ES2891528T3 - Compuestos útiles como inmunomoduladores - Google Patents

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Kap-Sun Yeung
Katharine A Grant-Young
Li-Qiang Sun
David R Langley
Laurent Denis R St
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I): **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: m es 0, 1 o 2; Z se selecciona entre -OCH3 y -O(CH2)nAr; en donde n es 1, 2, 3 o 4; Ar se selecciona entre fenilo y piridinilo, en donde cada anillo está opcionalmente sustituido con 1, 2, 3 o 4 sustituyentes seleccionados independientemente entre alcoxi C1-C4, alquilo C1-C4, amido, carboxi, ciano, formilo, halo, haloalquilo C1-C4, haloalcoxi C1-C4 y nitro; A se selecciona entre -CH2O-, -OCH2-, -(CH2)2-, -CH=CH-, -C(O)NH- y -NHC(O)-, en donde cada grupo se dibuja con su lado izquierdo unido a R2 y su lado derecho unido al anillo fenilo; R2 se selecciona de **(Ver fórmula)** en las que Rm y Rn se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C1-C3 y halo; Y se selecciona entre hidrógeno, alcoxi C1-C3, alquilo C1-C3, ciano y halo; R5 es un anillo monocíclico o bicíclico de tres a diez miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno y oxígeno y que contiene cero, uno, dos o tres dobles enlaces, en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre alcoxi C1-C3, alcoxi C1-C3alquilo C1-C4, alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C4, dialquilamino (C1-C4), amino, aminoalquilo C1-C4, carboxi, carboxialquilo C1-C4, cicloalquilo C3-C4 y fenilo; cada R3 se selecciona independientemente entre alquilo C1-C4, ciano, halo y haloalquilo C1-C4; R4 se selecciona entre -CH2OH, -CHO y -(CH2)nNRqR8; en donde n es 1, 2, 3 o 4; Rq se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4; R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-C4, -(CH2)nN(CH3)2, **(Ver fórmula)** R9 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1; cada R9' se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C1-C3 y R10 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4 o R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo que es **(Ver fórmula)** en el que s es 0, 1 o 2; z es 1, 2 o 3 y cada R14 se selecciona independientemente entre alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C6, carboxi, halo, hidroxi e hidroxialquilo C1-C4.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos útiles como inmunomoduladores
La presente divulgación se refiere generalmente a compuestos útiles como inhibidores de las interacciones proteína/ proteína PD-1/PD-L1 y proteína/proteína CD80/PD-L1. En el presente documento se proporcionan compuestos, composiciones que comprenden tales compuestos y usos de los mismos. La descripción se refiere además a composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de acuerdo con la divulgación que son útiles para el tratamiento de diversas enfermedades, incluyendo cáncer y enfermedades infecciosas.
La muerte programada-1 (CD279) es un receptor en linfocitos T que se ha demostrado que suprime las señales de activación del receptor de linfocitos T cuando está unido por cualquiera de sus ligandos, el ligando 1 de muerte programada (PD-L1, CD274, B7-H1) o PD-L2 (CD273, B7-Dc ) (Sharpe et al., Nat. Imm. 2007). Cuando los linfocitos T que expresan PD-1, entran en contacto con células que expresan sus ligandos, las actividades funcionales en respuesta a estímulos antigénicos, incluyendo la proliferación, la secreción de citocinas y la actividad citolítica se reducen. Las interacciones de PD-1/PD-Ligando regulan a la baja las respuestas inmunitarias durante la resolución de una infección o tumor, o durante el desarrollo de la auto-tolerancia (Keir Me, Butte MJ, Freeman GJ, et al. Annu. Rev. Immunol. 2008; 26: Epub). La estimulación antigénica crónica, tal como la que se produce durante la enfermedad tumoral o infecciones crónicas, da como resultado linfocitos T que expresan niveles elevados de PD-1 y son disfuncionales con respecto a la actividad hacia el antígeno crónico (revisado en Kim y Ahmed, Curr Opin Imm, 2010). Esto se denomina "agotamiento de linfocitos T". Los linfocitos B también muestran la supresión y el "agotamiento" de PD-1/PD-ligando.
También se ha demostrado que PD-L1 interacciona con CD80 (Butte MJ et al., Immunity 27:111—122 (2007). Se ha demostrado que la interacción de PD-L1/CD80 sobre la expresión de las células inmunitarias es inhibitoria. Se ha demostrado que el bloqueo de esta interacción elimina esta interacción inhibidora (Paterson AM, et al., J Immunol., 187:1097-1105 (2011); Yang J, et al. J Immunol. 1 de agosto;187(3):1113-9 (2011)).
Se ha mostrado que el bloqueo de la interacción PD-1/PD-L1 usando anticuerpos contra PD-L1 restaura y aumenta la activación de linfocitos T en muchos sistemas. Los pacientes con cáncer avanzado se benefician de la terapia con un anticuerpo monoclonal contra PD-L1 (Brahmer et al., New Engl J Med 2012). Los modelos animales preclínicos de tumores han demostrado que el bloqueo de la vía de PD-1/PD-L1 por los anticuerpos monoclonales puede mejorar la respuesta inmunitaria y dar como resultado la respuesta inmunitaria a varios tumores histológicamente distintos (Dong H, Chen L. J Mol Med. 2003; 81(5):281-287; Dong H, Strome SE, Salamoa DR, et al. Nat Med. 2002; 8(8):793-800).
La interferencia con la interacción PD-1/PD-L1 también ha mostrado una actividad de linfocitos T mejorada en sistemas de infección crónica. La infección crónica del virus de la coriomeningitis linfocítica crónica de ratones también muestra una mejor depuración del virus y una inmunidad restaurada con el bloqueo de PD-L1 (Barber DL, Wherry EJ, Masopust D, et al. Nature 2006; 439(7077):682-687). Los ratones humanizados infectados con VIH-1 muestran una protección mejorada contra la viremia y la depleción vírica de linfocitos T CD4+ (Palmer et al., J. Immunol 2013). El bloqueo de PD-1/PD-L1 a través de anticuerpos monoclonales contra PD-L1 puede restaurar la funcionalidad específica de antígeno in vitro contra linfocitos T de pacientes con VIH (Day, Nature 2006; Petrovas, J. Exp. Med. 2006; Trautman, Nature Med. 2006; D'Souza, J. Immunol. 2007; Zhang, Blood 2007; Kaufmann, Nature Imm. 2007; Kasu, J. Immunol.
2010; Porichis, Blood 2011), pacientes con VHC [Golden-Mason, J. Virol. 2007; Jeung, J. Leuk. Biol. 2007; Urbani, J. Hepatol. 2008; Nakamoto, p LoS Path. 2009; Nakamoto, Gastroenterology 2008] o pacientes de VHB (Boni, ,J. Virol.
2007; Fisicaro, Gastro. 2010; Fisicaro et al., Gastroenterology, 2012; Boni et al., Gastro., 2012; Penna et al., J Hep, 2012; Raziorrough, Hepatology 2009; Liang, World J Gastro. 2010; Zhang, Gastro. 2008).
También se ha demostrado que el bloqueo de la interacción PD-L1/CD80 estimula la inmunidad (Yang J., et al., J Immunol. 1 de agosto;187(3):1113-9 (2011)). Se ha demostrado que la estimulación inmune resultante del bloqueo de la interacción PD-L1/CD80 se potencia a través del bloqueo combinado de otras interacciones PD-1/PD-L1 o PD-1/PD-L2.
Se supone que las alteraciones en los fenotipos de las células inmunitarias son un factor importante en el choque séptico (Hotchkiss, et al., Nat Rev Immunol (2013)). Estos incluyen niveles incrementados de apoptosis de linfocitos T PD-1 y PD-L1 (Guignant, et al, Crit. Care (2011)). Los anticuerpos dirigidos a PD-L1 puede reducir el nivel de apoptosis de células inmunitarias (Zhang et al, Crit. Care (2011)). Además, los ratones que carecen de expresión de PD-1 son más resistentes a los síntomas del choque séptico que los ratones salvajes (Yang J., et al. J Immunol. 1 de agosto;187(3):1113-9 (2011)). Los estudios han revelado que el bloqueo de las interacciones de los anticuerpos que usan PD-L1 puede suprimir las respuestas inmunitarias inapropiadas y mejorar los síntomas de la enfermedad.
