FI109538B - Menetelmä antituumorisen aktiivisuuden omaavien 2-aminoalkyyli-5-aminoalkyyliamino-substituoitujen isokino[8,7,6-cd] ja [5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-onien valmistamiseksi - Google Patents

Description

109538

Menetelmä antituumorisen aktiivisuuden omaavien 2-aminoalkyyli-5-aminoalkyyliamino-substituoitujen iso-kino[8,7,6-cd] ja [5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-onien valmistamiseksi 5 Tämä keksintö koskee menetelmää atsa-antrapyratsolien, nimittäin 2-aminoalkyyli-5-aminoalkyyliaminosubsti-tuoitujen isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6-(2H)-onien ja 2-aminoalkyyli-5-aminoalkyyliaminosubstituoitujen isokino-10 [5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-onien valmistamiseksi. Näillä yhdisteillä on osoitettu olevan antituumorista aktiivisuutta .

On kuvattu tiettyjä 1,4-bis[(aminoalkyyli)amino]antrasee-15 ni-9,10-dioneja, joilla on kliinisissä kokeissa antituumorista aktiivisuutta. Erityisen kiinnostava on ollut ametantroni, 1,4-bis{[2-(2-hydroksietyyliamino)etyyli]a-mino}antraseeni-9,10-dioni, ja mitoksantroni, 5,8-dihyd-roksi-1,4-bis{[2-(2-hydroksietyyliamino)etyyli]amino}ant-20 raseeni-9,10-dioni. [Zee-Cheng et ai., J. Med. Chem. 21, 291-4 (1978); Cheng et ai., "Progress in Medicinal Chemistry", Ellis, G.P. ja West, G.B., toim.; Elsevier: Amsterdam, 1983, voi. 20, s. 83 ja näissä mainitut viitteet] . Mitoksantroni on laajakirjoinen kasvainsoluja ha-25 jottava aine, jonka aktiivisuus on samanlainen kuin ant- « · rasykliiniantibiootti doksorubisiinin. Kliiniset kokeet ovat osoittaneet, että mitoksantronilla on erityisen lu- paava aktiivisuus edenneen rintasyövän, akuutin leukemian *"* ja imukudoskasvaimen hoidossa [Legha, Drugs of Today, 20, \t\ j 30 629 (1984)]. Vaikka eläintutkimukset ovat osoittaneet vä- : : : hentyneen sydäntoksisuuden doksorubisiiniin verrattuna, myös mitoksantronilla on havaittu jonkin verran sydäntok- : sisuutta, enimmäkseen potilailla, joita on aikaisemmin .···. hoidettu doksorubisiinilla (R. Stuart Harris et ai., Lan- ’·' 35 cet, 219, (1984) ja siinä mainitut viitteet). Ametantro- • · . nin on kuvattu olevan, eläimillä, noin 10-kertaisesti tehottomampaa ja vähemmän sydäntoksista kuin mitoksantro-nin. Koska viivästynyt toksisuus havaitaan vain mitoksan- • · · 2 109538 tronin kanssa sen jälkeen kun näitä kahta lääkettä on annettu vatsaontelonsisäisesti kasvaimettomille rotille yhtä tehokkailla kasvaintenvastaisilla annoksilla, on esitetty, että 5,8-dihydroksisubstituution läsnäolo mi-5 toksantronissa saattaisi olla tekemisissä viivästyneiden kuolemien kanssa [Corbett et ai., Cancer Chemother. Pharmacol., 6, 161, (1981)].

Lisäksi sekä mitoksantronilla että ametantronilla on huo-10 mättävä myelodepressiivinen toksisuus, ja molemmat yhdisteet osoittavat ristiresistenssiä solukudostyyppejä kohtaan, joilla kehittyy doksorubisiinia kohtaan resistenssi, jota välittää glykoproteiini P:n yliekspressio. Sellaiseen resistenssiin, jota kutsutaan multiresistenssik-15 si, liittyy joukko kasvaintenvastaisia antibiootteja, joiden joukossa on amakriini- ja podofyllotoksiinijohdannaisia, ja tämä resistenssi on terapeuttisten epäonnistumisten yksi tärkeimmistä syistä kiinteitä kasvaimia sellaisilla antibiooteilla hoidettaessa.

20

Eräässä yrityksessä edellä mainittujen haittojen voittamiseksi on valmistettu joitain kromoforimodifioituja ant-raseenidioneja. Esimerkiksi EP-patenttihakemuksessa 103,381 kuvataan 2-aminoalkyyli-5-aminoalkyyliaminosubs-:*·.· 25 tituoidut antra[ 1,9-cd]pyratsol-6 (2H)-onit (antrapyratso- lit) , joilla väitetään olevan antituumorista aktiivisuut-ta. Mainittujen yhdisteiden antituumorisen aktiivisuuden : ,·, useissa esikliinisissä malleissa on kuvannut H.D. Hollis Ί!.' Showalter et ai. [J. Med. Chem., 30, 121-131, (1987)].

30 Antrapyratsolit eivät kuitenkaan ole ilman toksisia sivu vaikutuksia, joita ovat kova valkosolujen vähäisyys ve-'· " ressä (WHO-aste 3 ja 4) ja neutrofiilien vähäinen määrä ...· veressä (WHO-aste 4) , jotka ovat annosta rajoittavia vai- j heen I ja vaiheen II kliinisissä kokeissa antrapyratsoli .*··. 35 CI-941:lla [I.E. Smith et ai., J. Clin. Oncol. 9, 2141- • ^ 2147, (1991)]. Lisäksi Cl-941-käsittelyyn liittyy rotalla merkittävä munuaistoksisuus [D. Campling ja M.E.C. Rob- 3 109538 bins, Nephrotoxicity, Peter H. Dekker Bach toimittaja, s. 345-352, (1991), New York; katso Chemical Abstract 116:294η, (1992)], ja nämä kirjoittajat ehdottavat, että munuaisvaurio voi olla kliininen ongelma antrapyratsoli-5 terapiassa.

Sen vuoksi uusien aktiivisten analogien etsiminen on edelleen erittäin toivottavaa.

10 Olemme nyt keksineet, että yhden typpiatomin lisääminen 9-asemaan tai 8-asemaan edellä mainituissa antra[1,9-cd]-pyratsol-6(2H)-oneissa aikaansaa 2-aminoalkyyli-5-amino-alkyyliaminosubstituoituja isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6-(2H)-oneja ja 2-aminoalkyyli-5-aminoalkyyliaminosubstitu-15 oituja isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oneja, vastaavasti, joilla on selvää antituumorista aktiivisuutta.

Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat kaavan I mukaisia: 20

O NH-A

(i) 25 H-N —b » · · jossa toinen X:stä ja Y:stä on hiiliatomi ja toinen on : .·. typpiatomi, A ja B ovat toisistaan riippumatta: C^- alkyyli, -(CH2)p-NH2, - (CH2) p-NR2R3 tai - (CH2) p-NH-(CH2) q-OH, 30 joissa p ja q ovat toisistaan riippumatta kokonaisluku 2 tai 3, R2 ja R3 voivat olla samat tai erilaisia ja ovat ’ ’· vety tai C1.4-alkyyli, vapaina emäksinä ja näiden suoloina ···’ farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa.

35 Keksintö koskee myös kaavan I mukaisten yhdisteiden tau- , tomeerisiä muotoja, yksittäisiä enantiomeerejä ja diaste- reoisomeerejä, samoin kuin näiden seoksia.

4 109538

Kaavan I mukaisista yhdisteistä voidaan valmistaa ei-toksisia suoloja farmaseuttiseen ja eläinlääketieteelliseen käyttöön hyväksyttävien happojen kanssa, kuten niitä, jotka saadaan lisäämällä epäorgaanisia happoja kuten 5 suola-, bromivety-, rikki-, fosfori- tai pyrofosforihap-po, ja/tai orgaanisia happoja kuten etikka-, propioni-, sitruuna-, bentsoe-, maito-, maleiini-, fumaari-, meripihka-, viini-, glutamiini-, asparagiini-, glukoni- ja askorbiinihappo ja vastaavat.

10

Edullisia esimerkkejä C1_4-alkyyliryhmistä ovat metyyli, etyyli, n-propyyli, sec-propyyli, n-butyyli, sec-butyyli ja tert-butyyli.

15 Edullisimpia yhdisteitä ovat ne kaavan I mukaiset yhdisteet, jossa X ja Y ovat edellä määritellyt, ja A ja B ovat toisistaan riippumatta: ryhmä, jolla on kaava -(CH2)p-NH2, jossa p on koko- 20 naisluku 2 tai 3; ryhmä, jolla on kaava -(CH2)p-NR2R3, jossa p on edellä määritelty ja R2 ja R3 ovat metyyli; V. - ryhmä, jolla on kaava - (CH2) p-NR2R3, jossa p on edellä : määritelty ja R2 on vety ja R3 on metyyli; 25 - ryhmä, jolla on kaava - (CH2) p-NH-(CH2) q-OH, jossa p ja q ovat toisistaan riippumatta kokonaisluku 2 tai 3; » * » ··· · Erityisiä esimerkkejä keksinnön mukaisesti valmistetuista '·' * edullisista yhdisteistä esitetään taulukossa 1, ja niillä 30 on seuraavat kemialliset nimet: » · » · ’ : (1) 2 —[2 — [(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-[(2- ·’ : hydroksietyyli)amino]etyyli]amino]isokino[8,7,6- cd] indatsoli-6 (2H) -oni; 35 (2) 2— [2 — [ (2-hydroksietyyli) amino] etyyli]-5-[ (3-amino- propyyli) amino] isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H) -: oni; 5 109538 (3) 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[(2-amino-etyyli)amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (4) 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(metyy-liamino)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli- 5 6(2H)-oni; (5) 2-[2-[ (2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[ [2-(dime-tyyliamino)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (6) 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-[(2- 10 hydroksietyyli)amino]etyyli]amino]isokino[5,6,7- cd]indatsoli-6(2H)-oni; (7) 2-(2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[(3-amino-propyyli)amino]isokino[5,6,7-cd)indatsoli-6(2H)-oni; 15 (8) 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[(2-amino- etyyli)amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (9) 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]—5—[[2—(metyy— liamino)etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 20 (10) 2-[2-[(2-hydroksietyyli) amino]etyyli]-5-[[2-(dime- tyyliamino)etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (11) 5-[ [2-[ (2-hydroksietyyli) amino]etyyli]amino]-2-[2- : (dimetyyliamino) etyyli] isokino [8,7,6-cd] indatsoli- 25 6 (2H) -oni; (12) 5- [ (3-aminopropyyli) amino]-2-[ 2-(dimetyyliamino) e- , , tyyli] isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (13) 5 -[ (2-aminoetyyli) amino] -[2 - [2- (dimetyyliamino) e- > I · '·* ’ tyyli] isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H)-oni; 30 (14) 5-[[2-(metyyliamino)etyyli]amino]-2-[2-(dimetyy- « · :liamino) etyyli] isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H) -» · · ' : oni; • · · ' /* ; (15) 5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]-2-[2-(dimetyy liamino) etyyli]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)- 'I* 35 oni; > (16) 5-[[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]amino]-2-[2- : (dimetyyliamino) etyyli] isokino [5,6,7-cd] indatsoli- 6 109538 6(2H)-oni; (17) 5-[(3-aminopropyyli)amino]-2-[2-(dimetyyliamino)e-tyyli]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (18) 5-[(2-aminoetyyli)amino]-[2-(dimetyyliamino)etyy- 5 li]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (19) 5-[[2-(metyyliamino)etyyli]amino]-2-[2-(dimetyyliamino) etyyli]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (20) 5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]-2-[2-(dimetyy- 10 liamino)etyyli]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)- oni; (21) 2-[2-aminoetyyli]-5-[[2-[(2-hydroksietyyli)amino]-etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (22) 2-[2-arainoetyyli]-5-[(3-aminopropyyli)amino]iso- 15 kino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (23) 2-[2-aminoetyyli)-5-[(2-aminoetyyli)amino]isokino-[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (24) 2-[2-aminoetyyli]-5-[[2-(metyyliamino)etyyli]amino] isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 20 (25) 2-[2-aminoetyyli]-5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]ami no] isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (26) 2-[3-aminopropyyli)-5-[[2 — [(2-hydroksietyyli)ami- , : no] etyyli] amino] isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H) - oni; /'*. 25 (27) 2-[3-aminopropyyli]-5-[ (3-aminopropyyli) amino] iso- ,...: kino [8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H) -oni; ; ,·, (28) 2-[3-aminopropyyli]-5-[ (2-amino) etyyli) amino] isoki- no[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H) -oni; ’ (29) 2-[3-aminopropyyli]-5-[[2-(metyyliamino)etyyli]ami- 30 no]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (30) 2-[3-aminopropyyli]-5-[ [2-(dimetyyliamino) etyyli]a- ‘...· mino] isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H) -oni; » (31) 5-[ [2-[ (2-hydroksietyyli) amino]etyyli]amino]-2-[3- • · .···, aminopropyyli] isokino[5,6,7-cd] indatsoli-6 (2H) -oni; I · 35 (32) 5 - [ [ 2 - [ (2-hydroksietyyli) amino ] etyyli ] amino] -2 - [ 2- ‘ * aminoetyyli]isokino[5,6,7-cd)indatsoli-6(2H)-oni; :...* (33) 2- [ (2-metyyliamino) etyyli] -5- [ [2 - [ (2-hydroksietyy- 109538 7 li)amino]etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (34) 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[(3-aminopropyyli)ami no] isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 5 (35) 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[(2-aminoetyyli)ami no] isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (36) 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[[2-(metyyliamino)e-tyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (37) 2-[(2-metyyliamino)]etyyli]-5-[[2-(dimetyyliamino)- 10 etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (38) 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[[2-[(2-hydroksietyy-li)amino]etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H])-oni; (39) 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[(3-aminopropyyli)ami- 15 no]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (40) 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[(2-aminoetyyli)amino] isokino[5,6,7-cd)indatsoli-6(2H)-oni; (41) 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[[2-(metyyliamino)e-tyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 20 (42) 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[[2-(dimetyyliamino)- etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (43) 2-metyyli-5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]isoki-no[5,6,7-cd] indatsoli-6 (2H) -oni; (44) 2~metyyli-5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]isoki- 25 no[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni.

