MX2007004116A - Composiciones farmaceuticas de polipeptidos intestinales vasoactivos. - Google Patents

Abstract

Se presentan composiciones farmaceuticas relacionadas con polipeptidos intestinales vasoactivos y metodos para el tratamiento de trastornos metabolicos, incluyendo diabetes, resistencia a la insulina, acidosis metabolica y obesidad. Tambien se describen metodos para usar las composiciones de polipeptidos intestinales vasoactivos.

Description

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS DE POLIPEPTIDOS INTESTINALES VASOACTIVOS Campo de la invención Esta invención se refiere a análogos de polipéptidos y a su síntesis y usos. Más particularmente, la invención se refiere a análogos de polipéptidos relacionados con polipéptido intestinal vasoactivo, y a composiciones farmacéuticas de ellos. Antecedentes de la ¡nvención Cuando en el canal alimentario hay alimentos presentes, las células en el intestino secretan una señal hormonal (una "incretina"), la cual sensibiliza al páncreas con respecto a la presencia de glucosa, y da como resultado una respuesta secretora de insulina dependiente de glucosa potenciada. Esta respuesta sinérgica para proporcionar liberación de insulina dependiente de glucosa (Kieffer TJ y Habener, JR (1999) Endocr. Rev. 20, 876-913) se observa para las señales de incretina, péptido 1 simTIar al glucagón (GLP1 ) y péptido insulinotrópico dependiente de glucosa (GIP). Estas señales de incretina comúnmente muestran una acción de corta duración en el cuerpo, en donde el GLP1 muestra un t 1 /2 de aproximadamente 1 a 2 minutos (Knudsen, LB 2004, J. Med. Chem. 47, 4128-34). El GLP1 y el GIP son desprendidos por una amino peptidasa, dipeptidil peptidasa IV (DPPIV) y por ello, la hormona originaria de origen natural no se usa generalmente en formulaciones médicas. Se demostró que un péptido encontrado en la saliva del Monstruo de Gila (exendina 4, Exenatida; Amylin Pharmaceuticals, San Diego, California) se fija al receptor de GLP1 y muestra potente actividad agonista, impartiendo así una respuesta secretoria de insulina dependiente de glucosa, deseable (Nielsen LL, Young, AA, Par es, DG (2004) Regul. Peptides, 1 17, 77-88). La exenatida y los análogos de GLP1 han sido administrados a pacientes que necesitan de tratamiento para diabetes de tipo 2. El péptido activador de adenilato ciclasa de pituitaria (PACAP) es un péptido neuromodulador que estimula los receptores PAC1 , VPAC1 y VPAC2, y es emitido desde las terminaciones nerviosas en el páncreas. Los receptores de esta clase general residen en múltiples tejidos del cuerpo, incluyendo el páncreas. En el páncreas, se ha demostrado que la estimulación de los receptores de VPAC2 proporciona una liberación de insulina dependiente de glucosa potenciada, en respuesta a niveles de glucosa en sangre elevados similares a los del GLP1 o la exenatida (Tsutsumi, M., et al. (2002) Diabetes 51 , 1453-60). Este tipo de estímulo (de análogos agonistas de PACAP o de VPAC) podría ser sinérgico o alternativo para señales similares a incretina en la estimulación de la liberación de insulina dependiente de glucosa, dado que un perfil similar de secreción de insulina potenciada es el resultado de la activación de una segunda clase de receptor. Este tipo de efecto podría ser beneficioso en el tratamiento de trastornos metabólicos, incluyendo diabetes mellitus de tipo 2 (T2DM), acidosis metabólica, resistencia a la insulina y obesidad. Sin embargo, la secuencia originaria de origen natural del PACAP y sus análogos por lo general también son de vida corta en el cuerpo. La exendina 4 sintética es un péptido de acción relativamente corta, y hay una necesidad médica de péptidos que actúen durante más tiempo, que puedan modular la secreción de insulina dependiente de glucosa. Breve descripción de la invención La invención proporciona análogos de polipéptido sintéticos de PACAP y de polipéptido intestinal vasoactivo (VIP), y sales de ellos, en los cuales el término C contiene residuos de aminoácidos que forman una hélice alfa anfifática, dichos residuos se seleccionan de aminoácidos hidrofílicos (Haa) y aminoácidos lipofílicos (Laa), ordenados en la secuencia: Haa (Laa Laa Haa Haa)n Laa. en donde n = 1 - 5. En una modalidad, n = 1 o 2. Las modificaciones introducidas en los análogos de polipéptidos de la presente, de PACAP y de VIP facilitan la duración aumentada de la acción de la sustancia terapéutica que activa la familia de receptores de PACAP y de VI P, preferiblemente el receptor de VPAC2. Sin estar atado a cualquier teoría en particular, se cree que un aumento en la duración de la acción puede ser debido a la capacidad de la hélice anfifática en la región del terminal C para interactuar con los fosfolípidos de las membranas celulares en el cuerpo, y por lo tanto tienen un efecto de "depósito". Así, los análogos de péptidos de la presente se fijan a membranas celulares y luego son liberados de nuevo al plasma lentamente, para impartir su efecto distalmente. En contraste, si un péptido tal como PACAP , VEP o GLP1 está libre en el plasma, éste es activado rápidamente por proteasas o es eliminado por filtración glomerular. Por lo tanto, un aspecto de la invención proporciona análogos para PACAP, VI P, y los análogos y homólogos de los mismos truncados activos fisiológicamente, o sales de ellos , en los cuales el término C contiene residuos de aminoácidos que forman una hélice alfa anfifática, la secuencia de dichos residuos se selecciona de aminoácidos natu rales o de aminoácidos no naturales seleccionados, que tienen la capacidad de estabilizar dicha hélice alfa. También se proporcionan composiciones farmacéuticas para el suministro de una cantidad efectiva liberadora de insulina dependiente de glucosa, de un análogo de polipéptido de PACAP, VI P, y los análogos y homólogos de los mismos truncados activos fisiológicamente, o sales de ellos, en los cuales el término C contiene residuos de aminoácidos que forman una hélice alfa anfifática, dichos residuos se seleccionan de aminoácidos lipofílicos (Laa) ordenados en la secuencia: Haa (Laa Laa Haa Haa)n Laa; en donde n= 1 - 5. La invención proporciona además métodos para tratar condiciones en mamíferos caracterizadas por alto nivel de glucosa en sangre, cuyos métodos comprenden administrar a un mamífero que necesita de ello, una cantidad efectiva liberadora de insulina dependiente de la dosis, de un polipéptido análogo de PACAP, VI P, y los análogos y homólogos de los mismos truncados activos fisiológicamente, o sales de ellos, en los cuales el término C contiene residuos de aminoácidos que forman una hélice alfa anfifática, dichos residuos se seleccionan de aminoácidos hidrofílicos (Haa) y aminoácidos lipofílicos (Laa) ordenados en la siguiente secuencia: Haa (Laa Laa Haa Haa)n Laa; en donde n= 1 - 5. La invención también incluye procesos para la síntesis en fase sólida de análogos de polipéptidos de PACAP, VIP y los análogos y homólogos de los mismos truncados activos fisiológicamente, o una sal de ellos, en los cuales el término C contiene residuos de aminoácidos que forman una hélice alfa anfifática, dichos residuos se seleccionan de aminoácidos hidrofílicos (Haa), y aminoácidos lipofílicos (Laa), ordenados en la siguiente secuencia: Haa (Laa Laa Haa Haa)n Laa; en donde n = 1 - 5. Los procesos que se presentan aquí para preparar análogos de polipéptido contienen aminoácidos protegidos acoplados secuencialmente en un soporte de resina apropiado, eliminando la cadena lateral y los grupos protectores Na, y separando el polipéptido de la resina. La invención también proporciona secuencias de ADN, vectores y plásmidos para la síntesis recombinante de análogos de polipéptido de PACAP, VIP y los análogos y homólogos de los mismos truncados activos fisiológicamente, o una sal de ellos, en los cuales el término C contiene residuos de aminoácidos que forman una hélice alfa anfifática, dichos residuos se seleccionan de aminoácidos hidrofílicos (Haa), y aminoácidos lipofílicos (Laa), ordenados en la siguiente secuencia: Haa (Laa Laa Haa Haa)n Laa; en donde n = 1 -5. Además, la invención proporciona composiciones farmacéuticas y métodos para la prevención y tratamiento de una variedad de trastornos metabólicos, incluyendo diabetes, resistencia a la insulina, hiperglicemia, acidosis metabólica y obesidad, los cuales se manifiestan por elevados niveles de glucosa en sangre, que contienen una cantidad efectiva del polipéptido o polipéptidos de la invención , o una sal de ellos, y un portador aceptable farmacéuticamente. En otros aspectos de la invención, las cantidades efectivas terapéuticamente de compuestos para trastornos metabólicos, incluyendo insulina, análogos de insulina, incretina, análogos de incretina, péptido similar a glucagón, análogos de péptido similar a glucagón, exendina, análogos de exendina, sulfonilureas, biguanidas, inhibidores de a-glucosidasa, tiazolidinodionas, agonistas del receptor activado por el proliferador de peroxisoma (PPAR), antagonistas de PPAR y agonistas parciales de PPAR, pueden ser administrados en combinación con los polipéptidos de la presente invención. Breve descripción de los dibujos Las figuras 1 A, 1 B y 1 C son listas de ejemplos de análogos de polipéptidos de acuerdo con la invención. Se usa la nomenclatura estándar usando abreviaturas de una sola letra para los aminoácidos. La letra "X" se refiere a una cadena de polietilen glicol que tiene cadena de10 a 3000 átomos de carbono. El término "acilo" se refiere a una cadena acilo de 2 a 16 átomos de carbono. La letra "Z" se refiere a lisina que tiene una cadena acilo larga en la posición épsilon. El término "hex" se refiere a hexanoilo. El término "pen" se refiere a pentanoilo. El término "lau" se refiere a lauroilo. El término "mir" se refiere a miristoilo. El término "ste" se refiere a estearoilo. El término "pr" se refiere a propionilo. La figura 2 enumera otros polipéptidos y análogos de polipéptidos. Descripción detallada de la invención Abreviaturas y definiciones Las abreviaturas de una y de tres letras para las diversas bases de nucleótidos y aminoácidos comunes son las que se recomiendan en Pure Appl. Chem. 31 , 639-645 (1972) y 40, 277-290 (1974) y cumplen con la sección 1 .822 del CFR 37. (55 FR 18245, 1 de mayo, 1990). Las abreviaturas representan aminoácidos D- o DL. Ciertos aminoácidos, tanto naturales como no naturales, son aquirales, por ejemplo, glicina. Todas las secuencias de péptidos se presentan con el aminoácido del terminal N a la izquierda y el aminoácido del terminal C a la derecha. "Aminoácido hidrofílico (Haa)" se refiere a un aminoácido que tiene al menos un grupo funcional hidrofílico además de los requeridos para la formación de unión péptida, tal como arginina, asparagina, ácido aspártico, ácido glutámico, glutamina, histidina, lisina, serina, treonina, y sus homólogos. "Aminoácido lipofílico (Laa)" se refiere a un aminoácido alifático o aromático no cargado, tal como isoleucina, leucina , metionina , fenilalanina, triptófano, tirosina , valina, y sus homólogos. En la invención , la alanina se clasifica como "anfifílica", es decir, capaz de actuar ya sea como hidrofílica o como lipofílica. "Homólogo de PACAP o de VIP" se refiere a un polipéptido que contiene aminoácidos en una secuencia que es sustancialmente similar a la secuencia originaria de PACAP o de VI P, tal como al menos 50, 60, 70, 80, 85, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, o 99% de identidad de secuencia con el aminoácido. Los homólogos presentados aqu í pueden contener sustituciones de aminoácidos, deleciones y/o inserciones con relación a la secuencia originaria de PACAP o de VI P. Los ejemplos de homólogos comprenden una amplitud de al menos 5, 1 0, 1 5, 20, 25, 30, o 35 aminoácidos contiguos que son idénticos o sustancialmente similares a la secuencia originaria de PACAP o de VI P. "Análogos de PACAP o de VI P" se refiere a un polipéptido que contiene: (i) PACAP, VI P, y/u homólogos de PACAP o de VI P; y (ii) al menos una funcionalidad que no está presente en los PACAP y/o VI P originarios de origen natural. Por ejemplo, los análogos pueden contener opcionalmente una funcionalidad dentro de la cadena lateral de un aminoácido o en el terminal carboxilo del polipéptido. Los ejemplos de funcionalidades incluyen alquil-, aril-, acil-, ceto-, azido-, hidroxil-, hidrazina , ciano-, halo-, hidrazida, alquenilo, alquinilo, éter, tiol, seleno-, sulfonil-, borato, boronato, fosfo, fosfono, fosfina, heterocíclico, enona, imina, aldehido, éster, tioácido, hidroxilamina, grupo amino, o similares, o cualquier combinación de ellos. Otros ejemplos de fu ncionalidades que se puede introducir incluyen , sin limitarse a ellos, aminoácidos q ue contienen u n reticulante fotoactivable, aminoácidos marcados por espín , aminoácidos fluorescentes, aminoácidos fijadores de metal , aminoácidos que contienen metal, aminoácidos radiactivos, aminoácidos con grupos funcionales novedosos, aminoácidos que interactúan covalentemente o no covalentemente con otras moléculas, aminoácidos foto atrapables y/o foto isomerizables, aminoácidos que contienen biotina o un análogo de biotina, aminoácidos glicosilados tales como una serina sustituida con azúcar, otros aminoácidos modificados con carbohid ratos, aminoácidos q ue contienen ceto, aminoácidos q ue contienen polietilen glicol o poliéter, aminoácidos sustituidos con átomos pesados, aminoácidos escindibles q uímicamente y o foto escindibles, aminoácidos con cadenas laterales alargadas comparados con aminoácidos naturales, por ejemplo, poliéteres o hidrocarburos de cadena larga , por ejemplo, de más de aproximadamente 5 o más de aproximadamente 1 0 átomos de carbono, aminoácidos que contienen azúcar ligada a carbono, aminoácidos con actividad redox, aminoácidos que contienen amino tio ácidos, y aminoácidos que contienen una o más porciones tóxicas. Los análogos q ue se presentan , aquí pueden contener aminoácidos no naturales basados en aminoácidos, tales como análogos de tirosina, incluyendo tirosinas para-sustituidas, tirosinas orto-sustituidas, y tirosinas meta-sustituidas, en donde la tirosina sustituida contiene un grupo acetilo, un grupo benzoilo, un grupo amino, una hidrazina, una hid roxiamina, un grupo tiol, un grupo carboxi, un g rupo isopropilo, un grupo metilo, un hidrocarburo de cadena recta o ramificado de 6 a 20 átomos de carbono, un hidrocarbu ro satu rado o insaturado, un grupo O-metilo, un g rupo poliéter, un grupo nitro, o similares. Los análogos de glutamina incluyen , sin limitarse a ellos, derivados a-hidroxi, derivados ß-sustituidos, derivados cíclicos, y derivados de glutamina sustituidos con amida. Los ejemplos de análogos de fenilalanina incluyen , sin limitarse a ellos, fenilalaninas meta-sustituidas, en donde el sustituyente comprende un g rupo hidroxi, un grupo metoxi, un grupo metilo, un grupo alilo, un grupo acetilo, o similares. Los ejemplos específicos incluyen , sin limitarse a ellos, O-metil-L-tirosina, una L-3-(2-naftil)alanina, una 3-metil-fenilalanina, una O-4-alil-L-tirosina, una 4-propil-L-tirosina , una tri-O-acetil-GIcNAc. beta. -serina, u na L-Dopa, una fenilalanina fluorada , una isopropil-L-fenilalanina, una p-azido-L-fenilalanina, una p-acil-L-fenilalanina, una p-benzoil-L-fenilalanina, una L-fosfoserina, una fosfonoserina, una fosfonotirosina, una p-yodo-fenilalanina, una p-bromofenilalanina, una p-amino-L-fenilalanina, y una isopropil-L-fenilalanina, y similares. En general , los análogos son diseñados o seleccionados opcionalmente para modificar las propiedades biológicas del polipéptido, de tal forma de modular la toxicidad, biodistribución, solubilidad, estabilidad, por ejemplo, resistencia térmica, hidrolítica, oxidativa, a la degradación enzimática, y similares, facilidad de purificación y procesamiento, propiedades estructurales, propiedades espectroscópicas, propiedades químicas y/o fotoquímicas, actividad catalítica, potencial redox, vida media, capacidad de reaccionar con otras moléculas, por ejemplo, covalentemente o no covalentemente, y similares. "Homólogo truncado activo fisiológicamente o análogo de PACAP o de VI P" se refiere a un polipéptido que tiene una secuencia que contiene menos del complemento total de aminoácidos encontrados en PACAP o VI P, el cual, sin embargo, desencadena una respuesta fisiológica similar. Los homólogos truncados y/o análogos representativos que se presentan aquí contienen al menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, o 35 aminoácidos contiguos que se encuentran en la secuencia originaria de PACAP o de VIP. Los PACAP o VIP truncados no tienen que ser totalmente homólogos con PACAP o VIP para producir una respuesta fisiológica similar. Los PACAP o VIP son representantes preferidos, pero no exclusivos, de este grupo.