Además de mejorar las respuestas inmunológicas a los antígenos crónicos, también se ha demostrado que el bloqueo de la ruta PD-1/PD-L1 mejora las respuestas a la vacunación, incluyendo la vacunación terapéutica en el contexto de la infección crónica (S. J. Ha, S. N. Mueller, E. J. Wherry et al., The Journal of Experimental Medicine, vol. 205, n.° 3, págs. 543-555, 2008.; A. C. Finnefrock, A. Tang, F. Li et al., The Journal of Immunology, vol. 182, n.° 2, págs. 980­ 987, 2009; M. -Y. Song, S. -H. Park, H. J. Nam, D. -H. Choi e Y.-C. Sung, The Journal of Immunotherapy, vol. 34, n.° 3, págs. 297-306, 2011).
La ruta PD-1 es una molécula inhibidora clave en el agotamiento de los linfocitos T que surge de la estimulación crónica del antígeno durante las infecciones crónicas y las enfermedades tumorales. Se ha demostrado que el bloqueo de la interacción PD-1/PD-L1 a través del direccionamiento a la proteína PD-L1 restaura las funciones inmunitarias de los linfocitos T específicos de antígeno in vitro e in vivo, incluyendo respuestas mejoradas a la vacunación en el establecimiento de una infección tumoral o crónica. En consecuencia, se desean agentes que bloquean la interacción de PD-L1 con PD-1 o CD80.
Los solicitantes encontraron compuestos potentes que tienen actividad como inhibidores de la interacción de PD-L1 con PD-1 y CD80, y por lo tanto, pueden ser útiles para la administración terapéutica para aumentar la inmunidad en cáncer o infecciones, incluyendo la vacuna terapéutica. Estos compuestos se proporcionan para ser útiles como productos farmacéuticos con valores deseables de estabilidad, biodisponibilidad, índice terapéutico y toxicidad que son importantes para su capacidad farmacológica.
Los documentos WO 2015/034820 y US 2015/291549 desvelan compuestos que son útiles como inhibidores de la interacción proteína/proteína PD-1/PD-L1.
En un primer aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000003_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
m es 0, 1 o 2;
Z se selecciona entre -OCH3 y -O(CH2)nAr; en donde
n es 1, 2, 3 o 4;
Ar se selecciona entre fenilo y piridinilo, en donde cada anillo está opcionalmente sustituido con 1, 2, 3 o 4 sustituyentes seleccionados independientemente entre alcoxi C1-C4, alquilo C1-C4, amido, carboxi, ciano, formilo, halo, haloalquilo C1-C4, haloalcoxi C1-C4 y nitro;
A se selecciona entre -CH2O-, -OCH2-, -(CH2)2-, -CH=CH-, -C(O)NH- y -NHC(O)-, en donde cada grupo se dibuja con su lado izquierdo unido a R2 y su lado derecho unido al anillo fenilo;
R2 se selecciona de
Figure imgf000003_0002
en donde
Rm y Rn se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C1-C3 y halo;
Y se selecciona entre hidrógeno, alcoxi C1-C3, alquilo C1-C3, ciano y halo;
R5 es un anillo monocíclico o bicíclico de tres a diez miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno y oxígeno y que contiene cero, uno, dos o tres dobles enlaces, en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre alcoxi C1-C3, alcoxi C1-C3alquilo C1-C4, alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C4, dialquilamino (C1-C4), amino, aminoalquilo C1-C4, carboxi, carboxialquilo C1-C4, cicloalquilo C3-C4 y fenilo;
cada R3 se selecciona independientemente entre alquilo C1-C4, ciano, halo y haloalquilo C1-C4;
R4 se selecciona entre -CH2OH, -CHO y -(CH2)nNRqR8; en donde
n es 1, 2, 3 o 4;
Rq se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4;
R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-C4, -(CH2)nN(CH3)2,
Figure imgf000004_0001
R9 se selecciona entre hidrógeno y alquilo Ci;
cada R9' se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C1-C3 y
R10 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4 o
R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo que es
Figure imgf000004_0002
en donde
s es 0, 1 o 2;
z es 1,2 o 3 y
cada R14se selecciona independientemente entre alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C6, carboxi, halo, hidroxi e hidroxialquilo C1-C4.
En una primera realización del primer aspecto de la presente divulgación, se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en donde m es 1 y R3 es halo. En una segunda realización del primer aspecto Z es -OCH2Ar en donde Ar es piridinilo sustituido con un grupo ciano. En una tercera realización, A es -CH2O-.
En una cuarta realización del primer aspecto, la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde
m es 1;
R3 es halo
Z es OCH2Ar en donde Ar es piridinilo sustituido con un grupo ciano;
A es -CH2O-;
R2 es
Figure imgf000004_0003
Rn se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1 y
R5 es un anillo monocíclico o bicíclico de seis a ocho miembros que contiene un átomo de nitrógeno y cero dobles enlaces, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre alquilo C1 , dialquilamino (C1-C4), amino, carboxialquilo C1-C4 y cicloalquilo C3-C4.
En una quinta realización del primer aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde
m es 1;
R3 es halo
Z es OCH2Ar en donde Ar es piridinilo sustituido con un grupo ciano;
A es -CH2O-;
R2 es
Figure imgf000004_0004
Y se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1;
Rn se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1 ;
R5 es un anillo monocíclico o bicíclico de seis a ocho miembros que contiene un átomo de nitrógeno y cero dobles enlaces, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre alquilo Ci, dialquilamino (C1-C4), amino, carboxialquilo C1-C4y cicloalquilo C3-C4y
R4 es -(CH2)NRqR8; en donde
Rq se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1 ;
R8 se selecciona de
Figure imgf000005_0001
R9 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1;
cada R9' se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C1 y
R10 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4 o
R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo que es
Figure imgf000005_0002
en donde
s es 1;
z es 3 y
R14 es carboxi.
En una sexta realización del primer aspecto, la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde
m es 1;
Z es -O(CH2)nAr;
n es 1;
Ar es piridinilo sustituido con un grupo ciano;
A es -CH2O-;
R2 se selecciona de
Figure imgf000005_0003
en donde
Rm y Rn se seleccionan independientemente entre hidrógeno y alquilo C1-C3 ;
Y se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C3;
R5 es un anillo monocíclico o bicíclico de cinco a ocho miembros que opcionalmente contiene uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno y oxígeno y que contiene cero, uno, dos o tres dobles enlaces, en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado entre alquilo C1-C4, dialquilamino (C1-C4), amino, carboxialquilo C1-C4 y cicloalquilo C3-C4 ;
R3 es halo;
R4 se selecciona entre -CH2OH, -CHO y -(CH2)nNRqR8; en donde
n es 1;
Rq se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4;
R8 se selecciona de
Figure imgf000006_0001
R9 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C i
cada R9' se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C1-C3 y
R10 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4 o
R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo que es
Figure imgf000006_0002
en donde
s es 1 ;
z es 3 y
R14 es carboxi.
En un segundo aspecto, la presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En un tercer aspecto, la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso para potenciar, estimular, modular y/o incrementar una respuesta inmunitaria en un sujeto que lo necesita. En una primera realización del tercer aspecto, se administra un agente adicional antes de, después o simultáneamente con el compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una segunda realización, el agente adicional es un agente antimicrobiano, un agente antivírico, un agente citotóxico, un agente modulador de la expresión génica y/o un modificador de la respuesta inmunitaria.
En un cuarto aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la inhibición del crecimiento, proliferación o metástasis de células cancerosas en un sujeto que lo necesita. En una primera realización, el cáncer se selecciona entre melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de pulmón no microcítico escamoso (NSCLC), CPNM no escamoso, cáncer colorrectal, cáncer de próstata resistente a la castración, cáncer de ovario, cáncer gástrico, carcinoma hepatocelular, carcinoma pancreático, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, carcinomas del esófago, del tracto gastrointestinal y de mama, y neoplasia maligna hematológica.
En un quinto aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de una enfermedad infecciosa en un sujeto que lo necesita. En una primera realización del quinto aspecto, la enfermedad infecciosa está causada por un virus. En una segunda realización el virus se selecciona entre HIV, Hepatitis A, Hepatitis B, Hepatitis C, Hepatitis D, virus del herpes, papilomavirus y virus de la gripe.
En un sexto aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de choque séptico en un sujeto que lo necesita.
En un séptimo aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso como medicamento.