. >.i Taulukko 1

R o NH-A

N—N^B

8 109538

Taulukko 1 (Jatkoa)

Ho. Y X R A B

1 C N H CH2CH2NHCH2CH2OH CH2CH2NHCH2CH2OH

5 2 C N H CH2CH2CH2NH2 " 3 C N H CH2CH2NH2 4 C N H CH2CH2NHCH3 " 5 C N H CH2CH2N(CHj)2 "

6 N C H CH2CH2NHCH2CH2OH CH2CH2NHCH2CH2OH

10 7 H C H CH2CH2CH2NH2 " 8 H C H CH2CH2NH2 " 9 N C H CH2CH2NHCH3 " 10 N C H CH2CH2N(CHj)2 " 11 C N H CH2CH2NHCH2CH2OH CH2CH2N (CH3) 2 15 12 C N H CH2CH2CH2NH2 " 13 C N H CH2CH2NH2 " 14 C N H CH2CH2NHCHj " 15 C N H CH2CH2N(CHj)2 " 16 N C H , CH2CH2NHCH2CH2OH CH2CH2N (CH3) 2 20 17 N C H CH2CH2CH2NH2 " 18 N C H CH2CH2NH2 " 19 N C H CH2CH2NHCH3 " 20 N C H CH2CH2N(CH3)2 " 21 C N H CH2CH2NHCH2CH2OH CH2CHzNH2 25 22 C N H CH2CH2CH2NH2 " 23 C N H CH2CH2NH2 " 24 C N H CH2CH2NHCH3 " 25 C N H CH2CH2N(CH3)2 " 26 C N H CH2CH2NHCH2CH2OH CH2CH2CH2NH2 30 27 C N H CH2CH2NH2 " ·.! 29 C N H CH2CH2NHCH3 " ’·*’ 30 C N H CH2CH2N(CH3)2 " ··' 31 N C H CH2CH2NHCH2CH2OH CH2CH2CH2NH2 ·” 32 N C H CH2CH2NHCH2CH2OH CH2CH2NH2 ; ;·; 3 5 33 C N H CH2CH2NHCH2CH2OH CH2CH2NHCH3 34 C N H CH2CH2CH2NH2 " 1 3 5 C N H CH2CH2NH2 " 36 C N H CH2CH2NHCH3 " : 37 C N H CHjCH2N(CH3)2 " 4 0 38 N C H ch2ch2nhch2ch2oh ch2ch2nhch3 3 9 N C H CH2CH2CH2NH2 " . 4 0 N C H CH2CH2NH2 " 41 N C H CH2CH2NHCH3 " 42 N C H CH2CH2N(CH3)2 " • , 45 4 3 C N H CH2CH2N(CH3)2 CH3 44 H C H CH,CH2N(CH3)2 CH3 • · 9 109538

Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa kaaviossa 1 kuvatulla menetelmällä, ja siihen liittyy kaavan III mukaisen yhdisteen reaktio (reaktio a):

5 O Z

οφφ 10 0 w

(Ilia) X = N, Y = C

(Illb) X = C, Y = N

15 jossa Z on OTs (joka OTs on p-tolueenisulfonyylioksiryh-mä) tai Cl, ja W on F tai Cl, sillä ehdolla, että Z ja W eivät voi samanaikaisesti olla Cl, kaavan IV mukaisen hydratsiinin kanssa: 20 H2N-NH-B' (IV) jossa B' on sama kuin B, joka on määritelty kaavassa (I), ·*: tai B' on ryhmä, joka voidaan muuttaa B:ksi poistamalla i .l B':ssa mahdollisesti läsnä olevien primaaristen tai se- 25 kundaaristen amiinien suojaryhmät, jolloin saadaan kaavan 'til II mukainen yhdiste: » :o 2

30 I I I J

N- N-^g.

t · l > » « ·

’r’ 35 (Ila) X = N, Y = C

(Hb) X = C, Y = N

» > · t > 10 109538 joka saatetaan sitten reagoimaan (reaktio b) kaavan V mukaisen yhdisteen kanssa: H2N-A' (V) | 5 jossa A' on sama kuin A, joka on määritelty kaavassa (I), tai A' on ryhmä, joka voidaan muuttaa A:ksi poistamalla A':ssa mahdollisesti läsnä olevien primaaristen tai sekundaaristen amiinien suojaryhmät, jolloin saadaan kaavan 10 1' mukaisia yhdisteitä: O NH-A* 15 X (I') N b*

Kun A' ja/tai B' ovat erilaisia kuin A ja/tai B, kaavan 20 1' mukaiset yhdisteet muutetaan kaavan I mukaisiksi yh disteiksi poistamalla A':ssa ja/tai B':ssa mahdollisesti ·,·, läsnä olevat primaaristen ja/tai sekundaaristen amiinien . suojaryhmät.

» « · t ♦ ···" 25 Kun kaaviossa 1 kuvattu menetelmä, haluttaessa, suorite taan saattamalla kaavan lila mukaisia yhdisteitä reagoi-: maan, niin voidaan saada keksinnön kaavan Ia mukaisia yh- : disteitä, jossa X on typpiatomi ja Y on hiiliatomi. Vaih toehtoisesti voidaan saada kaavan Ib mukaisia yhdisteitä 30 saattamalla reagoimaan kaavan Illb mukaisia yhdisteitä.

• · .·. A':ssa ja/tai B':ssä mahdollisesti läsnä olevien primaa- *· ’· risten ja/tai sekundaaristen amiinien suojaryhmiä, joita '···* voidaan edullisesti käyttää kaavan I mukaisten yhdistei- :··· 35 den valmistukseen, edustavat (0^3) -asyylijohdannaiset .**. (edullisesti asetyylijohdannaiset) , (Cj.J -alkoksikarbo- • · · nyylijohdannaiset (edullisesti tert-butoksikarbonyyli- 11 109538 johdannaiset) ja (C7.10)-aralkyylioksikarbonyylijohdannai-set (edullisesti bentsyylioksikarbonyylijohdannaiset).

Keksinnön eräässä edullisessa suoritusmuodossa kaavan I 5 mukaiset yhdisteet valmistetaan siten, että kaavan III' mukainen yhdiste: O OTs 10 I I I I (lii') O w 15 saatetaan reagoimaan kaavan IV mukaisen hydratsiinin kanssa, jolloin saadaan kaavan II' mukainen yhdiste: O OTs 20 I II I (II,) N-N^b, 25 Kaavan II' mukaiset yhdisteet saatetaan sitten reagoimaan = t * · · kaavan V mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan kaa-.: van 1' mukainen yhdiste, jonka vaiheen jälkeen seuraa V · A':ssa ja/tai B':ssa mahdollisesti läsnä olevien primaa risten ja sekundaaristen amiinien suojaryhmien poisto, : 30 jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste.

.* . Keksinnön eräässä toisessa edullisessa suoritusmuodossa * * · kaavan I mukaiset yhdisteet, jossa X on C ja Y on N, val-*”·* mistetaan edullisesti siten, että kaavan III'' mukainen ·:··: 35 yhdiste: • · · 12 109538

O F

rVSrS f111") 5 ° Cl saatetaan reagoimaan kaavan IV mukaisen hydratsiinin 10 kanssa, jolloin saadaan kaavan II'' mukainen yhdiste: N-N-B' 15 ,ΓΗΓιμ (ιι''>

O CI

20 Sitten kaavan II'1 mukaiset yhdisteet saatetaan reagoimaan kaavan V mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan ·.·. kaavan 1' mukainen yhdiste, jota vaihetta seuraa A':ssa . ja/tai B':ssa mahdollisesti läsnä olevien primaaristen ja * · · sekundaaristen amiinien suojaryhmien poisto, jolloin saa-’···’ 25 daan kaavan I mukainen yhdiste, jossa X on C ja Y on N.

: Kaavan III mukaisten yhdisteiden reaktio kaavan IV mu- · kaisten hydratsiinien kanssa voidaan suorittaa kuumenta malla kaavan III mukaisia yhdisteitä stökiometrisen mää-30 rän kanssa kaavan IV mukaisia hydratsiineja tai ylimäärän • » ·’**; kanssa kaavan IV mukaisia hydratsiineja. Reaktio suorite- .* . taan tavallisesti inertissä liuottimessa kuten metyleeni- ’;// kloridi, kloroformi, 1,1,1-trikloorietaani, dimetoksi- ·;·' etaani, tetrahydrofuraani, dimetyylisulfoksidi, dimetyy- ;··· 35 liformamidi, pyridiini ja/tai pikoliini, tai näin halut- taessa, käyttämällä itse kaavan IV mukaista yhdistettä liuottimena, mahdollisesti epäorgaanisen emäksen kuten 13 109538 alkali- tai maa-alkalimetallikarbonaatin tai vetykarbo-naatin tai orgaanisen emäksen kuten trialkyyliamiinin läsnä ollessa lämpötilassa 0 °C:sta liuottimen refluk-sointilämpötilaan.

5

Edullisesti reaktio suoritetaan liuottimessa kuten pyri-diini, tetrahydrofuraani, dimetyylisulfoksidi tai N,N,N', N'-tetrametyylietyleenidiamiini käyttäen 2-10 ekvivalenttia kaavan IV mukaista yhdistettä yhtä ekvivalenttia 10 kaavan III mukaista yhdistettä kohden, ja työskennellen lämpötilassa alueella 5-50 °C.

Kun, keksinnön eräässä erityisessä suoritusmuodossa, kaavan III' mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan IV 15 mukaisen hydratsiinin kanssa, reaktio suoritetaan edullisesti kaavojen III ja IV mukaisten yhdisteiden välisessä moolisuhteessa 1:1,05 - 1:1,25 ja käyttämällä liuottimena tetrahydrofuraania lämpötilassa alueella huoneenlämpötilasta 50 °C:seen.

20

Kaavan II mukaisten yhdisteiden reaktio kaavan V mukaisten yhdisteiden kanssa voidaan suorittaa kuumentamalla , *. kaavan II mukaisia yhdisteitä kaavan V mukaisen amiinin stökiometrisen määrän tai ylimäärän kanssa. Reaktio suo-''··* 25 ritetaan tavallisesti inertissä liuottimessa kuten mety- ‘ * leenikloridi, kloroformi, 1,1,1-trikloorietaani, dimetok- : sietaani, tetrahydrof uraani, dimetyylisulfoksidi, dime- v : tyyliformamidi, pyridiini ja/tai pikoliini, tai, halut taessa, käyttämällä itse kaavan V mukaista yhdistettä 30 liuottimena, mahdollisesti epäorgaaninen emäksen kuten • i alkali- tai maa-alkalimetallikarbonaatin tai vetykarbo-.· . naatin tai orgaanisen emäksen kuten trialkyyliamiinin ’· ’· läsnä ollessa lämpötilassa 0 °C:sta liuottimen refluk- sointilämpötilaan.

Edullisesti reaktio suoritetaan liuottimessa kuten pyridiini, kloroformi tai dimetyylisulfoksidi käyttäen 2-10 35 14 109538 ekvivalenttia kaavan V mukaista yhdistettä kaavan II mukaisen yhdisteen yhtä ekvivalenttia kohden ja työskennellen lämpötilassa alueella huoneenlämpötilasta 100 °C:seen.

5

Kun kaavojen 1' mukaisissa yhdisteissä A' ja/tai B' ovat erilaisia kuin A ja/tai B, primaaristen ja/tai sekundaaristen aminofunktioiden suojaryhmien poisto suoritetaan ammattimiesten hyvin tuntemilla menettelytavoilla. Käyt-10 tökelpoisia opetuksia esitetään teoksessa Green, T.W., Wuts, P.G.M., "Protective Groups in Organic Synthesis", 2. painos, John Wiley & Sons, 1991.

Esimerkiksi N-(tert-butoksikarbonyyli)suojaryhmän poisto 15 voidaan suorittaa käsittelemällä kaavan I1 mukainen yhdiste ylimäärällä vedetöntä suolahappoa liuottimessa kuten C-^-alkanoli, dikloorimetaani ja/tai kloroformi lämpötilassa 0 °C:sta liuottimen refluksointilämpötilaan, ajan ollessa useista minuuteista muutamiin tunteihin.

20 Edullisesti reaktio suoritetaan etanolissa tai kloroformissa käyttäen 10 - 20 mooliekvivalenttia vedetöntä suolahappoa lämpötilassa 20 - 50 °C, ja se on yleensä eden- ', nyt loppuun neljässä tunnissa.

> « · ’··’ 25 Kaavan IV mukaiset yhdisteet ovat tunnettuja, tai ne voi- : ’· daan valmistaa tunnetuilla menettelytavoilla, katso esi- : merkiksi J. Med. Chem., 7, 493, (1964) ja J. Het. Chem., 26, 85, (1989) .

30 Kaavan V mukaiset yhdisteet ovat tunnettuja ja kaupalli-.··. sesti saatavia, tai ne voidaan valmistaa tunnetuilla me- / _ nettelytavoilla. Esimerkiksi joidenkin N-(tert-butoksi- • karbonyyli)alkaanidiamiinien, jotka ovat käyttökelpoisia joidenkin keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistuksessa, 35 valmistus kuvataan julkaisuissa Synth. Comm., 20, 2559, ,···. (1990) tai J. Med. Chem., 33, 97, (1990).

15 109538

Kaavan III mukaiset yhdisteet, joissa Z = OTs [yhdisteet III')], voidaan valmistaa monivaiheisella menettelytavalla, joka kuvataan kaaviossa 2, johon liittyvät seuraavat reaktiot: 5 (c) 1,4-difluoribentseenin Friedel-Craft -asylointi kaavan VI mukaisilla pyridiini-3,4-dikarboksyylihappoanhyd-rideillä, jossa R6 on vety tai sopiva hydroksifunktion suojaryhmä kuten metoksi tai bentsyylioksi, AlCl3:n läsnä 10 ollessa (110 °C, 22 tuntia), mikä johtaa kaavojen Vila ja Vllb mukaisiin alueisomeerisiin ketohappoihin; (d) kaavojen Vila ja Vllb mukaisten ketohappojen reaktio natriummetoksidin kanssa metanolissa (8,5 tuntia, refluk- 15 sointi) johtaen kaavojen Villa ja VHIb mukaisiin alueisomeerisiin metoksisubstituoituihin ketohappoihin; kaavojen Villa ja VHIb mukaiset yhdisteet, joissa R6 on vety, voidaan saattaa reagoimaan sellaisenaan seuraavassa vaiheessa; kun R6 on muu kuin vety, kaavan Villa mukainen 20 yhdiste puhdistetaan kiteyttämällä ja saatetaan reagoimaan puhtaana alueisomeerinä; • · ·* (e) kaavan Villa mukaisten yhdisteiden (R6 muu kuin vety) *· "· pelkistys Zn/Cu-parilla 75-%:sessa muurahaishapon vesi- tl· 25 liuoksessa (15 min huoneenlämpötilassa, sitten 2 tuntia 80 °C:ssa) johtaen kaavan IX mukaiseen yhdisteeseen; kun : R6 on vety, kaavojen IXa ja IXb mukaiset hapot voidaan erottaa kromatografiällä, jolloin saadaan tulokseksi kaavojen IXa ja IXb mukaiset puhtaat eristetyt alueisomee- : 3 0 rit; • ·

I · I

(f) kaavan IX mukaisen sopivan hapon syklisointi kuumen- • · tamalla yhdisteen suspensiota polyfosforihapossa 110 -120 °C:ssa 2 tunnin ajan johtaen kaavan X mukaiseen bent-35 so [g] isokinoliiniin; (g) kaavan X mukaisen yhdisteen hapetus kaavan XI mukai- 16 109538 seksi vastaavaksi dioniksi seriumammoniumnitraatilla ase-tonitriilin ja veden seoksessa (60 °C, 2 tuntia); (h) kaavan XI mukaisen dionin metoksiryhmän poisto alu-5 miinikloridilla metyleenikloridissa (huoneenlämpötila 2 tuntia, sitten refluksointilämpötilassa 1,5 tuntia) johtaen kaavan XII mukaisiin yhdisteisiin, jotka vastaavat kaavan XII mukaisten 9-fluori-6-hydroksi- ja 9-kloori-6-hydroksi-5,10-dionien seosta johtuen poistuvan fluoridin 10 osittaisesta korvautumisesta AlCl3:n avulla; ja (i) kaavan XII mukaisen yhdisteen vapaan hydroksiryhmän lopullinen funktionalisointi tolueenisulfonyylikloridin avulla pyridiinissä huoneenlämpötilassa, mikä johtaa kaa- 15 van III mukaisiin haluttuihin yhdisteisiin, jossa Z = OTs [yhdisteet (III)]; kun R6 on hydroksifunktion suojaryhmä, se voidaan poistaa ammattimiehen hyvin tuntemilla menetelmillä, johtaen siten kaavan III mukaiseen yhdisteeseen, jossa R on OH.

20

Keksinnön eräässä edullisessa suoritusmuodossa kaavan XI mukaisten välituotteiden valmistus suoritetaan kaaviossa . 3 kuvatulla monivaiheisella menettelytavalla, ja siihen

• I

liittyvät seuraavat reaktiot: 25 « * ‘ - kaavojen Vila ja Vllb mukaisten alueisomeeristen ke- ;,· · tohappojen seoksen syklisointi 20-%:isella savuavalla : : : rikkihapolla 130 - 140 °C:ssa, jolloin saadaan kaavan XIII mukaiset 6,9-difluoribentso[g]isokinoliinit; 30 t · · * « .*··, - kaavan XIII mukaisen yhdisteen reaktio yhden ekviva- _· t lentin kanssa natriummetylaattia liuottimessa kuten t » * *· metanoli, jolloin saadaan kaavan XI mukaisten väli- ·...’ tuotteiden seos, joka erotetaan kaavojen Xla ja Xlb 35 mukaisiksi yksittäisiksi puhtaiksi yhdisteiksi uudel- .··. leenkiteyttamällä liuottimesta ja/tai pylväskromato- » · grafialla. Sitten kaavojen Xla ja Xlb mukaiset puh- 17 109538 taat välituotteet käsitellään kaavion 2 yhtälön (h) ja (i) ja sitten kaavion 1 mukaan, jolloin saadaan kaavojen Ia ja vastaavasti Ib mukaiset yhdisteet.

