HU217843B - Paratiroid hormon (PTH) rokon polipeptidek, eljárások ezek előállítására és az ezeket tartalmazó gyógyszerek osteoporosis kezelésére - Google Patents

Paratiroid hormon (PTH) rokon polipeptidek, eljárások ezek előállítására és az ezeket tartalmazó gyógyszerek osteoporosis kezelésére Download PDF

Info

Publication number
HU217843B
HU217843B HU9500110A HU9500110A HU217843B HU 217843 B HU217843 B HU 217843B HU 9500110 A HU9500110 A HU 9500110A HU 9500110 A HU9500110 A HU 9500110A HU 217843 B HU217843 B HU 217843B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
leu
xaa
glu
arg
ser
Prior art date
Application number
HU9500110A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT69628A (en
HU9500110D0 (en
Inventor
Chinh T. Bach
Teresa L. Ho
John L. Krstenansky
John J. Nestor
Brian H. Vickery
Original Assignee
Syntex (U.S.A.) Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Syntex (U.S.A.) Inc. filed Critical Syntex (U.S.A.) Inc.
Publication of HU9500110D0 publication Critical patent/HU9500110D0/hu
Publication of HUT69628A publication Critical patent/HUT69628A/hu
Publication of HU217843B publication Critical patent/HU217843B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Superconductors And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

A találmány a paratiroid hormonnal (PTH) rokon új polipeptidekre,továbbá gyógyszerészetileg megfelelő sóikra vonatkozik. A találmányfoglalkozik a nevezett polipeptideket tartalmazógyógyszerkészítményekkel, amelyek emlősökben hasznosak a csontritkulásmegelőzésére és kezelésére. A találmányban eljárásokat írnak le anevezett polipeptidek szilárd fázisú és rekombináns módszerekkeltörténő előállítására. ŕ