[0025] "PEG" se refiere a polietilen glicol, polipropilen glicol, o polioxialquilenos. En una modalidad, el PEG contiene una cadena de 10 a 3000 átomos de carbono. En otra modalidad , el PEG tiene un peso molecular por encima de 40 kD. El PEG es bien conocido en la técnica y está descrito, por ejemplo, en las patenles estadounidenses números 4,640 ,835; 4,496,689; 4,301 , 144; 4,670,41 7; 4,791 , 1 92; y 4, 1 79,337. "Hélice alfa anfifática" se refiere a la estructura secu ndaria que muestran ciertos polipéptidos en los cuales los aminoácidos asumen una configuración a-helicoidal que tiene caras opuestas polar y no polar orientadas a lo largo del eje largo de la hélice. La posibilidad de una estructura a-helicoidal en el polipéptido de interés puede ser explorada en algún g rado mediante la construcción de u na "rueda Schiffer-Edmundson "(M . Schiffer y A. B. Edmundson , Biophys. J . 7, 1 21 (1 967) , incorporado aquí mediante referencia), con el tiro apropiado y notando la segregación de los residuos hidrofílicos y lipofílicos sobre caras opuestas del cilindro que circunscribe la hélice. Alternativamente, la evidencia empírica, tal como el dicroísmo circular o los datos de difracción de rayos S, puede estar disponible, indicando la presencia de una región a-helicoidal en u n polipéptido dado. U na hélice alfa ideal tiene 3.6 residuos de aminoácidos por vuelta con cadenas laterales adyacentes separadas por 1 00° de arco. Polipéptidos En una modalidad, los polipéptidos que se presentan aquí contienen porciones truncadas de PACAP y/o de VI P que tienen al menos 5, 1 0, 1 5, 20, 25, 30, o 35 aminoácidos contiguos de la secuencia originaria de PACAP o de VI P. En otra modalidad , los polipéptidos de la presente comparten al menos 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, o 99% de identidad de secuencia de aminoácidos con respecto a la secuencia originaria de PACAP o de VIP. En todavía otra modalidad, los polipéptidos de la presente comprenden una amplitud de al menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, o 35 aminoácidos contiguos de PACAP y/o de VIP que tienen al menos 50, 60, 70, 80, 85, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con respecto a la secuencia originaria de PACAP o de VI P. Los polipéptidos que se presentan aquí opcionalmente comprenden modificaciones, funcionalidades, y/o sustituciones de aminoácidos que modulan la selectividad de VPAC2. Los ejemplos de modificaciones, funcionalidades y/o sustituciones incluyen, sin limitarse a ellos, extensiones catiónicas en el terminal C y/o mutaciones que han sido reportadas en Gourlet ef al. (Peptides 18, 403-8; Xia M, eí al. (1997) y en J. Pharmacol. Exp. Ther. 281 : 629-33 (1997); cuyos contenidos están incorporados aquí mediante referencia). Opcionalmente, se pueden introducir modificaciones en el término amino o carboxilo en los polipéptidos de la presente. Por ejemplo, los polipéptidos de la presente, tales como los análogos de VIP, pueden ser acilados en el término N mediante ácidos grasos de cadena larga para producir polipéptidos que muestren baja eficacia, actividad agonista y antagonista parcial (Gourlet et al, Eur. J. Pharmacol. 354: 105-1 1 1 (1998), cuyo contenido está incorporado aquí mediante referencia). Otros ejemplos de modificaciones de los polipéptidos de la presente, tales como los análogos de VIP, incluyen acilación con ácido hexanoico para proporcionar polipéptidos que muestren selectividad aumentada hacia VPAC2 (Langer ef al, Peptides 25: 275-8 (2004), cuyo contenido está incorporado aquí mediante referencia). Así, la longitud y colocación de esta acilación puede alterar la eficacia, y podría dar como resultado pérdida de eficacia (antagonista) o análogos de agonista. Contrariamente a esta impredecibilidad, los polipéptidos presentados aquí han sido diseñados y sometidos a prueba para obtener la eficacia y la actividad deseadas. Opcionalmente, se puede introducir modificaciones dentro de la cadena lateral de al menos un aminoácido dentro de los polipéptidos de la presente para aumentar la duración de la acción y/o de la potencia. Por ejemplo, los polipéptidos de la presente pueden contener opcionalmente al menos un aminoácido acilado para una funcionalidad en la cadena lateral (es decir, en el grupo R). Las modificaciones representativas incluyen acilación con ácido graso de las cadenas laterales reactivas (tales como Lys) en diversas posiciones dentro del polipéptido. Modificaciones similares han sido reportadas en Kurtzhals et al. en donde la acilación de insulina en LysB29 dio como resultado la insulina detemir (Kurtzhals ef al. , Bíochem J. 312, 725-31 (1995), y en Kurtzhals, P., Int. J. Obesity 28: Supl 2, S23-8 (2004)). De manera similar, la acilación con ácidos grasos de cadena larga mediante moléculas enlazantes ha dado como resultado potentes análogos de GLP1 y con actuación a largo plazo (Knudsen LB, ef al. (2000). J . Med. Chem. 43, 1664-69), pero la acilación puede dar como resultado la pérdida de actividad o de agonistas potentes, dependiendo de la longitud y posicionamiento de la cadena o cadenas acilo. Contrariamente a los efectos no predecibles con la introducción de ácidos grasos de cadena larga, los polipéptidos q ue se presentan aquí han sido diseñados para incorporar una cantidad , longitud y posicionamiento de las cadenas acilo óptimas , de tal forma de obtener la actividad deseada. Otro tipo de modificación que se puede introducir opcionalmente en los polipéptidos de la presente (por ejemplo dentro de la cadena de polipéptidos o ya sea en el terminal N o en el terminal C) para extender la du ración de la acción , es la PEGilación o la incorporación de polímeros de polietilenglicol de cadena larga (PEG). La introducción de PEG o de polímeros de PEG de cadena larga aumenta el peso molecular efectivo de los polipéptidos de la presente para prevenir la rápida filtración en la orina. Los métodos para incorporar PEG o polímeros de P EG de cadena larga, son bien conocidos en la técnica, y están descritos, por ejemplo, en Greenwald et al, Adv. Drug Del. Rev. 55: 21 7-250 (2003), cuyo contenido está incorporado aquí mediante referencia. U n enfoque alternativo reportado más recientemente para incorporar PEG o polímeros de PEG mediante la incorporación de aminoácidos no naturales, puede realizarse con los polipéptidos de la presente. Este enfoq ue utiliza un par de ARNt evolucionado/sintetasa de ARNt, y está codificado en el plásmido de expresión por medio del codón supresor ámbar (Deiters, A, et al. (2004) . Bio-org. Med. Chem. Lett. 14, 5743-5). Por ejemplo, se puede incorporar p-azidofenilalanina en los polipéptidos de la presente y luego hacerse reaccionar con un polímero PEG q ue tenga una porción acetileno en la presencia de un agente reductor y iones de cobre para facilitar una reacción orgánica conocida como "cicloadición H uisgen [3+2]". Hélice anfifática Los polipéptidos de la presente invención comprenden una hélice alfa anfifática correspondiente a la fórmula: Haa (Laa Laa Haa Haa)p Laa en donde n , Haa, y Laa se seleccionan del grupo de aminoácidos hid rofílicos y los Laa se seleccionan del grupo de aminoácidos lipofílicos, tal como se definen anteriormente. Sin estar atado a cualquier teoría en particular, se cree que la hélice anfifática en la región del terminal C proporciona un aumento en la duración de la acción de los polipéptidos de la presente interactuando con los fosfolípidos de las membranas celu lares en el cuerpo, y por ello tienen un efecto de "depósito". Los polipéptidos de la presente invención comprenden una región peptídica que es una hélice alfa anfifática, no meramente una hélice alfa optimizada. Sin querer estar atados por cualquier teoría en particular, se cree que la hélice alfa anfifática facilita la interacción aumentada con membranas celulares y ayuda a la colocación apropiada de modificaciones de la cadena acilo en el terminal C para la interacción de membrana. Estudios por Eisenberg ef al. han combinado una escala de hidrofobicidad con la rueda helicoidal para cuantificar el concepto de hélices anfifáticas (Nature 299: 371 -374 (1982) y Proc. Nat. Acad. Sci. USA 81 : 140-144 (1984); cuyas descripciones están incorporadas aquí mediante referencia). El momento hidrofóbico medio se define como la suma de vectores de las hidrofobicidades de los aminoácidos componentes que constituye la hélice. Las siguientes hidrofobicidades para los aminoácidos son las reportadas por Eisenberg ef al. como la escala de "consenso": Me 0.73; Phe 0.61 ; Val 0.54; Leu 0.53; Trp 0.37; Met 0.26 Ala 0.25; Gly 0.16; Cys 0.04; Tyr 0.02; Pro -0.07; Thr -0.18; Ser -0.26; His -0.40; Glu -0.62; Asn - 0.64; Gln -0.69; Asp -0.72; Lys -1 .10; Arg -1.76. El momento hidrofóbico, µH , para una hélice alfa ideal que tiene 3.6 residuos por vuelta (o un arco de 100° (=360°/3.6) entre las cadenas laterales), se puede calcular a partir de: µH =[(?HN sen d(N-1 )2 +(?HN cos d(N-1 )2], en donde HN es el valor de hidrofobicidad del N-ésimo aminoácido y las sumas se toman sobre los N aminoácidos en la secuencia con periodicidad d =100°. El momento hidrofóbico puede ser expresado como el momento hidrofóbico medio por residuo, dividiendo µH por N para obtener < µH >. Un valor de < µH > a 100° +-.20° de aproximadamente 0.20 o más, sugiere la formación de hélice anfifática. Un estudio realizado por Cometí ef al. ha extendido adicionalmente el estudio de hélices alfa introduciendo el "índice anfifático" como un predictor de la anfifaticidad (J . Mol . Biol., 195: 659-685 (1 987) ; cuya descripción está incorporada aquí mediante referencia). Ellos concluyeron que aproximadamente la mitad de todas las hélices alfa conocidas son anfifáticas, y que la frecuencia dominante es de 97.5° en lugar de 1 00° , siendo la cantidad d residuos por vuelta cercana a 3.7 en lugar de a 3.6. El enfoque básico de Eisenberg , ef al. es suficiente para clasificar una secuencia dada como anfifática, particularmente cuando uno está diseñando una secuencia ab initio para formar una hélice alfa anfifática. Una secuencia de aminoácidos a-helicoidales anfifáticos sustituta puede carecer de homología con la secuencia de un segmento dado de un polipéptido de origen natural, pero producir una estructura secundaria similar, es decir, una hélice alfa que tiene caras opuestas, polar y no polar, en el entorno fisiológico. El reemplazo de la secuencia de aminoácidos de origen natural con una secuencia alternativa, puede afectar de manera beneficiosa la actividad, estabilidad u otras propiedades fisiológicas del polipéptido originario alterado. Los ejemplos de informes que describen el diseño y selección de estas secuencias se proporcionan en J . L. Kxstenansky, ef al. , FEBS Letters 242: 2, 409-41 3 (1 989), y en J . P. Seg rest, et al. Proteins: Structure, Function , and Genetics 8: 1 03-1 17 (1 990) entre otros. Los polipéptidos de la presente invención comprenden una hélice alfa anfifática correspondiente a la fórmula: Haa (Laa Laa Haa Haa)n Laa en donde los Haa se seleccionan del grupo de aminoácidos hidrofílicos y los Laa se seleccionan del grupo de aminoácidos lipofílicos, según se definió anteriormente. Asumiendo una hélice alfa idealizada en una modalidad en donde n=2, los residuos 1 , 4, 5, 8, y 9 están distribuidos a lo largo de una cara (A) de la hélice dentro de un arco de aproximadamente 140° uno del otro, mientras que los residuos 2, 3, 6, 7, y 10 ocupan un arco opuesto de 140° en la otra cara (B) de la hélice. En una modalidad, todos los residuos en una cara tienen la misma polaridad, mientras que todos los de la otra cara tienen la polaridad opuesta, es decir, si la cara A es toda hidrofílica, la cara B es toda lipofílica y viceversa. El