5 Keksinnön mukaisessa edullisessa menetelmässä, jolla aikaansaadaan kaavan I mukaiset yhdisteet, jossa X = C ja Y = N, kaavan III'1 mukaiset 9-kloori-6-fluoribentso[g]iso-kinoliini-5,10-dionit valmistetaan kaaviossa 4 kuvatulla monivaiheisella menetelmällä, ja siihen liittyvät seuraa-10 vat reaktiot: l-kloori-4-fluoribentseenin litiointi alkyylilitium-reagenssilla kuten sec-butyylilitiumilla THFissä -75 °C:ssa, jolloin saadaan kaavan XIV mukainen 1-litio-15 5-kloori-2-fluoribentseeni; edellä olevan vaiheen mukaan in situ muodostuneen, kaavan XIV mukaisen l-litio-5-kloori-2-fluoribentseenin asylointi kaavan VI mukaisilla pyridiini-3,4-di-20 karboksyylihappoanhydrideillä, jolloin saadaan kaavo jen XVa ja XVb mukaisten ketohappojen seosta, joka voidaan erottaa yksittäisiksi puhtaiksi yhdisteiksi ’· . uudelleenkiteyttämällä liuottimesta tai sublimoimal- Y:; ·...· 25 kaavan XVa mukaisen puhtaan ketohapon pelkistys « · · : Zn/Cu-parilla tai Zn-jauheella 75-%:isessa muurahais- • * · V · hapon vesiliuoksessa (15 min huoneenlämpötilassa,

sitten 2 tuntia 80 °C:ssa) mikä johtaa kaavan XVI

: 30 mukaiseen yhdisteeseen; • * .* . - kaavan XVI mukaisen yhdisteen oksidatiivinen sykli- sointi savuavalla rikkihapolla (20 - 30 % S03, 10 min, • · *·;·’ 130 °C) , jolloin saadaan kaavan III' 1 mukaisia 9- •;”i 35 kloori-6-fluoribentso[g]isokinoliini-5,10-dioneja.

* « • · ·

Kaavan III'' mukaiset välituotteet käsitellään sitten 18 109538 kaavion 1 mukaan, jolloin saadaan kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa X = C ja Y = N.

Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden biolo-5 ginen aktiivisuus

Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden biologisen aktiivisuuden arviointi suoritettiin in vitro ja in vivo ohjeilla, jotka on kehittänyt U.S. National Cancer 10 Institute.

Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden sytotok-sisen aktiivisuuden arviointi in vitro suoritettiin käyttämällä ihmisen paksusuolen adenokarsinoomasolulinjaa 15 (Lovo), joka on eristetty etäispesäkekyhmystä, ja ala-linjaa, joka ekspressoi multiresistenssiä. Alalinja on resistenssi joukolle antituumorisia aineita, joita ovat mm. doksorubisiini, VP-16 ja vinkristiini. Tällä alalin-jalla (nimeltään Lovo/DX) on alentunut doksorubisiinin 20 kerääntyminen ja proteiinin yliekspressio (Grandi, M., Geroni, C., Giuliani, F.C., British J. Cancer, (1986), V, 54, 515). Yhdisteet testattiin MTT-määrityksen mukaan (Mosman, T. "Rapid Colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxi-25 city assay", J. Immunol. Methods, (1983), 65, 55-63;

Green, L.M., "Rapid colorimetric assay for cell viabili-: ty; application to the quantitation of cytotoxic and v ’ growth inhibitory lymphokines", J. Immunol. Methods, (1984), 70, 257-268) mitoksantroniin ja doksorubisiiniin 30 verraten.

• · • 1 > - * * » I I ♦ · 19 109538

Taulukko 2 ICJU (/xg/ml)

Yhdiste 1LOVO I LOVO/DX Rl 5 o 0.3 5.0 16.7 N'~____ o nh^NHj 0.5 22.4 44.8 10 N' N'^/X N(CH,),____._ O nh^N(C^ 0.5 0.9 1.8 15 H N'vXNN(CH1)t____

Mitoksantroni | 0.041 0.9| 22.51

Doksorubisiini I 0.91 66.61 741 20

Yleensä keksinnön mukaisesti valmistetut edustavat yhdisteet olivat sytotoksisempia kuin doksorubisiini ja » · yhtä sytotoksisia kuin mitoksantroni Lovo-solulinjalla.

« "**t 25 Kun mitoksantroni testattiin Lovo/DX-solulinjalla, havaittiin resistessi-indeksi Rl (määritellään resis-; ί : tentin solulinjan IC50:n suhteena herkän solulinjan V * IC50:een) jopa 22,5, mikä osoittaa, että tämä alalinja on hankkinut resistessin mitoksantronia ja ametantronia ;’. 30 vastaan. Toisaalta joillain keksinnön mukaisilla yhdis- t 9 teillä samalla resistentillä alalinjalla testattaessa ei t I ♦ ,* , nähdä ristiresistenssiä mitoksantronin ja ametantronin 1 * » • : kanssa, kuten taulukossa 2 esitetään. Keksinnön mukai- '·;·* sesti valmistettujen edustavien yhdisteiden arviointi in ··,·: 35 vitro viittaa siihen, että kyseiset edustavat yhdisteet voivat olla käyttökelpoisia kasvainresistenssin multi-resistenssivälitteisen mekanismin voittamiseksi.

20 109538

Keksinnön mukaisesti valmistettujen edustavien yhdisteiden biologisen aktiivisuuden tutkimukset in vivo suoritettiin P388- ja L1210-hiirileukemiamalleja käyttämällä. P388-hiirileukemiasolut injisoitiin vatsaontelonsisäi-5 sesti (ip) tai laskimonsisäisesti (iv) CD2Fl-hiiriin. Käsittely aloitettiin noin 24 tuntia kasvaimen siirros-tuksen jälkeen, ja lääkkeen annostelut annettiin ip (P388 ip/ip) tai iv (P388 iv/iv) ennalta määrättyjen hoito-ohjelmien mukaan, tavallisesti kolmen päivän (P388 iv/iv) 10 tai neljän päivän (P388 ip/ip) välein. Tutkimukset suoritettiin 60 päivän ajanjaksolla, ja merkittiin muistiin kunkin eläimen kuolinpäivä. % T/C määritettiin käyttämällä kullekin ryhmälle keskimääräistä eloonjäämisaikaa (MST) kaavalla 15 % T/C = [(MST käsitelty) / (MST kontrolli)] x 100

Keksinnön mukaisesti valmistetut edustavat yhdisteet pystyivät lisäämään käsiteltyjen eläinten eloonjäämisaikaa 20 merkittävästi enemmän kuin mitoksantroni, johtaen suurempiin % T/C-arvoihin hyvin siedetyillä annosteluilla. Lisäksi edellä mainituilla edustavilla yhdisteillä ha-valttiin leukemianvastaista aktiivisuutta laajalla jou-kolia hyvin siedettyjä annosteluja, ja erityisesti ne 25 olivat aktiivisia annosteluilla, jotka olivat alhaisempia ...j kuin maksimaalinen siedetty annos, mikä osoittaa suotui- i ,·, sampaa terapeuttista indeksiä mitoksantroniin verrattuna.

I · ·

Keksinnön mukaisesti valmistettujen edustavien yhdistei-30 den antituumorinen aktiivisuus arvioitiin myös L1210- > * * ”· hiirileukemiamallissa.

L1210-leukemiasoluja injisoitiin vatsaontelonsisäisesti (ip) tai laskimonsisäisesti (iv) CDFl-hiiriin, ja käsit-• , 35 tely aloitettiin noin 24 tuntia kasvainsiirrostuksen jäl keen. Lääkkeiden annostelut annettiin ip (L1210 ip/ip) tai iv (L1210 iv/iv) ennalta määrättyjen ohjelmien 21 109538 mukaan, tavallisesti 3 päivän (L1210 iv/iv) tai 4 päivän (L1210 ip/ip) välein. Tutkimukset suoritettiin 60 päivän aikana, ja kunkin eläimen kuolinpäivä merkittiin muistiin. % T/C määritettiin käyttämällä kullekin ryhmälle 5 keskimääräistä eloonjäämisaikaa (MST) seuraavan kaavan mukaan: % T/C [(MST käsitelty) / (MST kontrolli)] x 100 10 Myös tässä toisessa leukemiamallissa keksinnön mukaisesti valmistetuilla edustavilla yhdisteillä nähtiin ylivoimainen aktiivisuus kliinisesti käytettyyn antituumoriseen mitoksantronilääkkeeseen verrattuna. Koska kyseisillä yhdisteillä nähdään hyvät tulokset in vivo-hiiri-P388- ja 15 -L1210-leukemiamalleja vastaan, joita pidetään kasvain-tenvastaista aktiivisuutta ennustavina ihmisillä, tässä kuvattujen yhdisteiden odotetaan olevan tehokkaita anti-tuumorisilla antibiooteilla tapahtuvalle hoidolle herkkiä ihmisen leukemioita ja kiinteitä kasvaimia vastaan.

20

Sen vuoksi keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä voidaan käyttää terapeuttisten koostumusten aktiivisina valmistusaineina indusoimaan kasvaimien regressiota ja/-tai lievenemistä nisäkkäillä annettaessa määriä alueella 25 noin 1 mg - 0,4 g/kg kehonpainoa. Eräs edullinen annoste-luohje olisi noin 1-50 mg/kg kehonpainoa/päivä. Voidaan : käyttää yksikköannostelua niin, että 24 tunnin aikana annetaan noin 70 mg - 3,5 g aktiivista yhdistettä henkilölle, jonka kehonpaino on noin 70 kg. Annostelu voidaan : 3 0 säätää muiden hoito-ohjeiden, kuten säteilyterapian kans- • · · !..* sa yhteensopivaksi.

\‘·· Farmaseuttinen koostumus voi olla tablettien, kapselien, geelikapselien, peräpuikkojen, lyofilisoitujen jauheiden 35 ja laskimonsisäiseen antoon tarkoitettujen liuosten muo-...t dossa. Keksintöä kuvataan seuraavilla ei-rajoittavilla, ammattimiehille hyvin selvillä esimerkeillä ja variaa- 22 109538 tioilla.

Keksinnön mukaisesti valmistettavien yhdisteiden synteesi 5 Va1 mistusesimerkki 1

Pyridiini-3,4-dikarboksyylihappoanhydridi

Seosta, jossa on pyridiini-3,4-dikarboksyylihappoa (15,0 g) ja etikkahappoanhydridi (30 ml) refluksoidaan kahden 10 tunnin ajan. Ylimääräinen etikkahappoanhydridi poistetaan tislaamalla, ja anhydridi kerätään ja puhdistetaan sublimoimalla [123 °C/400 Pa (3 mmHg)], jolloin saadaan pyri-diini-3,4-dikarboksyylihappoanhydridiä valkoisena kiinteänä aineena (10,1 g).

15 sp.: 74 - 76 °C.

XH-NMR (CDClj) : 7,94 (d, 1H) ; 9,24 (d, 1H); 9,39 (s, 1H).

Vaimistusesimerkki 2 4-(2,5-difluoribentsoyyli)nikotiinihappo ja 3-(2,5-di-20 fluoribentsoyyli)isonikotiinihappo

Seosta, jossa on pyridiini-3,4-dikarboksyylihappoanhydri-·.·*.· diä (5,0 g) ja alumiinikloridia (17,5 g) 1,4-difluori- : bentseenissä (65 ml) , kuumennetaan öljyhauteessa 110 25 °C:ssa 22 tunnin ajan. Ylimääräinen 1,4-difluoribentseeni ·;··· otetaan talteen tislaamalla. Jäännöstä jäähdytetään jää- ! : .·. hauteella ja sammutetaan jäävedellä (75 ml) ja konsent- t·;·, roidulla suolahapolla (6,3 ml). Saostunut kiinteä aine suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan noin 4/l-seosta . . 30 4-(2,5-difluoribentsoyyli)nikotiinihaposta ja vastaavasti '* '· 3-(2,5-difluoribentsoyyli)isonikotiinihaposta valkoisena jauheena (7,7 g), joka voidaan uudelleenkiteyttää aseto-·/·.: nitriilistä ja vedestä.

:*··; sp. : 214 - 217 °C.

·’. 35 1H-NMR (DMSO-d6) : 7,4 (m); 7,5 (m); 7,90 (m); 8,80 (d) ; 8,90 (d); 9,15 (s).

Tämän materiaalin (15,97 g) uudelleenkiteytys absoluutti- I » 23 109538 sesta etanolista (360 ml) antaa tulokseksi lähes puhdasta 3- (2,5-difluori-bentsoyyli)isonikotiinihappoa (1,146 g).

Valmistusesimerkki 3 5 4-(2-metoksi-5-fluoribentsoyyli)nikotiinihappo ja 3-(2- metoksi-5-fluoribentsoyyli)isonikotiinihappo

Valmistusesimerkin 2 seos, jossa on 4-(2,5-difluoribentsoyyli) nikotiinihappoa ja 3-(2,5-difluoribentsoyyli)iso-10 nikotiinihappoa (14,1 g), lisätään liuokseen, jossa on natriummetylaattia, joka on valmistettu lisäämällä natriumia (6,8 g) erissä kuivaan metanoliin (140 ml). Reak-tioseoksen annetaan reagoida refluksointilämpötilassa 8,5 tunnin ajan ja huoneenlämpötilassa yön yli. Reaktioseos 15 konsentroidaan noin 1/3-tilavuuteensa, lisätään vettä (100 ml), ja jäljellä oleva metanoli poistetaan tislaamalla. Jäännökseen lisätään hitaasti konsentroitua HCl:ää (25 ml) jäähdyttäen 10 °C:ssa, ja saatu sakka otetaan talteen imupullolla suodattamalla ja pestään 0,1 N HC1:-20 llä, jolloin saadaan noin 4:1-seosta 4-(2-metoksi-5-fluoribentsoyyli) nikotiinihaposta ja 3-(2-metoksi-5-fluoribentsoyyli) isonikotiinihaposta (11,31 g), sp. : >230 °C.

: 'H-NMR (DMSO-d6) : 3,40 (s); 3,45 (s); 7,15 (m); 7,37 (d) ; 25 7,42 - 7,63 (m); 7,26 (d) ; 8,60 (s); 8,83 (d) ; 9,07 (s), ;··: 13,55 (br.s) .

.·.·. Vaimistusesimerkki 4 4- (2-metoksi-5-fluoribentsyyli)nikotiinihappo (ja 3-(2- . . 30 metoksi-5-fluoribentsyyli)isonikotiinihappo) ·;·* Sinkki-kupari -paria (L.F. Fieser ja M. Fieser, Reagents for Organic Synthesis, voi. 1, s. 1292) (1,5 g) lisätään F”; sekoitettuun suspensioon, jossa on valmistusesimerkin 3 ‘ . 35 4-(2-metoksi-5-fluoribentsoyyli)nikotiinihapon ja 3—(2 — metoksi-5-fluoribentsoyyli)isonikotiinihapon seosta ···* (1,222 g) muurahaishapossa (15 ml) ja vedessä (5 ml). 15 24 109538 minuutin kuluttua huoneenlämpötilassa reaktioseosta kuumennetaan 2 tunnin ajan öljyhauteessa, jota pidetään 80 °C:ssa. Huoneenlämpötilaan jäähdyttämisen jälkeen reak-tioseos suodatetaan sintteröidyn lasisuodattimen läpi, ja 5 kiintoaine pestään läpikotaisin 75-%:isella muurahaishapon vesiliuoksella (10 ml) ja sitten etyyliasetaatilla (10 ml). Yhdistetyt suodokset konsentroidaan noin 5 ml:ksi, käsitellään 0,5 N HClrllä (15 ml) ja uutetaan etyyliasetaatilla (3 x 20 ml); lopuksi ne kyllästetään 10 natriumkloridilla, ja uutetaan edelleen etyyliasetaat-ti/1,2-dimetoksietaanilla 3/1 (2 x 20 ml). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivataan vedettömällä natriumsulfaa-tilla, ja liuotin poistetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan kellertävää jäännöstä. Tämä materiaali alis-15 tetaan silikageelipylväskromatografiälle (eluentti: etyy-liasetaatti/metanoli/etikkahappo 96/4/0:sta 90/10/l:een tilavuus/tilavuus/tilavuus), jolloin saadaan 4-(2-metok-si-5-fluoribentsyyli)nikotiinihappoa (0,805 g) kellertä-vänvalkoisena kiinteänä aineena.

