KR19990044614A

KR19990044614A - 항암제로서의 2-[2-[(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[(2-메틸아미노)에틸]아미노]인다졸로[4,3-ｇｈ]이소퀴놀린-6(2Ｈ)-온

Info

Publication number: KR19990044614A
Application number: KR1019980701865A
Authority: KR
Inventors: 어네스토 멘타; 암브로지오 올리바; 실바노 스피넬리; 폴 크라프쵸
Original assignee: 화이트 레지나 에이치.; 더 유니버시티 오브 버몬트 앤드 스테이트 어그리컬처럴 칼리지; 토그넬라 써지오; 베링거 만하임 이탈리아 에스.피.아
Priority date: 1995-09-13
Filing date: 1996-09-09
Publication date: 1999-06-25
Also published as: WO1997010245A1; AR003997A1; CN1196055A; HUP9901348A3; HUP9901348A2; ITMI951904A1; JPH11512409A; ZA967706B; IT1277576B1; ITMI951904A0; CZ75098A3; AU6988296A; EP0876369A1; NO981093D0; IL123619A0; NO981093L; BR9610601A; US6034092A; CZ286654B6

Abstract

본 발명은 구조식(I)과 같은 2-[2-[(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[[2-메틸아미노)에틸]아미노]인다졸로[4,3-gh]이소퀴놀린-6(2H)-온 및 이들의 약학적으로 허용가능한 산부가염에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 높은 항암 활성을 갖고 있다.

Description

항암제로서의 2-[2-[(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[(2-메틸아미노)에틸]아미노]인다졸로[4,3-ｇｈ]이소퀴놀린-6(2Ｈ)-온

1,4-비스[(아미노알킬)아미노]안트라센-9,10-디온의 일부는 임상실험에서 항암 활성을 보여 준다. 특히 흥미로운 것은 아메탄트론, 4-비스{[2-(2-하이드록시에틸아미노)에틸]아미노]안트라센-9,10-디온 및 미톡산트론, 5,8-디하이드록시-1,4-비스{[2-(2-하이드록시에틸아미노)에틸]아미노]안트라센-9,10-디온이다(지-쳉 외,J. Med. Chem.,(1978),21, 291-4; 쳉 외, "Progress in Medicinal Chemistry," Ellis, G.P. and West, G.B., eds.; Elsevier: Amsterdam, 1983; pp. 20, 83 및 인용된 참조문헌들). 미톡산트론은 광범위한 항암제로서, 그 활성은 안트라사이클린 안티바이오틱 독소루비신의 활성과 유사하다. 임상실험에서 미톡산트론은 진행된 유방암, 급성 백혈병 및 림프종의 치료에 특히 유효한 활성을 보여준다(Legha,Drugs of Today, (1984),20, 629). 이들 약제의 한계점은, 특히 미톡산트론의 경우에는 심장 독성, 양자 모두의 경우에는 골수억제 독성이 있다는 것이다. 또한, 양 화합물은 이미 독소루비신에 대한 내성을 나타내는 세포조직형에 대해 교차 내성을 보여주며, 상기 내성은 글리코프로테인 P의 과량 발현에 의해 조정된다. 다약 내성(multidrug resistance)라고 명명된 이러한 내성에는 수많은 항암성 항생제, 그 중에서도 암사크린 및 포도필로톡신과 그 유도체와 관련되며, 이는 상기 항생제를 사용하여 고형 종양을 치료함에 있어 실패의 주요 원인 중 하나이기도 하다.

이러한 결점을 극복하기 위하여 발색단이 변화된 안트라센디온을 제조하였다. 예를 들어, EP-A 103,381은 항암활성을 지닌 2-아미노알킬-5-아미노알킬아미노 안트라[1,9-cd]피라졸-6(2H)-온(안트라피라졸)을 청구하고 있다. 상기 화합물의 항암활성은 H.D. Hollis Showalter 등의 임상전 실험에서 보고된 바 있다(J. Med. Chem., 30, 121-131(1987)).

그러나, 안트라피라졸은 심각한 백혈구감소증(W.H.O. 등급 3 및 4) 및 호중구감소증(W.H.O. 등급 4)과 같은 중독성 부작용을 피할 수 없어, 안트라피라졸 CI-941을 이용한 단계 I 및 II의 임상실험에서 투약한계를 갖는 것으로 나타났다[I.E.Smith 외, J.Clin. Oncol., 9, 2141-2147 (1991)]. 또한, CI-941을 이용한 랫트실험에서 현저한 신독성이 나타났으며[D. Campling e M.E.C. Robbins, nephrotoxicity, Peter H. Dekker Bach and., Pag. 345-352(1991), New York: vedi Chem. Abstracts 116: 294n (1992)], 이 저자들은 안트라피라졸 요법에 있어서 신장 손상은 임상문제가 될 수도 있다고 언급하였다. 더욱이, 최근의 연구 [Drugs of the Future, 17, 725 (1992); Judson, I.R. 외, Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., 32, abstr. 1059 (1991)]에 의하면 급성 심장병 증상이 보고된 적이 없음에도 불구하고 안트라피라졸 CI-941은 사람에게 회복할 수 없는 심장독성을 야기하는 것으로 보고된 바 있다.

상술한 바와 같이, 신규한 활성 유사체의 개발이 여전히 요망되고 있다.

8- 및 9- 위치에 질소가 도입된 안트라피라졸 아자-유사체는 PCT/US93/08241(1994.3.31자 공개, WO 94/06795)에 개시되어 있다. 상기 화합물은 생체외 및 생체내 모델 양자 모두에 있어서 높은 항암활성을 가지며, 독소루비신 및 미톡산트론과는 달리 LoVo/DX 세포주에 대한 교차 내성을 보이지 않았다. 이러한 데이타는 항암 항생물질을 이용한 치료에 민감한 백혈병 및 고형 종양에 대한 치료에 있어서 상당한 가능성을 보여주는 것이다.

