,
3% cq-globulin,
9% a2-globulin,
25% β-globulin,
55% γ-globulin szuszpendálunk benne.
A szilárd anyagok és a maradék nedvesség aránya gyakorlatilag az összes frakciónál azonos.
A 20 kg „nedves” frakciót szuszpendáljuk és elkeverjük az oldószerben. A pH-értéket eközben 4,6 érté50 ken tartjuk állandóan. A frakciókban levő, oldható anyagok feloldódnak az oldószerben. Az emellett jelenlevő oldhatatlan komponensek zavarosságot okoznak. Az oldhatatlan anyagok az összes szilárd anyag tartalom mintegy 12 súlyszázalékát teszik ki. Az oldha55 tatlan anyagok között különösen olyan denaturált globulinok, beleértve a lipoproteineket is, vannak, melyekre az eljárás során tovább nincs szükség. Az utóbbiakat ezért egy centrifugálási lépés segítségével eltávolítjuk.
A felül úszó gyengén zavaros és sárgás színű.
. 5
-4182554
0,2 n nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával a pHértéket 7,4-re állítjuk be. Az oldathoz 5 súlyszázalék koncentráció eléréséig tiszta, kolloid kovasavat adunk és elkeverjük, A folyadékot 45 °C-ra melegítjük (mintegy 1 °C/perc sebességgel), és a pH-t konstans értéken tartjuk. A 45 °C-os véghőmérséklet elérése után a folyadékot 4 órán át keverjük. Ezen eljáráslépés során a tárolás-instabil proteinek megkötődnek a kovasavon és csapadékot képeznek, amit centrifugálással eltávolítunk.
A centrifugálás után felül maradó folyadékot aktívszenes szűréssel (Seitz AKS-Filter gyártmány) derítő szűrésnek vetjük alá. Az ebből kikerülő szürlet egy tiszta, borostyánkőszínű folyadék. A folyadékot dialízises koncentrálási eljárás segítségével (Millipore kazetta rendszer, membrán pórus-nagyság 10 000 Halton) a kiindulási térfogat mintegy 25%-ára koncentráljuk. Ezen lépés után az oldatnak mintegy 3,4—
4,5 súlyszázalék össz-fehérje-koncentrációja van.
Az analízis azt mutatja, hogy a dilízises koncentrálási lépéssel lényegében a koneentrátumból az összes 10 000-nél kisebb molekulasúlyú vér-komponenst eltávolítottuk. Ezek közé tartoznak különösen azok a komponensek, amelyek egy fehérje-konzervben nem kívánatosak, például a vazoaktív hatású oligopeptidek.
A koncentrátumot ezt követően az úgynevezett „tisztátalanságok” eltávolítására, valamint az elektrolitok beállítására háromszoros térfogatú 0,9 súlyszázalékos nátrium-klorid-oldattal szemben dialízisnek vetjük alá. A dialízist ugyanolyan berendezésben és ugyanolyan membránnal végezzük el, mint amilyent koncentrálásnál is használtunk.
Egy további koncentrációs lépés csatlakozik ehhez, melynek végén 6—10%-os protein-koncentrációt kapunk. Ezt követően nátrium-klorid-oldat segítségével az emberi vérnek megfelelő, azzal izotóniás fiziológiás viszonyokat állítunk be és az össz-protein koncentrációt 5 súlyszázalékra hozzuk.
Az 1. példa szerint nyert protein analízisét a következő táblázat mutatja:
2. táblázat (100 ml-re vonatkoztatva) protein 5000 mg albumin 2925 mg
IgG 1500 mg
IgA 380 mg
IgM 285 mg
A beállított oldatot járulékosan még egy csírátlanító szűrőn (EKS II; Seitz, Kreuznach) élesre szűrjük. A sterilre szűrés membrán szűrőn történik.
A készítmény atnpullázva alkalmas az intravénás alkalmazásra.
2. példa
300 1 oldószerben az 1. példához hasonlóan feloldunk
7.5 kg IV Cohn-frakciót, kg III—1 Cohn-frakciót és
8.5 kg III—2 Cohn-frakciót.
Ezen frakciók összetétele megfelel az 1. példában megadottaknak. A frakciókat összekeverjük az oldószerrel, és a pH-t 4,6-on tartjuk.