técnico hábil reconocerá que mientras que las hélices de la invención están descritas por Haa(Laa Laa Haa Haa)n Laa, la secuencia inversa, Laa (Haa Haa Laa Laa)n Haa también cumplirá con los criterios de distribución de residuos y es un descriptor equivalente de las hélices de la invención. La alanina puede ser sustituida por cualquier aminoácido hidrofílico o lipofílico, dado que la Ala puede residir fácilmente en cualquier cada de una hélice alfa anfifática, si bien la Ala-10 no forma una hélice alfa anfifática. Generalmente, la prolina, la cisteína y la tirosina no se usan; sin embargo, su presencia y otros errores aleatorios en la secuencia pueden ser tolerados, por ejemplo, un residuo hidrofílico sobre la cara lipofílica, siempre que los aminoácidos remanentes en el segmento estén sustancialmente conformes con la división de la cara hidrofílica y la cara lipofílica. Un método conveniente para determinar si una secuencia es suficientemente anfifática como para ser una secuencia de esta invención , es calcular el momento hidrofóbico medio, según se definió anteriormente. Si el momento medio pico por residuo a 100° +-20° excede de aproximadamente 0.20, entonces la secuencia formará una hélice anfifática y será una secuencia de la invención. Al aplicar este concepto a PACAP y a VIP, se tiene la hipótesis de que cualquiera o ambas regiones (terminal N o terminal C), preferiblemente el terminal C, puede mostrar una estructura secundaria a-helicoidal y podría ser reemplazado con una secuencia no homologa que tenga tendencias estructurales similares, sin pérdida de actividad biológica o inducción de inmuno reacción. Formulaciones farmacéuticas Los polipéptidos de la presente invención se pueden administrar en cualquier cantidad para impartir efecto terapéutico beneficioso. En una modalidad preferida, los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de niveles de glucosa elevados en la sangre, hiperglicemia, diabetes, incluyendo Diabetes mellitus de tipo 2, resistencia a la insulina, acidosis metabólica y obesidad. En una modalidad , los compuestos que se presentan aquí proporcionan actividad beneficiosa en la modulación de insulina y/o de niveles de glucosa. En una modalidad, los polipéptidos de la presente se administran a un paciente en concentraciones más altas o más bajas q ue las de otras formas de tratamiento que modulan la secreción de insulina y/o de glucosa. En todavía otra modalidad, los polipéptidos de la presente se administran con otros compuestos para producir un efecto terapéutico sinérgico. Por ejemplo, los polipéptidos de la invención se pueden administrar en conjunto con exendina o con análogos de exendina . Eiemplos Eiem plo 1 : Análogos si ntéticos Algunos de los ejemplos de análogos sintéticos de polipéptido ilustrados en la figura 1 provienen de VPAC2 sel U ld B (véase la figura 1 ). Otros ejemplos de análogos sintéticos de polipéptido que se ¡lustran en la figura 1 son homólogos truncados de VI P (véase la figu ra 1 ) . En u n aspecto, los análogos de polipéptido de los homólogos truncados de VI P activos fisiológicamente, son tales como los que se muestran en la figu ra 1 como TP 1 hasta TP 6. Los análogos TP 1 hasta TP 6 tienen un residuo acilo largo que contiene de 12 a 24 átomos de carbono , preferiblemente de 16 a 24 átomos de carbono. Lo análogos TP 7 hasta TP 12 que se muestran en la figura 1 tienen un resid uo acilo en el término N , que contiene de 2 a 1 6 átomos de carbono, preferiblemente 6 átomos de carbono. Los análogos de SQN M 1 0-1 2 (correspondientes a SEQ I D NO: 40-42) que se muestran en la figu ra 2 no contienen acilación en cualquiera de los términos C o N . Otros análogos de polipéptido representativos que se presentan aquí tienen secuencias de aminoácidos que corresponden a la fórmula general (I): Ac¡lo-His-Ser-Asp-aa1-aa2-Phe-Thr-aa3-aa -Tyr-aas-Arg-aa6-Arg-Lys- Gln-aaT-Ala-aas-Lys-Lys-Tyr-Leu-aag-aaio-aan-aa^-aa-is- aa 4-aa15- aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-Lys(e-acilo Iargo)-X Fórmula (I) en donde: n = 1-3; Haa es un aminoácido hidrofílico; Laa es un aminoácido lipofílico; acilo es una cadena acilo de 2 a 16 átomos de carbono; acilo largo es una cadena acilo de 12 a 24 átomos de carbono; X es OH o NHR1 cuando R1 es H o alquilo ¡nferior, haloalquilo, o PEG; aa! es Gly o Ala; aa2 es Val, Me, o Leu; aa3 es Asp o Arg; aa es Ser o Asn; aa5 es Ser o Thr; aa6 es Leu o Tyr; aa7 es Met, Leu, o Val; aa8 es Ala o Val; aa9 es Asn, Gln, o Ala; aa-i-i es He o Val; aa 2 es Leu o Lys; aa13 es Lys, Arg, Asn, o Gly; aa14 es Ala o Gly; aa15 es Lys o Arg; y aa16 es Lys o Arg. En una modalidad preferida, acilo es una cadena acilo de 2 a 8 átomos de carbono and acilo largo es una cadena acilo de 12 a 24 átomos de carbono. Otros análogos de polipéptido representativos que se presentan aquí tienen secuencias de aminoácidos que corresponden a la fórmula general (II): Acilo-His-Ser-Asp-aa1-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg- Lys-Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13- aa14-aa15-aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-aa17-Pro-Pro-Pro- Lys(e-acilo largo)-X Fórmula (II) en donde: n = 1 - 3; Haa es un aminoácido hidrofílico; Laa es un aminoácido lipofílico; acilo es una cadena acilo de 2 a 16 átomos de carbono; acilo largo es una cadena acilo de 12 a 24 átomos de carbono; X es OH o NHR1 cuando R1 es H o alquilo inferior, haloalquilo, o PEG; aa! es Gly o Ala; aa2 es Val, He, o Leu; aa3 es Asp o Arg; aa4 es Ser o Asn; aa5 es Ser o Thr; aa6 es Leu o Tyr; aa7 es Met, Leu, o Val; aa8 es Ala o Val; aa9 es Asn, Gln, o Ala; aa10 es Trp, Ala, o Ser; aa1 es Me o Val; aa12 es Leu o Lys; aa13 es Lys, Arg, Asn, o Gly; aa14 es Ala o Gly; aa15 es Lys o Arg; aai6 es Lys o Arg; y aa 7 está ausente o es GIn. En una modalidad preferida, acilo es una cadena acilo de 2 a 8 átomos de carbono y acilo largo es una cadena acilo de 12 a 24 átomos de carbono. Otros análogos de polipéptido representativos que se presentan aquí tienen secuencias de aminoácidos que corresponden a la fórmula general (lll): Acilo-His-Ser-Asp-aa-?-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg-Lys- Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aa9-aa?o-aa-??-aa12-aa13-aa1 -aai5- aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-Lys(e-acilo largo)-PEG Fórmula (III) en donde: n = 1 - 3; Haa es un aminoácido hidrofílico; Laa es un aminoácido lipofílico; acilo es una cadena acilo de 2 a 16 átomos de carbono; acilo largo es una cadena acilo de 12 a 24 átomos de carbono; aa! es Gly o Ala; aa2 es Val, Me, o Leu; aa3 es Asp o Arg; aa4 es Ser o Asn; aa5 es Ser o Thr; aa6 es Leu o Tyr; aa7 es Met, Leu, o Val; aa8 es Ala o Val; aa9 es Asn, Gln, o Ala; aa10 es Trp, Ala, o Ser; " aa-n es He o Val; aa 2 es Leu o Lys; aa13 es Lys, Arg, Asn, o Gly; aa14 es Ala o Gly; aa15 es Lys o Arg; y aa 6 es Lys o Arg. En una modalidad preferida, acilo es una cadena acilo de 2 a 8 átomos de carbono y acilo largo es una cadena acilo de 12 a 24 átomos de carbono. El técnico entrenado se dará cuenta de que numerosas permutaciones de los análogos del polipéptido pueden ser sintetizadas, las cuales poseerán los atributos deseables de aquellos que se describen aqu í, siempre que una secuencia de aminoácidos tenga un momento hidrofóbico medio por residuo a 1 00° +-20° más que aproximadamente 0.20 esté insertado en las posiciones en la región del terminal C. Eiemplo 2: Método general para sintetizar Polipéptidos Los polipéptidos de la invención se pueden sintetizar mediante métodos tales como los que se exponen en J. M . Stewart y J. D. Young , Solid Phase Peptide Synthesis, 2a. Ed . , Pierce Chemical Co. , Rockford , 1 1 1 . (1 984) y en J . Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, Vol. 2 , Academic Press, New York, (1 973) para síntesis en fase sólida, y en E. Schroder y K. Lubke, The Peptides, Vol. 1 , Academic Press, New York, (1 965) para síntesis en solución , y en Houben-Weilo, Synthesis of Peptides and Peptidomimetics. 4ta. Ed . Vol E22; M . Goodman, A. Félix, L. Moroder, C. Toniolo, Eds. , Thieme: New York, 2004 para técnicas de síntesis general. Las descripciones de los tratados precedentes están incorporadas aquí mediante referencia En general, estos métodos involucran la adición secuencial de aminoácidos protegidos para una cadena de péptidos en crecimiento. Normalmente, ya sea el grupo amino o el grupo carboxilo del primer aminoácido y cualquier grupo de cadena lateral reactivo, están protegidos. Este aminoácido protegido es cualquiera unido a un soporte sólido inerte, o utilizado en solución , y el siguiente aminoácido en la secuencia, también protegido apropiadamente, se añade bajo condiciones susceptibles de formación del enlace amida. Después de que todos los aminoácidos deseados han sido enlazados en la secuencia apropiada, se eliminan los grupos protectores y cualquier soporte sólido para producir el polipéptido crudo. El polipéptido se desala y se purifica, preferiblemente cromatográficamente, para dar el producto final. Un método preferido para preparar los análogos de los polipéptidos truncados activos fisiológicamente, que tienen menos de aproximadamente cuarenta aminoácidos, implica la síntesis de péptido en fase sólida. En este método las funciones a-amino (Na) y cualesquiera cadenas laterales reactivas están protegidos por grupos sensibles a ácidos o a bases. El grupo protector tiene que ser estable para las condiciones de formación de enlace peptídico, y al mismo tiempo ser fácilmente removible sin afectar la cadena de polipéptidos existente. Los grupos protectores a-amino apropiados incluyen, sin limitarse a ellos, t-butoxicarbonilo (Boc), benciloxicarbonilo (Cbz), o-clorobenciloxicarbonilo, bifenilisopropiloxicarbonilo, t-amiloxicarbonílo (Amoc), isoborniloxicarbonilo, a,a-dimetil-3,5-dimetoxibenciloxicarbonilo, o-nitrofenilsulfenilo, 2-ciano-t-butoxicarbonilo, 9-fluoreniI-metoxicarbonilo (Fmoc) y similares, preferiblemente t-butoxicarbonilo (Boc). Los grupos protectores de cadena lateral apropiados incluyen, sin limitarse a ellos, : acetilo, bencilo (Bzl), benciloximetilo (Bom), o-bromobenciloxicarbonilo, t-butilo, t-butildimetilsililo, 2-clorobencil (CI-z), 2,6-diclorobencil, ciciohexilo, ciclopentilo, isopropilo, pivalilo, tetrahidropiran-2-ilo, tosilo (Tos), trimetilsililo, y tritilo. En la síntesis en fase sólida, el aminoácido del terminal C se une primero a un soporte de resina apropiado. Los soportes de resina apropiados son aquellos materiales que son inertes a los reactivos y a las condiciones de reacción de la condensación paso a paso y a las reacciones de desprotección, así como también son insolubles en los medios utilizados. Los ejemplos de resinas disponibles comercialmente incluyen resinas de estireno/divinilbenceno modificadas con un grupo reactivo, por ejemplo, co-poli-(estireno-divinilbenceno) clorometilado, co-poli-(estireno-divinilbenceno) hidroximetilado, y similares. Se prefiere la resina de fenilacetamidometilo (PAM) hidroximetilada. Cuando el término C del compuesto es una amida, una resina preferida es resina de p-metilbenzhidrilamino-co-poli(estireno-divinil-benceno). La unión a la resina PAM se puede lograr mediante la reacción del aminoácido Na protegido, preferiblemente el Boc-aminoácido, como su sal de amonio, cesio, trietilamonio, 1 ,5-diazabiciclo-[5.4.0]undec-5-eno, tetrametilamonio, o similar en etanol, acetonitrilo, N . N-dimetilformamida (DMF), y similares, preferiblemente la sal de cesio en DMF, con la resina a una temperatura elevada, por ejemplo entre aproximadamente 40 y 60 °C, de preferencia aproximadamente 50 °C, durante desde aproximadamente 12 hasta 72 horas, de preferencia durante aproximadamente 48 horas.