안트라피라졸 9-아자-유사체인, 2-[2-[(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[[2-메틸아미노)에틸]아미노]인다졸로[4,3-gh]이소퀴놀린-6(2H)-온은 이 계열의 다른 유사체와 현저하게 구별되는 놀라운 활성을 갖고 있는 것으로 밝혀졌다. 또한, 상기 화합물은 실제로, 치료받은 동물의 평균 생존시간(% T/C 로 표현)이 다른 유사체의 경우보다 크게 증가하였으며, 통계적으로 상당수의 동물에 있어서 종양이 완전 퇴화되었음을 알 수 있었다. 그러므로, 임상실험에서도 효과적일 것으로 보인다.

본 발명은 2-[2-[(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[[2-메틸아미노)에틸]아미노]인다졸로[4,3-gh]이소퀴놀린-6(2H)-온과 이들의 약학적으로 허용가능한 산부가염에 관한 것이다.

본 발명의 화합물은 높은 항암 활성을 갖고 있다.

본 발명은 하기 구조식(I)의 2-[2-[(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[[2-메틸아미노)에틸]아미노]인다졸로[4,3-gh]이소퀴놀린-6(2H)-온 및 이들의 약학적으로 허용가능한 산부가염에 관한 것이다:

약학적으로 허용가능한 산은 예를 들면: 염산, 브롬산, 황산, 질산, 인산, 파이로인산과 같은 무기산 또는 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 시트르산, 벤조산, 락트산, 말레산, 말산, 푸마르산, 숙신산, 타르타르산, 글루탐산, 아스파르틴산, 글루콘산, 아스코르빈산, p-톨루엔술폰산, 메탄술폰산과 같은 유기산 또는 기타 상용되는 산이 있다.

특히, 본 발명은 2-[2-[(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[[2-메틸아미노)에틸]아미노]인다졸로[4,3-gh]이소퀴놀린-6(2H)-온 트리하이드로클로라이드에 관한 것이다.

본 발명의 화합물은 하기 구조식(II)의 중간체를, 하기 구조식(III)의 히드라진과 반응시켜 제조할 수 있다.

식중, U는 F, Cl, 파라-톨루엔술포닐옥시(OTs), 메탄술포닐옥시(OMs)로 구성된 그룹에서 선택되고, W는 F 또는 Cl 이며, 단 U 와 W가 동시에 Cl일 수는 없음.

H₂N-NH-CH₂-CH₂-N(-P)-CH₂CH₂-OP' (III)

식중, P 및 P'는 독립적으로 수소이거나 반응조건에서 안정한 적합한 보호그룹일 수 있음.

그 결과 얻은 하기 구조식(IV)의 화합물은 하기 구조식(V)의 아민과 반응하여 구조식(I)의 화합물로 전환되며, 임의의 보호그룹 P 및 P'의 후속 이탈이 존재한다.

H₂N-CH₂CH₂-N(-P)Me (V)

식중, P는 상술한 바와 같음.

예를 들면, 구조식(I) 화합물의 염이 얻어지며, 이 염의 짝이온은 이탈반응에 사용되는 산작용기가 된다. 염산 기체를 과량 사용하게 되면, 화합물(I)이 트리하이드로클로라이드 형태로 얻어질 것이다.

구조식(I)의 화합물을 합성하는 바람직한 방법은, 하기 구조식(II')의 중간체를 구조식(III)의 히드라진과 반응시킨 후 구조식(V)의 아민과 반응시키는 단계 및 임의의 보호그룹 P 및 P'의 후속 이탈 단계를 포함한다.

보호그룹 P 및 P'의 예로는: (C₁-C₃)-아실 유도체(바람직하게는 아세틸), (C₁-C₄)-알콕시카르보닐 유도체(바람직하게는 tert-부톡시카르보닐) 및 (C₇-C₁₀)-아랄킬옥시카르보닐 유도체(바람직하게는 벤질옥시카르보닐)이 있다.

구조식(II)의 중간체와 구조식(III)의 히드라진과의 반응은 중간체(II)를 화학량론적 양 또는 과량의 히드라진(III)과 가열함으로써 실시될 수 있다. 상기 반응은 보통 메틸렌클로라이드, 클로로포름, 1,1,1-트리클로로에탄, 디메톡시에탄, 테트라하이드로퓨란, 디메틸설폭사이드, 디메틸포름아마이드, 피리딘, 피콜린, 알콜(메탄올, 에탄올) 또는 이들의 혼합물과 같은 불활성 용매(선택적으로, 화합물(III)을 단독으로 용매로 사용할 수도 있다)내에서 알칼리 또는 알칼리토금속 카보네이트 또는 하이드로겐 카보네이트와 같은 임의의 무기염기 또는 트리알킬아민과 같은 유기염기 존재하에 -20℃ 내지 용매의 끓는점의 온도 범위에서 실시된다. 바람직하기로는, 상기 반응을 피리딘, 테트라하이드로퓨란, 디메틸설폭사이드 또는 N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민과 같은 용매내에서 2 내지 10 당량의 히드라진( III)을 사용하여 5℃ 내지 50℃의 온도범위에서 실시한다.

구조식(II')의 중간체와 구조식(III)의 히드라진의 반응은 테트라하이드로퓨란과 알콜(에탄올, 메탄올)의 혼합물과 같이 상기 시약을 용해할 수 있는 용매내에서 -10℃ 내지 실온의 온도범위에서 실시하는 것이 바람직하다.

구조식(IV)의 화합물과 구조식(V)의 아민과의 반응은 상기 화합물을 화학량론적 양 또는 과량의 아민(V)과 함께 가열함으로써 실시한다. 상기 반응은 보통 메틸렌 클로라이드, 클로로포름, 1,1,1-트리클로로에탄, 디메톡시에탄, 테트라하이드로퓨란, 디메틸설폭사이드, 디메틸포름아미드, 피리딘, 피콜린 또는 이들의 혼합물과 같은 불활성 용매내에서, 또는 필요하다면 아민(V) 그 자체를 용매로 사용하여, 임의로 알칼리금속 또는 알칼리토금속 카보네이트 또는 하이드로겐 카보네이트와 같은 무기염기 또는 트리알킬아민과 같은 유기염기 존재하에 0℃ 내지 용매의 끓는점의 온도범위내에서 실시된다.

상기 반응은 피리딘, 클로로포름 또는 디메틸설폭사이드와 같은 용매내에서 2 내지 10 당량의 아민(V)을 사용하여 실온 내지 100℃의 온도에서 실시하는 것이 바람직하다.