Description

A találmány paratiroid hormonnal (parathormon) rokon új polipeptidekre, ezek szilárd fázisú vagy rekombináns technikákkal történő szintézisére, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerekre és emlősök csonttömegének gyarapításában való alkalmazásra vonatkozik.
A csontritkulás (oszteoporózis) az anyagcsere-eredetű csontbetegségek legáltalánosabb formája, s a csontleépülés (oszteopenia) tüneti, töréses stádiumával jellemezhető. Bár a csontritkulás számos betegség következtében másodlagosan is előfordulhat, az esetek 90%-ában elsődleges. A klimax utáni életszakaszban lévő nők az elsődleges csontritkulást (posztklimakteriális vagy I. típusú csontritkulás) illetően különösen veszélyeztetettek. Az elsődleges csontritkulást illetően veszélyeztetett másik csoportot - nemtől függetlenül - az idősek képezik (öregkori vagy II. típusú csontritkulás). A csontritkulás kapcsolatban állhat a kortikoszteroidok alkalmazásával, mozgásképtelenséggel vagy hosszú ideig tartó ágyhoz kötöttséggel, alkoholizmussal, cukorbetegséggel, emelkedett prolaktinszinttel (hyperprolactinaemia), idegi eredetű étvágytalansággal, a menstruáció elsődleges vagy másodlagos elmaradásával (amenorrhoea) és a petefészek eltávolításával (oophorectomia).
A csontritkulás különböző formáiban a mechanikai gyengeséget eredményező csontleépülés miatt csonttörések gyakran előfordulnak. A posztklimakteriális csontritkulás a csukló és a gerinc töréseivel jellemezhető, míg az öregkori csontritkulás esetén a nyaktörés fordul elő leggyakrabban.
Úgy tartják, a csontritkulásban szenvedőkben a csontleépülés mechanizmusa a csontváz önmegújítási folyamatának egyensúlyzavarával áll kapcsolatban. Ezt a folyamatot csontátépítésnek nevezték el, amely több különálló, a működést hordozó üregben zajlik. Ezek az üregek a csont alapállományában egy adott felületen, a csontfelszívódás helyszíneként spontán jelennek meg. Az oszteoklasztok (csontfaló vagy csontfelszívó sejtek) felelősek az időátlagban állandó alakú csont egyes részeinek felszívódásáért. Ezt a felszívódási folyamatot az oszteoblasztok (csontképző sejtek) megjelenése követi, amelyek az oszteoklasztok által kialakított üregeket új csontszövettel töltik ki.
Egészséges felnőttben az oszteoklasztok és oszteoblasztok oly módon alakulnak ki, hogy a csontképződés és a csontfelszívódás egyensúlyban marad. A csontritkulásban szenvedőkben a csontátépítés folyamatának egyensúlya eltolódik, ami azt eredményezi, hogy a csont gyorsabban szívódik fel, mint ahogy felépül. Annak ellenére, hogy ez az egyensúlyzavar az életkor előrehaladtával bizonyos mértékben a legtöbb embernél előfordul, a posztklimakterikus csontritkulásban szenvedőknél ez fiatalabb életkorban és sokkal súlyosabb mértékben fordul elő.
A csontritkulás kezelésére számos kísérlet történt, amelyek egyrészt arra irányultak, hogy lassítsák a csont további leépülését, másrészt - ami sokkal kívánatosabb hPTH(l-34):
Ser Val Ser Glu I le Gin Leu 1 5
- hogy a csont tömegének tiszta gyarapodását érjék el. Bizonyos anyagokról, mint az ösztrogén és a bifoszfonátok, úgy tűnik, lassítják a csontritkulásban szenvedő betegek csontjának további leépülését. A csontleépülést lassító anyagok a csontfelszívódás és a csontképződés eltérő időtartama miatt növelhetik a csont tömegét (3-7%os nagyságrendben). Ez a látszólagos növekedés azonban időben korlátozott, nem előrehaladó, s az úgynevezett „csontátépítési tér” csökkenéséhez vezet. Ráadásul a felszívódás és a képződés közötti szoros kapcsoltság miatt a csontfelszívódást gátló kezelések végeredményben a csontképződést is gátolják.
Felvetették azt a lehetőséget, hogy a parathormonnal (PTH) végzett kezelés a csontátépülési ciklus serkentését és pozitív kalciumegyensúlyt eredményezne. Humán klinikai kísérletekkel azonban kimutatták, hogy a trabekuláris csont mindenféle növekedését a kortikális (corticalis) réteg csökkenése követi, s így a teljes csontot tekintve nincs nettó gyarapodás.
Hefti és munkatársai (Clinical Science, 62, 389-396, 1982) arról számoltak be, hogy akár a bPTH(l -84), akár a hPTH(l-34) naponkénti szubkután adagolása mind a normális, mind a csontritkulásban szenvedő nőstény patkányokban növelte az egyes csontok összes kalcium- és hamutömegét.
Liu és munkatársai (J. Boné Miner. Rés., 6:10, 1071-1080, 1991) leírták, hogy kifejlett nőstény patkányok petefészkének eltávolítása a tibia proximális metafízisében a trabekuláris csontszövet arányának 47%-os csökkenését eredményezte, amit az oszteoblasztok és trabekuláris oszteoklasztok számának jelentős gyarapodása követett. A hPTH(l-34) naponkénti szubkután injektálása a trabekuláris csont leépülését teljes mértékben megfordította, s olyan mértékű gyarapodást eredményezett, hogy a trabekuláris csont mennyisége meghaladta a látszatkezelt kontroliban tapasztalhatóét. Az oszteoblasztok száma nőtt, az oszteoklasztoké csökkent.
Hock és munkatársai (J. Boné Miner. Rés., 7:1, 65-71, 1992) leírták, hogy egészséges, kifejlett hím patkányokat 12 napig naponta hPTH(l-34) szubkután injektálással kezelve a trabekuláris és kortikális csont kalcium- és száraztömege nőtt. Növekedett a teljes csonttömeg, a trabekuláris csont térfogata, a gerendák (trabekulák) falvastagsága és száma, valamint az oszteoblasztos felületek nagysága.
Az emlősparathormonok, például a humán (hPTH), a szarvasmarha- (bPTH) és a sertés- (pPTH) parathormonok 84 aminosavból álló egyszálú polipeptidláncok, melyeknek molekulatömege hozzávetőleg 9500. A biológiai aktivitás az N-terminális résszel, az 1-34. aminosavakkal kapcsolatos, melyekről úgy tűnik, az aktivitáshoz minimálisan szükséges szakaszt képviselik.
A humán PTH N-terminális szegmense a szarvasmarha- és a sertéshormon N-terminális szegmensétől csak három, illetve két aminosavban különbözik:
His Asn Leu Gly Lys His Leu 10 15
HU 217 843 Β
As n Ser Me t Glu Arg Va 1 Glu Trp
20
Va 1 Hi s As n Phe (1. számú sz :ekvencia);
bPTH [(1-34 ):
Al a Va 1 Ser Glu I le GI n Phe Me t
1 5
Ser Ser Me t Glu Ar g Va 1 Glu Trp
20
Va 1 Hi s As n Phe (2. számú sz :ekvencia);
Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp
25 30
Hi s Asn 10 Leu Gly Ly s Hi s Leu 15
Leu Arg 25 Ly s Ly s Leu Gin As p 30
pPTH(l-34):
Ser Va 1 Ser Glu I le GI n Leu Me t
1 5
Ser Ser Leu Glu Ar g Va 1 Glu Trp
20
Va 1 Hi s As n Phe (3. számú sz ekvencia).
Hi s Asn 10 Leu Gly Ly s Hi s Le u 1 5
Leu Arg 25 Ly s Ly s Leu Gin As p 30
A PTH elsődleges funkciója azoknak az adaptív változásoknak a kiváltása, amelyek arra szolgálnak, hogy az extracelluláris folyadékban fenntartsák a Ca2+ állan- 20 dó koncentrációját. A PTH hat a vesére, növelve a Ca2+ vizeletből történő tubuláris reabszorpcióját, valamint serkentve a kalciferdiol kalcitriollá való átalakulását, amely a Ca2+ belekből történő abszorpciójáért felelős.
A PTH egyik kiemelkedő hatása a csontokból történő 25 Ca2+-mobilizáció. A PTH növeli a csont kalcium- és foszfátion-visszaszívásának arányát, továbbá serkenti az oszteoklasztok által megvalósuló csontfelszívódást arányát, növeli a mezenchimasejtek oszteoklasztokká differenciálódásának arányát, s meghosszabbítja ezen 30 utóbbi sejtek felezési idejét. A PTH tartós működésével nő a csontképző oszteoblasztok száma is, így fokozódik a csontátépülés körfolyamatának mértéke. A különálló oszteoblasztok azonban kevésbé mutatkoznak aktívnak, mint a normálisak.
Rosenblatt és munkatársai (4 423 037,4 968 669 és 5 001 223 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások) a PTH N-terminális (1-6) aminosavainak deléciójával és a Phe7, Met8>18 és Gly12 szelektív helyettesítésével előállított PTH-antagonistákat írtak le. A Tyr34-NH beépítése a leírás szerint növelte ezen vegyületek aktivitását és stabilitását.
Rokon, de eltérő szerkezetű paratiroid hormon antagonista hatású peptideket ír le az EP 451,867 számú szabadalom.
A parathormonnal rokon peptid (PTHrp) - egy 140+ aminosavas peptid -, valamint annak ffagmensei a PTH fő biológiai működéseit mutatják. A PTHrp-t számos humán és állati tumor- és egyéb szövet feldolgozza, s szerepet játszhat a rosszindulatú hiperkalcémia (emelkedett vérkalciumszint) kialakulásában. A hPTHrp(l-34) szekvenciája a következő:
Al a Var Ser Glu His Gin Leu Leu Hi s Asp Lys Gly Ly s Ser I 1 e
1 5 10 15
Gin As p Le u Arg Arg Arg Phe Phe Leu His Hi s Leu I le Al a GI u
20 25 30
I le Hi s Thr Alá (4. számú sz ekvencia).
A hPTH és a hPTHrp közötti szekvenciahomológia nagyrészt a 13 N-terminális aminosavra korlátozódik, melyek közül 8 azonos; a pPTH 25.-től 34. aminosavig 45 teijedő receptorkötő régiójában 10 aminosav közül csak egy konzerválódik a pPTHrp-ben. A konformációbeli hasonlóság szolgálhat a közös aktivitás alapjául. Cohen és munkatársai (J. Bioi. Chem., 266.3, 1997-2004, 1991) arra következtettek, hogy a PTH( 1 - 34) és PTHrp( 1-34) 50 szekvenciájának nagy része, különösen az 5-18. aminosavból, illetve a 21-34. aminosavból álló régiók alfahelikális konfigurációt vesznek fel. Megjegyezték, hogy vannak bizonyos problémák annak eldöntését illetően, hogy ez a konfiguráció fiziológiai körülmények között a 55 karboxi-terminális végre jellemző-e. Az ilyen másodlagos szerkezet fontos lehet a lipid- és receptor-kölcsönhatásokban és/vagy a szerkezet stabilizálásában.
PTH és PTHrp analógokat szintetizáltunk azzal a céllal, hogy tökéletesített gyógyszereket fejlesszünk ki 60 a csont tömegének fenntartására emlősökben, beleértve a csontritkulásban szenvedőket is.
A találmány a paratiroid hormon [parathormon (PTH)], parathormonnal rokon polipeptid (PTHrp), valamint a PTH és PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológjainak és analógjainak szintetikus polipeptidanalógjaira, valamint azok sóira vonatkozik, melyben a 22-31. aminosavgyökök amfipatikus alfa-hélixet képeznek, s az említett 22-31. aminosavak hidrofil aminosavak (Haa) és lipofil aminosavak (Laa) közül valók, melyek az alábbi sorrendben rendeződnek el:
Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa.
Pontosabban a találmány tárgya módosított paratiroid hormonnal rokon polipeptid (PTHrp), azzal jellemezve, hogy az alábbi képlettel bír:
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Leu His Xaa10
Xaa1 i Gly Xaa'3 Ser He Gin Xaa'7 Leu Xaa'9 Xaa29 Xaa21
HU 217 843 Β
Xaa22-3i Xaa32 Xaa33 Xaa34 Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 Term, ahol a képletben
Xaa1 nincs jelen, vagy jelentése Alá;
Xaa2 nincs jelen, vagy jelentése Val;
Xaa3 nincs jelen, vagy jelentése Ser;
Xaa4 nincs jelen, vagy jelentése Glu vagy Glu(OCH3); Xaa5 nincs jelen, vagy jelentése His vagy Alá;
Xaa6 nincs jelen, vagy jelentése Gin;
Xaa7 nincs jelen, vagy jelentése Leu;
Xaa10 és Xaa17 jelentése egymástól függetlenül Asp vagy Asp(OCH3);
Xaa11 jelentése Lys, Arg vagy Leu;
Xaa13 jelentése Lys, Arg, Tyr, Cys, Leu, Cys [CH2CONH(CH2)2NH-biotinil]-, Lys (7-dimetilamino-2-oxo-2H-l-benzopirán-4-acetil)- vagy Lys (dihidrocinnamoil)-csoport;
Xaa20 jelentése Arg vagy Leu;
Xaa19 és Xaa21 jelentése egymástól függetlenül Lys,
Alá vagy Arg;
Xaa22-31 jelentése az alábbiak valamelyike:
a) Xaa22 Xaa23 Leu Xaa25 Xaa26 Leu Xaa28 Xaa29
Xaa30 Xaa31 ahol a képletben
Xaa22 és Xaa25 jelentése egymástól függetlenül Glu, Glu(OCH3), His vagy Phe;
Xaa23 jelentése Leu vagy Phe;
Xaa26 jelentése Lys vagy His;
Xaa28 és Xaa31 jelentése egymástól függetlenül Leu vagy Ile;
Xaa29 jelentése Alá, Arg vagy Glu; és
Xaa30 jelentése Lys vagy Glu (85. számú szekvencia);
az a) előnyösen
Glu Leu Leu Gly Lys Leu Leu Xaa29 Lys Leu 1 5 10 ahol a képletben
Xaa29 jelentése Glu vagy Arg (26. számú szekvencia); vagy
b) Xaa22 Xaa23 Leu Xaa25 Arg Leu Leu Xaa29 Arg
Leu, ahol a képletben
Xaa22 és Xaa25 jelentése egymástól függetlenül Glu, G1u(OCH3), His vagy Phe;
Xaa23 jelentése Leu vagy Phe;
Xaa29 jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX), ahol a PEGX egy polietilénglikol-metil-étergyök 100 és 10 000 közti molekulatömeggel (86. számú szekvencia);
a b) előnyösen
Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa29 Arg Leu 1 5 10 ahol a képletben
Xaa29 jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX), ahol a PEGX egy polietilénglikol-metil-étergyök 100 és 10 000 közti molekulatömeggel (27. számú szekvencia); vagy
c) Alá Leu Alá Glu Alá Leu Alá Glu Alá Leu
5 10 (28. számú szekvencia); vagy
d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu
5 10 (29. számú szekvencia); vagy
e) Alá Phe Tyr Asp Lys Val Alá Glu Lys Leu
5 10 (30. számú szekvencia);
Xaa32 jelentése His, Pro vagy Lys;
Xaa33 nincs jelen, vagy jelentése Pro, Thr, Glu vagy Alá; Xaa34 nincs jelen, vagy jelentése Pro, Arg, Met, Alá, hSer, hSer lakton, Tyr, Leu vagy 1,4-diaminobutiril-laktám;
Xaa35 nincs jelen, vagy jelentése Pro, Glu, Ser, Alá vagy Gly;
Xaa36 nincs jelen, vagy jelentése Alá, Arg vagy Ile; Xaa37 nincs jelen, vagy jelentése Arg, Trp vagy 3-(2naftil)-L-alanin;
Xaa38 nincs jelen, vagy jelentése Alá vagy hSer, vagy
Xaa38*42 jelentése Thr Arg Ser Alá Trp; és Term jelentése OR vagy NR2, ahol az egyes R-ek jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy
1-4 szénatomos alkil- vagy fenil-(l-4 szénatomos alkilj-csoport;
valamint mindezek gyógyászatilag elfogadható sói, azzal a feltétellel, hogy az alábbi jelentések nem fordulhatnak elő egyidejűleg: Xaa22 jelentése Phe, Xaa23 jelentése Phe, Xaa25 jelentése His, Xaa26 jelentése Lys vagy His, Xaa28 jelentése Ile, Xaa29 jelentése Alá, Xaa30 jelentése Glu és Xaa31 jelentése Ile.
Ha e szekvencia specifikus, valóságos példáit inszertáljuk a PTH-ba, a PTHrp-be, valamint ezek fiziológiailag aktív, rövidített analógjaiba és homológjaiba, eredményül hatékony csontépítési szerként alkalmazható polipeptideket kapunk.
Ilyenformán egyik vonatkozásában a találmány tárgya a PTH és a PTHrp, valamint a PTH és a PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített analógjainak és homológjainak analógjai, melyekben a 22-31. aminosavak amfipatikus alfa-hélixet képeznek, s ezen aminosavak az alábbi szekvenciák szerint rendeződhetnek el:
a) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Xaa5 Leu Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10
5 10 ahol
Xaa1 és Xaa4 jelentése - egymástól függetlenül - Glu, G1u(OCH3), His vagy Phe;
Xaa2 jelentése Leu vagy Phe;
Xaa5 jelentése Lys vagy His;
Xaa7 és Xaa10 jelentése egymástól függetlenül Leu vagy Ile;
Xaa8 jelentése Alá, Arg vagy Glu; és
Xaa9 jelentése Lys vagy Glu (85. számú szekvencia); előnyösen:
Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu;
5 10 ahol
Xaa jelentése Glu vagy Arg (26. számú szekvencia);
b) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Arg Leu Leu Xaa8 Arg Leu,
5 10 ahol
Xaa1 és Xaa4 jelentése - egymástól függetlenül - Glu, Glu(OCH3), His vagy Phe;
HU 217 843 Β
Xaa2 jelentése Leu vagy Phe;
Xaa8 jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX) (PEGX=poli(etilénglikol-metil-éter)-gyök, melynek molekulatömege 100-10 000) (86. számú szekvencia); előnyösen:
Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu;
5 10 ahol
Xaa jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX) (PEGX=polietilénglikol-metil-éter-gyök, melynek molekulatömege 100-10 000) (27. számú szekvencia);
c) Alá Leu Alá Glu Alá Leu Alá Glu Alá Leu
5 10 (28. számú szekvencia);
d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu
5 10 (29. számú szekvencia);
e) Alá Phe Tyr Asp Lys Val Alá Glu Lys Leu
5 10 (30. számú szekvencia)
A találmány másik tárgya a PTH és PTHrp, valamint a PTH és PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológjainak és analógjainak analógjai, illetve azok sói, melyekben a 22-31. aminosavak amfipatikus alfahélixet képeznek, s ezen aminosavak szekvenciáit az alábbi szekvenciák közül választjuk ki:
a) Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu;
5 10 ahol
Xaa jelentése Glu vagy Arg (26. számú szekvencia);
b) Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu;
5 10 ahol
Xaa jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX) (PEGX=polietilénglikol-metil-éter-gyök, melynek molekulatömege 100-10 000) (27. számú szekvencia);
c) Alá Leu Alá Glu Alá Leu Alá Glu Alá Leu
5 10 (28. számú szekvencia);
d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu
5 10 (29. számú szekvencia);
e) Alá Phe Tyr Asp Lys Val Alá Glu Lys Leu
5 10 (30. számú szekvencia).
A találmány további tárgya gyógyszerkészítmények a csont tömegének csökkenésével jellemezhető betegségek megelőzésére vagy kezelésére, melyek gyógyszerészetileg megfelelő hordozóval együtt a csontok tömegének növeléséhez hatásos mennyiségben tartalmazzák a parathormon (PTH), a parathormonnal rokon polipeptid (PTHrp) és a PTH és a PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológjainak és analógjainak polipeptidanalógját, valamint annak sóit, melyben a 22-31. aminosavgyökök amfipatikus alfa-hélixet képeznek, s a hidrofil aminosavak (Haa) és lipofil aminosavak (Laa) közül kiválasztott 22-31. aminosavak, melyek az alábbi sorrendben rendeződnek el: Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa. A találmány további tárgya eljárások gyógyszerkészítmények előállítására, melyek során a fentebb leírt vegyületeket gyógyszerészetileg megfelelő hordozóval elegyítjük.
A szabadalmi leírás ismerteti a csont tömegének csökkenésével jellemezhető emlősbetegségek kezelését, melynek során a rászoruló emlősnek a csont tömegének növeléséhez hatásos mennyiségben a PTH, PTHrp vagy a PTH, illetve PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológjának vagy analógjának polipeptidanalógját vagy annak sóját adjuk, amelyben a 22-31. aminosavak amfipatikus alfa-hélixet képeznek, és ezek az aminosavak hidrofil aminosavak (Haa) és a lipofil aminosavak (Laa) közül valók, melyek az alábbi sorrendben rendeződnek el: Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa.
A szabadalmi leírás közelebbről eljárásokat ismertet a csont tömegének csökkenésével jellemezhető emlősbetegségek kezelésére, melyek során a rászoruló emlősnek a csont tömegének növeléséhez hatásos mennyiségben a PTH, PTHrp vagy a PTH, illetve PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológjának vagy analógjának polipeptidanalógját vagy annak sóját adjuk, amelyben a 22-31. aminosavak amfipatikus alfa-hélixet képeznek, és ezen aminosavaknak megfelelő szekvenciát a 26., 27., 28., 29. és 30. számú szekvencia közül választjuk ki.
A találmány további tárgya eljárások a PTH, PTHrp és a PTH, illetve PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológjai vagy analógjai polipeptidanalógjainak [melyekben a 22-31. aminosavak amfipatikus alfa-hélixet képeznek, és ezek az aminosavak hidrofil aminosavak (Haa) és lipofil aminosavak (Laa) közül valók, melyek a Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa sorrendben rendeződnek el], és azok sóinak szilárd fázisú szintézisére, melyek során a védett (védőcsoporttal ellátott) aminosavakat egymás után megfelelő gyantahordozóhoz kapcsoljuk, az oldallánc- és Na-védőcsoportokat eltávolítjuk, s a peptidet lehasítjuk a gyantáról.
A találmány további tárgya eljárások a PTH, PTHrp és a PTH, illetve PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológjai vagy analógjai polipeptidanalógjainak (amelyekben a 22-31. aminosavak amfipatikus alfahélixet képeznek, és ezen aminosavaknak megfelelő szekvenciát a 26., 27., 28., 29. és 30. számú szekvencia közül választjuk ki), és azok sóinak szilárd fázisú szintézisére, melyek során a védett aminosavakat egymás után megfelelő gyantahordozóhoz kapcsoljuk, az oldallánc- és Na-védőcsoportokat eltávolítjuk, s a peptidet lehasítjuk a gyantáról.
A találmány további tárgya eljárások a PTH, PTHrp vagy PTH, illetve PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológjai vagy analógjai polipeptid-analógjainak [melyekben a 22-31. aminosavak amfipatikus alfa-hélixet képeznek, és ezek az aminosavak hidrofil aminosavak (Haa) és lipofil aminosavak (Laa) közül valók, melyek a Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa sorrendben rendeződnek el], és azok sóinak rekombináns szintézisére.
A szabadalmi leírás ismerteti az említett polipeptidanalógok rekombináns szintéziséhez alkalmazható DNS-szekvenciákat, vektorokat és plazmidokat. Közelebbről a szabadalmi leírás e vonatkozásban ismerteti a PTH, PTHrp és a PTH, illetve PTHrp fiziológiailag ak5
HU 217 843 Β tív, rövidített homológjai vagy analógjai polipeptidanalógjainak (amelyekben a 22-31. aminosavak amfipatikus alfa-hélixet képeznek, és ezen aminosavaknak megfelelő szekvenciát a 26., 27., 28., 29. és 30. számú szekvencia közül választjuk ki), és azok sóinak rekombináns szintéziséhez alkalmazható DNS-szekvenciákat, vektorokat és plazmidokat.
Az ábrák rövid leírása
Az 1. ábrán a találmány szerinti PTHrp(l-34) analógot kódoló szintetikus gén nukleotidszekvenciáját és restrikciós enzimes hasítási helyeit mutatjuk be (hPTH PCR-amplifikáció).
A 2. ábrán vázlatosan mutatjuk be a PTHrp(l-34)analóg génjét magában foglaló plazmid [Trp LE 18 hPTHrp(l-34)l konstrukció] előállítását.
A 3. ábrán vázlatosan mutatjuk be a PTHrp(l-34)analóg génjének két példányát magában foglaló plazmid [Trp LE 18 hPTHrp(l-34)2 konstrukció] előállítását
A 4. ábrán vázlatosan mutatjuk be a PTHrp(l-34)analóg génjének négy példányát magában foglaló plazmid [Trp LE 18 hPTHrp(l-34)4 konstrukció] előállítását.
Találmányunk leírásában a különböző, általános nukleotidok és aminosavak egy- és hárombetűs rövidítéseit a Pure Appl. Chem., 31, 639-645 (1972) és 40, 2TJ-290 (1974) ajánlása szerint, valamint a 37 CFR 1.822 paragrafusnak (55 FR 18 245, 1990. 05. 01.) és a PCT-törvényeknek (WIPO Standard ST.23: Recommendation far the Presentation of Nucleotide and Amino Acid Sequences in Patent Applications and in Published Patent Documents) eleget téve használjuk. Az egy- és hárombetűs rövidítések a következők:
Aminosavrövidítések
Aminosav Hárombetűs Egybetűs
Alanin Ala A
Arginin Arg R
Aszparagin Asn N
Aszparaginsav Asp D
Asn+Asp Asx B
Cisztein Cys C
Glutamin Gin Q
Glutaminsav Glu E
Gin+Glu Glx z
Glicin Gly G
Hisztidin His H
Izoleucin Ile I
Leucin Leu L
Lizin Lys K
Metionin Met M
Fenilalanin Phe F
Prolin Pro P
Szerin Ser s
Treonin Thr T
Triptofán Trp w
Tirozin Tyr Y
Valin Val V
Egyéb aminosav Xaa X
A rövidítések, ha másképpen nem jelöljük (például D- vagy D,L-), L-aminosavakat jelölnek. Bizonyos természetes vagy nem természetes aminosavak akirálisak, mint például a glicin. Valamennyi peptid szekvenciáját úgy mutatjuk be, hogy az N-terminális aminosavak a bal oldalon, a C-terminális aminosavak a jobb oldalon helyezkednek el.
A találmányban használt egyéb aminosavak és vegyületek rövidítései a következők:
hSer homoszerin hSerlac homoszerin-lakton Nle norleucin
PEG2 dietilénglikol-metil-éter-gyök, metoxidi(etilén-oxi)-CH3O(CH2CH2O)2-, (M=119)
PEG5000 polietilénglikol-metil-éter-gyök, metoxipoli(etilén-oxi) - CH3O(CH2CH2O) 110(átlagos M=5000)
PEGX polietilénglikol-metil-éter-gyök,
CH3O(CH2CH2O)n-, n=2-225 (átlagos M= 100-10 000)
A „hidrofil aminosav (Haa)” kifejezés olyan aminosavra vonatkozik, amely a peptidkötés kialakításához szükséges csoportokon kívül legalább egy hidrofil funkciós csoporttal rendelkezik; ilyen az arginin, az aszparagin, az aszparaginsav, a glutaminsav, a glutamin, a hisztidin, a lizin, a szerin, a treonin és homológjaik.
A „lipofil aminosav (Laa)” kifejezés töltés nélküli, alifás vagy aromás aminosavra vonatkozik, mint amilyen az izoleucin, a leucin, a metionin, a fenilalanin, a triptofán, a tirozin, a valin és homológjaik.
A találmány céljait illetően az alanint „amfifil” aminosavként soroljuk be, azaz olyan aminosavként, amely hidrofil és lipofil módon is képes működni.
A „PTH vagy PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológja és analógja” kifejezés olyan polipeptidre vonatkozik, amely a PTH vagy PTHrp teljes szekvenciájában található aminosavak számánál kevesebb aminosavból álló szekvenciát tartalmaz, miközben hasonló fiziológiai reakciót mutat. A rövidített PTH-nak vagy PTHrp-nek nem szükséges a PTH-val vagy a PTHrpvel teljesen homológnak lenni ahhoz, hogy hasonló fiziológiai reakciót mutasson. E csoport előnyben részesített, de nem kizárólagos képviselője a PTH(l-34) és a PTHrp(l-34).
Az „amfipatikus alfa-hélix” kifejezés olyan, bizonyos polipeptidekre jellemző másodlagos szerkezetre vonatkozik, amelyben az aminosavak alfa-helikális konfigurációt vesznek fel, mely a hélix hosszanti tengelye mentén elhelyezkedő, egymással szemben álló poláris és apoláris oldalakkal rendelkezik. Egy adott polipeptidben az alfa-helikális szerkezet létezésének lehetősége bizonyos mértékig kimutatható a hélix megfelelő magasságában úgynevezett „Schiffer-Edmundson-kerék” kialakításával (M. Schiffer és A. B. Edmundson, Biophys. J., 7, 121, 1967), s a hélixet körülvevő henger szemközti oldalam a hidrofil és lipofil gyökök elkülönülésének megfigyelésével. Más módon, egy adott polipeptidben az alfa-helikális régió jelenlétére empirikus bizonyítékokat szerezhetünk, például cirkuláris dikroizmus vagy röntgensugárzásdiffrakció-adatok alapján. Az ideális alfa-hélix menetenként 3,6 aminosavból áll, s a szomszédos oldalláncok 100°-os körívenként különülnek el.
HU 217 843 Β
Eisenberg és munkatársai (Natúré, 299, 371-374, 1982; Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 81, 140-144, 1984) az amfipatikus hélixek kvantitatív jellemzéséhez a hidrofobitási skálát a helikális körrel kombinálták. Az átlagos hidrofobitási momentum (definíciója szerint): a hélixet felépítő aminosavak hidrofobitásának vektorösszege. A következőkben Eisenberg (1984) által leírt aminosav-hidrofobitási értékeket adunk meg (,,konszenzus”-skála).
Ile: 0,73; Phe: 0,61; Val: 0,54; Leu: 0,53; Trp: 0,37; Met: 0,26; Alá: 0,25; Gly: 0,16; Cys: 0,04; Tyr: 0,02; Pro: -0,07; Thr: -0,18; Ser: -0,26; His: -0,40; Glu: -0,62; Asn: -0,64; Gin: -0,69; Asp: -0,72; Lys: -1,10; Arg: -1,76.
A menetenként 3,6 gyököt [illetve az oldalláncok közötti 100°-os körívet (360°/3,6)] tartalmazó ideális alfa-hélix hidrofobitási momentuma (μΗ) a következő összefüggés szerint számítható:
μΗ=[(ZHNsinö(N -1 ))2+(XHNcosö(N-1 ))2]' /2 melyben HN az N-edik aminosav hidrofobitási értéke, az összegzések (Σ) pedig a hélix szekvenciájában az egymást 100°-onként (delta-szög) követő N számú aminosavakra vonatkoznak. A hidrofobitási momentum az aminosavgyökönkénti átlagos hidrofobitási momentumként (<μΗ>) is kifejezhető. Ebben az esetben <μΗ> = μΗ/Ν. 100°±20° delta-szögnél a 0,20 vagy annál nagyobb <μΗ> értékből amfipatikus hélix kialakulására következtethetünk. A hPTHrp(22-31) és hPTH(22-31) esetében 100° delta-szögnél a <μΗ> értéke 0,19, illetve 0,37.
Comett és munkatársai (J. Mól. Bioi., 195, 659-685, 1987) az „amfipatikus index” bevezetésével - melyből következtetni lehet az amfipatikus tulajdonságra - kiterjesztették az amfipatikus alfa-hélixek vizsgálatát. Megállapították, hogy az ismert alfa-hélixeknek hozzávetőleg a fele amfipatikus, és az aminosavak ismétlődése inkább 97,5 “-ónként, mint 100°-onként tapasztalható, miközben az aminosavgyökök menetenkénti száma közelebb van a 3,7-hez, mint a 3,6-hoz. Bár az ilyen pontosítások tudományosan érdekesek, Eisenberg és munkatársai alapul szolgáló megközelítése megfelelő egy adott szekvencia amfipatikus tulajdonságának eldöntéséhez, különösen, ha egy szekvenciából ab initio szándékozunk amfipatikus alfa-hélixet kialakítani.
Egy nem természetes, amfipatikus alfa-helikális aminosavszekvencia nem feltétlenül homológ a természetesen előforduló polipeptid megfelelő szakaszával, de fiziológiai környezetben hasonló másodlagos szerkezettel (például poláris és apoláris szemközti oldalakkal rendelkező amfipatikus alfa-hélix) rendelkezik. A természetesen előforduló aminosavszekvencia módosított szekvenciával történő helyettesítése előnyösen befolyásolhatja az eredeti polipeptid fiziológiai aktivitását, stabilitását vagy más tulajdonságát. Az ilyen szekvenciák tervezéséhez és kiválasztásához Krstenansky és munkatársai (FEBS Letters, 242:2, 409-413, 1989) és J. P. Segrest és munkatársai (Proteins: Structure, Function and Genetics, 8, 103, 117, 1990) írtak le útmutatást.
A találmány szerinti, tíz aminosavból álló amfipatikus alfa-hélix a következő képlettel írható le:
Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa, melyben a Haa aminosavak hidrofil aminosavak közül, az Laa aminosavak pedig lipofil aminosavak közül valók (amelyeket fentebb definiáltunk). Ideális alfa-hélixet feltételezve, az L, 4., 5., 8. és 9. gyök a hélix „A” oldalán, 140°-os körív mentén helyezkedik el, míg a 2., 3., 6., 7. és 10. gyökök a hélix szemközti „B” oldalának 140°-os körívét foglalják el. Az egyik oldalon elhelyezkedő gyökök előnyösen egymással azonos polaritással rendelkeznek, míg a szemközti oldal gyökei ellentétes polaritásúak; azaz, ha az A oldal teljesen hidrofil, a B oldal teljesen lipofil és fordítva. A szakemberek észre fogják venni, hogy a találmány szerinti hélixek leírására használt
Haa (Laa Laa Haa Haa)2 Laa szekvenciával ellenkező aminosav-sorrendű
Laa (Haa Haa Laa Laa)2 Haa szekvencia szintén megfelel a gyökmegoszlás kritériumainak, s egyenértékű leírását adja a találmány szerinti alfa-hélixeknek.
Az alanin egyaránt helyettesítheti a hidrofil vagy a lipofil aminosavakat, mivel az amfipatikus alfa-hélix bármelyik oldalán elhelyezkedhet, bár az Ala10 nem képez amfipatikus alfa-hélixet. A prolint, ciszteint és a tirozint általában nem alkalmazzuk; ezen aminosavak és más véletlenszerű hibák (például hidrofil gyök a lipofil oldalon) előfordulása azonban megengedhető mindaddig, míg a szegmensen belüli többi aminosav megfelelően alkalmazkodik a hidrofil oldal-lipofil oldal elrendeződéshez. A fentebb meghatározott hidrofobitási momentum kiszámításával könnyen meghatározhatjuk, hogy egy szekvencia megfelelő mértékben amfipatikus-e ahhoz, hogy a találmány szerinti szekvenciának minősíthessük. Ha az aminosavgyökönkénti maximális momentum 100° ±20° értéknél körülbelül 0,20 fölött van, úgy a szekvencia amfipatikus hélixet alakít ki, s megfelel a találmány céljainak.
Például a 26. számú szekvencia (Xaa=Glu) gyökönkénti átlagos hidrofobitási momentuma (100°-nál) a következők szerint számítható ki:
Aminosav E Hn -0,62 δ(Ν—1) Hsinö(N-l) HcosŐ(N-l)
0 0 -0,62
L 0,53 100 0,52 -0,17
L 0,53 200 -0,18 -0,50
E -0,62 300 0,34 -0,31
K -1,1 400 -0,70 -0,85
L 0,53 500 0,34 -0,41
L 0,53 600 -0,46 -0,27
E -0,62 700 0,21 -0,58
K -1,1 800 -1,08 -0,19
L 0,53 900 0 Σ=0,81 -0,53 Σ = -4,43
μΗ =[(0,81)2+(-4,43)2]>/2=4,50 <μΗ> =4,50/10=0,45
E szekvencia esetén a maximális átlagos hidrofobitási momentum 92°-nál tapasztalható, s értéke 0,48.
Ennek az elméletnek a parathormon és a parathormonnal rokon peptid esetében való alkalmazását illetően feltételeztük, hogy a (7 -16) és (22-31) régió valamelyike (vagy mindkettő) alfa-helikális másodlagos szerkezettel rendelkezik, s hasonló szerkezeti tulajdon7
HU 217 843 Β
Ságokkal rendelkező, nem homológ szekvenciával helyettesíthető anélkül, hogy a biológiai aktivitás, illetve immunreakciót indukáló képesség csökkenne.
A találmány egyik tárgya a PTH, PTHrp, valamint a PTH és PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített analógjainak és homológjainak (vagy ezek sóinak) analógjai, melyekben a 22-31. aminosavak amfipatikus alfa-hélixet képeznek, s ezen aminosavak (22-31.) szekvenciáját a következő szekvenciák közül választjuk ki:
a) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Xaa5 Leu Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10
5 10 ahol
Xaa1 és Xaa4 jelentése - egymástól függetlenül - Glu, Glu(OCH3), His vagy Phe;
Xaa2 jelentése Leu vagy Phe;
Xaa5 jelentése Lys vagy His;
Xaa7 és Xaa10 jelentése - egymástól függetlenül - Leu vagy IIe;
Xaa8 jelentése Alá, Arg vagy Glu, és
Xaa9 jelentése Lys vagy Glu (85. számú szekvencia); előnyösen:
Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu,
5 10 ahol
Xaa jelentése Glu vagy Arg (26. számú szekvencia);
b) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Arg Leu Leu Xaa8 Arg Leu,
5 10 ahol
Xaa1 és Xaa4 jelentése - egymástól függetlenül - Glu, G1u(OCH3), His vagy Phe;
Xaa2 jelentése Leu vagy Phe;
Xaa8 jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX) (PEGX=polietilénglikol-metil-éter-gyök, melynek molekulatömege 100-10 000) (86. számú szekvencia); előnyösen:
Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu,
5 10 ahol
Xaa jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX) (PEGX=polietilénglikol-metil-éter-gyök, melynek molekulatömege 100-10 000) (27. számú szekvencia);
c) Alá Leu Alá Glu Alá Leu Alá Glu Alá Leu
5 10 (28. számú szekvencia);
d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu
5 10 (29. számú szekvencia);
e) Alá Phe Tyr Asp Lys Val Alá Glu Lys Leu
5 10 (30. számú szekvencia).
Egy másik vonatkozásban a találmány tárgya a PTH, PTHrp, valamint a PTH és PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített analógjainak és homológjainak, illetve ezek sóinak analógjai, melyek a következő képlettel írhatók le:
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Leu His Xaa10 Xaa11 Gly Xaa13 Ser IIe Gin Xaa17 Leu Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22-31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 Term., melyben
Xaa1: hiányzik vagy Alá;
Xaa2: hiányzik vagy Val;
Xaa3: hiányzik vagy Ser;
Xaa4: hiányzik vagy Glu vagy Glu(OCH3);
Xaa5: hiányzik vagy His vagy Alá;
Xaa6: hiányzik vagy Gin;
Xaa7 hiányzik vagy Leu;
Xaa10 és Xaa17: (egymástól függetlenül) Asp vagy Asp(OCH3);
Xaa11: Lys, Arg vagy Leu;
Xaa13: Lys, Arg, Tyr, Cys, Leu, [CH2CONH(CH2)2NH-(biotinil)]-Cys, (7-dimetilamino-2-oxo-2H-1 -benzopirán-4-acetil) - Lys vagy (dihidrocinnamoil)-Lys;
Xaa20: Arg vagy Leu;
Xaa19 és Xaa21: (egymástól függetlenül) Lys, Alá vagy Arg';
Xaa22-31: a 26., 27., 28., 29. vagy 30. számú szekvencia valamelyike;
Xaa32: His, Pro vagy Lys;
Xaa33: hiányzik vagy Pro, Thr, Glu vagy Alá;
Xaa34: hiányzik vagy Pro, Arg, Met, Alá, hSer, hSerlakton, Tyr, Leu vagy 1,4-diamino-butiril-laktám;
Xaa35: hiányzik vagy Pro, Glu, Ser, Alá vagy Gly; Xaa36: hiányzik vagy Alá, Arg vagy IIe;
Xaa37: hiányzik vagy Arg, Trp vagy 3-(2-naftil)-Lalanin;
Xaa38: hiányzik vagy Alá vagy hSer; vagy
Xaa38-42: Thr Arg Ser Alá Trp; és
Term.: OR vagy NR2, melyekben R egymástól függetlenül lehet hidrogén, 1 -4 szénatomos alkil- vagy fenil(C,_4)-alkil-csoport; valamint ezek gyógyszerészetileg megfelelő sói.
A találmány egy további tárgya az alábbi I. képlet szerinti, fiziológiailag aktív, rövidített hPTHrp(l-34) homológ:
Alá Val Ser Glu Xaa5 Gin Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13 Ser IIe Gin Asp Leu Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22-31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Term., melyben
Xaa5 jelentése His vagy Alá;
Xaa11 és Xaa13: (egymástól függetlenül) Lys, Arg vagy Leu;
Xaa19 és Xaa21: (egymástól függetlenül) Alá vagy Arg; Xaa22-31 jelentése az alábbi szekvenciák valamelyike :
a) Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu,
5 10 ahol
Xaa jelentése Glu vagy Arg (26. számú szekvencia);
b) Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu,
5 10 ahol
Xaa jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX) (PEGX=polietilénglikol-metil-éter-gyök, melynek molekulatömege 100-10 000) (27. számú szekvencia);
c) Alá Leu Alá Glu Alá Leu Alá Glu Alá Leu
5 10 (28. számú szekvencia)
d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu
5 10 (29. számú szekvencia);
HU 217 843 Β
e) Alá Phe Tyr Asp Lys Val Alá Glu Lys Leu 1 5 10 (30. számú szekvencia); továbbá Xaa32: His vagy Lys;
Xaa33: Thr, Glu vagy Alá;
Xaa34: Alá, hSer, Tyr vagy Leu; és Term.: Gly Arg Arg, lakton, OH vagy NR2 (melyben mindkét R lehet H vagy 1 -4 szénatomos alkilcsoport), továbbá gyógyszerészetileg megfelelő sóik (I. képlet).
A találmány közelebbi tárgyát azok az I. képlet szerinti polipeptidek képezik, melyekben az Xaa22-31 szekvencia a 26. számú szekvencia, melynek átlagos hidrofobitási momentuma (<μΗ>) 100°-nál több, mint 0,45. A találmány még specifikusabb tárgyát azok az I. képlet szerinti polipeptidek képezik, melyekben az
Xaa22-31 szekvencia a 26. számú szekvencia, és melyekben Xaa11 és Xaa13 jelentése egyaránt Lys, továbbá Xaa19 és Xaa21 jelentése egyaránt Arg.
A jellemző polipeptidek közé tartoznak (nem kizárólagosan) az alábbi szekvenciák:
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 G1 n Leu Leu His Asp 10 Ly s Gly Ly s Ser I le 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Arg Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a OH | [5. számú szekvencia);
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser 11 e
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a OH I 6. számú szekvencia);
Alá Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu Hi s As p Ly s Gly Ly s Ser I le
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a nh2 (7. számú szekvencia);
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser I le
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Le u Hi s Thr hSe: r NH 2 (8. számú szekvencia);
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser I le
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu G1 u Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr hSe r-lakton (9. számú szekvencia);
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Lys Ser I 1 e
1 5 10 1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg G1 u Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a Gly Arg Arg OH (10. számú szekvencia); és
35
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser 11 e
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Ly s Glu Leu NH2 (11. számú szekvencia).
A találmány egy másik tárgyát azok az I. képlet szerinti polipeptidek képezik, melyekben az Xaa22 31 szekvencia a 26. számú szekvencia, és melyekben Xaa11 és Xaa13 jelentése egyaránt Lys, továbbá Xaa19 és Xaa21 egyikének jelentése Arg, míg a másiké Alá. Ezen alcsoportjellemző polipeptidjei közé tartoznak (nem kizárólagosan) az alábbi szekvenciák:
Al a Va 1 Ser G1 u Hi s
1 5
Gin As P Leu Al a Arg
20
Le u Hi s Thr Al a nh2
Gin Leu Leu Hi s As p 10
Arg Glu Leu Leu Glu 25
(12. számú szekvencia);
Ly s Gly Ly s Ser I le 1 5
Ly s Leu Leu Glu Ly s 30
HU 217 843 Β
Alá 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5
Gin Asp Leu Arg Arg 20
Leu Hi s Thr Al a nh2
(13. számú szekvencia).
G1 n Leu Leu Hi s As p 10
Al a Glu Le u Leu Glu 25
Lys Gly Lys Ser Ile 15
Lys Leu Leu Glu Lys 30
A találmány egy másik tárgyát azok az I. képlet szerinti polipeptidek képezik, melyekben az Xaa22 31 szekvencia a 26. számú szekvencia, és melyekben az Xaa11 és az Xaa13 egyikének j elentése Leu, míg a másik j elen- 10 tése Lys, továbbá Xaa19 és Xaa21 jelentése egyaránt Arg. Ezen alcsoport jellemző polipeptidjei közé tartozik (nem kizárólagosan) az alábbi szekvencia:
Al a 1 Va 1 Ser Glu Al a 5 Gin Leu Leu His Asp 10 Leu Gly Lys Ser Ile 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Le u Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Al a Leu OH (14. számú szekvencia).
A találmány egy további tárgyát azok az I. képlet szerinti polipeptidek képezik, melyekben az Xaa22-31 szekvencia a 27. számú szekvencia, melynek átlagos hidro- 20 fobitási momentuma (<μΗ>) 100°-nál több mint 0,50.
A találmány egy további tárgyát azok az I. képlet szerinti polipeptidek képezik, melyekben az Xaa22'31 szekvencia a 27. számú szekvencia, és melyekben Xaa11 és Xaa13 jelentése egyaránt Lys vagy egyaránt Arg, továbbá Xaa19 és Xaa21 jelentése egyaránt Arg. Ezen alcsoport jellemző polipeptidjei közé tartoznak (nem kizárólagosan) az alábbi szekvenciák:
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu Leu His As p 10 Ly s Gly Ly s Ser Ile 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg G1u Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a OH (15. számú szekvencia);
Al a Va 1 Ser G1 u Hi s Gin Leu Leu His As p Arg Gly Arg Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a OH ' (16. számú szekvencia);
AI a Va 1 Ser G1 u Hi s Gin Leu Leu His As p Arg Gly Arg Ser I 1 e
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Ly s Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a OH (17. számú szekvencia);
Al a Val Ser Glu Hi s Gin Leu Leu Hi s As p Arg Gly Arg Ser 11 e
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu G1 u Arg Leu Leu
25
Ly s (COCH2PEG2) Arg Leu His Thr Alá OH (18. számú szekvencia);
Al a Va 1 Ser 30 Glu His Gin Leu Leu Hi s As p Arg Gly Arg Ser Ile
1 Gin As p Leu 5 Arg Arg Arg Glu Leu Leu 10 Glu Arg Leu Leu 1 5
25
Ly s (COCH2PEG5000) Arg Leu His Thr Alá OH (19. számú szekvencia). 30
A találmány egy további tárgyát azok az I. képlet szerinti polipeptidek képezik, melyekben az Xaa22~31 szekvencia a 28. számú szekvencia, melynek átlagos hidrofobitási momentuma (<μΗ>) 100°-nál körülbelül 0,25. Ezen alcsoport jellemző polipeptidjei közé tartozik (nem kizárólagosan) az alábbi szekvencia:
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu Hi s As p Ly s Gly Arg Ser I 1 e
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Al a Leu Al a Glu Al a Leu Al a Glu Al a
20 25 30
Le u Hi s Thr Al a nh2 (20. számú s: zekven icia).
HU 217 843 Β
A találmány egy további tárgyát azok az I. képlet szerinti polipeptidek képezik, melyekben az Xaa22-31 szekvencia a 29. számú szekvencia, melynek átlagos hidrofobitási momentuma (<μΗ>) 100°-nál körülbelül 0,28. Ezen alcsoport jellemző polipeptidjei közé tartozik (nem kizárólagosan) az alábbi szekvencia:
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser I 1 e
1 5 10 1 5
G1 n As p Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Le u Hi s Thr Al a nh2 (21. számú szekvencia).
A találmány egy további tárgyát azok az I. képlet szerinti polipeptidek képezik, melyekben az Xaa22 31 szekvencia a 30. számú szekvencia, melynek átlagos hidrofobitási momentuma (<μΗ>) 100°-nál körülbelül 0,29. Ezen alcsoport jellemző polipeptidjei közé tartozik (nem kizárólagosan) az alábbi szekvencia:
Al a Va 1 Ser G1 u Hi s
1 5
G1 n As P Leu Ar g Arg
20
Le u Hi s Thr Al a nh2
Gin Leu Leu Hi s Asp 10
Arg Al a Phe Tyr As p 25
(22. számú szekvencia).
Ly s Gly Ly s Ser lle 15
Ly s Va 1 Al a Glu Ly s 30
A találmány további tárgyát képezik a fiziológiailag aktív, rövidített bPTH(l-34) homológ II. képlet szerinti polipeptidanalógjai:
Xaa1 Val Ser Glu lle Gin Xaa7 Xaa8 His Asn Leu Gly Lys His Leu Xaa16 Ser Xaa18 Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22-31 His Asn Xaa34 Term., melyben
Xaa1 jelentése Ser vagy Alá;
Xaa7 jelentése Leu vagy Phe;
Xaa8 jelentése Met vagy Nle;
Xaa16 jelentése Asn vagy Ser;
Xaa18 jelentése Leu, Met vagy Nle;
Xaa19 jelentése Glu vagy Arg;
Xaa21 jelentése Val vagy Arg;
Xaa22-31 jelentése a 26., 27., 28., 29. és 30. szekvenciák valamelyike;
Xaa34 jelentése Phe vagy Tyr;
Term. jelentése OH vagy NR2 (melyben R jelentése H vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport), továbbá ezek gyógyszerészetileg megfelelő sói (II. képlet).
A jellemző polipeptidek közé tartoznak (nem kizárólagosan) az alábbi szekvenciák:
Al a Va 1 Ser Glu lle Gin Phe Nle Hi s Asn Leu Gly Ly s Hi s Leu
1 5 10 15
Ser Ser NI e Glu Arg Val Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu H i s Asn Tyr nh2 (23. szekvencia); és
Al a Va 1 Ser Glu I 1 e Gin Phe Nle Hi s Asn Leu Gly Ly s Hi s Leu
1 5 10 15
Ser Ser NI e Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s As n Tyr nh2 (24. szekvencia).
A találmány egy további tárgyaként, meglepő módon, azt találtuk, hogy a PTH és PTHrp 34 aminosavnál kevesebb gyököt tartalmazó homológjai és analógjai szintén hatásos csontátépítési szerek. Ezek az alábbi általános képlettel írhatók le:
Alá Val Ser Glu Xaa5 Gin Leu Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13 Ser lle Gin Asp Leu Xaa19 Xaa21 Arg Xaa22-31 50 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Term.
A jellemző polipeptidek közé tartoznak (nem kizáró45 lagosan) az alábbi szekvenciák:
41. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHP-NH2 (55. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Le u Leu Hi s As p Ly s Gly Ly s Ser I 1 e
1 5 10 15
G1 n As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu H i s Pro nh2 (55. számú s; zekven cia).
HU 217 843 Β
Fizikai adatok:
Olvadáspont: 142,8-166,1 °C [a]2D5 =-53,80 (c=0,38, H2O)
FAB (C173H295N55O49): [M+H]+ =3929 AAA: Asx 2,0 (2) Glx 5,7 (6) Ser 1,8 (2)
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 GI n Leu
G1 n As p Leu Arg Arg 20 Arg Glu
Leu Pro nh2 (56. számú szekvencia).
Fizikai adatok:
Olvadáspont: 161,0-177,0 °C [a]2D5 = -61,97 (c=0,19, H2O)
FAB (C167H288N52O48): [M+H]+=3792,0
AAA: Asx 2,2 (2) Glx 5,9 (6) Ser 1,9 (2)
His 2,1 (2) Gly 1,1(1) Alá 1,0(1)
Arg 3,0 (3) Val 1,1 (1) Ile 1,0(1)
Leu 7,9 (8) Lys 4,3 (4) Pro 0,9(1)
A szakemberek számára nyilvánvaló lesz, hogy számos megváltoztatott aminosav-sorrendű polipeptid szintetizálható, amelyek a leírt, kívánt tulajdonságokkal rendelkeznek, azzal a kikötéssel, hogy a 22-31. aminosavaknak megfelelő helyen egy olyan aminosavszekvencia helyezkedik el, melynek aminosavgyökönkénti átlagos hidrofobitási momentuma 100°±20°-nál nagyobb, mint körülbelül 0,20.
A polipeptidek klasszikus szintézise
A találmányunk szerinti polipeptidek olyan eljárásokkal szintetizálhatok, mint amilyeneket (a szilárd fázisú szintézissel kapcsolatban) J. M. Stewart és J. D Young (Solid Phase Synthesis, 2. kiadás, Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois, 1984) és J. Meienhofer (Hormonal Proteins and Peptides, 2. kötet, Academic Press, New York, 1973), illetve - az oldatban végzett szintézissel kapcsolatban - E. Schroder és K. Lubke (The Peptides, 1. kötet, Academic Press, New York, 1965) írtak le.
Ezek az eljárások általában a védett aminosavak növekvő peptidlánchoz való egymás utáni hozzáadását foglalják magukban. Rendszerint az első aminosav amino- vagy karboxilcsoportja, illetve a reaktív oldallánccsoportok védettek. Ezt a védett aminosavat inért szilárd hordozóhoz kapcsolják, vagy oldatban alkalmazzák, s a szekvenciában következő, szintén megfelelően védett aminosavat az amidkötés kialakításához alkalmas körülmények között adják az előző aminosavhoz. Miután valamennyi kívánt aminosavat a helyes sorrendben összekapcsolták, a védőcsoportokat és a szilárd hordozót eltávolítják, miáltal a nyers polipeptidet kapják. A végtermék előállításához a polipeptidet sótalanítják és tisztítják - lehetőleg kromatográfiás úton.
A negyven aminosavnál kevesebbet tartalmazó, fiziológiailag aktív, rövidített polipeptidek analógjainak előnyben részesített előállítási módja a szilárd fázisú peptidszintézis. Ebben az eljárásban az alfa-amino (N“) funkciós csoportokat és valamennyi reaktív oldalláncot sav- vagy bázisérzékeny védőcsoporttal látjuk el. A védőcsoportoknak a peptidkötés kialakításának
His 3,0 (3) Gly 1,1(1) Alá 0,9(1) Arg 2,8 (3) Val 1,2(1) Ile 0,9(1)
Leu 7,4 (8) Lys 4,4 (4) Pro 0,9 (1)
42. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LP-NH2 (56. számú szekvencia)
His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 körülményei között stabilnak kell lenni, s a meglévő polipeptidlánc befolyásolása nélkül könnyen eltávolíthatónak is kell lenni. Az alkalmas alfa-amino védőcsoportok közé tartoznak (nem kizárólagosan) a í-butoxi-karbonil- (Boc), a benzil-oxi-karbonil- (Cbz), az o-klór-benzoil-oxi-karbonil-, a bifenil-izopropil-oxikarbonil-, a í-amil-oxi-karbonil- (Amoc), az izobomiloxi-karbonil-, az alfa,alfa-dimetil-3,5-(dimetoxi)-benzil-oxi-karbonil-, az ο-nitro-fenil-szulfenil-, a 2-cianoί-butoxi-karbonil-, a 9-fluorenil-metoxi-karbonil(Fmoc) és hasonló védőcsoportok, melyek közül a Z-butoxi-karbonil-csoport az előnyben részesített. Az alkalmas oldallánc védőcsoportok közé tartoznak (nem kizárólagosan) az acetil-, benzil- (Bzl), benzil-oximetil- (Bőm), o-bróm-benzil-oxi-karbonil-, í-butil-, f-butil-dimetil-szilil-, 2-klór-benzil- (Cl-z), 2,6-diklórbenzil-, ciklohexil-, ciklopentil-, izopropil-, pivalil-, tetrahidropirán-2-il-, tozil- (Tos), trimetil-szilil- és tritilcsoportok.
A szilárd fázisú szintézis során a C-terminális aminosavat először megfelelő gyantahordozóhoz kapcsoljuk. A megfelelő gyantahordozók olyan anyagok, amelyek a reagensekkel és a lépésenkénti kondenzációs és védőcsoport eltávolítási körülményekkel szemben mertek, és az alkalmazott oldószerben nem oldódnak. A kereskedelmileg beszerezhető gyanták közé tartoznak a reaktív csoporttal módosított sztirol/divinil-benzol kopolimer gyanták, például a klór-metilezett sztirol-divinilbenzol kopolimer, a hidroxi-metilezett sztirol-divinilbenzol kopolimer és hasonlók. A benzilezett, hidroximetilezett fenil-acetamido-metil (PAM)-gyanta az előnyben részesített. Ha a vegyület C-terminálisa egy amid, úgy az előnyben részesített gyanta a p-metil-benzhidril-amino-(sztirol - divinil-benzol) kopolimer.
Az aminosav PAM-gyantához való kapcsolását az N“-védett aminosav (lehetőleg Boc-aminosav) ammónium-, cézium-, trietil-ammónium-, 1,5-diaza-biciklo[5.4.0]undec-5-én-, tetrametil-ammónium- vagy hasonló sójának etanolban, acetonitrilben, N,N-dímetil-formamidban (DMF) és hasonlókban a gyantával végzett reakciójával valósítjuk meg. Előnyösen a céziumsót reagáltatjuk DMF-ben a gyantával, emelt hőmérsékleten, például 40-60 °C-on, lehetőleg 50 °C-on, körülbelül 12-72 órán keresztül, lehetőleg körülbelül 48 óráig.
Az N“-Boc-aminosav például N,N’-diizopropilkarbodiimid (DIC)/l-hidroxi-benzotriazol (HOBt) közvetett kapcsolással erősíthető a benzhidrilgyantához, mely reakciót körülbelül 2 órától körülbelül 24 óráig
HU 217 843 Β terjedő ideig, előnysöen körülbelül két órán keresztül körülbelül 10 °C-tól körülbelül 50 °C-ig terjedő hőmérsékleten, előnyösen 25 °C-on, diklór-metán vagy dimetil-formamid oldószerben (lehetőleg diklór-metánban) végezzük.
A védett aminosavak egymás utáni összekapcsolása a tudományban jól ismert eljárásokkal végezhető, jellemzően automatizált peptidszintetizátorban. Trietil-aminnal vagy más, hasonló bázissal végzett semlegesítés után a védett aminosavakat előnyösen körülbelül 1,5-2,5-szeres moláris feleslegben adjuk, s az összekapcsolt inért, nemvizes, poláris oldószerben, például diklór-metánban, DMF-ben vagy ezek elegyében, előnyösen diklór-metánban, környezeti hőmérsékleten végezzük. A jellemző összekapcsolási szerek az N,N’-diciklohexil-karbodiimid (DCC), az Ν,Ν’-diizopropil-karbodiimid (DIC) és más karbodiimidek, akár önmagukban, akár 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), O-acil-karbamidok, benzotriazoll-il-oxi-trisz(pirrolidino)-foszfónium-hexafluoro-foszfát (PyBop), N-hidroxi-szukcinimid, egyéb N-hidroxi-imidek vagy oximok jelenlétében. Más lehetőség szerint a védett aminosav aktív észterei (például p-nitro-fenil-, pentafluor-fenil-észterek és hasonlók) vagy szimmetrikus anhidridek is alkalmazhatók.
A szilárd fázisú szintézis végén a teljesen védett peptidet eltávolítjuk a gyantáról. Ha a szilárd gyantahordozóhoz való kötődés benzil-észter típusú, akkor az alkilamid C-terminálissal rendelkező peptidek esetén a lehasítást alkil-aminnal vagy fluor-alkil-aminnal végzett aminolízissel, szubsztituálatlan amid C-terminálissal rendelkező peptidek esetében pedig ammónia/metanol vagy ammónia/etanol eleggyel végzett aminolízissel, körülbelül -10 °C és 50 °C közötti hőmérsékleten (lehetőleg körülbelül 25 °C-on), körülbelül 12-24 (lehetőleg körülbelül 18) órán keresztül hajtjuk végre. A hidroxi C-terminálissal rendelkező peptidek HF-dal vagy más erősen savas védőcsoport-eltávolítóval vagy elszappanosítással hasíthatok le. Más módon, a peptidek például metanollal végzett transz-észteresítéssel, majd az azt követő aminolízissel vagy elszappanosítással is eltávolíthatók a gyantáról. A védett peptid szilikagéloszlop-kromatográfiával tisztítható.
A peptidről az oldallánc védőcsoportok az aminolízissel nyert termék, például anizol vagy egyéb karbóniumion-eltávolító anyag jelenlétében, vízmentes folyékony hidrogén-fluoriddal végzett kezelésével, hidrogénfluorid/piridin komplexszel, trisz(trifiuor-acetil)-boronnal és trifluor-ecetsavval végzett kezelésével vagy folyékony ammóniában nátriummal végzett redukciójával távolítható el; előnyösen folyékony hidrogén-fluoriddal és anizollal körülbelül -10 °C és +10 °C közötti (lehetőleg 0 °C) hőmérsékleten körülbelül 15 perc és 2 óra közötti (lehetőleg 1,5 óra) ideig végzett kezeléssel.
Benzhidril-amin-gyantán lévő peptidek esetében a gyantáról való lehasítás és a védőcsoportok eltávolításának lépései a fent leírt folyékony hidrogén-fluorid és anizol alkalmazásával egy lépésben végezhetők.
Az oldatot sótalaníthatjuk (például BioRad AG-3® anioncserélő gyantával), s a peptid kromatográfiás lépések sorozatával tisztítható, melynek során az alábbi módszerek bármelyikét (vagy mindet) alkalmazhatjuk: ioncsere gyengén bázisos gyantán, acetát alakban; hidrofób adszorpciós kromatográfia szubsztituálatlan sztirol-divinil-benzol kopolimeren, például Amberlite® XAD-n; szilikagél-adszorpciós kromatográfia; karboxi-metil-cellulózon végzett ioncserélő kromatográfia; megoszlásos kromatográfia, például Sephadex® G-25 oszlopon; ellenáramú megoszlásos kromatográfia, illetve nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC), különösen oktil- vagy oktadecil-szilil-szilikát (ODS) kötött fázisú oszlopon végzett reverz fázisú HPLC.
Fentieknek megfelelően a találmány egy további tárgya eljárások polipeptid és gyógyszerészetileg megfelelő sóik előállítására, melynek során a védett aminosavakat egymást követően alkalmas gyantahordozón kondenzáljuk, majd eltávolítjuk a védőcsoportokat és a gyantahordozót, s a terméket tisztítjuk, miáltal a PTH és PTHrp fiziológiailag aktív, rövidített homológjainak és analógjainak [előnyösen a PTH(l-34) és PTHrp(l-34)j analógjait állítjuk elő, melyekben a 22-31. helyen lévő aminosavak amfipatikus alfa-helikális peptidszekvenciát képeznek (amit fentebb leírtunk).
Polipeptidek rekombináns szintézise
A találmány szerinti polipeptidek előállításának másik módja a kívánt polipeptidet kódoló gén klónozása és expresszálása.
Ebben az eljárásban olyan plazmidot készítünk, amely a kívánt DNS-szekvenciát tartalmazza, és megfelelő mikroorganizmusgazdába, általában baktériumba, például E. coli-ba vagy élesztőkbe, például Saccharomyces cerevisiae-be inszertáljuk, miáltal a mikroorganizmust a plazmid - s ilyenformán a találmány szerinti polipeptidanalógokat kódoló cDNS másolatainak - termelésére indukáljuk.
Az eljárás során először - a későbbiek során végzett változtatások elősegítéséhez - restrikciós hasítási helyek alapján a kiválasztott PTH- vagy PTHrp-analógot kódoló szintetikus gént szerkesztünk. A szekvencia amplifikálásához polimeráz láncreakciót (PCR) alkalmazhatunk (lásd Mullis, 4 683 195 és 4 683 202 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás).
Az amplifikált szintetikus gént izoláljuk és alkalmas plazmidba ligáljuk, például Trp LE plazmidba, melybe egymás után a gén négy példánya inszertálható. A Trp LE plazmidokat a 4 738 921 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a 0 212 532 számú európai közrebocsátási iratban írták le. A Trp LE plazmidok általában 8-10-szer több proteint termelnek, mint a Trp E plazmidok. A többpéldányú gén megfelelő gazdában, például E. coli-ban vagy Saccharomyces cerevisiae-bert expresszálható.
Az alkalmazott expressziós vektor a Trp LE 18 Prot (Ile3, Pro5) volt, amely az ampicillinrezisztencia-gént és a plazmid replikációs kezdőpontját tartalmazó pBR322 fragmensből (EcoRI-BamHI), a trp promotert és a trpE gént tartalmazó EcoRl-SacII fragmensből, HIV-proteáz (Ile3, Pro5) génfragmensből (SacII-HindlII), bGRF génfragmensből (HindlII-BamHI) és az E. coli rpoc génjéből származó transzkripciós terminátorból áll. A HIV-proteáz és a
HU 217 843 Β bGRF génfragmensek nem feltétlenül szükségesek, s szükség szerint egyéb kódolószekvenciákkal helyettesíthetők.
Az expresszált multimer fúziós proteinek intracellulárisan stabil befogadótestekben gyűlnek össze, s centrifugálással elkülöníthetők a többi celluláris proteintől. Az izolált fúziós proteint monomer PTH- vagy PTHrp-analóggá alakítjuk és kationcserélő és/vagy reverz fázisú HPLC-vel tisztítjuk.
A klónozás, amplifikálás, expresszálás és tisztítás különböző módjai a szakemberek számára nyilvánvalóak. A jellemző eljárásokat Manietis és munkatársai írták le (Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2. kiadás, Cold Spring Harbor Laboratory, 1989).
Alkalmazhatóság és alkalmazás
A találmány szerinti polipeptidek a csont tömegének leépülésében megnyilvánuló számos emlősbetegség megelőzéséhez és kezeléséhez alkalmasak. A találmány szerinti vegyületek különösen az oszteoporózis és az oszteopenia megelőző (profilaktikus) és terápiás kezeléséhez alkalmasak.
A találmány szerinti polipeptideket vagy sóikat rendszerint naponta körülbelül 0,002-1 pg/testtömegkilogramm mennyiségben, lehetőleg naponta körülbelül 0,04 pg/testtömeg-kilogramm mennyiségben alkalmazzuk. 50 kg testtömegű nő esetében az aktív összetevő napi adagja körülbelül 0,1 pg-tól körülbelül 50 pg-ig, lehetőleg körülbelül 2,0 pg-tól körülbelül 10 pg-ig terjed. Más emlősök, például lovak, kutyák, szarvasmarhák esetében nagyobb dózisokra lehet szükség. Ezek a dózisok hagyományos gyógyszerkészítményekben egyszeri, többszöri beadással vagy kontrollált kibocsátással vihetők be, attól függően, hogy melyikkel érhető el a legjobb eredmény. Az előnyben részesített beadási mód a napi egyszeri vagy kétszeri injektálás.
A pontos adagolás, a készítmény és a legmegfelelőbb beviteli rendszer kiválasztását befolyásolhatják - többek között - a kiválasztott polipeptid gyógyszerészeti tulajdonságai, a kezelni kívánt betegség természete és súlyossága, valamint a kezelt páciens fizikai állapota és mentális fejlettsége.
A jellemző beadási rendszerek közé tartozik az orális, parenterális (beleértve a szubkután, intramuszkuláris és intravénás beadást), rektális, bukkális (beleértve a szublingvális beadást), pulmonáris, transzdermális és intranazális beadás.
A gyógyszerészetileg megfelelő sók toxikus mellékhatások nélkül megtartják az eredeti polipeptid biológiai aktivitását. Az ilyen sók példái
a) a szervetlen savakkal (például sósav, hidrogénbromid, kénsav, foszforsav, salétromsav és hasonlók), valamint a szerves savakkal (például ecetsav, oxálsav, borkősav, borostyánkősav, maleinsav, fumársav, glükonsav, citromsav, almasav, aszkorbinsav, benzoesav, csersav, palmoinsav, alginsav, poliglutaminsav, naffalinszulfonsavak, naftalindiszulfonsavak, poligalakturonsav és hasonlók) készített savaddíciós sók;
b) többértékű fémkationokkal (például cink-, kalcium-, bizmut-, bárium-, magnézium-, alumínium-, réz-, kobalt-, nikkel-, kadmiumionok és hasonlók) vagy N,N’dibenzil-etilén-diaminból vagy etilén-diaminból képezett szerves kationnal kialakított bázisaddíciós sók; és
c) az a) és b) pontban felsorolt sók kombinációi, mint például a cink-tannát-só és hasonlók.
A találmány további tárgya gyógyszerkészítményekre vonatkozik, amelyek aktív alkotórészként a találmány szerinti polipeptidek valamelyikét vagy gyógyszerészetileg megfelelő sóját gyógyszerészetileg megfelelő, nem toxikus hordozóval keverve tartalmazzák. Amint fentebb említettük, az ilyen készítmények parenterális (szubkután, intramuszkuláris, intravénás) alkalmazáshoz (folyékony oldatok vagy szuszpenziók formájában), orális vagy bukkális alkalmazáshoz (elsősorban tabletták és kapszulák formájában), pulmonáris vagy intranazális alkalmazáshoz (elsősorban porok, orrcseppek és aeroszolok formájában), valamint rektális és transzdermális alkalmazáshoz alakíthatók ki.
A készítmények alkalmas módon egységdózis formában alkalmazhatók, s a gyógyszerészettudományban jól ismert, például a Remington ’s Pharmaceutical Sciences-loen (Mack Publishing Company, Easton, PA,
17. kiadás, 1985) leírt eljárásokkal állíthatók elő. A parenterális alkalmazáshoz való készítmények kötőanyagként (excipiens) tartalmazhatnak steril vizet vagy sóoldatot, alkilénglikolokat (például propilénglikolt), polialkilénglikolokat (például polietilénglikolt), növényi eredetű olajokat, hidrogénezett naftalinokat és hasonlókat. Az orális alkalmazáshoz való készítmények epesavas sók vagy acil-kamitinek hozzáadásával egészíthetők ki. A nazális alkalmazáshoz való készítmények lehetnek szilárdak és tartalmazhatnak kötőanyagokat, például laktózt vagy dextránt, vagy orrcseppek, illetve pontos adagolású sprayk formájában való alkalmazáshoz lehetnek vizes vagy olajos oldatok. A bukkális alkalmazáshoz való jellemző kötőanyagok közé tartoznak a cukrok, a kalcium-sztearát, magnézium-sztearát, az előre zselatinezett keményítő és hasonlók.
Ha a készítményt nazális alkalmazáshoz alakítjuk ki, az ormyálkahártyán keresztül történő felszívódás felületaktív savakkal, mint például glikokólsavval, kólsawal, taurokólsawal, etokólsavval, dezoxikólsavval, kenodezoxikólsavval, dehidrokólsavval, gliko-dezoxikólsawal, ciklodextrinekkel és hasonlókkal fokozható, amelyeket körülbelül 0,2-15 m/m%, lehetőleg körülbelül 0,5 és 4 m/m%, leginkább 2 m/m% arányban alkalmazunk.
A kezelt beteg találmány szerinti vegyületekkel hosszú időn keresztül, például egy héttől egy évig terjedő ideig tartó ellátása kontrollált kibocsátású, a kívánt kibocsátási időtartam biztosításához megfelelő mennyiségű aktív anyagot tartalmazó rendszer egyszeri alkalmazásával valósítható meg. E célból különféle kontrollált kibocsátású rendszerek, mint például egy részből álló vagy rezervoár típusú mikrokapszulák, raktározóimplantátumok, ozmotikus pumpák, vezikulák, micellák, liposzómák, bőrtapaszok, iontoforetikus eszközök és más, injektálható dóziskészítmények alkalmazhatók. Néhány kontrollált gyógyszerkibocsátási eszköz az aktív összetevő megkívánt bejuttatási helyén való elhelyezkedéssel is jellemezhető, amely hasznos bizonyos betegségek kezelésében.
HU 217 843 Β
A kontrollált kibocsátási készítmények egyik típusa a polipeptidet vagy sóját lassan lebomló, nem toxikus, nem antigén hatású polimerben diszpergálva vagy ilyen polimerből készített kapszulában tartalmazza. Ilyen polimer például a tejsav/glikolsav kopolimer, amelyet úttö- 5 ró munkájukban Kent, Lewis, Sanders és Tice írtak le (4 675 189 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). A találmány szerinti vegyületek vagy még inkább viszonylag oldhatatlan sóik koleszterin vagy más lipid kötőanyagú pirulákká, illetve szilasztomer kötő- 10 anyagú implantátumokká alakíthatók. A szakemberek számára egyéb lassú kibocsátású raktározóimplantátumok vagy injektálható készítmények is ismertek (lásd például: Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, szerkesztő: J. R. Robinson, Marcel Dek- 15 kér, Inc., New York, 1978; és R. W. Baker, Controlled Release of Biologically Active Agents, John Wiley & Sons, New York, 1987).
A következőkben leírt példákat a találmány szerinti vegyületek szintézisének és tesztelésének jellemzésére 20 és semmiképpen nem az igénypontok körének korlátozására szánjuk. A példákban „op.” jelentése olvadáspont, ,,[a] jf ’ jelentése a feltüntetett oldószerben, adott koncentrációnál, 25 °C-on mért optikai aktivitás, „FAB” jelentése gyors elektronbombázásos tömegspektrometria, és 25 „AAA” jelentése aminosavanalízis (a mért értékek után zárójelben a várt értékek szerepelnek). Az aminosavanalízist a gyártó útmutatásai szerint Hewlett-Packard AminoQuant Analyzeren végeztük. A primer aminosavakat o-ftálaldehiddel, a szekunder aminosavakat Fmoc- 30 val származtattuk. A mennyiségi meghatározáshoz a leszármaztatott aminosavak fluoreszcenciás detektálását alkalmaztuk. A védett aminosavakat az Applied Biosystem Inc.-tól (Foster City, CA) szereztük be.