Az oldathoz 60 g Aerosil 2491/380 jelű terméket adunk literenként, és a pH-t 7,6-ra állítjuk be. A keveréket 47 °C-on 4 órán át keverjük, ezt követően 18 °C-ra lehűtjük, és kiszűrjük a lebegő anyagokat belőle. A lebegő anyagok kiszűrését egy CHF—S típusú (Schenk Filterbau, Schwab. Gmünd gyártmányú), függőlegesen álló uszadékszűrővel hajtjuk végre. Szűrési segédanyagként a szűrendő anyagra számolva S súlyszázalék koncentrációban Hyflo Super Cél jelű terméket alkalmazunk. Szűrési segédanyagként 5% koncentrációban Celite 545 jelű infuzóriaföldet is alkalmazhatunk.
3. példa
Tisztítás után az egyes oldatokat egyesítjük, és az 1. példának megfelelően dialízises koncentrálási eljárásnak vetjük alá, Az oldatokat azonban ugyanígy tetszés szerint végkoncentrátummá is feldolgozhatjuk, ahogyan azt az I. példában leírtuk, tetszés szerint magában vagy tetszés szerint egymással összekeverve.
4. példa
200 1 foszfát-citrát puffer-oldatban (0,066 mól foszfát-citrát) mintegj’ 3 óra alatt 10 kg III—I frakciót és 10 kp III—2 frakciót oldunk. A pH-t 7,50-re állítjuk be: az említett puffer-oldat további hozzáadásával 300 1-re történő felhígítása és 100 g/liter (2:1 arányú) Aerosil-bentonit keverék hozzáadása után a keveréket 4 órán át 45 °C-on keverjük. 10 °C-ra történő lehűtése után a szuszpenziót tisztára szűrjük egy zagyszűrőn 50 l/m2/óra szfírőteljesítménnyel 1,0 kg diatómaföldCelit 545/ni2 szűrőrétegen. Ezután élesre szűrés (Seitz AKS4 szűrővel) valamint diakoncentrálás következik, miként azt az 1.—3. példákban leírtuk. A felhasználásra kész oldat vég-koncentrációját 5% fehérjére állítjuk be. így a következő átlagos összetétel adódik:
5. táblázat protein 5000 mg albumin mintegy 1800—2000 mg globulinok 3000—3200 mg
IgG mintegy 1450 mg
IgA mintegy 700 ing
IgM mintegy 500 mg
-5182554
5. példa
Erakcionált kicsapás helyett az I—III és IV—1 Cohn-frakciókat 40%-os etanol-koncentráció és 5,8 pH-érték mellett egy lépésben kicsaphatjuk. Itt a IV—1 frakción a IV frakció egy alfrakcióját értjük (lásd például a 2710293 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírást). A csapadékot izoláljuk. A csapadék 20 kg-ját az 1. példában megadott oldószer 3000 l-ében szuszpendáljuk, és úgy dolgozzuk fel tovább, amint azt az 1. példában megadtuk.
6. példa
Ismeretes (Steinbuch; Vox Sanguin 23, 92—106.) a humán plazma Rivanollal (2-etoxi-6,9-diaminoacidinil-acélát) történő frakcionált kicsapása. Az utóbb megadott irodalmi helyen leírt eljárásnak megfelelően a II, III és a IV csapadékok válnak le. Ezeket a csapadékokat szintén feldolgozhatjuk a találmány szerinti eljárással széruinfehérje-készítménnyé. Ezen II, III és IV csapadékok 10—10 kg-ját (összesen 30 kg) 300 1, 1. példa szerinti oldószerben felvesszük, és az 1. példában leírt módszernek megfelelően feldolgozzuk.
