FI105815B - Spikamysiinijohdannaisten valmistusmenetelmä ja siinä käytettävät välituotteet - Google Patents

Spikamysiinijohdannaisten valmistusmenetelmä ja siinä käytettävät välituotteet Download PDF

Info

Publication number
FI105815B
FI105815B FI923170A FI923170A FI105815B FI 105815 B FI105815 B FI 105815B FI 923170 A FI923170 A FI 923170A FI 923170 A FI923170 A FI 923170A FI 105815 B FI105815 B FI 105815B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
purine
spicaminylamino
acid
mixture
added
Prior art date
Application number
FI923170A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI923170A0 (fi
FI923170A (fi
Inventor
Noboru Otake
Hiroyuki Kawai
Tomiko Kawasaki
Atsuo Odagawa
Masaru Kamishohara
Teruyuki Sakai
Original Assignee
Kirin Brewery
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kirin Brewery filed Critical Kirin Brewery
Publication of FI923170A0 publication Critical patent/FI923170A0/fi
Publication of FI923170A publication Critical patent/FI923170A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI105815B publication Critical patent/FI105815B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/02—Heterocyclic radicals containing only nitrogen as ring hetero atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

105815
Spikamysiinijohdannaisten valmistusmenetelmä ja siinä käytettävät välituotteet
Keksinnön taustaa * Käyttöala 5 Tämä keksintö koskee spikamysiinijohdannaisten valmistusmenetelmää, jolla on kasvaintenvastaista aktiivisuutta ja joka on käyttökelpoinen lääkkeisiin.
Tekniikan taso Tähän mennessä keksinnön tekijät ovat löytäneet spikamysiinin, jota esittää seuraa-va kaava:
R3-NHCH2CONH
o~°\ \jfe /
OH OH
NH
Co 10 jossa R3 esittää ryhmää (CH3)2CH(CH2)nCO- (n = 8-14) tai ryhmää CH3(CH2)mCO-" (m = 10-16), ja R4 esittää ryhmää CH2OHCH(OH)- (ks. JP-patenttijulkaisu 161396/1984).
Tämän keksinnön tekijät ovat myös todenneet Spicamycin X:n, jossa on 12 hiiliato- • 15 mia rasvahapposivuketjussaan, spikamysiiniyhdisteeksi, jolla on alhainen toksisuus ja suurempi terapeuttinen kerroin, sekä myös yhdistyneeksi komponentiksi, niin että - .. yhdistettä voidaan käyttää kliinisesti kasvaintenvastaisena aineena (ks. patenttihake mus PCT/JP90/00781).
Spikamysiinin rakenteessa spesifinen aminoheptoosi, jota tässä kutsutaan spikamii-20 niksi, on sitoutunut aminoryhmään puriinin 6-asemassa, glysiini on sitoutunut ami-disidoksella aminoryhmään spikamiinin 4-asemassa, ja rasvahappo on edelleen si-.. toutunut amidisidoksella glysiinin aminoryhmään.
2 105815
Yhdisteinä, joilla on samanlainen rakenne kuin spikamysiinillä, ovat tunnettuja septasidiini, joka on isomeeri spikamiinin 2-asemassa (ks. US-patentit 3 155 647 ja 3 264 195) Ja septasidiinin analogit [Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 845-849 (1965)]. Näillä yhdisteillä ei kuitenkaan ole kasvaintenvastaista aktiivisuutta 5 L1210 hiirileukemiaa ja Walker 256 rotan sarkoomaa vastaan [ks. Journal of Medi cinal Chemistry, 20 (11), 1362 (1977); Nucleoside Antibiotics, Wiley-Interscience, New York, N.Y., s. 256 (1970)], jolloin niillä on kapea kasvaintenvastainen kirjo.
Edellä kuvattuihin hyvin tunnettuihin yhdisteisiin liittyy ongelmia, jotka on ratkaistava, ja niinpä niitä ei nykyään käytetäkään kliinisesti.
10 Keksinnön kuvaus
Keksinnön yhteenveto Tämän keksinnön tarkoituksena on tarjota käyttöön uusi yhdiste, jolla on erinomainen kasvaintenvastainen aktiivisuus sekä korkea terapeuttinen kerroin, joka osoittaa sen tehokkaan annoksen alueen leveyttä.
15 Tämän keksinnön tekijät ovat suorittaneet vilpittömiä tutkimuksia spikamysiiniyh-disteillä pannen painoa eläinkokeisiin, erityisesti ihmisen kasvaimen xenograft-mal-liin, jonka on todistettu hyvin vastaavan kasvaintenvastaisten aineiden kliinistä tehokkuutta [Cancer Res., 35, 2790-2796 (1975); Cancer, 40, 2640-2650 (1977); Gann, 69, 299-309 (1978)]. Tuloksena näistä on todettu, että spesifisillä spikamysii-20 nijohdannaisilla voidaan saavuttaa tämän keksinnön tavoite ja saattaa se päätökseen saadun informaation pohjalta.
• ·
Toisin sanoen, tämän keksinnön mukaisesti saadut spikamysiiniyhdisteet ovat kaavan (I) esittämiä spikamysiinijohdannaisia tai niiden suoloja:
N H
rr> oh γ ηοΑϊγ7^ ° τ^π
RcJTV [ R*
Il O *2 O (I) • » 105815 3 jossa R esittää mitä tahansa substituenttia, joka on määritelty seuraavien kohtien (i)-(xi) avulla, ja Ri ja R2 toistensa kanssa erilaisia ja kumpikin on H tai OH: (i) suoraketjuinen alkyyli, jossa on 12-13 hiiliatomia, tai haarautunut alkyyli, jossa on 11-12 hiiliatomia, 5 suoraketjuinen alkenyyli, jossa on 12-13 hiiliatomia, tai suoraketjuinen alkadienyyli, jossa on 11-13 hiiliatomia, kun Rj on H ja R2 on OH; tai suoraketjuinen alkenyyli, jossa on 12-13 hiiliatomia, tai suoraketjuinen alkadienyyli, jossa on 11-13 hiiliatomia, kun Ri on OH ja R2 on H, 10 (ii) suoraketjuinen halogeenialkyyli, jossa on 10-15 hiiliatomia, (iii) CH3(CH2)„CH(OH)- tai CH3(CH2)n.1CH(OH)-CH2-, jossa n merkitsee kokonaislukua 9-13, (iv) alkyyli, jossa on atsidiryhmä tai syaaniryhmä ja jossa on 10-15 hiiliatomia, (v) suoraketjuinen alkyyli, jossa on fenoksiryhmä tai halogeenisubstituoitu fenoksi-15 ryhmä ja jossa on 10-13 hiiliatomia, (vi) CH3(CH2)aCO(CH2)b-,
II
O
CH3(CH2)b.1CH- OC(CH2)aCH3 0 tai CH3(CH2)b.2CHCH2-, OC(CH2)aCH3
O
4 105815 jossa a merkitsee kokonaislukua 0-2 ja b merkitsee kokonaislukua 10-15, (vii) CH3(CH2)cS020(CH2)d- tai CH3(CH2)d.1CH- 0S02(CH2)cCH3 < jossa c merkitsee kokonaislukua 0-3 ja d merkitsee kokonaislukua 10-15, 5 (viii) (CH3)3Si(CH2)w- tai (CH3)3Si-C=C-(CH2)8- (ix) CH3(CH2)7CHCH(CH2)7- °/\ h3c ch3 (X) CH3 (CH2)5C(CH2) ] 0-10 o (xi) Γ,-a.C=C(CH2)8-
,: V
jossa X on O tai S.
Tässä hakemuksessa kuvattu kasvaintenvastainen aine sisältää vaikuttavan määrän 15 ainakin yhtä edellä kuvatun kaavan (I) mukaista spikamysiinijohdannaista tai sen suolaa tai sisältää vaikuttavan määrän ainakin yhtä kaavan (I) mukaista spikamysiinijohdannaista sekä kantajan tai laimennusaineen.
i 105815 5
Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa. Keksinnön vaikutukset Tämän keksinnön mukaisten spikamysiiniyhdisteiden piirteitä ovat erinomainen kas-vaintenvastainen aktiivisuus sekä suuri terapeuttinen kerroin, jotka osoittavat vaiku-5 tusalueen laajuuden.
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus
Spikamysiinijohdannaiset ja niiden suolat Tämän keksinnön spikamysiinijohdannaisilla on, kuten edellä on kuvattu, kemiallinen rakenne, jota esittää kaava (I), jossa R on määritelty tarkemmin millä tahansa 10 kohdista (i)-(xi). Tässä yhteydessä ryhmässä R olevien hiiliatomien numeroihin liittyen ilmoitetaan amidisidoksen viereinen hiili olevaksi 2-asemassa, ja tämän hiilen viereiset hiilet on numeroitu peräkkäin 3-asemassa olevaksi, 4-asemassa olevaksi ja niin edelleen.
Kaavan (I) esittämät yhdisteet voivat käsittää happoadditiosuolat ja emäsadditiosuo-15 lat emäksisessä typpiatomissa ja puriinirenkaan 7-asemassa sekä OH-ryhmän, tässä järjestyksessä. Tämän keksinnön mukaiset spikamysiiniyhdisteet käsittävät myös nämä additiosuolat.
Hapot, jotka muodostavat happoadditiosuoloja, voivat olla esim. epäorgaanisia happoja, kuten vetykloridihappo, rikkihappo, typpihappo, fosforihappo ja vastaavat, ja 20 orgaanisia happoja, kuten etikkahappo, propionihappo, maleiinihappo, öljyhappo, : palmitiinihappo, sitruunahappo, meripihkahappo, viinihappo, iumaarihappo, gluta- miinihappo, pantoteenihappo, lauiyylisulfonihappo, metaanisulfonihappo ja vastaavat.
Emäsadditiosuolat voivat olla suoloja, jotka ovat muodostuneet alkalimetalliyhdis-25 teiden kanssa, kuten natriumhydroksidi, kaliumhydroksidi ja vastaavat, suoloja maa-alkalimetalliyhdisteiden kanssa, kuten kalsiumhydroksidi, magnesiumhydroksidi ja vastaavat, ammoniumsuoloja ja suoloja orgaanisten emästen kanssa, kuten trietyyli-amiini, etanoliamiini ja vastaavat.
On tarpeetonta sanoa, että kun happoadditiosuoloja ja emäsadditiosuoloja käytetään 30 lääkkeisiin, hapon ja emäksen täytyy olla farmaseuttisesti hyväksyttäviä.
6 105815
Edullisia esimerkkejä tämän keksinnön spikamysiiniyhdisteistä on kuvattu seuraa-vassa kappaleessa, joka kuvaa spikamysiinijohdannaisten valmistusta.
Spikamysiinijohdannaisten valmistus
Yhteenveto 5 (1) Kaavan (I) esittämät yhdisteet, joissa Ri = H ja R2 = OH (yhdiste A) Tämän keksinnön spikamysiinijohdannaiset tässä tapauksessa voidaan nykyään valmistaa synteettisesti kemiallisesti modifioimalla spikamysiiniaminonukleosidi, jota jäljempänä kutsutaan nimellä 6-(spikaminyyliamino)puriini ja joka saadaan hydrolysoimalla spikamysiinien seoksia, jotka on saatu viljelemällä mikro-organismia (ks. 10 patenttihakemus PCT/JP90/00781). Jotkut spikamysiinijohdannaiset voidaan saada suoraa mikrobiviljelmästä käyttäen sopivia erotusmenetelmiä. Edelleen voidaan tämän keksinnön spikamysiinijohdannaiset valmistaa myös kokonaan synteettisellä kemiallisella tavalla.
Spikamysiinien seos on saatu viljelemällä kantaa Streptomvces alanosinicus 879-15 MT3 (H79) (FERM BP-449), jonka keksinnön tekijät ovat eristäneet ja joka kanta on talletettu Fermentation Research Institute Agency of Industrial Science and Technology -laitokseen, Japaniin 19. heinäkuuta 1982. Spikamysiiniseos voidaan valmistaa tämän keksinnön tekijöiden löytämällä menetelmällä (ks. JP-patenttijulkaisu 161396/1984).
20 Samalla kun tämän keksinnön mukaiset spikamysiinijohdannaiset voidaan saada erilaisilla menetelmillä, kuten edellä kuvattiin, voidaan esim. seuraavaa menetelmää käyttää yhtenä yhdisteiden spesifisistä valmistusmenetelmistä.
6-(spikamynyyliamino)puriinin (t.s. spikamysiiniaminonukleosidin) valmistus:
Alla olevan kaavan (Ha) mukainen 6-(spikamynyyliamino)puriini saadaan epäpuh-25 taan tuotteensa suolojen muodossa erilaisten happojen kanssa hydrolysoimalla spi-'; kamysiiniseos sopivalla epäorgaanisella hapolla, kuten vetykloridihapolla tai rikki hapolla, tai sopivalla orgaanisella hapolla, kuten etikkahappo tai muurahaishappo. Spesifisesti epäpuhdas tuote saadaan liuottamalla tai suspendoimalla spikamysiiniseos hapon, kuten vetykloridihapon, alkoholi- tai vesiliuokseen ja sekoittamalla 30 seosta 20-40 °C:ssa 2-5 päivää. Epäpuhtaan tuotteen neutralointi ja sitä seuraava konsentrointi ja sen jälkeen tapahtunut puhdistus menetelmän avulla, kuten silika-geelipylväskromatografialla, partitiopylväskromatografialla, geelisuodatuksella, 105815 7 puhdistusmenetelmällä käyttäen liukoisuuseroja liuottimessa tai kiteyttämällä liuot-timesta, antaa puhdistetun 6-(spikamynyyliamino)puriinin. Näin saadulla 6-(spika-mynyyliamino)puriinilla on kemiallinen rakenne, joka on esitetty kaavalla (Ila), sekä seuraavat fysikokemialliset ominaisuudet: ^V\ oh y w HOCHj / ^ nh HO [ 5 OH (Ha) (1) Esiintymismuoto: valkoinen jauhe
(2) Sulamispiste: 180-183 °C
(3) Spesifinen rotaatio: [a]o25 =+1,2° (c = 0,25, metanolissa), (4) Alkuaineanalyysi: 10
Hiili Vety Happi Typpi Laskettu (%): 44,17 5,56 24,52 25,75 Löydetty (%): 44,42 5,71 24,27 25,60.
15 (5) Ohutkerroskromatografia ("Silica Gel 60F254H:M, Merck):
Kehitysliuotin Rf-arvo butanoli:etikkahappo:vesi=4:l:l 0,15 20 (6) Ultraviolettiabsorptiospektrit (maksimiabsorptio):
Metanoliliuoksessa: 264 nm (Ej^ 384),
Happamassa metanoliliuoksessa: 274 nm (E’^’392),
Emäksisessä metanoliliuoksessa: 272 nm (E^‘ 341), 25 (7) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekkomenetelmä): 3400,1650 cm'1.
(8) FD-massaspektri (m/z) 327 (M+l)+.
(9) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri - · (500 MHz, CD3OD + DCl:ssä) 8 105815 δΗ: 3,43 (1Η, dd, J=10,0, 10,0 Hz, H-4'), 3,62 (2H, m, H-7'), 3,72 (1H, dd, J=10,0, 10,0 Hz, H-5), 3,80 (1H, m, H-6'), 3,89 (1H, dd, J=10,0, 3,1 Hz, H-3'), 4,07 (1H, dd, J=3,l, <1 Hz, H-2'), 5,72 (1H, brs, Η-Γ), 8,20 (1H, s, H-8), 8,40 (1H, s, H-2).
(10) Molekyylikaava: C^HjgOsNö.
5 (11) Molekyylipaino: 326,3.
Yhdisteen A valmistus: Tämän keksinnön mukaisen yhdisteen A valmistamiseksi voidaan käyttää yhdistettä 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini (kutsutaan jäljempänä yhdisteeksi 10 (Ula)), jota esittää seuraava kaava (ΙΠ) ja jossa glysiini on sitoutunut sokerin 4'- asemaan edellä mainitussa 6-(spikamynyyliamino)puriinissa (kutsutaan jäljempänä yhdisteeksi (Ha)).
r^V\ OH w ho'hT^ 0 H2N/Vif O 0H (Ma)
Yhdisteen (Ula) valmistuksessa yhdiste, jossa glysiinin aminoryhmä on suojattu, 15 esim. tert.butyylioksikarbonyyliglysiini, käsitellään ensin tavallisella tavalla, kuten ·· jäljempänä kuvataan, jolloin saadaan aktiivinen esteri, jota seuraavaksi sekoitetaan 6-(spikamynyyliammo)puriinin (Ila) kanssa aproottisessa liuottimessa, kuten N,N-dimetyylifonnamidissa huoneenlämmössä, ja saadulle jäännökselle, joka saadaan poistamalla liuotin tislaamalla, voidaan sitten suorittaa sopiva erotusmenetelmä, 20 kuten pylväskromatografia sopivalla adsorbantilla, esim. silikageelillä, aktiivihiilellä . tai vastaavalla, jolloin saadaan 6-[4'-N-(N'-tert.butyylioksikarbonyyliglysyyli)spika- mynyyliaminojpuriini. Edellä mainittu aktiivinen esteri voidaan saada erilaisilla hyvin tunnetuilla menetelmillä, esim. menetelmällä, jossa paranitrofenoli lisätään tert. butyylioksikarbonyyliglysiiniin ja lisätään kondensoivaksi aineeksi vielä N,N'-25 disyk-loheksyylikarbodi-imidiä (ks. esim. julkaisu Pepuchido Gousei no Kiso To Jikken, s. 92, Maruzen, Japani).
i 105815 9 Näin saatu 6-[4'-N-(N-tert.butyylioksikarbonyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purii-ni käsitellään hapolla, kuten trifluorietikkahapolla tai vetykloridihapon metanoli-liuoksella, jolloin saadaan raakatuote yhdisteestä, josta suojaus on poistettu (Ula), jolle sitten suoritetaan puhdistus käyttäen puhdistusmenetelmää, kuten silikageeli-5 pylväskromatografia, partitiopylväskromatografia, geelisuodatus, puhdistusmenetel- * mä käyttäen liukoisuuseroja liuottimessa tai kiteyttäminen liuottimesta tai vastaavaa, jolloin saadaan 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini [yhdiste (lila)] tai sen • suola (joiden fysikokemialliset ominaisuudet on kuvattu jäljempänä).
Yhdiste A saadaan antamalla aktiivisen esterijohdannaisen, joka saadaan aktivoimal-10 la erilaisia karboksyylihappojä (vastaten ryhmiä, jotka on määritelty kohdissa (i)-(xi) R:lle kaavassa (I)) tavallisella menetelmällä kuten jäljempänä kuvataan, reagoida 6-(4'-N-glysyyliseptaminyyliamino)puriinin kanssa (yhdiste (mb)) tai sen happoadduktin kanssa, sekoittaen emäksen, kuten trietyyliamiinin tai vastaavan läsnäollessa aproottisessa liuottimessa, kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidissa tai vastaa-15 vassa (ks. esim. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 845, 1965). Edellä mainittu karboksyylihappojen aktivointi voidaan suorittaa muuttamalla erilaisia karbok-syylihappoja vastaaviksi aktiivisiksi estereiksi käyttäen paranitrofenolia, N-hydrok-sisukkiini-imidiä ja kondensoivaa ainetta, esim. N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä tai vastaavaa (ks. esim. Pepuchido Gousei no Kiso To Jikken, s. 92-100, Maruzen, 20 Japani). Spikamysiinijohdannaiset voidaan myös saada antamalla jonkin eri karbok-syylihapoista reagoida yhdisteen (lila) tai sen suolan kanssa käyttäen koplaavaa ainetta, kuten Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidiä, difenyylifosforyyliatsidia tai vastaavaa emäksen, kuten trietyyliamiini tai vastaavan läsnäollessa aproottisessa liuottimessa (ks. esim. Pepuchido Gousei no Kiso To Jikken, s. 114-124, Maruzen, Japa-25 ni).
Yhdiste A voidaan edelleen valmistaa seuraavasti: Asyyliglysiiniyhdiste saadaan menetelmällä, jossa glysiinin aminoryhmä asyloidaan millä tahansa erilaisten karboksyylihappojen halogenidilla tai menetelmällä, jossa glysiinijohdannainen, jossa karboksyylihappo on ollut suojattu, kytketään mihin tahansa karboksyylihappoon 30 käyttämällä kondensoivaa ainetta ja sitten suojaryhmä poistetaan. Asyyliglysiini muutetaan aktiiviseksi esteriksi ja se kondensoidaan yhdisteen (Ha) tai sen happoadduktin kanssa.
Spikamysiinijohdannainen voidaan myös valmistaa kondensoimalla asyyliglysiiniyhdiste ja yhdiste (Ila) tai sen happoaddukti suoraan aproottisessa liuottimessa tai • 35 käyttämällä kondensoivaa ainetta, kuten Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidi tai 1- 10 105815 etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyU)karbodi-imidihydrokloridi, 1-hydroksibentsotri-atsolin, N-hydroksisukkiini-imidin tai vastaavan läsnäollessa.
6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinin (Ilia) fysikokemialliset ominaisuudet: (1) Esiintymismuoto: valkoinen jauhe
5 (2) Sulamispiste: 195-198 °C
(3) Spesifinen rotaatio: [<x]d25 = +3,6° (c = 0,1, metanoli-vesi), (4) Alkuaineanalyysi:
Hiili Vety Happi Typpi 10 Laskettu (%): 43,86 5,52 25,04 25,58 Löydetty (%): 43,57 5,80 24,77 25,86.
(5) Ohutkerroskromatografia ("Silica Gel 60F254":llä, Merck): 15 Kehity sliuotin Rf-arvo butanoli:etikkahappo:vesi=4:1:1 0,10 (6) Ultraviolettiabsorptiospektrit:
Metanolissa: 264 nm (E^* 328), 20 (7) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekkomenetelmä): 3300, 1660 cm'1.
(8) FD-massaspektri (m/z) 384 (M+l)+.
(9) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD + DCl:ssä) δΗ: 3,60-3,90 (7H, m), 4,02 (1H, dd, J=3,0, <1 Hz, H-2'), 4,16 (1H, dd, J=10,0, 10,0 25 Hz, H-4'), 5,66 (1H, s, Η-Γ), 8,08 (1H, s, H-8), 8,28 (1H, s, H-2).
(2) Kaavan (I) esittämä yhdiste, jossa Ri = OH ja R2 = H (yhdiste B) Tämän keksinnön mukainen spikamysiinijohdannainen tässä tapauksessa voidaan nykyään valmistaa synteettisesti kemiallisesti modifioimalla septasidiiniaminonuk-leosidi, jota tässä jäljempänä kutsutaan nimellä 6-(septaminyyliamino)puriini ja joka 30 on saatu hydrolysoimalla septasidiinien seosta, joka on tuotettu viljelemällä mikro-organismia (ks. US-patentti 3 155 647). Jotkin septasidiinijohdannaiset voidaan saada suoraan mikrobiviljelmästä käyttäen sopivia erotusmenetelmiä. Lisäksi tämän keksinnön spikamysiinijohdannaiset voidaan valmistaa kokonaan synteettisesti kemiallisella menetelmällä.
11 105815
Septasidiiniseos saadaan Streptomyces fimbrias -viljelmästä (ATCC 15051). Septa-sidiiniseos voidaan saada samalla menetelmällä kuin spikamysiinijohdannaiset.
Kun tämän keksinnön mukainen yhdiste B voidaan saada, kuten edellä kuvattiin, erilaisilla menetelmillä, voidaan seuraavaa menetelmää käyttää esimerkkinä yhdis-5 teen spesifisestä valmistusmenetelmästä.
6-(septammyyliamino)puriinin valmistus: Jäljessä olevan kaavan (ITb) esittämä 6-(septaminyyliamino)puriini valmistetaan raa-katuotteena minkä tahansa hapon suolan muodossa hydrolysoimalla septasidiiniseos sopivalla hapolla, esim. epäorgaanisella hapolla, kuten vetykloridihapolla tai rikki-10 hapolla, tai orgaanisella hapolla, kuten etikkahapolla tai muurahaishapolla. Spesifisesti raakatuote saadaan liuottamalla tai suspendoimalla septasidiiniseos hapon, kuten vetykloridihapon, alkoholi- tai vesiliuokseen ja sekoittamalla seosta 20-40 °C:ssa 2-5 päivää. Raakatuotteen neutraloinnilla ja sen jälkeen konsentroinnilla, jota seuraa puhdistus jollakin puhdistusmenetelmällä, kuten silikageelipylväskroma-15 tografia, partitiopylväskromatografia, geelisuodatus, puhdistus käyttäen liukoisuus-eroja liuottimessa tai kiteytys liuottimesta tai vastaava, saadaan puhdistettu 6-(septa-minyyliamino)puriini. Näin saadulla 6-(septaminyyliamino)puriinilla on seuraavan kaavan (Ilb) esittämä kemiallinen rakenne ja seuraavat fysikokemialliset ominaisuudet:
N H
rr>
oh N
OH f 20 H (Hb) .· (1) Esiintymismuoto: valkoinen jauhe
• (2) Sulamispiste: li9-120°C
AP
(3) Spesifinen rotaatio: [a]D = +31,3° (c = 0,1, metanolissa), (4) Alkuaineanalyysi:
Hiili Vety Happi Typpi
Laskettu (%): 44,17 5,56 24,52 25,75 Löydetty (%): 44,36 5,82 24,31 25,51.
25 12 105815 (5) Ohutkerroskromatografia ("Silica Gel 60F254":llä, Merck):
Kehitysliuotin Rf-arvo butanoli:etikkahappo:vesi=4:l:l 0,15 5 (6) Ultraviolettiabsorptiospektrit (maksimiabsorptio):
Metanolissa: 264 nm (7) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekkomenetelmä): 3400,1650 cm'1.
(8) FD-massaspektri (m/z) 327 (M+l)+.
(9) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 10 (500 MHz, CD3OD + DCl:ssä) δΗ: 3,21 (1H, dd, J=10,0, 10,0 Hz, H-4'), 3,57 (1H, dd, 10,0, 10,0 Hz, H-2’), 3,63 (2H, brs, H-7'), 3,68 (1H, dd, J=10,0, 10,0 Hz, H-3'), 3,75 3,85 (2H, m, H-5',6'), 5,58 (1H, s, Η-Γ), 8,19 (1H, s, H-8), 8,35 (1H, s, H-2).
(10) Molekyylikaava: Ci2Hi805N6.
15 (11) Molekyylipaino: 326,3.
Yhdisteen B valmistus:
Yhdisteen B valmistamiseksi voidaan käyttää suoraan samaa menetelmää, joka mainittiin edellä kaavan (I) esittämän johdannaisen valmistuksessa. Toisin sanoen, 20 tämän keksinnön mukaisen yhdisteen B valmistamiseksi voidaan käyttää edellä olevaa kaavan (Illb) esittämää 6-(4'-N-glysyyliseptaminyyliamino)puriinia (kutsutaan jäljempänä yhdisteeksi (Illb)), jossa glysiini on sitoutunut sokerin 4'-asemaan edellä mainitussa 6-(septaminyyliamino)puriinissa (jota kutsutaan jäljempänä yhdisteeksi my i^V\ oh η°/Λ^/^0^7^νη H2N II OH f 25 O H (inb)
Yhdisteen (lila) valmistuksessa yhdiste, jossa glysiinin aminoryhmä on suojattu, . · esim. tert.butyylioksikarbonyyliglysiini, käsitellään ensin tavallisella menetelmällä, 105815 13 kuten jäljempänä kuvataan, jolloin saadaan aktiivinen esteri, jota sitten sekoitetaan 6-(septaminyyliamino)puriinin (Ilb) kanssa aproottisessa liuottimessa, kuten N,N-di-metyyliformamidissa tai vastaavassa, huoneenlämmössä. Jäännökselle, joka saadaan poistamalla liuotin tislaamalla, voidaan sitten suorittaa sopiva erotusmenetelmä, 5 kuten pylväskromatografia sopivalla adsorboivalla aineella, esim. silikageelillä, aktiivihiilellä tai vastaavalla, jolloin saadaan 6-[4'-N-(N'-tert.butyylioksikarbonyyli-glysyyli)septaminyyliamino]puriini. Edellä mainittu aktiivinen esteri voidaan saada * erilaisilla hyvin tunnetuilla menetelmillä, esim. menetelmällä, jossa paranitrofenolia lisätään tert.butyylioksikarbonyyliglysiiniin ja kondensoivaksi aineeksi lisätään vielä 10 N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä.
Näin saatua 6-[4'-N-(N'-tert.butyylioksikarbonyyliglysyyli)septaminyyliamino]purii-nia käsitellään hapolla, kuten trifluorietikkahapolla tai vetykloridihapon metanoli-liuoksella, ja saadusta tuotteesta poistetaan suojaus, jolloin saadaan yhdisteen (Illb) raakatuote, jolle sitten suoritetaan puhdistus jollakin puhdistusmenetelmällä, kuten 15 silikageelipylväskromatografialla, partitiopylväskromatografialla, geelisuodatuksel-la, puhdistusmenetelmällä, jossa käytetään liukoisuuseroja liuottimeen, tai kiteyttämällä liuottimesta, jolloin saadaan 6-(4,-N-glysyyliseptaminyyliammo)puriini [yhdiste (Illb)] tai sen suola.
Yhdiste B saadaan antamalla aktiivisen esterin, joka saadaan aktivoimalla mikä ta-20 hansa karboksyylihappo (vastaten ryhmiä, jotka määriteltiin kohdissa (i)-(xi) kaavan (I) R:lle), tavallisella menetelmällä, kuten jäljempänä kuvataan, reagoida 6-(4'-N-glysyyliseptaminyyliamino)puriinin (yhdiste (Illb)) tai sen happoadduktin kanssa (kuten esim. vetykloridihapon kanssa saadun happoadduktin kanssa) sekoittaen ·· emäksen, kuten trietyyliamiinin tai vastaavan läsnäollessa, aproottisessa liuottimes- 25 sa, kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidissa tai vastaavassa. Edellä mainitut karboksyyli-hapot voidaan aktivoida esim. muuttamalla erilaisia karboksyylihappoja aktiivisiksi estereiksi käyttäen p-nitrofenolia tai N-hydroksisukkiini-imidiä ja kondensoivaa ainetta, kuten N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidi tai vastaava. Spikamysiinijohdannai-nen voidaan saada myös antamalla minkä tahansa karboksyylihapon tai sen suolan 30 reagoidan koplaavan aineen, kuten Ν,Ν-disykloheksyylikarbodi-imidin, difenyyli-fosforyyliatsidin tai vastaavan kanssa, emäksen, kuten trietyyliamiinin tai vastaavan kanssa aproottisessa liuottimessa.
Edelleen yhdiste B voidaan valmistaa seuraavasti: Asyyliglysiiniyhdiste saadaan menetelmällä, jossa glysiinin aminoryhmä asyloidaan millä tahansa erilaisten kar-35 boksyylihappojen karboksyylihalogenidilla tai menetelmällä, jossa glysiinijohdan-nainen, jossa karboksyylihappo on suojattu, kytketään minkä tahansa karboksyyli- 14 105815 hapon kanssa käyttäen kondensoivaa ainetta, ja sitten poistetaan suojaiyhmä. Asyy-liglysiini muutetaan aktiiviseksi esteriksi ja se kondensoidaan yhdisteen (Ilb) tai sen happoadduktin kanssa.
Spikamysiinijohdannainen voidaan valmistaa myös kondensoimalla asyyliglysiini-5 yhdiste ja yhdiste (Ilb) tai sen happoaddukti suoraan aproottisessa huottimessa tai käyttämällä kondensoivaa ainetta, kuten Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidi tai 1-etyyli-3 -(3 -dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidihydrokloridi, 1 -hy droksi-bentso-triatsolin tai N-hydroksisukkiini-imidin tai vastaavan läsnäollessa.
6-(4'-N-glysyyliseptaminyyliamino)puriinin (mb) fysikokemialliset ominaisuudet: 10 (1) Esiintymismuoto: valkoinen jauhe
(2) Sulamispiste: 155-157 °C
(3) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +12,4° (c = 0,1, metanolissa), (4) Alkuaineanalyysi: 15 Hiili Vety Happi Typpi
Laskettu (%): 43,86 5,52 25,04 25,58 Löydetty (%): 44,06 5,30 24,81 25,83.
(5) Ohutkerroskromatografia ("Silica Gel 60F254":llä, Merck): 20 Kehitysliuotin Rf-arvo butanoli:etikkahappo:vesi=4:l:l 0,10 (6) Ultraviolettiabsorptiospektrit:
Metanolissa: 264 nm 25 (7) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekkomenetelmä): 3300,1660 cm'1.
(8) FD-massaspektri (m/z) 384 (M+H)+.
(9) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD + DCl.ssä) • * δΗ: 3,59 (1H, dd, J=10,0, 10,0 Hz, H-2'), 3,60-3,90 (7H, m), 3,96 (1H, dd, J=10,0, 30 10,0 Hz, H-4'), 5,40 (1H, brs, H-l'), 8,50 (1H, s, H-8), 8,60 (1H, s, H-2).
Tämän keksinnön mukaisten spikamysiinijohdannaisten edullisten esimerkkien rakenne voidaan esittää seuraavasti.
15 105815 Nämä yhdisteet ovat edellä mainitun kaavan (I) esittämiä, joissa ryhmä R on spesifisesti määritelty. Toisin sanoen, yhdisteillä on rakenteet, joissa seuraavat ryhmät korvaavat kaavan (I) ryhmää R.
i^V\ oh y
0 '"T^NH
RCiTV R‘
Il o R2 0 (I) 5 Tässä yhteydessä seuraavat kohdat (i)-(xi) vastaavat ryhmän R kuvauksessa mainittuja määritelmiä (i)-(xi).
(1) Yhdiste A (yhdisteitä esittää kaava (I), jossa Ri = H ja R2 = OH).
(i) ryhmä R
(1) SPM6: CH3(CH2)8- 10 6-[4'-N-(N'-dekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (2) SPM9: CH3(CH2)„- 6-[4'-N-(N'-tridekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, • · (3) SPM10: CH3(CH2)12- 6-[4,-N-(N'-tetradekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, 15 (4) SPM12: CH3(CH2)14- ·, 6-[4'-N-(N'-heksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (5) SPK9: (CH3)2CH(CH2)8- 6-[4'-N-(N'-10-metyyliundekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini (6) SPK251: (CH3)2CH(CH2)9- c 20 6-[4'-N-(N'-11 -metyylidodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini I6 105815 (7) SPK136: (CH2)2CH(CH2)10- 6- [4'-N-(Ν'-12-metyylitridekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini (8) SPK176: CH2=CH(CH2)8- 6-[4'-N-(N'-10-undekenoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini 5 (9) SPK44: CH2=CH(CH2)9- 6-[4'-N-(N'-1 l-dodekenoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (10) SPK142: CH2=CH(CH2)10- 6-[4'-N-(N'-12-tridekenoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (11) SPK106: CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7- 10 (Z) (Z:cis-tyyppi) 6-[4'-N-(N'-cis-9-oktadekenoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]pumni, (12) SPK120: CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7- (Z) (Z) 6-[4'-N-(N'-cis,cis-9,12-oktadekadienoyyligly syyli)spikamynyyliammo]puriini 15 (13) SPK231: CH3(CH2)3CH=CH(CH2>- (Z) 6-[4,-N-(N,-cis-9-tetradekenoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriiiii (14) SPK148: CH3(CH2)5CH=CH(CH2)7- : (Z) 20 6-[4'-N-(N'-cis-9-heksadekenoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]piiriini (15) SPK86: CH3(CH2)8CH=CH- (E) (E: trans-tyyppi) 6-[4'-N-(N'-trans-2-dodekenoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini 17 105815 (16) SPK156: CH3(CH2)10CH=CH- (E) 6-[4'-N-(N'-trans-2-tetradekenoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purimi (17) SPK188: CH3(CH2)12CH=CH- 5 (E) 6-[4'-N-(N'-trans-2-heksadekenoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini (18) SPK282: CH3(CH2)6CH=CHCH=CH- (E) (E) 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-dodekadienoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]piirimi 10 (19) SPK281: CH3(CH2)7CH=CHCH=CH- (E) (E) 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-tridekadienoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purimi (20) SPK241: CH3(CH2)8CH=CHCH=CH- (E) (E) 15 6-[4,-N-(N'-trans,trans-2,4-tetradekadienoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (21) SPK285: CH3(CH2)9CH=CHCH=CH- (E) (E) 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-pentadekadienoyyliglysyyli)spikamynyyliaimno]puriini, • : (22) SPK283: CH3(CH2)i0CH=CHCH=CH- 20 (E) (E) 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-heksadekadienoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, < 18 105815 (ϋ) (23) SPK64: Br(CH2)10- 6-[4'-N-(N'-1 l-bromiundekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purimi, (24) SPK152: Br(CH2),r 5 6-[4'-N-(N'-12-bromidodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (25) SPK276: Br(CH2)12- 6-[4'-N-(N'-13 -bromitridekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (26) SPK273: Br(CH2)i3- 6-[4,-N-(N'-14-bromitetradekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, 10 (27) SPK275: Br(CH2)i4- 6-[4'-N-(N'-15-bromipentadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (28) SPK272: Br(CH2)i5- 6-[4'-N-(N'-16-bromiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (29) SPK133: Cl(CH2)i0- 15 6-[4'-N-(N'-11 -klooriundekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini (30) SPK132: Cl(CH2)ir 6-[4'-N-(N'-12-klooridodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purimi (31) SPK278: C1(CH2)i2- : 6-[4'-N-(N'-13-klooritridekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini 20 (32) SPK280: C1(CH2)i3- 6- [4’-Ν-(Ν-14-klooritetradekanoyyligly syyli)spikamynyyliamino]puriini (33) SPK277: C1(CH2)i4- 6-[4,-N-(N'-15-klooripentadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini 19 105815 (34) SPK146: F(CH2)U- 6-[4'-N-(N'-12-fluoridodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriim (35) SPK279: F(CH2)13- 6-[4'-N-(N'- 14-fluoritetradekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini 5 (36) SPK247: F(CH2)14- 6-[4'-N-(N'-15-fluoripentadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini (37) SPK157: F(CH2)15- 6-[4'-N-(N'-16-fluoriheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini (38) SPK165: I(CH2)10- 10 6-[4'-N-(N'-11 -jodiundekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purimi (39) SPK258: CH3(CH2)nCHBr- 6-[4'-N-(N'-2-bromitetradekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purimi, (40) SPK153: CH3(CH2)13CHBr- 6-[4'-N-(N'-2-bromiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, 15 (41) SPK175: CH3(CH2)9CHC1- 6-[4,-N-(N'-2-klooridodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (42) SPK259: CH3(CH2)i iCHCl- 6-[4'-N-(N'-2-klooritetradekanoyyliglysyyli)spikamynyylianiino]puriini, • : (43) SPK135: CH3(CH2),3CHC1- 20 6-[4'-N-(N'-2-kIooriheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (44) SPK159: CH3(CH2)9CHF- 6-[4'-N-(N'-2-fluoridodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, 20 105815 (45) SPK233: CH3(CH2),3CHF- 6-[4'-N-(N'-2-fluoriheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (iii) (46) SPK182: CH3(CH2)nCF2- 5 6-[4'-N-(N'-2,2-difluoritetradekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini (47) SPK193: CH3(CH2)13CF2- 6-[4'-N-(N'-2,2-difluoriheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini (48) SPK87: CH3(CH2)9CH(OH)- 6-[4'-N-(N'-2-hydroksidodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purimi, 10 (49) SPK112: CH3(CH2),3CH(OH)- 6-[4,-N-(N'-2-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriim, (R) (50) SPK256: CH3(CH2)13CH(OH)- 6-[4'-N-(N'-(R)-2-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, 15 (S) (51) SPK271: CH3(CH2)13CH(OH)- 6-[4,-N-(N'-(S)-2-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (52) SPK88: CH3(CH2)8CH(OH)CH2- : 6-[4'-N-(N'-3-hydroksidodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, 20 (R) (53) SPK270: CH3(CH2)i0CH(OH)CH2- 6-[4'-N-(N'-(R)-3-hydroksitetradekanoyyliglysyyli)spikamynyyliammo]puriini, 2i 105815 (S) (54) SPK274: CH3(CH2)10CH(OH)CH2- 6-[4'-N-(N'-(S)-3-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, ' (55) SPK115: CH3(CH2)i2CH(OH)CH2- 5 6-[4'-N-(N'-3-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliainino]puriini, (iv) (56) SPK126: N3(CH2)i0- 6-[4'-N-(N'-11 -atsidoundekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (57) SPK410: N3(CH2)ir 10 6-[4'-N-(N'- 12-atsidododekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (58) SPK252: N3(CH2)i4- 6-[4'-N-(N'-15-atsidopentadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purimi, (59) SPK226: N3(CH2)15- 6-[4’-N-(N'-16-atsidoheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliainino]puriim, 15 (60) SPK229: CH3(CH2)i3CHN3- •« 6-[4'-N-(N'-2-atsidoheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (61) SPK416: CN(CH2)10- t 6-[4'-N-(N'-11 -syaaniundekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini - : (62) SPK177: CN(CH2)15- 20 6-[4'-N-(N'-16-syaaniheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini « 22 105815 (v) (63) SPK422: —O(CH2)10- 6-[4'-N-(N'-11 -fenoksiundekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini 5 (64) SPK249: ^ Q(CH2)n- 6-[4'-N-(N,-12-fenoksidodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriiiii, (65) SPK242: CH3(CH2)11CH- 0 ό 10 6-[4'-N-(N’-2-fenoksitetradekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (66) SPK186: F—^ —OiCH^n- 6-[4'-N-(N'-12-parafluorifenoksidodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (vi) 23 105815 (67) SPK228: CH3CO(CH2)15-
II
O
6-[4'-N-(N'-16-asetoksiheksadekanoyyligly syyli)spikamynyyliamino]purimi, (68) SPK173: CH3(CH2)13CH- occh3
II
5 O
6-[4'-N-(N'-2-asetoksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (69) SPK197: (S) CH3(CH2)13CH- occh3
II
0 6-[4'-N-(N'-(S)-2-asetoksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, 10 (70) SPK198: (R) CH3(CH2)13CH- occh3
II
0 . 6-[4'-N-(N'-(R)-2-asetoksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]purimi, (71) SPK189: CH3(CH2)12CHCH2- OCCH3
II
0 15 6-[4'-N-(N'-3-asetoksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]piiriini, 24 105815 (72) SPK184: CH3CH2CO(CH2)15-
O
6-[4'-N-(N'-16-propionyylioksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (73) SPK145:
CH3(CH2)2CO(CH2)n-5 O
6-[4'-N-(N'-12-butyryylioksidodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliammo]puriini, (vii) (74) SPK225: CH3S020(CH2)15- 6-[4'-N-(N'-16-metaanisulfonyylioksiheksadekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]-10 piiriini, (75) SPK230: CH3(CH2)2S020(CH2)ir 6-[4'-N-(N'-12-propaanisulfonyylioksidodekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]- puriini, (76) SPK232: CHa^H^SOjOiCH^! r . 15 6-[4'-N-(N'- 12-butaanisulfonyylioksidodekanoyyliglysyyli)spikamynyylianimo]- puriini, (77) SPK185: CH3(CH2)9CH- . 0S02(CH2)3CH3 6-[4'-N-(N'-2-butaanisulfonyylioksidodekanoyyliglysyyli)spikainynyyliamino]- 20 puriini, 25 105815 (viii) (78) SPK429: (CH3)3Si-C=C-(CH2)8- 6-[4'-N-(N'-11 -trimetyylisilyyli-10-undekynoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]-puriini, 5 (79) SPK430: (CH3)3Si-(CH2)10- i 6-[4'-N-(N'-1 l-trimetyylisilyyliundekanoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]puriini, (ix) (80) SPK123: CH3(CH2)7CHCH(CH2)7- °/\ h3c ch3 10 6-[4'-N-(N'-9,10-dioksi-9,10-Ö-isopropylideenioktadekanoyyliglysyyli)spikamy- nyyliamino]puriini, (x) (81) SPK102: CH3(CH2)5C(CH2)10- o 15 6-[4'-N-(N'-12-oksostearoyyliglysyyli)spikamynyyliamino]piirimi, (82) SPK262: : , ζλ s nC=C(CH2)8- * 6-{4'-N-[N'-l l-(2-tienyyli)-10-undekynoyyliglysyyli]spikamynyyliamino}puriini 26 105815 (83) SPK263: C=C(CH2)8- 6-{4'-N-[N'-l l-(3'-tienyyli)-10-undekynoyyliglysyyli]spikamynyyliamino}puriini (84) SPK266: C=C(CH2)8-
Q
5 O
6-{4'-N-[N'-1 l-(3'-fuiyyli)- 10-undekynoyyliglysyyli]spikamynyyliamino}puriini Tämän keksinnön spikamysiinijohdannaiset, jotka sisältävät edellä mainittuja edullisia yhdisteitä, voidaan muuttaa happoadditiosuoloiksi ja emäsadditiosuoloiksi edellä kuvatulla tavallisella tavalla.
10 (2) Yhdiste B (kaavan (I) yhdiste, jossa Ri = OH ja R2 = H)
(i) ryhmä R
(1) SPTM6: CH3(CH2)8- • 6-[4'-N-(N'-dekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (2) SPTM9: CH3(CH2)„- 15 6-[4'-N-(N'-tridekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (3) SPTM10: CH3(CH2)12- 6-[4'-N-(N'-tetradekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (4) SPTM12: CH3(CH2)i4- 6-[4'-N-(N'-heksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, 27 105815 (5) SPT9: (CH3)2CH(CH2)8- 6-[4'-N-(N'-10-metyyliundekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]purimi (6) SPT251: (CH3)2CH(CH2)9- 6-[4'-N-(N'-11 -metyylidodekanoyyliglysyyli)septammyyliamino]puriini 5 (7) SPT136: (CH3)2CH(CH2)10 6-[4'-N-(N'-12-metyylitridekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]purimi (8) SPT176: CH2=CH(CH2)8- 6-[4'-N-(Ν'- 10-undekenoyyliglysyyli)septaminyyliammo]puriini (9) SPT44: CH2=CH(CH2)9- 10 6-[4'-N-(N'-11 -dodekenoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriiiii, (10) SPT142: CH2=CH(CH2)10- 6-[4'-N-(N'-12-tridekenoyyliglysyyli)septammyyliamino]puriini, (11) SPT120: CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7- (Z) (Z) 15 6-[4'-N-(^'-cis,cis-9J2-oktadekadienoyyliglysyyli)septaininyyliamino]piiriim) « (12) SPT231: CH3(CH2)3CH=CH(CH2)7- (Z) 6-[4'-N-(N'-cis-9-tetradekenoyyliglysyyli)septainmyyliamino]piiriini • : (13) SPT 148: CH3(CH2)5CH=CH(CH2)7- 20 (Z) > 6-[4'-N-(N'-cis-9-heksadekenoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini 28 105815 (14) SPT86: CH3(CH2)8CH=CH- (E) (E: transmuoto) 6-[4'-N-(N'-trans-2-dodekenoyyliglysyyli)septaminyylianiino]puriini (15) SPT56: CH3(CH2)10CH=CH- 5 (E) 6-[4'-N-(N'-trans-2-tetradekenoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini (16) SPT188: CH3(CH2)i2CH=CH- (E) 6-[4'-N-(N'-trans-2-heksadekenoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriim 10 (17) SPT282: CH3(CH2)6CH=CHCH=CH- (E) (E) 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-dodekadienoyyliglysyyli)septaininyyliaiiiino]purimi (18) SPT281: CH3(CH2)7CH=CHCH=CH- (E) (E) 15 6-[4,-N-(N'-trans,trans-2,4-tridekadienoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini (19) SPT241: CH3(CH2)8CH=CHCH=CH- (E) (E) 6-[4'-N-(N'-trans,traiis-2,4-tetradekadienoyyliglysyyli)septaininyyliamino]puriini, : (201) SPTK285: CH3(CH2)9CH=CHCH=CH- 20 (E) (E) 6-[4'-N-(N,-trans,trans-2,4-pentadekadienoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (21) SPT283: CH3(CH2)10CH=CHCH=CH- (E) (E) 105815 29 6-[4'-N-(N,-trans,trans-2,4-heksadekadienoyyliglysyyli)septaminyyliaimno]puriini, (ϋ) (22) SPT64: Br(CH2)10- - 6-[4'-N-(N'-11 -bromiundekadienoyyligly syyli)septaminyyliamino]puriini, 5 (23) SPT152: Br(CH2)„- 6-[4'-N-(N'-12-bromidodekanoyyliglysyyli)septammyyliamino]puriini, (24) SPT276: Br(CH2)12- 6-[4'-N-(N'-13 -bromitTidekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (25) SPT273: Br(CH2)13- 10 6-[4'-N-(N'- 14-bromitetradekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (26) SPT275: Br(CH2)14- 6-[4'-N-(N'- 15-bromipentadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (27) SPT272: Br(CH2)15- 6-[4'-N-(N'-16-bromiheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, 15 (28) SPT133: C1(CH2),0- 6-[4'-N-(N'-11 -klooriundekanoyyligly syyli)septaminyyliamino]puriini (29) SPT132: Cl(CH2)ir 6-[4'-N-(N'-12-klooridodekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini : (30) SPT278: C1(CH2)12- 20 6-[4'-N-(N'- 13-klooritridekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]purimi (31) SPT280: C1(CH2)13- 6-[4'-N-(N'-14-klooritetradekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini (32) SPT277: C1(CH2)14- 30 105815 6-[4'-N-(N'-15-klooripentadekanoyyliglysyyli)septaimnyyliamino]puriini (33) SPT146: F(CH2)„- 6-[4'-N-(N'-12-fluoridodekanoyyliglysyyli)septammyyliainino]puriini (34) SPT279: F(CH2)i3- 5 6-[4'-N-(N'-14-fluoritetradekanoyyliglysyyli)septammyyliammo]puriini (35) SPT247: F(CH2)14- 6-[4'-N-(N'-15-fluoripentadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]purimi (36) SPT157: F(CH2),5- 6-[4'-N-(N'-16-fluoriheksadekanoyyliglysyyIi)septaminyyIiammo]puriini 10 (37) SPT165: I(CH2)io- 6-[4'-N-(N'-1 l-jodiundekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]purimi (38) SPT258: CH3(CH2)nCHBr- 6-[4'-N-(N'-2-bromitetradekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (39) SPT153: CH3(CH2)i3CHBr- 15 6-[4'-N-(N'-2-bromiheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (40) SPT175: CH3(CH2)9CHC1- 6-[4'-N-(N'-2-klooridodekanoyyliglysyyli)septaminyyliammo]puriini, (41) SPT259: CH3(CH2)UCHC1- : 6-[4'-N-(N'-2-klooritetradekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, 20 (42) SPT135: CH3(CH2)13CHC1- 6-[4'-N-(N'-2-klooriheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (43) SPT159: CH3(CH2)9CHF- 6-[4,-N-(N'-2-fluoridodekanoyyliglysyyli)septaimnyyliamino]puriini, 31 105815 (44) SPT233: CH3(CH2)13CHF- 6-[4'-N-(N'-2-fluoriheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (45) SPT182: CH3(CH2),,CHF2- 6-[4'-N-(N,-2,2-difluoritetradekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, 5 (46) SPT193: CH3(CH2)13CHF2- 6-[4'-N-(N'-2,2-difluoriheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (iii) (47) SPT87: CH3(CH2)9CH(OH> 6-[4'-N-(N'-2-hydroksidodekanoyyliglysyyli)septaminyyliainino]puriini, 10 (48) SPT112: CH3(CH2)i3CH(OH)- 6-[4'-N-(N'-2-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]purimi, (R) (49) SPT256: CH3(CH2)i3CH(OH)- 6-[4'-N-(N'-(R)-2-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]purimi, 15 (S) (50) SPT271: CH3(CH2)13CH(OH)- 6-[4'-N-(N'-(S)-2-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (51) SPT88: CH3(CH2)8CH(OH)CH2- . 6-[4'-N-(N'-3-hydroksidodekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, 20 (R) (52) SPT270: CH3(CH2)i0CH(OH)CH2- 6-[4'-N-(N,-(R)-3-hydroksitetradekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, 32 105815 (S) (53) SPT274: CH3(CH2)10CH(OH)CH2- 6-[4'-N-(N'-(S)-3-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)septammyyliammo]piiriini, (54) SPT115: CH3(CH2)12CH(OH)CH2- 5 6-[4'-N-(N'-3-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)septaininyylianiino]puriini, (iv) (55) SPT410: N3(CH2)10- 6-[4'-N-(N'-11 -atsidoundekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]pxiriini, (56) SPT126: N3(CH2)ir 10 6-[4'-N-(N'-12-atsidododekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (57) SPT252: N3(CH2)14- 6-[4'-N-(N'-15-atsidopentadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (58) SPT226: N3(CH2)i5- 6-[4'-N-(N'-16-atsidoheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, 15 (59) SPT229: CH3(CH2)13CHN3- 6-[4'-N-(N'-2-atsidoheksadekanoyyliglysyyli)septammyyliamino]puriim, (60) SPT416: CN(CH2)10- 6-[4'-N-(N'-11 -syaaniundekanoyyligly syyli)septaminyyliamino]puriini (61) SPT177: CN(CH2)i5- i 20 6-[4'-N-(N'-16-syaaniheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini 105815 33 (v) (62) SPT422: —OCCH^jo- 6-[4'-N-(N'-11 -fenoksiundekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini 5 (63) SPT249: A-™,.