20 sp.: >220 °C.

^-NMR (DMS0-d6) : 3,70 (s, 3H) ; 4,33 (s, 2H) ; 6,91 - 7,12 (m, 3H) ; 7,21 (d, 1H); 8,61 (d, 1H); 8,97 (s, 1H). Edellä : olevasta pylväskromatografiästä voidaan saada talteen myös hieman 3-(2-metoksi-5-fluori-bentsyyli)isoniko-25 tiinihappoa.

’ Valmistusesi merkki_5.

| | J

9-f luori-10-hydroksi-6-metoksibentso[g] isokinoliini 30 Seosta, jossa on 4-(2-metoksi-5-fluoribentsyyli)nikotii-• "· nihappoa (0,63 g) ja polyfosforihappoa (15 g), kuumenne- taan 110 - 120 °C:ssa kahden tunnin ajan sekoittaen. Kuu-mennus poistetaan, ja reaktioseokseen lisätään vettä (50 ,···. ml) sen ollessa edelleen lämmintä (60 °C) . Seos jäähdyte- • 35 tään 0 °C:seen, säädetään neutraaliin pH-arvoon 20- i 1 t » ♦ ' * %:isella natriumhydroksidilla ja annetaan sekoittua huo- neenlämpötilassa 1,5 tunnin ajan; lopuksi se uutetaan 4- 25 109538 %:isella metanolilla kloroformissa (4 x 75 ml). Yhdistetyt orgaaniset faasit pestään suolaliuoksella, kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla, ja liuottimet poistetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 9-fluori-10-hyd-5 roksi-6-metoksibentso[g]isokinoliinia (0,40 g) purppuranpunaisena kiinteänä aineena, sp.: >210 °C (etanolista).

lH-NMR (DMSO-d6) : 3,87 (s, 3H) ; 6,70 - 6,83 (m, 2H); 6,92 - 7,00 (m, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,50 (d, 1H); 8,75 (s, 1H); 10 12,30 (br.s, 1H).

UV (etanoli): lambda max. (nm) (E 1%) (cm): 539 (204); 398 (513); 378 (452); 266 (1232).

IR (KBr) : 729, 1245, 1499, 1528, 1620, 1644 ja 2838 cm'1. 15 Valmi stusesimerkki_6 9-fluori-6-metoksibentso[g]isokinoliini-5,10-dioni

Liuos, jossa on seriumammoniumnitraattia (CAN; 13,70 g) vedessä (50 ml), lisätään 20 min aikana sekoitettuun sus-20 pensioon, jossa on 9-fluori-10-hydroksi-6-metoksi-bentso-[g]isokinoliinia (1,22 g) asetonitriilissä (150 ml). Lisäyksen lopussa saatua suspensiota kuumennetaan 60 °C:ssa kahden tunnin ajan, jolloin saadaan kirkasta, tum-! maa liuosta, joka jäähdytetään huoneenlämpötilaan ja lai- t · : 25 mennetaan vedellä (100 ml). Sen jälkeen kun asetonitriili on poistettu tislaamalla alennetussa paineessa, vesifaasi ; kyllästetään natriumkloridilla ja uutetaan metyleeniklo- : .·. ridilla (3 x 150 ml) . Yhdistetyt orgaaniset liuokset kui- » * · • · · · vataan vedettömällä natriumsulfaatilla, ja liuotin pois-30 tetaan alennetussa paineessa. Saatu jäännös puhdistetaan , . silikageelipylväskromatografiällä (eluentti: metyleeni- kloridi/etyyliasetaatti 85/15:stä 75/25:een tilavuus/ti-lavuus), jolloin saadaan 9-fluori-6-metoksibentso[g]iso-kinoliini-5,10-dionia ruskeankeltaisena kiinteänä aineena 35 (0,48 g) .

• . sp. : >220 °C.

1H-NMR (CDC13) : 4,05 (S, 3H) ; 7,38 (dd, J=3,39, 9,39 Hz, 26 109538 1H); 7,55 (dd, J=10,37, 9,39 Hz, 1H), 8,00 (dd, J=5,09, 0,78 Hz, 1H); 9,07 (d, J=5,09 Hz, 1H); 9,45 (d, J=0,78 Hz, 1H).

5 Valmistusesimerkki 7 6,9-difluoribentso[g]isokinoliini-5,10-dioni

Liuosta, jossa on valmistusesimerkin 2 mukaista 4-(2,5-difluoribentsoyyli)nikotiinihapon ja 3-(2,5-difluoribent-10 soyyli)isonikotiinihapon seosta (61,07 g) 20-%:sessa savuavassa rikkihapossa (100 ml), kuumennetaan 140 °C:ssa samalla kun lisätään 20-%:ista savuavaa rikkihappoa neljässä osassa (13,2 ml kukin) 20 minuutin välein. Neljännen lisäyksen jälkeen seosta kuumennetaan 20 min ajan, 15 sitten se jäähdytetään huoneenlämpötilaan ja sammutetaan jään (1500 g), veden (1500 ml) ja 35-%:isen NaOH:n (350 ml) seoksella. Seos uutetaan neljästi metyleenikloridilla (1 x 1000 ml:lla, minkä, jälkeen 3 x 500 ml:lla). Yhdistetyt orgaaniset liuokset pestään vedellä (2 x 1000 ml), | 20 kuivataan (Na2S04), ja liuotin poistetaan kiertohaihdutti- ! mella. Saatu tummanpunainen kiinteä aine (56,0 g) liuote- j taan kiehuvaan THF:ään (840 ml), ja lisätään värinpoistoa varten aktiivihiiltä (8,40 g). 30 min kuluttua seos suo- ·'/· datetaan kuumana, ja suodos konsentroidaan 2 00 ml:ksi.

25 Saatu sakka kerätään suodattamalla imupullolla, jolloin saadaan 6,9-difluoribentso[g]isokinoliini-5,10-dionia (43,00 g) .

| ; ,·, sp. : 201 - 203 °C.

j *'!/ Konsentroimalla emäliuos 70 ml:aan saadaan toinen saanto 1 30 tuotetta (3,35 g), sp. 200 - 202 °C.

‘ · ValmiRi-.iispsimprkki 8 9-fluori-6-metoksibentso[g]isokinoliini-5,10-dioni ja 6-f luori-9-metoksibentso[g] isokinoliini-5,10-dioni . ·". 3 5 • , Valmistetaan natriummetylaatin liuosta typpi-ilmakehässä tiputussuppilossa kuivasta metanolista (97,6 ml) ja eris- 27 109538 sä lisätystä natriumista (2,024 g). Kun kaikki natrium häviää, liuos tiputetaan 2 tunnin 35 minuutin aikana sekoitettuun liuokseen, jossa on valmistusesimerkin 7 mukaista 5,9-difluoribentso[g]isokinoliini-5,10-dionia 5 (19,615 g) kuivassa THF:ssä (883 ml) 20 °C:ssa. Lisäyksen lopussa liuos konsentroidaan puoleen tilavuuteensa kier-tohaihduttimella, sitten sitä jäähdytetään 18 °C:seen 30 minuutin ajan. Erottuva kiinteä aine otetaan talteen imu-pullolla suodattamalla ja pestään THF:llä (100 ml); sit-10 ten se suspendoidaan veteen (80 ml) sekoittaen yön yli, ja suodatetaan jälleen, jolloin saadaan kiinteä aine A (7,4 g).

THF-emäliuos konsentroidaan kuiviin. Saatu kiinteä aine 15 suspendoidaan veteen (78 ml) sekoittaen 1 tunnin ajan ja suodatetaan, jolloin sadaaan kiinteä aine B (12,9 g).

Kiinteä aine A (9,30 g) metyleenikloridissa (45 ml) kuumennetaan refluksoitumaan 30 minuutin ajan. Huoneenlämpö-20 tilaan jäähdyttämisen jälkeen kiinteä aine otetaan talteen imupullolla suodattamalla, pestään metyleeniklori-dilla (5x3 ml) ja kuivataan tyhjössä 40 °C:ssa, jolloin saadaan 6-metoksi-9-fluoribentso[g]isokinoliini-5,10-dio-nia (8,65 g) puhtaana yhdisteenä, sp. : 248 - 250 °C.

,'·· 25 ^-NMR (CDC13) : 4,05 (s, 3H) ; 7,40 (dd (J=9,39, 3,91 Hz) 1H) ; 7,55 (dd, J=10,37, 9,39 Hz, 1H) ; 8,00 (dd, J=5,09, ·;·· 0,78 Hz, 1H) ; 9,05 (d, J=5,09 Hz, 1H) ; 9,48 (d, J=0,78 I : HZ, 1H) .

30 Kiinteä aine B (14,0 g) liuotetaan metyleenikloridiin (140 ml), ja liukenematon osa poistetaan suodattamalla. Metyleenikloridiliuosta käytetään pylväskromatografiaan ·;*’ silikageelillä (630 g), jota eluoidaan ympäristön pai- : ·.*. neessa metyleenikloridilla. Kun keltaiset kromatografiset 35 vyöhykkeet ilmenevät hyvin erottuneina, pylvästä eluoi-' . daan metyleenikloridi/etyyliasetaatti-seoksilla 10/l:stä 8/2:een, l/l:een, jolloin saadaan 9-metoksi-6-fluoribent- 28 109538 so[g]isokinoliini-5,10-dionin ja vastaavasti 6-metoksi-9-fluoribentso[g]isokinoliini-5,10-dionin 94/6-seosta I (HPLC-arviointi) (6,50 g) .

sp.: 168 - 170 °C.

5

Valmistnsesimerkki 9 a) 9-fluori-6-hydroksibentso[g]isokinoliini-5,10-dioni ja 9-kloori-6-hydroksibentso[g]isokinoliini-5,10-dioni (l/l-seos: pienimittakaavainen reaktio) 10

Seosta, jossa on 9-fluori-6-metoksibentso[g]isokinoliini-5,10-dionia (0,072 g) ja alumiinitrikloridia (0,112 g) kuivassa metyleenikloridissa (40 ml), sekoitetaan huoneenlämpötilassa 4 tunnin ajan typpi-ilmakehässä. Lisä-15 tään vielä erä alumiinikloridia (0,190 g), ja seos saa reagoida refluksointilämpötilassa 1,5 tunnin ajan ja huoneenlämpötilassa yön yli. Kun on lisätty suolaliuosta (15 ml), vesifaasi erotetaan ja uutetaan metyleenikloridilla (3x5 ml). Yhdistetyt orgaaniset liuokset kuivataan ve-20 dettömällä natriumsulfaatilla, ja liuotin poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saadaan noin 1:1 -seosta (0,070 g) 9-fluori-6-hydroksibentso[g]iso-kino-liini-5,10-dionista (hitaammin liikkuva keltainen täplä '.* silikageeli-TLC-levyllä, eluentti metyleenikloridi/etyy- • · 25 liasetaatti 70/30) ja 9-kloori-6-hydroksibentso[g] iso-kinoliini-5,10-dionista (nopeammin liikkuva keltainen ·:*: täplä edellä olevassa kromatograf ia järjestelmässä) , jota | käytetään enempää puhdistamatta seuraavassa vaiheessa.

30 9-fluori-6-hydroksibentso[g]isokinoliini-5,10-dionilla on . ; seuraava ^-NMR-spektri (CDC13) : 7,38 (dd, 1H) ; 7,53 (dd, 1H) ; 8,09 (dd, 1H) ; 9,15 (d, 1H) ; 9,57 (d, 1H) ; 12,56 (s, ·;’ 1H) .

35 9-kloori-6-hydroksibentso[g]isokinoliini-5,10-dionilla ' . seuraava ^-NMR-spektri (CDC13) : 7,91 (d, 1H) ; 7,75 (d, 1H) / 8,07 (dd, 1H) ; 9,13 (d, 1H) ; 9,58 (d, 1H) ; 12,95 (s, 29 109538 1H) .

b) 9-fluori-6-hydroksibentso[g]isokinoliini-5,10-dioni ja 9-kloori-6-hydroksibentso[g]isokinoliini-5,10-dio-5 ni (9/1-seos: usean gramman valmistus):

Alumiinikloridi (19,05 g) lisätään yhdessä erässä sekoitettuun refluksoituvaan liuokseen, jossa on 6-metoksi-9-fluoribentso[g]isokinoliini-5,10-dionia (7,20 g) metylee-10 nikloridissa (432 ml). Kun on refluksoitu 4 tunnin ajan, reaktioseos jäähdytetään ja kaadetaan veteen (1300 ml). Lisätään metyleenikloridia (200 ml), ja kun on sekoitettu 10 min ajan, orgaaninen faasi erotetaan. Vesiliuos kyllästetään NaCl:llä ja uutetaan edelleen metyleeniklori-15 dilla (3 x 400 ml). Yhdistetyt orgaaniset liuokset pestään suolaliuoksella (1000 ml), kuivataan, ja liuotin poistetaan kiertohaihduttimella. Saatu ruskea kiinteä aine (6,5 g) uudelleenkiteytetään etyyliasetaatti/n-heksaanista 1/1 (65 ml), jolloin saadaan vastaavasti 9-20 fluori-6-hydroksibentso[g]isokinoliini-5,10-dionin ja 9-kloori-6-hydroksibentso[g]isokinoliini-5,10-dionin 9/1-seosta (’H-NMR-arviointi) (6,00 g).

I ( sp.: osittainen sulaminen 179 - 181 °C:ssa; täydellinen sulaminen 193 - 195 °C:ssa.

25

Valmistusesimerkki 10 *: a) 9-fluori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)bentso[g]isoki- : noliini-5,10-dioni ja 9-kloori-6-(p-tolueenisulfonyy- . lioksi) bentso[g] isokinoliini-5,10-dioni (1/1-seos; 30 pienimittakaavainen valmistus) · I » * !..* Valmistusesimerkin 9a, 9-fluori-6-hydroksibentso[g]isoki- '1' noliini-5,10-dionin ja 9-kloori-6-hydroksibentso[g]isoki- noliini-5,10-dionin l:l-seosta (0,060 g) liuotetaan kui-35 vaan pyridiiniin (2 ml) , ja lisätään p-tolueenisulfonyy-likloridia (0,095 g). Kun on sekoitettu huoneenlämpötilassa yhden tunnin ajan, lisätään trietyyliamiinia (0,25 30 109538 ml), ja sekoitusta jatketaan vielä tunnin ajan. Reaktio-seos konsentroidaan lähes kuiviin ja jaetaan 1 N HC1 (4 ml)-20 % ammoniumsulfaatin (6 ml) ja etyyliasetaatin (10 ml) välillä. Vesifaasi erotetaan, uutetaan etyyliasetaa-5 tiliä (3x5 ml) ja heitetään pois. Yhdistetyt orgaaniset liuokset kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroidaan kuiviin, jolloin saadaan noin 1:1 -seosta (0,095 g) 9-fluori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)bentso[g]-isokinoliini-5,10-dionista ja 9-kloori-6-(p-tolueenisul-10 fonyylioksi)bentso[g]isokinoliini-5,10-dionista, jota käytetään seuraavassa vaiheessa enempää puhdistamatta.

Puhtaat yksittäiset yhdisteet voidaan saada tämän seoksen silikageelipylväskromatografiällä (eluentti: metyleeni-15 kloridi/n-heksaani/etyyliasetaatti 50/45/5:stä 50/40/10:een tilavuus/tilavuus/tilavuus), ja niillä on seuraavat analyyttiset tiedot: 9-fluori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)bentso[g]isokinoliini-5 , 10-dioni : sp. 173 - 174 °C.