식중 U가 OTs인 구조식(IV)의 중간체와 구조식(V)의 아민과의 반응은 피리딘 또는 디메틸설폭사이드와 같은 용매내에서 실온 내지 100℃의 온도에서 실시할 수 있다.

임의의 보호 그룹 P 및 P'의 이탈반응은 예를 들어, 문헌(Green, T.W., Wuts, P.G.M., "Protective Groups in Organic Synthesis", second edition, John Wiley & Sons, 1991)에 개시된 바와 같이 당업계에 잘 알려진 방법에 따라 실시될 수 있다.

예를 들면, N-tert-부톡시카르보닐 그룹의 이탈은 에탄올, 메탄올, 디클로로메탄, 클로로포름 또는 이들의 혼합물과 같은 용매에서 20℃ 내지 50℃의 온도에서 몇 분 내지 몇 시간으로 이루어지는 반응시간 동안 보호된 중간체를 과량의 염산 무수물로 처리함으로써 실시될 수 있다.

구조식(II')의 화합물은, 하기 화합물(VI)을 AlCl₃존재하에 약 90℃에서 약 22시간 동안 1,4-디플루오로벤젠과 프리델-크라프트 아실화 반응을 시켜 (VIIa) 및 (VIIb) 부위이성질체(regioisomer)의 혼합물을 유도함으로써 제조할 수 있다.

다른 방법으로는, 부위이성질체 (VIIa) 및 (VIIb)의 혼합물은, 1,4-디플루오로벤젠을 저온의 THF내에서 sec-부틸리튬과 같은 알킬-리튬과 반응시켜 제조된 1-리튬-2,5-디플루오로벤젠과 중간체(VI)를 반응시켜 얻을 수 있다.

부위이성질체 (VIIa) 및 (VIIb)의 혼합물을 130-140℃에서 발연황산(20% SO₃)을 이용하여 고리화시킴으로써 하기 화합물(VIII)을 얻을 수 있다.

구조식(VIII)의 화합물은 하기 방법을 이용하여 반응시킨다:

a) (VIII)을 메탄올 및 THF 내에서 소듐 메톡사이드와 반응시켜 중간체(IX)를 제조하는 단계;

b) 중간체(IX)의 메톡실 그룹을 약 110℃에서 메탄술폰산과 반응시켜 탈메틸화시킨 후 이소프로판올로부터 결정화시켜, 중간체(X)를 제조하는 단계;

c) 상기 화합물(X)을 실온의 피리딘내에서 p-톨루엔술포닐 클로라이드와 반응시켜 원하는 중간체(II')를 제조하는 단계.

식중 U가 염소이고 W가 불소인 구조식(II)의 중간체는 하기 반응 방법에 따라 제조될 수 있다:

(a) 3-클로로피리딘을 에테르(THF)와 같은 불활성 용매내에서 부틸 리튬 또는 리튬 디이소프로필아민과 같은 염기존재하에 -50℃ 내지 -78℃의 온도에서 이산화탄소와 반응시켜 3-클로로-니코틴-4-카르복실산을 제조하는 단계;

(b) 3-클로로-니코틴-4-카르복실산을 에스테르화하여 메틸-3-클로로-이소니코티네이트를 제조하는 단계로서, 시약으로는 에틸에테르와 같은 불활성 용매내에서 디아조메탄을 사용할 수 있다;

(c) 촉매로서 디클로로비스(트리페닐포스핀)니켈 존재하에 메틸-3-클로로-이소니코티네이트를 유기 아연(약 0℃, THF내에서 2-플루오로-5-클로로 a-브로모톨루엔 및 반응성 아연으로부터 얻어지는)과 반응시켜 하기 구조식(XI)의 중간체를 제조하는 단계로서, 상기 반응은 에테르(THF)와 같은 불활성 용매내에서 -10℃ 내지 실온의 온도에서 실시될 수 있다;

(d) 중간체(XI)인 메틸에스테르를 가수분해하여 상응하는 산유도체를 제조하는 단계로서, 상기 가수분해 반응은 수성 및/또는 알콜 매체내에서 알칼리 금속 하이드록사이드(예를들면, 수산화나트륨)를 사용하여 실온 내지 용매 또는 용매혼합물의 끓는점의 온도범위에서 실시된다;

(e) 단계(d)에서 얻은 산을 발연황산 존재하에 100-130℃의 온도에서 고리화시켜, 식중 U가 염소이고 W가 불소인 중간체(II)를 제조하는 단계.

다른 방법으로는, 식중 U가 염소이고 W가 불소인 구조식(II)의 중간체를 하기 방법에 따라 제조할 수 있다.

(a) 2-클로로-5-플루오로톨루엔을 카본 테트라클로라이드와 같은 불활성 용매내에서 촉매량의 아자-이소부티로니트릴 또는 디벤조일퍼옥사이드 존재하에 실온 내지 80℃의 온도에서 N-브로모-숙신이미드를 사용하여 브롬화시키는 단계;

(b) 단계(a)에서 얻은 α-브로모-2-클로로-5-플루오로톨루엔을 테트라하이드로퓨란내에서 활성 아연과 반응시킨 후 유기 아연을 N-페녹시카르보닐 니코티늄 클로라이드(메틸 니코티네이트를 테트라하이드로퓨란내에서 페닐클로로포르메이트로 아실화시켜 얻은)와 반응시켜 중간체(XII)를 제조하는 단계로서, 상기 반응은 -5℃ 내지 실온의 온도에서 실시될 수 있다;

(c) 상기 중간체(XII)내에서, 예를 들어 환류하에 데칼린내 황을 이용하여 디하이드로피리딘 고리를 피리딘으로 방향족화시키는 단계;

(d) 알칼리 또는 알칼리토금속 하이드록사이드의 알콜성 용액으로 메틸에스테르를 가수분해하는 단계로서, 예를 들면 수산화나트륨의 메탄올 용액을 시약으로 사용할 수 있다;

(e) 단계(d)에서 얻은 산유도체를 고온(100-150℃)의 발연황산(20% SO₃)으로 고리화시켜 중간체(II)를 제조하는 단계.