6-[4'-N-(N'-12-fenoksidodekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (64) SPT242: CHjCCH^nCH- 0
X
10 6-[4'-N-(N'-2-fenoksitetradekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, - (65) SPT186: —OiCH^n- 6-[4,-N-(N'-12-parafluorifenoksidodekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, · (vi) 15 (66) SPT228: CH3CO(CH2)ir
II
0 6-[4'-N-(N'-16-asetoksLheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]piirimi, 34 105815 (67) SPT173: CH3(CH2)13CH- occh3
II
0 6-[4'-N-(N'-2-asetoksiheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliaimno]puriini, (68) SPT197: (S) CH3(CH2)13CH- occh3
II
5 o 6-[4'-N-(N'-(S)-2-asetoksiheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (69) SPT198: (R) CH3(CH2)13CH- occh3
II
0 6-[4'-N-(N'-(R)-2-asetoksiheksadekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, • · 10 (70) SPT189: CH3(CH2)12CHCH2- occh3
II
o 6-[4'-N-(N'-3-asetoksiheksadekanoyyliglysyyli)septammyyliamino]purimi, 35 105815 (71) SPT184: CH3CH2CO(CH2)15-
O
6-[4'-N-(N'-16-propionyylioksiheksadekanoyyliglysyyli)septaimnyyliamino]purimi, f (72) SPT145:
CH3(CH2)2CO(CH2)ir 5 O
6-[4'-N-(N'-12-butyryylioksidodekanoyyliglysyyli)septammyyliamino]puriini, (νϋ) (73) SPT225: CH3S020(CH2)15- 6-[4'-N-(N'-16-metaanisulfonyylioksidodekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]-10 puriini, (74) SPT230: CH3(CH2)2S020(CH2)„- 6-[4'-N-(N'-12-propaanisulfonyylioksidodekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]- puriini, (75) SPT232: CH3(CH2)3S020(CH2)ir : 15 6-[4'-N-(N'-12-butaamsulfonyylioksidodekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]- puriini, (76) SPT185: CH3(CH2)9CH- . . 0S02(CH2)3CH3 6-[4'-N-(N'-2-butaanisulfonyylioksidodekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]- 20 puriini, 36 105815 (viii) (77) SPT429: (CH3)3Si-C=C-(CH2)8- 6-[4'-N-(N'-11-trimetyylisilyyli- 10-undekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]-puriini, 5 (78) SPT430: (CH3)3Si-(CH2)10- 6-[4'-N-(N'-1 l-trimetyylisilyyliundekanoyyliglysyyli)septaminyyliamino]puriini, (ix) (79) SPT123: CH3(CH2)7CHCH(CH2)7- °/\ h3c ch3 10 6-[4'-N-(N'-9, 10-dioksi-9,10-O-isopropylideenioktadekanoyyliglysyyli)septaminyy- liainino]purimi, (80) SPT102: CH3(CH2)5C(CH2)10- « ϋ o 15 6-[4'-N-(N'-12-oksostearoyyliglysyyli)septammyyliammo]puriini, (xi) (81) SPT262: s XC=C(C H^g- 6-{4'-N-[N'-1 l-(2-tienyyli)- 10-undekynoyyliglysyyli]septaminyyliamino} piiriini 105815 37 (82) SPT263:
C=C(CH£V
Q
/ 6-{4'-N-[N'-11 -(3 '-tienyyli)- 10-undekynoyyliglysyyli]septaminyyliamino}puriini (83) SPT266: C==C(CH2)g- & 6-{4’-N-[N-11 -(3'-furyyli)-1O-undekynoyyligly syyli] septaminyyliamino } piiriini.
Tämän keksinnön spikamyslinlyhdisteet, jotka sisältävät edellä mainittuja edullisia yhdisteitä, voidaan muuttaa happoadditio- ja emäsadditiosuoloiksi edellä kuvatulla tavallisella tavalla.
10 Spikamysiinijohdannaisten käytöt Tämän keksinnön mukaiset spikamysiinijohdannaiset ovat käyttökelpoisia siinä suhteessa, että niillä on kasvaintenvastaista aktiivisuutta ihmisen kasvaimen xenograft-malliin, joka heijastaa kliinistä vaikutusta.
: Kasvaintenvastainen aktiivisuus: 15 (1) Spikamysiinijohdannaisten maksimaalisen siedetyn annoksen (MTD) mittaami nen karvattomissa hiirissä
Spikamysiinijohdannainen liuotettiin dimetyylisulfoksidiin (DMSO) ja lisättiin Cremophor EL®:ää sama tilavuus kuin DMSO:ta. Fysiologista suolaliuosta lisättiin niin paljon, että DMSO:n ja Cremophor EL®:n konsentraatio lopuksi säädettiin ar-20 voon 1 %, vastaavasti, ja näin valmistettiin spikamysiinijohdannaisen injektioliuokset erilaisina konsentraatioina. Kuin näitä liuoksia oli annettu suonensisäisesti hoitamattomille karvattomille hiirille (BALB/c nu/nu, naaraita, 6 viikon ikäisiä) annos 0,01 ml/g ruumiinpainosta/päivä jatkuen 5 päivän ajan, eläinten elämistä ja kuolemista seurattiin 2 viikkoa. Maksimaalinen annos, jolla yksikään eläimistä ei kuollut, 25 määritettiin kunkin johdannaisen MTD-arvoksi.
38 105815 (2) Menetelmä kasvaintenvastaisen vaikutuksen mittaamiseksi ihmisen paksunsuolen syöpään (COL-1) COL-1, ihmisen paksunsuolen syöpä, istutettiin ihon alle karvattomiin hiiriin. Kun kasvain oli kasvanut tilavuuteen noin 100 mm , karvattomat hiiret jaettiin 5 eläimen 5 ryhmiin niin, että kasvainten keskimääräiset tilavuudet kussakin ryhmässä olivat samanlaiset. Vastaavia spikamysiinijohdannaisia annettiin koeryhmille niiden MTD-arvon verran, kun taas kontrolliryhmälle annettiin fysiologista suolaliuosta (liuotinta), joka sisälsi 1 % DMSO:ta ja 1 % Cremophor EL®:ää. Kasvainten kasvun hi-dastumisnopeus (TGIR) laskettiin yhtälöstä: TGIR = (1-Tx/Cx) x 100, sillä edelly-10 tyksellä, että kontrolliryhmän kasvaintilavuus (RV) päivänä X on määritelty Cx:ksi ja spikamysiinijohdannaisia saaneen ryhmän kasvaimen tilavuus päivänä X on määritelty Tx:ksi. RV ilmaistaan seuraavasti: RV = Vn/Vo, jossa Vn on kasvaimen tilavuus päivänä n, ja Vo on kasvaimen alkutilavuus silloin, kun hoito aloitettiin.
Noin 3 viikkoa kestäneen kokeen aikana saadut maksimaaliset TGIR-arvot on annet-15 tu seuraavassa taulukossa. Myös minTx-arvot (kasvaimen suhteellinen tilavuus, kun kasvaimen tilavuus pieneni minimiin koejakson aikana) joillekin spikamysiinijoh-dannaisille on annettu taulukossa.
Lisäksi minimaalinen tehokas annos (termin "tehokas" on tarkoitettu merkitsevän tehokasta, kun TGIR > 50) saatiin ja terapeuttinen indeksi laskettiin yhtälöstä: tera-20 peuttinen indeksi = maksimaalinen tehokas annos (MTD)/minimaalinen tehokas annos, joillekin spikamysiinijohdannaisille. Tulokset on myös annettu taulukossa.
Taulukko: Spikamysiinijohdannaisten maksimaaliset siedetyt annokset, niiden avulla : saatu kasvaimen kasvun hidastumisnopeus, kasvainta pienentävä vaikutus ja niiden terapeuttinen indeksi ihmisen paksunsuolen syöpää (COL-1) vastaan Näyte Maksimaalinen siedetty TGIR minTx Terapeuttinen _annos (mg/kg/päivä)___indeksi_ SPM8 10,4 94 0,19 4 : (Spicamycin X)____ SPM9__3A_99_0,05__6 SPM10__2^6_ 98_0J0__4 SPK9__6_99_0Z05__4 SPK44__4_94_0J6__4 SPK64__18_95___4 SPK86__18_86___4 SPK112__OJ55_82____4 SPK115 3 99 0,08 4 105815 39 SPK132 I 12 198 10,08 4 SPK135__24_93___4 SPK136__2_J54___4 SPK142__6_99_0,09__4 SPK148__3*4_94_0^1__ SPK152__36__100 0,03__8 SPK157___98_OJJ__4 SPK159__24_96___4 SPK165__24_86___ SPK177__1^5_99___4 SPK182__36_90_0^4__8 SPK188__0^_92___ SPK189__6_98_0^)9__4 SPK198__y>_82___ SPK231__6_96_0J2__6 SPK232__24_96___4 SPK233__2J_96_0J3__4 SPK241__6_97_0J4__16 SPK247__6_96_0J6__8 SPK249__3_J58_0^26__4 SPK251__6_97___8 SPK262__8_99_0,03 4 SPK263__12_97_0,09__8 SPK266__12_97_0,18__8 SPK270__12_94_0^1__4 SPK271__2_99_0,09__8 SPK273__12_98_OJJ__8 SPK274__24_92_0J6__4 : SPK276__12_96_ 0,16__8 SPK278__12_92_0^1__8 SPK279__6_93_0^5__8 SPK280__9_94_0J9__8 1 SPK281__18_99_0^6__8 SPK282__36_99_0,07__16 : SPK422__\4_95___4 SPK241__3_93_0,24__8
Kuten edellä on kuvattu, tämän keksinnön spikamysiinijohdannaisilla on erinomainen kasvaintenvastainen vaikutus ihmisen paksunsuolen syöpään (COL-1).
40 105815
Akuutti toksisuus (LD50):
Erilaiset konsentraatiot SPK241:tä annettiin suonensisäisesti kymmenelle ICR-hii-relle (naaraita, 6 viikon ikäisiä) ryhmää kohti, ja eläinten elämistä ja kuolemista seurattiin 14 päivää lääkkeen antamisen jälkeen. LD50-arvo saatiin kullakin annoksella 5 ryhmässä tapahtuneista kuolemista Litchfieldin ja Wilcoxonin menetelmällä. Tulokseksi saatiin, että SPK241:n LDso-arvo oli 110 mg/kg.
Kasvaintenvastainen aine: Näin on selvitetty, että tämän keksinnön mukaisilla spikamysiinijohdannaisilla on kasvaintenvastainen vaikutus karvattomiin hiiriin istutettua ihmisen kasvainta vas-10 taan.
Kuten edellä kuvattiin, tämän keksinnön yhdisteillä on se ominaisuus, että niillä on erinomainen kasvaintenvastainen vaikutus ja korkea terapeuttinen indeksi. Mitä tulee kasvaintenvastaiseen vaikutukseen, tämän keksinnön yhdisteillä saattaa olla se etu, että niillä on laaja kasvaintenvastainen kirjo.
15 Sen mukaisesti tämän keksinnön yhdistettä voidaan käyttää kasvaintenvastaisena aineena tai kasvaimia hoitavana aineena.
Tämän keksinnön yhdistettä, jota käytetään kasvaintenvastaisena aineena, voidaan antaa mitä tahansa sopivaa annostusmenetelmää käyttäen, erityisesti eläinten tapauksessa vatsaontelon sisään, ihon alle, suonen sisään tai valtimon sisään tai paikalli-20 sesti injektoimalla, ja ihmisten tapauksessa suonen sisään, valtimon sisään, paikallisesti injektoimalla, vatsaontelon sisään, intrapleuraalisesti, oraalisesti, ihon alle, lihaksen sisään, kielen alle, ihon alle tai rektaalisesti.
Kun tämän keksinnön yhdistettä annetaan lääkkeeksi, se voidaan antaa injektion, suspension, tablettien, rakeiden, jauheen, kapseleiden, lääkevoiteen, voiteen tai vas-25 taavan muodossa riippuen annostusmenetelmistä tai annostussuunnitelmista. Näiden lääkkeiden valmistuksessa voidaan lisätä liuotinta, liuottavaa ainetta, isotoniseksi : · tekevää ainetta, säilöntäainetta, antioksidanttia, täyteainetta, sideaineita, liukastusai- neita, stabiloivaa ainetta tai vastaavaa.
Esimerkkejä liuottimesta ovat vesi, fysiologinen suolaliuos ja vastaavat; esimerkkejä 30 liuottavasta aineesta ovat etanoli, polysorbaatit, Cremophor EL® ja vastaavat; esimerkkejä täyteaineesta ovat laktoosi, tärkkelys, kiteinen selluloosa, mannitoli, maltoosi, kalsiumvetyfosfaatti, vaalea piihappoanhydridi, kalsiumkarbonaatti ja vastaa- 105815 41 vat; esimerkkejä sideaineesta ovat tärkkelys, polyvinyylipyrrolidoni, hydroksipro-pyyliselluloosa, etyyliselluloosa, karboksimetyyliselluloosa, arabikumi ja vastaavat; esimerkkejä hajotusaineesta ovat tärkkelys, karboksimetyyliselluloosakalsium ja vastaavat; esimerkkejä liukastusaineesta ovat magnesiumstearaatti, talkki, kovetetut 5 öljyt ja vastaavat; esimerkkejä stabiloijista ovat laktoosi, mannitoli, maltoosi, poly-sorbaatit, macrogolit, polyoksietyleeni-kovetetut risiiniöljyt ja vastaavat. Tarpeen vaatiessa lisätään glyserolia, dimetyyliasetamidia, 70 % natriumlaktaattia, pinta-aktiivista ainetta tai emäksistä ainetta, kuten natriumhydroksidia, etyleenidiamiinia, etanoliamiinia, natriumkarbonaattia, arginiinia, meglumiinia tai trisaminometaania. 10 Farmaseuttisia valmisteita, kuten injektioita, tabletteja, rakeita tai kapseleita voidaan valmistaa näitä komponentteja käyttäen.
Tämän keksinnön yhdisteen annos määritetään eläinkokeiden tulosten ja erilaisten olosuhteiden perusteella siten, että kokonaisannos ei ylitä tiettyä määrää yhdellä tai toistuvilla antokerroilla. Tarkemmat annokset ilmeisesti vaihtelevat riippuen anto-15 menetelmistä, potilaiden tai kohde-eläinten tilasta, kuten iästä, painosta, sukupuolesta, herkkyydestä, ruoasta (syöttämisestä), annostusväleistä, samanaikaisista muista lääkkeistä, potilaan sairauden vakavuudesta tai asteista. Optimaalinen annos ja anto-tiheys tietyissä olosuhteissa täytyy määrittää lääkärin tekemällä sopivalla annostus-kokeella perustuen edellä mainittuihin ohjeisiin. Tarkemmin, yhdisteen annos on 20 0,01 mg - noin 400 mg, edullisesti 0,1 mg - noin 100 mg.
Kokeelliset esimerkit Tätä keksintöä kuvataan nyt jäljessä viitaten esimerkkeihin, mutta ei niihin rajoittu-·: en.
Prosentit tarkoittavat prosenttia paino/tilavuus.
25 Kokeellinen esimerkki 1-a: Spikamysiinin valmistus (1) Siemenviljelmän valmistus Käytetty kasvualusta on sellainen, jossa seuraavat komponentit liuotetaan 1 litraan vettä ja pH säädetään arvoon 7,0: glukoosia 0,4 % 30 mallasuutetta 1,0 % hiivauutetta 0,4 % 42 105815 15 ml:n erä edellä mainittua kasvualustaa siirrettiin 50 ml:n kokoiseen suureen koeputkeen ja steriloitiin, ja siihen siirrostettiin Streptomvces alanosinicus 879-MT3 (FERM BP-449) silmukallisesta vinoalustaa ja viljeltiin ravistaen 37 °C:ssa 48 tuntia, jolloin saatiin siemenviljelmä.
5 (2) Viljelmä Käytetty kasvualusta oli sellainen, jossa seuraavat komponentit sekoitettiin 1 litraan vettä ja pH säädettiin arvoon 7,0: glukoosi 2,5 % soijapapujauhe 1,5 % 10 kuivahiiva 0,2 % kalsiumkarbonaatti 0,4 %
Kun edellä mainittu kasvualusta oli jaettu 500 ml:n erlenmeyereihin ja steriloitu, kuhunkin pulloon lisättiin 2 ml siemenviljelmää, ja seosta viljeltiin pyörittämällä 15 pyöröravistajassa 37 °C:ssa. 4 päivän kuluttua viljelmä oli valmis, ja suodattamalla erotetut solut uutettiin kahdesti n-butanolilla.
Uute konsentroitiin kuiviin, pestiin asetonilla ja vedellä, liuotettiin metanoliin ja kuljetettiin "Sephadex LH20" -kolonnin läpi, joka oli tasapainotettu metanolilla. Näin saatu aktiivinen fraktio konsentroitiin kuiviin, liuotettiin metanoliin ja puh-20 distettiin korkean erotuskyvyn nestekromatografialla "Nucleosil 5Cig" -kolonnilla (8 mm x 250 mm) virtausnopeudella 2 ml/min, jolloin aktiivisella huipulla oli reten-tioaika 5,9 minuuttia, ja ultraviolettiabsorptio 264 nm:ssä otettiin ja konsentroitiin kuiviin, jolloin saatiin spikamysiini valkoisena jauheena 80 mg:n saannolla.
Kokeellinen esimerkki I-b: Septasidiinin valmistus 25 (1) Siemenviljelmän valmistus : Kasvualusta saadaan liuottamalla seuraavat komponentit 1 litraan vettä ja säätämällä pH arvoon 7,0: glukoosia 0,4 % mallasuutetta 1,0 % 30 hiivauutetta 0,4 % 105815 43 15 ml:n erä edellä mainittua kasvualustaa siirrettiin 50 ml:n kokoiseen suureen koeputkeen ja steriloitiin, ja lisättiin Streptomyces fimbriatus ATCC 15051 silmukalli-sesta vinoalustaa ja viljeltiin ravistaen 37 °C:ssa 48 tuntia, jolloin saatiin siemen-viljelmä.
5 (2) Viljelmä Käytetty kasvualusta oli sellainen, jossa seuraavat komponentit sekoitettiin 1 litraan vettä ja pH säädettiin arvoon 7,0: glukoosi 2,5 % soijapapujauhe 1,5 % 10 kuivahiiva 0,2 % kalsiumkarbonaatti 0,4 %
Kun edellä mainittu kasvualusta oli jaettu 500 ml:n erlenmeyereihin ja steriloitu, kuhunkin pulloon lisättiin 2 ml siemenviljelmää, ja seosta viljeltiin pyörittämällä 15 pyöröravistajassa 37 °C:ssa. 4 päivän kuluttua viljelmä oli valmis, ja suodattamalla erotetut solut uutettiin kahdesti n-butanolilla.
Uute konsentroitiin kuiviin, pestiin asetonilla ja vedellä, liuotettiin metanoliin ja kuljetettiin "Sephadex LH20" -kolonnin läpi, joka oli tasapainotettu metanolilla. Näin saatu aktiivinen fraktio konsentroitiin kuiviin, liuotettiin metanoliin ja puh-20 distettiin korkean erotuskyvyn nestekromatografialla "Nucleosil 5Ci8" -kolonnilla (8 mm x 250 mm) virtausnopeudella 2 ml/min, jolloin aktiivisella huipulla oli reten-. tioaika 5,6 minuuttia, ja ultraviolettiabsorptio 264 nm:ssä otettiin ja konsentroitiin kuiviin, jolloin saatiin septasidiini valkoisena jauheena 100 mg:n saannolla.
Kokeellinen esimerkki 2-a: 6-(spikamynyyliamino)puriinin (Ila) valmistus 25 Spikamysiiniseos (1,0 g) liuotettiin 100 ml:aan 10 % vetykloridihappo-metanolia ja sekoitettiin 30 °C:ssa 100 tuntia. Kun saatu liuos oli sentrifugoitu, supematanttiin lisättiin 400 ml dietyylieetteriä ja saatu sakka erotettiin sentrifugoimalla. Sakka konsentroitiin edellen kuiviin, jolloin saatiin 702 mg 6-(spikamynyyliamino)puriinin (Ha) raakatuotetta, joka sitten liuotettiin veteen ja jaettiin butanoliin ja veteen (1:1). 30 Vesikerros neutraloitiin hopeakarbonaatilla, konsentroitiin kuiviin sen jälkeen kun näin muodostunut sakka oli poistettu, ja puhdistettiin silikageelikromatografialla käyttämällä eluenttina kloroformi-metanolia (2:1), jolloin saatiin 6-(spikamynyyli-amino)puriini (Ha) saannolla 403 mg. Näin saadulla 6-(spikamynyyliamino)puriinil-la oli edellä kuvatut fysikokemialliset ominaisuudet.
Kokeellinen esimerkki 2-b: 6-(septaminyyliamino)puriinin (Ilb) valmistus 44 105815
Septasidiiniseos (1,0 g) liuotettiin 100 ml:aan 10 % vetykloridihappometanolia ja sekoitettiin 30 °C:ssa 100 tuntia. Kun saatu liuos oli sentrifugoitu, supematanttiin lisättiin 400 ml dietyylieetteriä ja saatu sakka erotettiin sentrifugoimalla. Sakka kon-5 sentroitiin edellen kuiviin, jolloin saatiin 683 mg 6-(septaminyyliamino)puriinin (Ilb) raakatuotetta, joka sitten liuotettiin veteen ja jaettiin butanoliin ja veteen (1:1). Vesikerros neutraloitiin hopeakarbonaatilla, konsentroitiin kuiviin sen jälkeen kun näin muodostunut sakka oli poistettu, ja puhdistettiin silikageelikromatografialla käyttämällä eluenttina kloroformi-metanolia (2:1), jolloin saatiin 6-(septaminyyli-10 amino)puriini (Ila) saannolla 351 mg. Näin saadulla 6-(septaminyyliamino)puriinilla oli edellä kuvatut fysikokemialliset ominaisuudet.
Kokeellinen esimerkki 3-a: 6-(4'-gIysyyIispikamynyyIiamino)puriinin (lila) valmistus t-butoksikarbonyyliglysiiniä (8,0 g) ja paranitrofenolia (6,3 g) liuotettiin N,N-dime-15 tyyliformamidiin (100 ml). Lisäksi liuokseen lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (9,4 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktiossa muodostunut sakka poistettiin suodattamalla, ja Ν,Ν-dimetyyliformamidi poistettiin tislaamalla. Jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla n-heksaani-etyyliasetaatti (20:1) eluenttina, jolloin saatiin t-butoksikarbonyyliglysiinin aktiivinen esteri 12,5 g:n saan-20 nolla.
Aktiivinen esteri (8,0 g) liuotettiin N,N-dimetyyliformamidiin (100 ml). Liuokseen lisättiin 6-(spikamynyyliamino)puriinia (Ha, 8,1 g) ja trietyyliamiinia (20 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Ν,Ν-dimetyyliformamidi poistettiin tislaamalla reak-tioseoksesta, ja jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla. Eluoimalla 25 kloroformi-metanolilla (7:1-5:1) saatiin 6-[4'-N-(N'-t-butyylioksikarbonyyliglysyy-li)spikamynyyliamino]puriini 9,3 g:n saannolla. Tuotteeseen lisättiin 10 % vetykloridihappometanolia (100 ml). Kun seosta oli sekoitettu huoneenlämmössä 30 minuuttia, liuotin tislattiin alipaineessa. Jäännökseen lisättiin metanolia (50 ml), ja : vain metanoliin liukenematon fraktio erotettiin suodattamalla. Operaation toistami- 30 nen lopuksi antoi 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinin (Ula) hydrokloridin 7,26 g:n saannolla.
Hydrokloridi (500 mg) liuotettiin veteen ja kuljetettiin Amberlite IRA410:n, OH-tyyppisen anioninvaihtohartsin läpi, ja adsorboitumaton fraktio konsentroitiin, jolloin saatiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini (lila) saannolla 230 mg.
i
Kokeellinen esimerkki 3-b: 6-(4'-N-glysyyliseptaminyyliamino)-puriinin (mb) valmistus 45 105815 t-butoksikarbonyyliglysiiniä (8,0 g) ja paranitrofenolia (6,3 g) liuotettiin N,N-dime-tyyliformamidiin (100 ml). Lisäksi liuokseen lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-5 imidiä (9,4 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktiossa muodostunut sakka poistettiin suodattamalla, ja Ν,Ν-dimetyyliformamidi poistettiin tislaamalla. Jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla n-heksaani-etyyliasetaatti (20:1) elu-enttina, jolloin saatiin t-butoksikarbonyyliglysiinin aktiivinen esteri 12,5 g:n saannolla.
10 Aktiivinen esteri (8,0 g) liuotettiin N,N-dimetyyliformamidiin (100 ml). Liuokseen lisättiin 6-(septaminyyliamino)puriinia (Ila, 8,1 g) ja trietyyliamiinia (20 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Ν,Ν-dimetyyliformamidi poistettiin tislaamalla reak-tioseoksesta, ja jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla. Eluoimalla kloroformi-metanolilla (7:1-5:1) saatiin 6-[4'-N-(N'-t-butyylioksikarbonyyliglysyy-15 li)septaminyyliamino]puriini 8,8 g:n saannolla. Tuotteeseen lisättiin 10 % vetyklori-dihappometanolia (100 ml). Kun seosta oli sekoitettu huoneenlämmössä 30 minuuttia, liuotin tislattiin alipaineessa. Jäännökseen lisättiin metanolia (50 ml), ja vain metanoliin liukenematon fraktio erotettiin suodattamalla. Operaation toistaminen lopuksi antoi 6-(4,-N-glysyyliseptaminyyliamino)puriinin (Illb) hydrokloridin 7,26 g:n 20 saannolla.
Hydrokloridi (500 mg) liuotettiin veteen ja kuljetettiin Amberlite IRA410:n, OH-tyyppisen anioninvaihtohartsin läpi, ja adsorboitumaton fraktio konsentroitiin, jol-• loin saatiin 6-(4'-N-glysyyliseptaminyyliamino)puriini (Illb) saannolla 219 mg.
Esimerkki 1: SPM6:n valmistus 25 Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) liuotettiin dekaanihappoa (1 g) ja paranitrofenolia (0,81 g). Liuokseen lisättiin N,N-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,20 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin dekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään lisättin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (653 mg) 30 ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännös puhdistettiin kromatografialla silikageelikolonnissa eluenttijär-jestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPM6 saannolla 380 mg.
46 105815 SPM6:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 217-219 °C
m e (2) Spesifinen rotaatio: [a]D = +0° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi: 5
C H O N
Laskettu (%): 53,62 7,31 20,83 18,24 Löydetty (%): 53,79 7,10 21,10 18,01.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 538 (M+H)+.
C24H39O7N7 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 15 δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,20-1,40 (12H, m), 1,60-1,70 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,06 (1H, dd, J = <1, 2,1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,1, 10,1 Hz), 5,58 (1H, brs), 8,01 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
Esimerkki 2: SPM9:n valmistus 20 Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) liuotettiin tridekaanihappoa (400 mg) ja paranitrofenolia (359 mg). Liuokseen lisättiin N,N-disykloheksyylikarbodi-imidiä . (533 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin tridekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (290 mg) liuotettuna DMF:ään lisättin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia 25 (300 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin pois tettiin tislaamalla, ja jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla eluentti-jäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPM9 saannolla 114 mg.
SPM9:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 168-169 °C
30 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +3,7° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 55,94 7,82 19,32 16,91 Löydetty (%): 55,67 8,01 19,44 16,88.
• 1 105815 47 (4) FD-massaspektri (m/z) 580 (M+H)+.
C27H45O7N7 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
5 (6) Protoniydmmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD30D:ssä) δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,30-1,70 (20H, m), 2,30 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,89 (1H, d, J = 16,5 Hz), 3,92 (1H, d, J = 16,5 Hz), 4,03 (1H, dd, J = 2,5 Hz, <1 Hz), 4,18 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,69 (1H, brs), 8,16 (1H, brs), 8,31 10 (1H, s).
Esimerkki 3: SPM12:n valmistus Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) liuotettiin palmitiinihappoa (1 g) ja para-nitrofenolia (0,54 g). Liuokseen lisättiin Ν,Ν-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,81 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, 15 jolloin saatiin palmitiinihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (492 mg) liuotettuna DMF:ään lisättin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla eluentti-jäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPM12 saannolla 20 114 mg.
SPM12:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 238-240 °C
m e (2) Spesifinen rotaatio: [a]o =+6,8° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi: 25
C H O N
Laskettu (%): 57,95 8,27 18,01 15,77 . Löydetty (%): 58,12 8,00 17,93 15,95.
30 (4) FD-massaspektri (m/z) 622 (M+H)\ C30H51O7N7 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm*1.
(6) Protoniydmmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD30D:ssä) 48 105815 δΗ: 0,90 (3Η, t, J = 7,0 Hz), 1,20-1,40 (24H, m), 1,60-1,70 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,05 (1H, dd, J = <1, 2,1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,1, 10,1 Hz), 5,58 (1H, brs), 8,10 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
5 Esimerkki 4: SPK86:n valmistus N,N-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) liuotettiin trans-2-dodekeenihappoa (1,5 g). Paranitrofenolia (1,0 g) ja N,N-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,5 g) lisättiin liuokseen ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin trans-2-dodekeenihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen este-10 riin (250 mg) liuotettuna DMF:ään lisättin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)pu-riinihydrokloridia (300 mg) ja trietyyliamiinia (1,1 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromato-grafialla eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK86 saannolla 158 mg.
15 SPK86:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 180-182 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]o25 = +14,4° (c = 0,2, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi:
20 C H O N
Laskettu (%): 54,63 7,15 20,38 17,84 Löydetty (%): 54,78 7,08 20,34 17,80.
(4) FD-massaspektri (m/z) 563 (M+Na+H)+.
25 C25H39O7N7 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400, 1620 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,50 (12H, m), 2,22 (2H, m), 3,6-3,8 (5H, m), 30 3,95 (1H, d, J = 16,0 Hz), 3,98 (1H, d, J = 16,0 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,17 (1H, dd, J = 10,5, 10,5 Hz), 5,68 (1H, brs), 6,00 (1H, d, J = 15,2 Hz), 6,85 (1H, dt, J = 6,8, 15,2 Hz), 8,12 (1H, brs), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 5: SPK156:n valmistus 49 105815 Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) liuotettiin trans-2-tetradekeenihappoa (1,0 g) ja paranitrofenolia (0,62 g). N,N-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,91 g) lisättiin liuokseen ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja kon-5 sentroitiin, jolloin saatiin trans-2-tetradekeenihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään lisättin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)-puriinihydrokloridia (552 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännös puhdistettiin silikageelipylväskro-matografialla eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin 10 SPK156 saannolla 180 mg.
SPK156:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 171-172 °C
<%ς (2) Spesifinen rotaatio: [a]D = +5,6° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi: 15
C H______ O N
Laskettu (%): 56,84 7,67 18,93 16,57 Löydetty (%): 57,10 7,38 19,17 16,35.
20 (4) FD-massaspektri (m/z) 592 (M+H)+.
C28H45O7N7 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm·1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 25 δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,20-1,60 (18H, m), 2,26 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,30-3,80 (5H, m), 3,94 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,98 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,16 (1H, dd, J = 10,1, 10,1 Hz), 5,65 (1H, brs), 6,00 (1H, d, J = 15,0 Hz), 6,83 (1H, dt, J = 6,4, 15,0 Hz), 8,18 (1H, s), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 6: SPK188:n ja 189:n valmistus 30 Liuokseen, jossa oli 3-hydroksiheksadekaanihappoa (2 g) pyridiinissä, lisättiin etik-kahappoanhydridiä 0 °C:ssa, ja seosta sekoitettiin 4 tuntia. Reaktioseos jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros konsentroitiin. Saatu jäännös liuotettiin Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF). Liuokseen lisättiin paranitrofenolia (1,02 g) ja Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,51 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reak- 50 105815 tioseos suodatettiin ja konsentroitiin, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia sili-kageelikolonnissa eluenttijäijestelininä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1-50:1), jolloin saatiin 2-heksadekeenihapon aktiivinen esteri (0,92 g) ja 3-asetoksiheksadekaa-nihapon aktiivinen esteri (1,01 g).
5 2-heksadekeenihapon aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (589 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmien ollessa kloro-formi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK188 saannolla 149 mg.
10 Myös 3-asetoksiheksadekaanihapon aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (440 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännökselle suoritetiin kromatografia silikageelikolonnissa käyttäen eluenttijärjestelminä kloroformi-metanolia (7:1-5:1), jolloin saatiin 15 SPK189 126 mg:n saannolla.
SPK188:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 178-179 °C
a r (2) Spesifinen rotaatio: [cx]d =+1,2° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi: 20
C H O N
Laskettu (%): 58,14 7,97 18,07 15,82 Löydetty (%): 58,36 7,72 17,91 16,01.
25 (4) FD-massaspektri (m/z) 620 (M+H)+.
C30H49O7N7 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri : - (500 MHz, CD3OD:ssä) 30 δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,60 (22H, m), 2,20 (2H, t, J = 7,1, 7,1 Hz), 3,60- 3,80 (5H, m), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,97 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,68 (1H, brs), 6,00 (1H, d, J = 15,7 Hz), 6,82 (1H, dt, J = 15,7, 7,1 Hz), 8,15 (1H, s), 8,28 (1H, s).
51 105815 SPK189:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 182-183 °C
(2) Alkuaineanalyysi:
5 CHON
Laskettu (%): 56,54 7,86 21,18 14,42 Löydetty (%): 56,71 7,73 20,95 14,61.
(3) FD-massaspektri (m/z) 680 (M+H)+.
10 C32H53O7N9 (4) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400,1720,1630 cm'1.
(5) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 15 δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,70 (24H, m), 2,05 (3H, s), 2,52 (2H, d, J = 5,7 Hz), 3,6-3,9 (7H, m), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,21 (1H, m), 5,62 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 7: SPK44:n valmistus Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) liuotettiin 11-dodekeenihappoa (500 mg) 20 ja paranitrofenolia (351 mg). Ν,Ν-disykloheksyylikarbodi-imidiä (520 mg) lisättiin liuokseen ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 11-dodekeenihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään lisättin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydroklori-dia (443 mg) ja trietyyliamiinia (1,6 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin 25 poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnis-sa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK44 saannolla 196 mg.
: SPK44:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 222-224 °C
30 (2) Spesifinen rotaatio: [cc]d24 = +21,5° (c = 0,1, metanolissa), 52 105815 (3) Alkuaineanalyysi: CHON Laskettu (%): 55,40 7,33 19,87 17,39 5 Löydetty (%): 55,70 7,26 19,94 17,10.
(4) FD-massaspektri (m/z) 564 (M+H)+.
C26H41O7N7 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm'1.
10 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CÖ30D:ssä) δΗ: 1,2-1,7 (14H, m), 2,03 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,6 Hz), 3,65-3,85 (5H, m), 3,88 (1H, d, J = 16,0 Hz), 3,91 (1H, d, J = 16,0 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,17 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 4,92 (1H, d, J = 10,9 Hz), 4,98 (1H, d, J = 17,0 15 Hz), 5,67 (1H, brs), 5,79 (1H, m), 8,12 (1H, s), 8,26 (1H, s).
Esimerkki 8: SPK142:n valmistus 12-tridekeenihapon (370 mg) liuokseen Ν,Ν-dimetyyliformamidissa (DMF) liuotettiin paranitrofenolia (243 mg) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (360 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saa-20 tiin 12-tridekeenihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (580 mg) lisättin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (350 mg) ja trietyyliamiinia (1,3 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi- • · metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK142 saannolla 80 mg.
25 SPK142:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 182-184 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +13,3° (c = 0,1, metanolissa), :'t (3) Alkuaineanalyysi:
30 C H O N
Laskettu (%): 56,24 7,34 19,42 17,00 Löydetty (%): 56,40 7,42 19,45 16,73.
105815 53 (4) FD-massaspektri (m/z) 577 (M+H)+.
C27H42O7N7 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm·1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 5 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,70 (16H, m), 2,03 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,2 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 15,0 Hz), 3,89 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,00 (1H, d, J = 2,0 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,0, 10,0 Hz), 4,92 (1H, d, J = 10,9 Hz), 4,98 (1H, d, J = 17,0 Hz), 5,67 (1H, brs), 5,81 (1H, m), 8,15 (1H, s), 8,32 (1H, s).
10 Esimerkki 9: SPK106:n valmistus öljyhapon (1 g) ja paranitrofenolin (492 mg) liuokseen N,N-dimetyyliformamidissa (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (730 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin öljy-hapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (745 mg) lisättin 6-(4'-N-glysyylispika-15 mynyyliamino)puriinihydrokloridia (400 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kro-matografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK106 saannolla 150 mg.
SPK106:n fysikokemiälliset ominaisuudet
20 (1) Sulamispiste: 224-225 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +20° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
25 Laskettu (%): 59,33 8,25 17,29 15,13 Löydetty (%): 59,12 8,43 17,37 15,08.
(4) FD-massaspektri (m/z) 648 (M+H)+.
C32H53O7N7 30 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,2-1,7 (24H, m), 2,02 (4H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,73,9 (5H, m), 3,85 (1H, d, J = 16,0 Hz), 3,88 (1H, d, J = 16,0 Hz), 3,98 (1H, 54 105815 dd, J = 3,0 Hz, <1 Hz), 4,12 (1H, dd, J = 10,8, 10,8 Hz), 5,35 (2H, m), 5,66 (1H, brs), 8,15 (1H, s), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 10: SPK120:n valmistus
Linoleenihapon (1 g) ja paranitrofenolin (496 mg) liuokseen N,N-dimetyyliform-5 amidissa (DMF, 30 ml) lisättiin Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (736 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin linoleenihapon aktiivinen esteri. DMF:ään liuotettuun aktiiviseen esteriin (500 mg) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (478 mg) ja trietyyliamiinia (1,7 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaa-10 maila, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijes-telmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK120 saannolla 154 mg.
SPK120:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 228-229 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]o25 = +5° (c = 0,1, metanolissa), 15 (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 59,52 7,96 17,34 15,18 Löydetty (%): 59,41 8,07 17,46 15,06.
20 (4) FD-massaspektri (m/z) 646 (M+H)\ C32H51O7N7 ’ (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 25 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,91 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,25-1,7 (16H, m), 2,08 (4H, m), 2,28 (2H, t, J , = 7,0 Hz), 2,87 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 15,0 Hz), 3,89 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,8 Hz, H-2'), 4,14 (1H, dd, J = 10,0, 10,0 Hz, H-4’), 5,30-5,40 (4H, m), 5,68 (1H, brs, Η-Γ), 8,15 (1H, s, H-8), 8,30 (1H, s, 30 H-2).
Esimerkki 11: SPK231:n valmistus
Cis-9-tetradekeenihappoon (197 mg) ja N-hydroksisukkiini-imidiin (101 mg) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyyli- 105815 55 karbodi-imidiä (198 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin cis-9-tetradekeenihapon aktiivinen esteri. DMF:ään liuotettuun aktiiviseen esteriin (280 mg) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliami-no)puriinihydrokloridia (334 mg) ja trietyyliamiinia (0,97 ml), ja seosta sekoitettiin 5 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäqestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK231 saannolla 520 mg.
SPK231:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 163-164 °C
10 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +9,2° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 56,84 7,67 18,93 16,57 15 Löydetty (%): 56,51 7,82 19,12 16,55.
(4) FD-massaspektri (m/z) 592 (M+H)+.
C28H45N7O7 (5) Infrapuna-absorptiospektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm’1.
20 (6) Protomydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,91 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,27-1,40 (14H, m), 1,65 (2H, m), 2,02 (4H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,65-3,80 (5Ή, m), 3,87 (1H, d, J = 15,0 Hz), 3,89 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,06 (1H, d, J = 2,1 Hz, H-20, 4,17 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,34 (2H, 25 m), 5,62 (1H, brs), 8,08 (1H, s), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 12: SPK9:n valmistus 10-metyyliundekaanihappoon (240 mg) ja paranitrofenoliin (167 mg) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) lisättiin Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (247 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsent-30 roitiin, jolloin saatiin 10-metyyliundekaanihapon aktiivinen esteri. DMF:ään liuotettuun aktiiviseen esteriin (380 mg) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)-puriinihydrokloridia (460 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia sili- 56 105815 kageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK9 saannolla 121 mg.
SPK9:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 192-195 °C
5 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +6,2° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 55,21 7,66 19,80 17,33 10 Löydetty (%): 55,50 7,39 19,72 17,39.
(4 FD-massaspektri (m/z) 589 (M+Na+H)+.
C26H43N7O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
15 (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,87 (6H, d, J = 6,4 Hz), 1,1-1,7 (15H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,6-3,9 (5H, m), 3,85 (1H, d, J = 15,6 Hz), 3,89 (1H, d, J = 15,6 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,27 (1H, s).
20 Esimerkki 13: SPK136:n valmistus 12-metyylitridekaanihappoon (200 mg) ja paranitrofenoliin (122 mg) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (183 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-metyylitridekaanihapon aktiivinen esteri. DMF:ään liuotet-25 tuun aktiiviseen esteriin (303 mg) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)-puriinihydrokloridia (336 mg) ja trietyyliamiinia (1,3 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia sili-kageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK136 saannolla 136 mg.
30 SPK136:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 225-226 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +9,1° (c = 0,1, metanolissa), 105815 57 (3) Alkuaineanalyysi: CHON Laskettu (%): 56,64 7,98 18,86 16,51 5 Löydetty (%): 56,43 8,14 19,15 16,28.
(4) FD-massaspektri (m/z) 616 (M+Na)\ C28H47N7O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm'1.
10 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CÖ30D:ssä) δΗ: 0,87 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,10-1,70 (19H, m), 2,29 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,85 (1H, d, J - 15, 0 Hz), 3,89 (1H, d, J = 15, 0 Hz) , 4,00 (1H, d, J = 2,1 Hz), 4,13 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
