JP2008515437A

JP2008515437A - 血管活性腸管ポリペプチド医薬品

Info

Publication number: JP2008515437A
Application number: JP2007535856A
Authority: JP
Inventors: ネスター，ジョン
Original assignee: フォーブスメディ−テック（リサーチ）インコーポレーテッド
Priority date: 2004-10-08
Filing date: 2005-10-07
Publication date: 2008-05-15
Also published as: CA2584095A1; AU2005294125A1; WO2006042152A2; EP1804820A4; KR20070067136A; WO2006042152A3; US7566691B2; EP1804820A2; US20060079456A1; MX2007004116A; CN101056647A; IL182342A0; BRPI0516126A

Abstract

【課題】血管活性腸管ポリペプチド医薬品の提供。
【解決手段】血管活性腸管ポリペプチドに関する医薬組成物及び糖尿病、インシュリン耐性、代謝性アシドーシス及び肥満を含む代謝性疾患の治療のための方法を提供する。血管活性腸管ポリペプチド組成物の使用方法も開示する。
【選択図】なし

Description

本発明は、ポリペプチド類似体及びそれらの合成及び使用に関する。より特には、本発明は、血管活性腸管ポリペプチドに関連した合成ポリペプチド類似体及びその医薬組成物に関する。

食物が消化器官に存在する場合、腸内の細胞は、ホルモンシグナル（インクレチン）を分泌し、そしてそれはグルコースの存在に対して膵臓を敏感にし、グルコース依存インシュリン分泌反応の増強をもたらす。グルコース依存インシュリン放出をもたらすこのような相乗的な応答（ＫｉｅｆｆｅｒＴＪａｎｄＨａｂｅｎｅｒ，ＪＲ（１９９９）Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．２０，８７６−９１３）は、インクレチンシグナル、グルカゴン様ぺプチド１（ＧＬＰ１）及びグルコース依存インシュリン分泌促進ペプチド（ＧＩＰ）に見られる。これらのインクレチンシグナルは、典型的には、体内に短期間の作用を示し、ＧＬＰ１では約１ないし２分の半減期（Ｔ１／２）を示す（Ｋｎｕｄｓｅｎ，ＬＢ２００４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７，４１２８−３４）。ＧＬＰ１及びＧＩＰは、アミノペプチダーゼ、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）によって開裂されるため、天然発生ホルモンは、一般に医薬製剤には使用されない。アメリカドクトカゲの唾液から発見されたペプチド（エキセンディン４、エキセナチド；カリフォルニア州、サンディエゴ、アミリンファーマシューティカルズ（ＡｍｙｌｉｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ））は、ＧＬＰ受容体と結合し、強いアゴニスト活性を示し、それによって所望のグルコース依存インシュリン分泌反応を与えることが分かっている（ＮｉｅｌｓｅｎＬＬ，Ｙｏｕｎｇ，ＡＡ，Ｐａｒｋｅｓ，ＤＧ（２００４）Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔｉｄｅ，１１７，７７−８８）。エキセナチド及びＧＬＰ１の類似体は、ＩＩ型糖尿病の治療を必要とする患者に投与されてきた。

下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）は、ＰＡＣ１、ＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２受容体を刺激する神経調節性ペプチドであり、膵臓の神経終末から放出される。この一般分類の受容体は、膵臓を含む体内の様々な組織に存在する。膵臓におけるＶＰＡＣ２受容体の刺激は、ＧＬＰ１又はエキセナチドと同様に、血糖値に応じてグルコース依存インシュリン放出を増強することが分かっている（Ｔｓｕｔｓｕｍｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．（２００２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ５１，１４５３−６０）。このような刺激（ＰＡＣＡＰ又はＶＰＡＣアゴニスト類似体からの）は、増強されたインシュリン分泌と類似のプロフィールが第二分類の受容体の活性化から得られるため、グルコース依存インシュリン放出の刺激において、インクレチンシグナルと相乗的であり得るか、又はインクレチン様のシグナルに代わるものであり得る。このような効果は、ＩＩ型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）、代謝性アシドーシス、インシュリン耐性及び肥満を含む代謝性疾患の治療において有益であり得る。しかしながら、天然発生配列のＰＡＣＡＰ及びその類似体はまた、典型的には、体内において短命である。
ＫｉｅｆｆｅｒＴＪａｎｄＨａｂｅｎｅｒ，ＪＲ（１９９１）Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．２０，８７６−９１３Ｋｎｕｄｓｅｎ，ＬＢ２００４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７，４１２８−３４ＮｉｅｌｓｅｎＬＬ，Ｙｏｕｎｇ，ＡＡ，Ｐａｒｋｅｓ，ＤＧ（２００４）Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔｉｄｅ，１１７，７７−８８Ｔｓｕｔｓｕｍｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．（２００２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ５１，１４５３−６０

合成エキセンディン４は、相対的に短作用のペプチドであり、グルコース依存インシュリン分泌を調節し得る長作用ペプチドが医薬的に必要とされている。

本発明は、Ｃ−末端が、両親媒性α−へリックスを形成するアミノ酸残基からなり、前記残基が親水性アミノ酸（Ｈａａ）及び親油性アミノ酸（Ｌａａ）から選択され、下記式

（式中、ｎは１ないし５を表わす。）で表わされる配列を有するところのＰＡＣＡＰの合成ポリペプチド類似体及び血管活性腸管ポリペプチド（ＶＩＰ）及びそれらの塩を提供する。一つの態様において、ｎは１又は２を表わす。

本発明のＰＡＣＡＰ及びＶＩＰのポリペプチド類似体において導入される変性は、ＰＡＣＡＰ及びＶＩＰ受容体ファミリー、好ましくはＶＰＡＣ２受容体を活性化する治療作用時間の増加を促進する。いかなる特定の理論にもとらわれずに、作用時間の増加は、体内の細胞膜のリン脂質と相互作用するＣ−末端領域の両親媒性へリックスの能力によるものであり得、そしてそれにより‘‘持続’’効果を奏すると考えられる。そのため、本発明のポリペプチド類似体は、細胞膜に結合され、その後、ゆっくりと血漿に再放出され、遠位にその効果をもたらす。一方、ＰＡＣＡＰ、ＶＩＰ又はＧＬＰ１等のペプチドが血漿中にない場合、それは、プロテアーゼによって急速に作用するか、又は糸球体濾過によって除去される。

それ故、本発明の一つの観点は、Ｃ−末端が、両親媒性α−へリックスを形成するアミノ酸残基からなり、天然アミノ酸又は非天然アミノ酸から選択された前記アミノ酸残基の配列が前記α−へリックスを安定化する能力を有するところのＰＡＣＡＰ、ＶＩＰ類似体、及び、生理学的に活性な切断型の類似体及び同様の相同体、又はそれらの塩を提供する。

Ｃ−末端が、両親媒性α−へリックスを形成するアミノ酸残基からなり、前記残基が親水性アミノ酸（Ｈａａ）及び親油性アミノ酸（Ｌａａ）から選択され、下記式

（式中、ｎは１ないし５を表わす。）で表わされる配列を有するところのＰＡＣＡＰ、ＶＩＰのポリペプチド類似体、及び、生理学的に活性な切断型の類似体及び同様の相同体、又はそれらの塩の、グルコース依存インシュリン放出のための有効量を配送するための医薬組成物も提供する。

本発明は、更に、高血糖を特徴とする哺乳動物の疾患を治療するための方法であって、該方法は、Ｃ−末端が、両親媒性α−へリックスを形成するアミノ酸残基からなり、前記残基が親水性アミノ酸（Ｈａａ）及び親油性アミノ酸（Ｌａａ）から選択され、下記式

（式中、ｎは１ないし５を表わす。）で表わされる配列を有するところのＰＡＣＡＰ、ＶＩＰのポリペプチド類似体、及び、生理学的に活性な切断型の類似体及び同様の相同体、又はそれらの塩の、グルコース依存インシュリン放出のための有効量を、必要に応じて哺
乳動物に投与することからなる方法を提供する。

本発明はまた、Ｃ−末端が、両親媒性α−へリックスを形成するアミノ酸残基からなり、前記残基が親水性アミノ酸（Ｈａａ）及び親油性アミノ酸（Ｌａａ）から選択され、下記式

（式中、ｎは１ないし５を表わす。）で表わされる配列を有するところのＰＡＣＡＰ、ＶＩＰのポリペプチド類似体、及び、生理学的に活性な切断型の類似体及び同様の相同体、又はそれらの塩の固相合成法も含む。

本発明において、ポリペプチド類似体の製造方法は、保護されたアミノ酸を適当な樹脂キャリヤー上に、順次、カップリングし、側鎖及びＮα−保護基を除去し、樹脂からポリペプチドを開裂させることからなる。

（式中、ｎは１ないし５を表わす。）で表わされる配列を有するところのＰＡＣＡＰ、ＶＩＰのポリペプチド類似体、及び、生理学的に活性な切断型の類似体及び同様の相同体、又はそれらの塩の組み換え合成のためのＤＮＡ配列、ベクター及びプラスミドも提供する。

更に、本発明は、有効量の本発明のポリペプチド又はその塩及び医薬的に許容可能なキャリヤーからなる医薬組成物並びに、高血糖値によって現れる、糖尿病、インシュリン耐性、高血糖症、代謝性アシドーシス及び肥満を含む様々な代謝性疾患の予防及び治療方法を提供する。本発明の他の観点において、治療有効量の、インシュリン、インシュリン類似体、インクレチン、インクレチン類似体、グルカゴン様ペプチド、グルカゴン様ペプチド類似体、エキセンディン、エキセンディン類似体、スルホニルウレア、ビグアニド、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）アゴニスト、ＰＰＡＲアンタゴニスト及びＰＰＡＲ部分アゴニストを含む代謝性疾患のための化合物が、本発明のポリペプチドと組み合わせて投与され得る。

図面の簡単な説明
図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは、本発明に従った典型的なポリペプチド類似体の表である。アミノ酸は、一文字略語を使用した標準命名法で表わした。文字‘‘Ｘ’’は、炭素原子数１０ないし３０００のポリエチレングリコール鎖を言及する。用語‘‘ａｃｙｌ’’は、炭素原子数２ないし１６のアシル鎖を言及する。文字‘‘Ｚ’’は、ε位において長鎖アシル基を有するリジンを言及する。用語‘‘ｈｅｘ’’は、ヘキサノイル基を言及する。用語‘‘ｐｅｎ’’は、ペンタノイル基を言及する。用語‘‘ｌａｕ’’は、ラウロイル基を言及する。用語‘‘ｍｙｒ’’は、ミリストイル基を言及する。用語‘‘ｓｔｅ’’は、ステアロイル基を言及する。用語‘‘ｐｒ’’は、プロピオニル基を言及する。