En otro aspecto la presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (II),
Figure imgf000006_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
m es 0 , 1 o 2 ;
Z es -O(CH2)nAr;
n es 1,2, 3 o 4;
Ar se selecciona entre fenilo y piridinilo, en donde cada anillo está opcionalmente sustituido con 1, 2, 3 o 4 sustituyentes seleccionados independientemente entre alcoxi C1-C4 , alquilo C1-C4, amido, carboxi, ciano, formilo, halo, haloalquilo C1-C4, haloalcoxi C1-C4y nitro;
A se selecciona entre -CH2O-, -OCH2-, -(CH2)2-, -CH=CH-, -C(O)NH- y -NHC(O)-, en donde cada grupo se dibuja con su lado izquierdo unido a R2 y su lado derecho unido al anillo fenilo;
R2 se selecciona de
Figure imgf000007_0001
en donde
Rm y Rn se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C1-C3y halo;
Y se selecciona entre hidrógeno, alcoxi C1-C3, alquilo C1-C3, ciano y halo;
R5 es un anillo monocíclico o bicíclico de tres a diez miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno y oxígeno y que contiene cero, uno, dos o tres dobles enlaces, en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre alcoxi C1-C3, alcoxi C1-C3alquilo C1-C4, alquilo C1-C4, dialquilamino (C1-C4), amino, aminoalquilo C1-C4, carboxi, carboxialquilo C1-C4 y cicloalquilo C3-C4;
cada R3 se selecciona independientemente entre alquilo C1-C4, ciano, halo y haloalquilo C1-C4;
R4 se selecciona entre -CH2OH, -CHO y -(CH2)nNRqR8; en donde
n es 1, 2, 3 o 4;
Rq se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4;
R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-C4, -(CH2)nN(CH3)2,
Figure imgf000007_0002
R9 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1;
cada R9' se selecciona independientemente entre hidrógeno y C1-C3alquilo;
R10 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4 o
R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo que es
Figure imgf000007_0003
en donde
s es 0, 1 o 2;
z es 1,2 o 3 y
cada R14 se selecciona independientemente entre alcoxicarbonilo Ci-C4, alquilo Ci-C6, carboxi, halo, hidroxi e hidroxialquilo C1-C4.
A menos que se indique específicamente otra cosa en el presente documento, las referencias hechas en singular también pueden incluir el plural. Por ejemplo, "un" y "una" pueden referirse a uno o a uno o más.
Como se usa en el presente documento, la expresión "compuesto o compuestos o sales farmacéuticamente aceptables del mismo" se refiere a al menos un compuesto, al menos a una sal de los compuestos o una combinación de los mismos. Por ejemplo, compuestos de fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos incluye un compuesto de fórmula (I); dos compuestos de fórmula (I); una sal de un compuesto de fórmula (I); un compuesto de fórmula (I) y una o más sales del compuesto de fórmula (I) y dos o más sales de un compuesto de fórmula (I).
A menos que se indique otra cosa, se supone que cualquier átomo con valencias insatisfechas tiene átomos de hidrógeno suficientes para satisfacer las valencias.
A lo largo de la memoria descriptiva, un experto en la técnica puede elegir los grupos y sustituyentes de los mismos para proporcionar restos y compuestos estables.
A continuación se enumeran las definiciones de diversos términos usados para describir la presente divulgación. Estas definiciones se aplican a los términos que se usan a lo largo de la memoria descriptiva (a menos que estén limitados de otro modo en casos específicos), ya sea de manera individual o como parte de un grupo más grande. Las definiciones expuestas en el presente documento tienen prioridad sobre las definiciones expuestas en cualquier patente, solicitud de patente.
Como se usa en el presente documento, las formas en singular "un", "una" y "el/la" incluyen referencias en plural a menos que el contexto indique claramente otra cosa.
Los anillos bicíclicos de la presente divulgación pueden ser estructuras monocíclicas o bicíclicas condensadas, espirocíclicas o puenteadas.
El término "alcoxi C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C3 unido al resto molecular precursor a través de un átomo de oxígeno.
El término "alcoxi C1-C3alquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxi C1-C3 unido al resto molecular precursor a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "alcoxi C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C4 unido al resto molecular precursor a través de un átomo de oxígeno.
El término "alcoxicarbonilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxi C1-C4 unido al grupo molecular precursor a través de un grupo carbonilo.
El término "alquilo C1-C3", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo obtenido a partir de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene de uno a tres átomos de carbono.
El término "alquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo obtenido a partir de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene de uno a cuatro átomos de carbono.
El término "alquilo C1-C6", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo obtenido a partir de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene de uno a seis átomos de carbono.
El término "alquilamino C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a -NHR, en donde R es un grupo alquilo C1-C4.
El término "amido", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)NH2.
El término "aminoalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo amino unido al resto molecular parental a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "carbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)-.
El término "carboxi", como se usa en el presente documento, se refiere a -CO2H.
El término "carboxialquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo carboxi unido al resto molecular parental a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "ciano", como se usa en el presente documento, se refiere a -CN.
El término "cicloalquilo C3-C6", como se usa en el presente documento, se refiere a un sistema de anillo hidrocarburo monocíclico, saturado, que tiene tres o cuatro átomos de carbono y cero heteroátomos.
El término "di(alquil C1-C4)amino", como se usa en el presente documento, se refiere a -NR2, en donde cada R es un grupo alquilo C1-C4. Los grupos R pueden ser iguales o diferentes.
El término "formilo", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)H.
Los términos "halo" y "halógeno", como se usan en el presente documento, se refieren a F, Cl, Br o I.
El término "haloalcoxi C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalquilo C1-C4 unido al resto molecular parental a través de un átomo de oxígeno.
El término "haloalquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo C1-C4 sustituido con uno, dos o tres átomos de halógeno.
El término "hidroxi", como se usa en el presente documento, se refiere a -OH.
El término "hidroxialquilo C1-C4", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo hidroxi unido al resto molecular parental a través de un grupo alquilo C1-C4.
El término "nitro", como se usa en el presente documento, se refiere a -NO2.
La expresión "farmacéuticamente aceptable" es emplea en el presente documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que son, dentro del alcance del criterio médico razonable, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin producir una toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación excesivos, en proporción con una relación beneficio/riesgo razonable.
Los compuestos de fórmula (I) pueden formar sales que también están dentro del alcance de la presente divulgación. A menos que se indique otra cosa, se entiende que la referencia a un compuesto de la invención incluye la referencia a una o más sales del mismo. El término "sal/sales" representa sales ácidas y/o básicas formadas con ácidos y bases inorgánicos y/u orgánicos. Además, el término "sal/sales" pueden incluir zwitteriones (sales internas), por ejemplo, cuando un compuesto de fórmula (I) contiene tanto un resto básico, tal como una amina o una piridina o un anillo de imidazol, como un resto ácido, tal como un ácido carboxílico. Se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables (es decir, no tóxicas, fisiológicamente aceptables), tales como, por ejemplo, sales de metal y amina aceptables en las que el catión no contribuye significativamente a la toxicidad o la actividad biológica de la sal. Sin embargo, pueden ser útiles otras sales, por ejemplo, en etapas de aislamiento o purificación, que pueden emplearse durante la preparación y, por lo tanto, se contemplan dentro del alcance de la divulgación. Se pueden formar sales de los compuestos de fórmula (I), por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (I) con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio tal como uno en el que la sal precipita o en un medio acuoso seguido de liofilización.
Las sales de adición de ácidos ilustrativas incluyen acetatos (tales como los formados con ácido acético o ácido trihaloacético, por ejemplo, ácido trifluoroacético), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencenosulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, alcanforatos, alcanforsulfonatos, ciclopentanopropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etanosulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, clorhidratos (formados con ácido clorhídrico), bromhidratos (formados con bromuro de hidrógeno), yodhidratos, maleatos (formados con ácido maleico), 2-hidroxietanosulfonatos, lactatos, metanosulfonatos (formados con ácido metanosulfónico), 2-naftalenosulfonatos, nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, 3-fenilpropionatos, fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos (tales como los formados con ácido sulfúrico), sulfonatos (tales como los mencionados en el presente documento), tartratos, tiocianatos, toluenosulfonatos tales como tosilatos, undecanoatos y similares.