1. példa
Az 1. vegyületet (7. számú szekvencia) automatizált Applied Biosystems Model 430A peptidszintetizátor alkalmazásával, 4-metil-benzhidril-amin-gyantán, szilárd fázisú eljárással 0,5 mmol nagyságrendben állítottuk elő. Az alfa-aminocsoportokat í-butoxi-karbonil-csoporttal (Boc) védtük. Az oldalláncok védéséhez az Asp, Glu és Ser esetében benzilcsoportot (Bzl), az Arg esetében tozilcsoportot (Tos), a His esetében benzil-oxi-metil-csoportot (Bőm), a Lys esetében pedig 2klór-benzil-csoportot (Cl-z) alkalmaztunk. Az aminosavakat Stewart és Young (lásd fentebb) módszerével N,N-diciklohexil-karbodiimid/l-hidroxi-benzotriazol (DCC/HOBt) alkalmazásával egymás után kapcsoltuk össze. Miután valamennyi aminosavat összekapcsoltuk, a peptidet ecetsavanhidrid és diizopropil-etil-amin elegyével N-metil-pirrolidonban acetileztük. Az elkészült peptidet az oldalláncok védöcsoportjainak egyidejű eltávolításával anizol (2,5 ml) jelenlétében vízmentes hidrogén-fluoriddal (25 ml) -10 °C-on 30 percig és 0 °C-on 60 percig végzett kezeléssel hasítottuk le a gyantáról. A HF in vacuo elpárologtatása után a maradékot vízmentes éténél mostuk, és a nyerspeptidet 10%-os ecetsavval extraháltuk. A 10%-os ecetsavas extraktum liofilizálásával 900 mg nyersterméket kaptunk. A peptidet 0,1 %-os TFA-ban 22-45% CH3CN gradiens alkalmazásával közegnyomásos ODS reverz fázisú oszlopkromatográfiával tisztítottuk. A termék három frakcióban eluálódott, melyeket bekoncentráltunk és liofilizáltunk, miáltal 130 mg, 98%-osnál nagyobb tisztaságú fehér, szilárd anyagot kaptunk.
1. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRELLEKLLEKLHTA-NH2 (7. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser G1 u His Gin Leu Leu His Asp Ly s Gly Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu G1u Ly s Leu Leu Gly Lys
20 25 30
Leu H i s Thr Al a NH2 (7. számú szekvencia)
Fizikai adat ok: A 2., 5-1 8., 21. ., 24-27., 29-36., 38-48., 50-54.,
op.: 150-L 59°C[ α]ο = - -34,88 0 (c=0,16, H2O) 58-64. és 66 -70. v együleteket hasonlóan állítottuk elő
FAB (C|75H300N56O5|): [M+H]+=4005,5 45 és jellemeztük, s a hidroxi-terminális polipeptidek szinAAA: Asp, 1,9 (2); Glu, 5,6 (6); Ser, 1,6 (2); His téziséhez PAM-gyantát alkalmaztunk.
2.7 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 0,9 (1); Alá, 1,9 (2); Arg,
2.8 (3); Val, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,3 (8); Lys, 4,0 (4).
16. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRAELLEKLLEKLHTA-NH2 (13. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Alá Arg Alá Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Alá NH2 (13. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 190-195 °C [a]2D5 =-50,50° (c=0,4, H2O) FAB (C|72H293N53O5I): [M + H] +=3919,0
AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,0 (6); Ser, 1,8 (2); His
3.1 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 3,0 (3); Arg,
2.1 (2); Val, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 60 4,2(4).
HU 217 843 Β
77. vegyület: AVSEHQLLHDKGK.SIQDLRRRSLLSSLLSSLHTA—NH2 (21. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
10 15
Gin Asp Leu Alá Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser
25 30
Leu Hi s Thr Alá NH2 (21. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 2,9 (3); Ser, 6,8 (7); His op.: 195-204°C [a]i’=-67,l 1° (c=0,3, H2O) 3,1 (3); Gly, 1,2 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg,
FAB (Cl63H280N54O50): [M+H]+=3796,0 10 3,0 (3); Val, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,2 (8); Lys,
2,0 (2).
18. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRAFYDKVAEKLHTA-NH2 (22. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Alá Phe Tyr Asp Lys Val Alá Glu Lys
25 30
Leu His Thr Alá NH2 (22. számú szekvencia)
Fizikai adatok: 20 AAA: Asp, 2,9 (3); Glu, 3,5 (4); Ser, 1,4 (2); His, op.: 200-207 °C [«$=-60,26° (c=0,6, H2O) 2,6 (3); Gly, 0,9 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 4,0 (4); Arg,
FAB (CI74H284N56O50): [M+H? =3960,0 3,0 (3); Tyr, 0,9 (1); Val, 1,9 (2); Phe, 1,1 (1); Ile,
0,9(1); Leu, 3,6 (4); Lys, 4,1(4).
27. vegyület: AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNY-NH2 (35. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His Leu
10 15
Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Asn Tyr NH2 (35. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 5,0 (5); Ser, 2,7 (3); His, op.: 148-155 °C [a]2D5=-45,97° (c=0,26, H2O) 3,0 (3); Gly, 1,0 (1); Alá, 0,9 (1); Arg, 3,1 (3); Tyr,
FAB (C184H304N56O49): [M+H]+=4084 0,9 (1); Val, 1,0 (1); Phe, 0,9 (1); Ile, 0,9 (1); Leu
9,3 (9); Lys, 3,2 (3).
24. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLKL KELLEKLLEK LHTA-NH2 (38. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
10 15
Gin Asp Leu Lys Leu Lys Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Alá NH2 (38. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 6,5 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: 175-182 °C [«$=-49,99° (c=0,47, H2O) 45 3,1 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,1 (2); Val, FAB (Cl75H299N49Osl):[M+H]+=3906,5 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 9,1 (9); Lys, 6,5 (6).
25. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTA-NH2 (39. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu H i s Thr Al a nh2 (39. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 136,5-153,5 °C [«$ = -32,57° (c = 0,13, H,O)
FAB (C175H300N60O51): [M+H]+=4060,8
AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 6,2 (6); Ser, 1,8 (2); His,
3.2 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,1 (2); Arg,
5.2 (5); Val, 1,1 (1); Ile, 1,1 (1); Leu, 8,4 (8); Lys, 60 2,2(2).
HU 217 843 Β
26. vegyület. AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAP-NH2 (40. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Ly s Gly Ly s Ser I le
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a Pro 35 nh2 (40. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 6,2 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: 125,8-127,2 °C [a]V=-54,62° (c=0,23, 10 2,9 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 8,0 (8); Alá, 2,0 (2); Arg,
H2O) 5,1 (5); Val, 1,0 (1); IIe, 1,0 (1); Leu, 8,0 (8); Lys,
FAB (C180H306N60O53): [M+H]+=4158,0 2,1 (2); Pro, 1,1 (1).
27. vegyület. • AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRR-OH (41 . számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser I 1e
1 5 10 15
G1 n As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a Gly 35 Arg Arg OH (41. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,6 (2); His, op.: 106-137,3° [a]2D5=-39,55° (c=0,67, H2O) 2,7 (3); Gly, 2,2 (2); Thr, 1,0 (1); Alá, 1,8 (2); Arg,
FAB (C189H326N68O55): [M+H]+=4430,5 7,3 (7); Val, 0,8 (1); IIe, 1,0 (1); Leu, 8,1 (8); Lys,
2,1 (2).
29. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTY-NH2 (43. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser I1e
10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Tyr NH2 (43. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 1,7 (2); His, op.: 160-172 °C[a]2D5=-49,85° (c=0,34, H2O) 3,1 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Alá, 0,9 (1); Arg,
FAB (C181H304N56O52): [M+H]+=4096,9 35 3,0 (3); Tyr, 0,9 (1); Val, 1,0 (1); He, 1,0 (1); Leu,
7,7 (8); Lys, 4,4 (4).
30. vegyület: AVSEHQLLHD KGYSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (44. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Aps Lys Gly Tyr Ser I1e
10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Alá NH2 (44. számú szekvencia)
Fizikai adatok: 45 AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,5 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: 130-171 °C [a]2D5=-40,65° (c=0,34, H2O) 3,4 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg,
FAB (C178H?97N55O52): [M+H]+=4039,4 2,9 (3); Tyr, 0,8 (1); Val, 1,0 (1); IIe, 0,9 (1); Leu,
7,9 (8); Lys, 3,4 (3).
31. vegyület: AVSEHQLLHD KGCSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (45. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Lys Gly Cys Ser 1 le
1 5 10 15
G1 n As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a NH2 (45. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx+Cys, 3,0 (2+1); Glx, 5,6 (6); Ser, op.: 140-160 °C [a]2D5 = -44,48° (c=0,25, H2O) 1,7 (2); His, 3,0 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 0,9 (1); Alá,
FAB(C177H293N55O5IS,): [M+H]+=3979 1,9 (2); Arg, 2,5 (3); Val, 1,0 (1); IIe, 0,9 (1); Leu,
7,5 (8); Lys, 3,3 (3):
HU 217 843 Β
32. vegyület: AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (46. számú szekvencia), X=Cys[CH2CONH(CH2)2NH(biotinil)]
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Xaa Ser Ile
1 5 10 1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a nh2 (46. számú szekvencia) (Xaa=[CH2CONH(CH2)2NH(biotinil)]Cys)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 6,1 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: (nem meghatározott) [a]2D5=(nem meghatáro- 10 3,8 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg, zott) 3,1 (3); Val, 1,1 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,3 (8); Lys,
FAB (C186H3I6N59O54S2): [M+H? =4306,6 3,3 (3).
33. vegyület: AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (47. számú szekvencia), X=[7-(dimetil-amino)-2-oxo-2H-l -benzopirán-4-acetil]-Lys
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu Leu H i s Asp Lys 10 Gly Xaa Ser Ile 15
Gin As p Leu Arg Arg 20 Arg Glu Leu Leu Glu Lys 25 Leu Leu Glu Lys 30
Leu Hi s Thr Al a nh2 (47. számú szekvencia) (Xaa=[7-(dimetil-amino)-2-oxo-2H-l-benzopirán-
4-acetil]-Lys)
Fizikai adatok: AAA: 1,9 (2); Glx, 6,3 (6); Ser, 1,7 (2); His, op.: 135-205 °C [a]2D5=-26,92° (c=0,104, 50% 3,2 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,1 (1); Alá, 2,0 (2); Arg, aq. HOAc) 25 3,2 (3); Val, 1,1 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,2 (8); Lys,
FAB (Clg8H311N57O54): [M+H]+=4233 4,5 (4).
34. vegyület. • AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAG-OH (48. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a Gly 35 (48. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,7 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: 92,1-146,6 °C [a]» = -40,76° (c=0,34, H,O) 3,0 (3); Gly, 2,2 (2); Thr, 0,9 (1); Alá, 1,9 (2); Arg,
FAB (C177H302N56O53): [M+H]+=4062,0 2,8 (3); Val, 1,2 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys,
4,2 (4).
35. vegyület: AVSX,HQLLHX2 KGKSIQX2LLR RX,LLX,KLLX,-K LHA-OH (49. számú szekvencia); X,=Glu(OCH3); X2=Asp(OCH3)
Alá Val Ser Xaa! His Gin Leu Leu His Xaa2 Lys Gly Lys Ser Ile 1 5 10 15
Gin Xaa2 Leu Arg Arg Arg Xaaj Leu Leu Xaat Lys Leu Leu Xaa!
25
Lys Leu His Alá OH (49. számú szekvencia), Xaa, =Glu(OCH3); Xaa2=Asp(OCH3)
Fizikai adatok: 50 AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 6,3 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: (nem meghatározott) [a]2D5 = -21,96° 3,3 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg, (c=0,132, HjO) 3,1 (3); Val, 1,1 (1), Ile, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys,
FAB (C188H3„N55O52): [M+H] + =4089,0 4,2 (4).
36. vegyület: AVSX,HQLLHX2 KGKSIQX2LRR RX,LLX,KLLX1K LHA-OCH3 (50. számú szekvencia); X,=Glu(OCH3); X2=Asp(OCH3)
Alá Val Ser Xaa! His Gin Leu Leu His Xaa2 Lys Gly Lys Ser Ile
5 10 15
HU 217 843 Β
Gin Xaa2 Leu Arg Arg Arg Xaa] Leu Leu Xaa] Lys Leu Leu Xaa]
25
Lys Leu His Alá OCH3 (50. számú szekvencia); Xaa[=Glu(OCH3); Xaa2=Asp(OCH3)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 6,2 (6); Ser, 1,4 (2); His, op.: (nem meghatározott) [a]2J=-46,80° (c=0,07, 3,0 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,1 (1); Alá, 1,7 (2); Arg,
H2O) 3,2 (3); Val, 0,6 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys,
FAB (C,82H3I3N55O52): [M+H]+=4103 4,1 (4).
38. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAP—OH (52. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Alá Pro OH (52. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 1,7 (2); His, op.: 152,1-186,5 °C [a]2D5 = -55,91° (c=0,33, 20 2,9 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Alá, 1,9 (2); Arg,
H2O) 2,9 (3); Val, 1,2 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,7 (8); Lys,
FAB (C,80H306N56O53): [M+H]+=4102,6 4,3 (4).
39. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTP-OH (53. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu His Gin Leu Leu His As p Lys Gly Ly s Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Pro OH (53. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: 120-148,2 °C [a]2D5=-52,78° (c=0,47, H2O) 2,9 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 7,5 (8); Alá, 0,9 (1); Arg,
FAB (C]77H30,N55O52): [M+H]+=4031,0 2,9 (3); Val, 1,2 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys,
3,6 (4); Pro, 0,9 (1).
40. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTP-NH2 (54. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Pro NH2 (54. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 1,9 (2); His, op.: 133,9-155,1 °C [a]2D5 =-54,22° (c=0,37, 2,9 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Alá, 0,9 (1); Arg,
H2O) 45 2,8 (3); Val, 1,2 (1); Ile, 1,1 (1); Leu, 7,8 (8); Lys,
FAB (C,77H302N56O51): [M + H] + =4030,7 4,2 (4); Pro, 0,9 (1).
41. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHP-NH, (55. számú szekvencia) Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Pro NH2 (55. számú szekvencia)
AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,7 (6); Ser, 1,8 (2); His, 3,0 (3); Gly, 1,1 (1); Alá, 0,9 (1); Arg, 2,8 (3); Val,
1,2 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,4 (8); Lys, 4,4 (4); Pro,
0,9(1).
Fizikai adatok:
op.: 142,8-166,1 °C [a]2D5 = -53,80° (c=0,38,
H2O)
FAB (C]73H295N55O49): [M+H]+=3929
HU 217 843 Β
42. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LP-NH2 (56. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser I le 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu Pro NH2 (56. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,9 (2); His, op.: 161,0-177,0 °C [a]2D5 = -61,97° (c=0,19, 2,1 (2); Gly, 1,1 (1); Alá, 1,0 (1); Arg, 3,0 (3); Val,
H2O) 10 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,9 (8); Lys, 4,3 (4); Pro,
FAB (C167H288N52O48): [M + H]+=3792,0 0,9(1).
43. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-OH (57. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 20 25 30
Leu His Thr Arg Ser Alá Trp OH (57. számú szekvencia)
Fizikai adatok: 20 AAA : Asx, 2,0 (2); Glx, 5,8 (6); Ser, 2,8 (3); His, op.: 181-202 °C [a]2J=-45,14° (c=0,19,H2O) 2,8 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Alá, 1,9 (2); Arg,
FAB (C195H326N62O56): [M+H]+=4435,2 3,7 (4); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 4,3 (4); Trp,
0,9(1).
44. vegyület: AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH (58. számú szekvencia)
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu Leu Hi s As p 10 Arg Gly Arg Ser I 1 e 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu H i s Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Al a Trp OH
(58. számú szekvencia)
40
Fizikai adatok: 35 AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 6,0 (6); Ser, 2,7 (3); His, op.: 130-132,2 °C [a]2D5=-46,66° (c=0,195, H2O) 3,0 (3); Gly, 2,2 (2); Thr, 2,1 (2); Alá, 3,0 (3); Arg,
FAB (C216H365N81O62): [M+H]+=5088,8 10,5 (10); Val, 0,9 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,2 (8); Trp,
LO(l).
45. vegyület: AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-NH2 (59. számú szekvencia)
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu Leu Hi s As p 10 Arg Gly Arg Ser I 1 e 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Gl u Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Al a Trp nh2
(59. számú szekvencia)
40
Fizikai adatok: 50 AAA: Asx, 1,9 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 2,6 (3); His, op.: 158-174 °C[<x]2D5=-43,57° (c=0,53, H2O) 3,3 (3); Gly, 2,1 (2); Thr, 2,0 (2); Alá, 2,9 (3); Arg,
FAB (C216H366N82O61): [M + H]-=5087,4 10,1 (10); Val, 0,9 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,3 (8); Trp,
1,1(1).
46. vegyület: AVSEHQLLHD RGXSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH (60. számú szekvencia); X=(dihidro-cinnamoil)Lys
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Xaa Ser Ile
10 15
HU 217 843 Β
Gin Asp Leu Arg Arg 20 Arg Glu Leu Leu Glu 25 Arg Leu Le u Glu Arg 30
Le u Hi s Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Al a Trp OH
35 40
(60. számú szekvencia) [Xaa=(dihidro-cinnamoil)Lys]
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 6,3 (6); Ser, 2,8 (3); His, op.: 165,4-175,2 °C [a]/3 = -40,43° (c=0,20, 3,2 (3); Gly, 2,1 (2); Thr, 2,0 (2); Alá, 3,2 (3); Arg,
H2O) 9,9 (9); Val, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,6 (8); Lys,
FAB (C225H374N8()O62): [M+H]+=5191 10 1,1 (1); Trp, 1,1 (1).
48. vegyület. AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTMA-NH2 (62.: számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Ly s Gly Lys Ser I 1 e
1 5 10 15
GI n As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Me t Al a 35 nh2 (62. számú szekvencia)
Fizikai adatok: 20 AAA: Asx, 2,3 (2); Glx, 6,6 (6); Ser, 1,4 (2); His, op.: 140-210 °C [ct]2D5=-47,75° (c=0,178, H2O) 3,2 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg,
FAB (Cl80H309N57O52St): [M+H]+=4135,0 3,1 (3); Val, 0,9 (1); Met, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu,
8,8(8); Lys, 4,4(4).
2. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-OH (6. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a OH (6. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 5,9 (6); Ser, 1,7 (2); His, op.: 154-170 °C [a](j=-49,35° (c=0,46, H2O) 2,9 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 1,9 (2); Arg,
FAB (C175H301N57O50): [M+H] + =4005,0 3,0 (3); Val, 1,2 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,8 (8); Lys,
4,2 (4).
5. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH (15. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu His Gin Leu Leu Hi s As p Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a OH (15. számú szí ekvenc :ia)
Fizikai adat ok: AAA: As >P, 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); S ler, 1,8 (2); His,
op.: 147-11 55 °C[ aPDs=- -49,17 ° (c=0,66, H2O) 45 3,1 (3 ); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Al a, 2,0 (2); Arg,
FAB (C175H299N59O52): [M+H]+=4061 5,0 (5); Val, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,7 (8); Lys,
1,9 (2).
6. vegyület: AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH (16. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Arg GI y Arg Ser Ile
1 5 10 1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a OH (16. számú szí ekvencia)
AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); Ser, 1,8 (2); His,
3,2 (3); Gly, 1,2 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg,
6,9 (7); Val, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,8 (8).
Fizikai adatok:
op.: 150-170 °C [a]/5=-48,65° (c=0,54, H2O)
FAB (C|75H299N63O52): [M+Hp=4118,0
HU 217 843 Β
7. vegyület: AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH (17. számú szekvencia)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Lys Arg
25 30
Leu His Thr Ala OH (17. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asp, 2,0 (2); Glu, 4,8 (5); Ser, 1,8 (2); His, op.: 177-182 °C[a]£=-46,17° (c=0,14, H2O) 3,2 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 1,9 (2); Arg,
FAB (C176H304N64O50): [M+H] + =4117 10 6,7 (7); Val, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,7 (8); Lys,
0.9(1).
8. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLRKLHTA-OH (5. számú szekvencia)
Ala Va 1 Ser Glu Hi s G1 n Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Arg Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a OH (5. számú szekvencia)
Fizikai adatok: 20 AAA: Asp, 2,0 (2); Glu, 4,8 (5); Ser, 1,8 (2); His, op.: 147-165 °C [a]2D5=-49,17° (c=0,66, H2O) 2,7 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 0,9 (1); Ala, 2,0 (2); Arg,
FAB (C176H305NS9O49): [M+Hp =4033,0 3,9 (4); Val, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,9 (8); Lys,
4,0 (4).
9. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTAGRR-OH (10. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a Gly Arg Arg OH (10. számú szekvencia)
35
Fizikai adatok: AAA: Asp, 2,0 (2); Glu, 5,9 (6); Ser, 1,7 (2); His, op.: 158-160 °C [a]2D5=-44,76° (c=0,l, H7O) 2,9 (3); Gly, 2,3 (2); Thr, 1,0 (1); Ala, 1,9 (2); Arg,
FAB (CI89H326N64O55): [M+H] + =4375,0 35 5,0 (5); Val, 1,2 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 7,8 (8); Lys,
4,3 (4).
10. vegyület: AVSEAQLLHDLGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHAL-OH (14. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Ala Gin Leu Leu His As p Leu Gly Lys Ser Ile
1 5 10 1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Al a Leu OH (14. számú szekvencia)
Fizikai adatok: 45 AAA: Asp, 2,0 (2); Glu, 6,0 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: 170-175 °C [a]2D5=-31,59° (c=0,54, H2O) 2,0 (2); Gly, 1,2 (1); Ala, 3,0 (3); Arg, 2,8 (3); Val,
FAB (C174H300N52O5l): [M + H] +=3936,0 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 9,9 (10); Lys, 3,0 (3).
11. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLELLKEL-NH2 (11. számú szekvencia)
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5
Gin As p Leu Arg Arg 20
Leu Ly s Glu Leu NH2
Gin Leu Leu His As p 10
Arg Glu Leu Leu Glu 25
(11. számú szekvencia)
Lys Gly Lys Ser Ile 15
Lys Leu Leu Glu Lys 30
AAA: Asp, 2,2 (2); Glu, 7,7 (7); Ser, 1,7 (2); His, 2,0 (2); Gly, 1,0 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 3,0 (3); Val,
1,1(1); Ile, 1,0 (1); Leu, 9,3 (9); Lys, 5,1 (5).
Fizikai adatok:
op.: 172-174 °C [a]2D5=-43,29° (c=0,2, H2O)
FAB (C179H311N55O52): [M+H]+=4065,8
HU 217 843 Β
12. vegyület: AVSEIQFXHNLGKHLSSXERVELLEKLLEKLHNY—NH2 (X=Nle; 23. számú szekvencia)
Ala Val Ser Glu Ile Gin Phe NIe His Asn Leu Gly Lys His Leu 15 10 15
Ser Ser Nle Glu Arg Val Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 20 25 30
Leu His Asn Tyr NH2 (23. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,5 (6); Ser, 2,7 (3); His, op.: 178 °C [a?D 5=-36,88° (c=0,4, H2O) 3,1 (3); Gly, 1,1 (1); Ala, 1,0 (1); Arg, 1,0 (1); Tyr,
FAB (C182H295N50O51): [M+H]+=4001,6 10 0,8 (1); Val, 2,0 (2); Phe, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu+Nle,
8,5 (7+2); Lys, 3,1 (3).
13. vegyület: AVSEIQFXHNLGKHLSSXRRRELLEKLLEKLHNY-NH2 (X=Nle; 24. számú szekvencia)
Ala Val Ser Glu Ile Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His Leu 15 10 15
Ser Ser Nle Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 20 25 30
Leu His Asn Tyr NH2 (24. számú szekvencia)
Fizikai adatok: 20 AAA : Asp, 2,1 (2); Glu, 5,5 (5); Ser, 2,6 (3); His, op.: 260 °C [«]()=-37,02° (c=0,2, H2O) 3,1 (3); Ala, 1,0 (1); Gly, 1,1 (1); Arg, 3,2 (3); Tyr,
FAB (C184H304N56O49): [M+H]+=4084 1,0 (1); Val, 1,0 (1); Phe, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu,
9,0 (9); Lys, 3,0 (3).
14. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRALAEALAEALHTA-NH2 (20. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Lys Gly Lys Ser I 1 e
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Al a
20 25 30
Le u Hi s Thr Al a NH2 (20. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 4,9 (5); Ser, 1,7 (2); His, op.: 190-225 °C [a]2D5 =-56,58° (c=0,36, H2O) 2,6 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 7,6 (7); Arg,
FAB (CI61H272N54O49): [M + H]+=3747,0 2,8 (3); Val, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 6,6 (6); Lys,
1,9(2).
75. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLARRELLEKLLEKLHTA-NH2 (12. számú szekvencia)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Ala Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Ala NH2 (12. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); Ser, 1,7 (2); His, op.: 170-180 °C [a]2D5= -48,19° (c=0,2, H2O) 45 3,1 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 3,0 (3); Arg,
FAB (C172H?93N53O51): [M+H] + =3919,0 2,1 (2); Val, 1,1 (1); He, 1,0 (1); Leu, 8,0 (8); Lys,
4,4 (4).
50. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RFFLEKLLEK LHTA-NH2 (64. számú szekvencia)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Ala NH2 (64. számú szekvencia)
AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 5,0 (5); Ser, 1,9 (2); His,
3,3 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,1 (2); Arg,
3,1 (3); Val, 1,0 (1); Phe, 2,0 (2); Ile, 0,9 (1); Leu,
7,2 (7); Lys, 3,5 (4).
Fizikai adatok:
op.: 136,5-156,8 °C [a]2D5 =-49,89° (c = 0,24,
H2O)
FAB (C182H300N56O49): [M+H] + =4056,0
HU 217 843 Β
57. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLHKLLEK LHTA-NH2 (65. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu His Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Alá NH2 (65. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 4,9 (5); Ser, 1,8 (2); His, op.: 80,7-141,0 °C [a]2D5=-55,38° (c=0,23, H2O) 4.3 (4); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg, FAB (C176H300N58O49): [M+H]+=4012,8 10 3.1 (3); Val, 1,1 (1); lle, 1,0 (1); Leu, 8,1 (8); Lys,
3,9(4).
52. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEHLLEK LHTA-NH2 (66. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu His Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Alá NH2 (66. számú szekvencia)
Fizikai adatok: 20 AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: 134,3-157,9 °C [a]2D5 = -50,72° (c = 0,45, 4,2 (4); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg,
H2O) 3,0 (3); Val, 1,1 (1); lle, 0,9 (1); Leu, 8,1 (8); Lys,
FAB (C175H295N57O51): [M+H]+=4012,8 3,1 (3).
53. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLIAK LHTA-NH2 (67. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu lle Alá Lys
25 30
Leu His Thr Alá NH2 (67. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 4,9 (5); Ser, 1,8 (2); His, op.: 142,7-159,8 °C [a]2D5 = -54,01° (c = 0,21, 3,1 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 3,1 (3); Arg,
H2O) 3,1 (3); Val, 1,0 (1); lle, 1,9 (2); Leu, 7,0 (7); Lys,
FAB (C173H298N56O49): [M + H] +=3946,0 35 4,3(4).
54. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEE IHTA-NH, (68. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Lys Gly Lys Ser I 1 e
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Glu
20 25 30
lle Hi s Thr Al a NH2 (68. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 7,1 (7); Ser, 1,7 (2); His, op.: 138-185 °C[a]2D5=-50,17° (c=0,14, H2O) 45 2,8 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 2,1 (2); Arg, FAB (C174H295N55O53): [M+H] + =4005 3,1 (3); Val, 1,1 (1); lle, 1,7 (2); Leu, 7,1 (7); Lys,
2,7 (3).
58. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-NH, (72. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s G1 n Le u Leu
1 5
Gin As P Leu Arg Arg Ar g G1 u Leu
20
Leu Hi s Thr Arg Ser Al a Tr P nh2
His Asp Lys Gly Lys Ser lle 10 15
Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (72. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 158-163 °C [a]2D5 =-46,06° (c=0,17, H2O)
FAB (C195H327N63O55): [M + Hp=4434,8
AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,5 (6); Ser, 2,7 (3); His,
3,1 (3); Gly, 1,0 (1); Alá, 1,8 (2); Arg, 4,0 (4); Thr, 0,9 (1); Val, 0,9 (1); lle, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys, 3,9 (4); Trp, 1,0(1).
HU 217 843 Β
59. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAX—OH (73. számú szekvencia) [X=Nal(2)=3-(2-naftil)-L-alanin]
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu His Thr Arg Ser Al a 3-(2-naftil)-L-alanin-OH (73. számú szekvencia)
35
Fizikai adatok: 10 AAA; Asx, 2,1 (2); Glx, 5,5 (6); Ser, 2,8 (3); His, op.: 156-162 °C [¢^=-44,44° (c=0,189,H2O) 2,9 (3); Gly, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg, 4,0 (4); Thr,
FAB (C197H328N62O55): [M+H]+ =4445,6 0,9 (1); Val, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,5 (8); Lys,
4,2(4); Nal, 1,1 (1).
60. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTASAW-OH (74. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 20 25 30
Leu His Thr Alá Ser Alá Trp OH (74. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,6 (6); Ser, 2,7 (3); His, op.: 159-164 °C [α]£=-50,94° (c=0,29, H2O) 3,2 (3); Gly, 1,0 (1); Alá, 3,1 (3); Arg, 2,8 (3); Thr,
FAB (C192H320N60O55): [M+H]+=4349,0 25 1,0 (1); Val, 1,1 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,6 (8); Lys,
4,0 (4); Trp, 1,0(1).
61. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIRA-OH (75. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 20 25 30
Leu His Thr Alá Glu Ile Arg Alá OH (75. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 6,9 (7); Ser, 1,7 (2); His, op.: 155-210 °C[a]2D5 = -46,15° (c=0,12, H2O) 3,2 (3); Gly, 1,1 (1); Alá, 3,1 (3); Arg, 4,0 (4); Thr,
FAB (C195H334N6?O58): [M+H]+=4475,8 0,9 (1); Val, 1,1 (1); Ile, 1,9 (2); Leu, 8,1 (8); Lys,
4,1 (4).
62. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIR-OH (76. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a G1 u 35 Ile Arg OH (76. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 6,6 (7); Ser, 1,9 (2); His, op.: 186-218 °C [a]2J=-52,73° (c=0,265, H2O) 50 3,4 (3); Gly, 1,1 (1); Alá, 2,0 (2); Arg, 3,8 (4); Thr, FAB (CI92H329N61O57): [M+H] + =4404,4 1,0 (1); Val, 1,1 (1); Ile, 1,7 (2); Leu, 7,9 (8); Lys,
4,0 (4).
63. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEI-OH (77. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Alá Glu Ile OH (77. számú szekvencia)
HU 217 843 Β
Fizikai adatok:
op.: 169-205 °C [a]2D5 =-50,78° (c=0,51, H2O) FAB(C186H317N57O56): [M + H^ =4248,0
AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 6,8 (7); Ser, 1,8 (2); His,
3,3 (3); Gly, 1,0 (1); Alá, 2,0 (2); Arg, 3,0 (3); Thr, 1,0 (1); Val, 1,0 (1); Ile, 1,8 (2); Leu, 7,8 (8); Lys,
3,6 (4).
64. vegyület. • AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAE-OH (78. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a Glu 35 OH (78. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 199-205 °C [a]2D5=-52,47° (c=0,41, H2O) FAB (Cl80H306N56O55): [M+H]+=4135,0
AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 6,6 (7); Ser, 1,9 (2); His,
3,3 (3); Gly, 1,1 (1); Alá, 2,0 (2); Arg, 2,9 (3); Thr, 15 1,0 (1); Val, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,2 (8); Lys,
3,8 (4).
66. vegyület: SEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (80. számú szekvencia) Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp 1 5
Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His
Thr Alá NH2 (80. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 134,2 °C [a]2D5 = -48,12° (c=0,36, H2O) FAB (C167H286N54O49): [M+H]+=3834,4
AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,7 (6); Ser, 1,7 (2); His, 2,9 (3); Gly, 1,0 (1); Thr, 0,9 (1); Alá, 1,0 (1); Arg, 2,8 (3); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,2 (8); Lys, 3,8 (4).
67. vegyület: LLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (81. számú szekvencia)
Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg 15 10 15
Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2
25 (81. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 4,1 (4); Ser, 0,9 (1); His, op.: 128,5-184,5 °C [a]2D5 = -6,53° (c = 0,69, 2,1 (2); Gly, 1,0 (1); Thr, 0,9 (1); Alá, 1,0 (1); Arg,
MCOH) 3,0 (3); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,1 (8); Lys, 4,2 (4).
FAB (C148H259N47O41): [M + H] +=3353 40
68. vegyület: LHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (82. számú szekvencia)