20 1H-NMR (CDC13) : 2,45 (s, 3H) , 7,35 (d, 2H) ; 7,50 - 7,57 I (m, 2H) ; 7,82 - 7,94 (m, 3H); 9,08 (d, 1H); 9,48 (s, 1H).

9-kloori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)bentso[g]isokinoliini-5 ,10-dioni: */ sp. : 180 - 181 °C.

25 XH-NMR (CDCI3) : 2,45 (s, 3H) ; 7,35 (d, 2H) ; 7,47 (d, 1H) ; 7,78 - 7,91 (m, 4H), 9,07 (d, 1H); 9,48 (s, 1H).

I * » * ( > · t : b) 9-f luori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi) bentsofg] isoki- • * noliini-5,10-dioni ja 9-kloori-6-(p-tolueenisulfonyy- e * · 30 lioksi)bentso[g]isokinoliini-5,10-dioni (9/1 -seos; usean gramman valmistus):

Trietyyliamiinia (8,20 ml) lisätään sekoitettuun suspen-sioon, jossa on valmistusesimerkin 9b mukaista 9-fluori-.··*. 35 6-hydroksibentso[g] isokinoliini-5,10-dionin ja vastaavas- • , ti 9-kloori-6-hydroksibentso[g]isokinoliini-5,10-dionin 9/1-seosta (5,53 g) ja p-tolueenisulfonyylikloridia (8,47 31 109538 ml) metyleenikloridissa (166 ml). Saatu punertavanviolet-ti liuos jätetään 1 tunniksi huoneenlämpötilaan typpi-ilmakehässä, ja sitten se kaadetaan veteen (500 ml). Orgaaninen faasi erotetaan, ja vesiliuosta uutetaan edel-5 leen metyleenikloridilla (100 ml). Yhdistetyt orgaaniset liuokset kuivataan (Na2S04) ja konsentroidaan kuiviin. Saatu kiinteä aine suspendoidaan n-heksaaniin (100 ml) 1 tunnin ajaksi ja suodatetaan, jolloin saadaan 9-fluori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)bentso[g]isokinoliini-5,10-dio-10 nin ja vastaavasti 9-kloori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)-bentso[g]isokinoliini-5,10-dionin 9:l-seosta ^H-NMR-arviointi) sp.: 156 - 158 °C.

Valnri stusesimerkki 11 15 3-(5-kloori-2-fluoribentsoyyli)isonikotiinihappo ja 4 —(5— kloori-2-fluoribentsoyyli)nikotiinihappo

Sec-butyylilitiumia (1,3 M sykloheksaanissa; 6,0 ml) lisätään tipoittain ruiskun kautta sekoitettuun liuokseen, 20 jossa on l-kloori-4-fluoribentseeniä (0,97 g) THFrssä (70 ml) -75 °C:ssa, jota pidetään typpi-ilmakehässä. Kun on sekoitettu vielä 30 min ajan, keltainen seos siirretään tipoittain vaipallisen kanyylin kautta sekoitettuun seokseen, jossa on pyridiini-3,4-dikarboksyylihappoanhydridiä ,'·· 25 (1,00 g) THFrssä (100 ml) -78 °C:ssa typpivaipan alla.

, Vaaleankeltainen liuos saa lämmetä -20 °C:seen 4 tunnin :··! ajan. THF poistetaan alennetussa paineessa. Saatu keltai- : ;·; nen kiinteä aine liuotetaan veteen (10 ml), jäähdytetään 0 °C:seen, ja säädetään happamaksi laimealla HClrllä jää- t · * 30 hauteessa, ja tulokseksi saatu sakka kerätään suodatta-. . maila. Kuumennettaessa valkoista kiinteää ainetta aseto- nilla (30 ml) jäljelle jää liukenematonta materiaalia t » ;** (0,095 g), joka on ^-NMR-analyysin mukaan 94/4 -seosta 3- (5-kloori-2-fluoribentsoyyli) isonikotiinihaposta ja vas-35 taavasti 4-(5-kloori-2-fluoribentsoyyli)nikotiinihaposta. sp.: 289 - 291 °C.

Iitit » · 109538 32

Sentrifugoinnin jälkeen supernatantti poistetaan ja haihdutetaan kiertohaihduttimella, jolloin saadaan kiteitä, jotka ovat 94/6 -seosta ^H-NMR-analyysin mukaan) 4-(5-kloori-2-fluoribentsoyyli)nikotiinihaposta ja vastaavasti 5 3-(5-kloori-2-fluoribentsoyyli)isonikotiinihaposta (0,947 g) · sp.: 236 - 237 °C.

Tämän seoksen (0,025 g) sublimointi 180 - 205 °C:ssa/74 10 Pa (0,5 mmHg) tuottaa valkoista kiinteää ainetta, jossa on 98/2 -suhteessa 4-(5-kloori-2-fluoribentsoyyli)niko-tiinihappoa ja vastaavasti 3-(5-kloori-2-fluoribentsoyyli) isonikotiinihappoa (20 mg).

15 4-(5-kloori-2-fluoribentsoyyli)nikotiinihappo: 1H-NMR

(CDCI3/CD3OD 9/1): 6,96 (m, 1H) ; 7,21 (d, 1H) ; 7,45 (m, 1H); 7,86 (m, 1H); 8,76 (d, 1H); 9,18 (s, 1H).

3-(5-kloori-2-fluoribentsoyyli)isonikotiinihappo: 1H-NMR 20 (DMSO-d6) : 7,37 (m, 1H); 7,75 (m, 2H); 7,83 (d, 1H); 8,77 (s, 1H); 8,90 (d, 1H).

Valmistusesimerkki 12 V 4-(5-kloori-2-fluoribentsyyli)nikotiinihappo ·: 25 , "1 Sinkki-kupari-paria (0,75 g) lisätään sekoitettuun seok- seen, jossa on valmistusesimerkin 11 mukaista 4-(5-kloo- : .·. ri-2-fluoribentsoyyli)nikotiinihappoa ja 3-(5-kloori-2- *;·, f luoribentsoyyli) isonikotiinihappoa (94/6 moolipohjalta; • » · 30 0,60 g) 75-%:isessa muurahaishapossa. Eksotermista ja kuohuvaa reaktioseosta sekoitetaan 15 min ajan ennen kuu-mentamista 80 °C:seen 2 tunniksi. Kun on jäähdytetty 40 * · °C:seen, seos suodatetaan sintteröidyn lasisuppilon läpi. Kiinteä aine pestään 75-%:isella muurahaishapolla (1x5 35 ml) ja etyyliasetaatilla (2x5 ml). Seos konsentroidaan

• I I

• kiertohaihduttimella noin 2 ml:aan. Saatu oranssinvärinen öljy liuotetaan 0,5 N HCl:ään (3 ml) ja uutetaan etyy- » « 33 109538 liasetaatilla (3 x 10 ml), sitten kyllästetään NaClillä ja uutetaan etyyliasetaatti/1,2-dimetoksietaanilla (2x5 ml). Yhdistetyt uutteet kuivataan Na2SO„:llä, ja liuottimet poistetaan kiertohaihduttimella, jolloin saadaan kel-5 täistä vaahtoa. Vaahto (0,541 g) uudelleenkiteytetään kuumasta asetonitriilistä (1 ml), jolloin saadaan 4-(5-kloori-2-fluoribentsyyli)nikotiinihappoa (0,142 g), sp.: 174 - 176 °C.

^-NMR (CDCI3/CD3OD 9/1): 4,43 (s, 2H) ; 6,79 (m, 1H) ; 6,86 10 (m, 1H); 6,95 (m, 1H); 7,11 (d, 1H); 8,55 (d, 1H); 9,12 (s, 1H).

Valmi stusesimerkk i_12 9-kloori-6-fluoribentso[g]isokinoliini-5,10-dioni 15

Savuavaa rikkihappoa (30 % S03; 0,31 ml) lisätään valmis-tusesimerkin 12 4-(5-kloori-2-fluoribentsyyli)nikotiini-happoon. Tumma seos kuumennetaan nopeasti 130 °C:seen 10 minuutiksi pullossa, johon on sovitettu puuvillatäyttei-20 nen kuivausputki. Huoneenlämpötilaan jäähdyttämisen jälkeen reaktioseos sammutetaan jäällä (3 g), ja uutetaan metyleenikloridilla (4 x 7 ml). Yhdistetyt uutteet kuivataan Na2S04:llä, ja liuos poistetaan kiertohaihduttimella, * » ’ ·' jolloin saadaan 9-kloori-6-fluori-bentso[g]isokinoliini- * * .’·! 25 5,10-dionia keltaisena kiinteänä aineena (0,045 g; saanto ·*"*· 82 %) .

I sp. : 204 - 206 °C.

• ’H-NMR (CDCl3) : 7,45 (m, 1H) ; 7,83 (m, 1H) ; 7,98 (d, 1H) ; « < t t 9,08 (d, 1H) ; 9,49 (s, 1H) .

30 . . Es i Tnerkk i 1 » * 1 5-(p-tolueenisulfonyylioksi)-2-metyyli-isokino[8,7,6-cd]- • · indatsoli-6 (2H)-oni

I 1 I

I 4 · : 35 Valmistusesimerkin 10a 9-fluori-6-(p-tolueenisulfonyy- lioksi)bentso[g]isokinoliini-5,10-dionin ja 9-kloori-6- * » ,,, (p-tolueenisulfonyylioksi)bentso[g]isokinoliini-5,10-dio- » · a «

I I I

34 109538 nin 1/1 -seosta (0,041 g) liuotetaan kuivaan pyridiiniin (2 ml), ja lisätään juuri valmistettua N-metyylihydrat-siinin 1 M liuosta pyridiinissä (0,183 ml). Kun on sekoitettu 3 tuntia huoneenlämpötilassa, reaktioseos konsent-5 roidaan kuiviin ja lisätään vettä (5 ml), NaH2P04:llä kyllästettyä liuosta (5 ml), ja uutetaan useita kertoja me-tyleenikloridilla (50 ml). Yhdistetyt orgaaniset liuokset kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla, ja liuotin poistetaan alennetussa paineessa. Saatu jäännös puhdiste-10 taan silikageelipylväskromatografiällä (eluentti: mety-leenikloridi/etyyliasetaatti 90/10 tilavuus/tilavuus (50 ml), sitten 75/25 (50 ml), sitten 60/40 (50 ml) ja lopulta 40/60 (50 ml), jolloin saadaan 2-metyyli-5-(p-toluee-nisulfonyylioksi)isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-onia.

15 1H-NMR (CDC13) : 2,42 (s, 3H) ; 4,25 (s, 3H); 7,33 (d, 2H); 7,53 (d, 1H); 7,63 (d, 1H); 7,95 (d, 2H); 8,07 (d, 1H) 8,80 (d, 1H); 9,50 (s, 1H).

Esimerkki 2 20 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli)]-5-(p-tolueenisulfonyyliok- si)isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni

Liuosta, jossa on 2-(dimetyyliaminoetyyli)hydratsiinia (J. Med. Chem. 7, 493, 1964) (1,86 g) vedettömässä t · 25 THFrssä (6,0 ml), lisätään typpi-ilmakehässä 30 min aika-na sekoitettuun liuokseen, jossa on valmistusesimerkin ' 10b 9-f luori-6- (p-tolueenisulfonyylioksi) bentso[g] iso- • kinoliini-5,10-dionin ja 9-kloori-6-(p-tolueenisulfonyy- I . lioksi) bentso[g] isokinoliini-5,10-dionin 9:l-seosta (2,4 30 g) THF:ssä (24 ml), joka sisältää N,N-di-isopropyylietyy-. . liamiinia (1,10 ml). Alkaa hieman eksoterminen reaktio, ja reaktiolämpötila kohoaa 20 °C:sta 25 °C:seen. Yhden ·;·’ tunnin kuluttua huoneenlämpötilassa reaktioseos kaadetaan veteen (240 ml) , ja saatua suspensiota sekoitetaan 30 min 35 ajan. Kiinteä aine erotetaan imupullolla suodattamalla, ’ . pestään vedellä ja kuivataan 40 °C:ssa, jolloin saadaan 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli) ]-5-(p-tolueenisulfonyyliok- 35 109538 si)isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-onia (1,44 g) . sp.: 139 - 141 °C.

1H-NMR (CDC13) : 2,35 (s, 6H) ; 2,45 (s, 3H) ; 2,95 (t, 2H) ; I 4,65 (t, 2H); 7,35 (d, 2H); 7,52 (d, 1H); 7,80 (d, 1H); 5 7,95 (d, 2H); 8,10 (d, 1H); 8,80 (d, 1H); 9,55 (s, 1H).

Esimerkki_3.

2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli]-5-(p-tolu-eenisulfonyylioksi)isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni 10 (2-N-tert-butoksikarbonyyliaminoetyyli)hydratsiinia valmistetaan N-t-butoksikarbonyyli-2-kloorietyyliamiinin reaktiolla hydratsiinin kanssa soveltamalla menettelytapaa, joka on kuvattu julkaisussa J. Med. Chem. 7, 493, 15 (1964). Liuos, jossa on (2-N-tert-butoksikarbonyyliamino- etyyli)hydratsiinia (9,2 g) vedettömässä THFrssä (10 ml) typpi-ilmakehässä, lisätään typpiatmosfäärissä 30 min aikana valmistusesimerkin 10b 9-fluori-6-(p-tolueenisul-fonyylioksi)bentso[g]isokinoliini-5,10-dionin ja 9-kloo-20 ri-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)bentso[g]isokinoliini- 5,10-dionin 9:1 -seokseen (3,0 g) THFrssä (25 ml), joka sisältää N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,38 ml). Alkaa hieman eksoterminen reaktio, ja reaktiolämpötila kohoaa t · I 21 °C:sta 24 °C:seen. Kun on sekoitettu 1 tunti huoneen- : '·· 25 lämpötilassa, saatu sakka otetaan talteen imupullolla suodattamalla, pestään THF/n-heksaanilla 1/1 (15 ml) ja ·;··· kuivataan 40 °C:ssa tyhjössä, jolloin saadaan 2-[2-(N- : .·. tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli]-5-(p-tolueenisulfo- nyylioksi) isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H)-onia (1,33 g). 30 sp.: 206 - 208 °C.

. . ^-NMR (CDCI3) : 1,4 (s, 9H) ; 2,45 (s, 3H) ; 3,75 (q, 2H) ; 4,70 (t, 2H); 4,92 (br, 1H); 7,35 (d, 2H); 7,50 (d, 1H); ·;·: 7,75 (d, 1H) ; 7,95 (d, 2H) ; 8,09 (d, 1H) ; 8,78 (d, 1H) ; 9,50 (s, 1H) .

• · .···. 35 36 109538

Esimerkki 4 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-(p-tolueenisul-fonyylioksi)isokino[8,7,6-c]indatsoli-6(2H)-oni 5 Liuos, jossa on 2-[(2-hydroksietyyliamino)etyyliJhydrat-siinia (J. Het. Chem., 26, 85, (1989); 0,179 g) absoluut tisessa etanolissa (0,5 ml), lisätään tipoittain sekoitettuun liuokseen, jossa on Valmistusesimerkin 10b 9-fluori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)bentso[g]isokinoliini-10 5,10-dionin ja 9-kloori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)bent-so[g]isokinoliini-5,10-dionin 9:1 -seosta (0,200 g) THF:ssä (2,0 ml), joka sisältää trietyyliamiinia (0,073 ml). Kun on sekoitettu 2 tuntia huoneenlämpötilassa, lisätään 2-[(2-hydroksietyyliamino)etyyli]hydratsiinin li-15 sämäärä (0,179 g) absoluuttisessa etanolissa (0,5 ml), ja edelleen kahden tunnin kuluttua reaktioseos konsentroidaan tilavuuteen noin 1 ml. Lisätään vettä (20 ml), ja seos saa sekoittua huoneenlämpötilassa yön yli. Sakka kerätään suodattamalla imupullolla, kuivataan tyhjössä 40 20 °C:ssa, ja lietetään lopuksi kiehuvaan etyyliasetaattiin, jolloin saadaan 2 —[2 —[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-(p-tolueenisulfonyylioksi)isokino[8,7,6-c]indatsoli-6(2H)-onia (0,060 g). sp.: 131 - 133 °C.