El Na-Boc-aminoácido puede ser unido a la resina de benzhidrilamina, por ejemplo, por medio de acoplamiento mediado por N ,N'-diisopropilcarbodiimida (DIC)/1 -hidroxibenzotriazol (HOBt) durante desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 2 horas, a una temperatura de entre aproximadamente 10 y 50 °C, preferiblemente 25 °C en un solvente tal como diclorometano o dimetilformamida, preferiblemente diclorometano. El acoplamiento sucesivo de los aminoácidos protegidos se puede llevar a cabo mediante métodos bien conocidos en la técnica, comúnmente en un sintetizador de péptido automático. Después de la neutralización con trietilamina o con una base similar, cada aminoácido protegido preferiblemente se introduce en aproximadamente 1 .5 a 2.5 veces de exceso molar y el acoplamiento se lleva a cabo en un solvente polar inerte, no acuoso, tal como diclorometano, DMF, o mezclas de él, preferiblemente en díclorometano a temperatura ambiente. Los agentes de acoplamiento representativos son N ,N'-dicicIohexilcarbodiimida (DCC), N,N'-diisopropiI-carbodiimida (DIC) u otra carbodiimida, ya sea sola o en la presencia de 1 -hidroxibenzotriazol (HOBt), O-acil ureas, hexafluorofosfato de benzotriazoI-1 -ii-oxitris(pirrolidino)fosfonio (PyBop), N-hidroxisuccinimida, otras N-hidroxiimidas, u oximas. Alternativamente, se puede usar esteres activos de aminoácido protegido (por ejemplo p-nitrofenilo, pentafluorofenilo y similares) o anhídridos simétricos.

