FI120586B - Menetelmä PTH:n ja PTHRP:n analogien valmistamiseksi, ja niiden käyttö osteoporoosin hoitoon - Google Patents
Menetelmä PTH:n ja PTHRP:n analogien valmistamiseksi, ja niiden käyttö osteoporoosin hoitoon Download PDFInfo
- Publication number
- FI120586B FI120586B FI950169A FI950169A FI120586B FI 120586 B FI120586 B FI 120586B FI 950169 A FI950169 A FI 950169A FI 950169 A FI950169 A FI 950169A FI 120586 B FI120586 B FI 120586B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- leu
- glu
- arg
- lys
- ser
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 69
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title abstract description 12
- 101150071808 PTHLH gene Proteins 0.000 title abstract description 4
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 title description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 227
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 119
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 77
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 71
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 108700020797 Parathyroid Hormone-Related Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102100036893 Parathyroid hormone Human genes 0.000 claims abstract 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 224
- KYIIALJHAOIAHF-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 KYIIALJHAOIAHF-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 133
- ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 131
- UICKAKRRRBTILH-GUBZILKMSA-N Ser-Glu-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N UICKAKRRRBTILH-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 122
- LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N Asp-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 106
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 claims description 100
- BRQKGRLDDDQWQJ-MBLNEYKQSA-N His-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BRQKGRLDDDQWQJ-MBLNEYKQSA-N 0.000 claims description 90
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 57
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N Arg-Arg-Glu Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 48
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 43
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 43
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 37
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 claims description 28
- KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N Glu-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 27
- HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 27
- NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims description 27
- YWYQSLOTVIRCFE-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YWYQSLOTVIRCFE-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 25
- BRGQQXQKPUCUJQ-KBIXCLLPSA-N Ser-Glu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BRGQQXQKPUCUJQ-KBIXCLLPSA-N 0.000 claims description 25
- REWSWYIDQIELBE-FXQIFTODSA-N Ala-Val-Ser Chemical group [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O REWSWYIDQIELBE-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 23
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 23
- AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N Asp-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 21
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 20
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 19
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 18
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 14
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 14
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 13
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 13
- IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims description 12
- VOKCBYNCZVSILJ-KKUMJFAQSA-N His-Asn-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O VOKCBYNCZVSILJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 12
- JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N His-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 11
- RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 11
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 claims description 11
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 claims description 10
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 claims description 10
- WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N Arg-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 8
- CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N Thr-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 claims description 7
- HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 6
- DXTYEWAQOXYRHZ-KKXDTOCCSA-N Ala-Phe-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N DXTYEWAQOXYRHZ-KKXDTOCCSA-N 0.000 claims description 6
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 6
- VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CO VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 6
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 claims description 6
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N Glu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 5
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 5
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 claims description 5
- 125000004057 biotinyl group Chemical group [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 5
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 5
- CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 4
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 4
- YNNPKXBBRZVIRX-IHRRRGAJSA-N Lys-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YNNPKXBBRZVIRX-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 4
- DCRWPTBMWMGADO-AVGNSLFASA-N Lys-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DCRWPTBMWMGADO-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 4
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 claims description 4
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 claims description 4
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 4
- UISQLSIBJKEJSS-GUBZILKMSA-N Arg-Arg-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UISQLSIBJKEJSS-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 3
- SCQIQCWLOMOEFP-DCAQKATOSA-N Asp-Leu-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SCQIQCWLOMOEFP-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 3
- VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N His-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N 0.000 claims description 3
- XPSGESXVBSQZPL-SRVKXCTJSA-N Arg-Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O XPSGESXVBSQZPL-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 2
- HQIZDMIGUJOSNI-IUCAKERBSA-N Arg-Gly-Arg Chemical compound N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O HQIZDMIGUJOSNI-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 2
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 2
- AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N Asp-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 2
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IWTBYNQNAPECCS-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IWTBYNQNAPECCS-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 2
- RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 2
- SMIDBHKWSYUBRZ-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SMIDBHKWSYUBRZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 claims description 2
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 claims description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 claims 2
- VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N Arg-Ala-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- SBVJJNJLFWSJOV-UBHSHLNASA-N Arg-Ala-Phe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SBVJJNJLFWSJOV-UBHSHLNASA-N 0.000 claims 1
- OGTCOKZFOJIZFG-CIUDSAMLSA-N Asp-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OGTCOKZFOJIZFG-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asp-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- 125000006355 carbonyl methylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([*:1])=O 0.000 claims 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 25
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 16
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 8
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 abstract description 3
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 abstract description 2
- 102000043299 Parathyroid hormone-related Human genes 0.000 abstract 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 222
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 128
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 108
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 98
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 94
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 87
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 87
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 81
- 238000010265 fast atom bombardment Methods 0.000 description 70
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 68
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 66
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 66
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 55
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 39
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 31
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 31
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 24
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 22
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 22
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 19
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 18
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 15
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 15
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N Asn-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 11
- FCPSGEVYIVXPPO-QTKMDUPCSA-N His-Thr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FCPSGEVYIVXPPO-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 10
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical group CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- BTJVOUQWFXABOI-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N BTJVOUQWFXABOI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 9
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- HGJREIGJLUQBTJ-SZMVWBNQSA-N Glu-Trp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HGJREIGJLUQBTJ-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 8
- METZZBCMDXHFMK-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N METZZBCMDXHFMK-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- IDCKUIWEIZYVSO-WFBYXXMGSA-N Ser-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C)C(O)=O)=CNC2=C1 IDCKUIWEIZYVSO-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- ZOWOHMFPXMYFKJ-WBTWNKCNSA-N (4S)-4-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]hexanoyl]amino]acetyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3R)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 ZOWOHMFPXMYFKJ-WBTWNKCNSA-N 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N L-homoserine lactone Chemical compound N[C@H]1CCOC1=O QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VIKZGAUAKQZDOF-NRPADANISA-N Val-Ser-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VIKZGAUAKQZDOF-NRPADANISA-N 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 7
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XJQDHFMUUBRCGA-KKUMJFAQSA-N His-Asn-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O XJQDHFMUUBRCGA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 6
- QKXZCUCBFPEXNK-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 QKXZCUCBFPEXNK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 6
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 6
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- KXOPYFNQLVUOAQ-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KXOPYFNQLVUOAQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 5
- 108010018691 arginyl-threonyl-arginine Proteins 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 5
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 5
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- JVGBKLJPRWUXEI-AKGZTFGVSA-N (2S)-2-amino-4-(2-hydroxypropanoyloxy)butanoic acid Chemical compound C(C(O)C)(=O)OCC[C@H](N)C(=O)O JVGBKLJPRWUXEI-AKGZTFGVSA-N 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- QIQABBIDHGQXGA-ZPFDUUQYSA-N Glu-Ile-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O QIQABBIDHGQXGA-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 4
- UPJODPVSKKWGDQ-KLHWPWHYSA-N His-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O UPJODPVSKKWGDQ-KLHWPWHYSA-N 0.000 description 4
- OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N Leu-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 4
- POMXSEDNUXYPGK-IHRRRGAJSA-N Leu-Met-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N POMXSEDNUXYPGK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- JOSAKOKSPXROGQ-BJDJZHNGSA-N Lys-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JOSAKOKSPXROGQ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- KQBJYJXPZBNEIK-DCAQKATOSA-N Met-Glu-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQBJYJXPZBNEIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 4
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000010072 bone remodeling Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 4
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N (3ar,5s,6s,7r,7ar)-5-(difluoromethyl)-2-(ethylamino)-5,6,7,7a-tetrahydro-3ah-pyrano[3,2-d][1,3]thiazole-6,7-diol Chemical compound S1C(NCC)=N[C@H]2[C@@H]1O[C@H](C(F)F)[C@@H](O)[C@@H]2O UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- URAUIUGLHBRPMF-NAKRPEOUSA-N Arg-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O URAUIUGLHBRPMF-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 3
- NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N Asp-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DTPOVRRYXPJJAZ-FJXKBIBVSA-N Gly-Arg-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N DTPOVRRYXPJJAZ-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 3
- WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N His-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- AHEBIAHEZWQVHB-QTKMDUPCSA-N His-Thr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O AHEBIAHEZWQVHB-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 3
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 3
- HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N Leu-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 3
- 108700003690 bovine parathyroid hormone (1-34) Proteins 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 3
- 229940125936 compound 42 Drugs 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Chemical compound 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 3
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N (3S,8S,10R,13S,14S,17S)-17-isoquinolin-7-yl-N,N,10,13-tetramethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-amine Chemical compound CN(C)[C@H]1CC[C@]2(C)C3CC[C@@]4(C)[C@@H](CC[C@@H]4c4ccc5ccncc5c4)[C@@H]3CC=C2C1 IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N 0.000 description 2
- PLVPPLCLBIEYEA-WAYWQWQTSA-N (z)-3-(1h-indol-3-yl)prop-2-enoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(\C=C/C(=O)O)=CNC2=C1 PLVPPLCLBIEYEA-WAYWQWQTSA-N 0.000 description 2
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 2-[[4-(2,2-difluoropropoxy)pyrimidin-5-yl]methylamino]-4-[[(1R,4S)-4-hydroxy-3,3-dimethylcyclohexyl]amino]pyrimidine-5-carbonitrile Chemical compound FC(COC1=NC=NC=C1CNC1=NC=C(C(=N1)N[C@H]1CC([C@H](CC1)O)(C)C)C#N)(C)F FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 0.000 description 2
- VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 2-acetyloxybenzoic acid;[(2s,3r)-4-(dimethylamino)-3-methyl-1,2-diphenylbutan-2-yl] propanoate;1,3,7-trimethylpurine-2,6-dione Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O.CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C.C([C@](OC(=O)CC)([C@H](C)CN(C)C)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 0.000 description 2
- 125000006282 2-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Cl)=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- OHXPGWPVLFPUSM-KLRNGDHRSA-N 3,7,12-trioxo-5beta-cholanic acid Chemical compound C1CC(=O)C[C@H]2CC(=O)[C@H]3[C@@H]4CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]4(C)C(=O)C[C@@H]3[C@]21C OHXPGWPVLFPUSM-KLRNGDHRSA-N 0.000 description 2
- GGNHBHYDMUDXQB-KBIXCLLPSA-N Ala-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N GGNHBHYDMUDXQB-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CJUKAWUWBZCTDQ-SRVKXCTJSA-N Asp-Leu-Lys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O CJUKAWUWBZCTDQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010369 HIV Protease Proteins 0.000 description 2
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 2
- DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N His-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZCGZYWNIDZZMR-UHFFFAOYSA-N Ile-Arg-Ala Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NC(C)C(O)=O)CCCN=C(N)N TZCGZYWNIDZZMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N Leu-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CN=CN1 CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 2
- QTVUPXHPSXZJKH-ULQDDVLXSA-N Phe-Met-His Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N QTVUPXHPSXZJKH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N [(2R)-1-[[4-[(3-phenylmethoxyphenoxy)methyl]phenyl]methyl]pyrrolidin-2-yl]methanol Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)OC=1C=C(OCC2=CC=C(CN3[C@H](CCC3)CO)C=C2)C=CC=1 SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N 0.000 description 2
- PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N [(3r,4ar,5s,6s,6as,10s,10ar,10bs)-3-ethenyl-10,10b-dihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1-oxo-6-(2-pyridin-2-ylethylcarbamoyloxy)-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-5-yl] acetate Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(O[C@](C)(CC(=O)[C@]2(O)[C@@]2(C)[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@@H]21)C=C)C)OC(=O)C)C(=O)NCCC1=CC=CC=N1 PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 230000008416 bone turnover Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 2
- 229940125810 compound 20 Drugs 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 229940126540 compound 41 Drugs 0.000 description 2
- 229940127271 compound 49 Drugs 0.000 description 2
- 229940127113 compound 57 Drugs 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002997 dehydrocholic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N gtpl8555 Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)N[C@H](B1O[C@@]2(C)[C@H]3C[C@H](C3(C)C)C[C@H]2O1)CCC1=CC=C(F)C=C1 JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 201000000916 idiopathic juvenile osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- PLVPPLCLBIEYEA-UHFFFAOYSA-N indoleacrylic acid Natural products C1=CC=C2C(C=CC(=O)O)=CNC2=C1 PLVPPLCLBIEYEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N lnp023 Chemical compound C1([C@H]2N(CC=3C=4C=CNC=4C(C)=CC=3OC)CC[C@@H](C2)OCC)=CC=C(C(O)=O)C=C1 RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 2
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 2
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 101150075675 tatC gene Proteins 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N (1R,3R)-3-[[3-bromo-1-[4-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)phenyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl]amino]-N,1-dimethylcyclopentane-1-carboxamide Chemical compound BrC1=NN(C2=NC(=NC=C21)N[C@H]1C[C@@](CC1)(C(=O)NC)C)C1=CC=C(C=C1)C=1SC(=NN=1)C ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N 0.000 description 1
- UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N (1R,9R,10S,11R,12R,15S,18S,21R)-10,11,21-trihydroxy-8,8-dimethyl-14-methylidene-4-(prop-2-enylamino)-20-oxa-5-thia-3-azahexacyclo[9.7.2.112,15.01,9.02,6.012,18]henicosa-2(6),3-dien-13-one Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@]23C(C1=C)=O)C[C@H]2[C@]12C(N=C(NCC=C)S4)=C4CC(C)(C)[C@H]1[C@H](O)[C@]3(O)OC2 UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N 0.000 description 1
- AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-6-[(3-chlorophenyl)methyl]-12,19-difluoro-11-hydroxy-8-(2-hydroxyacetyl)-9,13-dimethyl-6-azapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosa-14,17-dien-16-one Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2[C@H]3[C@]([C@]4(C=CC(=O)C=C4[C@@H](F)C3)C)(F)[C@@H](O)C[C@@]2([C@@]1(C1)C(=O)CO)C)N1CC1=CC=CC(Cl)=C1 AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N 0.000 description 1
- ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N (1r,2r,4r)-2-(4-bromophenyl)-n-[(4-chlorophenyl)-(2-fluoropyridin-4-yl)methyl]-4-morpholin-4-ylcyclohexane-1-carboxamide Chemical compound C1=NC(F)=CC(C(NC(=O)[C@H]2[C@@H](C[C@@H](CC2)N2CCOCC2)C=2C=CC(Br)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1 ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N 0.000 description 1
- GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N (1s,2s,3r,4r)-3-[[5-chloro-2-[(1-ethyl-6-methoxy-2-oxo-4,5-dihydro-3h-1-benzazepin-7-yl)amino]pyrimidin-4-yl]amino]bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxamide Chemical compound CCN1C(=O)CCCC2=C(OC)C(NC=3N=C(C(=CN=3)Cl)N[C@H]3[C@H]([C@@]4([H])C[C@@]3(C=C4)[H])C(N)=O)=CC=C21 GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N 0.000 description 1
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 1
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 1
- GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-amino-n-[3-(difluoromethoxy)-4-(1,3-oxazol-5-yl)phenyl]-4-methylpentanamide Chemical compound FC(F)OC1=CC(NC(=O)[C@H](N)CC(C)C)=CC=C1C1=CN=CO1 GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N (2r)-n-[(2s,3r)-4-[[(4s)-6-(2,2-dimethylpropyl)spiro[3,4-dihydropyrano[2,3-b]pyridine-2,1'-cyclobutane]-4-yl]amino]-3-hydroxy-1-[3-(1,3-thiazol-2-yl)phenyl]butan-2-yl]-2-methoxypropanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](C)OC)[C@H](O)CN[C@@H]1C2=CC(CC(C)(C)C)=CN=C2OC2(CCC2)C1)C(C=1)=CC=CC=1C1=NC=CS1 IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N 0.000 description 1
- YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-[6-amino-8-[(4-phenylphenyl)methylamino]purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC=CC=2)C=CC=1CNC1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N 0.000 description 1
- VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4,4-dimethylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(C)=O VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N 0.000 description 1
- WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N (2s)-2-[[2-benzyl-3-[hydroxy-[(1r)-2-phenyl-1-(phenylmethoxycarbonylamino)ethyl]phosphoryl]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)C(CP(O)(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N 0.000 description 1
- WEAYSODFUHQOTI-VKHMYHEASA-N (2s)-2-amino-4-hydroxybutanamide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CCO WEAYSODFUHQOTI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N (2s)-n-[(3s,4s)-5-acetyl-7-cyano-4-methyl-1-[(2-methylnaphthalen-1-yl)methyl]-2-oxo-3,4-dihydro-1,5-benzodiazepin-3-yl]-2-(methylamino)propanamide Chemical compound O=C1[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC)[C@H](C)N(C(C)=O)C2=CC(C#N)=CC=C2N1CC1=C(C)C=CC2=CC=CC=C12 STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N 0.000 description 1
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N (3r)-7-[(1s,2s,4ar,6s,8s)-2,6-dimethyl-8-[(2s)-2-methylbutanoyl]oxy-1,2,4a,5,6,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl]-3-hydroxy-5-oxoheptanoic acid Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CCC(=O)C[C@@H](O)CC(O)=O)C2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H](C)C[C@@H]21 OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N 0.000 description 1
- HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N (3r,4r)-3-azaniumyl-5-[[(2s,3r)-1-[(2s)-2,3-dicarboxypyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxo-4-sulfanylpentane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC[C@@H](N)[C@@H](S)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)CC)C(=O)N1CCC(C(O)=O)[C@H]1C(O)=O HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N 0.000 description 1
- MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M (3r,5r)-7-[2-(4-fluorophenyl)-5-[methyl-[(1r)-1-phenylethyl]carbamoyl]-4-propan-2-ylpyrazol-3-yl]-3,5-dihydroxyheptanoate Chemical compound C1([C@@H](C)N(C)C(=O)C2=NN(C(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C2C(C)C)C=2C=CC(F)=CC=2)=CC=CC=C1 MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M 0.000 description 1
- UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N (4R)-5-[(6-bromo-3-methyl-2-pyrrolidin-1-ylquinoline-4-carbonyl)amino]-4-(2-chlorophenyl)pentanoic acid Chemical compound CC1=C(C2=C(C=CC(=C2)Br)N=C1N3CCCC3)C(=O)NC[C@H](CCC(=O)O)C4=CC=CC=C4Cl YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N (z)-3-[3-[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-1-yl]-n'-pyrazin-2-ylprop-2-enehydrazide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC(C(F)(F)F)=CC(C2=NN(\C=C/C(=O)NNC=3N=CC=NC=3)C=N2)=C1 DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N 0.000 description 1
- DJMOXMNDXFFONV-UHFFFAOYSA-N 1,3-dimethyl-7-[2-(n-methylanilino)ethyl]purine-2,6-dione Chemical compound C1=NC=2N(C)C(=O)N(C)C(=O)C=2N1CCN(C)C1=CC=CC=C1 DJMOXMNDXFFONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 1,3-dimethyl-7-[3-(n-methylanilino)propyl]purine-2,6-dione Chemical compound C1=NC=2N(C)C(=O)N(C)C(=O)C=2N1CCCN(C)C1=CC=CC=C1 KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 1-[(1R)-1-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]-6-[(4S,5R)-4-[(2S)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]-5-methylcyclohexen-1-yl]pyrazolo[3,4-b]pyrazine-3-carbonitrile Chemical compound ClC1=C(C=CC(=C1)Cl)[C@@H](C)N1N=C(C=2C1=NC(=CN=2)C1=CC[C@@H]([C@@H](C1)C)N1[C@@H](CCC1)CO)C#N KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 0.000 description 1
- WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 1-[(3s,4s)-4-[8-(2-chloro-4-pyrimidin-2-yloxyphenyl)-7-fluoro-2-methylimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-3-fluoropiperidin-1-yl]-2-hydroxyethanone Chemical compound CC1=NC2=CN=C3C=C(F)C(C=4C(=CC(OC=5N=CC=CN=5)=CC=4)Cl)=CC3=C2N1[C@H]1CCN(C(=O)CO)C[C@@H]1F WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 0.000 description 1
- ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 1-[2-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)propan-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 0.000 description 1
- UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 1-[6-[2-[3-[3-[3-[2-[2-[3-[[2-[2-[[(2r)-1-[[2-[[(2r)-1-[3-[2-[2-[3-[[2-(2-amino-2-oxoethoxy)acetyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-1-oxopropan-2-yl Chemical compound O=C1C(SCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(=O)N[C@@H](CSC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(N)=O)CC(=O)N1CCNC(=O)CCCCCN\1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2CC/1=C/C=C/C=C/C1=[N+](CC)C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C1 UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 0.000 description 1
- WGFNXGPBPIJYLI-UHFFFAOYSA-N 2,6-difluoro-3-[(3-fluorophenyl)sulfonylamino]-n-(3-methoxy-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridin-5-yl)benzamide Chemical compound C1=C2C(OC)=NNC2=NC=C1NC(=O)C(C=1F)=C(F)C=CC=1NS(=O)(=O)C1=CC=CC(F)=C1 WGFNXGPBPIJYLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 2-(1-adamantyl)-n-[2-[2-(2-hydroxyethylamino)ethylamino]quinolin-5-yl]acetamide Chemical compound C1C(C2)CC(C3)CC2CC13CC(=O)NC1=CC=CC2=NC(NCCNCCO)=CC=C21 FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBASXUCJHJRPEV-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxyethoxy)ethanol Chemical compound COCCOCCO SBASXUCJHJRPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(2-cyclopropylethoxy)-9-(2-hydroxy-2-methylpropyl)-1h-phenanthro[9,10-d]imidazol-2-yl]-5-fluorobenzene-1,3-dicarbonitrile Chemical compound C1=C2C3=CC(CC(C)(O)C)=CC=C3C=3NC(C=4C(=CC(F)=CC=4C#N)C#N)=NC=3C2=CC=C1OCCC1CC1 PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 2-amino-9-[(1S,6R,8R,9S,10R,15R,17R,18R)-8-(6-aminopurin-9-yl)-9,18-difluoro-3,12-dihydroxy-3,12-bis(sulfanylidene)-2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3lambda5,12lambda5-diphosphatricyclo[13.2.1.06,10]octadecan-17-yl]-1H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC2=C(N=CN2[C@@H]2O[C@@H]3COP(S)(=O)O[C@@H]4[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]2[C@@H]3F)O[C@H]([C@H]4F)N2C=NC3=C2N=CN=C3N)C(=O)N1 YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 0.000 description 1
- TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 2-amino-9-[(2R,3S,4S,5R)-4-fluoro-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-ynyl-1H-purine-6,8-dione Chemical compound NC=1NC(C=2N(C(N(C=2N=1)[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H]1O)F)CO)=O)CC#C)=O TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 0.000 description 1
- DYNFCHNNOHNJFG-UHFFFAOYSA-M 2-formylbenzoate Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C=O DYNFCHNNOHNJFG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical group CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-[6-methoxy-4-[(3-phenylmethoxyphenyl)methoxy]-1-benzofuran-2-yl]imidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazole Chemical compound N1=C2SC(OC)=NN2C=C1C(OC1=CC(OC)=C2)=CC1=C2OCC(C=1)=CC=CC=1OCC1=CC=CC=C1 LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWPQTFXULUUCGD-UHFFFAOYSA-N 3,4,5,7,8,9,10,10a-octahydropyrido[1,2-a][1,4]diazepine Chemical compound C1CCN=CC2CCCCN21 KWPQTFXULUUCGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 4-[[(1s)-2-[(e)-3-[3-chloro-2-fluoro-6-(tetrazol-1-yl)phenyl]prop-2-enoyl]-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-1-carbonyl]amino]benzoic acid Chemical compound O=C1CN(C)CCN1C1=CC=CC2=C1CCN(C(=O)\C=C\C=1C(=CC=C(Cl)C=1F)N1N=NN=C1)[C@@H]2C(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 0.000 description 1
- DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-n-[4-(3-ethynylanilino)-7-methoxyquinazolin-6-yl]piperazine-1-carboxamide Chemical compound C1CN(CC)CCN1C(=O)NC(C(=CC1=NC=N2)OC)=CC1=C2NC1=CC=CC(C#C)=C1 DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 5-chloro-2-[4-[(1r,2s)-2-[2-(5-methylsulfonylpyridin-2-yl)oxyethyl]cyclopropyl]piperidin-1-yl]pyrimidine Chemical compound N1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1OCC[C@H]1[C@@H](C2CCN(CC2)C=2N=CC(Cl)=CN=2)C1 XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 0.000 description 1
- RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-7-[(1s)-1-(7h-purin-6-ylamino)ethyl]-[1,3]thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one Chemical compound C=1([C@@H](NC=2C=3N=CNC=3N=CN=2)C)N=C2SC=C(C)N2C(=O)C=1C1=CC=CC(F)=C1 RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- HCCNBKFJYUWLEX-UHFFFAOYSA-N 7-(6-methoxypyridin-3-yl)-1-(2-propoxyethyl)-3-(pyrazin-2-ylmethylamino)pyrido[3,4-b]pyrazin-2-one Chemical compound O=C1N(CCOCCC)C2=CC(C=3C=NC(OC)=CC=3)=NC=C2N=C1NCC1=CN=CC=N1 HCCNBKFJYUWLEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- PMQXMXAASGFUDX-SRVKXCTJSA-N Ala-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CCCCN PMQXMXAASGFUDX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YXXPVUOMPSZURS-ZLIFDBKOSA-N Ala-Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)=CNC2=C1 YXXPVUOMPSZURS-ZLIFDBKOSA-N 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 241001279686 Allium moly Species 0.000 description 1
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 208000000103 Anorexia Nervosa Diseases 0.000 description 1
- XEPSCVXTCUUHDT-AVGNSLFASA-N Arg-Arg-Leu Natural products CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XEPSCVXTCUUHDT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N Arg-Arg-Thr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- WYBVBIHNJWOLCJ-IUCAKERBSA-N Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N WYBVBIHNJWOLCJ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- AIFHRTPABBBHKU-RCWTZXSCSA-N Arg-Thr-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O AIFHRTPABBBHKU-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 1
- JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N 0.000 description 1
- BQXUPNKLZNSUMC-YUQWMIPFSA-N CCN(CCCCCOCC(=O)N[C@H](C(=O)N1C[C@H](O)C[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)c1ccc(cc1)-c1scnc1C)C(C)(C)C)CCOc1ccc(cc1)C(=O)c1c(sc2cc(O)ccc12)-c1ccc(O)cc1 Chemical compound CCN(CCCCCOCC(=O)N[C@H](C(=O)N1C[C@H](O)C[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)c1ccc(cc1)-c1scnc1C)C(C)(C)C)CCOc1ccc(cc1)C(=O)c1c(sc2cc(O)ccc12)-c1ccc(O)cc1 BQXUPNKLZNSUMC-YUQWMIPFSA-N 0.000 description 1
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 description 1
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 1
- 229940126639 Compound 33 Drugs 0.000 description 1
- 229940127007 Compound 39 Drugs 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 101100031571 Danio rerio pth4 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- WOMUDRVDJMHTCV-DCAQKATOSA-N Glu-Arg-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WOMUDRVDJMHTCV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N Glu-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- IRXNJYPKBVERCW-DCAQKATOSA-N Glu-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IRXNJYPKBVERCW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010007979 Glycocholic Acid Proteins 0.000 description 1
- ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N His-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- LYSVCKOXIDKEEL-SRVKXCTJSA-N His-Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 LYSVCKOXIDKEEL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 101001135770 Homo sapiens Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 101001135995 Homo sapiens Probable peptidyl-tRNA hydrolase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N Lactic Acid Natural products CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- VZBIUJURDLFFOE-IHRRRGAJSA-N Leu-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O VZBIUJURDLFFOE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ZDJQVSIPFLMNOX-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N ZDJQVSIPFLMNOX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- NNKLKUUGESXCBS-KBPBESRZSA-N Lys-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O NNKLKUUGESXCBS-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- HQXSFFSLXFHWOX-IXOXFDKPSA-N Lys-His-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O HQXSFFSLXFHWOX-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- 101100177977 Magnaporthe oryzae (strain 70-15 / ATCC MYA-4617 / FGSC 8958) PTH3 gene Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030136 Marchiafava-Bignami Disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 description 1
- JHKXZYLNVJRAAJ-WDSKDSINSA-N Met-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JHKXZYLNVJRAAJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KZKVVWBOGDKHKE-QTKMDUPCSA-N Met-Thr-His Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 KZKVVWBOGDKHKE-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYBVBIHNJWOLCJ-UHFFFAOYSA-N N-L-arginyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCCN=C(N)N WYBVBIHNJWOLCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N N-[(2R,3S)-2-(4-chlorophenyl)-1-(1,4-dimethyl-2-oxoquinolin-7-yl)-6-oxopiperidin-3-yl]-2-methylpropane-1-sulfonamide Chemical compound CC(C)CS(=O)(=O)N[C@H]1CCC(=O)N([C@@H]1c1ccc(Cl)cc1)c1ccc2c(C)cc(=O)n(C)c2c1 LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N N-{[3-(2-benzamido-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)-pyrazol-5-yl]carbonyl}-G-dR-G-dD-dD-dD-NH2 Chemical compound S1C(C=2NN=C(C=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(N)=O)=C(C)N=C1NC(=O)C1=CC=CC=C1 OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N 0.000 description 1
- QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O Chemical compound N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 1
- RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N Na salt-Glycocholic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002230 Pectic acid Polymers 0.000 description 1
- RZKYEQDPDZUERB-UHFFFAOYSA-N Pindone Chemical group C1=CC=C2C(=O)C(C(=O)C(C)(C)C)C(=O)C2=C1 RZKYEQDPDZUERB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000053451 Silis Species 0.000 description 1
- PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N Sitafloxacin Chemical compound C([C@H]1N)N(C=2C(=C3C(C(C(C(O)=O)=CN3[C@H]3[C@H](C3)F)=O)=CC=2F)Cl)CC11CC1 PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N Taurocholic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)C1(C)C(O)C2 WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N Valyl-Serine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N [(1s,3r,4ar,7s,8s,8as)-3-hydroxy-8-[2-[(4r)-4-hydroxy-6-oxooxan-2-yl]ethyl]-7-methyl-1,2,3,4,4a,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl] (2s)-2-methylbutanoate Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=C[C@H]2C[C@@H](O)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)CC1C[C@@H](O)CC(=O)O1 LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N 0.000 description 1
- LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[[(3s,5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-4,5-disulfo Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N 0.000 description 1
- REAYFGLASQTHKB-UHFFFAOYSA-N [2-[3-(1H-pyrazol-4-yl)phenoxy]-6-(trifluoromethyl)pyridin-4-yl]methanamine Chemical compound N1N=CC(=C1)C=1C=C(OC2=NC(=CC(=C2)CN)C(F)(F)F)C=CC=1 REAYFGLASQTHKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N [[(2R,3S,4R,5S)-5-(2,6-dioxo-3H-pyridin-3-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [[[(2R,3S,4S,5R,6R)-4-fluoro-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H]([C@H](O)[C@@H]2O)C2C=CC(=O)NC2=O)[C@H](O)[C@@H](F)[C@@H]1O SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 108010080488 arginyl-arginyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N benzathine Chemical compound C=1C=CC=CC=1CNCCNCC1=CC=CC=C1 JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N benzyl n-[(2r)-1-[(2s,4r)-2-[[(2s)-6-amino-1-(1,3-benzoxazol-2-yl)-1,1-dihydroxyhexan-2-yl]carbamoyl]-4-[(4-methylphenyl)methoxy]pyrrolidin-1-yl]-1-oxo-4-phenylbutan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CO[C@H]1CN(C(=O)[C@@H](CCC=2C=CC=CC=2)NC(=O)OCC=2C=CC=CC=2)[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)(O)C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C1 KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 229910052797 bismuth Inorganic materials 0.000 description 1
- JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N bismuth atom Chemical compound [Bi] JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000010478 bone regeneration Effects 0.000 description 1
- 108700027323 bovine parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001275 ca(2+)-mobilization Effects 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052792 caesium Inorganic materials 0.000 description 1
- JWUBBDSIWDLEOM-DTOXIADCSA-N calcidiol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C JWUBBDSIWDLEOM-DTOXIADCSA-N 0.000 description 1
- GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N calcitriol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N 0.000 description 1
- 229960005084 calcitriol Drugs 0.000 description 1
- 235000020964 calcitriol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011612 calcitriol Substances 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 1
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 1
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 1
- 229940125758 compound 15 Drugs 0.000 description 1
- 229940126142 compound 16 Drugs 0.000 description 1
- 229940126086 compound 21 Drugs 0.000 description 1
- 229940126208 compound 22 Drugs 0.000 description 1
- 229940125833 compound 23 Drugs 0.000 description 1
- 229940125961 compound 24 Drugs 0.000 description 1
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 description 1
- 229940125851 compound 27 Drugs 0.000 description 1
- 229940127204 compound 29 Drugs 0.000 description 1
- 229940125877 compound 31 Drugs 0.000 description 1
- 229940125878 compound 36 Drugs 0.000 description 1
- 229940125807 compound 37 Drugs 0.000 description 1
- 229940127573 compound 38 Drugs 0.000 description 1
- 229940125844 compound 46 Drugs 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 229940126545 compound 53 Drugs 0.000 description 1
- 229940125900 compound 59 Drugs 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000005553 drilling Methods 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 230000002894 effect on hypercalcemia Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 208000020089 femoral neck fracture Diseases 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N formamide Substances NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N glycocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N 0.000 description 1
- 229940099347 glycocholic acid Drugs 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 231100000451 gonadotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003605 gonadotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 102000058004 human PTH Human genes 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 208000031424 hyperprolactinemia Diseases 0.000 description 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000009884 interesterification Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 1
- 230000009916 joint effect Effects 0.000 description 1
- BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N ketorolac tromethamine Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- NBTOZLQBSIZIKS-UHFFFAOYSA-N methoxide Chemical compound [O-]C NBTOZLQBSIZIKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRVDJDISBSALJP-UHFFFAOYSA-N methyloxidanyl Chemical compound [O]C GRVDJDISBSALJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- YZMHQCWXYHARLS-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1,2-disulfonic acid Chemical class C1=CC=CC2=C(S(O)(=O)=O)C(S(=O)(=O)O)=CC=C21 YZMHQCWXYHARLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002790 naphthalenes Chemical class 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N nazartinib Chemical compound C1N(C(=O)/C=C/CN(C)C)CCCC[C@H]1N1C2=C(Cl)C=CC=C2N=C1NC(=O)C1=CC=NC(C)=C1 IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N ombitasvir Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NC1=CC=C([C@H]2N([C@@H](CC2)C=2C=CC(NC(=O)[C@H]3N(CCC3)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)C(C)(C)C)C=C1 PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002892 organic cations Chemical class 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001009 osteoporotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013021 overheating Methods 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010318 polygalacturonic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000003836 solid-state method Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2O)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N tert-butyl(dimethyl)silicon Chemical group C[Si](C)C(C)(C)C ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004187 tetrahydropyran-2-yl group Chemical group [H]C1([H])OC([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N tetramethylammonium Chemical compound C[N+](C)(C)C QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-O triethylammonium ion Chemical compound CC[NH+](CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 101150044170 trpE gene Proteins 0.000 description 1
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- MJIBOYFUEIDNPI-HBNMXAOGSA-L zinc 5-[2,3-dihydroxy-5-[(2R,3R,4S,5R,6S)-4,5,6-tris[[3,4-dihydroxy-5-(3,4,5-trihydroxybenzoyl)oxybenzoyl]oxy]-2-[[3,4-dihydroxy-5-(3,4,5-trihydroxybenzoyl)oxybenzoyl]oxymethyl]oxan-3-yl]oxycarbonylphenoxy]carbonyl-3-hydroxybenzene-1,2-diolate Chemical class [Zn++].Oc1cc(cc(O)c1O)C(=O)Oc1cc(cc(O)c1O)C(=O)OC[C@H]1O[C@@H](OC(=O)c2cc(O)c(O)c(OC(=O)c3cc(O)c(O)c(O)c3)c2)[C@H](OC(=O)c2cc(O)c(O)c(OC(=O)c3cc(O)c(O)c(O)c3)c2)[C@@H](OC(=O)c2cc(O)c(O)c(OC(=O)c3cc(O)c(O)c(O)c3)c2)[C@@H]1OC(=O)c1cc(O)c(O)c(OC(=O)c2cc(O)c([O-])c([O-])c2)c1 MJIBOYFUEIDNPI-HBNMXAOGSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0043—Nose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Immunology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Superconductors And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
MENETELMÄ PTH:N JA PTHRP:N ANALOGIEN VALMISTAMISEKSI, JA NIIDEN KÄYTTÖ OSTEOPOROOSIN HOITOON
KEKSINNÖN TAUSTAA
5 a) Keksinnön ala
Keksintö koskee menetelmiä uusien PTH:n ja PTHRP:n analogien valmistamiseksi syntetisoimalla niitä kiinteätaasi-10 ja yhdistelmätekniikoilla. Yhdisteitä voidaan käyttää luuaineksen lisäämiseksi nisäkkäillä.