Las sales básicas a modo de ejemplo incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos, tales como sales de sodio, litio y potasio; sales de metales alcalinotérreos, tales como sales de calcio y magnesio; sales de bario, cinc y aluminio; sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas) tales como trialquilaminas tales como trietilamina, procaína, dibencilamina, N-bencil-p-fenetilamina, 1-efenamina, N,N'-dibenciletilen-diamina, deshidroabietilamina, N-etilpiperidina, bencilamina, diciclohexilamina o aminas farmacéuticamente aceptables similares y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y similares. Los grupos que contienen nitrógeno básico pueden cuaternizarse con agentes, tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo), dialquil sulfatos (por ejemplo, dimetil, dietil, dibutil y diamil sulfatos), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo) y otros. Las sales preferidas incluyen sales monoclorhidrato, hidrogenosulfato, metanosulfonato, fosfato o nitrato.
Se conocen bien en la técnica diversas formas de profármacos y se describen en:
a) The Practice of Medicinal Chemistry, Camille G. Wermuth et al., cap. 31, (Academic Press, 1996);
b) Design of Prodrugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);
c) A Textbook of Drug Design and Development, P. Krogsgaard-Larson y H. Bundgaard, eds. cap. 5, págs. 113­ 191 (Harwood Academic Publishers, 1991) y
d) Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Bernard Testa y Joachim M. Mayer, (Wiley-VCH, 2003).
Además, los compuestos de fórmula (I), después de su preparación, se pueden aislar y purificar para obtener una composición que contiene una cantidad en peso igual a o superior al 99 % de un compuesto de fórmula (I) ("sustancialmente puro"), la cual se usa o se formula después tal como se describe en el presente documento. Dichos compuestos de fórmula (I) "sustancialmente puros" se contemplan también en el presente documento como parte de la presente divulgación.
"Compuesto estable" y "estructura estable" pretenden incluir un compuesto que es suficientemente robusto como para sobrevivir al aislamiento hasta un grado útil de pureza a partir de una mezcla de reacción y a su formulación en un agente terapéutico eficaz. La presente divulgación pretende incluir los compuestos estables.
"Cantidad terapéuticamente eficaz" pretende incluir una cantidad de un compuesto de la presente divulgación solo o una cantidad de la combinación de compuestos reivindicados o una cantidad de un compuesto de la presente divulgación en combinación con otros principios activos eficaces para inhibir las interacciones PD-1/PD-L1 proteína/proteína y/o CD80/PD-L1 proteína/proteína o eficaces para tratar o prevenir cáncer o enfermedades infecciosas, tales como choque séptico, HIV o hepatitis B, hepatitis C y hepatitis D.
Como se usa en el presente documento, "tratar" o "tratamiento" incluye el tratamiento de una patología en un mamífero, en particular en un ser humano e incluyen: (a) prevenir la aparición de la patología en un mamífero, en particular, cuando dicho mamífero tiene predisposición a la patología pero aún no se ha diagnosticado que la tenga; (b) inhibir la patología, es decir, detener su desarrollo y/o (c) aliviar la patología, es decir, provocar la regresión de la patología.
Los compuestos de la presente divulgación están destinados a incluir todos los isótopos de átomos que aparecen en los presentes compuestos. Los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico pero diferentes números másicos. A modo de ejemplo general y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen deuterio (D) y tritio (T). Los isótopos de carbono incluyen 13C y 14C. Los compuestos de la divulgación marcados isotópicamente pueden prepararse generalmente mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a aquellos descritos en el presente documento, usando un reactivo marcado con isótopos apropiado en lugar del reactivo no marcado empleado de otro modo. Por ejemplo, metilo (-CH3) incluye también grupos metilo deuterados tales como -CD3.
Los compuestos de acuerdo con la fórmula (I) y/o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden administrarse por cualquier medio adecuado para la afección a tratar, que puede depender de la necesidad de tratamiento específico de sitio o la cantidad de compuesto de fórmula (I) a administrar. También se incluye dentro de esta divulgación una clase de composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) y/o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, no tóxicos y/o diluyentes y/o adyuvantes (denominados de manera colectiva en el presente documento materiales "vehículo") y, si se desea, otros principios activos. Los compuestos de fórmula (I) se pueden administrar por cualquier vía adecuada, preferentemente en forma de una composición farmacéutica adaptada a dicha vía y en una dosis eficaz para el tratamiento pretendido. Los compuestos y composiciones de la presente descripción pueden, por ejemplo, administrarse por vía oral, por vía mucosa, rectal o parenteral incluyendo por vía intravascular, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular e intraesternal en formulaciones de unidades de dosificación que contienen portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables convencionales. Por ejemplo, el portador farmacéutico puede contener una mezcla de manitol o lactosa y celulosa microcristalina. La mezcla puede contener componentes adicionales tales como un agente lubricante, por ejemplo, estearato de magnesio y un agente disgregante tal como crospovidona. La mezcla de portador puede rellenarse en una cápsula de gelatina o comprimirse en forma de un comprimido. La composición farmacéutica se puede administrar en forma de una forma de dosificación oral o una infusión, por ejemplo.
Para administración oral, la composición farmacéutica puede estar en forma de, por ejemplo, un comprimido, una cápsula, cápsula líquida, suspensión o líquido. La composición farmacéutica se prepara preferentemente en forma de una unidad de dosificación que contiene una cantidad particular del principio activo. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede proporcionarse como un comprimido o cápsula que comprende una cantidad de principio activo en el intervalo de aproximadamente 0,1 a 1000 mg, preferentemente de aproximadamente 0,25 a 250 mg y más preferentemente de aproximadamente 0,5 a 100 mg. Una dosis diaria adecuada para un ser humano u otro mamífero puede variar ampliamente dependiendo del estado del paciente y de otros factores, pero, puede determinarse usando métodos rutinarios.
Cualquier composición farmacéutica contemplada en el presente documento puede, por ejemplo, suministrarse por vía oral mediante cualquier preparación oral aceptable y adecuada. Las preparaciones orales a modo de ejemplo, incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, comprimidos, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas y oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras y blandas, cápsulas líquidas, jarabes y elixires. Las composiciones farmacéuticas destinadas a la administración oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas destinadas a la administración oral. Para proporcionar preparaciones farmacéuticamente aceptables, una composición farmacéutica de acuerdo con la divulgación puede contener al menos un agente seleccionado de entre agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, emolientes, antioxidantes y agentes conservantes.
Un comprimido puede, por ejemplo, preparase mezclando al menos un compuesto de fórmula (I) y/o al menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con al menos un excipiente no tóxico farmacéuticamente aceptable adecuado para la fabricación de comprimidos. Los excipientes a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como, por ejemplo, carbonato de calcio, carbonato sódico, lactosa, fosfato de calcio y fosfato de sodio; agentes de granulación y desintegración, tales como, por ejemplo, celulosa microcristalina, croscarmelosa de sodio, almidón de maíz y ácido algínico; agentes aglutinantes, tales como, por ejemplo, almidón, gelatina, polivinilpirrolidona y goma arábiga y agentes lubricantes, tales como, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico y talco. Además, un comprimido puede estar sin recubrir o puede recubrirse por técnicas conocidas para enmascarar el mal sabor de un fármaco de sabor desagradable o retrasar la desintegración y absorción del principio activo en el tracto gastrointestinal, manteniendo así los efectos del principio activo durante un período más prolongado. Los materiales enmascarantes del sabor solubles en agua a modo de ejemplo, incluyen, pero no se limitan a, hidroxipropil-metilcelulosa e hidroxipropilcelulosa. Los materiales de retardo de tiempo a modo de ejemplo, incluyen, pero no se limitan a, etil celulosa y acetato butirato de celulosa.
Las cápsulas de gelatina dura pueden, por ejemplo, prepararse mezclando al menos un compuesto de fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo con al menos un diluyente sólido inerte, tales como, por ejemplo, carbonato de calcio; fosfato de calcio y caolín.
Las cápsulas de gelatina blanda pueden, por ejemplo, pueden prepararse mezclando al menos un compuesto de fórmula (I) y/o al menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con al menos un vehículo soluble en agua, tales como, por ejemplo, polietilenglicol y al menos un medio oleoso, tales como, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida y aceite de oliva.
Se puede preparar una suspensión acuosa, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de fórmula (I) y/o al menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con al menos un excipiente adecuado para la fabricación de una suspensión acuosa. Los excipientes de ejemplo adecuados para la fabricación de una suspensión acuosa, incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, agentes de suspensión, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, ácido algínico, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma arábiga; agentes de dispersión o humectantes, tales como, por ejemplo, un fosfátido de origen natural, por ejemplo, lecitina; productos de condensación de óxido de alquileno con ácidos grasos, tales como, por ejemplo, estearato de polioxietileno; productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, tales como, por ejemplo, heptadecaetilen-oxicetanol; productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol, tales como, por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitol y productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como, por ejemplo, monooleato de polietilensorbitán. Una suspensión acuosa también puede contener al menos un conservante, tal como, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de etilo y n-propilo; al menos un agente colorante; al menos un agente saborizante y/o al menos un agente edulcorante, que incluye pero no se limita a, por ejemplo, sacarosa, sacarina y aspartamo.