図２は、他のポリペプチド及びポリペプチド類似体の表である。

発明の詳細な説明
略語及び定義
様々な一般的なヌクレオチド塩基及びアミノ酸の一文字及び三文字略語は、ＰｕｒｅＡｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．３１，６３９−６４５（１９７２）及び４０，２７７−２９０（１９７４）に推奨されており、３７ＣＦＲ．ｓｃｔｎ．１．８２２（５５ＦＲ１８２４５，Ｍａｙ１，１９９０）に従っている。略語は、特にＤ−又はＤＬと記載がない限りは、Ｌ−アミノ酸を表わす。天然及び非天然の、特定のアミノ酸、例えばグリシンは、アキラルである。全てのペプチド配列において、Ｎ−末端アミノ酸は左側に、Ｃ−末端アミノ酸は右側に存在する。

‘‘親水性アミノ酸（Ｈａａ）’’はペプチド結合を形成するために必要とされるものの他に、少なくとも１つの親水性官能基を有するアミノ酸、例えば、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、リジン、セリン、トレオニン及びそれらの類似体を言及する。

‘‘親油性アミノ酸（Ｌａａ）’’は、非電荷の、脂肪族又は芳香族アミノ酸、例えばイソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、バリン及びそれらの類似体を言及する。

本発明において、アラニンは、‘‘両親媒性’’として分類される、即ち親水性としても親油性としても作用することができる。

‘‘ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰの相同体’’は、天然のＰＡＣＡＰ又はＶＩＰのアミノ酸配列と実質的に相似のアミノ酸配列からなる、例えば少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％のアミノ酸配列が同一のポリペプチドを言及する。該相同体は、天然のＰＡＣＡＰ又はＶＩＰのアミノ酸配列と比べて、アミノ酸の置換体、欠失体及び／又は挿入体を含み得る。例示的な相同体は、天然のＰＡＣＡＰ又はＶＩＰのアミノ酸配列と同一であるか又は実質的に相似の、少なくとも５、１０、２０、２５、３０又は３５個の連続アミノ酸範囲を含む。

‘‘ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰの類似体’’は、（ｉ）ＰＡＣＡＰ、ＶＩＰ、及び／又は、ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰの相同体；及び（ｉｉ）天然発生のＰＡＣＡＰ及び／又はＶＩＰにおいて、少なくとも１種の存在しない官能基を含むポリペプチドを言及する。例えば、類似体は、所望により、アミノ酸の側鎖内に又はポリペプチドのアミノ末端又はカルボキシル末端において、官能基を含み得る。例示的な官能基は、アルキル基、アリール基、アシル基、ケト基、アジド基、ヒドロキシル基、ヒドラジン基、シアノ基、ハロ基、ヒドラジド基、アルケニル基、アルキニル基、エーテル基、チオール基、セレノ基、スルホニル基、ボレート基、ボロネート基、ホスホ基、ホスホノ基、ホスフィン基、複素環基、エノン基、イミン基、アルデヒド基、エステル基、チオ酸基、ヒドロキシルアミン基、アミノ基等又はこれらのあらゆる組み合わせを含む。導入され得る他の例示的な官能基は、光活性化架橋剤、スピン標識されたアミノ酸、蛍光アミノ酸、金属結合しているアミノ酸、金属含有アミノ酸、放射性アミノ酸、新規官能基を有するアミノ酸、他の分子と共有的に又は非共有的に相互作用するアミノ酸、光ケージ（ｐｈｏｔｏｃａｇｅｄ）及び／又は光異性化アミノ酸、ビオチン又はビオチン類似体を含むアミノ酸、グリコシル化アミノ酸、例えば糖置換セリン、他の糖修飾アミノ酸、ケト基含有アミノ酸、ポリエチレングリコール又はポリエーテルを含むアミノ酸、重原子置換アミノ酸、化学的に開裂性の及び／又は光開裂性のアミノ酸、天然アミノ酸と比べて長い側鎖、例えばポリエーテル又は長鎖炭化水素、例えば約５個以上の又は約１０個以上の炭素原子を有するものを有するアミノ酸、炭素が結合した糖含有アミノ酸、レドックス活性アミノ酸、アミノチオ酸含有アミノ酸、及び１つ以上の毒性部位を含むアミノ酸を含むが、これらに限定されない。

本発明の類似体は、天然アミノ酸に基づく非天然アミノ酸、例えば、パラ−置換チロシン、オルト−置換チロシン及びメタ−置換チロシンを含むチロシン類似体（ここで、置換チロシンは、アセチル基、ベンゾイル基、アミノ基、ヒドラジン、ヒドロキシアミン、チオール基、カルボキシ基、イソプロピル基、メチル基、炭素原子数６ないし２０の直鎖の又は枝分かれした炭化水素、飽和又は不飽和炭化水素、Ｏ−メチル基、ポリエーテル基、ニトロ基等を含む。）を含み得る。グルタミン類似体は、α−ヒドロキシ誘導体、β−置換誘導体、環状誘導体、及びアミド置換グルタミン誘導体を含むが、これらに限定されない。フェニルアラニン類似体の例は、メタ−置換フェニルアラニン（ここで、置換基は、ヒドロキシ基、メトキシ基、メチル基、アリル基、アセチル基等を含む。）を含むが、これらに限定されない。特定の例は、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃ．β−セリン、Ｌ−ドーパ、蛍光フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン及びイソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン等を含むが、これらに限定されない。

一般に、類似体は、所望により、ポリペプチドの生物学的特性を変性するために、例えば、毒性、生体内分布、溶解性、安定性、例えば熱、加水分解、酸化、酵素分解に対する耐性等、精製及び加工の容易さ、構造特性、分光学的特性、化学及び／又は光化学特性、触媒活性、酸化還元電位、半減期、他の分子との例えば共有的な又は非共有的な反応性等を調節するために、設計又は選択される。

‘‘ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰの生理学的に活性な切断型の相同体又は類似体’’は、ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰにおいて見られるアミノ酸を十分に補完しない配列を有するが、同様の生理学的応答を誘発するポリペプチドを言及する。本発明の典型的な切断型の相同体及び／又は類似体は、ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰの天然配列において見られる、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０又は３５個の連続アミノ酸を含む。切断型のＰＡＣＡＰ又はＶＩＰは、同様の生理学的応答を誘発するために、ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰと十分に相同する必要がない。この群の典型として、ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰが好ましいが、これらに限定されない。

‘‘ＰＥＧ’’は、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール又はポリオキシアルキレンを言及する。一つの態様において、ＰＥＧは、炭素原子数１０ないし３０００の鎖を含む。他の態様において、ＰＥＧは、４０ｋＤ以上の分子量を有する。ＰＥＧは、技術的によく知られており、例えば米国特許第４，６４０，８３５号明細書、米国特許第４，４９６，６８９号明細書、米国特許第４，３０１，１４４号明細書、米国特許第４，６７０，４１７号明細書、米国特許第４，７９１，１９２号明細書及び米国特許第４，１７９，３３７号明細書に記載されている。

‘‘両親媒性α−へリックス’’は、アミノ酸がへリックスの長軸に沿って正しく配置された相反する極性面及び非極性面を有するα−へリックス構造をとると推測されるところの特定のポリペプチドによって示される二次構造を言及する。興味深いポリペプチドにおけるα−へリックス構造の実現性は、‘‘Ｓｃｈｉｆｆｅｒ−ＥｄｍｕｎｄｓｏｎＷｈｅｅｌ’’（参照としてここに組み込まれるＭ．ＳｃｈｉｆｆｅｒａｎｄＡ．Ｂ．Ｅｄｍｕｎｄｓｏｎ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．７，１２１（１９６７））の、へリックスを囲む円筒の対面上の親水性及び親油性残基の適当なピッチ及び分離の有無の説明によって、ある程度調べられ得る。さもなくば、円偏光二色性又はＸ線回析データ等の実証的証拠が、得られたポリペプチドにおけるα−へリックス領域の存在を示すために利用可能であ
り得る。理想的なαへリックスは、１００°の弧によって分離された隣接側鎖の１回転当りに３．６個のアミノ酸残基を有する。

ポリペプチド
一つの態様において、本発明のポリペプチドは、ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰの天然アミノ酸配列の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０又は３５個の連続アミノ酸を有する、ＰＡＣＡＰ及び／又はＶＩＰの不完全部分を含む。他の態様において、本発明のポリペプチドは、ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰの天然アミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５又は９９％共有する。更なる他の態様において、本発明のポリペプチドは、ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰの天然アミノ酸配列と少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、ＰＡＣＡＰ又はＶＩＰの、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０又は３５個の連続アミノ酸の範囲を含む。

本発明のポリペプチドは、所望により、ＶＰＡＣ２選択性を調節する変性、機能、及び／又はアミノ酸置換を含む。例示的な変性、機能、及び／又は置換は、Ｇｏｕｒｌｅｔ他（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ１８，４０３−８；ＸｉａＭ，ｅｔａｌ．（１９９７）及びＪ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２８１：６２９−３３（１９９７）；両文献の内容は、参照としてここに組み込まれる。）により報告されるＣ−末端のカチオン性エクステンション（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）及び／又は変異（ｍｕｔａｔｉｏｎ）を含むが、これらに限定されない。

アミノ又はカルボキシル末端における変性は、所望により、本発明のポリペプチドに導入され得る。例えば、ＶＩＰの類似体等の本発明のポリペプチドは、Ｎ末端を長鎖脂肪酸によってアシル化され、低効率の部分アゴニスト及びアンタゴニスト活性を示すポリペプチドとなり得る（Ｇｏｕｒｌｅｔｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３５４：１０５−１１１（１９９８）、該文献の内容は参照としてここに組み込まれる。）。ＶＩＰ類似体等の本発明のポリペプチドの他の例示的な変性は、ＶＰＡＣ２に対して増加した選択性を示すポリペプチドを得るためのヘキサノン酸を用いたアシル化を含む（Ｌａｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ２５：２７５−８（２００４）、該文献の内容は参照としてここに組み込まれる。）。このようなアシル化の長さ及び位置は、効果を変化させ得、（アンタゴニスト）又はアゴニスト類似体の効果の損失をもたらし得た。この予測不能性に反して、本発明のポリペプチドは、要求される効果及び活性が得られるように設計及び試験されている。