b) Läheisen tekniikan kuvaus 15 Osteoporoosi on tavallisin aineenvaihdunnallisen luu- sairauden muoto ja sitä voidaan pitää luukadon (osteopenia) oireellisena murtumavaiheena. Vaikka osteoporoosi voi ilmetä useiden sairauksien sivuvaikutuksena, 90 % kaikista tapauksista näyttää olevan idiopaattisia. Naiset ovat 20 vaihdevuosien jälkeen erityisessä vaarassa sairastua idio-paattiseen osteoporoosiin (vaihdevuosien jälkeinen eli tyyppi I:n osteoporoosi). Toisen idiopaattisen osteoporoosin suuren riskiryhmän muodostavat molempien sukupuolten vanhukset (vanhuuteen liittyvä eli tyyppi II:n osteoporoo-25 si). Osteoporoosi on yhdistetty myös kortikosteroidien käyttöön, liikkumattomuuteen tai pitkään vuodelepoon, alkoholismiin, sokeritautiin, gonadotoksiseen kemoterapiaan, hyperprolaktinemiaan, anorexia nervosaan, primaariseen ja sekundaariseen amenorrheaan (kuukautisvuodon puuttuminen) 30 sekä munasarjojen poistoon.
Osteoporoosin eri muodoissa esiintyy usein luunmurtumia sellaisen luukadon seurauksena, joka on johtanut mekaaniseen heikentymiseen. Vaihdevuosien jälkeiselle osteopo-35 roosille ovat tunnusomaisia ranteen ja selkärangan murtumat, kun taas vanhuuteen liittyvän osteoporoosin pääpiirteenä näyttävät olevan reisiluun kaulan murtumat.
2
Luun häviämisen mekanismin uskotaan osteoporoosia sairastavilla liittyvän luurangon uudistumisprosessissa olevaan epätasapainoon. Tämä prosessi on nimetty luun uudismuodos-tumiseksi. Se tapahtuu sarjana erillisiä aktiivisuuskes-5 kuksia. Nämä keskukset ilmestyvät luumatriksin sisälle spontaanisti määrätyn luun pinnalle muodostaen luun re-sorptiopaikan. Osteoklastit (luuta hajottavat tai resor-boivat solut) vastaavat tavallisesti vakiokokoisen luuosan resorptiosta. Tätä resorptioprosessia seuraa osteoblastien 10 (luuta muodostavat solut) ilmestyminen, jotka sitten täyttävät uudelleen uudella luuaineksella osteoklastien jälkeensä jättämän onkalon.
Osteoklasteja ja osteoblasteja muodostuu terveellä aikui-15 sella sellaisessa suhteessa, että luun muodostuminen ja häviäminen ovat tasapainossa. Osteoporoosipotilailla luun uudismuodostumisprosessiin kehittyy epätasapaino, joka johtaa siihen, että luuta häviää nopeammin kuin sitä muodostuu. Vaikka tätä epätasapainoa esiintyy jossain määrin 20 useimmilla ihmisillä ikääntymisen myötä, vaihdevuosien jälkeisessä osteoporoosissa tai munasarjojen poistamisen jälkeen se esiintyy paljon vakavampana ja nuoremmalla iällä. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Osteoporoosin hoitamiseksi on tehty useita yrityksiä pää 2 määränä joko hidastaa luun lisähäviämistä tai mieluummin 3 aikaansaada nettolisäystä luuaineksessa. Tietyt aineet, 4 kuten estrogeeni ja bisfosfonaatit, näyttävät hidastavan 5 luun lisähäviämistä osteoporoosipotilailla. Aineet, jotka 6 hidastavat luun häviämistä, joka johtuu luuaineksen re 7 sorption ja muodostumisen eri kestoajöistä, saattavat 8 näyttää lisäävän luuainesta (3-7 %:n suuruusluokkaa). Tämä 9 näkyvä lisääntyminen on kuitenkin aikarajoitteista eikä 10 progressiivista, ja se johtuu "uudismuodostumistilan" 11 pienenemisestä. Lisäksi koska häviäminen ja muodostuminen ovat läheisesti toisiinsa kytkeytyneitä, hoidot, jotka es- tävät luun häviämistä, vaikuttavat viime kädessä estävästi myös luun muodostumiseen.
3
Lisäkilpirauhashormoni- eli paratyroidiini(PTH) -hoidon on 5 ehdotettu johtavan sekä kasvaneeseen luuaineksen vaihtu-misnopeuteen että positiiviseen kalsiumtasapainoon. Ihmisillä tehdyt kliiniset kokeet ovat kuitenkin osoittaneet, että mitä tahansa trabekulaarisen luuaineksen lisäystä vastaa väheneminen kortIkaalisessa luussa niin, että luun 10 kokonaismäärässä ei tapahdu nettolisäystä.
Hefti, et ai. ovat esittäneet artikkelissa Clinical Science 62, 389-396 (1982), että päivittäiset ihonalaiset annokset joko bPTH(1-84):ää tai hPTH(1-34):ää lisäsivät ke-15 hon kokonaiskalsiumin määrää ja yksittäisten luiden tuhka-painoa sekä normaaleilla että osteoporoottisilla aikuisilla naarasrotilla.
Liu, et ai. ovat havainneet artikkelissa J. Bone Miner.
20 Res. 6: 10, 1071-1080 (1991), että munasarjojen poisto ai kuisilta naarasrotilta aiheutti 47 %:n häviämisen trabe-kulaarisessa luuaineksessa proksimaalisessa sääriluun me-tafyysissä, minkä yhteydessä osteoblastien ja trabekulaa-risten osteoklastien määrä lisääntyi merkittävästi. Päi-25 vittäiset ihonalaiset hPTH(1-34)-injektiot lopettivat täydellisesti trabekulaarisen luun häviämisen ja johtivat trabekkeliluuainesmääriin, jotka ylittivät näennäisleikat-tujen kontrollien määrät. Osteoblastien määrä lisääntyi ja osteoklastien määrä väheni.
30
Hock et ai. ovat esittäneet artikkelissa J. Bone Min. Res. 7: 1, 65-71 (1992), että päivittäiset ihonalaiset hPTH(l-34)-injektiot terveille aikuisille urosrotille 12 päivän ajan lisäsivät trabekulaarisen ja kortikaalisen luun kal-35 siumpitoisuutta ja kuivapainoa. Kokonaisluuaines, trabek-keliluutilavuus, trabekkelipaksuus ja -lukumäärä sekä osteoblastiset pinnat lisääntyivät.
4
Nisäkkäiden paratyroidiinihormonit, esim. ihmisen (hPTH), naudan (bPTH) ja porsaan (pPTH), ovat yksittäisiä 84 aminohappotähteen polypeptidiketjuja, joiden molekyylipainot 5 ovat noin 9500. Biologinen aktiivisuus liittyy N-terminaa-liseen alueeseen, josta tarvitaan ilmeisesti vähintään tähteet (1-3 4) .
Ihmisen PTH:n N-terminaalinen osa eroaa naudan ja porsaan 10 hormonien N-terminaalisesta osasta vain vastaavasti kolmen ja kahden aminohappotähteen osalta: hPTH(1-34):
Ser Vai Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 15 1 5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Vai Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25
Gin Asp Vai His Asn Phe (SEKV. ID NO:l); 30 20 bPTH(1-34):
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Met His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Met Glu Arg Vai Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu 25 15 20 25
Gin Asp Vai His Asn Phe (SEKV. ID NO:2); 30 pPTH(1-34): 30 Ser Vai Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10
Leu Ser Ser Leu Glu Arg Vai Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25
Gin Asp Vai His Asn Phe (SEKV. ID NO:3).
35 30 5 PTH:n ensisijaisena tehtävänä on tuoda esiin adaptiivisia muutoksia, jotka auttavat ylläpitämään Ca2+-ionipitoisuu-den vakiona solunulkoisessa nesteessä. PTH toimii munuaisissa lisäämällä munuaistubuluksissa Ca2+:n takaisinimey-5 tyrnistä virtsasta sekä stimuloimalla kalsifidiolin muuntumista kalsitrioliksi, joka vastaa Ca2+:n imeytymisestä suolista. Eräs huomattava vaikutus on Ca2+:n liikkeellelähdön edistäminen luustosta. Luustossa PTH vaikuttaa nostamalla Ca2+:n ja fosfaatin imeytymisnopeutta. PTH stimu-10 loi osteoklastien suorittamaa luun resorptionopeutta, lisää mesenkyymisolujen erilaistumisnopeutta osteoklasteiksi ja pidentää jälkimmäisten solujen puoliintumisikää. Pitkitetyn PTH-vaikutuksen mukana myös luuta muodostavien os-teoblastien lukumäärä lisääntyy; siten luuaineksen vaihtu-15 vuus ja uudismuodostus nopeutuvat. Yksittäiset osteoblas-tit näyttävät kuitenkin olevan vähemmän aktiivisia kuin normaalisti.
Rosenblatt, et ai. ovat kuvanneet US-patenteissa 20 4,423,037, 4,968,669 ja 5,001,223 PTH-antagonisteja, jotka on saatu poistamalla N-terminaaliset (1-6) aminohapot ja korvaamalla ne valikoiden aminohapoilla Phe7, Met8'18 ja Gly12. Selostuksen mukaan Tyr34-NH2 lisäsi näiden yhdisteiden aktiivisuutta ja stabiilisuutta.
25
Paratyroidiiniin liittynyt peptidi (PTHRP), joka on 140+ aminohappoa sisältävä proteiini, ja sen fragmentit toistavat PTH:n pääasiallisia biologisia vaikutuksia. Useat ihmisten ja eläinten kasvaimet ja muut kudokset valmistavat 30 PTHRP:tä, ja sillä voi olla vaikutusta pahanlaatuisuuteen liittyvässä hyperkalsemiassa. hPTHRP(1-34):n sekvenssi on seuraavanlainen:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 35 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile 15 20 25 6
Ala Glu Ile His Thr Ala (SEKV. ID N0:4).
30 hPTH:n ja hPTHRP:n välinen sekvenssihomologia on suureksi 5 osaksi rajoittunut 13:een N-terminaaliseen tähteeseen, joista 8 on identtisiä; hPTH:n reseptorin sitoutumiskohdasta (25-34) vain 1 aminohappo 10:stä on säilynyt hPTHRP:ssä. Yhteisen aktiivisuuden perustana saattaa olla rakenteen samankaltaisuus. Cohen, et ai. ovat ehdottaneet 10 artikkelissa J. Biol. Chem. 266: 3, 1997-2004 (1991), että suuri osa PTH(l-34):n ja PTHRP(1-34):n sekvenssistä, erityisesti alueet (5-18) ja (21-34), omaksuu a-helikaalisen konfiguraation, samalla he huomauttavat, että on jossain määrin kyseenalaista, onko tämä konfiguraatio vallitseva 15 karboksyyliterminaalisessa päässä fysiologisissa olosuhteissa. Sellainen sekundaarirakenne saattaa olla tärkeä lipidivuorovaikutuksessa, reseptorivuorovaikutuksessa ja/tai rakenteen stabiloinnissa. 1
Olemme syntetoineet PTH:n ja PTHRP:n analogeja tarkoituksena kehittää parannettuja terapeuttisia aineita luuainek-sen vahvistamiseksi nisäkkäillä, mukaan luettuna osteoporoosin vaivaamat nisäkkäät.
25 Keksinnön yhteenveto
Keksintö koskee menetelmää lisäkilpirauhashormonin kaltaisen peptidin (PTH), (PTHRP) ja PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten typistettyjen homologien ja analogien 30 synteettisten polypeptidianalogien sekä niiden suolojen valmistamiseksi, joissa aminohappotähteet (22-31) muodostavat amfipaattisen α-heliksin, jossa mainitut tähteet (22-31) hydrofiilisiä aminohappoja (Haa) tai lipofiilisiä aminohappoja (Laa), ja ovat järjestettyinä sekvenssiksi: 35 Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa.
7
Kun spesifiset tätä sekvessityyppiä selventävät ilmentymismuodot insertoidaan PTH:hon, PTHRP:hen ja PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisiin, typistettyihin analo-geihin ja homologeihin, ovat tuloksena saatavat polypepti-5 dit tehokkaita luuta uudismuodostavia aineita.
Eräs keksinnön näkökanta koskee menetelmää PTH:n, PTHRP:n ja PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten, typistettyjen analogien ja homologien analogien tai niiden suolo-10 jen valmistamiseksi, joissa aminohappotähteet (22-31) muodostavat amfipaattisen α-heliksin, jossa mainittujen tähteiden (22-31) muodostama sekvenssi on joko: a) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Xaa5 Leu Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10, jossa 15 10 15 Xaa1 ja Xaa4 ovat toisistaan riippumatta Glu, Glu(OCH3),
His tai Phe; Xaa2 on Leu tai Phe; Xaa5 on Lys tai His; Xaa7 ja Xaa10 ovat toisistaan riippumatta Leu tai Ile; Xaa8 on Ala, Arg tai Glu; ja Xaa9 on Lys tai Glu (SEKV. ID NO:85); edullisesti 20 Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu, jossa 15 10
Xaa on Glu tai Arg (SEKV. ID NO:26); b) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Arg Leu Leu Xaa8 Arg Leu, jossa 25 1 5 10
Xaa1 ja Xaa4 ovat toisistaan riippumatta Glu, Glu(OCH3),
His tai Phe; Xaa2 on Leu tai Phe; Xaa8 on Glu, Lys tai Lys(COCH2PEGX) ja PEGX on poly-(eteeniglykolimetyylieet-teri)radikaali, jonka molekyylipaino on 100 - 10 000 30 (SEKV. ID NO:86); edullisesti
Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu, jossa 15 10
Xaa on Glu, Lys tai Lys(COCH2PEGX) ja PEGX on poly-(etee-niglykolimetyylieetteri)radikaali, jonka molekyylipaino on 35 100 - 10 000 (SEKV. ID NO:27); 8 c) Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu 15 10 (SEKV. ID NO:28); 5 d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu 15 10 (SEKV. ID NO:29); e) Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu 15 10 10 (SEKV. ID NO :30) .
Toinen keksinnön näkökanta koskee menetelmää PTH:n, PTHRP:n ja PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten, typistettyjen homologien ja analogien analogien tai niiden 15 suolojen valmistamiseksi, joissa aminohappotähteet (22-31) muodostavat amfipaattisen α-heliksin, jossa mainittujen tähteiden (22-31) muodostama sekvenssi on joko: a) Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu, jossa 15 10 20 Xaa on Glu tai Arg (SEKV. ID NO:26); b) Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu, jossa 15 10
Xaa on Glu, Lys tai Lys(COCH2PEGX) ja PEGX on poly-(etee-25 niglykolimetyylieetteri)radikaali, jonka molekyylipaino on 100 - 10 000 (SEKV. ID NO:27); c) Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu 15 10 30 (SEKV. ID NO:28) ; d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu 15 10 (SEKV. ID NO:29); 35 e) Ala Phe Tyr Asp Lys Vai Ala Glu Lys Leu 15 10 9 (SEKV. ID NO :30) .
Näistä yhdisteistä voidaan valmistaa farmaseuttisia koostumuksia sellaisten tilojen ehkäisyyn tai hoitoon, joille 5 on tunnusomaista luuaineksen väheneminen, jotka koostumukset sisältävät luuaineksen lisääntymiseen vaikuttavan määrän PTH:n, PTHRP:n ja PTH:n ja PTHRPrn fysiologisesti aktiivisten typistettyjen homologien ja analogien polypep-tidianalogia sekä sen suoloja, joissa aminohappotähteet 10 (22-31) muodostavat amfipaattisen α-heliksin, jossa maini tut tähteet (22-31) ovat hydrofiilisiä aminohappoja (Haa) tai lipofiilisiä aminohappoja (Laa), ja ovat järjestettyinä sekvenssiksi:
Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa 15 sekoituksena farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan kanssa. Menetelmissä farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi sekoitetaan edellä kuvattuja yhdisteitä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan kanssa.
20 Keksinnön mukaisilla menetelmillä valmistettuja yhdisteitä voidaan käyttää sellaisten nisäkkäiden tilojen hoitamiseksi, joille on tunnusomaista luuaineksen häviäminen, jolloin hoidon tarpeessa olevalle nisäkkäälle annetaan luu-aineksen kasvuun vaikuttava määrä PTH:n, PTHRP:n tai PTH:n 25 tai PTHRP:n fysiologisesti aktiivisen typistetyn homologin tai analogin polypeptidianalogia tai sen suolaa, jossa aminohappotähteet (22-31) muodostavat amfipaattisen a-heliksin, jossa mainitut tähteet (22-31) ovat hydrofiili-siä aminohappoja (Haa) tai lipofiilisiä aminohappoja 30 (Laa), ja ovat järjestettyinä sekvenssiksi:
Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa.
Yksityiskohtaisemmin menetelmissä sellaisten nisäkkäiden tilojen hoitamiseksi, joille on tunnusomaista luuaineksen 35 häviäminen, hoidon tarpeessa olevalle nisäkkäälle annetaan luuaineksen kasvuun vaikuttava määrä PTH:n, PTHRP:n tai PTH:n tai PTHRP:n fysiologisesti aktiivisen typistetyn 10 homologin tai analogin polypeptidianalogia tai sen suolaa, jossa aminohappotähteet (22-31) muodostavat amfipaattisen a-heliksin, jossa mainitut tähteet (22-31) muodostavat joko sekvenssin SEKV. ID NO:26, 27, 28, 29 tai 30.
5 Tämä keksintö sisältää olennaisesti menetelmät PTH:n, PTHRP:n ja PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten typistettyjen homologien ja analogien polypeptidianalogien sekä niiden suolojen, joissa aminohappotähteet (22-31) 10 muodostavat amfipaattisen a-heliksin, jossa mainitut tähteet (22-31) ovat hydrofiilisiä aminohappoja (Haa) tai lipofiilisiä aminohappoja (Laa), ja ovat järjestettyinä sekvenssiksi:
Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa, 15 valmistamiseksi kiinteäfaasisynteesillä, joissa menetelmissä perättäisestä liitetään suojattuja aminohappoja sopivaan hartsikantajaan, poistetaan sivuketju- ja Na-suoja-ryhmät ja lohkaistaan polypeptidi hartsista. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Tämä keksintö sisältää myös menetelmät PTH:n, PTHRP:n ja 2 PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten typistettyjen 3 homologien ja analogien polypeptidianalogien sekä niiden 4 suolojen, joissa aminohappotähteet (22-31) muodostavat 5 amfipaattisen α-heliksin, jossa mainittujen tähteiden (22— 6 31) muodostama sekvenssi on joko SEKV. ID NO:26, 27, 28, 7 29 tai 30, valmistamiseksi kiinteäfaasisynteesillä, joissa 8 menetelmissä perättäisestä liitetään suojattuja aminohap 9 poja sopivaan hartsikantajaan, poistetaan sivuketju- ja 10 N“-suojaryhmät ja lohkaistaan polypeptidi hartsista.
11 12
Samoin keksintö sisältää menetelmät PTH:n, PTHRP:n ja 13 PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten typistettyjen 14 homologien ja analogien polypeptidianalogien sekä niiden 15 suolojen, joissa aminohappotähteet (22-31) muodostavat 16 amfipaattisen α-heliksin, jossa mainitut tähteet (22-31) ovat hydrofiilisiä aminohappoja (Haa) tai lipofiilisiä aminohappoja (Laa), ja ovat järjestettyinä sekvenssiksi: 11
Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa, valmistamiseksi rekombinanttisynteesillä.
Keksinnössä käytetään DNA-sekvenssejä, vektoreita ja plas-5 mideja mainittujen polypeptidianalogien rekombinanttisyn-teesiin. Erityisesti käytetään DNA-sekvenssejä, vektoreita ja plasmideja PTH:n, PTHRP:n ja PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten typistettyjen homologien ja analogien polypeptidianalogien sekä niiden suolojen, joissa amino-10 happotähteet (22-31) muodostavat amfipaattisen a-heliksin, jossa mainittujen tähteiden (22-31) muodostama sekvenssi on joko SEKV. ID NO:26, 27, 28, 29 tai 30, valmistamiseksi rekombinanttisynteesillä.
15 Piirrosten lyhyt kuvaus
Kuva 1 esittää keksinnön mukaisesti valmistettua PTHRP(1-34)-analogia koodaavan synteettisen geenin DNA-sekvenssin ja restriktioentsyymikohdat (hPTH:n PCR-amplifikaatio).
20
Kuva 2 esittää sellaisen plasmidin valmistuksen pääkohdat, joka sisältää PTHRP(1-34)-analogin geenin (Trp LE 18 hPTHRP(l-34)1 -rakenne).
25 Kuva 3 esittää sellaisen plasmidin valmistuksen pääkohdat, joka sisältää kaksi PTHRP(1-34)-analogin geenikopiota (Trp LE 18 hPTHRP(1-34)2 -rakenne).