15 Esimerkki 14: SPK64:n valmistus 11-bromiundekaanihappoon (1 g) ja paranitrofenoliin (0,56 g) liuotettuna N,N-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,83 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 11-bromiundekaanihapon aktiivinen esteri. DMF:ään liuotettuun ak-20 tiiviseen esteriin (500 mg) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihyd-robromidia (496 mg) ja trietyyliamiinia (2,5 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageeliko-j · loimissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK64 saannolla 210 mg.
25 SPK64:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 175-178 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]p24 =+17,3° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi:
30 C H O N
Laskettu (%): 47,62 6,39 17,76 15,55 Löydetty (%): 47,90 6,10 17,52 15,68.
(4) FD-massaspektri (m/z) 630, 632 (M+H)+.
58 105815 C25H40N7O7Br (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
(6) Protomydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 5 δΗ: 1,30-1,90 (16H, m), 2,29 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3, 44 (2H, t, J = 7,2 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 17,0 Hz), 3,90 (1H, d, J = 17,0 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,9, 10,9 Hz), 5,67 (1H, brs), 8,15 (1H, s), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 15: SPK152:n valmistus 12-bromidodekaanihappoon (1 g) ja paranitrofenoliin (490 mg) liuotettuna N,N-10 dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) lisättiin Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (740 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-bromidodekaanihapon aktiivinen esteri. DMF.ään liuotettuun aktiiviseen esteriin (560 mg) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini-hydrobromidia (530 mg) ja trietyyliamiinia (1,4 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. 15 Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageeli-kolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK152 saannolla 177 mg.
SPK152:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 164-165 °C
20 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +0° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi: > t
C H O N
Laskettu (%): 52,04 7,05 18,66 16,34 25 Löydetty (%): 52,32 7,24 18,52 16,01.
(4) FD-massaspektri (m/z) 644, 646 (M+H)+.
C26H42N707Br (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm'1.
30 (6) Protomydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,70 (18H, m), 1,82 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,43 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 15,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 15,1 Hz), 4,00 i 105815 59 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,1, 10,1 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 16: SPK132:n valmistus 12-bromidodekaanihappoon (1 g) liuotettuna asetonitriiliin (50 ml) lisättiin kal-5 siumkloridia (2 g) ja tetra-n-butyyliammoniumkloridia (1,2 g), ja seosta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä 4 tuntia. Reaktioseos suodatettiin, konsentroitiin ja jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, jolloin saatiin 12-klooridodekaanihappo. Kun 280 mg:n erää näin saadusta 12-klooridodekaanihaposta, paranitrofenolia (167 mg) ja Ν,Ν'-disyklo-10 heksyylikarbodi-imidiä (245 mg) Ν,Ν-dimetyyliformamidissa (DMF) oli sekoitettu 12 tuntia, sakat poistettiin suodattamalla ja DMF poistettiin tislaamalla, jolloin saatiin aktiivinen esteri. 12-klooridodekaanihapon aktiiviseen esteriin liuotettuna DMF: ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (456 mg) ja trietyyliamiinia (1,2 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos 15 konsentroitiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijes-telmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK132 saannolla 287 mg.
SPK132:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 216-220 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]o24 = +34,3° (c = 0,1, metanolissa), 20 (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 52,04 7,05 18,66 16,34 Löydetty (%): 52,00 7,30 18,79 16,50.
25 (4) FD-massaspektri (m/z) 622, 624 (M+Na)+.
C26H42N707C1 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 30 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,80 (20H, m), 3,55 (2H, t, J = 7,2 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 15,4 Hz), 3,91 (1H, d, J = 15,4 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,13 (1H, s), 8,28 (1H, s).
60 105815
Esimerkki 17: SPK133:n valmistus 11-bromiundekaanihappoon (1 g) liuotettuna asetonitriiliin (50 ml) lisättiin kalsium-kloridia (2 g) ja tetra-n-butyyliammoniumkloridia (1,2 g), ja seosta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä 4 tuntia. Reaktioseos suodatettiin, konsentroitiin ja jaettiin 5 etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natrium-sulfaatilla, jolloin saatiin 11-klooriundekaanihappo (0,85 g). Kun 230 mg:n erää näin saadusta 11-klooriundekaanihaposta, paranitrofenolia (145 mg) ja N,N'-disyk-loheksyylikarbodi-imidiä (215 mg) Ν,Ν-dimetyyliformamidissa (DMF) oli sekoitettu 12 tuntia, sakat poistettiin suodattamalla ja DMF poistettiin tislaamalla, jolloin 10 saatiin aktiivinen esteri. 11-klooriundekaanihapon aktiiviseen esteriin liuotettuna DMF: ään (20 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (400 mg) ja trietyyliamiinia (1,2 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijes-telmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK133 saannolla 103 mg.
15 SPK133:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 214-218 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D24 = +20° (c = 0,1, metanolissa), (3) Alkuaineanalyysi:
20 C H O N
Laskettu (%): 51,23 6,88 19,11 16,73 Löydetty (%): 51,03 6,78 19,02 16,58.
(4) FD-massaspektri (m/z) 586, 588 (M+Na)+.
25 C25H4oN707Cl (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm*1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,30-1,80 (18H, m), 2,30 (2H, t, J = 7,0 Hz) , 3,54 (2H, t, J = 7,2 Hz), 3,60-3,80 30 (5H, m), 3,88 (1H, d, J = 15,0 Hz), 3,91 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,0, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,66 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
: l 105815 61
Esimerkki 18: SPK146:n valmistus 12-hydroksidodekaanihappoa (1 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetykloridihappo-metanoliliuokseen (20 ml) sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Reaktioseos konsentroitiin ja jaettiin kloroformiin ja veteen. Kloroformikerros pestiin edelleen 1-5 prosenttisen natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-hydroksidodekaanihapon me-tyyliesteri (1,03 g). 12-hydroksidodekaanihapon metyyliesteriin (1 g) liuotettuna pyridiiniin (20 ml) lisättiin paratolueenisulfonyylikloridia (0,85 g), ja seosta sekoitettiin 8 tuntia. Kun pyridiini oli poistettu tislaamalla, jäännös jaettiin kloroformiin 10 ja veteen ja kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, konsentroitiin ja sille suoritettiin sitten kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijes-telmänä n-heksaani-etyyliasetaatti (50:1), jolloin saatiin 12-paratolueenisulfonyyli-oksidodekaanihapon metyyliesteri (1,21 g). Kun koko tuote oli liuotettu asetonitrii-liin (50 ml) ja 5 ml tetra-n-butyyliammoniumfluoridin 1 M liuosta tetrahydrofuraa-15 nissa oli lisätty, seosta sekoitettiin 48 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijestelmänä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1), jolloin saatiin 12-fluoridodekaanihapon metyyliesteri (680 mg). Tuote liuotettiin etanolin ja veden muodostamaan sekaliuottimeen (1:1). Liuokseen lisättiin kaliumhydroksidia (0,7 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 20 30 minuuttia. Kun reaktioseos oli konsentroitu ja säädetty heikosti happamalle pH- alueelle lisäämällä vettä ja ylimäärä sitruunahappoa, se uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-fluoridodekaanihappo (610 mg).
Kun näin saatu 12-fluoridodekaanihappo (610 mg) ja paranitrofenoli (390 mg) oli 25 liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (576 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-fluoridodekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliami-no)puriinitrifluoriasetaattia (565 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitet-30 tiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK146 saannolla 183 mg.
SPK146:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 182-183 °C
35 (2) Spesifinen rotaatio: [cx]d25 = +0° (c = 0,1, metanolissa), 62 105815 (3) Alkuaineanalyysi: CHON Laskettu (%): 53,50 7,25 19,19 16,80 5 Löydetty (%): 53,82 7,03 18,95 17,09.
(4) FD-massaspektri (m/z) 584 (M+H)+.
C26H42N707F
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm"1.
10 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,80 (18H, m), 2,29 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,60-3,90 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,40 (2H, dt, J = 6,4, 47,1 Hz), 5,69 (1H, brs), 8,16 (1H, s), 8,31 15 (1H, s).
Esimerkki 19: SPK157:n valmistus 16-Hydroksiheksadekaanihappoa (1 g) liuotettuna 10 % vetykloridihappo-metanoli-liuokseen (20 ml) sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Reaktioseos konsentroitiin ja jaettiin kloroformiin ja veteen. Kloroformikerros pestiin edelleen 1-prosenttisen 20 natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsul-faatillaja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-hydroksiheksadekaanihapon metyyliesteri (1,03 g). 16-hydroksiheksadekaanihapon metyyliesteriin liuotettuna pyridiiniin • (20 ml) lisättiin paratolueenisulfonyylikloridia (0,69 g), ja seosta sekoitettiin 8 tun tia. Kun pyridiini oli poistettu tislaamalla, jäännös jaettiin kloroformiin ja veteen ja 25 kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, konsentroitiin ja sille suoritettiin sitten kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmänä n-heksaa-ni-etyyliasetaatti (50:1), jolloin saatiin 16-paratolueenisulfonyylioksiheksadekaani-hapon metyyliesteri (1,21 g). Kun koko tuote oli liuotettu asetonitriiliin (30 ml) ja 5 ml tetra-n-butyyliammoniumfluoridin 1 M liuosta tetrahydrofuraanissa oli lisätty, 30 seosta sekoitettiin 48 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmänä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1), jolloin saatiin 16-fluoriheksadekaanihapon metyyliesteri (0,53 g). Tuote liuotettiin etanolin ja veden muodostamaan sekaliuottimeen (1:1). Liuokseen lisättiin kaliumhydroksidia (0,6 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 30 minuuttia. Kun re-35 aktioseos oli konsentroitu ja säädetty heikosti happamalle pH-alueelle lisäämällä vettä ja ylimäärä sitruunahappoa, se uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros i 105815 63 kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-fluori-heksadekaanihappo (440 mg).
Kun näin saatu 16-fluoriheksadekaanihappo (438 mg) ja paranitrofenoli (222 mg) oli liuotettu Ν,Ν-dimetyylformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin Ν,Ν’-disyklohek-5 syylikarbodi-imidiä (330 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-fluoriheksadekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyli-amino)puriinitrifluoriasetaattia (612 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin 10 kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK157 saannolla 228 mg.
SPK157:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 175-176 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D =+6,4° (c = 0,1, metanolissa), 15 (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 55,49 8,03 17,84 15,62 Löydetty (%): 56,71 7,80 17,66 15,83.
20 (4) FD-massaspektri (m/z) 628 (M+H)+.
C29H50N7O7F
: · (5)1 nfrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 25 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,50 (26H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,85 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,40 (1H, dt, J = 7,1, 42 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,13 (1H, s), 8,32 (1H, s).
30 Esimerkki 20: SPK165:n valmistus 11-bromiundekaanihappoon (1 g) liuotettuna asetonitriiliin (50 ml) lisättiin natrium-jodidia (2 g) ja tetra-n-butyyliammonium-jodidia (1 g), ja seosta kuumennettiin pa-lautusjäähdytyksessä 4 tuntia. Reaktioseos suodatettiin, konsentroitiin ja jaettiin 64 105815 etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natrium-sulfaatilla, jolloin saatiin 11-jodiundekaanihappo (0,89 g).
Näin saadun 11-jodiundekaanihapon ja paranitrofenolin (0,36 g) liuokseen N,N-dimetyyliformamidissa (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä 5 (0,53 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 11-jodiundekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (0,6 g) lisättiin sen jälkeen, kun se oli liuotettu DMF:ään, jälleen 6-(4'-N-glysyylispikamy-nyyliamino)puriinihydrojodidia (0,53 g) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kro-10 matografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmien ollessa kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK156 0,18 g:n saannolla.
SPK165:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 174-175 °C
Af (2) Spesifinen rotaatio: [a]D = +11,6° (c = 0,1, metanolissa), 15 (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 44,32 5,95 16,53 14,47 Löydetty (%): 44,60 5,72 16,31 14,69.
20 (4) FD-massaspektri (m/z) 678 (M+H)+.
C25H40N7O7I
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 25 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,90 (16H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,22 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz) , 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,12 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,64 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
30 Esimerkki 21: SPK153:n valmistus 2-bromiheksadekaanihappoon (1 g) ja paranitrofenoliin (0,42 g) liuotettuna N,N-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,62 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-bromiheksadekaanihapon aktiivinen esteri. DMF:ään liuotettuun 105815 65 aktiiviseen esteriin (0,5 g) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihyd-robromidia (0,43 g) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageeliko-lonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK153 5 saannolla 0,15 g.
SPK153:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 167-169 °C
(2) Alkuaineanalyysi:
10 C H O N
Laskettu (%): 51,43 7,19 15,98 13,99 Löydetty (%): 51,70 6,98 15,89 14,20.
(3) FD-massaspektri (m/z) 700, 702 (M+H)\ 15 C3oH5oN707Br (4) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
(5) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,60 (24H, m), 1,90-2,10 (2H, m), 3,60-3,80 (5H, 20 m), 3,80-4,05 (3H, m), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,40 (1H, m), 5,63 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
Esimerkki 22: SPK175:n valmistus 2-bromidodekaanihappoon (1 g), joka ensin oli liuotettu asetonitriiliin (50 ml), lisättiin kalsiumkloridia (2 g) ja tetraetyyliammoniumkloridia (1 g), ja seosta kuu-25 mennettiin palautusjäähdytyksessä 4 tuntia. Reaktio seos suodatettiin, konsentroitiin ja jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä . . natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-klooridodekaanihappo.
* f 2-klooridodekaanihappoon (0,8 g) ja paranitrofenoliin (0,48 g), jotka oli liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-30 imidiä (0,71 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-klooridodekaanihapon aktiivinen esteri. 2-klooridodekaani-hapon aktiiviseen esteriin, joka ensin oli liuotettu DMF:ään, lisättiin taas 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (0,53 g) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännök- 66 105815 selle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa käyttäen eluenttijärjestelmiä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK175 0,15 g:n saannolla.
SPK175:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 175-176 °C
5 (2) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 52,04 7,05 18,66 16,34 Löydetty (%): 52,20 6,81 18,46 16,52.
10 (3) FD-massaspektri (m/z) 601, 603 (M+H)+.
C26H42N7O7CI
(4) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
(5) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 15 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,91 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,25-1,60 (16H, m), 1,90-2,10 (2H, m), 3,60-3,80 (5H, m), 3,854,13 (3H, m), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,41 (1H, m), 5,68 (1H, brs), 8,17 (1H, brs), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 23: SPK135:n valmistus 20 2-bromiheksadekaanihappoon (1 g), joka ensin oli liuotettu asetonitriiliin (50 ml), lisättiin kalsiumkloridia (5 g) ja tetrametyyliammoniumkloridia (1 g), ja seosta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä 6 tuntia. Reaktioseos suodatettiin, konsentroitiin ja jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-klooriheksadekaanihappo (0,80 g). 25 2-klooriheksadekaanihappo (893 mg), paranitrofenoli (428 mg) ja N,N'-disyklohek-syylikarbodi-imidi (634 mg) liuotettiin Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Sakka poistettiin suodattamalla ja DMF poistettiin tislaamalla, jolloin saatiin 2-klooriheksadekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin, joka ensin oli liuotettu DMF:ään (500 mg), lisättiin taas 6-(4'-N-glysyylispikamynyyli-30 amino)puriinihydrokloridia (465 mg) ja trietyyliamiinia (1,2 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa käyttäen eluenttijäijestelmiä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK135 262 mg:n saannolla.
105815 67 SPK135:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 166-168 °C
(2) Alkuaineanalyysi:
5 CHON
Laskettu (%): 54,91 7,68 17,07 14,94 Löydetty (%): 55,20 7,51 16,93 14,86.
(3) FD-massaspektri (m/z) 678, 680 (M+Na)+.
10 C30H50N7O7CI
(4) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm*1.
(5) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD30D:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,60 (24H, m), 1,80-2,10 (2H, m), 3,60-4,00 (8H, 15 m), 4,14 (1H, dd, J = 10,3 Hz), 4,38 (1H, dd, J = 5,7, 8,0 Hz), 5,63 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
Esimerkki 24: SPK159:n valmistus 2-hydroksidodekaanihappoa (1 g) liuotettuna 10 % vetykloridihappo-metanoliliuok-seen (20 ml) sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Reaktioseos konsentroitiin ja 20 jaettiin kloroformiin ja veteen. Klorofoimikerros pestiin edelleen 1-prosenttisen natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsul-, . faatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-hydroksidodekaanihapon metyyliesteri (1,02 g). 2-hydroksidodekaanihapon metyyliesteriin liuotettuna pyridiiniin (20 ml) lisättiin paratolueenisulfonyyliHoridia (0,9 g), ja seosta sekoitettiin 8 tuntia. Kun 25 pyridiini oli poistettu tislaamalla, jäännös jaettiin kloroformiin ja veteen ja kloro- r. formikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, konsentroitiin ja sille suori tettiin sitten kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmänä n-heksaani-·, etyyliasetaatti (50:1), jolloin saatiin 2-paratolueenisulfonyylioksidodekaanihapon metyyliesteri (1,43 g). Kun koko tuote oli liuotettu asetonitriiliin (50 ml) ja 5 ml tet-30 ra-n-butyyliammoniumfluoridin 1 M liuosta tetrahydrofuraanissa oli lisätty, seosta sekoitettiin 48 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmänä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1), jolloin saatiin 2-fluoridodekaanihapon metyyliesteri (480 mg). Tuote liuotettiin etanolin ja veden muodostamaan sekaliuottimeen (1:1). Liuokseen lisättiin 35 kaliumhydroksidia (0,6 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 30 minuuttia. Kun reak- 68 105815 tioseos oli konsentroitu ja säädetty heikosti happamalle pH-alueelle lisäämällä vettä ja ylimäärä sitruunahappoa, se uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-fluoridode-kaanihappo (420 mg).
5 Kun näin saatu 2-fluoridodekaanihappo (420 mg) ja paranitrofenoli (267 mg) oli liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (395 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-fluoridodekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (326 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliami-10 no)puriinitrifluoriasetaattia (565 mg) ja trietyyliamiinia (1,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromato-grafia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK159 saannolla 153 mg.
SPK1597:n fysikokemialliset ominaisuudet
15 (1) Sulamispiste: 187-189 °C
(2) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 53,50 7,25 19,19 16,80 20 Löydetty (%): 53,23 7,40 19,29 16,62.
(4) FD-massaspektri (m/z) 607 (M+Na+H)+.
• C26H42N7O7F
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1620 cm*1.
25 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CÖ30D:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,20-1,53 (16H, m), 1,80-2,00 (2H, m), 3,60-4,05 (8H, m), 4,15 (1H, t, J = 10,2 Hz) 4,95 (1H, dm, J = 50 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,15 (1H, s), 8,31 (1H, s).
30 Esimerkki 25: SPK233:n valmistus 2-hydroksiheksadekaanihappoa (1 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetykloridihappo-metanoliliuokseen (20 ml) sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Reaktioseos konsentroitiin ja jaettiin kloroformiin ja veteen. Kloroformikerros pestiin edelleen 1-prosenttisen natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä 69 105815 natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-hydroksiheksadekaanihapon metyyliesteri (1,01 g). 2-hydroksiheksadekaanihapon metyyliesteriin (1,01 g) liuotettuna pyridiiniin (20 ml) lisättiin paratolueenisulfonyylikloridia (0,67 g), ja seosta sekoitettiin 8 tuntia. Kun pyridiini oli poistettu tislaamalla, jäännös jaettiin kloro-5 formiin ja veteen ja kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, konsentroitiin ja sille suoritettiin sitten kromatografia silikageelikolonnilla eluent-tijärjestelmänä n-heksaani-etyyliasetaatti (50:1), jolloin saatiin 2-paratolueenisulfo-nyylioksiheksadekaanihapon metyyliesteri (1,43 g). Kun koko tuote oli liuotettu ase-tonitriiliin (30 ml) ja 5 ml tetra-n-butyyliammoniumfluoridin 1 M liuosta tetrahydro-10 furaanissa oli lisätty, seosta sekoitettiin 48 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijestelmänä n-hek-saani-etyyliasetaatti (100:1), jolloin saatiin 2-fluoriheksadekaanihapon metyyliesteri (480 mg). Tuote liuotettiin etanolin ja veden muodostamaan sekaliuottimeen (1:1). Liuokseen lisättiin kaliumhydroksidia (0,6 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 30 mi-15 nuuttia. Kun reaktioseos oli konsentroitu ja säädetty heikosti happamalle pH-alu-eelle lisäämällä vettä ja ylimäärä sitruunahappoa, se uutettiin etyyliasetaatilla. Etyy-liasetaattikeiTos kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-fluoriheksadekaanihappo (390 mg).
Kun näin saatu 2-fluoriheksadekaanihappo (390 mg) ja paranitrofenoli (200 mg) oli 20 liuotettu Ν,Ν-dimetyylformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (300 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-fluoriheksadekaanihapon aktiivinen esteri (510 mg). Aktiiviseen esteriin (510 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispika-. mynyyliamino)puriinitrifluoriasetaattia (495 mg) ja trietyyliamiinia (1,0 ml), ja se- 25 osta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK233 saannolla 118 mg.
SPK233:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 174-175 °C
30 (2) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 56,32 7,88 17,51 15,33 Löydetty (%): 56,60 7,66 17,43 15,59.
(4) FD-massaspektri (m/z) 640 (M+H)+.
35 70 105815
C30H50N7O7F
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 5 δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-2,10 (26H, m), 3,60-3,80 (5H, m), 3,85-4,05 (3H, m), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,95 (1H, dm, J = 50 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,15 (1H, s), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 26: SPK87:n valmistus 2-hydroksidodekaanihappoon (1,0 g) ja N-hydroksisukkiini-imidiin (540 mg) liuo-10 tettuna Ν,Ν-dimetyyliformainidiin (DMF, 30 ml) lisättiin Ν,Ν'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (960 mg) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-hydroksidodekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (500 mg) lisättiin, sen jälkeen kun se oli liuotettu DMF:ään, 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (612 mg) ja trietyyliamiinia 15 (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännök selle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa käyttäen eluointijäijestelminä kloroformi-metanolia (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK87 238 mg:n saannolla.
SPK87:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 190-192 °C
20 (2) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 53,69 7,45 22,00 16,86 Löydetty (%): 53,90 7,19 21,74 17,17.
25 (4) FD-massaspektri (m/z) 582 (M+H)+.
C26H43N7O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm*1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 30 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,88 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,80 (18H, m), 3,60-3,80 (5H, m), 3,80-4,10 (4H, m), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,62 (1H, brs), 8,10 (1H, s), 8,25 (1H, s).
• · 105815 71
Esimerkki 27: SPK112:n valmistus 2- hydroksiheksadekaanihappoon (500 mg) liuotettuna N,N-dimetyyliformamidiin (DMF, 40 ml) lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (211 mg) ja N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (379 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja 5 DMF poistettiin tislaamalla, jolloin saatiin 2-hydroksiheksadekaanihapon aktiivinen esteri. DMF:ään (250 mg) liuotettuun aktiiviseen esteriin (250 mg) lisättiin 6-(4'-N-spikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (259 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. DMF poistettiin tislaamalla ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnflla eluenttijärjestelmien ollessa kloroformi-metanoli 10 (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK112 saannolla 137 mg.
SPK112:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 238-240 °C
(2) Alkuaineanalyysi:
15 C H O N
Laskettu (%): 56,50 8,06 20,07 15,37 Löydetty (%): 56,77 8,00 19,98 15,25.
(4) FD-massaspektri (m/z) 660 (M+Na)+.
20 C30H51N7O8 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400,1630 cm*1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,85 (26H, m), 3,60-4,05 (8H, m), 4,08 (1H, m), 25 4,17 (1H, dd, J = 10,3 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,09 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 28: SPK88:n valmistus 3- hydroksidodekaanihappoon (1,0 g) ja N-hydroksisukkiini-imidiin (540 mg) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (960 mg) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja 30 konsentroitiin, jolloin saatiin 3-hydroksidodekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (500 mg) lisättiin, sen jälkeen kun se oli liuotettu DMF.ään, 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (620 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännök- 72 105815 selle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa käyttäen eluointijärjestelminä klorofonni-metanolia (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK88 223 mg:n saannolla.
SPK87:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 233-236 °C
5 (2) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 53,69 7,45 22,00 16,86 Löydetty (%): 53,82 7,20 21,86 17,12.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 582 (M+H)+.
C26H43N7O8 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm·1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 15 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,60 (16H, m), 2,28-2,50 (2H, m), 3,60-4,05 (9H, m), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,67 (1H, brs), 8,12 (1H, s), 8,31 (1H, s).
Esimerkki 29: SPK115:n valmistus 3-hydroksiheksadekaanihappoon (1,0 g) ja N-hydroksisukkiini-imidiin (423 mg) 20 liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (757 mg) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia.
Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 3-hydroksiheksaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (500 mg) lisättiin, sen jälkeen kun se oli liuotettu DMF:ään, 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (519 mg) 25 ja trietyyliamiinia (2 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa käyttäen eluointijärjestelminä kloroformi-metanolia (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK115 205 mg:n saannolla.
SPK115:n fysikokemialliset ominaisuudet 73 105815
(1) Sulamispiste: 215-217 °C
(2) Alkuaineanalyysi:
5 CHON
Laskettu (%): 56,50 8,06 20,07 15,37 Löydetty (%): 56,80 8,15 19,97 15,08.
(4) FD-massaspektri (m/z) 642 (M+Na+H20)+.
10 C3oH5iN708 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, 1630 cm11.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,60 (24H, m), 2,30-2,50 (2H, m), 3,60-4,10 (9H, 15 m), 4,14 (1H, t, J = 10,3 Hz), 5,69 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
Esimerkki 30: SPK410:n valmistus 11-bromiundekaanihappoon (1,73 g) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF) lisättiin natriumatsidia (1,5 g), ja seos kuumennettiin 80 °C:n lämpötilaan ja sekoitettiin 5 tuntia. Reaktioseos laimennettiin sitten jäähdytysvedellä ja uutettiin etyyli-20 asetaatilla, jolloin saatiin ll-atsfdoundekaanihappo. 11-atsidoundekaanihapon (1 g) ja paranitrofenolin (612 mg) muodostamaan sekaliuokseen DMF:ssä lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (920 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos * suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 11-atsidoundekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (284 mg) lisättiin, kun se ensin oli liuotettu DMF:ään, 25 vielä 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (300 mg) ja trietyy-z liamiinia (1,1 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluointijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1 -5:1), jolloin saatiin SPK410 saannolla 171 mg.
SPK410:n fysikokemialliset ominaisuudet
30 (1) Sulamispiste: 182-183 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +6,0° (c = 0,1 metanolissa) · · 74 105815 (3) Alkuaineanalyysi: CHON Laskettu (%): 50,67 6,80 18,90 23,63 5 Löydetty (%): 50,38 6,99 19,10 23,53.
(4) FD-massaspektri (m/z) 593 (M+H)+.
C25H40N10O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, cm'1, 2110 cm'1, 1630 cm'1.
10 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,25-1,50 (12H, m), 1,55-1,70 (4H, m), 2,30 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,30 (2H, t, J = 7.0 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 16,6 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,6 Hz), 4.00 (1H, dd, J = 2,1 <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,64 (1H, brs), 8,16 15 (1H, s), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 31: SPK126:n valmistus 12-bromidodekaanihappoon (1 g) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF) lisättiin natriumatsidia (2,0 g), ja seos kuumennettiin 80 °C:n lämpötilaan ja palautus-jäähdytettiin 5 tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin sitten lisäämällä vettä ja uutettiin 20 etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 12-atsidododekaanihappo (0,81 g).
12-atsidododekaanihapon (0,81 g) ja paranitrofenolin (0,47 g) muodostamaan seka-liuokseen DMFissä lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,69 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-atsidododekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (472 mg) lisättiin, kun 25 se ensin oli liuotettu DMF:ään, vielä 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini-hydrokloridia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageeli-kolonnilla eluointijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK126 saannolla 189 mg.
30 SPK126:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 202-203 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D245 = +24° (c = 0,1 metanolissa) 75 105815 (3) Alkuaineanalyysi CHON Laskettu (%): 51,47 6,98 18,46 23,09 5 Löydetty (%): 51,57 6,81 18,30 23,32.
(4) FD-massaspektri (m/z) 607 (M+H)+.
C26H42N10O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, cm'1, 2080 cm'1, 1630 cm'1.
10 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,70 (18H, m), 2,27 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,26 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,65-3,80 (5H, m), 3,85 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,05 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,60 (1H, brs), 8,02 (1H, s), 8,22 (1H, s).
15 Esimerkki 32: SPK226:n valmistus
Suspensioon, jossa oli 16-hydroksiheksadekaanihappoa (0,7 g) dikloorimetaanissa (20 ml), lisättiin trietyyliamiinia (1,80 ml). Metaanisulfonyylikloridia (0,8 ml) lisättiin pisaroittain reaktioseokseen samalla kun sitä jäähdytettiin jäillä ja sekoitettiin. Sekoittamista jatkettiin suoraan 0 °C:ssa 1 tunti. Reaktioseos uutettiin kloro-20 formilla ja kloroformikerros pestiin 1-prosenttisen natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja sitten vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä kloroformi-metanoli (3:1), jolloin saatiin 16-metaanisulfonyylioksiheksadekaanihap-po (0,74 g). 16-metaanisulfonyylioksiheksadekaanihappoon (325 mg) liuotettuna 25 Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 15 ml) lisättiin natriumatsidia (268 mg), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 12 tuntia. Reaktioseos jaettiin jäähdytyksen jälkeen etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetäatfikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, jolloin saatiin 16-atsidoheksadekaanihappo (235 mg). 16-atsidoheksadekaanihapon (226 mg) liuokseen DMF:ssä lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (90 mg) ja N,N'-30 disykloheksyylikarbodi-imidiäXTtiÖ mg), ja seosta sekoitettiin 48 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-atsidoheksadekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin, joka oli liuotettu DMF:ään, lisättiin edelleen 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (310 mg) ja trietyyliamiinia (1 ml), ja seosta sekoitettiin 24 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suori-. 35 tettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmällä kloroformi-metanoli (6:1), jolloin saatiin SPK226 92 mg:n saannolla.
76 SPK226:n fysikokemialliset ominaisuudet 105815
(1) Sulamispiste: 182-183 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [cc]D25 = +0° (c = 0,1 metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi 5
C H O N
Laskettu (%): 54,37 7,60 16,89 21,13 Löydetty (%): 54,15 7,89 16,92 21,04.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 663 (M+H)+.
C30H50N10O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, cm'1, 2110 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 15 δΗ: 1,20-1,70 (26H, m), 2,29 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,28 (2H, t, J = 6,5 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 15,0 Hz), 3,90 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,03 (1H, dd, J = 2,5, <1 Hz), 4,16 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 33: SPK229:n valmistus 20 2-bromiheksadekaanihapon (1,00 g) liuokseen Ν,Ν-dimetyyliformamidissa (DMF, 15 ml) lisättiin natriumatsidia (0,86 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 12 tuntia. Re-aktioseokseen lisättiin huoneenlämpöön jäähdyttämisen jälkeen sitten vettä. Seos *’ uutettiin etyyliasetaatilla, ja etyyliasetaattikerros erotettiin, pestiin kahdesti suola liuoksella ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamal-25 la, jolloin saatiin 2-atsidoheksadekaanihappo (0,73 g). 2-atsidoheksadekaanihapon liuokseen DMF:ssä lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (74 mg) ja Ν,Ν'-disyklohek-syylikarbodi-imidiä (146 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Muodostunut sakka poistettiin suodattamalla, ja suodos konsentroitiin, jolloin saatiin 2-atsidoheksadekaanihapon aktiivinen esteri. DMF:ssä olevaan aktiiviseen esteriin lisättiin vielä 6-30 (4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (246 mg) ja trietyyliamiinia (0,72 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluointijärjestelmällä klorofor-mi-metanoli (6:1), jolloin saatiin SPK229 saannolla 185 mg.
« SPK229:n fysikokemialliset ominaisuudet 77 105815
(1) Sulamispiste: 184-185 °C
(2) Alkuaineanalyysi
5 CHON
Laskettu (%): 54,37 7,60 16,90 21,13 Löydetty (%): 54,11 7,88 17,12 20,89. .
(3) FD-massaspektri (m/z) 663 (M+H)+.
10 C30H50N10O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400, cm’1, 2120 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CDCl3-CD3OD:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,20-1,52 (24H, m), 1,78-1,95 (2H, m), 3,60-3,80 (5H, 15 m), 3,86-4,02 (3H, m), 4,05 (1H, dd, J = 2,0, <1 Hz), 4,18 (1H, dd, J = 10,3, 10,3
Hz), 5,65 (1H, brs), 8,09 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 34: SPK416:n valmistus 11-syaaniundekaanihapon (1,00 g) ja paranitrofenolin (660 mg) liuokseen N,N-dimetyyliformamidissa (DMF, 30 ml) lisättiin Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidiä 20 (980 mg) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 11-syaaniundekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (433 mg) lisättiin, sen jälkeen kun se oli liuotettu DMF:ään, vielä 6-(4'-N-glysyyli-spikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännökselle suoritet-25 tiin kromatografia silikageelikolonnissa käyttäen eluointijärjestelminä kloroformi-„ metanolia (7:1-5:1), jolloin saariin SPK416 173 mg:n saannolla.
SPK416:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 215-217 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [o]d25 = +0° (c = 0,1 metanolissa) 30 (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 54,16 6,99 19,42 19,43 Löydetty (%): 53,95 7,16 19,20 19,69.
78 105815 (4) FD-massaspektri (m/z) 577 (M+H)+.
C26H40N8O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 2250 cm'1, 1630 cm'1.
5 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,70 (16H, m), 2,27 (2H, t, J = 7,1 Hz), 2,42 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,85 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,69 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,30 (1H, 10 s).
Esimerkki 35: SPK177:n valmistus 16-hydroksiheksadekaanihappoa (1 g) liuotettuna 10-prosenttisen vetykloridihapon metanoliliuoksen ja metyleenikloridin muodostamaan sekaliuokseen (5:1) sekoitettiin 1 tunti. Reaktioseos konsentroitiin ja jaettiin kloroformiin ja veteen. Klorofor-15 mikerros pestiin edelleen 1-prosenttisen natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-hydroksiheksadekaanihapon metyyliesteri (1,04 g).
16-hydroksiheksadekaanihapon metyyliesteriin (1,04 g) liuotettuna metyleeniklo-ridiin (20 ml) lisättiin pyridiiniä (1 ml), ja seosta sekoitettiin jäillä jäähdyttäen. Se-20 okseen lisättiin paratolueenisulfonyylikloridia (0,73 g), ja sekoittamista jatkettiin 3 tuntia. Reaktioseos jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros kuivattiin ve-.. dettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin. Näin saadulle jäännökselle suoritet- tiin sitten kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmänä n-heksaani-etyy-liasetaatti (100:1), jolloin saatiin 16-paratolueenisulfonyylioksiheksadekaanihapon 25 metyyliesteri (1,58 g).
16-paratolueensulfonyylioksiheksadekaanihapon metyyliesteri (600 mg) liuotettiin dimetyylisulfoksidiin (DMSO). Liuokseen lisättiin natriumsyanidia (250 mg) ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 5 tuntia. Kun reaktioseos oli jäähdytetty, se jaettiin di-etyylieetteriin ja veteen. Dietyylieetterikerros kuivattiin vedettömällä natriumsul-30 faatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-syaaniheksadekaanihapon metyyliesteri (370 mg). Tuote liuotettiin etanolin ja veden muodostamaan sekaliuottimeen (1:1), ja liuokseen lisättiin litiumhydroksidia (180 mg). Seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos jäähdytettiin ja etanoli poistettiin tislaamalla ja uutettiin * etyyliasetaatilla, joka oli säädetty heikosti happamaan pH-alueeseen lisäämällä sit- 105815 79 raunahappoa. Etyyliasetaattikerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-syaaniheksadekaanihappo (316 mg).
Kim näin saatu 16-syaaniheksadekaanihappo (225 mg) ja paranitrofenoli (111 mg) oli liuotettu Ν,Ν-dimetyylformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin N,N'-disyklohek-5 syylikarbodi-imidiä (167 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-syaaniheksadekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (323 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispika-mynyyliamino)puriinihydrokloridia (317 mg) ja trietyyliamiinia (1,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin 10 kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK177 saannolla 95,8 mg.
