FI106379B

FI106379B - Menetelmä valmistaa ihmisen valkosoluelastaasi-inhibiittorina käytettäviä trifluorimetyyliketonijohdoksia

Info

Publication number: FI106379B
Application number: FI915996A
Authority: FI
Inventors: Keiji Hemmi; Keisuke Imai; Hirokazu Tanaka; Ichiro Shima
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co
Priority date: 1990-12-31
Filing date: 1991-12-19
Publication date: 2001-01-31
Also published as: DK0494071T3; HU210263B; EP0494071A2; JPH0699378B2; RU2073684C1; CA2058560C; AU641577B2; DE69218977D1; EP0494071A3; KR100192991B1; US5296591A; JPH04297446A; NO920035D0; HUT60507A; EP0494071B1; ATE151775T1; IE914360A1; CN1040003C; CA2058560A1; SG50457A1

Description

106379

Menetelmä valmistaa ihmisen valkosoluelastaasi-inhibiitto-rina käytettäviä trifluorimetyyliketonijohdoksia - För-farande för framställning av som human leukocytelastasin-hibitor använda trifluormetylketonderivat 5 Tämä keksintö koskee menetelmää valmistaa ihmisen valko-soluelastaasi-inhibiittorina käytettäviä trifluorimetyyliketoni johdoksia tai niiden suolaa, joilla yhdisteillä on 10 kaava (I) R2 r3

I I

R^NHCO—( )— X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 U) 15 jossa R1 on (C^-Cg) -alkyyli, joka on substituoitu karbok-silla, esteröidyllä karboksilla valittuna ryhmästä (Ci-C6) -alkoksikarbonyyli, fenyyli (C^-Cg) -alkoksikarbonyyli 20 ja bentsoyyli(C^-Cg)-alkoksikarbonyyli; tai morfoliino-(C1-Cg)-alkyyli, R ja R ovat molemmat isopropyyli, X on - tai -NH-, ja 25 Y on ui -nch2- 30

Keksinnön mukaisesti kaavan (I) mukaiset uudet trifluori-. metyyliketonijohdannaiset ja näiden suolat voidaan valmis taa eri prosesseilla, jotka kuvataan seuraavilla reaktio-35 kaavioilla:

! VV1- ' J

2

Prosessi 1 "1 0 6 3 7 9 R2 R3

_jT\_ 1 I

HOOC—( >— X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 (11) 5 I RX-NH2 (III) /_ R2 R3

10 f/ \\ I I

R^NHCO—( )— X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 d)

Prosessi 2 15 y_ R2 R3

/r\ 1 I

R^NHCO—Y )—x-conhchco-y-conhchcocf, (iv

\r=/ I

OH

20 _ R2 R3 R^NHCQ—X-C0NHCHC0-Y-C0NHCHC0CF3 (1) 25 Prosessi 3 R2 R3 1 /TV 1 1 R^-NHCO ( ) X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 (Ia) 30 i j_ R2 R3 1 ' ' R^-NHCO—( Y~ X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 (Ib) 35 3 106379

Prosessi 4 ^2 5 dc) conhchcocf3 10 /Γ'Λ ^ I \ NH2—^ y—CH2NHCO—J— CONHCHCON^^/ ^3 (Id) CONHCHCOCF3 15 Prosessi 5 _ f R3

f/ \ * I

HOOC-R^-NHCO ( >—X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 (Ie> 20 1 (Rd)2NH (V) _ R2 R3 (R*) 2NCO-rJtNHCO —(/ y-X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 (1 f)

:·: 25 \=J

Edellä olevissa kaavoissa R* on mono- tai diesteröity kar-boksi (Cx-C6) alkyyli ja on mono- tai dikarboksi (C^-Cg) al-30 kyyli, R3 on C^-Cg-alkyleeni, R* on C1-C6-alkyyli, ja R1 -R3, X ja Y ovat kukin edellä määritellyt.

«

Kaavan (I) mukaisten uusien trifluorimetyyliketonijohdannaisten farmaseuttisesti hyväksyttävä suola voi olla mm.

35 suola epäorgaanisen tai orgaanisen emäksen kanssa, kuten alkalimetallisuola (esimerkiksi natriumsuola, kaliumsuola ja vastaavat), maa-alkalimetallisuola (esimerkiksi kai- 106379 4 siumsuola ja vastaavat), aramoniumsuola, etanoliamiinisuo-la, trietyyliamiinisuola, disykloheksyyliamiinisuola tai vastaavat, ja happoadditiosuola orgaanisen tai epäorgaani- .

sen hapon kanssa, kuten metaanisulfonaatti, hydrokloridi, 5 sulfaatti, nitraatti, fosfaatti tai vastaavat.

Edullisia esimerkkejä ja kuvauksia erilaisista määritelmistä edellä olevissa kuvauksissa, joita tämä keksintö sisältää suoja-alassaan, selostetaan seuraavaksi yksityis-10 kohtaisesti.

Edullisia esimerkkejä "halogeenista" ovat fluori, kloori, bromi j a j odi, 15 Edullisia esimerkkejä "Οχ-Cg-alkyylistä" voivat olla mm. suoran tai haaroittuneen alkaanin tähde, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, kuten metyyli, etyyli, propyyli, isopropyyli, butyyli, isobutyyli, t-butyyli, pentyyli, neopentyyli, heksyyli ja vastaavat, ja edullisesti sellainen, jossa on 20 1-4 hiiliatomia.

"Esteröityynä karboksiin" voit kuulua Οχ-Cg alkoksikar-bonyyli (esimerkiksi metoksikarbonyyli, etoksikarbonyyli, propoksikarbonyyli, butoksikarbonyyli, tert-butoksikarbo-25 nyyli ja vastaavat) ja fenyyli (Οχ-Cg) alkoksikarbonyyli kuten bentsyylioksikarbonyyli ja bentsoyyli (Οχ-Cg) alkoksikarbonyyli kuten bentsoyylimetoksikarbonyyli, ja vastaavat.

Edullisia esimerkkejä "0χ-06 alkyleenistä" voivat olla mm.

30 metyleeni, etyleeni, propyleeni, isopropyleeni ja vastaavat .

Menetelmät tämän keksinnön kaavan (I) mukaisen kohdeyhdis-teen tai sen suolojen valmistamiseksi selitetään seuraa-35 vaksi yksityiskohtaisesti.

Seuraavassa menetelmien 1-5 selituksessä kaavojen (I), (Ia) - (If) ja (II) - (V) mukaisten yhdisteiden suolat voivat olla samoja kuin edellä kaavan (I) mukaisten trifluo- 106379 5 rimetyyliketonijohdannaisten farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina esimerkkeinä mainitut (1) Menetelmä 1: 5 yhdiste (II) + yhdiste (III) -> yhdiste (I)

Kaavan (I) mukainen yhdiste (I) ja sen suolat voidaan valmistaa saattamalla kaavan (II) mukaisen yhdisteen tai sen 10 suolan reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen tai sen suolan kanssa.

Tämän menetelmän reaktio voidaan suorittaa seuraavalla tavalla.

15

Ts., yhdessä tapauksessa ensimmäisenä vaiheena kaavan (II) mukaisen yhdisteen tai sen suolan karboksiryuhmä aktivoidaan tavallisesti tavanomaisella tavalla, esimerkiksi, happohalogenidinsa, -atsidinsa, happoanhydridin tai seka-20 happoanhydridin, aktivoidun esterin ja vastaavien muodossa, ja saatetaan reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen kanssa antamaan kaavan (I) mukaisen yhdisteen, ja toisessa tapauksessa kaavan (II) mukainen yhdiste tai sen suola saatetaan reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen 25 tai sen suolan kanssa suoraan tavanomaisen kondensointi-reagenssin, kuten Ν,Ν-disykloheksyylikarbodi-imidin, 1-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidin ja vastaavien läsnä ollessa.

30 Tämä reaktio suoritetaan edullisesti liuottimessa, kuten N,N-dimetyyliformamidi, metyleenikloridi, kloroformi, tetrahydrofuraani, dioksaani, etyyliasetaatti, metanoli, ' ·] etanoli, vesi tai vastaavat jäällä jäähdyttäen/ympäristön lämpötilassa, ja reaktio kondensointireagenssin läsnä ol-35 lessa suoritetaan tavallisesti vedettömässä, muttei kriittisissä olosuhteissa.