変性は、活性及び／又は有効時間を増加させるために、所望により、本発明のポリペプチド内の少なくとも１つのアミノ酸の側鎖内に導入され得る。例えば、本発明のポリペプチドは、所望により、側鎖内の官能基（即ち、Ｒ基）をアシル化されたアミノ酸を少なくとも１つ含み得る。典型的な変性は、ポリペプチド内の様々な位置の反応性側鎖（例えば、Ｌｙｓ）の脂肪酸アシル化を含む。同様の変性は、ＬｙｓＢ²⁹におけるインシュリンのアシル化がインシュリンデテミルをもたらすところの、カートジャールス他（Ｋｕｒｔｚｈａｌｓｅｔａｌ．，ＢｉｏｃｈｅｍＪ．３１２，７２５−３１（１９９５）及びＫｕｒｔｚｈａｌｓ，Ｐ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓｉｔｙ２８：Ｓｕｐｐｌ２，Ｓ２３−８（２００４））において報告されている。同様に、リンカー分子を介した長鎖脂肪酸を用いたアシル化は、強力で長時間作用するＧＬＰ１の類似体をもたらすが（ＫｎｕｄｓｅｎＬＢ，ｅｔａｌ．（２０００）．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３，１６６４−６９）、該アシル化は、アシル鎖の長さ及び位置に依存して活性又は強力なアゴニストの損失をもたらし得る。長鎖脂肪酸の導入による予測不能な効果に反して、本発明のポリペプチドは、所望の活性を得るために、最適な数、長さ及び位置のアシル鎖を組み込むように設計した。

作用時間を延ばすために、所望により、本発明のポリペプチドに（例えば、ポリペプチド鎖内に、又は、Ｎ−末端又はＣ−末端のどちらかに）導入され得る他の種類の変性は、ＰＥＧ化又は長鎖ポリエチレングリコールポリマー（ＰＥＧ）の組み込みである。ＰＥＧ又はＰＥＧの長鎖ポリマーの導入は、本発明のポリペプチドの有効分子量を増加させ、尿中への急速な濾過を防止する。ＰＥＧ又はＰＥＧの長鎖ポリマーを組み込むための方法は、技術的によく知られており、例えばＧｒｅｅｎｗａｌｄｅｔａｌ．，Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌ．Ｒｅｖ．５５：２１７−２５０（２００３）に記載されており、該文献の内容は、参照としてここに組み込まれる。

つい最近報告された、非天然アミノ酸の組み込みを介したＰＥＧ又はＰＥＧポリマーを組み込むための代替的アプローチは、本発明のポリペプチドを用いて行われ得る。該アプローチは、発達したｔＲＮＡ／ｔＲＮＡ合成酵素対を利用し、アンバーサプレッサーコドンによって発現プラスミド中にコードされる（Ｄｅｉｔｅｒｓ，Ａ，ｅｔａｌ．（２００４）．Ｂｉｏ−ｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１４，５７４３−５）。例えば、ｐ−アジドフェニルアラニンが本発明のポリペプチド中に組み込まれ、その後、‘‘ユイスゲン[３＋２]環化付加（Ｈｕｉｓｇｅｎ[３＋２]ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎ）’’として既知の有機反応を容易にするために、還元剤及び銅イオンの存在下においてアセチレン部位を有するＰＥＧポリマーと反応させられ得る。

両親媒性へリックス
本発明のポリペプチドは、式

（式中、上記で定義したように、Ｈａａは、親水性アミノ酸からなる群から選択され、Ｌａａは、親油性アミノ酸からなる群から選択され、ｎは１ないし５を表わす。）に対応する両親媒性α−へリックスを含む。いかなる特定の理論にもとらわれずに、Ｃ−末端領域の両親媒性へリックスが、体内の細胞膜のリン脂質と相互作用し、それにより‘‘持続’’効果を奏することによって、本発明のポリペプチドの作用時間を増加させると考えられる。本発明のポリペプチドは、単に最適化されたαへリックスではなく、両親媒性αへリックスであるペプチド領域を含む。あらゆる特定の理論にとらわれることなく、両親媒性αへリックスは、細胞膜との相互作用の増加を容易にし、かつ膜相互作用のためのＣ−末端脂肪アシル鎖変性の適切な配置を補助すると考えられる。

エイセンバーグらによる研究は、両親媒性へリックスの概念を数値化するために、疎水性スケールとヘリカルウィールを組み合わせた（Ｎａｔｕｒｅ２９９：３７１−３７４（１９８２）及びＰｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：１４０−１４４（１９８４）；両方の開示は参照としてここに組み込まれる。）。平均疎水性モーメントは、へリックスを構成するアミノ酸成分の疎水性のベクトルの和として定義される。以下のアミノ酸の疎水性は、エイセンバーグらによって、‘‘共通（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）’’スケールとして報告されたものである。
Ｉｌｅ０．７３；Ｐｈｅ０．６１；Ｖａｌ０．５４；Ｌｅｕ０．５３；Ｔｒｐ
０．３７；Ｍｅｔ０．２６；Ａｌａ０．２５；Ｇｌｙ０．１６；Ｃｙｓ０．０４；Ｔｙｒ０．０２；Ｐｒｏ −０．０７；Ｔｈｒ −０．１８；Ｓｅｒ −０．２６；Ｈｉｓ −０．４０；Ｇｌｕ −０．６２；Ａｓｎ −０．６４；Ｇｌｎ −０．６９；Ａｓｐ −０．７２；Ｌｙｓ −１．１０；Ａｒｇ −１．７６。

１回転（又は側鎖間の１００°の弧（＝３６０°／３．６））当りに３．６個の残基を有する理想のα−へリックスの疎水性モーメント（μＨ）は、以下の式

（ここで、Ｈ_Nは、Ｎ番目のアミノ酸の疎水値を表わし、周期性δ＝１００°を用いた配列におけるＮ番目のアミノ酸までの和を取る。）から計算され得る。疎水性モーメントは、ＮでμＨを割り＜μＨ＞を得ることによって、１残基当りの平均疎水性モーメントとして表わされ得る。１００°±２０°における約０．２０以上の＜μＨ＞値は、両親媒性へリックスの形成を示唆する。

コルネットらによる研究は、両親媒性の予測判断材料として、‘‘両親媒性指数’’を導入することによって、両親媒性α−へリックスの研究を更に広げた（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９５：６５９−６８５（１９８７）；この開示は参照としてここに組み込まれる。）。それらは、既知のα−へリックスの約半数が両親媒性であること、及び優位回転数（ｄｏｍｉｎａｎｔｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）は１００°よりむしろ９７．５°であり、１回転当りの残基の数は３．６より３．７に近いことを結論として出している。エイセンバーグらによる基礎的アプローチは、特に、両親媒性α−へリックスを形成するために、非経験的計算法（ａｂｉｎｉｔｉｏ）で配列を設計する場合、得られた配列を両親媒性として分類するのに十分である。

代替両親媒性α−へリックスアミノ酸配列は、天然発生ポリペプチドが有するセグメント配列と相同性が欠け得るが、生理環境において、同様の二次構造、即ち、相反する極性及び非極性面を有するα−へリックスを導く。代替配列との天然発生アミノ酸配列の置換は、生理活性、安定性又は変更したもとのポリペプチドの他の性質に有益に影響し得る。このような配列の設計及び選択を記載する例示的なレポートは、例えばＪ．Ｌ．Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙ，ｅｔａｌ．，ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒ２４２：２，４０９−４１３（１９９８）及びＪ．Ｐ．Ｓｅｇｒｅｓｔ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄＧｅｎｅｔｉｃｓ８：１０３−１１７（１９９０）において提供される。

本発明のポリペプチドは、式

（式中、上記で定義したように、Ｈａａは、親水性アミノ酸からなる群から選択され、Ｌａａは、親油性アミノ酸からなる群から選択される。）に対応する両親媒性α−へリックスを含む。ｎ＝２の態様において、理想のα−へリックスを仮定すると、１、４、５、８及び９番目の残基は、互いに約１４０°の弧の範囲内のへリックスの一面（Ａ）に沿って分布され、一方、２、３、６、７及び１０番目の残基は、へリックスの他面（Ｂ）上の対角の１４０°の弧を占有する。該態様において、一面上の全ての残基は同じ極性を有するものであり、一方、他面上の全ての残基は相反する極性を有するものである、言い換えれば、面Ａが全て親水性であるならば、面Ｂは、逆に全て親油性である。当業者ならば、本発明のへリックスが

と記載される一方、
逆配列である

もまた、残基の分布基準を満たし得、本発明のへリックスと同等の記載であることが分かり得る。

Ａｌａは両親媒性α−へリックスのどちらか一方の面上に容易に存在し得るため、アラニンは他の親水性又は親油性アミノ酸と置換され得るが、Ａｌａ−１０は両親媒性α−へリックスを形成しない。一般に、プロリン、システイン及びチロシンは使用されない；しかしながら、配列におけるそれらの存在及び他のランダムエラー、例えば、親油面上の親水性残基は、セグメント中に残存するアミノ酸が、実質的に親水面−親油面部分と対応する限りは許容され得る。配列が十分に両親媒性である場合に、本発明の配列であることを決定するための便利な方法は、上記で定義したように平均疎水性モーメントを計算することである。１００°±２０°において１残基当りのピーク平均モーメントが約０．２０を超える場合、該配列は両親媒性へリックスを形成し得、本発明の配列である。

ＰＡＣＡＰ及びＶＩＰにおけるこの概念の適用において、一方の又は両方の領域（Ｎ−末端又はＣ−末端）、好ましくはＣ−末端がα−へリックス二次構造を示し得、生物学的活性の損失又は免疫反応の導入なく、同様の構造傾向を有する非相同配列と置き換えられ得ることが仮定される。

医薬製剤
本発明のポリペプチドは、有益な治療効果を与えるために、いかなる量においても投与され得る。好ましい態様において、本発明の化合物は、高血糖値、高血糖症、ＩＩ型糖尿病を含む糖尿病、インシュリン耐性、代謝性アシドーシス及び肥満の治療に有用である。一つの態様において、本発明の化合物は、インシュリン及び／又はグルコース量の調節に有益な活性を与える。一つの態様において、本発明のポリペプチドは、インシュリン及び／又はグルコース分泌を調節する他の形態の治療剤よりも、より高い又は低い濃度で患者に投与される。更なる他の態様において、本発明のポリペプチドは、相乗治療効果を得るために、他の化合物と共に投与される。例えば、本発明のポリペプチドは、エキセンディン又はエキセンディン類似体と共に投与され得る。

実施例１：合成類似体
図１に示す例示的な合成ポリペプチド類似体のいくつかは、ＶＰＡＣ２ｓｅｌＵｌｄＢから誘導される（図１参照。）。図１に示す他の例示的な合成ポリペプチド類似体は、ＶＩＰの切断型の相同体である（図１参照。）。

一つの観点において、本発明のポリペプチド類似体は、ＶＩＰの生理学的に活性な切断型の類似体、例えばＴＰ１ないしＴＰ６として図１に示されるものである。類似体ＴＰ１ないしＴＰ６は、炭素原子数１２ないし２４、好ましくは炭素原子数１６ないし２４の長鎖アシル残基を有する。図１に示される類似体ＴＰ７ないしＴＰ１２は、Ｎ−末端上に、炭素原子数２ないし１６、好ましくは炭素原子数６のアシル残基を有する。図２に示される類似体ＳＱＮＭ１０ないし１２（配列識別番号４０ないし４２に対応）は、Ｃ又はＮ−末端のどちらにもアシル化を含まない。