SPK177:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 162-163 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D =-1,6° (c = 0,1, metanolissa) 15 (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 57,57 7,79 17,32 17,32 Löydetty (%): 57,28 8,01 17,57 17,14.
20 (4) FD-massaspektri (m/z) 669 (M+Na)+.
C31H50N8O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 2250 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 25 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,70 (26H, m), 2,26 (2H, t, J = 7,3 Hz), 2,40 (2H, t, J = 7,3 Hz), 3,65-3,80 (5H, m), 3, 86 (1H, d, J = 16,0 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,0 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,3, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,62 (1H, brs), 8,05 (1H, brs), 8,22 (1H, s).
30 Esimerkki 36: SPK422:n valmistus 11-fenoksiundekaanihapon (1 g) ja paranitrofenolin (499 mg) liuokseen N,N-dimetyyliformamidissa (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä : (741 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 11-fenoksiundekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin 80 105815 (532 mg) DMF:ään liuotettuna lisättiin vielä 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)-puriinihydrokloridia (400 mg) ja trietyyliamiinia (5,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia sili-kageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin 5 SPK422 245 mg:n saannolla.
SPK422:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 187-188 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 = +10,0° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 10
C H O N
Laskettu (%): 57,84 7,05 19,88 15,23 Löydetty (%): 57,60 7,30 20,09 15,01.
15 (4) FD-massaspektri (m/z) 644 (M+H)+.
C31H45N7O8 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm*1, 1630 cm*1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,30-1,80 (16H, m), 2,30 (2H, t, J = 7,0 Hz) , 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, 2 J = 16,0 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,0 Hz), 3,95 (1H, t, J = 7,0), 4,00 (1H, dd, J = 2,0, 3 <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,68 (1H, brs), 6,90 (3H, m), 7,22 (2H, t, 4 J = 7,3 Hz), 8,15 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
5
Esimerkki 37: SPK186:n valmistus 6 12-bromidodekaanihappoa (1 g) sekoitettiin 10-prosenttisessa vetykloridihappome- 7 tanoliseoksessa 4 tuntia. Sitten seos konsentroitiin ja jaettiin kloroformiin ja veteen, 8 ja kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, jolloin saatiin 12- 9 bromiundekaanikaanihapon metyyliesteri (1,01 g). Parafluorifenoliin (0,38 g) liuo 10 tettuna dimetyyliformamidiin (DMF) lisättiin 60-prosenttista NaH:ta (0,40 g) ja se- 11 osta sekoitettiin. Tähän seokseen lisättiin 12-bromiundekaanihappoa (1 g) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos uutettiin etyyliasetaatilla sen jälkeen, kun se oli konsentroitu ja säädetty heikosti happamalle pH-alueelle lisäämällä sitruunahappoa. Etyyliasetaattikerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-parafluorifenoksi-* dodekaanihappoa (1,12 g). Tuote liuotettiin etanolin ja veden seokseen (1:1), ja liu- 81 105815 okseen lisättiin kaliumhydroksidia (0,6 g). Seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos laimennettiin vedellä (80 ml), säädettiin happamalle pH-alueelle lisäämällä sitruunahappoa ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin parafluorifenoksido-5 dekaanihappoa (1,03 g).
Kun näin saatu parafluorifenoksidodekaanihappo (1 g) ja paranitrofenoli (0,36 g) oli liuotettu Ν,Ν-dimetyylformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin Ν,Ν'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (167 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-parafluorifenoksidodekaanihapon aktiivinen esteri. 10 Aktiiviseen esteriin (644 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispika-mynyyliamino)puriinihydrokloridia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK186 saannolla 215 mg.
15 SPK186:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 218-219 °C
Af (2) Spesifinen rotaatio: [a]o =+6,4° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
20 C H O N
Laskettu (%): 56,88 6,86 18,94 14,51 Löydetty (%): 56,97 6,70 18,83 14,70.
♦ · (4) FD-massaspektri (m/z) 676 (M+H)+.
25 C32H46N708F
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,80 (18H, m), 2,30 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 30 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,92 (1H, t, J = 7,1
Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4 Hz), 5,60 (1H, brs), 6,82 (2H, dd, J = 4,6, 9,1 Hz), 6,96 (2H, dd, J =9,1, 9,1 Hz), 8,12 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
s 82 105815
Esimerkki 38: SPK228:n valmistus 16-hydroksiheksadekaanihappo (0,5 g) suspendoitiin metyleenikloridiin (15 ml), ja suspensioon lisättiin trietyyliamiinia (1,03 ml). Seokseen lisättiin jäillä jäähdyttäen ja sekoittaen pisaroittani asetyylikloridia (0,39 ml). 8 tunnin kuluttua lisättiin jäitä ja 5 uutettiin kloroformilla. Kloroformikerros pestiin kyllästetyllä natriumkarbonaattiliu-oksella ja sitten kahdesti vedellä ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Kloro-formikerros konsentroitiin ja näin saadulle jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijestelmällä kloroformi-heksaani (2:1), jolloin saatiin 16-asetoksiheksadekaanihappoa (0,58 g).
10 16-asetoksiheksadekaanihappo (236 mg) liuotettiin N,N-dimetyyli-formamidiin (DMF, 3,5 ml). Lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (87 mg) ja N,N'-disykloheksyy-likarbodi-imidiä (170 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (288 mg) ja trietyyliamiinia (0,84 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos 15 konsentroitiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla elu-enttijärjestelmällä kloroformi-metanoli (6:1), jolloin saatiin SPK228 saannolla 167 mg.
SPK228:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 170-172 °C
20 (2) Spesifinen rotaatio: [a]o25 = +3,2° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
” C H O N
Laskettu (%): 56,54 7,86 21,18 14,42 25 Löydetty (%): 56,26 7,99 21,30 14,45.
(4) FD-massaspektri (m/z) 680 (M+H)+.
• C32H53N7O9 (5) Tnfrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm-1, 1740 cm*1, 1630 cm*1.
30 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,20-1,70 (26H, m), 2,03 (3H, s), 2,30 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,6-3,8 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 15,0 Hz), 3,89 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,03 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,06 < •« 83 105815 (2H, t, J = 7,0 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 39: SPK173:n valmistus 2-hydroksiheksadekaanihappoa (1 g) liuotettiin pyridiiniin, ja liuokseen lisättiin 5 etikkahappoanhydridiä (0,62 g) jäähauteessa. 12 tunnin kuluttua reaktioseos jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros konsentroitiin, jolloin saatiin 2-asetoksi-heksadekaanihappo (1,10 g). 2-asetoksiheksadekaanihappoon (0,50 g) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF) lisättiin paranitrofenolia (0,22 g) ja Ν,Ν'-disyk-loheksyylikarbodi-imidiä (0,33 g), ja seosta sekoitettiin 8 tuntia. Reaktioseos suoda-10 tettiin ja suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyyiispikamynyyliamino)puriini-hydroklo-ridia (0,61 g) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia.
Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageeli-kolonnilla eluenttijärjestelmällä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK173 saannolla 223 mg.
15 SPK173:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 165-167 °C
(2) Alkuaineanalyysi:
C H O N
20 Laskettu (%): 56,54 7,86 21,18 14,42 Löydetty (%): 56,78 7,59 20,85 14,78.
·« « (4) FD-massaspektri (m/z) 703 (M+Na+H)+.
C32H53N7O9 25 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 1720 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,91 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,90 (26H, m), 2,20 (3H, s), 3,60-3,80 (5H, m), 3,80-4,00 (2H, m), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J =10,4, 10,4 Hz), 30 4,98 (1H, m), 4,70 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,30 (1H, s).
t 84 105815
Esimerkki 40: SPK184:n valmistus 16-hydroksidodekaanihappoa (1 g) liuotettiin pyridiiniin ja liuokseen lisättiin pro-pionyylikloridia (0,40 g) jäähauteessa. 4 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseos jaettiin kloroformiin ja veteen ja kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natrium-5 sulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-propionyylioksidodekaanihappo (1,10 g). 16-propionyylioksidodekaanihappoon (0,50 g) N,N-dimetyyliformamidiin (DMF) liuotettuna lisättiin paranitrofenolia (0,22 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,32 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suodok-seen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (0,58 g) ja 10 trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK184 saannolla 219 mg.
SPK184:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 165-166 °C
15 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +4,7° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 57,13 7,99 20,75 14,13 20 Löydetty (%): 56,96 8,12 20,43 14,49.
(4) FD-massaspektri (m/z) 694 (M+H)+.
• C33H55N7O9 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 1730 cm"1, 1630 cm’1.
25 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,13 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,70 (26H, m), 2,30 (2H, t, J = 7,1 Hz), 2,33 (2H, q, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,03 (1H, d, J = 2,1, <1 Hz), 4,05 (2H, t, J = 7,1 Hz), 4,15 (1H, t, J = 10,4, 30 10,4 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,10 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
Esimerkki 41: SPK145:n valmistus 12-hydroksidodekaanihappoa (1 g) liuotettiin pyridiiniin ja liuokseen lisättiin buty-royylikloridia (0,59 g) jäähauteessa. 4 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseos 105815 85 jaettiin kloroformiin ja veteen ja kloroformikerros konsentroitiin, jolloin saatiin 12-butyroyylioksidodekaanihappo (1,28 g).
12-butyroyylioksidodekaanihappoon (0,30 g) Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF) liuotettuna lisättiin paranitrofenolia (0,15 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä 5 (0,22 g), ja seosta sekoitettiin 8 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suodokseen li sättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (0,40 g) ja trietyy-liamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK145 saannolla 129 mg.
10 SPK145:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 173-174 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [α]ο24 = +4,3° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
15 C H O N
Laskettu (%): 55,29 7,58 22,09 15,04 Löydetty (%): 55,51 7,39 21,81 15,29.
(4) FD-massaspektri (m/z) 652 (M+H)+.
20 C30H49N7O9 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm"1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri : (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,92 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,80 (20H, m), 2,28 (4H, m), 3,60-3,80 (5H, m), 25 3,85 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,05 (2H, t, J = 7,4 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,62 (1H, brs), 8,12 (1H, s), 8,29 (1H, s).
. . Esimerkki 42: SPK225:n valmistus 16-Hydroksiheksadekaanihappoa (1 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetykloridihap-30 pometanoliliuokseen sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Seos konsentroitiin sitten ja jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros pestiin 1-prosenttisen nat-riumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsul-faatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-hydroksiheksadekaanihapon metyyliesteri (1,02 g). 16-hydroksiheksadekaanihapon metyyliesteriin liuotettuna pyridiiniin 86 105815 (20 ml) lisättiin metaanisulfonyylikloridia (0,50 g), ja seosta sekoitettiin 8 tuntia. Sitten pyridiini poistettiin tislaamalla ja jäännös jaettiin kloroformiin ja veteen. Klo-roformikeiros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, konsentroitiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelipylväässä eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliase-5 taatti (50:1), jolloin saatiin 16-metaanisulfonyylioksiheksadekaanihapon metyylies-teri (1,02 g).
Metyyliesteriin, joka oli liuotettu etanolin ja veden (1:1) muodostamaan sekaliuot-timeen, lisättiin kaliumhydroksidia (0,6 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos konsentroitiin, säädettiin happamalle pH-alueelle lisäämällä 10 vettä ja ylimäärä sitruunahappoa ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-metaa-nisulfonyylioksiheksadekaanihappoa (0,960 mg).
Kun näin saatu metaanisulfonyylioksiheksadekaanihappo (0,50 g) ja paranitrofenoli (200 mg) oli liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin N,N'-15 disykloheksyylikarbodi-imidiä (295 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihyd-rokloridia (0,55 g) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageeliko-lonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK225 20 saannolla 189 mg.
SPK225:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 161-162 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]o25 = +10,4° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 25
C H O N
Laskettu (%): 53,20 7,63 20,57 14,01 Löydetty (%): 52,96 7,38 20,46 14,30.
30 (4) FD-massaspektri (m/z) 700 (M+H)+.
C31H53N7O9S
(5) Infiapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm*1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 105815 87 δΗ: 1,20-1,80 (26Η, m), 2,29 (2Η, t, J 7,1 Hz), 3,05 (3H, s), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,25 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,22 (1H, t, J = 7,1 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,10 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
5 Esimerkki 43: SPK230:n valmistus 12-hydroksidodekaanihappoa (1 g) liuotettiin metyleenikloridiin (25 ml) ja liuokseen lisättiin trietyyliamimia (2 ml). Seokseen lisättiin pisaroittani 1-propaanisulfo-nyylikloridia (1,03 ml) samalla, kun sitä jäähdytettiin jäillä ja sekoitettiin. 1,5 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseos jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros 10 kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin. Näin saadulle jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelipylväällä kloroformi-heksaani (2:1) elu-enttijärjestelmänä, jolloin saatiin 12-propaanisulfonyylioksidodekaanihappo (1,49 g). Tuote (210 mg) liuotettiin Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF). N-hydroksi-sukkiini-imidiä (75 mg) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (148 mg) lisättiin ja 15 seosta sekoitettiin 12 tuntia. Saadut sakat poistettiin suodattamalla ja suodos konsentroitiin, jolloin saatiin 12-propaanisulfonyylioksidodekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiivinen esteri liuotettiin DMF:ään ja lisättiin 6-(4'-N-glysyylispika-mynyyli-amino)puriinihydrokloridia (250 mg) ja trietyyliamimia (0,73 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia 20 silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmänä kloroformi-metanoli (6:1), jolloin saatiin : ’. # t SPK230 480 mg:n saannolla.
« ] * SPK230:n fysikokemialliset ominaisuudet • · · • · • ·
(1) Sulamispiste: 163-164 °C
• · A# (2) Spesifinen rotaatio: [a]D = +5,6° (c = 0,1, metanolissa) 25 (3) Alkuaineanalyysi: j ··· [::: c h o n . *V Laskettu (%): 50,64 7,18 23,26 14,26 Löydetty (%): 50,40 7,08 23,54 14,38.
;·**: 30 (4) FD-massaspektri (m/z) 710 (M+Na)+.
C29H49N7O10S
(5) Inffapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm"1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 35 (500 MHz, CD3OD:ssä) 88 105815 δΗ: 1,10 (3Η, t, 7,6 Hz), 1,25-1,43 (14H, m), 1,60-1,80 (4H, m), 1,85 (2H, m), 2,30 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,17 (2H, t, J = 8,3 Hz), 3,65-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 15,0 Hz), 3,90 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,01 (1H, d, J = 2,0 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,0 Hz), 4,20 (2H, t, J = 7,0 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,15 (1H, s), 8,29 (1H, s).
5 Esimerkki 44: SPK232:n valmistus 12-hydroksidodekaanihappoa (1 g) liuotettiin metyleenikloridiin (25 ml) ja liuokseen lisättiin trietyyliamiinia (2 ml). Seokseen lisättiin pisaroittani 1-butaanisulfo-nyylikloridia (0,72 ml) samalla kun sitä jäähdytettiin jäillä ja sekoitettiin. 1,5 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseos jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros 10 kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin. Näin saadulle jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelipylväällä kloroformi-heksaani (2:1) elu-enttijärjestelmänä, jolloin saatiin 12-butaanisulfonyylioksidodekaanihappo (0,99 g). Tuote (220 mg) liuotettiin Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF). N-hydroksisukkiini-imidiä (76 mg) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (149 mg) lisättiin ja seosta 15 sekoitettiin 12 tuntia. Saadut sakat poistettiin suodattamalla ja suodos konsentroitiin, jolloin saatiin 12-butaanisulfonyylioksidodekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiivinen esteri liuotettiin DMF:ään ja lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini-hydrokloridia (251 mg) ja trietyyliamiinia (0,73 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageeli- .···. 20 kolonnissa eluenttijärjestelmänä kloroformi-metanoli (6:1), jolloin saatiin SPK232 • · .' 134 mg.n saannolla.
SPK232:n fysikokemialliset ominaisuudet • · * • · ·
(1) Sulamispiste: 161-162 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +1,2° (c = 0,1, metanolissa) • · · *·* ’ 25 (3) Alkuaineanalyysi:
C: C H O N
***** Laskettu (%): 51,64 6,79 22,93 14,05 Löydetty (%): 51,50 6,88 23,15 13,80.
• · _ _ 30 (4) FD-massaspektri (m/z) 698 (M+H)+.
...· C30H47N7O10S
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm’1, 1630 cm*1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 35 (500 MHz, CD3OD:ssä) 105815 89 δΗ: 0,97 (1Η, t, J = 7,3 Hz), 1,20-1,90 (22H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,3 Hz), 3,20 (2H, t, J = 8,0 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,85 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,00 (1H, dd, J = <1,2,4 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,7, 10,7 Hz), 4,20 (2H, t, J = 6,7 Hz), 5,66 (1H, brs), 8,13 (1H, brs), 8,28 (1H, s).
5 Esimerkki 45: SPK185:n valmistus 2-hydroksidodekaanihappoa (1 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetykloridihapon me-tanoliliuokseen sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Seos konsentroitiin sitten ja jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros pestiin 1-prosenttisen natriumve-tykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja 10 konsentroitiin, jolloin saatiin 2-hydroksidodekaanihapon metyyliesteri (1,02 g). 2-hydroksidodekaanihapon metyyliesteriin, joka oli liuotettu pyridiiniin (20 ml), lisättiin butaanisulfonyylikloridia (0,80 g), ja seosta sekoitettiin 8 tuntia. Sitten pyri-diini poistettiin tislaamalla ja jäännös jaettiin kloroformiin ja veteen. Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, konsentroitiin ja sille suoritettiin kro-15 matografia silikageelikolonnillä eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (50:1), jolloin saatiin butaanisulfonyylioksidodekaanihapon metyyliesteri (1,21 g).
Metyyliesteriin, joka oli liuotettu etanolin ja veden (1:1) muodostamaan sekaliuot-timeen, lisättiin kaliumhydroksidia (0,6 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 30 mi-... nuuttia. Reaktioseos konsentroitiin, säädettiin happamalle pH-alueelle lisäämällä • 4 20 vettä ja ylimäärä sitruunahappoa ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros : * * kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-butaani- ':: sulfonyylioksidodekaanihappo (1,16 g).
* · « • · « • « : Kun näin saatu 2-butaanisulfonyylioksiheksadekaanihappo (500 mg) ja N-hydroksi- « ·· sukkiini-imidi (171 mg) oli liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml), li-• · » __ ______ ’ 25 sättiin N,N'-disykloheksyyIikarbodi-imidiä (253 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia.
; Reaktioseos suodatettiin, ja suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliami- • · '···' no)puriinihydrokloridia (569 mg) ja trietyyliamiinia (1,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia ;*·,· silikageelikolonnillä eluenttijäijestelmällä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin . ··. 30 saatiin SPK185 saannolla 242 mg.
• · · ’: SPK185: n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 158-159 °C
(2) Alkuaineanalyysi: 90 105815 CHON Laskettu (%): 52,54 7,49 21,00 14,30 Löydetty (%): 52,38 7,26 20,79 14,58.
5 (3) FD-massaspektri (m/z) 586 (M+H)+.
C30H51N7O9S
(4) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 1630 cm1.
(5) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 10 δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 0,98 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-2,00 (22H, m), 3,40 (2H, m), 3,60-4,10 (8H, m), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,95 (1H, t, J = 6,7 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,13 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 46: SPK429:n ja 430:n valmistus 10-undekyynihappoa (0,5 g) liuotettiin tetrahydrofuraaniin (20 ml), ja ilma reaktorin 15 sisältä puhdistettiin argonilla. Kun liuos oli jäähdytetty -78 °C:een kuivan jään ja asetonin muodostamassa hauteessa, lisättiin edellä mainittuun liuokseen pisaroittain 2,4 M liuos n-butyylilitiumia heksaanissa (2,7 ml) 5 minuutin kuluessa. Kun seosta oli sekoitettu samassa lämpötilassa 15 minuuttia, lisättiin seokseen trimetyylisilyy-likloridia (0,6 g). 15 minuutin kuluttua laimeata vetykloridihappoa lisättiin seok-20 seen, ja saatu seos uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin suolaliuok-! sella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Seos suodatettiin ja suodos :"i konsentroitiin, jolloin saatiin epäpuhdas tuote, jolle sitten suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (30:1, 20:1, 10:1 ja 5:1), jolloin saatiin 1 l-trimetyylisilyyli-10-undekyynihappo (0,44 g).
• · • · · · · ’·* * 25 Kun ll-trimetyylisilyyli-10-undekyynihapon (0,21 g) ja paranitrofenolin (0,11 g) seos Ν,Ν-dimetyyliformamidissa (DMF, 3 ml) oli jäähdytetty 0 °C:een, lisättiin • · · N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,18 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reak- • · · ί,,,ϊ tioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin ll-trimetyylisilyyli-10-unde- ; kyynihapon aktiivinen esteri.
• · · • · • · · 30 Liuokseen, jossa oli 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini-hydrokloridia (400 mg) ja trietyyliamiinia (1,0 ml) DMF:ssä (15 ml), lisättiin 11-trimetyylisilyyli- • · · 10-undekyynihappoa (300 mg) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja epäpuhtaalle tuotteelle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa 105815 91 eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (5:1-4:1), jolloin saatiin SPK429 saannolla 37 mg.
SPK429:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 170-172 °C
5 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D =+5,6° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 54,26 7,32 18,07 15,82 10 Löydetty (%): 54,49 7,12 17,90 16,10.
(4) FD-massaspektri (m/z) 620 (M+H)+.
C28H45N7O7S1 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 2100 cm'1, 1630 cm'1.
15 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,11 (9H, s), 1,30-1,70 (12H, m), 2,20 (2H, t, J = 7,1 Hz), 2,30 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,90 (1H, d, J = 16,4 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,16 (1H, dd, J = 10,1, 10,1 Hz), 5,62 (1H, brs), 8,10 (1H, 20 brs), 8,30 (1H, s).
• · • ·
Samaan aikaan ll-trimetyylisilyyli-10-undekyynihappoa (0,23 g) liuotettiin etyyli- 9 9 ;v< asetaattiin (5 ml), ja liuokseen lisättiin 10-prosenttista palladiumhiiltä (10 mg). Kun \ reaktorissa oleva ilma oli korvattu vedyllä, seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 12 / tuntia. Sitten seos suodatettiin, ja suodos konsentroitiin, jolloin saatiin 11-trimetyy- *·* * 25 lisilyyliundekaanihappoa (0,21 g).
.·*·. Kun 11-trimetyylisilyyliundekaamhapon (0,21 g) ja paranitrofenolin (0,12 g) seos .···. Ν,Ν-dimetyyliformamidissa (DMF, 3 ml) oli jäähdytetty 0 °C:een, lisättiin Ν,Ν'-di- ' sykloheksyylikarbodi-imidiä (0,18 g) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos %**: suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 11-trimetyylisilyyliundekaanihapon • « · 30 aktiivinen esteri.
9 * * * ’··] Liuokseen, jossa oli 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (150 ' ‘ mg) ja trietyyliamiinia (0,5 mg) DMF:ssä (15 ml), lisättiin 11-trimetyylisilyyli- undekaanihapon aktiivinen esteri (148 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktio-seos konsentroitiin, ja epäpuhtaalle tuotteelle suoritettiin kromatografia silikageeli- 92 105815 kolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (5:1-4:1), jolloin saatiin SPK430 saannolla 40 mg.
SPK430:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 176-177 °C
5 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +17,2° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 53,91 7,92 17,95 15,72 10 Löydetty (%): 53,80 8,12 18,22 15,44.
(4) FD-massaspektri (m/z) 624 (M+H)+.
C28H49N7O7S1 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm*1, 1630 cm'1.
15 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: -0,04 (9H, s), 0,48 (2H, brt), 1,24-1,35 (14H, m), 1,62 (2H, t, J = 7,3 Hz), 2,26 (2H, t, J = 7, 3 Hz), 3,65-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 16,0 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,0 Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,0, <1 Hz), 4,13 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,64 (1H, !:;·* 20 m), 8,11 (1H, s), 8,28 (1H, s).
« «· ””J Esimerkki 47: SPK123:n valmistus •« · • · * • * \ \ NaOH:n (5,03 g) liuokseen vedessä (200 ml) suspendoitiin öljyhappoa (4,96 g), ja *;./ seosta, johon oli lisätty jäitä, sekoitettiin 5 °C:ssa. Kaliumpermanganaatin (4 g) liu- • · · os vedessä (500 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 5 minuuttia. Sitten lisättiin rikki-25 hapon vesipitoista liuosta kunnes seos muuttui valkoiseksi, ja saatu sakka kerättiin )*· talteen suodattamalla. Sakka pestiin vedellä ja eluoitiin kloroformin ja metanolin ··« L..: (1:1) seoksella, ja eluaatti konsentroitiin, jolloin saatiin 9,10-dihydroksiokta-dekaa- .·! : nihappoa (4,69 g). 9,10-dihydroksioktadekaanihapposuspensioon asetonissa lisättiin • · · '··.[ kons. rikkihappoa (0,1 ml), ja seosta sekoitettiin 8 tuntia. Kun asetoni oli poistettu *:* 30 tislaamalla ja vettä oli lisätty, seos uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros
«M
:...: kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, jolloin saatiin asetonidi (4,70 g). Asetoni- *:·" diin (3,70 g) lisättiin paranitrofenolia (1,44 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi- imidiä (3,21 g), ja seosta sekoitettiin Ν,Ν-dimetyyliformamidissa (DMF) 12 tuntia. Kun muodostuneet sakat oli poistettu suodattamalla ja liuotin (DMF) oli poistetu 105815 93 tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijär-jestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (50:1), jolloin saatiin 9,10-dihydroksioktade-kaanihapon aktiivinen esteri 9,10-asetonidi (3,05 g). Aktiivinen esteri liuotettiin DMF:ään yhdessä 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridin 5 (400 mg) kanssa, ja sen jälkeen kun trietyyliamiinia (2,0 ml) oli lisätty, seosta sekoi tettiin 12 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK123 saannolla 113,9 mg.
SPK123:n fysikokemialliset ominaisuudet
10 (1) Sulamispiste: 226-227 °C
(2) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 58,23 8,24 19,95 13,58 15 Löydetty (%): 58,40 8,41 19,79 13,40.
(3) FD-massaspektri (m/z) 722 (M+H)+.
C35H59N7O9 (4) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm*1, 1630 cm'1.
20 (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri :*.<t (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,70 (26H, m), 1,38 (6H, s), 2,28 (2H, t, J = 7,0 f V Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 15,0 Hz), 3,90 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,00 :*.*·:· (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,04 (2H, m), 4,14 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5, 69 (1H, :T: 25 brs), 8,16 (1H, s), 8,31 (1H, s).
... Esimerkki 48: SPK102:n valmistus • a • · ·«· 12-hydroksisteariinihappoa (2 g) liuotettuna 10-prosenttisen vetykloridihapon meta- .·]: noliliuokseen sekoitettiin huoneenlämmössä 2 tuntia. Seos konsentroitiin sitten ja • · · 1··\ jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros pestiin 1-prosenttisen natriumve- ”* 30 tykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja • · 4 konsentroitiin, jolloin saatiin 12-hydroksisteariinihapon metyyliesteri (2,0 g). 12-hydroksisteariinihapon metyyliesteriin (2,0 g), joka oli liuotettu metyleenikloridiin (50 ml), lisättiin Celiteä (4 g) ja pyridiinikloorikromaattia (6 g), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 24 tuntia. Muodostuneet sakat poistettiin suodattamalla. Suodos 94 105815 sekoitettuna silikageeliin (10 g) konsentroitiin ja eluoitiin n-heksaani-etyyliasetaatil-la (5:1)Jolloin saatiin 12-oksosteariinihapon metyyliesteri (1,8 g).
Sitten 12-oksosteariinihapon metyyliesteri (1,8 g) suspendoitiin etanolin ja veden (1:1) muodostamaan sekaliuottimeen ja kaliumhydroksidia (1,7 g) liuotettiin sus-5 pensioon. Reaktioseos kuumennettiin lämpötilaan 70 °C ja sekoitettiin 30 minuuttia. Sitten reaktioseos jäähdytettiin, säädettiin happamalle pH-alueelle lisäämällä vettä ja ylimäärä sitruunahappoa, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-okso-stearii-nihappo (1,6 g). Kun 12-oksosteariinihappo (500 mg) oli liuotettu N,N-dimetyy-10 liformamidiin (DMF), lisättiin paranitrofenolia (231 mg) ja N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (343 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin, ja liuotin poistettiin tislaamalla, jolloin saatiin 12-oksosteariinihapon aktiivinen esteri. Aktiivinen esteri (438 mg) liuotettiin DMF:ään ja liuokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyy-lispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (400 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Se-15 osta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK102 saannolla 143 mg.
SPK102:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 225-227 °C
20 (2) Spesifinen rotaatio: [<x]d26 = +13,3° (c = 0,1, metanolissa) , · ·.. (3) Alkuaineanalyysi: • · •
1 C H O N
[;7 Laskettu (%): 57,90 8,05 19,28 14,77 :V 25 Löydetty (%): 57,74 8,12 19,46 14,68.
• • · v • · • · : (4) FD-massaspektri (m/z) 686 (M+Na)+.
C32H53N7O8 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 1710 cm'1, 1630 cm'1.
··· .···. 30 (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CDCl3-CD3OD:ssä) • · · • · δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,70 (24H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,0 Hz), 2,44 (4H, t, J = 7,0 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 15,6 Hz), 3,90 (1H, d, J = 15,6 *·*·; Hz), 4,00 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,67 (1H, brs), 35 8,16 (1H, brs), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 49: SPK251:n valmistus 95 105815 11-metyylidodekaanihappoon (400 mg) ja paranitrofenoliin (260 mg) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imi-diä (385 mg) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroi-5 tiin, jolloin saatiin 10-metyyliundekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (620 mg) lisättiin sen jälkeen, kun se oli liuotettu DMF:ään, 6-(4'-N-glysyylispika-mynyyliamino)puriinihydrokloridia (710 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännökselle suoritettiin kro-matografia silikageelikolonnissa käyttäen eluenttijärjestelmiä kloroformi-metanoli 10 (7:1-5 :1), jolloin saatiin SPK251 saannolla 236 mg.
SPK251:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 170-171 °C
Af (2) Spesifinen rotaatio: [a]o =+2,8° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 15
C H O N
Laskettu (%): 55,94 7,82 19,32 16,91 Löydetty (%): 56,18 8,09 19,05 16,68.
20 (4) FD-massaspektri (m/z) 580 (M+H)+.
C27H45N7O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1620 cm'1.
• · I
' . (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri .. . (500 MHz, CDCl3-CD3OD:ssä) • · · • · • · 25 δΗ: 0,89 (6H, d, J = 6,4 Hz), 1,10-1,70 (17H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,65-3,80 ^ :T: (5H, m), 3,85 (1H, d, J = 15,6 Hz), 4,02 (1H, d, J = 15,6 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,3, 10,3 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,32 (1H, s), 8,10 (1H, s).
• · · *···* Esimerkki 50: SPK282:n valmistus • · t • · * · • · · / . Trans-2-dekenaaliin (5,0 g) liuotettuna metyleenikloridiin (80 ml) lisättiin (karbo- 30 metoksimetyleeni)trifenyylifosforaania (11,99 g), ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Re- • · aktioseokselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1-20:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-dodekadieeni-:·· hapon metyyliesteri (6,1 g). Kaliumhydroksidia (8,1 g) liuotettiin etanolin ja veden muodostamaan sekaliuottimeen (1:1) (100 ml). Trans,trans-2,4-dodekadieenihapon 96 105815 metyyliesteri (6,1 g) lisättiin seokseen, ja saatua seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 40 minuuttia. Kun reaktioseos oli jäähtynyt, se säädettiin heikosti happamalle pH-alueelle sitruunahapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin trans,trans-2,4-dodeka-5 dieenihappo (5,4 g). Trans,trans-2,4-dodekadieenihappoon liuotettuna N,N-dime-tyyliformamidiin (DMF, 50 ml) lisättiin paranitrofenolia (3,8 g) ja N,N'-disyklohek-syylikarbodi-imidiä (5,8 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun saatu sakka oli poistettu suodattamalla ja liuotin (DMF) poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti 10 (200:1-50:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-dodekadieenihapon aktiivinen esteri (3,4 g). Aktiiviseen esteriin (800 mg) liuotettuna DMF:ään (30 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (800 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä klorofor-15 mi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK282 saannolla 310 mg.
SPK282:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 168-169 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +7,6° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 20
C H O N
Laskettu (%): 55,60 7,00 19,94 17,46 : ” Löydetty (%): 55,81 6,83 19,65 17,71.
| ’ (4) FD-massaspektri (m/z) 562 (M+H)+.
\y 25 C26H39N707 :Λ: (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3250 cm"1, 1650 cm'1, 1620 cm*1.
:.· ·’ (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) • · · δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,20-1,50 (10H, m), 2,18 (2H, dt, J = 7,3, 7,3 Hz), 30 3,60-3,80 (5H, m), 3,95 (1H, d, J = 16,3 Hz), 3,98 (1H, d, J = 16,3 Hz), 4,00 (1H, :/.: dd, J = <1, 2,9 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,8, 10,8 Hz), 5,68 (1H, brs), 6,00 (1H, d, J = 15,7 Hz), 6,13 (1H, d, J = 7,3, 15,7 Hz), 6,22 (1H, dd, J = 10,0, 15,7 Hz), 7,17 (1H, dd, J = 10,0, 15,7 Hz), 8,15 (1H, s), 8,30 (1H, s).
M M I • f
Esimerkki 51: SPK281:n valmistus 97 105815
Trans-2-undekenaaliin (5,0 g) liuotettuna metyleenikloridiin (80 ml) lisättiin (karbo-metoksimetyleeni)trifenyylifosforaania (9,9 g), ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Reak-tioseokselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijestelmillä n-5 heksaani-etyyliasetaatti (100:1-20:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-tridekadieeniha-pon metyyliesteri (5,2 g). Kaliumhydroksidia (6,5 g) liuotettiin etanolin ja veden > muodostamaan sekaliuottimeen (1:1) (100 ml). Trans,trans-2,4-tridekadieenihapon metyyliesteri (5,2 g) lisättiin seokseen, ja saatua seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 40 minuuttia. Kun reaktioseos oli jäähtynyt, se säädettiin heikosti happamalle pH-alueelle 10 sitruunahapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin trans,trans-2,4-trideka-dieenihappo (4,4 g). Trans,trans-2,4-tridekadieenihappoon liuotettuna N,N-dime-tyyliformamidiin (DMF, 50 ml) lisättiin paranitrofenolia (3,0 g) ja N,N'-disyklohek-syylikarbodi-imidiä (4,4 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kim saatu sakka oli 15 poistettu suodattamalla ja liuotin (DMF) poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliase-taatti (200:1-50:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-tridekadieenihapon aktiivinen esteri (2,4 g). Aktiiviseen esteriin (880 mg) liuotettuna DMF:ään (30 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (800 mg) ja trietyyliamiinia 20 (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännök selle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä klorofor-.···. mi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK281 saannolla 380 mg.
• · : SPK281:n fysikokemialliset ominaisuudet t » M ·
(1) Sulamispiste: 177-179 °C
25 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D2y=+6,8° (c = 0,1, metanolissa) » · · _ _ l..\ (3) Alkuaineanalyysi: • · »
C Ή O N
* Laskettu (%): 56,33 7,18 19,46 17,03 C: 30 Löydetty (%): 56,60 6,91 19,22 17,27.
# # m * · • I · . · · . (4) FD-massaspektri (m/z) 598 (M+Na)+.
c27H4iN7o7
* M
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3250 cm'1, 1650 cm'1, 1620 cm*1.
35 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD30D:ssä) 98 105815 δΗ: 0,90 (3Η, t, J = 7,3 Hz), 1,20-1,50 (12H, m), 2,18 (2H, dt, J = 7,3, 7,3 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,95 (1H, d, J = 16,3 Hz), 3,98 (1H, d, J =16,3 Hz), 4,00 (1H, dd, J = <1, 2,9 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,8, 10,8 Hz), 5,68 (1H, brs), 6,00 (1H, d, J = 15,7 Hz), 6,13 (1H, d, J = 7,3, 15,7 Hz), 6,22 (1H, dd, J = 10,0, 15,7 Hz), 7,17 5 (1H, dd, J = 10,0, 15,7 Hz), 8,15 (1H, s), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 52: SPK241:n valmistus
Trans-2-dodekenaaliin (4,5 g) liuotettuna metyleenikloridiin (80 ml) lisättiin (karbo-metoksimetyleeni)trifenyylifosforaania (8,3 g), ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Reak-tioseokselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä n-10 heksaani-etyyliasetaatti (100:1-20:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-tetradekadiee-nihapon metyyliesteri (5,4 g). Kaliumhydroksidia (6,5 g) liuotettiin etanolin ja veden muodostamaan sekaliuottimeen (1:1) (100 ml). Trans,trans-2,4-tetradekadieeni-hapon metyyliesteri (5,4 g) lisättiin seokseen, ja saatua seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 40 minuuttia. Kun reaktioseos oli jäähtynyt, se säädettiin heikosti happamalle pH-15 alueelle sitruunahapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin trans,trans-2,4-tetra-dekadieenihappo (4,4 g). Tämän jälkeen otsikon yhdiste voidaan syntetisoida kahdella jäljessä kuvatulla menetelmällä.
Ensimmäisessä menetelmässä trans,trans-2,4-tetradekadieenihappo (4,3 g) liuotetaan 20 ensin Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml). Paranitrofenolia (2,67 g) ja N,N'-:...· disykloheksyylikarbodi-imidiä (3,9 g) lisättiin trans,trans-2,4-tetradekadieenihappo- • ’· liuokseen, ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun muodostuneet sakat oli poistettu suo- ·:··: dattamalla ja liuotin (DMF) tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia sili- kageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (200:1-50:1), joi- • · : 25 loin saatiin trans,trans-2,4-tetradekadieenihapon aktiivinen esteri (5,1 g). Aktiivi- * · _ seen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään (30 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispika- mynyyliamino)puriinihydrokloridia (556 mg) ja trietyyliamiinia (1,2 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-30 5:1), jolloin saatiin SPK241 saannolla 398 mg.