AI final de la síntesis en fase sólida, el péptido completamente protegido se elimina de la resina. Cuando el enlace al soporte de la resina es del tipo éster bencílico, se puede efectuar el desprendimiento por medio de aminólisis con una alquilamina o fluoroalquilamina para los péptidos con un término C alquilamida, o mediante aminólisis, por ejemplo, con amoniaco/metanol o con amoniaco/etanol para péptidos con un término C amida no sustituido, a una temperatura de entre aproximadamente -10° y 50 °C, preferiblemente aproximadamente 25 °C, durante entre aproximadamente 12 y 24 horas, preferiblemente aproximadamente 18 horas. Los péptidos con un término hidroxi pueden ser desprendidos por medio de H F u otro régimen de desprotección acida o mediante saponificación. Alternativamente, el péptido puede ser eliminado de la resina mediante trans esterificación, por ejemplo, con metanol, seguido por aminólisis o saponificación. El péptido protegido puede ser purificado mediante cromatografía en gel de sílice. Los grupos protectores de cadena lateral pueden ser eliminados del péptido mediante tratamiento del producto de la aminólisis, por ejemplo, con fluoruro de hidrógeno anhídrido líquido en la presencia de anisol o de otro depurador de ion carbono, tratamiento con fluoruro de hidrógeno/complejo piridina, tratamiento con tris(trifluoroacetiI)boro y ácido trifluoroacético, mediante reducción con hidrógeno y paladio sobre carbón o polivinilpirrolidona, o mediante reducción con sodio en amoniaco líquido, preferiblemente con fluoruro de hidrógeno líquido y anisol a una temperatura de entre aproximadamente -10° y +10 °C, de preferencia aproximadamente a 0 °C, durante entre aproximadamente 15 minutos y 2 horas, de preferencia aproximadamente 1 .5 horas. Para los péptidos en la resina de benzhidrilamina, el desprendimiento de la resina y los pasos de desprotección se pueden combinar en un solo paso utilizando fluoruro de hidrógeno líquido y anisol, tal como se describió anteriormente. La solución puede ser desalada (por ejemplo con resina de intercambio aniónico BioRad AG-3. RTM.) y el péptido co-poli(estireno-divinilbenceno), por ejemplo Amberlite.RTM. XAD; cromatografía por adsorción en gel de sílice; cromatografía por intercambio iónico en carboximetilcelulosa; cromatografía de partición, por ejemplo en Sephadex. RTM. G-25; distribución contra corriente; o cromatografía líquida de alto desempeño (HPLC), especialmente HPLC de fase inversa en empaque de columna unida a octil- u octadecil-sililsílice (ODS). Así, otro aspecto de la presente invención se refiere a procesos para preparar polipéptidos y sales de ellos aceptables farmacéuticamente, los cuales contienen aminoácidos protegidos en condensación secuencial sobre un soporte de resina apropiado, eliminando los grupos protectores y el soporte de resina, y purificando el producto, para producir análogos del homólogo truncado activos fisiológicamente y análogos de PACAP y VIP, preferiblemente de PACAP y VIP, en los cuales los aminoácidos en el término C forman una secuencia peptídica a-helicoidal anfifática, tal como se definió anteriormente aquí. Eiemplo 3: Ejemplo de síntesis y procedimiento de purificación para un análogo de polipéptido representativo El análogo de polipéptido representativo correspondiente a SEQ ID NO: 1 se preparó usando los métodos sintéticos y de purificación descritos más adelante. Pentanoilo-His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu- Arg-Lys-G I n-Val-AIa-AIa-Lys-Lys-Tyr- Leu-As n-Trp-lle-Lys-Lys-Ala-Lys-Arg-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Lys (épsilon estearoiIo)-NH2 (SEQ I D NO: 1 ) De manera general, el péptido fue sintetizado en resina Fmoc- Rink-Amida-PEG por medio de química con Fmoc. Los grupos protectores utilizados para los grupos funcionales de cadena lateral de aminoácidos son: grupo t-Butilo para Glu, Tyr, Thr, Asp y Ser; grupo Boc para Lys y Trp; grupo Pbf para Arg; grupo Trt para Asn y His. Los aminoácidos protegidos con N-alfa Fmoc se adquirieron en EMD Biosciences (San Diego, CA). Los reactivos para acoplamiento y para escisión se adquirieron en Aldrich (St. Louis, MO). Los solventes se adquirieron en Fisher Scientific (Fairlawn, NJ). De manera general, el procedimiento de síntesis implicó el ensamblaje de la cadena peptídica o resina mediante la eliminación repetitiva del grupo protector Fmoc y el acoplamiento de aminoácido protegido. Para la síntesis, se acopló Dde-Lys(Fmoc)-OH en la resina Rink Amida primero. El grupo protector Fmoc se eliminó luego mediante 20% de piperidina en DM F . Se acopló ácido esteárico en la cadena lateral de Lys usando H BTU , HOBt y N M M . El g rupo Dde se eliminó mediante hidrazina al 2% en D MF y el sig uiente aminoácido proíegido con Fmoc fue acoplado. El H BTU y el HO Bl se usaron como reacfivo de acoplamienío y se usó N M M como base. Después de la eliminación del úlíimo g rupo proíecfor Fmoc, se acopló ácido valérico (4 equivaleníes) al íérmino amino con DIC (4 equivalentes) y HOBt (4 eq uivalentes). La resina peptídica se íraló con el cocíel 1 para la escisión y eliminación de los grupos protectores de la cadena lateral. El pépíido crudo se precipiíó a paríir de éíer frío, y se recolecíó medianfe filíración . La purificación del pépíido crudo se logró por medio de RPH PLC usando una columna de 20 mm x 250 mm , de Waíers (Milford , MA). El pépíido se pu rificó usando regulador TFA. Se ufilizó un gradieníe lineal de 35% a 55% de aceíoniírilo en 60 minuíos. Las fracciones agrupadas fueron liofilizadas. La ideníidad del pépíido se verificó medianfe análisis de especíromeíría de masa y análisis de aminoácidos. La pureza del pépfido se deíerminó medianíe cromaíografía de columna (Columna C1 8, 4.6 x 250mm, fabricada por Supelco (Sí. Louis, MO)) en H PLC analííica. El procedimienío aníerior se puede resumir en el siguiente procedimiento paso a paso: Paso 1 . Aumento de volumen de la resina: Se dejó aumentar de volumen la resina de Fmoc-Rmk-Amida-PEG en DCM durante 30 minutos (1 0 mL/g resina) Paso 2. Desproíección : a. Se le añadió solución de 20% piperidina/D M F (1 0 mL/g resina) a la resina; b. Se agiíó la solución duranfe 30 minufes (se comenzó a medir el íiempo cuando íoda la resina esíaba floíando libre en el recipieníe de la reacción); y c. Se vació la solución. Paso 3. Lavado: Se lavó la resina con DM F (1 0 mL/g resina) cinco veces. Se realizó la prueba de ninhidrina y resulfó posifiva. Paso 4. Acoplamienío: a. Se pesó Fmoc-AA-OH (3 equivaleníes calculados con relación a la carga de resina y HO Bf (3 equivaleníes con relación a la carga de resina) en una boíella plásíica. b. Se disolvieron los sólidos con DM F (5 mL/g resina). c. Se le añadió H BTU (3 equivaleníes con relación a la carga de resina) a la mezcla, seguido por la adición de NMM (6 equivaleníes con relación a la carga de resina). d . Se le añadió la mezcla a la resina. e. Se hizo burbujear la mezcla (o se agiíó) suavemeníe duraníe 1 0 - 60 minufos hasfa que se obfuvo una prueba negafiva a la ninhidrina en una muesíra peq ueña de resina. Paso 5. Lavado: Se lavó íres veces la resina con DM F. Paso 6. Se repiíieron los pasos 2 hasía 5 hasía q ue esfuvo ensamblado el pépíido. Paso 7. Desprofección de Fmoc en el ferminal N : Se repitió el paso 2. Paso 8. Lavado y secado: a. Después del acoplamienío final, se lavó la resina íres veces con DMF, una vez con MeOH , íres veces con DCM, y íres veces con MeOH. b. Se secó la resina al vacío (por ejemplo, con una aspiradora de agua) duraníe 2 horas y a alio vacío (bomba de aceiíe) duranle un mínimo de 12 horas. Paso 9. Desprendimienío: a. Se colocó la resina seca en una boíella plásíica y se le añadió el cocfel para escisión. SE agiló la mezcla a íemperaíura ambieníe duranfe 2.5 horas. b. La resina se eliminó medianíe filíración bajo presión reducida. Se lavó dos veces con TFA. Se combinaron los filírados y se le añadió un volumen de 8 a 10 veces de éfer frío para obíener un precipiíado. c. Se aislaron los pépíidos crudos medíanle filíración, y luego se lavaron dos veces con éter frío. Las siguientes sustancias químicas y solventes se utilizaron en el procedimiento de síntesis descrito anteriormenfe: NMM (N-Meíilmorfolina); HBTU Hexafluorofosfafo de (2-(1 H-Benzofriazol-1 -il)-1 , 1 ,3,3-íelrameíiluronio); HOBí (1 -HidroxibenzoíriazoI); DMF (Dimeíilformamida); DCM (Dicloromeíano); Melanol; Éíer dielílico; Piperidina; Tis (Triisopropilsilano); Tioanisol; Fenol; EDT (1 ,2-Eíanodiíiol); Ácido írifluoroacélico, Cocfel 1 : TFA/Tioanisol/Fenol/ H2O/EDT (87.5/5/2.5/2.5/2.5 v/v/); regulador TFA: A (0.1 % TFA en agua); y regulador TFA B (0.1 % TFA en Acetonitrilo).

