ES2895066T3 - Derivados de 1,3-dihidroxi-fenilo útiles como inmunomoduladores - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de fórmula (I): **(Ver fórmula)** o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde m es 1; R1 es -(CH2)nAr; en donde n is 1; Ar es piridinilo opcionalmente sustituido con ciano; R2 es **(Ver fórmula)** en donde Rn es hidrógeno; Y es metilo; R5 es un heterociclo insaturado, monocíclico o bicíclio que contiene de cinco a diez átomos, en donde de uno a cuatro de esos átomos se seleccionan independientemente de entre nitrógeno y azufre; y en donde el grupo monocíclico o bicíclico está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes independientemente seleccionados de entre alquilo C1-C3, ciano, formilo, halo, haloalcoxi C1-C3, haloalquilo C1-C3, hidroxi, oxo, -L- (CH2)m'NRcRd, -L-(CH2)m'OH, **(Ver fórmula)** y **(Ver fórmula)** en donde L se selecciona de entre un enlace, -CH2- y -O-; m' es 1, 2, 3 o 4; siempre que cuando m' es 1, L es un enlace que está unido al resto molecular precursor a través de un átomo de carbono; t es 0 o 1; z es 2 o 3; Rz es hidroxi; y Rc y Rd son cada uno metilo; y R6 es hidrógeno; R3 es halo; R4 se selecciona de entre -(CH2)pCHO, -(CH2)n'OH y -(CH2)n'NRqR8, p es 0, 1, 2 o 3; n' es 1, 2, 3 o 4; Rq se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C4 y bencilo; y R8 se selecciona de entre **(Ver fórmula)** y **(Ver fórmula)** en donde s es 0, 1 o 2; z es 1, 2 o 3; Rj se selecciona de entre alquilo C1-C3, alquilsulfonil C1-C3alquilo C1-C3, alquilsulfoxil C1-C3alquilo C1- C3 y alquilsulfanil C1-C3alquilo C1-C3; Rw es -CO2H o -CONH2, R9 se selecciona de entre hidrógeno, bencilo y metilo; cada R9' se selecciona independientemente de entre hidrógeno, etilo y metilo; R10 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C3 y bencilo; y R11 se selecciona de entre alquenilo C2-C4 y alquilo C1-C4; o R8 y Rq, juntos con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo seleccionado de entre **(Ver fórmula)** y **(Ver fórmula)** en donde s es 0, 1 o 2; z es 1, 2 o 3; Q' se selecciona de entre CHR13', S, O, -N(CH2)2OH y NCH3; R12 se selecciona de entre hidrógeno, -CO2H, hidroxialquilo C1-C4, y -C(O)NHSO2R16; en donde R16 se selecciona de entre trifluorometilo, ciclopropilo, alquilo C1-C4, dimetilamino, 4-metilpiperazinilo e imidazolilo sustituidos con un grupo metilo; R13 se selecciona de entre hidrógeno, hidroxialquilo C1-C4 y -CO2H; R13' se selecciona de entre hidrógeno, hidroxialquilo C1-C3 y -CO2H; y R14 se selecciona de entre alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C3, carboxi, halo, hidroxi, hidroxialquilo C1-C4 y -NRc'Rd'; en donde Rc' y Rd' se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alcoxicarbonilo C1-C4 y alquilcarbonilo C1-C4.

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de 1,3-dihidroxi-fenilo útiles como inmunomoduladores
La presente divulgación se refiere, en general, a compuestos útiles como inhibidores de las interacciones proteínaproteína PD-1/PD-L1 y CD80/PD-L1. En la presente se proporcionan compuestos, composiciones que comprenden estos compuestos y métodos de uso. La divulgación también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de conformidad con la divulgación que son útiles para el tratamiento de diversas enfermedades, que incluyen cáncer y enfermedades infecciosas.
Se demostró que la muerte programada-1 (CD279), un receptor en linfocitos T, inhibe señales de activación del receptor de linfocitos T cuando está unido por cualquiera de sus ligandos, ligando de muerte programada 1 (PD-L1, CD274, B7-H1) o PD-L2 (CD273, B7-DC) (Sharpe et al., Nat. Imm. 2007). Cuando los linfocitos T que expresan PD-1 entran en contacto con células que expresan sus ligandos, se reducen las actividades funcionales en respuesta a los estímulos antigénicos, incluida la proliferación, la secreción de citocina y la actividad citolítica. Las interacciones PD-1/PD-ligando regulan de manera descendente las respuestas inmunitarias durante la resolución de una infección o un tumor, o durante el desarrollo de la auto-tolerancia inmunológica (Keir Me, Butte MJ, Freeman GJ, et al. PD-1 and its ligands in tolerance and immunity. Annu. Rev. Immunol. 2008, 26 Epub). La estimulación crónica de antígenos, tal como la que ocurre durante la enfermedad tumoral o las infecciones crónicas, da como resultado linfocitos T que expresan niveles elevados de PD-1 y son disfuncionales con respecto a la actividad hacia el antígeno crónico (reseña en Kim and Ahmed, Curr Opin Imm, 2010). Esto se denomina "agotamiento de linfocitos T". Los linfocitos B también muestran inhibición y "agotamiento" de PD-1/PD-ligando.
También se demostró que PD-L1 interactúa con CD80 (Butte MJ et al, Immunity; 27:111-122 (2007)). Se demostró que la interacción de células inmunitarias que expresan PD-L1/CD80 es inhibidora. El bloqueo de esta interacción demostró la inactivación de esta interacción inhibidora (Paterson AM, et al., J Immunol., 187:1097-1105 (2011); Yang J, et al. J Immunol. Aug 1; 187(3):1113-9 (2011)).
El bloqueo de la interacción PD-1/PD-L1 por medio del uso de anticuerpos dirigidos a PD-L1 demostró la recuperación y el aumento de la activación de linfocitos T en muchos sistemas. Los pacientes que presentan cáncer avanzado se benefician de la terapia con un anticuerpo monoclonal dirigido a PD-L1 (Brahmer et al., New Engl J Med 2012). Los modelos de tumores preclínicos de animales dieron cuenta de que el bloqueo de la trayectoria PD-1/PD-L1 por parte de anticuerpos monoclonales puede mejorar la respuesta inmunitaria y dar como resultado una respuesta inmunitaria a diversos tumores histológicos (Dong H, Chen L. B7-H1 pathway and its role in the Evasion of tumor immunity. J Mol Med. 2003; 81(5):281-287; Dong H, Strome SE, Salamoa d R, et al. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion. Nat Med. 2002; 8(8):793-800).
La interferencia con la interacción PD-1/PD-L1 también demostró actividad de linfocitos T mejorada en los sistemas de infección crónicos. La infección por el virus de la coriomeningitis linfocítica crónica de ratones también demuestra una depuración de virus mejorada e inmunidad recuperada con bloqueo de PD-L1 (Barber DL, Wherry EJ, Masopust D, et al. Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection. Nature. 2006; 439(7077):682-687). Los ratones humanizados infectados por VIH-1 mostraron una mejora de la protección contra la viremia y una disminución viral de linfocitos T CD4+ (Palmer et al., J. Immunol 2013). El bloqueo de PD-1/PD-L1 a través de anticuerpos monoclonales dirigidos a PD-L1 puede restaurar la funcionalidad específica del antígeno in vitro a los linfocitos T de pacientes con VIH (Day, Nature 2006; Petrovas, J. Exp. Med. 2006; Trautman, Nature Med. 2006; D'Souza, J.Immunol. 2007; Zhang, Blood 2007; Kaufmann, Nature Imm. 2007; Kasu, J. Immunol. 2010; Porichis, Blood 2011), pacientes con HCV [Golden-Mason, J. Virol. 2007; Jeung, J. Leuk. Biol. 2007; Urbani, J. Hepatol. 2008; Nakamoto, PLoS Path. 2009; Nakamoto, Gastroenterology 2008] o pacientes con HBV (Boni, J. Virol. 2007; Fisicaro, Gastro. 2010; Fisicaro et al., Gastroenterology, 2012; Boni et al., Gastro., 2012; Penna et al., JHep, 2012; Raziorrough, Hepatology 2009; Liang, World J Gastro. 2010; Zhang, Gastro. 2008).
El bloqueo de la interacción PD-L1/CD80 también demostró que estimula la inmunidad (Yang J., et al., J Immunol. Aug 1; 187(3):1113-9 (2011)). Se demostró la mejora de la estimulación inmunitaria que resulta del bloqueo de la interacción PD-L1/CD80 a través de la combinación con el bloqueo de otras interacciones PD-1/PD-L1 o PD-1/PD-L2.
Se supone que las alteraciones en los fenotipos de células inmunitarias son un factor importante en el choque séptico (Hotchkiss, et al., Nat Rev Immunol (2013)). Estos incluyen mayores niveles de PD-1 y PD-L1 y apoptosis de linfocitos T (Guignant, et al., Crit. Care (2011)). Los anticuerpos dirigidos a PD-L1 pueden reducir el nivel de apoptosis de células inmunitarias (Zhang et al, Crit Care (2011)). Además, los ratones que carecen de expresión de PD-1 son más resistentes a los síntomas de choque séptico que los ratones de tipo silvestre (Yang J., et al. J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)). Los estudios revelaron que el bloqueo de las interacciones de PD-L1 por medio de anticuerpos puede deprimir respuestas inmunitarias inadecuadas y mejorar los síntomas de la enfermedad.
Además de mejorar las respuestas inmunológicas a los antígenos crónicos, el bloqueo de la trayectoria de PD-1/PD-L1 también demostró mejorar las respuestas a la vacunación, incluida la vacunación terapéutica en el contexto de infección crónica (S. J. Ha, S. N. Mueller, E. J. Wherry et al., "Enhancing therapeutic vaccination by blocking PD-1mediated inhibitory signals during chronic infection", The Journal of Experimental Medicine, vol. 205, n.° 3, pág. 543­ 555, 2008.; A. C. Finnefrock, A. Tang, F. Li et al., "PD-1 blockade in rhesus macaques: impact on chronic infection and prophylactic vaccination", The Journal of Immunology, vol. 182, n.° 2, pág.980-987, 2009; M. -Y. Song, S. -H. Park, H. J. Nam, D. -H. Choi, and Y. -C. Sung, "Enhancement of vaccine-induced primary and memory CD8+ t-cell responses by soluble PD-1", The Journal of Immunotherapy, vol. 34, n.° 3, pág. 297-306, 20l1).
La trayectoria de PD-1 es una molécula inhibidora clave en el agotamiento de linfocitos T, que surge de la estimulación de antígenos crónica durante las infecciones crónicas y la enfermedad tumoral. El bloqueo de la interacción de PD-1/PD-L1 mediante el direccionamiento de la proteína PD-L1 demostró recuperar las funciones inmunitarias de linfocitos T específicos del antígeno in vitro e in vivo, incluidas las respuestas mejoradas a la vacunación ante una infección tumoral o crónica.
En consecuencia, se prefieren los agentes que bloquean la interacción de PD-L1 con PD-1 o CD80.
Los documentos WO 2015/160641 y WO 2015/034820 describen compuestos que son inhibidores útiles de las interacciones PD-1/PD-L1 y CD80/PD-L1. El documento EP2011788 describe compuestos de oxadiazolidindiona como agonistas de GPR40.
Los solicitantes descubrieron compuestos potentes que tienen actividad como inhibidores de la interacción de PD-L1 con PD-1 y CD80 y, de este modo, pueden ser útiles para la administración terapéutica para mejorar la inmunidad contra tipos de cáncer o las infecciones, por ejemplo, la vacuna terapéutica. Estos compuestos se proporcionan por ser de utilidad como compuestos farmacéuticos con valores deseables de estabilidad, biodisponibilidad, índice terapéutico y toxicidad, que son importantes para su accesibilidad a fármacos.
La presente divulgación también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la Fórmula (I), y/o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente divulgación también proporciona un método para tratar una enfermedad o trastorno asociado a la actividad de PD-L1, que incluye su interacción con otras proteínas, tales como PD-1 y B7-1(CD80); el método comprende administrar a un paciente que lo necesite un compuesto de la Fórmula (I) y/o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. La presente divulgación también proporciona procesos e intermedios para preparar los compuestos de la Fórmula (I) y/o sales de los mismos.
La presente divulgación también proporciona un compuesto de la Fórmula (I) y/o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usar en la terapia.
La presente divulgación también proporciona el uso de los compuestos de la Fórmula (I) y/o las sales de los mismos farmacéuticamente aceptables, para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de afecciones relacionadas con PD-L1, tales como tipos de cáncer y enfermedades infecciosas.
Los compuestos de la Fórmula (I) y las composiciones que comprenden los compuestos de la Fórmula (I) se pueden usar para el tratamiento, la prevención o la cura de diversas enfermedades infecciosas y tipos de cáncer. Las composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos son útiles para el tratamiento, la prevención o la ralentización de la progresión de enfermedades o trastornos en varias áreas terapéuticas, tales como cáncer y enfermedades infecciosas.
Estas y otras características de la divulgación se explicarán en más detalle a lo largo de la divulgación.
Se reivindican compuestos de fórmula (I) como se definen en las reivindicaciones. A continuación se describen varios aspectos y realizaciones de la divulgación que pueden incluir o no todos o algunos de los compuestos reivindicados de fórmula (I) como se define en las reivindicaciones.
En un primer aspecto, la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) como se define a continuación, que incluye los compuestos reivindicados de fórmula (I) como se definen en las reivindicaciones:
Figure imgf000003_0001
o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde:
m es 0, 1, o 2;
R1 se selecciona de entre hidrógeno, haloalquilo C1-C4, hidroxialquilo C1-C4, -(CH2)nX, y-(CH 2)nAr; en donde
n es 1, 2, 3, o 4;
X se selecciona de entre hidrógeno, -CH3, -CF3, alcoxi C1-C4, -N(CH3)2, cicloalquilo C3-C6, CN, -CO2Rg, -C(O)NH2,
Figure imgf000004_0001
morfolinilo, tetrahidropiranilo, pirrolidonilo opcionalmente sustituido con un grupo hidroxi, y piperidinilo opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente de entre alquilo C1-C4, carboxi, hidroxi, y alcoxicarbonilo C1-C4; en donde Rg se selecciona de entre hidrógeno y alquilo C1-C4;
Ar se selecciona de entre benzodioxanilo, indazolilo, isoquinolinilo, isoxazolilo, naftilo, oxadiazolilo, fenilo, piridinilo, pirimidinilo, y quinolinilo; en donde cada anillo es opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, o 4 sustituyentes seleccionados independientemente de entre alcoxi C1-C4, alcoxicarbonilo C1-C4, alcoxicarbonilamino C1-C4, alquilo C1-C4, alquilcarbonilo C1-C4, alquilsulfonilo C1-C4, amido, amidoalquilo C1-C4, -(CH2)qCO2alquilo C1-C4, -(CH2)qOH, carboxi, ciano, formilo, halo, haloalquilo C1-C4, haloalcoxi C1-C4, nitro, fenilo opcionalmente sustituido con un grupo ciano, feniloxi opcionalmente sustituido con un grupo halo, fenilcarbonilo, pirrol, y tetrahidropirano, en donde q es 0, 1, 2, 3, o 4;
R2 se selecciona de entre
Figure imgf000004_0002
en donde
Rn se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C3, halo, y haloalquilo C1-C3;
Y se selecciona de entre hidrógeno, alcoxi C1-C3, alquilo C1-C3, ciano, y halo;
R5 es fenilo o heterociclo insaturado monocíclico o bicíclico que contiene cinco a diez átomos en donde uno a cuatro de estos átomos se seleccionan independientemente de entre nitrógeno, oxígeno y azufre; y en donde el fenilo y el grupo monocíclico o bicíclico es opcionalmente sustituido con uno, dos, tres, cuatro, o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de entre alquilo C1-C3, ciano, formilo, halo, haloalcoxi C1-C3, haloalquilo C1-C3, hidroxi, oxo,-L-(CH2)mNRcRd, -L-(CH2)mOH,
Figure imgf000005_0001
en donde
L se selecciona de entre un enlace, -CH2, -NHC(O)-, -C(O)NH-, y -O-; siempre que L sea -CH2- cuando está unido a la porción molecular precursora a través de un átomo de nitrógeno en el heterociclo;
m' es 1, 2, 3, o 4; siempre que cuando m' es 1, L es un enlace que está unido a la porción molecular precursora a través de un átomo de carbono;
t es 0, 1, 2, o 3;
z es 1, 2, o 3;
cada Rz se selecciona independientemente de entre alcoxi C1-C4, alcoxicarbonilo C1-C4, alcoxicarbonil C1-C4 alquilo C1-C4, alquilo C1-C4, alquilamido C1-C4, alquilamino C1-C4, alquilcarbonilo C1-C4, amido, carboxi, carboxialquilo C1-C4, ciano, di(alquilo C1-C4)amido, di(alquilo C1-C4)amino, halo, haloalcoxi C1-C4, haloalquilo
C1-C4, hidroxi, hidroxialquilo C1-C4, -NRcRd, (NRcRd)alquilo C1-C4, -NReRf, (NReRf)alquilo C1-C4, fenilo, y fenilalquilo C1-C4; en donde Re y Rf, junto con el átomo al cual están unidos, forman un anillo seleccionado de entre morfolina y
Figure imgf000005_0002
Rc y Rd se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alquenilcarbonilo C2-C4, alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C6, alquilcarbonilo C1-C4, amidoalquilo C1-C4, aminoalquilo C1-C4, arilalquilo C1-C4, C10, (cicloalquil C3-C1ü)alquilo C1-C4, haloalquilcarbonilo C1-C4, heteroarilalquilo C1-C4, e hidroxialquilo C1-C4;
en donde la parte alquilo del amidoalquilo C1-C4, el aminoalquilo C1-C4, el arilalquilo C1-C4, el (cicloalquil C3-C10)alquilo C1-C4, y el heteroarilalquilo C1-C4 es opcionalmente sustituida con uno o dos grupos seleccionados independientemente de entre carboxi e hidroxi; en donde la parte alquilo del hidroxialquilo C1-C4 es opcionalmente sustituida con uno o dos grupos seleccionados independientemente de entre carboxi e hidroxi;
y en donde la parte arilo del arilalquilo C1-C4, el cicloalquilo C3-C10, la parte cicloalquilo del (cicloalquil C3-C10)alquilo C1-C4 y la parte heteroarilo del heteroarilalquilo C1-C4 son cada una opcionalmente sustituidas con uno, dos, o tres grupos seleccionados independientemente de entre alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C4, y halo;
Q se selecciona de entre S, O, y -NRp; en donde Rp se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C4, alquilamido
C1-C4 alquilo C1-C4, alquilamino C1-C4 alquilo C1-C4, amidoalquilo C1-C4, aminoalquilo C1-C4, di(alquilo C1-C4)amidoalquilo C1-C4, di(alquilo C1-C4)aminoalquilo C1-C3, hidroxialquilo C1-C4, piridinilo, y fenilo opcionalmente sustituido con metoxi;
siempre que cuando R2 es
entonces R5 es distinto de fenilo; y
R6 es hidrógeno, o, R5 y R6, junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un anillo insaturado de cinco o seis elementos que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente de entre nitrógeno, oxígeno, y azufre; en donde el anillo es opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de entre alquilo C1-C3, ciano, formilo, halo, haloalquilo C1-C3, hidroxi, oxo, -L-(CH2)nNRcRd, -L-(CH2)nOH,
cada R3 se selecciona independientemente de entre alquenilo C2-C4, alcoxi C1-C4, alquilo C1-C4, ciano, halo, y haloalquilo C1-C4; y
R4 se selecciona de entre -(CH2VCHO, -(CH2VOH, y -(CH2)n’NRqR8, en donde
p es 0, 1, 2, o 3;
n’ es 1, 2, 3, o 4;
Rq se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C4, y bencilo; y
R8 se selecciona de entre
Figure imgf000006_0001
en donde:
s es 0, 1, o 2;
z es 1, 2, o 3;
Rj se selecciona de entre alquilo C1-C3, alquilsulfonil C1-C3 alquilo C1-C3, alquilsulfoxil C1-C3 alquilo C1-C3, y alquilsulfanil C1-C3 alquilo C1-C3;
Rw es -CO2H o -CONH2,
R9 se selecciona de entre hidrógeno, bencilo, y metilo;
cada R9’ se selecciona independientemente de entre hidrógeno, etilo, y metilo;
R10 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C3, y bencilo; y
R11 se selecciona de entre alquenilo C2-C4 y alquilo C1-C4; o
R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo seleccionado de entre
Figure imgf000006_0002
en donde
s es 0, 1, o 2;
z es 1, 2, o 3;
Q’ se selecciona de entre CHR13’, S, O, -N(CH2)2OH, y NCH3;
R12 se selecciona de entre hidrógeno, -CO2H, hidroxialquilo C1-C4, y -C(O)NHSO2R16; en donde R16 se selecciona de entre trifluorometilo, ciclopropilo, alquilo C1-C4, dimetilamino, 4-metilpiperazinilo, e imidazolilo sustituido con un grupo metilo;
R13 se selecciona de entre hidrógeno, hidroxialquilo C1-C4, y -CO2H;
R13’ se selecciona de entre hidrógeno, hidroxialquilo C1-C3, y -CO2H; y
R14 se selecciona de entre alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C3, carboxi, halo, hidroxi, hidroxialquilo C1-C4, y -NRc’Rd’; en donde Rc’ y Rd’ se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alcoxicarbonilo C1-C4, y alquilcarbonilo C1-C4.
En una primera modalidad del primer aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es -(CH2)nAr en donde n es 1 y Ares piridinilo opcionalmente sustituido con ciano.
En una segunda modalidad del primer aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es -(CH2)nAr en donde n es 1 y Ares piridinilo opcionalmente sustituido con ciano; m es 1; y R3 es halo.
En una tercera modalidad, la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es -(CH2)nAr en donde n es 1 y Ar es piridinilo opcionalmente sustituido con ciano; m es 1; y R3 es halo y en donde R2 se selecciona de entre
Figure imgf000007_0001
en donde
Rn es hidrógeno;
Y es metilo;
R5 es fenilo o heterociclo insaturado monocíclico o bicíclico que contiene cinco a diez átomos en donde de uno a cuatro de estos átomos se seleccionan independientemente de entre nitrógeno, oxígeno y azufre; y en donde el fenilo y el grupo monocíclico o bicíclico es opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres sustituyentes seleccionados independientemente de entre alquilo C1-C3, ciano, formilo, halo, haloalcoxi C1-C3, haloalquilo C1-C3, hidroxi, oxo,-L-(CH2)m’NRcRd, -L-(CH2)m’OH,
Figure imgf000007_0002
en donde L se selecciona de entre un enlace, -CH2-, y -O-;
m’ es 1,2, 3, o 4; siempre que cuando m’ es 1, L es un enlace que está unido a la porción molecular precursora a través de un átomo de carbono;
t es 0 o 1;
z es 2 o 3;
Rz es hidroxi;
Rc y Rd son cada uno metilo; y
R6 es hidrógeno.
En una cuarta modalidad del primer aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es -(CH2)nAr en donde n es 1 y Ares piridinilo opcionalmente sustituido con ciano; m es 1; y R3 es halo; R4 se selecciona de entre -(CH2VCHO, -(CH2VOH, y -(CH2)nNRqR8, en donde
p es 0;
n’ es 1;
Rq es hidrógeno; y
R8 se selecciona de entre
Figure imgf000008_0001
s es 1.
z es 2;
R9 se selecciona de entre hidrógeno, bencilo, y metilo;
cada R9’ se selecciona independientemente de entre hidrógeno, etilo, y metilo; y
R10 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C3, y bencilo; o
R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo el cual es:
Figure imgf000008_0002
en donde
s es 0, 1, o 2;
z es 1, 2, o 3; y
R14 se selecciona de entre alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C3, carboxi, e hidroxi.
En un segundo aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I),
Figure imgf000008_0003
o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde:
m es 1;
R1 es -(CH2)nAr; en donde
n es 1,
Ar es piridinilo opcionalmente sustituido con ciano;
R2 se selecciona de entre
Figure imgf000008_0004
en donde
Rn es hidrógeno;
Y es alquilo C1-C3;
R5 es fenilo o heterociclo insaturado monocíclico o bicíclico que contiene cinco a diez átomos en donde uno a cuatro de estos átomos se seleccionan independientemente de entre nitrógeno, oxígeno y azufre; y en donde el fenilo y el grupo monocíclico o bicíclico es opcionalmente sustituido con uno, dos, tres, cuatro, o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de entre alquilo C1-C3, ciano, formulo, halo, haloalcoxi C1-C3, haloalquilo C1-C3, hidroxi, oxo, -L-(CH2)m'NRcRd, -L-(CH2)m'OH,
Figure imgf000009_0001
en donde
L se selecciona de entre un enlace, -CH2-, y -O-; siempre que L sea -CH2- cuando está unido a la porción molecular precursora a través de un átomo de nitrógeno en el heterociclo;
m' es 1,2, 3, o 4; siempre que cuando m' es 1, L es un enlace que está unido a la porción molecular precursora a través de un átomo de carbono;
t es 0, 1, 2, o 3;
z es 1, 2, o 3;
Rz es hidroxi;
Rc y Rd son alquilo C1-C6; siempre que cuando R2 es
Figure imgf000009_0002
entonces R5 es distinto de fenilo;
R6 es hidrógeno,
R3 es halo; y
R4 se selecciona de entre -(CH2VCHO, -(CH2)n'OH, y -(CH2)nNRqR8, en donde
p es 0;
n' es 1;
Rq es hidrógeno; y
R8 se selecciona de entre
Figure imgf000009_0003
s es 1;
z es 2;
R9 se selecciona de entre hidrógeno, bencilo, y metilo;
cada R9' se selecciona independientemente de entre hidrógeno, etilo, y metilo; y
R10 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C3, y bencilo;
o
R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo el cual es
Figure imgf000010_0001
en donde
s es 1o 2;
z es 2 o 3; y
R14 se selecciona de entre alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C3, carboxi, halo, e hidroxi.
En un tercer aspecto, la presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la Fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En un cuarto aspecto, la presente divulgación proporciona un método para mejorar, estimular, modular y/o aumentar la respuesta inmunitaria en un sujeto que lo necesita; el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. En una primera modalidad del cuarto aspecto, el método también comprende administrar un agente adicional antes, durante o después de la administración del compuesto de la Fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. En una segunda modalidad del cuarto aspecto, el agente adicional es un agente antimicrobiano, un agente antiviral, un agente que modifica la expresión génica, un agente citotóxico y/o un modificador de la respuesta inmunitaria.
En un quinto aspecto, la presente divulgación proporciona un método para inhibir el crecimiento, la proliferación o la metástasis de células cancerosas en un sujeto que lo necesita; el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. En una primera modalidad del quinto aspecto, el tipo de cáncer se selecciona de melanoma, carcinoma de células renales, cáncer pulmonar de células no microcíticas escamosas (NSCLC, por sus siglas en inglés), NSCLC de células no escamosas, cáncer colorrectal, cáncer de próstata resistente a la castración, cáncer de ovario, cáncer gástrico, carcinoma hepatocelular, carcinoma pancreático, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, carcinomas de esófago, tubo gastrointestinal y mama y cáncer hematológico.
En un sexto aspecto, la presente divulgación proporciona un método para tratar una enfermedad infecciosa en un sujeto que lo requiera, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. En una primera modalidad del sexto aspecto, la enfermedad infecciosa es causada por un virus. En una segunda modalidad del sexto aspecto, el virus se selecciona de VIH, Hepatitis A, Hepatitis B, Hepatitis C, Hepatitis D, virus del herpes, virus del papiloma e influenza.
En un séptimo aspecto, la presente divulgación proporciona un método para tratar el choque séptico en un sujeto que lo requiera, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
En un octavo aspecto, la presente divulgación proporciona un método para bloquear la interacción de PD-L1 con PD-1 y/o CD80 en un sujeto; dicho uso comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Los expertos en la materia pueden comprender más fácilmente las características y ventajas de la divulgación tras leer la siguiente descripción detallada. Debe apreciarse que ciertas características de la divulgación que son, por razones de claridad, descritas anteriormente y a continuación en el contexto de realizaciones separadas, también pueden combinarse para formar una única realización. Por el contrario, varias características de la divulgación que, por razones de brevedad, se describen en el contexto de una única realización, también se pueden combinar para formar subcombinaciones de los mismos. Las modalidades identificadas en el presente documento como ilustrativas o preferidas están destinadas a ser ilustrativas y no limitantes.
A menos que se especifique lo contrario en la presente, las referencias realizadas en singular también pueden incluir el plural. Por ejemplo, "un" y "uno(a)" se pueden referir a uno(a) o más.
Como se usa en el presente documento, la frase "compuesto(s) o sales del(los) mismo(s) farmacéuticamente aceptables" se refiere al menos a un compuesto, al menos una sal de los compuestos o una combinación de estos. Por ejemplo, los compuestos de la Fórmula (I) o las sales de los mismos farmacéuticamente aceptables incluyen un compuesto de la Fórmula (I); dos compuestos de la Formula (I); una sal de un compuesto de la Fórmula (I); un compuesto de la Fórmula (I) y una o más sales del compuesto de la Fórmula (I); y dos o más sales de un compuesto de la Fórmula (I).
A menos que se indique lo contrario, se asume que cualquier átomo con valencias no satisfechas tiene los suficientes átomos de hidrógeno para satisfacer las valencias.