6 106379 (2) Menetelmä 2: yhdiste (IV) -> yhdiste (I) 5 Kaavan (I) mukainen yhdiste ja sen suolat voidaan valmistaa hapettamalla kaavan (IV) mukainen yhdiste tai sen suo-loj a.

Hapetus suoritetaan tavanomaisella menetelmällä käyttämäl-10 lä hapetusreagenssia, jota voidaan käyttää muuttamaan hydroksimetyyliryhmän karbonyyliryhmäksi, kuten kaliumpermanganaattia, kromiyhdistettä (esimerkiksi kromihappo, natriumkromaatti, dikromihappo, natriumdikromaatti, pyri-diniumkloorikromaatti, pyridiniumdikromaatti ja vastaa-15 vat), Swern-reagenssi dimetyylisulfoksidi ja oksalyyliklo-ridi), Jones-reagenssi ja vastaavat.

Reaktio suoritetaan tavallisesti tavanomaisessa liuotti-messa, kuten vesi, asetoni, dioksaani, dimetyyliformamidi, 20 pyridiini, tai missä hyvänsä muissa orgaanisissa liuotti-missä, jotka eivät vaikuta reaktioon haitallisesti, tai näiden seoksessa.

Tämä reaktio suoritetaan edullisesti hieman lievemmissä 25 olosuhteissa, kuten jäähdyttäen, huoneenlämpötilassa tai lämmittäen.

» · (3) Menetelmä 3: 30 yhdiste (Ia) -> yhdiste (Ib) . Kaavan (Ib) mukainen yhdiste ja sen suola voidaan valmistaa ·[ alistamalla kaavan (Ia) mukainen yhdiste tai sen suola esterinpoistoreaktiolle.

Esterinpoistoreaktio suoritetaan tavanomaisella menetelmällä, kuten hydrolyysillä, pelkistyksellä tai vastaavilla, joiden yksityiskohdat selitetään seuraavaksi: 35 7 106379 1) Hydrolyysi:

Hydrolyysi suoritetaan edullisesti hapon tai emäksen läsnä ollessa.

5

Sopiva happo on mm. epäorgaaninen happo (esimerkiksi suolahappo, bromivetyhappo, rikkihappo ja vastaavat), orgaaninen happo (esimerkiksi muurahaishappo, etikkahappo, tri-fluorietikkahappo, propionihappo, bentseenisulfonihappo, 10 p-tolueenisulfonihappo ja vastaavat), ja vastaavat.

Sopiva emäs on mm. epäorgaaninen emäs, kuten alkali- tai maa-alkalimetallihydroksidi tai vastaava karbonaatti tai bikarbonaatti (esimerkiksi natriumhydroksidi, kaliumhyd-15 roksidi, natriumkarbonaatti, kaliumkarbonaatti, natriumbikarbonaatti, kalsiumhydroksidi ja vastaavat), ammoniumhyd-roksidi tai vastaavat; orgaaninen emäs, edellä olevan metallin kuten alkoksidi tai fenoksidi (esimerkiksi natrium-etoksidi, natriummetoksidi ja vastaavat), amiini, kuten 20 mono-, di- tai trialkyyliamiini (esimerkiksi metyyliamii-ni, etyyliamiini, N,N-dimetyyli-l,3-propaanidiamiini, tri-metyyliamiini, trietyyliamiini ja vastaavat), tai vastaavat .

25 Hydrolyysi suoritetaan edullisesti hieman lievemmissä olosuhteissa, kuten jäähdyttäen tai lämmittäen liuottimessa, joka ei vaikuta reaktioon haitallisesti, esimerkiksi vedessä, hydrofiilisessä liuottimessa, kuten alkoholi (esimerkiksi metanoli, etanoli, propanoli ja vastaavat), ase-30 töni, N,N-dimetyyliformamidi ja vastaavat. Edellä mainittua nestemäistä happoa ja emästä voidaan myös käyttää liuottimena .

» 2) Pelkistys:

Pelkistys, mukaan lukien kemiallinen pelkistys ja kata-lyyttinen pelkistys, suoritetaan tavanomaisella tavalla.

35 106379 8

Sopivia kemiallisessa pelkistyksessä käytettäviä pelkis-tysreagensseja ovat metalli (esimerkiksi tina, sinkki, rauta ja vastaavat), tai yhdistelmä tällaisesta metallista ja/tai metalliyhdisteestä (esimerkiksi kromikloridi, kro-5 miasetaatti ja vastaavat) ja orgaanisesta tai epäorgaanisesta haposta (esimerkiksi muurahaishappo, etikkahappo, propionihappo, trifluorietikkahappo, p-tolueenisulfonihap-po, suolahappo ja vastaavat).

10 Sopivia katalyyttisessä pelkistyksessä käytettäviä katalysaattoreita ovat tavanomaiset katalysaattorit, kuten platinakatalysaattorit (esimerkiksi platinalevy, huokoinen platina, platinamusta, kolloidinen platina, platinaoksidi ja vastaavat), palladiumkatalysaattorit (esimerkiksi huo-15 koinen palladium, palladiummusta, palladiumoksidi, Pd/C, kolloidinen palladium ja vastaavat), tai vastaavat.

Pelkistys suoritetaan tavallisesti liuottimessa, kuten vesi, alkoholi (esimerkiksi metanoli, etanoli ja vastaa-20 vat), tai vastaavat.

Pelkistys suoritetaan edullisesti hieman lievemmissä olosuhteissa, kuten jäähdyttäen, huoneenlämpötilassa tai lämmittäen .

25 (4) Prosessi 4: • · yhdiste (Ic) -> yhdiste (Id) 30 Kaavan (Id) mukainen yhdiste tai sen suolat voidaan valmistaa pelkistämällä kaavan (Ic) mukainen yhdiste tai sen suoloja.

Pelkistys, mukaan lukien kemiallinen pelkistys ja kata-35 lyyttinen pelkistys, suoritetaan tavanomaisella tavalla.

Sopivia pelkistimiä voivat olla samat kuin prosessissa 3 esimerkkeinä mainitut.

106379 9

Pelkistys suoritetaan tavallisesti liuottimessa, kuten vesi, alkoholi (esimerkiksi metanoli, etanoli ja vastaavat) , tai vastaava.

5 Pelkistys suoritetaan edullisesti hieman lievemmissä olosuhteissa, kuten jäähdyttäen, huoneenlämpötilassa tai lämmittäen.

(5) Prosessi 5: 10 yhdiste (Ie) + yhdiste (V) -> yhdiste (If)

Kaavan (If) mukainen yhdiste ja sen suola voidaan valmistaa saattamalla kaavan (Ie) mukaisen yhdisteen tai sen 15 suolan reagoimaan kaavan (V) mukaisen yhdisteen tai sen suolan kanssa.

Reaktio suoritetaan olennaisesti samalla menetelmällä kuin prosessin 1.

20

Kaavan (I) mukaisten trifluorimetyyliketonijohdannaisten farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat voidaan valmistaa tavanomaisella menetelmällä, ts., käsittelemällä kaavan (I) mukaisen yhdisteen hapolla tai emäksellä. Sopivia esi-25 merkkejä haposta tai emäksestä voivat olla samat kuin prosessin 3 "hydrolyysin" selityksessä esimerkkeinä esitetyt.

-> · «

Kaavojen (II) - (V) mukaiset lähtöaineyhdisteisiin kuuluu uusia yhdisteitä, ja ne voidaan valmistaa tämän jälkeen 30 olevilla valmistusmenetelmillä ja niiden kanssa samanlaisilla menetelmillä.

• ·. Kaavan (I) mukaiseen yhdisteeseen, mukaan lukien kaavojen (Ia) - (If) mukaisiin yhdisteisiin ja kaavojen (II) ja (IV) 35 mukaisiin lähtöaineyhdisteisiin kuuluu 1 tai useita isomeerejä johtuen asymmetrisistä hiiliatomeista, ja kaikki tällaiset isomeerit kuuluvat tämän keksinnön suoja-alaan.

106379 10

Keksinnön mukaisesti voidaan saada diastereoisomeerien seos johtuen yhdisteiden läsnä olosta, joissa on sekä liettä S-konfiguraatioita alla mainitun kaavan kiraalisessa keskuksessa, joka on merkitty symbolilla δ, ja voidaan 5 myös saada optisesti puhdas yhdiste.

On huomautettava, että mainittu optisesti puhdas yhdiste muuttuu vesi- ja/tai orgaanisessa liuoksessa mainittujen diastereoisomeerien seokseksi.