25 ^-NMR (DMS0-d6/D20) : 2,45 (s, 3H) ; 2,62 (t, 2H) ; 3,13 (t, 2H) ; 3,40 (t, 2H) ; 4,65 (t, 2H) ; 7,25 (d, 1H) ; 7,40 (d, 2H) ; 7,75 (d, 2H) ; 7,95 (d, 1H); 8,15 (d, 1H) ; 8,80 (d, ; .·. 1H) ; 9,40 (s, 1H) .

• · · * 30 Esimerkki 5 , . 2-(aminoalkyyli)-5-(p-tolueenisulfonyylioksi)isokino- • · · [8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H)-onien valmistus

Seuraavat yhdisteet saadaan käyttämällä esimerkkien 1-4 35 menettelytapaa valmistusesimerkin 10 9-fluori-6-(p-tolu-·, eenisulfonyylioksi)bentso[g]isokinoliini-5,10-dionin ja 9-kloori-6-(p-tolueenisulfonyylioksi)bentso[g]isokinolii- 37 109538 ni-5,10-dionin seosten reaktiolla substituoidun hydrat-siinin kanssa, joita ovat 2-(dietyyliaminoetyyli)hydrat-siini [J. Med. Chem., 7, 493, (1964)], 3-dimetyyliaminop- ropyylihydratsiini [J. Het. Chem., 23, 1491, (1986)], 2- 5 aminoetyylihydratsiini [J. Het. Chem., 23, 1491, (1986)], 2-(metyyliaminoetyyli)hydratsiini, 2-hydroksietyylihyd-ratsiini ja 3-aminopropyylihydratsiini [J. Het. Chem., 23, 1491, (1986)]; 2-[2-(dietyyliamino)etyyli]-5-(p-tolueenisulfonyyliok-10 si)isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 2-[3-(dimetyyliamino)propyyli]-5-(p-tolueenisulfonyyliok-si)isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 2-[2-(amino)etyyli]-5-(p-tolueenisulfonyylioksi)isokino-[ 8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 15 2-[2-(metyyliamino)etyyli]-5-(p-tolueenisulfonyylioksi)- isokino[8,7,6-cd]-indatsoli-6(2H)-oni; 2-[3-(amino)propyyli]-5-(p-tolueenisulfonyylioksi)isoki-no[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni.

20 Esimerkki 6 5-kloori-2-metyyli-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni

Liuosta, jossa on metyylihydratsiinia (0,76 M; 0,021 g) '.· pyridiinisssä (0,6 ml), lisätään tipoittain kahden minuu- '.· 25 tin aikana sekoitettuun liuokseen, jossa on valmistusesi- , merkin 13 9-kloori-6-fluoribentso[g)isokinoliini-5,10- ;··· dionia pyridiinissä (0,5 ml), jota jäähdytetään jäähau- : .·. teella. Tummassa liuoksessa ilmenee keltaista sakkaa 6 • · · # min kuluttua. 1,3 tunnin kuluttua reaktioseoksen tilavuus 30 pienennetään puoleen pienellä typpivirralla ja sammute-. , taan jäällä (5 g). Vaaleankeltainen sakka kerätään imu- pullolla suodattamalla ja pestään jäävedellä (2x1 ml) ···' ja kuivataan tyhjössä. Keltainen kiinteä aine puhdiste- taan silikageelipylväskromatografiällä (eluentti: kloro-35 formi/metanoli 96/4 tilavuus/tilavuus), jolloin saadaan . 5-kloori-2-metyyli-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-onia (0,033 g; saanto 71 %) keltaisena kiinteänä aineena.

38 109538 sp.: 244 - 245 °C.

’H-NMR (CDC13) : 4,25 (s, 3H) ; 7,59 (dd, 2H) ; 7,92 (d, 1H) ; 8,84 (d, 1H); 9,55 (s, 1H) .

5 Esimerkki 7 2- (aminoalkyyli)-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-onien valmistus

Seuraavat yhdisteet saadaan käyttämällä esimerkin 6 melo nettelytapaa valmistusesimerkin 13 9-kloori-6-fluoribent-so[g]isokinoliini-5,10-dionin reaktiossa substituoidun hydratsiinin kanssa, joita ovat (2-N-tert-butoksikarbo-nyyliaminoetyyli)hydratsiini, 2-(dimetyyliaminoetyyli)-hydratsiini [J. Med. Chem., 7, 493, (1964)], 2-(dietyy- 15 liaminoetyyli)hydratsiini [J. Med. Chem., 7, 493, (1964)], 2-[(2-hydroksietyyliamino)etyyli]hydratsiini [J. Het. Chem., 26, 85, (1989)], 3-dimetyyliaminopropyylihyd- ratsiini [J. Het. Chem., 23, 1491, (1986)], 2-amino-etyy- lihydratsiini [J. Het. Chem., 1491, (1986)], 2-(metyyli- 20 aminoetyyli)hydratsiini, 2-hydroksietyylihydratsiini ja 3- aminopropyylihydratsiini [J. Het. Chem., 23, 1491, (1986)]; 2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli)]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd] indatsoli-6 (2 H)-oni; 25 sp.: 226 - 228 °C.

^-NMR (CDCI3 + CD3OD) : 1,30 (s, 9H) ; 3,58 (t, 2H) ; 4,63 ·:··: (t, 2H) ; 7,54 (d, 1H) ; 7,70 (d, 1H) ; 7,90 (dd, 1H) ; 8,70 : (d, 1H) ; 9,40 (s, 1H) .

• * · · .··.·. 2-[2- (dimetyyliamino) etyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]- 30 indatsoli-6(2H)-oni; . . sp.: 160 - 161 °C.

^-NMR (CDCI3) : 2,32 (s, 6H) ; 2,95 (t, 2H) ; 4,65 (t, 2H) ; ·”’ 7,60 (d, 1H); 7,69 (d, 1H); 8,00 (dd, 1H); 8,88 (d, 1H); 9,60 (s, 1H) ; 35 2-[2-(dietyyliamino)etyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]in- ‘ . datsoli-6(2H)-oni; 2-[2-(dietyyliamino)etyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]in- 39 1 0 9 5 3 8 datsoli-6(2H)-oni 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-kloori-isokino-[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; sp.: 148 - 152,5 °C.

5 ^-NMR (CDC13 + CD3OD) : 2,75 (t, 2H) ; 3,43 (t, 2H) ; 3,60 (t, 2H); 4,63 (t, 2H) 7,55 (d, 1H); 7,75 (d, 1H); 7,98 (dd, 1H); 8,73 (d, 1H); 9,40 (s, 1H); 2-[3-(dimetyyliamino)propyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 10 2-[2-(amino)etyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]indatsoli- 6(2H)-oni; 2-[2-(metyyliamino)etyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6 (2H) -oni; 2-[2-(hydroksi)etyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]indatso-15 li-6(2H)-oni; 2-[3-(amino)propyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6 (2H)-oni.

Esimerkki 8 20 5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]-2-metyyli-isokino- [8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni Ν,Ν-dimetyylietyleenidiamiinin 1 M liuosta pyridiinissä (0,10 ml) lisätään sekoitettuun suspensioon, jossa on 2-’·· 25 metyyli-5-(p-tolueenisulf onyylioksi) isokino[8,7,6-cd] in- datsoli-6 (2H)-onia (0,02 g) kuivassa pyridiinissä (2 ml). ,·*: Kun on sekoitettu huoneenlämpötilassa yhden tunnin ajan, : reaktioseosta kuumennetaan 13 tuntia 70 °C:ssa samalla 1 t · kun lisätään N,N-dimetyylietyleenidiamiiniliuoksen lisä-30 määriä (0,1; 0,05; 0,05 ml) 2, 4 ja vastaavasti 11 tunnin . . kuluttua. Pyridiini ja ylimääräinen N,N-dimetyylietylee- nidiamiini poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, ·;*’ ja saatu jäännös jaetaan CH2Cl2:n (50 ml) ja suolaliuoksen (10 ml) välillä, johon lisätään NaHC03;lla kyllästettyä 35 liuosta (1 ml). Orgaaninen liuos kuivataan vedettömällä Na2S04:llä, ja liuotin poistetaan tislaamalla. Saatu oranssinvärinen jäännös puhdistetaan silikageelipylväs- 40 109538 kromatografiällä (eluentti: CHCl3/MeOH 95/5 (30 ml) , sen jälkeen CHCl3/MeOH/NH4OH 90/15/0,5 (50 ml), jolloin saadaan 2-metyyli-5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]iso-kino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-onia (0,011 g) punertavan-5 oranssina kiinteänä aineena, sp.: 208 - 215 °C (hajoaa).

^-NMR (CDC13) : 2,40 (s, 3H) ; 2,75 (t, 2H) ; 3,57 (q, 2H) ; 4,25 (s, 3H); 6,97 (d, 1H); 7,63 (d, 1H); 8,30 (dd, 1H) 8,79 (d, 1H); 9,30 (br.t, 1H); 9,62 (d, 1H).

10

Esimerkki 9 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli] amino] isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni 15 Liuosta, jossa on esimerkin 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]- 5-(p-tolueenisulfonyylioksi)isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6 (2H)-onia (0,463 g) ja 2-(dimetyyliamino)etyyliamiinia (0,80 ml) kuivassa pyridiinissä (4,63 ml), kuumennetaan 1 tunti 30 min 80 °C:ssa typpivaipan alla. Sitten liuos 20 konsentroidaan kuiviin, ja saatu tumma jäännös jaetaan suolaliuoksen (30 ml) ja etyyliasetaatin (4 x 25 ml) välillä. Yhdistetyt orgaaniset liuokset kuivataan Na2S04:llä ja konsentroidaan noin 3 ml:ksi. Kun on lisätty n-heksaa-.· nia (12 ml) ja sekoitettu 1 tunnin ajan, sakka kerätään '·( 25 suodattamalla imupullolla ja kuivataan 40 °C:ssa tyhjös- sä, jolloin saadaan 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli) ]-5-[ [2-··· (dimetyyliamino) etyyli)amino] isokino[8,7,6-cd] indatsoli- : 6(2H)-onia (0,23 g).

, sp. : 150 - 152 °C.

30 ^-NMR (CDCI3) : 2,32 (s, 6 H); 2,40 (s, 6H) ; 2,70 (t, 2H) ; . . 2,95 (t, 2H); 3,60 (q, 2H); 4,65 (t, 2H); 6,98 (d, 1H); 7,70 (d, 1H) ; 8,30 (d, 1H) ; 8,80 (d, 1H) ; 9,30 (br, 1H) ; *;·’ 9,65 (S, 1H) .

41 109538

Esi merkki_IQ

2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli]-5-[[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni 5

Suspensiota, jossa on esimerkin 3 2-[2-(N-tert-butoksi-karbonyyli-amino)etyyli]-5-(p-tolueenisulfonyylioksi)iso-kino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-onia (0,535 g) ja N-(tert-butoksikarbonyyli)etyleenidiamiinia (valmistettu 10 julkaisun Synt. Comm., 20, 2559, (1990) mukaan; 1,12 g) kuivassa pyridiinissä (5,35 ml), kuumennetaan 80 °C:ssa. Saatua tummaa liuosta pidetään tässä lämpötilassa 5 tunnin ajan, sitten se konsentroidaan kuiviin ja jaetaan suolaliuoksen (30 ml) ja etyyliasetaatin (2 x 25 ml) vä-15 Iillä. Oranssinpunainen kiinteä liukenematon aines kaksi-faasisessa seoksessa erotetaan suodattamalla imupullolla ja kuivataan 40 °C:ssa tyhjössä (0,43 g).

Tämä materiaali (0,60 g) puhdistetaan pylväskromatogra-20 fialla (Si02; eluentti metyleenikloridi/metanoli 90/10:stä 70/30:een tilavuus/tilavuus). Tuotteen sisältävät jakeet yhdistetään ja konsentroidaan noin 20 ml:ksi, ja 2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli]-5-[[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino) etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatso-25 li-6(2H)-oni erottuu punaoransseina kiteinä (0,45 g).

j sp. : 211 - 213 °C.

, ^-NMR (CDCl3/DMSO-d6 9/1): 1,3 (s, 9H) ; 1,4 (s, 9H) ; 3,32 . (q, 2H) ; 3,58 (m, 4H) ; 4,58 (t, 2H) ; 6,20 (br, 1H) ; 6,40 : (br, 1H) ; 7,05 (d, 1H) ; 7,70 (d, 1H) ; 8,15 (d, 1H) ; 8,65 ' *./ 30 (d, 1H) ; 9,20 (br, 1H) ; 9,49 (s, 1H) .

Esimerkki_11 2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli]-5-[[(2-(dime-tyyliamino) etyyli]amino] isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H) -: 35 oni

Suspensiota, jossa on 2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliami-no) etyyli] -5-(p-tolueenisulfonyylioksi) isokino[8,7,6-cd] - » · 42 1 0 9 5 3 8 indatsoli-6 (2H) -onia (0,056 g) ja 2-(dimetyyliamino)etyy-liamiinia (0,080 ml) kuivassa pyridiinissä (0,50 ml), kuumennetaan 80 °C:ssa. Saatua tummaa liuosta pidetään tässä lämpötilassa 1 tunnin ajan, sitten se jätetään huo-5 neenlämpötilaan yöksi. Saatu tumma sakka erotetaan suodattamalla imupullolla ja puhdistetaan pylväskromatogra-fiällä (Si02; eluentti etyyliasetaatti ja sitten mety-leenikloridi/metanoli 9/0,5 tilavuus/tilavuus), jolloin saadaan 2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli]-5-10 [[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indat soli-6 (2H) -onia (0,024 g) punaoranssina kiinteänä aineena.

sp.: 225 - 227 °C (metyleenikloridistä).

1H-NMR (CDC13) : 1,43 (s, 9H); 2,40 (s, 6H); 2,7 (t, 2H); 15 3,55 (q, 2H); 3,78 (m, 2H); 4,65 (t, 2H); 5,23 (br.m, 1H) ; 6,87 (d, 1H); 7,62 (d, 1H); 8,28 (dd, 1H); 8,76 (d, 1H) ; 9,6 (s, 1H) .

Esimerkki_12 20 isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-onit

Seuraavat yhdisteen valmistetaan esimerkkien 8-11 menettelytavoilla esimerkin 2 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-: ,· 5-(p-tolueenisulfonyylioksi)isokino[8,7,6-cd]indatsoli- '·; 25 6(2H)-onin, esimerkin 3 2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyli- amino)etyyli]-5-(p-tolueenisulfonyylioksi)isokino[8,7,6 - ·· cd] indatsoli-6 (2H)-onin tai esimerkin 4 2-[2-[ (2-hydrok- ,·. sietyyli) amino] etyyli ] -5- (p-tolueenisulfonyylioksi) iso- ;·, kino[8,7,6-c] indatsoli-6 (2H)-onin reaktiolla oikein väli- • · 30 tun amiinin kanssa: . . 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-[(2-hydrok- sietyyli) amino]etyyli]amino] isokino[8,7,6-cd] indatsoli-···' 6 (2H) -oni; 1H-NMR (CDC13) : 3,25 (m, 6H) ; 3,61 (t, 4H) ; 3,71 (m, 4H) ; 35 3,98 (q, 2H) ; 4,65 (t, 2H) ; 5,31 (br, 2H) ; 7,08 (d, 1H) , 7,70 (d, 1H) ; 8,30 (d, 1H) ; 8,83 (d, 1H) ; 9,30 (br, 1H) ; 9,69 (s, 1H).