7—12. példa
Az 1. példa szerinti eljárást ismételjük meg, a IV,
III/l és/vagy TTI/2 Cohn-frakciókat az alábbi táblázat szerinti mennyiségben használva. A készítmények albumin-globulin arányát a táblázat utolsó két oszlopa mutatja:
Táblázat
| Példa szám | IV. össz- meny- nyiség (g) | Chon frakció | III/l össz- meny- nyiség (g) | Chonfrakció alb. glob. | III/2 °SSZ Chon-frakció | Össz. albu- min | Össz. globu- lin | Albu- min o/ /0 | Globu- lin 0/ •0 | ||||
| alb. | glob. | meny- nyiség (g) | alb. glob. | ||||||||||
| 7 | 800 | 440 | 360 | 200 | 30 | 170 | 0 | 0 | 0 | 470 | 530 | 47,0 | 53,0 |
| 8 | 1000 | 55Q | 450 | 500 | 75 | 425 | 500 | 40 | 460 | 665 | 1 335 | 33,25 | 66,75 |
| 9 | 300 | 165 | 135 | 400 | 60 | 340 | 300 | 24 | 276 | 249 | 751 | 24,9 | 75,1 |
| 10 | 300 | 165 | 135 | 0 | 0 | 0 | 700 | 56 | 644 | 221 | 779 | 22,1 | 77,9 |
| 11 | 7500 | 4125 | 3375 | 4 000 | 600 | 3400 | 8 500 | 680 | 7820 | 5405 | 14 595 | 27,025 | 72,975 |
| 12 | 0 | 10 000 | 1500 | 8500 | 10 000 | 800 | 9200 | 2300 | 17 700 | 11,5 | 88,5 |
Szabadalmi igénypont:
Claims (1)
- Eljárás intravénásán alkalmazható pirogénmentés, tárolásálló, a proteineket vizes, izotóniás oldatban oldva tartalmazó, stabil, rezisztencia-növelő, plazma helyettesítőként alkalmazható szérumfehérje-készítmény előállítására humán vérfehérje-oldatból, melynek során az alvadási faktoroktól megszabadított vérplazmát Cohn önmagában ismert eljárásával frakcionáljuk, azzal jellemezve, hogy a Cohn-frakcionálási eljárás III/l és/vagy III/2 frakcióit, valamint az I, II és/vagy IV frakciókat valamely kémiailag és fizioló40 giailag megfelelő hordozóanyagban oly módon keverjük össze, hogy az albumin-globulin arány 23—50: 50—77 súly0/ között legyen, majd a kapott készítményt önmagában ismert módon tisztítjuk és stabilizáljuk.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH93477 | 1977-01-26 | ||
| AT0185977A AT367297B (de) | 1977-03-17 | 1977-03-17 | Verfahren zur herstellung eines serumeiweiss-pr[parates |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU182554B true HU182554B (en) | 1984-02-28 |
Family
ID=25597003
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU78PA303A HU182554B (en) | 1977-01-26 | 1978-01-25 | Process for producing preparation of serum protein for intravenous application |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4216205A (hu) |
| JP (1) | JPS5396315A (hu) |
| AR (1) | AR220328A1 (hu) |
| AU (1) | AU522413B2 (hu) |
| BE (1) | BE863278A (hu) |
| DD (1) | DD133632A5 (hu) |
| DE (1) | DE2801123C2 (hu) |
| DK (1) | DK152334C (hu) |
| EG (1) | EG13119A (hu) |
| ES (1) | ES466385A1 (hu) |
| FI (1) | FI63673C (hu) |
| FR (1) | FR2378524A1 (hu) |
| GB (1) | GB1597204A (hu) |
| HU (1) | HU182554B (hu) |
| IE (1) | IE46304B1 (hu) |
| IL (1) | IL53856A (hu) |
| IN (1) | IN147713B (hu) |
| NL (1) | NL7800606A (hu) |
| PL (1) | PL124730B1 (hu) |
| SE (1) | SE447204B (hu) |
| SU (1) | SU786854A3 (hu) |
| YU (1) | YU16578A (hu) |
| ZA (1) | ZA78295B (hu) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4322275A (en) * | 1980-01-10 | 1982-03-30 | Ionics Incorporated | Fractionation of protein mixtures |
| US4321192A (en) * | 1980-01-10 | 1982-03-23 | Ionics Incorporated | Fractionation of protein mixtures by salt addition followed by dialysis treatment |
| FR2492269A2 (fr) * | 1980-01-10 | 1982-04-23 | Ionics | Appareil d'electrodialyse et procede de fractionnement de melanges de proteines |
| US4351710A (en) * | 1980-01-10 | 1982-09-28 | Ionics, Incorporated | Fractionation of protein mixtures |
| EP0072843A1 (en) * | 1981-02-18 | 1983-03-02 | University Patents, Inc. | Precipitation of proteins |
| US4452893A (en) * | 1981-08-03 | 1984-06-05 | Cutter Laboratories, Inc. | Cell growth medium supplement |
| US4391801A (en) * | 1981-10-29 | 1983-07-05 | Cutter Laboratories, Inc. | Plasma protein fraction substantially free of acetate ions |
| US4439421A (en) * | 1982-08-30 | 1984-03-27 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Stabilized gamma globulin concentrate |
| DE3245591C2 (de) * | 1982-12-09 | 1986-11-06 | Schott Glaswerke, 6500 Mainz | Verfahren zur fraktionierten Auftrennung von Stoffgemischen mit Membranen |