本発明の他の典型的なポリペプチド類似体は、一般式（Ｉ）

[式中、
ｎは１ないし３を表わし、
Ｈａａは、親水性アミノ酸を表わし、
Ｌａａは、新油性アミノ酸を表わし、
ａｃｙｌは、炭素原子数２ないし１６のアシル鎖を表わし、
ｌｏｎｇａｃｙｌは、炭素原子数１２ないし２４のアシル鎖を表わし、
Ｘは、ＯＨ又はＮＨＲ１（式中、Ｒ１はＨ又は低級アルキル基、ハロアルキル基又はＰＥＧを表わす。）を表わし、
ａａ₁は、Ｇｌｙ又はＡｌａを表わし、
ａａ₂は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＬｅｕを表わし、
ａａ₃は、Ａｓｐ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₄は、Ｓｅｒ又はＡｓｎを表わし、
ａａ₅は、Ｓｅｒ又はＴｈｒを表わし、
ａａ₆は、Ｌｅｕ又はＴｙｒを表わし、
ａａ₇は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＶａｌを表わし、
ａａ₈は、Ａｌａ又はＶａｌを表わし、
ａａ₉は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ又はＡｌａを表わし、
ａａ₁₀は、Ｔｒｐ、Ａｌａ又はＳｅｒを表わし、
ａａ₁₁は、Ｉｌｅ又はＶａｌを表わし、
ａａ₁₂は、Ｌｅｕ又はＬｙｓを表わし、
ａａ₁₃は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₄は、Ａｌａ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₅は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₁₆は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わす。]に対応するアミノ酸配列を有する。
好ましい態様において、ａｃｙｌは、炭素原子数２ないし８のアシル鎖を表わし、ｌｏｎｇａｃｙｌは炭素原子数１２ないし２４のアシル鎖を表わす。

本発明の他の典型的なポリペプチド類似体は、一般式（ＩＩ）

[式中、
ｎは１ないし３を表わし、
Ｈａａは、親水性アミノ酸を表わし、
Ｌａａは、親油性アミノ酸を表わし、
ａｃｙｌは、炭素原子数２ないし１６のアシル鎖を表わし、
ｌｏｎｇａｃｙｌは、炭素原子数１２ないし２４のアシル鎖を表わし、
Ｘは、ＯＨ又はＮＨＲ１（式中、Ｒ１はＨ又は低級アルキル基、ハロアルキル基又はＰＥＧを表わす。）を表わし、
ａａ₁は、Ｇｌｙ又はＡｌａを表わし、
ａａ₂は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＬｅｕを表わし、
ａａ₃は、Ａｓｐ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₄は、Ｓｅｒ又はＡｓｎを表わし、
ａａ₅は、Ｓｅｒ又はＴｈｒを表わし、
ａａ₆は、Ｌｅｕ又はＴｙｒを表わし、
ａａ₇は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＶａｌを表わし、
ａａ₈は、Ａｌａ又はＶａｌを表わし、
ａａ₉は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ又はＡｌａを表わし、
ａａ₁₀は、Ｔｒｐ、Ａｌａ又はＳｅｒを表わし、
ａａ₁₁は、Ｉｌｅ又はＶａｌを表わし、
ａａ₁₂は、Ｌｅｕ又はＬｙｓを表わし、
ａａ₁₃は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₄は、Ａｌａ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₅は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₁₆は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₁₇は、存在しないか又はＧｌｎを表わす。]に対応するアミノ酸配列を有する。
好ましい態様において、ａｃｙｌは、炭素原子数２ないし８のアシル鎖を表わし、ｌｏｎｇａｃｙｌは炭素原子数１２ないし２４のアシル鎖を表わす。

本発明の他の典型的なポリペプチド類似体は、一般式（ＩＩＩ）

[式中、
ｎは１ないし３を表わし、
Ｈａａは、親水性アミノ酸を表わし、
Ｌａａは、新油性アミノ酸を表わし、
ａｃｙｌは、炭素原子数２ないし１６のアシル鎖を表わし、
ｌｏｎｇａｃｙｌは、炭素原子数１２ないし２４のアシル鎖を表わし、
ａａ₁は、Ｇｌｙ又はＡｌａを表わし、
ａａ₂は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＬｅｕを表わし、
ａａ₃は、Ａｓｐ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₄は、Ｓｅｒ又はＡｓｎを表わし、
ａａ₅は、Ｓｅｒ又はＴｈｒを表わし、
ａａ₆は、Ｌｅｕ又はＴｙｒを表わし、
ａａ₇は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＶａｌを表わし、
ａａ₈は、Ａｌａ又はＶａｌを表わし、
ａａ₉は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ又はＡｌａを表わし、
ａａ₁₀は、Ｔｒｐ、Ａｌａ又はＳｅｒを表わし、
ａａ₁₁は、Ｉｌｅ又はＶａｌを表わし、
ａａ₁₂は、Ｌｅｕ又はＬｙｓを表わし、
ａａ₁₃は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₄は、Ａｌａ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₅は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₁₆は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わす。]に対応するアミノ酸配列を有する。
好ましい態様において、ａｃｙｌは、炭素原子数２ないし８のアシル鎖を表わし、ｌｏｎｇａｃｙｌは炭素原子数１２ないし２４のアシル鎖を表わす。

当業者であれば、１００°±２０°における１残基当りの平均疎水性モーメントが約０．２０以上のアミノ酸配列がＣ−末端領域の位置に挿入されるならば、ここに記載されるものの所望の特性を加工し得る多くの順列のポリペプチド類似体が合成され得ることが分かり得る。

実施例２：ポリペプチドの一般的な合成方法
本発明のポリペプチドは、Ｊ．Ｍ．ＳｔｅｗａｒｔａｎｄＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ２ｎｄｅｄ．，ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌｓＣｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．（１９８４）及び
Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，ＨｏｒｍｏｎａｌＰｒｏｔｅｉｎｓａｎｄＰｅｐｔｉｄｅ，Ｖｏｌ．２，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，（１９７３）ｆｏｒｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ及びＥ．ＳｃｈｒｏｄｅｒａｎｄＫ．Ｌｕｂｋｅ，ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ，Ｖｏｌ．１，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，（１９６５）ｆｏｒｓｏｌｕｔｕｉｏｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓ及びＨｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，ＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅａｎｄＰｅｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ．４ｔｈｅｄ．ＶｏｌＥ２２；Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ａ．Ｆｅｌｉｘ，Ｌ．Ｍｏｒｏｄｅｒ，Ｃ．Ｔｏｎｉｏｌｏ，Ｅｄｓ．，Ｔｈｉｅｍｅ：ＮｅｗＹｏｒｋ，２００４ｆｏｒｇｅｎｅｒａｌｓｙｎｔｈｅｓｉｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓに示されるような方法によって合成され得る。前記文献の開示は、参照としてここに組み込まれる。

一般に、これらの方法は、保護されたアミノ酸を順次付加し、ペプチド鎖を成長させることによってなされる。一般に、１番目のアミノ酸のアミノ基又はカルボキシル基のどちらか及びあらゆる反応性の側鎖基が保護される。その後、保護されたアミノ酸は、不活性な固体基材上に結合させられるか、又は溶液において利用され、適切に保護された、配列における次のアミノ酸がアミノ結合の形成をし易い条件下で付加される。全ての所望のアミノ酸を適切な順序において結合させた後、保護基及びあらゆる固体基材を除去することにより、粗ポリペプチドを得ることができる。該ポリペプチドを脱塩し、好ましくはクロマトグラフィーによって精製し、最終生成物を得る。

約４０個未満のアミノ酸を有する、生理学的に活性な切断型のポリペプチド類似体の好ましい製造方法は、固相ペプチド合成を含む。該方法において、α−アミノ（Ｎα）官能基及びあらゆる反応性側鎖が酸又は塩基に敏感な基によって保護される。保護基は、ペプチド結合の形成条件に対して安定であり、かつ現存のペプチド鎖に影響を及ぼすことなく容易に除去できるものであるべきである。適当なα−アミノ保護基は、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル基、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｍｏｃ）基、イソボルニルオキシカルボニル基、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル基、２−シアノ−ｔ−ブトキシカルボニル基、９−フルオレニル−メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基等、好ましくはｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基を含むが、これらに限定されない。適当な側鎖保護基は、アセチル基、ベンジル（Ｂｚｌ）基、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）基、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブチル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、２−クロロベンジル（Ｃｌ−ｚ）基、２，６−ジクロロベンジル基、シクロヘキシル基、シクロペンチル基、イソプロピル基、ピバリル基、テトラヒドロピラニ−２−イル基、トシル（Ｔｏｓ）基、トリメチルシリル基及びトリチル基を含むが、これらに限定されない。

固相合成において、Ｃ−末端アミノ酸は、まず適当な樹脂基材に結合される。適当な樹脂基材は、試剤及び段階的縮合の反応条件及び脱保護反応に不活性であり、かつ使用される溶剤に不溶性の材料である。市販で入手可能な樹脂の例は、反応基で変性されたスチレン／ジビニルベンゼン樹脂、例えば、塩化メチル化コ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）、ヒドロキシメチル化コ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）等を含む。ベンジル化、ヒドロキシメチル化フェニルアセトアミドメチル（ＰＡＭ）樹脂が好ましい。化合物のＣ−末端がアミド基である場合、好ましい樹脂は、ｐ−メチルベンズヒドリルアミノ−コ−ポリ（スチレン−ジビニル−ベンゼン）樹脂である。

ＰＡＭ樹脂への結合は、Ｎα保護アミノ酸、好ましくはＢｏｃ−アミノ酸、例えばそのアンモニウム塩、セシウム塩、トリエチルアンモニウム塩、１，５−ジアザビシクロ−[
５．４．０]ウンデセ−５−エン塩、テトラメチルアンモニウム塩、又はエタノール、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中同様の塩、好ましくはＤＭＦ中該セシウム塩と該樹脂を、高温で、例えば約４０°ないし６０°、好ましくは約５０°において、約１２ないし７２時間、好ましくは約４８時間反応させることによってなされ得る。

Ｎα−Ｂｏｃ−アミノ酸は、例えば、ジクロロメタン又はジメチルホルムアルデヒド、好ましくはジクロロメタン等の溶媒中での約１０°ないし５０°、好ましくは２５°の温度における約２ないし約２４時間、好ましくは約２時間のＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）媒介カップリングによって、ベンズヒドリルアミン樹脂と結合させられ得る。

保護されたアミノ酸の連続カップリングは、技術的によく知られた方法によって、典型的には自動ペプチド合成機で行われ得る。トリエチルアミン又は同様の塩基を用いた中和後、各保護アミノ酸は、好ましくは、約１．５ないし２．５倍のモル過剰において導入され、カップリングは、周囲温度において、ジクロロメタン、ＤＭＦ又はそれらの混合物等の不活性で非水の極性溶媒、好ましくはジクロロメタン中で行われる。典型的なカップリング剤は、単独で、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｏ−アシルウレア、ベンゾトリアゾリ−１−イル−オキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｏｐ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、他のＮ−ヒドロキシイミド又はオキシムの存在下において、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ）又は他のカルボジイミドである。もしくは、保護アミノ酸活性エステル（例えば、ｐ−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル等）又は対称無水物が使用され得る。