Kuva 4 esittää sellaisen plasmidin valmistuksen pääkohdat, 30 joka sisältää neljä PTHRP(1-34)-analogin geenikopiota (Trp LE 18 hPTHRP(1-34)4 -rakenne).
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus 35 Lyhenteet ja määritelmät
Erilaisten tavallisten nukleotidiemästen ja aminohappojen yksi- ja kolmikirjaimiset lyhenteet ovat kuten on suosi- 12 teltu artikkeleissa Pure Appi. Chem. 31, 639-645 (1972) ja 40, 277-290 (1974), ja ne noudattavat sekä 37 CFR §1.822 (55 FR 18245, Toukokuu 1, 1990)- että PCT-sääntöjä (WIPO-standardi ST.23: Recommendation for the Presentation of 5 Nucleotide and Amino Acid Sequences in Patent Applications and in Published Patent Documents). Yksi- ja kolmikirjaimiset lyhenteet ovat seuraavanlaisia: 10 Aminohappojen lyhenteet
Aminohappo Kolmikirjaiminen Yksikirjaiminen symboli symboli
Alaniini Ala A
Arginiini Arg R
15 Asparagiini Asn N
Asparagiinihappo Asp D
Asn + Asp Asx B
Kysteiini Cys C
Glutamiini Gin Q
20 Glutamiinihappo Glu E
Gin + Glu Glx Z
Glysiini Gly G
Histidiini His H
Isoleusiini Ile I
25 Leusiini Leu L
Lysiini Lys K
Metioniini Met M
Fenyylialaniini Phe F
Proliini Pro P
30 Seriini Ser S
Treoniini Thr T
Tryptofaani Trp W
Tyrosiini Tyr Y
Väliini Vai V
35 Muu aminohappo Xaa X
Lyhenteet tarkoittavat L-aminohappoja ellei D- tai D,L-muotoja ole erikseen merkitty. Tietyt sekä luonnolliset että ei-luonnolliset aminohapot ovat akiraalisia, esim.
40 glysiini. Kaikki peptidisekvenssit esitetään siten, että N-terminaalinen aminohappo on vasemmalla ja C-terminaali-nen aminohappo on oikealla.
13
Muita tässä käytettyjä muiden aminohappojen ja yhdisteiden lyhenteitä ovat: hSer homoseriini 5 hSerlac homoseriinilaktoni
Nle norleusiini PEG2 dieteeniglykolimetyylieetterin radikaali, a.k.a. metoksidi(eteenioksi), CH3O(CH2CH2O) 2-, (MP = 119) PEG5000 poly(eteeniglykolimetyylieetterin) radikaali, 10 a.k.a. metoksipoly(eteenioksi), CH30(CH2CH20) u0-, (keskim. MP = 5000) PEGX poly(eteeniglykolimetyylieetterin) radikaali, CH3O (CH2CH2O) n-/· n = 2-225, (keskim.
MP = 100 - 10 000) 15 "Hydrofiilinen aminohappo (Haa)" tarkoittaa aminohappoa, jossa on vähintään yksi hydrofiilinen funktionaalinen ryhmä niiden lisäksi, jotka tarvitaan peptidisidoksen muodostamiseen, kuten esim. arginiini, asparagiini, aspara-20 giinihappo, glutamiinihappo, glutamiini, histidiini, ly-siini, seriini, treoniini ja niiden homologit.
"Lipofiilinen aminohappo (Laa)" tarkoittaa varauksetonta, alifaattista tai aromaattista aminohappoa, joita ovat 25 esim. isoleusiini, leusiini, metioniini, fenyylialaniini, tryptofaani, tyrosiini, väliini ja niiden homologit.
Tämän keksinnön tarkoituksia varten alaniini luokitellaan "amfifiiliseksi", s.o. se pystyy toimimaan joko hydrofii-30 lisenä tai lipofiilisenä aminohappona.
"Fysiologisesti aktiivinen typistetty PTH:n tai PTHRP:n homologi tai analogi" tarkoittaa polypeptidiä, jonka sekvenssissä on vähemmän aminohappoja kuin PTH:ssa tai 35 PTHRP:ssä kokonaisuudessaan löytyy, joka kuitenkin saa esiin samanlaisen fysiologisen reaktion. Typistetyn PTH:n tai PTHRP:n ei tarvitse olla täysin homologinen PTH:n tai 14 PTHRP:n kanssa saadakseen esiin samanlaisen fysiologisen reaktion. PTH(l-34) ja PTHRP(l-34) ovat edullisia, mutta eivät ainoita tämän ryhmän edustajia.
5 "Amfipaattinen a-heliksi" tarkoittaa tiettyjen polypepti-dien osoittamaa sekundaarirakennetta, jossa aminohapot omaksuvat α-helikaalisen konfiguraation, jossa vastakkaiset polaariset ja ei-polaariset puolet ovat orientoituneet heliksin pituusakselia pitkin. α-Helikaalisen rakenteen 10 mahdollisuutta kiinnostavassa polypeptidissä voidaan jossain määrin tutkia rakentamalla sopivan välin (pitch) "Schiffer-Edmundsonin kierre (wheel)" (M. Schiffer ja A.B. Edmundson, Biophys. J. 7, 121 (1967)) ja huomioimalla hydrofiilisten ja lipofiilisten tähteiden jakautuminen 15 heliksiä kiertävän sylinterin vastakkaisille puolille.
Vaihtoehtoisesti saatavilla oleva empiirinen todistusaineisto, kuten esim. tiedot sirkulaarisesta dikroismista tai röntgensädediffraktiosta, saattaa osoittaa cx-helikaa-lisen alueen olemassaolon kyseisessä polypeptidissä. Ihan-20 teellisessä α-heliksissä on kierrettä kohti 3,6 aminohappotähdettä, joiden vierekkäiset sivuketjut eroavat toisistaan 100°:n kaarella. Eisenberg et ai. ovat yhdistäneet artikkeleissa Nature 299: 371-374 (1982) ja Proc. Nat. Acad. Sei. USA 81: 140-144 (1984) hydrofobisuusasteikon 25 helikaaliseen kierteeseen määrittääkseen kvantitatiivisesti amfipaattisten heliksien käsitteen. Keskimääräinen hydrof obisuusmomentti määritetään heliksin muodostavien aminohappojen hydrofobisuuksien vektorisummana. Seuraavat aminohappojen hydrofobisuudet ovat Eisenbergin (1984) 30 selostamia "yleiseksi" asteikoksi:
Ile 0,73; Phe 0,61; Vai 0,54; Leu 0,53; Trp 0,37; Met 0,26; Ala 0,25; Gly 0,16; Cys 0,04; Tyr 0,02; Pro -0,07; Thr -0,18; Ser -0,26; His -0,40; Glu -0,62; Asn -0,64; Gin -0,69; Asp -0,72; Lys -1,10; Arg -1,76.
35 15
Ihanteellisen α-heliksin, jossa on 3,6 aminohappotähdettä kierrettä kohti (tai sivuketjujen välillä on 100°:n kaari (= 360°/3,6)), hydrofobisuusmomentti, μΗ, voidaan laskea kaavasta: 5 μΗ = [ (Σ HNsino (N-l) )2 + (Σ H Ncoso (N-l) ) 2]1/2, jossa Hn on N:nen aminohapon hydrofobisuusarvo ja sekvenssissä olevien N:n aminohapon summat otetaan jaksollisuudella σ= 100°. Hydrofobisuusmomentti voidaan ilmaista keskimääräisenä hydrofobisuusmomenttina tähdettä kohti jaka-10 maila μΗ N:llä, jolloin saadaan <μΗ>. Kun <μΗ>:η arvo on 100° ± 20°:ssa noin 0,20 tai suurempi, se viittaa amfi-paattisen heliksin muodostukseen. <μΗ>:η arvot yhdisteille hPTHRP(22-31) ja hPTH(22-31) 100°:ssa ovat vastaavasti 0,19 ja 0,37.
15
Cornett, et ai. ovat artikkelissa J. Mol. Biol., 195: 659-685 (1987) laajentaneet amfipaattisten α-heliksien tutkimusta esittelemällä "amfipaattisen indeksin" amfipaatti-suuden ennustajana. He päättelivät, että noin puolet kai-20 kista tunnetuista α-helikseistä on amfipaattisia, ja että vallitseva taajuus on pikemminkin 97,5° kuin 100°, jolloin tähteiden määrä kierrettä kohti on lähempänä arvoa 3,7 kuin arvoa 3,6. Vaikka tällaiset hienoudet ovat tieteellisesti kiinnostavia, Eisenbergin ym. peruslähestymistapa on 25 riittävä luokittelemaan tietty sekvenssi amfipaattiseksi, erityisesti kun sekvenssi suunnitellaan alusta lähtien siten, että se muodostaa amfipaattisen a-heliksin.
Korvaavasta amfipaattisesta α-helikaalisesta aminohappo-30 sekvenssistä voi puuttua homologia luontaisesti esiintyvän polypeptidin tietyn osan kanssa, mutta se johtaa samanlaiseen sekundaarirakenteeseen, s.o. α-heliksiin, jossa polaariset ja ei-polaariset puolet ovat vastakkain, fysiologisessa ympäristössä. Luontaisesti esiintyvän aminohap-35 posekvenssin korvaaminen vaihtoehtoisella sekvenssillä voi 16 vaikuttaa edullisesti fysiologiseen aktiivisuuteen, sta-biilisuuteen tai muihin muunnetun lähtöpolypeptidin ominaisuuksiin. Sellaisten sekvenssien suunnitteluun ja valintaan saa opastusta muun muassa artikkeleista J. L.
5 Krstenansky, et ai. FEES Letters 242: 2, 409-413 (1989) ja J. P. Segrest, et ai. Proteins: Structure, Function, and Genetics 8: 103-117 (1990).
Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavalla 10 aminohapon 10 amfipaattisella α-heliksillä on kaava:
Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa, jossa Haa-aminohapot ovat hydrofiilisiä aminohappoja ja Laa-aminohapot ovat lipofiilisiä aminohappoja, kuten edellä on määritelty. Kun oletetaan ihanteellinen a-heliksi, 15 täh-teet 1, 4, 5, 8 ja 9 jakautuvat heliksin toiselle sivulle (A) noin 140° kaaren alueelle, kun taas tähteet 2, 3, 6, 7 ja 10 sijaitsevat vastakkaisella 140°:n alueella heliksin toisella sivulla (B). Kaikki toisen sivun tähteet ovat edullisesti samaa polaarisuutta samalla kun toisen 20 sivun kaikki tähteet ovat vastakkaista polaarisuutta, s.o. jos sivu A on kokonaan hydrofiilinen, sivu B on kokonaan lipofiilinen ja päinvastoin. Alan asiantuntija huomaa, että vaikka tässä keksinnössä esitettyjä heliksejä kuvataan kaavalla 25 Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa, niin vastakkainen sekvenssi
Laa (Haa Haa Laa Laa)2 Haa täyttää myös tähteiden jakaantumisvaatimuksen ja on siten vastaavanlainen tässä keksinnössä esitettyjen heliksien 30 kuvaaja.
Sekä hydrofiilinen että lipofiilinen aminohappo voidaan korvata alaniinilla, koska Ala voi helposti olla kummalla amfipaattisen α-heliksin sivulla tahansa, vaikkakaan Alaio 35 ei muodosta amfipaattista α-heliksiä. Tavallisesti ei käytetä proliinia, kysteiiniä eikä tyrosiiniä; niiden läsnä- 17 olo ja muut satunnaiset virheet sekvenssissä voidaan kuitenkin sietää, esim. hydrofiilinen tähde lipoiiilisellä sivulla, niin kauan kuin muut osan aminohapot olennaisilta osiltaan sopivat jakoon hydrofiilinen sivu - lipofiilinen 5 sivu. Sopiva keino sen määrittämiseksi, onko sekvenssi riittävän amfipaattinen ollakseen tässä keksinnössä esitetty sekvenssi, on keskimääräisen hydrofobisuusmomentin laskeminen, kuten edellä on kuvattu. Jos huippukeskimo-mentti tähdettä kohti 100° ± 20°:ssa ylittää noin arvon 10 0,20, sekvenssi muodostaa amfipaattisen heliksin ja on tässä keksinnössä esitetty sekvenssi.
Esimerkiksi sekvenssille ID NO:26 lasketaan keskimääräinen hydrofobisuusmomentti tähdettä kohti 100°:ssa, kun Xaa = 15 Glu, seuraavasti: A.A_Hn_σ (N—1) H sin σ(Ν-1) H cos σ(Ν-1) E -0,62 0 0 -0,62 L 0,53 100 0,52 -0,17 20 L 0,53 200 -0,18 -0,50 E -0,62 300 0,34 -0,31 K -1,1 400 -0,70 -0,85 L 0,53 500 0,34 -0,41 L 0,53 600 -0,46 -0,27 25 E -0,62 700 0,21 -0,58 K -1,1 800 -1,08 -0,19 L 0,53 900 0 -0,53 Σ= 0,81 Σ= -4,43 30 μΗ= [(0,81)2 + (-4, 43 ) 2 ] 1/2 = 4,50 <μΗ> = 4,50/10 = 0,45 35 Tämän sekvenssin keskimääräinen huippuhydrofobisuusmomentti esiintyy 92°:ssa ja sen arvo on 0,48.
18
Kun tätä käsitettä sovellettiin PTH:hon ja PTHRP:hen, oletettiin, että joko toisella tai molemmilla alueilla (7-16) ja (22-31) on οί-helikaalinen sekundaarirakenne ja ne voi-5 täisiin korvata ei-homologisella sekvenssillä, jolla on samanlaiset rakenneominaisuudet, ilman biologisen aktiivisuuden menetystä tai immunoreaktion induktiota.
Edulliset suoritustavat 10
Eräs keksinnön näkökanta koskee menetelmää PTH:n, PTHRPtn ja PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten, typistettyjen analogien ja homologien analogien tai niiden suolojen valmistamiseksi, joissa aminohappotähteet (22-31) 15 muodostavat amfipaattisen α-heliksin, jossa mainittujen tähteiden (22-31) muodostama sekvenssi on joko: a) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Xaa5 Leu Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10, jossa 15 10
Xaa1 ja Xaa4 ovat toisistaan riippumatta Glu, Glu(0CH3), 20 His tai Phe; Xaa2 on Leu tai Phe; Xaa5 on Lys tai His; Xaa7 ja Xaa ovat toisistaan riippumatta Leu tai Ile; Xaa on Ala, Arg tai Glu; ja Xaa9 on Lys tai Glu (SEKV. ID NO:85); edullisesti
Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu, jossa 25 1 5 10
Xaa on Glu tai Arg (SEKV. ID NO:26); b) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Arg Leu Leu Xaa8 Arg Leu, jossa 15 10 30 Xaa1 ja Xaa4 ovat toisistaan riippumatta Glu, Glu(0CH3),
His tai Phe; Xaa2 on Leu tai Phe; Xaa8 on Glu, Lys tai Lys(COCH2PEGX) ja PEGX on poly-(eteeniglykolimetyylieette-ri)radikaali, jonka molekyylipaino on 100 - 10 000 (SEKV. ID NO:86); edullisesti 35 Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu, jossa 15 10 19
Xaa on Glu, Lys tai Lys(COCH2PEGX) ja PEGX on poly-(etee-niglykolimetyylieetteri) radikaali, jonka molekyylipaino on 100 - 10 000 (SEKV. ID NO:27); 5 c) Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu 15 10 (SEKV. ID NO:28); 10 d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu 15 10 (SEKV. ID NO:29); e) Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu 15 1 5 10 (SEKV. ID NO :30) .
Toinen keksinnön näkökanta koskee menetelmää PTH:n, PTHRP:n ja PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten, 20 typistettyjen analogien ja homologien analogien tai niiden suolojen valmistamiseksi, joilla on kaava:
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Leu His Xaa10 Xaa11 Gly Xaa13 Ser Ile Gin Xaa17 Leu Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22-31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 loppu, jossa 25 Xaa1 on poissa tai se on Ala;
Xaa2 on poissa tai se on Vai;
Xaa3 on poissa tai se on Ser;
Xaa4 on poissa tai se on Glu tai Glu(OCH3);
Xaa5 on poissa tai se on His tai Ala; 30 Xaa6 on poissa tai se on Gin;
Xaa7 on poissa tai se on Leu;
Xaa10 ja Xaa17 ovat toisistaan riippumatta Asp tai Asp (OCH3) ;
Xaa11 on Lys, Arg tai Leu; 35 Xaa13 on Lys, Arg, Tyr, Cys, Leu, Cys (CH2CONH (CH2) 2NH (bio-tinyyli)), Lys(7-dimetyyliamino-2-okso-2H-l-benksopyraani- 4-asetyyli) tai Lys(dihydrokinnamoyyli); 20 on
Xaa on Arg tai Leu;
Xaa ja Xaa ovat toisistaan riippumatta Lys, Ala tai Arg; 5 Xaa22-31 on SEKV. ID NO:26, 27, 28, 29 tai 30; Xaa1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 on His,
Pro tai Lys;
Xaa14 on poissa tai se on Pro, Thr, Glu tai Ala; 34 * i
Xaa on poissa tai se on Pro, Arg, Met, Ala, hSer, hSer- laktoni, Tyr, Leu tai 1,4-diaminobutyryylilaktaami; 10 Xaa15 on poissa tai se on Pro, Glu, Ser, Ala tai Gly;
Xaa16 on poissa tai se on Ala, Arg tai Ile;
Xaa17 on poissa tai se on Arg, Trp tai 3-(-2-naftyyli)-L- alaniini;
Xaa on poissa tai se on Ala tai hSer tai Xaa on Thr 15 Arg Ser Ala Trp; ja loppu on -OR tai -NR2, jossa kumpikin R on toisistaan riippumatta H, (C1-C4)alkyyli tai fenyy-li (C1-C4)alkyyli; sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.
Vielä eräs keksinnön näkökanta sisältää menetelmän fysio 2 logisesti aktiivisen typistetyn hPTHRP(1-34)-homologin 3 polypeptidianalogien, kuten esimerkiksi kaavassa (I) esi 4 tettyjen, valmistamiseksi: 5
Ala Vai Ser Glu Xaa5 Gin Leu Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13 6
Ser Ile Gin Asp Leu Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22-31 Xaa13 Xaa14 Xaa18 7 loppu, jossa: 8
Xaa5 on His tai Ala; 9
Xaa11 ja Xaa13 ovat toisistaan riippumatta Lys, Arg tai 10
Leu; 11
Xaa19 ja Xaa21 ovat toisistaan riippumatta Ala tai Arg; 12
Xaa22-31 on joko 13 a) Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu, jossa 14 15 10 15 16 b) Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu, jossa 17 15 10 18
Xaa on Glu tai Arg (SEKV. ID NO:26); 21
Xaa on Glu, Lys tai Lys(COCH2PEGX) ja PEGX on poly-(etee-niglykolimetyylieetteri) radikaali, jonka molekyylipaino on 100 - 10 000 (SEKV. ID NO:27); 5 c) Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu 15 10 (SEKV. ID NO:28); d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu 10 1 5 10 (SEKV. ID NO:29); e) Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu 15 10 15 (SEKV. ID NO:30) ;
Xaa32 on His tai Lys;
Xaa33 on Thr, Glu tai Ala;
Xaa34 on Ala, hSer, Tyr tai Leu; 20 ja loppu on Gly Arg Arg, laktoni, -OH tai -NR2, jossa kumpikin R on H tai (Ci-C4)alkyyli; ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat. (Kaava I)
Vielä yksityiskohtaisempi keksinnön näkökanta sisältää 25 menetelmän kaavan (I) mukaisten polypeptidien valmistamiseksi, joissa Xaa22”31 on SEKVENSSI ID NO: 26, joille <μΗ> ylittää arvon 0,45 100°:ssa. Vielä yksityiskohtaisempi keksinnön näkökanta sisältää menetelmän niiden kaavan (I) mukaisten polypeptidien valmistamiseksi, joissa Xaa22-31 on 30 SEKVENSSI ID NO: 26, Xaa11 ja Xaa13 ovat molemmat Lys; ja Xaa19 ja Xaa21 ovat molemmat Arg.
Tyypillisiä sellaisia polypeptidejä ovat muun muassa: 35 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 22
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Arg Lys Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:5); 30 5
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 10 Glu Lys Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:6); 30
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10 15 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:7); 30 20 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr hSer NH2 (SEKV. ID NO:8); 25 30
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 30 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr hSerlac (SEKV. ID NO:9); 30
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 35 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Gly Arg Arg OH (SEKV. ID NO:10); 30 35 23 ja 5 Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 lie Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu Lys Glu Leu NH2 (SEKV. ID NO:ll).
10 30
Eräs keksinnön näkökanta sisältää menetelmän niiden kaavan (I) mukaisten polypeptidien valmistamiseksi, joissa Xaa22~ 31 on SEKVENSSI ID NO: 26, Xaa11 ja Xaa13 ovat molemmat Lys; 15 ja toinen aminohapoista Xaa19 ja Xaa21 on Arg ja toinen on Ala. Tyypillisiä tämän alaryhmän polypeptidejä ovat muun muassa:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 20 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Ala Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:12) ja 30 25 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Ala Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:13).
30 30
Eräs keksinnön näkökanta sisältää menetelmän niiden kaavan . oo_g i (I) mukaisten polypeptidien, joissa Xaa on SEKVENSSI ID NO:26, toinen aminohapoista Xaa11 ja Xaa13 on Leu ja 35 toinen on Lys; ja Xaa19 ja Xaa21 ovat molemmat Arg. Tyypillinen tämän alaryhmän polypeptidi on muun muassa: 24
Ala Vai Ser Glu Ala Gin Leu Leu His Asp Leu Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 5 Glu Lys Leu His Ala Leu OH (SEKV. ID NO:14).
30
Eräs keksinnön näkökanta sisältää menetelmän niiden kaavan (I) mukaisten polypeptidien, joissa Xaa22~31 on SEKVENSSI 10 ID NO:27, joilla <μΗ> 100°:ssa ylittää arvon 0,50. Edelleen keksinnön näkökanta sisältää menetelmän niiden kaavan (I) mukaisten polypeptidien valmistamiseksi, joissa Xaa22~ 31 on SEKVENSSI ID NO: 27, Xaa11 ja Xaa13 ovat molemmat Lys tai molemmat Arg; ja Xaa19 ja Xaa21 ovat molemmat Arg.
15 Tyypillisiä tämän alaryhmän polypeptidejä ovat muun muassa:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 20 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:15); 30 25 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:16); 30 30
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 35 15 20 25
Lys Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO :17) ; 30 25
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 5 1 5 10 lie Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Lys(COCH2PEG2) Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:18); ja 30 10
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10 lie Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25 15 Lys(COCH2PEG5000) Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:19).
30
Eräs keksinnön näkökanta sisältää menetelmän niiden kaavan (I) mukaisten polypeptidien valmistamiseksi, joissa Xaa22-20 31 on SEKVENSSI ID NO:28, joilla <μΗ> 100°:ssa on noin 0,25. Tyypillinen tämän alaryhmän polypeptidi on muun muassa:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 25 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala 15 20 25
Glu Ala Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:20).
30 30
Eräs keksinnön näkökanta sisältää menetelmän niiden kaavan (I) mukaisten polypeptidien valmistamiseksi, joissa Xaa22~ 31 on SEKVENSSI ID NO:29, joilla <μΗ> 100°:ssa on noin 0,28. Tyypillinen tämän alaryhmän polypeptidi on muun 35 muassa: 26
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu 15 20 25 5 Ser Ser Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:21).
30
Eräs keksinnön näkökanta sisältää menetelmän niiden kaavan (I) mukaisten polypeptidien valmistamiseksi, joissa Xaa22-10 31 on SEKVENSSI ID NO:30, joilla <μΗ> 100°:ssa on noin 0,29. Tyypillinen tämän alaryhmän polypeptidi on muun muassa:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Phe Tyr Asp Lys Vai Ala 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:22).
30 20
Vielä eräs keksinnön näkökanta sisältää menetelmän fysiologisesti aktiivisen typistetyn bPTH(1-34)-homologin poly-peptidianalogien, kuten kaavassa (II) esitettyjen, valmistamiseksi : 25
Xaa1 Vai Ser Glu Ile Gin Xaa7 Xaa8 His Asn Leu Gly Lys His Leu Xaa16 Ser Xaaj8 Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22-31 His Asn Xaa34 loppu, jossa Xaa1 on Ser tai Ala; 30 Xaa7 on Leu tai Phe;
Xaa8 on Met tai Nle;
1 G
Xaa on Asn tai Ser;
Xaa18 on Leu, Met tai Nle;
Xaa19 on Glu tai Arg; 35 Xaa21 on Vai tai Arg;
Xaa22-31 on SEKV. ID NO:26, 27, 28, 29 tai 30; 27
Xaa34 on Phe tai Tyr; loppu on -OH tai -NR2, jossa jokainen R on H tai (Ci-C4)al-kyyli; ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat. (Kaava II) Tyypillisiä sellaisia polypeptidejä ovat muun 5 muassa:
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Nle Glu Arg Vai Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 10 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn Tyr NH2 (SEKV. ID NO:23) ja 30
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His 15 10 15 Leu Ser Ser Nle Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn Tyr NH2 (SEKV. ID NO:24).
30 20 Vielä eräässä keksinnön näkökannassa on yllättäen havaittu, että myös sellaiset PTH:n ja PTHRP:n homologit ja analogit, joissa on vähemmän kuin 34 aminohappoa, ovat tehokkaita luuta uudismuodostavia aineita. Näillä yhdisteillä on yleiskaava: 25 Ala Vai Ser Glu Xaa5 Gin Leu Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13
Ser Ile Gin Asp Leu Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22-31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 loppu.
Tyypillisiä sellaisia polypeptidejä ovat muun muassa: 30
Yhdiste 41: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHP-NH2 (SEKV. ID NO:55)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 35 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Pro NH2 (SEKV. ID NO:55).
30 28
Fysikaaliset tiedot 5 sp. 142, 8 - 166,1 °C [a]D25 = -53,80 (c 0,38, H20) FAB(C173H295N55049) · [M+H] + = 3929 AAA: Asx 2,0 (2) Glx 5,7 (6) Ser 1,8 (2)
His 3,0 (3) Gly 1,1 (1) Ala 0,9 (1)
Arg 2,8 (3) Val 1,2 (1) He 0,9 (1) 10 Leu 7,4 (8) Lys 4,4 (4) Pro 0,9 (1)
Yhdiste 42: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LP-NH2 (SEKV. ID NO :56)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 1 5 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu Pro NH2 (SEKV. ID NO:56).
30 20
Fysikaaliset tiedot sp. 161,0 - 177,0 °C [a]D25 = -61 , 9 7 (c 0,19, H20) F AB (C i6 7H28 8^52 048 ) : [M+H]+ = 3792,0 AAA: Asx 2,2 (2) Glx 5,9 (6) Ser 1,9 (2) 25 His 2,1 (2) Gly 1,1 (1) Ala 1,0 (1)
Arg 3,0 (3) Val 1,1 (1) He 1,0 (1)
Leu 7,9 (8) Lys 4,3 (4) Pro 0,9 (1)
Alan asiantuntija arvostaa sitä, että useita sellaisia 30 polypeptidianalogien muunnoksia voidaan syntetisoida, jotka sisältävät tässä kuvattuja haluttuja ominaisuuksia, edellyttäen että aminohapposekvenssi, jonka keskimääräinen hydrofobisuusmomentti tähdettä kohti 100° ± 20°:ssa on suurempi kuin noin 0,20, sijoitetaan asemiin (22-31).
35 29
Polypeptidien klassinen synteesi Tässä esitettyjä polypeptidejä voidaan valmistaa menetelmillä, joita on julkaistu teoksissa J.M. Stewart ja J.D.
5 Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2. painos, Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois (1984) ja J. Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, Vol. 2., Academic Press, New York, (1973) koskien kiinteäfaasisynteesiä ja teoksessa E. Schroder ja K. Lubke, The Peptides, Voi. 1, Academic 10 Press, New York, (1965) koskien liuossynteesiä.
Tavallisesti näihin menetelmiin kuuluu suojattujen aminohappojen perättäinen liittäminen kasvavaan peptidiketjuun. Tavallisesti ensimmäisen aminohapon joko amino- tai kar-15 boksyyliryhmä ja kaikki reaktiiviset sivuketjuryhmät suojataan. Näin suojattu aminohappo kiinnitetään sitten joko inerttiin kiinteään kantajaan tai se käytetään liuoksessa, ja sekvenssin seuraava, myös sopivasti suojattu aminohappo, lisätään olosuhteissa, jotka suosivat amidisidoksen 20 muodostumista. Lopulta halutut aminohapot ovat sitoutuneet sopivassa sekvenssissä, suojaryhmät ja kaikki kiinteä kantaja-aines poistetaan ja saadaan raaka polypeptidi. Polypeptidistä poistetaan suolat ja se puhdistetaan, mieluiten kromatografisesti, jolloin saadaan lopputuote.