Oíros análogos de polipépfido represeníafivos fueron preparados de una forma similar a la descrifa aníeriormeníe aquí. En la íabla 1 esíán las propiedades químicas de los análogos de polipépíido de la invención. Tabla 1. Propiedades de eiemplos de análogos de polipéptido Eiemplo 4: Síntesis recombinante de los polipéptidos Alíernaíivameníe, los polipépíidos de la preseníe invención pueden ser preparados por clonación y expresión de un gen que codifica el polipépíido deseado. En esíe proceso, un plásmido que coníiene la secuencia de ADN deseada se prepara y se insería en un microorganismo huésped apropiado, íípicameníe una bacíeria, fal como E. coli, o una levadura, lal como Saccharomyces cerevisiae, induciendo al microorganismo huésped a producir múlíiples copias del plásmido, y así sucesivamente, del ADNc que codifica los análogos de polipéptido de la invención . Primero, un gen sintético que codifica el análogo de PACAP o VI P seleccionado se diseña con sitios de escisión de enzima de restricción convenientes para facilitar las alteraciones subsig uientes. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) , tal como lo piensa Mullís en las paíentes estadounidenses números 4,683, 195 y 4,683,202 , incorporadas aq uí mediante referencia, se puede usar para amplificar la secuencia. El gen sintético amplificado puede ser aislado y ligado a u n plásmido apropiado, tal como un plásmido Trp LE en el cual se puede insertar cuatro copias del gen en tándem. La preparación de los plásmidos Trp LE está descrita^ en la patente estadounidense número 4,738,921 . y en la publicación de patenle europea No. 021 2532, incorporadas aquí mediante referencia. Los plásmidos Trp LE generalmente prod ucen de 8 a 1 0 veces más proteína que los plásmidos Trp E. El gen multi copias puede ser expresado luego en un h uésped apropiado, tal como E. coli o S. cerevisiae. El Trp LE 1 8 Prot (Me3, Pro5) se puede usar como un vector de expresión en la presente invención . El Trp LE 1 8 Prot (Me3, Pro5) contiene los siguientes elementos: un fragmento pBR322 (EcoRI-BamH I) que contiene el gen resisíente a la ampicilina y el origen plásmido de la replicación ; un fragmento EcoRI-Sacl l que contiene el promotor de trp y el gen de trpE; un fragmento genético (Sacl l-Hindlll) de proteasa de VI H(He3, Pro5) ; un fragmento genético (HindIII-BamHI) de bGRF; y un terminador de transcripción del gen rpoc de E. coli. La proíeasa de VI H y los fragmentos genéticos de bGRF no son críticos, y pueden ser reemplazados con otras secuencias codificadores, si se desea. Las proteínas de fusión multiméricas expresadas luego se acumulan intracelularmenle en cuerpos de inclusión esíable y pueden ser separadas medianíe cenírifugación del resto de la proteína celular. La proteína de fusión aislada se convierte al PACAP o VIP análogo monomérico y se puede purificar medianíe iníercambio caíiónico o medianfe HPLC de fase inversa. Los méíodos alíernaíivos para clonación, amplificación, expresión y purificación serán evideníes para el fécnico enfrenado. Los méíodos represeníafivos esíán descrifos en Maniaíis, ef al. , Molecular Cloning , a Laboraíory Manual, 3a. Ed., Cold Spring Harbor Laboraíory (2001 ), incorporado aquí medianíe referencia. Eiemplo 5: Bioanálisis in vitro con cultivos estáticos de células en islote El siguiente ejemplo de bioanálisis in vitro se realizó para evaluar la capacidad de análogos de polipéptido representaíivos para modular la secreción de insulina. Aislamiento de islotes Se recolecíaron isloíes de raía (Sweeí IR, ef al. (2004) Biochem. Biophys. Res. Commun. 314, 976-983) de raías Fisher machos con un peso de alrededor de 250 g , las cuales fueron aneslesiadas medianíe inyección infraperiíoneal de peníobarbiíal sódico (35 mg/230 g raía). En general, los islofes se prepararon inyecíando colagenasa (10 mL de 0.23 mg/mL de Liberase, Roche Molecular Biochemicals, I ndianapolis, I N) en el ducío pancreáíico del páncreas parcialmeníe disecado y se exlrajo quirúrgicameníe. Todos los procedimieníos fueron aprobados por el Comilé Insíiíucional de Cuidado y Uso de Animales (I nsíiíuíional Animal Care and Use Commiífee) de la Universidad de Washingíon. Los páncreas fueron colocados en íubos cónicos de 15mL que coníenían 5 mL de 0.23 mg/mL de Liberase y se incubaron a 37 °C duraníe 30 min. Luego se filtró el digesío a íravés de una malla de acero inoxidable de 400-micrómeíros, enjuagada con solución salina regulada de Hanks, y se purificó en una solución gradieníe de Opliprep (Nycomed, Oslo, Noruega). Las islefas se cullivaron duraníe 18-24 h antes de realizar el análisis en medio RPMl 1640 complementado con 10% (v/v) suero fetal bovino inactivado por calor(FBS), antibiótico - antimicófico (100 U/mL de penicilina, 100 1 g/mL de esfrepíomicina, y 0.25 1 g/mL de anfoíericina B), 2 mM de gluíamina (fodas de Gibco-BRL, Grand Island, NY), y 1 mM de beta mercaptoefanol. Bioanálisis Se escogieron los islofes bajo un microscopio y se colocaron en 10 mL de solución reguladora de Krebs Ringer (KRB) 3 mM para el lavado. Se incubaron los islofes en glucosa KRB 3mM duraníe 60 min y luego grupos de 10 isloíes por recepíáculo se colocaron en 200 µL de medio en una placa de 96 recepíáculos. Se incubaron los isloíes duraníe 1 20 min bajo condiciones de conírol o de íraíamiento, y se recolecfaron los supernadanles. Se someíió a prueba un conjunío de condiciones íípico con 3mM de glucosa (conírol en reposo) , 1 6mM de glucosa (confrol de prueba), 1 6 mM de glucosa + 1 0 nm GLP1 , 1 6 m M de glucosa + 1 0 nM de Exendina 4, 1 6 mM de glucosa + 50 n M de pépfido de prueba . Las condiciones del regulador fueron KRB con 0.1 % de BSA, H EPES 20 m M , y el análisis se realizó por cuadruplicado. Se evaluaron los supernadanfes para deíerminar el coníenido de insulina usando un análisis inmunoabsorbeníe ligado a enzimas (ELISA) con insulina comercial según las insírucciones del fabricaníe. Resultados del bioanálisis La Tabla 2 ilusíra la secreción de insulina obíenida en el análisis anferior para el análogo TP-106, el cual mosíró acíividad máxima en esíe análisis en una conceníración de 200 n M . En comparación se somefió a prueba la Exendina 4 en esíe análisis, y mosfró acfividad máxima a 1 0 nM . El TP-106 es un análogo alíameníe hid rofóbico, diseñado para deposiíarse en el siíio de la inyección se y por lo laño se espera que la conceníración efecíiva de TP-1 06 sea mucho más baja que la concenfración nominal (200 nM). Tabla 2. Resultados del bioanálisis del cultivo estático de cél ulas de islote con TP- 106 El análisis del cultivo estálico de células de islote descrito arribe, se realizó en ejemplos de análogos de polipépíido adicionales. Los TP-1 07 mosíraron acíividad máxima en esfe análisis en una conceníración de 1 00 n M . En comparación, se someíió a prueba la Exendina 4 en esíe análisis y mosfró acíividad máxima a 1 0 nM . Los pépíidos preseníados fueron diseñados para unirse a albúmina de suero, y por ello, la concenlración de pépíido libre para imparíir acíividad a la insulina se espera que sea mucho más baja , y por lo íanío, el análogo será más poíenle que lo indicado en esíe análisis in vitro. Tabla 3. Resultados del bioanálisis del cultivo estático de cél ulas de islote con TP-1 07 y TP-1 08 Eiemplo 6: Bioanálisis in vivo El siguienfe ejemplo de análisis in vivo se realizó para evaluar la capacidad de análogos de polipépíido represeníaíivos para modular la secreción de insulina. Grupos sometidos a prueba en el estudio Raíones db/db hembras sin fralamienío previo, de 8 semanas de edad , se aclimafaron duraníe una semana, periodo duraníe el cual los animales fueron manipulados periódicamenfe para permiíirles aclimaíarse para los procedimieníos experimentales. Los grupos del estudio coníenían 6 raíones por grupo, y se les adminisíró una de las siguieníes inyecciones infraperifoneales: (1 ) Vehículo conírol; (2) Conírol posiíivo (exendina 4 u oíro íraíamienío esíándar); (3) Análogo de polipépíido en alia dosis; o (4) Análogo de polipépíido en dosis baja. Se tomó un volumen pequeño de un corte en la punta de la cola para muestreo de sangre. Se determinaron los niveles de glucosa en sangre en un medidor de glucosa manual comercial. El día 1 , se le inyectó a los animales los análogos de polipéptidos y confroles en la mañana. Se íomaron muestras de sangre y se analizaron inmediatameníe antes de la inyección y a las 2, 4, 8, 14, y 24 horas después de la inyección. Se permitió que se alimentaran los animales, ad libitem, durante todo el análisis (Tsutsumi et al, Diabeíes 51 : 1453-60 (2002)). La Tabla 4 enumera un muesíreo represeníaíivo de los dafos obfenidos del análisis in vivo descriío aníeriormeníe. Como se muesíra más abajo, los TP-106 mosíraron acíividad significativa estadísíicameníe (por ejemplo, glucosa en plasma reducida) en una dosis alta dos horas después de la inyección , y mantuvieron su actividad 4 horas después de la dosis. Tabla 4. Resultados del análisis in vivo con TP- 1 03 y TP- 1 06 *d .s. = desviación esíándar Eiem plo 7: Usos de la invención Los polipéptidos de la presente invención son útiles para la prevención y iratamienlo de una variedad de trasíornos metabólicos. En particular, los compuestos de la presenfe invención están indicados para la profilaxis y traíamienío íerapéuíico de los niveles de glucosa elevados en la sangre, hiperglicemia, diabeíes, incluyendo diabeles melliíus de íipo 2, resisíencia a la insulina, acidosis mefabólica y obesidad. En general, los polipépíidos de la invención, o sus sales, se adminisfran en canlidades eníre aproximadamenfe 0.01 y 1 µg/kg de peso corporal por día, preferiblemenfe desde aproximadameníe 0.07 hasía aproximadameníe 0.2 µg/kg de peso corporal por día. Para un sujeío humano de sexo femenino de 50 kg, la dosis diaria de ingrediente activo es desde aproximadamenfe 0.5 hasla aproximadameníe 50 µg, preferiblemente desde aproximadamente 3.5 hasta aproximadameníe 10 µg. En otros mamíferos, tales como caballos, perros y ganado, se puede requerir dosis más altas. Esta dosificación puede ser suministrada en una composición farmacéutica convencional mediante una sola adminisíración, medianíe múltiples aplicaciones, o mediante liberación controlada, según sea necesario para lograr los resultados más efectivos, preferiblemente una o más veces diariamente medianíe inyección. En oíra modalidad, los polipépíidos de la invención se pueden adminisírar en combinación con otros compuestos útiles para el tratamiento de trastornos metabólicos. Por ejemplo, los polipéptidos de la invención se pueden administrar con uno o más de los siguieníes compuesfos uíilizados para el írafamienío de írasíornos metabólicos, incluyendo, sin limitación a ellos, insulina, análogos de insulina, incretina, análogos de increíina, péptido similar al glucagón , análogos de péptido similar al glucagón , exendina, análogos de exendina, sulfonilu reas, biguanidas, inhibidores de a-glucosidasa, tiazolidinodionas, los agonisías del recepíor activado del proliferador de peroxisoma (PPAR, el cual incluye agentes que acfúan sobre los subíipos a, ß, o y de los receptores de PPAR y/o aquellos agentes q ue actúan sobre múlíiples subtipos de los receptores de PPAR), aníagonistas de PPAR y agonisías parciales de PPAR se pueden administrar en combinación con los polipéptidos de la preseníe invención . La selección de la dosis y composición exacfa y el régimen de suminisíro más apropiado será influenciada, eníre oíros, por las propiedades farmacológicas del polipépfido seleccionado, la naíuraleza y g ravedad de la condición q ue esíá siendo íraíada, y la condición física y la agudeza mental del receptor. Los regímenes de suministro repre'sentaíivos incluyen oral, parenferal (incluyendo subculáneo, iníramuscular e iníravenoso), recial, bucal (incluyendo sublingual) , fransdérmico e intranasal. Las sales aceptables farmacéuticameníe mantienen la actividad biológica deseada del polipéptido originario sin efectos secundarios tóxicos. Los ejemplos de estas sales son (a) sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos, por ejemplo ácido clorhíd rico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico y similares; y sales formadas con ácidos orgánicos tales como por ejemplo, ácido acéíico, ácido oxálico, ácido íaríárico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido cíírico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido fánico, ácido pamoico, ácido algínico, ácido poliglulámico, ácidos nafíalenosulfónicos, ácidos nafíaleno disulfónicos, ácido poligalacturónico y similares; (b) sales de adición de base formadas con cationes metálicos polivalenfes íales como zinc, calcio, bismuío, bario, magnesio, aluminio, cobre, cobalío, níquel, cadmio, y similares; o con un cafión orgánico formado a partir de N,N'-dibenciletilendiamina o etilendiamina; o (c) combinaciones de (a) y (b), por ejemplo, una sal tanaío de zinc y similares. Un aspecío adicional de la presenfe invención se refiere a composiciones farmacéuíicas que coníienen como ingredieníe acíivo un polipépfido de la preseníe invención, o una sal de él acepíable farmacéuticameníe, en combinación con un portador no íóxico, acepfable farmacéuíicameníe. Como se mencionó anferiormeníe, esfas composiciones pueden ser preparadas para su adminisíración pareníeral (subcuíánea, inframuscular o infravenosa), parlicularmeníe en la forma de soluciones o suspensiones líquidas; para su adminisíración oral o bucal, paríicularmeníe en la forma de íabletas o cápsulas, para su administración iníranasal, paríicularmeníe en la forma de polvos, gotas nasales o aerosoles; y para su administración rectal o transdérmica. Las composiciones se pueden adminislrar convenienlemenle en formas de dosis unitaria, y se pueden preparar mediante cualquiera de los méíodos bien conocidos en la íécnica farmacéutica, por ejemplo como se describe en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a. ed. , Mack Publishing Company, Easíon, Pa., (1985), incorporado aquí medianíe referencia. Las formulaciones para adminisíración pareníeral pueden confener como excipienles agua esíéril o solución salina, glicoles de alquileno íales como propilenglicol, glicoles de polialquileno fales como polieíilenglicol, aceiíes de origen vegeíal, naflalenos hidrogenados y similares. Para su administración oral, la formulación puede ser mejorada mediante la adición de sales de bilis o acilcarnitinas. Las formulaciones para adminisfración nasal pueden ser sólidas y pueden confener excipieníes, por ejemplo, lacíosa o dexírán , o pueden ser soluciones acuosas o aceiíosas para su uso en la forma de gofas nasales o rocío con medidor. Para su adminisíración bucal, los excipieníes fípicos incluyen azúcares, estearato de calcio, estearaío de magnesio, almidón pregelaíinizado, y similares. Cuando se formula para su adminisíración nasal, la absorción a íravés de la membrana mucosa nasal puede ser mejorada medianíe ácidos íensoacíivos, íales como por ejemplo, ácido glicocólico, ácido cólico, ácido íaurocólico, ácido efocólico, ácido desoxicólico, ácido quenodesoxicólico, ácido deshidrocólico, ácido glicodesoxicólico, ciclodextrinas y similares en una cantidad en el rango de entre aproximadamente 0.2 y 15 por ciento por peso, preferiblemente entre aproximadamente 0.5 y 4 por ciento por peso, mucho más preferiblemente aproximadamente 2 por ciento por peso. Una clase adicional de mejoradores de absorción que muesíra mayor eficacia con irriíación disminuida, es la clase de alquil malfosidas, tales como la teíradecilmaltosida (Arnold , JJ , ef al. (2004). J Pharm. Sci. 93, 2205-1 3, y las referencias mencionadas en él, todo lo cual está incorporado aqu í medianfe referencia) . El suminisíro de los compuesíos de la presente invención al sujeto duraníe periodos de íiempo prolongados, por ejemplo, duranfe periodos desde una semana hasta un año, puede lograrse mediante una sola administración de u n sisfema de liberación prolongada que coníiene suficieníe ingredieníe activo para el periodo de liberación deseado. Diversos sistemas de liberación conírolada, íales como microcápsulas de fipo depósito monolíticas, implaníes de depósito, bombas osmóticas, vesículas, micelios, liposomas, parches transdérmicos, disposiíivos ioníoforéticos y formas de dosis inyecíables alíernaíivas, pueden ser uíilizados para este propósito. La localización en el sitio hacia el cual se desea el suminisíro del ing redieníe acíivo es una caracíerística adicional de algunos disposiíivos con liberación conírolada, los cuales se puede probar que son beneficiosos en el traíamienfo de ciertos trasíornos. Una forma de formulación de liberación controlada contiene el polipéptido o su sal dispersada o encapsulada en un polímero leníameníe degradable, no tóxico, no antigénico, íal como ácido copoli(lácíico/glicólico) , según se describe en el írabajo pionero de Kení, Lewis, Sanders, y Tice, en la paíenfe estadounidense número 4,675, 1 89, incorporados aqu í mediante referencia. Los compuestos o, preferiblemente, sus sales relativameníe insolubles, íambién se pueden formular en colesíerol o en oíros granulos para maíriz lípida, o en implaníes para mafriz silasfomérica. Formulaciones adicionales de liberación lenta, implante con depósito o formulaciones inyectables serán evidentes para el técnico enfrenado. Véase, por ejemplo, Sustained and Controlled Reléase Drug Delivery Systems, J. R. Robinson ed. , Marcel Dekker, Inc. , New York, 1978, y R. W. Baker, Conírolled Reléase of Biologically Active Agents, John Wiley & Sons, New York, 1987, incorporado aquí mediante referencia Todas las publicaciones y solicitudes de patenfe mencionadas en esta especificación, están incorporadas aquí mediante referencia en la misma extensión que si cada publicación o solicitud de pateníe esíuviera indicada específica e individualmente para ser incorporada mediante referencia. Si bien los ejemplos y descripción presentados anteriormente pretenden ilustrar la síntesis y prueba de los compuestos representaíivos de la invención, se entenderá que son susceptibles de modificaciones adicionales y que no deben ser interpretados como limitantes del alcance de las reivindicaciones anexas. Referencias US 5,589,452 (1996), Análogos of Parathyroid Hormone and Parathyroid Hormone Related peptide: Synthesis and Use for the Treatment of Osteoporosis. J. L. Krstenansky et al. Arnold, JJ , ef al. (2004). Correlaíion of Tetradecilmalíoside Induced Increases in Nasal Pepíide Drug Delivery wifh Morphological Changes in Nasal Epiíhelial Cells. J Pharm. Sci. 93, 2205-13 Yung , SL., ef al. (2003) Generation of Highiy Selective VPAC2 Receptor Agonists by High Throughpuí Muíagenesis of Vasoactive Infeslinal Polipépíido and Piluiíary Adenylaíe Cyclase-acíivating Peptide. J Biol Chem 278, 10273-81 . Tsutsumi, M ., ef al. (2002) A Poíení and Highiy Selecíive VPAC2 Agonist Enhances Glucosa-l nduced Insulina Reléase and Glucosa Disposal. A Poteníial Therapy for Type 2 Diabetes. Diabetes 51 , 1453-60. Langer, L, ef al. (2004) Hexanoylafion of VPAC2 receptor-preferring ligand markedly increased ifs selecíiviíy and poíency. Pepfides 25, 275-8. Knudsen, LB, ef al. (2000). Poíent Derivaíives of Pépíido similar al glucagón- 1 wiíh Pharmacokinefic Properfies Suiíable for Once Daily Adminisíraíion. J . Med. Chem. 43, 1664-9 Gourlet P, et al. (1997). The long-acting vasoacíive iníesíinal polipépíido agonisí RO 25- 1553 is highly selective of the VTP2 receptor subclass. Peptides 18, 403-8 Gourlet P, ef al. (1998). Interacíion of lipophilic VI P derivatives with recombinaní VIPI / PACAP and VIP2 / PACAP recepfors. Eur. J. Pharmacol. 354, 105-1 1 1 Greenwald RB, ef al. (2003). Effective drug delivery by PEGylaíed drug conjugaíes. Adv. Drug Del. Rev. 55, 217-250 Nielsen LL, Young, AA, Parkes, DG (2004). Pharmacology of exenatide (syntheíic exendina- 4): a poteníial fherapeutic for ¡mproved glycemic control of type 2 diabetes. Regul. Peptides 1 17, 77-88 Kieffer TJ y Habener, JR (1999). The Glucagon-Like Peptides. Endocr. Rev. 20, 876-913 Knudsen, LB. (2004). Glucagon-like Peptide-1 : The Basis of a New Class of Treaímení for Type 2 Diabeíes. J. Med. Chem. 47, 4128-34 Kurízhals, P ef al. (1995). Albumin binding of insulins acylated wiíh faííy acids: characíerizaíion of íhe ligand-proíein interacíion and correlaíion beíween binding affinity and timing of the insulin effect in vivo. Biochem J . 312, 725-31 . Kurtzhals, P. (2004). Engineering predictability and protracfion in a basal insulina analogue: íhe pharmacology of insulin detemir. Inf. J. Obesiíy 28, Supl 2, S23-8 Xia M , ef al. (1997). Novel cyclic pepíide agonist of high potency and selectivity for the type l l vasoactive iníesíinal pepíide recepfor. J. Pharmacol. Exp. Ther. 281 , 629-33 Deiíers, A, ef al. (2004). Siíe-specific PEGylation of proteins containing unnafural aminoácidos. Bio-org . Med. Chem. Leíí. 14, 5743-5