固相合成の終わりにおいて、十分に保護されたペプチドが樹脂から取り外される。樹脂基材への結合がベンジルエステル型のものである場合、開裂は、約−１０°ないし５０°、好ましくは約２５°において、約１２ないし２４時間、好ましくは約１８時間、アルキルアミドＣ−末端を有するペプチドを、アルキルアミン又はフルオロアルキルアミンを用いてアミノ分解することによって、又は未置換のアミドＣ−末端を有するペプチドを、例えば、アンモニア／メタノール又はアンモニア／エタノールを用いてアミノ分解することによってもたらされ得る。ヒドロキシＣ−末端を有するペプチドは、ＨＦ又は他の強酸を用いた脱保護処理によって又は鹸化によって開裂され得る。さもなくば、ペプチドは、例えばメタノールを用いてエステル交換し、その後、アミノ分解又は鹸化することによって樹脂から取り外され得る。保護されたペプチドは、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製され得る。

側鎖保護基は、アミノ分解生成物を、例えば、アニソール又は他のカルボニウムイオン掃去剤の存在下で液状のフッ化水素無水物を用いて処理することによって、フッ化水素／ピリジン複合体を用いて処理することによって、トリス（トリフルオロアセチル）ボロン及びトリフルオロ酢酸を用いて処理することによって、水素、パラジウム炭素又はポリビニルピロリドンを用いて還元することによって、又は液状のアンモニア中ナトリムを用いて、好ましくは約−１０°ないし１０°、好ましくは約０°の温度において、約１５分ないし２時間、好ましくは約１．５時間、液状のフッ化水素及びアニソールを用いて還元することによって、ペプチドから除去され得る。

ベンズヒドリルアミン樹脂上のペプチドにおいて、樹脂開裂及び脱保護工程は、上記したように、液状のフッ化水素及びアニソールを利用した単一工程として組み合わせられ得る。

溶液を脱塩し（例えば、陰イオン交換樹脂であるバイオラッドＡＧ−３（登録商標：Ｂｉｏ−ＲａｄＡＧ−３）を用いて）、ペプチドを、以下の工程のいくつか又は全てを使用した一連のクロマトグラフィー工程によって精製し得る：酢酸形態の弱塩基性樹脂上でのイオン交換；非誘導性コ−ポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）、例えばアンバーライトＸＡＤ（登録商標：Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）上での疎水性吸着クロマトグラフィー；シリカゲル吸着クロマトグラフィー；カルボメチルセルロース上でのイオン交換クロマトグラフィー；例えば、セファデックスＧ−２５（登録商標：Ｓｅｐｈａｄｅｘ）上での分配クロマトグラフィー；向流分配；又は高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、特にオクチル−又はオクタデシルシリルシリカ（ＯＤＳ）結合相カラムパッキング上での逆相ＨＰＬＣ。

そのため、本発明の他の観点は、ポリペプチド及びその医薬的に許容可能な塩の製造方法であって、該方法は、適当な樹脂基材上に保護されたアミノ酸を順次縮合し、保護基及び樹脂基材を除去し、生成物を精製し、ＰＡＣＡＰ及びＶＩＰの生理学的に活性な切断型の相同体及び類似体、好ましくは、上記で定義したように、アミノ酸がＣ−末端において両親媒性α−へリックスペプチド配列を形成するところのＰＡＣＡＰ及びＶＩＰ相同体及び類似体を得ることからなる方法に関する。

実施例３：典型的なポリペプチド類似体の例示的な合成及び精製手順
配列識別番号１に対応する典型的なポリペプチド類似体を下記の合成及び精製方法を使用して製造した。

一般に、ペプチドは、Ｆｍｏｃケミストリー社製のＦｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−Ａｍｉｄｅ−ＰＥＧ樹脂上で合成した。アミノ酸側鎖の官能基のために使用した保護基は、以下の通りである：Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ及びＳｅｒのためにｔ−ブチル基；Ｌｙｓ及びＴｒｐのためにＢｏｃ基；ＡｒｇのためにＰｂｆ基；Ａｓｎ及びＨｉｓのためにＴｒｔ基。Ｎ−αＦｍｏｃ保護アミノ酸をＥＭＤバイオサイエンス社（カリフォルニア州、サンディエゴ）から購入した。カップリング及び開裂のための試剤をアルドリッチ社（ミズーリ州、セントルイス）から購入した。溶媒はフィッシャーサイエンティフィック社（ニュージャージー州、フェアラウン）から購入した。

一般に、合成手順は、Ｆｍｏｃ保護基の除去及び保護されたアミノ酸のカップリングの繰り返しによって、樹脂上にぺプチド鎖を構築すること含む。合成において、Ｄｄｅ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨを、まず、ＲｉｎｋＡｍｉｄｅ樹脂上にカップリングした。その後、Ｆｍｏｃ保護基を、ＤＭＦ中に２０％のピペリジンによって除去した。ステアリン酸を、ＨＢＴＵ、ＨＯＢｔ及びＮＭＭを使用してＬｙｓの側鎖上にカップリングした。Ｄｄｅ基をＤＭＦ中に２％のヒドラジンによって除去し、次のＦｍｏｃ保護アミノ酸をカップリングした。ＨＢＴＵ及びＨＯＢｔはカップリング剤として使用し、ＮＭＭは塩基として使用した。最後のＦｍｏｃアミノ保護基の除去後、ＤＩＣ（４当量）及びＨＯＢｔ（４等量）を用いて、吉草酸（４当量）をアミノ末端にカップリングした。側鎖の保護基の開裂及び除去のために、ペプチド樹脂を反応混液１で処理した。粗ペプチドを、冷エーテルにより沈殿させ、濾過によって収集した。

粗ペプチドの精製は、ウォータース社（マサチューセッツ州、ミルフォード）製の２０ｍｍ×２５０ｍｍカラムを使用したＲＰ−ＨＰＬＣによって行った。ペプチドを、ＴＦＡ
緩衝液を使用して精製した。６０分間で直線勾配が３５ないし５５％のアセトニトリルを使用した。統合画分（ｐｏｏｌｅｄｆｒａｃｔｉｏｎ）を凍結乾燥した。ペプチド同定は、質量分析及びアミノ酸分析によって検証した。ペプチド純度は、分析用ＨＰＬＣカラム（Ｃ１８カラム、４．６×２５０ｍｍ、スペルコ社製（ミズーリ州、セントルイス））クロマトグラフィーによって決定した。

上記手順を、以下の段階的手順にまとめ得る：
工程１．樹脂の膨潤：Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−Ａｍｉｄｅ−ＰＥＧ樹脂をＤＣＭ（１０ｍＬ／ｇ樹脂）中で３０分間、膨潤させた。
工程２．脱保護：
ａ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液（１０ｍＬ／ｇ樹脂）を該樹脂に添加した；
ｂ．溶液を３０分間撹拌した（全ての樹脂が反応容器中で流動性となるタイミングで開始した）；
ｃ．溶液を排出した。
工程３．洗浄：樹脂をＤＭＦ（１０ｍＬ／ｇ樹脂）を用いて、５回洗浄した。ニンヒドリン試験を行ったところ、陽性であった。
工程４．カップリング：
ａ．Ｆｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨ（樹脂装填量から計算して３当量）及びＨＯＢｔ（樹脂装填量に対して３当量）を計量し、プラスチックボトルに入れた。
ｂ．固体をＤＭＦ（５ｍＬ／ｇ樹脂）で溶解した
ｃ．ＨＢＴＵ（樹脂装填量に対して３当量）を混合物へ添加し、ＮＭＭ（樹脂装填量に対して６当量）を添加した。
ｄ．混合物を樹脂に添加した。
ｅ．樹脂の小さなサンプルにおけるニンヒドリン試験の結果が陰性となるまで、混合物を静かに１０ないし６０分間泡立てた（又は撹拌した）。
工程５．洗浄：樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。
工程６．ペプチドが構築されるまで、工程２から５を繰り返した。
工程７．Ｎ−末端Ｆｍｏｃ脱保護：工程２を繰り返した。
工程８．洗浄及び乾燥：
ａ．最終カップリング後、樹脂をＤＭＦで３回、ＭｅＯＨで１回、ＤＣＭで３回及びＭｅＯＨで３回洗浄した。
ｂ．樹脂を真空下（例えば、水流吸引器）で２時間、及び高真空下（オイルポンプ）で最低でも１２時間乾燥させた。
工程９．開裂：
ａ．乾燥樹脂をプラスチックボトル中に置き、開裂反応混液を添加した。混合物を室温において２．５時間振盪した。
ｂ．樹脂を、減圧下で濾過することによって取り外した。樹脂をＴＦＡで２回洗浄した。濾液を組み合わせ、８ないし１０倍量の冷エーテルを添加し、沈殿物を得た。
ｃ．粗ペプチドを濾過によって単離し、その後、冷エーテルで２回洗浄した。

以下の化学薬品及び溶媒を上記合成手順において使用した：ＮＭＭ（Ｎ−メチルモルホリン）；ＨＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾリ−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）；ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）；ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）；ＤＣＭ（ジクロロメタン）；メタノール；ジエチルエーテル；ピペリジン；Ｔｉｓ（トリイソプロピルシラン）；チオアニソール；フェノール；ＥＤＴ（１，２−エタンジチオール）；トリフルオロ酢酸反応混液１：ＴＦＡ／チオアニソール／フェノール／Ｈ₂Ｏ／ＥＤＴ（８７．５／５／２．５／２．５／２．５ｖ／ｖ）；ＴＦＡ緩衝液Ａ（水中に０．１％のＴＦＡ）；及びＴＦＡ緩衝液Ｂ（アセトニトリル中に０．１％のＴＦＡ）。

他の典型的なポリペプチド類似体は、上記と同様の方法で製造した。本発明の典型的なポリペプチド類似体の化学的性質を下記の表１に示す。
表１．典型的なポリペプチド類似体の性質

実施例４：ポリペプチドの組み換え合成
二者択一的に、本発明のポリペプチドは、所望のポリペプチドをエンコードする遺伝子のクローニング及び発現によって製造され得る。該方法では、所望のＤＮＡ配列を含むプラスミドを製造し、該プラスミドを適当な宿主微生物、典型的には大腸菌等の細菌、又はサッカロミセスセレビシア等の酵母中に挿入し、該宿主微生物を誘導し、該プラスミド及び本発明のポリペプチド類似体をエンコードするｃＤＮＡの多数のコピーを製造する。