A lo largo de toda la memoria descriptiva, el experto en la materia puede elegir los grupos y sus sustituyentes para proporcionar compuestos y porciones estables.
A continuación se enumeran las definiciones de varios términos que se usan para describir la presente divulgación. Estas definiciones se aplican a los términos como se usan en toda la divulgación (a menos que se limiten en momentos específicos), ya sea individualmente o como parte de un grupo más grande. Las definiciones que se establecen en la presente prevalecerán sobre las definiciones en cualquier otra patente, solicitud de patente y/o publicación de solicitud de patente incorporada en el presente documento por referencia.
El término "alquenilo C2-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo derivado a partir de un hidrocarburo de cadena recta o ramificada que contiene desde uno a cuatro átomos de carbono y uno o dos enlaces dobles.
El término "alquenilcarbonilo C2-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquenilo C2-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo carbonilo.
El término "alcoxi C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un átomo de oxígeno.
El término "alcoxicarbonilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxi C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo carbonilo.
El término "alcoxicarbonil C1-C4alquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxicarbonilo C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "alcoxicarbonilamino C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxicarbonilo C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo -NH.
El término "alquilo C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo derivado a partir de un hidrocarburo saturado de cadena recta o ramificada que contiene desde uno hasta tres átomos de carbono.
El término "alquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo derivado a partir de un hidrocarburo saturado de cadena recta o ramificada que contiene desde uno a cuatro átomos de carbono.
El término "alquilo C1-C6", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo derivado a partir de un hidrocarburo saturado de cadena recta o ramificada que contiene desde uno hasta seis átomos de carbono.
El término "alquilamido C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)NHR, en donde R es un grupo alquilo C1-C4.
El término "alquilamido C1-C4alquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilamido C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "alquilamino C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a - NHR, en donde R es un grupo alquilo C1-C4.
El término "alquilamino C1-C4alquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilamino C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "alquilcarbonilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo carbonilo.
El término "alquilsulfanilo C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C3 unido a la porción molecular precursora a través de un átomo de azufre.
El término "alquilsulfanil C1-C3alquilo C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un alquilsulfanilo C1-C3 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C3.
El término "alquilsulfonilo C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo sulfonilo.
El término "alquilsulfonilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo sulfonilo.
El término "alquilsulfonil Ci-C3alquilo C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilsulfonilo C1-C3 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C3.
El término "alquilsulfoxilo C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C3 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo sulfoxilo.
El término "alquilsulfoxil C1-C3alquilo C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilsulfoxilo C1-C3 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C3.
El término "amido", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)NH2.
El término "amidoalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo amido unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "aminoalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo amino unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "arilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo fenilo, o un sistema de anillo bicíclico fusionado en donde uno o ambos de los anillos es un grupo fenilo. Los sistemas de anillo bicíclico fusionado consisten en un grupo fenilo fusionado a un anillo carbocíclico aromático o no aromático de cuatro a seis elementos. Los grupos arilo de la presente invención pueden ser unidos a la porción molecular precursora a través de cualquier átomo de carbono sustituible en el grupo. Ejemplos representativos de grupos arilo incluyen, pero no se limitan a, indanilo, indenilo, naftilo, fenilo, y tetrahidronaftilo.
El término "arilalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilo unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "carbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)-.
El término "carboxi", como se usa en el presente documento, se refiere a -CO2H.
El término "carboxialquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo carboxi unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "ciano", como se usa en el presente documento, se refiere a -CN.
El término "cicloalquilo C3-C6", como se usa en el presente documento, se refiere a un sistema de anillo hidrocarburo, monocíclico, saturado que tiene tres a seis átomos de carbono y cero heteroátomos.
El término "cicloalquilo C3-C10", como se usa en el presente documento, se refiere a un sistema de anillo hidrocarburo, monocíclico, saturado que tiene tres a diez átomos de carbono y cero heteroátomos.
El término "(cicloalquil C3-C10)alquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo cicloalquilo C3-C10 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "di(alquil C1-C4)amido", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)NR2, en donde R es un grupo alquilo C1-C4. Los dos grupos R pueden ser los mismos o diferentes.
El término "di(alquil C1-C4)amidoalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo di(alquil C1-C4)amido unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "di(alquil C1-C4)amino", como se usa en el presente documento, se refiere a -NR2, en donde R es un grupo alquilo C1-C4. Los dos grupos R pueden ser los mismos o diferentes.
El término "di(alquil C1-C4)aminoalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo di(alquilo C1-C4)amino unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "dimetilamino", como se usa en el presente documento, se refiere a -N(CH3)2.
El término "formilo", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)H.
Los términos "halo" y "halógeno", como se usa en el presente documento, se refiere a F, Cl, Br, o I.
El término "haloalquilo C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C3 sustituido con uno, dos, o tres átomos de halógeno.
El término "haloalcoxi C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalquilo C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un átomo de oxígeno.
El término "haloalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C4 sustituido con uno, dos, o tres átomos de halógeno.
El término "haloalquilcarbonilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalquilo C1-C4 unido a la porción molecular precursora a través de un grupo carbonilo.
El término "heteroarilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un anillo aromático de cinco o seis elementos que contiene uno, dos, o tres heteroátomos seleccionados independientemente de entre nitrógeno, oxígeno, y azufre. El término "heteroarilo" también incluye grupos bicíclicos en los cuales el anillo heteroarilo es fusionado a otro grupo heteroarilo monocíclico o un grupo fenilo.
El término "heteroarilalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heteroarilo unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "hidroxi", como se usa en el presente documento, se refiere a -OH.
El término "hidroxialquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo hidroxi unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "(NRcRd)alquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo NRcRd unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "(NReRf)alquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo NRcRd unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "nitro", como se usa en el presente documento, se refiere a -NO2.
El término "oxo", como se usa en el presente documento, se refiere a =O.
El término "fenilalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo fenilo unido a la porción molecular precursora a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "fenilcarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo fenilo unido a la porción molecular precursora a través de un grupo carbonilo.
El término "feniloxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo fenilo unido a la porción molecular precursora a través de un átomo de oxígeno.
El término "sulfonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a -SO2-.
El término "sulfoxilo", como se usa en el presente documento, se refiere a -SO-.
La frase "farmacéuticamente aceptable" se emplea en la presente para referirse a compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del criterio médico sensato, son adecuados para usar en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin provocar excesiva toxicidad, irritación, reacción alérgica u otros problemas o complicaciones proporcionales con una relación riesgo/beneficio razonable.
Los compuestos de la Fórmula (I) pueden formar sales que también se encuentran dentro del alcance de la presente divulgación. A menos que se indique lo contrario, la referencia a un compuesto de la invención pretende incluir la referencia a una o más sales de aquel. El término "sal(es)" indica sales ácidas y/o básicas formadas con ácidos y bases orgánicas y/o inorgánicas. Además, el término "sal(es)" puede incluir zwitteriones (sales internas), por ejemplo, cuando un compuesto de la Fórmula (I) contiene una porción básica, tal como una amina o un anillo de piridina o imidazol, y una porción ácida, tal como un ácido carboxílico. Se prefieren sales farmacéuticamente aceptables (es decir, sales no tóxicas fisiológicamente aceptables), por ejemplo, sales de metal y de amina aceptables en donde el catión no contribuye considerablemente a la toxicidad ni a la actividad biológica de la sal. Sin embargo, otras sales también pueden ser útiles, por ejemplo, en las etapas de aislamiento o purificación que se pueden usar durante la preparación y, por ello, están contempladas dentro del alcance de la divulgación. Las sales de los compuestos de la Fórmula (I) se pueden formar, por ejemplo, mediante la reacción de un compuesto de la Fórmula (I) con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio, tal como uno en el que la sal precipita o en un medio acuoso, y la posterior liofilización.
Las sales de adición ácida de ejemplo incluyen acetatos (tales como los que se forman con ácido acético o ácido trihaloacético, por ejemplo, ácido trifluoroacético), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencensulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos, ciclopentanpropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etansulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, clorhidratos (formados con ácido clorhídrico), bromhidratos (formados con bromuro de hidrógeno), yodhidratos, maleatos (formados con ácido maleico), 2-hidroxietansulfonatos, lactatos, metansulfonatos (formados con ácido metansulfónico), 2-naftalensulfonatos, nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, 3-fenilpropionatos, fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos (tales como los que se forman con ácido sulfúrico), sulfonatos (tales como los que se mencionan en la presente), tartratos, tiocianatos, toluensulfonatos, tales como tosilatos, undecanoatos y similares.
Los ejemplos de sales básicas incluyen sales de amonio, sales de metales álcali, tales como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinotérreos, tales como sales de calcio y magnesio; sales de bario, cinc y aluminio; sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas), tales como trialquilaminas, por ejemplo, trietilamina, procaina, dibencilamina, N-bencil-p-fenetilamina, 1-efenamina, N,N-dibenciletilen-diamina, dehidroabietilamina, N-etilpiperidina, bencilamina, diciclohexilamina o aminas y sales similares farmacéuticamente aceptables con aminoácidos, tales como arginina, lisina y similares. Los grupos que contenían nitrógeno básico se pueden cuaternizar con agentes, tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo), y otros. Las sales preferidas incluyen sales de monoclorhidrato, hidrogensulfato, metansulfonato, fosfato o nitrato.
En el estado de la técnica, se conocen varias formas de profármacos, y estas se describen en:
a) The Practice of Medicinal Chemistry, Camille G. Wermuth et al., capítulo 31, (Academic Press, 1996);
b) Design of Prodrugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);
c) A Textbook of Drug Design and Development, P. Krogsgaard-Larson and H. Bundgaard, eds. Cap. 5, pág. 113 -191 (Harwood Academic Publishers, 1991); y
d) Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Bernard Testa and Joachim M. Mayer, (Wiley-VCH, 2003).
Además, los compuestos de la Fórmula (I), después de su preparación, se pueden aislar y purificar para obtener una composición que contiene una cantidad en peso igual o superior a 99 % de un compuesto de la Fórmula (I) ("sustancialmente puro"), que luego se usa o se formula como se describe en el presente documento. Los compuestos "sustancialmente puros" de la Fórmula (I) también se contemplan en la presente como parte de la presente divulgación.
"Compuesto estable" y "estructura estable" indican un compuesto que es suficientemente potente para sobrevivir al aislamiento en una mezcla de reacción en grado útil de pureza y la formulación en un agente terapéutico eficaz. La presente divulgación pretende comprender compuestos estables.
"Cantidad terapéuticamente efectiva" pretende incluir una cantidad de un compuesto de la presente divulgación solo o en una cantidad de la combinación de compuestos reivindicados, o una cantidad de un compuesto de la presente divulgación, en combinación con otros ingredientes activos eficaces para inhibir las interacciones proteína/proteína PD-1/PD-L1 y/o proteína/proteína CD80/PD-L1, o eficaces para el tratamiento o la prevención del cáncer o enfermedades infecciosas, tales como VIH o hepatitis B, hepatitis C y hepatitis D.
Como se usan en el presente documento, "tratar" o "tratamiento" abarcan el tratamiento de un estado patológico en un mamífero, en particular, un ser humano, e incluyen: (a) evitar que ocurra la enfermedad en un mamífero, en particular, cuando el mamífero tiene predisposición a la enfermedad, pero aún no se le ha diagnosticado; (b) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo y/o (c) aliviar la enfermedad, es decir, provocar la regresión de la enfermedad.
Los compuestos de la presente divulgación incluyen todos los isótopos de átomos que ocurren en estos compuestos. Los isótopos incluyen los átomos que tienen el mismo número atómico, pero diferentes números másicos. A modo de ejemplo general y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen deuterio (D) y tritio (T). Los isótopos de carbono incluyen 13C y 14C. Por lo general, los compuestos de la divulgación etiquetados de manera isotópica se pueden preparar mediante técnicas convencionales conocidas por las personas del oficio de nivel medio o mediante procesos análogos a los que se describen en la presente, usando un reactivo adecuado etiquetado de manera isotópica en lugar de un reactivo no etiquetado. Por ejemplo, metilo (-CH3) también incluye grupos metilo deuterados, tales como -CD3.
Los compuestos de acuerdo con la Fórmula (I) y/o las sales de los mismos farmacéuticamente aceptables pueden administrarse por cualquier medio adecuado para la afección que se desea tratar, que puede depender de la necesidad de un tratamiento específico del sitio o de la cantidad del compuesto de la Fórmula (I) que debe administrarse. Esta divulgación también abarca una clase de composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de la Fórmula (I) y/o sales del mismo farmacéuticamente aceptables; y uno o más vehículos y/o diluyentes y/o adyuvantes no tóxicos farmacéuticamente aceptables (denominados, en forma conjunta, materiales "portadores") y, si se desea, otros ingredientes activos. Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden administrar mediante cualquier trayectoria adecuada, preferentemente, en forma de una composición farmacéutica adaptada a la vía, y en una dosis eficaz para el tratamiento que se desea realizar. Los compuestos y las composiciones de la presente divulgación se pueden administrar, por ejemplo, por trayectoria oral, mucosa, rectal o parenteral, que incluye las vías intravascular, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular e intrasternal en formulaciones de dosis unitarias que contenían materiales portadores, adyuvantes y vehículos convencionales farmacéuticamente aceptables. Por ejemplo, el vehículo farmacéutico puede contener una mezcla de manitol o lactosa, y celulosa microcristalina. La mezcla puede contener componentes adicionales, tales como un agente lubricante, por ejemplo, estearato de magnesio, y un agente de desintegración, tal como crospovidona. La mezcla del vehículo puede colocarse en una cápsula de gelatina o puede tener forma de comprimido. La composición farmacéutica se puede administrar como una forma de dosis oral o una infusión, por ejemplo.
Para la administración oral, la composición farmacéutica puede ser, por ejemplo, en forma de unb comprimido, una cápsula, una cápsula líquida, una suspensión o un líquido. La composición farmacéutica se realiza, preferentemente, en forma de una dosis unitaria que contiene una cantidad particular del ingrediente activo. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede proporcionarse como un comprimido o una cápsula que comprende una cantidad del ingrediente activo en el intervalo de aproximadamente 0,1 a 1000 mg, preferentemente, de aproximadamente 0,25 a 250 mg y, con mayor preferencia, de aproximadamente 0,5 a 100 mg. Una dosis diaria adecuada para un ser humano u otro mamífero puede variar ampliamente, en función de la afección del paciente y de otros factores, pero puede determinarse usando métodos de rutina.
Cualquier composición farmacéutica contemplada en la presente se puede administrar, por ejemplo, por trayectoria oral mediante cualquier preparación oral adecuada y aceptable. Las preparaciones orales de ejemplo incluyen, entre otros, comprimidos, pastillas, caramelos, suspensiones acuosas y aceitosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras y blandas, cápsulas líquidas, jarabes y elíxires. Las composiciones farmacéuticas previstas para la administración oral se pueden preparar de acuerdo con cualquier método conocido en el estado de la técnica para la manufacturación de composiciones farmacéuticas previstas para la administración oral. Con el fin de proporcionar preparaciones farmacéuticas de sabor agradable, una composición farmacéutica de acuerdo con la divulgación puede contener al menos un agente seleccionado de agentes endulzantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, demulcentes, antioxidantes y agentes conservadores.
Por ejemplo, un comprimido puede prepararse mezclando al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo farmacéuticamente aceptable con al menos un excipiente no tóxico farmacéuticamente aceptable, adecuado para la manufactura de comprimidos. Los excipientes de ejemplo incluyen, entre otros, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio y fosfato de sodio; agentes de granulación y de desintegración, tales como celulosa microcristalina, croscarmelosa de sodio, almidón de maíz y ácido algínico; agentes aglutinantes, tales como almidón, gelatina, polivinil-pirrolidona y acacia; y agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, ácido esteárico y talco. Además, un comprimido puede no estar recubierto o puede estar recubierto mediante técnicas conocidas, a fin de disimular el sabor desagradable de un fármaco o retrasar la desintegración y la absorción del ingrediente activo en el tracto gastrointestinal y, de esa manera, prolongar los efectos del ingrediente activo durante más tiempo. Los ejemplos de materiales hidrosolubles para disimular el sabor incluyen, entre otros, hidroxipropil-metilcelulosa e hidroxipropil-celulosa. Los materiales retardadores de tiempo incluyen, entre otros, celulosa de etilo y acetato butirato de celulosa.
Las cápsulas de gelatina dura pueden prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo con al menos un diluyente sólido inerte, tal como carbonato de calcio, fosfato de calcio y caolín.
Las cápsulas de gelatina blanda pueden prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo farmacéuticamente aceptable con al menos un vehículo hidrosoluble, tal como polietilenglicol, y al menos un medio oleoso, tal como aceite de maní, parafina líquida y aceite de oliva.
Una suspensión acuosa puede prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo farmacéuticamente aceptable con al menos un excipiente adecuado para la manufactura de una solución acuosa. Los ejemplos de excipientes adecuados para la manufactura de una suspensión acuosa incluyen, entre otros, agentes de suspensión, tales como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, ácido algínico, polivinil-pirrolidona, goma de tragacanto y goma acacia; agentes dispersantes o humectantes, tales como un fosfátido natural, por ejemplo, lecitina; productos de condensación de óxido de alquileno con ácidos grasos, tales como estearato de polioxietileno; productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, tales como heptadecaetilen-oxicetanol; productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol, tales como monooleato de polioxietileno sorbitol; y productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como monooleato de polietileno sorbitán. Una suspensión acuosa también puede contener al menos un conservador, tal como p-hidroxibenzoato de n-propilo y etilo; al menos un agente colorante; al menos un agente saborizante; y/o al menos un agente endulzante, que incluye, entre otros, sacarosa, sacarina y aspartamo.
Las suspensiones aceitosas pueden prepararse, por ejemplo, suspendiendo al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo farmacéuticamente aceptable en un aceite vegetal, tal como aceite de arachis, aceite de oliva, aceite de sésamo y aceite de coco; o en un aceite mineral, tal como parafina líquida. Una suspensión oleosa también puede contener, al menos, un agente espesante, tal como cera de abejas, parafina sólida y alcohol de cetilo. A fin de obtener una suspensión oleosa de sabor agradable, puede agregarse, al menos, uno de los agentes endulzantes descritos anteriormente y/o, al menos, un agente saborizante a la suspensión oleosa. Una suspensión oleosa también puede contener al menos un conservador, que incluye, entre otros, un antioxidante, tal como hidroxianisol butilado y alfa-tocoferol.
Los polvos y gránulos dispersables pueden prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo farmacéuticamente aceptable con al menos un agente dispersante y/o humectante, al menos un agente de suspensión y/o al menos un conservador. Los agentes dispersantes adecuados, los agentes humectantes y los agentes de suspensión son como se ya se los describió anteriormente. Los conservadores de ejemplo incluyen, entre otros, antioxidantes, por ejemplo, ácido ascórbico. Además, los polvos y gránulos dispersables también pueden contener al menos un excipiente, que incluye, entre otros, agentes endulzantes; agentes saborizantes; y agentes colorantes.
Una emulsión de al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo farmacéuticamente aceptable puede prepararse, por ejemplo, como una emulsión de aceite en agua. La fase oleosa de las emulsiones que comprenden compuestos de la Fórmula (I) puede formarse con ingredientes conocidos en una forma conocida. La fase oleosa se puede proporcionar mediante, por ejemplo, un aceite vegetal, tal como aceite de oliva y aceite de arachis; un aceite mineral, tal como parafina liquida; y mezclas de estos. Si bien la fase puede comprender solo un emulsionante, puede comprender una mezcla de, al menos, un emulsionante con una grasa o con un aceite, o con ambos. Los agentes emulsionantes adecuados incluyen, entre otros, fosfátidos naturales, por ejemplo, lecitina de soja, ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como monooleato de sorbitán, y productos de condensación de ésteres parciales con óxido de etileno, tales como monooleato de polioxietileno sorbitán. Preferentemente, se incluye un emulsionante hidrófilo junto con un emulsionante lipofílico que actúa como estabilizador. También se prefiere incluir tanto un aceite como una grasa. Juntos, el emulsionante con o sin el estabilizador constituye la denominada cera emulsionante, y la cera junto con el aceite y la grasa constituyen la denominada base de ungüento emulsionante que forma la fase dispersa oleosa de las formulaciones cremosas. Una emulsión también puede contener un agente endulzante, un agente saborizante, un conservador y/o un antioxidante. Los emulgentes y los estabilizantes de emulsión adecuados para usar en la formulación de la presente divulgación incluyen Tween 60, Span 80, alcohol cetoestearilo, alcohol miristilo, monoestearato de glicerilo, laurilsulfato de sodio, diestearato de glicerilo solo o con una cera, u otros materiales conocidos en el estado de la técnica.
Los compuestos de la Fórmula (I) y/o al menos una sal de estos farmacéuticamente aceptable también se pueden administrar, por ejemplo, por trayectoria intravenosa, subcutánea y/o intramuscular mediante cualquier forma inyectable adecuada y farmacéuticamente aceptable. Las formas inyectables de ejemplo incluyen, entre otros, soluciones acuosas estériles que comprenden vehículos aceptables y disolventes, tales como agua, solución de Ringer y solución de cloruro de sodio isotónico; microemulsiones de aceite en agua estériles; y suspensiones acuosas u oleaginosas.
Las formulaciones para la administración parenteral pueden presentar la forma de soluciones o suspensiones inyectables isotónicas estériles acuosas o no acuosas. Estas soluciones y suspensiones pueden prepararse de polvos o gránulos estériles usando uno o más de los vehículos o diluyentes mencionados para usar en formulaciones para la administración oral o usando otros agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. Los compuestos pueden disolverse en agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de algodón, aceite de maní, aceite de sésamo, alcohol bencílico, cloruro de sodio, goma de tragacanto y/o diversos amortiguadores. En las artes farmacéuticas, se conocen ampliamente otros adyuvantes y modos de administración. El ingrediente activo también puede administrarse mediante inyección como una composición con vehículos adecuados, que incluyen solución salina, dextrosa o agua, o con ciclodextrina (es decir, Captisol), solubilización cosolvente (es decir, propilenglicol) o solubilización micelar (es decir, Tween 80).
La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente aceptable para la administración parenteral no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1,3-butandiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden usar, se encuentran agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, los aceites fijos estériles se emplean de manera convencional como un disolvente o medio de suspensión. Con este fin, puede emplearse cualquier aceite fijo blando, incluidos los monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos, tales como el ácido oleico, pueden usarse en la preparación de inyectables.
Una microemulsión de aceite en agua inyectable estéril se puede preparar, por ejemplo, mediante 1) la disolución de al menos un compuesto de la Fórmula (I) en una fase oleosa, tal como una mezcla de aceite de soja y lecitina; 2) la combinación de la Fórmula (I) que contiene la fase oleosa con una mezcla de glicerol y agua; y 3) el procesamiento de la combinación para formar una microemulsión.
Una suspensión acuosa u oleaginosa estéril se puede preparar de acuerdo con los métodos ya conocidos en el estado de la técnica. Por ejemplo, una solución o suspensión acuosa estéril puede prepararse con un diluyente o disolvente no tóxico aceptable para la administración parenteral, tal como 1,3-butandiol; y una suspensión oleaginosa estéril puede prepararse con un disolvente o medio de suspensión aceptable no tóxico estéril, tal como aceites fijos estériles, por ejemplo, monoglicéridos o diglicéridos sintéticos; y ácidos grasos, tales como ácido oleico.
Los materiales portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación incluyen, entre otros, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, sistemas autoemulsionantes de administración de fármacos (SEDDS, por sus siglas en inglés), tales como succinato de d-alfa-tocoferol polietilenglicol 1000, tensioactivos usados en formas de dosificación farmacéutica, tales como Tweens, aceite de ricino polietoxilado, tal como tensioactivo CREMOPHOR (BASF), u otras matrices de administración polimérica similares, proteínas séricas, tales como albúmina de suero humana, sustancias amortiguadoras, tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato de hidrógeno disódico, hidrogenfosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina. Las ciclodextrinas, tales como alfa, beta y gamma-ciclodextrina, o los derivados químicamente modificados, tales como hidroxialquilciclodextrinas, incluidas 2-y 3-hidroxipropil-ciclodextrinas, u otros derivados solubilizados, también pueden usarse de manera beneficiosa para mejorar la administración de compuestos de las fórmulas descritas en el presente documento.
Los compuestos farmacéuticamente activos de esta divulgación pueden procesarse de acuerdo con métodos farmacéuticos convencionales, a fin de producir agentes medicinales para la administración a pacientes, incluidos los seres humanos y otros mamíferos. Las composiciones farmacéuticas se pueden someter a operaciones farmacéuticas convencionales, tales como esterilización, y/o pueden contener adyuvantes convencionales, tales como conservadores, estabilizantes, agentes humectantes, emulgentes, amortiguadores, etc. Los comprimidos y las píldoras se pueden preparar adicionalmente con recubrimientos entéricos. Tales composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes, endulzantes, saborizantes y perfumantes.
Las cantidades de compuestos que se administran y el régimen de dosificación para tratar una enfermedad con los compuestos y/o las composiciones de la presente divulgación dependen de varios factores, que incluyen la edad, el peso, el sexo, la afección médica del sujeto, el tipo de enfermedad, la gravedad de la enfermedad, la trayectoria y la frecuencia de administración y el compuesto particular que se emplea. Por ello, el régimen de dosificación puede variar ampliamente, pero puede determinarse de forma rutinaria mediante métodos estándares. Puede ser adecuada una dosis diaria de aproximadamente 0,001 a 100 mg/kg en peso corporal, preferentemente, de aproximadamente 0,0025 hasta aproximadamente 50 mg/kg en peso corporal y, con máxima preferencia, de aproximadamente 0,005 a 10 mg/kg en peso corporal. La dosis diaria se puede administrar en una a cuatro dosis por día. Otros cronogramas de dosificación incluyen una dosis por semana y una dosis por ciclo de dos días.
Para propósitos terapéuticos, los compuestos activos de la presente divulgación se combinan de manera ordinaria con uno o más adyuvantes adecuados para la trayectoria de administración indicada. Si se administran por trayectoria oral, los compuestos de pueden mezclar con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, alquilésteres de celulosa, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfóricos y sulfúricos, gelatina, goma acacia, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y/o alcohol polivinílico, y luego se comprimen o encapsulan para una administración conveniente. Tales cápsulas o comprimidos pueden contener una formulación de liberación controlada como se puede proporcionar en una dispersión de un componente activo en hidroxipropilmetilcelulosa.
Las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación comprenden al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo farmacéuticamente aceptable y, opcionalmente, un agente adicional seleccionado de cualquier material portador, adyuvante y vehículo farmacéuticamente aceptables. Las composiciones alternativas de la presente divulgación comprenden un compuesto de la Fórmula (I) que se describe en la presente, o un profármaco de este, y un material portador, un adyuvante o un vehículo farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de la divulgación inhiben la interacción proteína-proteína PD-1/PD-L1, lo que da como resultado el bloqueo de PD-L1. El bloqueo de PD-L1 puede mejorar la respuesta inmunitaria a células cancerosas y enfermedades infecciosas en mamíferos, incluidos los humanos.
En un aspecto, la presente divulgación se refiere al tratamiento de un sujeto in vivo usando un compuesto de la Fórmula (I) o una sal del mismo, de manera que se inhiba el crecimiento de los tumores cancerosos. Un compuesto de la Fórmula (I) o una sal del mismo se pueden usar solos para inhibir el crecimiento de los tumores cancerosos. De manera alternativa, un compuesto de la Fórmula (I) o una sal del mismo se pueden usar junto con otros agentes inmunogénicos o tratamientos oncológicos estándares, como se describe a continuación.
En una modalidad, la divulgación proporciona un método para inhibir el crecimiento de células tumorales en un sujeto, que comprende administrarle al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) o una sal del mismo.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un paciente que lo necesita una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) o una sal del mismo. Los ejemplos de tipos de cáncer incluyen aquellos cuyo crecimiento se puede inhibir usando compuestos de la divulgación e incluyen tipos de cáncer que generalmente responden a la inmunoterapia. Los ejemplos de tipos de cáncer preferidos para el tratamiento incluyen melanoma (por ejemplo, melanoma maligno metastásico), cáncer renal (por ejemplo, carcinoma de células claras), cáncer de próstata (por ejemplo, adenocarcinoma de próstata resistente al tratamiento hormonal), cáncer de mama, cáncer de colon y cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón de células no microcíticas). Además, la divulgación incluye tumores malignos recidivantes o resistentes al tratamiento, cuyo crecimiento puede inhibirse usando los compuestos de la divulgación.
Los ejemplos de otros tipos de cáncer que se pueden tratar usando los métodos de la divulgación incluyen cáncer óseo, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma maligno cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de testículo, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de cuello uterino, carcinoma de vagina, carcinoma de vulva, enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endócrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de las glándulas suprarrenales, sarcoma de tejido blando, cáncer de uretra, cáncer de pene, leucemias crónicas o agudas, que incluyen leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, tumores sólidos de la infancia, linfoma linfocítico, cáncer de vejiga, cáncer de riñón o de uretra, carcinoma de pelvis renal, neoplasia del sistema nervioso central (SNC), linfoma del SNC primario, angiogénesis tumoral, tumor del eje espinal, glioma del tronco encefálico, adenoma hipofisario, sarcoma de Kaposi, cáncer epidermoide, cáncer de células escamosas, linfoma de linfocitos T, tipos de cáncer provocados por el entorno, que incluyen los provocados por el amianto, y combinaciones de estos tipos de cáncer. La presente divulgación también es útil para el tratamiento de tipos de cáncer metastásicos, en especial, tipos de cáncer metastásicos que expresan PD-L1 (Iwai et al. (2005) Int. Immunol. 17:133-144).