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu 15 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (82. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 165-210 °C [a]2D5=-36,05° (c=0,12, H2O) FAB (C142H248N46O40): [M+H]+=3239,0
AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 3,9 (4); Ser, 0,9 (1); His, 50 1,9 (2); Gly, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 1,0 (1); Arg,
2,9 (3); Ile, 0,9 (1); Leu, 6,8 (7); Lys, 4,2 (4).
69. vegyület: SEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER
Ser Glu Hi s Gin Leu Leu Hi s As p Arg
1 5
Leu Arg Arg Arg Glu Leu Le u Gl u Arg
20
Leu Hi s Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser
35
Lei
Ali
5 Hi ! 30
HU 217 843 Β
Fizikai adatok:
op.: 150-210 °C [a]2D4 5=-18,0° (c=0,64, H2O) FAB (C208H351N79O60): [M + H] + =4918,6
AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 6,2 (6); Ser, 2,8 (3); His,
3,1 (3); Gly, 2,2 (2); Thr, 2,2 (2); Alá, 2,2 (2); Arg, 10,4(10); Ile, 1,0(1); Leu, 8,0 (8); Trp, 1,1 (1).
70. vegyület. • LLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW—OH (84. számú szekvencia)
Leu Leu Hi s As p Arg Gly Arg Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg
1 5 10 15
Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His Leu His Arg Gly
20 25 30
Arg Arg Thr Arg Ser 35 Alá Trp OH (84. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 150-210 °C[a]2D5=-41,70° (c=0,36, H2O) 15
FAB (C189H324N72O52): [M+H]+=4437,14
AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 4,1 (4); Ser, 1,9 (2); His,
2,0 (2); Gly, 2,1 (2); Thr, 2,0 (2); Alá, 2,1 (2); Arg,
9,7 (10); Ile, 0,9 (1); Leu, 7,4 (8).
Az oldalláncaival ciklizált analógot (57. vegyület) 20 szintén a fentiek szerint szintetizáltuk, azzal a különbséggel, hogy a 13. és 17. helyre Nu-Boc-Nf—Fmoc-Lys-t és Na-Boc-NY-Fmoc-Asp-t helyeztünk. A Boc aminosavszintézisének elvégzése után a gyantát szobahőmérsékleten 30 percig DMF-ben 20%-os piperidinnel 25 kezeltük. A gyantát leszűrtük, DMF-fel, metanollal és diklór-metánnal (CH2C12) mostuk. A gyantát (1,1 g) 250 mg PyBOP-t tartalmazó 10 ml DMF-ben szuszpendáltuk. A pH-t DIEA-val 8-9 értékre állítottuk be, és a gyantát egy órán keresztül kevertük, majd leszűrtük, DMF-fel és diklór-metánnal mostuk, s DMF-ben reszuszpendáltuk. Az összekapcsolást 125 mg ByBOP alkalmazásával megismételtük. A gyantát szűrtük, DMFfel, metanollal és diklór-metánnal mostuk, majd szárítottuk. A gyantát végül hidrogén-fluoriddal kezeltük, s a peptidet a fentebb leírtak szerint tisztítottuk.
57. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (71. számú szekvencia) Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr Alá NH2 (71. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 142,5-163,5 °C [a]2D5 = -34,31° (c = 0,17, H2O)
FAB (Ci75H298N56O50): [M+H]+=3986,4
AAA: Asx, 1,9 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,8 (2); His,
3,2 (3); Gly, 1,1 (1); Alá, 2,0 (2); Arg, 3,0 (3); Thr, 1,0 (1); Val, 1,1 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 4,0 (4).
2. példa
Az 1. vegyületet [Met34, Alá35] [AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTMA-NH2 (25. számú szekvencia)] az 1. példa szerinti eljárással szintetizáltuk és tisztítottuk. Ezt a polipeptidet az alábbi eljárással homoszerin-laktonná alakítottuk. A tisztított peptidet (160 mg) 44%-os hangyasavban (4 ml) feloldottuk, majd ezt az oldatot 0 °C-on 44%-os hangyasavban (4 ml) készített cián-bromid (700 mg) és fenol (1,6 mg) oldatával elegyítettük. A kapott oldatot 0 °C-on két óráig és szobahőmérsékleten szintén két óráig kevertük. A termék kialakulását HPLC-vel ellenőriztük (Vydac® C-18, 300 Á, 4,6 χ 250 mm, 1,2 ml/perc átfolyási sebesség, 0,1% TFA-ban 25-45%-os acetonitril gradiens, 10 perces időtartam). A reakció négy órán belül lejátszódott. A minta felét bekoncentráltuk és preparatív RP-HPLC-n tisztítottuk (Vydac® C-18, 0,1% TFAban 25-45%-os acetonitril gradiens). A homoszerinlakton peptidfrakciókat összegyűjtöttük és liofílizáltuk, miáltal 28 mg, 95%-osnál nagyobb tisztaságú fehér, szilárd terméket (4. vegyület) kaptunk.
4. vegyület: AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX (X=hSerlac; 9. számú szekvencia) Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr hSerlac (9. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); Ser, 1,8 (2); His, op.: 138-142 °C [a]2D5 = -50,66° (c=0,l,H2O) 3,0 (3); Thr, 1,1 (1); Alá, 1,1 (1); Arg, 2,7 (3); Val,
FAB(C,76H299N55O5,): [M+H]+=40l7,61 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,2 (8); Lys, 3,8 (4); Gly,
1,09 (1); hSer, 1,09(1).
HU 217 843 Β
A 65. vegyületet szintén a fenti eljárással állítottuk elő.
3. példa
Homoszerinamid előállításához a nyers homosze- 5 rin-lakton analógot (4. vegyület) bekoncentráltuk és metanolban 25 ml telített ammóniával kezeltük. Az oldatot 0 °C-on két óráig és szobahőmérsékleten 16 óráig kevertük. A reakciót HPLC-vel ellenőriztük (Vydac®
3. vegyület: AVSEIHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX-NH-, (X=hSer; 8. számú szekvencia)
C-18, 300 Á, 4,6 χ 250 mm, 1,2 ml/perc átfolyási sebesség, 0,1% TFA-ban 25-45%-os acetonitril gradiens) és 18 órán belül befejeztük. Az oldatot bekoncentráltuk és preparatív RP-HPLC-vel (Vydac® C-18, 0,1% TFAban 25-45%-os acetonitril gradiens) tisztítottuk. A homoszerinamid peptidfrakciókat összegyűjtöttük és liofilizáltuk, miáltal 30 mg, 98%-osnál nagyobb tisztaságú fehér, szilárd terméket (3. vegyület) kaptunk.
Al a Va 1 Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Le u Hi s Thr h S e r NH2 (8. számú szekvencia)
Fizikai adatok: 1,0 (1); Arg, 2,9 (3); Val, 1,0 (1); Ile, 1,0 (1); Leu,
op.: 138-142 °C[a]2D5= -45,97° (c=0,25, H2O) 7,6 (8); Lys, 3,9 (4).
FAB (C176H302N56O52): [M+H]+=4033,9 20 A 22., 23. és 28. vegyületet hasonló módon szintén
AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 6,1 (6); Ser, 1,6 (2); His, a fenti eljárás szerint állítottuk elő.
2,8 (3); Gly, 0,97 (1); hSer, 0,97 (1); Thr, 1,0 (1); Alá,
22. vegyület: AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH2 (X=homoszerin; 36. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His Leu 15 10 15
Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Asn hSer NH2 (36. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 4,9 (5); Ser, 2,6 (3); His, op.: 69,4-128 °C [a]2D5=-43,93° (e=0,15 H2O) 2,8 (3); Gly, 1,0 (1); Alá, 1,0 (1); Arg, 3,0 (3); Val,
FAB (C179H302N56O49): [M+H]+=4022,9 35 1,0 (1); Phe, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,8 (9); Lys,
3,4 (3).
23. vegyület: AVSEIQFLHN KGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH2 (X=homoszerin; 37. számú szekvencia)
Alá Val Ser Glu Ile Gin Phe Leu His Asn Lys Gly Lys His Leu 15 10 15
Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Asn hSer NH2 (37. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 4,9 (5); Ser, 2,7 (3); His, op.: 87,1-142,1 °C [a]2D5=-52,14° (c=0,41, H2O) 2,8 (3); Gly, 1,0 (1); hSer, 1,0 (1); Alá, 1,0 (1); Arg,
FAB (C179H303N57O49): [M + H]+=4038 3,0 (3); Val, 1,1 (1); Phe, 0,9 (1); Ile, 0,9 (1); Leu,
7,9 (8); Lys, 3,7 (4).
28. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRX-NH2 (X=homoszerin; 42. számú szekvencia)
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a Gly Arg Arg hSer NH2 (42. számú szekvencia)
35
HU 217 843 Β
Fizikai adatok:
op.: 80 °C [a]2D4 5=-48,64° (c=0,09, H2O)
FAB (Cl93H334N70O56): [M+Hp=4530,0 AAA: Asx, 2,2 (2); Glx, 6,1 (6); Ser, 1,7 (2); His,
3,0 (3); Gly, 1,9 (2); hSer, 1,0 (1); Thr, 1,0 (1); Ala,
2,1 (2); Arg, 7,2 (7); Val, 0,8 (1); Ile, 1,0 (1); Leu,
8,4 (8); Lys, 2,1 (2).
A homoszerin-alkilamidokat hasonlóan homoszerin-laktonból állítottuk elő oly módon, hogy azt a megfelelő alkil-amin feleslegét tartalmazó DMF-ben oldottuk fel, és szobahőmérsékleten néhány napig végzett ke5 verést követően (a reakciót analitikai HPLC-vel ellenőriztük) az elegyet szárazra pároltuk, majd a peptidet preparatív HPLC-vel tisztítottuk. A jellemző homoszerin-alkilamidok az 55. és 56. vegyületek.
55. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH2CH3 (X=homoszerin; 69. számú szekvencia)
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu Leu His As p 10 Lys Gly Ly s Ser I 1 e 1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr hSe r NHCH2CH 3 (69. számú szekvencia)
Fizikai adatok: AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 5,8 (6); Ser, 1,7 (2); His, op.: (nem meghatározott) [a]2D5=(nem meghatáro- 3,1 (3); Gly, 0,9 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 0,9 (1); Arg, zott) 20 3,0 (3); Val, 1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,4 (8); Lys,
FAB (C178H306N56O52): [M+H]-=4063,0 3,7 (4); hSer, 0,9 (1).
56. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH2-CH2C6H5 (X=homoszerin; 70. számú szekvencia)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
Leu His Thr hSer NHCH2CH2C6H5
Fizikai adatok:
op.: (nem meghatározott) [a]2D5=(nem meghatározott)
FAB (C184H310N56O52): [M+H]+=4138,8 AAA: Asx, 2,0 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 1,7 (2); His,
2,9 (3); Gly, 0,9 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 0,9 (1); Arg, 3,0 (3); Val, 1,0 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys,
4,1 (4); hSer, 0,9(1).
4. példa
Az 1. példában alkalmazott Boc-Ala gyanta helyett Merrifield-gyantához (DMF-ben 50 °C-on, 48 órás ke25 30 (70. számú szekvencia) zeléssel) kapcsolt Na-Boc-Ni'-Fmoc-L-2,4-diamino-vajsav céziumsót használtunk. A szintézis befejezésével az Fmoc oldallánc-védőcsoport eltávolítása érdekében a peptidet 30 percig, szobahőmérsékleten,
DMF-ben 20%-os piperidinnel kezeltük. A védett peptid spontán laktámmá ciklizálódott, miáltal lehasadt a gyantáról. Az oldatot leszűrtük a gyantáról és vákuum alatt bepároltuk, s így olaj maradt vissza. Ezt a maradékot az 1. példában leírtak szerint folyékony hidrogén40 fluoriddal kezeltük, miáltal védőcsoport nélküli nyerspeptidet kaptunk. A peptidet az 1. példában leírt módon kezeltük és tisztítottuk.
49. vegyület: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX (X=L-2,4-diamino-butiril-laktám; 63. számú szekvencia)
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
25 30
Leu His Thr L-2,4-diamino-butiril-laktám (63. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 161-181 °C [a]2D5 =-48,38° (c=0,25, H2O) FAB (C176H300N56O51): [M+H]+=4016,8 AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 6,3 (6); Ser, 1,7 (2); His,
3,3 (3); Gly 1,1 (1); Thr, 1,0 (1); Ala, 2,1 (2); Arg,
2,9 (3); Val, 0,9 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,0 (8); Lys,
3,8 (4).
5. példa
A 2. példában előállított homoszerin-lakton analóg vizes oldatát sertésmájészterázzal (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO) kezeltük. A lakton Cterminális homoszerint eredményező hidrolízisét analitikai HPLC-vel ellenőriztük. Amikor úgy ítéltük, hogy a hidrolízis befejeződött, az anyagot az 1. példában leírtak szerint preparatív HPLC-vel tisztítottuk.
HU 217 843 Β
37. vegyület szekvencia) Alá Val 1
Gin Asp
Leu Hi s
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-OH (X=homoszerin; 51. számú
Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 5 10 15
Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 20 25 30
Thr hSer OH (51. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: (nem meghatározott) [a]2D5=(nem meghatározott)
FAB (C176H301N55O53): [M+H]+=4035,l
AAA: Asx, 2,1 (2); Glx, 5,9 (6); Ser, 2,0 (2); His,
3,1 (3); Gly, 0,8 (1); hSer, 0,8 (1); Thr, 1,0 (1); Alá, 1,0 (1); Arg, 3,0 (3); Val, 1,3 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,1(8); Lys, 3,8 (4).
6. példa
Az 1. példa szerint, 0,35 mmol mennyiségben a BocAVS(Bzl)E(OBz)H(Bom)QLLHD(OBzl)R(Ts)GR(Ts)S(Bzl)IQD(OBz)LR(Ts)R(Ts)E(OBz)LLE(OBzl)R(Ts)LLK(Fmoc)R(Ts)LH(Bom)T(Bzl)A-O-PMA védett peptid-gyanta komplexumot szintetizáltuk. Valamennyi N“-csoportot /-butoxi-karbonil- (Boc) védőcsoporttal védtük, az oldalláncok védőcsoportjait pedig feltüntettük. A szintézis befejezése után a peptid-gyanta komplexumot a lizin fluorenil-metoxi-karbonil-védőcsoportja eltávolítása érdekében, szobahőmérsékleten 30 percig dimetil-formamidban (DMF) készített 50 ml 20%-os piperidinnel kezeltük. A lizint egymást után DMF-fel, metanollal, diklór-metánnal mostuk, majd szárítottuk, miáltal 1,6 g részlegesen védett pepiidet kaptunk. A részlegesen védett peptid 0,8 g-ját (0,175 mmol) (a lizin aminosavon) szobahőmérsékleten 5 órán keresztül 20 ml DMF-ben, 0,16 g (0,3 mmol) benzo-triazoloxi-trisz(pirrolidino)-foszfónium-hexafluor-foszfát (PyBop) és 0,067 g (0,525 mmol) diizopropil-etil-amin (DIEA) jelenlétében 0,44 g (0,3 mmol) metoxi-di(etilén-oxi)-ecetsavval [PEG(2)CH2COOH] acileztük. Öt óra elteltével a gyantát leszűrtük, és egymás után DMFfel, metanollal, diklór-metánnal mostuk. Az acilezéses lépést kétszer ismételtük, míg a gyantán negatív ninhidrinreakciót nem kaptunk. A kész peptídet az 1. példában leírt módon az oldallánc-védőcsoportok eltávolításával és tisztítással hasítottuk le a gyantáról, s termékként a 19. vegyület 100 mg-ját kaptuk.
19. vegyület: AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH (18. számú szekvencia) CH3O(CH2CH2O)2CH2C=O
Al a Val Ser Glu Hi s Gin Leu Leu Hi s Asp Arg Gly Arg Ser I 1 e
1 5 10 1 5
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Le u Leu Glu Arg Leu Leu
20 25
Lys (COCH7PEG2) Arg Leu Hi s Thr Al a OH (18. számú szekvencia)
30
Fizikai adatok:
op.: 145-195 °C [a]2D5=-44,60° (c=0,2, H2O) 40
FAB (CI83H316N64O54): [M+H]+=4276,2
AAA: Asp, 2,1 (2); Glu, 5,0 (5); Ser, 1,6 (2); His,
2,9 (3); Gly, 0,9 (1); Thr, 1,9 (2); Arg, 7,1 (7); Val,
1,1 (1); Ile, 1,0 (1); Leu, 8,0 (8); Lys, 0,9 (1).
7. példa
A peptídet a 4. példában leírt módon szintetizáltuk, hasítottuk és tisztítottuk, azzal a különbséggel, hogy acilezőszerként 2-metoxi-poli(etilén-oxi)-ecetsavat [PEG(5000)CH2C02H] alkalmaztunk. A részlegesen védett peptid 0,8 g-jából (0,175 mmol) 300 mg tiszta peptídet (20. vegyület) állítottunk elő.
20. vegyület: AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH (19. számú szekvencia) i :'
CH3O(CH2CH2O),, 0ch2c=o
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile 15 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 20 25
Ly s (COCH2PEG5000) Arg Leu His Thr Alá OH (19. számú szekvencia)
Fizikai adatok:
op.: 105 °C [a]2D5=-22,95° (c = 0,ll, 50% aq. HOAc)
AAA: Asp, 2,0 (2); Glu, 4,8 (5); Ser, 1,6 (2); His, 2,6 (3); Gly, 1,1 (1); Thr, 1,1 (2); Arg, 7,3 (7); Val, 0,8 (1); Ile, 0,9 (1); Leu, 8,3 (8); Lys, 1,8 (2); Alá, 1,8 (2).
HU 217 843 Β
8. példa
A pPTHrp(l-34) analóg génjének szintézise A pPTHrp(l-4) analógot (4. vegyület; 9. számú szekvencia) kódoló szintetikus gént szerkesztettünk, amely az 1. ábrán bemutatott nukleotidszekvenciával 5 és restrikciós enzimes hasítási helyekkel rendelkezik.
A szükséges oligodezoxinukleotidokat Sinha és munkatársai eljárásával (Nucleic Acid Research, 12, 4539-4557, 1984) DNS-szintetizátoron (Milligen/Biosearch) készítettük. A védőcsoportok eltávolítása után 10 a nyers oligonukleotidokat preparatív 15%-os poliakrilamid gélen gélelektroforézissel tisztítottuk. Az oligonukleotidok helyét UV-vel határoztuk meg; ezeket kivágtuk a gélből, majd Waters Cl8 Sep-pak® tölteten sótalanítottuk és liofilizáltuk.
A polimeráz láncreakcióval (PCR) végzett amplifikációt „GeneAmp” DNS-amplifikációs kit (Perkin-Elmer Cetus) reagenseinek (köztük Taq-polimeráz) alkalmazásával Perkin-Elmer Cetus PCR-készüléken hajtottuk végre, 25 ciklussal (1 percig 90 °C-on, 2 percig 50 °C-on és 3 percig 72 °C-on). A pPTHrp(l-34) analóg gén templát DNS-szekvenciájaként két átfedő oligonukleotidot állítottunk elő; az egyik egy 88mer (2 pg), a PTH3 (31. számú szekvencia):
CCTCTAGATC TCCGCGGCGC TAGC ATG GCT GTT TCT GAA CAT CAG 45
Me t Alá Val Ser Glu His Gin
5
CTG CTT CAT GAC AAA GGT AAA TCG ATT CAA GAT CTG AGA CGT C 88 Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser I le Gin Asp Leu Arg Arg
15 20 a másik egy anti-szensz 90mer (2 pg), a PTH4 (32. számú szekvencia):
CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATCTAGA CAT AGT ATG CAG CTT TTC 46
AAG CAG TTT CTC CAG CAG CTC GCG Leu Leu Lys Glu Leu Leu Glu Arg
20 let inr His Leu Lys Glu
ACG TCT CAG ATC TTG ATT CG 90 Arg Arg Leu Asp Gin I le
A két szegélyező primer, a PTHPCR1: CCTCTAGATC TCCGCGGCGC TAG (33. számú szekven- 30 cia) és PTHPCR2: CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATC (34. számú szekvencia) alkalmazásával PCR-rel teljes gént amplifikáltunk. Az amplifikált DNS-terméket 4%-os NuSieve® agarózgélen gélelektroforézissel tisztítottuk. A hozzávetőleg 150 bázis hosszúságú, szín- 35 tetikus hPTHrp(l -34) analóg gént tartalmazó sávot kivágtuk a gélből, és Elu-Quick® üveggél DNS-extrakcióval (Schleicher & Schuell, Keene, NH) hozzávetőleg 200 ng DNS-t izoláltunk.
9. példa
A pPTHrp(l-34)l analóg gén molekuláris klónozása
A 6. példa szerinti hPTHrp(l-34) analóg gén szubklónozásához az amplifikált DNS 200 ng-ját izoláltuk, és HindlII és Sacl restrikciós enzimekkel hasítottuk. Amint a 2. ábrán látható, a DNS-t 2 pg, előzetesen HindlII-mal és SacII-vel hasított TrpLE 18 Prot (He3, Pro5) plazmidhoz ligáltuk.
A kapott, hPTHrp(l-34) analóg gén egy példányát tartalmazó TrpLE 18 hpPTHrp( 1-34)1 plazmidot kompetens E. coli HB 101 sejtekben (CLONTECH, Palo Alto, CA) transzformáltuk. A transzformánsokat az inszerció igazolása érdekében PCR-analízisnek vetettük alá. Kiválasztottuk a transzformált sejttelepeket, és azokat 5 percig 200 pl vízben forraltuk, ebből 2 pl-t az inszertet szegélyező két primerrel együtt PCR-nek vetettük alá. A PCR-terméket ezután 1%-os agarózgélen analizáltuk, hogy igazoljuk a hPTHrp(l -34) gén inszert egy példányának jelenlétét. A Trp LE 18 hPTHrp(l-34) plazmidot automatizált DNS-szekvenátoron (Applied Biosystems Model 373A, Foster City, CA), a forgalmazó Dye Deoxy Terminátor sequencing kitjének felhasználásával azonosítottuk.
10. példa
A hPTHrp(l-34) analóg gén több példányát tartalmazó Trp LE 18 vektor előállítása Az egyedüli Nhel és Xbal restrikciós hasítási helyek a hPTHrp(l-34) analóg gén szekvenciájának kezdetéhez és végéhez közel helyezkednek el. Ez a két restrikciós hely, amely különböző szekvenciákat ismer fel, de azonos egyszálú kohéziós terminálisokat képez, lehetővé teszi a Trp LE 18 vektoron belül a hPTHrp(l-34) gén több példányának kialakítását.
Az egymás utáni ismételt hPTHrp(l-34) szekvenciák kialakításának folyamatát a 3. ábrán vázoljuk. A gén egy példányát tartalmazó Trp LE 18 hPTHrp(1-34)1 plazmid 5 pg-ját külön reakciókban BamHI -t-Nhel, valamint Xbal+BamHI enzimekkel hasítottuk. Mindegyik emésztésből a hPTHrp(l-34) analóg gént tartalmazó fragmens körülbelül 300 ng-ját izoláltuk. A két fragmenst összekevertük és ligáltuk, miáltal a Trp LE 18 hPTHrp(l-34)2 plazmidot hoztuk létre, amelyet kompetens E. coli HB 101 sejtek transzformálásához használtunk. A hPTHrp(l -34) gén inszert két példánya jelenlétének meghatározásához a transzformált PCR-termékek 1%-os agarózgélen végzett méretmeghatározását alkalmaztuk. A gén két példányát tartalmazó Trp LE 18 hPTHrp( 1-34)2 plazmidot DNS-szekvenálással igazoltuk. A két hPTHrp(l -34) gén helyes kapcsolódása a kapcsolódási helynél az Nhel és Xbal helyek
HU 217 843 Β megszűnését eredményezi, miáltal a megmaradó NehI és Xbal helyek a két tandem (egymás utáni) gént szegélyezik.
Az eljárás ismétlésével a hPTHrp(l-34) gén négy példányát tartalmazó Trp LE 18 hPTHrp( 1-34)4 plazmidot állítottuk elő (4. ábra). DNS-szekvencia-analízissel megállapítottuk, hogy a Trp LE 18 hPTHrp(1-34)4 plazmid szekvenciája helyes.
11. példa
A Trp LE 18 hPTHrp(l-34)4 plazmid expresszálása és tisztítása
A Trp LE 18 hPTHrpíl-34)4 plazmid indukálása pg/ml ampicillint és 100 pg/ml triptofánt tartalmazó 50 ml LB tápközeg [J. H. Miller, „Experiments in Molecular Genetics”, 431. oldal (1972); amelyet hivatkozásul említünk] indító tenyészetet Trp LE 18 hPTHrp( 1-34)4 plazmidot tartalmazó E. coli sejtekkel oltottuk be, és a tenyészetet élénk keveréssel 37 °C-on, egy éjszakán keresztül, körülbelül 6-os A55()-érték elérésig neveltük. Az előállításhoz az LB tápközeg két literét 37 °C-ra előmelegítettük, majd 0,06-os A550-érték eléréséhez 20 ml indítótenyészettel oltottuk be. A tenyészetet élénk keveréssel 0,6 és 0,8 közötti A550-értékig neveltük, majd 2 ml 10 mg/ml indol-akrilsav (IAA) oldatot adtunk hozzá. A tenyésztést jó levegőztetéssel körülbelül 6-os A550-érték (jellemzően 4 és 10 között) eléréséig körülbelül 16 órán keresztül folytattuk. A sejteket centrifugálással koncentráltuk, és 50 mM Tris-HCl (pH=7,5) és 0,1 mM EDTA-puffer 500 ml oldatában (Tris-puffer) reszuszpendáltuk.
A szuszpenziót (X” hangtölcsérrel felszerelt) Heat Systems-Ultrasonics, Inc. model 220F hangsugárzóval kezeltük, melyet a túlhevülés elkerülése érdekében 50%-os teljesítménnyel működtettünk.
Az indukció mértékének meghatározásához az ép sejteket SDS-PAGE módszerrel analizáltuk. A Trp LE 18 hPTHrp( 1-34)4 plazmidból származó géntermékek hozzávetőleg 17 000 molekulatömegű fősávként voltak láthatók. Ez az összes celluláris protein 10%-ának felel meg.
A fúziós protein izolálása és tisztítása
A Trp LE 18 hPTHrp( 1-34)4 fúziós protein pelletezéséhez a sejtlizátumot f5 percig körülbelül 3600 g-vel centrifugáltuk, a felülúszót eltávolítottuk, és a pelletet 200 ml Tris-pufferben reszuszpendáltuk (jellemzően 40-80 A550/ml koncentrációban).
12. példa
A fúziós protein kezelése és a homoszerin-lakton hPTHrp(l-34) peptid tisztítása A hPTHrp(l-34) multimer fúziós proteint szegélyező metioningyökök CNBr-dal végzett lehasításával a kívánt homoszerin-lakton hPTHrp(l-34) polipeptidet szabadítottuk fel, amelyet az alábbiak szerint tisztítottuk.
A fúziós protein CNBr-os kezelése
A Trp LE 18 hPTHrp(l -34)4 fúziós protein mosott pelleteit óvatos keveréssel 60 ml 70%-os hangyasavban reszuszpendáltuk (körülbelül 20 mg/ml összes protein; jellemzően 1000 A550 sejtegységből származó anyagot 3 ml-ben oldottunk). Az elegyhez néhány csepp oktanolt adtunk, az oldaton nitrogént buborékoltattunk át, majd 5,5 g CNBr-ot adtunk hozzá. A reakciót 25 °C-on 6 órán keresztül végeztük, majd egyenlő térfogatban 50:50 arányú metanol:víz elegyet kevertünk a mintával, amit ventilációs párologtatással távolítottunk el. Az eljárás 2-4-szeri ismétlése után a hangyasav és a cián-bromid zömét eltávolítottuk, majd a mintát szárazra pároltuk, 200 ml vízben újra feloldottuk, s a tárolhatóság érdekében liofilizáltuk.
A homoszerin-lakton hPTHrp(l-34) tisztítása
A cián-bromiddal kezelt felülúszót 24 órán keresztül 50 mM KH2PO4-oldattal (pH=6,5) szemben dializáltuk, többszöri változtatással. A dializálás során a kémhatást 6,5 pH-η tartottuk. A dialízis után a csapadékokat nagy sebességű centrifugálással távolítottuk el. A felülúszót Gelman 0,45 μ szűrőkészüléken (Acrodisc 4184) szűrtük.
Kationcserélő kromatográfia
A kezdeti tisztítást Bio-Gel TSK-SP-5PW HPLC oszlopon (21,5 χ 150 mm) végzett kationcserélő kromatográfiával egészítettük ki. A kromatografálást 8 ml/perc átfolyási sebességgel és hozzávetőleg 12 mg nagymértékben tisztított homoszerin-lakton hPTHrp(l-34) peptid hozammal a következők szerint végeztük:
1. Az oszlopot 50 mM KH2P04-oldattal (pH=6,5) ekvilibráltuk.
2. Az oszlopra 10 ml leszűrt felülúszót töltöttünk (hozzávetőleg 1,5 1 tenyészet tápközeg vagy 2,4 g benne lévő anyag).
3. Az oszlopot az alapszint állandósulásáig 50 mM NaCl-oldatot tartalmazó 50 mM KH2PO4-oldattal (pH=6,5) mostuk.
4. Az oszlopot 90 mM NaCl-oldatot tartalmazó 50 mM KH2PO4-oldattal (pH=6,5) eluáltuk. A frakciókat körülbelül 45 percen át gyűjtöttük.
5. A 90 mM NaCl-os frakciókat C18 HPLC-vel homoszerin-lakton hPTHrp(l-34) tartalomra vizsgáltuk, majd összegyűjtöttük és tároltuk azokat.
Reverz fázisú HPLC-kromatográfia
A végső tisztítási lépéshez reverz fázisú Poros R/H 4,6x100 mm-es oszlopot (Perseptive Biosystems, Cambridge, MA) használtunk. A kromatográfia körülményei a következők voltak.
„A” mozgó fázis: 0,1 %-os trifluor-ecetsav
(TFA)/víz
„B” mozgó fázis: 0,1%-os trifluor-ecetsav
(TFA)/CH3CN
Idő Átfolyás B%
0 perc 4 ml/perc 15
5,0 perc 4 ml/perc 40
5,2 perc 4 ml/perc 100
6,8 perc 4 ml/perc 100
7,0 perc 4 ml/perc 15
A homoszerin-lakton hPTHrp(l- 34) (4. vegyület)
retencióideje hozzávetőleg 2,943 perc volt. A tisztított peptid 98%-os tisztaságú volt (amit tömegspektroszkópiával határoztunk meg).
HU 217 843 Β
13. példa
A találmány szerinti vegyületek eltávolított petefészkű patkányok csonttömegére gyakorolt hatását értékeltük, rendszerint Gunnes-Hey és Hock (Metab. Boné Dis., 5:177-181, 1984) eljárása szerint.
A felnőtt Sprague-Dawley nőstény patkányokat akklimatizáltuk, tömeg szerint csoportosítottuk (n=9, 10 vagy 12), s kétoldali petefészek-eltávolítást (OVX) vagy látszatműtétet végeztünk rajtuk. A vegyület adagolását a műtét után 17 nappal kezdtük, és 20 napon keresztül folytattuk. A tesztvegyületet naponta egyszer 2%-os patkány szérum/sóoldat vivőanyagban szubkután adtuk be.
napig végzett adagolás után a patkányokat leöltük, a jobb combcsontokat (femur) félbevágtuk, s a disztális combcsontfeleket (DHF) a trabekulák (gerendák) átfúrásával tovább osztottuk trabekuláris csontra (TB) és kortikális csontra (CB). A kalciumot Calcette kalciumanalizátorral vontuk ki és mértük, és a csont átlagos kalciumtartalmát mg/DHF/100 g testtömeg értékben fejeztük ki.
Az OVX és a látszatkezelt csoportok összehasonlításához a kétmintás t-tesztet alkalmaztuk. Az OVX-csoportok összehasonlításához az egyváltozós ANOVAtesztet használtuk, majd - a kezelt csoportok vivőanyaggal való összehasonlításához — Fisher-féle összetett LSD-összehasonlítást végeztünk.
A petefészek-eltávolítás lényegében teljes csontleépülést okozott, elsősorban a trabekuláris csontban. Az egész csont kalciummennyisége a látszatoperált kontrollokhoz képest 47-54%-kal kevesebb volt.
A bPTH(l-34) és a hPTHrp(l-34) 80 pg/kg/nap adagolásban a kezelt OVX patkányok esetében az egész csont kalciumtartalmát illetően statisztikusan jelentős növekedést eredményezett (53-95%-os, illetve 18-40%-os növekedés), a kortikális csont kalciumtartalmában azonban nem tapasztaltunk lényeges növekedést.
A találmány szerinti vegyületek 80 pg/kg/nap adagolásban az egész csont kalciumtartalmát 66-138%kal, a trabekuláris csont kalciumtartalmát pedig 87-128%-kal növelték. A kortikális csont kalciumtartalma, a trabekulák (gerendák) vastagsága és a csont térfogata a kezeletlen OVX-kontrollokhoz képest szintén jelentősen növekedett.
A vizsgálat során az alábbi vegyületeket teszteltük:
A kalcium %-os gyarapodása az OVX-csoporthoz képest
5 Vegyület 1. (7. számú Tesztek száma Trabekuláris csont Egész csont
szekvencia) 2. (6. számú 6 101-128% 88-138%
szekvencia) 4. (9. számú 3 87-102% 66-114%
10 szekvencia) 3 - 88-114%
Hasonló vizsgálatokban az eltávolított petefészkű
patkányokat 5, 10 és 20 napon keresztül 40 pg/kg/nap adagolással kezeltük, az alábbi eredményekkel.
A kalcium %-os
15 Vegyület Tesztek Napok gyarapodása az OVX-csoporthoz képest Egész
20 1. (7. számú szekvencia) száma 3 száma 20 csont 73-109%
4. (9. számú szekvencia) 5 20 79-105%
25 4. (9. számú szekvencia) 1 10 79%
49. (63. számú szekvencia) 1 10 93%
4. (9. számú szekvencia) 1 5 55%
30 42. (56. számú szekvencia) 1 5 60%
14. példa Toxicitás
A fenti 11. példában a találmány szerinti vegyületek esetében nem tapasztaltunk toxikus hatásokat.
SZEKVENCIALISTA
TUDNIVALÓK AZ 1. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 1. számú szekvencia
Ser 1 Va 1 Ser Glu Ile 5 Gin Leu Me t Hi s Asn 10 Leu Gly Ly s Hi s Leu 15
Asn Ser Me t Glu Arg Va 1 Glu Trp Leu Arg Ly s Ly s Leu Gin As p
20 25 30
Va 1 Hi s Asn Phe
TUDNIVALÓK A 2. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS:
2. számú szekvencia
HU 217 843 Β
Al a Va 1 Ser Glu Ile Gin Phe
1 5
Se r Se r Me t Glu Arg Va 1 Glu
20
Va 1 Hi s Asn Phe
Me t Hi s As n 10 Leu Gly Ly s H i s Le u 15
Trp Leu Arg Ly s Ly s Leu Gin As p
25 30
TUDNIVALÓK A 3. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: aminc isav
(D) ALAK: lineár is
Ser Va 1 Ser Glu I 1 e Gin Leu
1 5
Ser Ser Leu Glu Arg Va 1 Glu
20
Val Hi s As n Phe
TUDNIVALÓK A 4. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino isav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Phe
20
Ile Hi s Thr Al a
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális 10 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 3. számú szekvencia
Me t His Asn Leu Gly Lys His Leu 10 15
Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid 20 (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 4. számú szekvencia
Le u Hi s As p 10 Ly s Gly Ly s Ser Ile 15
Phe Leu Hi s Hi s Leu I le Al a Glu
25 30
TUDNIVALÓK AZ 5. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineár is
Al a Val Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 5. számú szekvencia
35
Leu Hi s As p Ly s Gly Ly s Ser Ile
10 15
Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Arg Ly s
25 30
TUDNIVALÓK A 6. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG : 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino >sav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 6. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
TUDNIVALÓK A 7. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS:
7. számú szekvencia
HU 217 843 Β
Alá 1 Val Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
Leu H i s As p 10 Ly s Gly Lys Ser Ile 1 5
Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
25 30
TUDNIVALÓK A 8. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid
(iii) HIPOTETI KUS: nem
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Xaa
TUDNIVALÓK A 9. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid
(iii) HIPOTETI KUS: nem
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Xaa
TUDNIVALÓKA 10. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 37 aminosav (B) TÍPUS: aminosav
Al a Va 1 Ser GI u Hi s G1 n Le u
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg GI u
20
Leu Hi s Thr Al a Gly Arg Ar g
(v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely 10 (B) ELHELYEZKEDÉS: 34 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa34 =homoszerin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 8. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 34 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa34=homoszerin-lakton (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 9. számú szekvencia
Le u Hi s Asp 10 Ly s Gly Ly s Ser Ile 15
Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
25 30
(D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 10. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
TUDNIVALÓK All. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino isav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Ly s Glu Leu
TUDNIVALÓKA 12. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális 50 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 11. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav 60 (B) TÍPUS: aminosav
HU 217 843 Β (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 12. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser G1 u Hi s Gin Leu
1 5
Gin As P Leu Al a Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓK A 13. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Alá Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓK A 14. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu Al a Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Al a Leu
TUDNIVALÓK A 15. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineári is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
G1 n Asp Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓKA 16. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineár: is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Le u Hi s Thr Al a