まず、選択されたＰＡＣＡＰ又はＶＩＰ類似体をコードする合成遺伝子を、その後の改変を容易にするために、慣用の制限酵素開裂部位を用いて設計する。ここに参照として組み込まれる、マリスらによる米国特許第４，６８３，１９５号明細書及び米国特許第４，６８３，２０２号明細書に教示されるポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）が、配列を増幅させるために使用され得る。

増幅した合成遺伝子は、単離され、４個の遺伝子のコピーが相前後して挿入され得るところの、ＴｒｐＬＥプラスミド等の適当なプラスミドに連結され得る。ＴｒｐＬＥ
プラスミドの製造は、参照としてここに組み込まれる米国特許第４，７３８，９２１号明細書及び欧州特許第０２１２５３２号明細書に記載されている。ＴｒｐＬＥプラスミドは、一般に、ＴｒｐＥプラスミドの８ないし１０倍以上のタンパク質を製造する。その後、多数のコピー遺伝子は、大腸菌又はサッカロミセスセレビシア等の適当な宿主中で発現され得る。

ＴｒｐＬＥ１８Ｐｒｏｔ（Ｉｌｅ³、Ｐｒｏ⁵）は、本発明において、発現ベクターとして使用され得る。ＴｒｐＬＥ１８Ｐｒｏｔ（Ｉｌｅ³、Ｐｒｏ⁵）は、以下のエレメントを含む：アンピシリン耐性遺伝子及びプラスミドの複製起点を含むｐＢＲ３２２フラグメント（ＥｃｏＲＩ−ＢａｍＨＩ）；ｔｒｐプロモーター及びｔｒｐＥ遺伝子を含むＥｃｏＲＩ−ＳａｃＩＩフラグメント；ＨＩＶプロテアーゼ（Ｉｌｅ³、Ｐｒｏ⁵）遺伝子フラグメント（ＳａｃＩＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ）；ｂＧＦＲ遺伝子フラグメント（ＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩ）；及び大腸菌ｒｐｏｃ遺伝子由来の転写ターミネーター。ＨＩＶプロテアーゼ及びｂＧＲＦ遺伝子フラグメントは重要ではなく、所望により他のコード配列と置き換えられ得る。

その後、発現した多量体の融合タンパク質を、細胞内で安定な封入体中に蓄積し、遠心
分離によって他の細胞タンパク質から分離し得た。単離した融合タンパク質をモノマー状のＰＡＣＡＰ又はＶＩＰ類似体に転換し、陽イオン交換及び／又は逆相ＨＰＬＣによって精製し得た。

クローニング、増幅、発現及び精製の代替法は、当業者に明らかであり得る。典型的な方法は、参照としてここに組み込まれるＭａｎｉａｔｉｓ，ｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ，ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，３ｒｄＥｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（２００１）に開示されている。

実施例５：島細胞静置培養物を用いた生体外バイオアッセイ
以下の例示的な生体外バイオアッセイを行い、典型的なポリペプチド類似体のインシュリン分泌調節能力を評価した。

島細胞単離
ラットの島細胞を、ぺントバルビタールナトリウムの腹腔内投与（３５ｍｇ／２３０ｇ
ラット）によって麻酔した約２５０ｇの雄のフィッシャーラットから採取した（ＳｗｅｅｔＩＲ，ｅｔａｌ．（２００４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１４，９７６−９８３）。一般に、島細胞は、部分的に解剖された膵臓の膵管中にコラーゲナーゼ（０．２３ｍｇ／ｍＬのリベラーゼ（インディアナ州、インディアナポリス、ロッシュモレキュラーバイオケミカルズ社製）１０ｍＬ）を注入し、それを外科的に除去することによって製造される。全ての手順は、アメリカ合衆国、ワシントン大学の所内動物実験委員会によって認可されている。

膵臓を、０．２３ｍｇ／ｍＬのリベラーゼ５ｍＬを含む１５ｍＬ円錐管中に置き、３７℃において３０分間培養した。その後、消化物（ｄｉｇｅｓｔａｔｅ）を、４００マイクロメーターのステンレス鋼スクリーンに通して濾過し、ハンクス緩衝塩溶液ですすぎ、オプティプレプ（Ｏｐｔｉｐｒｅｐ）（ノルウェー国、オスロ、ニコメド社製）の勾配溶液中で精製した。１０％（ｖ／ｖ）の熱不活性のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、抗生物−抗真菌物質（１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００ｌｇ／ｍＬストレプトマイシン及び０．２５ｌｇ／ｍＬアムホテリシンＢ）、２ｍＭのグルタミン（全て、ニューヨーク州、グランドアイランドのジブコ−ＢＲＬ社製）及び１ｍＭのβ−メルカプトエタノールを補給したＰＲＭＩメディア１６４０（ＰＲＭＩＭｅｄｉａ１６４０）中で分析を行う前に、島細胞を１８ないし２４時間培養した。

バイオアッセイ
島細胞を顕微鏡下で採取し、洗浄のために、３ｍＭクレブスリンガーバッファー（ＫｒｅｂｓＲｉｎｇｅｒＢｕｆｆｅｒ）（ＫＲＢ）溶液１０ｍＬ中に置いた。島細胞を３ｍＭグルコースＫＲＢ中で６０分間培養し、その後、１ウェル当りに１０個の島細胞の群を９６−ウェルプレート中２００μＬの媒体中に置いた。島細胞を、調節又は処理条件下で１２０分間培養し、上澄みを収集した。典型的な試験条件は、３ｍＭグルコース（静止対照（ｒｅｓｔｉｎｇｃｏｎｔｒｏｌ））、１６ｍＭグルコース（試験対照）、１６ｍＭグルコース＋１０ｎｍＧＬＰ１、１６ｍＭグルコース＋１０ｎＭ
エキセンディン−４、１６ｍＭグルコース＋５０ｎＭ試験ペプチドである。緩衝液条件は、０．１％ＢＳＡ、２０ｍＭＨＥＰＥＳを有するＫＲＢであり、分析は繰り返し４回行った。上澄みのインシュリン含有量を、市販のインシュリン酵素−結合イムノソルベント（ＥＬＩＳＡ）アッセイを製造者の指示に従い使用して評価した。

バイオアッセイの結果
表２は、類似体ＴＰ−１０６の上記アッセイにおいて得られたインシュリン分泌を説明
し、２００ｎＭの濃度において、該アッセイにおける最大活性が示された。比較のために、エキセンディン−４をこのアッセイにおいて試験したところ、１０ｎＭにおいて最大活性を示した。ＴＰ−１０６は、疎水性の高い類似体であり、ｓｃ注入部位で持続するように設計されたため、ＴＰ−１０６の有効濃度は、ほんのわずかの濃度（２００ｎＭ）よりも非常に低いことが予期される。
表２．ＴＰ−１０６を用いた島細胞静置培養物のバイオアッセイの結果

上記した島細胞静置培養物アッセイを、更なる例示的なポリペプチド類似体を用いて行った。ＴＰ−１０７は、１００ｎＭの濃度において、該アッセイにおける最大活性を示した。比較のために、エキセンディン−４をこのアッセイにおいて試験したところ、１０ｎＭにおいて最大活性を示した。本発明のポリペプチドは、血清アルブミンと結合するように設計されたため、該生体外アッセイにおいて示されるよりも、インシュリン活性を付与する遊離ペプチドの濃度は非常に低く、該類似体は該生体外バイオアッセイで示されるよりも強力であることが予期される。
表３．ＴＰ−１０７及びＴＰ−１０８を用いた島細胞静置培養物のバイオアッセイの結果

実施例６：生体内バイオアッセイ
以下の例示的な生体内アッセイを行い、典型的なポリペプチド類似体のインシュリン分泌調節能力を評価した。

試験された研究群
投薬を受けたことがない８週齢の雌のｄｂ／ｄｂマウスを、１週間、実験手順に順応させるため定期的に扱い、環境に順応させた。研究群は、１群当り６匹のマウスを含み、以下の一つを腹腔内投与によって投与した：
（１）賦形剤対照；
（２）陽性対照（エキセンディン−４又は他の標準処理）；
（３）高用量のポリペプチド類似体；又は
（４）低用量のポリペプチド類似体。
血液サンプルのために、尾部の先端を切り、少量の血液を採取した。血糖値は、市販の携帯用血糖測定器で決定した。１日目の朝に、動物に、ポリペプチド類似体及び対照を注入した。注入直前及び注入から２、４、８、１４及び２４時間後に、血液サンプルを採取し、分析した。動物は、アッセイの間中、不断給餌とした（Ｔｓｕｔｓｕｍｉｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ５１：１４５３−６０（２００２））。

表４は、上記生体内アッセイから得られた典型的なサンプリングデータを列挙する。以下に示すように、高用量のＴＰ−１０６は、注入から２時間後において、統計的に有意な活性（例えば、血漿グルコースの減少）を示し、投与から４時間後においても活性を維持した。
表４．ＴＰ−１０３及びＴＰ−１０６を用いた生体内アッセイの結果

^*ｓ．ｄ．＝標準偏差

実施例７：本発明の使用
本発明のポリペプチドは、様々な代謝性疾患の予防及び治療に有用である。特に、本発明の化合物は、高血糖値、高血糖症、ＩＩ型糖尿病を含む糖尿病、インシュリン耐性、代謝性アシドーシス及び肥満の予防及び治療処置に適応される。

一般に、本発明のポリペプチド又はその塩は、１日当り約０．０１ないし１μｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは１日当り約０．０７ないし約０．２μｇ／ｋｇ（体重）の量で投与される。５０ｋｇの女性患者において、活性有効成分の１日量は、約０．５ないし約５０μｇ、好ましくは約３．５ないし約１０μｇである。馬、犬及び畜牛等の他の哺乳動物においては、より高い用量が必要とされ得る。該用量は、慣用の医薬組成物の形態で、単回投与によって、複合投与によって、又は最も効果的な結果を達成するまで必要に応じて放出制御することを通して、好ましくは１日１回以上の注入によって配送され得る。

他の態様において、本発明のポリペプチドは、代謝性疾患の治療に有用な他の化合物と組み合わせて投与され得る。例えば、本発明のポリペプチドは、本発明のポリペプチドと組み合わせて投与され得るインシュリン、インシュリン類似体、インクレチン、インクレチン類似体、グルカゴン様ペプチド、グルカゴン様ペプチド類似体、エキセンディン、エキセンディン類似体、スルホニルウレア、ビグアニド、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（α、β又はγサブタイプのＰＰＡＲ受容体に作用する試剤及び／又は複数のサブタイプのＰＰＡＲ受容体に作用する試剤
を含むところのＰＰＡＲ）アゴニスト、ＰＰＡＲアンタゴニスト及びＰＰＡＲ部分アゴニストを含むが、これらに限定されない代謝性疾患の治療に使用される１種以上の化合物と共に投与され得る。