De manera opcional, los compuestos de la Fórmula (I) o sales de los mismos se pueden combinar con otro agente inmunogénico, tal como células cancerosas, antígenos tumorales purificados (que incluyen proteínas recombinantes, péptidos y moléculas de carbohidratos), células y células transfectadas con genes que codifican citocinas estimulantes del sistema inmunitario (He et al (2004) J. Immunol. 173:4919-28). Los ejemplos de vacunas antitumorales que se pueden usar incluyen péptidos de antígenos de melanoma, tales como péptidos de gp100, antígenos MAGE, Trp-2, MART1 y/o tirosinasa, o células tumorales transfectadas para expresar la citocina GM-CSF. En los seres humanos, algunos tumores demostraron ser inmunogénicos, tales como los melanomas. Se prevé que mediante el aumento del umbral de activación de linfocitos T a través del bloqueo de PD-L1, se espere que se activen las respuestas tumorales en el hospedero.
El bloqueo de PD-L1 se puede combinar con un protocolo de vacunación. Se trazaron diversas estrategias experimentales para la vacunación contra los tumores (véanse Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D.
2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; véase también Restifo, N. y Sznol, M., Cancer Vaccines, capítulo 61, pág. 3023-3043 en DeVita, V. et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology. Quinta edición). En una de estas estrategias, se prepara una vacuna en la que se usan células tumorales autólogas o alogénicas. Estas vacunas celulares demostraron ser más eficaces cuando las células tumorales se transducen para expresar GM-CSF. GM-CSF demostró ser un activador potente de la presentación de antígenos para la vacunación contra los tumores (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 3539-43).
El estudio de los patrones de expresión génica y de expresión génica a gran escala en diversos tumores produjo la definición de los denominados antígenos específicos de tumores (Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7). En varios casos, estos antígenos específicos de tumores son antígenos de diferenciación que se expresan en los tumores y en la célula donde se produjo el tumor, por ejemplo, antígenos melanocitos gp100, antígenos MAGE y Trp-2. Lo que es más importante, se puede demostrar que muchos de estos antígenos son los objetivos de linfocitos T específicos del tumor en el hospedero. El bloqueo de PD-L1 se puede usar en combinación con un conjunto de proteínas recombinantes y/o péptidos expresados en un tumor, a fin de generar una respuesta inmunitaria a estas proteínas. En general, el sistema inmunitario considera estas proteínas como autoantígenos y, por lo tanto, son tolerantes a ellos. El antígeno tumoral también puede incluir la proteína telomerasa, que es necesaria para la síntesis de telómeros de cromosomas y que se expresa en más del 85 % de los tipos de cáncer en seres humanos y solo en una cantidad limitada de tejidos somáticos (Kim, N et al. (1994) Science 266: 2011-2013). (Estos tejidos somáticos pueden protegerse del ataque inmunitario de varias maneras). El antígeno tumoral también puede ser un "neoantígeno" expresado en células cancerosas debido a las mutaciones somáticas que alteran la secuencia proteica o crean proteínas de fusión entre dos secuencias no relacionadas (es decir, bcr-abl en el cromosoma Philadelphia), o idiotipo de tumores de linfocitos B.
Otras vacunas antitumorales pueden incluir las proteínas de virus implicados en ciertos tipos de cáncer humano, tales como el virus del papiloma humano (VPH, por sus siglas en inglés), el virus de la hepatitis (HBV, HDV y HCV) y el virus herpes asociado al sarcoma de Kaposi (KHSV, por sus siglas en inglés). Otra forma de antígeno específico de tumores que se puede usar junto con el bloqueo de PD-L1 son las proteínas de choque térmico (HSP) purificadas aisladas del tejido tumoral en sí mismo. Estas proteínas de choque térmico contienen fragmentos de proteínas de las células tumorales, y estas HSP son altamente eficaces para el suministro a las células que presentan antígenos, a fin de provocar inmunidad tumoral (Suot, R & Srivastava, P (1995) Science 269:1585-1588; Tamura, Y. et al. (1997) Science 278:117-120).
Las células dendríticas (DC) son potentes células que presentan antígenos que se pueden usar para cebar respuestas específicas del antígeno. Las DC se pueden producir ex vivo y cargar con varios antígenos de proteínas y péptidos, así como extractos de células tumorales (Nestle, F. et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). Asimismo, las DC se pueden transducir por medios genéticos para que también expresen estos antígenos tumorales. Las DC también se fusionaron directamente a las células tumorales, a fin de lograr la inmunización (Kugler, A. et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336). Como método de vacunación, la inmunización de DC se puede combinar de manera eficaz con el bloqueo de PD-L1 para activar respuestas antitumorales más potentes.
El bloqueo de PD-L1 también se puede combinar con tratamientos oncológicos estándares. El bloqueo de PD-L1 se puede combinar de manera eficaz con regímenes quimioterapéuticos. En estos casos, es posible reducir la dosis de reactivos quimioterapéuticos administrados (Mokyr, M. et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). Un ejemplo de tal combinación es un compuesto de la presente divulgación en combinación con decarbazina para el tratamiento del melanoma. Otro ejemplo de tal combinación es un compuesto de la presente divulgación en combinación con interleucina-2 (IL-2) para el tratamiento del melanoma. La razón científica del uso combinado del bloqueo de PD-L1 y la quimioterapia es que la muerte celular, que es una consecuencia de la acción citotóxica de la mayoría de los compuestos quimioterapéuticos, debería provocar el aumento de los niveles de antígenos tumorales en la trayectoria de presentación de antígenos. Otras terapias de combinación que pueden dar como resultado la sinergia con el bloqueo de PD-L1 mediante la muerte celular son la radiación, la cirugía y la carencia hormonal. Cada uno de estos protocolos crea una fuente de antígeno tumoral en el hospedero. Los inhibidores de la angiogénesis también se pueden combinar con el bloqueo de PD-L1. La inhibición de la angiogénesis produce la muerte de células tumorales que podrían alimentar el antígeno tumoral en las vías de presentación del antígeno hospedero.
Los compuestos de la presente divulgación también se pueden usar en combinación con compuestos biespecíficos que dirigen células efectoras que expresan el receptor Fc alfa o Fc gamma hacia células tumorales (véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses n.° 5.922.845 y 5.837.243). Los compuestos biespecíficos se pueden usar para dirigir dos antígenos separados. Por ejemplo, se usaron compuestos biespecíficos del receptor anti-Fc/antígeno antitumoral (por ejemplo, Her-2/neu) para dirigir macrófagos hacia los sitios tumorales. Este direccionamiento puede activar de manera más eficaz las repuestas específicas tumorales. El brazo de los linfocitos T de estas respuestas se podría aumentar mediante el uso del bloqueo de PD-L1. De manera alternativa, el antígeno se puede administrar directamente a las DC usando compuestos biespecíficos que se unen al antígeno tumoral y un marcador de superficie celular específico de célula dendrítica.
Los tumores evaden la vigilancia inmunitaria del hospedero mediante una gran variedad de mecanismos. Varios de estos mecanismos se pueden debilitar mediante la inactivación de proteínas expresadas por los tumores y que son inmunodepresoras. Estos incluyen, entre otros, TGF-beta (Kehrl, J. et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard, M. & O'Garra, A. (1992) Immunology Today 13: 198-200) y el ligando Fas (Hahne, M. et al. (1996) Science 274: 1363-1365). Los inhibidores que se unen y bloquean a cada una de estas entidades se pueden usar en combinación con los compuestos de la presente divulgación para contrarrestar los efectos del agente inmunosupresor y favorecer las respuestas inmunitarias tumorales por parte del hospedero.
Se pueden usar compuestos que activan la respuesta inmunitaria del hospedero en combinación con el bloqueo de PD-L1. Estos incluyen moléculas en la superficie de células dendríticas, que activan la función de DC y la presentación de antígenos. Los compuestos anti-CD40 pueden sustituir eficazmente la actividad de los linfocitos T colaboradores (Ridge, J. et al. (1998) Nature 393: 474-478) y se puede usar junto con el bloqueo de PD-L1 (Ito, N. et al. (2000) Immunobiology 201 (5) 527-40). La activación de compuestos hacia las moléculas coestimulantes de linfocitos T, tales como CTLA-4 (por ejemplo, patente estadounidense n.° 5,811,097), OX-40 (Weinberg, A. et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero, I. et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997) e ICOS (Hutloff, A. et al. (1999) Nature 397: 262-266) también puede proporcionar mayores niveles de activación de linfocitos T.
El trasplante de médula ósea se usa actualmente para tratar varios tumores de origen hematopoyético. Si bien la enfermedad del injerto contra el hospedero es una consecuencia de este tratamiento, se puede obtener un beneficio terapéutico de las respuestas del injerto contra el tumor. El bloqueo de PD-L1 se puede usar para aumentar la eficacia de los linfocitos T específicos de tumor injertados en el donante.
Se usan otros métodos de la divulgación para tratar pacientes que estuvieron expuestos a toxinas o patógenos particulares. En consecuencia, otro aspecto de la divulgación proporciona un método para tratar una enfermedad infecciosa en un sujeto, que comprende la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) o sales del mismo.
De manera similar a su aplicación a tumores como se analizó anteriormente, el compuesto de la Fórmula (I) o las sales del mismo se pueden usar solos, o como adyuvantes, en combinación con vacunas para estimular la respuesta inmunitaria a patógenos, toxinas y autoantígenos. Los ejemplos de patógenos para los que este enfoque terapéutico puede ser particularmente útil incluyen patógenos para los que no hay en la actualidad una vacuna eficaz o patógenos para los cuales las vacunas convencionales no son totalmente eficaces. Estos incluyen, entre otros, VIH, hepatitis (A, B, C o D), influenza, herpes, giardia, malaria, leishmaniosis, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. El bloqueo de PD-L1 es particularmente útil contra infecciones establecidas por agentes, tales como el VIH, que presentan antígenos alterados durante el curso de las infecciones. Estos epítopos novedosos se reconocen como extraños al momento de la administración, y por lo tanto, provocan una fuerte respuesta de los linfocitos T que no disminuye por las señales negativas a través de PD-1.
Algunos ejemplos de virus patogénicos que causan infecciones que se pueden tratar mediante los métodos de la divulgación incluyen VIH, hepatitis (A, B, C o D), virus del herpes (por ejemplo, VZV, HSV-1, HAV-6, HHv-7, HHV-8, HSV-2, CMV y virus de Epstein Barr), adenovirus, virus de la influenza, flavivirus, virus ECHO, rinovirus, virus de Coxsackie, cornovirus, virus respiratorio sinsicial, virus de la parotiditis, rotavirus, virus del sarampión, virus de la rubeola, parvovirus, viruela vacunoide, virus de HTLV, virus del dengue, virus del papiloma, virus del molusco contagioso, poliovirus, virus de la rabia, virus de John Cunningham y encefalitis causada por arbovirus.
Algunos ejemplos de bacterias patogénicas que causan infecciones que se pueden tratar mediante los métodos de la divulgación incluyen clamidia, bacterias rickettsias, micobacterias, estafilococos, estreptococos, neumonococos, meningococos y conococci, Klebsiella, próteo, Serratia, seudomonas, legionela, difteria, salmonela, bacilos, cólera, tétanos, botulismo, antrax, peste, leptospirosis y bacterias de la enfermedad de Lyme.
Algunos ejemplos de hongos patogénicos que causan infecciones que se pueden tratar mediante los métodos de la divulgación incluyen Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), género Mucorales (Mucor, Absidia, Rhizophus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis e Histoplasma capsulatum.
Algunos ejemplos de parásitos patogénicos que causen infecciones que se pueden tratar mediante los métodos de la divulgación incluyen Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleriafowleri, Acanthamoeba sp., Giardia lambia, Cryptosporidium sp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondi y Nippostrongylus brasiliensis.
En todos los métodos anteriores, el bloqueo de PD-L1 se puede combinar con otras formas de inmunoterapia, tales como tratamiento de citocinas (por ejemplo, interferones, GM-CSF, G-CSF, IL-2) o terapia de anticuerpos biespecíficos, que proporciona una presentación mejorada de antígenos tumorales (véase, por ejemplo, Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123), vacunas o agentes que modifican la expresión génica.
Los compuestos de la presente divulgación pueden provocar y ampliar las respuestas autoinmunitarias. De hecho, la inducción de respuestas antitumorales mediante el uso de vacunas de péptidos y células tumorales revela que muchas respuestas antitumorales implican reactividad autoinmunitaria (despigmentación observada en melanoma B 16 modificado por anti-CTLA-4+GM-CSF en van Elsas et al. supra; despigmentación en ratones vacunados con Trp-2 (Overwijk, W. et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96: 2982-2987); prostatitis autoinmunitaria provocada por vacunas de células tumorales TRAMP (Hurwitz, A., supra (2000)), vacuna de antígenos peptídicos de melanoma y vitiligo observados en ensayos clínicos en seres humanos (Rosenberg, S A y White, D E (1996) J. Immunother Emphasis Tumor Immunol 19 (1): 81-4).
Por lo tanto, es posible considerar el uso del bloqueo de anti-PD-L1 junto con varias autoproteínas, a fin de elaborar protocolos de vacunación para generar eficazmente respuestas inmunitarias contra estas autoproteínas para el tratamiento de enfermedades. Por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer implica una acumulación inadecuada del péptido A.beta. en depósitos amiloides en el cerebro; las respuestas de anticuerpos contra el amiloide permiten aclarar estos depósitos de amiloides (Schenk et al., (1999) Nature 400: 173-177).
También se pueden usar como objetivos otras autoproteínas, tales como IgE para el tratamiento de la alergia y el asma, y TNF.alfa para la artritis reumatoide. Finalmente, las respuestas del anticuerpo a distintas hormonas se pueden inducir mediante el uso de un compuesto de la Fórmula (I) o de las sales del mismo. Las respuestas de los anticuerpos neutralizantes a las hormonas reproductoras se pueden usar para la anticoncepción. Las respuestas de los anticuerpos neutralizantes a las hormonas y otros factores solubles necesarios para el crecimiento de tumores particulares también se pueden considerar como posibles objetivos de vacunación.
Los modalidades análogos a los descritos anteriormente para el uso del anticuerpo anti-PD-L1 se pueden usar para la inducción de respuestas autoinmunitarias terapéuticas en el tratamiento de pacientes que tienen una acumulación inadecuada de otros autoantígenos, tales como depósitos de amiloide, incluidos A.beta en la enfermedad de Alzheimer, citocinas, tales como TNFa e IgE.
Los compuestos de esta divulgación se pueden usar para estimular las respuestas inmunitarias específicas de antígenos mediante la coadministración de un compuesto de la Fórmula (I) o sales del mismo con un antígeno de interés (por ejemplo, una vacuna). En consecuencia, en otro aspecto, la divulgación provee un método para mejorar una respuesta inmunitaria a un antígeno en un sujeto, que comprende administrar al sujeto: (i) el antígeno; y (ii) un compuesto de la Fórmula (I) o sales de los mismos, de modo que se mejora la respuesta inmunitaria al antígeno en el sujeto. El antígeno puede ser, por ejemplo, un antígeno tumoral, un antígeno viral, un antígeno bacteriano o un antígeno de un patógeno. Los ejemplos no limitantes de esos antígenos incluyen los que se analizan en las secciones anteriores, tales como los antígenos tumorales (o vacunas contra tumores) analizados anteriormente, o los antígenos de virus, bacterias u otros patógenos descritos anteriormente.
Como se describió anteriormente, los compuestos de la divulgación se pueden coadministrar con uno o más agentes terapéuticos, por ejemplo, un agente citotóxico, un agente radiotóxico o un agente inmunosupresor. Los compuestos de la divulgación se pueden administrar antes, después o de manera simultánea con el otro agente terapéutico o se puede coadministrar con otras terapias conocidas, por ejemplo, una terapia contra el cáncer, tal como la radiación. Los agentes terapéuticos incluyen, entre otros, agentes antineoplásicos, como doxorrubicina (adriamicina), cisplatina, sulfato de bleomicina, carmustina, clorambucil, decarbazina y ciclofosfamida hidroxiurea que, por sí solos, son eficaces únicamente a niveles que son tóxicos o subtóxicos para un paciente. La cisplatina se administra por trayectoria intravenosa en dosis de 100 mg una vez cada cuatro semanas, y la adriamicina se administra por trayectoria intravenosa en una dosis de 60-75 mg/ml una vez cada 21 días. La coadministración de un compuesto de la Fórmula (I) o las sales del mismo con agentes quimioterapéuticos proporciona dos agentes contra el cáncer que funcionan mediante diferentes mecanismos que producen un efecto citotóxico en las células tumorales humanas. La coadministración puede solucionar problemas debido al desarrollo de resistencia a los fármacos o a un cambio en la antigenicidad de las células tumorales, lo cual las volvería no reactivas con el anticuerpo.
También, dentro del alcance de la presente divulgación, se encuentran kits que comprenden un compuesto de la Fórmula (I) o sales del mismo e instrucciones de uso. Además, el kit puede contener al menos un reactivo adicional. En general, los kits incluyen una etiqueta que indica el uso previsto del contenido del kit. El término "etiqueta" incluye cualquier leyenda o material grabado suministrado sobre el kit o junto con él, o que acompaña de otro modo al kit.
Los otros agentes terapéuticos anteriores, cuando se usan en combinación con los compuestos de la presente divulgación, se pueden emplear, por ejemplo, en las cantidades indicadas en el manual de referencia para médicos Physicians' Desk Reference (PDR) o según lo determine una persona experta en la técnica. En los métodos de la presente divulgación, tales otros agentes terapéuticos se pueden administrar antes, durante o después de la administración de los compuestos de la invención.
En una modalidad, los compuestos de la Fórmula (I) inhiben la interacción PD-1/PD-L1 con valores CI50 de 10 pM o menores, por ejemplo, de 0,01 a 10 pM, medida según el ensayo de unión de fluorescencia homogénea de resolución temporal (HTRF) PD-1/PD-L1. Preferentemente, los compuestos de la Fórmula (I) inhiben la interacción PD-1/PD-L1 con valores CI50 de 0,01 a 1 pM.
Ejemplos
La divulgación también se define en los siguientes Ejemplos Y Ejemplos de referencia. Cabe destacar que los ejemplos solo se proporcionan a modo ilustrativo. De la divulgación anterior y los ejemplos, una persona experta en la técnica puede determinar las características principales de la divulgación, y sin apartarse de su espíritu ni de su alcance, puede realizar diversos cambios y modificaciones para adaptar la divulgación a diversos usos y condiciones. Como resultado, la divulgación no se limita a los ejemplos establecidos a continuación, sino que se define mediante las reivindicaciones adjuntas a esta.
Las abreviaturas usadas en la presente serán conocidas por aquellos de habilidad en la técnica. Ejemplos son: THF para tetrahidrofurano; DCM para diclorometano; DMF para N,N-dimetilformamida; DMSO para dimetilsulfóxido; TFA para ácido trifluoroacético; AcOH para ácido acético; ACN o MeCN para acetonitrilo; MeOH para metanol; NH4OAc para acetato de amonio; DIAD para azodicarboxilato de diisopropilo; h para horas; min para minutos; DCE para 1,2-dicloroetano; EtOH para etanol; ta o RT para tiempo de retención o temperatura ambiente (el contexto lo indicará); y DIPEA para diisopropiletilamina.
Los Esquemas de Reacción General 1, 2 y 3 representan algunos métodos que pueden ser empleados para la preparación de los Ejemplos. Se entiende que los asociados de acoplamiento cruzado, bromuro y ácido borónico (o ésteres borónicos) son intercambiables.
Esquema 1
Figure imgf000022_0001
Experimentales:
Intermedio: (2-metil-3-(quinolin-7-il)fenil)metanol
Figure imgf000022_0002
A un tubo sellado se le añadieron THF (75 ml), agua (18 ml), ácido quinolin-7-borónico (500 mg, 2,89 mmol), (3-bromo-2-metilfenil)metanol (0,581 g, 2,89 mmol), fosfato de potasio tribásico (1,53 g, 7,23 mmol) y precatalizador XPhos de 2a generación (0,068 g, 0,087 mmol). La mezcla se desgasificó/lavó abundantemente con nitrógeno x3 después se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. La mezcla de reacción en bruto se diluyó con DCM, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó. El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 25-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,42 g de (2-metil-3-(quinolin-7-il)fenil)metanol (57 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 88,94 (dd, J=4,2, 1,7 Hz, 1H), 8,42 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,04 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,62 - 7,51 (m, 2H), 7,47 (d, J=7,1 Hz, 1H), 7,33 - 7,26 (m, 1H), 7,25 - 7,19 (m, 1H), 5,15 (t, J=5,1 Hz, 1H), 4,59 (d, J=4,6 Hz, 2H), 2,17 (s, 3H).
Intermedio: 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinolin-7-il)bencil)oxi)benzaldehído
Figure imgf000023_0001
Se añadió por goteo azodicarboxilato de diisopropilo (184 mg, 0,911 mmol) en THF (12 ml) a una solución de (2-metil-3-(quinolin-7-il)fenil)metanol (206,5 mg, 0,828 mmol), 5-cloro-2,4-dihidroxibenzaldehído (157 mg, 0,911 mmol), y trifenilfosfina (239 mg, 0,911 mmol) en THF (12 ml) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó y se dejó alcanzar temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró, después se purificó en gel de sílice usando 10-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 280 mg (71 % de rendimiento) de 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinolin-7-il)bencil)oxi)benzaldehído como un sólido amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 |jm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100 % de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), en 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM (Tiempo de retención) = 1,059 min., m/z 404,2 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 10,06 (s, 1H), 8,96 (dd, J=4,3, 1,7 Hz, 1H), 8,88 (m, 2H), 8,45 (dd, J=8,4, 0,8 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,95 - 7,89 (m, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,63 - 7,56 (m, 2H), 7,43 - 7,34 (m, 1H), 6,90 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 2,29 (s, 3H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinolin-7-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000023_0002
A un matraz pequeño de fondo redondo (RBF) se le añadieron carbonato de cesio (452 mg, 1,387 mmol), 5-(clorometil) nicotinonitrilo (212 mg, 1,387 mmol), 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinolin-7-il)bencil)oxi)benzaldehído (280 mg, 0,693 mmol), y DMF (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla en bruto se diluyó con 10 ml de DCM, se neutralizó con 4 gotas de 0,1 M de HCl ac., se extrajo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y evaporó. El sólido resultante se trituró con éter dietílico frío (0 °C) para dar 179 mg (37% de rendimiento) de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinolin-7-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo como un sólido amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters BEH 1,7 jm C18, 2 x 50 mm, con un gradiente de 0-100 % de B (B = 95 % de acetonitrilo grado HPLC/10 mM de acetato de amonio/5 % de agua grado HPLC), (A = 95 % de agua grado HPLC/10 mM de acetato de amonio/5 % de acetonitrilo grado HPLC), durante 3 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 2,07 min., m/z 520,3 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 810,23 (s, 1H), 9,03 (d, J=2,6 Hz, 2H), 8,95 (d, J=2,9 Hz, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,44 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,97 -7,88 (m, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,63 -7,54 (m, 3H), 7,38 (d, J=4,0 Hz, 2H), 7,28 (s, 1H), 5,50 (s, 1H), 5,46 (s, 1H), 2,30 (s, 3H).
Ejemplo 1001: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-7-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000024_0001
A un vial con tapón de rosca se le añadieron 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinolin-7-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrMo (40 mg, 0,077 mmol), ácido (R)-2-amino-3-hidroxi-2-metilpropanoico (27,5 mg, 0,231 mmol), triacetoxihidroborato de sodio (48,9 mg, 0,231 mmol) y DMF (3 ml). El vial se tapó y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-85 % B durante 35 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 4,5 mg (10 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 99 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 89,03 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,93 (d, J=4,0 Hz, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,44 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,07 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,62 - 7,55 (m, 3H), 7,52 (m, 1H), 7,39 - 7,32 (m, 2H), 7,13 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,33 (s, 2H), 4,04 (m, 2H), 3,75 - 3,69 (m, 1H), 3,60 - 3,52 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 1,26 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,58 min; IEN-MS(+) m/z = 623,4 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,3 (M - H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,66 min; IEN-MS(+) m/z = 623,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,5 (M - H).
Se prepararon los siguientes ejemplos en una manera similar como el Ejemplo 1001:
Intermedio: (2-metil-3-(il)fenil)metanol
Figure imgf000024_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 25-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,48 g de (2-metil-3-(quinolin-3-il)fenil)metanol (99 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 88,85 (d, J=2,2 Hz, 1H), 8,30 (d, J=2,0 Hz, 1H), 8,06 (dd, J=14,2, 8,3 Hz, 2H), 7,83 - 7,76 (m, 1H), 7,70 - 7,62 (m, 1H), 7,50 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,36 -7,30 (m, 1H), 7,29 -7,21 (m, 1H), 5,17 (t, J=5,4 Hz, 1H), 4,60 (d, J=5,4 Hz, 2H), 2,18 (s, 3H).
Intermedio: 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinolin-3-il)bencil)oxi)benzaldehído
Figure imgf000025_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,21 g de 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinolin-3-il)bencil)oxi)benzaldehído (74 % de rendimiento) como un sólido amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100 % de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM (Tiempo de retención) = 1,125 min., m/z 403,9 (M H). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 811,44 (s, 1H), 9,72 (s, 1H), 8,93 (d, J=2,2 Hz, 1H), 8,18 (d, J=8,6 Hz, 1H), 8,12 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,77 (m, 1H), 7,65 - 7,55 (m, 3H), 7,40 - 7,36 (m, 1H), 6,66 (s, 1H), 5,26 (s, 2H), 2,33 (s, 3H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinolin-3-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000025_0002
Se obtuvieron 115 mg de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinolin-3-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (38 % de rendimiento) como un sólido amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100 % de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,140 min., m/z 520,1 (M H).
Ejemplo 1002: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-3-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000025_0003
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 40-80 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 7,8 mg (16 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 99 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,02 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,12 - 8,03 (m, 2H), 7,82 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,67 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,60 - 7,52 (m, 2H), 7,42 - 7,33 (m, 2H), 7,12 (s, 1H), 5,35 (m, 4H), 4,03 (s, 2H), 3,71 -3,69 (m, 1H), 3,59 - 3,53 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 1,25 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,60 min; IEN-MS(+) m/z = 623,4 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,4 (M - H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,71 min; IEN-MS(+) m/z = 623,4 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,3 (M - H).
Ejemplo 1003: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-3-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000026_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 25-85 % de B durante 30 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 4,8 mg (10 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 99 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,99 (d, J=5,1 Hz, 2H), 8,86 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,12 - 8,03 (m, 2H), 7,82 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,67 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,61 - 7,55 (m, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,43 - 7,35 (m, 2H), 7,14 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 5,32 (s, 2H), 4,04 (d, J=12,8 Hz, 1H), 3,88 (t, J=6,4 Hz, 1H), 3,26 -3,17 (m, 1H), 2,99 (m, 1H), 2,25 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 1,96 - 1,87 (m, 1H), 1,68 (d, J=9,9 Hz, 1H), 1,54 (m, 3H), 1,36 (m, 1H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,69 min; IEN-MS(+) m/z = 633,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 631,4 (M - H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,75 min; IEN-MS(+) m/z = 633,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 631,4 (M - H).
Intermedio: (2-metil-3-(quinolin-2-il)fenil)metanol
Figure imgf000027_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 25-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,77 g de (2-metil-3-(quinolin-2-il)fenil)metanol (85% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 8,23 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,18 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,89 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,76 (m, 1H), 7,71 - 7,64 (m, 1H), 7,62 - 7,54 (m, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,46 - 7,41 (m, 1H), 7,39 - 7,31 (m, 1H), 4,80 (d, J=5,6 Hz, 2H), 2,34 (s, 3H).
5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinolin-2-il)bencil)oxi)benzaldehído
Figure imgf000027_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-70 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,14 g de 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinolin-2-il)bencil)oxi)benzaldehído (25 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 10,05 (s, 1H), 8,48 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,09 - 8,02 (m, 2H), 7,82 (m, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,68 -7,64 (m, 2H), 7,62 - 7,61 (m, 1H), 7,49 (dd, J=7,6, 1,1 Hz, 1H), 7,45 - 7,38 (m, 1H), 6,90 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 2,33 (s, 3H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinolin-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000027_0003
Se obtuvieron 82 mg de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinolin-3-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (46 % de rendimiento) como un sólido beige. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100 % de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,134 min., m/z 520,0 (M H). RMN 1H(500 MHz, DMSO-d6) 810,25 (s, 1H), 9,05 (d, J=1,7 Hz, 2H), 8,57 (m, 1H), 8,48 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,10 - 8,02 (m, 2H), 7,82 (m, 1H), 7,78 - 7,73 (m, 1H), 7,71 -7,62 (m, 3H), 7,51 (dd, J=7,6, 1,1 Hz, 1H), 7,44 -7,37 (m, 1H), 7,32 (s, 1H), 5,55 -5,46 (m, 4H), 2,40 -2,33 (m, 3H).