구조식(IV)의 화합물은 3,4-피리딘-디카르복실산(상업적으로 입수가능)을 카르복실산 무수물(아세트산 또는 트리플루오로아세트산 무수물), 카보디이미드(N,N'-디사이클로헥실카보디이미드) 또는 유사한 시약과 같은 적합한 탈수제와 반응시켜 제조할 수 있다.

3,4-피리딘-디카르복실산을 약 110℃에서 아세트산 무수물과 반응시키는 것이 바람직한 방법이다.

구조식(I) 화합물의 염들은 당업계에 알려진 통상의 방법으로 상호 전환될 수 있다.

본 발명의 화합물의 생물학적 활성

본 발명의 화합물에 대한 생물학적 활성의 평가는 프로토콜(U.S. National Cancer Institute에 의해 개발된 프로토콜)에 따라 "생체외" 및 "생체내"에서 수행하였다.

"생체외" 세포독성에 대한 평가는 전이성 소결절로부터 분리한 사람의 결장 선암 세포주(Lovo)를 사용하여 수행하였다. 상기 화합물은 MTT 분석(Mosman, T. "Rapid Colorimetric Assay for Celluar Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assay", J. Immunol. Methods, (1983), 65, 55-63; Green, L.M., "Rapid Colorimetric Assay for Cell Viability; Application to the Quantitation of Cytotoxic and Growth Inhibitory Lymphokines", J. Immunol. Methods, (1984), 70, 257-268)에 의해 미톡산트론, 독소루비신 및 CI-941과 비교하여 시험하였다. 표 1에서는 본 발명의 화합물과 독소루비신의 활성을 비교하였다.

"생체내"의 생물학적 활성 실험은 P 388 쥐의 백혈병 모델을 사용하였다. P 388 쥐의 백혈병 세포를 CD2F1 마우스의 정맥내로(iv) 주사하였다. 종양 이식 후 약 24시간이 경과하고나서 치료를 시작하였고, 상기 생성물은 소정의 프로토콜에 따라, 보통 3일 간격으로 1회 투약량을 정맥내에 주사하였다. 실험은 60일 이상 행해졌으며, 동물들이 사망한 날짜를 기록하였다. %T/C는 하기식

T/C% = [(MST_treated)/(MST_controls)] × 100

에 따라 각각의 그룹에 대한 중간 생존시간(median survival time: MST)을 사용하여 측정하였다.

본 발명의 화합물은 대조표준(미처리 동물)과 비교할 때 처리 동물의 생존시간을 증대시키는 것으로 나타났다. 또한, 본 발명의 화합물은 미톡산트론보다 내성이 향상되었음을 알 수 있었다(표 2).

또한, 본 발명의 화합물의 생물학적 활성에 대한 생체내 실험을 사람의 종양 이종이식편 2가지, 즉 사람의 유방 MX-1 종양 및 난소 종양 A2780을 사용하여 실시하였다(표 2). 본 발명의 화합물은 CI-941보다 높지는 않더라도 동일한 정도의 "종양 중량 억제"라고 표현되는 활성을 갖는 것으로 나타났다. "종양 중량 억제" 활성은 다음과 같이 평가된다:

TWI% = 100 - [(처리된 종양의 평균 상대중량/대조표준 종양의 평

균 상대중량) × 100

또한, 본 발명의 화합물은 CI-941과 비교할 때 어떠한 독성효과도 없이 실험 투약량에 의해 상당수의 종양을 완전 퇴행시키는 것으로 나타났다. 종양 퇴행이란 치료종료 후 30일이 경과하였을 때 종양 중량이 종양의 초기 중량과 비교하여 감소되는 것을 의미하는 것이다. 완전한 종양 퇴행이란 종양 중량이 사라진 것을 의미한다.

따라서, 상기한 결과에 의하면 본 발명의 화합물은 항암성 항생제 및 안트라센디온을 이용한 치료에 민감한 백혈병 및 고형 종양의 치료에 효과적일 것으로 기대된다.

그러므로, 본 발명의 화합물을 0.5 내지 20 mg/kg 체중의 범위로 투여하여 포유동물의 종양 퇴행 및/또는 치료용 조성물의 활성성분으로 이용할 수 있다. 바람직한 1회 투약량은 포유동물의 체중 1kg당 1 내지 18 mg일 수 있다. 특히, 5 내지 200 mg/m²체면적이 바람직한 1회 투약량이다.

상기 1회 투약량은 예를 들자면, 방사선요법과 같은 다른 치료요법과 병행할 수 있도록 조절가능하다.

본 발명 화합물(I), 미톡산트론, 독소루비신 및 CI-941의 생물학적 활성에대한 생체외 평가를 사람의 결장 선암 세포주(LoVo)에 대하여 상기 약제를처리하고 1시간 경과 후 측정한 결과

화 합 물 IC₅₀± S.D. (㎍/㎖)

화합물(I) 0.54 ± 0.17미톡산트론 0.026 ± 0.017독소루비신 0.7 ± 0.49CI-941 0.039 ± 0.035

본 발명 화합물(I), 미톡산트론 및 CI-941의 생물학적 활성에 대한 생체내평가를 쥐의 백혈병 P388 및 사람의 종양 이종이식편(MX-1 및 A 2780) 모델을마우스에 적용하여 측정한 결과
화합물	P388 iv/iv + 1,4,7투약량 T/C% 독성(mg/kg)	MX-1 sc/iv q7dx3투약량 TWI% 독성(mg/kg)	A 2780 sc/iv q4dx3투약량 TWI% 독성 종양퇴행(mg/kg)
화합물(I)	7.5 167 0/8	8.9 78 0/517.5 96 0/5	7.5 99 0/7 4/79.7 100 0/7 6/7
미톡산트론	3 195 16/284	4.5 74 16/60	- - - -
CI-941	6 133 0/89 144 0/813.5 133 0/8	9 83 0/713.5 93 0/4017.5 97 9/33	8 87 0/7 0/710.4 97 0/7 0/713.5 100 5/7 1/7

구조식(I)의 화합물을 함유한 약학적 조성물도 본 발명의 범위에 포함되는 것이다. 이러한 약학적 조성물은 포유동물에 있어서 독소루비신, 안트라센디온 및 안트라피라졸을 사용하는 치료에 민감한 종양에 대하여 항암활성을 부여할 수 있는 구조식(I)의 화합물을 소정량 포함할 수 있다.