25
Kiinteäfaasipeptidisynteesi kuuluu edullisiin menetelmiin sellaisten fysiologisesti aktiivisten typistettyjen polypeptidien analogien valmistamiseksi, joissa on vähemmän kuin noin 40 aminohappoa. Tässä menetelmässä a-aminoryhmän 30 (Na) vaikutukset ja kaikki reaktiiviset sivuketjut suojataan happo- tai emäsherkillä ryhmillä. Suojaryhmän tulisi olla stabiili peptidisidoksen muodostumisolosuhteissa samalla kun sen tulee olla helposti poistettavissa niin, että sillä ei ole vaikutusta jäljellä olevaan polypeptidi-35 ketjuun. Sopiviin a-aminosuojaryhmiin kuuluvat muun muassa t-butoksikarbonyyli (Boc), bentsyylioksikarbonyyli (Cbz), o-klooribentsyylioksikarbonyyli, bifenyyli-isopropyyliok- 30 sikarbonyyli, t-amyylioksikarbonyyli (Amoc), isobornyyli-oksikarbonyyli, a,a-dimetyyli-3,5-dimetoksibentsyylioksi-karbonyyli, o-nitrofenyylisulfenyyli, 2-syaani-t-butoksi-karbonyyli, 9-fluorenyylimetoksikarbonyyli (Fmoc) ja vas-5 taavat, edullisesti t-butoksikarbonyyli (Boc). Edullisiin sivuketjujen suojaryhmiin kuuluvat muun muassa asetyyli, bentsyyli (Bzl), bentsyylioksimetyyli (Born), o-bromibent-syylioksikarbonyyli, t-butyyli, t-butyylidimetyylisilyyli, 2-klooribentsyyli (Cl-z), 2,6-diklooribentsyyli, syklohek-10 syyli, syklopentyyli, isopropyyli, pivalyyli, tetrahydro-pyran-2-yyli, tosyyli (Tos), trimetyylisilyyli ja trife-nyylimetyyli.
Kiinteätaasisynteesissä C-terminaalinen aminohappo kiinni-15 tetään ensin sopivaan hartsikantajaan. Sopivia hartsikan-tajia ovat sellaiset materiaalit, jotka ovat inerttejä asteittaisessa kondensaatiossa ja suojaamisen poistamisessa käytettyjä reagensseja ja reaktio-olosuhteita kohtaan, samoin kuin ne ovat liukenemattomia käytetyissä väliaineis-20 sa. Esimerkkejä kaupallisesti saatavista hartseista ovat styreeni/divinyylibentseenihartsit, jotka on modifioitu reaktiivisella ryhmällä, esim. kloorimetyloitu kopoly-(styreeni-divinyylibentseeni), hydroksimetyloitu kopoly-(styreeni-divinyylibentseeni) ja vastaavat. Bentsyloitu, 25 hydroksimetyloitu fenyyliasetamidometyyli (PAM) -hartsi on edullinen. Kun yhdisteen C-terminaali on amidi, edullinen hartsi on p-metyylibentshydryyliamino-kopoly(styreeni-divinyylibent seeni)hartsi.
30 Kiinnittäminen PAM-hartsiin voidaan suorittaa Na-suojatun aminohapon, edullisesti Boc-aminohapon, reaktiolla sen ammonium-, cesium-, trietyyliammonium-, 1,5-diatsabisyklo-[5,4,0]undek-5-eeni-, tetrametyyliammonium- tai samankaltaisena suolana etanolissa, asetonitriilissä, N,N-dimetyy-35 liformamidissa (DMF) ja vastaavassa, edullisesti cesium-suolana DMF:s s ä hartsin kanssa kohotetussa lämpötilassa, esimerkiksi 40 °C:n ja 60 °C:n välillä, edullisesti noin 31 50 °C:ssa, noin 12-72 tunnin ajan, edullisesti noin 48 tunnin ajan.
Na-Boc-aminohappo voidaan sitoa bentshydryyliamiinihart-5 siin sellaisilla menetelmillä kuin esim. liittäminen N,N'-di-isopropyylikarbodi-imidin (DIC) / 1-hydroksibentsotri-atsolin (HOBt) välityksellä noin 2-24 tunnin ajan, edullisesti noin 2 tunnin ajan 10 °C:n ja 50 °C:n välisessä lämpötilassa, edullisesti 25 °C:ssa sellaisessa liuotti-10 messa kuin esim. dikloorimetaani tai dimetyyliformamidi, edullisesti dikloorimetaani.
Suojattujen aminohappojen perättäinen liittäminen voidaan tehdä alalla hyvin tunnetuilla menetelmillä, tyypillisesti 15 automaattisella peptidisyntetisaattorilla. Trietyyliamii-nilla tai samankaltaisella emäksellä tapahtuvan neutrali-saation jälkeen jokaista suojattua aminohappoa pannaan edullisesti noin 1,5 - 2,5 kertaa molaarista ylimäärää ja liittäminen tehdään inertissä, ei-vesi-, polaarisessa 20 liuottimessa, kuten esimerkiksi dikloorimetaanissa, DMF:ssä tai niiden seoksessa, edullisesti dikloorimetaanissa ympäristön lämpötilassa. Tyypillisiä kiinnitysai-neita ovat N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidi (DCC), N,N'-di-isopropyylikarbodi-imidi (DIC) tai muu karbodi-imidi, 25 joko yksin tai 1-hydroksibentsotriatsolin (HOBt), O-asyy-likarbamidien, bentsotriatsol-l-yylioksitris(pyrrolidi-no)fosfoniumheksafluorifosfaatin (PyBop), N-hydroksisuk-kinimidin, muiden N-hydroksi-imidien tai oksiimien läsnäollessa. Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää suojattujen ami-30 nohappojen aktiivisia estereitä (esim. p-nitrofenyyli, pentafluorifenyyli ja vastaavat) tai symmetrisiä anhydride jä .
Kiinteätaasisynteesin lopussa täydellisesti suojattu pep-35 tidi irrotetaan hartsista. Kun sidos hartsikantajaan on bentsyyliesterityyppiä, lohkeamiseen voidaan vaikuttaa 32 aminolyysimenetelmillä alkyyliamiinin tai fluorialkyyli-amiinien kanssa peptideillä, joilla on C-terminaalissa al-kyyliamidi, tai ammoniakki/metanolin tai ammoniakki/etanolin kanssa peptideillä, joilla on C-terminaalissa subs-5 tituoimaton amidi, noin -10 °C:n ja 50 °C:n välisissä lämpötiloissa, edullisesti noin 25 °C:ssa, noin 12-24 tunnin ajan, edullisesti noin 18 tunnin ajan. Peptidit, joiden C-terminaalissa on hydroksyyliryhmä, voidaan lohkoa HF:llä tai jollain muulla voimakkaasti happamalla suojauksenpois-10 tomenetelmällä tai saippuoitumisella. Vaihtoehtoisesti peptidi voidaan poistaa hartsista vaihtoesteröimällä esim. metanolin kanssa, minkä jälkeen seuraa aminolyysi tai saippuoituminen. Suojattu peptidi voidaan puhdistaa sili-kageelikromatografiällä.
15
Sivuketjujen suojaryhmät voidaan poistaa peptidistä käsittelemällä aminolyysituotetta esim. vedettömällä nestemäisellä fluorivedyllä anisolin tai muun karboniumionin sieppaajan läsnäollessa, fluorivety/pyridiini-kompleksi-käsit-20 telyllä, käsittelyllä tris(trifluoriasetyyli)boorin ja trifluori-etikkahapon kanssa, pelkistämällä vedyn ja palladiumin kanssa hiilellä tai polyvinyylipyrrolidonilla tai pelkistämällä natriumin kanssa nestemäisessä ammoniakissa, edullisesti nestemäisen fluorivedyn ja anisolin kanssa 25 noin -10 °C:n ja +10 °C:n välisessä lämpötilassa, edullisesti noin 0 °C:ssa, noin 15 minuutin ja 2 tunnin välisen ajan, edullisesti noin 1,5 tunnin ajan.
Bentshydryyliamiinihartsilla oleville peptideille loh-30 kaiseminen hartsista ja suojauksenpoistovaiheet voidaan yhdistää yhdeksi vaiheeksi, jossa käytetään nestemäistä fluorivetyä ja anisolia edellä kuvatulla tavalla.
Liuoksesta voidaan poistaa suola (esim. BioRad AG-3® 35 -anioninvaihtohartsilla) ja peptidi voidaan puhdistaa sarjalla kromatografiavaiheita, jossa käytetään jotakin 33 tai kaikkia seuraavia tyyppejä: ioninvaihtoa heikosti emäksisellä hartsilla asetaattimuodossa; hydrofobista ad-sorptiokromatografiaa derivatisoitumattomalla kopoly(sty-reeni-divinyylibentseenillä), esim. Amberlite® XAD; sili-5 kageeliadsorptiokromatografiaa; ioninvaihtokromatografiaa karboksimetyyliselluloosalla; partitiokromatografiaa, esim. Sephadex® G-25:llä; vastavirtajakaantumista; tai korkean erotuskyvyn nestekromatografiaa (HPLC), erityisesti käänteisfaasi-HPLC:tä oktyyli- tai oktadekyylisilyyli-10 silika (ODS) -sidotulla faasilla pakatulla pylväällä.
Eräs keksinnön näkökanta koskee menetelmiä polypeptidien ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, joissa perättäisesti kondensoidaan suojattuja 15 aminohappoja sopivalla hartsikantajalla, poistetaan suoja-ryhmät ja hartsikantaja ja puhdistetaan tuote, jolloin saadaan PTH:n ja PTHRP:n fysiologisesti aktiivisten typistettyjen homologien ja analogien analogeja, edullisesti PTH(l-34):n ja PTHRP(1-34):n, joissa aminohapot asemissa 20 (22-31) muodostavat amfipaattisen α-helikaalisen peptidi- sekvenssin kuten edellä on kuvattu.
Polypeptidien rekombinanttisynteesi 25 Vaihtoehtoisesti tässä esitettyjä polypeptidejä voidaan valmistaa kloonaamalla ja ilmentämällä haluttua polypepti-diä koodaava geeni. Tässä menetelmässä valmistetaan halutun DNA-sekvenssin sisältävä plasmidi ja insertoidaan se sopivaan isäntämikro-organismiin, tavallisesti bakteeriin, 30 esimerkiksi E. coliin, tai hiivaan, esimerkiksi Saccharo-myces cerevisiae -lajiin, indusoimaan isäntämikro-organis-mi tuottamaan plasmidista useita kopioita ja samoin keksinnön mukaisesti valmistettavia polypeptidianalogeja koodaavaa cDNA:ta.
35
Ensin suunnitellaan valittua PTH- tai PTHRP-analogia koodaava synteettinen geeni, jossa on sopivat restriktioent- 34 syymien pilkkomiskohdat, jotka helpottavat myöhempiä muutoksia. Sekvenssin monistamiseen voidaan käyttää polymeraasiketjureaktiota (PCR), kuten Mullis on opettanut US-patenteissa 4,683,195 ja 4,683,202.
5
Monistettu synteettinen geeni voidaan eristää ja liittää sopivaan plasmidiin, kuten esimerkiksi Trp LE -plasmidiin, johon voidaan insertoida neljä geenikopiota peräkkäin. Trp LE -plasmidien valmistus kuvataan US-patentissa 4,738,921 10 ja EP-patenttijulkaisussa 0212532. Trp LE -plasmidit tuottavat yleensä 8-10 kertaa enemmän proteiinia kuin Trp E -plasmidit. Monistettu geeni voidaan sitten ilmentää sopivassa isännässä, joita ovat esim. E. coli tai S. cerevi-siae.
15 Tässä käytetty spesifinen ilmentymisvektori oli Trp LE 18 Prot (Ile3, Pro5), joka sisältää seuraavat perusosat: pBR322-fragmentti (EcoRI-BamHI), joka sisältää ampisillii-niresistenssigeenin ja plasmidin replikaation alkukohdan; 20 EcoRI-SacII-fragmentti, joka sisältää trp-promoottorin ja trpE-geenin; HIV-proteaasi (Ile3, Pro5) -geenifragmentti (SacII-Hindlll); bGRF-geenifragmentti (Hindlll-BamHI); ja transkription terminaattori E. colin rpoc-geenistä. HIV-proteaasi- ja bGRF-geenifragmentit eivät ole ratkaisevia 25 ja ne voidaan haluttaessa korvata muilla koodaavilla sekvensseillä .
Ilmennetyt multimeeriset fuusioproteiinit kasaantuvat so-lunsisäisesti stabiileihin inkluusio-onteloihin ja ne voi-30 daan erottaa muista solun proteiineista sentrifugoimalla. Eristetty fuusioproteiini muutetaan monomeeriseksi PTH-tai PTHRP-analogiksi ja se voidaan puhdistaa kationin-vaihto- ja/tai käänteisfaasi-HPLC:llä.
35 Vaihtoehtoiset kloonaus-, monistus-, ilmentämis- ja puhdistusmenetelmät ovat selviä alan asiantuntijoille. Tyypillisiä sellaisia menetelmiä esitetään teoksessa Mania- 35 tis, et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual, toinen painos, Cold Spring Harbor Laboratory (1989).
Käyttökelpoisuus ja antomuoto 5
Keksinnön mukaisesti vamistetut polypeptidit ovat hyödyllisiä nisäkkäiden monien eri tilojen, joissa ilmenee luu-aineksen häviämistä, ehkäisyssä ja hoidossa. Erityisesti tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden on 10 osoitettu toimivan osteoporoosin ja osteopenian ennaltaehkäisyssä ja hoidossa ihmisillä.
Keksinnön mukaisesti valmistettuja polypeptidejä tai niiden suoloja annetaan tavallisesti määrinä noin 0,002-1 pg 15 kehon painokiloa kohti vuorokaudessa, edullisesti noin 0,04-0,2 pg kehon painokiloa kohti vuorokaudessa. Aktiivisen aineosan päivittäinen annos 50 kg:n painoiselle naiselle on noin 0,1-50 pg, edullisesti noin 2,0-10 pg. Muut nisäkkäät, kuten hevoset, koirat ja nautakarja, saattavat 20 tarvita suurempia annoksia. Annos voidaan antaa tavanomaisessa farmaseuttisessa koostumuksessa yhdellä antotavalla, monenlaisilla antotavoilla tai säädellysti lääkeainetta vapauttavana valmisteena, mitä tarvitaan tehokkaimpien tulosten saavuttamiseksi, edullisesti yhden tai useamman 25 kerran päivässä injektiona.
Täsmällisen annoksen ja koostumuksen sekä sopivimman lääk-keenantotavan valintaan vaikuttavat muun muassa valitun polypeptidin farmakologiset ominaisuudet, hoidettavan ti-30 lan luonne ja ankaruus sekä vastaanottajan fyysinen kunto ja henkinen tila.
Tyypillisiä lääkkeenantotapoja ovat oraalinen, parenteraa-linen (sisältäen ihonalaisen, lihaksensisäisen ja laski-35 monsisäisen antotavan), rektaalinen, bukkaalinen (sisältäen kielen alla pidettävät lääkkeet), pulmonaalinen, trans-dermaalinen ja intranasaalinen anto.
36
Farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat säilyttävät lähtöpo-lypeptidin biologisen aktiivisuuden ilman toksisia sivuvaikutuksia. Sellaisia suoloja ovat esim. a) happoaddi-5 tiosuolat, jotka on muodostettu epäorgaanisten happojen, esim. kloorivetyhapon, bromivetyhapon, rikkihapon, fosfo-rihapon, typpihapon ja vastaavien, kanssa; ja suolat, jotka on muodostettu orgaanisten happojen, esim. etikkahapon, oksaalihapon, viinihapon, meripihkahapon, maleiinihapon, 10 fumaarihapon, glukonihapon, sitruunahapon, omenahapon, askorbiinihapon, bentsoehapon, parkkihapon, pamoiinihapon (pamoic acid), algiinihapon, polyglutamiinihapon, nafta-leenisulfonihappojen, naftaleenidisulfonihappojen, polyga-lakturonihapon ja vastaavien, kanssa; b) emäsadditiosuo-15 lat, jotka on muodostettu monivalenssisten metallikatio-nien, kuten esim. sinkin, kalsiumin, vismutin, bariumin, magnesiumin, alumiinin, kuparin, koboltin, nikkelin, kadmiumin ja vastaavien, kanssa; tai orgaanisten kationien, jotka on muodostettu N,N'-dibentsyylieteenidiamiinista tai 20 eteenidiamiinista, kanssa; tai c) a)- ja b)-kohtien yhdistelmät, esim. sinkkitannaattisuola ja vastaavat.
Keksinnön mukaisesti valmistetuista polypeptideistä saadaan farmaseuttisia koostumuksia, joissa aktiivisena aine-25 osana on tällainen polypeptidi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola sekoituksena farmaseuttisesti hyväksyttävän, myrkyttömän kantajan kanssa. Kuten edellä on mainittu, sellaiset koostumukset voidaan valmistaa parente-raalista (ihonalaisesti, lihaksensisäisesti tai laskimon-30 sisäisesti) antoa varten, erityisesti nestemäisten liuosten tai suspensioiden muodossa; oraalista tai bukkaalista antoa varten, erityisesti tablettien tai kapseleiden muodossa; pulmonaalista tai intranasaalista antoa varten, erityisesti jauheiden, nenätippojen tai aerosolien muodos-35 sa, sekä rektaalista tai transdermaalista antoa varten.
37
Koostumukset voidaan antaa sopivasti yksikköannosmuodossa ja ne voidaan valmistaa millä tahansa farmaseuttisen alan hyvin tuntemalla menetelmällä, esimerkiksi kuten on kuvattu teoksessa Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. pai-5 nos, Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985). Paren-teraalisesti annettavat formulaatiot voivat sisältää täyteaineina steriiliä vettä tai suolaliuosta, alkeeniglyko-leja, kuten esim. propyleeniglykolia, polyalkeeniglykole-ja, kuten esim. polyeteeniglykolia, kasviperäisiä öljyjä, 10 hydrattuja naftaleeneja ja vastaavia. Oraalisesti annettavia formulaatioita voidaan kasvattaa lisäämällä sappisuoloja tai asyylikarnitiineja. Nenän kautta annettavat formulaatiot voivat olla kiinteitä ja ne voivat sisältää täyteaineita, esim. laktoosia tai dekstraania, tai ne 15 voivat olla nenätippoihin tai annostussumutteisiin käytettäviä vesi- tai öljyliuoksia. Bukkaaliselle antotavalle tyypillisiä täyteaineita ovat sokerit, kalsiumstearaatti, magnesiumstearaatti, esihyytelöity tärkkelys ja vastaavat.
20 Nenän kautta annettavassa formulaatiossa voidaan nenän limakalvon läpi tapahtuvaa imeytymistä lisätä pinta-aktii-visilla aineilla, kuten esim. glykokoolihapolla, kooliha-polla, taurokoolihapolla, ethokoolihapolla, deoksikooliha-polla, kenodeoksikoolihapolla, dehydrokoolihapolla, glyko-25 deoksikoolihapolla, syklodekstriineillä ja vastaavilla, noin 0,2-15 painoprosentin välisenä määränä, edullisesti noin 0,5-4 painoprosenttia ja edullisimmin noin 2 painoprosenttia .
30 Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden anto kohteelle pidentyneen ajanjakson aikana, esim. yhdestä viikosta vuoteen, voidaan suorittaa yhtenä antona säädellystä vapauttavaa lääkeainetta, joka sisältää halutulle vapautu-misajalle riittävän määrän aktiivista aineosaa. Tähän tar-35 koitukseen voidaan käyttää erilaisia säädellystä vapauttavia järjestelmiä, kuten yksiosaisia tai varastotyyppisiä mikrokapseleita, depot-implantaatteja, osmoottisia pumppu- 38 ja, vesikkeleitä, misellejä, liposomeja, transdermaalisia laastareita, iontoforeettisiä välineitä ja vaihtoehtoisia injektoitavia annostelumuotoja. Joidenkin säädellysti vapauttavien lääkkeenantomekanismien lisäpiirteenä on sen 5 kohdan paikallistaminen, jonne aktiivinen aineosa halutaan toimittaa, mikä saattaa osoittautua hyödylliseksi tiettyjen sairauksien hoidossa.
Yksi säädellysti vapauttavan formulaation muoto sisältää 10 polypeptidiä tai sen suolaa dispergoituna tai koteloituna hitaasti hajoavassa myrkyttömässä, ei-antigeenisessa polymeerissä, kuten esim. kopoly(maitohappo/glykolihappo), kuten on kuvattu Kentin, Lewisin, Sandersin ja Ticen uraauurtavassa työssä US-patentissa 4,675,189. Yhdisteitä, tai 15 mieluummin niiden suhteellisen liukenemattomia suoloja, voidaan formuloida myös kolesterolissa tai muissa lipidi-matriksipelleteissä tai silastomeerimatriksi-implantteina. Muut hitaasti vapauttavat depot-implant- tai injektoitavat formulaatiot ovat selviä alan asiantuntijalle. Katso esim. 20 Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, toim. J. R. Robinson, Marcel Dekker, Inc., New York, 1978 ja R. W. Baker, Controlled Release of Biologically Active Agents, John Wiley & Sons, New York, 1987.
25 Seuraavat yksityiskohtaiset esimerkit on tarkoitettu valaisemaan synteesiä ja keksinnön mukaisesti valmistettavien tyyppiyhdisteiden testaamista, eikä niitä pidä tulkita patenttivaatimusten piiriä rajoittavina. Esimerkeissä "sp." on sulamispiste, "[a]D25" on optinen aktiivisuus 25 30 °C:ssa tietyssä konsentraatiossa osoitetussa liuottimessa, "FAB" on fast atom bombardment -massaspektrometria ja "AAA" on aminohappoanalyysi, jonka yhteydessä odotusarvot ilmoitetaan suluissa havaittujen arvojen jälkeen. Aminohappoanalyysi suoritettiin laitteella Hewlett-Packard 35 AminoQuant Analyzer valmistajan suosittelemia ohjeita noudattaen. Primaariset aminohapot derivatisoitiin o-ftaali- 39 aldehydin kanssa; sekundaariset aminohapot Fmoc:n kanssa. Fluoresenssidetektiota käytettiin derivatisoitujen aminohappojen kvantitatiiviseen määrittämiseen. Suojatut aminohapot saatiin yhtiöltä Applied Biosystems Inc. (Foster 5 City, CA).
ESIMERKKI I
Yhdiste 1 (SEKV. ID NO:7) valmistettiin 0,5 mmol:n mitta-10 kaavassa kiinteätaasimenetelmällä 4-metyylibentshydryyli-amiinihartsilla käyttämällä automaattista Applied Biosystems Model 430A -peptidisyntetisaattoria. a-Aminoryhmät suojattiin t-butoksikarbonyylillä (Boc). Sivuketjujen suo-jaryhmät olivat: bentsyyli (Bzl) tähteille Asp, Glu ja 15 Ser; tosyyli (Tos) tähteelle Arg; bentsyylioksimetyyli (Born) tähteelle His; ja 2-klooribentsyyli (Cl-z) tähteelle Lys. Aminohapot liitettiin perättäisesti käyttämällä N,N-disykloheksyylikarbodi-imidi/1-hydroksibentsotriatsoli (DCC/HOBt) -menetelmää Stewartin ja Youngin (yllä) mukaan. 20 Jokaisen aminohappoliitännän jälkeen peptidi asetyloitiin käyttämällä asetanhydridin ja di-isopropyylietyyliamiinin seosta IV-metyylipyrrolidonissa. Valmis peptidi lohkottiin hartsista poistamalla samanaikaisesti suojaus sivuketju-suo j aryhmistä käyttämällä vedetöntä HF:ää (25 ml) anisolin 25 läsnäollessa (2,5 ml) -10 °C:ssa 30 minuutin ajan ja 0 °C:ssa 60 minuutin ajan. Sen jälkeen kun HF oli haihdutettu tyhjiössä, jäännös pestiin vedettömällä eetterillä ja raakapeptidi uutettiin 10%:isella etikkahapolla. 10%:isen etikkahappouutteen lyofilisointi antoi 900 mg raakatuotet-30 ta. Peptidi puhdistettiin keskimääräisessä paineessa ODS-käänteisfaasipylväskromatografiällä käyttämällä 22-45%:is-ta CH3CN-gradienttia 0,l%:isessa TFA:ssa. Tuote eluoitui kolmessa fraktiossa, jotka konsentroitiin ja lyofilisoi-tiin, jolloin saatiin 130 mg valkeaa kiinteää ainetta > 98 35 %:n puhtaudella.
40
Yhdiste 1: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-NH2 (SEKV. ID NO:7)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 5 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:7) 30 10 Fysikaaliset tiedot sp. 150 - 159 °C [ex] D25 = -34, 88° (c 0,16, H20) FAB(C175H3ooN5605i) : [M+H] + = 4005,5 AAA: Asp, 1,9 (2); Glu, 5,6 (6); Ser, 1,6 (2); His, 2,7 (3) ; Gly, 1,0 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,9 (2); Arg, 2,8 15 (3); Vai, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,3 (8); Lys, 4,0 (4) .
Samalla tavalla valmistettiin ja karakterisoitiin yhdisteet 2, 5-18, 21-27, 29-36, 38-48, 50-54, 58-64 ja 66-70 20 korvaamalla tarvittaessa PAM-hartsi hydroksi-terminaalis-ten polypeptidien synteesiin.
Yhdiste 2: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-OH (SEKV. ID NO:6) 25 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:6) 30 30
Fysikaaliset tiedot sp. 154 - 170 °C [ex] d25 = -49,35° (c 0,46, H20) FAB(C175H3oiN5705o) : [M+H] + = 4005,0 35 AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 5,9 (6); Ser, 1,7 (2); His, 2,9 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 1,9 (2); Arg, 3,0 41 (3) ; Vai, 1,2 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,8 (8); Lys, 4,2 (4) .
Yhdiste 5: 5 AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH (SEKV. ID NO:15) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25 10 Glu Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:15) 30
Fysikaaliset tiedot sp. 147 - 165 °C [ex] d25 = -49, 17° (c 0,66, H20) 15 FAB (C175H299N59O52) : [M+H] + = 4061 AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,1 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 5,0 (5) ; Vai, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,7 (8); Lys, 1,9 (2) .
20
Yhdiste 6: AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH (SEKV. ID NO:16) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10 25 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:16) 30 30 Fysikaaliset tiedot sp. 150 - 170 °C [ex] o25 = -48,65° (c 0,54, H20) FAB (C175H299N63O52 ) : [M+H] + = 4118,0 AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,2 (3); Gly, 1,2 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 6,9 35 (7); Vai, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,8 (8).
42
Yhdiste 7: AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH (SEKV. ID NO:17)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10 5 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Lys Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:17) 30 10 Fysikaaliset tiedot sp. 177 - 182 °C [ex] D25 = -46,17° (c 0,14, H20) FAB (C176H304N64O50 ) : [M+H] + = 4117 AAA: Asp, 2,0 (2); Glu, 4,8 (5); Ser, 1,8 (2); His, 3,2 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,9 (2); Arg, 6,7 15 (7); Vai, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,7 (8); Lys, 0,9 (1) .
Yhdiste 8: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLRKLHTA-OH (SEKV. ID NO:5) 20 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Arg Lys Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:5) 25 30
Fysikaaliset tiedot sp. 147 - 165 °C [ox] d25 = -49 , 1 7° (c 0,66, H20) FAB (Ci76H305N59O49) : [M+H]+ = 4033,0 30 AAA: Asp, 2,0 (2); Glu, 4,8 (5); Ser, 1,8 (2); His, 2,7 (3) ; Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,9 (4) ; Vai, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,9 (8); Lys, 4,0 (4) .
35 Yhdiste 9: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTAGRR-OH (SEKV. ID NO:10) 43
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 5 Glu Lys Leu His Thr Ala Gly Arg Arg OH (SEKV. ID NO:10) 30 35
Fysikaaliset tiedot sp. 158 - 160 °C [of] d25 = -44, 76° (c 0,1, H20) 10 FAB (C189H326N64O55) : [M+H] + = 4375,0 AAA: Asp, 2,0 (2); Glu, 5,9 (6); Ser, 1,7 (2); His, 2,9 (3) ; Gly, 2,3 (2); Thr, 1,0 (1); Ala, 1,9 (2); Arg, 5,0 (5); Vai, 1,2 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,8 (8); Lys, 4,3 (4) .
15
Yhdiste 10: AVSEAQLLHDLGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHAL-OH (SEKV. ID NO:14) Ala Vai Ser Glu Ala Gin Leu Leu His Asp Leu Gly Lys Ser 15 10 20 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Ala Leu OH (SEKV. ID NO:14) 30 25 Fysikaaliset tiedot sp. 170 - 175 °C [a] D25 = -31,59° (c 0,54, H20) FAB (Ci74H3ooN5205i) : [M+H] + = 3936,0 AAA: Asp, 2,0 (2); Glu, 6,0 (6); Ser, 1,8 (2); His, 2,0 (2); Gly, 1,2 (1); Ala, 3,0 (3); Arg, 2,8 (3); Vai, 1,1 30 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 9,9 (10); Lys, 3,0 (3).