Ejemplo 1004: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-2-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000028_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 |jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 30-80 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 16,1 mg (60 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 98 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,03 (d, J=14,3 Hz, 2H), 8,52 (s, 1H), 8,47 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,05 (t, J=7,3 Hz, 2H), 7,81 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,70 -7,63 (m, 2H), 7,61 - 7,55 (m, 2H), 7,48 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,40 - 7,33 (m, 1H), 7,16 (s, 1H), 5,37 (m, 4H), 3,96 (s, 2H), 3,62 (m, 1H), 3,53 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,60 min; IEN-MS(+) m/z = 623,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,4 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,82 min; IEN-MS(+) m/z = 623,4 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,4 (M- H).
Intermedio: (2-metil-3-(quinolin-6-il)fenil)metanol
Figure imgf000028_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-70 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,28 g de (2-metil-3-(quinolin-6-il)fenil)metanol (39 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 8,96 (dd, J=4,3, 1,6 Hz, 1H), 8,23 - 8,12 (m, 2H), 7,74 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,69 (dd, J=8,8, 2,0 Hz, 1H), 7,46 (dt, J=8,1, 3,9 Hz, 2H), 7,36 - 7,29 (m, 2H), 4,82 (d, J=5,6 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H).
Intermedio: 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinolin-6-il)bencil)oxi)benzaldehído
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-70 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,160 g de 5-doro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinolin-6-il)bencil)oxi)benzaldehído (45 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 810,05 (s, 1H), 8,95 (dd, J=4,3, 1,7 Hz, 1H), 8,44 (dd, J=8,6, 1,0 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,7 Hz, 1H), 7,95 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,77 - 7,68 (m, 2H), 7,62 - 7,55 (m, 2H), 7,42 -7,36 (m, 2H), 6,90 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 2,27 (s, 3H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinolin-6-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000029_0001
Se obtuvieron 165 mg de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinolin-6-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (65 % de rendimiento) como un sólido anaranjado. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98% de B (B = 100% de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,090 min., m/z 520,0 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 810,25 (s, 1H), 9,05 (m, 2H), 8,95 (dd, J=4,2, 1,7 Hz, 1H), 8,57 (t, J=2,0 Hz, 1H), 8,48 -8,41 (m, 1H), 8,11 (d, J=8,7 Hz, 1H), 7,96 (d, J=1,9 Hz, 1H), 7,79 - 7,72 (m, 2H), 7,63 -7,56 (m, 2H), 7,42 -7,36 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 5,52 (s, 2H), 5,47 (s, 2H), 2,30 (s, 3H).
Ejemplo 1005: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropiónico
Figure imgf000029_0002
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 25-65 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 16,0 mg (33 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 99 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,03 (d, J=15,4 Hz, 2H), 8,94 (d, J=4,0 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,43 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,98 -7,90 (m, 1H), 7,74 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,63 - 7,51 (m, 3H), 7,40 - 7,29 (m, 2H), 7,15 (s, 1H), 5,36 (m, 4H), 3,97 (s, 2H), 3,66 - 3,50 (m, 2H), 2,29 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,54 min; IEN-MS(+) m/z = 623,4 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,4 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,82 min; IEN-MS(+) m/z = 623,4 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,4 (M- H).
Intermedio: (2-metil-3-(quinoxalin-2-il)fenil)metanol
Figure imgf000030_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 20-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,69 g de (2-metil-3-(quinoxalin-2-il)fenil)metanol (79% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,08 (s, 1H), 8,21 - 8,10 (m, 2H), 7,95 - 7,85 (m, 2H), 7,61 - 7,57 (m, 1H), 7,47 (dd, J=7,6, 1,1 Hz, 1H), 7,42 - 7,35 (m, 1H), 5,24 (t, J=5,4 Hz, 1H), 4,63 (d, J=5,4 Hz, 2H), 2,28 (s, 3H).
Intermedio: 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinoxalin-2-il)bencil)oxi)benzaldehído
Figure imgf000030_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-70 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,360 g de 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinoxalin-2-il)bencil)oxi)benzaldehído (17% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 10,05 (s, 1H), 9,12 (s, 1H), 8,15 (m, 2H), 7,92 (m, 2H), 7,71 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 6,87 (s, 1H), 5,40 (s, 2H), 2,38 (s, 3H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinoxalin-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000030_0003
Se obtuvieron 341 mg de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinoxalin-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (99 % de rendimiento) como un sólido amarillo. Los datos CL/e M se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98% de B (B = 100% de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,384 min., m/z 521,0 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8 10,25 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 9,05 (dd, J=9,7, 2,0 Hz, 2H), 8,62 - 8,55 (m, 1H), 8,22 - 8,13 (m, 2H), 7,96 - 7,90 (m, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,71 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,58 - 7,57 (m, 1H), 7,46 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 5,55 (m, 4H), 2,41 (s, 3H).
Ejemplo 1006: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-2-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000031_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 25-65 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 4,3 mg (9,4 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 95 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,11 (s, 1H), 9,02 (d, J=15,8 Hz, 2H), 8,51 (s, 1H), 8,22 -8,11 (m, 2H), 7,99 -7,87 (m, 2H), 7,65 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,59 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,42 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,37 (m, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,65 -3,49 (m, 2H), 2,39 (s, 3H), 1,22 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BE
Figure imgf000031_0002
1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,50 min; IEN-MS(+) m/z = 624,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 622,4 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,77 min; IEN-MS(+) m/z = 624,4 (M H), IEN-MS(-) m/z = 622,4 (M- H).
Intermedio: (3-(isoquinolin-3-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000031_0003
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 25-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,69 g de (3-(isoquinolin-3-il)-2-metilfenil)metanol (99 % de rendimiento) como un sólido amarillo.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,40 (s, 1H), 8,17 (d, J=7,8 Hz, 1H), 8,02 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,82 (m, 1H), 7,75 - 7,68 (m, 1H), 7,52 - 7,44 (m, 1H), 7,37 - 7,25 (m, 2H), 5,18 (t, J=5,4 Hz, 1H), 4,60 (d, J=5,4 Hz, 2H), 2,22 (s, 3H).
Intermedio: 5-cloro-2-hidroxi-4-((3-(isoquinolin-3-il)-2-metilbencil)oxi)benzaldehído
Figure imgf000032_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-70 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,407 g de 5-doro-2-hidroxi-4-((3-(isoquinolin-3-il)-2-metilbencil)oxi)benzaldehído (33 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 810,05 (s, 1H), 9,41 (s, 1H), 8,50 (s a, 1H), 8,18 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,04 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,83 (t, J=7,4 Hz, 1H), 7,76 -7,69 (m, 1H), 7,57 (d, J=6,8 Hz, 1H), 7,48 (d, J=6,8 Hz, 1H), 7,41 -7,35 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 2,31 (s, 3H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(isoquinolin-3-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000032_0002
Se obtuvieron 86 mg de 5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(isoquinolin-3-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi) metil)nicotinonitrilo (25 % de rendimiento) como un sólido tostado. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98% de B (B = 100% de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,109 min., m/z 520,1 (M H).
Ejemplo 1007: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(isoquinolin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000032_0003
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-100 % de B durante 20 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 7,2 mg (17 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,41 (s, 1H), 9,05 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,19 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,04 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,83 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,73 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,60 - 7,54 (m, 2H), 7,47 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,35 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H), 5,36 (m, 4H), 3,98 (s, 2H), 3,66 - 3,60 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,59 min; IEN-MS(+) m/z = 623,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,4 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,84 min; IEN-MS(+) m/z = 623,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,5 (M- H).
Intermedio: (3-(isoquinolin-7-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000033_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 25-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,51 g de (3-(isoquinolin-7-il)-2-metilfenil)metanol (72 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 9,36 (s, 1H), 8,54 (d, J=5,9 Hz, 1H), 8,04 (m, 2H), 7,89 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,75 (dd, J=8,6, 1,7 Hz, 1H), 7,48 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,31 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,27 - 7,15 (m, 1H), 4,59 (m, 2H), 2,16 (s, 3H).
Intermedio: 5-cloro-2-hidroxi-4-((3-(isoquinolin-7-il)-2-metilbencil)oxi)benzaldehído
Figure imgf000033_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,299 g de 5-cloro-2-hidroxi-4-((3-(isoquinolin-7-il)-2-metilbencil)oxi)benzaldehído (41 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 810,04 (s, 1H), 9,38 (s, 1H), 8,54 (d, J=5,8 Hz, 1H), 8,11 - 8,03 (m, 2H), 7,90 (d, J=5,5 Hz, 1H), 7,76 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,71 (m, 1H), 7,57 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,42 - 7,32 (m, 2H), 6,87 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 2,26 (s, 3H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(isoquinolin-7-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Se obtuvieron 319 mg de 5-((4-doro-2-formil-5-((3-(isoquinolin-7-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi) metil)nicotinonitrilo (83 % de rendimiento) como un sólido tostado. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 |jm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98% de B (B = 100% de acetonitrilo grado HPLC/0,o5 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,065 min., m/z 520,2 (M H).
Ejemplo 1008: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(isoquinolin-7-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000034_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-70 % de B durante 20 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 2 mg (10 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 99 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,38 (s, 1H), 9,02 (m, 2H), 8,59 - 8,47 (m, 2H), 8,12 - 8,01 (m, 2H), 7,90 (d, J=5,5 Hz, 1H), 7,76 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,62 - 7,48 (m, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,15 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,34 (s, 2H), 3,98 (s a, 2H), 3,63 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,53 min; IEN-MS(+) m/z = 623,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,5 (M-H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,68 min; IEN-MS(+) m/z = 623,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,5 (M-H).
Intermedio: (3-(isoquinolin-6-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000034_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,333 g de (3-(isoquinolin-6-il)-2-metilfenil)metanol (42 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,37 (s, 1H), 8,54 (d, J=5,7 Hz, 1H), 8,19 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,91 - 7,83 (m, 2H), 7,64 (dd, J=8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,48 (d, J=7,4 Hz, 1H), 7,31 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,22 (d, J=7,4 Hz, 1H), 5,20 (t, J=5,3 Hz, 1H), 4,59 (d, J=5,0 Hz, 2H), 2,16 (s, 3H).
Intermedio: 5-doro-2-hidroxi-4-((3-(isoquinolin-6-il)-2-metilbencil)oxi)benzaldehído
Figure imgf000035_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,158 g de 5-cloro-2-hidroxi-4-((3-(isoquinolin-6-il)-2-metilbencil)oxi)benzaldehído (31 % de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 8 10,04 (s, 1H), 9,38 (s, 1H), 8,55 (d, J=5,8 Hz, 1H), 8,21 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,89 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,66 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,58 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,43 - 7,32 (m, 2H), 6,89 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 2,25 (s, 3H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(isoquinolin-6-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000035_0002
Se obtuvieron 136 mg de 5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(isoquinolin-6-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi) metil)nicotinonitrilo (67 % de rendimiento) como un sólido anaranjado. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 |jm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98% de B (B = 100% de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,065 min., m/z 520,0 (M H).
Ejemplo 1009: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(isoquinolin-6-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000035_0003
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-70 % de B durante 20 minutos con una retención de 5 minutos a 100% de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 45-85 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 1,3 mg (3% de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,37 (s, 1H), 9,01 (m, 2H), 8,55 (d, J=5,9 Hz, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,21 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,93 - 7,86 (m, 2H), 7,66 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,56 (d, J=6,2 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,37 - 7,30 (m, 2H), 7,13 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 5,31 (s, 2H), 3,94 - 3,86 (m, 2H), 3,53 -3,46 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,17 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,52 min; IEN-MS(+) m/z = 623,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,5 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,64 min; IEN-MS(+) m/z = 623,1 (M H), IEN-MS(-) m/z = 621,5 (M- H).
Intermedio: 7-bromo-2-cloroquinoxalina
Figure imgf000036_0001
A un matraz de fondo redondo (RBF) que conenía quinoxalin-2-ol (10 g, 68,4 mmol) y ácido acético (500 ml, 68,4 mmol) se le añadió lentamente, en nitrógeno, por goteo, bromo (3,60 ml, 69,9 mmol). Cuando se completó la adición, la mezcla roja se agitó durante 1,5 horas a temperatura ambiente. El producto en bruto resultante se filtró, lo sólido se lavó con 1 l de agua y se dejó secar al aire por 1 hora. El sólido se recuperó en 10 ml de DMSO, y se añadió 100 ml de agua. El sólido amarillo pálido resultante se filtró y se secó bajo vacío para dar 12,69 g de 7-bromoquinoxalin-2-ol (74 %). Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 1000 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100 % de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 0,859 min., m/z 226,9 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 812,39 (br.s., 1H), 8,19 (s, 1H), 7,74 - 7,68 (m, 1H), 7,46 (m, 2H).
A un RBF se le añadieron 7-bromoquinoxalin-2-ol (7,3 g, 32,4 mmol) y tricloruro de fosforilo (36,3 ml, 389 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 90 °C por 2,5 horas. El producto en bruto se enfrió a 0 °C, se hizo gotear lentamente en 500 ml de agua congelada durante 60 minutos. La mezcla resultante se diluyó con acetato de etilo y se extrajo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró. El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 30-90 % DCM/hexanos para dar 5,4 g (66,4 %) de 7-bromo-2-cloroquinoxalina como un sólido blanco.
Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 1000 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,275 min., m/z 244,8 (M H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,06 (s, 1H), 8,35 (d, J=2,3 Hz, 1H), 8,14 -8,09 (m, 1H), 8,09 - 8,04 (m, 1H).
Intermedio: (3-(7-bromoquinolin-2-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000036_0002
El producto en bruto se purificó por HPLC prep usando el siguiente método: una HPLC preparativa Shimadzu empleando metanol/agua/ácido trifluoroacético donde el disolvente A fue 10 % de metanol/90 % de agua/0,1 % de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10 % de agua/90 % de metanol/0,1 % de ácido trifluoroacético con una columna Waters Sunfire 5|jm C1819 x 100 mm un gradiente de 30-100 % de B y una velocidad de flujo de 30 ml/min., durante 15 minutos con una retención de 7 minutos para dar 0,204 g (73 % de rendimiento) de (3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-2-metilfenil)metanol como un sólido blanco. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100% de B (B = 90% de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), durante 2,0 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,593 min., m/z 329,2 (M H); RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 89,12 (d, J=2,4 Hz, 1H), 8,36 (d, J=2,4 Hz, 1H), 8,11 (dd, J=8,9, 2,4 Hz, 1H), 8,06 - 8,00 (m, 1H), 7,59 (d, J=7,4 Hz, 1H), 7,47 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,43 - 7,35 (m, 1H), 5,26 (m, 1H), 4,62 (d, J=5,4 Hz, 2H), 2,27 (s, 3H).
Intermedio: 4-((3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído
Figure imgf000037_0001
El producto en bruto se trituró con 10 ml de etanol, después se filtró para dar 160 mg (38 % de rendimiento) de 4-((3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído como un sólido tostado ligero. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100 % de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto.
Tr de CLEM = 1,562 min., m/z 484,8 (M H).
Intermedio: 5-((5-((3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000037_0002
Se obtuvieron 115 mg de 5-((5-((3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (41 % de rendimiento) como un sólido anaranjado. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto.
Tr de CLEM = 1,529 min., m/z 600,9 (M H).
Ejemplo 1010: Ácido (R)-2-((4-((3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000038_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 |jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 40-80 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100% de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 50-90 % de B durante 20 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 3,4 mg (7 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 97 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,16 (s, 1H), 9,02 (m, 2H), 8,51 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,17 - 8,10 (m, 1H), 8,05 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,66 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,60 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,43 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,15 (s, 1H), 5,37 (s, 4H), 4,03 - 3,86 (m, 3H), 3,65 - 3,50 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 1,23 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,76 min; IEN-MS(+) m/z = 702,4 (M H), IEN-MS(-) m/z = 700,4 (M - H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,88 min; IEN-MS(+) m/z = 702,4 (M H), IEN-MS(-) m/z = 700,4 (M - H).
Intermedio: (3-(benzo[d]tiazol-6-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000038_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-60 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,577 g de (3-(benzo[d]tiazol-6-il)-2-metilfenil)metanol (95 % de rendimiento) como un sólido amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05% de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05% de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM
= 1,044 min., m/z 256,5 (M H). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 89,03 (s, 1H), 8,18 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,88 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,51 - 7,41 (m, 2H), 7,33 - 7,28 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 4,81 (d, J=5,6 Hz, 2H), 2,27 (s, 3H).
Intermedio: 4-((3-(benzo[d]tiazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-doro-2-hidroxibenzaldehído
Figure imgf000039_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-80 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,500 g de 4-((3-(benzo[d]tiazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-doro-2-hidroxibenzaldehído (32 % de rendimiento) como un sólido blanco. Los datos Cl/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100 % de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,439 min., m/z 409,9 (M H). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 11,46 (s, 1H), 9,74 - 9,68 (m, 1H), 9,05 (s, 1H), 8,20 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,91 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,59 - 7,47 (m, 3H), 7,36 - 7,30 (m, 2H), 5,24 (s, 2H), 2,28 (s, 3H).
Intermedio: 5-((5-((3-(benzo[d]tiazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000039_0002
Se obtuvieron 260 mg de 5-((5-((3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (61 % de rendimiento) como un sólido anaranjado. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,405 min., m/z 526,0 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 810,25 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), 9,05 (m, 2H), 8,60 -8,53 (m, 1H), 8,17 (dd, J=4,9, 3,3 Hz, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,58 (dd, J=6,9, 2,1 Hz, 1H), 7,50 (dd, J=8,4, 1,7 Hz, 1H), 7,39 - 7,34 (m, 2H), 7,31 (s, 1H), 5,51 (s, 2H), 5,46 (s, 2H), 2,28 (s, 3H).
Ejemplo 1011: Ácido (R)-2-((4-((3-(benzo[d]tiazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi) bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000039_0003
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-60 % de B durante 25 minutos con una retención de 7 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 16 mg (35 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,43 (s, 1H), 9,03 (m, 2H), 8,51 (s, 1H), 8,21 -8,10 (m, 2H), 7,57 (s, 1H), 7,55 -7,45 (m, 2H), 7,35 -7,27 (m, 2H), 7,15 (s, 1H), 5,43 - 5,25 (m, 4H), 3,98 (s, 2H), 3,68 - 3,54 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,59 min; IEN-MS(+) m/z = 629,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 627,7 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,68 min; IEN-MS(+) m/z = 629,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 627,7 (M- H).
Intermedio: (3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000040_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-60 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,461 g de (3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilfenil)metanol (74 % de rendimiento) como un sólido amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05% de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05% de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,005 min., m/z 240,1 (M H); RMN 1H (400 MHz, CDCh) 88,16 (s, 1H), 7,71 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,63 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,44 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,33 (dd, J=8,4, 1,6 Hz, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,24 (m, 1H), 4,80 (d, J=5,4 Hz, 2H), 2,25 (s, 3H).
Intermedio: 4-((3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído
Figure imgf000040_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 0-70 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,320 g de 4-((3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído (40 % de rendimiento) como un sólido blanco. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100 % de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,400 min., m/z 394,3 (M H). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 811,45 (s, 1H), 9,72 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,75 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,54 - 7,48 (m, 1H), 7,40 - 7,29 (m, 3H), 5,24 (s, 2H), 2,26 (s, 3H).
Figure imgf000041_0001
Se obtuvieron 412 mg de 5-((5-((3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-doro-2-formilfenoxi) metil)nicotinonitrilo
(80 % de rendimiento) como un sólido anaranjado. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH
1,7 |jm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,387 min., m/z 510,2 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8 10,25 (s, 1H), 9,05 (m, 2H), 8,82 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 7,86 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,56 (d, J=6,1 Hz, 1H), 7,42 -7,28 (m, 4H), 5,51 (s, 2H), 5,45 (s, 2H), 2,26 (s, 3H).
Ejemplo 1012: Ácido (R)-2-((4-((3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000041_0002
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-80 % de B durante 25 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue
16 mg (33 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,02 (m, 2H), 8,81 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,85 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,51 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,38 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,30 (q, J=7,9 Hz, 2H), 7,14 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,32 (s, 2H), 3,98 (s, 2H), 3,67 -3,60 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 1,25 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,55 min; IEN-MS(+) m/z = 613,1 (M H), IEN-MS(-) m/z = 611,2
(M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,61 min; IEN-MS(+) m/z = 613,0 (M H), IEN-MS(-) m/z = 611,1 (M- H).
Intermedio: (3-(benzofuran-5-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000042_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-60 % de acetato de etilo/hexano para dar 1,03 g de (3-(benzofuran-5-il)-2-metilfenil)metanol (55% de rendimiento) como un sólido amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 7,68 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,55 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,51 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,44 - 7,40 (dd, J=1,5, 8,6 Hz, 1H), 7,33 - 7,28 (m, 1H), 7,28 - 7,25 (m, 1H), 7,24 - 7,21 (m, 1H), 6,83 (dd, J=2,1, 0,9 Hz, 1H), 4,80 (s a, 2H), 2,27 (s, 3H).
Intermedio: 4-((3-(benzofuran-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído
Figure imgf000042_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 0-50 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,215 g de 4-((3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído (41 % de rendimiento) como un sólido blanco. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+/-) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100 % de B (B = 95 % de acetonitrilo grado HPLC/10 mM de acetato de amonio/5 % de agua grado HPLC), (A = 95 % de agua grado HPLC/10 mM de acetato de amonio/5 % de acetonitrilo grado HPLC), durante 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto.
Tr de CLEM = 2,17 min., m/z 391,31 (M - H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 11,18 (s, 1H), 10,05 (s, 1H), 8,06 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,68 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,58 (d, J=1,7 Hz, 1H), 7,52 (d, J=7,1 Hz, 1H), 7,37 -7,21 (m, 2H), 7,04 - 6,99 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,34 (s, 2H), 2,23 (s, 3H).
Intermedio: 5-((5-((3-(benzofuran-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000042_0003
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa empleando las siguientes condiciones: columna Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm con Fase Móvil A, 5:95 acetonitrilo/agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B, 95:5 acetonitrilo/agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 55-95 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/min. El disolvente se evaporó para dar 240 mg (82 % de rendimiento) de 5-((5-((3-(benzofuran-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo.
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 % de B, 0-100 % de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % de B; Flujo: 1 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100% de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 0,5 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 2,41 min; IEN-MS(+) m/z = 509,0 (M H) Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 3,21 min; IEN-MS(+) m/z = 509,2 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 810,25 (s, 1H), 9,08 - 8,91 (m, 2H), 8,57 (s, 1H), 8,06 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,68 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,62 - 7,57 (m, 1H), 7,54 (d, J=7,1 Hz, 1H), 7,41 - 7,22 (m, 4H), 7,01 (d, J=1,4 Hz, 1H), 5,51 (s, 2H), 5,45 (s, 2H), 2,26 (s, 3H).
Ejemplo de referencia 1013: Ácido (R)-2-((4-((3-(benzofuran-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopindin-3-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000043_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 45-85 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 10 mg (28 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,03 (m, 2H), 8,52 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,67 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,57 (m, 2H), 7,48 (m, 1H), 7,26 (m, 3H), 7,14 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 5,43 - 5,25 (m, 4H), 4,04 - 3,87 (m, 2H), 3,71 - 3,51 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BE
Figure imgf000043_0002
1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,88 min; IEN-MS(+) m/z = 612,9 (M H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 3,35 min; IEN-MS(+) m/z = 612,0 (m h ).
Ejemplo de referencia 1014: Ácido (S)-2-((4-((3-(benzofuran-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-5-guanidinopentanoico
Figure imgf000044_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 |jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 25-65 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 24 mg (58 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 96 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,05 - 8,95 (m, J=8,1 Hz, 2H), 8,46 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,49 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,32 - 7,19 (m, 3H), 7,10 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 5,33 (s, 2H), 5,26 (s, 2H), 3,73 (d, J=13,6 Hz, 1H), 3,66 - 3,58 (m, 1H), 3,16 -3,03 (m, 1H), 3,03 -2,94 (m, 1H), 2,94 -2,85 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 1,62 - 1,40 (m, 4H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,73 min; IEN-MS(+) m/z = 668,0 (M H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 3,29 min; IEN-MS(+) m/z = 668,1 (m h ).
Ejemplo de referencia 1015: Ácido 2-((4-((3-(benzofuran-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-2-metilpropanoico
Figure imgf000044_0002
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 45-85 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 11,5 mg (33 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,04 (m, 2H), 8,53 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,67 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,50 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,32 - 7,21 (m, 3H), 7,15 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 5,35 (s, 2H), 5,33 (s, 2H), 3,90 (s, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,28 (m, 6H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 |jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3,5 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3,5 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,90 min; IEN-MS(+) m/z = 596,0 (M H), IEN-MS(-) m/z = 594,2 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 3,35 min; IEN-MS(+) m/z = 596,0 (M H), IEN-MS(-) m/z = 594,2 (M- H).
Intermedio: (3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000045_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-60 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,470 g de (3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilfenil)metanol (55 % de rendimiento) como un sólido anaranjado. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05% de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05% de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 0,987 min., m/z 240,1 (M H). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 88,15 (s, 1H), 7,82 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,52 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,47 - 7,42 (m, 1H), 7,34 - 7,28 (m, 2H), 7,25 (d, J=1,2 Hz, 1H), 4,80 (s, 2H), 2,25 (s, 3H).
Intermedio: 4-((3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído
Figure imgf000045_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 0-50 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,190 g de 4-((3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído (34 % de rendimiento) como un sólido blanco. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 jm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100 % de B (B = 90 % de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), durante 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,973 min., m/z 394,3 (M - H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 811,18 (s a, 1H), 10,05 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 7,88 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,75 (d, J=1,0 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,55 (d, J=6,1 Hz, 1H), 7,40 - 7,29 (m, 3H), 6,89 (s, 1H), 5,35 (s, 2H), 2,24 (s, 3H).
Intermedio: 5-((5-((3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000046_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa empleando las siguientes condiciones: columna Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm con Fase Móvil A, 5:95 metanol/agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B, 95:5 metanol/agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 60-100 % de B durante 15 minutos con una retención de 10 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/min. El disolvente se evaporó para dar 271 mg (72% de rendimiento) de 5-((5-((3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo.
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100 % de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 1 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100% de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 0,5 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 2,12 min; IEN-MS(+) m/z = 510,1 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,98 min; IEN-Ms (+) m/z = 510,1 (M H) RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 810,25 (s, 1H), 9,04 (m, 2H), 8,80 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 7,88 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7,78 -7,73 (m, 2H), 7,57 (dd, J=7,2, 1,5 Hz, 1H), 7,40 - 7,28 (m, 4H), 5,51 (s, 2H), 5,45 (s, 2H), 2,27 (s, 3H).
Ejemplo 1016: Ácido 2-((4-((3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-2-metilpropanoico
Figure imgf000046_0002
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 25-65 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 12,4 mg (36 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,03 (m, 2H), 8,80 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,88 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,53 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,41 - 7,26 (m, 3H), 7,15 (s, 1H), 5,34 (m, 4H), 3,88 (s, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,27 (s, 6H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 |jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,54 min; IEN-MS(+) m/z = 597,2 (M H), IEN-MS(-) m/z = 595,2
(M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,57 min; IEN-MS(+) m/z = 597,2 (M H), IEN-MS(-) m/z = 595,3
(M- H).
Ejemplo 1017: Ácido (R)-2-((4-((3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000047_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 10-100 % de B durante 20 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 20.3 mg (61 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9.03 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,87 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,50 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,38 -7,26 (m, 3H), 7,12 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,31 (s, 2H), 4,02 (s, 2H), 3,68 (m, 1H), 3,54 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 1,26 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3,5 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BE
Figure imgf000047_0002
1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3,5 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,70 min; IEN-MS(+) m/z = 613,1 (M H), IEN-MS(-) m/z = 611,1
(M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 3,27 min; IEN-MS(+) m/z = 613,2 (M H), IEN-MS(-) m/z = 611,0
(M- H).
Intermedio: (3-(benzofuran-6-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000048_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-60 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,486 g de (3-(benzofuran-6-il)-2-metilfenil)metanol (56 % de rendimiento) como una espuma blanca. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 7,67 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,63 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,44 - 7,40 (m, 1H), 7,33 - 7,28 (m, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,19 (dd, J=7,9, 1,3 Hz, 1H), 6,83 (dd, J=2,1, 0,9 Hz, 1H), 4,80 (s a, 2H), 2,27 (s, 3H).
Intermedio: 4-((3-(benzofuran-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído
Figure imgf000048_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-60 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,603 g de 4-((3-(benzofuran-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído (60 % de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 10,05 (s, 1H), 8,05 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,74 - 7,71 (m, 2H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 7,37 -7,28 (m, 2H), 7,22 (m, 1H), 7,03 (dd, J=2,2, 0,9 Hz, 1H), 6,91 - 6,86 (m, 1H), 5,34 (s, 2H), 2,25 (s, 3H).
Intermedio: 5-((5-((3-(benzofuran-6-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000048_0003
Se obtuvieron 493 mg de 5-((5-((3-(benzofuran-6-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (75 % de rendimiento) como un polvo amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98% de B (B = 100% de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,509 min., m/z 509,15 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 810,25 (s, 1H), 9,09 - 8,97 (m, 2H), 8,56 (t, J=2,0 Hz, 1H), 8,05 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,81 - 7,70 (m, 2H), 7,60 -7,51 (m, 2H), 7,37 - 7,29 (m, 3H), 7,22 (dd, J=7,9, 1,4 Hz, 1H), 7,03 (dd, J=2,2, 0,9 Hz, 1H), 5,51 (s, 2H), 5,41 (s, 2H), 2,27 (s, 3H).