10 _ R2 R3 R1-NHC0 \ 7~X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF, \=/ Δ 15

Edelleen on huomautettava, että keksinnön kaavan (I) mukainen kohdeyhdiste antaa käyttöön vesiliuoksessa hydraat-timuodon, joka sisältyy keksinnön suoja-alaan.

20 Kaavan (I) mukaisilla trifluorimetyyliketonijohdannaisilla (I) ja niiden farmaseuttinen hyväksyttävällä suolalla on ihmisen valkosoluelastaasia inhiboivaa aktiivisuutta ja ovat käyttökelpoisia ihmisen valkosoluelastaasi-inhibiit-toreina hoitamaan tai estämään degeneratiivisia sairauk-25 siä, esimerkiksi keuhkonlaajentumaa, valtimonkovetustau-tia, nivelreumaa, nivelen jäykistymistä, nivelrikkoa, pso-: riasista, haimatulehdusta, hampaan kiinnityskudoksen rap- peumaa, keuhkojen sidekudostumaa, kystistä fibroosia, kroonista keuhkoputkentulehdusta, keuhkoputkenlaajentumaa, 30 laajalle levinnyttä yleiskeuhkoputkikiveä, hengitysteiden vauriota, ARDS:ää (adult respiratory distress syndrome) ja vastaavia, ja ovat edelleen käyttökelpiosia hoitamaan

» I

v tai estämään astmaa, siirrännäisen hylkimistä, munuaistu lehdusta, rakkulamaista ihomuutosta, laajalle levinnyttä 35 suonensisäistä koaguloitumista, shokkia, systeemistä puna-hukkaa, "clone disease", iskemia-reperfuusio-vauriota, COPD:tä (chronic obstructive pulmonary disease), membraa-nin ennenaikaista hajoamista (PROM), sarveiskalvon jäykistymistä tai fibroblastien proliferäätiota (silmän hyytymi 106379 11 nen, palovammat, mekaaninen ja kemiallinen vaurio, sar-veis- ja sidekalvon tulehdus, ja vastaavat), ja verenmyrkytystä .

5 Kaavan (I) mukaisten trifluorimetyyliketonijohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan käyttökel poisuuden kuvaamiseksi alla esitetään niiden farmakologisia testitietoja.

10 Testi 1.: Proteaasi-inhibitiomääritys (in vitro) (1) Menetelmä:

Koko määrityksen ajan käytetty puskuri oli 0,1 M HEPES 15 (4-(2-hydroksietyyli)-1-piperatsiinietaanisulfonihappo), joka sisälsi 0,5 M NaCl, pH 7,5. 25 /xl 2 mM metoksisukki-nyyli-(Ala)2-Pro-Val-p-nitroanilidia (100 mM dimetyylisul-foksidiliuosta laimennettiin puskuriin) ja 50 /xl näytettä (10 /xl näytettä orgaanisessa liuottimessa laimennettiin 20 5-kertaisesti puskuriin) sekoitettiin 96-kaivoisen mikro- tiitterilevyn kaivoissa. Mitattiin seoksen absorbanssi aallonpituudella 415 nm mikrolevylukijalla (Corona Electric Co., Ibaraki, Japani). Mittauksen jälkeen lisättiin 25 /xl 6 /xg/ml ihmisen ysköselastaasia (HSE) , ja seos sai 25 seistä 30 min ajan huoneen lämpötilassa. Sitten mitattiin absorbanssi aallonpituudella 415 nm. Lääkkeen inhibitio-% määritettiin kaavalla 100 x (l-"r" inhibiittoria läsnä/"r" inhibiittoria ei läsnä), jossa "r" on absorbanssi 30-min inkuboinnin jälkeen miinus absorbanssi ennen entsyymin 30 lisäämistä. Inhibiittorien vaikutukset sian haiman elas-taasia (tyyppi IV, 5 /xg/ml lopullinen) vastaan määritettiin samalla lailla käyttämällä N-sukkinyyli-(Ala)3-p-nit-v roanilidia. HSE saatiin yhtiöstä Elastin Products Company

Inc., MO, U.S.A. Kaikki muut substraatit ja proteaasi os-35 tettiin yhtiöstä Sigma Chemicals Co.

Inhiboiva vaikutus useisiin seriiniproteaasiaktiivisuuk-siin 106379 12 IC50 (M) testattava yhdiste ihmisen yskös- sian haiman (esimerkki no.) elastaasi elastaasi 1 4,5 X 10'7 4,4 x 10"5 5 3 9,8 X 1CT7 8,7 x 10'6 6 7,2 X 1CT7 3,3 x 10'6 8 6,1 x 10'7 2,0 x 10"6 9 7,1 x 10-6 3, O x 10-5 10 6,8 x 10’7 3,0 x 10'6 10 11 8,9 x 10"7 2,4 X 10"6 12 1,2 x 10"6 3,7 x 10'6 12 6,8 x 10~7 4,9 x 10'6 14 8,1 x 10"7 2,4 X 10'6 17 2,4 X 10~6 1,6 X 10~5 15 19 2,4 x ΙΟ-6 1,9 x 10“5

Vertailukoe 20 Aktiivisuuden määritys elastaasi-indusoidussa keuhkovauriossa .

- (1) Menetelmä: 25 Käytettiin pentobarbitaalianestesian alaisia hamstereita. Suolaliuosta, tai ihmisen ysköselastaasia sisältävää suolaliuosta kaadettiin hitaasti henkitorvensisäisesti pienen aukon kautta mahanpuoleisella kaula-alueella käyttämällä 1-ml ruiskua koo'on 27 neulalla. 3 tunnin kuluttua eläimet 30 tapettiin tukehduttamalla C02:lla, kunkin eläimen henki-torvi otettiin esille. Sitten keuhkot huuhdottiin käyttämällä 2,5 ml erää suolaliuosta, ja sitten suolaliuos imettiin pois, jolloin jokaisesta eläimestä saatiin lopullinen tilavuus noin 1,5 ml keuhkoputki-keuhorakkula-huuhtelu 35 (BAC)-nestettä.

106379 13 BAL-nesteen solut kerättiin sentrifugoimalla, ja laimennettiin sitten tislatulla vedellä hajottamiseksi, ja hemo-globiinisisällöt määritettiin spektrofotometrisesti aallonpituudella 541 nm. Testilääkkeet liuotettiin suolali-5 uokseen tai metyyliselluloosaan, ja tiputettiin hitaasti samalla tavalla kuin käytettiin elastaasin tiputtamiseen 5 min kohdalla ennen elastaasin tiputtamista.

(2) Tulos: 10

Inhiboiva vaikutus elastaasin-indusoituun keuhkoveren-vuotoon testiyhdis- 5 min. inhi- EDS0 15 te (esi- esiannos verenvuoto bitio ^g/kohta) merkki no.) ^g/kohta) (0D541 nm) % normaali 0,6449±0,173*** kontrolli 14,66 ±1,68 6 1 11,63 ±1,99 21,6 3,0 20 10 4,217 ±1,02** 74,5 100 0,6384±1,222 100,0 normaali 0,8352±l,423*** kontrolli 12,89 ±1,44 25 10 1 11,59 ±1,40 10,8 2,4 10 1,663 ±1,690*** 93,1 100 0,2141±1,020*** 105,2 normaali 0,8352±1,423*** 30 kontrolli 12,89 ±1,44 11 1 10,94 ±1,35 16,1 2,5 10 2,522 ±0,803*** 86,0 100 0,2680±0,050*** 104,7 106379 14 testiyhdis- 5 min. inhi- EDS0 te (esi- esiannos verenvuoto bitio ^g/kohta) merkki no.) (^g/kohta) (OD541 nm) % testiyhdis- 5 min. inhi- ED50 te (esi- esiannos verenvuoto bitio ^g/kohta) merkki no.) ^g/kohta) (OD541 nm) % normaali 0,6449+1,173*** 5 kontrolli 14,66 ±1,68 12 1 12,76 ±1,11 13,6 4,5 10 5,372 ±2,06*** 66,3 100 0,6476±0,129*** 100,0 10 normaali 0,9424±0,403*** kontrolli 11,05 ±1,40 14 1 9,435 ±0,941 16,0 3,2 10 3,412 ±1,31** 75,6 100 0,7258±0,303*** 102,1 15 normaali 0,3203±0,159** kontrolli 14,11 ±1,80 ? - 17 1 10,68 ±1,25 24,8 3,7 10 4,878 ±0,917** 66,9 20 100 0,3451±0,084*** 99,8 normaali 0,3199±0,159*** * kontrolli 14,11 ±1,80 19 1 12,05 ±1,95 14,9 17,9 25 10 8,155 ±1,761 43,2 100 4,545 ±1,49** 69,4 P<0,05, ** P<0,01, ***P<0,001 (Student'in t-testi) 106379 15

Testi 3: Vaikutus ihmisen ysköselastaasi-indusoituun käpälän turvotukseen hiirissä.