» » > · * 43 1 0 9 5 3 8 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[3-(amino)pro-pyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 1H-NMR (CDC13) : 2,05 (m, 2H) ; 3,18 (m, 4H) ; 3,58 (t, 2H) ; 3,65 (t, 2H); 3,78 (q, 2H); 4,62 (t, 2H); 5,20 (br, 3H), 5 7,10 (d, 1H); 7,69 (d, 1H); 8,30 (d, 1H); 8,85 (d, 1H); 9,15 (br, 1H); 9,30 (t, 1H); 9,71 (s, 1H).

2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(amino)etyyli] amino] isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 1H-NMR (CDCI3) : 3,20 (m, 4H) , 3,58 (t, 2H) ; 3,66 (t, 2H) ; 10 3,86 (q, 2H); 4,61 (t, 2H); 5,15 (br, 3H); 7,12 (d, 1H) ; 7,69 (d, 1H) ,* 8,30 (d, 1H) ; 8,85 (d, 1H) ; 9,15 (br, 1H) ; 9,30 (t, 1H); 9,71 (s, 1H).

2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(metyyliami-no)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 15 :H-NMR (CDCI3) : 2,61 (s, 3H) ; 3,06 (t, 2H) ; 3,20 (t, 2H) ; 3.58 (t, 2H); 3,67 (t, 2H); 3,88 (q, 2H); 4,65 (t, 2H); 5,10 (t, 1H); 7,05 (d, 1H); 7,70 (d, 1H); 8,33 (d, 1H); 8,81 (d, 1H); 8,99 (br, 2H); 9,35 (t, 1H); 9,66 (s, 1H).

20 2-[2-[(2-hydroksietyyliamino]etyyli]-5-[[2-(dimetyyliami- no)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; ^-NMR (CDCI3) : 2,42 (s, 6H) ; 2,75 (t, 2H) ; 3,18 (t, 2H) ; 3.58 (q, 2H) ,’ 3,63 (t, 2H) ; 3,68 (t, 2H) ; 4,61 (t, 2H) ; V 5,15 (t, 1H) ; 6,99 (d, 1H) ; 7,66 (d, 1H) ; 8,31 (d, 1H) ; '·! 25 8,80 (d, 1H) ; 9,11 (br, 1H) ; 9,35 (t, 1H) , 9,65 (s, 1H) .

# » ·; 2-[2-[ (2-hydroksietyyli) amino] etyyli]-5-[ [2-(N-tert-bu— : toksikarbonyyliamino) etyyli]amino] isokino[8,7,6-cd] indat- , soli-6 (2H)-oni; 30 ^-NMR (CDCI3 + CD3OD) : 1,40 (s, 9H) ; 3,31 (m, 4H) ; 3,52 ; (q, 2H) ; 3,63 (t, 2H) ; 3,85 (t, 2H) ; 4,71 (t, 2H) ; 7,03 (d, 1H) ; 7,70 (d, 1H) ; 8,21 (dd, 1H) ; 8,76 (d, 1H) ; 9,61 *:·* (s, iH).

I · I * · 35 2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli)]-5-[[2-[(2- ‘ hydroksietyyli)amino]etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indat- ... soli-6 (2H)-oni » · 44 109538 ^-NMR (CDC13 + CD3OD) : 1,45 (s, 9H) ; 3,18 (m, 4H) ; 3,73 (q, 2H); 3,80 (m, 4H); 4,67 (t, 2H); 7,00 (d, 1H); 7,68 (d, 1H); 8,25 (dd, 1H); 8,75 (d, 1H); 9,60 (s, 1H).

5 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-5-[[2-[(2-hydroksietyyli)- amino]etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; sp.: 156 - 157 °C.

^-NMR (CDCI3) : 2,30 (s, 6H) ; 2,91 (m, 4H) ; 3,08 (t, 2H) ; 3.60 (t, 2H); 3,75 (m, 2H); 4,60 (t, 2H); 6,90 (d, 1H); 10 7,60 (d, 1H); 8,25 (dd, 1H); 8,75 (d, 1H); 9,45 (br, 1H); 9.60 (s, 1H).

2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-5-[[2-(amino)etyyli]amino]-isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 15 ^-NMR (CDCI3 + CD3OD) : 2,30 (s, 6H) ; 2,95 (t, 2H) ; 3,13 (t, 2H); 3,65 (t, 2H); 4,58 (t, 2H); 7,04 (d, 1H); 7,70 (d, 1H) ; 8,18 (dd, 1H) ; 8,66 (d, 1H) ; 9,51 (s, 1H) .

Esimerkki 13 20 5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]-2-metyyli-isokino- [5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni

Esimerkin 6 5-kloori-2-metyyli-isokino[5,6,7-cd]indatso-li-6(2H)-onia (0,013 g) lisätään 2-(dimetyyliamino)etyy-’·: 25 liamiiniin (0,34 ml). Keltainen seos kuumennetaan nopeas ti refluksoitumaan 1 tunniksi. Ylimääräinen diamiini "i poistetaan oranssinvärisestä liuoksesta pienellä typpi- ! virralla. Saatu oranssinvärinen seos puhdistetaan silika- . geelipylväskromatografiällä gradienttieluoinnilla (l-% 30 metanoli/kloroformi (25 ml), 2-% metanoli/kloroformi (25 ml), 4-% metanoli/kloroformi (25 ml), 8-% metanoli/kloro-formi (25 ml) , 12-% metanoli/kloroformi (25 ml) , 16-% >;·’ metanoli/kloroformi (25 ml) , 24-% metanoli/kloroformi (50 : ·.: ml) ) , jolloin saadaan 5-[ [2-(dimetyyliamino)etyyli]ami- 35 no]-2-metyyli-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-onia ' . (0,010 g) punertavanoranssinvärisenä kiinteänä aineena, sp.: 212 - 216 °C.

45 109538 1H-NMR (CDCI3) : 2,36 (s, 6H) ; 2,69 (t, 2H) ; 3,54 (q, 2H) ; 4,21 (s, 3H); 6,91 (d, 1H); 7,54 (d, 1H); 8,00 (d, 1H) ; 8,79 (d, 1H); 9,19 (br, 1H); 9,67 (s, 1H).

5 Esimerkki_14.

2-[2-(dimetyyliamino)etyyli)]-5-[[2-(dimetyyliamino)etyy-li]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni N,N-dimetyylietyleenidiamiinia (1,79 ml) lisätään typpi-10 ilmakehässä sekoitettuun liuokseen, jossa on 2-[2-(dimetyyliamino) etyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-onia (0,539 g) pyridiinissä (6,80 ml), ja saatua liuosta kuumennetaan 12 tunnin ajan 80 °C:ssa. Pyridiini ja ylimääräinen N,N-dimetyylietyleenidiamiini poistetaan 15 kiertohaihduttimellä, ja saatu jäännös puhdistetaan sili-kageelipylväskromatografiällä eluoiden ensin metyleenik-loridilla, sitten metyleenikloridi/metanolilla 95/5 ja lopuksi metyleenikloridi/metanoli/konsentroidulla ammoniakilla 95/5/0,5:stä 95/5/l:een tilavuus/tilavuus/-20 tilavuus. Keltaisen halutun tuotteen sisältävät jakeet yhdistetään, ja liuottimet haihdutetaan kiertohaihdutti-mella. Saatu jäännös (0,529 g) kiteytetään di-isopropyy-lieetteristä, jolloin saadaan 2-[2-(dimetyyliamino)etyy-li) ] -5-[ [2- (dimetyyliamino) etyyli]amino] isokino[5,6,7-25 cd] indatsoli-6 (2H)-onia keltaisena jauheena (0,291 g), sp. : 110 - 111 °C.

·: ^-NMR (CDCI3): 2,31 (s, 6 H); 2,38 (s, 6H) ; 2,71 (t, 2H) ; .·. 2,92 (t, 2H) ; 3,55 (q, 2H) ; 4,65 (t, 2H) ; 7,01 (d, 1H) ; I 7,69 (d, 1H) ; 8,10 (dd, 1H) ; 8,83 (d, 1H) ; 9,30 (br.t. , 30 1H); 9,71 (s, 1H).

? 1 · ' Esimerkki_15 1 » isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-onit I I f ;"‘l 35 Seuraavat yhdisteet valmistetaan esimerkin 13 tai 14 me- * , nettelytapoja käyttämällä esimerkin 7 2-[2-(N-tert-butok- sikarbonyyliamino)etyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]in- 46 109538 datsoli-6(2H)-onia, 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-5-kloo-ri-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-onia tai 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-kloori-isokino[5,6,7-cd]-indatsoli-6(2H)-onia käyttämällä: 5 2-[2-(N-tert-butoks ikarbonyyliamino)etyyli]-5-[[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; sp.: 211 - 213 °C.

10 1H-NMR (CDC13) : 1,40 (s, 9H) ; 1,46 (s, 9H) ; 3,55 (q, 2H) ; 3,65 (q, 2H); 3,77 (q, 2H); 4,69 (t, 2H); 5,55 (br, 2H); 7,00 (d, 1H); 7,60 (d, 1H); 7,93 (dd, 1H)/ 8,70 (d, 1H); 9,10 (br.t., 1H); 9,38 (s, 1H).

2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli]-5-[[2-(ami-15 no)etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (reaktio suoritettiin 50 °C:ssa DMSO:ssa liuottimena) sp.: 221 - 222 °C.

^-NMR (CDCI3) : 1,43 (s, 9H) ; 3,13 (t, 2H) ; 3,58 (q, 2H) ; 3,75 (q, 2H); 3,67 (t, 2H); 5,05 (br, 1H); 7,00 (d, 1H); 20 7,65 (d, 1H); 8,05 (dd, 1H); 8,60 (d, 1H); 9,30 (br., 1H); 9,75 (s, 1H).

2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli)]-5-[[2-[(2- ; · *.· hydroksietyyli) amino] etyyli]amino] isokino[5,6,7-cd] indat- '*· 25 soli-6 (2H)-oni; "\l ^-NMR (CDCI3 + CD3OD) : 1,48 (s, 9H) ; 3,25 (m, 4H) ; 3,74 :·· (q, 2H); 3,80 (m, 4H); 4,68 (t, 2H); 7,01 (d, 1H); 7,72 ' (d, 1H) ; 8,09 (dd, 1H) ; 8,80 (d, 1H) ; 9,75 (s, 1H) .

> ( » * « < · * t · > t » 30 2-[2-(N-tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli)]-5-[[2-(dime- , . tyyliamino)etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)- t * » /,./ oni; TH-NMR (CDCI3) : 1,44 (s, 9H) ; 2,31 (s, 6H) ; 2,75 (t, 2H) ; 3,68 (q, 2H) ; 3,75 (q, 2H) ; 4,68 (t, 2H) ; 5,10 (br.m. ,H) ; 35 7,03 (d, 1H); 7,70 (d, 1H); 8,15 (dd, 1H); 8,85 (d, 1H); ; i · 9,33 (br.t., 1H); 9,71 (s, 1H) .

* » * * * I I * 47 109538 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-5-[[2-[(2-hydroksietyyli)-amino]etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; aH-NMR (CDC13 + CD3OD): 2,40 (s, 6H); 2,95 (t, 2H); 3,23 (m, 4H); 3,82 (m, 4H); 4,70 (t, 2H); 7,05 (d, 1H); 7,70 5 (d, 1H); 8,13 (dd, 1H)/ 8,85 (d, 1H); 9,70 (s, 1H).

2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-5-[[2-(amino)etyyli]amino]-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 1H-NMR (CDCI3) : 2,39 (s, 6H) ; 2,95 (t, 2H) ; 3,15 (t, 2H) ; 10 3,68 (q, 2H); 4,68 (t, 2H); 7,00 (d, 1H); 7,65 (d, 1H) ; 8,12 (dd, 1H); 8,85 (d, 1H); 9,33 (br.t., 1H); 9,72 (s, 1H) .

2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-[(2-hydrok-15 sietyyli)amino] etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; (reaktio suoritetaan 52 °C:ssa DMSOissa liuottimena) sp.: 148 - 151 °C.

^-NMR (D20) : 2,75 (m, 6H) ; 2,95 (m, 2H) ; 3,12 (m, 2H) ; 20 3,70 (m, 4H); 4,05 (m, 2H); 6,10 (d, 1H); 6,65 (d, 1H); 6,90 (d, 1H); 7,83 (s, 1H); 7,95 (d, 1H).

. . 2—[2—[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(amino)etyy- \ '*t li] amino] isokino[5,6,7-cd] indatsoli-6 (2H)-oni; 25 !H-NMR (CDCI3 + CD3OD) : 2,97 (t, 2H) ; 3,30 (m, 4H) ; 3,68 (t, 2H) ; 3,85 (t, 2H) ; 4,66.(t, 2H) ; 7,00 (d, 1H) ; 7,69 (d, 1H) ; 8,10 (dd, 1H) ; 8,83 (d, 1H) ; 9,76 (s, 1H) . 1 2 3 2- [2-[ (2-hydroksietyyli) amino]etyyli]-5-[ [3-(amino)pro- 30 pyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; .·. ; ^-NMR (CDCI3 + CD3OD) : 2,09 (m, 2H) ; 2,57 (t, 2H) ; 3,30 2 • * · .···’, (m, 4H) ; 3,53 (t, 2H) ; 3,82 (t, 2H) ; 4,66 (t, 2H) ; 7,01 (d, 1H); 7,68 (d, 1H); 8,05 (dd, 1H); 8,80 (d, 1H); 9,68 1 · (s, iH).

3 5 2-[2-[ (2-hydroksietyyli) amino]etyyli]-5-[ [2-(metyyliami-_··, no) etyyli]amino] isokino[5,6,7-cd] indatsoli-6 (2H) -oni; 48 109538 ^-NMR (CDC13 + CD3OD) : 2,48 (s, 3H) ; 2,83 (t, 2H) ; 3,28 (m, 4H)/ 3,58 (t, 2H); 3,83 (t, 2H); 4,67 (t, 2H); 7,01 (d, 1H) ; 7,68 (d, 1H) ; 8,03 (dd, 1H) ; 8,80 (d, 1H) ; 9,67 (s, 1H).

5 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(dimetyy-liamino)etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H) -oni; ^-NMR (CDCI3 + CD3OD) : 2,31 (S, 6H) ; 2,72 (t, 2H) ; 3,33 10 (m, 4H); 3,57 (t, 2H); 3,87 (t, 2H); 4,71 (t, 2H); 7,00 (d, 1H) ; 7,71 (d, 1H) ; 8,09 (dd, 1H) ; 8,81 (d, 1H) ; 9,70 (S, 1H).

2 —[2 —[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(N-tert-bu-15 toksikarbonyyliamino)etyyli]amino]isokinof5,6,7-cd]indat- soli-6(2H)-oni; :H-NMR (CDCI3 + CD3OD): 1,41 (s, 9H); 3,29 (m, 4H); 3,56 (t, 2H); 3,79 (t, 2H); 3,83 (t, 2H); 4,68 (t, 2H); 7,05 (d, 1H); 7,68 (d, 1H); 8,08 (dd, 1H); 8,80 (d, 1H); 9,68 20 (s, 1H).

Esimerkki_16.

. t-butoksikarbonyylisuojaryhmän poistaminen 25 Etanolista liuosta, jossa on vedetöntä HClrää (5 N; 0,40 ml), lisätään typpi-ilmakehässä tipoittain sekoitettuun ! "· suspensioon, jossa on esimerkin 10 2-[2-(N-tert-butoksi- > · I ] ] karbonyyliamino)etyyli]-5-[[2-(N-tert-butoksikarbonyyli- J ;amino) etyyli] amino] isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H) -onia 30 (0,104 g) absoluuttisessa etanolissa (2,1 ml). Lähtö- : aineen alkuliukeneminen, jota seuraa tummanpunaisen • · ,···. kiinteän aineen saostuminen, havaitaan etanolisen HCl:n ’·’ lisäyksen aikana. Tämä kiinteä aine liuotetaan uudelleen » · ·. *: absoluuttisella etanolilla, ja liuosta kuumennetaan 2 35 tunnin 30 minuutin ajan 40 °C:seen. Havaitaan purppuran-punaisen saostuman muodostuminen kuumennuksen aikana.