Yhdiste 11: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLELLKEL-NH2 (SEKV. ID NO:11) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 35 1 5 10 44
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu Lys Glu Leu NH2 (SEKV. ID NO:11) 30 5
Fysikaaliset tiedot sp. 172 - 174 °C [ex] D25 = -43,29° (c 0,2, H20) FAB (Ci79H311N55052 ) : [M+H] + = 4065,8 AAA: Asp, 2,2 (2); Glu, 7,7 (7); Ser, 1,7 (2); His, 2,0 10 (2); Gly, 1,0 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 3,0 (3); Vai, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 9,3 (9); Lys, 5,1 (5).
Yhdiste 12: AVSEIQFXHNLGKHLSSXERVELLEKLLEKLHNY-NH2 (X= Nle, SEKV. ID 15 NO:23)
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Nle Glu Arg Vai Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 20 Glu Lys Leu His Asn Tyr NH2 (SEKV. ID NO:23) 30
Fysikaaliset tiedot sp. 178 °C [Of] d25 = -36,88° (c 0,4, H20) 25 FAB (Ci82H295N5o05i) : [M+H]+ = 4001,6 AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,5 (6); Ser, 2,7 (3); His, 3,1 (3); Gly, 1,1 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 1,0 (1); Tyr, 0,8 (1); Vai, 2,0 (2); Phe, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu + Nle, 8,5 (7 + 2); Lys, 3,1 (3).
30
Yhdiste 13: AVSEIQFXHNLGKHLSSXRRRELLEKLLEKLHNY-NH2 (X=Nle, SEKV. ID NO:24)
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His 35 1 5 10 45
Leu Ser Ser Nle Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn Tyr NH2 (SEKV. ID NO:24) 30 5
Fysikaaliset tiedot sp. 260 °C [a] D25 = -37, 02° (c 0,2, H20) FAB (C184H304N56O49) : [M+H] + = 4084 AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 5,5 (5); Ser, 2,6 (3); His, 3,1 10 (3); Ala, 1,0 (1); Gly, 1,1 (1); Arg, 3,2 (3); Tyr, 1,0 (1) ; Val, 1,0 (1); Phe, 1,0 (1); He, 1,0 (1); Leu, 9,0 (9) ; Lys, 3, 0 (3) .
Yhdiste 14: 15 AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRALAEALAEALHTA-NH2 (SEKV. ID NO :20) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala 15 20 25 20 Glu Ala Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:20) 30
Fysikaaliset tiedot sp. 190 - 225 °C [Of] D25 = -56,58° (c 0,36, H20) 25 FAB (Ci6iH272N54049 ) : [M+H]+ = 3747,0 AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 4,9 (5); Ser, 1,7 (2); His, 2,6 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 7,6 (7); Arg, 2,8 (3); Val, 1,2 (1); He, 1,0 (1); Leu, 6,6 (6); Lys, 1,9 (2) .
30
Yhdiste 15: AVSEHQLLHDKGKSIQDLARRELLEKLLEKLHTA-NH2 (SEKV. ID NO:12) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 35 He Gin Asp Leu Ala Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 46
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:12) 30
Fysikaaliset tiedot 5 sp. 170 - 180 °C [a] D25 = -48,19° (c 0,2, H20) FAB (Ci72H293N5305i) : [M+H] + = 3919,0 AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); Ser, 1,7 (2); His, 3,1 (3) ; Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 3,0 (3); Arg, 2,1 (2); Val, 1,1 (1); He, 1,0 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 4,4 10 (4) .
Yhdiste 16: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRAELLEKLLEKLHTA-NH2 (SEKV. ID NO:13) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 1 5 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Ala Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:13) 30 20
Fysikaaliset tiedot sp. 190 - 195 °C [a] d25 = -50,50° (c 0,4, H20) FAB (Ci72H293N5305i) : [M+H] + = 3919,0 AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,0 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,1 25 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 3,0 (3); Arg, 2,1 (2); Val, 1,1 (1); He, 1,0 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 4,2 (4) .
Yhdiste 17: 30 AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRSLLSSLLSSLHTA-NH2 (SEKV. ID NO :21) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu 15 20 25 35 Ser Ser Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:21) 30 47
Fysikaaliset tiedot sp. 195 - 204 °C [Oi] d25 = -6 7, 11° (c 0,3, H20) FAB (C163H280N54O50) : [M+H]+ = 3796,0 5 AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 2,9 (3); Ser, 6,8 (7); His, 3,1 (3); Gly, 1,2 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,0 (3); Vai, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,2 (8); Lys, 2,0 (2) .
10 Yhdiste 18: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRAFYDKVAEKLHTA-NH2 (SEKV. ID NO:22)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Phe Tyr Asp Lys Vai Ala 15 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:22) 30
Fysikaaliset tiedot 20 sp. 200 - 207 °C [a]D25 = -60,26° (c 0,6, H20) FAB (C174H284N56O50) : [M+H] + = 3960,0 AAA: Asp, 2,9 (3); Glu, 3,5 (4); Ser, 1,4 (2); His, 2,6 (3); Gly, 0,9 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 4,0 (4); Arg, 3,0 (3); Tyr, 0,9 (1); Vai, 1,9 (2); Phe, 1,1 (1); Ile, 0,9 25 (1); Leu, 3,6 (4); Lys, 4,1 (4).
Yhdiste 21: AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNY-NH2 (SEKV. ID NO:35) Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His 30 1 5 10
Leu Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn Tyr NH2 (SEKV. ID NO:35) 30 35 48
Fysikaaliset tiedot sp. 148 - 155 °C [a] D25 = -45, 97° (c 0,26, H20) FAB (C184H304N56O49) : [M+H] + = 4084 AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 5,0 (5); Ser, 2,7 (3); His, 3,0 5 (3); Gly, 1,0 (1); Ala, 0,9 (1); Arg, 3,1 (3); Tyr, 0,9 (1); Vai, 1,0 (1); Phe, 0,9 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 9,3 (9); Lys, 3,2 (3).
Yhdiste 24: 10 AVSEHQLLHD KGKSIQDLKL KELLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:38) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Lys Leu Lys Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 15 Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:38) 30
Fysikaaliset tiedot sp. 175 - 182 °C [a] d25 = -49 , 99° (c 0,47, H20) 20 FAB(Ci75H299N4905i) : [M+H]+ = 3906,5 AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 6,5 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,1 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,1 (2); Vai, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 9,1 (9); Lys, 6,5 (6).
25 Yhdiste 25: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:39) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 30 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:39) 30
Fysikaaliset tiedot 35 sp. 136,5 - 153,5 °C [a]D25 = -32,57° (c 0,13, H20) FAB (C175H300N60O51) : [M+H] + = 4060,8 49 AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 6,2 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,2 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,1 (2); Arg, 5,2 (5); Val, 1,1 (1); He, 1,1 (1); Leu, 8,4 (8); Lys, 2,2 (2) .
5
Yhdiste 26: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAP-OH (SEKV. ID NO:40) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 10 He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala Pro OH (SEKV. ID NO:40) 30 15 Fysikaaliset tiedot sp. 125, 8 - 127, 2 °C [a]D25 = -54, 62° (c 0,23, H20) FAB (C180H306N60O53 ) : [M+H]+ = 4158,0 AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 6,2 (6); Ser, 1,8 (2); His, 2,9 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 5,1 2 0 (5); Val, 1,0 (1); He, 1,0 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 2,1 (2); Pro, 1,1 (1).
Yhdiste 27: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRR-OH (SEKV. ID 25 NO:41)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25 30 Glu Arg Leu His Thr Ala Gly Arg Arg OH (SEKV. ID NO :41) 30 35
Fysikaaliset tiedot sp. 106 - 137,3 °C [a]D25 = -39,55° (c 0,67, H20) 35 FAB (Ci89H326N68055) : [M+H] + = 4430,5 50 AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,6 (2); His, 2,7 (3); Gly, 2,2 (2); Thr, 1,0 (1); Ala, 1,8 (2); Arg, 7,3 (7) ; Val, 0,8 (1); He, 1,0 (1); Leu, 8,1 (8); Lys, 2,1 (2) .
5
Yhdiste 29: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTY-NH2 (SEKV. ID NO:43) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 10 He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Tyr NH2 (SEKV. ID NO:43) 30 15 Fysikaaliset tiedot sp. 160 - 172 °C [a] D25 = -49, 85° (c 0,34, H20) FAB (Ci8iH304N56O52 ) : [M+H]+ = 4096,9 AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 1,7 (2); His, 3,1 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 0,9 (1); Arg 3,0 20 (3); Tyr, 0,9 (1); Val, 1,0 (1); He, 1,0 (1); Leu, 7,7 (8) ; Lys, 4, 4 (4) .
Yhdiste 30: AVSEHQLLHD KGYSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:44) 25 Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Tyr Ser 15 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:44) 30 30
Fysikaaliset tiedot sp. 130 - 171 °C [a] d25 = -40,65° (c 0,34, H20) FAB (C178H297N55O52) : [M+H]+ = 4039,4 35 AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,5 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,4 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 2,9 51 (3); Tyr, 0,8 (1); Vai, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,9 (8) ; Lys, 3, 4 (3) .
Yhdiste 31: 5 AVSEHQLLHD KGCSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:45) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Cys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 10 Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:45) 30
Fysikaaliset tiedot sp. 140 - 160 °C [oi] D25 = -44, 48° (c 0,25, H20) 15 FAB (Ci72H293N5505iSi) : [M+H]+ = 3979 AAA: Asx + Cys, 3,0 (2 + 1); Glx, 5,6 (6); Ser, 1,7 (2); His, 3,0 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,9 (2); Arg, 2,5 (3); Vai, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 3,3 (3).
20
Yhdiste 32: AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:46) (X= Cys (CH2CONH (CH2) 2NH (biotinyyli) ) )
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Xaa Ser 25 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2, 30 (Xaa= Cys (CH2CONH (CH2) 2NH (biotinyyli) )) , 30 (SEKV. ID NO:46)
Fysikaaliset tiedot sp. (ei määritetty) [of] D25 = (ei määritetty) FAB (Ci86H3i6N5g054S2) : [M+H] + = 4306,6 35 AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 6,1 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,8 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,1 52 (3); Vai, 1,1 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,3 (3); Lys, 3,3 (3) .
Yhdiste 33: 5 AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:47) (X= Lys(7-dimetyyliamino-2-okso-2H-l-benksopyraani-4-ase-tyyli)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Xaa Ser 15 10 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2, 30 (Xaa= Lys(7-dimetyyliamino-2-okso-2H-l-benksopyraani-4-15 asetyyli), (SEKV. ID NO:47)
Fysikaaliset tiedot sp. 135 - 205 °C [a] D25 = -26,92° (c 0, 104, 50%:inen aq. HOAc) 20 FAB (C188H311N57O54) : [M+H]+ = 4233 AAA: Asx 1,9 (2); Glx, 6,3 (6); Ser, 1,7 (2); His, 3,2 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,1 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,2 (3) ; Vai, 1,1 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,2 (8); Lys, 4,5 (4) .
25
Yhdiste 34: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHIAG-OH (SEKV. ID NO:48) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10 30 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Gly OH (SEKV. ID NO:48) 30 35 35 Fysikaaliset tiedot sp. 92, 1 - 146,6 °C [a]D25 = -40, 76° (c 0,34, H20) 53 FAB (C177H302N56O53 ) : [M+H] + = 4062,0 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,7 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,0 (3); Gly, 2,2 (2); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,9 (2); Arg 2,8 (3); Val, 1,2 (1); He, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 4,2 5 (4) .
Yhdiste 35: AVSX1HQLLHX2 KGKSIQX2LRR RX1LLX1KLLX1K LHA-OH (SEKV. ID NO: 49) (Xi= Glu(OCH3); X2= Asp(OCH3)) 10 Ala Val Ser Xaai His Gin Leu Leu His Xaa2 Lys Gly Lys Ser 15 10
He Gin Xaa2 Leu Arg Arg Arg Xaai Leu Leu Xaai Lys Leu Leu 15 20 25
Xaai Lys Leu His Ala OH 15 30 (Xaa3= Glu(OCH3) ; Xaa2= Asp(OCH3)) (SEKV. ID NO:49) Fysikaaliset tiedot sp. (ei määritetty) [of] D25 = -21,96° (c 0,132, H20) 20 FAB(C181H3iiN55052 ) : [M+H ] + = 4 0 8 9 , 0 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 6,3 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,3 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,1 (3) ; Val, 1,1 (1); He, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 4,2 (4) .
25
Yhdiste 36: AVSX1HQLLHX2 KGKSIQX2LRR RXiLLX^LLXiK LHA-OCH3 (SEKV. ID NO: 50) (Χχ= Glu(0CH3); X2= Asp(0CH3))
Ala Val Ser Xaai His Gin Leu Leu His Xaa2 Lys Gly Lys Ser 30 1 5 10
He Gin Xaa2 Leu Arg Arg Arg Xaai Leu Leu Xaai Lys Leu Leu 15 20 25
Xaai Lys Leu His Ala OCH3 30 35 (Xaa3= Glu(OCH3); Xaa2= Asp(OCH3)) (SEKV. ID NO:50) 54
Fysikaaliset tiedot sp. (ei määritetty) [a]D25 = -46, 80° (c 0,07, H20) FAB (C182H313N55O52) : [M+H] + = 4103 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 6,2 (6); Ser, 1,4 (2); His, 3,0 5 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,1 (1); Ala, 1,7 (2); Arg 3,2 (3) ; Vai, 0,6 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 4,1 (4) .
Yhdiste 38: 10 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAP-OH (SEKV. ID NO:52) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 15 Glu Lys Leu His Thr Ala Pro OH (SEKV. ID NO:52) 30 35
Fysikaaliset tiedot sp. 152,1 - 186,5 °C [a]D25 = -55, 91° (c 0,33, H20) 20 FAB (C180H306N56O53) : [M+H]+ = 4102,6 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 1,7 (2); His, 2,9 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,9 (2); Arg 2,9 (3) ; Vai, 1,2 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,7 (8); Lys, 4,3 (4) .
25
Yhdiste 39: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTP-OH (SEKV. ID NO:53) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 30 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Pro OH (SEKV. ID NO:53) 30 35 Fysikaaliset tiedot sp. 120 - 148,2 °C [a]D25 = -52, 78° (c 0,47, H20) 55 FAB (C177H301N55O52) : [M+H] + = 4031,0 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,5 (6); Ser, 1,8 (2); His, 2,9 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 0,9 (1); Arg 2,9 (3); Val, 1,2 (1); He, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 3,6 5 (3) ; Pro, 0, 9 (1) .
Yhdiste 40: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTP-NH2 (SEKV. ID NO:54) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 10 1 5 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Pro NH2 (SEKV. ID NO :54) 30 15
Fysikaaliset tiedot sp. 133,9 - 155, 1 °C [cx] D25 = -54, 22° (c 0,37, H20) FAB (Ci77H3o2N5605i) : [M+H] + = 4030,7 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 1,9 (2); His, 2,9 20 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 0,9 (1); Arg, 2,8 (3) ; Val, 1,2 (1); He, 1,1 (1); Leu, 7,8 (8); Lys, 4,2 (4) ; Pro, 0, 9 (1) .
Yhdiste 41: 25 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHP-NH2 (SEKV. ID NO:55) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 30 Glu Lys Leu His Pro NH2 (SEKV. ID NO:55) 30
Fysikaaliset tiedot sp. 142, 8 - 166, 1 °C [of] D25 = -53,80° (c 0,38, H20) 35 FAB (Ci73H295N55049 ) : [M+H] + = 3929 56 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,7 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,0 (3); Gly, 1,1 (1); Ala, 0,9 (1); Arg 2,8 (3); Val, 1,2 (1) ; He, 0,9 (1); Leu, 7,4 (8); Lys, 4,4 (4); Pro, 0,9 (1) .
5
Yhdiste 42: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LP-NH2 (SEKV. ID NO:56) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 10 He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu Pro NH2 (SEKV. ID NO :56) 30 15 Fysikaaliset tiedot sp. 161,0 - 177,0 °C [Of] D25 = -61 , 9 7° (c 0,19, H20) FAB (0ΐ67Η28δΝ52048 ) : [M+H]+ = 3792,0 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,9 (2); His, 2,1 (2) ; Gly, 1,1 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 3,0 (3); Val, 1,1 20 (1); He, 1,0 (1); Leu, 7,9 (8); Lys, 4,3 (4); Pro, 0,9 (1) -
Yhdiste 43: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-OH 25 (SEKV. ID NO:57)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 30 Glu Lys Leu His Thr Arg Ser Ala Trp OH (SEKV. ID NO :57) 30 35
Fysikaaliset tiedot sp. 181 - 202 °C [ex] d25 = -45, 14° (c 0,19, H20) 35 FAB (Ci95H326N62056) : [M+H]+ = 4435,2 57 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,8 (6); Ser, 2,8 (3); His, 2,8 (3) ; Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,9 (2); Arg, 3,7 (4) ; lie, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 4,3 (4); Trp, 0,9 (1) .
5
Yhdiste 44: AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH (SEKV. ID NO :58)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 10 1 5 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp OH 30 35 40 15 (SEKV. ID NO :58)
Fysikaaliset tiedot sp. 130 - 132,2 °C [a]D25 = -46,66° (c 0,195, H20) FAB (C216H365N81O62 ) · [M+H] + = 5088,8 20 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 6,0 (6); Ser, 2,7 (3); His, 3,0 (3); Gly, 2,2 (2); Thr, 2,1 (2); Ala, 3,0 (3); Arg 10,5 (10); Val, 0,9 (1); He, 1,0 (1); Leu, 8,2 (8); Trp, 1,0 (1) .
25 Yhdiste 45: AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-NH2 (SEKV. ID NO :59)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 1 5 10 30 He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25 Glu Arg Leu His Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala 30 35 40
Trp NH2 (SEKV. ID NO:59) 35 58
Fysikaaliset tiedot sp. 158 - 174 °C [a] D25 = -43,57° (c 0,53, H20) FAB (C216H366N82O61) : [M+H] + = 5087,4 AAA: Asx 1,9 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 2,6 (3); His, 3,3 5 (3); Gly, 2,1 (2); Thr, 2,0 (2); Ala, 2,9 (3); Arg 10,1 (10); Vai, 0,9 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,3 (8); Trp, 1,1 (1) .
Yhdiste 46: 10 AVSEHQLLHD RGXSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH (SEKV. ID NO:60) (X= Lys(dihydrokinnamoyyli))
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Xaa Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp OH
30 35 40 (Xaa= Lys(dihydrokinnamoyyli)) (SEKV. ID NO:60) 20 Fysikaaliset tiedot sp. 165, 4 - 175,2 °C [a]D25 = -40,43° (c 0,20, H20) FAB (C225H374N8o062 ) : [M+H]+ = 5191 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 6,3 (6); Ser, 2,8 (3); His, 3,2 (3); Gly, 2,1 (2); Thr, 2,0 (2); Ala, 3,2 (3); Arg, 9,9 25 (9); Vai, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,6 (8); Lys, 1,1 (1); Trp, 1,1 (1).
Yhdiste 47: AVSEIQFXHN LGKHLSSXTR SAWLRKKLQD VHNY-NH2 (SEKV. ID NO:61) 30 (X= norleusiini)
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Nle Thr Arg Ser Ala Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25 35 Gin Asp Vai His Asn Tyr NH2 (SEKV. ID NO:61) 30 59
Fysikaaliset tiedot sp. 140 - 160 °C [a] D25 = -56,88° (c 0,16, H20) FAB (C180H287N55O58) : [M+H] + = 3989,8 5 AAA: Asx 3,0 (3); Glx, 2,9 (3); Ser, 3,7 (4); His, 2,8 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,9 (2); Arg, 2,0 (2) ; Tyr, 1,0 (1); Vai, 1,7 (2); Phe, 0,9 (1); Ile, 0,9 (1); Leu + Nle 5,8 (2 + 4); Lys, 3,4 (3); Trp, 1,1 (1).
10 Yhdiste 48: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTMA-NH2 (SEKV. ID NO:62)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 15 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Met Ala NH2 (SEKV. ID NO:62) 30 35 20 Fysikaaliset tiedot sp. 140 - 210 °C [ex] d25 = -47, 75° (c 0,178, H20) FAB (Ci8oH309N57052Si) : [M+H]+ = 4135,0 AAA: Asx 2,3 (2); Glx, 6,6 (6); Ser, 1,4 (2); His, 3,2 (3) ; Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,1 25 (3); Vai, 0,9 (1); Met, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,8 (8) ; Lys, 4, 4 (4) .
Yhdiste 50: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RFFLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:64) 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:64) 35 30 60
Fysikaaliset tiedot sp. 136,5 - 156,8 °C [a]D25 = -49,89° (c 0,24, H20) FAB (C182H300N56O49 ) : [M+H] + = 4056,0 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 5,0 (5); Ser, 1,9 (2); His, 3,3 5 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,1 (2); Arg, 3,1 (3) ; Vai, 1,0 (1); Phe, 2,0 (2); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,2 ( 7) ; Ly s, 3,5 ( 4) .
Yhdiste 51: 10 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLHKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:65) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu His Lys Leu Leu 15 20 25 15 Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:65) 30
Fysikaaliset tiedot sp. 80,7 - 141,0 °C [a] d25 = -55,38° (c 0,23, H20) 20 FAB(Ci76H3ooN58049 ) : [M+H] + = 4012,8 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 4,9 (5); Ser, 1,8 (2); His, 4,3 (4) ; Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,1 (3) ; Vai, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,1 (8); Lys, 3,9 (4) .
25
Yhdiste 52: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEHLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:66) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 30 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu His Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:66) 30 35 Fysikaaliset tiedot sp. 134,3 - 157, 9 °C [a]D25 = -50, 72° (c 0,45, H20) 61 FAB (C175H295N57O51) : [M+H] + = 4012,8 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,8 (2); His, 4,2 (4); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,0 (3); Val, 1,1 (1); lie, 0,9 (1); Leu, 8,1 (8); Lys, 3,1 5 (3) .
Yhdiste 53: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLIAK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:67) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 10 1 5 10 lie Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu lie 15 20 25
Ala Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:67) 30 15 Fysikaaliset tiedot sp. 142, 7 - 159,8 °C [a]D25 = -54, 01° (c 0,21, H20) FAB (Ci73H29gN56049 ) : [M+H] + = 3946,0 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 4,9 (5); Ser, 1,8 (2); His, 3,1 (3) ; Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 3,1 (3); Arg, 3,1 20 (3); Val, 1,0 (1); He, 1,9 (2); Leu, 7,0 (7); Lys, 4,3 (4) .
Yhdiste 54: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEE IHTA-NH2 (SEKV. ID NO:68) 25 Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Glu He His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:68) 30 30
Fysikaaliset tiedot sp. 138 - 185 °C [a] d25 = -50,17° (c 0,14, H20) FAB (Ci74H295N55053 ) : [M+H] + = 4005 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 7,1 (7); Ser, 1,7 (2); His, 2,8 35 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,1 (2); Arg, 3,1 62 (3); Vai, 1,1 (1); Ile, 1,7 (2); Leu, 7,1 (7); Lys, 2,7 (3) .
Yhdiste 58: 5 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-NH2 (SEKV. ID NO:72)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 10 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Arg Ser Ala Trp NH2 (SEKV. ID NO:72) 30 35
Fysikaaliset tiedot sp. 158 - 163 °C [Oi] d25 = -46, 06° (c 0,17, H20) 15 FAB (Ci95H327N63055 ) : [M+H] + = 4434,8 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,5 (6); Ser, 2,7 (3); His, 3,1 (3) ; Gly, 1,0 (1); Ala, 1,8 (2); Arg, 4,0 (4); Thr, 0,9 (1); Vai, 0,9 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 3,9 (4) ; Trp, 1, 0 (1) .
20
Yhdiste 59: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAX-OH (SEKV. ID NO:73) (X= Nal(2)= 3-(2-naftyyli)-L-alaniini)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 25 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Arg Ser Ala 3-(2-naftyyli)-L-alaniini-30 35 OH (SEKV. ID
30 NO:73)
Fysikaaliset tiedot sp. 156 - 162 °C [ex] d25 = -44, 44° (c 0,189, H20) FAB (Ci97H32gN62055 ) : [M+H]+ = 4445,6 35 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 5,5 (6); Ser, 2,8 (3); His, 2,9 (3); Gly, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 4,0 (4); Thr, 0,9 63 (1); Vai, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 4,2 (4) ; Nai, 1, 1 (1) .
Yhdiste 60: 5 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTASAW-OH (SEKV. ID NO:74)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 10 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Ser Ala Trp OH (SEKV. ID NO:74) 30 35
Fysikaaliset tiedot 15 sp. 159 - 164 °C [a]D25 = -50, 94° (c 0,29, H20) FAB (C192H320N60O55 ) : [M+H] + = 4349,0 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 2,7 (3); His, 3,2 (3); Gly, 1,0 (1); Ala, 3,1 (3); Arg, 2,8 (3); Thr, 1,0 (1); Vai, 1,1 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,6 (8); Lys, 4,0 20 (4) ; Trp, 1, 0 (1) .
Yhdiste 61: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIRA-OH (SEKV. ID NO:75) 25 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Glu Ile Arg Ala OH 30 30 35 (SEKV. ID NO:75)
Fysikaaliset tiedot sp. 155 - 210 °C [a] d25 = -46,15° (c 0,12, H20) FAB (C195H334N62O58) : [M+H] + = 4475,8 35 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 6,9 (7); Ser, 1,7 (2); His, 3,2 (3); Gly, 1,1 (1); Ala, 3,1 (3); Arg, 4,0 (4); Thr, 0,9 6 4 (1); Vai, 1,1 (1); Ile, 1,9 (2); Leu, 8,1 (8); Lys, 4,1 (4) .
Yhdiste 62: 5 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIR-OH (SEKV. ID NO:76)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 10 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Glu Ile Arg OH (SEKV. ID NO:76) 30 35
Fysikaaliset tiedot 15 sp. 186 - 218 °C [a]D25 = -52, 73° (c 0,265, H20) FAB (C192H329N61O57) : [M+H] + = 4404,4 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 6,6 (7); Ser, 1,9 (2); His, 3,4 (3); Gly, 1,1 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,8 (4); Thr, 1,0 (1); Vai, 1,1 (1); Ile, 1,7 (2); Leu, 7,9 (8); Lys, 4,0 20 (4) .
Yhdiste 63: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEI-OH (SEKV. ID NO:77) 25 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Glu Ile OH (SEKV. ID NO:77) 30 30 35
Fysikaaliset tiedot sp. 169 - 205 °C [a] d25 = -50, 78° (c 0,51, H20) FAB (C186H317N57O56) : [M+H]+ = 4248,0 35 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 6,8 (7); Ser, 1,8 (2); His, 3,3 (3); Gly, 1,0 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,0 (3); Thr, 1,0 65 (1); Vai, 1,0 (1); Ile, 1,8 (2); Leu, 7,8 (8); Lys, 3,6 (4) .
Yhdiste 64: 5 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAE-OH (SEKV. ID NO:78) Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 10 Glu Lys Leu His Thr Ala Glu OH (SEKV. ID NO:78) 30 35
Fysikaaliset tiedot sp. 199 - 205 °C [ex] d25 = -52, 47° (c 0,41, H20) 15 FAB (C180H306N56O55) : [M+H] + = 4135,0 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 6,6 (7); Ser, 1,9 (2); His, 3,3 (3) ; Gly, 1,1 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 2,9 (3); Thr, 1,0 (1); Vai, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,2 (8); Lys, 3,8 (4) .
20
Yhdiste 66: SEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:80) Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin 15 10 25 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 15 20 25
Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:80) 30 30 Fysikaaliset tiedot sp. 134,2 °C [a] D25 = -48 , 12° (c 0,36, H20) FAB (C167H286N54O49) : [M+H] + = 3834,4 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,7 (6); Ser, 1,7 (2); His, 2,9 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 2,8 35 (3); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,4 (8); Lys, 4,3 (4).
66
Yhdiste 67: LLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:81)
Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg 15 10 5 Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr 15 20 25
Ala NH2 (SEKV. ID NO:81)
Fysikaaliset tiedot 10 sp. 128,5 - 184, 5 °C [a]D25 = -6,53° (c 0,69, MeOH) FAB (Ci48H259N4704i) : [M+H] + = 3353 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 4,1 (4); Ser, 0,9 (1); His, 2,1 (2) ; Gly, 1,0 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 3,0 (3) ; Ile, 1,0 (1); Leu, 8,1 (8); Lys, 4,2 (4).
15
Yhdiste 68: LHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:82)
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg 15 10 20 Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 15 20 25 (SEKV. ID NO:82)
Fysikaaliset tiedot 25 sp. 165 - 210 °C [of] 025 = -36,05° (c 0,12, H20) FAB(Ci42H248N4604o) : [M+H] + = 3239,0 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 3,9 (4); Ser, 0,9 (1); His, 1,9 (2) ; Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 2,9 (3) ; Ile, 0,9 (1); Leu, 6,8 (7); Lys, 4,2 (4).