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 13. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Gly Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 14. számú szekvencia
Leu His Asp Leu Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii)HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 15. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális 50 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 16. számú szekvencia
Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 25 30
HU 217 843 Β (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális
TUDNIVALÓRA 17. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu H i s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg G1 u
20
Leu Hi s Thr Al a
(xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 17. számú szekvencia
Le u Hi s Asp 10 Arg Gly Arg Ser Ile 15
Leu Leu Glu Arg Leu Leu Lys Arg
25 30
TUDNIVALÓKA 18. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS : aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 29 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa29=lizin-OCCH2 - (OCH2CH2)2OCH3 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 18. számú szekvencia
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu Leu Hi s Asp 10 Arg Gly Arg Ser Ile 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg G1 u Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓKA 19. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS : nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely 30 (B) ELHELYEZKEDÉS: 29 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa29=lizin-OCCH2 - (OCH2CH2), 10OCH3 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 19. számú szekvencia
Al a 1 Va 1 Ser G1 u Hi s 5 Gin Leu Le u
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu
20
Leu Hi s Thr Al a
Hi s Asp 10 Arg Gly Arg Ser Ile 15
Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg
25 30
TUDNIVALÓK A 20. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 20. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser G1 u Hi s Gin Leu Leu
1 5
Gin As P Leu Ar g Arg Arg Al a Leu
20
Le u Hi s Thr Al a
His As p 10 Ly s Gly Arg Ser Ile 15
Al a Glu Al a Leu Al a Glu Al a
25 30
TUDNIVALÓK A 21. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS:
21. számú szekvencia
HU 217 843 Β
Al a 1 Val Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin As p Leu Arg Arg Arg Ser
20
Leu Hi s Thr Al a
Leu Hi s As p 10 Ly s Gly Ly s Ser I 1 e 15
Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Se r
25 30
TUDNIVALÓK A 22. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris
Alá Val Ser Glu His Gin Leu
1 5
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Alá
20
Leu His Thr Alá
TUDNIVALÓK A 23. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális
10 (xi) SZEKVENCIALEIRAS: 22. . számú szekvencia
Leu Hi s As p Ly s Gly Ly s Ser I 1 e
10 15
Phe Tyr As p Ly s Val Al a Glu Lys
25 30
(i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: pepiid (iii) HIPOTETIKUS : nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 8 20 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa8=norleucin (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 18 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa18=norleucin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 23. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser Glu I 1 e Gin Ph e
1 5
Ser Ser Xaa Glu Arg Va 1 Glu
20
Leu Hi s Asn Tyr
Xaa H i s As n 10 Leu Gly Ly s Hi s Leu 15
Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
25 30
TUDNIVALÓK A 24. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 8 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa8=norleucin (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 18 (D)MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa18=norleucin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 24. számú szekvencia
Al a 1 Va 1 Ser Glu I le 5 Gin Phe
Ser Ser Xa a Arg Arg Arg Glu
20
Le u Hi s Asn Tyr
Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
TUDNIVALÓK A 25. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 35 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS:
25. számú szekvencia
HU 217 843 Β
Al a 1 Val Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Me t Al a
35
Hi s As p 10 Ly s Gly Ly s Ser Ile 15
Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
25 30
TUDNIVALÓK A 26. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 10 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 8 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Xaa8=glutaminsav vagy arginin (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: régió (B) ELHELYEZKEDÉS: 1..10 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: „a 26. szekvencia az 5., 6., 7., 8., 9., 10., 11., 12., 13. és 14. szekvenciák 22. és 31. helyei között helyezkedik el” (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 26. számú szekvencia Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu
5 10
TUDNIVALÓK A 27. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 10 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 8 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Xaa8=glutaminsav, lizin vagy lizin-(OCCH2PEGX) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: régió (B) ELHELYEZKEDÉS: 1..10 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: „a 27. szekvencia a 15., 16., 17., 18. és 19. szekvenciák 22. és 31. helyei között helyezkedik el” (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 27. számú szekvencia Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu
5 10
TUDNIVALÓK A 28. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 10 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: peptid (B) ELHELYEZKEDÉS: 1..10 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: „a 28. szekvencia a 20. szekvencia 22. és 31. helyei között helyezkedik el” (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 28. számú szekvencia Alá Leu Alá Glu Alá Leu Alá Glu Alá Leu
5 10
TUDNIVALÓK A 29. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 10 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: peptid (B) ELHELYEZKEDÉS: 1..10 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: „a 29. szekvencia a 21. szekvencia 22. és 31. helyei között helyezkedik el” (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 29. számú szekvencia Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu
5 10
TUDNIVALÓK A 30. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 10 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: peptid (B) ELHELYEZKEDÉS: 1..10 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: „a 30. szekvencia a 22. szekvencia 22. és 31. helyei között helyezkedik el” (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 30. számú szekvencia Alá Phe Tyr Asp Lys Val Alá Glu Lys Leu
5 10
TUDNIVALÓK A 31. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 88 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁL: egyszálú (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (iii) HIPOTETIKUS: nem (iv) ANTI-SZENSZ: Nem (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 31. számú szekvencia
HU 217 843 Β
CCTCTAGATC TCCGCGGCGC TAGCATGGCT GTTTCTGAAC ATCAGCTGCT 50 TCATGACAAA GGTAAATCGA TTCAAGATCT GAGACGTC 88
TUDNIVALÓK A 32. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (D) ALAK: lineáris (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK 5 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (A) HOSSZÚSÁG: 90 bázispár (iii) HIPOTETIKUS: nem (B) TÍPUS: nukleinsav (iv) ANTI-SZENSZ: igen (C) SZÁL: egyszálú (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 32. számú szekvencia
CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATCTAGACA TAGTATGCAG CTTTTCAAGC 50 AGTTTCTCCA GCAGCTCGCG ACGTCTCAGA TCTTGAATCG 90
TUDNIVALÓK A 33. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 23 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁL: egyszálú (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (iii) HIPOTETIKUS: nem (iv) ANTI-SZENSZ: nem (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 33. számú szekvencia CCTCTAGATC TCCGCGCGCT AGC 23
TUDNIVALÓK A 34. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 24 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁL: egyszálú (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (iii) HIPOTETIKUS: nem (iv) ANTI-SZENSZ: igen (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 34. számú szekvencia CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATC 24
TUDNIVALÓK A 35. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ 20 (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein 25 (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 35. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser Gl u Ile Gin Phe
1 5
Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Asn Tyr
Leu His Asn Leu Gly Lys His Leu 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
TUDNIVALÓK A 36. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 34 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa=homoszerin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 36. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser Glu Ile Gin Phe
1 5
Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s As n Xaa
Leu His Asn Leu Gly Lys His Leu 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
TUDNIVALÓK A 37. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális 55 (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 34 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa=homoszerin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 37. számú szekvencia
HU 217 843 Β
Al a Va 1 Se r Glu lle Gin Phe
1 5
Se r Se r Le u Arg Arg Arg Glu
20
Le u Hi s As n Xaa
Leu Hi s Asn 10 Ly s Gly Ly s Hi s Leu 15
Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
25 30
TUDNIVALÓK A 38. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Lys Leu Lys Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓK A 39. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓK A 40. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 35 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a Pro
35
TUDNIVALÓK A 41. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 37 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális 10 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 38. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein 20 (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 39. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle 10 15
Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 40. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle 10 15
Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein 45 (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 41. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser G1 u H i s G1 n Le u
1 5
G1 n As P Leu Ar g Arg Ar g G1 u
20
Le u Hi s Thr Al a Gly Ar g Ar g
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle 10 15
Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 25 30
TUDNIVALÓK A 42. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 38 aminosav (B) TÍPUS : aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális
HU 217 843 Β (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSEG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 38 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Xaa=homoszerin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 42. számú szekvencia
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin As p Leu Arg Arg 20 Arg Glu
Leu Hi s Thr Al a Gly 35 Arg Arg
Leu Hi s As p 10 Ly s Gl y Ly s Ser He 1 5
Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
25 30
Xaa
TUDNIVALÓK A 43. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino isav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu H i s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Tyr
TUDNIVALÓK A 44. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris
Alá Val Ser Glu His Gin Leu
1 5
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu His Thr Alá
TUDNIVALÓK A 45. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ
(i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Le u Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓK A 46. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG : 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein
(iii) HIPOTETI KUS: nem
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gl n As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu H i s Thr Al a
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális 15 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 43. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein 25 (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 44. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Tyr Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 45. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Cys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 13 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa=Cy s [CH2CONH - (CH2)2NH(biotinil)] (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 46. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Xaa Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
HU 217 843 Β
TUDNIVALÓK A 47. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 13 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Xaa=[7 5 (dimetil-amino)-2-oxo-2H-l-benzopirán-4 acetil]-Lys (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 47. számú szekvencia
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu Leu
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu
20
Leu Hi s Thr Al a
Hi s Asp 10 Ly s Gly Xaa Ser Ile 15
Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
25 30
TUDNIVALÓK A 48. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 35 aminosav (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális
(B) TÍPUS: (D) ALAK: aminosav lineáris 20 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 48. . számú szekvencia
Al a Val Ser G1 u Hi s G1 n Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg G1 u Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a Gly
35
TUDNIVALÓK A 49. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 33 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 4 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa4= Glu(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 10 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa10= Asp(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 17 30 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa17= Asp(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 22 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa22= Glu(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 25 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa25= Glu(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 29 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa29= Glu(OCH3) (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 49. számú szekvencia
Al a 1 Val Ser Xaa Hi s 5 Gin Leu Leu
Gin Xa a Leu Arg Arg Arg Xa a Leu
20
Le u Hi s Al a
Hi s Xa a 10 Ly s Gly Ly s Ser Ile 15
Leu Xaa Ly s Leu Le u Xaa Ly s
25 30
TUDNIVALÓK AZ 50. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 33 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely
HU 217 843 Β (B) ELHELYEZKEDES: 4 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa4= Glu(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 10 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Xaa10= Asp(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 17 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: XaaI7= Asp(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely
Al a 1 Va 1 Ser Xaa Hi s 5 Gin Leu
Gin Xaa Leu Arg Arg Arg Xaa
20
Leu Hi s Al a
TUDNIVALÓK AZ 51. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein
(iii) HIPOTETI KUS: nem
Al a Val Se r Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Xaa
(B) ELHELYEZKEDES: 22 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa22= G1u(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 25 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa25 = G1u(OCH3) (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 29 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa29= G1u(OCH3) (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 50. számú szekvencia
Leu His Xaa Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Xaa Lys Leu Leu Xaa Lys 25 30 (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 34 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Xaa=homo szerin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 51. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
TUDNIVALÓK AZ 52. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 35 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a Pro
35
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális 40 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 52. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
TUDNIVALÓK AZ 53. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineár: is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Pro
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 53. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
HU 217 843 Β
TUDNIVALÓK AZ 54. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 54. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser Glu Hi s G1 n Le u
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Pro
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
TUDNIVALÓK AZ 55. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 33 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 55. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Pro
Leu His As p 10 Ly s Gly Lys Ser Ile 15
Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
25 30
TUDNIVALÓK AZ 56. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 32 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS : nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális 30 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 56. számú szekvencia
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu Leu Hi s As p 10 Ly s G1 y Ly s Ser I le 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Pro
TUDNIVALÓK AZ 57. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 37 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin As p Leu Arg Arg 20 Arg Glu
Leu Hi s Thr Arg Ser 35 Al a Trp
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 57. számú szekvencia
45
Leu Hí s Asp Ly s Gly Ly s Ser Ile
10 15
Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
25 30
TUDNIVALÓK AZ 58. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 42 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS:
58. számú szekvencia
HU 217 843 Β
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5
Gin As p Leu Arg Arg 20
Leu Hi s Thr Arg Gly 35
Gin Leu Leu Hi s As p 10
Arg Glu Leu Leu Glu 25
Arg Arg Thr Arg Ser 40
Ar g Gly Arg Ser I 1 e
15
Ar g Leu Leu Glu Arg
30
Al a Trp
TUDNIVALÓK AZ 59. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (iii) HIPOTETIKUS: nem (A) HOSSZÚSÁG: 42 aminosav 10 (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális
(B) TÍPUS: (D) ALAK: aminosav lineáris (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 59. számú szekvencia
Al a Val Ser Glu Hi s Gin Leu Le u His Asp Arg Gly Arg Ser I 1e
1 5 10 1 5
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
20 25 30
Leu His Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Alá Trp
35 40
TUDNIVALÓK A 60. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 42 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 13 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa13=(dihidrocinnamoil)Lys (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 60. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gl n Le u
1 5
Gin As P Leu Arg Ar g Ar g Gl u
20
Leu Hi s Thr Arg Gl y Ar g Ar g
Leu Hi s As p 10 Arg Gly Xaa Ser Ile 15
Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg
25 30
Thr Arg Ser Al a Trp
40
TUDNIVALÓK A 61. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 8 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Leu8=norleucin (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 18 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Leu18=norleucin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 61. számú szekvencia
Al a 1 Va 1 Ser Glu I 1 e 5 Gl n Phe
Ser Ser Leu Thr Arg Ser Al a
20
Va 1 Hi s As n Tyr
Leu His Asn Leu Gly Lys His Leu 10 15
Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp 25 30
TUDNIVALÓK A 62. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 35 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS:
62. számú szekvencia
HU 217 843 Β
Al a Val Ser Glu Hi s GI n Le u
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Me t Al a
Le u H i s As p 10 Lys Gly Ly s Ser Ile 15
Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
25 30
TUDNIVALÓK A 63. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 33 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK : lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein
(iii) HIPOTETI KUS: nem
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Xaa
TUDNIVALÓK A 64. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris
Alá Val Ser Glu His Gin Leu
1 5
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Phe
20
Leu His Thr Alá
TUDNIVALÓK A 65. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ
(i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineári is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓK A 66. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino 'sav
(D) ALAK: lineár is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Le u Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓK A 67. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 33 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa=Thr-1,4-diamino-butiril-laktám (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 63. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Glu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális 25 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 64. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Phe Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein 35 (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 65. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu His Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 66. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu His Leu Leu Glu Lys 25 30 (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris
HU 217 843 Β (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Le u
1 5
Gin As P Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
TUDNIVALÓK A 68. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK
(A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris
Alá Val Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu
20
Ile His Thr Al a
TUDNIVALÓK A 69. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK
(A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav
(D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: (iii) HIPOTETIKUS: nem protein
Alá Val Ser Glu His Gin Leu
1 5
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu 20
Leu Hi s Thr Xaa
TUDNIVALÓK A 70. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Le u Hi s Thr Xa a
TUDNIVALÓK A 71. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav
(B) TÍPUS: amino sav
(D) ALAK: lineári is
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu
20
Leu Hi s Thr Al a
(v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 67. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Ile Alá Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 68. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Glu 25 30 (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 34 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa=homoszerin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 69. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 34 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa=homoszerin (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 70. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS.· 71. számú szekvencia
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
HU 217 843 Β
TUDNIVALÓK A 72. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 37 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 72. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser G1 u Hi s G1 n Leu Le u Hi s As p Ly s Gly Ly s Ser Ile
1 5 10 1 5
Gin As P Leu Ar g Arg Ar g Glu Leu Leu G1 u Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Ar g Ser Al a Trp
TUDNIVALÓK A 73. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 36 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS : 36 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Xaa=Ala 3 -(2-naftil)-L-alanin
(iii) HIPOTETIKUS: nem 20 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 73. . számú szekvencia
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
20 25 30
Leu His Thr Arg Ser Xaa
35
TUDNIVALÓK A 74. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 37 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein 30 (iii)HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 74. számú szekvencia
Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Le u
1 5
Gin As p Leu Arg Arg Arg G1 u
20
Leu Hi s Thr Al a Ser Al a Tr P
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile 10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 25 30
TUDNIVALÓK A 75. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 38 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin As p Leu Arg Arg 20 Arg Glu
Leu Hi s Thr Al a Glu 35 Ile Arg
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális
45 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 75. számú szekvencia
Leu Hi s As p Ly s Gly Lys Ser Ile
10 15
Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Lys
25 30
Al a
TUDNIVALÓK A 76. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 37 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS:
76. számú szekvencia
HU 217 843 Β
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu Leu H i s As p 10 Ly s Gly Ly s Ser I 1 e 15
Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s
20 25 30
Leu Hi s Thr Al a Glu Ile Arg
35
TUDNIVALÓK A ΊΊ. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 36 aminosav (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális
(B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 77. számú szekvencia
Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
20 25 30
Leu His Thr Ala Glu Ile
35
TUDNIVALÓK A 78. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 35 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris
Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Leu
Gin As p Leu Arg Arg 20 Arg Glu
Leu Hi s Thr Al a Glu 35
TUDNIVALÓK A 79. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 34 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 8 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Leu8=norleucin (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális
(xi) SZEKVENCIALEIRAS: 78. , számi ú szekvencia
25
Leu Hi s Asp Lys Gly Lys Ser Ile
10 15
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ly s
25 30
(ix) SAJÁTOS JELLEGZETESS ÉG
(A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 18 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Leu18=norleucin (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG 40 (A) NÉV: módosított hely (B) ELHELYEZKEDÉS: 34 (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa=homoszerin-lakton (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 79. számú szekvencia
Al a 1 Va 1 Ser Glu Ile 5 Gin Phe
Ser Ser Leu Glu Arg Va 1 Glu
20
Va 1 Hi s Asn Xaa
Leu H i s Asn 10 Ly s Gly Lys Hi s Leu 15
Trp Leu Arg 25 Ly s Ly s Leu Gin As p 30
TUDNIVALÓK A 80. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 32 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS:
80. számú szekvencia
HU 217 843 Β
Ser Glu Hi s Gin Leu Leu Hi s
1 5
Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu
20
Thr Al a
TUDNIVALÓK A 81. , SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ
(i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 28 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris
Leu Leu His Asp Lys Gly Lys 1 5
Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu 20
TUDNIVALÓK A 82. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 27 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris
Leu His Asp Lys Gly Lys Ser 1 5
Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu 20
TUDNIVALÓK A 83. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 41 aminosav
(B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 83. . számú szekvencia
Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile Gin Asp
1 5 10 15
Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His
20 25 30
Leu His Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Alá Trp
35 40
As p Ly s Gly 10 Ly s Ser Ile Gin As p 1 5
Gl u Ly s Leu 25 Leu Glu Ly s Leu Hi s 30
(ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső 10 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 81. számú szekvencia
Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg 10 15
Glu Lys Leu His Thr Alá 25 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 82. számú szekvencia
Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu 10 15
Lys Leu His Thr Alá 25 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein 30 (iii)HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső
TUDNIVALÓK A 84. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 41 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 84. számú szekvencia
Leu 1 Leu Hi s As p Arg 5 Gly Arg
Glu Leu Leu Glu Arg Leu Le u
20
Thr Arg Ser Al a Trp
35
Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg 10 15
Glu Arg Leu His Alá Gly Arg Arg 25 30
TUDNIVALÓK A 85. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 10 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid 60 (iii)HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (D) MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés:
Xaa22=glutaminsav, Glu(OCH3), hisztamin vagy fenil-alanin;
HU 217 843 Β
Xaa23=leucin vagy fenil-alanin;
Xaa25 = glutaminsav, Glu(OCH3), hisztamin vagy fenil-alanin;
Xaa26=lizin vagy hisztidin;
Xaa28=leucin vagy izoleucin;
Xaa29=alanin, arginin vagy glutaminsav;
Xaa30=lizin vagy glutaminsav;
Xaa31=leucin vagy izoleucin (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (B) ELHELYEZKEDÉS: 1..10 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 85. számú szekvencia Xaa22 Xaa23 Leu Xaa25 Xaa26 Leu Xaa28 Xaa30 Xaa31 1 5 10
TUDNIVALÓK A 86. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK (A) HOSSZÚSÁG: 10 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) HIPOTETIKUS: nem (v) FRAGMENS TÍPUSA: belső (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG (D)MÁS TUDNIVALÓ: megjegyzés: Xaa22=glutaminsav, Glu(OCH3), hisztamin vagy fenil-alanin;
Xaa23=leucin vagy fenil-alanin;
Xaa25 = glutaminsav, Glu(OCH3), hisztamin vagy fenil-alanin;
Xaa29 = glutaminsav, lizin vagy lizin (COCH2PEGX), ahol a PEGX egy polietilénglikol-metil-észter-gyök 100 és 10 000 közti molekulatömeggel (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG:
(B) ELHELYEZKEDÉS: 1..10 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 86. számú szekvencia Xaa2 Xaa23 Leu Xaa25 Arg Leu Leu Xaa29 Arg Leu