Ejemplo de referencia 1018: Ácido 2-((4-((3-(benzofuran-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-2-metilpropanoico
Figure imgf000049_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 |jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-60 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue
4,9 mg (11 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 98 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-8) 89,02
(d, J=15,4 Hz, 2H), 8,51 (s a, 1H), 8,02 (s a, 1H), 7,73 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,53 (s a, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,32 -7,24 (m, 2H), 7,20 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,13 (s a, 1H), 7,02 (s a, 1H), 5,33 (m, 4H), 3,92 (s, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,27 (s, 6H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,85 min; IEN-MS(+) m/z = 596,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 594,6
(M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,86 min; IEN-MS(+) m/z = 596,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 594,6
(M- H).
Ejemplo de referencia 1019: Ácido (R)-2-((4-((3-(benzofuran-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000049_0002
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 10-50 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100% de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 45-85 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 8,2 mg (18% de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 98 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,03 (s, 1H), 8,98
(s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,72 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,47 (d, J=6,1 Hz, 1H), 7,32 -7,22
(m, 2H), 7,18 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 5,29 (s, 2H), 3,99 (s a, 2H), 3,88 (m, 1H), 3,56
(m, 1 H), 2,24 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,81 min; IEN-MS(+) m/z = 612,6 (M H), IEN-MS(-) m/z = 610,6
(M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,85 min; IEN-MS(+) m/z = 612,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 610,5
(M- H).
Ejemplo de referencia 1020: Ácido (S)-1-(4-((3-(benzofuran-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi) bencil)-2-metilpirrolidin-2-carboxílico
Figure imgf000050_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-60 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100% de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 40-80 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 7,3 mg (15% de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 96 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,03 - 8,95 (m, 2H), 8,45 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,72 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,48 (d, J=6,2 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,32 -7,23 (m, 2H), 7,19 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 5,27 (s, 2H), 3,82 (s a, 2H), 2,90 -2,77 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,16 (m, 1H), 1,79 - 1,59 (m, 3H), 1,30 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,95 min; IEN-MS(+) m/z = 622,6 (M H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,90 min; IEN-MS(+) m/z = 622,6 (M H).
Intermedio: (3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilfenil)metanol
Figure imgf000051_0001
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 10-60 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,71 g de (3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilfenil)metanol (98 % de rendimiento) como un sólido blanco.
RMN 1H (400 MHz, CDCla) 89,06 (s, 1H), 8,07 (d, J=1,2 Hz, 1H), 8,01 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,45 (dd, J=7,1, 1,5 Hz, 1H), 7,41 (dd, J=8,3, 1,7 Hz, 1H), 7,34 - 7,28 (m, 2H), 4,81 (d, J=5,6 Hz, 2H), 2,31 - 2,25 (s, 3H).
Intermedio: 4-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído
Figure imgf000051_0002
El producto en bruto se purificó en gel de sílice usando 0-60 % de acetato de etilo/hexano para dar 0,234 g de 4-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído (21 % de rendimiento) como un polvo amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100 % de B (B = 90 % de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto.
Tr de CLEM = 2,053 min., m/z 410,3 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 10,05 (s, 1H), 9,47 (s, 1H), 8,26 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,01 (d, J=1,4 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,55 (dd, J=7,2, 1,7 Hz, 1H), 7,45 (dd, J=8,3, 1,7 Hz, 1H), 7,40 -7,31 (m, 2H), 6,89 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 2,26 (s, 3H).
Intermedio: 5-((5-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000051_0003
Se obtuvieron 231 mg de 5-((5-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (81 % de rendimiento) como un sólido amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100% de B (B = 90% de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 2.037 min., m/z 526,3 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 810,25 (s, 1H), 9,47 (s, 1H), 9,05 (m, 2H), 8,57 (t, J=2,0 Hz, 1H), 8,26 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,02 (d, J=1,3 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,62 - 7,54 (m, 1H), 7,47 (dd, J=8,3, 1,7 Hz, 1H), 7.38 - 7,35 (m, 2H), 7,30 (s, 1H), 5,51 (s, 2H), 5,46 (s, 2H), 2,29 (s, 3H).
Ejemplo 1021: Ácido (R)-2-((4-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000052_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 |jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-60 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue
5,8 mg (12 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 99 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,45 (s, 1H), 9,04 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,24 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,56 - 7,49 (m, 2H), 7,44 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,31 (m, 2H), 7,13 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,31 (s, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,62 (m, 1H), 3,54 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,62 min; IEN-MS(+) m/z = 629,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 627,5
(M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,65 min; IEN-MS(+) m/z = 629,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 627,5
(M- H).
Ejemplo 1022: Ácido 2-((4-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi) bencil)amino)-2-metilpropanoico
Figure imgf000052_0002
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 30-70 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue
3,8 mg (8 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,46 (s, 1H), 9,04 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,25 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,56 - 7,49 (m, 1H), 7,44 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,14 (s, 1H), 5,34 (m, 4H), 3,90 (s, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,27 (s, 6H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final. Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 |jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,65 min; IEN-MS(+) m/z = 613,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 611,5 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,65 min; IEN-MS(+) m/z = 613,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 611,5 (M- H).
Ejemplo 1023: Ácido (S)-1-(4-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)-2-metilpirrolidin-2-carboxílico
Figure imgf000053_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 25-65 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 9,7 mg (20 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,45 (s, 1H), 9,00 (m, 2H), 8,45 (s, 1H), 8,24 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,56 - 7,48 (m, 1H), 7,44 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33 - 7,28 (m, 2H), 7,13 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 3,85 - 3,74 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,21 -2,12 (m, 1H), 1,79 - 1,60 (m, 3H), 1,29 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,78 min; IEN-MS(+) m/z = 639,6 (M H), IEN-MS(-) m/z = 637,6 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,68 min; IEN-MS(+) m/z = 639,6 (M H), IEN-MS(-) m/z = 637,5 (M- H).
Intermedio: 5-((5-((3-(1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-doro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000054_0001
A un tubo sellado pequeño se le añadieron 5-bromo-1H-bencimidazol (22,79 mg, 0,116 mmol), dioxano (1446 |jl), agua (482 jl), 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (50 mg, 0,096 mmol), carbonato de cesio (94 mg, 0,289 mmol), y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II) (2,82 mg, 3,86 jmol). El vial se selló y la mezcla se desgasificó/lavó abundantemente con nitrógeno x3. La mezcla se calentó a 90 °C durante la noche. La mezcla se enfrió y se concentró a casi sequedad, se recuperó en 4 ml de acetonitrilo y se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu empleando acetonitrilo/agua/0,1 % de ácido trifluoroacético donde el disolvente A fue 10 % acetonitrilo/90 % de agua/0,1 % de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10 % de agua/90 % acetonitrilo/0,1 % de ácido trifluoroacético con una columna XTERRA 5|j C1819x100 mm a un gradiente de 30-100 % de B y una velocidad de flujo de 25 ml/min. durante 15 minutos con una retención de 10 minutos para dar 21,4 mg (36% de rendimiento) de 5-((5-((3-(1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo, sal de TFA. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 jm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100 % de B (B = 90 % de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90% de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,472 min., m/z 509,4 (M H).
Ejemplo 1024: Ácido (R)-2-((4-((3-(1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000054_0002
A un vial se le añadieron DMF (1 ml), ácido acético (0,111 ml), 5-((5-((3-(1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo, TFA (21,4 mg, 0,034 mmol), 2-metil-D-serina (12,28 mg, 0,103 mmol), y complejo de borano-2-picolina (5,51 mg, 0,052 mmol). El vial se tapó y la mezcla se sacudió durante la noche a temperatura ambiente. El material en bruto se purificó mediante CL/e M preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 15-55 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100% de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 7 mg (33 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 98 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,04 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,53 - 7,43 (m, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,18 - 7,09 (m, 2H), 5,37 (s, 2H), 5,31 (s, 2H), 3,99 (s, 2H), 3,64 (m, 1 H), 3,57 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 1,25 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,31 min; IEN-MS(+) m/z = 612,6 (M H), IEN-MS(-) m/z = 610,6 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,32 min; IEN-MS(+) m/z = 612,5 (M H), IEN-MS(-) m/z = 610,5 (M- H).
Intermedio: 2-(5-bromo-1H-benzo[d]imidazol-1-il)-N,N-dimetiletanamina y 2-(6-bromo-1H-benzo[d]imidazol-1-il)-N,N-dimetiletanamina
Figure imgf000055_0001
A un RBF se le añadieron DMSO (3 ml), sal de HCl de 2-cloro-N,N-dimetiletanamina (219 mg, 1,523 mmol) y 5-bromo-1H-bencimidazol (250 mg, 1,269 mmol). La mezcla se enfrió a 0°C y se añadió hidróxido de sodio anhidro en polvo (228 mg, 5,71 mmol). El RBF se selló y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla en bruto se diluyó con 10ml de agua y se empujó a través de un cartucho Water HLB de 6 g. El cartucho se lavó abundantemente con 30 ml x2 de agua adicional. El producto se eluyó con 60 ml de metanol después se evaporó para dar 351,6 mg (93 % de rendimiento) de una mezcla 1:1 de 2-(5-bromo-1H-benzo[d]imidazol-1-il)-N,N-dimetiletanamina y 2-(6-bromo-1H-benzo[d] imidazol-1-il)-N,N-dimetiletanamina. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 1000 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05% de ácido trifluoroacético), (A = 100% de agua grado HPLC/0,05% de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 0,8 ml/minuto. Tr de CLEM = 0,694 min., m/z 267,9 y 269,9 (M H). RMN 1H (500 MHz, CDCls) 57,98 (m, 1H), 7,94 (d, J=1,7 Hz, 0,5H), 7,66 (m, 0,5H), 7,56 (d, J=1,7 Hz, 0,5H), 7,42 -7,35 (m, 1H), 7,27 (m, 0,5H), 4,21 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 2,33 -2,25 (m, 6H).
Intermedio: 5-((4-cloro-5-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo y 5-((4-cloro-5-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000055_0002
A un tubo sellado se le añadieron THF (3614 pl), agua (1205 pl), una mezcla 1:1 de 2-(5-bromo-1H-benzo[d]imidazol-1-il)-N,N-dimetiletanamina y 2-(6-bromo-1H-benzo[d]imidazol-1-il)-N,N-dimetiletanamina (110 mg, 0,370 mmol), 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (120 mg, 0,231 mmol), fosfato de potasio (147 mg, 0,694 mmol), y precatalizador XPhos de segunda generación (14,56 mg 0,019 mmol). El recipiente se selló, la mezcla se desgasificó/lavó abundantemente con nitrógeno y después se calentó durante la noche a 75 °C. La mezcla de reacción en bruto se recuperó en 8 ml de 1:1 DMF/metanol y se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu empleando acetonitrilo/agua/0,1 % de ácido trifluoroacético donde el disolventeA fue 10 % acetonitrilo/90 % de agua/0,1 % de ácido trifluoroacético y el disolventeB fue 10 % de agua/90 % acetonitrilo/0,1 % de ácido trifluoroacético con una columna XTERRA 5p C1830x100 mm a un gradiente de 20-100 % de B y una velocidad de flujo de 40 ml/min. durante 15 minutos con una retención de 10 minutos para dar 98,7 mg de una mezcla 1:1 de 5-((4-cloro-5-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo, 2TFA y 5-((4-cloro-5-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo, 2TFA. Los datos Cl/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente de 2-98 % de B (B = 100 % de acetonitrilo grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), (A = 100 % de agua grado HPLC/0,05 % de ácido trifluoroacético), durante 1,5 minutos con una retención de 0,5 minutos a una velocidad de 0,8 ml/minuto.
Tr de CLEM = 0,964 min., m/z 580,30 (M H).
Ejemplo 1025: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxipropanoico y Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxipropanoico
Figure imgf000056_0001
A un vial se le añadieron DMF (1 ml), ácido acético (0,100 ml), complejo de borano-2-picolina (3,97 mg, 0,037 mmol), D-serina (7,80mg, 0,074mmol), y una mezcla 1:1 de 5-((4-cloro-5-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo, 2 TFA y 5-((4-cloro-5-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo, 2 TFA. El vial se tapó y la mezcla se sacudió durante la noche a temperatura ambiente. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 metanol: agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 45-85 % de B durante 20 minutos con una retención de 5 minutos a 100% de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para dar 5,3mg (31 % de rendimiento, 98% de pureza) de una mezcla 1:1 de regioisómeros. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 59,02 (m, 2H), 8,52 (s a, 1H), 8,30 - 8,23 (m, 1H), 7,73 -7,65 (m, 1H), 7,58 - 7,52 (m, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,35 - 7,25 (m, 2H), 7,20 (d, J=7,3 Hz, 0,5H), 7,15 (m, 1,5H), 5,42 - 5,33 (m, 2H), 5,29 (s a, 2H), 4,36 (m, 2H), 4,02 -3,89 (m, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,07 (m, 1H), 2,71 -2,62 (m, 2H), 2,31 -2,12 (m, 9H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3,5 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3,5 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,30 min; IEN-MS(+) m/z = 669,1 (M H), IEN-MS(-) m/z = 667,2 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,89 min; IEN-MS(+) m/z = 669,1 (M H), IEN-MS(-) m/z = 667,2 (M- H).
Ejemplo 1026: Ácido 2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-2-metilpropanoico y Ácido 2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-2-metilpropanoico
Figure imgf000057_0001
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10m Mde acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 10-50 % de B durante 25 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para dar 4,2 mg (25 % de rendimiento, 97 % de pureza) de una mezcla 1:1 de regioisómeros. RMN 1H(500 MHz, DMsO-d6) 59,03 (m, 2H), 8,53 (s, 1H), 8,30 - 8,23 (m, 1H), 7,73 -7,66 (m, 1H), 7,61 - 7,52 (m, 2H), 7,49 (m, 1H), 7,35 -7,26 (m, 2H), 7,22 -7,11 (m, 2H), 5,34 (m, 4H), 4,41 - 4,32 (m, 2H), 3,88 (s, 2H), 2,73 - 2,62 (m, 2H), 2,36 - 2,05 (m, 9H), 1,26 (s, 6H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3,5 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3,5 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,49 min; IEN-MS(+) m/z = 667,7 (M H), IEN-MS(-) m/z = 665,7 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 2,43 min; IEN-MS(+) m/z = 667,8 (M H), IEN-MS(-) m/z = 665,3 (M- H).
Intermedio (R)-1-(2-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)etil)pirrolidin-3-ol
Figure imgf000057_0002
A 2-amino-4-bromofenol (980 mg, 5,21 mmol) en diclorometano (DCM) (20 ml) se le añadió, por goteo a temperatura ambiente, cloruro de 3-cloropropionilo (0,500 ml, 5,21 mmol). La mezcla rosa se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. A la mezcla del producto se le añadieron 5 ml de DCM y 0,5° equiv. (0,250 ml, 2,61 mmol) de cloruro de 3-cloropropionilo. Se continuó la agitación por 30minutos. Al producto en bruto se le añadieron, con agitación, 5 ml de bicarbonato de sodio acuoso saturado. La mezcla se agitó durante 5 minutos después se transfirió a un embudo separador. El producto se extrajo, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó para dar 1,46 g (99 % de rendimiento) de N-(5-bromo-2-hidroxifenil)-3-cloropropanamida. Los datos CL/e M se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100 % de B (B = 90 % de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10% de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10% de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,737 min., m/z 280,1 y 282,1 (M H). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 510,19 (s a, 1H), 9,40 (s, 1H), 8,12 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,08 (dd, J=8,5, 2,2 Hz, 1H), 6,82 (d, J=8,5 Hz, 1H), 3,85 (t, J=6,2 Hz, 2H), 2,93 (t, J=6,2 Hz, 2H).
A un tubo sellado pequeño se le añadieron N-(5-bromo-2-hidroxifenil)-3-doropropanamida (153 mg, 0,55 mmol) y ácido polifosfórico (5 ml). El tubo se selló y la mezcla se calentó por 4 horas a 130 °C. La mezcla se enfrió a 0 °C y se goteó hidróxido de amonio frío hasta pH 7. El producto se diluyó con 30 ml de acetato de etilo, se extrajo, se lavó con 15 ml de fosfato de potasio 1,5 M, agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó para dar 100,6 mg (70 % de rendimiento) de una mezcla 1:1 de 5-bromo-2-(2-cloroetil)benzo[d]oxazol y 5-bromo-2-vinilbenzo[d]oxazol. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: Columna Phenomenex Luna 3 pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100 % de B (B = 90 % de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,750 min., m/z 259,9 y 261,9 (M H) para el producto cloroetilo. RMN 1H (500 MHz, CDCh) 57,85 (m, 1H), 7,46 (m, 1H), 7,40 (m, 1H), 6,75 (dd, J=17,5, 11,2 Hz, 0,5H), 6,50 (d, J=17,5 Hz, 0,5H), 5,91 (d, J=11,2 Hz, 0,5H), 4,01 (t, J=6,9 Hz, 1H), 3,42 (t, J=6,9 Hz, 1H).
A la mezcla 1:1 de 5-bromo-2-(2-cloroetil)benzo[d]oxazol (50 mg, 0,192 mmol) y 5-bromo-2-vinilbenzo[d]oxazol (50 mg, 0,223 mmol) se le añadieron DMF (5 ml), carbonato de cesio (300 mg, 0,921 mmol), y clorhidrato de (R)-pirrolidin-3-ol (85 mg, 0,691 mmol). La mezcla se agitó a 50 °C por 20 h. La mezcla se enfrió y transfirió a un embudo de separación. Al producto en bruto se le añadieron 10 ml de agua y 25 ml de acetato de etilo, el producto se extrajo, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó para dar 60,8 mg (85 % de rendimiento) de (R)-1-(2-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)etil)pirrolidin-3-ol. Los datos CL/e M se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (|En ) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100% de B (B = 90% de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto.
Tr de CLEM = 1,218 min., m/z 312,1 (M H). RMN 1H (500 MHz, CDCla) 57,73 (m, 1H), 7,40 - 7,34 (m, 1H), 7,34 -7,29 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 3,08 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,77 (m, 1H), 2,71 - 2,57 (m, 2H), 2,37 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 1,70 (m, 1H).
Ejemplo 1027: (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(2-(2-(3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000058_0001
A un tubo sellado se le añadieron 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (79 mg, 0,152 mmol), THF (4,5 ml), agua (1,5 ml), (R)-1-(2-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)etil)pirrolidin-3-ol (84 mg, 0,228 mmol), fosfato de potasio tribásico (64,6 mg, 0,305 mmol y precatalizador XPhos de 2a generación (5,99 mg, 7,61 pmol). El recipiente se selló, la mezcla se desgasificó/lavó abundantemente con nitrógeno después se calentó durante la noche a 75 °C. La mezcla de reacción se enfrió, se concentró a un aceite, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. La mezcla de reacción en bruto se recuperó en 8 ml de 1:1 DMF/metanol y se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu empleando acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético donde el disolvente A fue 10% acetonitrilo/90 % de agua/0,1 % de ácido trifluoroacético y el disolvente B fue 10 % de agua/90 % acetonitrilo/0,1 % de ácido trifluoroacético con una columna Waters XTERRA 5 pm C1830x100 mm a un gradiente de 20-100 % de B y una velocidad de flujo de 25 ml/min. durante 10 minutos con una retención de 10 minutos para dar 55,7 mg (48 % de rendimiento) de (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(2-(2-(3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo, TFA. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100% de B (B = 90% de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto.
Tr de CLEM = 1,547 min., m/z 623,3 (M H). RMN 1H (500 MHz, THF-d8) 810,29 (m, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,82 (m, 1H), 7,63 - 7,56 (m, 1H), 7,55 -7,41 (m, 1H), 7,31 - 7,18 (m, 3H), 7,04 (m, 1H), 6,95 - 6,84 (m, 1H), 5,36 (m, 4H), 4,51 -4,46 (m, 1H), 3,76 (m, 1H), 3,63 - 3,51 (m, 4H), 3,05 (t, J=7,2 Hz, 1H), 2,88 (s, 1H), 2,77 (s, 1H), 2,30 (m, 4H), 1,73 (m, 1H).
Ejemplo 1028: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(2-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000059_0001
A un vial se le añadieron DMF (1,3 ml), ácido acético (0,130 ml), (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(2-(2-(3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo, TFA (48,6 mg, 0,066 mmol), 2-Metil-D-Serina (19,63 mg, 0,165 mmol) y complejo de borano-2-picolina (8,46 mg, 0,079 mmol). El vial se selló y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-60 % de B durante 15 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 7,5 mg (16 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,03 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,73 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,49 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,33 - 7,23 (m, 3H), 7,13 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 5,30 (s, 2H), 4,22 - 4,13 (m, 1H), 3,94 (s, 2H), 3,61 -3,58 (m, 1H), 3,52 -3,50 (m, 1H), 3,16 -3,08 (m, 2H), 2,96 -2,87 (m, 2H), 2,80 -2,73 (m, 1H), 2,62 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 2,23 (s, 3H), 2,00 -1,91 (m, 1H), 1,51 (m, 1H), 1,22 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,43 min; IEN-MS(+) m/z = 726,0 (M H), IEN-MS(-) m/z = 724,0 (M- H).
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,33 min; IEN-MS(+) m/z = 725,9 (M H), IEN-MS(-) m/z = 724,0 (M- H).
Ejemplo 1029: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(2-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000060_0001
El Ejemplo 1029 se preparó en una manera similar como el Ejemplo 1028. El material en bruto se purificó mediante CL/Em preparativa usando las siguientes condiciones: columna Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 15-65 % de B durante 25 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. El material se purificó adicionalmente usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético acetonitrilo:agua con 0,1 % TFA a un gradiente de 15-55 % de B durante 20 minutos con una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 3,2 mg como una sal de 2TFA, y su pureza estimada por análisis CLEM fue 96 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 89,01 (m, 2H), 8,46 (s, 1H), 7,74 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7,60 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,52 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,34 -7,25 (m, 3H), 7,14 (s, 1H), 5,35 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 4,18 (s a, 1H), 3,80 (d, J=14,0 Hz, 1H), 3,63 (d, J=14,0 Hz, 1H), 3,13 (m, 4H), 2,98 - 2,87 (m, 3H), 2,79 (dd, J=9,8, 6,1 Hz, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,38 (dd, J=9,5, 3,7 Hz, 1H), 2,33 - 2,27 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 1,95 (m, 1H), 1,86 - 1,68 (m, 2H), 1,50 (m, 4H), 1,41 -1,34 (m, 1H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,468 min; IEN-MS(+) m/z = 736,1 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,398 min; IEN-MS(+) m/z = 736,1 (m h )
Intermedio: 3-((6-bromopiridin-2-il)oxi)propan-1-ol
Figure imgf000060_0002
A una solución de 2,6-dibromopiridina (4,27 g, 18,03 mmol) y 5 equiv. de 1,3-propandiol (6,47 ml, 90 mmol) en DMF (30 ml), a 0 °C, se le añadieron por porciones hidruro de sodio al 60 % en aceite mineral (1,081 g, 27,0 mmol). La reacción se agitó durante 10 minutos a 0 °C, el baño de hielo se retiró, y la mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se enfrió nuevamente a 0 °C después se apagó con 5 ml de salmuera. El producto se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3), se empujó a través de un tapón de celite/sulfato de sodio y se evaporó durante la noche bajo una corriente de nitrógeno. El producto se purificó en gel de sílice usando 0-70 % de acetato de etilo en hexanos para dar 2,13 g de 3-((6-bromopiridin-2-il)oxi)propan-1-ol (38 % de rendimiento) como un aceite incoloro. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica ShimadzuMS (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100 % de B (B = 90 % de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,219 min., m/z 233,95 (M H), 95 % de pureza. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 87,43 (t, J=8,2 Hz, 1H), 7,07 (dd, J=8,2, 0,6 Hz, 1H), 6,69 (dd, J=8,2, 0,6 Hz, 1H), 4,49 (t, J=6,0 Hz, 2H), 3,76 (q, J=5,9 Hz, 2H), 2,11 -1,92 (m, 2H).
Intermedio: (R)-1 -(3-((6-bromopiridin-2-il)oxi)propM)pirroMdin-3-ol
Figure imgf000061_0001
A un vial de escintilación se le añadieron 3-((6-bromopiridin-2-il)oxi)propan-1-ol (100 mg, 0,431 mmol), DCM (2 ml), y trietilamina (0,066 ml, 0,474 mmol). La solución se enfrió a 0°C y se añadió cloruro de metansulfonilo (0,033 ml, 0,431 mmol). El vial se tapó, el baño de hielo se retiró, y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El vial se transfirió a un rotoevaporador Buchi, el disolvente se retiró, y el producto en bruto, metansulfonato de 3-((6-bromopiridin-2-il)oxi)propilo se obtuvo como un aceite tostado. Al aceite tostado aislado se añadió DMF (10 ml), 6 equiv. de clorhidrato de (R)-pirrolidin-3-ol (320 mg, 2,59 mmol), 5 equiv. de yoduro de sodio (323 mg, 2,155 mmol) y 10 equiv. de carbonato de potasio (596 mg, 4,31 mmol). El vial se tapó y la mezcla se agitó durante 7 h a 55 °C. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con 10 ml de agua y se empujó a través de un cartucho de extracción Waters 6 g HLB. El cartucho se lavó abundantemente con 20 ml de agua adicional, el producto se eluyó con 20 ml de metanol. La solución de metanol entonces se empujó a través de un cartucho Biotage 5 g SCX-2. El cartucho SCX se lavó abundantemente con 20 ml de metanol. El producto deseado se eluyó con 50 ml de 2 M amoníaco en metanol. Los volátiles se evaporaron bajo una corriente de nitrógeno para dar 60 mg de (R)-1-(3-((6-bromopiridin-2-il)oxi)propil)pirrolidin-3-ol (44 % de rendimiento) como un aceite ligeramente amarillo. Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica ShimadzuMS (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 um C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100% de B (B = 90% de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,059 min., m/z 302,95 (M H), 90 % de pureza. RMN 1H (500 MHz, CDCh) 8 7,41 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,04 (d, J=7,6 Hz, 1H), 6,67 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,41 - 4,30 (m, 3H), 2,93 (m, 1H), 2,73 (d, J=10,1 Hz, 1H), 2,65 - 2,59 (m, 2H), 2,52 (dd, J=10,0, 5,1 Hz, 1H), 2,33 - 2,25 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 2,02 - 1,92 (m, 2H), 1,80 -1,70 (m, 1H).
Intermedio: (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(6-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)pindin-2-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000061_0002
A un tubo sellado se le añadieron 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (52,5 mg, 0,101 mmol), THF (6 ml), agua (2,000 ml), (R)-1-(3-((6-bromopiridin-2-il)oxi)propil)pirrolidin-3-ol (27,7 mg, 0,092 mmol), fosfato de potasio, tribásico (48,8 mg, 0,230 mmol) y precatalizador X-Phos de segunda generación (3,62 mg, 4,60 pmol). El recipiente se selló, la mezcla se desgasificó/lavó abundantemente con nitrógeno, después se calentó durante la noche a 80 °C. La mezcla se enfrió y los volátiles se removieron bajo una corriente de nitrógeno. El sólido aceitoso resultante se recuperó en DCM, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó en nitrógeno para dar 66,6 mg de (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(6-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo como un sólido amarillo (83 %).
Los datos CL/EM se obtuvieron en una CL analítica Shimadzu/CL de Plataforma Micromass (IEN+) a 220 nm usando la siguiente serie de condiciones: columna Phenomenex Luna 3 pm C18, 2 x 30 mm, con un gradiente de 0-100 % de B (B = 90 % de acetonitrilo grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de agua grado HPLC), (A = 90 % de agua grado HPLC/0,1 % de ácido trifluoroacético/10 % de acetonitrilo grado HPLC), en 2 minutos con una retención de 1 minuto a una velocidad de 1 ml/minuto. Tr de CLEM = 1,480 min., m/z 614,25(M H). RMN 1H (500 MHz, CDCI3) 5 10,29 (s, 1H), 8,91 (m, 2H), 8,09 (m, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,66 (dd, J=8,4, 7,3 Hz, 1H), 7,50 - 7,39 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 6,97 (m, 1H), 6,73 (dd, J=8,3, 0,7 Hz, 1H), 6,65 (s, 1H), 5,29 - 5,22 (m, 4H), 4,39 (t, J=6,5 Hz, 2H), 4,32 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 2,73 (m, 1H), 2,64 (t, J=7,3 Hz, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,28 (m, 1H), 2,23 -2,12 (m, 1H), 2,04 -1,94 (m, 2H), 1,73 (m, 1H).