30
Yhdiste 69: SEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW—OH (SEKV. ID NO:83)
Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile Gin 35 1 5 10 67
Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 15 20 25 Leu His Leu His Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp OH 30 35 40 5 (SEKV. ID NO:83)
Fysikaaliset tiedot sp. 150 - 210 °C [ex] d25 = -18,0° (c 0,64, H20) FAB (C208H351N79O60) : [M+H]+ = 4918,6 10 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 6,2 (6); Ser, 2,8 (3); His, 3,1 (3); Gly, 2,2 (2); Thr, 2,2 (2); Ala, 2,2 (2); Arg, 10,4 (10); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,0 (8); Trp, 1,1 (1).
Yhdiste 70: 15 LLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW-OH (SEKV. ID NO:84) Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg 15 10
Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His Leu His 15 20 25 20 Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp OH (SEKV. ID NO:84) 30 35
Fysikaaliset tiedot sp. 150 - 210 °C [a]D25 = -41 , 70° (c 0,36, H20) 25 FAB (Ci89H324N72052 ) : [M+H]+ = 4437, 14 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 4,1 (4); Ser, 1,9 (2); His, 2,0 (2); Gly, 2,1 (2); Thr, 2,0 (2); Ala, 2,1 (2); Arg, 9,7 (10); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,4 (8).
30 Analogi (yhdiste 57), jonka sivuketju on syklisoitu, syntetisoitiin kuten edellä, paitsi että N“-Boc-Ne-Fmoc-Lys ja N“-Boc-NY—Fmoc-Asp sijoitettiin vastaavasti asemiin 13 ja 17. Boc-aminohapon synteesin loppuvaiheilla hartsi käsiteltiin 20%:isella piperidiinillä DMF:ssä huoneenlämpö-35 tilassa 30 minuutin ajan. Hartsi suodatettiin ja pestiin DMF:llä, MeOH:lla ja CH2Cl2:lla. Hartsi (1,1 g) suspendoi- 68 tiin 10 mlrssa DMF:ää, joka sisälsi 250 mg PyB0P:ia. pH säädettiin välille 8-9 DIEA:lla ja hartsia sekoitettiin 1 tunnin ajan. Hartsi suodatettiin, pestiin DMF:11ä ja CH2C12:11a ja resuspendoitiin sitten DMF:s s ä. Liittäminen 5 toistettiin käyttämällä 125 mg PyBOP:ia. Hartsi suodatettiin, pestiin DMF:11ä, MeOH:lla ja CH2Cl2:lla ja kuivattiin. Sitten hartsi käsiteltiin HF:llä ja peptidi puhdistettiin kuten edellä on mainittu.
10 Yhdiste 57: I-1 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (SEKV. ID NO:71) I-
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:71) 20 30
Fysikaaliset tiedot sp. 142,5 - 163,5 °C [Of] D25 = -34,31° (c 0,17, H20) FAB (Ci75H29gN56O50) : [M+H]+ = 3986,4 25 AAA: Asx 1,9 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,2 (3) ; Gly, 1,1 (1); Ala, 2,0 (2); Arg, 3,0 (3); Thr, 1,0 (1); Vai, 1,1 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 4,0 (4) .
30 ESIMERKKI II
[Met34, Ala35]-yhdiste 1, AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKL-HTMA-NH2, (SEKV. ID NO:25), valmistettiin ja puhdistettiin esimerkin 1 menettelyjä seuraten. Tämä polypeptidi muutet-35 tiin homoseriinilaktoniksi seuraavasti. Puhdistettu peptidi (160 mg) liuotettiin 44%:iseen muurahaishappoon (4 ml). Tämä liuos yhdistettiin etukäteen sekoitetun syaanibromi-din (700 mg) ja fenolin (1,6 mg) liuoksen kanssa 44%:ises- 69 sa muurahaishapossa (4 ml) 0 °C:ssa. Liuosta sekoitettiin 0 °C:ssa 2 tunnin ajan ja huoneenlämpötilassa 2 tunnin ajan. Tuotteen muodostumista seurattiin HPLC:llä (Vydac® C-18, 300 Ä, 4,6 x 250 mm, virtaus 1,2 ml/min, 25-45%:inen 5 asetonitriiligradientti 0,l%:isessa TFA:ssa 10 minuuttia). Reaktio oli valmis 4 tunnin sisällä. Puolet näytteestä konsentroitiin ja puhdistettiin preparatiivisella RP-HPLCrllä (Vydac® C-18, 25-45%:inen asetonitriiligradientti 0,l%:isessa TFA:ssa). Homoseriinilaktonipeptidifraktiot 10 yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 28 mg valkeaa kiinteää ainetta > 95 %:n puhtaudella, yhdistettä 4.
Yhdiste 4: 15 AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX (X= hSerlac, SEKV. ID NO: 9)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 20 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr hSerlac (SEKV. ID NO:9) 30
Fysikaaliset tiedot 25 sp. 138 - 142 °C [a]D25 = -50,66° (c 0,1, H20) FAB (C176H299N55O52) : [M+H] + = 4017,61 AAA: Asp 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,0 (3); Thr, 1,1 (1); Ala, 1,1 (1); Arg, 2,7 (3); Vai, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,2 (8); Lys, 3,8 (4); Gly, 1,09 30 (1); hSer, 1,09 (1).
Samalla tavoin tämän menettelyn mukaisesti valmistettiin yhdiste 65.
70
Yhdiste 65: AVSEIQFXiHN KGKHLSSXiER VEWLRKKLQD VHNX2 (SEKV. ID NO:79) (Xi= L-norleusiini; X2= homoseriinilaktoni)
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Nle His Asn Lys Gly Lys His 5 1 5 10
Leu Ser Ser Nle Glu Arg Vai Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25
Gin Asp Vai His Asn hSerlac (SEKV. ID NO:79) 30 10 Fysikaaliset tiedot sp. 166 - 176 °C [a] D25 = -52,22° (c 0,25, H20) FAB (Ci8oH2ggN5405o) : [M+H] + = 4008,6 AAA: Asx 3,1 (3); Glx, 4,8 (5); Ser, 2,9 (3); His, 2,9 (3); Gly, 1,1 (1); Ala, 1,1 (1); Arg, 2,0 (2); Vai, 2,7 15 (3); Phe, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu + Nle 5,9 (4 + 2);
Lys, 2,8 (3) .
ESIMERKKI III
20 Homoseriiniamidin valmistamiseksi raaka homoseriinilakto-nianalogi, yhdiste 4, konsentroitiin ja käsiteltiin 25 ml:n kanssa kyllästettyä NH3 metanolissa. Liuosta sekoitettiin 0 °C:ssa 2 tunnin ajan ja huoneenlämpötilassa 16 tunnin ajan. Reaktiota seurattiin HPLC:llä (Vydac® C-18, 25 300 Ä, 4,6 x 250 mm, virtaus 1,2 ml/min, 20-45%:inen ase- tonitriiligradientti 0,l%:isessa TFA:ssa) ja se oli valmis 18 tunnin kuluessa. Liuos konsentroitiin ja puhdistettiin preparatiivisella RP-HPLC:llä (Vydac® C-18, 25-45%:inen asetonitriiligradientti 0,l%:isessa TFA:ssa). Homoseriini-30 amidipeptidifraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jol loin saatiin 30 mg valkeaa kiinteää ainetta > 98 %:n puhtaudella, yhdistettä 3.
Yhdiste 3: 35 AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX-NHz (X= hSer, SEKV. ID NO: 8) 71
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 5 Glu Lys Leu His Thr hSer NH2 (SEKV. ID NO:8).
30
Fysikaaliset tiedot sp. 138 - 142 °C [a] D25 = -45, 97° (c 0,25, H20) 10 FAB(C176H3o2N56052) : [M+H] + = 4033,9 AAA: Asp 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); Ser, 1,6 (2); His, 2,8 (3); Gly, 0,97 (1); hSer, 0,97 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 2,9 (3); Vai, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,6 (8) ; Lys, 3, 9 (4) .
15
Samalla tavoin tämän menettelyn mukaisesti valmistettiin yhdisteet 22, 23 ja 28.
Yhdiste 22: 20 AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH2 (SEKV. ID NO:36) (X= homoseriini)
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 25 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn hSer NH2 (SEKV. ID NO:36) 30
Fysikaaliset tiedot 30 sp. 69, 4 - 128 °C [of] D25 = -43,93° (c 0,15, H20) FAB (Ci79H3o2N56049 ) : [M+H]+ = 4022,9 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 4,9 (5); Ser, 2,6 (3); His, 2,8 (3); Gly, 1,0 (1); Ala, 1,0 (1); Arg 3,0 (3); Vai, 1,0 (1); Phe, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,8 (9); Lys, 3,4 35 (3); 72
Yhdiste 23: AVSEIQFLHN KGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH2 (SEKV. ID NO:37) (X= homoseriini)
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Lys Gly Lys His 5 1 5 10
Leu Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn hSer NH2 (SEKV. ID NO:37) 30 10
Fysikaaliset tiedot sp. 87, 1 - 142, 1 °C [a]D25 = -52, 14° (c 0,41, H20) FAB (C179H303N57O49) : [M+H]+ = 4038 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 4,9 (5); Ser, 2,7 (3); His, 2,8 15 (3); Gly, 1,0 (1); hSer, 1,0 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 3,0 (3); Vai, 1,1 (1); Phe, 0,9 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,9 (8) ; Lys, 3, 7 (4) .
Yhdiste 28: 20 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRX-NH2 (SEKV. ID NO:42) (X= homoseriini)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 25 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala Gly Arg Arg hSer NH2 30 35 (SEKV. ID NO:42)
Fysikaaliset tiedot 30 sp. 80 °C [Of] o25 = -48,64° (c 0,09, H20) FAB (C193H334N70O56) : [M+H]+ = 4530,0 AAA: Asx 2,2 (2); Glx, 6,1 (6); Ser, 1,7 (2); His, 3,0 (3); Gly, 1,9 (2); hSer, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,1 (2); Arg, 7,2 (7); Vai, 0,8 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,4 35 (8); Lys, 2,1 (2) .
73
Homoseriinialkyyliamidit valmistettiin samalla tavoin homoseriinilaktonista liuottamalla sitä DMF:ssä, joka sisälsi ylimäärän vastaavaa alkyyliamiinia. Sen jälkeen kun oli sekoitettu huoneenlämpötilassa useita päiviä (reakti-5 ota seurattiin analyyttisellä HPLC:llä), seos haihdutettiin kuivaksi ja peptidi puhdistettiin preparatiivisella HPLC:llä. Yhdisteet 55 ja 56 ovat vastaavia homoseriinial-kyyliamideja.
10 Yhdiste 55: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH2CH3 (SEKV. ID NO:69) (X= homoseriini)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 15 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr hSer NHCH2CH3 (SEKV. ID NO:69) 30 20 Fysikaaliset tiedot sp. (ei määritetty) [a]D25 = (ei määritetty) FAB (Ci78H306N56O52) : [M+H] + = 4063,0 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 5,8 (6); Ser, 1,7 (2); His, 3,1 (3) ; Gly, 0,9 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 0,9 (1); Arg, 3,0 25 (3); Vai, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,4 (8); Lys, 3,7 (4) ; hSer, 0,9 (1).
Yhdiste 56: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH2CH2C6H5 (SEKV.
30 ID NO:70) (X= homoseriini)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 35 Glu Lys Leu His Thr hSer NHCH2CH2C6H5 (SEKV. ID NO:70) 30 74
Fysikaaliset tiedot 2 5 sp. (ei määritetty) [a]D = (ei määritetty) FAB (C184H310N56O52) : [M+H] + = 4138,8 AAA: Asx 2,0 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,7 (2); His, 2,9 5 (3); Gly, 0,9 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 0,9 (1); Arg 3,0 (3) ; Vai, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 4,1 (4) ; hSer, 0,9 (1).
ESIMERKKI IV
10 N“-Boc-NY-Fmoc-L-2,4-diaminobutaanihapon cesiumsuola sidottiin Merrifield-hartsiin (DMF, 50 °C, 48 tuntia) ja käytettiin kiinteätaasisynteesissä Boc-Ala-hartsin sijasta kuten esimerkissä I. Synteesin loppuvaiheessa peptidiä kä-15 siteltiin 20%:isella piperidiinillä DMF:s s ä huoneenlämpö-tilassa 30 minuutin ajan, jotta sivuketjun Fmoc-suojaryhmä poistui. Suojattu peptidi syklisoitui spontaanisti laktaa-miksi, jolloin se irrottautui hartsista. Liuos suodatettiin hartsista ja haihdutettiin tyhjiössä öljyksi. Jään-20 nöstä käsiteltiin nestemäisellä HF:llä kuten esimerkissä I, jolloin saatiin suojaamaton raaka peptidi. Peptidi käsiteltiin ja puhdistettiin kuten esimerkissä I.
Yhdiste 49: 25 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX (SEKV. ID NO:63) (X= L-2,4-diaminobutyryylilaktaami)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 30 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr L-2,4-diaminobutyryylilaktaami 30 (SEKV. ID NO:63)
Fysikaaliset tiedot 35 sp. 161 - 181 °C [a]D25 = -48,38 (c 0,25, H20) FAB(C176H3ooN5605i) : [M+H]+ = 4016,8 75 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 6,3 (6); Ser, 1,7 (2); His, 3,3 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,1 (2); Arg, 2,9 (3) ; Val, 0,9 (1); He, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 3,8 (4) .
5
ESIMERKKI V
Esimerkin II homoseriinilaktonianalogin vesiliuosta käsiteltiin porsaan maksan esteraasin (Sigma Chemical Company, 10 St. Louis, MO) kanssa. Laktonin hydrolyysiä C-terminaali-seksi homoseriiniksi seurattiin analyyttisellä HPLCrllä. Kun hydrolyysin arvioitiin päättyneen, aines puhdistettiin preparatiivisella HPLCrllä samoin kuin esimerkissä I.
15 Yhdiste 37: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-OH (SEKV. ID NO:51) (X= homoseriini)
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 20 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr hSer OH (SEKV. ID NO:51) 30 25 Fysikaaliset tiedot sp. (ei määritetty) [a]D25 = (ei määritetty) FAB (C176H301N55O53 ) : [M+H] + = 4035,1 AAA: Asx 2,1 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 2,0 (2); His, 3,1 (3); Gly, 0,8 (1); hSer, 0,8 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 1,0 30 (1); Arg, 3,0 (3); Vai, 1,3 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,1 (8) ; Lys, 3, 8 (4) .
ESIMERKKI VI
35 Suojattu peptidi-hartsi BocAVS(Bzl)E(OBz)H(Bom)QLLHD-(OBz1)R(Ts)GR(Ts)S(Bzl)IQD(OBz)LR(Ts)R(Ts)E(OBz)LLE-(OBzl)R(Ts)LLK(Fmoc)R(Ts)LH(Bom)T(Bzl)A-O-PAM syntetisoi- 76 tiin esimerkin 1 mukaisesti 0,35 mmol:n mittakaavassa. Kaikki Na-ryhmät suojattiin t-butoksikarbonyylillä (Boc); sivuketjusuojaryhmät olivat kuten ne on osoitettu. Synteesin päättymisen jälkeen peptidi-hartsia käsiteltiin 50 5 ml:n kanssa 20%:ista piperidiiniä dimetyyliformamidissa (DMF) huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan, jotta lysiinin suojaryhmä fluorenyylimetoksikarbonyyli (Fmoc) poistuisi. Hartsi pestiin peräkkäin DMF:n, MeOH:n ja CH2Cl2:n kanssa ja kuivattiin antamaan 1,6 g osittain suojattua peptidiä. 10 Osittain suojatusta peptidistä asyloitiin 0,8 g (0,175 mmol) lysiinillä 0,44 g:n (0,3 mmol) kanssa metoksidi-(eteenioksi)etikkahappoa [PEG (2)CH2COOH] 20 ml:ssa DMF:ää huoneenlämpötilassa 0,16 g:n (0,3 mmol) bentsotriatsolyy-lioksi-tris(pyrrolidino)fosfoniumheksafluorifosfaattia 15 (PyBop) ja 0,067 g:n (0,525 mmol) di-isopropyylietyyli-amiinia (DIAE) läsnäollessa 5 tunnin ajan. Kun 5 tuntia oli kulunut, hartsi suodatettiin ja pestiin peräkkäin DMF:n, MeOH:n ja CH2Cl2:n kanssa. Asylointivaihe toistettiin kahdesti kunnes hartsille saatiin negatiivinen nin-20 hydrin-tulos. Lopullinen peptidi lohkottiin hartsista, sivuketjusuojaryhmät poistettiin ja se puhdistettiin kuten esimerkissä I; yhdistettä 19 saatiin 100 mg.
Yhdiste 19: 25 AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH (SEKV. ID NO:18) CH30(CH2CH20)2ch2c=o
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 30 15 20 25
Lys(COCH2PEG2) Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:18) 30
Fysikaaliset tiedot 35 sp. 145 - 195 °C [Of] D25 = -44,60° (c 0,2, H20) FAB (C183H316N64O54) : [M+H]+ = 4276,2 77 AAA: Asp 2,1 (2); Glu, 5,0 (5); Ser, 1,6 (2); His, 2,9 (3); Gly, 0,9 (1); Thr, 1,9 (2); Arg, 7,1 (7); Val, 1,1 (1); He, 1,0 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 0,9 (1).
5 ESIMERKKI VII
Peptidi syntetisoitiin, lohkottiin ja puhdistettiin samalla tavalla kuin esimerkissä IV, paitsi että asylointiai-neena käytettiin 2-metoksipoly(eteenioksi)etikkahappoa 10 [PEG(5000)CH2C02H] . 0,8 g (0,175 mmol) osittain puhdistet tua peptidiä tuotti 300 mg puhdasta yhdistettä 20.
Yhdiste 20: AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH (SEKV. ID NO:19) 15 CH30(CH2CH20) hoCH2C=0
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 20 15 20 25
Lys(COCH2PEG5000) Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:19) 30
Fysikaaliset tiedot 25 sp. 105 °C [ex] d25 = -22,95° (c 0,11, 50%:inen aq. HOAc) AAA: Asp 2,0 (2); Glu, 4,8 (5); Ser, 1,6 (2); His, 2,6 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,1 (1); Arg 7,3 (7); Vai, 0,8 (1) ; Ile, 0,9 (1); Leu, 8,3 (8); Lys, 1,1 (1); Ala, 1,8 (2) .
30
ESIMERKKI VIII
hPTHRP(1-34)-analogin geenin synteesi hPTHRP(1-34)-analogiyhdistettä 4 (SEKV. ID NO:9) koodaava 35 synteettinen geeni suunniteltiin niin, että se sisälsi nukleotidisekvenssin ja entsyymirestriktiokohdat, jotka 78 esitetään kuvassa 1. Tarvittavat oligodeoksinukleotidit valmistettiin DNA-syntetisaattorilla (Milligen/Biosearch) käyttämällä Sinhan ym., artikkelissa Nucleic Acid Research 12, 4539-4557 (1984), esittämää fosforamidiittimenetelmää. 5 Suojauksenpoiston jälkeen raa'at oligonukleotidit puhdistettiin geeli-elektroforeesilla preparatiivisilla 15%:i-silla polyakryyliamidigeeleillä. Oligonukleotidit paikallistettiin UV:n avulla, poistettiin geelistä, niistä poistettiin suolat Waters cl8 Sep-pak® -patruunoilla (cartrid-10 ges) ja ne lyofilisoitiin.
Monistaminen polymeraasiketjureaktiota (PCR) käyttäen ajettiin laitteistolla Perkin-Elmer Cetus thermal cycler 25 syklillä, joilla oli vaiheet: 94 °C 1 minuutti, 50 °C 2 15 minuuttia ja 72 °C 3 minuuttia, käyttäen reagensseja, joihin kuului Taq-polymeraasi, pakkauksesta "GeneAmp" DNA-amplifiointikitti (Perkin-Elmer Cetus).
Valmistettiin kaksi päällekkäistä oligonukleotidiä, 88-20 meerinen (2 pg) , PTH3, (SEKV. ID NO:31): CCTCTAGATC TCCGCGGCGC TAGC ATG GCT GTT TCT GAA CAT CAG 45
Met Ala Vai Ser Glu His Gin 1 5 CTG CTT CAT GAC AAA GGT AAA TCG ATT CAA GAT CTG AGA CGT 87 25 Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg 10 15 20 C 88 ja anti-sense 90-meerinen (2 pg) , PTH4 (SEKV. ID NO:32): 30 CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATCTAGA CAT AGT ATG CAG CTT TTC 46
Met Thr His Leu Lys Glu 30 AAG CAG TTT CTC CAG CAG CTC GCG ACG TCT CAG ATC TTG AAT 88
Leu Leu Lys Glu Leu Leu Glu Arg Arg Arg Leu Asp Gin Ile 35 25 20 15 CG 90, 79 templaatti-DNA-sekvenssiksi hPTHRP(1-34)-analogin geenille. Kahta reunustavaa aluketta, PTHPCR1: CCTCTAGATC TCCGCGGCGC TAG (SEKV. ID NO:33) ja PTHPCR2: CCTCGAAGCT 5 TATGCATCAT TATC (SEKV. ID NO:34), hyödyntäen monistettiin kokonainen geeni PCRrllä. Monistetut DNA-tuotteet puhdistettiin geelielektroforeesilla 4%:isella NuSieve®-agaroo-sigeelillä. Vyöhyke, joka sisälsi synteettisen hPTHRP(l-34)-analogin geenin, pituudeltaan noin 150 emästä, pois-10 tettiin geelistä ja noin 200 ng DNA:ta eristettiin Elu-Quik® -lasigeeli-DNA-ekstraktiolla (Schleicher & Schuell, Keene, NH).
ESIMERKKI IX
15 hPTHRP(1-34)1-analogin geenin molekyylikloonaus
Esimerkin VI hPTHRP(1-34)-analogin geenin alikloonaamisek-si 200 ng monistettua DNA:ta eristettiin ja sitä pilkottiin restriktioentsyymeillä HinD III ja Sac II. Kuten ku-20 vassa 2 nähdään, DNA liitettiin 2 pg:aan TrpLE 18 Prot (Ile3, Pro5) -plasmidia, joka oli aiemmin pilkottu Hind 111:11a ja Sac II:lla.
Tuloksena saatu plasmidi, TrpLE 18 hPTHRP(1-34)1, joka 25 sisälsi yhden kopion hPTHRP(1-34)-analogin geenistä, transformoitiin sitten kompetentteihin E. coli HB 101 -soluihin (CLONTECH, Palo Alto, CA). Transformanteille tehtiin PCR-analyysi insertion varmistamiseksi. Transformoidut solupesäkkeet valikoitiin ja keitettiin 200 pl:ssa 30 vettä 5 minuutin ajan; 2 pl:lle tehtiin PCR kahden insert-tiä reunustavan alukkeen kanssa. Sitten PCR-tuote analysoitiin l%:isella agaroosigeelillä, jotta varmistuttiin yhden hPTHRP(1-34)-geeni-insertin kopion läsnäolosta. Trp LE18 hPTHRP(1-34)1-rakenne varmistettiin sitten DNA-sek-35 vensoinnilla automaattisella DNA-sekvenaattorilla (Applied Biosystems Model 373A, Foster City, CA) käyttämällä myyjän Dye Deoxy Terminator Sequencing -kittiä.
80
ESIMERKKI X
Monia hPTHRP(1-34)-analogin geenikopioita sisältävän Trp LE 18 -vektorin rakentaminen 5
Ainoat Nhe I ja Xba I -restriktiokohdat sijaitsevat lähellä hPTHRP(1-34)-analogin geenisekvenssin alkua ja loppua. Nämä kaksi kohtaa, jotka tunnistavat erilaiset sekvenssit, mutta tuottavat identtiset yksijuosteiset kohesiiviset 10 päät, mahdollistavat monien hPTHRP(1-34)-geenikopioiden rakentamisen Trp LE 18 -vektorin sisällä.
Suunnitelma toistuvien hPTHRP(1-34)-sekvenssien peräkkäiseksi rakentamiseksi esitetään pääpiirteittäin kuvassa 3. 15 Erillisissä reaktioissa 5 pg plasmidia Trp LE 18 hPTHRP(l-34)1, joka sisälsi yhden geenikopion, pilkottiin restrik-tioentsyymeillä Bam HI + Nhe I ja Xba I + Bam HI. Kummankin pilkkomisen jälkeen eristettiin noin 300 ng fragmenttia, joka sisälsi hPTHRP(1-34)-analogin geeniä. Nämä kaksi 20 fragmenttia yhdistettiin ja liitettiin muodostamaan Trp LE 18 hPTHRP(1-34)2 -plasmidi. Tätä plasmidia käytettiin transformoimaan kompetentit E. coli HB 101 -solut. Kahden hPTHRP(1-34)-geeni-inserttikopion läsnäolon määrittämiseksi transformoidut PCR-tuotteet lajiteltiin koon mukaan 25 l%:isella agaroosigeelillä. TrpLE 18 hPTHRP(1-34)2, joka sisälsi kaksi geenikopiota, varmistettiin sitten DNA-sek-vensoinnilla. Kahden hPTHRP(1-34)-geenin oikean fuusion tuloksena kohdat Nhe I ja Xba I poistuvat liitoskohdassa. Tämän vuoksi jäljelle jäävät Xba I ja Nhe I -kohdat tan-30 dem-geenien reunoilla ovat ainutlaatuisia.
Toistamalla tämä prosessi rakennettiin lopullinen plasmidi Trp LE 18 hPTHRP(1-34)4, joka sisältää neljä kopiota hPTHRP(1-34)-geenistä, kuten nähdään kuvassa 4. Trp LE 18 35 hPTHRP(1-34)4 -plasmidin sekvenssi havaittiin oikeaksi DNA-sekvenssianalyysillä.
81
ESIMERKKI XI
Trp LE IS hPTHRP(1-34)4:n ilmentäminen ja puhdistus Trp LE 18 hPTHRP(1-34)4:n induktio 5 Aloitusviljelmään, joka käsitti 50 ml:sta LB-kasvuliuosta, J.H. Miller, "Experiments in Molecular Genetics," s.431 (1972), joka sisällytetään tähän viitteenä, ja joka aloi-tusviljelmä sisälsi 50 pg/ml ampisilliinia ja 100 pg/ml tryptofaania, siirrostettiin E. coli -soluja, jotka sisäl-10 sivät Trp LE 18 hPTHRP(1-34)4 -plasmidia, ja kasvatettiin yön yli 37 °C:ssa voimakkaasti ravistellen A55o-arvoon noin 6. Kaksi litraa LB-tuotantoliuosta esilämmitettiin 37 °C:seen ja siihen ympättiin 20 ml aloitusviljelmää, jotta päästiin A55o-arvoon noin 0,06. Sitten viljelmää kasvatet-15 tiin voimakkaasti ravistellen A55o-arvoon välille 0,6 ja 0,8, minkä jälkeen lisättiin 2 ml indoliakryylihappo (IAA) -liuosta, jonka pitoisuus oli 10 mg/ml. Kasvatusta jatkettiin hyvin ilmastaen noin 16 tuntia lopulliseen A55o-arvoon noin 6 (tavallisesti 4:n ja 10:n välille). Solut konsent-20 roitiin sentrifugoimalla ja resuspendoitiin 500 ml:ssa 50 mM Tris-HCl:ää, pH 7,5, 0,1 inM EDTA-puskuriliuosta (Tris- puskuri).
Suspensiota sonikoitiin käyttämällä sonikaattoria Heat 25 Systems-Ultrasonics, Inc. malli 220F (varustettu 3/4" sarvella (horn)) 50 %:n teholla täydestä kapasiteetista ylikuumenemisen välttämiseksi.
Induktion laajuuden määrittämiseksi kokonaiset solut ana-30 lysoitiin SDS-PAGE:11a. Trp LE 18 hPTHRP(1-34)4 -rakenteesta johdetut geenituotteet havaittiin päävyöhykkeenä, jonka ennustettu molekyylipaino oli noin 17 000. Tämä vastaa niin paljoa kuin 10 % solun kokonaisproteiinista.
82
Fuusioproteiinin eristäminen
Solulysaattia sentrifugoitiin 15 minuutin ajan kiihtyvyydellä noin 3600 x g Trp LE 18 hPTHRP(1-34)4 -fuusioprote-5 iinin pelletoimiseksi; supernatantti heitettiin pois. Pelletti resuspendoitiin 200 ml:ssa Tris-puskuria. (tavallisesti 40-80 A55o/ml).
ESIMERKKI XII
10 Fuusioproteiinin käsittely ja homoseriinilaktoni-hPTHRP(1-34)-peptidin puhdistus
Multimeeristä hPTHRP(1-34)-fuusioproteiinia reunustavien metioniinitähteiden poisto CNBr:llä vapauttaa halutun ho-15 moseriinilaktoni-hPTHRP(1-34)-polypeptidin, joka puhdistettiin kuten alla on kuvattu.