또한, 약학적 조성물은 구조식(I)의 화합물외에도, 액체 또는 고체의 형태로 경구, 비경구, 정맥내, 내피, 피하 또는 국소 투여와 같은 임의의 경로로 투여하기에 적합하며 약학적으로 허용가능한 부형제를 함유할 수 있다.

구조식(I) 화합물은 경구로 투여될 수 있다. 경구용 조성물은 일반적으로 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함하고 있다. 이들은 젤라틴 캡슐에 포함되어 있거나 또는 정제로 압축된 형태일 수 있다. 기타 경구 투여형태는 캡슐, 필, 일릭서, 현탁액 또는 시럽 등이 있다.

정제, 필, 캡슐 및 유사 조성물은 하기 성분들을 함유할 수 있다(활성 성분 외에도): 미정질 셀룰로오스, 트라가칸트 또는 젤라틴과 같은 결합제; 전분 또는 락토오스와 같은 부형제; 알긴산, 프리모겔(primogel), 옥수수 전분 등과 같은 붕괴제; 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제; 콜로이드상 실리콘 디옥사이드; 설탕 또는 사카린과 같은 감미료; 또는 민트향, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지향과 같은 향미료. 또한, 캡슐 형태의 조성물은 이외에도 지방유(fat oil)와 같은 액상 담체를 포함할 수 있다. 다른 조성물은 물리적 형태를 변화시킬 수 있는 다양한 물질예를 들어, 설탕 또는 쉘락 과 같은 코팅제(정제 및 필을 제조하기 위한)을 함유할 수 있다. 상기 조성물을 제조하는데 사용된 물질들은 약학적으로 순수하고, 사용된 투약량에 있어서 독성이 없어야 할 것이다.

비경구 투여용으로 사용될 제약학적 조성물은 활성 성분을 용액 또는 현탁액의 형태로 함유하고, 그외에도 하기 성분들을 포함할 수 있다: 주사용 증류수, 식염용액, 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 폴리프로필렌 글리콜 또는 기타 합성용매와 같은 멸균 희석제; 벤질알코올과 같은 항균제; 아스코르빈산 또는 소듐 바이설페이트와 같은 항산화제; 에틸렌디아미노테트라아세트산과 같은 킬레이트화제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충액; 및 염화나트륨 또는 덱스트로오스와 같이 용액의 강직성(tonicity)을 조절하는 제제. 비경구 투여용 조성물은 앰풀, 일회용 주사기, 유리병 또는 플라스틱병에 함유될 수 있다.

본 발명 화합물의 합성

제법 1: 3,4-피리딘-디카르복실산 무수물(VI)

3,4-피리딘-디카르복실산(15g)과 아세트산 무수물(30ml)의 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 과량의 아세트산 무수물은 증발시키고 잔류물은 승화시켜(123℃, 3mmHg에서) 10.1g의 3,4-피리딘-디카르복실산 무수물을 백색 고체형태로 얻었다; m.p. 74-76℃.

¹H-NMR(200 MHz, CDCl₃): 7.94 ppm (d, 1H); 9.24 ppm(d, 1H); 9.39 ppm(s, 1H).

제법 2: (VIIa) 및 (VIIb)의 혼합물

3,4-디카르복실산 무수물(5 g)과 알루미늄 트리클로라이드(17.5g)가 1,4-디플루오로벤젠(65ml)에 용해되어있는 혼합물을 110℃의 오일조내에서 22시간 동안 가열하였다. 과량의 1,4-디플루오로벤젠은 증류하여 회수하였다. 잔류물을 얼음조내에서 냉각시킨 후 여기에 물/얼음(75 ml)과 농축 염산(6.3 ml)을 부가하였다. 침전된 고체를 여과 및 건조시켜 4-(2,5-디플루오로벤조일)니코틴산과 3-(2,5-디플루오로벤조일)이소니코틴산의 약 4:1 혼합물(7.7 g)을 백색 분말형태로 얻었으며, 아크릴로니트릴과 물로 재결정하였다; m.p. 214-217℃.

¹H-NMR(200 MHz, d6-DMSO): 7.4 ppm(m); 7.5 ppm(m); 7.9 ppm(m); 8.8 ppm(d); 8.9 ppm(d); 9.15 ppm(s).

제법 3: 6,9-디플루오로벤젠[g]이소퀴놀린-5,10-디온(II')

제법 2로 부터 얻은 (VIIa) 및 (VIIb) 혼합물의 발연황산(20% SO₃, 100 ml) 용액(61.07 g)을 140℃로 가열하고 20분 간격으로 발연황산을 4회 더 부가하였다(1회에 13.2 ml씩). 최종 부가후, 상기 혼합물을 20분간 더 가열한 다음 실온으로 냉각시키고, 얼음(1500 ml), 물(1500 ml) 및 35% 수산화나트륨의 혼합물을 더 부가하였다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드(1×1000 ml 후 3×500 ml)로 추출하였다. 유기 추출물을 모아서 물(2×1000 ml)로 세척하고 황산나트륨상에서 건조시킨 다음 감압하에 용매를 제거하였다. 그 결과 얻은 암적색 고체(56g)를 고온의 THF(840 ml)에 용해시킨 다음 활성탄(8.4 g)으로 탈색시켰다. 30분후 아직 따뜻한 혼합물을 여과하여 여과액을 부피가 200 ml로 되도록 농축시켰다. 그 결과 얻은 침전물을 여과분리하여 43 g의 생성물을 얻었다; m.p. 201-203℃.

모액을 부피 70ml가 되도록 농축시켜 이차 수확물을 얻었다(3.35 g); m.p. 200-202℃.