正確な用量及び組成物の選択、及び最も適当な配送レジメン（ｄｅｌｉｖｅｒｙｒｅｇｉｍｅｎ）は、とりわけ、選択されたポリペプチドの薬理学的特性、処方される疾患の性質及び重さ及び受容者の体調及び知力（ｍｅｎｔａｌａｃｕｉｔｙ）に左右され得る。

典型的な配送レジメンは、経口投与、非経口投与（皮下投与、筋内投与及び静脈内投与を含む）、直腸投与、口腔投与（舌下投与を含む）、経皮投与及び経鼻投与を含む。

医薬的に許容可能な塩は、毒性の副作用なく、もとのポリペプチドの所望の生物学的活性を保持する。このような塩の典型的な例は、（ａ）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸等と形成される酸付加塩；例えば、酢酸、蓚酸、酒石酸、琥珀酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラツロン酸等の有機酸と形成される塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム等の多価金属カチオンと形成される塩基付加塩；又は、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン又はエチレンジアミンから形成される有機カチオンとの塩；又は（ｃ）（ａ）と（ｂ）の組み合わせ、例えばタンニン酸亜鉛等である。

本発明の更なる観点は、医薬的に許容可能な非毒性のキャリヤーとの混合物において、有効成分として、本発明のポリペプチド又はその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物に関する。上記で言及したように、該組成物は、非経口（皮下、筋内及び静脈内を含む）投与のために、特に溶液又は懸濁液の形態で；経口投与又は口腔投与のために、特にタブレット又はカプセルの形態で；経鼻投与のために、特に粉末、点鼻薬又はエアロゾルの形態で；及び、直腸投与又は経皮投与のために、製造され得る。

該組成物は、投与形態単位において都合良く投与され得、かつ、例えば、参照としてここに組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈｅｄ．，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，（１９８５）に記載されるような、医薬技術においてよく知られるいずれかの方法によって製造され得る。非経口投与製剤は、賦形剤として、殺菌水又は生理食塩水、プロピレングリコール等のアルキレングリコール、ポリエチレングリコール等のポリアルキレングリコール、植物性油、水素化ナフタレン等を含み得る。経口投与のために、該製剤は、胆汁塩又はアシルカルニチンの添加によって強化され得る。経鼻投与製剤は、固体であり得、賦形剤、例えばラクトース又はデキストランを含み得るか、又は、点鼻薬又は定量スプレー形態における使用のために、水性又は油性溶液であり得る。口腔投与のために、典型的な賦形剤は、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、プレゼラチン化澱粉等を含む。

経鼻投与のために製剤化される場合、鼻粘膜を経た吸収は、約０．２ないし１５質量％、好ましくは約０．５ないし４質量％、最も好ましくは約２質量％の範囲の量の界面活性剤酸、例えばグリココール酸、コール酸、タウロコール酸、エトコール酸（ｅｔｈｏｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ）、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、デヒドロコール酸、グリコデオキシコール酸、シクロデキストリン等によって強化され得る。刺激が低く、より高い効率を示す更なる吸着強化剤類は、テトラデシルマルトシド等のアルキルマルトシド類である（Ａｒｎｏｌｄ，ＪＪ，ｅｔａｌ．（２００４）．ＪＰｈａｒｍ．Ｓｃｉ
．９３，２２０５−１３及びその中の参照文献、これらの全ては参照としてここに組み込まれる。）。

患者への長期間、例えば、１週間ないし１年間に渡る本発明の化合物の配送は、所望の放出期間のために十分な有効成分を含む放出制御製剤の単回投与によってなされ得る。モノリシック又は持続型のマイクロカプセル、持続性インプラント（ｄｅｐｏｔｉｍｐｌａｎｔ）、浸透圧ポンプ、小胞、ミセル、リポソーム、経皮パッチ、イオントフォレーゼデバイス（ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｔｉｃｄｅｖｉｃｅ）及び、さもなくば注入投与形態等の様々な放出制御製剤がこの目的のために利用され得る。有効成分の配送が望まれるところの部位における局在性は、いくつかの放出制御デバイスの更なる特徴であり、そしてそれは特定疾患の治療において有効であると立証され得る。

放出制御製剤の一つの形態は、参照としてここに組み込まれる米国特許第４，６７５，１８９号明細書、ケント、ルイス、サンダー及びタイスの先駆的な研究に記載されるような、徐々に分解する非毒性で非抗原性のポリマー、例えばコポリ（乳／グリコール）酸中に分散又はカプセル化されたポリペプチド又はその塩を含む。化合物、又は好ましくはそれらの比較的に不溶性の塩はまた、コレステロール又は他の脂質マトリックスペレット又はシラストマー（ｓｉｌａｓｔｏｍｅｒ）マトリックスインプラント中にも配合され得る。更なる徐放性の持続性インプラント又は注射製剤は当業者に明らかであり得る。例えば、参照としてここに組み込まれるＳｕｓｔａｉｎｅｄａｎｄＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎｅｄ．，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９７８及びＲ．Ｗ．Ｂａｋｅｒ，ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙＡｃｔｉｖｅａｇｅｎｔｓ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９７８参照。

本願明細書で言及した全ての刊行物及び特許出願は、各々の独立した刊行物又は特許出願が、具体的かつ個々に参照として組み込まれることを示すのと同程度に参照としてここに組み込まれる。

上記した実施例及び論議は、典型的な本発明の化合物の合成及び試験を説明することを目的とし、それは、更なる変更が可能であると理解され得、添付した特許請求の範囲を制限するように構成されるべきではない。

参照
米国特許第５，５８９，４５２号明細書（１９９６），ＡｎａｌｏｇｓｏｆＰａｒａｔｈｙｒｏｉｄＨｏｒｍｏｎｅａｎｄＰａｒａｔｈｙｒｏｉｄＨｏｒｍｏｎｅ
Ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ:ＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄＵｓｅｆｏｒｔｈｅＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ．Ｊ．Ｌ．Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙｅｔａｌ．

Ａｒｎｏｌｄ．ＪＪ，ｅｔａｌ．（２００４）．ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｏｆＴｅｔｒａｄｅｃｙｌｍａｌｔｏｓｉｄｅＩｎｄｕｃｅｄＩｎｃｒｅａｓｅｓｉｎＮａｓａｌＰｅｐｔｉｄｅＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙｗｉｔｈＭｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌＣｈａｎｇｅｓｉｎＮａｓａｌＥｐｉｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌｓ．ＪＰｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３，２２０５−１３

Ｙｕｎｇ，ＳＬ．，ｅｔａｌ．（２００３）ＧｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｉｇｈｌｙＳｅｌｅｃｔｉｖｅＶＰＡＣ２ＲｅｃｅｐｔｏｒＡｇｏｎｉｓｔｓｂｙＨｉｇｈＴｈｒｏｕｇｈｐｕｔＭｕｔａｇｅｎｅｓｉｓｏｆＶａｓｏａｃｔｉｖ
ｅＩｎｔｅｓｔｉｎａｌＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅａｎｄＰｉｔｕｉｔａｒｙＡｄｅｎｙｌａｔｅＣｙｃｌａｓｅ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇＰｅｐｔｉｄｅ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８，１０２７３−８１．

Ｔｓｕｔｓｕｍｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．（２００２）ＡＰｏｔｅｎｔａｎｄＨｉｇｈｌｙＳｅｌｅｃｔｉｖｅＶＰＡＣ２ＡｇｏｎｉｓｔＥｎｈａｎｃｅｓＧｌｕｃｏｓｅ−ＩｎｄｕｃｅｄＩｎｓｕｌｉｎＲｅｌｅａｓｅａｎｄＧｌｕｃｏｓｅＤｉｓｐｏｓａｌ．ＡＰｏｔｅｎｔｉａｌＴｈｅｒａｐｙｆｏｒＴｙｐｅ２
Ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ５１，１４５３−６０．

Ｌａｎｇｅｒ，Ｉ．，ｅｔａｌ．（２００４）ＨｅｘａｎｏｙｌａｔｉｏｎｏｆＶＰＡＣ２ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｐｒｅｆｅｒｒｉｎｇｌｉｇａｎｄｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｔｓｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｐｏｔｅｎｃｙ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ２５，２７５−８．

Ｋｎｕｄｓｅｎ，ＬＢ，ｅｔａｌ．（２０００）．ＰｏｔｅｎｔＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆＧｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅＰｅｐｔｉｄｅ−１ｗｉｔｈＰｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓＳｕｉｔａｂｌｅｆｏｒＯｎｃｅ
ＤａｉｌｙＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３，１６６４−９

ＧｏｕｒｌｅｔＰ，ｅｔａｌ．（１９９７）．Ｔｈｅｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅａｇｏｎｉｓｔＲＯ２５−１５５３ｉｓｈｉｇｈｌｙｓｅｌｅｃｔｉｖｅｏｆｔｈｅＶＩＰ２ｒｅｃｅｐｔｏｒｓｕｂｃｌａｓｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ１８，４０３−８
ＧｏｕｒｌｅｔＰ，ｅｔａｌ．（１９９８）．ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃＶＩＰｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＶＩＰ１／ＰＡＣＡＰａｎｄＶＩＰ２／ＰＡＣＡＰｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３５４，１０５−１１１

ＧｒｅｅｎｗａｌｄＲＢ，ｅｔａｌ．（２００３）．ＥｆｆｅｃｔｉｖｅｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｂｙＰＥＧｙｌａｔｅｄｄｒｕｇｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌ．Ｒｅｖ．５５，２１７−２５０

ＮｉｅｌｓｅｎＬＬ，Ｙｏｕｎｇ．ＡＡ，Ｐａｒｋｅｓ，ＤＧ（２００４）．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆｅｘｅｎａｔｉｄｅ（ｓｙｎｔｈｅｔｉｃｅｘｅｎｄｉｎ−４）:ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｆｏｒｉｍｐｒｏｖｅｄ
ｇｌｙｃｅｍｉｃｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ１１７，７７−８８

ＫｉｅｆｆｅｒＴＪａｎｄＨａｂｅｎｅｒ，ＪＲ（１９９９）．ＴｈｅＧｌｕｃａｇｏｎ−ＬｉｋｅＰｅｐｔｉｄｅｓ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．２０，８７６−９１３

Ｋｎｕｄｓｅｎ．ＬＢ，（２００４）．Ｇｌｕｃａｇｏｎ−１ｉｋｅＰｅｐｔｉｄｅ−１:ＴｈｅＢａｓｉｓｏｆａＮｅｗＣｌａｓｓｏｆＴｒｅａｉｍｅｎｔ
ｆｏｒＴｙｐｅ２Ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７，４１２８−３４