!./ Toisessa menetelmässä trans,trans-2,4-tetradekadieenihappo (99,6 g) liuotettiin tio- nyylikloridiin (87 ml), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä. Ylimääräinen tio-nyylikloridi poistettiin tislaamalla, jolloin saatiin trans,trans-2,4-tetradekadieeni-·:·: hapon kloridi (102,0 g). Glysiiniin (66,8 g), joka oli liuotettu 2N natriumhydroksi- 35 din vesiliuokseen (540 ml), lisättiin samaan aikaan trans,trans-2,4-tetradekadieeni- 99 105815 tetradekadieenihappokloridia (102,0 g) ja 2N natriumhydroksidia (270 ml) 1/10 erissä 3 minuutin välein. Kun lisäys oli suoritettu, seos lämmitettiin huoneenlämpöön, sekoitettiin 15 minuuttia ja tehtiin happamaksi konsentroidulla vetykloridiha-polla (140 ml) jäillä jäähdyttäen. Näin muodostunut sakka kerättiin suodattamalla ja 5 kuivattiin, jolloin saatiin trans,trans-2,4-tetradekadienoyyliglysiini (75,0 g). Trans, trans-2,4-tetradekadienoyyliglysiinin (4,7 g) ja 6-(spikamynyyliamino)puriinin (5,1 g) liuokseen Ν,Ν-dimetyyliformamidissa (DMF, 60 ml) lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (2,1 g), ja seos jäähdytettiin jäillä. l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyy-li)karbodi-imidihydrokloridia (3,4 g) liuotettuna DMF:ään (100 ml) lisättiin pisaroit-10 tain seokseen. Kun lisäys oli suoritettu, seos lämmitettiin huoneenlämpöön ja sekoitettiin 12 tuntia. Vettä (500 ml) lisättiin reaktioseokseen, ja muodostunut sakka kerättiin suodattamalla ja kuivattiin. Natriummetoksidia (3,1 g) lisättiin sakkasuspen-sioon metanolissa (100 ml), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä, jäähdytettiin sitten jäillä ja tehtiin happamaksi lisäämällä pisaroittain 10-prosenttisen vetykloridi-15 hapon metanoliliuosta. Muodostunut sakka suodatettiin, kuivattiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK241 saannolla 5,00 g.
SPK241:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 182-183 °C
20 (2) Spesifinen rotaatio: [cc]d25 = +0° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: • »·
C H O N
:··: Laskettu (%): 57,03 7,35 18,99 16,63 25 Löydetty (%): 56,78 7,59 19,21 16,42.
• · • · · "-Γ : TT - - - ·" • · · ..........
(4) FD-massaspektri (m/z) 590 (M+H)+.
C28H43N7O7 ..... (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3250 cm'1, 1650 cm'1, 1620 cm'1.
« * * Γ.’. 30 (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,20-1,50 (14H, m), 2,18 (2H, dt, J = 7,3, 7,3 Hz), 3,6- 3,8 (5H, m), 3,95 (1H, d, J = 16,3 Hz), 3,98 (1H, d, J = 16,3 Hz), 4,00 (1H, dd, J = O <1, 2,9 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,8, 10,8 Hz), 5,66 (1H, brs), 5,98 (1H, d, J = 15,7 ”*: 35 Hz), 6,12 (1H, dt, J = 7,3, 15,7 Hz), 6,22 (1H, dd, J = 10,0, 15,7 Hz), 7,17 (1H, dd, J = 10,0, 15,7 Hz), 8,15 (1H, s), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 53: SPK285:n valmistus 100 105815
Undekyylialdehydiin (5,0 g) liuotettuna metyleenikloridiin lisättiin (karbometoksi-metyleeni)trifenyylifosforaania (14,7 g), ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjes-5 telmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1-20:1), jolloin saatiin trans-2-tridekeeni-hapon metyyliesteri (55,2 g). Tetrahydrofuraaniin liuotettuun metyyliesteriin lisättiin litiumalumiinihydridiä (0,9 g) jäillä jäähdyttäen, ja seosta sekoitettiin 1 tunti. Reaktioseos jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kuivattiin, konsentroitiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjes-10 telmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (50:1), jolloin saatiin trans-2-tridekenoli (3,2 g). Trans-2-tridekenolin liuokseen metyleenikloridissa lisättiin pyridiinikloorikromaat-tia (3,2 g) ja Celiteä (5,0 g), ja seosta sekoitettiin. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin trans-2-tridekenaali (1,7 g).
Trans-2-tridekenaaliin (1,7 g) liuotettuna metyleenikloridiin (80 ml) lisättiin (karbo-15 metoksimetyleeni)trifenyylifosforaania (4,0 g), ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Reak-tioseokselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1-20:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-pentadekadieeni-hapon metyyliesteri (2,1 g). Kaliumhydroksidia (2,0 g) liuotettiin etanolin ja veden muodostamaan sekaliuottimeen (1:1) ja trans,trans-2,4-pentadekadieenihapon me-20 tyyliesteri (2,1 g) lisättiin seokseen. Kun saatua seosta oli sekoitettu 60 °C:ssa 40 minuuttia, se jäähdytettiin, se säädettiin heikosti happamalle pH-alueelle sitruunaha-' · · · ’ polla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä nat- : ’ · riumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin trans,trans-2,4-pentadekadieenihappo (2,1 g). Tuote liuotettiin Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml) ja paranit-25 rofenolia (1,2 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,7 g) lisättiin. Seosta se-koitettiin 12 tuntia. Reaktion jälkeen muodostuneet sakat poistettiin suodattamalla, • · DMF poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikagee-*·* # » likolonnilla eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-pentadekadieenihapon aktiivinen esteri (1,3 g). Aktiiviseen • · Ϊ.Ι' 30 esteriin (600 mg) liuotettuna DMF:ään (30 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyy- '·:** liamino)puriinihydrokloridia (750 mg) ja trietyyliamiinia (1,2 ml). Seosta sekoi- tettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kro- matografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), _.!. _ jolloin saatiin SPK285 saannolla 530 mg.
· t · 105815 101 SPK285:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 188-189 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [α]ο25 = +2,1° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 5
C H O N
Laskettu (%): 57,70 7,51 18,55 16,24 Löydetty (%): 57,94 7,70 18,38 15,98.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 604 (M+H)+.
C29H45N707 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1655 cm'1, 1620 cm*1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 15 δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,20-1,50 (16H, m), 2,18 (2H, dt, J = 7,3, 7,3 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,95 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,98 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,02 (1H, dd, J = <1, 2,9 Hz), 4,16 (1H, dd, J = 10,8, 10,8 Hz), 5,68 (1H, brs), 6,00 (1H, d, J = 15,7 Hz), 6,13 (1H, d, J = 7,3, 15,7 Hz), 6,22 (1H, dd, J = 10,3, 15,7 Hz), 7,17 (1H, dd, J = 10,3, 15,7 Hz), 8,15 (1H, s), 8,30 (1H, s).
20 Esimerkki 54: SPK283:n valmistus • · · • · [”·’ Dodekyylialdehydiin (5,0 g) liuotettuna metyleenikloridiin lisättiin (karbometoksi- • · • ” metyleeni)trifenyylifosforaama (9,1 g), ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijäijes- • · · • V telmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1-20:1), jolloin saatiin trans-2-tetradekeeni- 25 hapon metyyliesteri (5,2 g). Tetrahydrofuraaniin liuotettuun metyyliesteriin lisättiin litiumalumiinihydridiä (0,9 g) jäillä jäähdyttäen, ja seosta sekoitettiin 1 tunti. Reaktioseos jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kuivattiin, kon-, .···. sentroitiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestel- .···. mällä n-heksaani-etyyliasetaatti (50:1), jolloin saatiin trans-2-tetradekenoli (3,2 g).
· 30 Trans-2-tetradekenolin liuokseen metyleenikloridissa lisättiin pyridiinikloorikro-maattia (3,5 g) ja Celiteä (5,0 g), ja seosta sekoitettiin. Reaktioseos suodatettiin ja :. „· konsentroitiin, jolloin saatiin trans-2-tetradekenaali (2,3 g).
• * ’···’ Trans-2-tetradekenaaliin (2,3 g) liuotettuna metyleenikloridiin (80 ml) lisättiin (kar- bometoksimetyleeni)trifenyylifosforaania (4,4 g), ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Re- 102 105815 aktioseokselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1-20:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-heksadeka-dieenihapon metyyliesteri (2,2 g). Kaliumhydroksidia (2,8 g) liuotettiin etanolin ja veden muodostamaan sekaliuottimeen (1:1) ja trans,trans-2,4-heksadekadieenihapon 5 metyyliesteri (2,2 g) lisättiin seokseen. Kun saatua seosta oli sekoitettu 60 °C:ssa 40 minuuttia, se jäähdytettiin, säädettiin heikosti happamalle pH-alueelle sitruunahapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin trans,trans-2,4-heksadekadieenihap-po (2,0 g). Tuote liuotettiin Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml) ja paranit-10 rofenolia (1,1 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,6 g) lisättiin. Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktion jälkeen muodostuneet sakat poistettiin suodattamalla, DMF poistettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikagee-likolonnilla eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-heksadekadieenihapon aktiivinen esteri (0,8 g). Aktiiviseen este-15 riin (340 mg) liuotettuna DMF:ään (30 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyli-amino)puriinihydrokloridia (500 mg) ja trietyyliamiinia (1,2 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK283 saannolla 270 mg.
20 SPK283:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 188-189 °C
* I AF
’···* (2) Spesifinen rotaatio: [a]D =+4,0° (c = 0,1, metanolissa) : '·· (3) Alkuaineanalyysi: • ·
:*·*: 25 C H O N
• ·
Laskettu (%): 58,33 7,67 18,13 15,87 Löydetty (%): 58,06 7,89 17,98 16,07.
(4) FD-massaspektri (m/z) 618 (M+H)+.
"* 30 C30H47N7O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1655 cm'1, 1620 cm'1.
• · '·,*·: (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,20-1,50 (18H, m), 2,18 (2H, dt, J = 7,3, 7,3 Hz), ·:·*: 35 3,60-3,80 (5H, m), 3,95 (1H, d, J = 16,3 Hz), 3,98 (1H, d, J = 16,3 Hz), 4,00 (1H, dd, J = <1, 2,9 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,8, 10,8 Hz), 5,68 (1H, brs), 6,00 (1H, d, 105815 103 J = 15,7 Hz), 6,13 (1H, d, J = 7,3, 15,7 Hz), 6,22 (1H, dd, J = 10,0, 15,7 Hz), 7,17 (1H, dd, J = 10,0, 15,7 Hz), 8,15 (1H, s), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 55: SPM10:n valmistus Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) liuotettiin tetradekaanihappoa (1 g) ja pa-5 ranitrofenolia (0,60 g). Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,90 g) lisättiin liuokseen ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, joi- * loin saatiin tetradekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (549 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin pois-10 tettiin tislaamalla, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPM10 saannolla 290 mg.
SPM10:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 210-212 °C
15 (2) Spesifinen rotaatio: [a]o25 = +4,8° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 56,64 7,98 18,86 16,51 20 Löydetty (%): 56,91 8,21 18,64 16,24.
I I
1 · • 1 (4) FD-massaspektri (m/z) 594 (M+H)+.
.. . C28H47N7O7 • · # __ (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm11, 1630 cm11.
· a 25 (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri : J: (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,40 (20H, m), 1,60-1,70 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = * j:::’, 7,0 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,4 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,4 Hz), ’"·1 4,05 (1H, dd, J = 2,1 Hz, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,1, 10,1 Hz), 5,58 (1H, brs), V·! 30 8,10 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
• · a t » « · * · · t · i « t « ·
Mill a t 104 105815
Esimerkki 56: SPK148:n valmistus Palmitoleiinihappoon [CH3(CH2)5CH=CH(CH2)7COOH] (Z) (500 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (226 mg) ja li-5 sättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (406 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suodokseen lisättiin trietyyliamiinia (10 ml) ja 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (250 mg). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja jäännös puhdistettiin kromatografialla silika-geelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin 10 SPK148 saannolla 133 mg.
SPK148:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 174-175 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +18° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 15
C H O N
Laskettu (%): 58,14 7,97 18,07 15,82 Löydetty (%): 57,88 8,20 17,86 16,06.
» 20 (4) FD-massaspektri (m/z) 621 (M+H)+.
• ^ C30H49O7N7 : (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm’1.
• · * i (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) ··« • · · *** ’ 25 δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,25-1,70 (20H, m), 2,05 (4H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1
Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,01 ::::: (1H, dd, J = 2,1 Hz, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,1, 10,1 Hz), 5,34 (2H, m), 5,68 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
• · • · t
Esimerkki 57: SPK176:n valmistus « · 30 Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) liuotettiin 10-undekeenihappoa (1,0 g) ja paranitrofenolia (0,83 g). N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,23 g) lisättiin liu- okseen, ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, I ( 105815 105 jolloin saatiin 10-undekeenihapon aktiivinen esteri. Aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydroklori-dia (663 mg) ja trietyyliamiinia (1,6 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännös puhdistettiin kromatografialla silikageelikolonnissa 5 eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK176 saannolla 289 mg.
SPK176:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 177-179 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +4,3° (c = 0,1, metanolissa) 10 (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 54,63 7,15 20,38 17,84 Löydetty (%): 55,01 7,12 20,14 17,73.
15 (4) FD-massaspektri (m/z) 551 (M+H)+.
C25H39O7N7 (5) Infiapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 20 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,30-1,70 (12H, m), 2,06 (2H, dt, J = 7,1, 7,1 Hz), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), I’·.. 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,02 (1H, ·:··: dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,8-5,0 (2H, m), 5,65 (1H, brs), 5,80 (1H, m), 8,18 (1H, s), 8,31 (1H, s).
• « • · 25 Esimerkki 58: SPK276:n valmistus • t · • · *
• · I
• L__ 11-bromi-1-undekanoliin (5 g) liuotettuna metyleenikloridiin (70 ml) lisättiin pyri- .*··. diinikloorikromaattia (10,7 g) ja Celiteä (11,0 g), ja seosta sekoitettiin huoneenläm- .···. mössä 12 tuntia. Sitten reaktioseos suodatettiin, konsentroitiin ja sille suoritettiin » · ......
** kromatografia silikageelikolonriilla eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti 30 (20:1), jolloin saatiin 11-bromi-1-undekanaali (3,57 g). Metyleenikloridiin (50 ml) liuotettuun tuotteeseen lisättiin (karbometoksimetyleeni)trifenyylifosforaania .···. (5,76 g), ja seosta sekoitettiin. Reaktioseos konsentroitiin, ja näin saadulle jäännök- selle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmällä n-heksaa- • * ni-etyyli-asetaatti (20:1), jolloin saatiin 13-bromi-2-tridekeenihapon metyyliesteri 106 105815 (4,16 g). Tuote liuotettiin metanoliin ja sekoitettiin vetyilmakehässä palladium/hii-len (1,5 g) läsnäollessa 18 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 13-bromitridekaanihapon metyyliesteri (3,22 g). 50 % etanolin vesiliuosta (100 ml), johon oli liuotettu kaliumhydroksidia (2,95 g), lisättiin metyyliesteriin, ja 5 seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 1 tunti. Reaktioseoksessa oleva etanoli poistettiin tislaamalla, ja jäännös tehtiin happamaksi heikosti happamalle pH-alueelle lisäämällä sitruunahappoa, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 13-bromitridekaanihappo (2,61 g). Kun tuote oli liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml), lisättiin paranitrofenolia (1,24 g) ja N,N'-10 disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,84 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Sitten muodostunut sakka poistettiin suodattamalla ja DMF poistettiin tislaamalla. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin 13-bromitridekaanihapon aktiivinen esteri (1,73 g). Aktiivinen esteri (540 mg) liuotettiin DMF:ään (30 ml), ja liuokseen lisät-15 tiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (500 mg) ja trietyy-liamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK276 saannolla 227 mg.
SPK276:n fysikokemialliset ominaisuudet
20 (1) Sulamispiste: 152-153 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D =+5,5° (c = 0,1, metanolissa) « · · ί,..: (3) Alkuaineanalyysi: » » * · • «
C H O N
25 Laskettu (%): 49,24 6,73 17,01 14,89 ί·Λ Löydetty (%): 49,04 6,81 16,74 15,26.
• · • «· • · · ' (4) FD-massaspektri (m/z) 658, 660 (M)+.
... C27H44N707Br *···' 30 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm-1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) • » » m m δΗ: 1,20-1,70 (18H, m), 1,82 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,2 Hz), 3,42 (2H, t, J = 7,3 Γ\ Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,01 35 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
i 105815 107
Esimerkki 59: SPK273:n valmistus 12-bromi-l-dodekanoliin (5 g) liuotettuna metyleenikloridiin (70 ml) lisättiin pyri-diinikloorikromaattia (10,1 g) ja Celiteä (11,0 g), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 12 tuntia. Sitten reaktioseos suodatettiin, konsentroitiin ja sille suoritettiin 5 kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (20:1), jolloin saatiin 12-bromi-l-dodekanaali (3,72 g). Metyleenikloridiin (50 ml) liuotettuun tuotteeseen lisättiin (karbometoksimetyleeni)trifenyylifosforaania (8,80 g), ja seosta sekoitettiin. Reaktioseos konsentroitiin, ja näin saadulle jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä n-heksaa-10 ni-etyyli-asetaatti (20:1), jolloin saatiin 14-bromi-2-tetradekeenihapon metyyliesteri (4,14 g). Tuote liuotettiin metanoliin ja sekoitettiin vetyilmakehässä palladium/-hiilen (1,5 g) läsnäollessa 18 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 14-bromitetradekaanihapon metyyliesteri (3,35 g). 50-prosenttista etanolin vesiliuosta (100 ml), johon oli liuotettu kaliumhydroksidia (2,90 g), lisättiin me-15 tyyliesteriin, ja seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 1 tunti. Reaktioseoksessa oleva etanoli poistettiin tislaamalla, ja jäännös tehtiin happamaksi heikosti happamalle pH-alueelle lisäämällä sitruunahappoa, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 14-bromitetradekaanihappo (3,55 g). Kun tuote oli liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml), lisättiin paranitrofeno-20 lia (1,61 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (2,39 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Sitten muodostunut sakka poistettiin suodattamalla ja DMF poistettiin tis-:' ‘ : laamalla. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijes- • I · telmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin 14-bromitetradekaa- nihapon aktiivinen esteri (2,57 g). Aktiivinen esteri (655 mg) liuotettiin DMF:ään ..... 25 (30 ml), ja liuokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydroklori- • · \.\ dia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa % « · . 1«1 1 eluenttijärjestelmillä kloroforml-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK273 saannol la 219 mg.
··· * · j. · · .
.···. 30 SPK273:n fysikokemialliset ominaisuudet «··
:\j (1) Sulamispiste: 161-163 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [cx]d25 =-4,4° (c = 0,1, metanolissa)
• M
• · · • · • · • · · III· « · 108 105815 (3) Alkuaineanalyysi: CHON Laskettu (%): 50,00 6,89 16,65 14,58 5 Löydetty (%): 49,78 7,03 16,89 14,92.
(4) FD-massaspektri (m/z) 672, 674 (M)+.
CagiLtöNyOvBr (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1.
10 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,30-1,70 (20H, m), 1,84 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,43 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,15 (1H, 15 brs), 8,31 (1H, s).
Esimerkki 60: SPK275:n valmistus 15-hydroksipentadekaanihappoa (3,0 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetykloridiha-pon metanoliliuokseen sekoitettiin 1 tunti. Sitten seos konsentroitiin ja jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyli-asetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsul-20 faatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 15-hydroksipentadekaanihapon metyyliesteri (3,0 g). Metyleenikloridiin liuotettuun metyyliesteriin lisättiin pyridiiniä (2,6 g) ja paratolueenisulfonyylikloridia (2,5 g) 0 °C:ssa, ja seosta sekoitettiin huoneenläm-mössä 18 tuntia. Sitten reaktioseos konsentroitiin ja se jaettiin kloroformiin ja ve- * · .. . teen. Kloroformikerros kuivataan ja konsentroidaan, ja näin saadulle jäännökselle \ 25 suoritetaan kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä n-heksaani- • · · etyyliasetaatti (20:1), jolloin saatiin 15-paratolueenisulfonyylioksipentadekaanihap-’·’ * po (3,40 g). Asetonitriiliin (70 ml) liuotettuun tuotteeseen lisättiin natriumbromidia (8,3 g), tetraetyyliammoniumbromidia (2,8 g) ja trietyyliamiinia (2,3 ml), ja seosta kuumennettiin 80 °C:ssa 3,5 tuntia. Reaktioseoksen jäähtyessä muodostunut sakka 30 poistettiin suodattamalla ja suodos konsentroitiin. Näin saatu jäännös jaettiin etyyli- m'\ · asetaattiin ja veteen. Saatiin 15-bromipentadekaanihapon metyyliesteri (2,40 g). 50- prosenttista etanolin vesiliuosta (100 ml), johon oli liuotettu kaliumhydroksidia (2,1 g), lisättiin tuotteeseen, ja seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 1 tunti. Reaktioseoksessa L*.: oleva etanoli haihdutettiin, ja jäännös tehtiin happamaksi heikosti happamalle pH- •:": 35 alueelle, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 15-bromipentadekaanihappo (2,2 g). Kun tuote oli liuotettu N,N- i 109 105815 dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml), lisättiin paranitrofenolia (0,96 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,42 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun muodostuneet sakat oli poistettu suodattamalla, DMF haihdutettiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäqestelmillä n-heksaani-5 etyyliasetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin 15-bromipentadekaanihapon aktiivinen esteri (15 g). Aktiivinen esteri (591 mg) liuotettiin DMF:ään (30 ml), ja liuokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (500 mg) ja trietyy-liamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä klorofor-10 mi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK275 saannolla 232 mg.
SPK275:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 179-180 °C
Af (2) Spesifinen rotaatio: [a]o =-6,2° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 15
C H O N
Laskettu (%): 50,73 7,05 16,31 14,28 Löydetty (%): 51,14 7,13 16,49 14,63.
20 (4) FD-massaspektri (m/z) 686, 688 (M)+.
,.. C29H48N707Br (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm*1, 1640 cm’1.
: " (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) • · »
• I I
• · !/: 25 δΗ: 1,25-1,70 (22H, m), 1,84 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,42 (2H, t, J = 7,1
Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,02 (1H, d, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
• * ? · · ·♦·
Esimerkki 61: SPK272:n valmistus ··· • m V*: 30 16-hydroksiheksadekaanihappoa (3,0 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetykloridiha- • · · L..: pon metanoliliuokseen sekoitettiin 1 tunti. Sitten seos konsentroitiin ja jaettiin etyy- .···. liasetaattiin ja veteen, ja etyyli-asetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsul- • · faatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 16-hydroksiheksadekaanihapon metyyliesteri (3,07 g). Metyleenikloridiin liuotettuun metyyliesteriin lisättiin pyridiiniä (2,6 g) ja • · 110 105815 paratolueenisulfonyylikloridia (2,26 g) 0 °C:ssa, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 tuntia. Sitten reaktioseos konsentroitiin ja se jaettiin kloroformiin ja veteen. Kloroformikerros kuivataan ja konsentroidaan, ja näin saadulle jäännökselle suoritetaan kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä n-heksaani-5 etyyliasetaatti (20:1), jolloin saatiin 16-paratolueenisulfonyylioksiheksadekaanihap-po (3,47 g). Asetonitriiliin (70 ml) liuotettuun tuotteeseen lisättiin natriumbromidia (28 g), trietyyliammoniumbromidia (2,8 g) ja trietyyliamiinia (5,6 ml), ja seosta kuumennettiin 80 °C:ssa 3,5 tuntia. Reaktioseoksen jäähtyessä muodostunut sakka poistettiin suodattamalla ja suodos konsentroitiin. Näin saatu jäännös jaettiin etyyli-10 asetaattiin ja veteen. Saatiin 16-bromiheksadekaanihapon metyyliesteri (2,60 g). 50-prosenttista etanolin vesiliuosta (100 ml), johon oli liuotettu kaliumhydroksidia (2,12 g), lisättiin tuotteeseen, ja seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 1 tunti. Reaktioseok-sessa oleva etanoli haihdutettiin, ja jäännös tehtiin happamaksi heikosti happamalle pH-alueelle, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin ja konsentroi-15 tiin, jolloin saatiin 16-bromiheksadekaanihappo (2,24 g). Kun tuote oli liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml), lisättiin paranitrofenolia (0,93 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,38 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun muodostuneet sakat oli poistettu suodattamalla, DMF haihdutettiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyli-20 asetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin 16-bromiheksadekaanihapon aktiivinen esteri (1,5 g). Aktiivinen esteri (591 g) liuotettiin DMF:ään (30 ml), ja liuokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (500 mg) ja trietyyliamii-·’... · nia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle • '·· suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi- •: · : 25 metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK272 saannolla 260 mg.
tt · • · · *. SPK272:n fysikokemialliset ominaisuudet • · · • · · • ·
(1) Sulamispiste: 182-183 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = -5,2° (c = 0,1, metanolissa) .*··. (3) Alkuaineanalyysi: 30
C H O N
• · V·: Laskettu (%): 51,43 7,19 15,98 13,40 O Löydetty (%): 51,83 6,79 15,76 14,30.
• ♦ · 9 · • · .!!!: 35 (4) FD-massaspektri (m/z) 700, 702 (M)+.
C3oH5oN707Br ui 105815 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1, (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,25-1,70 (24H, m), 1,84 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,42 (2H, t, J = 7,1 5 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,02 (1H, d, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 62: SPK278:n valmistus 11-bromi-1-undekanoliin (5 g) liuotettuna metyleenikloridiin (70 ml) lisättiin pyri-10 diinikloorikromaattia (10,7 g) ja Celiteä (11,0 g), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 12 tuntia. Sitten reaktioseos suodatettiin, konsentroitiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (20:1), jolloin saatiin 11-bromi-1-undekanaali (3,57 g). Metyleenikloridiin (50 ml) liuotettuun tuotteeseen lisättiin (karbometoksimetyleeni)trifenyylifosforaania 15 (4,66 g), ja seosta sekoitettiin. Reaktioseos konsentroitiin, ja näin saadulle jäännök selle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (20:1), jolloin saatiin 13-bromi-2-tridekeenihapon metyyliesteri (4,16 g). Tuote liuotettiin metanoliin ja sekoitettiin vetyilmakehässä palladium/hii-len (1,5 g) läsnäollessa 18 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin 20 saatiin 13-bromitetradekaanihapon metyyliesteri (3,22 g). Asetonitriiliin liuotettuun metyyliesteriin lisättiin kalsiumkloridia (9,4 g) ja tetraetyyliammoniumkloridia :' * ·. (2,8 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 3 tuntia, ja jäähdytettiin ja konsentroitiin sen •: · ·: jälkeen. Jäännös jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin l3-klooritridekaanihapon metyyliesteri (2,08 g). 50- • · .·. j 25 prosenttista etanolin vesiliuosta (100 ml), johon oli liuotettu kaliumhydroksidia .·:·! (2,27 g), lisättiin metyyliesteriin, ja seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 1 tunti. Reaktiose- • · · · ·_—----- — " oksessa oleva etanoli haihdutettiin, ja jäännös tehtiin happamaksi heikosti happa- ... malle pH-alueelle lisäämällä sitruunahappoa, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaani- • · nen kerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 13-klooritridekaanihappo 30 (1,69 g). Kun tuote oli liuotettu N,N-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml), lisättiin paranitrofenolia (0,94 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,39 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Sitten muodostunut sakka poistettiin suodattamalla ja DMF poistettiin tislaamalla. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa ' · · · ‘ eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin 13-kloo- * * 35 ritetradekaanihapon aktiivinen esteri (1,01 g). Aktiivinen esteri (600 mg) liuotettiin DMF:ään (30 ml), ja liuokseen lisättiin 6-(4'-N-gJysyylispikamynyyliamino)puriini- 112 105815 hydrokloridia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kim liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolon-nissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK278 saannolla 222 mg.
5 SPK278:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 175-176 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [ajo25 = +6,4° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
10 C H O N
Laskettu (%): 52,81 7,22 18,24 15,97 Löydetty (%): 53,18 6,95 17,90 16,21.
(4) FD-massaspektri (m/z) 614, 616 (M)+.
15 C27H44N7O7CI
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,25-1,50 (16H, m), 1,64 (2H, m), 1,75 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,53 20 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,02 (m, dd, J = 2,0, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,69 (1H, brs), 8,13 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
« .. . Esimerkki 63: SPK280:n valmistus v · · • • V·: 12-bromi-l-dodekanoliin (5 g) liuotettuna metyleenikloridiin (70 ml) lisättiin pyri- :T: 25 diinikloorikromaattia (10,1 g) ja Celiteä (11,0 g), ja seosta sekoitettiin huoneenläm mössä 12 tuntia. Sitten reaktioseos suodatettiin, konsentroitiin ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnilla eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti .···. (20:1), jolloin saatiin 12-bromi-l-dodekanaali (3,72 g). Metyleenikloridiin (50 ml) *·* liuotettuun tuotteeseen lisättiin (karbometoksimetyleeni)trifenyylifosforaania (8,80 30 g), ja seosta sekoitettiin. Reaktioseos konsentroitiin, ja näin saadulle jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä n-heksaani-.···. etyyliasetaatti (20:1), jolloin saatiin 14-bromi-2-tetradekeenihapon metyyliesteri (4,14 g). Tuote liuotettiin metanoliin ja sekoitettiin vetyilmakehässä palladium/-hiilen (1,5 g) läsnäollessa 18 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jol- i 105815 113 loin saatiin 14-bromitetradekaanihapon metyyliesteri (3,25 g). Asetonitriiliin liuotettuun metyyliesteriin lisättiin kalsiumkloridia (12,3 g) ja tetraetyyhammoniumklori-dia (3,7 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 3 tuntia, ja jäähdytettiin ja konsentroitiin sen jälkeen. Jäännös jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kui-5 vattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 14-klooritetradekaanihapon metyyliesteri (2,37 g). 50-prosenttista etanolin vesiliuosta (100 ml), johon oli liuotettu kaliumhyd-roksidia (2,90 g), lisättiin metyyliesteriin, ja seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 1 tunti. Reaktioseoksessa oleva etanoli haihdutettiin, ja jäännös tehtiin happamaksi heikosti happamalle pH-alueelle lisäämällä sitruunahappoa, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Or-10 gaaninen kerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 14-klooritetradekaani-happo (2,02 g). Kim tuote oli liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml), lisättiin paranitrofenolia (1,07 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,59 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Sitten muodostunut sakka poistettiin suodattamalla ja DMF poistettiin tislaamalla. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageeliko-15 loimissa eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin 14-klooritetradekaanihapon aktiivinen esteri (1,86 g). Aktiivinen esteri (500 mg) liuotettiin DMF:ään (30 ml), ja liuokseen lisättiin 6-(4’-N-glysyylispikamynyyliami-no)puriinihydrokloridia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikagee-20 likolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK280 saannolla 247 mg.
SPK280:n fysikokemialliset ominaisuudet * »
: " (1) Sulamispiste: 166-168 °C
" (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = -3,6° (c = 0,1, metanolissa) •« · • V 25 (3) Alkuaineanalyysi: • « • · · «· • f
C H O N
Laskettu (%): 53,54 7,38 17,83 15,61 Löydetty (%): 53,89 6,96 18,15 15,22.
• · ft Λ Λ 30 • · ’!* (4) FD-massaspektri (m/z) 628, 630 (M)+.
:M c28H46n7o7ci (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1.
.*·· (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri 35 (500 mhz, CD3OD:ssa) • · 114 105815 δΗ: 1,25-1,50 (18Η, m), 1,63 (2Η, m), 1,75 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,54 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
5 Esimerkki 64: SPK277:n valmistus 15-hydroksipentadekaanihappoa (3,0 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetykloridiha-pon metanoliliuokseen sekoitettiin 1 tunti. Sitten seos konsentroitiin ja jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natriumsul-faatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 15-hydroksipentadekaanihapon metyyliesteri 10 (3,0 g). Metyleenikloridiin liuotettuun metyyliesteriin lisättiin pyridiiniä (2,6 ml) ja paratolueenisulfonyylikloridia (2,5 g) 0 °C:ssa, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 tuntia. Sitten reaktioseos konsentroitiin ja se jaettiin kloroformiin ja veteen. Kloroformikerros kuivataan ja konsentroidaan, ja näin saadulle jäännökselle suoritetaan kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmällä n-heksaani-15 etyyliasetaatti (20:1), jolloin saatiin 15-paratolueenisulfonyylioksipentadekaaniha-pon metyyliesteri (3,47 g). Asetonitriiliin (70 ml) liuotettuun tuotteeseen (3 g) lisättiin kalsiumkloridia (7,7 g), tetraetyyliammoniumbromidia (2,4 g) ja trietyylia-miinia (2,0 ml), ja seosta kuumennettiin 80 °C:ssa 3,5 tuntia. Reaktioseoksen jäähtyessä muodostunut sakka poistettiin suodattamalla ja suodos konsentroitiin. Näin 20 saatu jäännös jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen. Saatiin 15-klooripentadekaanihapon metyyliesteri (1,49 g). 50-prosenttista etanolin vesiliuosta (100 ml), johon oli liuo- • · *·' tettu kaliumhydroksidia (1,5 g), lisättiin tuotteeseen, ja seosta sekoitettiin 60 °C:ssa : 1 tunti. Reaktioseoksessa oleva etanoli haihdutettiin, ja jäännös tehtiin happamaksi heikosti happamalle pH-alueelle, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros j’\: 25 kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 15-klooripentadekaanihappo (1,23 g). Kun tuote oli liuotettu Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml), lisättiin paranitrofeno- :*·*; lia (0,62 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,92 g), ja seosta sekoitettiin 12 • _ tuntia. Kun muodostuneet sakat oli poistettu suodattamalla, DMF haihdutettiin ja .···. jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n- • · IV. t 30 heksaani-etyyliasetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin 15-klooripentadekaanihapon T' aktiivinen esteri (1,5 g). Aktiivinen esteri (515 mg) liuotettiin DMF:ään (30 ml), ja !.'·· liuokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kim liuotin oli haihdu- .‘., tettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjes- • · 35 telmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK277 saannolla 219 mg.
• · SPK277:n fysikokemialliset ominaisuudet 115 105815
(1) Sulamispiste: 177-179 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [<x]d25 = -8,4° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 5
C H O N
Laskettu (%): 54,24 7,53 17,44 15,27 Löydetty (%): 53,98 7,70 17,59 14,96.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 642, 644 (M)\ C29H48N707C1 (5) Infrapunaspektri (Kbr-kiekko): 3400 cm'1, 1620 cm11.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 15 δΗ: 1,20-1,50 (20H, m), 1,63 (2H, m), 1,76 (2H, m), 2,29 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,54 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 65: SPK279:n valmistus ... 20 12-bromidodekanoliin (5 g) liuotettuna metyleenikloridiin (30 ml) lisättiin Celiteä (5,0 g) ja pyridiinikloorikromaattia (5,2 g), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä « · • 12 tuntia. Sitten reaktioseos suodatettiin, ja sille suoritettiin kromatografia silika- ':' : geelikolonnilla eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (30:1), jolloin saatiin • · · • V 12-bromidodekanaali (4,4 g). Metyleenikloridiin (50 ml) liuotettuun 12-bromi- 25 dodekanaaliin (4,4 g) lisättiin (karbometoksimetyleeni)trifenyylifosforaania (6,75 :T: g), ja seosta sekoitettiin 4 tuntia. Sitten reaktioseos konsentroitiin, ja näin saadulle jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä n-. .1··. heksaani-etyyliasetaatti (30:1), jolloin saatiin 14-bromi-2-tetradekeenihapon me- tyyliesteri (4,91 g). Tuote liuotettiin asetonitriiliin (30 ml) ja lisättiin IM tetra-n- • · .... ............
’1 30 butyyliammoniumkloridia THF:ssä (27 ml) ja kaliumfluoridia (7,6 g). Seosta kuu- mennettiin palautus]äähdytyksessä 12 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin ja sille suo- • « « ... _______;.-----.------ liiettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyli-.··, asetaatti 100:1, jolloin saatiin 14-fluori-3-tetradekeenihapon metyyliesteri (3,3 g).
• · t · 116 105815 14-fluori-2-tetradekeenihapon metyyliesteri (3,3 g) liuotettiin metanoliin (20 ml), johon oli suspendoitu 10-prosenttista palladium/hiiltä (0,9 g), ja lisättiin 10-pro-senttista vetykloridihapon metanoliliuosta (2 ml). Seosta sekoitettiin vetyilmakehäs-sä 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin, ja suodokseen lisättiin suuri määrä klorofor-5 mia. Kloroformikerros pestiin kylläisellä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä. Orgaaninen kerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 14-fluoritetra-dekaanihapon metyyliesteri (2,5 g). Metyyliesteri (2,5 g) liuotettiin liuokseen, jossa oli kaliumhydroksidia etanolin ja veden seoksessa (1:1), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos tehtiin happamaksi lisäämällä sitruunahappoa, 10 ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä natrium-sulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 14-fluoritetradekaanihappo (2,3 g).
Kun tuote (2,3 g) ja paranitrofenolia (1,3 g) oli liuotettu N,N-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,9 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 14-fluori-15 tetradekaanihapon aktiivinen esteri. Aktiivinen esteri (500 mg) liuotettiin DMF:ään, ja liuokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinitrifluoriasetaattia (0,52 g) ja trietyyliamiinia (1,6 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijär-jestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK279 saannolla 227 mg.
20 SPK279:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 193-194 °C
' .. (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = +6,5° (c = 0,1, metanolissa) ·:·· (3) Alkuaineanalyysi: • · · • · ·
25 C H O N
Laskettu (%): 54,98 7,58 18,31 16,03 : Löydetty (%): 54,82 7,71 18,55 15,84.
«it (4) FD-massaspektri (m/z) 613 (M+H)+.
O 30 C28H46N707F
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1.
• · . · ·. (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri ’(500 MHz, CD3OD:ssä) • · « · //..: δΗ: 1,25-1,75 (22H, m), 2,28 (3H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 35 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,13 (1H, dd, J = 117 105815 10,4, 10,4 Hz), 4,40 (2H, dt, J = 6,4, 47,1 Hz), 5,65 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 66: SPK247:n valmistus 15-hydroksipentadekaanihappoa (1,0 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetykloridiha-5 pon metanoliliuokseen (20 ml) sekoitettiin 1 tunti. Sitten seos konsentroitiin ja , jaettiin kloroformiin ja veteen, ja pestiin vielä 1-prosenttisella natriumvetykarbo- naatin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 15-hydroksipentadekaanihapon metyyliesteri (1,01 g). Pyridiiniin (20 ml) liuotettuun metyyliesteriin lisättiin paratolueenisulfonyylikloridia (0,70 g), 10 ja seosta sekoitettiin 8 tuntia. Sitten pyridiini haihdutettiin ja seos jaettiin kloroformiin ja veteen, ja kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, ja sille suoritettiinJoromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestel-mällä n-heksaani-etyyliasetaatti (50:1), jolloin saatiin 15-paratolueenisulfonyyliok-sipentadekaanihapon metyyliesteri (1,46 g). Asetonitriiliin (30 ml) liuotettuun tuot-15 teeseen (3 g) lisättiin IM teträ-n-butyyliammoniumbromidia tetrahydrofiiraanissa (6 ml), ja seosta sekoitettiin 48 tuntia. Sitten reaktioseos konsentroitiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1), jolloin saatiin 15-fluoripentadekaanihapon metyyliesteri (0,63 g). Metyyliesteri liuotettiin etanolin ja veden seokseen (1:1) ja liuokseen li-20 sättiin kaliumhydroksidia (0,8 g). Saatua seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos konsentroitiin, tehtiin happamaksi heikosti happamalle pH-alueelle li- • | ];·1 säämällä sitruunahappoa, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivat- : 1·· tiin vedettömällä natriumsulfaatilla, jolloin saatiin 15-fluoripentadekaanihappo •:,,i (0,53 g).