Las suspensiones oleosas pueden, por ejemplo, prepararse suspendiendo al menos un compuesto de fórmula (I) y/o al menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en un aceite vegetal, tal como, por ejemplo, aceite de cacahuete; aceite de oliva; aceite de sésamo y aceite de coco o en aceite mineral, tal como, por ejemplo, parafina líquida. Una suspensión oleosa también puede contener al menos un agente espesante, tal como, por ejemplo, cera de abejas; parafina dura y alcohol cetílico. Para proporcionar una suspensión oleosa de sabor agradable, pueden añadirse a la suspensión oleosa al menos uno de los agentes edulcorantes ya descritos anteriormente en el presente documento y/o al menos un agente saborizante. Una suspensión oleosa puede contener además al menos un conservante, que incluye, pero no se limita a, por ejemplo, un antioxidante, tal como, por ejemplo, hidroxianisol butilado y alfa-tocoferol.
Los polvos y gránulos dispersables pueden, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de fórmula (I) y/o al menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con al menos un agente dispersante y/o humectante; al menos un agente de suspensión y/o al menos un conservante. Los agentes de dispersión, agentes humectantes y agentes de suspensión adecuados son como ya se ha descrito anteriormente. Los conservantes a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, antioxidantes, por ejemplo, ácido ascórbico. Además, los polvos y gránulos dispersables también pueden contener al menos un excipiente, que incluye, pero no se limita a, por ejemplo, agentes edulcorantes; agentes saborizantes y agentes colorantes.
Una emulsión de al menos un compuesto de fórmula (I) y/o al menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede, por ejemplo, prepararse como una emulsión de aceite en agua. La fase oleosa de las emulsiones que comprenden compuestos de fórmula (I) puede estar constituida a partir de ingredientes conocidos de una manera conocida. La fase oleosa puede proporcionarla, pero no se limita a, por ejemplo, un aceite vegetal, tal como, por ejemplo, aceite de oliva y aceite de cacahuete; un aceite mineral, tal como, por ejemplo, parafina líquida y mezclas de los mismos. Si bien la fase puede comprender simplemente un emulsionante, puede comprender una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o con tanto una grasa como un aceite. Los agentes emulsionantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, fosfátidos de origen natural, por ejemplo, lecitina de soja; ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como, por ejemplo, monooleato de sorbitán y productos de condensación de ésteres parciales con óxido de etileno, tales como, por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitán. Preferentemente, se incluye un emulsionante hidrófilo junto con un emulsionante lipófilo que actúa como estabilizante. También se prefiere incluir tanto un aceite como una grasa. En conjunto, el emulsionante o emulsionantes con o sin el estabilizante o estabilizantes constituyen la denominada cera emulsionante y la cera junto con el aceite y la grasa forman la denominada base de pomada emulsionante que forma la fase oleosa dispersa de las formulaciones en crema. Una emulsión puede contener también un agente edulcorante, un agente saborizante, un conservante y/o un antioxidante. Los emulsionantes y estabilizadores de emulsión adecuados para su uso en la formulación de la presente divulgación incluyen Tween 60, Span 80, alcohol cetoestearílico, alcohol miristílico, monoestearato de glicerilo, laurilsulfato de sodio, diestearato de glicerilo solo o con una cera, u otros materiales bien conocidos en la técnica.
Los compuestos de fórmula (I) y/o al menos una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos pueden, por ejemplo, administrarse también por vía intravenosa, vía subcutánea y/o vía intramuscular mediante cualquier forma inyectable adecuada y farmacéuticamente aceptable. Las formas inyectables a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, soluciones acuosas estériles que comprenden vehículos y disolventes aceptables, tales como, por ejemplo, agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio; microemulsiones estériles de aceite en agua y suspensiones acuosas u oleaginosas.
Las formulaciones para administración parenteral pueden estar en forma de disoluciones o suspensiones inyectables estériles isotónicas, acuosas o no acuosas. Estas soluciones y suspensiones pueden prepararse a partir de polvos o gránulos estériles, usando uno o más de los portadores o diluyentes mencionados para su uso en las formulaciones para administración oral o utilizando otros agentes de dispersión o humectantes y agentes de suspensión adecuados. Los compuestos pueden disolverse en agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, alcohol bencílico, cloruro de sodio, goma de tragacanto y/o diversos tampones. Otros adyuvantes y modos de administración son bien y ampliamente conocidos en la técnica farmacéutica. El principio activo puede administrarse también por inyección en forma de una composición con portadores adecuados que incluyen solución salina, dextrosa o agua o con ciclodextrina (es decir, Captisol), solubilización de codisolvente (es decir, propilenglicol) o solubilización micelar (es decir, Tween 80).
La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico y parenteralmente aceptable, por ejemplo en forma de una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están el agua, la solución de Ringer y la solución de cloruro de sodio isotónica. Además, se usan aceites no volátiles estériles convencionalmente como disolvente o medio de suspensión. Para este fin puede emplearse cualquier aceite suave no volátil, incluyendo monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables.
Una microemulsión de aceite en agua inyectable, estéril, puede, por ejemplo, prepararse 1) disolviendo al menos un compuesto de fórmula (I) en una fase oleosa, tales como, por ejemplo, una mezcla de aceite de soja y lecitina; 2) combinando la fórmula (I) que contiene la fase oleosa con una mezcla de agua y glicerol y 3) procesando la combinación para formar una microemulsión.
Una suspensión acuosa u oleaginosa estéril puede prepararse en conformidad con métodos ya conocidos en la técnica. Por ejemplo, puede prepararse una solución o suspensión acuosa estéril con un diluyente o disolvente no tóxico, parenteralmente aceptable, tal como, por ejemplo, 1,3-butano diol y puede prepararse una suspensión oleaginosa estéril con un disolvente o medio de suspensión aceptable no tóxico, estéril, tal como, por ejemplo, aceites no volátiles estériles, por ejemplo, monoglicéridos o diglicéridos sintéticos y ácidos grasos, tales como, por ejemplo, ácido oleico.
Los vehículos, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas de esta divulgación incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, sistemas de suministro de fármaco autoemulsionantes (SEDDS) tales como succinato de d-alfatocoferol polietilenglicol 1000, tensioactivos utilizados en formas de dosificación farmacéuticas tales como Tweens, aceite de ricino polietoxilado tal como tensioactivo CREMOPHOR (BASF) u otras matrices poliméricas de suministro similares, proteínas séricas, tales como seroalbúmina humana, sustancias tamponantes tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrogenofosfato de disodio, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloques de polietilen-poli-oxipropileno, polietilenglicol y lanolina. Ciclodextrinas tales como alfa, beta y gamma-ciclodextrina o derivados modificados químicamente tales como hidroxialquilciclodextrinas, incluyendo 2 y 3-hidroxipropil-ciclodextrinas, u otros derivados solubilizados se pueden usar también de manera ventajosa para mejorar la liberación de compuestos de las fórmulas descritas en el presente documento.
Los compuestos farmacéuticamente activos de esta divulgación pueden procesarse de acuerdo con procedimientos convencionales de farmacia para producir agentes medicinales para administración a pacientes, incluidos seres humanos y otros mamíferos. Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales tales como esterilización y/o pueden contener adyuvantes convencionales, tales como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, tampones, etc. Adicionalmente, pueden prepararse comprimidos y píldoras con recubrimientos entéricos. Dichas composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes, edulcorantes, saborizantes y perfumantes.
Las cantidades de compuestos que se administran y el régimen de dosificación para tratar una enfermedad con los compuestos y/o composiciones de esta divulgación dependen de diversos factores, incluyendo la edad, el peso, el sexo, la afección médica del sujeto, el tipo de enfermedad, la gravedad de la enfermedad, la vía y frecuencia de administración y el compuesto particular empleado. Por lo tanto, el régimen de dosificación puede variar ampliamente, pero se puede determinar de manera rutinaria utilizando métodos convencionales. Una dosis diaria de aproximadamente 0,001 a 100 mg/kg de peso corporal, preferentemente entre aproximadamente 0,0025 y aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal y lo más preferentemente entre aproximadamente 0,005 a 10 mg/kg de peso corporal, puede ser apropiada. La dosis diaria puede administrarse en de una a cuatro dosis por día. Otros programas de dosificación incluyen una dosis por semana y una dosis por ciclo de dos días.