(1) Materiaalit ja menetelmät: 5

Koiraspuolisia C57BL-hiiriä iältään 7-8 viikkoa saatiin yhtiöstä Japan Clear Inc,.

Ihmisen ysköselastaasi (HSE) ostettiin yhtiöstä Elastin 10 Products Company, Inc,. Testilääke aiienttiin ihonalaisesti, ja 15 min myöhemmin HSE:tä injisoitiin oikeaan takakä-pälään annoksella 20 ja suolaliuosta vasempaan takakäpälään kontrollina. 2 tunnin kuluttua HSE-injektiosta käpälän turvotus mitattiin asteikkopaksuusmittalait-15 teella, ja laskettiin oikean ja vasemman takajalan tyynyn paksuuden ero.

(2) Tulokset: 20 Vaikutus elastaasi-indusoituun käpälän turvotukseen hiirissä käsittely esi- jalkatyynyn käpälän merkin 19 paksuus turvotuksen 25 yhdisteellä n (x 10"2 mm) inhibitio-% (mg/kg) « « · käsittely esimerkin 10 jalkatyynyn käpälän 30 yhdisteellä paksuus turvotuksen (mg/kg) n (x 10'2 mm) inhibitio-% . 1· kontrolli 5 46,8 ± 5,76 1 5 43,8 ± 5,67 6,4 10 5 37,0 ± 13,41 20,9 35 100 5 27,0 ± 4,661 42,3 p<0,05 versus kontrolliryhmä (Student'in t-testi) 106379 16

Testi 4: Vaikutus kokeellisesti indusoituun emfyseemaan hamstereissa (1) Materiaalit ja menetelmät: 5

Koiraspuolisia kultaisia syyrialaisia hamstereita painoltaan noin 120 g saatiin yhtiöstä Japan SLC Inc,.

Sian haiman elastaasia (PPE) ostettiin yhtiöstä Elastin 10 Products Company, Inc.. Dialferiini ostettiin yhtiöstä Japan ROche Inc.

Hamsterit nukutettiin vatsaontelonsisäisesti pentobarbi-taalilla. Esimerkin 10 yhdiste liuotettiin suolaliuokseen. 15 Molemmat tekniikan tason yhdisteet A ja B suspendoitiin 0,5-% metyyliselluloosaan. Lääkkeet tiputettiin hitaasti henkitorveen suuaukon kautta 5 min ennen PPE:n hidasta tiputtamista 100 μg/kohta 0,2 ml:ssa suolaliuosta. 3 viikkoa PPE:n tiputuksen jälkeen hamsterit nukutettiin pento-20 barbitaalilla. Hengitysmekanismeja tutkittiin selällään olevilla hamstereilla käyttämällä koko vartalon vakiotila-vuus-, vaihtelevan paineen pletysmografiaa tilavuuden mittaukseen. Keuhkopussin paineen arvioimiseen käytettiin vedellä täytettyä ruokatorvikatetrilla. Kvasistaattiset 25 deflaatio-paine-tilavuus (P-V)-käyrät saatiin vatsaontelonsisäisesti annetulla dialferiinilla spontaanin hengi-

• I

*” tyksen suppressoimiseksi laajentamaan keuhkot transpulmo- naariseen paineeseen (PL) 2,9 kPa, sallien hitaan tyhjenemisen PL-arvoon 0 Pa, ja aspiroimalla varovasti PL-arvoon 30 -1,96 kPa. Kvasistaattinen keuhkojen kimmoisuus (Cst) mää ritettiin tyhjennys-P-V-käyrän jyrkän osan kulmakertoimena keskitilavuusalueella. Vitaalikapasiteetti määritettiin keukhotilavuuden erona välillä TLC25 (tilavuus kohdassa PL= 2,45 kPa) ja RV-20 (tilavuus kohdassa PL= -1,96 kPa). 35 (2) Tulokset:

Esikäsittely esimerkin 10 yhdisteellä esti PPE-indusoitu-jen kasvujen kehittymisen keuhkomekaniikassa annoksesta 106379 17 riippuvalla tavalla, kuten seuraavassa taulukossa esitetään. Cst- ja VC-arvojen suhteen esimerkin 10 yhdisteen tehokkuus oli ylivoimainen tekniikan tason yhdisteisiin A ja B verrattuna.

5

Vaikutus kokeellisesti indusoituun emfyseemaan hamstereissa

käsittely Cst VC

10 (^g/kohta) n (ml/kPa) (ml) koe 1 normaali 8 5,40+0,20*** 4,9+0,1 *** kontrolli 8 15,7 +1,0 7,3+0,2 esimerkin 10 15 yhdiste 1 8 14,2 ±0,51(15%) 7,0±0,1(12%) 10 8 7,14+0,41(84%)*** 5.8+0,1(65%)*** 100 7 5,41±0,20(100%)*** 5,0+0,1(97%)*** koe 2 20 normaali 8 5,20+0,20*** 4,6+0,1 *** kontrolli 8 16,5 +1,22 6,8±0,1

Tekniikan tason ·. Yhdiste A

100 8 15,8±1,1(7%) 6,9±0,2(-l%) 25 1000 8 11,4±1,5(37%) 6,6+0,2(9%) koe 3 normaali 8 5,00±0,2** 4,6+0,2 *** kontrolli 6 12,0 ±2,1 7,0±0,2

tekniikan tason 30 yhdiste B

32 8 19,9 ±0,82(32%) 6,1±0,3 (39%)* 320 8 7,6 ±0,5 (63%)* 5,8±0,2(49%)** 106379 18

Cst = kvasistaattinen keuhkojen kimmoisuus, VC = vitaalikapasiteetti, (%) = inhibitio *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,001 versus kontrolli (Student1 in t-testi) 5

Tekniikan tason yhdiste A (JP-hakemusjulkaisu 61-218518 = EP-A-189 305) (Kokai Tokkyo Koho): CH, CH, V/ \ X CH3 CH, 10 /—\ r r^/

Cl—<" y— S02-NHC0—^CONHCH-CON^) CH

CONHCH-COCF3

Tekniikan tason yhdiste B (JP-hakemusjulkaisu 2-256657 = 15 EP-A-369 391) (Kokai Tokkyo Koho): cm cm ch, cm x/

FH I—fi Ί PH

_J~\_ 1 1 ci—( )— S02-NHC0—( )— CONHCH-CONCH2-CONHCH-COCF3

Keksinnön mukaisia farmaseuttisia koostumuksia voidaan käyttää tavanomaisissa farmaseuttisissa muidoissa, kuten jauheet, hienot rakeet, rakeet, tabletit, pastilli, injek-25 tiot, inhalaatiot, mikrokapselit, kapselit, peräpuikko, liuos, suspensio, emulsio, siirapit ja vastaavat. Halutta- • < essa mainitunm koostumuksen kanssa voidaan jakaa laimen-nusaineita tai hajoamista edistäviä aineita (disintegrators) (esimerkiksi sakkaroosi, laktoosi, tärkkelys, kitei-30 nen selluloosa, alhaisen substituutioasteen omaava hydrok-sipropyyliselluloosa, synteettinen alumiinisilikaatti ja ., vastaavat), sideaineet (esimerkiksi selluloosa, metyyli- selluloosa, hydroksipropyyliselluloosa, hydroksipropyyli-metyyliselluloosa, polypropyylipyrrolidoni, polyvinyyli-35 pyrrolidoni, gelatiini, arabikumi, polyetyleeniglykoli ja vastaavat), väriaineet, makeutusaineet, voiteluaineet (esimerkiksi magnesiumstearaatti ja vastaavat) tai vastaavia .