Fuusioproteiinin CNBr-käsittely 20 Pesty TrpLE 18 hPTHRP(1-34)4 -fuusioproteiinipelletti resuspendoit iin kevyesti sekoittaen 60 ml:ssa 70%:ista muurahaishappoa (noin 20 mg/ml kokonaisproteiinia; tavallisesti aines 1000 :sta A550-yksiköstä soluja liukenee 3 ml:ssa). Lisättiin muutama tippa oktanolia ja N2 kuplitet-25 tiin liuoksen läpi 20 minuutin ajan ennen kuin lisättiin 5,5 g CNBr. Reaktion annettiin edetä 6 tuntia 25 °C:ssa ennen kuin näytteen kanssa sekoitettiin yhtä suuri tilavuus 50:50 Me0H:H20 -liuosta ja sen jälkeen haihdutettiin kiertohaihdutuksella. Sen jälkeen kun tämä menetelmä oli 30 toistettu 2-4 kertaa, muurahaishappo- ja CNBr-aines pääasiallisesti poistettiin. Näyte haihdutettiin sitten kuiviin, liuotettiin uudelleen 200 ml:aan vettä ja lyofili-soitiin varastointia varten.
83
Homoseriinilaktoni-hPTHRP(1-34):n puhdistus CNBr-pilkottu supernatantti dialysoitiin 50 mM KH2PO4 vastaan pH:ssa 6,5 24 tuntia monilla vaihdoksilla. Dialyysin 5 aikana pH pidettiin arvossa 6,5. Dialyysin jälkeen sakat poistettiin high speed -sentrifugoinnilla. Supernatantti selkeytettiin 0,45 pm:n Gelman -suodatinlaitteiston läpi (Acrodisc 4184).
10 Kationinvaihtokromatografia
Ensimmäinen puhdistus suoritettiin kationinvaihtokromato-grafialla Bio-Gel TSK-SP-5PW HPLC -pylväällä (21,5 x 150 mm). Kromatografiaolosuhteet virtausnopeudelle 8 ml/min ja 15 saannolle, joka oli noin 12 mg hyvin puhdistettua homose-riinilaktoni-hPTHRP(1-34)-peptidiä, olivat: 1. Pylvään tasapainotus 50 mM KH2PC>4:ssa, pH 6,5.
2. Syötä 10 ml selkeytettyä supernatanttia (noin 1,5 1 20 viljelylientä tai 2,4 g siirrosta).
3. Pese pylväs 50 mM KH2P04:lla pH:ssa 6,5, joka sisältää 50 mM NaCl, kunnes perusviiva (base line) on stabiloitu.
4. Eluoi pylväs 50 mM K^PCdrlla pH 6,5, joka sisältää 90 mM NaCl. Kerää fraktiot noin 45 minuutiksi.
25 5. Analysoi 90 mM NaCl-fraktioista homoseriinilaktoni- hPTHRP(1-34)-pitoisuus C18 HPLCrllä ennen yhdistämistä ja varastointia.
Käänteisfaasi-HPLC-kromatografia 30
Lopulliseen puhdistusvaiheeseen käytettiin käänteisfaasi-pylvästä Poros R/H 4,6 x 100 mm (Perseptive Biosystems, Cambridge, MA). Kromatografiaolosuhteet olivat seuraavanlaiset : 84
Liikkuva faasi A: 0,l%:inen trifluorietikkahappo (TFA) / vesi B: 0,l%:inen trifluorietikkahappo (TFA) / CH3CN 5
Aika Virtaus % B
0 min 4 ml/min 15 5.0 min 4 ml/min 40 5,2 min 4 ml/min 100 10 6,8 min 4 ml/min 100 7.0 min 4 ml/min 15
Homoseriinilaktoni-hPTHRP(1-34):n, yhdisteen 4, viipymis-aika oli noin 2,943 minuuttia. Puhdistettu peptidi oli 15 noin 98%risesti puhdasta massaspektrometrialla määritettynä .
ESIMERKKI XIII
20 Tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden vaikutusta luuainekseen arvioitiin rotilla, joiden munasarjat oli poistettu, yleensä Gunness-Heyn ja Hoekin, Metab. Bone Dis. 5: 177-181 (1984), menettelyjen mukaisesti .
25
Aikuiset naaraspuoliset Sprague-Dawley-rotat sopeutettiin ympäristöönsä, ryhmiteltiin koon mukaan (n= 9, 10 tai 12) ja niille tehtiin molemminpuolinen munasarjojen poisto (OVX) tai näennäisleikkaus. Annostus aloitettiin 17 päivää 30 leikkauksen jälkeen ja sitä jatkettiin 20 päivää. Testiyh-distettä annettiin ihonalaisesti kerran päivässä 2%:isessa rotan seerumi/suolaliuosapuaineessa.
20 päivän annostuksen jälkeen rotat tapettiin ja niiden 35 oikeat reisiluut poistettiin. Reisiluut leikattiin puoliksi ja distaaliset reisiluun puolikkaat (DHF) eroteltiin edelleen trabekulaariseksi luuksi (TB) ja kortikaaliseksi 85 luuksi poraamalla pois sidekudoksinen säie. Kalsium uutettiin ja mitattiin Calcette-kalsiumanalysaattorilla ja ilmaistiin keskimääräisenä luun kalsiumina mg/DHF/100 g kehon paino.
5
Kahden otoksen t-testiä käytettiin OVX- ja valeryhmän vertailuun. OVX-ryhmiä vertailtiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA), minkä jälkeen tehtiin Fisherin LSD -monivertailu kunkin käsittelyryhmän ja apuaineen vertai-10 lemiseksi.
Munasarjojen poisto aiheutti huomattavaa luuaineksen häviämistä, erityisesti trabekulaarisesta luusta. Luun koko-naiskalsium oli 47-54 % alhaisempi kuin näennäiskäsitel-15 lyillä kontrollieläimillä.
80 pg/kg/vrk:n annostus bPTH(1-34):ää ja hPTHRP(1-34):ää aikaansai tilastollisesti merkittävän luun kokonaiskal-siumin nousun käsitellyillä OVX-rotilla vaihdellen 53 20 %:sta 95 %:iin ja vastaavasti 18 %:sta 40 %:iin; kortikaa-lisen luun kalsiumissa ei kuitenkaan tapahtunut merkittävää lisääntymistä.
Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet, annostettuna 25 määränä 80 pg/kg/vrk, lisäsivät luun kokonaiskalsiumia 66 %:ista 138 %:iin ja trabekulaarisen luun kalsiumia 87 %:sta 128 %:iin. Myös kortikaalisen luun kalsium, trabek-kelipaksuus ja luutilavuus kasvoivat merkitsevästi käsittelemättömiin OVX-kontrolleihin nähden.
30 Tässä analyysissä testattiin seuraavat yhdisteet:
Yhdisteen n Trabekulaarisen Kokonaisluun numero (# koetta) luun kalsium kalsium (kasvu-% (kasvu-% 35 OVX:ään verrattuna) OVX:ään verrattuna)
Yhdiste 1 6 101-128 % 88-138 % 86 (SEKV. ID NO:7)
Yhdiste 2 3 87-102 % 66-114 % (SEKV. ID NO:6)
Yhdiste 4 3 88-114 % 5 (SEKV. ID NO:9)
Samanlaisissa tutkimuksissa rotille, joilta munasarjat oli poistettu, annosteltiin 5, 10 ja 20 päivän ajan 40 pg/kg/vrk, ja saatiin seuraavat tulokset: 10
Yhdisteen n Antopäivien Kokonaisluun numero (# koetta) määrä (d) kalsium (kasvu-% OVX:ään verr.) 15 Yhdiste 1 6 20d 73-109 % (SEKV. ID NO:7)
Yhdiste 4 5 20d 79-105 % (SEKV. ID NO:9)
Yhdiste 4 1 lOd 79 % 20 (SEKV. ID NO:9)
Yhdiste 49 1 lOd 93 % (SEKV. ID NO:63)
Yhdiste 4 1 5d 55 % (SEKV. ID NO:9) 25 Yhdiste 42 1 5d 60 % (SEKV. ID NO:56)
ESIMERKKI XIV TOKSISUUS
30
Edellä olevassa esimerkissä XI ei keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden yhteydessä havaittu toksisia vaikutuksia.
87 SEKVENS SILIS TAUS (1) YLEISET TIEDOT: (1) HAKIJA: (A) NIMI: Syntex (USA) Inc.
(B) KATU: 3401 Hillview Avenue (C) KAUPUNKI: Palo Aito (D) OSAVALTIO TAI MAAKUNTA: Kalifornia (E) MAA: Yhdysvallat (F) POSTINUMERO: 94303 (G) PUHELIN: 415-852-1356 (H) TELEFAKSI: 415-496-3529 (ii) KEKSINNÖN NIMITYS: Menetelmä PTH:n ja PTHRP:n analogien valmistamiseksi, ja niiden käyttö osteoporoosin hoitoon (iii) SEKVENSSIEN LUKUMÄÄRÄ: 8 4 (iv) KONEKOODIMUOTO: (A) VÄLINETYYPPI: Levyke (B) TIETOKONE: IBM PC-yhteensopiva
(C) KÄYTTÖJÄRJESTELMÄ: PC-DOS/MS-DOS
(D) OHJELMISTO: Patentin julkaisulupa #1.0, ver sio #1.25 (EPO) (v) TIEDOT NYKYISESTÄ HAKEMUKSESTA: (A) HAKEMUSNUMERO: (2) SEKVENSSIN ID NO:1 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:1:
Ser Vai Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Vai Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25
Gin Asp Vai His Asn Phe 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:2 TIEDOT: 88 (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:2:
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Met His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Met Glu Arg Vai Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25
Gin Asp Vai His Asn Phe 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:3 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:3:
Ser Vai Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Leu Glu Arg Vai Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25
Gin Asp Vai His Asn Phe 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:4 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen 89 (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:4:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile 15 20 25
Ala Glu Ile His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:5 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:5:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Arg Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:6 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:6: 90
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:7 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:7:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:8 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 34 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa34= homoseriini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:8: 91
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Xaa 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:9 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 34 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa34= homoseriinilakto-ni " (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:9:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Xaa 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:10 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 37 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:10: 92
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Gly Arg Arg 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:ll TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:11:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu Lys Glu Leu 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:12 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:12:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 93
Ile Gin Asp Leu Ala Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:13 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:13:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Ala Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:14 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:14:
Ala Vai Ser Glu Ala Gin Leu Leu His Asp Leu Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Ala Leu 30 (2) SEKVENSSIN ID N0:15 TIEDOT: 94 (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:15:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:16 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:16:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:17 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen 95 (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:17:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Lys Arg Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:18 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 29 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa29= lysiini-(0CCH2(0CH2CH2)20CH3) " (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:18:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Xaa Arg Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:19 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen 96 (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 29 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa29= lysiini-(OCCH2 (OCH2CH2) 110OCH3) " (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:19:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Xaa Arg Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:20 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:20:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala 15 20 25
Glu Ala Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:21 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen 97 (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:21:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu 15 20 25
Ser Ser Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:22 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:22:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Phe Tyr Asp Lys Vai Ala 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:23 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen 98 (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 8 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa8= norleusiini" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 18 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaal8= norleusiini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:23:
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Xaa His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Xaa Glu Arg Vai Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn Tyr 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:24 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 8 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa8= norleusiini" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 18 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaal8= norleusiini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:24:
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Xaa His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Xaa Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 99
Glu Lys Leu His Asn Tyr 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:25 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 35 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:25:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Met Ala 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:26 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 10 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 8 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa8= glutamiinihappo tai arginiini" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Alue (B) SIJAINTI: 1..10 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Sekvenssi 26 sijaitsee sekvenssien 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ja 14 alueella asemasta 22 asemaan 31." (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:26: 100
Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu 15 10 (2) SEKVENSSIN ID NO:27 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 10 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 8 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa8= glutamiinihappo, lysiini tai lysiini-(OCCH2PEGX) " (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Alue (B) SIJAINTI: 1..10 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Sekvenssi 27 sijaitsee sekvenssien 15, 16, 17, 18 ja 19 alueella asemasta 22 asemaan 31." (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:27:
Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu 15 10 (2) SEKVENSSIN ID NO:28 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 10 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Peptidi (B) SIJAINTI: 1..10 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Sekvenssi 28 sijaitsee sekvenssin 20 alueella asemasta 22 asemaan 31." (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:28: 101
Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu 15 10 (2) SEKVENSSIN ID NO:29 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 10 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Peptidi (B) SIJAINTI: 1..10 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Sekvenssi 29 sijaitsee sekvenssin 21 alueella asemasta 22 asemaan 31." (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:29:
Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu 15 10 (2) SEKVENSSIN ID NO:30 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 10 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Peptidi (B) SIJAINTI: 1..10 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus^ "Sekvenssi 30 sijaitsee sekvenssin 22 alueella asemasta 22 asemaan 31." (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:30:
Ala Phe Tyr Asp Lys Vai Ala Glu Lys Leu 15 10 (2) SEKVENSSIN ID NO :31 TIEDOT: 102 (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 88 emäsparia (B) TYYPPI: nukleotidi (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen
(ii) MOLEKYYLITYYPPI: cDNA
(iii) HYPOTEETTINEN: Ei (iv) ANTI-SENSE: Ei (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:31: CCTCTAGATC TCCGCGGCGC TAGCATGGCT GTTTCTGAAC ATCAGCTGCT 50 TCATGACAAA GGTAAATCGA TTCAAGATCT GAGACGTC 88 (2) SEKVENSSIN ID NO:32 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 90 emäsparia (B) TYYPPI: nukleotidi (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen
(ii) MOLEKYYLITYYPPI: cDNA
(iii) HYPOTEETTINEN: Ei (iv) ANTI-SENSE: Kyllä (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:32: CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATCTAGACA TAGTATGCAG CTTTTCAAGC 50 AGTTTCTCCA GCAGCTCGCG ACGTCTCAGA TCTTGAATCG 90 (2) SEKVENSSIN ID NO:33 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 23 emäsparia (B) TYYPPI: nukleotidi (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen
(ii) MOLEKYYLITYYPPI: cDNA
(iii) HYPOTEETTINEN: Ei (iv) ANTI-SENSE: Ei (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:33: 103 CCTCTAGATC TCCGCGCGCT AGC 23 (2) SEKVENSSIN ID NO:34 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 24 emäsparia (B) TYYPPI: nukleotidi (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen
(ii) MOLEKYYLITYYPPI: cDNA
(iii) HYPOTEETTINEN: Ei (iv) ANTI-SENSE: Kyllä (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:34: CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATC 24 (2) SEKVENSSIN ID NO:35 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:35:
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn Tyr 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:36 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo 104 (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 34 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on homoseriini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:36:
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn Xaa 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:37 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 34 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on homoseriini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:37:
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Lys Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Asn Xaa 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:38 TIEDOT: 105 (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:38:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Lys Leu Lys Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:39 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:39:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:40 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 35 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen 106 (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:40:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala Pro 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:41 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 37 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:41:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala Gly Arg Arg 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:42 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 38 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen 107 (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 38 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on homoseriini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:42:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala Gly Arg Arg Xaa 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:43 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:43:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Tyr 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:44 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei 108 (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO :44:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Tyr Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:45 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:45:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Cys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:46 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 13 109 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on Cys (CH2CONH (CH2) 2NH (biotinyyli) ) (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:46:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Xaa Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:47 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 13 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on Lys(7- dimetyyliamino-2-okso-2H-l-benksopyraani-4-ase-tyyli)" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:47:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Xaa Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:48 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 35 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini 110 (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:48:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Gly 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:49 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 33 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 4 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa4 on Glu(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 10 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "XaalO on Asp(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 17 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaal7 on Asp(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 22 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa22 on Glu(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 25 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa25 on Glu(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE:
Ill (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 29 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa29 on Glu(OCH3)" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:49:
Ala Vai Ser Xaa His Gin Leu Leu His Xaa Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Xaa Leu Arg Arg Arg Xaa Leu Leu Xaa Lys Leu Leu 15 20 25
Xaa Lys Leu His Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:50 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 33 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 4 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa4 on Glu(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 10 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "XaalO on Asp(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 17 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaal7 on Asp(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 22 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa22 on Glu(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 25 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa25 on Glu(OCH3)" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta 112 (B) SIJAINTI: 29 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa29 on Glu(OCH3)" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:50:
Ala Vai Ser Xaa His Gin Leu Leu His Xaa Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Xaa Leu Arg Arg Arg Xaa Leu Leu Xaa Lys Leu Leu 15 20 25
Xaa Lys Leu His Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:51 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 34 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on homoseriini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:51:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Xaa 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:52 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 35 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei 113 (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO :52:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Pro 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:53 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:53:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Pro 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:54 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:54: 114
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Pro 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:55 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 33 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:55:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Pro 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:56 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 32 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:56:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 115
Glu Lys Leu Pro 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:57 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 37 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:57:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Arg Ser Ala Trp 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:58 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 42 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:58:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arq Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Ala Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp 30 35 40 (2) SEKVENSSIN ID NO:59 TIEDOT: 116 (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 42 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:59:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp 30 35 40 (2) SEKVENSSIN ID NO:60 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 42 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu paikka (B) SIJAINTI: 13 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaal3 on Lys(dihydrokinnamoyyli)" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:60:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Xaa Ser 1 5 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25
Glu Arg Leu His Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp 30 35 40 (2) SEKVENSSIN ID N0:61 TIEDOT: 117 (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu paikka (B) SIJAINTI: 8 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Leu8 on norleusiini" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu paikka (B) SIJAINTI: 18 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Leul8 on norleusiini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:61:
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Leu Thr Arg Ser Ala Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25
Gin Asp Vai His Asn Tyr 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:62 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 35 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:62:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 118
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Met Ala 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:63 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 33 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 33 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on Thr-1,4-diaminobutyryylilaktaami" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:63:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Xaa 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:64 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:64:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 119
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:65 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:65:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu His Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:66 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:66:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu His Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO :67 TIEDOT: 120 (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:67:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Ile 15 20 25
Ala Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:68 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:68:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Glu Ile His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:69 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo 121 (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 34 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on homoseriini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:69:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Xaa 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:70 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 34 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on homoseriini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:70:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Xaa 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:71 TIEDOT: 122 (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: molemmat (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:71:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:72 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 37 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:72:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Arg Ser Ala Trp 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:73 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 36 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen 123 (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 36 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on Ala-3-(2-naftyyli)-L-alaniini" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:73:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Arg Ser Xaa 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:74 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 37 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:74:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Ser Ala Trp 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:75 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 38 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen 124 (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:75:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Glu Ile Arg Ala 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:76 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 37 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:76:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Glu Ile Arg 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:77 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 36 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:77: 125
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Glu Ile 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:78 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 35 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (lii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:78:
Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25
Glu Lys Leu His Thr Ala Glu 30 35 (2) SEKVENSSIN ID NO:79 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Peptidi (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: N-terminaalinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 8 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Leu8 on norleusiini" 126 (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 18 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Leul8 on norleusiini" (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Modifioitu kohta (B) SIJAINTI: 34 (D) MUU INFORMAATIO: /huomautus= "Xaa on homo seriinilak töni" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:79:
Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Lys Gly Lys His 15 10
Leu Ser Ser Leu Glu Arg Vai Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25
Gin Asp Vai His Asn Xaa 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:80 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 32 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:80:
Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin 15 10
Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 15 20 25
Leu His Thr Ala 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:81 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 28 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini 127 (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:81:
Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg 15 10
Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala 15 20 25 (2) SEKVENSSIN ID NO:82 TIEDOT: (1) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 27 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:82:
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg 15 10
Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala 15 20 25 (2) SEKVENSSIN ID NO:83 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 41 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:83:
Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile Gin 15 10
Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 15 20 25 128
Leu His Leu His Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp 30 35 40 (2) SEKVENSSIN ID NO:84 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 35 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: Proteiini (iii) HYPOTEETTINEN: Ei (v) FRAGMENTTITYYPPI: Sisäinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI ID NO:84:
Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg 15 10
Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His Ala Gly 15 20 25
Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp 30 35
Claims (21)
1. Menetelmä modifioidun lisäkilpirauhashormonin kaltaisen peptidin (PTHRP) tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, jolla on kaava Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa Xaa Xaa Xaa Leu His Xaa Xaa Gly Xaa13 Ser Ile Gin Xaa17 Leu Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22-31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 "loppu", jossa Xaa1 on poissa tai se on Ala; Xaa2 on poissa tai se on Vai; Xaa3 on poissa tai se on Ser; Xaa4 on poissa tai se on Glu tai Glu(OCH3); Xaa5 on poissa tai se on His tai Ala; Xaa6 on poissa tai se on Gin; Xaa7 on poissa tai se on Leu; Xaa10 ja Xaa17 ovat toisistaan riippumatta Asp tai Asp(OCH3) ; Xaa11 on Lys, Arg tai Leu; Xaa13 on Lys, Arg, Tyr, Cys, Leu, Cys (CH2CONH (CH2) 2NH (bio-tinyyli)), Lys(7-dimetyyliamino-2-okso-2H-l-bentsopyraani- 4-asetyyli) tai Lys(dihydrokinnamoyyli); Xaa20 on Arg tai Leu; Xaa19 ja Xaa21 ovat toisistaan riippumatta Lys, Ala tai Arg; Xaa22-31 muodostaa amfipaattisen α-heliksin ja on: a) Xaa22 Xaa23 Leu Xaa25 Xaa26 Leu Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31, jossa Xaa22 ja Xaa25 ovat toisistaan riippumatta Glu, Glu(OCH3), His tai Phe; Xaa23 on Leu tai Phe; Xaa26 on Lys tai His; Xaa23 ja Xaa31 ovat toisistaan riippumatta Leu tai Ile; Xaa23 on Ala, Arg tai Glu; ja Xaa30 on Lys tai Glu (SEKV. ID NO:85); poislukien yhdiste, jossa Xaa on Phe, Xaa on Phe, Xaa25 on His, Xaa26 on Lys tai His, Xaa28 on Ile, Xaa29 on Ala, Xaa30 on Glu ja Xaa31 on Ile, poop pc p q b) Xaa Xaa Leu Xaa Arg Leu Leu Xaa Arg Leu, jossa
22. S I. Xaa ja Xaa ovat toisistaan riippumatta Glu, Glu(OCH3), His tai Phe; Xaa23 on Leu tai Phe; Xaa29 on Glu, Lys tai Lys (COCH2PEGX) ja PEGX on poly-(eteeniglykolimetyylieetteri) radikaali, jonka molekyyli-paino on 100 - 10 000 (SEKV. ID NO:86); c) Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu (SEKV. ID NO:28); d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu (SEKV. ID NO:29); e) Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu (SEKV. ID NO:30); Xaa32 on His, Pro tai Lys; Xaa33 on poissa tai se on Pro, Thr, Glu tai Ala; Xaa34 on poissa tai se on Pro, Arg, Met, Ala, hSer, hSer- laktoni, Tyr, Leu tai 1,4-diaminobutyryylilaktaami; Xaa35 on poissa tai se on Pro, Glu, Ser, Ala tai Gly; Xaa36 on poissa tai se on Ala, Arg tai Ile; Xaa37 on poissa tai se on Arg, Trp tai 3-(2-naftyyli)-L- alaniini; Xaa on poissa tai se on Ala tai hSer, tai Xaa on Thr Arg Ser Ala Trp; ja "loppu" on -OR tai -NR2, jossa kumpikin R on toisistaan riippumatta H, (Ci-C4)alkyyli tai fe-nyyli (Ci-C4) alkyyli, tunnettu siitä, että a) kiinteätaasisynteesimenetelmällä liitetään suojattuja aminohappoja perättäisesti sopivaan hartsikantajaan, poistetaan sivuketju- ja Nu-suojaryhmät ja lohkaistaan polypeptidi hartsikantajasta, tai b) rekom-binanttisynteesimenetelmällä kloonataan ja ekspressoidaan haluttua polypeptidiä koodaava geeni.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Xaa22”31 on Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu, jossa Xaa on Glu tai Arg (SEKV. ID NO:26).
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu sitä että Xaa11 ja Xaa13 ovat molemmat Lys ja Xaa19 ja Xaa21 ovat molemmat Arg.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä että polypeptidi on Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Arg Lys Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:5) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:6) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:7) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Thr hSer NH2 (SEKV. ID NO:8) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 _ 20 25 Glu Lys Leu His Thr hSerlaktoni (SEKV. ID NO:9) tai Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Thr Ala Gly Arg Arg OH (SEKV. ID NO:10) tai 30 35 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu Lys Glu Leu NH2 (SEKV. ID NO:11) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu Pro NH2 (SEKV. ID NO:56) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Thr 1,4-diaminobutyryylilaktaami 30 (SEKV. ID NO:63).
5. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Xaa11 ja Xaa13 ovat molemmat Lys ja toinen Xaa19:sta ja Xaa21:stä on Arg ja toinen on Ala.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polypeptidi on Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Ala Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:12) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Ala Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:13). 30
7. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että toinen Xaan:sta ja Xaa1 2:sta on Leu ja toinen on Lys, ja Xaa19 ja Xaa21 ovat molemmat Arg.
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polypeptidi on Ala Vai Ser Glu Ala Gin Leu Leu His Asp Leu Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Ala Leu OH (SEKV. ID NO:14). 30
9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Xaa22-31 on SEKV. ID NO: 85.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polypeptidi on Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu His Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:66). 30
11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu .. 00 — 7 1 siitä, että Xaa on Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu, jossa Xaa on Glu, Lys tai Lys(COCH2) PEGX ja PEGX on poly-(eteeniglykolimetyylieetteri)radikaali, jonka mole-kyylipaino on 100 - 10 000 (SEKV. ID N:0 27).
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Xaa11 ja Xaa1 ovat molemmat Lys tai Arg ja Xaa19 ja Xaa21 ovat molemmat Arg. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, tunnettu 2 siitä, että polypeptidi on Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25 Glu Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:15) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 1 5 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25 Glu Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:16) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 1 5 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25 Lys Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:17) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25 Lys(COCH2PEG2) Arg Leu His Thr Ala OH (SEKV. ID NO:18) tai 30 Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 15 20 25 Lys(COCH2PEG5000) Arg Leu His Thr Ala (SEKV. ID NO:19). 30
14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Xaa22~31 on SEKV. ID NO: 28.
15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polypeptidi on Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala 15 20 25 Glu Ala Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:20). 30
16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu sitä, että Xaa22”31 on SEKV. ID NO: 29.
17. Patenttivaatimuksen 16 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polypeptidi on Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu 15 20 25 Ser Ser Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:21). 30
18. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Xaa22-31 on SEKV. ID NO:30.
19. Patenttivaatimuksen 18 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polypeptidi on Ala Vai Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 15 10 Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Phe Tyr Asp Lys Vai Ala 15 20 25 Glu Lys Leu His Thr Ala NH2 (SEKV. ID NO:22). 30
20. Menetelmä modifioidun lisäkilpirauhashormonipoly-peptidin (PTH) tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, jolla on kaava Xaa1 Vai Ser Glu Ile Gin Xaa7 Xaa8 His Asn Leu Gly Lys His Leu Xaa16 Ser Xaa18 Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22-31 His Asn Xaa34 "loppu", jossa Xaa1 on Ser tai Ala, Xaa7 on Leu tai Phe, Xaa8 on Met tai Nle, Xaa16 on Asn tai Ser, Xaa18 on Leu, Met tai Nle, Xaa19 on Glu tai Arg, Xaa21 on Vai tai Arg, Xaa22~31 on jokin sekvensseistä SEKV. ID NO:26, 27, 28, 29, 30, 85 tai 86, Xaa34 on Phe tai Tyr, "loppu" on OH tai NR2, jossa R on H tai (Ci-C4) -alkyyli, tunnettu siitä, että a) kiinteätaasisynteesimenetelmällä liitetään suojattuja aminohappoja perättäisesti sopivaan hartsikantajaan, poistetaan sivuketju- ja N“-suojaryhmät ja lohkaistaan polypeptidi hartsikantajasta, tai b) rekom-binanttisynteesimenetelmällä kloonataan ja ekspressoidaan haluttua polypeptidiä koodaava geeni.