Con fines terapéuticos, los compuestos activos de esta divulgación se combinan normalmente con uno o más adyuvantes apropiados para la vía de administración indicada. Si se administran por vía oral, los compuestos pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ésteres alquílicos de celulosa, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfórico y sulfúrico, gelatina, goma arábiga, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y/o alcohol polivinílico y a continuación se comprimen o encapsulan para una administración conveniente. Dichas cápsulas o comprimidos pueden contener una formulación de liberación controlada que se puede proporcionar en una dispersión de compuesto activo en hidroxipropilmetil celulosa.
Las composiciones farmacéuticas de esta divulgación comprenden al menos un compuesto de fórmula (I) y/o al menos una de sal farmacéuticamente aceptable del mismo y opcionalmente un agente adicional seleccionado de cualquier portador, adyuvante y vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones alternativas de esta divulgación comprenden un compuesto de fórmula (I) descrita en el presente documento y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos de la divulgación inhiben la interacción PD-1/PD-L1 proteína/proteína en un bloqueo de PD-L1. El bloqueo de PD-L1 puede mejorar la respuesta inmune a células cancerosas y las enfermedades infecciosas en mamíferos, incluyendo seres humanos.
En un aspecto, la presente divulgación se refiere al tratamiento de un sujeto in vivo utilizando un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo de tal manera que se inhibe el crecimiento de tumores cancerosos. Un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo se puede usar en solitario para inhibir el crecimiento de tumores cancerosos. Como alternativa, un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo se puede usar junto con otros agentes inmunogénicos o tratamientos estándar contra el cáncer, como se describe a continuación.
En una realización, la divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo para su uso en la inhibición de crecimiento de células tumorales en un sujeto.
En una realización, un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se usa para tratar el cáncer en un paciente que lo necesita. Los ejemplos de cánceres incluyen aquellos cuyo crecimiento se puede inhibir usando compuestos de la divulgación incluyen cánceres que responden habitualmente a inmunoterapia. Los ejemplos no limitantes de cánceres preferidos para tratamiento incluyen melanoma (por ejemplo, melanoma metastásico maligno), cáncer renal (p. ej., carcinoma de células claras), cáncer de próstata (p. ej., adenocarcinoma de próstata refractario a hormonas), cáncer de mama, cáncer de colon y cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico). Además, la divulgación incluye neoplasias refractarias o recurrentes cuyo crecimiento se puede inhibir usando los compuestos de la divulgación.
Los ejemplos de otros cánceres que se pueden tratar usando las realizaciones de la invención incluyen cáncer de hueso, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma maligno cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer testicular, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cuello uterino, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroidea, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma de tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, leucemias crónicas o agudas, incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, tumores sólidos de la infancia, linfoma linfocítico, cáncer de la vejiga, cáncer del riñón o la uretra, carcinoma de la pelvis renal, neoplasia del sistema nervioso central (SNC), linfoma primario del SNC, angiogénesis tumoral, tumor del eje espinal, glioma del tronco cerebral, adenoma hipofisario, sarcoma de Kaposi, cáncer epidermoide, cáncer de células escamosas, linfoma de linfocitos T, cánceres inducidos ambientalmente incluyendo aquellos inducidos por amianto y combinaciones de dichos cánceres. La presente divulgación también es útil para el tratamiento de cánceres metastásicos, en especial cánceres metastásicos que expresan PD-L1 (Iwai et al. (2005) Int. Immunol. 17:133-144).
Opcionalmente, los compuestos de Fórmula (I) o sales de los mismos pueden combinarse con otro agente inmunogénico, tal como células cancerosas, antígenos tumorales purificados (incluyendo proteínas recombinantes, péptidos y moléculas de carbohidratos), células y células transfectadas con genes que codifican citoquinas inmunoestimulantes (He et al. (2004) J. Immunol. 173:4919-28). Los ejemplos no limitantes de vacunas tumorales que se pueden usar incluyen péptidos de antígenos de melanoma, tales como péptidos de gp100, antígenos MAGE, Trp-2, MART1 y/o tirosinasa, o células tumorales transfectadas para expresar la citocina GM-CSF.
En los seres humanos, se ha demostrado que algunos tumores son inmunogénicos tales como melanomas. Se anticipa que al elevar el umbral de activación de linfocitos T por bloqueo de PD-L1, se espera que las respuestas tumorales se activen en el huésped.
El bloqueo PD-L1 puede combinarse con un protocolo de vacunación. Se han ideado muchas estrategias experimentales para la vacunación contra tumores (véase Rosenberg, S., 2000, "Development of Cancer Vaccines", ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D.
2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; véase también Restifo, N. y Sznol, M., "Cancer Vaccines", cap. 61, págs. 3023-3043 en DeVita, V. et al. (eds.), 1997, "Cancer: Principles and Practice of Oncology. Quinta Edición). En una de estas estrategias, se prepara una vacuna usando células tumorales autólogas o alogénicas. Se ha demostrado que estas vacunas celulares son más eficaces cuando las células tumorales se someten a transducción para expresar GM-CSF. Se ha demostrado que el GM-CSF es un potente activador de la presentación de antígenos para la vacunación de tumores (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 3539-43).
El estudio de la expresión génica y los patrones de expresión génica a gran escala en diversos tumores ha conducido a la definición de los denominados antígenos específicos de tumores (Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7). En muchos casos, estos antígenos específicos de tumor son antígenos de diferenciación expresados en los tumores y en la célula de la que se originó el tumor, por ejemplo, antígenos de melanocitos gp100, antígenos MAGE y Trp-2. Más importante aún, se puede demostrar que muchos de estos antígenos son las dianas de linfocitos T específicos a tumor encontrados en el hospedador. El bloqueo de PD-L1 se puede usar junto con una colección de proteínas recombinantes y péptidos expresados en un tumor para generar una respuesta inmune a estas proteínas. Estas proteínas son normalmente vistas por el sistema inmunitario como antígenos propios y por lo tanto, son tolerantes a ellos. El antígeno tumoral también puede incluir la proteína telomerasa, que se requiere para la síntesis de telómeros de cromosomas y que se expresa en más del 85 % de los cánceres humanos y en solo un número limitado de tejidos somáticos (Kim, N et al. (1994) Science 266: 2011-2013). (Estos tejidos somáticos pueden protegerse del ataque inmunitario por diversos medios). El antígeno tumoral también puede ser "neo-antígenos" expresados en células cancerosas debido a mutaciones somáticas que alteran la secuencia proteica o crean proteínas de fusión entre dos secuencias no relacionadas (es decir, bcr-abl en el cromosoma Filadelfia), o idiotipo de tumores de linfocitos B.
Otras vacunas de tumores pueden incluir las proteínas de virus implicados en cánceres humanos tales como virus del papiloma humano (HPV), virus de la hepatitis (VHB, VHD y VHC) y virus del herpes sarcoma de Kaposi (KHSV). Otra forma de antígeno específico de tumor que se puede usar junto con el bloqueo de PD-L1 se purifica proteínas de choque térmico (HSP) aisladas del tejido tumoral. Estas proteínas de choque térmico contienen fragmentos de proteínas de las células tumorales y estas HSP son altamente eficientes en la administración a las células que presentan antígeno para provocar la inmunidad tumoral (Suot, R y Srivastava, P (1995) Science 269:1585-1588; Tamura, Y. et al. (1997) Science 278:117-120).
Las células dendríticas (DC) son potentes células presentadoras de antígeno que pueden usarse para preparar respuestas específicas de antígeno. Las CD pueden producirse ex vivo y cargarse con diversos antígenos proteicos y peptídicos, así como con extractos de células tumorales (Nestle, F. et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). Las CD también pueden ser transducidas por medios genéticos para expresar también estos antígenos tumorales. Las CD también se han fusionado directamente a células tumorales con el propósito de inmunización (Kugler, A. et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336). Como método de vacunación, La inmunización con DC puede combinarse eficazmente con el bloqueo de PD-L1 para activar respuestas antitumorales más potentes.