106379 19 Tämän keksinnön mukaisen mainitun koostumuksen annostelu riippuu potilaan iästä, kehonpainosta, tilasta ja vastaavista, ja se annetaan yleensä oraalisella tai inhalaatio-reitillä päivittäisellä annostasolla 1 mg - 1 g kohdeyh-5 disteenä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävänä suolana, edullisesti 10 - 500 mg samalta pohjalta, aikavälillä 1-3 kertaa päivässä. Tyypillisiä yksikköannoksia voivat olla 5 mg, 10 mg, 20 mg, 50 mg, 100 mg ja vastaavat, vaikka nämä ovat vain esimerkkejä eivätkä rajoittavia.

10

Seuraavat valmismenetelmät ja esimerkit esitetään tämän keksinnön kuvaamiseksi.

Valmistusmenetelmissä ja esimerkeissä käytetään seuraavia 15 lyhenteitä.

WSCD: 1-etyyli-3-{3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidi HOBT: N-hydroksibentsotriatsoli DMF: N,N-dimetyyliformamidi 20 DMSO: dimetyylisulfoksidi

Valmiste 1

Liuokseen, jossa oli N-(tert-butoksikarbonyyli)-L-valiinia 25 (10,86 g) ja L-proliinibentsyyliesterihydrokloridia (12,09 g) DMF:ssa (50 ml) lisättiin HOBT:ä (6,76 g) ja ** WSCD:ä (7,76 g) jäähauteessa jäähdyttäen. Sekoitettiin huoneenlämpötilassa 18 tuntia, minkä jälkeen reaktioseos väkevöitiin alipaineessa.

30 Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (400 ml) ja pestiin 5 % vesipitoisella sitruunahapolla (200 ml) ja kyllästetyllä vesipitoisella natriumbikarbonaatilla (200 ml). Liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin ali-35 paineessa, jolloin saatiin N-(tert-butoksikarbonyyli)-L-valyyli-L-proliini-bentsyyliesteriä (20,06 g) öljynä.

TLC (Kieselgel 60 F254 silikageelilevy, Merck) (tarkoittaa samaa seuraavissa valmistusmenetelmissä ja esimerkeissä, ellei toisin ole mainittu) 106379 20

Rf: 0,62 (heksaani:AcOEt = 2:1)

Seuraavat yhdisteet valmistettiin valmistusmenetelmän 1 mukaisella tavalla.

5

Valmiste 2 4-(Metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli-L-valyyli-L-pro-liini- bentsyyliesteri 10 öljy TLC Rf: 0,89 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Valmiste 3 15 3(RS)-[[4-(Metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-

L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-2(RS)-hydroksi-4-metyyli -pentaani sp. : 64-67°C

TLC Rf: 0,63 ja 0,60 (CHCl3:MeOH = 10:1) 20

Valmiste 4

3(R tai S)- [ [4-(Metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-2(R tai S)-hyd-25 roksi-4-metyylipentaani sp.: 65-75°C

" TLC Rf: 0,65 (CHCl3:MeOH = 10:1) [a]o2: -56,23° (C=0,14, MeOH) 30 Valmiste 5 3(R tai S)-[[4-(Bentsyylioksikarbonyylimetyyliaminokarbo-.· nyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-

trifluori-2(R tai S)-hydroksi-4-metyylipentaani 35 sp.: 70-80°C

TLC Rf: 0,65 (CHCl3:MeOH = 10:1) [a ]q2: -46,59° (C=0,165, MeOH) 106379

Valmiste 6 21

3(R tai S)-[[4-(Bentsyylioksikarbonyylimetyyliaminokarbo-nyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-5 trifluori-2(R tai S)-hydroksi-4-metyylipentaani sp.: 80-90°C

TLC Rf: 0,60 (CHCl3:MeOH = 10:1) [ö]d2: -27,59° (C=0,165, MeOH) 10 Valmiste 7

3(R tai S)-[[4-(Metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-2(R tai S)-hydr-oksi-4-metyylipentaani 15 sp.: 68-85°C

TLC Rf: 0,60 (CHCl3:MeOH = 10:1) [aio2: -42,63° (C=0,175, MeOH)

Valmiste 8 20 N-(tert-Butoksikarbonyyli)-L-valyyli-L-proliini-bentsyyli-esteriä (20,0 g) liuotettiin 4N vetykloridiin dioksaanis-sa (30 ml) jäähauteessa jäähdyttäen. Sekoitettiin huoneenlämpötilassa yksi tunti, minkä jälkeen reaktioseos haihdu-25 tettiin alipaineessa. Jäännös tehtiin jauhemaiseksi eetterillä, jolloin saatiin L-valyyli-L-proliini-bentsyylieste-·· rihydrokloridia (14,56 g) .

sp. : 66-69°C

TLC Rf: 0,55 (CHCl3:MeOH = 10:1) 30

Valmiste 9

Liuos, jossa oli N-4-(metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli-L-valyyli-L-proliini-bentsyyliesteriä (18,53 g) metanolis-35 sa (150 ml) hydrattiin 10 % palladium/hiilellä (1,0 g) vedyn 3 ilmakehän paineessa 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Katalyytti poistettiin suodattamalla, minkä jälkeen suodos haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 4- 106379 22

(metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli-L-valyyli-L-proliinia (14,20 g). sp. : 68-71°C

TLC Rf: 0,27 (CHCl3:MeOH = 10:1) 5

Valmiste 10

Liuokseen, jossa oli oksalyylikloridia (0,82 ml) dikloori-metaanissa (5 ml) lisättiin dimetyylisulfoksidia (1,34 ml) 10 ja liuosta, jossa oli 3(RS)-[[4-(4-metoksikarbonyyli)fe- nyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluo-ri-2(RS)-hydroksi-4-metyylipentaania (2,5 g) dikloorime-taanissa (10 ml) -70°C:ssa peräkkäin. Seosta sekoitettiin yksi tunti -40°C:ssa, minkä jälkeen lisättiin trietyyli-15 amiinia (2,63 ml). Seosta sekoitettiin vielä 30 minuuttia samassa lämpötilassa ja pestiin 0,5N suolahapolla (15 ml) ja 5 % natriumbikarbonaatin vesiliuoksella (15 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin silikageelillä 20 (50 g) pylväskromatograafisesti (kloroformi:metanoli =

50:1), jolloin saatiin 3(RS)-[[4-(4-metoksikarbonyyli)-fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-tri-fluori-4-metyyli-2-oksopentaania (2,18 g), sp.: 67-70°C

25 TLC Rf: 0,51 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Valmiste 11

Liuokseen, jossa oli 3(RS)-[[4-(4-metoksikarbonyyli)fenyy-30 likarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (2,1 g) metanolissa (40 ml) lisättiin IN vesipitoista natriumhydroksidia (15 ml) jää-hauteessa jäähdyttäen. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 2 tuntia, minkä jälkeen metanoli haihdutettiin. Kon-35 sentraatti pestiin eetterillä (30 ml), sitten tehtiin hap-pameksi pH-arvoon 2 IN suolahapolla. Vesiliuos uutettiin etyyliasetaatilla (20 ml). Uute pestiin kyllästetyllä suo-laliuolsella (10 ml), kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin 3(RS)-[(4-kar- 106379 23

boksifenyylikarbonyyli)-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (1,94 g), sp.: 215-220°C

TLC Rf: 0,63 (CHC13 :MeOH:AcOH = 8:2:1) 5

Seuraavat yhdisteet valmistettiin valmistusmenetelmän 11 mukaisella tavalla.

Valmiste 12 10

3(R tai S)-[[4-(Karboksi)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli] amino-1,1,1-trifluori-2(R tai S)-hydroksi-4-me-tyylipentaani (0,61 g) sp.: 266-269°C

15 TLC Rf: 0,42 (bentseeni:EtOAc:AcOH = 20:20:1) [aio2: -49,71° (C=0,1, Me OH)

Valmiste 13 20 3(R tai S)-[[4-(Karboksi)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-

prolyyli] amino-1,1,1-trifluori-2(R tai S)-hydroksi-4-metyylipentaani sp. : 265-268 °C

TLC Rf: 0,40 (bentseeni:EtOAc:AcOH = 20:20:1) 25 [a]o2: -64,25° (C=0,16, Me OH)

Valmiste 14

Liuos, jossa oli 28 % natriummetoksidia metanolissa 30 (3,0 ml) lisättiin huoneenlämpötilassa liuokseen, jossa oli 3(RS)-amino-1,1,1-trifluori-2(RS)-hydroksi-4-metyyli-pentaani-hydrokloridia (3,2 g) etanolissa (30 ml). Saostu- nut natriumkloridi poistettiin suodattamalla, minkä jäl keen suodokseen lisättiin (2R,3R)-L-viinihappoa (2,3 g).