Ejemplo 1030: Ácido (S)-1 -(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(6-(3-((R)-3-hidroxipirroMdin-1-il) propoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)bencM)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000062_0001
A un vial se le añadieron (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(6-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (34 mg, 0,055 mmol), ácido L-pipecólico (10,74 mg, 0,083 mmol), DMF (1 ml), AcOH (0,111 ml) y complejo de borano-2-picolina (11,86 mg, 0,111 mmol). El vial se tapó y la mezcla se sacudió durante la noche a temperatura ambiente. El producto en bruto se purificó mediante CL/e M preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-75 % de B durante 30 minutos con una retención de 5 minutos a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto, ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(6-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico, fue 4,4 mg (10,4%), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 95,5 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 59,00 (m, 2H), 8,46 (s, 1H), 7,79 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,40 -7,35 (m, 1H), 7,34 -7,27 (m, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,06 (d, J=7,3 Hz, 1H), 6,79 (d, J=8,2 Hz, 1H), 5,34 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 4,29 (t, J=6,7 Hz, 2H), 4,21 - 4,10 (m, 1H), 3,77 (d, J=13,7 Hz, 1H), 3,06 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,48 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,29 (m, 2H), 2,22 (m, 1H), 2,03 - 1,89 (m, 2H), 1,89 - 1,82 (m, 6H), 1,49 (m, 4H), 1,34 (m, 1H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,358 min; IEN-MS(+) m/z = 727,1 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,383 min; IEN-MS(+) m/z = 727,1 (m h )
Ejemplo 1031: (R)-5-((4-cloro-2-(hidroximetil)-5-((3-(6-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000063_0001
El Ejemplo 1031 se aisló a partir de la mezcla de reacción para el Ejemplo 1030. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 20-75 % de B durante 30 minutos con una retención de 5 minutos a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 4,6 mg (11 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 95 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 88,96 (m, 2H), 8,38 (s, 1H), 7,85 -7,69 (m, 1H), 7,49 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,42 - 7,30 (m, 2H), 7,30 - 7,21 (m, 1H), 7,11 - 6,97 (m, 2H), 6,78 (d, J=7,9 Hz, 1H), 5,32 (s, 2H), 5,25 (s, 2H), 4,47 (s, 2H), 4,27 (m, 2H), 3,88 (m, 1 H), 2,70 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,31 (m 4H), 1,95 (m 1H), 1,86 (m, 5 H), 1,51 (m, 1 H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,599 min; IEN-MS(+) m/z = 616,1 (M H) Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,598 min; IEN-MS(+) m/z = 616,1 (m h )
Intermedio: (2-metil-3-(quinoxalin-6-il)fenil)metanol
Figure imgf000063_0002
Se obtuvo (2-metil-3-(quinoxalin-6-il)fenil)metanol a partir del acoplamiento entre 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)quinoxalina y (3-bromo-2-metilfenil)metanol a temperatura ambiente usando el precatalizador XPhos de 2a generación y fosfato de potasio acuoso 0,5 M, tribásico en t Hf .
RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 88,93 - 8,89 (m, 2H), 8,18 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,07 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,78 (dd, J=8,7, 1,9 Hz, 1H), 7,51 (dd, J=7,2, 1,6 Hz, 1H), 7,39 -7,31 (m, 2H), 4,85 (d, J=5,5 Hz, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,72 (t, J=5,6 Hz, 1H).
Intermedio: 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)benzaldehído
Figure imgf000064_0001
Se obtuvo 5-doro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)benzaldehído a partir de la reacción entre (2-metil-3-(quinoxalin-6-il)fenil)metanol y 5-doro-2,4-dihidroxibenzaldehído usando azodicarboxilato de diisopropilo y trifenilfosfina en THF. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 811,47 (s, 1H), 9,77 -9,71 (m, 1H), 8,95 -8,88 (m, 2H), 8,20 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,09 (d, J=1,8 Hz, 1H), 7,80 (dd, J=8,7, 1,9 Hz, 1H), 7,62 - 7,55 (m, 2H), 7,44 - 7,35 (m, 2H), 6,68 (s, 1H), 5,27(m, 2H), 2,34 (s, 3H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000064_0002
Se obtuvo 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo a partir de la reacción entre 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)benzaldehído y 5-(clorometil)nicotinonitrilo usando carbonato de cesio en DMF.
Ejemplo 1032: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000064_0003
Se obtuvo ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico a partir de la reacción entre 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo y ácido (S)-piperidin-2-carboxílico usando TFA y triacetoxiborohidruro de sodio en DMF. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 25-65% de B durante 15 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,01 (d, J=2,7 Hz, 4H), 8,47 (s, 1H), 8,19 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,03 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,87 (dd, J=8,5, 1,5 Hz, 1H), 7,62 - 7,57 (m, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,41 - 7,35 (m, 2H), 7,15 (s, 1H), 5,40 - 5,34 (m, 2H), 5,32 (s, 2H), 3,79 (d, J=13,7 Hz, 1H), 3,62 (d, J=14,0 Hz, 1H), 3,14 (dd, J=7,3, 4,3 Hz, 1H), 2,93-2,85 (m, 1H) 2,34 -2,24 (m, 4H), 1,84 - 1,68 (m, 2H), 1,49 (s a, 3H), 1,37 (s a, 1H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100 % de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 1 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 |jm; fase móvil A: 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio;
Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100% de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 0,5 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
CLEM (condición de Inyección 1: acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr (Tiempo de retención) =1,65 min, IEN m/z 634(M+1), 632 (M-1).
CLEM (condición de Inyección 2: metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=2,52 min, IEN m/z 634 (M+1), 632 (M-1).
Ejemplo 1033: Ácido (R)-1-(5-cloro-2-((5-cianopindin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000065_0001
Se obtuvo ácido (R)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico a partir de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo y ácido (R)-piperidin-2-carboxílico en una manera similar como el Ejemplo 1001. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 jm ; fase móvil A:
5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 25-65 % de B durante 15 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min.
Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga.
RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,01 (d, J=2,7 Hz, 4H), 8,47 (s, 1H), 8,19 (d, J=8,9 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,87 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,61 - 7,57 (m, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,42 - 7,35 (m, 2H), 7,15 (s, 1H), 5,40 - 5,30 (m, 4H), 3,79 (d, J=13,7 Hz, 1H), 3,62 (d, J=13,7 Hz, 1H), 3,14 (dd, J=7,3, 4,0 Hz, 1H), 2,93-2,85 (m, 1H), 2,34 -2,25 (m, 4H), 1,85 - 1,68 (m, 2H), 1,49 (s a, 3H), 1,37 (s a, 1H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 jm ; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100 % de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 1 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 jm ;
Figure imgf000065_0002
ase móvil A: 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100% de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 0,5 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
CLEM (condición de Inyección 1: acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=1,60 min, IEN m/z 634 (M+1), 632 (M-1).
CLEM (condición de Inyección 2: metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=2,52 min, IEN m/z 634 (M+1), 632 (M-1).
Ejemplo 1034: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxipropanoico
Figure imgf000066_0001
Se obtuvo ácido (R)-2-((5-doro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxipropanoico a partir de 5-((4-doro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo y ácido (R)-2-amino-3-hidroxipropanoico en una manera similar como el Ejemplo 1001. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 20-60 % de B durante 15 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 89,07 -8,99 (m, 4H), 8,54 (s, 1H), 8,20 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,03 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,87 (dd, J=8,5, 1,8 Hz, 1H), 7,59 (d, J=6,7 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,42 -7,35 (m, 2H), 7,18 (s, 1H), 5,43 -5,33 (m, 4H), 4,07 -3,98 (m, 2H), 3,74 (dd, J=11,3, 4,3 Hz, 1H), 3,67-3,61 (m, 1H), 3,22 -3,17 (m, 1H), 2,32 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100 % de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 1 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100% de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 0,5 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
CLEM (condición de Inyección 1: acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=1,73 min, IEN m/z 610 (M+1), 608 (M-1).
CLEM (condición de Inyección 2: metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=2,47 min, IEN m/z 610 (M+1), 608 (M-1).
Ejemplo 1035: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000066_0002
Se obtuvo ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico a partir de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo y ácido (R)-2-amino-3-hidroxi-2-metilpropanoico en una manera similar como el Ejemplo 1001. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 15-55 % de B durante 15 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,04 (d, J=1,5 Hz, 1H), 9,03 -8,98 (m, 3H), 8,52 (s, 1H), 8,19 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,02 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,86 (dd, J=8,5, 1,5 Hz, 1H), 7,60 -7,54 (m, 2H), 7,42 - 7,34 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 5,36 (d, J=11,6 Hz, 4H), 3,95 (s, 2H), 3,63 - 3,58 (m, 1H), 3,53 (d, J=11,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 1,23 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 |jm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100 % de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 1 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 jm ; fase móvil A: 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100% de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 0,5 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
CLEM (condición de Inyección 1: acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=1,54 min, IEN m/z 624 (M+1), 622 (M-1).
CLEM (condición de Inyección 2: metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=2,50 min, IEN m/z 624 (M+1), 622 (M-1).
Ejemplo 1036: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopindin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000067_0001
Se obtuvo ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico a partir de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo y ácido (S)-2-amino-3-hidroxi-2-metilpropanoico en una manera similar como el Ejemplo 1001. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 jm ; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 15-55 % de B durante 15 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,04 (d, J=1,5 Hz, 1H), 9,03 -8,99 (m, 3H), 8,52 (s, 1H), 8,19 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,02 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,86 (dd, J=8,5, 1,5 Hz, 1H), 7,59 -7,55 (m, 2H), 7,41 - 7,34 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 5,36 (d, J=11,6 Hz, 4H), 3,95 (s, 2H), 3,63 - 3,59 (m, 1H), 3,53 (d, J=11,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 jm ; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100 % de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 1 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters BEH C18, 2,0 x 50 mm, partículas de 1,7 jm ; fase móvil A: 5:95 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0 %B, 0-100% de B durante 3 minutos, después una retención de 0-5 minutos a 100 % B; Flujo: 0,5 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
CLEM (condición de Inyección 1: acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=1,62 min, IEN m/z 624 (M+1), 622 (M-1).
CLEM (condición de Inyección 2: metanol:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=2,50 min, IEN m/z 624 (M+1), 622 (M-1).
Intermedio: 3-bromo-1-(3-cloropropil)piridin-2(1H)-ona y 3-bromo-1-(3-bromopropil)piridin-2(1H)-ona
Figure imgf000068_0001
A una solución de 3-bromopiridin-2(1H)-ona (500 mg, 2,87 mmol) en DMF (13 ml) se le añadió K2CO3 (794 mg, 5,75 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, después se añadió 1-bromo-3-cloropropano (0,283 ml, 2,87 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 50 °C por 19 h. El disolvente se retiró. El residuo se disolvió en DCM. La capa orgánica se lavó con agua, salmuera y se secó sobre MgSO4, y después se concentró. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc en DCM (de 0-50%) para proporcionar la mezcla del compuesto objetivo (352 mg, 49%). RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 87,77 (dd, J=7,3, 1,9 Hz, 1H), 7,39 -7,35 (m, 1H), 6,11 (t, J=6,9 Hz,1H), 4,22 -4,15 (m, 2H), 3,61 -3,54 (m, 1,5H), 3,42 (t, J=6,1 Hz, 0,5H), 2,41 -2,35 (m, 0,5H), 2,30 (dt, J=12,4, 6,4 Hz, 1,5H). Con base en el espectro de RMN 1H: 3-bromo-1-(3-cloropropil)piridin-2(1H)-ona fue 75 % y 3-bromo-1-(3-bromopropil)piridin-2(1H)-ona (76) fue 25 %.
Intermedio: 5-((4-cloro-5-((3-(1-(3-cloropropil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000068_0002
Se obtuvo 5-((4-cloro-5-((3-(1-(3-cloropropil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo a partir del acoplamiento de la mezcla de 3-bromo-1-(3-cloropropil)piridin-2(1H)-ona y 3-bromo-1-(3-bromopropil)piridin-2(1H)-ona con 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo usando precatalizador XPhos de 2a generación y fosfato de potasio acuoso 0,5 M, tribásico en THF. RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 810,32 - 10,27 (m, 1H), 8,97 (d, J=2,0 Hz, 1H), 8,88 (d, J=1,9 Hz, 1H), 8,19 (t, J=2,0 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,46 (dd, J=6 ,8, 2,0 Hz, 1H), 7,40 (dd, J=6 ,8, 2,0 Hz, 1H), 7,38 -7,35 (m, 1H), 7,27 -7,22 (m, 1H), 7,22 -7,18 (m, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,34 (t, J=6,8 Hz, 1H), 5,27 (d, J=6,0 Hz, 2H), 5,17 (s, 2H), 4,24 - 4,17 (m, 2H), 3,61 (t, J=6,1 Hz, 2H), 2,33 - 2,25 (m, 5H).
Intermedio: (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(1-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000068_0003
Una mezcla agitada de 5-((4-cloro-5-((3-(1-(3-cloropropil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (304 mg, 0,540 mmol) (77), (R)-pirrolidin-3-ol, HCl (100 mg, 0,811 mmol) y K2CO3 (112 mg, 0,811 mmol), yoduro de sodio (81 mg, 0,540 mmol) en Dm F (8 ml) se calentó a 60 °C por 6 h. El disolvente se retiró. El residuo se dividió entre EtOAc y agua. La fase acuosa se extrajo una vez con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron y se lavaron con salmuera y después se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró por filtración y el disolvente se retiró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna en gel de sílice (Biotage 25s, 0-20 % de MeOH/DCM) para obtener 145 mg del compuesto objetivo. RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 810,29 (s, 1H), 8,98 (d, J=2,0 Hz, 1H), 8,87 (d, J=1,9 Hz, 1H), 8,22 (t, J=2,0 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,47 - 7,46 (m, 1H), 7,39 - 7,34 (m, 2H), 7,26 - 7,17 (m, 2H), 6,46 - 6,44 (m, 1H), 6,32 -6,28 (m, 1H),5,37 (s a, 2H), 5,16 (s, 2H), 4,34 (ddt, J=7,0, 4,7, 2,1 Hz, 1H), 4,12 (t, J=6,9 Hz, 2H), 2,91 (td, J=8,6 , 4,8 Hz, 1H), 2,72 (d, J=9,9 Hz, 1H), 2,55 -2,47 (m, 3H), 2,31 -2,24 (m, 4H), 2,22 -2,14 (m, 1H), 2,05 - 1,96 (m, 2H), 1,75 (dt, J=13,5, 6,7 Hz, 1H).
Ejemplo 1037: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000069_0001
Se obtuvo ácido 2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico a partir del acoplamiento de (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(1-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo y ácido (S)-2-amino-3-hidroxi-2-metilpropanoico usando complejo de borano-2-picolina y ácido acético en MeOH. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 5-45 % de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9,04 (d, J=1,8 Hz, 1H), 9,00 (d, J=1,8 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,73 (dd, J=6,8, 2,0 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,43 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,35 (dd, J=6,6, 1,8 Hz, 1H), 7,22 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,13 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,32 (t, J=6,8 Hz, 1H), 5,34 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 4,17 (s a, 1H), 4,01 -3,94 (m, 4H),, 2,72 -2,65 (m, 1H), 2,57 -2,53 (m, 2H), 2,45 -2,35 (m, 3H), 2,29 (dd, J=9,5, 3,3 Hz, 1H),2,16-212 (m,1H), 2,14 (s, 3H), 2,00 - 1,92 (m, 1H), 1,85 - 1,75 (m, 2H), 1,53 (dd, J=8,4, 4,8 Hz, 1H), 1,23(s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos, después a una retención de 0,75 minuto a 100 % B; Flujo: 1,0 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos, después a una retención de 0,75 minuto a 100 % B; Flujo: 1,0 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
CLEM (condición de Inyección 1: acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=1,185 min, IEN m/z 716 (M+1), 714 (M-1).
CLEM (condición de Inyección 2: acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético) Tr=1,182 min, IEN m/z 716 (M+1), 714 (M-1).
Ejemplo 1038: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000070_0001
Se obtuvo ácido (R)-2-((5-doro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico a partir de la reacción entre (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(1-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo y ácido (R)-2-amino-3-hidroxi-2-metilpropanoico en una manera similar como el Ejemplo 1006. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 5-45 % de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,04 (d, J=1,8 Hz, 1H), 9,00 (d, J=1,8 Hz, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,73 (dd, J=6,8, 2,0 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,43 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,35 (dd, J=6,6, 2,2 Hz, 1H), 7,22 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,12 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,32 (t, J=6,8 Hz, 1H), 5,34 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 4,17 (s a, 1H), 4,01 -3,94 (m, 4H), 2,69 (dd, J=9,5, 6,2 Hz, 1H), 2,56 -2,53 (m, 2H), 2,43 -2,36 (m, 3H), 2,28 (dd, J=9,5, 3,7Hz, 1H), 2,16 -2,11 (m, 1H), 2,14(s, 3H), 2,01 -1,93 (m, 1H), 1,85 - 1,75 (m, 2H), 1,58 - 1,49 (m, 1H), 1,23 (s, 3H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos, después a una retención de 0,75 minuto a 100 % B; Flujo: 1,0 ml/min; Detección: UV a 220 nm. Condiciones de inyección 2: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos, después a una retención de 0,75 minuto a 100 % B; Flujo: 1,0 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
CLEM (condición de Inyección 1: acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=1,203 min, IEN m/z 716 (M+1), 714 (M-1).
CLEM (condición de Inyección 2: acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético) Tr=1,158 min, IEN m/z 716 (M+1), 714 (M-1).
Ejemplo 1039: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000070_0002
Se obtuvo ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico a partir de (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(1-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo y ácido (S) piperidin-2-carboxílico de una manera similar como el Ejemplo 1006. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 10-50 % de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,01 (s, 2H), 8,46 (s, 1H), 7,74 (d, J=4,8 Hz, 1H), 7,47 -7,42 (m, 2H), 7,37 - 7,34 (m, 1H), 7,23 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,13 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,32 (t, J=6,8 Hz, 1H), 5,33 (s, 2H), 5,25 (s, 2H), 4,17 (s a, 1H), 4,02 -3,95 (m, 2H), 3,85 (d, J=13,6 Hz, 1H), 3,68 (d, J=13,6 Hz, 1H), 3,19 -3,11 (m, 1H), 2,95-2,87 (m,1H), 2,69 (dd, J=9,7, 6,4 Hz, 1H), 2,55 (m, 2H), 2,45 - 2,36 (m, 3H), 2,32 - 2,26 (m, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,01 - 1,93 (m, 1H), 1,82 (t, J=6,6 Hz, 3H), 1,75-1,64 (m,1H), 1,50 (s a, 4H), 1,37 (s a, 1H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos, después a una retención de 0,75 minuto a 100 % B; Flujo: 1,0 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos, después a una retención de 0,75 minuto a 100 % B; Flujo: 1,0 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
CLEM (condición de Inyección 1: acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=1,218 min, IEN m/z 726 (M+1), 724 (M-1).
CLEM (condición de Inyección 2: acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético) Tr=1,218 min, IEN m/z 726 (M+1), 724 (M-1).
Ejemplo 1040: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxipropanoico
Figure imgf000071_0001
Se obtuvo ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxipropanoico a partir de (R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(1-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo y ácido (S)-2-amino-3-hidroxipropanoico en una manera similar como el Ejemplo 1006. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 15-50 % de B durante 15 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. RMN 1H(500 MHz, DMSO-d6) 89,04 (d, J=1,5Hz, 1H), 9,01 (d, J=1,8 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,73 (dd, J=6,6, 1,8 Hz, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,43 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,35 (dd, J=6,8, 2,0 Hz, 1H), 7,23 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,13 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,32 (t, J=6,8 Hz, 1H), 5,34 (d, J=7,3 Hz, 2H), 5,27 (s, 2H), 4,17 (s a, 1H), 4,05 - 3,94 (m, 4H), 3,73 - 3,67 (m, 1H), 3,64 - 3,58 (m, 1H), 3,17 - 3,12 (m, 1H), 2,75 - 2,67 (m, 1H), 2,59 - 2,53 (m, 1H), 2,46 - 2,38 (m, 3H), 2,30 (dd, J=9,5, 3,7 Hz, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,00 - 1,92 (m, 1H), 1,82 (t, J=7,2 Hz, 2H), 1,58 - 1,50 (br, s, H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos, después a una retención de 0,75 minuto a 100 % B; Flujo: 1,0 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 |jm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos, después a una retención de 0,75 minuto a 100 % B; Flujo: 1,0 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
CLEM (condición de Inyección 1: acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio) Tr=1,161 min, IEN m/z 702 (M+1), 700 (M-1).
CLEM (condición de Inyección 2: acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético) Tr=1,158 min, IEN m/z 702 (M+1), 700 (M-1).
Ejemplo 1041: Ácido (S)-1-(4-((3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000072_0001
A un tubo sellado pequeño se le añadieron THF (2 ml), agua (0,667 ml), 5-bromobenzoxazol (13,16 mg, 0,066 mmol), ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico (35 mg, 0,055 mmol), fosfato de potasio, tribásico (23,51 mg, 0,111 mmol) y precatalizador XPhos de segunda generación (2,179 mg, 2,77 |jmol). El recipiente se selló, la mezcla se desgasificó/lavó abundantemente con nitrógeno y después se calentó durante la noche a 75 °C.
El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 25-65 % de B durante 15 minutos después una retención de 5 minutos a 100 % de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa usando las siguientes condiciones: Waters XBridge 5 jm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a un gradiente de 25-65 % de B durante 15 minutos después una retención de 5 minutos a 100% de B a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El rendimiento del producto fue 4,2 mg (12 % de rendimiento), y su pureza estimada por análisis CLEM fue 95 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,93 (m, 2H), 8,71 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,78 (m, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,51 -7,46 (m, 1H), 7,44 -7,32 (m, 1H), 7,30 -7,11 (m, 2H), 7,03 (m, 1H), 6,54 (m, 1H), 5,28 (m, 2H), 5,17 (m, 2H), 3,71 (d, J=13,7 Hz, 1H), 3,49 (d, J=13,7 Hz, 1H), 3,04 -2,97 (m, 1H), 2,89 -2,80 (m, 1H), 2,25 -2,18 (m, 4H), 1,70 (m, 2H), 1,43 (m, 3H), 1,34 -1,23 (m, 1H).
Dos inyecciones CL/EM analíticas se usaron para determinar la pureza final.
Condiciones de inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condiciones de inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético a una temperatura de 50 °C a un gradiente de 0-100 % de B durante 3 minutos con una retención de 0,75 minuto a 100 % de B a una velocidad de flujo de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,696 min; IEN-MS(+) m/z = 623,0 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,874 min; IEN-MS(+) m/z = 623,1 (m h )
Los Ejemplos 2001 hasta 2016 se prepararon como se describe abajo, y las condiciones de HPLC CL/EM empleadas para estos ejemplos son listadas bajo:
Condición de CL/EM A:
Columna = Waters Aquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 jm
Inicio % de B = 2; Final % de B = 98
Tiempo de Gradiente = 1,5 min; Tiempo de Detención = 2 o 2,5 min
Velocidad de Flujo = 0,8 ml/min; Longitud de onda = 220 nm o 254 nm
Disolvente A = 100 % de agua/0,05 % de TFA
Disolvente B = 100 % de ACN/0,05 % de TFA, (ACN = acetonitrilo)
Temp. del Horno = 40 °C
Condición de CL/EM B:
Columna = Phenomenex-Luna C18, 2,0 X 50 mm, 3 pm
Inicio % de B = 0; Final % de B = 100
Tiempo de Gradiente = 4 min; Tiempo de Detención = 5 o 6 min
Velocidad de Flujo = 0,8 ml/min; Longitud de onda = 220 nm o 254 nm
Disolvente A = 5 % de ACN/95 % de agua/10 mM NH4OAc
Disolvente B = 95 % de ACN/5 % de agua/10 mM NH4OAc
Temp. del Horno = 40 °C
Condición de CL/EM C:
Columna = ACQUITY UPLC BEH, C182,1 X 50 mm, 1,7 pm Inicio % de B = 0; Final % de B = 100
Tiempo de Gradiente = 2 min; Tiempo de Detención = 3 min
Velocidad de Flujo = 0,8 ml/min; Longitud de onda = 220 nm o 254 nm
Disolvente A = 10 % de MeOH/90 % de H2O/0,1 % de TFA
Disolvente B = 90 % de MeOH/10 % de H2O/0,1 % de TFA
Temp. del Horno = 40 °C
Condición de CL/EM D:
Columna = Waters Aquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm
Inicio % de B = 2; Final % de B = 98
Tiempo de Gradiente = 1,5 min; Tiempo de Detención = 1,6 min
Velocidad de Flujo = 0,8 ml/min; Longitud de onda = 220 nm o 254 nm
Disolvente A = 100 % de agua/0,05 % de TFA
Disolvente B = 100 % de ACN/0,05 % de TFA
Temp. del Horno = 50 °C
Condición de CL/EM E:
Columna = Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm
Inicio % de B = 0; Final % de B = 100
Tiempo de Gradiente = 3 min; Tiempo de Detención = 3,75 min
Velocidad de Flujo = 1,0 ml/min; Longitud de onda = 220 nm
Disolvente A = 5 % de ACN/95 % de agua/10 mM NH4OAc
Disolvente B = 95 % de ACN/5 % de agua/10 mM NH4OAc
Temp. del Horno = 50 °C
Condición de CL/EM F:
Columna = Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm
Inicio % de B = 0; Final % de B = 100
Tiempo de Gradiente = 3 min; Tiempo de Detención = 3,75 min
Velocidad de Flujo = 1,0 ml/min; Longitud de onda = 220 nm
Disolvente A = 5 % de ACN/95 % de agua/0,1 % de TFA
Disolvente B = 95 % de ACN/5 % de agua/0,1 % de TFA
Temp. del Horno = 50 °C
Intermedio: 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)benzaldehído
Figure imgf000073_0001
Una solución magnéticamente agitada de (2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)metanol (8,0 g, 32,2 mmol), 5-cloro-2,4-dihidroxibenzaldehído (5,56 g, 32,2 mmol), y trifenilfosfina (11,4 g, 43,5 mmol) en THF anhidro recientemente destilado (250 ml) se enfrió en un baño de hielo/agua y se trató lentamente (durante 30 min) con DIAD (azodicarboxilato de diisopropilo, 8,0 ml, 41,1 mmol). La reacción se lavó abundantemente con argón, se selló, y se dejó agitar durante la noche mientras se calienta lentamente a temperatura ambiente. La reacción se evaporó al vacío a un aceite espeso y después se aplicó en CH2Ch/hex a la cabeza de una columna de Sílice Instantánea de 120 g Teledyne Isco y se purificó en Biotage usando un gradiente de 100 % de Hexanos hasta 40 % de EtOAc en hexanos sobre 12 volúmenes de col (volúmenes de columna). Las fracciones que contenían el producto se evaporaron al vacío y se secaron en alto vacío para dar 5,5 g (42 %) del compuesto del título puro como un sólido blanco: RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 811,43 (s, 1H), 9,71 (s, 1H), 7,80 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,60 - 7,47 (m, 2H), 7,25 (t, J=7,5 Hz, 1H), 6,61 (s, 1H), 5,19 (s, 2H), 2,59 (s, 3H), 1,39 (s, 12H).
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000074_0001
A una solución magnéticamente agitada de 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)benzaldehído (2,76 g, 6,85 mmol) en DMF anhidro (40 ml) se le añadió 5-(clorometil)nicotinonitrilo (1,26 g, 8,26 mmol), seguido por carbonato de cesio (3,35 g, 10,28 mmol). La reacción se lavó abundantemente también con N2, se tapó de manera segura, y se colocó en un baño de aceite a 75 °C. Después de 2,75 h, la reacción se enfrió y se dividió con EtOAc (200 ml) y agua (150 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc adicional (200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, y evaporaron al vacío. El residuo se disolvió en CH2Ch (15 ml), aplicó a la cabeza de una Columna Instantánea de Sílice Teledyne Isco de 80 g y se purificó en Biotage usando un gradiente de 100 % de CH2Ch hasta 25 % de EtOAc/CH2Ch sobre 8 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron al vacío después se secaron en alto vacío para dar 1,92 g (54%) del compuesto del título puro como un sólido blanquecino: RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 810,29 (s, 1H), 8,91 (dd, J=11,7, 2,1 Hz, 2H), 8,07 (t, J=2,1 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,81 (dd, J=7,5, 1,2 Hz, 1H), 7,47 (d, J=6,6 Hz, 1H), 7,24 (t, J=7,6 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,24 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 2,60 (s, 3H), 1,39 (s, 12H).
Intermedio: 4-bromo-3-cloro-2-(3-(piperidin-1-il)propoxi)piridina
Figure imgf000074_0002
A una suspensión de hidruro de sodio (74,1 mg, 3,09 mmol) en DMF anhidro (5 ml) en un chorro de argón continuo se le añadió lentamente 3-(piperidin-1-il)propan-1-ol (440 mg, 3,07 mmol). La reacción se agitó durante 10 min, después se trató con 4-bromo-2,3-dicloropiridina sólida (655 mg, 2,89 mmol) en porciones durante 1 min. La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente por 3 h, se filtró a través de una frita de 0,45 uM, y se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa usando una columna a Sunfire C1810uM 50x300 mm con desde 10 % de Disolvente B hasta 100 % de Disolvente B durante 30 min a 150 ml/min con detección a 220 nM (el disolvente A es 10 % de MeOH/90 % de agua con 0,1 % de TFA y el Disolvente B es 90 % de MeOH y 10 % de agua con 0,1 % de TFA) para dar el compuesto del título puro como una sal de TFA (151,5 mg, 9 %); RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 87,86 (d, J=5,3 Hz, 1H), 7,21 (d, J=5,3 Hz, 1H), 4,47 (t, J=5,7 Hz, 2H), 3,79 (br d, J=11,7 Hz, 2H), 3,37 - 3,25 (m, 2H), 2,83 -2,67 (m, 2H), 2,39 - 2,25 (m, 2H), 2,04 - 1,89 (m, 5H), 1,56 - 1,40 (m, 1H)
Intermedio: 5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-2-(3-(piperidin-1-il)propoxi)piridin-4-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000075_0001
A una solución de 4-bromo-3-cloro-2-(3-(piperidin-1-il)propoxi)piridina, 2 TFA (86,3 mg, 0,154 mmol) y 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (90 mg, 0,173 mmol) en THF anhidro (7 ml) se le añadió fosfato de potasio tribásico, 0,5 M en agua (0,8 ml, 0,400 mmol). La reacción se lavó abundantemente también con argón y después se trató con precatalizador X-phos de 2a generación (17 mg, 0,022 mmol). La mezcla resultante se lavó nuevamente a chorro con argón, se tapó de manera segura, y se dejó agitar a temperatura ambiente por 3,5 días. El disolvente se retiró bajo una corriente suave de N2 y el residuo se dividió con agua (100 ml) y EtOAc (75 ml). La capa orgánica se extrajo con salmuera (40 ml) se secó sobre Na2SO4 se filtró y el disolvente se retiró al vacío para dar el compuesto del título que se usó en bruto. Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 1,104 min; m/e = 645, (tiempo de ret. = tiempo de retención).