21. Patenttivaatimuksen 20 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polypeptidi on Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His 15 10 Leu Ser Ser Nle Glu Arg Vai Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Asn Tyr NH2 (SEKV. ID NO:23) tai 30 Ala Vai Ser Glu Ile Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 Leu Ser Ser Nle Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 15 20 25 Glu Lys Leu His Asn Tyr NH2 (SEKV. ID NO:24). 30
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/915,247 US5589452A (en) | 1992-07-14 | 1992-07-14 | Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis |
US91524792 | 1992-07-14 | ||
US9306465 | 1993-07-13 | ||
PCT/US1993/006465 WO1994001460A1 (en) | 1992-07-14 | 1993-07-13 | Analogs of pth and pthrp, their synthesis and use for the treatment of osteoporosis |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI950169A FI950169A (fi) | 1995-01-13 |
FI950169A0 FI950169A0 (fi) | 1995-01-13 |
FI120586B true FI120586B (fi) | 2009-12-15 |
Family
ID=25435450
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI950169A FI120586B (fi) | 1992-07-14 | 1995-01-13 | Menetelmä PTH:n ja PTHRP:n analogien valmistamiseksi, ja niiden käyttö osteoporoosin hoitoon |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (8) | US5589452A (fi) |
EP (2) | EP0651765B1 (fi) |
JP (1) | JP4106082B2 (fi) |
KR (3) | KR100458350B1 (fi) |
AT (1) | ATE202115T1 (fi) |
AU (1) | AU671851B2 (fi) |
CA (1) | CA2140281C (fi) |
DE (1) | DE69330347T2 (fi) |
DK (1) | DK0651765T3 (fi) |
ES (1) | ES2159293T3 (fi) |
FI (1) | FI120586B (fi) |
GR (1) | GR3036521T3 (fi) |
HU (2) | HU217843B (fi) |
MX (1) | MX9304226A (fi) |
NZ (1) | NZ254554A (fi) |
PT (1) | PT651765E (fi) |
WO (1) | WO1994001460A1 (fi) |
Families Citing this family (119)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5814603A (en) * | 1992-06-12 | 1998-09-29 | Affymax Technologies N.V. | Compounds with PTH activity |
US5977070A (en) * | 1992-07-14 | 1999-11-02 | Piazza; Christin Teresa | Pharmaceutical compositions for the nasal delivery of compounds useful for the treatment of osteoporosis |
US5589452A (en) * | 1992-07-14 | 1996-12-31 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis |
US5821225A (en) * | 1992-07-14 | 1998-10-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method for the treatment of corticosteroid induced osteopenia comprising administration of modified PTH or PTHrp |
AU672790B2 (en) * | 1992-07-15 | 1996-10-17 | Novartis Ag | Variants of parathyroid hormone and its fragments |
CN1070500C (zh) * | 1993-07-13 | 2001-09-05 | 森德克斯(美国)股份有限公司 | 甲状旁腺激素类似物和甲状旁腺激素相关肽:合成和治疗骨质疏松症的用途 |
US6110892A (en) | 1994-06-20 | 2000-08-29 | National Research Council Of Canada | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
US5955425A (en) * | 1996-08-02 | 1999-09-21 | National Research Council Of Canada | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
US5955574A (en) * | 1995-07-13 | 1999-09-21 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A. | Analogs of parathyroid hormone |
US6544949B1 (en) * | 1995-07-13 | 2003-04-08 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S. | Analogs of parathyroid hormone |
US5969095A (en) * | 1995-07-13 | 1999-10-19 | Biomeasure, Inc. | Analogs of parathyroid hormone |
US7410948B2 (en) * | 1995-07-13 | 2008-08-12 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas | Analogs of parathyroid hormone |
US5723577A (en) * | 1995-07-13 | 1998-03-03 | Biomeasure Inc. | Analogs of parathyroid hormone |
DE69713485T2 (de) * | 1996-02-01 | 2003-01-30 | Chugai Seiyaku K.K., Tokio/Tokyo | Medikamente für die Behandlung oder Vorbeugung von Thrombocytopenie |
TW505654B (en) * | 1996-07-30 | 2002-10-11 | Hoffmann La Roche | Synthesis of analogs of PTH and PTHrP |
ES2248853T3 (es) * | 1996-07-31 | 2006-03-16 | The General Hospital Corporation | Nuevos analogos del peptido relacionado con la hormona paratiroidea. |
US6273634B1 (en) | 1996-11-22 | 2001-08-14 | Shell Oil Company | Connector for an expandable tubing string |
US6335195B1 (en) * | 1997-01-28 | 2002-01-01 | Maret Corporation | Method for promoting hematopoietic and mesenchymal cell proliferation and differentiation |
US20020168718A1 (en) * | 1997-04-03 | 2002-11-14 | California Institute Of Technology | Enzyme-mediated modification of fibrin for tissue engineering |
US6434542B1 (en) * | 1997-04-17 | 2002-08-13 | Smithkline Beecham Corporation | Statistical deconvoluting of mixtures |
EA002819B1 (ru) | 1997-05-14 | 2002-10-31 | Авентис Фармасьютикалз Продактс Инк. | Циклическое пептидное соединение и его применение, бициклопептидное соединение, пептидное соединение и его применение, фармацевтическая композиция |
WO1999012561A2 (en) * | 1997-09-09 | 1999-03-18 | F. Hoffman-La Roche Ag | FRACTURE HEALING USING PTHrP ANALOGS |
US6248587B1 (en) | 1997-11-26 | 2001-06-19 | University Of Southern Cailfornia | Method for promoting mesenchymal stem and lineage-specific cell proliferation |
EP1053004A2 (en) * | 1998-02-09 | 2000-11-22 | University Of Southern California | Use of angiotensin analogues for promoting erythropoiesis |
US7173011B2 (en) * | 2000-11-20 | 2007-02-06 | University Of Southern California | Radiation therapy methods |
US6455500B1 (en) | 1998-03-10 | 2002-09-24 | University Of Southern California | Radiation therapy methods |
WO1999046285A2 (en) | 1998-03-11 | 1999-09-16 | University Of Southern California | Method of promoting production of living tissue equivalents |
ATE392431T1 (de) | 1998-05-05 | 2008-05-15 | Sod Conseils Rech Applic | Pth2 rezeptor selektive verbindungen |
ATE292976T1 (de) | 1998-05-11 | 2005-04-15 | Univ Southern California | Verwendung von angiotensin analogen zur herstellung eines arzneimittels zur steigerung des ueberlebens der weissen blutzellen und mobilisierung von haematopoietischen stammzellen nach einer chemotherapeutischen behandlung |
US6762167B1 (en) | 1998-05-11 | 2004-07-13 | University Of Southern California | Methods for treating a patient undergoing chemotherapy |
US6916783B2 (en) | 1998-07-13 | 2005-07-12 | University Of Southern California | Methods for accelerating bone and cartilage growth and repair |
JP3686335B2 (ja) | 1998-07-13 | 2005-08-24 | ユニヴァースティ オブ サザーン カリフォルニア | 骨および軟骨成長と修復を促進する方法 |
EP1105149A1 (en) | 1998-08-13 | 2001-06-13 | University Of Southern California | Methods to increase blood flow to ischemic tissue |
US7241730B2 (en) | 1998-08-27 | 2007-07-10 | Universitat Zurich | Enzyme-mediated modification of fibrin for tissue engineering: fibrin formulations with peptides |
US7601685B2 (en) * | 1998-08-27 | 2009-10-13 | Eidgenossische Technische Hochschule Zurich | Growth factor modified protein matrices for tissue engineering |
US6894022B1 (en) | 1998-08-27 | 2005-05-17 | Eidgenossische Technische Hochschule Zurich | Growth factor modified protein matrices for tissue engineering |
EP1123401A1 (en) | 1998-10-22 | 2001-08-16 | The General Hospital Corporation | BIOACTIVE PEPTIDES AND PEPTIDE DERIVATIVES OF PARATHYROID HORMONE (PTH) AND PARATHYROID HORMONE-RELATED PEPTIDE (PTHrP) |
EP1175444B1 (en) * | 1998-11-25 | 2008-01-23 | The General Hospital Corporation | Amino-terminal modified parathyroid hormone (pth) analogs |
WO2000032771A1 (en) * | 1998-11-30 | 2000-06-08 | The General Hospital Corporation | Pth1r and pth3r receptors, methods and uses thereof |
US6689566B1 (en) | 1999-01-14 | 2004-02-10 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Methods, kits, and antibodies for detecting parathyroid hormone |
US7820393B2 (en) * | 1999-01-14 | 2010-10-26 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Methods, kits and antibodies for detecting parathyroid hormone |
US6730775B1 (en) | 1999-03-23 | 2004-05-04 | University Of Southern California | Methods for limiting scar and adhesion formation |
US7338938B2 (en) * | 1999-05-10 | 2008-03-04 | University Of Southern California | Methods for treating a patient undergoing chemotherapy |
US20080108086A1 (en) * | 1999-06-02 | 2008-05-08 | Cantor Thomas L | Parathyroid hormone antagonists and uses thereof |
US6923968B2 (en) * | 2000-08-10 | 2005-08-02 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Cyclase inhibiting parathyroid hormone antagonists or modulators and osteoporosis |
US7893021B2 (en) * | 1999-06-02 | 2011-02-22 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Parathyroid hormone antagonists and uses thereof |
US7022815B1 (en) | 1999-09-29 | 2006-04-04 | The General Hospital Corporation | Polypeptide derivatives of parathyroid hormone (PTH) |
ATE412670T1 (de) | 1999-09-29 | 2008-11-15 | Gen Hospital Corp | Parathyroid hormon (pth) polypeptidderivate |
AU7734800A (en) | 1999-09-29 | 2001-04-30 | General Hospital Corporation, The | Polypeptide derivatives of parathyroid hormone (pth) |
GB9924351D0 (en) | 1999-10-14 | 1999-12-15 | Brennan Frank | Immunomodulation methods and compositions |
AU2001262906A1 (en) * | 2000-02-11 | 2001-08-20 | Cellomics, Inc. | Peptide biosensors for anthrax protease |
US6756480B2 (en) * | 2000-04-27 | 2004-06-29 | Amgen Inc. | Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein |
US20050124537A1 (en) * | 2000-04-27 | 2005-06-09 | Amgen Inc. | Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein |
EP1339312B1 (en) * | 2000-10-10 | 2006-01-04 | Microchips, Inc. | Microchip reservoir devices using wireless transmission of power and data |
AU2002308522A1 (en) * | 2001-05-01 | 2002-11-11 | University Of Southern California | Methods for inhibiting tumor cell proliferation |
DE10123668A1 (de) * | 2001-05-16 | 2002-11-28 | Johein Harmeyer | Anwendung einer Hormonpräparation zur Induzierung und Stimulierung des intestinalen Calciumtransports |
US20030232324A1 (en) * | 2001-05-31 | 2003-12-18 | Chiron Corporation | Chimeric alphavirus replicon particles |
KR100491737B1 (ko) * | 2001-07-20 | 2005-05-27 | 주식회사 한국아이템개발 | 공기 정화 기능의 모기 퇴치기 |
CA2454275C (en) * | 2001-07-23 | 2012-10-23 | The General Hospital Corporation | Conformationally constrained parathyroid hormone (pth) analogs |
US20050032685A1 (en) * | 2001-09-17 | 2005-02-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Remedies for bone loss |
US7247609B2 (en) * | 2001-12-18 | 2007-07-24 | Universitat Zurich | Growth factor modified protein matrices for tissue engineering |
MXPA04006021A (es) * | 2001-12-18 | 2005-08-19 | Eth Zuerich | Matrices de proteina modificada con factor de crecimiento para ingenieria de tejidos. |
MXPA04006728A (es) * | 2002-01-10 | 2005-08-19 | Osteotrophin Llc | Tratamiento de desordenes oseos con medicamentos anabolicos esqueleticos. |
US20050148763A1 (en) * | 2002-02-01 | 2005-07-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Peg-binding pth or peg-binding pth derivative |
WO2003099849A2 (en) * | 2002-05-23 | 2003-12-04 | Michael Holick | Use of a parathyroid hormone peptide analogs for the treatment of vaginal atrophy |
WO2004022033A1 (en) * | 2002-09-04 | 2004-03-18 | Microchips, Inc. | Method and device for the controlled delivery of parathyroid hormone |
US20040067526A1 (en) * | 2002-10-03 | 2004-04-08 | Cantor Thomas L. | Methods for diagnosing and guiding treatment of bone turnover disease |
US8263666B2 (en) | 2002-10-29 | 2012-09-11 | L'oreal | Composition in the form of an oil-in-water emulsion and uses thereof |
AU2002359391A1 (en) * | 2002-11-01 | 2004-07-29 | Amgen, Inc. | Modulators of receptors for parathyrois hormone and parathyroid hormone-related protein |
US8088734B2 (en) * | 2003-01-21 | 2012-01-03 | Unigene Laboratories Inc. | Oral delivery of peptides |
WO2004093902A1 (en) * | 2003-03-19 | 2004-11-04 | The General Hospital Corporation | CONFORMATIONALLY CONSTRAINED PARATHYROID HORMONES WITH α-HELIX STABILIZERS |
KR100540659B1 (ko) * | 2003-07-02 | 2006-01-10 | 삼성전자주식회사 | 이미지 확대 인쇄 방법과 장치 및 컴퓨터 프로그램을저장하는 컴퓨터로 읽을 수 있는 기록 매체 |
EP1653985A4 (en) | 2003-07-17 | 2009-08-05 | Gen Hospital Corp | CONSTRAINTS CONTAINING CONTAINING HORMONE PARATHYROID (PTH) ANALOGUES |
US7044468B2 (en) * | 2003-10-15 | 2006-05-16 | Sklansky Games, Llc | System and method for playing community hand poker games utilizing dealer qualifying criteria |
US7562876B2 (en) * | 2003-10-15 | 2009-07-21 | Sklansky Games, Llc | System and method for playing community hand poker games utilizing mathematical dealer qualifying criteria |
WO2005046798A1 (en) * | 2003-11-12 | 2005-05-26 | Nps Allelix Corp. | Treatment of bone loss utilizing full length parathyroid hormone |
WO2005072277A2 (en) * | 2004-01-21 | 2005-08-11 | Unigene Laboratories Inc. | Amidated parathyroid hormone fragments and uses thereof |
US7541140B2 (en) * | 2004-06-03 | 2009-06-02 | Scantibodies Laboratory, Inc. | Assessing risk for kidney stones using parathyroid hormone agonist and antagonist |
US20080214440A1 (en) * | 2004-10-08 | 2008-09-04 | Forbes Medi-Tech (Research), Inc. | Vasoactive intestinal polypeptide compositions |
US7595294B2 (en) * | 2004-10-08 | 2009-09-29 | Transition Therapeutics, Inc. | Vasoactive intestinal polypeptide pharmaceuticals |
WO2006042152A2 (en) * | 2004-10-08 | 2006-04-20 | Forbes Medi-Tech (Research) Inc. | Vasoactive intestinal polypeptide pharmaceuticals |
US20090170775A1 (en) * | 2004-10-08 | 2009-07-02 | Transition Therapeutics, Inc. | Vasoactive intestinal polypeptide compositions |
US20070293429A1 (en) * | 2004-10-08 | 2007-12-20 | Therapei Pharmaceuticals, Inc. | Vasoactive Intestinal Polypeptide Compositions |
MX2007007732A (es) * | 2004-12-22 | 2007-10-08 | Kuros Biosurgery Ag | Hidrogeles peg con grupos funcionales para la reaccion de adicion tipo michael con biofactores incorporados con el factor xiiia. |
US8575101B2 (en) | 2005-01-06 | 2013-11-05 | Kuros Biosurgery Ag | Supplemented matrices for the repair of bone fractures |
WO2006073711A2 (en) * | 2005-01-06 | 2006-07-13 | Kuros Biosurgery Ag | Use of a matrix comprising a contrast agent in soft tissues |
BRPI0606409A2 (pt) * | 2005-01-06 | 2009-06-23 | Kuros Biosurgery Ag | matrizes suplementadas para o reparo de fraturas ósseas |
US7488316B2 (en) * | 2005-01-25 | 2009-02-10 | Microchips, Inc. | Control of drug release by transient modification of local microenvironments |
CA2628945A1 (en) * | 2005-11-10 | 2007-05-24 | Board Of Control Of Michigan Technological University | Black bear parathyroid hormone and methods of using black bear parathyroid hormone |
PE20070684A1 (es) | 2005-11-14 | 2007-08-06 | Amgen Inc | MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP |
DE102006014579A1 (de) * | 2006-03-29 | 2007-10-04 | Epcos Ag | Verfahren zur Reinigung einer Monomer-Lösung und Herstellungsverfahren für ein elektrisches Bauelement umfassend das Reinigungsverfahren |
WO2007133580A2 (en) * | 2006-05-09 | 2007-11-22 | Zelos Therapeutics, Inc. | Use of pth (1-31) and optionally g-csf for hematopoietic stimulation |
JP2009545320A (ja) * | 2006-08-04 | 2009-12-24 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | 副甲状腺ホルモン(pth)のポリペプチド誘導体 |
US8012694B2 (en) * | 2006-09-14 | 2011-09-06 | Immutopics, Inc. | Assay for the detection of phosphorylated PTH |
USRE49444E1 (en) | 2006-10-03 | 2023-03-07 | Radius Health, Inc. | Method of treating osteoporosis comprising administration of PTHrP analog |
KR20170067906A (ko) * | 2006-10-03 | 2017-06-16 | 라디우스 헬쓰, 인코포레이티드 | 골 아나볼릭 단백질을 위한 약물 전달 방법 |
US7803770B2 (en) | 2006-10-03 | 2010-09-28 | Radius Health, Inc. | Method of treating osteoporosis comprising administration of PTHrP analog |
DK2084183T3 (da) * | 2006-10-13 | 2010-08-16 | Lilly Co Eli | Pegyleret PTH som PTH-receptormodulatorer og anvendelser deraf |
DK2136850T3 (da) * | 2007-04-13 | 2012-04-10 | Kuros Biosurgery Ag | Polymervævforsegling |
KR101661730B1 (ko) | 2007-08-01 | 2016-10-04 | 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 | G―단백질 결합 수용체를 이용한 스크리닝 방법 및 관련 조성물 |
JP2012512812A (ja) * | 2007-12-28 | 2012-06-07 | クロス・バイオサージェリー・アクチェンゲゼルシャフト | フィブリンフォームに組込まれたpdgf融合タンパク質 |
US20090227507A1 (en) * | 2008-03-10 | 2009-09-10 | University Of Southern California | Angiotensin (1-7) Dosage Forms and Uses Thereof |
US8563513B2 (en) | 2009-03-27 | 2013-10-22 | Van Andel Research Institute | Parathyroid hormone peptides and parathyroid hormone-related protein peptides and methods of use |
JP2013512688A (ja) | 2009-12-07 | 2013-04-18 | ミシガン テクノロジカル ユニバーシティ | クロクマの副甲状腺ホルモン及びクロクマの副甲状腺ホルモンを使用する方法 |
EP2568806B1 (en) | 2010-05-12 | 2016-05-11 | Radius Health, Inc. | Therapeutic regimens |
WO2011143406A2 (en) | 2010-05-13 | 2011-11-17 | The General Hospital Corporation | Parathyroid hormone analogs and uses thereof |
AU2011312490B2 (en) | 2010-09-28 | 2015-06-25 | Radius Pharmaceuticals, Inc. | Selective androgen receptor modulators |
EP2686027B1 (en) | 2011-03-16 | 2021-05-05 | Kuros Biosurgery AG | Pharmaceutical formulation for use in spinal fusion |
EP3566711A1 (en) * | 2011-05-18 | 2019-11-13 | Eumederis Pharmaceuticals, Inc. | Improved peptide pharmaceuticals |
US20200354428A9 (en) | 2013-06-23 | 2020-11-12 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Analogues of parathyroid hormone (1-34) that function as agonists of the parathyroid hormone receptor-1 and display modified activity profiles |
IL255148B2 (en) | 2015-04-29 | 2023-04-01 | Radius Pharmaceuticals Inc | 1901 rad for use in a method to inhibit a cancerous growth or induce tumor regression in a patient who is resistant to the drug and/or has cancer positive for an estrogen receptor alpha mutation |
EP3998061A1 (en) | 2016-04-18 | 2022-05-18 | Radius Health, Inc. | Formulations of abaloparatide, transdermal patches thereof, and uses thereof |
EP3474841B1 (en) | 2016-06-22 | 2022-03-16 | Ellipses Pharma Ltd | Ar+ breast cancer treatment methods |
CN117417263A (zh) | 2017-01-05 | 2024-01-19 | 雷迪厄斯制药公司 | Rad1901-2hcl的多晶型形式 |
US10996208B2 (en) | 2017-04-28 | 2021-05-04 | Radius Health, Inc. | Abaloparatide formulations and methods of testing, storing, modifying, and using same |
JP7354123B2 (ja) | 2018-02-21 | 2023-10-02 | エイアイ・セラピューティクス・インコーポレーテッド | アピリモドとグルタミン酸作動薬を用いた併用療法 |
CN112423844A (zh) | 2018-07-04 | 2021-02-26 | 雷迪厄斯制药公司 | Rad1901-2hcl的多晶型形式 |
CN109734794A (zh) * | 2019-03-07 | 2019-05-10 | 苏州科技大学 | 一种阿巴帕肽的制备方法 |
CN114057863B (zh) * | 2020-08-06 | 2023-10-20 | 珠海联邦制药股份有限公司 | 一种甲状旁腺激素相关肽类似物及其应用 |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4086196A (en) * | 1975-03-28 | 1978-04-25 | Armour Pharmaceutical Company | Parathyroid hormone |
US4423037A (en) * | 1982-05-13 | 1983-12-27 | The General Hospital Corporation | Inhibitors of peptide hormone action |
US4643988A (en) * | 1984-05-15 | 1987-02-17 | Research Corporation | Amphipathic peptides |
US4738921A (en) * | 1984-09-27 | 1988-04-19 | Eli Lilly And Company | Derivative of the tryptophan operon for expression of fused gene products |
ES2000859A6 (es) * | 1985-08-12 | 1988-03-16 | Syntex Inc | Un metodo para producir un vector de expresion bacteriana para la expresion de proteinas de fusion |
WO1988000596A1 (en) * | 1986-07-18 | 1988-01-28 | The University Of Melbourne | A PROTEIN ACTIVE IN HUMORAL HYPERCALCEMIA OF MALIGNANCY-PTHrP |
ATE72582T1 (de) * | 1986-09-05 | 1992-02-15 | Cetus Corp | Oxidationsresistente muteine von beta-interferon, deren herstellung und diese muteine enthaltende praeparate. |
US5010010A (en) * | 1986-10-22 | 1991-04-23 | Selmer-Sande, A.S. | Production of human parathyroid hormone from microorganisms |
US4833125A (en) * | 1986-12-05 | 1989-05-23 | The General Hospital Corporation | Method of increasing bone mass |
US4835255A (en) * | 1987-03-26 | 1989-05-30 | Yale University | T-cell membrane protein |
US5001223A (en) * | 1987-05-26 | 1991-03-19 | Merck & Co., Inc. | Parathyroid hormone antagonists with enhanced metabolic properties |
EP0293158A3 (en) * | 1987-05-26 | 1990-05-09 | Merck & Co. Inc. | Parathyroid hormone antagonists |
US4771124A (en) * | 1987-05-26 | 1988-09-13 | Merck & Co., Inc. | Parathyroid hormone antagonists with simplified synthetic methodology |
EP0293160A3 (en) * | 1987-05-26 | 1990-05-09 | Merck & Co. Inc. | Parathyroid hormone antagonists with enhanced metabolic properties |
DE3725320A1 (de) * | 1987-07-30 | 1989-02-09 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Expressionsvektoren und verfahren unter deren verwendung zur gewinnung von cro/ss-galaktosidase/pth-fusionsproteinen und von pth |
DE3725319A1 (de) * | 1987-07-30 | 1989-02-09 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Pth-modifikationen und therapeutische zusammensetzungen, die sie enthalten und daraus bestehen |
US4861756A (en) * | 1988-03-08 | 1989-08-29 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Synthetic pulmonary surfactant |
EP0341963A3 (en) * | 1988-05-09 | 1991-07-24 | Merck & Co. Inc. | Parathyroid hormone antagonists |
US4968669A (en) * | 1988-05-09 | 1990-11-06 | Merck & Co., Inc. | Parathyroid hormone antagonists |
JPH03504201A (ja) * | 1989-02-23 | 1991-09-19 | ゲゼルシャフト・フュア・ビオテクノロギッシェ・フォルシュンク・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング (ゲー・ベー・エフ) | Pth変種をコードするdna配列、pth変種、発現ベクター、細菌宿主、利用と治療用組成物 |
CA2032527C (en) * | 1989-04-10 | 2002-07-02 | Jesse M. Jaynes | Lytic peptides: their use in the treatment of microbial infections, cancer and in the promotion of growth |
CA2040264A1 (en) * | 1990-04-12 | 1991-10-13 | Tatsuhiko Kanmera | Parathyroid hormone antagonists |
US5087562A (en) * | 1990-04-25 | 1992-02-11 | Merck & Co., Inc. | Humoral hypercalcemic factor antagonists with modification at position 13 . . . |
US5093233A (en) * | 1990-04-25 | 1992-03-03 | Merck & Co., Inc. | Antagonists with position 13 modification |
WO1992000753A1 (en) * | 1990-07-13 | 1992-01-23 | The Regents Of The University Of California | PARATHYROID HORMONE ANALOGUES MODIFIED AT POSITIONS 3, 6 or 9 |
US5149779A (en) * | 1990-07-26 | 1992-09-22 | Merck & Co., Inc. | Humoral hypercalcemic factor antagonists |
JPH0532696A (ja) * | 1990-09-28 | 1993-02-09 | Takeda Chem Ind Ltd | 副甲状腺ホルモン誘導体 |
AU9103791A (en) * | 1990-12-21 | 1992-07-22 | Allelix Biopharmaceuticals Inc. | Oxidation resistant variants of parathyroid hormone |
US5317010A (en) * | 1991-10-10 | 1994-05-31 | Peter K. T. Pang | Parathyroid hormone analogues substituted at AA 25, 26, 27, and use in osteoporosis treatment |
US5434246A (en) * | 1992-03-19 | 1995-07-18 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Parathyroid hormone derivatives |
US5382658A (en) * | 1992-04-03 | 1995-01-17 | Allelix Biopharmaceuticals Inc. | Stability-enhanced variants of parathyroid hormone |
US5589452A (en) * | 1992-07-14 | 1996-12-31 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis |
-
1992
- 1992-07-14 US US07/915,247 patent/US5589452A/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-07-13 KR KR10-2002-7001830A patent/KR100458350B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 KR KR1019950700136A patent/KR100461618B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 EP EP93917060A patent/EP0651765B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 AU AU46705/93A patent/AU671851B2/en not_active Expired
- 1993-07-13 KR KR10-2002-7001833A patent/KR100404008B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 ES ES93917060T patent/ES2159293T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 AT AT93917060T patent/ATE202115T1/de active
- 1993-07-13 HU HU9500110A patent/HU217843B/hu unknown
- 1993-07-13 EP EP00122853A patent/EP1094073A3/en not_active Withdrawn
- 1993-07-13 CA CA002140281A patent/CA2140281C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 DK DK93917060T patent/DK0651765T3/da active
- 1993-07-13 NZ NZ254554A patent/NZ254554A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 WO PCT/US1993/006465 patent/WO1994001460A1/en active Application Filing
- 1993-07-13 DE DE69330347T patent/DE69330347T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 PT PT93917060T patent/PT651765E/pt unknown
- 1993-07-13 MX MX9304226A patent/MX9304226A/es unknown
- 1993-07-13 JP JP50352794A patent/JP4106082B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-01-18 US US08/184,328 patent/US5874086A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-01-13 FI FI950169A patent/FI120586B/fi not_active IP Right Cessation
- 1995-05-23 US US08/443,863 patent/US5693616A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-23 US US08/447,856 patent/US6051686A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-23 US US08/448,070 patent/US5695955A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-24 US US08/449,447 patent/US5840837A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-24 US US08/449,500 patent/US5798225A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-24 US US08/449,317 patent/US5807823A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-20 HU HU95P/P00281P patent/HU211348A9/hu unknown
-
2001
- 2001-09-05 GR GR20010401381T patent/GR3036521T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI120586B (fi) | Menetelmä PTH:n ja PTHRP:n analogien valmistamiseksi, ja niiden käyttö osteoporoosin hoitoon | |
US5977070A (en) | Pharmaceutical compositions for the nasal delivery of compounds useful for the treatment of osteoporosis | |
US5821225A (en) | Method for the treatment of corticosteroid induced osteopenia comprising administration of modified PTH or PTHrp | |
WO1995002610A1 (en) | Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis | |
JPH06184198A (ja) | ペプチド類 | |
CA2206008C (en) | Method for the synthesis of analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide | |
EP1804820A2 (en) | Vasoactive intestinal polypeptide pharmaceuticals | |
JPH07507051A (ja) | 新規なパラトルモンフラグメント,その調製およびそれを含む医薬 | |
EP0832221A1 (en) | Bone stimulating factor | |
MXPA98001630A (en) | Pharmaceutical compositions of nasal administration of useful compounds for the treatment of osteoporo | |
NO319848B1 (no) | Syntetiske peptidanaloger til PTH og PTHrp, fremgangsmate for fastfasesyntese derav, farmasoytiske preparater som omfatter dem, og anvendelse derav til fremstilling av medikamenter til behandling av reduksjoner i benmasse. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Patent granted |
Ref document number: 120586 Country of ref document: FI |
|
MA | Patent expired |