> 35 Seosta lämmitettiin kunnes viinihappo liukeni ja suodatet tiin. Suodoksen annettiin seistä 5 tuntia huoneenlämpötilassa. Saostunut kiteinen kiinteä aines (1,94 g) otettiin talteen suodattamalla ja liuotettiin IN vesipitoiseen nat-riumhydroksidiin. Liuos uutettiin etyyliasetaatilla 106379 24 {10 ml) ja uute sekoitettiin 4N vetykloridin kanssa etyyliasetaatissa. Etyyliasetaatti poistettiin, minkä jälkeen jäännös tehtiin jauhemaiseksi di-isopropyylieetterillä (10 ml), jolloin saatiin 3(R tai S)-amino-1,1,1-trifluori-5 2(R tai S)-4-metyylipentaani-hydrokloridia (1,03 g).

sp.: 165-170°C

TLC Rf: 0,50 (CHCl3:MeOH - 10:1) [a ]l2: +11,39° (C=0,13 , MeOH) 10 Seuraava yhdiste valmistettiin valmistusmenetelmän 14 mukaisella tavalla.

Valmiste 15 15 3(R tai S)-Amino-1,1,1-trifluori-2(R tai S)-4-metyylipen-

taani- hydrokloridi sp.: 165-170°C

TLC Rf: 0,55 (CHCl3:MeOH = 10:1) [oOd2: -10,56° (C=1,05 , MeOH) 20

Valmiste 16

Liuokseen, jossa oli metyyli p-aminobentsoaattia (0,4 g) tetrahydrofuraanissa (10 ml) lisättiin trikloorimetyyli-25 kloroformiaattia (0,31 g) ja seoksen annettiin seistä yön yli huoneenlämpötilassa. L-Valiini-bentsyyliesteriä • · (0,54 g) lisättiin liuokseen ja seoksen pH neutraloitiin trietyyliamiinilla. Sekoitettiin 30 minuuttia huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen seos väkevöitiin alipaineessa ja 30 jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (10 ml). Uute pestiin IN suolahapolla (10 ml) ja vesipitoisella natriumbikarbonaatilla (10 ml) ja väkevöitiin kuiviin, jolloin saatiin 4-(metoksikarbonyyli)fenyyliaminokarbonyyli-L-valiini-bentsyyliesteriä (1,17 g).

35 TLC Rf: 0,55 (CHCl3:MeOH = 10:1, tilavuus/tilavuus)

Valmiste 17 25 106379 4-(Metoksikarbonyyli)fenyyliaminokarbonyyli-L-valiinia ' (0,83 g) valmistettiin 4-(metoksikarbonyyli)fenyyliamino- 5 karbonyyli-L-valiini-bentsyyliesteristä (1 g) valmistusmenetelmän 9 mukaisella tavalla.

TLC Rf: 0,3 (CHC13:MeOH:H20 = 65:25:4) öljy

Valmiste 18 10 [4-(Metoksikarbonyyli)fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L-proliini-bentsyyliesteriä (1,0 g) valmistettiin 4-(metoksikarbonyyli) fenyyliaminokarbonyyli-L-valiinista (0,83 g) ja L-proliini-bentsyyliesterihydrokloridista (0,65 g) val-15 mistusmenetelmän 1 mukaisella tavalla.

TLC Rf: 0,60 (CHCl3:MeOH = 10:1) öljy

Valmiste 19 20 [4-(Metoksikarbonyyli)fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L- proliinia (0,69 g) valmistettiin [4-(metoksikarbonyyli)-fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L-proliini-bentsyylies-teristä (1,0 g) valmistusmenetelmän 9 mukaisella tavalla. TLC Rf: 0,35 (CHCl3:MeOH:H20 = 65:25:4) öljy 25

Valmiste 20 3(RS)-[[4-(Metoksikarbonyyli)fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L-propyyli]amino-1,1,1-trifluori-2(RS)-hydroksi-4-30 metyylipentaania (1,03 g) valmistettiin [4-(metoksikarbonyyli] fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L-proliinista (0,69 g) ja 3(RS)-amino-1,1,1-trifluori-2(RS)-hydroksi-4-• »' metyylipentaanihydrokloridista (0,37 g) valmistusmenetel män 1 mukaisella tavalla.

35 TLC Rf: 0,45 (CHCl3:MeOH = 10:1) öljy

Valmiste 21 26 106379

3(RS)-[[4-(Metoksikarbonyyli)fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-2-okso-4-metyyli-5 pentaania (0,98 g) valmistettiin 3(RS)-[[4-(metoksikarbonyyli) fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1, 1, 1-trifluori-2(RS)-hydroksi-4-metyylipentaanista (1,0 g) valmistusmenetelmän 10 mukaisella tavalla, sp. : 90 -100°C

10 TLC Rf: 0,50 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Valmiste 22 3(RS)-[[4-(Karboksi)fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L-15 prolyyli]amino-1,1,l-trifluori-2-okso-4-metyylipentaania (0,2 g) valmistettiin 3(RS)-[[4 -(metoksikarbonyyli)fenyyliaminokarbonyyli] -L-valyyli-L-prolyyli]amino]-1,1,1-tri-fluori-2-okso-4-metyylipentaanista (0,3 g) valmistusmenetelmän 11 mukaisella tavalla.

20 sp. : 125-130°C

TLC Rf: 0,50 (CHCl3 : MeOH : H20 = 65:25:4)

Valmiste 23 25 Liuokseen, jossa oli N-(tert-butoksikarbonyyli)-L-valiinia (4,35 g) ja trietyyliamiinia (2,13 g) kuivassa CH2Cl2:ssa (40 ml) lisättiin isobutyylikloroformiaattia (2,87 g) -20°C:ssa. Sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia, minkä jälkeen liuos, jossa oli N-(2-indanyyli)glysiini-30 bentsyyliesteriä (5,37 g) kuivassa CH2Cl2:ssa (20 ml) lisättiin -20°C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin -10°C-.ssa yksi tunti, sitten huoneenlämpötilassa 4 tuntia. Reaktio-,·, seos haihdutettiin alipaineessa, minkä jälkeen jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (100 ml) ja pestiin kylläs-35 tetyllä vesipitoisella natriumbikarbonaatilla (100 ml x 2). Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin silika-geelillä (50 g) pylväskromatograafisesti (CHCl3:AcOEt = 10:1), jolloin saatiin N-(tert-butoksikarbonyyli)-L- 106379 27 valyyli-N-(2-indanyyli)glysiini- bentsyyliesteriä (2,20 g) öljynä.

TLC Rf: 0,78 (Heksaani:AcOEt = 2:1) 5 Valmiste 24

L-Valyyli-N-(2-indanyyli)glysiini-bentsyyliesterihydroklo-ridia (1,83 g) valmistettiin N-(tert-butoksikarbonyyli)-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysiini-bentsyyliesteristä (2,14 10 g) valmistusmenetelmän 8 mukaisella tavalla, sp. : 162 -163°C

TLC Rf: 0,58 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Valmiste 25 15 N-[4-(Metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysiini-bentsyyliesteriä (1,24 g) valmistettiin L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysiini-bentsyyliesterihydroklo-ridista (1,80 g) ja tereftaalihappo-monometyyliesteristä 20 (0,86 g) valmistusmenetelmän 1 mukaisella tavalla, sp. : 72-76°C TLC Rf: 0,29 (CHC13)

Valmiste 26 25

N-[4-(Metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysiiniä (0,83 g) valmistettiin N-[4-(metoksikarbonyyli) fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-(2indanyyli)-glysiini-bentsyyliesteristä (1,20 g) valmistusmenetelmän 9 30 mukaisella tavalla, sp. : 163 -164°C

TLC Rf: 0,48 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Valmiste 27 35 3(RS)-[[4-(Metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli]amino-1,1,1-trifluori-2(RS)-hyd-roksi-4-metyylipentaania (1,06 g) valmistettiin N-[4-(metoksikarbonyyli) fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyy- 106379 28

li)glysiinistä (0,80 g) ja 3(RS)-amino-1,1,1-trifluori-2(RS)-hydroksi-4-metyylipentaani-hydrokloridista (385 mg) valmistusmenetelmän 1 mukaisella tavalla, sp.: 76-78°C