Intermedio: 3-((2,3-dicloropiridin-4-il)oxi)propan-1-ol
Figure imgf000075_0002
A propano-1,3-diol puro (4 g, 52,6 mmol) en argón se le añadió hidruro de sodio (68 mg, 2,75 mmol). La reacción (muy caliente) se lavó abundantemente en N2, después se trató con 4-bromo-2,3-dicloropiridina (500 mg, 2,204 mmol) seguido por THF anhidro (5 ml). La reacción se lavó abundantemente con argón, se tapó de manera segura y se dejó agitar a temperatura ambiente por 2 días. La reacción se vertió en agua (150 ml) que contiene HCl 1 N (1 ml) y se dividió con EtOAc (200 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (23 x 70 ml), salmuera (75 ml), se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se retiró al vacío. El material en bruto se aplicó en CH2Ch a la cabeza de una Columna Instantánea de Sílice Teledyne Isco de 80 g y se purificó en Biotage usando un gradiente de 100 % de CH2Ch hasta 100% de EtOAc en hexanos sobre 9 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían el producto se combinaron, se evaporaron al vacío y se secaron a alto vacío para dar el compuesto del título puro (210 mg, 43 %) como un sólido blanco Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 0,860 min; m/e = 222; RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 88,17 (d, J=5,5 Hz, 1H), 6,84 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,29 (t, J=6,0 Hz, 2H), 3,92 (t, J=5,8 Hz, 2H), 2,14 (quin, J=5,9 Hz, 2H)
Intermedio: 5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-4-(3-hidroxipropoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000075_0003
A una solución de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (400 mg, 0,771 mmol) y 3-((2,3-dicloropiridin-4-il)oxi)propan-1-ol (175 mg, 0,788 mmol) en THF anhidro (30 ml) se le añadió fosfato de potasio tribásico, 0,5 M en agua (3,9 ml, 1,950 mmol). La reacción se lavó abundantemente con argón y después se trató con precatalizador X-phos de 2a generación (60 mg, 0,076 mmol). La mezcla resultante se lavó nuevamente a chorro también con argón, se tapó de manera segura y se colocó en un baño de hielo a 65 °C por 18 h. El disolvente se retiró principalmente bajo una corriente suave de N2 y el residuo se dividió con EtOAc (100 ml) y agua (40 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (50 ml) y las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (15 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y el disolvente se retiró al vacío. El material en bruto se aplicó en CH2Ch a la cabeza de una Columna Instantánea de Sílice Teledyne Isco de 40 g y se purificó en Biotage usando un gradiente de 100% de CH2Ch hasta 100% de EtOAc sobre 8 volúmenes de columna, seguido por un gradiente de 100 % de EtOAc hasta 20 % de MeOH/EtOAc sobre 5 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían el producto se combinaron, se evaporaron al vacío y se secaron a alto vacío para dar el compuesto del título puro (300 mg, 67 %). Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 1,002 min; m/e = 578; RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 810,29 (s, 1H), 8,92 (d, J=1,5 Hz, 2H), 8,47 (d, J=5,6 Hz, 1H), 8,11 (t, J=1,8 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,49 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,40 - 7,32 (m, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,95 (d, J=5,6 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,33 (s, 2H), 5,15 (s, 2H), 4,35 (br t, J=4,9 Hz, 2H), 3,95 (s a, 2H), 2,23 -2,15 (m, 5H)
Intermedio: 5-((5-((3-(4-(3-bromopropoxi)-3-cloropiridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000076_0001
A una solución magnéticamente agitada de 5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-4-(3-hidroxipropoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (182 mg, 0,315 mmol) y trifenilfosfina (98,3 mg, 0,375 mmol) en CH2Ch (5 ml) está en argón a chorro de argón continuo se le añadió tetrabromuro de carbono sólido (123 mg, 0,371 mmol). La reacción se lavó abundantemente también con argón, se tapó de manera segura y agitó a temperatura ambiente 4 h. La reacción se aplicó directamente a la cabeza de una Columna Instantánea de Sílice Teledyne Isco de 40 g y se purificó en Biotage usando un gradiente de 100 % de CH2Ch hasta 100 % de EtOAc sobre 11 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían el producto se combinaron, se evaporaron al vacío y se secaron a alto vacío para dar el compuesto del título puro (88,5 mg, 44%). Condición de c L/EM B: tiempo de ret. 3,68 min; m/e = 640 RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 8 10,29 (s, 1H), 8,93 (m, 2H), 8,48 (d, J=5,5 Hz, 1H), 8,11 (t, J=2,1 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,51 -7,46 (m, 1H), 7,37 -7,33 (m, 1H), 7,31 -7,29 (m, 1H), 6,95 (d, J=5,6 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,33 (s, 2H), 5,16 (s, 2H), 4,34 (t, J=5,6 Hz, 2H), 3,69 (t, J=6,3 Hz, 2H), 2,47 (quin, J=6,0 Hz, 2H), 2,19 (s, 3H).
Intermedio: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000076_0002
A una mezcla de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (1,2 g, 2,313 mmol) y ácido (R)-2-amino-3-hidroxi-2-metilpropanoico (0,551 g, 4,63 mmol) en una mezcla de DCE (15 ml) y EtOH (15 ml) se le añadieron ácido acético (0,265 ml, 4,63 mmol) y tamices moleculares de 4 A (100 mg). La mezcla resultante se agitó a ta por 5 h, después se trató por goteo con cianoborohidruro de sodio (4,63 ml, 4,63 mmol) durante 40 h. La mezcla de reacción se filtró, el filtrado se concentró (baño de <20oC) y el residuo se purificó por HPLC prep. de fase inversa usando una columna Sunfire C1810uM 50x100 mm con desde 15 % Disolvente B hasta 100 % de Disolvente B durante 30 min a 150 ml/min con detección a 220 nM (el disolvente A es 5 % de CH3CN/95 % de agua con 10 mM de NH4OAc y el Disolvente B es 95 % de CH3CN/5 % de agua con 10 mM de NH4Oac), para dar el compuesto del título puro (220 mg, 15 %). Condición de CL/EM C: tiempo de ret. 2,120 min, m/e = 622; RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) 88,96 (d, J=6,3 Hz, 1H), 8,89 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,39 (d, J=12,5 Hz, 1H), 7,69 (dd, J=7,5, 1,3 Hz, 1H), 7,55 (d, J=1,0 Hz, 1H), 7,49 - 7,38 (m, 1H), 7,30 -7,24 (m, 1H), 7,18 (dt, J=14,9, 7,5 Hz, 1H), 7,03 -6,90 (m, 1H), 5,35 (d, J=2,3 Hz, 2H), 5,26 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 3,92 (d, J=11,8 Hz, 1H), 3,72 (d, J=12,0 Hz, 1H), 2,61 -2,32 (m, 3H), 1,44 (s, 3H), 1,38 (s, 6H).
Intermedio: Bromuro de 2-bromo-1,3-dimetil-5,6,7,8-tetrahidropirazolo[1,2-a]piridazin-4-io
Figure imgf000077_0001
A una botella de presión de 150 ml se le añadieron 4-bromo-3,5-dimetil-1H-pirazol (2,29 g, 13,08 mmol), carbonato de potasio (4 g, 28,9 mmol) y acetonitrilo anhidro (70 ml). La reacción se lavó abundantemente con N2 y después se trató con 1,4-dibromobutano (22 g, 102 mmol). La reacción se tapó y agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La reacción después se calentó a 50- 55 °C por 5 h, se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y el disolvente se evaporó bajo una corriente suave de N2. El residuo se trituró con CH2Ch (40 ml) y lo sólido se recolectó por filtración para dar el compuesto del título puro (2,6 g, 64 %) como un sólido blanco RMN 1H (500 MHz, CLOROF0RMO-d) 84,60 (s a, 4H), 2,54 (s, 6H), 2,39 (dt, J=6,4, 3,0 Hz, 4H)
Intermedio: (R)-1-(4-(4-bromo-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)butil)pirrolidin-3-ol
Figure imgf000077_0002
A un vial de reacción secado en bajo N2, se le añadieron bromuro de 2-bromo-1,3-dimetil-5,6,7,8-tetrahidropirazolo[1,2-a]piridazin-4-io (400 mg, 1,290 mmol), (R)-pirrolidin-3-ol, HCl (200 mg, 1,618 mmol), DMSO anhidro (2 ml) y N,N-diisopropiletilamina (530 pl, 3,03 mmol). La reacción se lavó abundantemente con Ar, se tapó de manera segura y se colocó en un baño de hielo a 135 °C durante 10,5 h. La reacción se diluyó con metanol (2 ml) y se purificó por HpLC prep. de fase inversa usando una columna Sunfire C1810uM 50x300 mm con desde 10 % de Disolvente B hasta 100 % de Disolvente B durante 30 min a 150 ml/min con detección a 220 nM (el disolvente A es 5 % de CH3CN/95 % de agua con 10 mM de NH4OAc y el disolvente B es 95 % de CH3CN y 5 % de agua con 10 mM de NH4OAc) para dar el compuesto del título puro (140,5 mg, 33 %) como un sólido tostado. Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 0,769 min, m/e = 316
Intermedio: 4-((5-bromo-4-metilpiridin-3-il)metoxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído
Figure imgf000077_0003
A una mezcla de (5-bromo-4-metilpiridin-3-il)metanol (418 mg, 2,069 mmol), 5-cloro-2,4-dihidroxibenzaldehido (400 mg, 2,318 mmol), y trifenilfosfina (600 mg, 2,288 mmol) en THF anhidro (20 ml) bajo un chorro de argón continuo, se le añadió DIAD (450 pl, 2,314 mmol) mediante jeringa durante 5 min. El rxn se tapó de manera segura y agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Se evaporó la mayoría del disolvente bajo una corriente suave de N2. El residuo se disolvió nuevamente en una mezcla de CH2Ch (25 ml) y agua (30 ml) y la mayoría del disolvente se retiró bajo una corriente suave de N2. El residuo se trituró con MeOH frío (20 j l ) y lo sólido se recolectó por filtración para dar el compuesto del título (263,2 mg, 36 %) como un sólido tostado. Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 1,144 min, m/e = 356 RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 811,45 (s, 1H), 9,74 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,64 (s, 1H), 5,19 (s, 2H), 2,50 (s, 3H)
Intermedio: 5-((5-((5-bromo-4-metilpiridin-3-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000078_0001
A una solución de 4-((5-bromo-4-metilpiridin-3-il)metoxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído (253 mg, 0,709 mmol) y 5-(clorometil)nicotinonitrilo (130 mg, 0,852 mmol) en DMF anhidro (1,1 ml), se le añadió carbonato de cesio (278 mg, 0,853 mmol). La reacción se lavó abundantemente también con N2, se tapó de manera segura y se colocó en un baño de aceite a 65 °C durante 3 h. La reacción se añadió mediante pipeta a agua (14 ml), el sólido se filtró, se lavó con Et2O (10 ml) y se secó a alto vacío para dar el compuesto del título (380 mg, cuant) como un sólido ligeramente marrón. Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 1,174 min, m/e = 472; RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 810,24 (s, 1H), 9,04 (dd, J=6,2, 2,1 Hz, 2H), 8,74 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,56 (t, J=2,0 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 5,49 (d, J=1,7 Hz, 4H), 2,46 (s, 3H)
Intermedio: 2-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano
Figure imgf000078_0002
Una botella de presión de 150 ml secada en horno se cargó con 2-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (5,30 g, 17,2 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (7,3 g, 28,7 mmol) y acetato de potasio (5,3 g, 54,0 mmol). Se añadió dioxano (100 ml), se burbujeó en argón por 10 min, y se añadió [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II) (825 mg, 1,128 mmol). La reacción se selló y se calentó en un baño de aceite a 80 °C por 21 h. La reacción se trató con agua (300 ml) y EtOAc (250 l), y se filtró a través de Celite para remover algunos sólidos oscuros. Se lavó Celite con acetato de etilo (300 ml). Las capas se dividieron. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se evaporó a un sólido aceitoso oscuro. Se aplicó en CH2Ch/hexano a la cabeza de una columna Instantánea de Sílice Teledyne Isco de 330 g y se purificó en Biotage usando un gradiente desde 100% de Hexanos hasta 100% de C ^ C h sobre 11 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron al vacío y se secó en alto vacío para dar 4,36 g (71 %) del compuesto del título puro como un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 8 7,38 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,16 (t, J=7,8 Hz, 1H), 6,94 (d, J=8,1 Hz, 1H), 4,11 (t, J=5,7 Hz, 2H), 3,66 (t, J=6,5 Hz, 2H), 2,44 (s, 3H), 2,36 (quin, J=6,1 Hz, 2H), 1,37 (s, 12H).
Intermedio: 5-((5-((5-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-4-metilpiridin-3-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000079_0001
A una solución de 5-((5-((5-bromo-4-metilpiridin-3-il)metoxi)-4-doro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (335 mg, 0,709 mmol) y 2-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (275 mg, 0,774 mmol) en THF (30 ml) se le añadió fosfato de potasio tribásico (3,54 ml, 1,770 mmol). La reacción se lavó abundantemente muy bien con argón, después se trató con precatalizador X-phos de 2a generación (53 mg, 0,067 mmol). La reacción se lavó nuevamente a chorro muy bien con argón, se tapó de manera segura y agitó a temperatura ambiente durante 2,5 h. La reacción después se colocó en un baño de aceite a 45 °C por 45 min, después se dejó agitar durante la noche a temperatura ambiente por 18 h. Se añadió catalizador adicional (12 mg, 0,015 mmol), también se lavó abundantemente con argón y se colocó en un baño de aceite a 40 °C por 3,5 h. La reacción se diluyó con EtOAc (110 ml) y se lavó con agua (1 x 15 ml), salmuera (1 x 15 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y evaporó el disolvente al vacío para dar el compuesto del título (340 mg, 77 %). Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 1,155 min, m/e = 620.
Intermedio: 1-(3-(hidroximetil)-2-metilfenil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldehído
Figure imgf000079_0002
A un vial de reacción seco se le añadieron (2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)metanol (1,02 g, 4,11 mmol), 3,5-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldehído (510 mg, 4,11 mmol), acetato de cobre (II) (0,747 g, 4,11 mmol) y piridina (3 ml). La reacción se lavó abundantemente con aire, se tapó de manera segura y se colocó en un baño de arena a 60 °C con sacudimiento por 42 h. El disolvente se retiró principalmente bajo una corriente suave de N2 y CH2Cl2 (10 ml) se añadió al residuo resultante. La reacción se lavó nuevamente a chorro con aire, se tapó y agitó a temperatura ambiente durante 7 días. Lo precipitado sólido se filtró y el filtrado se aplicó a la cabeza de una Columna Instantánea de Sílice Teledyne Isco de 80 g y se purificó en Biotage usando un gradiente desde 100 % de Hexanos hasta 70% de EtOAc/hexanos sobre 10 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se evaporaron al vacío para dar el compuesto del título (149 mg, 15 %). Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 0,744 min, m/e = 245.
Intermedio: 1-(3-((2-cloro-4-formil-5-hidroxifenoxi)metil)-2-metilfenil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldehído
Figure imgf000079_0003
A una solución de 1-(3-(hidroximetil)-2-metilfenil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldehído (149 mg, 0,610 mmol), 5-cloro-2,4-dihidroxibenzaldehído (210 mg, 1,217 mmol) y trifenilfosfina (192 mg, 0,732 mmol) en THF (6 ml) bajo un flujo continuo de argón se le añadió DIAD (0,192 ml, 0,989 mmol) durante 4-5 min. Después de que la adición se completase, la reacción se tapó de manera segura y se dejó agitar a temperatura ambiente por varias horas. El disolvente se evaporó bajo una corriente suave de N2. El residuo se disolvió en CH2Ch (7 ml), se aplicó a la cabeza de una Columna Instantánea de Sílice Teledyne Isco de 40 g y se purificó en Biotage usando un gradiente lineal desde 100 % de Hexanos hasta 100 % de EtOAc sobre 15 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se evaporaron al vacío para dar el compuesto del título (140 mg, 55 %). Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 1,189 min, m/e = 399; RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 811,17 (s, 1H), 10,05 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,69 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,48 - 7,43 (m, 1H), 7,38 (d, J=7,6 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 1,97 (s, 3H)
Intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(4-formil-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000080_0001
A una solución de 1-(3-((2-cloro-4-formil-5-hidroxifenoxi)metil)-2-metilfenil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldehído (122 mg, 0,306 mmol) y 5-(clorometil)nicotinonitrilo (56 mg, 0,367 mmol) en DMF anhidro (550 j l) se le añadieron carbonato de cesio (120 mg, 0,368 mmol) y yoduro de sodio (5 mg, 0,033 mmol). La reacción se lavó abundantemente también con argón, se tapó de manera segura y se colocó en un baño de aceite a 65 °C por 3 h. La reacción se diluyó con EtOAc (125 ml) y la capa orgánica se extrajo con agua (3 x 20 ml), salmuera (1 x 20 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y el disolvente se evaporó al vacío para dar el compuesto del título (63,3 mg, 40 %). Condición de CL/EM A: tiempo de ret. 1,195 min, m/e = 515.
Intermedio: (R)-1 -((3,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)metil)pirrolidin-3-ol
Figure imgf000080_0002
A una mezcla de 3,5-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldehído (0,3 g, 2,417 mmol), y (R)-pirrolidin-3-ol, HCl (0,597 g, 4,83 mmol) en EtOH (5 ml) se le añadieron ácido acético (0,277 ml, 4,83 mmol) y tamices moleculares de 4 A (100 mg). La reacción se lavó abundantemente con N2, se tapó de manera segura y agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción después se trató con cianoborohidruro de sodio (4,83 ml, 4,83 mmol), se lavó abundantemente con N2, se tapó y agitó a temperatura ambiente durante 6 h. La reacción se diluyó con MeOH (100 ml), se lavó nuevamente con N2, se tapó y se dejó agitar a temperatura ambiente por 18 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se purificó por HPLC prep. de fase inversa usando una columna Sunfire C18 10uM 50x300 mm con desde 10 % de Disolvente B hasta 100% de Disolvente B durante 30 min a 150ml/min con detección a 220 nM (el disolvente A es 5% de CH3CN/95 % de agua con 10 mM de NH4OAc y el disolvente B es 95 % de CH3CN y 5 % de agua con 10 mM de NH4OAc) para dar el compuesto del título puro (280 mg, 33 %) como un sólido blanco. Condición de CL/EM C: tiempo de ret. 0,504 min, m/e = 196. RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 84,46 (tt, J=5,6, 1,4 Hz, 1H), 3,90 -3,78 (m, 2H), 3,41 (ddd, J=10,1, 8,4, 5,3 Hz, 1H), 3,23 (d, J=11,1 Hz, 1H), 2,82 (dd, J=11,2, 5,7 Hz, 1H), 2,71 - 2,63 (m, 1H), 2,30 (s, 6H), 2,06 - 1,98 (m, 2H).
Ejemplo 2001: 5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-2-(3-(piperidin-1-il)propoxi)piridin-4-il)-2-metilbencil)oxi)-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000081_0001
A una solución de 5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-2-(3-(piperidin-1-il)propoxi)piridin-4-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (40 mg, 0,062 mmol) y 2-amino-2-metilpropan-1,3-diol (27 mg, 0,257 mmol) en DCE (0,8 ml) y etanol (0,7 ml), se le añadieron ácido acético (14 pl, 0,245 mmol) y tamices moleculares de 4 A activados. La reacción se lavó abundantemente bajo argón, se agitó temperatura ambiente durante 25 min, después se trató con cianoborohidruro de sodio, 1 M en THF (0,22 ml, 0,220 mmol) lentamente mediante jeringa durante 3 h. Después de que la adición se completase, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Gradiente: 15-55 % de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para dar el compuesto del título puro (21,6 mg, 46 %).
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,59 min; m/e = 734 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 1,41 min; m/e = 734 (M+h )+.
Ejemplo 2002: (R)-5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-4-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000081_0002
A una solución de 5-((5-((3-(4-(3-bromopropoxi)-3-cloropiridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (46,5 mg, 0,073 mmol) y 2-amino-2-metilpropan-1,3-diol (25 mg, 0,238 mmol) en una mezcla de DCE (0,8 ml) y etanol (0,7 ml), se le añadieron ácido acético (12 pl, 0,210 mmol) y tamices moleculares de 4 A activados. La reacción se lavó abundantemente de forma breve bajo argón, se agitó a ta durante 25 min y después se trató lentamente durante 3 h con cianoborohidruro de sodio, 1,0 M en THF (220 pl, 0,220 mmol). Después de que la adición se completase, la reacción se agitó a ta por unas 3 h adicionales. El disolvente se retiró en su mayoría bajo una corriente de N2 y el residuo se volvió a disolver en MeOH (1,5 ml). La solución resultante se trató con (R)-pirrolidin-3-ol, HCl (120 mg, 0,971 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (210 pl, 1,202 mmol) y se colocó en un baño de arena a 65 °C con agitación durante 18 h. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 10-50 % de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min para dar el compuesto del título puro (37,4 mg, 67 %)
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,18 min; m/e = 736 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 1,15 min; m/e = 736 (M+h )+.
Ejemplo 2003: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(4-((S)-3-hidroxipirrolidin-1-il)butil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000082_0001
A una solución de ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico (35 mg, 0,056 mmol) y (R)-1-(4-(4-bromo-3,5-dimetil-1H-pirazol-1 -il)butil)pirrolidin-3-ol (20 mg, 0,063 mmol) en THF (6 ml) se le añadió fosfato de potasio tribásico 0,5 M en agua (0,4 ml, 0,200 mmol). La reacción se lavó abundantemente bien con Ar, después se trató con un precatalizador de 2a generación X-phos (5 mg, 6,35 pmol). La reacción se lavó abundantemente nuevamente bien con argón, se tapó de manera segura y se colocó en un baño de aceite a 60 °C con agitación durante 65 h. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 10-50% de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min., para dar el compuesto del título puro (5,8 mg, 14 %).
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,36 min; m/e = 731 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 1,23 min; m/e = 731 (M+h )+.
Ejemplo 2004: 5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-4-(3-hidroxipropoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000082_0002
A una solución de 5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-4-(3-hidroxipropoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (23 mg, 0,040 mmol) y 2-amino-2-metilpropan-1,3-diol (25 mg, 0,238 mmol) en una mezcla de DCE (0,8 ml) y EtOH (0,5 ml) se le añadieron ácido acético (10 pl, 0,175 mmol) y tamices moleculares de 4 A activados. La reacción se lavó abundantemente de forma breve con argón, se agitó a temperatura ambiente durante 20 min, después se trató por goteo con cianoborohidruro de sodio 1 M en THF (160 pl, 0,160 mmol durante 2 h. Después de que la adición se completase, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 10-50% de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min., para dar el compuesto del título puro (19,5 mg, 74 %).
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,53 min; m/e = 667 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 1,32 min; m/e = 667 (M+h )+.
Ejemplo de referencia 2005: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((5-(3-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)-2-metilfenil)-4-metilpiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000083_0001
A una solución de 5-((5-((5-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-4-metilpiridin-3-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (52 mg, 0,084 mmol) y ácido L-pipecólico (33 mg, 0,256 mmol), en una mezcla de DCE (800 |jl) y EtOH (500 |jl), se le añadieron ácido acético (19 pl, 0,332 mmol) y tamices moleculares de 4 A. La reacción se lavó abundantemente de forma breve con N2, se tapó con agitación a temperatura ambiente por 45 min, después se trató por goteo con cianoborohidruro de sodio, 1,0 M en THF (250 jl, 0,250 mmol) durante 2 h. Después de que la adición se completase, la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se retiró en su mayoría bajo una corriente de N2 y el residuo se volvió a disolver en MeOH (1,5 ml). La solución resultante se trató con clorhidrato de (R)-3-hidroxipirrolidina (155 mg, 1,254 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (350 jl, 2,004 mmol) y se colocó en un baño de arena a 65 °C con agitación por 3,5 h. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 10-50 % de B durante 23 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Gradiente: 5-40% de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min., para dar el compuesto del título puro (14,2 mg, 14 %) como una Sal de TFA.
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,24 min; m/e = 740 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 1,08 min; m/e = 740 (M+h )+.
Ejemplo 2006: 5-((4-cloro-2-(((2-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)amino)metil)-5-((3-(4-(((2-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)amino)metil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000083_0002
A una solución de 5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(4-formil-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (22,8 mg, 0,044 mmol) en una mezcla de DCE (900 j l) y EtOH (600 j l) se le añadieron (3R)-1-(2-aminoetil)-3-pirrolidinol (43 mg, 0,330 mmol), ácido acético (8 j l, 0,140 mmol) y tamices moleculares de 4 A. La reacción se lavó abundantemente de forma breve con N2, se tapó de manera segura agitada a temperatura ambiente por 1 h, después se trató por goteo con cianoborohidruro de sodio, 1,0 M en THF (270 jl, 0,270 mmol) durante 5 h. Después de que la adición se completase, la reacción se dejó agitar durante la noche a temperatura ambiente. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 5-35 % de B durante 18 minutos, después una retención por 3 minutos a 100% B; Flujo: 20 ml/min para dar el compuesto del título puro (2,9 mg, 8 %).
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,18 min; m/e = 743 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 0,907 min; m/e = 743 (M+H)+.
Ejemplo 2007: 5-((4-cloro-2-(((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)metil)-5-((3-(4-(((R)-3-hidroxipirroMdin-1-il)metil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000084_0001
A una solución de 5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(4-formil-3,5-dimetiMH-pirazoM-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (22,8 mg, 0,044 mmol) y clorhidrato de (R)-3-hidroxipirrolidina (40 mg, 0,324 mmol), en una mezcla de DCE (900 |jl) y EtOH (600 |jl), se le añadieron ácido acético (5,2 jl, 0,091 mmol), N,N-diisopropiletilamina (13 jl, 0,074 mmol) y tamices moleculares de 4 A. La reacción se lavó abundantemente de forma breve con N2, se tapó con agitación a temperatura ambiente por 2 h y después se trató por goteo con cianoborohidruro de sodio, 1,0 M en THF (270 jl, 0,270 mmol) durante 3,5 h. Después de que la adición se completase, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 jm ; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 8-48% de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100% B; Flujo: 20 ml/min., para dar el compuesto del título puro (8,0 mg, 26 %).
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,23 min; m/e = 657 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 1,22 min; m/e = 657 (M+h )+.
Ejemplo de referencia 2008: (R)-5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)-5-((5-(3-(3-(3-hidroxipirrolidin-1 -il)propoxi)-2-metilfenil)-4-metilpiridin-3-il)metoxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000084_0002
A una solución de 5-((5-((5-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-4-metilpiridin-3-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (20,4 mg, 0,033 mmol) y 2-amino-2-metil-1,3-propandiol (10,4 mg, 0,099 mmol) en una mezcla de DCE (800 j l) y Etanol (500 jl), se le añadieron ácido acético (7,5 jl, 0,131 mmol) y tamices moleculares de 4 A activados. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, después se trató por goteo con cianoborohidruro de sodio, 1,0 M en THF (115 jl, 0,115 mmol) durante 30 min. Después de que la adición se completase, la reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El disolvente se retiró en su mayoría bajo una corriente de N2 y el residuo se volvió a disolver en MeOH (1,5 ml). La solución resultante se trató con clorhidrato de (R)-3-hidroxipirrolidina (74 mg, 0,599 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (185 jl, 1,059 mmol), se lavó abundantemente de forma breve con N2, se tapó, se colocó en un baño de arena a 65 °C con agitación por 4,5 h después se colocó en un baño de arena a 45 °C por 36 h. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 |jm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 5-55 % de B durante 25 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min para dar el compuesto del título (7,2 mg, 29 %).
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,31 min; m/e = 716 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 1,18 min; m/e = 716 (M+h )+.