| US4486282A (en) * | 1983-02-22 | 1984-12-04 | University Patents, Inc. | Precipitation of proteins from salt-containing proteinaceous fluids employing a desalting treatment, and use thereof in selective plasmapheresis |
| DE3344656A1 (de) * | 1983-12-09 | 1985-06-13 | Lentia GmbH Chem. u. pharm. Erzeugnisse - Industriebedarf, 8000 München | Verfahren zur herstellung einer serumproteinloesung |
| US5420250A (en) * | 1990-08-06 | 1995-05-30 | Fibrin Corporation | Phase transfer process for producing native plasma protein concentrates |
| CA2066374C (en) * | 1991-04-19 | 2002-01-29 | Paul E. Segall | Solution for perfusing primates |
| CN1055095C (zh) * | 1992-12-11 | 2000-08-02 | 上海莱士血制品有限公司 | 白蛋白的纯化方法 |
| KR100267604B1 (ko) | 1993-06-04 | 2000-11-01 | 이 세갈 폴 | 혈장 유사 용액 |
| US6300322B1 (en) | 1993-06-04 | 2001-10-09 | Biotime, Inc. | Plasma-like solution |
| US5945272A (en) | 1993-06-04 | 1999-08-31 | Biotime, Incorporated | Plasma expanders and blood substitutes |
| US6627393B2 (en) * | 1993-06-04 | 2003-09-30 | Biotime, Inc. | Solutions for use as plasma expanders and substitutes |
| US6680305B1 (en) | 1993-06-04 | 2004-01-20 | Biotime, Inc. | Physiologically acceptable aqueous solutions and methods for their use |
| US6218099B1 (en) | 1994-06-03 | 2001-04-17 | Biotime, Inc. | Methods and compositions for use in perfusion applications |
| US6589223B1 (en) * | 1999-02-03 | 2003-07-08 | Biotime, Inc. | Method and compositions for use in perfusion applications |
| US6441144B1 (en) | 1999-05-20 | 2002-08-27 | Alpha Therapeutic Corporation | Method for repairing dual virally inactivated immune globulin for intravenous administration |
| US6596262B2 (en) * | 2001-02-15 | 2003-07-22 | Aeropharm Technology Incorporated | Modulated release particles for aerosol delivery |
| US6806355B2 (en) * | 2001-08-14 | 2004-10-19 | Statens Serum Institut | Purification process for large scale production of Gc-globulin, the Gc-globulin produced hereby, a use of Gc.globulin and a Gc-globulin medicinal product |
| CA2742994A1 (en) * | 2008-11-12 | 2010-05-20 | Baxter International Inc. | Purification of butyrylcholinesterase using membrane adsorption |
| US8772462B2 (en) | 2010-05-26 | 2014-07-08 | Baxter International Inc. | Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide |
| US8796430B2 (en) | 2010-05-26 | 2014-08-05 | Baxter International Inc. | Method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield |
| AU2010202125B1 (en) | 2010-05-26 | 2010-09-02 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | A method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield |
| CN110054685A (zh) * | 2019-04-26 | 2019-07-26 | 兰州兰生血液制品有限公司 | 一种静注人免疫球蛋白（pH4）低温乙醇组分Ⅲ的生产方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1207477A (en) * | 1969-04-29 | 1970-10-07 | Ts I Gematologii I Perelivania | Plasma proteins solution |
| US3770631A (en) * | 1971-06-29 | 1973-11-06 | Baxter Laboratories Inc | Clarification of blood serum and plasma |
| JPS5620287B2 (hu) * | 1972-06-19 | 1981-05-13 | ||
| US4073886A (en) * | 1973-01-30 | 1978-02-14 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Blood fractionation process using block copolymers of ethylene oxide and polyoxypropylene |
| US3850903A (en) * | 1973-06-21 | 1974-11-26 | S Mankarious | Plasma volume expander prepared from cohn iv precipitate using block copolymers of ethylene oxide and polyoxypropylene |
| DE2459291C3 (de) * | 1974-12-14 | 1981-06-04 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrombin- Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen |
-
1978
- 1978-01-12 DE DE2801123A patent/DE2801123C2/de not_active Expired
- 1978-01-16 SE SE7800443A patent/SE447204B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-01-16 IE IE88/78A patent/IE46304B1/en unknown
- 1978-01-17 ZA ZA00780295A patent/ZA78295B/xx unknown
- 1978-01-18 NL NL7800606A patent/NL7800606A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-01-19 GB GB2285/78A patent/GB1597204A/en not_active Expired
- 1978-01-20 IL IL53856A patent/IL53856A/xx unknown