Claims (18)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Módosított paratiroid hormonnal rokon polipeptid (PTHrp), amelynek képlete Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Leu His Xaa10 Xaa11 Gly Xaa13 Ser Ile Gin Xaa17 Leu Xaa19 Xaa2» Xaa21
    Xaa22-31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 Term, ahol a képletben
    Xaa1 nincs jelen, vagy jelentése Alá;
    Xaa2 nincs jelen, vagy jelentése Val;
    Xaa3 nincs jelen, vagy jelentése Ser;
    Xaa4 nincs jelen, vagy jelentése Glu vagy Glu(OCH3); Xaa5 nincs jelen, vagy jelentése His vagy Alá;
    Xaa6 nincs jelen, vagy jelentése Gin;
    Xaa7 nincs jelen, vagy jelentése Leu;
    Xaa10 és Xaa17 jelentése egymástól függetlenül Asp vagy Asp(OCH3);
    Xaa11 jelentése Lys, Arg vagy Leu;
    Xaa13jelentése Lys, Arg, Tyr, Cys, Leu, Cys [CH2CONH(CH2)2NH-biotinil]-, Lys (7-dimetilamino-2-oxo-2H-l-benzopirán-4-acetil)- vagy Lys (dihidrocinnamoil)-csoport;
    Xaa20 jelentése Arg vagy Leu;
    Xaa19 és Xaa21 jelentése egymástól függetlenül Lys,
    Alá vagy Arg;
    Xaa22~31 jelentése az alábbiak valamelyike:
    a) Xaa22 Xaa23 Leu Xaa25 Xaa26 Leu Xaa28 Xaa29
    Xaa30 Xaa31 ahol a képletben
    Xaa22 és Xaa25 jelentése egymástól függetlenül Glu, Glu(OCH3), His vagy Phe;
    Xaa23 jelentése Leu vagy Phe;
    Xaa26 jelentése Lys vagy His;
    Xaa28 és Xaa31 jelentése egymástól függetlenül Leu vagy Ile;
    Xaa29 jelentése Alá, Arg vagy Glu; és
    Xaa30 jelentése Lys vagy Glu (85. számú szekvencia);
    az a) előnyösen
    Glu Leu Leu Gly Lys Leu Leu Xaa29 Lys Leu 1 5 10 ahol a képletben
    Xaa29 jelentése Glu vagy Arg (26. számú szekvencia); vagy
    b) Xaa22 Xaa23 Leu Xaa25 Arg Leu Leu Xaa29 Arg Leu, ahol a képletben
    Xaa22 és Xaa25 jelentése egymástól függetlenül Glu, Glu(OCH3), His vagy Phe;
    Xaa23 jelentése Leu vagy Phe;
    Xaa29 jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX), ahol a PEGX egy polietilénglikol-metil-étergyök 100 és 10 000 közti molekulatömeggel (86. számú szekvencia);
    a b) előnyösen
    Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa29 Arg Leu 1 5 10 ahol a képletben
    Xaa29 jelentése Glu, Lys vagy Lys(COCH2PEGX), ahol a PEGX egy polietilénglikol-metil-étergyök 100 és 10 000 közti molekulatömeggel (27. számú szekvencia); vagy
    c) Alá Leu Alá Glu Alá Leu Alá Glu Alá Leu
    1 5 10 (28. számú szekvencia); vagy
    d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu
    1 5 10 (29. számú szekvencia); vagy
    e) Alá Phe Tyr Asp Lys Val Alá Glu Lys Leu
    1 5 10 (30. számú szekvencia);
    Xaa32 jelentése His, Pro vagy Lys;
    Xaa33 nincs jelen, vagy jelentése Pro, Thr, Glu vagy Alá; Xaa34 nincs jelen, vagy jelentése Pro, Arg, Met, Alá, hSer, hSer lakton, Tyr, Leu vagy 1,4-diamino-butiril-laktám;
    Xaa35 nincs jelen, vagy jelentése Pro, Glu, Ser, Alá vagy Gly;
    Xaa36 nincs jelen, vagy jelentése Alá, Arg vagy Ile;
    HU 217 843 Β
    Xaa37 nincs jelen, vagy jelentése Arg, Trp vagy 3-(2naftil)-L-alanin;
    Xaa38 nincs jelen, vagy jelentése Alá vagy hSer, vagy Xaa38-42 jelentése Thr Arg Ser Alá Trp; és
    Term jelentése OR vagy NR2, ahol az egyes R-ek jelen- 5 tése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkil- vagy fenil-(l-4 szénatomos alkilj-csoport;
    valamint mindezek gyógyászatilag elfogadható sói, azzal a feltétellel, hogy az alábbi jelentések nem fordul- 10 hatnak elő egyidejűleg: Xaa22 jelentése Phe, Xaa23 jelentése Phe, Xaa25 jelentése His, Xaa26 jelentése Lys vagy His, Xaa28 jelentése Ile, Xaa29 jelentése Alá, Xaa30 jelentése Glu, és Xaa31 jelentése Ile.
    Elsőbbsége: 1994.07.01.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amelyben Xaa22 31 jelentése a 26. számú szekvencia.
    Elsőbbsége: 1994.07.01.
  3. 3. A 2. igénypont szerinti polipeptid, amelyben mind Xaa, mind Xaa13 jelentése Lys; és mind Xaa19, mind Xaa21 jelentése Arg.
    Elsőbbsége: 1994.07.01.
  4. 4. A 3. igénypont szerinti polipeptid, amelynek képlete az alábbiak valamelyike:
    Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 15 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Arg Ly s 20 25 30 Leu Hi s Thr Al a OH I [5. számú szekvencia); vagy Al a Val Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 15 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Le u Hi s Thr Al a OH I [6. számú szekvencia); vagy Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 15 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Leu Hi s Thr Al a nh2 (7. számú szekvencia); vagy Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Ly s Gly Lys Ser Ile 1 5 10 15 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Leu Hi s Thr hSe r NH 2 (8. számú szekvencia); vagy Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 15 G1 n As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Leu Hi s Thr hSe r 1 ak t on (9. számú szekvencia); vagy Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser I 1 e 1 5 10 15 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Leu Hi s Thr Al a Gly Arg Arg OH (10. számú szekvencia); vagy 35 Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu Hi s As p Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 15 Gl n As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Leu Ly s Glu Leu nh2 (11. számú szekvencia); vagy Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu Hi s As p Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 15 Gl n As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Le u Pro nh2 (56. számú szekvencia); vagy Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gl n Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 15 Gl n As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Le u Hi s Thr 1,4-diamino-butiril-laktám (63. számú szekvencia). Elsőbbsége: 1994. 07. 01.
    HU 217 843 Β
  5. 5. A 2. igénypont szerinti polipeptid, amelyben Elsőbbsége: 1994.07.01.
    mind Xaa11, mind Xaa13 jelentése Lys; és Xaa19 és 6. Az 5. igénypont szerinti polipeptid, amelynek
    Xaa21 egyike Arg és másika Alá. képlete az alábbiak valamelyike:
    Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu Hi s As p Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 1 5 Gin As p Leu Al a Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Leu Hi s Thr Al a nh2 (12. számú szekvencia); vagy Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His As p Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 15 Gin As p Leu Arg Arg Alá Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Leu H i s Thr Al a NH2 (13. számú szekvencia).
    Elsőbbsége: 1994. 07. 01. 8. A 7. igénypont szerinti polipeptid, amely az aláb7. A 2. igénypont szerinti polipeptid, amelyben bi képlettel bír:
    Xaa11 és Xaa13 egyikének jelentése Leu, és másikának jelentése Lys; és mind Xaa19, mind Xaa21 jelentése Arg. 20
    Elsőbbsége: 1994. 07. 01.
    Alá Val Ser Glu Alá Gin Leu Leu His Asp Leu Gly Lys Ser Ile
    15 10 15
    Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys
    20 25 30
    Leu His Alá Leu OH (14. számú szekvencia).
    Elsőbbsége: 1994.07.01. 10. A 9. igénypont szerinti polipeptid, amelyben
  6. 9. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amelyben 30 mind Xaa11, mind Xaa13 jelentése Lys; és mind Xaa19,
    Xaa22 31 jelentése a 85. számú szekvencia. mind Xaa21 jelentése Arg.
    Elsőbbsége: 1994.07.01. Elsőbbsége: 1994.07.01.
  7. 11. A 10. igénypont szerinti polipeptid, amely az alábbi képlettel bír:
    Al a Va 1 Ser Glu Hi s G1 n Leu Leu Hi s As p Ly s Gly Lys Ser Ile 1 5 10 1 5 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Hi s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Leu Hi s Thr Al a nh2 (66. számú s: zekven cia).
    Elsőbbsége: 1994. 07. 01. 13. A 12. igénypont szerinti polipeptid, amelyben
  8. 12. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amelyben mind Xaa11, mind Xaa13 jelentése Lys, vagy mindketXaa22-31 jelentése a 27. számú szekvencia. tőé Arg; és mind Xaa19, mind Xaa21 jelentése Arg.
    Elsőbbsége: 1994.07.01. 45 Elsőbbsége: 1994.07.01.
  9. 14. A 13. igénypont szerinti polipeptid, amely az alábbiak valamelyike:
    Al a Va 1 Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Ly s Gly Ly s Ser Ile 1 5 10 15 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 20 25 30 Leu H i s Thr Al a OH (15. számú sz< :kvencia); va gy Al a Val Ser Glu His Gin Leu Leu His As p Arg Gly Arg Ser Ile 1 5 10 15 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 20 25 30 Leu Hi s Thr Al a OH (16. számú sz< íkvencia); va gy
    HU 217 843 Β
    Al a 1 Va 1 Ser Glu Hi s 5 Gin Le u Leu His As p 10 Arg Gly Arg Ser I le 15 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Ly s Arg 20 25 30 Leu Hi s Thr Al a OH (17. számú szekvencia); vagy Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Le u Leu His As p Arg Gly Arg Ser I 1 e 1 5 10 1 5 Gin As p Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu 20 25 Lys(COCH2PEG2) Arg Leu Hi s Thr Alá OH (18. számú szekvencia); vagy
    Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Le u Hi s As p Arg Gly Arg Ser I le 1 5 10 15 G1 n As p Leu Arg Arg Arg Glu Le u Le u Glu Arg Leu Leu 20 25 Ly s(COCH2PEG5 0 00) Arg Leu Hi s Thr Al a OH (19. számú szekvencia).
    Elsőbbsége: 1994. 07. 01. 16. A 15. igénypont szerinti polipeptid, amely az
  10. 15. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amelyben 20 alábbi képlettel bír:
    Xaa22-31 jelentése a 28. számú szekvencia.
    Elsőbbsége: 1994. 07.01. Al a Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser I le 1 5 10 15 Gin Asp Leu Arg Arg Arg Alá Leu Alá Glu Alá Leu Alá Glu Alá 20 25 30 Leu His Thr Alá NH2 (20. számú szekvencia). Elsőbbsége: 1994.07.01. 30 18. A 17. igénypont szerinti polipeptid, amely az
  11. 17. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amelyben alábbi képlettel bír: Xaa22-31 jelentése a 29. számú szekvencia.
    Elsőbbsége: 1994.07.01.
    Al a Va 1 Ser Glu Hi s Gin Leu Leu His Asp Ly s Gly Ly s Ser I le 1 5 10 15 Gin As p Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser 20 25 30 Leu Hi s Thr Al a NH, (21. számú szekvencia).
    Elsőbbsége: 1994.07.01. 20. A 19. igénypont szerinti polipeptid, amely az
  12. 19. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amelyben alábbi képlettel bír:
    Xaa22-31 jelentése a 30. számú szekvencia.
    Elsőbbsége: 1994.07.01.
    Al a Va 1 Ser Glu Hi s G1 n Leu Leu H i s As p Ly s Gly Ly s Ser I le 1 5 10 1 5 Gin As p Leu Arg Arg Arg Al a Phe Tyr As p Ly s Val Al a Glu Ly s 20 25 30 Leu Hi s Thr Al a NH2 (22. számú s; zekven icia).
    Elsőbbsége: 1994. 07. 01.
  13. 21. Módosított paratiroid hormon (PTH) polipeptid, amely az alábbi képlettel bír:
    Xaa1 Val Ser Glu IIe Gin Xaa7 Xaa8 His Asn Leu
    Gly Lys His Leu Xaa16 Ser Xaa18 Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22 31 His Asn Xaa34 Term., ahol a képletben Xaa1 jelentése Ser vagy Alá;
    Xaa7 jelentése Leu vagy Phe;
    Xaa8 jelentése Met vagy Nle;
    Xaa16 jelentése Asn vagy Ser;
    55 Xaa18 jelentése Leu, Met vagy Nle;
    Xaa19 jelentése Glu vagy Arg;
    Xaa21 jelentése Val vagy Arg;
    Xaa22-31 jelentése a 26. számú, 27. számú, 28. számú, 29. számú, 30. számú, 85. számú vagy 86. számú
    60 szekvenciák valamelyike;
    HU 217 843 Β
    Xaa34 jelentése Phe vagy Tyr;
    Term. jelentése OH vagy NR2, ahol R jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, és mindezek gyógyászatilag elfogadható sói.
    Elsőbbsége: 1994.07. 01. 5 Al a Va 1 Ser Glu I 1 e Gin Phe Nle Hi s As n Leu Gly Lys His Leu 1 5 10 15 Ser Ser NI e Glu Arg Val Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Leu Hi s Asn Tyr nh2 (23. számú szekvencia); vagy Al a Va 1 Ser Glu I 1 e Gin Phe Nle Hi s As n Leu Gly Lys His Leu 1 5 10 15 Ser Ser NI e Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Ly s Leu Leu Glu Ly s 20 25 30 Le u Hi s Asn Tyr nh2 (24. számú szekvencia). Elsőbbsége: 1994. 07. 01. zal jellemezve, hogy ezeket emlősök csonttól
  14. 23. Gyógyászati kompozíció csonttömeg csökkenésével jellemezhető állapotok megelőzésére vagy kezeié- 20 sére, azzal jellemezve, hogy valamely 1. vagy 21. igénypont szerinti polipeptidnek vagy gyógyászatilag elfogadható sójának gyógyászatilag hatásos mennyiségét tartalmazza valamely gyógyászatilag elfogadható hordozóval együtt. 25
    Elsőbbsége: 1994.07.01.
  15. 24. Gyógyászati kompozíció egységdózis formában csonttömeg csökkenésével jellemezhető állapotok kezelésére, azzal jellemezve, hogy egy dózis mintegy 0,5 pg és mintegy 50 pg közti mennyiséget tartalmaz vala- 30 mely 1. vagy 21. igénypontok szerinti polipeptidből vagy gyógyászatilag elfogadható sójából valamely gyógyászatilag elfogadható hordozóval együtt.
    Elsőbbsége: 1994.07.01.
  16. 25. Az 1. vagy 21. igénypont szerinti vegyületek 35 vagy gyógyászatilag elfogadható sóik alkalmazása, az22. A 21. igénypont szerinti polipeptid, amely az alábbiak valamelyike:
    kenésével jellemezhető állapotainak, elsősorban oszteoporózisnak kezelésére szolgáló gyógyszerek előállítására alkalmazzuk.
    Elsőbbsége: 1994.07.01.
  17. 26. Eljárás az 1. vagy 21. igénypont szerinti polipeptidek vagy gyógyászatilag elfogadható sóik előállítására szilárd fázisú szintézissel, azzal jellemezve, hogy egymás után összekapcsolunk védett aminosavakat megfelelő gyantahordozón, az oldallánc- és Na-védőcsoportokat eltávolítjuk, majd a polipeptidet a gyantahordozóról lehasítjuk.
    Elsőbbsége: 1992.07. 14.
  18. 27. Eljárás az 1. vagy 21. igénypont szerinti polipeptidek vagy gyógyászatilag elfogadható sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy az említett polipeptidet hordozó gént expresszáljuk.
HU9500110A 1992-07-14 1993-07-13 Paratiroid hormon (PTH) rokon polipeptidek, eljárások ezek előállítására és az ezeket tartalmazó gyógyszerek osteoporosis kezelésére HU217843B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/915,247 US5589452A (en) 1992-07-14 1992-07-14 Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9500110D0 HU9500110D0 (en) 1995-03-28
HUT69628A HUT69628A (en) 1995-09-28
HU217843B true HU217843B (hu) 2000-04-28