5 TLC Rf: 0,71 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Valmiste 28 3(RS)-[[4-(Metoksikarbonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-10 N-(2-indanyyli)glysyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (0,84 g) valmistettiin 3(RS)-[[4-(metoksikarbonyyli) fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)-glysyyli]amino-1,1,1-trifluori-2(RS)-hydroksi-4-metyyli-pentaanista (1,03 g) valmistusmenetelmän 10 mukaisella 15 tavalla.

sp.: 62-64°C

TLC Rf: 0,74 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Valmiste 29 20

3(RS)-[(4-Karboksifenyylikarbonyyli)-L-valyyli-N-(2-inda-nyyli)glysyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-taania (0,76 g) valmistettiin 3(RS)-[[4-(metoksikarbonyyli) fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli]-25 amino-1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaanista (0,83 g) valmistusmenetelmän 11 mukaisella tavalla, sp. : 84 -86°C

TLC Rf: 0,15 (CHCl3:MeOH = 10:1) 30 Esimerkki 1

Seokseen, jossa oli glysiinibentsyyliesteri-p-tolueenisul-fonaattia (66 mg) ja 3(RS)-[(4-karboksifenyylikarbonyyli)-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-35 oksopentaania (100 mg) DMF:ssä (6 ml) lisättiin HOBT:ä (26 mg) ja WSCD:ä (30 mg) jäähauteessa jäähdyttäen. Sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia, minkä jälkeen seos väkevöitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (30 ml) ja pestiin 5 % vesipitoisella sitruunaha- 106379 29 polla (20 ml), vedellä (20 ml), 5 % vesipitoisella natriumbikarbonaatilla (20 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (20 ml). Liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 3 (RS)-[[4-5 [(bentsyylioksikarbonyyli)metyyliaminokarbonyyli]fenyyli-

karbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (125 mg). sp. : 77-78°C

TLC Rf: 0,56 (CHCl3:MeOH = 10:1) 10

Seuraavat yhdisteet valmistettiin esimerkin 1 mukaisella tavalla.

Esimerkki 2 15

3(RS)-[[4-[[2-(4-Morfolino)etyyli]aminokarbonyyli]fenyyli-karbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaani sp.: 98-102°C

2 0 TLC Rf: 0,24 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Esimerkki 3

3(RS)-[[4-[(3-Bentsoyylimetoksikarbonyyli)propyyliamino-25 karbonyyli]fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1, 1 , ltrifluori-4-metyyli-2-oksopentaani sp . : 70 -73°C

TLC Rf: 0,71 (CHCl3: MeOH = 10:1) 30 Esimerkki 4

Liuokseen, jossa oli oksalyylikloridia (0,09 ml) dikloori-.·' metaanissa (2 ml) lisättiin peräkkäin dimetyylisulfoksidia (0,15 ml) ja liuosta, jossa oli 3(R tai S)-[[4(bentsyyli-35 oksikarbonyylimetyyliaminokarbonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-2(R tai S)-hydr-oksi-4-metyylipentaania (0,35 g) dikloorimetaanissa (4 ml) 70°C:ssa. Seosta sekoitettiin yksi tunti -40°C:ssa, minkä jälkeen lisättiin trietyyliamiinia (0,29 ml). Seosta se- 106379 30 koitettiin vielä 30 minuuttia samassa lämpötilassa ja pestiin 0,5N suolahapolla (15 ml) ja 5 % natriumbikarbonaatin vesiliuoksella (15 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös 5 puhdistettiin silikageelillä (20 g) pylväskromatograafi-sesti (kloroformi:metanoli = 50:1), jolloin saatiin 3(R tai S)-([4-(bentsyylioksikarbonyylimetyyliaminokarbonyy-li)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-2-okso-4-metyylipentaania (0,22 g).

10 sp. : 159 -161°C

TLC Rf: 0,63 (CHCl3:MeOH = 10:1) [0]2d2: -39,66° (C=0,105, MeOH)

Seuraava yhdiste valmistettiin esimerkin 4 mukaisella ta-15 valla.

Esimerkki 5

3(R tai S)-[[4- (Bentsyylioksikarbonyylimetyyliaminokarbo-20 nyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-2-okso-4-metyylipentaani sp.: 141-143°C

TLC Rf: 0,68 (CHCl3:MeOH = 10:1) [0]2d2: -41,90° (C=0,15, MeOH) 25

Esimerkki 6 • ·

Liuos, jossa oli 3(RS)-[[4-[(bentsyylioksikarbonyyli)-metyyliaminokarbonyyli]fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-30 prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (70 mg) metanolin (10 ml) ja veden (1 ml) seoksessa hyd-rattiin 10 % palladium/hiilellä (1,0 g) vedyn 3 ilmakehän .· paineessa 3 tuntia huoneenlämpötilassa. Katalyytti pois

tettiin suodattamalla, minkä jälkeen suodos haihdutettiin 35 alipaineessa, jolloin saatiin 3(RS)-[[4-(karboksimetyyli-aminokarbonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]-amino-1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (61 mg), sp.: 99-103°C

TLC Rf: 0,17 (CHCl3 : MeOH: AcOH = 8:1:1) 106379

Esimerkki 7 31

Liuokseen, jossa oli 3(RS)-[[4-[(3-bentsoyylimetoksikarbo-nyyli)propyyliaminokarbonyyli]fenyylikarbonyyli]-L-valyy-5 li-L-prolyyli]amino-1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-taania (120 mg) etikkahapossa (5 ml) lisättiin sinkkijau-hetta (120 mg) jäähauteessa jäähdyttäen. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 2 tuntia, minkä jälkeen sinkki poistettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin alipai-10 neessa, jolloin saatiin 3(RS)-[[4-[(3-karboksipropyyli)-aminokarbonyyli]fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]-amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (95 mg), sp.: 84-86°C

TLC Rf: 0,32 (CHC13:MeOH:AcOH = 8:1:1) 15

Seuraavat yhdisteet valmistettiin esimerkin 6 mukaisella tavalla.

Esimerkki 8 20

3(R tai S)-[[4-(Karboksimetyyliaminokarbonyyli)fenyyli-karbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-2-okso-4-metyylipentaani sp.: 75-120°C

25 TLC (RP-18 WF254S (E. Merck valmistanut)

Rf: 0,55 (MeOH: H20 = 6:5) [a]p2: -35,10° (C=0,105, MeOH)

Esimerkki 9 30 3(R tai S)-[[4-(Karboksimetyyliaminokarbonyyli)fenyylikarbonyyli] -L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-2- ·. okso-4-metyylipentaani

sp.: 90 - 110°C

35 TLC (RP-18 WF254S (E. Merck valmistanut)

Rf: 0,50 (MeOH: H20 =6:5) [α]ρ2: -50,04° (C=0,115, MeOH) 106379

Esimerkki 10 32

Liuokseen, jossa oli 3 (RS)- [ [4-(karboksimetyyliaminokarbo-nyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-5 trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (0,50 g) vedessä (10 ml) lisättiin IN vesipitoista natriumhydroksidia (0,88 ml) huoneenlämpötilassa. Liuos lyofilisoitiin, jolloin saatiin lähtöaineen natriumsuolaa (0,52 g), sp.: >230°C

10 TLC Rf: 0,17 (CHCl3 : MeOH: AcOH = 8:1:1)

Seuraava yhdiste valmistettiin esimerkin 10 mukaisella tavalla.

15 Esimerkki 11

3(RS)- [ [4- [(3-karboksipropyyli)aminokarbonyyli]fenyylikarbonyyli] -L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaanin natriumsuola 20 sp. : 66-69°C

TLC Rf: 0,32 (CHCl3:MeOH:AcOH = 8:1:1)

Esimerkki 12 25 Liuokseen, jossa oli 3 (RS)-[ [4-[ [2- (4-morfolino) etyyli] -aminokarbonyyli]fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]-amino-l,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (80 mg) 1,4-dioksaanissa (1 ml) lisättiin 4N vetykloridia diok-saanissa (0,1 ml). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 10 minuuttia ja haihdutettiin, jolloin saatiin 3(RS)-[[4- [[2-(4-morfolino)etyyli]aminokarbonyyli]fenyylikarbonyyli] -L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli- e ·, 2-oksopentaani-hydrokloridia (83 mg) .

sp. : 64 -65°C

35 TLC Rf: 0,24 (CHCl3:MeOH = 10:1) 106379

Esimerkki 13 33 3(RS)-[[4-(Bentsyylioksikarbonyylimetyyliaminokarbonyyli)-fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-5 trifluori-2-okso-4-metyylipentaania (0,25 g) valmistettiin 3(RS)-[[4-(karboksi)fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli] amino-1,1,l-trifluori-2-okso-4-metyylipentaanista (0,2 g) ja glysiinibentsyyliesteripara-tolueenisulfonaa-tista (0,13 g) esimerkin 1 mukaisella tavalla.