• · i • · · • · .....
j·.1· 25 Kun 15-fluoripentadekaanihappo (500 mg) ja paranitrofenoli (268 mg) oli liuotettu • · · . . ^ Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml), lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi- • 1 imidiä (396 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun reaktioseos oli suodatettu ja konsentroitu 15-klooripentadekaanihapon aktiivisen esterin saamiseksi, aktiivinen esteri liuotettiin DMF:ääri, ja liuokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliami- • · · .......
30 no)puriinitrifluoriasetaattia (735 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silika- • · .···. geelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK247 saannolla 230 mg.
• · t w • « • « • · · • · 118 SPK247:n fysikokemialliset ominaisuudet 105815
(1) Sulamispiste: 185-186 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = -1,2° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 5
C H O N
Laskettu (%): 55,67 7,73 17,90 15,67 Löydetty (%): 56,02 7,21 18,04 15,39.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 627 (M+H)+.
C29H48N7O7F
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3340 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 15 δΗ: 1,25-1,70 (24H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,2 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,40 (2H, dt, J = 6,4, 47,1 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,14 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 67: SPK258:n valmistus .···. 20 2-bromitetradekaanihappoon (2 g) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml) lisättiin paranitrofenolia (0,90 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä • 1 1 ' . (1,34 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun muodostuneet sakat oli poistettu suo-
I I
.. , dattamalla, liuotin (DMF) poistettiin haihduttamalla, ja jäännökselle suoritettiin t · 1 \ ·1 kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäqestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti • · · *· " 25 (200:1-50:1), jolloin saatiin 2-bromitetradekaanihappo (1,59 g). Aktiiviseen esteriin V : liuotettuna DMF:ään (30 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini- hydrobromidia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK258 saannolla 202 mg.
··· • · » « · • · · • · · · • · • · M1 f « · 1 • • 1 • · · 119 105815
(1) Sulamispiste: 175-177 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 =-8,4° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
5 C H O N
Laskettu (%): 50,00 6,89 16,65 14,58 Löydetty (%): 50,39 6,44 16,59 14,32.
(4) FD-massaspektri (m/z) 672, 674 (M)+.
10 C28H4gN707Br (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1650 cm"1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,2 Hz), 1,20-1,60 (20H, m), 1,90-2,10 (2H, m), 3,60-3,80 (5H, 15 m), 3,80-4,00 (2H, m), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4
Hz), 4,38 (1H, dd, J = 6,4, 6,4 Hz), 5,67 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,32 (1H, s).
Esimerkki 68: SPK259:n valmistus 2-bromitetradekaanihappoon (2 g) liuotettuna asetonitriiliin (100 ml) lisättiin kal-siumkloridia (7,2 g), tetraetyyliammoniumkloridia (2,2 g) ja trietyyliamiinia 20 (0,84 ml), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 3 tuntia. Kun reaktioseoksen jäähtyessä : muodostuneet sakat oli poistettu suodattamalla, suodos konsentroitiin ja jäännös jaettiin etyyliasetaattiin ja vesipitoiseen sitruunahappoliuokseen. Etyyliasetaattiker-....: ros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 2-klooritetradekaanihappo (1,29 g). 2- klooritetradekaanihappoon (1,29 g) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 25 50 ml) lisättiin paranitrofenolia (0,68 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,1 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun sakat oli poistettu suodattamalla, liuotin - '·'* (DMF) haihdutettiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n-heksaam-etyyliasetaatti (200:1-50:1), jolloin saatiin 2-kloori-tetradekaanihapon aktiivinen esteri (11,12 g). Aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotet- ··· 30 tuna DMF:ään (30 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydro- ; kloridia (500 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun .··♦.* liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa « · ’’’ eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK259 saannol- la 202 mg.
* • · 120 SPK259:n fysikokemialliset ominaisuudet 105815
(1) Sulamispiste: 188-189 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [cc]d25 = +12,8° (c = 0,1, metanolissa) 5 (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 53,54 7,38 17,83 15,61 Löydetty (%): 53,98 6,98 18,09 15,30.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 628, 630 (M)+.
C28H46N707C1 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri 15 (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,89 (3H, J = 7,1 Hz), 1,20-1,60 (20H, m), 1,80-2,10 (2H, m), 3,60-3,80 (5H, m), 3,85-4,00 (2H, m), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,40 (1H, m), 5,68 (1H, brs), 8,12 (1H, s), 8,29 (1H, s).
Esimerkki 69: SPK182:n valmistus 20 Etyylibromidifluoriasetaattia (6,0 g) ja dodekyylialdehydiä (1,84 g) sekoitettiin ve- • · .5 dettömän tetrahydrofuraanin (40 ml) kanssa argonilmakehässä, ja liuos lisättiin pisa- \. roittain sinkkijauheen (2,2 g) ja kuparibromidin (I) (0,22 g) muodostamaan sus- ·:" pensioon vedettömässä tetrahydrofuraanissa (40 ml), jota kuumennettiin palautus- ··.·; jäahdytyslämpötilassa. Kun seosta oli kuumennettu palautusjäähdytyksessä 5 tuntia, • · 25 se jäähdytettiin ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin kromatogra-fia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (20:1-10:1), • t i ' jolloin saatiin etyyli-2,2-difluori-3-hydroksitetradekanoaatti (0,92 g). Kun etyyli- ... 2,2-difluori-3-hydroksitetradekanoaatin (0,92 g) ja l,l'-tiokarbonyyli-imidatsolin • * *·"* (1,26 g) seosta 1,2-dikloorietaanissa oli kuumennettu palautusjäähdytyksessä 1 tun- 30 ti, se jäähdytettiin ja konsentroitiin. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silika- ·’·,« geelikolonnissa eluenttijäqestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (30:1-10:1), jolloin • « J,,,; saatiin etyyli-2,2-difluori-3-imidatsoyylitiokarbonyylioksitetradekanoaatti (1,32 g).
Etyyli-2,2-difluori-3-imidatsoyylitiokarbonyylioksitetradekanoaatin (1,32 g) liuok- • » *••*1 seen tolueenissa (40 ml) argonilmakehässä, jota kuumennettiin palautusjäähdy- 35 tyksessä, lisättiin pisaroittain tri-n-butyylitinahydridin (2,93 g) liuosta tolueenissa (70 ml). Kun seosta oli kuumennettu 2 tuntia palautusjäähdytyksessä, se kon- i 121 105815 sentroitiin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (300:1-50:1), jolloin saatiin etyyli- 2,2-difluoritetradekanoaatti (0,67 g). Etyyli-2,2-difluoritetradekanoaatin (489 mg) liuokseen N,N-dimetyyliformamidissa (30 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyy-5 liamino)puriinihydrokloridia (300 mg) ja trietyyliamiinia (1,5 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli-vesi (8,5:1:0,05-7:1:0,05), jolloin saatiin SPK182 saannolla 95 mg.
SPK182:n fysikokemialliset ominaisuudet
10 (1) Sulamispiste: 181-183 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]o = -6,2° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
15 Laskettu (%): 53,41 7,20 17,79 15,57 Löydetty (%): 53,63 6,79 18,03 15,40.
(4) FD-massaspektri (m/z) 630 (M)+.
C28H45N7O7F2 20 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3250 cm*1, 1660 cm'1,1630 cm'1.
... (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri !;·* (500 MHz, CDCl3-CD3OD:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,25-1,60 (20H, m), 2,10 (2H, m), 3,60-3,80 (5H, m), :···; 3,96 (1H, d, J = 16,7 Hz), 3,98 (1H, d, J = 16,7 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), !·.*: 25 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,76 (1H, brs), 8,13 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
• · • « ·
Esimerkki 70: SPK193:n valmistus .**·. Etyylibromidifluoriasetaattia (11,2 g) ja tetradekyylialdehydiä (3,96 g) sekoitettiin .···. vedettömän tetrahydrofuraanin (80 ml) kanssa argonilmakehässä, ja liuos lisättiin pisaroittain sinkkijauheen (4,1 g) ja kuparibromidin (I) (0,41 g) muodostamaan sus-30 pensioon vedettömässä tetrahydrofuraanissa (80 ml), jota kuumennettiin palautus-
IM
jäähdytyslämpötilassa. Kun seosta oli kuumennettu palautusjäähdytyksessä 5 tuntia, .···. se jäähdytettiin ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin kromatogra- fia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (20:1-10:1), jolloin saatiin etyyli-2,2-difluori-3-hydroksiheksadekanoaatti (1,99 g). Kun etyyli- • · 122 105815 2.2- difluori-3-hydroksiheksadekanoaatin (1,00 g) ja Ι,Γ-tiokarbonyyli-imidatsolin (1,18 g) seosta 1,2-dikloorietaanissa oli kuumennettu palautusjäähdytyksessä 1 tunti, se jäähdytettiin ja konsentroitiin. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silika-geelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (30:1-10:1), jolloin 5 saatiin etyyli-2,2-difluori-3-imidatsoyylitiokarbonyylioksiheksadekanoaatti (1,32 g). Etyyli-2,2-difluori-3-imidatsoyylitiokarbonyylioksiheksadekanoaatin (0,86 g) liuokseen tolueenissa (40 ml) argonilmakehässä, jota kuumennettiin palautusjäähdytyksessä, lisättiin pisaroittani tri-n-butyylitinahydridin (1,07 g) liuosta tolueenissa (80 ml). Kun seosta oli kuumennettu 2 tuntia palautusjäähdytyksessä, se kon-10 sentroitiin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (300:1-50:1), jolloin saatiin etyyli- 2.2- difluoriheksadekanoaatti (0,51 g). Etyyli-2,2-difluoriheksadekanoaatin (300 mg) liuokseen N,N-dimetyyliformamidissa (30 ml) lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyy-liamino)puriinihydrokloridia (300 mg) ja trietyyliamiinia (1,1 ml). Seosta sekoitet- 15 tiin 12 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli-vesi (9:1:0,05-7:1:0,05), jolloin saatiin SPK193 saannolla 41 mg.
SPK193:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 185-186 °C
20 (2) Spesifinen rotaatio: [oc]d25 = -0,8° (c = 0,1, metanolissa) #...t (3) Alkuaineanalyysi: • · ·
! C H O N
Laskettu (%): 54,78 7,51 17,03 14,91 ί V 25 Löydetty (%): 55,06 7,16 16,82 15,21.
• · • · • · • · :T: (4) FD-massaspektri (m/z) 659 (M+H)+.
C30H49N7O7F2 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3250 cm"1, 1660 cm’1, 1620 cm"1.
.···. 30 (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CDCl3-CD3OD:ssä)
> · I
• » t » δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,25-1,60 (20H, m), 2,09 (2H, m), 3,60-3,80 (5H, m), 3,96 (1H, d, J = 16,7 Hz), 3,98 (1H, d, J = 16,7 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), :···; 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,76 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,31 (1H, s).
» • 105815 123
Esimerkki 71: SPK256:n valmistus (R)-(-)-2-hydroksiheksadekaanihapon (0,5 g; valmistettu menetelmällä, joka on kuvattu julkaisussa Agric. Biol. Chem., 54(12), 3337-3338, (1990)) liuokseen DMF:ssä (20 ml) lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (0,22 g) ja Ν,Ν’-disyklo-5 heksyylikarbodi-imidiä (0,38 g), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 12 tuntia ja suodatettiin. Suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriinihydro-kloridia (0,71 g) ja trimetyyliamiinia (1,3 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia, konsentroitiin, ja sille suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijes-telmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK256 saannolla 108 mg.
10 SPK256:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 182-186 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [ajD25 = -6° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
15 C H O N
Laskettu (%): 56,50 8,06 20,07 15,37 Löydetty (%): 56,83 8,12 19,91 15,14.
(4) FD-massaspektri (m/z) 638 (M)+.
... 20 C30H51N7O8 *;· (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm"1, 1630 cm'1 i (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri ': : (500 MHz, CDCl3-CD3OD:ssä) • « · ί·.’: δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,25-1,55 (24H, m), 1,60-1,90 (2H, m), 3,60-3,82 (5H, 25 m), 3,87 (1H, d, J = 16,6 Hz), 4,05 (1H, d, J = 16,6 Hz), 4,07 (1H), 4,10 (1H, dd, ! J = 8,6, 3,7 Hz), 4,18 (1H, dd, J = 10,6, 10,6 Hz), 5,62 (1H, brs), 8,06 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
• 9 · · ·
Esimerkki 72: SPK271:n valmistus • · · • · V·: (S)-(+)-2-asetoksiheksadekaanihappo (0,5 g; valmistettu menetelmällä, joka on ku- 30 vattu julkaisussa Agric. Biol. Chem., 54(12), 333 7-333 8, (1990)) liuotettiin kalium- ,···, hydroksidin (1,0 g) liuokseen 50-prosenttisessa etanolin vesiliuoksessa ja sekoitet- • « tiin 70 °C:ssa 2 tuntia. Kun etanoli oli haihdutettu, reaktioseos tehtiin happamaksi sitruunahapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin (S)-(-)-2-hydroksiheksadekaanihappo (407 mg). Tuote 124 105815 liuotettiin DMF:ään (20 ml), ja liuokseen lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (173 mg) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (310 mg). Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 12 tuntia ja suodatettiin. Suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispika-mynyyliamino)puriinihydrokloridia (0,60 g) ja trietyyliamiinia (1,0 ml), ja seosta 5 sekoitettiin 12 tuntia, konsentroitiin ja suoritettiin kromatografia silikageelikolon-nissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK271 saannolla 97 mg. Olennaisesti mitään diastereomeerikontaminaatiota ei havaittu.
SPK271:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 173-174 °C
10 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = -14,4° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 56,50 8,06 20,07 15,37 15 Löydetty (%): 56,91 7,60 19,71 15,78.
(4) FD-massaspektri (m/z) 639 (M+H)+.
C30H51N7O8 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm’1, 1630 cm'1 20 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri : (500 MHz, CDCl3-CD3OD:ssä) f · * : *·; δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,22-1,55 (24H, m), 1,55-1,90 (2H, m), 3,60-3,80 (5H, [I'" m), 3,90 (1H, d, J = 16,6 Hz), 3,97 (1H, d, J = 16,6 Hz), 4,01 (1H, d, J = 2,1, <1 Γ V Hz), 4,06 (1H, dd, J = 7,1, 4,0 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10,4 Hz), 8,10 (1H, s), 8,30 25 (1H, s).
• · · • · · · ·
Esimerkki 73: SPK270:n valmistus (R)-(-)-3-hydroksitetradekaanihappoa (0,5 g) liuotettiin DMF:ään (20 ml). Liuok- seen lisättiin 0 °C:ssa N-hydroksisukkiini-imidiä (0,26 g) ja N,N'-disyklohek- : syylikarbodi-imidiä (0,46 g), ja seos suodatettiin 12 tunnin sekoittamisen jälkeen • · · •.. * 30 huoneenlämmössä. Suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini- hydrokloridia (0,86 g) ja trietyyliamiinia (1,6 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia, »»» konsentroitiin ja suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäqestelmil-*:”i lä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK270 saannolla 121 mg.
125 SPK270:n fysikokemialliset ominaisuudet 105815
(1) Sulamispiste: 167-168 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = -1,2° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 5
C H O N
Laskettu (%): 55,16 7,77 20,99 16,08 Löydetty (%): 54,98 7,99 20,86 16,17.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 610 (M)+.
C28H47N7O8 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm*1, 1630 cm*1 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 15 δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,65 (20H, m), 2,33 (1H, dd, J = 14,5, 13,0 Hz), 2,44 (1H, dd, J = 4,3, 14,5 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,82 (1H, d, J = 17,0 Hz), 3,97 (1H, d, J = 17,0 Hz), 3,99 (1H), 4,02 (1H, m), 4,14 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,67 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 74: SPK274:n valmistus 20 (R)-(+)-3-hydroksitetradekaanihappoa (0,5 g) liuotettiin DMF.ään (20 ml). Liuok-seen lisättiin 0 °C:ssa N-hydroksisukkiini-imidiä (0,26 g) ja N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (0,46 g), ja seos suodatettiin 12 tunnin sekoittamisen jälkeen huo-neenlämmössä. Suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyliamino)puriini-.·. : hydrokloridia (0,86 g) ja tnetyyliamiinia (1,6 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia, .*:·* 25 konsentroitiin ja suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäqestel- t · f ..._____ ..
millä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK274 saannolla 136 mg.
'·]”· SPK270:n fysikokemialliset ominaisuudet * · · « • ·
'V (1) Sulamispiste: 178-180 °C
• t ..
(2) Spesifinen rotaatio: [a]o =-4,4° (c = 0,1, metanolissa) 30 (3) Alkuaineanalyysi: .
m * ♦ · - · -
• I
c h o n
Laskettu (%): 55,16 7,77 20,99 16,08 Löydetty (%): 55,01 8,01 21,32 15,66.
126 105815 (4) FD-massaspektri (m/z) 610 (M)+.
C28H47N7O8 (5) Infirapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1 5 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CDsODissä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,65 (20H, m), 2, 33 (1H, dd, J = 8,9, 13,9 Hz), 2,45 (1H, dd, J = 4,3, 13,9 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,85 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,03 (1H, m), 4,14 (1H, dd, J = 10 10,4, 10,4 Hz), 5,67 (1H, brs), 8,14 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 75: SPK252:n valmistus 15-hydroksipentadekaanihappoa (3,0 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetyklori-dihapon metanoliliuokseen sekoitettiin 1 tunti. Sitten reaktioseos konsentroitiin ja jaettiin kloroformiin ja veteen. Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsul-15 faatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 15-hydroksipentadekaanihapon metyyliesteri (3,0 g). Pyridiiniin (2,6 ml) liuotettuun metyyliesteriin lisättiin paratolueenisul-fonyylikloridia (2,5 g) 0 °C:ssa, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 tuntia. Sitten reaktioseos konsentroitiin ja jaettiin kloroformiin ja veteen. Kloroformikerros kuivattiin ja konsentroitiin, ja näin saadulle jäännökselle suoritettiin kromatografia ... 20 silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (20:1), jolloin *;··' saatiin 15-paratolueenisulfonyylioksipentadekaanihapon metyyliesteri (3,47 g).
9 w • " N,N-dimetyyliformamidiin (50 ml) liuotettuun tuotteeseen (1 g) lisättiin natriumat- : : sidia (1,52 g), ja seosta sekoitettiin 80 °C:ssa 5 tuntia. Sitten reaktioseos kon- • · 9 : sentroitiin ja jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, jolloin saatiin 15-atsidopentade- 25 kaanihapon metyyliesteri (0,66 g). Metyyliesteriin liuotettiin kaliumhydroksidin : Y: (0,6 g) liuos 50-prosenttisessa etanolin vesiliuoksessa (100 ml) ja seosta sekoitettiin 60 °C:ssa 1 tunti. Etanoli haihdutettiin reaktioseoksesta, joka tehtiin happamaksi .··. heikosti happamalle pH-alueelle ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros .···. kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 15-klooripentadekaanihappo (0,57 g).
Y 30 Tuote liuotettiin Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml), ja liuokseen lisättiin pa-ranitrofenolia (0,28 g) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,42 g). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Sakka poistettiin suodattamalla ja 6-(4'-N-glysyylispikamynyyli-; amino)puriinitrihydrokloridia (700 mg) ja trietyyliamiinia (2,5 ml) lisättiin suodok- ,,; seen. Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suori- 35 tettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK252 saannolla 193 mg.
SPK252:n fysikokemialliset ominaisuudet 127 105815
(1) Sulamispiste: 182-183 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = -6° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 5
C H O N
Laskettu (%): 53,69 7,46 17,26 21,59 Löydetty (%): 53,41 7,52 17,15 21,92.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 650 (M+H)+.
C29H48N10O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 1630 cm'1.
(6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 15 δΗ: 1,25-1,70 (24H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,7 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,7 Hz) , 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,15 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 76: SPK249:n valmistus :...: 20 12-bromidekaanihappoa (5 g) liuotettuna 10-prosenttiseen vetykloridihapon metano- • · ! '·· liliuokseen (30 ml) sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Sitten reaktioseos kon- ‘ : sentroitiin ja jaettiin kloroformiin ja veteen ja kloroformikerros pestiin edelleen 1- prosenttisella natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä ja kuivattiin vedet-tömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-bromidekaanihapon • * 25 metyyliesteri (5,0 g). Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 30 ml) liuotettuun metyy-liesteriin (2,24 g) lisättiin 60-prosenttista natriumhydridiä (917 mg) ja fenolia ... (720 mg), ja seosta sekoitettiin 17 tuntia. Sitten DMF haihdutettiin ja jäännös jaet- 9 · II! tim kloroformiin ja veteen. Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsul- · faatilla, konsentroitiin, ja suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijär-:\i 30 jestelmällä n-heksaani-etyyliasetaatti (10:1), jolloin saatiin 12-fenoksidodekaaniha- pon metyyliesteri (1,05 g). Tuote (1,05 g) liuotettiin 50-prosenttiseen etanolin vesi-liuokseen, johon oli liuotettu kaliumhydroksidia (920 mg), ja seosta sekoitettiin kuumentaen 60 °C:ssa 2 tuntia. Sitten etanoli haihdutettiin reaktioseoksesta, joka tehtiin happamaksi heikosti happamalle pH-alueelle ja uutettiin etyyliasetaatilla. 35 Etyyliasetaattikerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 12-fenoksidode- 128 105815 kaanihappo (850 mg). Tähän tuotteeseen liuotettuna DMF:ään lisättiin paranitro-fenolia (404 mg) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (600 mg) ja seosta sekoitettiin 15 tuntia. Kun sakka oli poistettu suodattamalla, 6-(4'-N-glysyylispikamynyyli-amino)puriinihydrokloridia (250 mg) ja trietyyliamiinia (1,0 ml) lisättiin liuokseen. 5 Seosta sekoitettiin vielä 15 tuntia. Kun liuotin oli haihdutettu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK249 saannolla 96 mg.
SPK249:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 175-177 °C
10 (2) Spesifinen rotaatio: [<x]D24 = -8,4° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 58,52 7,06 19,49 14,93 15 Löydetty (%): 58,88 6,82 19,18 15,12.
(4) FD-massaspektri (m/z) 658 (M+H)+.
C32H46N7O8 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1.
20 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD30D:ssä) . · • · δΗ: 1,30-1,45 (12H, m), 1,48 (2H, m), 1,63 (2H, m), 1,76 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,7 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,7 Hz), 3,95 (2H, t, J = 7,1 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, t, J = 10,4, 10,4 V·: 25 Hz), 5,68 (1H, brs), 6,87 (3H, m), 7,24 (2H, t, J = 7,6 Hz), 8,15 (1H, brs), 8,32 (1H, s7: s).
.···, Esimerkki 77: SPK242:n valmistus • t • · « <«« 2-bromidekaanihappoon (500 mg) liuotettuna Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 10 ml) 0 °C:ssa lisättiin 60-prosenttista natriumhydridiä (163 mg) ja sen jälkeen fe- • · _ .··. 30 nolia (154 mg), ja seosta sekoitettiin 17 tuntia. Kun liuotin (DMF) oli haihdutettu, jäännös jaettiin veteen ja etyyliasetaattiin. Etyyliasetaattikerros kuivattiin ja kon- sentroitiin, jolloin saatiin 2-fenoksidodekaanihappoa (440 mg). DMF:ään liuotet- tuun 2-fenoksidodekaanihappoon (440 mg) lisättiin paranitrofenolia (190 mg) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (283 mg), ja seosta sekoitettiin 15 tuntia. Sitten 10S815 muodostunut sakka poistettiin suodattamalla, ja suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyy-lispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (529 mg) ja trietyyliamiinia (2,0 ml). Seosta sekoitettiin vielä 15 tuntia. DMF haihdutettiin reaktioseoksesta, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-5 metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK242 saannolla 118 mg.
SPK242:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 172-174 °C
(2) Alkuaineanalyysi:
10 C H O N
Laskettu (%): 59,55 7,50 18,66 14,30 Löydetty (%): 59,30 7,78 18,91 14,01 (3) FD-massaspektri (m/z) 686 (M+H)+.
15 C34H51N7O8 (4) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm"1, 1660 cm*1, 1620 cm*1.
(5) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,60 (20H, m), 1,92 (2H, m), 3,67-3,82 (5H, m), 20 3,85-4,04 (2H), 4,05 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,0, 10,0 Hz), 4,62 (1H, m), 5,67 (1H, brs), 6,95-7,05 (3H, m), 7,32 (2H), 8,01 (1H, brs), 8,22 (1H, s).
• 1 · « ‘!"! Esimerkki 78: SPK197:n valmistus I I c ( < < • · (S)-(+)-2-asetoksiheksadekaanihapon (0,5 g; valmistettu menetelmällä, joka on ku-*L.: vattu julkaisussa Agric. Biol. Chem., 54(12), 3337-3338, (1990)) liuokseen ’ 25 DMF:ssä (20 ml) lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (183 mg) ja N,N'-disyklo- heksyylikarbodi-imidiä (328 mg) 0 °C:ssa, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 12 tuntia. Sitten reaktioseos suodatettiin ja suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyyli- • · · - - - L- —· spikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (0,62 g) ja trietyyliamiinia (1,1 ml). Seosta : sekoitettiin 12 tuntia. Kun reaktioseos oli konsentroitu, jäännökselle suoritettiin 30 kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1- • * "* 5:1), jolloin saatiin SPK197 saannolla 107 mg. Mitään olennaista diastereomeeri- • · · kontaminaatiota ei havaittu.
• · SPK197:n fysikokemialliset ominaisuudet „ 105815
(1) Sulamispiste: 181-183 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [α]ο25 = +13,2° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 5
C H O N
Laskettu (%): 56,54 7,86 21,18 14,42 Löydetty (%): 56,30 8,09 21,33 14,28.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 680 (M)+.
C32H53N7O9 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3350 cm'1, 1720 cm"1, 1660 cm'11620 cm'1 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CDCl3-CD3OD:ssä) 15 δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,50 (24H, m), 1,82 (2H, m), 2,20 (3H, s), 3,60- 3,80 (5H, m), 3,86 (1H, d, 16,8 Hz), 3,95 (1H, d, 16,8 Hz), 4,01( 1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4,10,4 Hz), 4,96 (1H, t, J = 6,4 Hz), 5,68 (1H, brs), 8,15 (1H, s), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 79: SPK198:n valmistus 20 (R)-(+)-2-hydroksiheksadekaanihapon (0,5 g; valmistettu menetelmällä, joka on ku-vattu julkaisussa Agric. Biol. Chem., 54(12), 3337-3338, (1990)) liuokseen pyridii-·:··; nissä (15 ml) lisättiin etikkahappoanhydridiä (0,23 ml) 0 °C:ssa, ja seosta sekoitet- : v. tiin 12 tuntia. Reaktioseos jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen, ja etyyliasetaattikerros kuivattiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin (R)-(-)-2-asetoksiheksadekaanihappo * · · § I.. I 25 (0,52 g). Asetoksijohdannainen liuotettiin DMF:ään (20 ml), ja liuokseen lisättiin N- • · · ’ hydroksisukkiini-imidiä (191 mg) ja N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä (342 mg) 0 °C:ssa. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 12 tuntia. Sitten reaktioseos suoda- t · · • « *···’ tettiin ja suodokseen lisättiin 6-(4'-N-glysyylispikamynyyli-amino)puriinihydro- kloridia (0,65 g) ja trietyyliamiinia (1,1 ml). Seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun reak- ; ’.. j 30 tioseos oli konsentroitu, jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa • · . · ·. eluenttijäijestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK198 saannol- la 119 mg.
« · · 1 · SPK198:n fysikokemialliset ominaisuudet 131 105815
(1) Sulamispiste: 184-185 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [α]ο25 = -26,0° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 5
C H O N
Laskettu (%): 56,54 7,86 21,18 14,42 Löydetty (%): 56,21 8,13 21,26 14,40.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 680 (M)+.
C32H53N7O9 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1720 cm'1, 1660 cm'11620 cm'1 (6) Protoniydinmagneettinenresonanssispektri (500 MHz, CDCl3-CD3OD:ssä) 15 δΗ: 0,90 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,25-1,60 (24H, m), 1,84 (2H, m), 2,18 (3H, s), 3,60- 3,80 (5H, m), 3,89 (1H, d, J = 17,3 Hz), 3,92 (1H, d, J = 17,3 Hz), 4,02 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 4,98 (1H, t, J = 6,9 Hz), 5,66 (1H, brs), 8,12 (1H, brs), 8,30 (1H, s).
Esimerkki 80: SPK262:n valmistus · · • · 20 2-bromitiofeeniä (0,82 g) ja bis(trifenyylifosfiini)palladium(II)kloridia (35 mg) se- « · : " koitettiin yhteen trietyyliamiinin (35 ml) kanssa. Tähän seokseen lisättiin kupari(I)- jodidia (5 mg). Kun seosta oli sekoitettu 15 minuuttia, siihen lisättiin 10-undekyy- t · « • V nihappoa (0,91 g), ja saatu seos suodatettiin ja konsentroitiin, kun sitä ensin oli se- koitettu 12 tuntia. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa elu-:T: 25 enttijärjestelmällä kloroformi-metanoli (100:1), jolloin saatiin ll-(2'-tienyyli)-10- undekyynihappo (0,30 g).
• · · • · '”·' ll-(2'-tienyyli)-10-undekyynihappoon (234 mg) liuotettuna N,N-dimetyyliforma- midiin (DMF, 12 ml) lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (102 mg) ja N,N'-di-sykloheksyylikarbodi-imidiä (183 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun muodos- • · .*·. 30 tunut sakka oli poistettu suodattamalla, suodos lisättiin liuokseen, jossa oli 6-(4'-N- • · · glysyylispikamynyyliamino)puriinihydrokloridia (450 mg) ja trietyyliamiinia • · ------ *···] (1,6 ml) DMF.ssä (45 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin haihdutettiin, ja ’ : jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä 132 105815 kloroformi-metanoli-vesi (7:1:0,05-5:1:0,1), jolloin saatiin SPK262 saannolla 151 mg.
SPK262:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 184-186 °C
5 (2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = -4,8° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
Laskettu (%): 55,31 6,24 17,79 15,57 10 Löydetty (%): 55,25 5,95 17,58 15,82.
(4) FD-massaspektri (m/z) 630 (M)+.
C29H39N7O7S
(5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm’1, 1630 cm'1 15 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,30-1,70 (12H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,6 Hz), 2,43 (2H, t, J = 7,6 Hz), 3,60-3,80 (5H, m), 3, 87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,14 (1H, dd, J = 10, 4, 10,4 Hz), 5,67 (1H, brs), 6,93 (1H, dd, J = 3,6, 3,6 ..... 20 Hz), 7,07 (1H, dd, J = 3,6, <1 Hz), 7,27 (1H, dd, J = 3,6, <1 Hz), 8,15 (1H, s), 8,31 (iH, s).
I < ':' ! Esimerkki 81: SPK263:n valmistus 1« 1 « I · « · 3-bromitiofeeniä (0,82 g) ja bis(trifenyylifosfiini)palladium(II)kloridia (35 mg) se-koitettiin yhteen trietyyliamiinin (35 ml) kanssa. Tähän seokseen lisättiin kupari(I)- « · · '·* * 25 jodidia (5 mg). Kun seosta oli sekoitettu 15 minuuttia, siihen lisättiin 10-undekyyni- happoa (0,91 g), ja saatu seos suodatettiin ja konsentroitiin, kun sitä ensin oli sekoi- • · « :...: tettu 12 tuntia. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluentti-
III
järjestelmällä kloroformi-metanoli (100:1), jolloin saatiin ll-(3'-tienyyli)-10-unde- : kyynihappo (0,17 g).
• · · » · • · · 30 ll-(3'-tienyyli)-10-undekyynihappoon (0,17 g) liuotettuna N,N-dimetyyliformami-.···. diin (DMF, 8,5 ml) lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (74 mg) ja N,N'-disyklohek-
IM
syylikarbodi-imidiä (133 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun sakka oli poistettu suodattamalla, suodos lisättiin liuokseen, jossa oli 6-(4'-N-glysyylispikamynyyli-amino)puriinihydrokloridia (300 mg) ja trietyyliamiinia (1,1 ml) DMF.ssä (30 ml), 133 105815 ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin haihdutettiin, ja jäännökselle suoritettiin kro-matografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli-vesi (7:1:0,05-5:1:0,1), jolloin saatiin SPK263 saannolla 160 mg.
SPK263:n fysikokemialliset ominaisuudet
5 (1) Sulamispiste: 180-181 °C
Af (2) Spesifinen rotaatio: [a]D =+2,4° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
C H O N
10 Laskettu (%): 55,31 6,24 17,79 15,57 Löydetty (%): 55,62 5,88 17,62 15,78.
(4) FD-massaspektri (m/z) 652 (M+Na)+.
C29H39N7O7S
15 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm'1, 1630 cm'1 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,30-1,70 (12H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 2, 38 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60- 3,80 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4,02 (1H, dd, 20 J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, t, J = 10,4 Hz), 5,69 (1H, brs), 7,02 (1H, dd, J = 1,3, 4,7 ;·" Hz), 7,32 (1H, dd, J = 3,3, 4,7 Hz), 7,37 (1H, dd, J = 1,3, 3,3 Hz), 8,13 (1H, s), 8,29 (1H, s).
: Esimerkki 82: SPK266:n valmistus • · • · · • · · .·:·] 3-bromifuraania (0,82 g) ja bis(trifenyylifosfiini)palladium(II)kloridia (35 mg) se- • · · 25 koitettiin yhteen trietyyliamiinin (35 ml) kanssa. Tähän seokseen lisättiin kupari(I)- ... jodidia (5 mg). Kun seosta oli sekoitettu 15 minuuttia, siihen lisättiin 10-undekyyni- • · happoa (0,91 g), ja saatu seos suodatettiin ja konsentroitiin, kun sitä ensin oli sekoi-'··.* tettu 12 tuntia. Jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluentti- järjestelmällä kloroformi-metanoli (100:1), jolloin saatiin ll-(3'-furyyli)-10-unde- • « 30 kyynihappo (0,16 g).
·»· ll-(3'-furyyli)-10-undekyynihappoon (0,16 g) liuotettuna N,N-dimetyyliformami-·:·: diin (DMF, 8 ml) lisättiin N-hydroksisukkiini-imidiä (74 mg) ja N,N'-disyklo- heksyylikarbodi-imidiä (133 mg), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun sakka oli poistettu suodattamalla, suodos lisättiin liuokseen, jossa oli 6-(4'-N-glysyylispika- 134 105815 mynyyliamino)puriinihydrokloridia (300 mg) ja trietyyliamiinia (1,1 ml) DMF:ssä (30 ml), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Liuotin haihdutettiin, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metano-li-vesi (7:1:0,05-5:1:0,1), jolloin saatiin SPK266 saannolla 93 mg.
5 SPK266:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 161-162°C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]o25 = +1,2° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
10 C H O N
Laskettu (%): 56,76 6,41 20,86 15,98 Löydetty (%): 57,05 6,42 20,80 15,83.
(4) FD-massaspektri (m/z) 614 (M)+.
15 C29H39N7O8 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3300 cm*1, 1620 cm*1 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 1,30-1,70 (12H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,1 Hz), 2,37 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,60-3,80 ..... 20 (5H, m), 3,87 (1H, d, J = 16,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 16,1 Hz), 4, 01 (1H, dd, J = 2,1, <1 Hz), 4,15 (1H, dd, J = 10,4, 10,4 Hz), 5,67 (1H, brs), 6,38 (1H, d, J = 1,4 Hz), : 7,42 (1H, dd, J = 1,4, <1 Hz), 7,58 (1H, dd, J = <1 Hz), 8,12 (1H, brs), 8,28 (1H, s).
« f :' ': Esimerkki 83: ST152:n valmistus • m 9 9 • 99
Liuokseen, jossa oli 12-bromidodekaanihappoa (1 g) ja paranitrofenolia (490 mg) « I « *·* ’ 25 Ν,Ν'-dimetyyliformamidissa (DMF, 30 ml), lisättiin N,N'-disykloheksyylikarbodi- imidiä (740 mg) ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja konsent- « · · roitiin, jolloin saatiin 12-bromidodekaanihapon aktiivinen esteri. Tähän aktiiviseen :...·’ esteriin (836 mg) liuotettuna DMF:ään lisättiin 6-(4'-N-glysyyliseptaminyyliamino)- ; puriinihydrobromidia (800 mg) ja trietyyliamiinia (2,5 ml), ja seosta sekoitettiin 12
• · I
30 tuntia. Liuotin haihdutettiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageeliko- • * *:" loimissa eluenttijäqestelmällä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPK152 • · · \: saannolla 462 mg.
SPK152:n fysikokemialliset ominaisuudet 135 105815
(1) Sulamispiste: 155-157 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [α]ο25 = +9,2° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi: 5
C H O N
Laskettu (%): 52,04 7,05 18,66 16,34 Löydetty (%): 52,30 6,79 18,45 16,49.
10 (4) FD-massaspektri (m/z) 644, 646 (M+H)+.
^26Η42Ν?07Βγ (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3400 cm'1, 1630 cm'1 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) 15 δΗ: 1,20-1,70 (18H, m), 1,84 (2H, m), 2,28 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,43 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,50-3,80 (6H, m), 3,86 (1H, d, J = 15,1 Hz), 3,89 (1H, d, J = 15,1 Hz), 3,90 (1H, dd, J = 10,1, 10,1 Hz), 5,43 (1H, brs), 8,12 (1H, s), 8,31 (1H, s).
Esimerkki 84: SPT241:n valmistus
Liuokseen, jossa oli trans-2-dodekenaalia (4,5 g) liuotettuna metyleenikloridiin 20 (80 ml), lisättiin (karbometoksimetyleenitrifenyylifosforaania (8,3 g), ja seosta se- • ‘ ·., koitettiin 2 tuntia. Reaktioseokselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti (100:1-20:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-tetradekadieenihapon metyyliesteri (5,4 g). Liuokseen, jossa oli ka- • · ]./. liumhydroksidia (6,5 g) etanolin ja veden sekaliuottimessa (1:1) (100 ml), lisättiin • · · 25 trans,trans-2,4-tetradekadieenihapon metyyliesteriä (5,4 g), ja seosta sekoitettiin „ '·* ’ 60 °C:ssa 40 minuuttia. Reaktioseos jäähdytettiin ja tehtiin happamaksi heikosti happamalle pH-alueelle sitruunahapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaatti-kerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin, jolloin saatiin • · · trans,trans-2,4-tetradekadieenihappo (4,3 g). Tetradekadieenihappoon liuotettuna . \ : 30 Ν,Ν-dimetyyliformamidiin (DMF, 50 ml) lisättiin paranitrofenolia (2,67 g) ja N,N'- .··· j disykloheksyylikarbodi-imidiä (3,9 g), ja seosta sekoitettiin 12 tuntia. Kun muodos- ’! ’ tunut sakka oli poistettu suodattamalla ja DMF haihdutettu, jäännökselle suoritettiin • « « kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä n-heksaani-etyyliasetaatti ”"· (200:1-50:1), jolloin saatiin trans,trans-2,4-tetradekadieenihapon aktiivinen esteri 35 (5,1 g). Aktiiviseen esteriin (500 mg) liuotettuna DMF:ään (30 ml) lisättiin 6-(4'-N- 136 105815 glysyyliseptaminyyliamino)puriinihydrokloridia (560 mg) ja trietyyliamiinia (1,5 ml), ja seosta sekoitettiin 18 tuntia. Liuotin haihdutettiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia silikageelikolonnissa eluenttijärjestelmillä kloroformi-metanoli (7:1-5:1), jolloin saatiin SPT241 saannolla 271 mg.
5 SPT241:n fysikokemialliset ominaisuudet
(1) Sulamispiste: 154-156 °C
(2) Spesifinen rotaatio: [a]D25 = -16,0° (c = 0,1, metanolissa) (3) Alkuaineanalyysi:
10 C H O N
Laskettu (%): 57,03 7,35 18,99 16,63 Löydetty (%): 56,82 7,63 19,15 16,40.
(4) FD-massaspektri (m/z) 590 (M+H)+.
15 C28H43N7O7 (5) Infrapunaspektri (KBr-kiekko): 3250 cm'1, 1650 cm'1, 1620 cm'1 (6) Protoniydinmagneettinen resonanssispektri (500 MHz, CD3OD:ssä) δΗ: 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz), 1,20-1,50 (14H, m), 2,19 (2H, dt, J = 7,1 Hz), 3,53 (1H, 20 dd, J = 9,5, 9,5 Hz), 3,60-3,80 (6H, m), 3,95 (1H, dd, J = 10,0, 10,0 Hz), 3,97 (2H, s), 5,98 (1H, d, J = 15,0 Hz), 6,14 (1H, dt, J = 15,0, 7,3 Hz), 6,21 (1H, dd, J = 15,0, f'·· 10,5 Hz), 7,18 (1H, dd, 10,5, 15,0 Hz), 8,07 (1H, s), 8,32 (1H, s).
« •
Esimerkki 85: Menetelmä tämän keksinnön yhdisteen natriumsuolan valmis- • · tamiseksi • · · • · · • · • · · : 25 Tämän keksinnön yhdisteen (10 mg) suspensioon metanolissa (10 ml) lisätään nat- riummetoksidia (2,3 mg), ja seosta sekoitetaan 1 tunti. Sitten metanoli haihdutetaan, : * *': jolloin saadaan tämän keksinnön yhdisteen natriumsuola (10 mg).
• · · • ·
Esimerkki 86 (injektio/ampulli) • ·
• f I
• · » . · · . Tämän keksinnön yhdiste 1-5 mg ’·' 30 Etanoli Imi • * f
Polysorbaatti 0,1 ml
Fysiologinen suolaliuos q.s.
Yhteensä 10 ml 105815 137
Edellä esitetyt yhdisteet sekoitetaan yhteen, suodatetaan ja täytetään ampulliin injektioksi.
Esimerkki 87 (injektio/ampulli) Tämän keksinnön yhdiste 5 mg 5 Propyleeniglykoli+etanoli (l:l-seos) 0,5 ml
Polysorbaatti 80 0,3 ml
Etanoliamiini 40 μΐ
Fysiologinen suolaliuos q.s.
Yhteensä 100 ml 10
Edellä esitetyt yhdisteet sekoitetaan yhteen, suodatetaan ja täytetään ampulliin injektioksi.
Esimerkki 88 (injektio/ampulli) Tämän keksinnön yhdiste 5 mg 15 Dimetyyliasetamidi 0,25 ml
Polysorbaatti 80 0,3 ml IN NaOH:n vesiliuos 60 μΐ
Fysiologinen suolaliuos q.s.
Yhteensä 100 ml «· · :·. 20 • · : : Edellä esitetyt yhdisteet sekoitetaan yhteen, suodatetaan ja täytetään ampulliin in- • · « : V jektioksi.
• · • ♦ · • ·· .···] Esimerkki 89 (tabletti/1 tabletti) · · Tämän keksinnön yhdiste 5 mg • · · •',,,ί 25 Kiteinen selluloosa 72,5 mg
Maissitärkkelys 18 mg . Talkki 4 mg « · ·
Magnesiumstearaatti 0,5 g
Yhteensä 100 mg 30 • · · •:' ·! Edellä esitetyt komponentit sekoitetaan ja puristetaan tabletin saamiseksi.