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Un polipépfido infestinal vasoacíivo seleccionado del grupo que consisíe en: (a) un polipéptido que corresponde a la fórmula (I): Acilo-His-Ser-Asp-aa -aa2-Phe-Thr-aa3-aa -Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg-Lys- Gln-aaT-Ala-aas-Lys-Lys-Tyr-Leu-aag-aa^-aa-H-aa-^-aaTs- aa 4-aa15- aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-Lys(e-acilo Iargo)-X Fórmula (I) en donde: n = 1-3; Haa es un aminoácido hidrofílico; Laa es un aminoácido lipofílico; acilo es una cadena acilo de 2 a 16 átomos de carbono; acilo largo es una cadena acilo de 12 a 24 átomos de carbono;

X es OH o NHR1 cuando R1 es H o alquilo inferior, haloalquilo, o PEG; aa! es Gly o Ala; aa2 es Val, Me, o Leu; aa3 es Asp o Arg; aa4 es Ser o Asn; aa5 es Ser o Thr; aa6 es Leu o Tyr; aa7 es Met, Leu, o Val; aa8 es Ala o Val; aa9 es Asn, Gln, o Ala; aa-M es He o Val; aa12 es Leu o Lys; aa13 es Lys, Arg, Asn, o Gly; aa 4 es Ala o Gly; aa15 es Lys o Arg; y aa16 es Lys o Arg. (b) un polipéptido que corresponde a la fórmula (II): Acilo-His-Ser-Asp-aa1-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg- Lys-Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13- aa14-aa15-aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-aa17-Pro-Pro-Pro- Lys(e-acilo Iargo)-X Fórmula (II) en donde: n = 1 - 3; Haa es un aminoácido hidrofílico; Laa es un aminoácido lipofílico; acilo es una cadena acilo de 2 a 16 átomos de carbono; acilo largo es una cadena acilo de 12 a 24 átomos de carbono; X es OH o NHR1 cuando R1 es H o alquilo inferior, haloalquilo, o PEG; aa! es Gly o Ala; aa2 es Val, He, o Leu; aa3 es Asp o Arg; aa4 es Ser o Asn; aa5 es Ser o Thr; aa6 es Leu o Tyr; aa7 es Met, Leu, o Val; aa8 es Ala o Val; aa9 es Asn, Gln, o Ala; aa10 es Trp, Ala, o Ser; aa-M es Me o Val; aa12 es Leu o Lys; aa-i3 es Lys, Arg, Asn, o Gly; aa14 es Ala o Gly; aa15 es Lys o Arg; aa¡6 es Lys o Arg; y aa-?7 está ausente o es Gln. (c) un polipépíido que corresponde a la fórmula (lll): Acilo-His-Ser-Asp-aa?-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg-Lys- Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aag-aa?o-aa11-aai2-aa 3-aa14-aa15- aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-Lys(e-aci!o Iargo)-PEG Fórmula (III) en donde: n = 1 - 3; Haa es un aminoácido hidrofílico; Laa es un aminoácido lipofílico; acilo es una cadena acilo de 2 a 16 átomos de carbono; acilo largo es una cadena acilo de 12 a 24 átomos de carbono; aai es Gly o Ala; aa2 es Val, Me, o Leu; aa3 es Asp o Arg; aa4 es Ser o Asn; aa5 es Ser o Thr; aa6 es Leu o Tyr; aa7 es Meí, Leu, o Val; aa8 es Ala o Val; aa9 es Asn, Gln, o Ala; aa-io es Trp, Ala, o Ser; aat1 es He o Val; aa12 es Leu o Lys; aa-,3 es Lys, Arg, Asn, o Gly; aa1 es Ala o Gly; aa15 es Lys o Arg; y aa16 es Lys o Arg. (d) un polipéptido seleccionado de SEQ ID NO: 1 - SEQ ID