,···, Huoneenlämpötilaan jäähdyttämisen jälkeen lisätään di- 49 109538 etyylieetteriä (10 ml), ja sakka kerätään suodattamalla imupullolla typpivaipan alla, jolloin saadaan 2-[2-(amino) etyyli]-5-[[2-(amino)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6 (2H)-oni-tr ihydrokloridia (0,070 g).

5 sp.: 247 - 250 °C.

1H-NMR (D20): 3,40 (t, 2H); 3,70 (t, 2H); 3,95 (t, 2H) ; 4.87 (t, 2H); 7,05 (d, 1H); 7,78 (d, 1H); 8,04 (dd, 1H); 8,62 (d, 1H); 9,10 (s, 2H).

UV (H20) : lmax (Eu) = 230 nm (650 cm); 240 nm (555 cm); 370 10 nm (244 cm); 591 nm (342 cm).

Esimerkki 17

Seuraavat yhdisteet valmistetaan trihydrokloridisuolana noudattamalla esimerkin 16 menettelytapaa lähtien esi-15 merkkien 11, 12, 14 tai 15 sopivista N-tert-butoksikar-bonyylijohdannaisista: 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(amino)etyyli] amino] isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 20 1H-NMR (D20) : 3,07 (t, 2H) ; 3,39 (m, 4H) ; 3,69 (t, 2H) ; 3.88 (t, 2H); 4,83 (t, 2H); 7,05 (d, 1H); 7,70 (d, 1H); 8,33 (dd, 1H); 8,78 (d, 1H) ; 9,15 (s, 1H) .

\ 2-[2-(amino)etyyli)]-5-[[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyy- • · "· 25 li ] amino] isokino[ 8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H)-oni; ‘ ^-NMR (D20) : 3,28 (t, 2H) ; 3,31 (m, 4H) ; 3,85 (m, 4H) ; 4,90 (t, 2H) ; 7,03 (d, 1H) ; 7,70 (d, 1H) ; 8,35 (dd, 1H) ; I.·*: 8,72 (d, 1H) ; 9,77 (s, 1H) .

30 2-[2-(amino)etyyli)]-5-[[(2-(dimetyyliamino)etyyli]ami- .. : no] isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H) -oni .*··. sp.: 224 °C (hajoaa).

1H-NMR (D-O) : 3,00 (s, 6H) ; 3,60 (t, 2H) ; 3,70 (t, 2H) ; 4,07 (t, 2H) ; 4,93 (t, 2H) ; 7,20 (d, 1H) ; 7,95 (d, 1H) ; 35 8,43 (dd, 1H) ; 8,77 (d, 1H) ; 9,43 (s, 1H) .

UV (HCl 0,1 N): Amax (E1%) = 236 nm (485 cm); 382 nm (205 .*··. cm); 507 nm (232 cm).

50 109538 2-[2-(amino)etyyli]-5-[[2[(amino)etyyli]amino]isokino-[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni sp.: >260 °C.

’H-NMR (D20): 3,42 (t, 2H); 3,75 (t, 2H); 4,00 (t, 2H); 5 5,05 (t, 2H); 7,32 (d, 1H)/ 8,09 (d, 1H)/ 8,62 (d, 1H) ; 8,87 (d, 1H); 9,55 (s, 1H) UV (HC1 0,1 N): Amax, (E1%) = 245 nm (622 cm); 275 nm (181 cm); 351 nm (258 cm); 472 nm (327 cm), 494 nm (353 cm) .

10 2-[2-(amino)etyyli)]-5-[[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyy-li]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 2-[2-(amino)etyyli)]-5-[[2-(dimetyy1iamino)etyyli]amino]-isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 15

Esimerkki 18 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-5-[[2-(amino)etyyli]amino]-isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni dimaleaatti 20 Liuosta, jossa on maleiinihappoa (0,030 g) absoluuttisessa etanolissa (0,4 ml), lisätään tipoittain sekoitettuun liuokseen, jossa on esimerkin 12 2-[2-(dimetyyliamino)-etyyli]-5-[[2-(amino)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indat-·’ soli-6(2H)-onia (0,030 g) absoluuttisessa etanolissa (1,5 *: 25 ml), jota pidetään 50 °C:ssa. Kun lisäys on suoritettu ,.· loppuun, reaktioseosta pidetään 3 min ajan 50 °C:ssa, ja "" annetaan sitten jäähtyä huoneenlämpötilaan. Yhden tunnin kuluttua erottunut purppuranpunainen kiteinen materiaali suodatetaan, pestään etanolilla ja kuivataan tyhjössä 40 30 °C:ssa, jolloin saadaan 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-5-·, : [[2-(amino)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)- I I i oni -dimaleaattia (0,029 g).

·;*’ sp. : 175 - 175,5 °C.

1H-NMR (D20) : 3,00 (s, 6 H); 3,40 (t, 2H) ; 3,80 (t, 2H) ; 35 3,93 (t, 2H) ; 4,90 (t, 2H) ; 6,00 (s, 4H) ; 7,00 (d, 1H) ; 7,70 (d, 1H) ; 7,80 (d, 1H) ; 8,55 (d, 1H) ; 9,00 (s, 1H) .

UV (HC1 0,1 N): Xmax (E1%) = 236 nm (436 cm); 382 nm 51 109538 (169 cm); 507 nm (190 cm).

Esimerkki 19 5 Seuraavat maleaattisuolat valmistetaan esimerkin 18 menettelytavalla käsittelemällä sopivia isokinoindatsoli-6(2H)-oneja maleiinihapolla: 2- [ 2-(dimetyyliamino)etyyli)]-5-[[2-(dimetyyliamino)etyy-10 li]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni dimaleaatti sp.: 189 - 191 °C.

^-NMR (DMS0-d6) : 2,88 (s, 12H) ; 3,37 (t, 2H) ; 3,70 (t, 2H); 3,95 (q, 2H); 5,01 (t, 2H); 6,00 (s, 4H); 7,38 (d, 1H); 8,20 (dd, 1H); 8,85 (d, 1H); 9,20 (br.t., 1H); 9,55 15 (s, 1H) .

UV (H20) : Xma.A (E1%) = 368 nm (154 cm); 469 nm (206 cm); 490 nm (211 cm).

2- [ 2-(dimetyyliamino)etyyli)]-5-[[2-(dimetyyliamino)etyy-20 li]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni dimaleaatti sp.: 142 - 146 °C.

1H-NMR (D20): 3,00 (s, 6H); 3,05 (s, 6H); 3,60 (t, 2H); 3,92 (t, 2H); 4,08 (t, 2H); 5,07 (t, 2H); 6,15 (s, 4H); ' 7,20 (d, 1H); 7,95 (d, 1H); 8,20 (d, 1H); 8,75 (d, 1H); ; 25 9,30 (s, 1H) .

UV (H20) : Amax (E1%) = 292 nm (108 cm); 352 nm (133 cm); 476 nm (215 cm).

: ;*: 2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-5-[[2 — [(2-hydroksietyyli)- 30 amino]etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni : dimaleaatti .··’. sp. : 156 - 157 °C.

1H-NMR (D20) : 3,05 (s, 6H) ; 3,30 (m, 2H) ; 3,54 (t, 2H) ; 3,88 (m, 4H) ; 4,03 (t, 2H) ; 4,96 (t, 2H) ; 6,00 (s, 4H) ; 35 7,00 (d, 1H) ; 7,70 (d, 1H) ; 7,83 (dd, 1H) ; 8,57 (d, 1H) ; 9,05 (s, 1H) .··*. UV (H20) ; Xmax (E1%) = 368 nm (1057 cm); 491 nm (210 cm).

Claims (14)

52 1 0 9 5 3 8

1. Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen kaavan (I) mukaisen 2-aminoalkyyli-5-aminoalkyyliamino-substituoidun 5 isokino[8,7,6-cd ja 5,6,7-cd]indatsoli-6-(2H)-onin O NH-A (i) 10 N —N^b jossa toinen X:stä ja Y:stä on hiiliatomi ja toinen on 15 typpiatomi; A ja B ovat toisistaan riippumatta: C1.4-alkyyli, -(CH2)p-NH2/ -(CH2)p-NR2R3 tai - (CH2) p-NH- (CH2) q-OH, joissa p ja q ovat toisistaan riippumatta kokonaisluku 2 tai 3, R2 ja R3 voivat olla samat tai erilaisia ja ovat vety tai C^-20 alkyyli, syntetisoimiseksi vapaana emäksenä tai sen suoloina farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa, tunnettu siitä, että a) kaavan (III) mukaisia yhdisteitä ! 25 O z I θφφ 30. w (Ula) X = N, Y = C (Illb) X = C, Y = N » i » »Il I 35 jossa kaavassa Z on OTs (joka OTs on p-tolueenisulfon-: yylioksiryhmä) tai Cl, ja W on F tai Cl, sillä ehdolla, *:··; että Z ja W eivät voi samanaikaisesti olla Cl, saatetaan reagoimaan kaavan IV mukaisen alkyylihydratsiinin kanssa: 53 109538 H2N-NH-B' (IV) jossa B':llä on sama merkitys kuin B:lle kaavassa (I) määritelty, tai B' on ryhmä, joka voidaan muuttaa B:ksi 5 poistamalla B':ssä mahdollisesti läsnä olevien primaaristen tai sekundaaristen amiinien suojaryhmät, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste O z io i I IJ N —N^b. 15 (Ha) X = N, Y = C (Hb) X = C, Y = N b) joka sitten käsitellään kaavan (V) mukaisella yhdisteellä:

20 NH2-A' (V) jossa A':11a on sama merkitys kuin A:lle kaavassa (I) • : määritelty, tai A* on ryhmä, joka voidaan muuttaa A:ksi poistamalla A':ssa mahdollisesti läsnä olevien primaaris-··. 25 ten tai sekundaaristen amiinien suojaryhmät, jolloin saa- daan kaavan (I') mukainen yhdiste O NH-A* 30 vi (IM V N —N-B- ,··, ja kun A' ja/tai B' ovat erilaisia kuin A ja/tai B, kaa- 35 van (IM mukaiset yhdisteet muutetaan kaavan I mukaisiksi : ·· yhdisteiksi poistamalla A':ssa ja/tai B':ssa mahdollises- ti läsnä olevien primaaristen ja/tai sekundaaristen amiinien suojaryhmät. 54 1 0 9 5 38

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-[(2-hydrok-sietyyli)amino]etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-5 6(2H)-oni; 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[(3-aminopropyy-li)amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni tai 2 — £ 2 — [(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[(2-aminoetyyli)-amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina emäk-10 sinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 15 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(metyyliami- no)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni tai 2~i2~[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(dimetyyli-amino)etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina emäksinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväk-20 syttävien happojen kanssa.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan « * : 2-[2-[ (2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[ [2-[ (2-hydroksi- ···. 25 etyyli) amino]etyyli]amino] isokino[5,6,7-cd) indatsoli- 6(2H)-oni; . , 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[(3-aminopropyy- li)amino]isokino[5,6,7-cd) indatsoli-6 (2H)-oni; ! '·* 2-[2-[ (2-hydroksietyyli) amino]etyyli]-5-[ (2-aminoetyy- 30 li)amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina * I emäksinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien ‘ : happojen kanssa. 'il,'

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu ·; 35 siitä, että valmistetaan : 2-[2-[ (2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[ [2-(metyyliami- ;·*: no) etyyli] amino] isokino[5,6,7-cd] indatsoli-6 (2H)-oni tai 2-[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]-5-[[2-(dimetyyli- 55 1 0 9 5 3 8 amino)etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina emäksinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 5—[[2 —[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]amino]-2-[2-(dime-tyyliamino)etyyli]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 5-[(3-aminopropyyli)amino]-2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-10 isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 5-[(2-aminoetyyli)amino]-[2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]-isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 5_[[2-(metyyliamino)etyyli]amino]-2-[2-(dimetyyliamino)-etyyli]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni tai 15 5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]-2-[2-(dimetyyliami- no)etyyli]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina emäksinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 5-[[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]amino]-2-[2-(dime-·’: tyyliamino) etyyli] isokino[5,6,7-cd] indatsoli-6(2H)-oni; .: 5-[(3-aminopropyyli)amino]-2-[2-(dimetyyliamino)etyyli]- 25 isokinof5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 5- [ (2-aminoetyyli) amino] -2- [ 2- (dimetyyliamino) etyyli] -, , isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 5-[ [2- (metyyliamino) etyyli]amino] -2 -[2 - (dimetyyliamino) -etyyli]isokinof5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni tai 30 5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]-2-[2-(dimetyyliami- ! :.‘*i no) etyyli] isokino[5,6,7-cd] indatsoli-6 (2H)-oni, vapaina ,,,·* emäksinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien : happojen kanssa.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu : ’·· siitä, että valmistetaan : 2-[2-aminoetyyli]-5-[[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]- amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 56 1 0 9 5 3 8 2-[2-aminoetyyli]-5-[(3-aminopropyyli)amino]isokino-[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni ; 2-[2-aminoetyyli]-5-[(2-aminoetyyli)amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni tai 5 2-[2-aminoetyyli]-5-[[2-(metyyliamino)etyyli]amino]isoki- no[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina emäksinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 2-[2-aminoetyyli]-5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]iso-kino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 2-[3-aminopropyyli)-5-[[2—[(2-hydroksietyyli)amino]etyy-15 li]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 2-[3-aminopropyyli]-5-[(3-aminopropyyli)amino]isokino-[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni tai 2-[3-aminopropyyli]-5-((2-amino)etyyli)amino]isokino-[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina emäksinään tai 20 suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa.

10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu i siitä, että valmistetaan '·*. 25 2-[3-aminopropyyli] -5- [ [2- (metyyliamino) etyyli]amino] iso- kino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H)-oni tai j ; 2-[3-aminopropyyli]-5-[ [2-(dimetyyliamino) etyyli]amino]- i t | isokino[8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H)-oni, vapaina emäksinään $ t · *’ tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen 30 kanssa.

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu : ,\ siitä, että valmistetaan ,··. 5-[ [2-[ (2-hydroksietyyli) amino]etyyli]amino]-2-[3-amino- 3. propyyli]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni tai : “ 5-[[2-[(2-hydroksietyyli)amino]etyyli]amino]-2-[2-amino- etyyli]isokino[5,6,7-cd)indatsoli-6(2H)-oni, vapaina emäksinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien 57 1 0 9 5 3 8 happojen kanssa.

12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 5 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[[2-[(2-hydroksietyyli)- amino]etyyli]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[(3-aminopropyyli)amino]iso-kino [8, 7 ,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[(2-aminoetyyli)amino]isoki-10 no[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[[2-(metyyliamino)etyyli]-amino]]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni, tai 2-[(2-metyyliamino)]etyyli]-5-[[2-(dimetyyliamino)etyy-li]amino]isokino[8,7,6-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina 15 emäksinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa.

13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 20 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[[2-[(2-hydroksietyyli)- amino]etyyli]amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; 2-[(2-metyyliamino)etyyli]-5-[(3-aminopropyyli)amino]iso- * : kino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni; '2 -[ (2-metyyliamino) etyyli] -5-[ (2-aminoetyyli) amino] isoki-’·. 25 no[5,6,7-cd) indatsoli-6 (2H)-oni; 2 - [ (2-metyyliamino) etyyli] - 5- [ [2 - (metyyliamino) etyyli] - ; #*t amino] isokino[5,6,7-cd] indatsoli-6 (2H) -oni tai * · 2-[ (2-metyyliamino) etyyli] -5- [ [2 - (dimetyyliamino) etyyli]-amino]isokino[5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina emäk-30 sinään tai suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien *: happojen kanssa.

: 14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu ,··*, siitä, että valmistetaan * · ’·' 35 2-metyyli-5-[[2-(dimetyyliamino) etyyli] amino) isokino- ·' “ [8,7,6-cd] indatsoli-6 (2H)-oni tai •'· 2-metyyli-5-[[2-(dimetyyliamino)etyyli]amino]isokino- [5,6,7-cd]indatsoli-6(2H)-oni, vapaina emäksinään tai 58 1 0 9 5 3 8 suoloinaan farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa. 5