Claims (14)

138 105815
1. Spikamysiinijohdannainen 6-(4'-N-glysyylispikaminyyliamino)puriini, jota esittää seuraava kaava (lila), tai sen suola: LE > ns/ OH w H2N Ύ OH f o 0H (ma)
2. Spikamysiinijohdannainen 6-(4'-N-glysyyliseptaminyyliamino)puriini, jota esittää seuraava kaava (Illb), tai sen suola: N H rr> Nv. V ns / oh y w H0 hT^0^7^"^ h2n Ύ oh f O o H (mb) • · • · • · · |ii>; 3. Analogiamenetelmä sellaisen spikamysiinijohdannaisen valmistamiseksi, jota esittää kaava (I), tai sen suola: « < • I • m M H *·; f Ύ) Nx f/ OH 0 ν/^Τ'ο "Τ'-'-νη .··. ^ n7^\/ r RciTY WT^Rl ·/·.: Il o R2 10 o (I) ,---. jossa R esittää mitä tahansa substituenttia, joka on määritelty seuraavien kohtien (i)- < I '' ‘. (xi) avulla, ja Ri ja R2 ovat toistensa kanssa erilaisia ja kumpikin on H tai OH: 105815 139 (i) suoraketjuinen alkyyli, jossa on 12-13 hiiliatomia, tai haarautunut alkyyli, jossa on 11-12 hiiliatomia, suoraketjuinen alkenyyli, jossa on 12-13 hiiliatomia, tai suoraketjuinen alkadienyyli, jossa on 11-13 hiiliatomia, kun Rj on H ja R2 on OH; 5 tai suoraketjuinen alkenyyli, jossa on 12-13 hiiliatomia, tai suoraketjuinen alkadienyyli, jossa on 11-13 hiiliatomia, kun Ri on OH ja R2 on H, (ii) suoraketjuinen halogeenialkyyli, jossa on 10-15 hiiliatomia, 10 (iii) CH3(CH2)nCH(OH)- tai CH3(CH2)n.,CH(OH)-CH2-, jossa n merkitsee kokonaislukua 9-13, (iv) alkyyli, jossa on atsidiryhmä tai syaaniryhmä ja jossa on 10-15 hiiliatomia, (v) suoraketjuinen alkyyli, jossa on fenoksiryhmä tai halogeenisubstituoitu fenoksi-ryhmä ja jossa on 10-13 hiiliatomia, 15 (^) CH3(CH2)aCO(CH2)b-, ·:·; Il O • · • · :N CH3(CH2)b.1CH- · · I • * * I • « < I - ’ OC(CH2)aCH3 :*·*: O • ·· • · · tai rj CH3(CH2)b.2CHCH2-, ;i;‘ oqcH2)acH3 Il o • « jossa a merkitsee kokonaislukua 0-2 ja b merkitsee kokonaislukua 10-15, 140 105815 (vii) CH3(CH2)cS020(CH2)d- tai CH^CH^CH- 0S02(CH2)cCH3 jossa c merkitsee kokonaislukua 0-3 ja d merkitsee kokonaislukua 10-15, (viii) (CH3)3Si(CH2)10- tai 5 (CH3)3SiC=C-(CH2)8- (ix) CH3(CH2)7CHCH(CH2)7- °/\ h3c ch3 (X) ch3(ch2)5c(ch2)10-; *·· Il O • I i’v 10 (xi) • · S’ ^-Λ C=C(CH2)8- - Qy :***: x • · · • · · *···* jossa X on O tai S, • · • · · tunnettu siitä, että tätä valmistetaan I r joko valmistusmenetelmällä 1, jossa annnetaan aktiivisen esterijohdannaisen, joka 15 saadaan aktivoimalla erilaisia karboksyylihappoja (vastaten ryhmiä, jotka on määri- < « telty kohdissa (i)-(xi) R:lle kaavassa (I)) tavallisella menetelmällä, reagoida patent- 105815 141 tivaatimuksen 1 mukaisen yhdisteen (lila) kanssa tai patenttivaatimuksen 2 mukaisen yhdisteen (Illb) kanssa tai sen happoadduktin kanssa, tai valmistusmenetelmällä 2, jossa annetaan karboksyylihapon reagoida patenttivaatimuksen 1 mukaisen yhdisteen (lila) kanssa tai patenttivaatimuksen 2 mukaisen 5 yhdisteen (mb) kanssa tai näiden suolan kanssa käyttäen koplaavaa ainetta, tai valmistusmenetelmällä 3, jossa asyyliglysiiniyhdiste saadaan tavanomaisella menetelmällä, ja asyyliglysiini muutetaan aktiiviseksi esteriksi ja se kondensoidaan seuraavan yhdisteen (Ila) tai (Ilb) tai näiden happoadduktin kanssa, N H CO oh y HOCH2 HO [ OH (na) 10 N H ι^ΝνΛ N.JC/ oh N ’"'ί HO^^C^""0 '^7^'NH OH [ .·*:·: H (Ilb) • · · tai valmistusmenetelmällä 4, jossa kondensoidaan asyyliglysiiniyhdiste ja yhdiste ·*, (Ila) tai (Ilb) tai näiden happoaddukti käyttämällä kondensoivaa ainetta. • « • I [·’ 4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen valmis- 15 tamiseksi, tunnettu siitä, että Ri on H ja R2 on OH, tai sen suola.
5. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen valmis- • « ' · · ·[ tamiseksi, tunnettu siitä, että Ri on OH ja R2 on H, tai sen suola. 142 105815
6. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että R on suoraketjuinen alkenyyli, jossa on 12-13 hiiliatomia, tai sen suola.
7. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen valmis-5 tamiseksi, tunnettu siitä, että R on suoraketjuinen alkenyyli, jossa on 12-13 hiiliatomia, tai sen suola.
8. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että R on suoraketjuinen alkadienyyli, jossa on 11-13 hiiliatomia, tai sen suola.
9. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen valmis tamiseksi, tunnettu siitä, että R on suoraketjuinen alkadienyyli, jossa on 11-13 hiiliatomia, tai sen suola.
10. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistettava spikamysiinijohdannainen on valittu 15 ryhmästä, johon kuuluvat seuraavat yhdisteet ja niiden suolat: 6-[4'-N-(N'-tridekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, 6-[4'-N-(N'-tetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, 6-[4'-N-(N'-10-metyyliundekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini • I I 6-[4'-N-(N'-l l-metyylidodekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini j’\. 20 6-[4'-N-(N'-12-tridekenoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, • · · i 6-[4'-N-(N'-cis-9-tetradekenoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini ;'.'; 6-[4'-N-(N'-trans-2-tetradekenoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini • · 6-[4,-N-(N'-trans,trans-2,4-dodekadienoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini .': *! 6-[4'-N-(N'-trans,ttans-2,4-tridekadienoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini • · · 25 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-tetradekadienoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, ... 6-[4'-N-(N'-l l-bromiundekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, V.f 6-[4'-N-(N'-12-bromidodekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, ·...· 6-[4'-N-(N'-13-bromitridekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, 6-[4'-N-(N'-14-bromitetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, 30 6-[4'-N-(N'-12-klooridodekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini t;, 6-[4'-N-(N -13 -klooritridekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini c ' 'r <r' 6-[4'-N-(N - 14-klooritetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini : ‘ 6-[4'-N-(N'- 14-fluoritetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 6-[4'-N-(N'-15-fluoripentadekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 105815 143 6-[4'-N-(N'-16-fluoriheksadekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 6-[4'-N-(N'- 1 l-jodiundekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 6-[4'-N-(N'-2-klooriheksadekanoyyliglysyyli)spikammyyliamino]purimi, 6-[4'-N-(N'-2-fluoridodekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]purimi, 5 6-[4'-N-(N'-2-fluoriheksadekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]purimi, 6-[4'-N-(N'-2,2-difluoritetradekanoyyliglysyyli)spikammyyli-ainino]piiriini 6-[4'-N-(N'-2diydroksiheksadekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriim, 6-[4'-N-(N'-(S)-2-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, 6-[4'-N-(H'-(R)-3-hydroksitetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriim, 10 6-[4'-N-(N'-(S)-3-hydroksitetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]purimi, 6-[4'-N-(N'-3-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)spikaminyyliammo]puriini, 6-[4'-N-(N'-16-syaaniheksadekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 6-[4'-N-(N'-11 -fenoksiundekanoyyliglysyyli)spikaminyyliainino]puriini 6-[4'-N-(N'-12-fenoksidodekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, 15 6-[4'-N-(N'-(R)-2-asetoksiheksadekanoyyliglysyyH)spikaminyyliamino]puriini, 6-[4'-N-(N'-3-asetoksiheksadekanoyyliglysyyli)spikammyyliamino]puriini, 6-[4'-N-(N'-12-butaanisulfonyylioksidodekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]-puriini, 6-{4'-N-[N'-ll-(2'-tienyyli)-10-undekynoyyliglysyyli]spikaniinyyliainino}purimi 20 6-{4'-N-[N'-l l-(3'-tienyyli)-10-undekynoyyliglysyyli]spikaminyyliamino}puriini 6-{4'-N-[N'-ll-(3,-furyyli)-10-undekynoyyliglysyyli]spikaminyyliamino}puriini.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen val-niistämiseksi, tunnettu siitä, että valmistettava spikamysiinijohdannainen on valittu 25 ryhmästä, johon kuuluvat seuraavat yhdisteet ja niiden suolat: I I 4 6-[4'-N-(N'-tridekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, *; ’ 6-[4'-N-(N'-1 l-metyylidodekanoyyIiglysyyli)spikaminyyliamino]puriini • · · '·['· 6-[4'-N-(N'-cis-9-tetradekenoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriim : 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-dodekadienoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 30 6-[4,-N-(N'-trans,trans-2,4-tridekadienoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-tetradekadienoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puiimi, ·’**' 6-[4'-N-(N'-12-bromidodekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, . 6-[4'-N-(N'-13-bromitridekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, I,, ‘ 6-[4'-N-(N'- 14-bromitetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, ' *:' 35 6-[4'-N-(N'-13 -klooritridekanoyyligly syyli)spikaminyyliamino]puriini 6-[4'-N-(N'- 14-klooritetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 6-[4'-N-(N'-14-fluoritetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 144 105815 6-[4'-N-(N'-15-fluoripentadekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini 6-[4'-N-(N'-2,2-difhioritetradekanoyyliglysyyli)spikaminyyliamino]puriini, 6-[4'-N-(N,-(S)-2-hydroksiheksadekanoyyliglysyyli)spikammyyliamino]puriini, 6-{4'-N-[N'-ll-(3'-tienyyli)-10-undekynoyyliglysyyli]spikaminyyliamino}puriini 5 6-{4'-N-[N'-l l-(3'-fuiyyli)-10-undekynoyyliglysyyli]spikaminyyliamino}puriini.
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen tai sen suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistettava yhdiste on valittu ryhmästä, johon kuuluvat 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-dodekadienoyyliglysyyli)spikami- 10 nyyliaminojpuriini ja 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-tetradekadienoyyliglysyyli)spika-minyyliaminojpuriini.
13. Patenttivaatimuksen 11 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen tai sen suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistettava yhdiste on valittu ryhmästä, johon kuuluu 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-tetradekadienoyyliglysyyli)spikaminyy- 15 liamino]puriini ja sen suola.
14. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä spikamysiinijohdannaisen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistettava yhdiste on valittu ryhmästä, johon kuuluu 6-[4'-N-(N'-trans,trans-2,4-tetradekadienoyyliglysyyli)septaminyyliamino]purii-ni ja sen suola.
20 Patentkrav
FI923170A 1991-07-12 1992-07-09 Spikamysiinijohdannaisten valmistusmenetelmä ja siinä käytettävät välituotteet FI105815B (fi)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP19890391 1991-07-12
JP19890391 1991-07-12
JP32684591 1991-11-15
JP32684591 1991-11-15
JP11066592 1992-04-03
JP4110665A JP2783722B2 (ja) 1991-07-12 1992-04-03 スピカマイシン誘導体およびそれを含む抗腫瘍剤