제법 4: 9-플루오로-6-메톡시벤조[g]이소퀴놀린-5,10-디온

질소 분위기하에서 무수 메탄올(97.6 ml) 및 나트륨(2.024 g)으로 새롭게 제조한 소듐메톡사이드 용액을 실온에서 교반하에 6,9-디플루오로벤조[g]이소퀴놀린-5,10-디온(19.615 g, 제법 3)의 무수 THF(883 ml) 용액내로 2시간 35분 동안 적하하였다. 상기 작업이 끝난 후, 상기 반응 혼합물을 최초 부피의 절반이 되도록 농축시킨 다음 18℃에서 30분간 유지하였다. 분리된 고체를 여과하여 100 ml의 THF로 세척한 다음 상기 고체를 물(80 ml)에 현탁시켜 밤새 교반한 후 다시 여과하여 9.3 g의 조생성물을 얻었다. 이를 메틸렌 클로라이드(45 ml)에 현탁시키고 30분간 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 다음 생성물을 여과하고, 분리된 고체를 메틸렌 클로라이드(5×3 ml)로 세척한 다음 진공하 40℃에서 건조시켜 8.65 g의 순수 생성물을 얻었다; m.p. 248-250℃.

¹H-NMR(200 MHz, CDCl₃): 4.05 ppm(s, 3H); 7.40 ppm(dd, J=9.39, 3.91 Hz, 1H); 7.55 ppm (dd, J=10.37, 9.39Hz, 1H); 8.00 ppm(dd, J=5.09, 0.78 Hz, 1H); 9.05 ppm(d, J=5.09 Hz, 1H); 9.48 ppm(d, J=0.78 Hz, 1H).

제법 5: 9-플루오로-6-하이드록시벤조[g]이소퀴놀린-5,10-디온

29 g의 9-플루오로-6-메톡시벤조[g]이소퀴놀린-5,10-디온이 145 ml의 메탄설폰산에 용해되어있는 혼합물을 불활성기체 분위기하에 교반하면서 110℃로 약 2시간 동안 가열한 다음 3000ml의 물을 부가하였다. 1시간 동안 교반한 후 형성된 침전물을 여과하여 약 300ml의 물로 세척하였다. 이를 추가로 2000 ml의 물에 넣어 30분간 교반한 후 다시 여과하였다. 상기 모액을 500ml의 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기상을 분리하여 감압하에 용매를 증발시켰다. 잔류물(3 g)을 일차 결정화 생성물과 함께 500 ml의 이소프로판올에 용해시켰다. 1시간 동안 교반한 다음 결정화된 생성물을 여과하여 24.16 g의 생성물을 얻었다; m.p. 189-192℃.

제법 6: 9-플루오로-6-(p-톨루엔술포닐옥시)벤조[g]이소퀴놀린-5,10-디온

불활성기체 분위기하의 실온에서 교반하면서 9-플루오로-6-하이드록시벤조[g]이소퀴놀린-5,10-디온(18 g) 및 트리에틸아민(17.51 ml)이 혼합되어있는 메틸렌 클로라이드(540 ml) 용액에 21.37 g의 토실 클로라이드를 부가하였다. 약 8시간 경과 후 반응 혼합물을 200 ml의 물로 세척한 다음 그 세척액을 메틸렌 클로라이드로 추출하였다. 유기상을 모아서 황산나트륨상에서 건조시킨 후 감압하에 용매를 증발시켜 80 g의 잔류물을 얻었다. 상기 잔류물을 294 ml의 헥산에 용해시켜 실온에서 약 1시간 동안 교반후 여과한 다음 필터상에서 200 ml의 헥산으로 여과하였다. 그 결과 얻은 고체(29 g)를 40℃에서 메틸렌 클로라이드(160 ml) 및 이소프로판올(60 ml)의 혼합물을 이용하여 결정화시켰다. 따뜻한 용액을 유리섬유 필터로 여과한 후 잔류체적이 120 ml가 되도록 농축시켰다. 2시간 교반후 결정화된 생성물을 여과하여 12.92 g의 일차 수확물을 얻었다. 결정화 모액의 체적이 절반이 되도록 더욱 농축시켜 이차 수확물을 얻었다(7.65 g); m.p.170-172℃.

제법 7: 2-[2-[(2-하이드로시에틸)아미노]에틸]-5-(p-톨루엔술포닐옥시)인다졸로[4,3-gh]이소퀴놀린-6(2H)-온

N-[2-[(하이드록시에틸아미노)에틸]]히드라진(J. Het. Chem.,26, 85(1989); 0.179 g)의 무수에탄올(0.5 ml) 용액을 실온에서 교반하에 9-플루오로-6-(p-톨루엔술포닐옥시)벤조[g]이소퀴놀린-5,10-디온(0.2 g; 제법 6) 및 트리에틸아민(0.073 g)의 THF 용액 2 ml에 적하하였다. 2시간 경과후 N-[2-[(2-하이드록시에틸아미노)에틸]]히드라진의 무수에탄올 용액 0.5 ml의 이차분을 부가하고나서 다시 2시간이 경과한 다음 반응혼합물의 체적이 약 1 ml가 되도록 농축시켰다. 20 ml의 물을 부가하여 얻은 혼합물을 실온에서 교반하에 하룻밤 방치한 다음, 분리된 고체를 여과하고 40℃ 진공에서 건조시킨 후 최종적으로 고온의 에틸아세테이트에 용해시켜 0.06 g의 생성물을 얻었다; m.p. 131-133℃.

¹H-NMR(200 MHz, d6-DMSO/D₂O): 2.45 ppm(s, 3H); 2.62 ppm(t, 2H); 3.13 ppm(t, 2H); 3.40 ppm(t, 2H); 4.65 ppm(t, 2H); 7.25 ppm(d, 1H); 7.40 ppm(d, 2H); 7.75 ppm(d, 2H); 7.95 ppm(d, 1H); 8.15 ppm(d, 1H); 8.80 ppm(d, 1H); 9.40 ppm(s, 1H).

제법 8: 2-[2-[N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]-N-(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-(p-톨루엔술포닐옥시)-이소퀴놀린[8,7,6,-cd]인다졸로-6(2H)-온

ditert-부틸 디카보네이트가 THF(20 ml) 및 물(4 ml)에 용해되어있는 용액을 계속 교반하면서 2.132 g의 고체 2-[(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-(p-톨루엔술포닐옥시)-인다졸로[4,3-gh]이소퀴놀린-6(2H)-온(제법 7)을 2분에 걸쳐 조금씩 부가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간동안 교반한 다음 체적이 작아지도록 농축시켰다. 반복해서 잔류물을 에탄올에 녹이고 거의 건조한 상태가 되도록 농축시킴으로써 잔류수분을 제거하였다. 그 결과 얻은 고체를 고온의 메틸 tert-부틸에테르와 혼합하고 메틸렌 클로라이드를 부가하여 고체가 완전히 용해되도록 하였다. 그 후 약간의 질소 스트림하에서 메틸렌 클로라이드를 증발시켰다. 상기 혼합물을 실온에서 냉각되도록 방치한 다음 고체를 여과하여 과량의 메틸 tert-부틸에테르로 세척한 후 40℃ 진공하에서 건조시켰다. 그 결과 1.91 g의 생성물을 녹색의 고체 형태로 얻었다; m.p. 175-178℃.