- 1978-01-20 AU AU32600/78A patent/AU522413B2/en not_active Expired
- 1978-01-23 US US05/871,620 patent/US4216205A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-01-24 EG EG41/78A patent/EG13119A/xx active
- 1978-01-24 DD DD7800203381A patent/DD133632A5/xx unknown
- 1978-01-24 YU YU00165/78A patent/YU16578A/xx unknown
- 1978-01-24 FI FI780212A patent/FI63673C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-01-25 IN IN98/CAL/78A patent/IN147713B/en unknown
- 1978-01-25 HU HU78PA303A patent/HU182554B/hu unknown
- 1978-01-25 PL PL1978204214A patent/PL124730B1/pl unknown
- 1978-01-25 BE BE2056636A patent/BE863278A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-01-25 AR AR270851A patent/AR220328A1/es active
- 1978-01-25 FR FR7802028A patent/FR2378524A1/fr active Granted
- 1978-01-25 DK DK035478A patent/DK152334C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-01-26 ES ES466385A patent/ES466385A1/es not_active Expired
- 1978-01-26 JP JP778978A patent/JPS5396315A/ja active Granted
- 1978-01-26 SU SU782572351A patent/SU786854A3/ru active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2378524A1 (fr) | 1978-08-25 |
| ES466385A1 (es) | 1978-10-01 |
| BE863278A (nl) | 1978-05-16 |
| US4216205A (en) | 1980-08-05 |
| DK35478A (da) | 1978-07-27 |
| DK152334C (da) | 1988-07-25 |
| FI63673C (fi) | 1983-08-10 |
| NL7800606A (nl) | 1978-07-28 |
| SU786854A3 (ru) | 1980-12-07 |
| IE46304B1 (en) | 1983-04-20 |
| EG13119A (en) | 1981-03-31 |
| IL53856A (en) | 1981-03-31 |
| DK152334B (da) | 1988-02-22 |
| GB1597204A (en) | 1981-09-03 |
| SE447204B (sv) | 1986-11-03 |
| IE780088L (en) | 1978-07-26 |
| AR220328A1 (es) | 1980-10-31 |
| FI780212A (fi) | 1978-07-27 |
| AU522413B2 (en) | 1982-06-03 |
| ZA78295B (en) | 1978-12-27 |
| IN147713B (hu) | 1980-06-07 |
| DE2801123A1 (de) | 1978-07-27 |
| PL124730B1 (en) | 1983-02-28 |
| JPS5396315A (en) | 1978-08-23 |
| DD133632A5 (de) | 1979-01-17 |
| SE7800443L (sv) | 1978-07-27 |
| JPS6241211B2 (hu) | 1987-09-02 |
| FI63673B (fi) | 1983-04-29 |
| PL204214A1 (pl) | 1978-09-25 |
| FR2378524B1 (hu) | 1983-02-04 |
| YU16578A (en) | 1983-10-31 |
| DE2801123C2 (de) | 1986-01-02 |
| AU3260078A (en) | 1979-07-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU182554B (en) | Process for producing preparation of serum protein for intravenous application | |
| EP0073371B1 (en) | Intravenously injectable immune serum globulin and method of preparing same | |
| US4499073A (en) | Intravenously injectable immune serum globulin | |
| US6835379B2 (en) | Method of producing IgG | |
| EP0447585B1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verträglichen Immunglobulin-G-Präparates | |
| US4081431A (en) | Blood fractionation | |
| HU176142B (en) | Process for separating purified albumine from blood | |
| EP0311950A2 (de) | Verfahren zur Herstellung einer sterilen Plasmaproteinlösung, die Fibrinogen und den Gerinnungsfaktor XIII enthält | |
| JP2644946B2 (ja) | ＩｇＧ− モノクロナール抗体の精製方法及びその使用方法 | |
| US4168303A (en) | Lyophilized native gamma globulin preparation for intravenous administration | |
| US3916026A (en) | Method for the preparation of gamma-globulin suitable for intravenous use | |
| US4164495A (en) | Method of recovering immunoglobulin using a polyol and an alkanoic acid | |
| DE3786832T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Immunoglobulinzubereitungen für intravenöse Injektion. | |
| AT391808B (de) | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf)-haeltigen fraktion | |
| US4075197A (en) | Serum albumin production | |
| DE69002033T2 (de) | Gelfiltration von wärmebehandeltem Faktor VIII. | |
| JPH0381290A (ja) | 精製されたアルブミン溶液の製造方法 | |
| USRE31268E (en) | Method of recovering immunoglobulin using a polyol and an alkanoic acid | |
| JP2001500867A (ja) | 血漿タンパク質含有薬剤の製造方法 | |
| DE69736115T2 (de) | Verfahren zur herstellung von gereinigtem transferrin | |
| JPH0579649B2 (hu) | ||
| JPS6242887B2 (hu) | ||
| CA1168152A (en) | Process for preparing human plasma fractions containing immune globulin (igg) | |
| JPH08787B2 (ja) | ガンマグロブリン含有組成物の製造法 | |
| AT367297B (de) | Verfahren zur herstellung eines serumeiweiss-pr[parates |