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI923170A0 FI923170A0 (fi) 1992-07-09
FI923170A FI923170A (fi) 1993-01-13
FI105815B true FI105815B (fi) 2000-10-13

Family

ID=27311786

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI923170A FI105815B (fi) 1991-07-12 1992-07-09 Spikamysiinijohdannaisten valmistusmenetelmä ja siinä käytettävät välituotteet

Country Status (16)

Country Link
US (2) US5461036A (fi)
EP (1) EP0525479B1 (fi)
JP (1) JP2783722B2 (fi)
KR (1) KR100253050B1 (fi)
AT (1) ATE159948T1 (fi)
AU (1) AU657551B2 (fi)
CA (1) CA2073567C (fi)
DE (1) DE69222992T2 (fi)
DK (1) DK0525479T3 (fi)
ES (1) ES2111019T3 (fi)
FI (1) FI105815B (fi)
GR (1) GR3025293T3 (fi)
HK (1) HK1001729A1 (fi)
HU (1) HU221808B1 (fi)
NO (1) NO178500C (fi)
SG (1) SG52704A1 (fi)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7017208B2 (en) * 1995-08-04 2006-03-28 Hill-Rom Services, Inc. Hospital bed
US5905069A (en) * 1998-01-26 1999-05-18 The General Hospital Corporation Methods of decreasing or preventing pain using spicamycin or derivatives thereof
WO2000043366A1 (fr) * 1999-01-22 2000-07-27 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Derives de quinoline et derives de quinazoline
EP1328236B1 (en) 2000-09-20 2011-04-06 The General Hospital Corporation Methods of decreasing or preventing pain using spicamycin derivatives
US20060074014A1 (en) * 2002-11-18 2006-04-06 Vicuron Pharmaceuticals Inc. Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
US20050130909A1 (en) * 2002-11-18 2005-06-16 Luigi Colombo Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
JP2007505123A (ja) * 2003-09-11 2007-03-08 インヴィスタ テクノロジー エスアエルエル 不飽和カルボン酸誘導体のヒドロシアン化方法
JP4608651B2 (ja) * 2004-06-24 2011-01-12 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 抗ガン作用を有する化合物、その製造方法及び抗ガン剤
US8119829B2 (en) * 2004-09-08 2012-02-21 Invista North America S.A.R.L. Process of hydrocyanation of unsaturated carboxylic acid derivatives
US9248098B2 (en) * 2008-10-10 2016-02-02 Dara Biosciences, Inc. Treating or preventing pain using spicamycin derivatives
EP2597082A1 (de) 2011-11-24 2013-05-29 Symrise AG Verbindungen zur Maskierung eines unangenehmen Geschmacks
MX2015001648A (es) 2012-08-09 2015-10-14 Dara Biosciences Inc Composiciones que comprenden derivados de espicamicina y metodos de uso de los mismos.
WO2015061481A1 (en) 2013-10-23 2015-04-30 Dara Biosciences, Inc. Methods of treating liquid tumors using compositions comprising spicamycin derivatives
CN110386874B (zh) * 2018-04-16 2022-10-04 湖北金鹤化工有限公司 一种12-酮基硬脂酸酯及其制备方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3264195A (en) * 1963-07-24 1966-08-02 Squibb & Sons Inc Process for the preparation of septacidin and derivatives
US3155647A (en) 1963-07-24 1964-11-03 Olin Mathieson Septaciding and derivatives thereof
US4086416A (en) * 1977-05-17 1978-04-25 Stanford Research Institute Septacidin analogs
JPS59161389A (ja) * 1983-03-07 1984-09-12 Eisai Co Ltd ７−カルボキシメトキシフエニルアセトアミドセフエム誘導体，その製造法およびそれからなる抗菌剤
JPS59161396A (ja) * 1983-03-04 1984-09-12 Kirin Brewery Co Ltd 新規抗生物質スピカマイシン
US4975434A (en) * 1986-05-27 1990-12-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Antiviral and anticancer cyclopentenyl cytosine
WO1990015811A1 (en) 1989-06-16 1990-12-27 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Spicamycin x and its use

Also Published As

Publication number Publication date
FI923170A0 (fi) 1992-07-09
ATE159948T1 (de) 1997-11-15
JPH05186494A (ja) 1993-07-27
AU657551B2 (en) 1995-03-16
DE69222992D1 (de) 1997-12-11
HU221808B1 (hu) 2003-01-28
NO922674D0 (no) 1992-07-08
SG52704A1 (en) 1998-09-28
CA2073567C (en) 1998-05-05
HUT61773A (en) 1993-03-01
NO178500B (no) 1996-01-02
HU9202285D0 (en) 1992-10-28
FI923170A (fi) 1993-01-13
NO922674L (no) 1993-01-13
CA2073567A1 (en) 1993-01-13
JP2783722B2 (ja) 1998-08-06
NO178500C (no) 1996-04-10
GR3025293T3 (en) 1998-02-27
DE69222992T2 (de) 1998-03-05
EP0525479A1 (en) 1993-02-03
HK1001729A1 (en) 1998-07-03
DK0525479T3 (da) 1998-04-20
US5631238A (en) 1997-05-20
KR930002370A (ko) 1993-02-23
US5461036A (en) 1995-10-24
AU1960092A (en) 1993-01-14
ES2111019T3 (es) 1998-03-01
EP0525479B1 (en) 1997-11-05
KR100253050B1 (ko) 2000-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100483256B1 (ko) 젬시타빈 유도체
FI105815B (fi) Spikamysiinijohdannaisten valmistusmenetelmä ja siinä käytettävät välituotteet
US4658058A (en) 11-O-methylspergualin
US4369178A (en) Glucosamine peptide derivatives, their production and use
EP0354583A1 (en) DC-88A derivatives
US4831038A (en) Vinblastine derivatives and pharmaceutical composition containing them
CA1335892C (en) Saccharide derivatives
US5696154A (en) Brefeldin A derivatives and their utility in the treatment of cancer
EP0393923A1 (en) 6-Fluoroshikimic acid derivatives
EP0588317A1 (en) Uridine derivative and process for preparing the same
US4362866A (en) Aprosamine derivatives
US4087603A (en) Antifungal antibiotics
EP3634974B1 (en) Tunicamycin analogues
KR920002143B1 (ko) 5-치환 우리딘 유도체 및 그의 제조 중간체
EP0416605A1 (en) Novel oxetanocin derivatives and their salts as well as use thereof
GB2321454A (en) Gemcitabine esters and amides
WO1991004268A1 (en) [N-(η-GLUTAMYL)GLYCYL]ALANINE DERIVATIVES
TAKAMURA et al. Syntheses and antitumor activities of N6, N6-dimethyladenosine carboxylate analogues
WO1994012512A1 (en) Glucosylglucoside derivative
JPH0873489A (ja) スピカマイシン誘導体およびそれを含む抗腫瘍剤
JPH05208979A (ja) Ｄｃ１１３誘導体

Legal Events

Date Code Title Description
PC Transfer of assignment of patent

Owner name: KIRIN PHARMA KABUSHIKI KAISHA

Free format text: KIRIN PHARMA KABUSHIKI KAISHA

PC Transfer of assignment of patent

Owner name: KYOWA HAKKO KIRIN CO., LTD.

Free format text: KYOWA HAKKO KIRIN CO., LTD.