¹H-NMR(200 MHz, 323K, d6-DMSO): 9.43 ppm(s, 1H); 8.85 ppm(d, 1H); 8.17 ppm(d, 1H); 7.98 ppm(d, 1H); 7.78 ppm(d, 2H); 7.50-7.30 ppm(m, 3H); 4.80 ppm(t, 2H); 4.67 ppm(br. s, 1H); 3.75 ppm(br. s, 2H); 3.57-3.35 ppm(br. m, 2H); 3.30-2.95 ppm(br. m, 2H); 2.38 ppm(s, 3H); 1.17 ppm(br. s, 4H); 0.90 ppm(br. s, 5H).

제법 9: 2-[2-[N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]-N-(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[(N-메틸-N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]아미노)에틸아미노]이소퀴노[8,7,6,-cd]인다졸로-6(2H)-온

2-[2-[N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]-N-(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-(p-톨루엔술포닐옥시)이소퀴노[8,7,6,-cd]인다졸로-6(2H)-온(0.74 g) 및 N-메틸-N-BOC 에틸렌디아민(1.561 g; Saari, W.S. 외., J. Med. Chem.,33, 97-101 (1989))이 6 ml의 피리딘에 용해되어있는 혼합물을 6시간 30분 동안 65℃로 가열하여 고체를 전부 용해되시켰다. 상기 용액을 2시간 30분 동안 100℃로 가열한 다음, 반응 혼합물의 체적이 작아지도록 농축시켰다. 잔류물을 100 ml의 메틸렌 클로라이드와 50 ml의 1N 수산화나트륨 수용액에 혼합한 후 염기성 수성상을 분리하여 메틸렌 클로라이드로 추출하였다(2×50 ml). 유기 추출물을 물(50 ml) 및 NaH₂PO₄포화용액(25 ml)의 혼합물로 세척하여 황산나트륨 상에서 건조시킨 후 감압하에 용매를 제거하였다. 잔류물(950 mg)을 실리카겔 크로마토그래피(70 g; 용출액 메틸렌 클로라이드/메탄올 97:3-95:5)로 정제하여 585 mg의 생성물을 오렌지색 거품 형태로 얻었다.

H¹-NMR(200 MHz, 333 K, d6-DMSO): 1.17 ppm(s br., 9H); 1.33 ppm(s, 9H); 2.87 ppm(s, 3H); 3.05-3.20 ppm(m, 2H); 3.45 ppm(q, 2H); 3.52 ppm(t, 2H); 3.72 ppm(q, 2H); 3.76 ppm(t, 2H); 4.46 ppm(t br., 1H); 4.76 ppm(t, 2H); 7.27 ppm(d, 1H); 7.98 ppm(d, 1H); 8.20 ppm(dd, 1H); 8.79 ppm(d, 1H); 9.20 ppm(t br., 1H); 9.51 ppm(d, 1H).

제법 10: 2-[2-[N-(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[(N-메틸-N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]아미노)에틸아미노]이소퀴노[8,7,6,-cd]인다졸로-6(2H)-온

N-메틸-N-BOC 에틸렌디아민(2.12 g)의 무수피리딘 용액 7 ml에 710 mg의 2-[2-[(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-(p-톨루엔술포닐옥시)인다졸로[4,3-gh]이소퀴놀린-6(2H)-온(제법 7)을 부가한 다음 반응 혼합물을 질소분위기하에서 22시간동안 교반하면서 50℃로 가열하였다. 그리고나서 상기 혼합물을 1시간 더 70℃로 가열한 다음 감압하 40℃에서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 25 ml의 0.1N 수산화나트륨과 75 ml의 메틸렌클로라이드 사이에서 분배한 후 수성상을 메틸렌클로라이드(2×25 ml)로 추출하였다. 유기상을 수거하여 염수(25 ml)로 두번 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시킨 다음 감압하에서 용매를 증발시켜 약 2 g의 갈색오일을 얻었다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(50 g; 용출액 메틸렌 클로라이드/메탄올/암모늄 하이드록사이드 95:5:0 - 85:15:0.6)로 정제한 다음 메틸렌 클로라이드/메틸 tert-부틸 에테르를 이용하여 결정화시켜 339 mg의 생성물을 얻었다.

H¹-NMR(200 MHz, CDCl₃): 1.48 ppm(s, 9H); 2.85 ppm(t, 2H); 2.94 ppm(s, 3H); 3.30 ppm(t, 2H); 3.50-3.75 ppm(m, 6H); 4.66 ppm(t, 2H); 6.95-7.20 ppm(m, 1H); 7.70 ppm(d, 1H); 8.27 ppm(d, 1H); 8.80 ppm(d, 1H); 9.28 ppm(t br., 1H); 9.51 ppm(d, 1H).

실시예 1: 2-[2-[N-(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[(N-메틸아미노)에틸아미노]이소퀴노[8,7,6,-cd]인다졸로-6(2H)-온 트리하이드로클로라이드

2-[2-[N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]-N-(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[(N-메틸-N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]아미노)에틸아미노]이소퀴노[8,7,6,-cd]인다졸로-6(2H)-온(563 mg; 제법 9)의 무수에탄올 용액 20 ml에 4.11M 염산의 무수에탄올용액을 5 ml 부가하였다. 그 결과 얻은 암적색 용액을 질소 분위기하의 실온에서 약20시간 동안 교반하였다. 이렇게 형성된 적색 고체를 여과하여, 에탄올로 완전히 세척한 다음 50℃, 진공하에서 건조시켜 414 mg의 생성물을 얻었다; m.p. 220-222℃(분해).