Family

ID=25435450

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9500110A HU217843B (hu) 1992-07-14 1993-07-13 Paratiroid hormon (PTH) rokon polipeptidek, eljárások ezek előállítására és az ezeket tartalmazó gyógyszerek osteoporosis kezelésére
HU95P/P00281P HU211348A9 (en) 1992-07-14 1995-06-20 Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU95P/P00281P HU211348A9 (en) 1992-07-14 1995-06-20 Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis

Country Status (17)

Country Link
US (8) US5589452A (hu)
EP (2) EP0651765B1 (hu)
JP (1) JP4106082B2 (hu)
KR (3) KR100458350B1 (hu)
AT (1) ATE202115T1 (hu)
AU (1) AU671851B2 (hu)
CA (1) CA2140281C (hu)
DE (1) DE69330347T2 (hu)
DK (1) DK0651765T3 (hu)
ES (1) ES2159293T3 (hu)
FI (1) FI120586B (hu)
GR (1) GR3036521T3 (hu)
HU (2) HU217843B (hu)
MX (1) MX9304226A (hu)
NZ (1) NZ254554A (hu)
PT (1) PT651765E (hu)
WO (1) WO1994001460A1 (hu)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6921750B2 (en) 1995-07-13 2005-07-26 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S. Analogs of parathyroid hormone
US7410948B2 (en) 1995-07-13 2008-08-12 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas Analogs of parathyroid hormone

Families Citing this family (117)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5814603A (en) * 1992-06-12 1998-09-29 Affymax Technologies N.V. Compounds with PTH activity
US5977070A (en) * 1992-07-14 1999-11-02 Piazza; Christin Teresa Pharmaceutical compositions for the nasal delivery of compounds useful for the treatment of osteoporosis
US5589452A (en) * 1992-07-14 1996-12-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis
US5821225A (en) * 1992-07-14 1998-10-13 Syntex (U.S.A.) Inc. Method for the treatment of corticosteroid induced osteopenia comprising administration of modified PTH or PTHrp
AU672790B2 (en) * 1992-07-15 1996-10-17 Novartis Ag Variants of parathyroid hormone and its fragments
CN1070500C (zh) * 1993-07-13 2001-09-05 森德克斯(美国)股份有限公司 甲状旁腺激素类似物和甲状旁腺激素相关肽：合成和治疗骨质疏松症的用途
US6110892A (en) 1994-06-20 2000-08-29 National Research Council Of Canada Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis
US5955425A (en) * 1996-08-02 1999-09-21 National Research Council Of Canada Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis
US5955574A (en) * 1995-07-13 1999-09-21 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A. Analogs of parathyroid hormone
US5969095A (en) * 1995-07-13 1999-10-19 Biomeasure, Inc. Analogs of parathyroid hormone
US5723577A (en) * 1995-07-13 1998-03-03 Biomeasure Inc. Analogs of parathyroid hormone
DE69713485T2 (de) * 1996-02-01 2003-01-30 Chugai Seiyaku K.K., Tokio/Tokyo Medikamente für die Behandlung oder Vorbeugung von Thrombocytopenie
TW505654B (en) * 1996-07-30 2002-10-11 Hoffmann La Roche Synthesis of analogs of PTH and PTHrP
ES2248853T3 (es) * 1996-07-31 2006-03-16 The General Hospital Corporation Nuevos analogos del peptido relacionado con la hormona paratiroidea.
US6273634B1 (en) 1996-11-22 2001-08-14 Shell Oil Company Connector for an expandable tubing string
US6335195B1 (en) * 1997-01-28 2002-01-01 Maret Corporation Method for promoting hematopoietic and mesenchymal cell proliferation and differentiation
US20020168718A1 (en) * 1997-04-03 2002-11-14 California Institute Of Technology Enzyme-mediated modification of fibrin for tissue engineering
US6434542B1 (en) * 1997-04-17 2002-08-13 Smithkline Beecham Corporation Statistical deconvoluting of mixtures
EA002819B1 (ru) 1997-05-14 2002-10-31 Авентис Фармасьютикалз Продактс Инк. Циклическое пептидное соединение и его применение, бициклопептидное соединение, пептидное соединение и его применение, фармацевтическая композиция
WO1999012561A2 (en) * 1997-09-09 1999-03-18 F. Hoffman-La Roche Ag FRACTURE HEALING USING PTHrP ANALOGS
US6248587B1 (en) 1997-11-26 2001-06-19 University Of Southern Cailfornia Method for promoting mesenchymal stem and lineage-specific cell proliferation
EP1053004A2 (en) * 1998-02-09 2000-11-22 University Of Southern California Use of angiotensin analogues for promoting erythropoiesis
US7173011B2 (en) * 2000-11-20 2007-02-06 University Of Southern California Radiation therapy methods
US6455500B1 (en) 1998-03-10 2002-09-24 University Of Southern California Radiation therapy methods
WO1999046285A2 (en) 1998-03-11 1999-09-16 University Of Southern California Method of promoting production of living tissue equivalents
ATE392431T1 (de) 1998-05-05 2008-05-15 Sod Conseils Rech Applic Pth2 rezeptor selektive verbindungen
ATE292976T1 (de) 1998-05-11 2005-04-15 Univ Southern California Verwendung von angiotensin analogen zur herstellung eines arzneimittels zur steigerung des ueberlebens der weissen blutzellen und mobilisierung von haematopoietischen stammzellen nach einer chemotherapeutischen behandlung
US6762167B1 (en) 1998-05-11 2004-07-13 University Of Southern California Methods for treating a patient undergoing chemotherapy
US6916783B2 (en) 1998-07-13 2005-07-12 University Of Southern California Methods for accelerating bone and cartilage growth and repair
JP3686335B2 (ja) 1998-07-13 2005-08-24 ユニヴァースティ オブ サザーン カリフォルニア 骨および軟骨成長と修復を促進する方法
EP1105149A1 (en) 1998-08-13 2001-06-13 University Of Southern California Methods to increase blood flow to ischemic tissue
US7241730B2 (en) 1998-08-27 2007-07-10 Universitat Zurich Enzyme-mediated modification of fibrin for tissue engineering: fibrin formulations with peptides
US7601685B2 (en) * 1998-08-27 2009-10-13 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Growth factor modified protein matrices for tissue engineering
US6894022B1 (en) 1998-08-27 2005-05-17 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Growth factor modified protein matrices for tissue engineering
EP1123401A1 (en) 1998-10-22 2001-08-16 The General Hospital Corporation BIOACTIVE PEPTIDES AND PEPTIDE DERIVATIVES OF PARATHYROID HORMONE (PTH) AND PARATHYROID HORMONE-RELATED PEPTIDE (PTHrP)
EP1175444B1 (en) * 1998-11-25 2008-01-23 The General Hospital Corporation Amino-terminal modified parathyroid hormone (pth) analogs
WO2000032771A1 (en) * 1998-11-30 2000-06-08 The General Hospital Corporation Pth1r and pth3r receptors, methods and uses thereof
US6689566B1 (en) 1999-01-14 2004-02-10 Scantibodies Laboratory, Inc. Methods, kits, and antibodies for detecting parathyroid hormone
US7820393B2 (en) * 1999-01-14 2010-10-26 Scantibodies Laboratory, Inc. Methods, kits and antibodies for detecting parathyroid hormone
US6730775B1 (en) 1999-03-23 2004-05-04 University Of Southern California Methods for limiting scar and adhesion formation
US7338938B2 (en) * 1999-05-10 2008-03-04 University Of Southern California Methods for treating a patient undergoing chemotherapy
US20080108086A1 (en) * 1999-06-02 2008-05-08 Cantor Thomas L Parathyroid hormone antagonists and uses thereof
US6923968B2 (en) * 2000-08-10 2005-08-02 Scantibodies Laboratory, Inc. Cyclase inhibiting parathyroid hormone antagonists or modulators and osteoporosis
US7893021B2 (en) * 1999-06-02 2011-02-22 Scantibodies Laboratory, Inc. Parathyroid hormone antagonists and uses thereof
US7022815B1 (en) 1999-09-29 2006-04-04 The General Hospital Corporation Polypeptide derivatives of parathyroid hormone (PTH)
ATE412670T1 (de) 1999-09-29 2008-11-15 Gen Hospital Corp Parathyroid hormon (pth) polypeptidderivate
AU7734800A (en) 1999-09-29 2001-04-30 General Hospital Corporation, The Polypeptide derivatives of parathyroid hormone (pth)
GB9924351D0 (en) 1999-10-14 1999-12-15 Brennan Frank Immunomodulation methods and compositions
AU2001262906A1 (en) * 2000-02-11 2001-08-20 Cellomics, Inc. Peptide biosensors for anthrax protease
US6756480B2 (en) * 2000-04-27 2004-06-29 Amgen Inc. Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein
US20050124537A1 (en) * 2000-04-27 2005-06-09 Amgen Inc. Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein
EP1339312B1 (en) * 2000-10-10 2006-01-04 Microchips, Inc. Microchip reservoir devices using wireless transmission of power and data
AU2002308522A1 (en) * 2001-05-01 2002-11-11 University Of Southern California Methods for inhibiting tumor cell proliferation
DE10123668A1 (de) * 2001-05-16 2002-11-28 Johein Harmeyer Anwendung einer Hormonpräparation zur Induzierung und Stimulierung des intestinalen Calciumtransports
US20030232324A1 (en) * 2001-05-31 2003-12-18 Chiron Corporation Chimeric alphavirus replicon particles
KR100491737B1 (ko) * 2001-07-20 2005-05-27 주식회사 한국아이템개발 공기 정화 기능의 모기 퇴치기
CA2454275C (en) * 2001-07-23 2012-10-23 The General Hospital Corporation Conformationally constrained parathyroid hormone (pth) analogs
US20050032685A1 (en) * 2001-09-17 2005-02-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Remedies for bone loss
US7247609B2 (en) * 2001-12-18 2007-07-24 Universitat Zurich Growth factor modified protein matrices for tissue engineering
MXPA04006021A (es) * 2001-12-18 2005-08-19 Eth Zuerich Matrices de proteina modificada con factor de crecimiento para ingenieria de tejidos.
MXPA04006728A (es) * 2002-01-10 2005-08-19 Osteotrophin Llc Tratamiento de desordenes oseos con medicamentos anabolicos esqueleticos.
US20050148763A1 (en) * 2002-02-01 2005-07-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Peg-binding pth or peg-binding pth derivative
WO2003099849A2 (en) * 2002-05-23 2003-12-04 Michael Holick Use of a parathyroid hormone peptide analogs for the treatment of vaginal atrophy
WO2004022033A1 (en) * 2002-09-04 2004-03-18 Microchips, Inc. Method and device for the controlled delivery of parathyroid hormone
US20040067526A1 (en) * 2002-10-03 2004-04-08 Cantor Thomas L. Methods for diagnosing and guiding treatment of bone turnover disease
US8263666B2 (en) 2002-10-29 2012-09-11 L'oreal Composition in the form of an oil-in-water emulsion and uses thereof
AU2002359391A1 (en) * 2002-11-01 2004-07-29 Amgen, Inc. Modulators of receptors for parathyrois hormone and parathyroid hormone-related protein
US8088734B2 (en) * 2003-01-21 2012-01-03 Unigene Laboratories Inc. Oral delivery of peptides
WO2004093902A1 (en) * 2003-03-19 2004-11-04 The General Hospital Corporation CONFORMATIONALLY CONSTRAINED PARATHYROID HORMONES WITH α-HELIX STABILIZERS
KR100540659B1 (ko) * 2003-07-02 2006-01-10 삼성전자주식회사 이미지 확대 인쇄 방법과 장치 및 컴퓨터 프로그램을저장하는 컴퓨터로 읽을 수 있는 기록 매체
EP1653985A4 (en) 2003-07-17 2009-08-05 Gen Hospital Corp CONSTRAINTS CONTAINING CONTAINING HORMONE PARATHYROID (PTH) ANALOGUES
US7044468B2 (en) * 2003-10-15 2006-05-16 Sklansky Games, Llc System and method for playing community hand poker games utilizing dealer qualifying criteria
US7562876B2 (en) * 2003-10-15 2009-07-21 Sklansky Games, Llc System and method for playing community hand poker games utilizing mathematical dealer qualifying criteria
WO2005046798A1 (en) * 2003-11-12 2005-05-26 Nps Allelix Corp. Treatment of bone loss utilizing full length parathyroid hormone
WO2005072277A2 (en) * 2004-01-21 2005-08-11 Unigene Laboratories Inc. Amidated parathyroid hormone fragments and uses thereof
US7541140B2 (en) * 2004-06-03 2009-06-02 Scantibodies Laboratory, Inc. Assessing risk for kidney stones using parathyroid hormone agonist and antagonist
US20080214440A1 (en) * 2004-10-08 2008-09-04 Forbes Medi-Tech (Research), Inc. Vasoactive intestinal polypeptide compositions
US7595294B2 (en) * 2004-10-08 2009-09-29 Transition Therapeutics, Inc. Vasoactive intestinal polypeptide pharmaceuticals
WO2006042152A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Forbes Medi-Tech (Research) Inc. Vasoactive intestinal polypeptide pharmaceuticals
US20090170775A1 (en) * 2004-10-08 2009-07-02 Transition Therapeutics, Inc. Vasoactive intestinal polypeptide compositions
US20070293429A1 (en) * 2004-10-08 2007-12-20 Therapei Pharmaceuticals, Inc. Vasoactive Intestinal Polypeptide Compositions
MX2007007732A (es) * 2004-12-22 2007-10-08 Kuros Biosurgery Ag Hidrogeles peg con grupos funcionales para la reaccion de adicion tipo michael con biofactores incorporados con el factor xiiia.
US8575101B2 (en) 2005-01-06 2013-11-05 Kuros Biosurgery Ag Supplemented matrices for the repair of bone fractures
WO2006073711A2 (en) * 2005-01-06 2006-07-13 Kuros Biosurgery Ag Use of a matrix comprising a contrast agent in soft tissues
BRPI0606409A2 (pt) * 2005-01-06 2009-06-23 Kuros Biosurgery Ag matrizes suplementadas para o reparo de fraturas ósseas
US7488316B2 (en) * 2005-01-25 2009-02-10 Microchips, Inc. Control of drug release by transient modification of local microenvironments
CA2628945A1 (en) * 2005-11-10 2007-05-24 Board Of Control Of Michigan Technological University Black bear parathyroid hormone and methods of using black bear parathyroid hormone
PE20070684A1 (es) 2005-11-14 2007-08-06 Amgen Inc MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP
DE102006014579A1 (de) * 2006-03-29 2007-10-04 Epcos Ag Verfahren zur Reinigung einer Monomer-Lösung und Herstellungsverfahren für ein elektrisches Bauelement umfassend das Reinigungsverfahren
WO2007133580A2 (en) * 2006-05-09 2007-11-22 Zelos Therapeutics, Inc. Use of pth (1-31) and optionally g-csf for hematopoietic stimulation
JP2009545320A (ja) * 2006-08-04 2009-12-24 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）のポリペプチド誘導体
US8012694B2 (en) * 2006-09-14 2011-09-06 Immutopics, Inc. Assay for the detection of phosphorylated PTH
USRE49444E1 (en) 2006-10-03 2023-03-07 Radius Health, Inc. Method of treating osteoporosis comprising administration of PTHrP analog
KR20170067906A (ko) * 2006-10-03 2017-06-16 라디우스 헬쓰, 인코포레이티드 골 아나볼릭 단백질을 위한 약물 전달 방법
US7803770B2 (en) 2006-10-03 2010-09-28 Radius Health, Inc. Method of treating osteoporosis comprising administration of PTHrP analog
DK2084183T3 (da) * 2006-10-13 2010-08-16 Lilly Co Eli Pegyleret PTH som PTH-receptormodulatorer og anvendelser deraf
DK2136850T3 (da) * 2007-04-13 2012-04-10 Kuros Biosurgery Ag Polymervævforsegling
KR101661730B1 (ko) 2007-08-01 2016-10-04 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 Ｇ―단백질 결합 수용체를 이용한 스크리닝 방법 및 관련 조성물
JP2012512812A (ja) * 2007-12-28 2012-06-07 クロス・バイオサージェリー・アクチェンゲゼルシャフト フィブリンフォームに組込まれたｐｄｇｆ融合タンパク質
US20090227507A1 (en) * 2008-03-10 2009-09-10 University Of Southern California Angiotensin (1-7) Dosage Forms and Uses Thereof
US8563513B2 (en) 2009-03-27 2013-10-22 Van Andel Research Institute Parathyroid hormone peptides and parathyroid hormone-related protein peptides and methods of use
JP2013512688A (ja) 2009-12-07 2013-04-18 ミシガン テクノロジカル ユニバーシティ クロクマの副甲状腺ホルモン及びクロクマの副甲状腺ホルモンを使用する方法
EP2568806B1 (en) 2010-05-12 2016-05-11 Radius Health, Inc. Therapeutic regimens
WO2011143406A2 (en) 2010-05-13 2011-11-17 The General Hospital Corporation Parathyroid hormone analogs and uses thereof
AU2011312490B2 (en) 2010-09-28 2015-06-25 Radius Pharmaceuticals, Inc. Selective androgen receptor modulators
EP2686027B1 (en) 2011-03-16 2021-05-05 Kuros Biosurgery AG Pharmaceutical formulation for use in spinal fusion
EP3566711A1 (en) * 2011-05-18 2019-11-13 Eumederis Pharmaceuticals, Inc. Improved peptide pharmaceuticals
US20200354428A9 (en) 2013-06-23 2020-11-12 Wisconsin Alumni Research Foundation Analogues of parathyroid hormone (1-34) that function as agonists of the parathyroid hormone receptor-1 and display modified activity profiles
IL255148B2 (en) 2015-04-29 2023-04-01 Radius Pharmaceuticals Inc 1901 rad for use in a method to inhibit a cancerous growth or induce tumor regression in a patient who is resistant to the drug and/or has cancer positive for an estrogen receptor alpha mutation
EP3998061A1 (en) 2016-04-18 2022-05-18 Radius Health, Inc. Formulations of abaloparatide, transdermal patches thereof, and uses thereof
EP3474841B1 (en) 2016-06-22 2022-03-16 Ellipses Pharma Ltd Ar+ breast cancer treatment methods
CN117417263A (zh) 2017-01-05 2024-01-19 雷迪厄斯制药公司 Rad1901-2hcl的多晶型形式
US10996208B2 (en) 2017-04-28 2021-05-04 Radius Health, Inc. Abaloparatide formulations and methods of testing, storing, modifying, and using same
JP7354123B2 (ja) 2018-02-21 2023-10-02 エイアイ・セラピューティクス・インコーポレーテッド アピリモドとグルタミン酸作動薬を用いた併用療法
CN112423844A (zh) 2018-07-04 2021-02-26 雷迪厄斯制药公司 Rad1901-2hcl的多晶型形式
CN109734794A (zh) * 2019-03-07 2019-05-10 苏州科技大学 一种阿巴帕肽的制备方法
CN114057863B (zh) * 2020-08-06 2023-10-20 珠海联邦制药股份有限公司 一种甲状旁腺激素相关肽类似物及其应用

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4086196A (en) * 1975-03-28 1978-04-25 Armour Pharmaceutical Company Parathyroid hormone
US4423037A (en) * 1982-05-13 1983-12-27 The General Hospital Corporation Inhibitors of peptide hormone action
US4643988A (en) * 1984-05-15 1987-02-17 Research Corporation Amphipathic peptides
US4738921A (en) * 1984-09-27 1988-04-19 Eli Lilly And Company Derivative of the tryptophan operon for expression of fused gene products
ES2000859A6 (es) * 1985-08-12 1988-03-16 Syntex Inc Un metodo para producir un vector de expresion bacteriana para la expresion de proteinas de fusion
WO1988000596A1 (en) * 1986-07-18 1988-01-28 The University Of Melbourne A PROTEIN ACTIVE IN HUMORAL HYPERCALCEMIA OF MALIGNANCY-PTHrP
ATE72582T1 (de) * 1986-09-05 1992-02-15 Cetus Corp Oxidationsresistente muteine von beta-interferon, deren herstellung und diese muteine enthaltende praeparate.
US5010010A (en) * 1986-10-22 1991-04-23 Selmer-Sande, A.S. Production of human parathyroid hormone from microorganisms
US4833125A (en) * 1986-12-05 1989-05-23 The General Hospital Corporation Method of increasing bone mass
US4835255A (en) * 1987-03-26 1989-05-30 Yale University T-cell membrane protein
US5001223A (en) * 1987-05-26 1991-03-19 Merck & Co., Inc. Parathyroid hormone antagonists with enhanced metabolic properties
EP0293158A3 (en) * 1987-05-26 1990-05-09 Merck & Co. Inc. Parathyroid hormone antagonists
US4771124A (en) * 1987-05-26 1988-09-13 Merck & Co., Inc. Parathyroid hormone antagonists with simplified synthetic methodology
EP0293160A3 (en) * 1987-05-26 1990-05-09 Merck & Co. Inc. Parathyroid hormone antagonists with enhanced metabolic properties
DE3725320A1 (de) * 1987-07-30 1989-02-09 Biotechnolog Forschung Gmbh Expressionsvektoren und verfahren unter deren verwendung zur gewinnung von cro/ss-galaktosidase/pth-fusionsproteinen und von pth
DE3725319A1 (de) * 1987-07-30 1989-02-09 Biotechnolog Forschung Gmbh Pth-modifikationen und therapeutische zusammensetzungen, die sie enthalten und daraus bestehen
US4861756A (en) * 1988-03-08 1989-08-29 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Synthetic pulmonary surfactant
EP0341963A3 (en) * 1988-05-09 1991-07-24 Merck & Co. Inc. Parathyroid hormone antagonists
US4968669A (en) * 1988-05-09 1990-11-06 Merck & Co., Inc. Parathyroid hormone antagonists
JPH03504201A (ja) * 1989-02-23 1991-09-19 ゲゼルシャフト・フュア・ビオテクノロギッシェ・フォルシュンク・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング　（ゲー・ベー・エフ） Ｐｔｈ変種をコードするｄｎａ配列、ｐｔｈ変種、発現ベクター、細菌宿主、利用と治療用組成物
CA2032527C (en) * 1989-04-10 2002-07-02 Jesse M. Jaynes Lytic peptides: their use in the treatment of microbial infections, cancer and in the promotion of growth
CA2040264A1 (en) * 1990-04-12 1991-10-13 Tatsuhiko Kanmera Parathyroid hormone antagonists
US5087562A (en) * 1990-04-25 1992-02-11 Merck & Co., Inc. Humoral hypercalcemic factor antagonists with modification at position 13 . . .
US5093233A (en) * 1990-04-25 1992-03-03 Merck & Co., Inc. Antagonists with position 13 modification
WO1992000753A1 (en) * 1990-07-13 1992-01-23 The Regents Of The University Of California PARATHYROID HORMONE ANALOGUES MODIFIED AT POSITIONS 3, 6 or 9
US5149779A (en) * 1990-07-26 1992-09-22 Merck & Co., Inc. Humoral hypercalcemic factor antagonists
JPH0532696A (ja) * 1990-09-28 1993-02-09 Takeda Chem Ind Ltd 副甲状腺ホルモン誘導体
AU9103791A (en) * 1990-12-21 1992-07-22 Allelix Biopharmaceuticals Inc. Oxidation resistant variants of parathyroid hormone
US5317010A (en) * 1991-10-10 1994-05-31 Peter K. T. Pang Parathyroid hormone analogues substituted at AA 25, 26, 27, and use in osteoporosis treatment
US5434246A (en) * 1992-03-19 1995-07-18 Takeda Chemical Industries, Ltd. Parathyroid hormone derivatives
US5382658A (en) * 1992-04-03 1995-01-17 Allelix Biopharmaceuticals Inc. Stability-enhanced variants of parathyroid hormone
US5589452A (en) * 1992-07-14 1996-12-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6921750B2 (en) 1995-07-13 2005-07-26 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S. Analogs of parathyroid hormone
US7410948B2 (en) 1995-07-13 2008-08-12 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas Analogs of parathyroid hormone
USRE40850E1 (en) * 1995-07-13 2009-07-14 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S. Analogs of parathyroid hormone
US7632811B2 (en) 1995-07-13 2009-12-15 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas Analogs of parathyroid hormone

Also Published As

Publication number Publication date
AU4670593A (en) 1994-01-31
ATE202115T1 (de) 2001-06-15
ES2159293T3 (es) 2001-10-01
EP0651765A1 (en) 1995-05-10
HU211348A9 (en) 1995-11-28
MX9304226A (es) 1995-01-31
US5695955A (en) 1997-12-09
EP0651765B1 (en) 2001-06-13
JPH07509228A (ja) 1995-10-12
GR3036521T3 (en) 2001-12-31
FI120586B (fi) 2009-12-15
NZ254554A (en) 1996-03-26
HUT69628A (en) 1995-09-28
US5874086A (en) 1999-02-23
KR100461618B1 (ko) 2005-04-06
EP1094073A3 (en) 2002-09-25
US5840837A (en) 1998-11-24
JP4106082B2 (ja) 2008-06-25
FI950169A (fi) 1995-01-13
WO1994001460A1 (en) 1994-01-20
KR100404008B1 (ko) 2003-11-01
FI950169A0 (fi) 1995-01-13
KR20030097580A (ko) 2003-12-31
KR950702578A (ko) 1995-07-29
DK0651765T3 (da) 2001-09-24
EP1094073A2 (en) 2001-04-25
PT651765E (pt) 2001-11-30
KR100458350B1 (ko) 2004-11-26
US5693616A (en) 1997-12-02
US6051686A (en) 2000-04-18
US5807823A (en) 1998-09-15
CA2140281A1 (en) 1994-01-20
DE69330347T2 (de) 2002-05-29
US5798225A (en) 1998-08-25
DE69330347D1 (de) 2001-07-19
AU671851B2 (en) 1996-09-12
HU9500110D0 (en) 1995-03-28
US5589452A (en) 1996-12-31
CA2140281C (en) 2002-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU217843B (hu) Paratiroid hormon (PTH) rokon polipeptidek, eljárások ezek előállítására és az ezeket tartalmazó gyógyszerek osteoporosis kezelésére
US5977070A (en) Pharmaceutical compositions for the nasal delivery of compounds useful for the treatment of osteoporosis
EP0835262B1 (en) Method for the treatment of corticosteroid induced osteopenia
US7494979B2 (en) Method for treating congestive heart failure and other disorders
AU2005222387B2 (en) Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
WO1995002610A1 (en) Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis
NO319848B1 (no) Syntetiske peptidanaloger til PTH og PTHrp, fremgangsmate for fastfasesyntese derav, farmasoytiske preparater som omfatter dem, og anvendelse derav til fremstilling av medikamenter til behandling av reduksjoner i benmasse.
MXPA98001630A (en) Pharmaceutical compositions of nasal administration of useful compounds for the treatment of osteoporo