Ｋｕｒｔｚｈａｌｓ，Ｐｅｔａｌ，（１９９５）．Ａｌｂｕｍｉｎｂｉｎｄｉｎ
ｇｏｆｉｎｓｕｌｉｎｓａｃｙｌａｔｅｄｗｉｔｈｆａｔｔｙａｃｉｄｓ:ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌｉｇａｎｄ−ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｂｉｎｄｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙａｎｄｔｉｍｉｎｇｏｆｔｈｅｉｎｓｕｌｉｎｅｆｆｅｃｔｉｎｖｉｖｏ．ＢｉｏｃｈｅｍＪ．３１２，７２５−３１．

Ｋｕｒｔｚｈａｌｓ，Ｐ．（２００４）．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｐｒｅｄｉｃｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｐｒｏｔｒａｃｔｉｏｎｉｎａｂａｓａｌｉｎｓｕｌｉｎａｎａｌｏｇｕｅ:ｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆｉｎｓｕｌｉｎｄｅｔｅｍｉｒ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓｉｔｙ２８，Ｓｕｐｐｌ２，Ｓ２３−８

ＸｉａＭ，ｅｔａｌ．（１９９７）．Ｎｏｖｅｌｃｙｃｌｉｃｐｅｐｔｉｄｅ
ａｇｏｎｉｓｔｏｆｈｉｇｈｐｏｔｅｎｃｙａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ
ｆｏｒｔｈｅｔｙｐｅＩＩｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｐｔｉｄｅｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２８１，６２９−３３

Ｄｅｉｔｅｒｓ，Ａ，ｅｔａｌ．（２００４）．Ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃＰＥＧｙｌａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｕｎｎａｔｕｒａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．Ｂｉｏ−ｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，１４，５７４３−５

図１Ａは、本発明に従った典型的なポリペプチド類似体の表である。図１Ｂは、本発明に従った典型的なポリペプチド類似体の表である。図１Ｃは、本発明に従った典型的なポリペプチド類似体の表である。図２は、他のポリペプチド及びポリペプチド類似体の表である。

Claims

（ａ）式（Ｉ）

[式中、
ｎは１ないし３を表わし、
Ｈａａは、親水性アミノ酸を表わし、
Ｌａａは、新油性アミノ酸を表わし、
ａｃｙｌは、炭素原子数２ないし１６のアシル鎖を表わし、
ｌｏｎｇａｃｙｌは、炭素原子数１２ないし２４のアシル鎖を表わし、
Ｘは、ＯＨ又はＮＨＲ１（式中、Ｒ１はＨ又は低級アルキル基、ハロアルキル基又はＰＥＧを表わす。）を表わし、
ａａ₁は、Ｇｌｙ又はＡｌａを表わし、
ａａ₂は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＬｅｕを表わし、
ａａ₃は、Ａｓｐ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₄は、Ｓｅｒ又はＡｓｎを表わし、
ａａ₅は、Ｓｅｒ又はＴｈｒを表わし、
ａａ₆は、Ｌｅｕ又はＴｙｒを表わし、
ａａ₇は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＶａｌを表わし、
ａａ₈は、Ａｌａ又はＶａｌを表わし、
ａａ₉は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ又はＡｌａを表わし、
ａａ₁₀は、Ｔｒｐ、Ａｌａ又はＳｅｒを表わし、
ａａ₁₁は、Ｉｌｅ又はＶａｌを表わし、
ａａ₁₂は、Ｌｅｕ又はＬｙｓを表わし、
ａａ₁₃は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₄は、Ａｌａ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₅は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₁₆は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わす。]に対応するポリペプチド、
（ｂ）式（ＩＩ）

[式中、
ｎは１ないし３を表わし、
Ｈａａは、親水性アミノ酸を表わし、
Ｌａａは、親油性アミノ酸を表わし、
ａｃｙｌは、炭素原子数２ないし１６のアシル鎖を表わし、
ｌｏｎｇａｃｙｌは、炭素原子数１２ないし２４のアシル鎖を表わし、
Ｘは、ＯＨ又はＮＨＲ１（式中、Ｒ１はＨ又は低級アルキル基、ハロアルキル基又はＰＥＧを表わす。）を表わし、
ａａ₁は、Ｇｌｙ又はＡｌａを表わし、
ａａ₂は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＬｅｕを表わし、
ａａ₃は、Ａｓｐ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₄は、Ｓｅｒ又はＡｓｎを表わし、
ａａ₅は、Ｓｅｒ又はＴｈｒを表わし、
ａａ₆は、Ｌｅｕ又はＴｙｒを表わし、
ａａ₇は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＶａｌを表わし、
ａａ₈は、Ａｌａ又はＶａｌを表わし、
ａａ₉は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ又はＡｌａを表わし、
ａａ₁₀は、Ｔｒｐ、Ａｌａ又はＳｅｒを表わし、
ａａ₁₁は、Ｉｌｅ又はＶａｌを表わし、
ａａ₁₂は、Ｌｅｕ又はＬｙｓを表わし、
ａａ₁₃は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₄は、Ａｌａ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₅は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₁₆は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₁₇は、存在しないか又はＧｌｎを表わす。]に対応するポリペプチド、
（ｃ）式（ＩＩＩ）

[式中、
ｎは１ないし３を表わし、
Ｈａａは、親水性アミノ酸を表わし、
Ｌａａは、新油性アミノ酸を表わし、
ａｃｙｌは、炭素原子数２ないし１６のアシル鎖を表わし、
ｌｏｎｇａｃｙｌは、炭素原子数１２ないし２４のアシル鎖を表わし、
ａａ₁は、Ｇｌｙ又はＡｌａを表わし、
ａａ₂は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＬｅｕを表わし、
ａａ₃は、Ａｓｐ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₄は、Ｓｅｒ又はＡｓｎを表わし、
ａａ₅は、Ｓｅｒ又はＴｈｒを表わし、
ａａ₆は、Ｌｅｕ又はＴｙｒを表わし、
ａａ₇は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＶａｌを表わし、
ａａ₈は、Ａｌａ又はＶａｌを表わし、
ａａ₉は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ又はＡｌａを表わし、
ａａ₁₀は、Ｔｒｐ、Ａｌａ又はＳｅｒを表わし、
ａａ₁₁は、Ｉｌｅ又はＶａｌを表わし、
ａａ₁₂は、Ｌｅｕ又はＬｙｓを表わし、
ａａ₁₃は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₄は、Ａｌａ又はＧｌｙを表わし、
ａａ₁₅は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わし、
ａａ₁₆は、Ｌｙｓ又はＡｒｇを表わす。]に対応するポリペプチド、及び
（ｄ）配列識別番号１ないし３８から選択されるポリペプチド、
からなる群から選択される血管活性腸管ポリペプチド。
ａｃｙｌが炭素原子数４ないし８のアシル鎖を表わし、ｌｏｎｇａｃｙｌが炭素原子数６ないし１４のアシル鎖を表わし、ＰＥＧが炭素原子数２ないし２０の鎖のポリエチレングリコール鎖を表わす請求項１に記載のポリペプチド。
請求項１に記載のポリペプチドの製造方法であって、該方法は、保護されたアミノ酸をペプチド鎖に順次付加し、保護基を除去し、脱塩し、ポリペプチドを精製することにより
ポリペプチドを合成することからなる方法。
請求項１に記載のポリペプチドの製造方法であって、前記ポリペプチドをエンコードする遺伝子を発現させ、発現したポリペプチドを精製することを含む方法。
請求項１に記載のポリペプチドをエンコードする発現ベクター。
請求項５に記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
有効量の請求項１に記載のポリペプチド又はその許容可能な塩、及び少なくとも１種の医薬的に許容可能なキャリヤー又は賦形剤からなる医薬組成物。
更に、インシュリン、インシュリン類似体、インクレチン、インクレチン類似体、グルカゴン様ペプチド、グルカゴン様ペプチド類似体、エキセンディン、エキセンディン類似体、スルホニルウレア、ビグアニド、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）アゴニスト、ＰＰＡＲアンタゴニスト及びＰＰＡＲ部分アゴニストからなる群から選択される少なくとも１種の化合物の有効量を含む請求項７に記載の医薬組成物。
高血糖値の治療方法であって、該方法は、治療有効量の請求項１に記載のポリペプチドを投与することからなる方法。
更に、インシュリン、インシュリン類似体、インクレチン、インクレチン類似体、グルカゴン様ペプチド、グルカゴン様ペプチド類似体、エキセンディン、エキセンディン類似体、スルホニルウレア、ビグアニド、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲアゴニスト、ＰＰＡＲアンタゴニスト及びＰＰＡＲ部分アゴニストからなる群から選択される少なくとも１種の化合物の治療有効量を投与することを含む請求項９に記載の方法。
糖尿病の治療方法であって、該方法は、治療有効量の請求項１に記載のポリペプチドを投与することからなる方法。
前記糖尿病がＩＩ型糖尿病である請求項１１に記載の方法。
更に、インシュリン、インシュリン類似体、インクレチン、インクレチン類似体、グルカゴン様ペプチド、グルカゴン様ペプチド類似体、エキセンディン、エキセンディン類似体、スルホニルウレア、ビグアニド、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲアゴニスト、ＰＰＡＲアンタゴニスト及びＰＰＡＲ部分アゴニストからなる群から選択される少なくとも１種の化合物の治療有効量を投与することを含む請求項１１に記載の方法。
インシュリン耐性の治療方法であって、該方法は、治療有効量の請求項１に記載のポリペプチドを投与することからなる方法。
更に、インシュリン、インシュリン類似体、インクレチン、インクレチン類似体、グルカゴン様ペプチド、グルカゴン様ペプチド類似体、エキセンディン、エキセンディン類似体、スルホニルウレア、ビグアニド、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲアゴニスト、ＰＰＡＲアンタゴニスト及びＰＰＡＲ部分アゴニストからなる群から選択される少なくとも１種の化合物の治療有効量を投与することを含む請求項１４に記載の方法。
代謝性アシドーシスの予防方法であって、該方法は、治療有効量の請求項１に記載のポリペプチドを投与することからなる方法。
更に、インシュリン、インシュリン類似体、インクレチン、インクレチン類似体、グルカゴン様ペプチド、グルカゴン様ペプチド類似体、エキセンディン、エキセンディン類似体、スルホニルウレア、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲアゴニスト、ＰＰＡＲアンタゴニスト及びＰＰＡＲ部分アゴニストからなる群から選択される少なくとも１種の化合物の治療有効量を投与することを含む請求項１６に記載の方法。
肥満の治療方法であって、該方法は、治療有効量の請求項１に記載のポリペプチドを投与することからなる方法。
更に、インシュリン、インシュリン類似体、インクレチン、インクレチン類似体、グルカゴン様ペプチド、グルカゴン様ペプチド類似体、エキセンディン、エキセンディン類似体、スルホニルウレア、ビグアニド、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲアゴニスト、ＰＰＡＲアンタゴニスト及びＰＰＡＲ部分アゴニストからなる群から選択される少なくとも１種の化合物の治療有効量を投与することを含む請求項１８に記載の方法。