10 sp.: 65-70°C

TLC Rf: 0,15 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Esimerkki 14 15 3(RS)-[[4-(Karboksimetyyliaminokarbonyyli)fenyyliamino karbonyyli] -L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,l-trifluori-2-okso-4-metyylipentaania (0,14 g) valmistettiin 3 (RS)-[[4-(bent syylioks ikarbonyylimetyyliaminokarbonyyli)fenyyliami-nokarbonyyli)]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-20 2-okso-4-metyylipentaanista

(0,2 g) esimerkin 6 mukaisella tavalla, sp.: 98-128°C

TLC Rf: 0,25 (CHCl3 : MeOH : H20 = 65:25:4) 25 Esimerkki 15 '* 3(RS)-[[4-[(Bentsyylioksikarbonyyli)metyyliaminokarbonyy- li]fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli]-amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (250 mg) 30 valmistettiin glysiinibentsyyliesteri-p-tolueenisulfonaa-tista (118 mg) ja 3(RS)-[(4-karboksifenyylikarbonyyli)-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli]amino-1,1,l-trifluori-4-- / metyyli-2-oksopentaanista (206 mg) esimerkin 1 mukaisella tavalla.

35 sp. : 64-66°C

TLC Rf: 0,81 (CHCl3:MeOH = 10:1) valkoinen jauhe

Esimerkki 16 106379 34 3(RS)-[[4-(Karboksimetyyliaminokarbonyyli)fenyylikarbo-nyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli]amino-1,1,l-tri-5 fluori-4-metyyli-2-oksopentaania (195 mg) valmistettiin 3(RS)-[[4-[(bentsyylioksikarbonyyli)metyyliaminokarbonyy-li] fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli]-amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaanista (220 mg) esimerkin 6 mukaisella tavalla.

10 sp. : 88 - 91°C

TLC Rf: 0,2 5 (CHC13:MeOH:AcOH = 16:1:1)

Esimerkki 17 15 3(RS)-[[4-(karboksimetyyliaminokarbonyyli)fenyylikarbo

nyyli] -L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaanin natriumsuolaa (160 mg) valmistettiin esimerkin 10 mukaisella tavalla, sp. : 2 03 -2 05°C

20 TLC Rf: 0,25 (CHCl3: MeOH: AcOH = 16:1:1)

Esimerkki 18 3(RS)-[[4-[ [2-(4-Morfolino)etyyli]aminokarbonyyli]fenyyli-25 karbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-olsopentaania (180 mg) valmistettiin 4 -(2-aminoetyyli)morfoliinista (46 mg) ja 3(RS)-[(4-kar-boksifenyylikarbonyyli)-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli] amino-1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaanista 30 (206 mg) esimerkin 1 mukaisella tavalla,

sp. : 76-80°C

TLC Rf: 0,38 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Esimerkki 19 35 3(RS)- [ [4-[ [2-(4-morfolino)etyyli]aminokarbonyyli]fenyyli-karbonyyli]-L-valyyli-N-(2-indanyyli)glysyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaanin hydrokloridia (170 mg) valmistettiin esimerkin 12 mukaisella tavalla.

106379 35

sp. : 96-99°C

TLC Rf: 0,38 (CHCl3:MeOH = 10:1)

Esimerkki 20 5 3(RS)-[[4-(etoksikarbonyyli)metyyliaminokarbonyyli]fenyy-likarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania valmistettiin esimerkin 1 mukaisella tavalla.

10 sp.: 96-99°C

Esimerkki 21

Liuokseen, jossa oli 3(RS)-[[4-(etoksikarbonyyli)metyyli-15 aminokarbonyyli]fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]-amino-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentaania (5,0 g) metyleenikloridissa (60 ml), metanolissa (10 ml) ja vedessä (25 ml) lisättiin vesipitoista natriumhydroksidia (NaOH

0. 6 g vedessä (5 ml)) jäähauteessa jäähdyttäen. Reaktio-20 seosta sekoitettiin 0-10°C:ssa 10 minuuttia, minkä jälkeen sen pH säädettiin arvoon 9 6N suolahapolla ja sitten vesi-liuos pestiin metyleenikloridilla (60 ml). Vesiliuokseen lisättiin natriumkloridia (5 g) ja etyyliasetaattia (60 ml), ja sitten seos tehtiin happameksi pH-arvoon 2 6N 25 suolahapolla. Etyyliasetaattiliuos pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella (30 ml), kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin alipaineessa tilavuuteen 20 ml. Väkevöity liuos lisättiin tipoittain isopropyylieetteriin (225 ml) huoneenlämpötilassa. Sakka suodatettiin ja sitten kuivat-30 tiin, jolloin saatiin 3(RS)-[[4 -(karboksimetyyliaminokar-bonyyli)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino- 1, 1 , 1-trif luori-4 -metyyli - 2 -oksopentaania (3,24 g).

/ sp.: 99-103°C

106379 36

Patenttivaatimukset 1. Menetelmä valmistaa ihmisen valkosoluelastaasi-inhi-biittorina käytettäviä trifluorimetyyliketonijohdoksia tai 5 niiden suolaa, joilla yhdisteillä on kaava (I) /_ R2 R3 /ΓΛ 1 i RX-NHC0 ( ) X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 (I) 10 jossa R1 on (C1-Cg)-alkyyli, joka on substituoitu karbok- silla, esteröidyllä karboksilla valittuna ryhmästä (C]_-C6) -alkoksikarbonyyli, fenyyli (C]_-C6) -alkoksikarbonyyli 15 ja bentsoyyli (C^-Cg)-alkoksikarbonyyli; tai morfoliino- (C1-C6)-alkyyli, 2 3 R ja R ovat molemmat xsopropyyli, X on - tai -NH-, ja 2 0 Y on -9 - Οψ -nch2- 25 tunnettu siitä, että < » 1) saatetaan kaavan (II) mukainen yhdiste tai sen suola 30 r2 r3 1 1 h 00c—( y- x-conhchco-y-conhchcocf3 (id reagoimaan kaavan 35 r1-nh2 (III) mukaisen yhdisteen tai sen suolan kanssa, 106379 37 2) hapetetaan kaavan (IV) mukainen yhdiste tai sen suola _ R2 R3 5 R^NHCO—y-X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 (Iv

OH

3) de-esteröidään kaavan (Ia) mukainen yhdiste tai sen 10 suola _ R2 R3

Rg -NHCO (/ y—X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 (Ia) 15 4) pelkistetään kaavan (Ie) mukainen yhdiste tai sen suola N02—^ CH2NHCO—^ CONHCHCOJ^3 (Ie) 2 ^ conhchcocf3 tai 5) saatetaan kaavan (Ie) mukainen yhdiste tai sen suola 25 >_ R2 R3

/T\ I I

HOOC-rJ.-NHCO—( f- X-CONHCHCO-Y-CONHCHCOCF3 de) 30 reagoimaan kaavan (Ra)2NH (V) mukaisen yhdisteen tai sen suolan kanssa, 35 jolloin edellisissä kaavoissa R* on mono- tai di-esteröity karboksi(C^-Cg)-alkyyli , R^ on (C^-Cg)-alkyleeni, R^ on (C^-Cg)-alkyyli, ja R -R , X ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä.

106379 38 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu sii- 12 3 tä, että R , R ja R tarkoittavat samaa kuin edellä, X on - ja Y on 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että 10 R1 on karboksimetyyli, X on - ja Y on _

~Y

15 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 3{RS)-[[4-(karboksimetyyliaminokarbonyyli)fenyylikarbon-yyli]-L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyy-li-2-oksopentaani, tunnettu siitä, että käytetään vastaa- 20 via lähtöaineita.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 3(RS)-[[4-karboksimetyyliaminokarbonyyli)fenyylikarbon-yyli] -L-valyyli-L-prolyyli]amino-1,1,1-trifluori-4-metyy-25 li-2-oksopentaanin natriumsuola, tunnettu siitä, että käy-• tetään vastaavia lähtöaineita.