El bloqueo de PD-L1 también se puede combinar con tratamientos estándar contra el cáncer. El bloqueo de PD-L1 puede combinarse eficazmente con regímenes quimioterapéuticos. En estos casos, puede ser posible reducir la dosis de reactivo quimioterapéutico administrado (Mokyr, M. et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). Un ejemplo de dicha combinación es un compuesto de esta divulgación en combinación con dacarbazina para el tratamiento de melanoma. Otro ejemplo de dicha combinación es un compuesto de esta divulgación en combinación con interleucina-2 (IL-2) para el tratamiento de melanoma. El fundamento científico detrás del uso combinado de bloqueo de PD-L1 y quimioterapia es que la muerte celular, que es una consecuencia de la acción citotóxica de la mayoría de los compuestos quimioterapéuticos, debería dar lugar a niveles incrementados de antígeno tumoral en la ruta de presentación del antígeno. Otras terapias combinadas que pueden dar como resultado una sinergia con el bloqueo de PD-L1 a través de la muerte celular son la radiación, cirugía y privación de hormonas. Cada uno de estos protocolos crea una fuente de antígeno tumoral en el hospedador. Los inhibidores de la angiogénesis también pueden combinarse con el bloqueo de PD-L1. La inhibición de la angiogénesis conduce a la muerte de células tumorales que pueden alimentar el antígeno tumoral en las rutas de presentación del antígeno hospedador.
Los compuestos de esta descripción también pueden usarse en combinación con compuestos biespecíficos que dirigen las células efectoras que expresan receptores Fc alfa o Fc gamma a células tumorales (véase, por ejemplo, patentes de Estados Unidos n.° 5.922.845 y 5.837.243). Se pueden usar compuestos biespecíficos para dirigir dos antígenos separados. Por ejemplo, se han usado compuestos biespecíficos del receptor anti-Fc/antígeno anti-tumor (por ejemplo, Her-2/neu) para dirigir macrófagos a sitios de tumor. Este direccionamiento puede activar más eficazmente las respuestas tumorales específicas. El brazo de linfocitos T de estas respuestas se vería aumentado por el uso del bloqueo de PD-L1. Como alternativa, el antígeno puede administrarse directamente a las DC mediante el uso de compuestos biespecíficos que se unen al antígeno tumoral y un marcador de superficie celular específico de células dendríticas.
Los tumores evaden la vigilancia inmunitaria del hospedador por una gran diversidad de mecanismos. Muchos de estos mecanismos pueden ser superados por la inactivación de proteínas que son expresadas por los tumores y que son inmunosupresoras. Estas incluyen, entre otras, TGF-beta (Kehrl, J. et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard, M. & O'Garra, A. (1992) Immunology Today 13: 198-200) y ligando Fas (Hahne, M. et al. (1996) Science 274: 1363-1365). Los inhibidores que se unen y bloquean cada una de estas entidades pueden usarse junto con los compuestos de esta divulgación para contrarrestar los efectos del agente inmunosupresor y favorecer las respuestas inmunitarias del tumor por parte del huésped.
Los compuestos que activan la capacidad de respuesta inmune del huésped pueden usarse junto con bloqueo de PD-L1. Estos incluyen moléculas en la superficie de las células dendríticas que activan la función DC y la presentación del antígeno. Los compuestos anti-CD40 son capaces de sustituir eficazmente la actividad de los linfocitos T colaboradores (Ridge, J. et al. (1998) Nature 393: 474-478) y se puede utilizar junto con el bloqueo de PD-L1. (Ito, N. et al. (2000) Immunobiology 201 (5) 527-40). Los compuestos activadores de moléculas coestimuladoras de linfocitos T, como c TlA-4( por ejemplo, patente de los Estados Unidos n.° 5.811.097), OX-40 (Weinberg, A. et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero, I. et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997) e ICOS (Hutloff, A. et al. (1999) Nature 397: 262-266) también pueden proporcionar niveles incrementados de activación de linfocitos T.
El trasplante de médula ósea se utiliza actualmente para tratar diversos tumores de origen hematopoyético. Mientras que la enfermedad del injerto contra huésped es una consecuencia de este tratamiento, el beneficio terapéutico puede obtenerse a partir de respuestas de injerto frente a tumor. El bloqueo de PD-L1 se puede usar para aumentar la eficacia de los linfocitos T específicos de tumor injertados de donante.
Otras realizaciones de la divulgación se usan para tratar pacientes que han sido expuestos a toxinas o agentes patógenos particulares. En consecuencia, otro aspecto de la divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I) o sales del mismo para su uso en el tratamiento de una enfermedad infecciosa en un sujeto.
Similar a su aplicación a los tumores como se ha analizado anteriormente, el compuesto de Fórmula (I) o sales del mismo, se puede usar en solitario, o como coadyuvante, en combinación con vacunas, para estimular la respuesta inmunitaria a patógenos, toxinas y auto-antígenos. Los ejemplos de agentes patógenos para los que este enfoque terapéutico puede ser particularmente útil, incluyen patógenos para los que actualmente no existe una vacuna eficaz, o patógenos para los cuales las vacunas convencionales son menos que completamente eficaces. Estos incluyen, pero sin limitación, HIV, Hepatitis (A, B, C o D), gripe, Herpes, Giardia, Malaria, Leishmania, Staphylococcus aureus, Pseudomonas Aeruginosa. El bloqueo de PD-L1 es particularmente útil contra infecciones establecidas por agentes tales como VIH que presentan antígenos alterados durante el curso de las infecciones. Estos nuevos epítopos se reconocen como extraños en el momento de la administración, provocando así una fuerte respuesta de linfocitos T que no se ve atenuada por señales negativas a través de PD-1.
Algunos ejemplos de virus patógenos que causan infecciones tratables mediante realizaciones de la divulgación incluyen VIH, hepatitis (A, B, C o D), herpes virus (por ejemplo, VVZ, HSV-1, HAV-6, HHv-7, HHV-8, HSV-2, CMV y virus de Epstein-Barr), adenovirus, virus de la gripe, flavivirus, ecovirus, rinovirus, virus coxsackie, cornovirus, virus sincitial respiratorio, virus de las paperas, rotavirus, virus del sarampión, virus de la rubeola, parvovirus, virus vaccinia, virus HTLV, virus del dengue, virus del papiloma, virus de molusco, poliovirus, virus de la rabia, virus JC y virus de la encefalitis arboviral.
Algunos ejemplos de bacterias patógenas que causan infecciones tratables mediante realizacionesde la divulgación incluyen clamidia, bacterias rickettsiales, micobacterias, estafilococos, estreptococos, neumonococos, meningococos y conococos, klebsiella, proteus, serratia, pseudomonas, legionella, difteria, salmonela, bacilos, cólera, tétanos, botulismo, ántrax, peste, leptospirosis y bacterias de la enfermedad de Lyme.
Algunos ejemplos de hongos patógenos que causan infecciones tratables mediante realizaciones de la divulgación incluyen Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), Genus Mucorales (mucor, absidia, rhizophus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis e Histoplasma capsulatum.
Algunos ejemplos de parásitos patógenos que causan infecciones tratables mediante realizaciones de la divulgación incluyen Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleriafowleri, Acanthamoeba sp., Giardia lambía, Cryptosporidium sp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondi y Nippostrongylus brasiliensis. En todas las realizaciones anteriores, el bloqueo de PD-L1 puede combinarse con otras formas de inmunoterapia tales como tratamiento con citocinas (por ejemplo, interferones, GM-CSF, G-CSF, IL-2) o terapia de anticuerpos biespecíficos, que proporciona una presentación de antígenos tumorales aumentada (véase, por ejemplo, Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123), vacunas o agentes que modifican la expresión génica.
Los compuestos de esta descripción pueden provocar y amplificar respuestas autoinmunes. De hecho, la inducción de respuestas antitumorales usando vacunas de células tumorales y péptidos revela que muchas respuestas antitumorales implican antirreactividades (despigmentación observada en el melanoma B16 modificado con anti-CTLA-4+GM-CSF en van Elsas et al., citado anteriormente; despigmentación en ratones vacunados con Trp-2 (Overwijk, W. et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96: 2982-2987); prostatitis autoinmune evocada por vacunas de células tumorales TRAMP (Hurwitz, A. ( 2000) anteriormente), la vacunación con antígenos de péptidos de melanoma y el vitíligo observado en ensayos clínicos en seres humanos (Rosenberg, S A y White, D E (1996) J. Immunother Emphasis Tumor Immunol 19 (1): 81-4).