H¹-NMR(200 MHz, D₂O): 2.80 ppm(s, 3H); 3.35 ppm(q, 2H); 3.45 ppm(t, 2H); 3.83 ppm(t, 2H); 3.87-3.93 ppm(m, 2H); 4.00 ppm(t, 2H); 4.97 ppm(t, 2H); 7.11 ppm(d, 1H); 7.91 ppm(d, 1H); 8.39 ppm(d, 1H); 8.77 ppm(d, 1H); 9.34 ppm(s, 1H).

실시예 2: 2-[2-[N-(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[(N-메틸아미노)에틸아미노]이소퀴노[8,7,6,-cd]인다졸로-6(2H)-온 트리하이드로클로라이드

2-[2-[N-(2-하이드록시에틸)아미노]에틸]-5-[(N-메틸-N-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]아미노)에틸아미노]이소퀴노[8,7,6,-cd]인다졸로-6(2H)-온(320 mg; 제법 10)의 무수에탄올 현탁액 14 ml에 6.5 M 염산의 무수에탄올 용액 5 ml를 약 0℃를 유지하면서 1분간 부가하였다. 그 결과, 적색 고체가 침전되었는데, 1.5 ml의 물을 부가하여 부분적으로 재용해시켰다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 23시간 유지한 후 2시간 동안 55℃로 가열하였다. 그 후 적색 침전물을 질소 분위기하에서 여과하고 에탄올로 세척한 다음 40℃와 실온의 진공하에서 1시간 동안 건조시켰다. 271 mg의 생성물을 적색 고체형태로 얻었다; m.p. 220 - 222℃(분해).

Claims

유리염기 및 약학적으로 허용가능한 산부가염으로서의 하기 구조식(I)의 화합물.
트리하이드로클로라이드로서의 구조식(I) 화합물.
(a) 하기 구조식(II)의 중간체를 하기 구조식(III)의 히드라진과 반응시키는 단계;

식중, U가 F, Cl, 파라-톨루엔술포닐옥시, 메탄술포닐옥시로 구성된 그룹에서 선택되고, W는 F 또는 Cl이며, 단 U 와 W가 동시에 Cl 일수는 없음.

H₂N-NH-CH₂-CH₂-N(-P)-CH₂CH₂-OP' (III)

식중, P 및 P'는 독립적으로 수소이거나 반응조건에서 안정한 적합한 보호그룹일 수 있음.

(b) 단계(a)에서 얻은 화합물을 하기 구조식(V)의 아민과 반응시키는 단계;

H₂N-CH₂CH₂-N(-P)Me (V)

식중, P는 상술한 바와 같음.

(c) 존재하는 임의의 보호그룹을 이탈시키는 단계를 포함하는 구조식(I) 화합물 또는 그 염을 제조하는 방법.
제3항에 있어서, U가 파라-톨루엔술포닐옥시이고, W가 불소인 구조식(I) 화합물 또는 그 염을 제조하는 방법.
(a) 알루미늄 트리클로라이드 존재하에 1,4-디플루오로벤젠을 3,4-피리딘디카르복실산으로 프리델-크라프트 아실화시켜 부위이성질체 (VIIa) 및 (VIIb)의 혼합물을 제조하는 단계;

(b) (VIIa) 및 (VIIb)를 발연황산(20% SO₃)으로 결정화시켜 하기 구조식(VIII)의 중간체를 제조하는 단계;

(c) 구조식(VIII)의 화합물을 소듐메톡사이드와 반응시켜 하기 구조식(IX)의 화합물을 제조하는 단계;

(d) 상기 화합물(IX)내의 메톡실 그룹을 메탄술폰산으로 탈메틸화하는 단계;

(e) 단계(d)에서 얻은 화합물을 파라-톨루엔술포닐 클로라이드와 반응시켜 구조식(II')의 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 구조식(II') 화합물의 제조방법.
제5항에 있어서, 부위이성질체 (VIIa) 및 (VIIb)의 혼합물은 3,4-피리딘디카르복실산 무수물과 1-리튬-2,5-디플루오로벤젠을 반응시켜 제조되는 것을 특징으로하는 방법.
(a) 염기존재하에 3-클로로피리딘을 이산화탄소와 반응시켜 3-클로로-니코틴-4-카르복실산을 제조하는 단계;

(b) 단계(a)의 산을 에스테르화하여 메틸 3-클로로이소니코티네이트를 제조하는 단계;

(c) 촉매로서 디클로로비스(트리페닐포스핀)니켈 존재하에 단계(b)의 3-메틸 3-클로로이소니코티네이트를 2-플루오로-5-클로로톨릴 아연과 반응시켜 하기 구조식(XI)의 중간체를 제조하는 단계;

(d) 화합물(XI)을 가수분해하여 얻은 산을 황산/발연황산으로 결정화시켜 식중 U가 염소이고 W가 불소인 구조식(II)의 화합물을 제조하는 단계를 포함하는, 식중 U가 염소이고 W가 불소인 구조식(II)의 중간체를 제조하는 방법.
(a) 2-클로로-5-플루오로톨루엔을 브롬화하고 계속해서 활성화아연과 반응시켜 2-클로로-5-플루오로톨릴 아연을 제조하는 단계;

(b) 메틸 니코티네이트와 페닐 클로로포르메이트를 반응시켜 얻은 N-페녹시카르보닐니코틴산 클로라이드를 단계(a)의 화합물과 반응시켜 하기 구조식(XII)의 화합물을 제조하는 단계;

(c) 화합물(XII)의 디하이드로피리딘 고리를 방향족화하여 상응하는 피리딘 유도체를 제조하는 단계;

(d) 단계(c)에서 얻은 화합물의 메틸에스테르를 가수분해한 다음 발연황산(20% SO3)으로 결정화시켜 식중 U가 염소이고, W가 불소인 구조식(II)의 화합물을 제조하는 단계를 포함하는, 식중 U가 염소이고 W가 불소인 구조식(II)의 중간체를 제조하는 방법.
적합한 담체 또는 부형제와의 혼합물 형태로 제1항 또는 제2항의 화합물을 함유하는 약학적 조성물.
제1항 또는 제2항의 화합물을 활성성분으로 하는 항암활성을 갖는 약제.