NO: 38. 2. El polipéptido de la reivindicación 1, caracterizado además porque acilo es una cadena acilo de 4 a 8 áíomos de carbono; acilo largo es una cadena acilo de 6 a 14 áíomos de carbono; y PEG es una cadena de polieíilen glicol de 2 a 20 áíomos de carbono. 3. Un méfodo para producir el polipépíido de la reivindicación 1, dicho méíodo comprende siníeíizar el polipéptido mediante la adición secuencial de aminoácidos proíegidos a una cadena de péplidos, eliminando los grupos proíectores, desalando y purificando el polipéplido.

4. Un méíodo para producir el polipépfido de la reivindicación 1 , dicho méíodo comprende expresar un gen que codifica dicho polipéptido y purificar el polipéptido expresado.

5. Un vector de expresión que codifica el polipéptido de la reivindicación 1 .

6. Una célula huésped transformada con un vector de expresión de la reivindicación 5.

7. Una composición farmacéutica que contiene una cantidad efectiva del polipéptido de la reivindicación 1 , o una sal aceptable de él, y al menos un portador o excipiente aceptable farmacéuticamente.

8. La composición farmacéuíica de la reivindicación 7, que además confiene una caníidad efectiva de al menos un compuesto escogido del grupo que consiste en insulina, análogos de insulina, incretina, análogos de increlina, pépíido similar al glucagón, análogos de pépfido similar al glucagón, exendina, análogos de exendina, sulfonilureas, biguanidas, inhibidores de a-glucosidasa, tiazolidinodionas, agonisfas del recepíor acíivado del proliferador de peroxisoma (PPAR), antagonislas de PPAR y agonisías parciales de PPAR.

9. Un méíodo para írafar niveles de glucosa elevados en la sangre, el méíodo comprende adminisírar una caníidad efecíiva terapéuíicamenle del polipépfido de la reivindicación 1 .

10. El método de la reivindicación 9, que además comprende administrar una canfidad efectiva terapéuficameníe de al menos un compuesío escogido del grupo q ue consiste en insulina, análogos de insulina, incretina, análogos de increíina, pépíido similar al glucagón , análogos de pépíido similar al glucagón, exendina, análogos de exendina, sulfonilureas, biguanidas, inhibidores de a-glucosidasa, íiazolidinodionas, agonisfas de PPAR, antagonisías de PPAR y agonisías parciales de PPAR. 1 1 . U n método para traíar diabeíes, el méíodo comprende administrar una cantidad efectiva terapéuficameníe del polipéptido de la reivindicación 1 . 1 2. El método de la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque la diabetes es diabetes melliíus de tipo 2. 13. El método de la reivindicación 1 1 , que además comprende administrar u na caníidad efecíiva lerapéuíicamenfe de al menos un compuesto escogido del g rupo que consiste en insulina, análogos de insulina, incretina, análogos de incretina, pépíido similar al glucagón, análogos de pépíido similar al glucagón , exendina, análogos de exend ina, sulfonilureas, biguanidas, inhibidores de a-glucosidasa, íiazolidinodionas, agonisías de PPAR, aníagonisías de PPAR y agonistas parciales de PPAR. 14. U n método para traíar resisíencia a la insulina, el méíodo comprende adminisírar una caníidad efectiva terapéuiicamenie del polipépíido de la reivindicación 1 . 1 5. El mélodo de la reivindicación 14, que además comprende adminisfrar una caníidad efectiva terapéuticamente de a! menos un compuesto escogido del grupo que consiste en insulina, análogos de insulina, incretina , análogos de incretina, péptido similar al glucagón, análogos de péptido similar al glucagón , exendina, análogos de exendina, sulfonilureas, big uanidas, inhibidores de a-glucosidasa, tiazolidinodionas, agonistas de PPAR, antagonistas de PPAR y agonistas parciales de PPAR. 1 6. Un método para prevenir acidosis metabólica, que comprende administrar u na cantidad efectiva terapéuticamente del polipéptido de la reivindicación 1 . 1 7. El método de la reivindicación 1 6, que además comprende administrar una cantidad efectiva terapéuticamente de al menos un compuesto escogido del grupo que consiste en insulina, análogos de insulina, incretina, análogos de incretina, péptido similar al glucagón , análogos de péptido similar al glucagón, exendina, análogos de exendina, sulfonilureas, inhibidores de glucosidasa, tiazolidinodionas, agonistas de PPAR, antagonistas de PPAR y agonistas parciales de PPAR. 1 8. U n método para tratar obesidad , que comprende administrar una cantidad efectiva terapéuticamente del polipéptido de la reivindicación 1 . 19. El método de la reivindicación 18 , que además comprende administrar una cantidad efectiva terapéuticamente de al menos un compuesto escogido del grupo que consiste en insulina, análogos de insulina, incretina , análogos de incretina, péptido similar al glucagón, análogos de pépíido similar al glucagón , exendina, análogos de exendina, sulfonilureas, biguanidas, inhibidores de a- glucosidasa, tiazolidinodionas, agonistas de PPAR, antagonisfas de PPAR y agonistas parciales de PPAR.