Ejemplo 2009: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(4-(((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)metil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000085_0001
A una mezcla de ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico (90 mg, 0,145 mmol), (R)-1-((3,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)metil)pirrolidin-3-ol, 2 AcOH (63 mg, 0,200 mmol), 2,2'-bipiridina (23 mg, 0,147 mmol) y acetato de cobre (II) (40 mg, 0,220 mmol) se le añadió piridina (1 ml). La reacción se tapó y se agitó a temperatura ambiente en presencia de aire durante la noche. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 jm ; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Gradiente: 5-45 % de B durante 25 minutos, después una retención de 5 minutos a 100% B; Flujo: 20 ml/min. El material se purificó adicionalmente mediante c L/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 jm ; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 10-50% de B durante 15 minutos, después una retención por 3 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min para dar el compuesto del título puro (1,3 mg, 1,2 %).
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,04 min; m/e = 689 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 1,16 min; m/e = 689 (M+h )+.
Ejemplo 2010: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(4-formil-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000085_0002
A una mezcla de ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico (32,5 mg, 0,052 mmol), y 3,5-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldehído (11,9 mg, 0,096 mmol) en CH2Ch (2 ml), se le añadió piridina (32 pl, 0,396 mmol), seguido por acetato de cobre (II) sólido (16 mg, 0,088 mmol). La reacción se lavó abundantemente con O2, se selló y se agitó a temperatura ambiente durante 6 días. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 jm ; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 15-55 % de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 15-55 % de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min para dar el compuesto del título (1 mg, 2 %).
Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,47 min; m/e = 618 (M+H)+.
Condición de CL/EM F: tiempo de retención 1,57 min; m/e = 618 (M+h )+.
Intermedio: 4-((4-bromo-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído
Figure imgf000086_0001
Una mezcla de (4-bromo-3-metilpiridin-2-il)metanol (560 mg, 2,77 mmol), 5-cloro-2,4-dihidroxibenzaldehído (478 mg, 2,77 mmol), y trifenilfosfina (800 mg, 3,05 mmol) en THF (20 ml) se enfrió como un resultado de lavado a chorro con N2 continuo (una mezcla turbia amarilla) mientras se añadió DIAD (450 pl, 2,314 mmol) mediante jeringa durante 2 min. La suspensión llegó a ser una solución anaranjada clara cuando se añadió DIAD y después de ~10 min, se observó algo de precipitado. La reacción se selló bajo N2 y agitó a ta durante la noche. El primer cultivo del producto se recolectó filtrando la mezcla de reacción para dar 0,277 g como un sólido blanco. El filtrado se secó por soplado bajo N2 y se trituró con MeOH frío y después se filtró para dar el 2° cultivo del producto en aproximadamente ~0,2 g como un sólido blanquecino (Total 0,47 g, 45 %). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 811,37 (s, 1H), 9,69 (s, 1H), 8,24 (d, J=5,3 Hz, 1H), 7,53 (d, J=5,3 Hz, 1H), 7,52 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 2,54 (s, 3H). Condición de CL/EM D: tiempo de retención 1,01 min, m/e = 356.
Intermedio: 5-((5-((4-bromo-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000086_0002
Una mezcla de 4-((4-bromo-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-5-cloro-2-hidroxibenzaldehído (0,277 g, 0,777 mmol), 5-(clorometil)nicotinonitrilo (0,142 g, 0,932 mmol), yoduro de sodio (0,012 g, 0,078 mmol) y carbonato de cesio (0,304 g, 0,932 mmol) en DMF (6 ml) se agitó a 75 °C en nitrógeno por 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a ta durante y se vertió en 50 ml agua helada. La mezcla se después se agitó durante 2 h y se filtró para recolectar el producto 5-((5-((4-bromo-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (0,3 g, 0,597 mmol, 77 % de rendimiento) como un sólido blanquecino.
RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 810,25 (s, 1H), 8,96 (d, J=2,0 Hz, 1H), 8,92 (d, J=1,8 Hz, 1H), 8,20 (d, J=5,3 Hz, 1H), 8,11 (t, J=2,0 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,55 (d, J=5,3 Hz, 1H), 7,08 (s, 1H), 5,48 (s, 2H), 5,21 (s, 2H), 2,60 (s, 3H). Condición de CL/EM D: tiempo de retención 1,07 min, m/e = 472
Intermedio: 5-((5-((4-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000087_0001
Se añadió cloro(2-diciclohexilfosfino-2',4',6-triisopropiM,1-bifenil)[2-(2-amino-1,1-bifenil)]paladio(N) (0,025 g, 0,032 mmol) a una mezcla de 2-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,225 g, 0,635 mmol) y fosfato de potasio tribásico (3,17 ml, 1,587 mmol) en THF (15 ml) (se lavó abundantemente con N2 durante 10 min antes de añadir el catalizador). La mezcla resultante se agitó a ta durante 18 h. La mezcla de reacción se dividió entre EtOAc/bicarbonato de sodio acuoso. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso (2 x 20 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron bajo vacío para dar 0,5 g de producto en bruto, que se purificó por cromatografía en gel de sílice (Sistema Biotage Horizon; columna RediSepRf 40 g; EtOAc/Hexano, Gradiente: 0 % ~ 100 %) para dar 5-((5-((4-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (0,3 g, 0,459 mmol, 72,3 % de rendimiento) como un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 810,27 (s, 1H), 8,99 (d, J=2,3 Hz, 1H), 8,92 (d, J=2,0 Hz, 1H), 8,44 (d, J=4,8Hz, 1H), 8,15 (t, J=2,1 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,24 - 7,18 (m, 1H), 7,11 (d, J=5,0 Hz, 1H), 6,91 (d, J=8,0 Hz, 1H), 6,67 (d, J=7,0 Hz, 1H), 5,60 - 5,45 (m, 2H), 5,27 (s, 2H), 4,17 (td, J=5,8, 3,3 Hz, 2H), 3,65 (t, J=6,4 Hz, 2H), 2,39 (dd, J=6,3, 5,8 Hz, 2H), 2,24 (s, 3H), 1,86 (s, 3H). Condición de CL/EM D: tiempo de retención 1,08 min; m/e = 620
Ejemplo de referencia 2011: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((4-(3-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000087_0002
Una mezcla de 5-((5-((4-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (0,1 g, 0,161 mmol), ácido (S)-piperidin-2-carboxílico (0,042 g, 0,322 mmol), ácido acético (0,018 ml, 0,322 mmol) y unos pocos TM de 4 A (tamices moleculares) en ClCH2CH2Cl (5 ml) y EtOH (5 ml) se agitó a ta durante 2 h. Se añadió cianoborohidruro de sodio (1,0 M en THF) (0,322 ml, 0,322 mmol) y la mezcla de reacción resultante se agitó a ta por 1 día. La mezcla de reacción se lavó abundantemente con N2 durante la noche y se secó por bombeo por 2 h. El residuo se disolvió en 4 ml de DMF, se filtró y el filtrado se dividió en 2 porciones iguales y entonces una porción se sometió a la siguiente etapa. La otra porción se usó para hacer el Ejemplo 2014. A la solución del intermedio se añadió (R)-pirrolidin-3-ol, HCl (0,100 g, 0,805 mmol) y DIPEA (diisopropiletilamina, 0,141 ml, 0,805 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a 60oC por 6 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 15-55% de B durante 15 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Gradiente: 10-50 % de B durante 15 minutos, después una retención por 3 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para dar ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((4-(3-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)-2 metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)bencM)piperidin-2-carboxnico como Sal de TFA (6,6 mg, 5,4 %) RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 88,99 (s, 2H), 8,46 - 8,37 (m, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,28 - 7,18 (m, 1H), 7,12 (s a, 2H), 7,01 (d, J=8,4 Hz, 1H), 6,68 (d, J=7,3 Hz, 1H), 5,40 (s, 2H), 5,29 (s, 2H), 4,20 (s a, 1H), 4,13 - 4,00 (m, 2H), 3,74 (dd, J=14,3, 5,5 Hz, 1H), 3,57 (dd, J=14,1, 5,3 Hz, 1H), 3,13 (s a, 1H), 2,88 (d, J=11,7 Hz, 1H), 2,78 -2,69 (m, 1H), 2,66 -2,56 (m, 3H), 2,46 (d, J=6,2 Hz, 1H), 2,40 - 2,33 (m, 1H), 2,30 - 2,19 (m, 1H), 2,11 (s, 3H), 2,02 - 1,93 (m, 1H), 1,92 (s, 5H), 1,81 (s, 3H), 1,78 (s a, 2H), 1,60 - 1,32 (m, 5H). Condición de CL/EM E tiempo de retención 1,25 min; m/e = 740,1.
Ejemplo de referencia 2012: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-N)metoxi)-4-((4-(3-(3-((R)-3-hidroxipirroNdin-1-il)propoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000088_0001
Una mezcla de 5-((5-((4-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (120 mg, 0,193 mmol), ácido (S)-2-amino-3-hidroxi-2-metilpropanoico (46,0 mg, 0,387 mmol), ácido acético (0,022 ml, 0,387 mmol) y unos pocos t M de 4 A en CICH2CH2CI (2 ml) y EtOH (2 ml) se agitó a ta durante 2 h. Se añadió cianoborohidruro de sodio (0,322 ml, 0,322 mmol) y la mezcla de reacción resultante se agitó a ta por 3 días. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró y se secó por bombeo por 2 h. El residuo se disolvió en 4 ml de DMF. Una mitad del material se sometió a la siguiente etapa. La otra mitad de la porción se usó para el Ejemplo 2015. A la solución del intermedio en 2 ml de DMF se le añadieron (R)-pirrolidin-3-ol, HCl (47,8 mg, 0,387 mmol) y DIPEA (0,141 ml, 0,805 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a 60 °C por 6 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: Waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 0-30% de B durante 15 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 10-50% de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para dar ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((4-(3-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico (4,9 mg, rendimiento 3,4 %). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,05 - 8,97 (m, 1H), 8,48 - 8,37 (m, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,28 -7,22 (m, 1H), 7,17 -7,10 (m, 2H), 7,02 (d, J=7,7 Hz, 1H), 6,68 (d, J=7,3 Hz, 1H), 5,41 (d, J=2,9 Hz, 2H), 5,32 (s, 2H), 4,20 (s a, 1H), 4,13 -4,02 (m, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,59 -3,44 (m, 3H), 2,80 -2,68 (m, 1H), 2,66 -2,56 (m, 3H), 2,37 (dd, J=9,5, 4,0 Hz, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,03 - 1,93 (m, 2H), 1,83 (s, 3H), 1,57 (d, J=2,9 Hz, 1H), 1,22 (s, 3H). Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,13 min; m/e = 730,0.
Ejemplo de referencia 2013: (R)-5-((4-cloro-2-(((1-hidroxi-2-(hidroximetil)butan-2-il)amino)metil)-5-((4-(3-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Una mezcla de 5-((5-((4-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (80 mg, 0,129 mmol), 2-amino-2-etilpropan-1,3-diol (30,7 mg, 0,258 mmol), ácido acético (0,015 ml, 0,258 mmol) y unos pocos MS 4A en ClCH2CH2Cl (2 ml) y EtOH (2 ml) se agitó a ta durante 2 h. se añadió cianoborohidruro de sodio (0,322 ml, 0,322 mmol) y la mezcla de reacción resultante se agitó a ta durante 24 h. La mezcla de reacción se lavó abundantemente con N2 durante la noche y se secó por bombeo por 2 h. El residuo se disolvió en 4 ml de DMF, se filtró y el filtrado se dividió en dos porciones iguales y una porción se sometió en la siguiente etapa. La otra porción se usó para la síntesis del Ejemplo 2016. A la solución del intermedio se le añadieron (R)-pirrolidin-3-ol, HCl (0,100 g, 0,805 mmol) y DIPEA (0,141 ml, 0,805 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a 60 °C por 6 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Gradiente: 5-40 % de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para dar (R)-5-((4-cloro-2-(((1-hidroxi-2-(hidroximetil)butan-2-il)amino)metil)-5-((4-(3-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo como sal de TFA (15,2 mg, rendimiento 15%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 88,99 (s a, 2H), 8,47 -8,34 (m, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,25 (t, J=7,9 Hz, 1H), 7,16 -7,09 (m, 2H), 7,01 (d, J=8,1 Hz, 1H), 6,68 (d, J=7,3 Hz, 1H), 5,39 (d, J=3,7 Hz, 2H), 5,30 (s, 2H), 4,20 (s a, 1H), 4,12 - 3,97 (m, 2H), 3,61 (s, 1H), 2,79 -2,56 (m, 4H), 2,49 -2,31 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 2,04 - 1,94 (m, 1H), 1,83 (s, 3H), 1,57 (d, J=4,4 Hz, 1H), 1,36 (q, J=7,2 Hz, 2H), 0,77 (t, J=7,5 Hz, 3H). Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,17 min; m/e = 730,1.
Ejemplo de referencia 2014: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-metil-4-(2-metil-3-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)piridin-2-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000089_0001
Una mezcla de ácido (S)-1-(4-((4-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico (el intermedio del Ejemplo 2011) (60 mg, 0,038 mmol), piperidina (32,0 mg, 0,376 mmol) y DiPEa (0,066 ml, 0,376 mmol) en DMF (2 ml) se agitó a 60 °C en nitrógeno durante 6 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 20-60% de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El material se purificó adicionalmente mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,1 % de ácido trifluoroacético; Gradiente: 10-50 % de B durante 15 minutos, después una retención por 3 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para dar ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-metil-4-(2-metil-3-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)piridin-2-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico como la sal de TFA (7,1 mg, rendimiento 15%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 89,02 (s, 2H), 8,48 - 8,38 (m, 2H), 7,51 (s, 1H), 7,34 - 7,19 (m, 2H), 7,14 (d, J=4,8 Hz, 1H), 7,04 (d, J=8,4 Hz, 1H), 6,72 (d, J=7,7 Hz, 1H), 5,45 (d, J=4,0 Hz, 2H), 5,37 (s a, 2H), 4,21 (s a, 2H), 4,17 - 4,06 (m, 2H), 3,88 (s a, 1H), 3,31 - 3,19 (m, 1H), 2,85 (s a, 1H), 2,28 -2,17 (m, 2H), 2,12 (s, 3H), 1,86 (d, J=4,4 Hz, 3H), 1,67 (s a, 10H). Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,12 min; m/e = 738,3.
Ejemplo de referencia 2015: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-metil-4-(2-metil-3-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)piridin-2-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000090_0001
A la solución de ácido (S)-2-((4-((4-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico (65 mg, 0,025 mmol) (el intermedio del Ejemplo 2012) en DMF (2 ml) se le añadió piperidina (21,40 mg, 0,251 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a 60 °C durante 6 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: Waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 10­ 50 % de B durante 15 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para dar ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-metil-4-(2-metil-3-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)piridin-2-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico (14,8 mg, rendimiento 78%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 9.00 (d, J=14,3 Hz, 1H), 8,51 - 8,36 (m, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,25 (t, J=7,9 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,13 (d, J=4,8 Hz, 1H), 7.01 (d, J=8,1 Hz, 1H), 6,68 (d, J=7,3 Hz, 1H), 5,41 (s a, 2H), 5,32 (s, 2H), 4,12 - 4,02 (m, 2H), 3,88 (s a, 2H), 3,64 -3,46 (m, 2H), 2,47 (t, J=7,2 Hz, 3H), 2,38 (d, J=5,1 Hz, 6H), 2,11 (s, 4H), 1,82 (s, 4H), 1,51 (d, J=4,8 Hz, 5H), 1,40 (d, J=4,8 Hz, 3H), 1,23 (s, 4H). Condición de CL/EM E: tiempo de retención 1,10 min; m/e = 728,1.
Ejemplo de referencia 2016: 5-((4-cloro-2-(((1-hidroxi-2-(hidroximetil)butan-2-il)amino)metil)-5-((3-metil-4-(2-metil-3-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)piridin-2-il)metoxi)fenil)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000090_0002
Una mezcla de 5-((5-((4-(3-(3-bromopropoxi)-2-metilfenil)-3-metilpiridin-2-il)metoxi)-4-cloro-2-(((1-hidroxi-2-(hidroximetil)butan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (el intermedio del Ejemplo 2013) (42 mg, 0,022 mmol), piperidina (18,77 mg, 0,220 mmol) y DIPEA (0,038 ml, 0,220 mmol) en DMF (2 ml) se agitó a 60 °C en nitrógeno durante 4 h. La CLEM mostró el producto deseado. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo: agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; Gradiente: 10-50 % de B durante 20 minutos, después una retención de 5 minutos a 100 % B; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para proporcionar 5-((4-cloro-2-(((1-hidroxi-2-(hidroximetil)butan-2-il)amino)metil)-5-((3-metil-4-(2-metil-3-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)piridin-2-il)metoxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (15,5 mg, rendimiento 92%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 88,99 (s a, 1H), 8,46 - 8,33 (m, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,25 (t, J=7,9 Hz, 1H), 7,16 - 7,09 (m, 2H), 7,02 (d, J=8,4 Hz, 1H), 6,68 (d, J=7,7 Hz, 1H), 5,45 - 5,35 (m, 2H), 5,30 (s, 2H), 4,15 - 3,99 (m, 2H), 3,61 (s, 1H), 3,31 (s, 1H), 2,46 (t, J=7,0 Hz, 2H), 2,37 (s a, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,92 (s, 5H), 1,83 (s, 3H), 1,51 (d, J=5,1 Hz, 4H), 1,45 -1,30 (m, 4H), 0,77 (t, J=7,5 Hz, 3H). Condición de c L/EM E: tiempo de retención 1,11 min; m/e = 728,2.
ENSAYO BIOLÓGICO
La capacidad de los compuestos de la Fórmula (I) para unirse a PD-L1 se investigó mediante un ensayo de unión de fluorescencia homogénea de resolución temporal (HTRF) PD-1/PD-L1.
Ensayo de unión de fluorescencia homogénea de resolución temporal (HTRF).
La interacción de PD-1 y PD-L1 se puede analizar usando preparaciones solubles purificadas de los dominios extracelulares de las dos proteínas. Los dominios extracelulares de las proteínas PD-1 y PD-L1 se expresaron como proteínas de fusión con etiquetas de detección, para PD-1, la etiqueta era la porción Fc de inmunoglobulina (PD-1 -Ig) y para PD-L1, la porción de histidina 6 (PD-L1-His). Todos los estudios de unión se realizaron en un amortiguador de ensayo HTRF que consiste en dPBS enriquecido con 0,1 % (con) albúmina de suero bovino y 0,05 % (v/v) de Tween-20. Para el ensayo de unión de h/PD-L1-His, los inhibidores se incubaron previamente con PD-L1-His (10 nM final) durante 15 m en 4 pl de amortiguador de ensayo, y luego se añadió PD-1-Ig (20 nM final) en 1 pl de amortiguador de ensayo y se continuó la incubación durante 15 m. La detección mediante HTRF se logró usando anti-Ig etiquetado con criptato de europio (1 nM final) y anti-His etiquetado con aloficocianina (APC) (20 nM final). Los anticuerpos se diluyeron en amortiguador de detección de HTRf y se colocaron 5 pl encima de la reacción de unión. La mezcla de reacción se equilibró durante 30 minutos, y se obtuvo la señal resultante (relación 665 nm/620 nm) usando un fluorómetro EnVision. Se establecieron otros ensayos de unión entre las proteínas humanas PD-1-Ig/PD-L2-His (20 y 5 nM, respectivamente) y CD80-His/PD-L1-Ig (100 y 10 nM, respectivamente).
Proteínas recombinantes: PD-1 humano (25-167) con una etiqueta de epítopo dominio Fc humano de inmunoglobulina G (Ig) del terminal C [hPD-1 (25-167)-3S-IG] y PD-L1 humano (18-239) con una etiqueta de epítopo His del terminal C [hPD-L1(18-239)-TVMV-His] se expresaron en células HEK293T y se purificaron secuencialmente mediante cromatografía de afinidad de proteína A y cromatografía por exclusión de tamaño. PD-L2-His y CD80-His humanos se obtuvieron a través de fuentes comerciales.
Secuencia de PD-1-Ig humana recombinante
1 LDSPDFPWN? PTFSPALLW TEGDNATFTC SF3NTS&SFV LNWYEMSPSM
51 QTDKI.AAFPE DPSQPGQDCR FFVTCkPJK SE P F H M 5 W R A R RÍJPSG TYLCG
101 AISLAPKAQI KESLRAELRV TEHfiAEVFTA HPSPSPRPAG QFQGSPGGGG 151 GREPK.5SDKT HTSPPSPAPE LLGGSSVFLF PPKPKDTLtfi: SRTPEVTCW 201 VDVSHEDPEU KPNWYVDGVE VHUAKTKPRE EQYltüTlfRW SVLTVLHQDW 251 LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAJ03QP REPQVYTLPP SltDELTKNQV
101 SLTCLVKGFY PSD1AVEWES NGQPENWYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD
351 KSRWQQGNVF SCSVWHEALH NHYTQKSLSL SM K
(SEQ ID NO: 1)
Secuencia de PD-L1-His humana recombinante
1 AFTVTVPKDL YWEYGSNMT IECKFPVEKQLDLAALI7YW EMEDKN1IQF
51 VHGEEDIiKYQ HSSYRQRARL LKDQL5LGNAALQITDVKLQ DAGVYRCMIS
101 YGGADYKRIT VKVNAPYNXI NQRILWDPVTSEHELTOQA EGYPKAEVIW
1SX TSSDHOVLSG K’TTTTNSKRE EKLFHVTSTL RIHTTTNEIF YCTFRRLÜPE
201 ENHTAELVTP ELPLAHPPNE RTGSSETVRF OGHHHHHH
(SEQ JD NO:2)
En la tabla siguiente, se enumeran los valores CI50 de los ejemplos representativos de la presente divulgación medidos en el ensayo de unión de fluorescencia homogénea de resolución temporal (HTRF) PD-1/PD-L1. Los intervalos son los siguientes: A = 0,001 nM - 0,010 micromolares; B = 0,011 a 0,150 micromolares; C = 0,151 a 10 micromolares.
Figure imgf000091_0001

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000096_0001
o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable,
en donde
m es 1 ;
R1 es -(CH2)nAr; en donde
n is 1 ;
Ar es piridinilo opcionalmente sustituido con ciano;
R2 es
Figure imgf000096_0002
en donde
Rn es hidrógeno;
Y es metilo;
R5 es un heterociclo insaturado, monocíclico o bicíclio que contiene de cinco a diez átomos, en donde de uno a cuatro de esos átomos se seleccionan independientemente de entre nitrógeno y azufre; y en donde el grupo monocíclico o bicíclico está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes independientemente seleccionados de entre alquilo C1-C3, ciano, formilo, halo, haloalcoxi C1-C3, haloalquilo Ci-C3, hidroxi, oxo, -L-(CH2)mNRcRd, -L-(CH2)mOH,
Figure imgf000096_0003
en donde
L se selecciona de entre un enlace, -CH2- y -O-;
m' es 1,2, 3 o 4; siempre que cuando m' es 1, L es un enlace que está unido al resto molecular precursor a través de un átomo de carbono;
t es 0 o 1 ;
z es 2 o 3;
Rz es hidroxi; y
Rc y Rd son cada uno metilo; y
R6 es hidrógeno;
R3 es halo;
R4 se selecciona de entre -(CH2)pCHO, -(CH2)nOH y -(CH2)n'NRqR8,
p es 0, 1,2 o 3;
n' es 1, 2, 3 o 4;
Rq se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C4 y bencilo; y
R8 se selecciona de entre
Figure imgf000096_0004
Figure imgf000097_0001
en donde
s es 0, 1 o 2;
z es 1,2 o 3;
Rj se selecciona de entre alquilo C1-C3, alquilsulfonil C1-C3alquilo C1-C3, alquilsulfoxil C1-C3alquilo C1-C3 y alquilsulfanil C1-C3alquilo C1-C3;
Rw es -CO2H o -CONH2,
R9 se selecciona de entre hidrógeno, bencilo y metilo;
cada R9' se selecciona independientemente de entre hidrógeno, etilo y metilo;
R10 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C3 y bencilo; y
R11 se selecciona de entre alquenilo C2-C4 y alquilo C1-C4;
o
R8 y Rq, juntos con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo seleccionado de entre
Figure imgf000097_0002
en donde
s es 0, 1 o 2;
z es 1, 2 o 3;
Q' se selecciona de entre CHR13', S, O, -N(CH2)2OH y NCH3;
R12 se selecciona de entre hidrógeno, -CO2H, hidroxialquilo C1-C4,
y -C(O)NHSO2R16; en donde R16 se selecciona de entre trifluorometilo, ciclopropilo, alquilo C1-C4, dimetilamino, 4-metilpiperazinilo e imidazolilo sustituidos con un grupo metilo;
R13 se selecciona de entre hidrógeno, hidroxialquilo C1-C4 y -CO2H;
R13' se selecciona de entre hidrógeno, hidroxialquilo C1-C3 y -CO2H; y
R14 se selecciona de entre alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C3, carboxi, halo, hidroxi, hidroxialquilo C1-C4 y -NRc'Rd'; en donde Rc' y Rd' se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alcoxicarbonilo C1-C4 y alquilcarbonilo C1-C4.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en donde:
p es 0;
n' es 1;
Rq es hidrógeno; y
R8 se selecciona de entre
Figure imgf000097_0003
en donde
s es 1
z es 2;
R9 se selecciona de entre hidrógeno, bencilo y metilo;
cada R9' se selecciona independientemente de entre hidrógeno, etilo y metilo; y
R10 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo C1-C3 y bencilo;
o
R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo que es
Figure imgf000098_0001
en donde
s es 1 o 2 ;
z es 2 o 3; y
R14 se selecciona de entre alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C3, carboxi, halo e hidroxi.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 seleccionado de
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-7-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-3-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-3-il)bencil)oxi)bencil) piperidin-2-carboxílico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-2-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinolin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-2-il)bencil)oxi) bencil)amino)-3-hidroxi-2- metilpropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(isoquinolin-3-il)-2-metilbencil)oxi) bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(isoquinolin-7-il)-2-metilbencil)oxi) bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(isoquinolin-6-il)-2-metilbencil)oxi) bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((4-((3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il) metoxi)bencil)amino)-3- hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((4-((3-(benzo[d]tiazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi) bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((4-((3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido 2-((4-((3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi) bencil)amino)-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((4-((3-(benzo[d]oxazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi) bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((4-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi) bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido 2-((4-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi) bencil)amino)-2-metilpropanoico;
ácido (S)-1-(4-((3-(benzo[d]tiazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)-2-metilpirrolidin-2-carboxílico;
ácido (R)-2-((4-((3-(1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il) metoxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxipropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxipropanoico;
ácido 2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-2-metilpropanoico;
ácido 2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(2-(dimetilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-2-metilpropanoico;
(R)-5-((4-cloro-2-formil-5-((3-(2-(2-(3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)
fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(2-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(2-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)benzo[d]oxazol-5-il)-2 metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
ácido (s)-1-(5-doro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(6-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il) propoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
(R)-5-((4-cloro-2-(hidroximetil)-5-((3-(6-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
ácido (R)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxipropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3 -hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3 -hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propil)-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3 -hidroxipropanoico;
5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-2-(3-(piperidin-1-il)propoxi)piridin-4-il)-2-metilbencil)oxi)-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
(R)-5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-4-(3-(3-hidroxipirrolidin-1-il)propoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(1-(4-((S)-3-hidroxipirrolidin-1-il)butil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3 -hidroxi-2-metilpropanoico;
5-((4-cloro-5-((3-(3-cloro-4-(3-hidroxipropoxi)piridin-2-il)-2-metilbencil)oxi)-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
5-((4-cloro-2-(((2-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)amino)metil)-5-((3-(4-(((2-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)etil)amino)metil)-3,5-dimetiMH-pirazoM-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
5-((4-cloro-2-(((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)metil)-5-((3-(4-(((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)metil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-2-metilbencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(4-(((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)metil)-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3 -hidroxi-2-metilpropanoico;
ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(4-formil-3,5-dimetiMH-pirazoM-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico; y
ácido (S)-1-(4-((3-(benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il) metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
o una sal de los mismos farmacéuticamente aceptable.
4. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
5. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para su uso en terapia.
6. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para su uso para potenciar, estimular, modular y/o aumentar la respuesta inmune en un sujeto que lo necesite.
7. El compuesto o la sal del mismo farmacéuticamente aceptable para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende además administrar un agente adicional antes, después o simultáneamente con el compuesto de la reivindicación 1 o la sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
8. El compuesto o la sal del mismo farmacéuticamente aceptable para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el agente adicional es un agente antimicrobiano, un agente antivírico, un agente citotóxico, un agente modulador de la expresión génica y/o un modificador de la respuesta inmune.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la inhibición del crecimiento, la proliferación o la metástasis de células cancerosas en un sujeto que lo necesite.10
10. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 9 en donde el cáncer se selecciona de entre melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de pulmón de células no microcíticas escamosas (NSCLC), NSCLC no escamosas, cáncer colorrectal, cáncer de próstata resistente a la castración, cáncer de ovario, cáncer gástrico, carcinoma hepatocelular, carcinoma de páncreas, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, carcinomas de esófago, tracto gastrointestinal y mama, y cáncer hematológico.
11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de una enfermedad infecciosa en un sujeto que lo necesite.
12. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la enfermedad infecciosa es causada por un virus.
13. El compuesto o la sal del mismo farmacéuticamente aceptable para su uso de acuerdo con la reivindicación 12 en donde el virus se selecciona de entre VIH, Hepatitis A, Hepatitis B, Hepatitis C, Hepatitis D, virus del herpes, virus del papiloma e influenza.
14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento del choque séptico en un sujeto que lo necesite.
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