Por lo tanto, es posible considerar el uso del bloqueo anti-PD-L1 junto con diversas autoproteínas para diseñar protocolos de vacunación para generar eficazmente respuestas inmunes contra estas autoproteínas para el tratamiento de la enfermedad. Por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer implica una acumulación inapropiada de péptido A.beta. en depósitos amiloides en el cerebro; las respuestas de anticuerpos contra el amiloide son capaces de eliminar estos depósitos amiloides (Schenk et al., (1999) Nature 400: 173-177).
Otras autoproteínas también pueden usarse como dianas tales como IgE para el tratamiento de alergia y asma, y TNF.alfa. para la artritis reumatoide. Finalmente, pueden inducirse respuestas de anticuerpos a diversas hormonas mediante el uso de un compuesto de Fórmula (I) o sales del mismo. Para la anticoncepción se pueden utilizar respuestas de anticuerpos neutralizantes a hormonas reproductivas. La respuesta de anticuerpos neutralizantes a hormonas y otros factores solubles que se requieren para el crecimiento de tumores particulares también pueden considerarse como posibles dianas de vacunación.
Pueden usarse realizaciones análogas como se ha descrito anteriormente para el uso del anticuerpo anti-PD-L1 para la inducción de respuestas terapéuticas autoinmunitarias para tratar pacientes que tienen una acumulación inapropiada de otros autoantígenos, tales como depósitos amiloides, incluyendo A-beta en la enfermedad de Alzheimer, citocinas tales como TNF-alfa e IgE.
Los compuestos de esta divulgación se pueden usar para estimular respuestas inmunitarias específicas de antígeno por coadministración de un compuesto de Fórmula (I) o sales del mismo con un antígeno de interés (por ejemplo, una vacuna). En consecuencia, en otro aspecto, la divulgación proporciona un (i) antígeno; y (ii) un compuesto de fórmula (I) o sales del mismo para su uso en la mejora de una respuesta inmunitaria al antígeno en un sujeto, de forma que se mejora una respuesta inmunitaria al antígeno en el sujeto. El antígeno puede ser, por ejemplo, un antígeno tumoral, un antígeno vírico, un antígeno bacteriano o un antígeno de un patógeno. Los ejemplos no limitativos de tales antígenos incluyen los analizados en las secciones anteriores, tales como los antígenos tumorales (o vacunas tumorales) analizados anteriormente, o antígenos de los virus, bacterias u otros patógenos descritos anteriormente.
Como se ha descrito anteriormente, los compuestos de la divulgación pueden coadministrarse con uno o más agentes terapéuticos, por ejemplo, un agente citotóxico, un agente radiotóxico o un agente inmunosupresor. Los compuestos de la divulgación pueden administrarse antes, después o simultáneamente con el otro agente terapéutico o pueden coadministrarse con otras terapias conocidas, por ejemplo, una terapia anticancerosa, por ejemplo, radiación. Dichos agentes terapéuticos incluyen, entre otros, agentes antineoplásicos tales como doxorrubicina (adriamicina), cisplatino bleomicina sulfato, carmustina, clorambucilo, descarbazina y ciclofosfamida hidroxiurea que, por sí solas, son solamente eficaces a niveles que son tóxicos o subtóxicos para un paciente. El cisplatino se administra por vía intravenosa como una dosis de 100 mg/dosis una vez cada cuatro semanas y la adriamicina se administra por vía intravenosa en forma de una dosis de 60-75 mg/ml una vez cada 21 días. La coadministración de un compuesto de Fórmula (I) o sales del mismo, con agentes quimioterapéuticos proporciona dos agentes anticancerosos que actúan a través de diferentes mecanismos que producen un efecto citotóxico a las células tumorales humanas. Dicha coadministración puede resolver problemas debidos al desarrollo de resistencia a fármacos o a un cambio en la antigenicidad de las células tumorales que las hará no reactivas con el anticuerpo.
También dentro del alcance de la presente divulgación se encuentran kits que comprenden un compuesto de Fórmula (I) o sales del mismo e instrucciones de uso. El kit puede contener además al menos un reactivo adicional. Los kits incluyen normalmente un texto informativo que indica el uso pretendido de los contenidos del kit. El término etiqueta incluye cualquier material escrito o grabado suministrado en o con el equipo, o que de otro modo acompaña al equipo.
Los anteriores agentes terapéuticos diferentes, cuando se emplean en combinación con los compuestos de la presente divulgación, se pueden usar, por ejemplo, en las cantidades indicadas en Physicians' Desk Reference (PDR) o como se determina de otro modo por un experto en la materia. En las realizaciones de la presente divulgación, tal otro agente terapéutico (a agentes terapéuticos) puede administrarse antes de, simultáneamente con, o después de la administración de los compuestos de la invención.
En una realización, los compuestos de fórmula (I) inhiben la interacción PD-1/PD-L1 con valores de CI50 de 20 ^M o menos, por ejemplo, de 0,48 a 20 ^M, según se mide por el ensayo de unión de fluorescencia en tiempo resuelto homogénea (HTRF) de PD-1/PD-L1.
Ejemplos
La invención se define además en los siguientes ejemplos. Debe entenderse que los ejemplos se dan a modo de ilustración solamente. A partir del análisis anterior y los ejemplos, un experto en la técnica puede determinar las características esenciales de la invención y puede realizar diversos cambios y modificaciones para adaptar la invención a diversos usos y condiciones. Como resultado, la invención no está limitada por los ejemplos ilustrativos expuestos a continuación, sino que se define por las reivindicaciones adjuntas a la presente.
Tal como se usa en la presente memoria descriptiva, los siguientes términos tienen los significados indicados: THF para tetrahidrofurano, EtOAc para acetato de etilo, DMF para N,N-dimetilformamida, DCE para 1,2-dicloretano, DCM para diclorometano, ta o TA o Ta para temperatura ambiente y tr o TR o Tr para tiempo de retención, EtOH para etanol, min para minutos, h o hr para horas y DMSO para dimetilsulfóxido.
Producto intermedio: 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)benzaldehído
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Una solución de azodicarboxilato de diisopropilo (1,793 g, 8,87 mmol) en THF (50 ml) se añadió gota a gota a una solución de (2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)metanol (2 g, 8,06 mmol), 5-cloro-2,4-dihidroxibenzaldehído (1,391 g, 8,06 mmol) y trifenilfosfina (2,326 g, 8,87 mmol) en THF (50 ml) a 0 °C. La solución de color amarillo resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. El disolvente se eliminó y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (Biotage 40 m, 0 a 20 % EtOAc/hexano) para dar 1,95 g (57,1 %) de 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)benzaldehído en forma de un sólido de color blanco. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical Le /Micromass Platform LC (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Phenomenex Luna 3 ^m C18, 2 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS (Tiempo de retención) = 2,147 min, m/z 389,2 (M H). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 11,45 (s, 1H), 9,72 (s, 1H), 7,83-7,79 (m, 1H), 7,57-7,53 (m, 2H), 7,28-7,23 (m, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,19 (s, 2H), 2,59 (s, 3H), 1,40-1,37 (m, 12H).
Producto intermedio: 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000017_0002
Una suspensión de 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)benzaldehído (1,5 g, 3,73 mmol), 5-(clorometil)nicotinonitrilo (0,739 g, 4,84 mmol) y carbonato de cesio (1,760 g, 5,40 mmol) en DMF (15 ml) se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se eliminó y el residuo se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo una vez con diclorometano. El extracto orgánico se lavó con salmuera y después se secó sobre sulfato sódico. El agente de secado se eliminó por filtración y el disolvente se eliminó al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (Biotage 40 m, del 0 al 50 % de EtOAc/hexanos) para dar 1,48 g (77 %) de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo en forma de un sólido de color blanco. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LC /Micromass Platform LC (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Phenomenex Luna 3 ^m C18, 2 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10%), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 2,147 min, m/z 505,3 (M+H). RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 10,29 (s, 1H), 8,93 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,91 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,81 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,25 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 5,25 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 2,61 (s, 3H), 1,40 (s, 12H).
Producto intermedio: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000018_0001
A un vial se le añadió ácido acético (55 pl, 0,964 mmol), DCE (1,2-dicloroetano, 2,0 ml), etanol (6,0 ml), THF (2,0 ml), 20 mg de secado al horno, triturado, 4Á tamices moleculares, ácido (S)-piperidin-2-carboxílico (124 mg, 0,964 mmol), 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (250 mg, 0,482 mmol) y cianoborohidruro sódico (60,6 mg, 0,964 mmol). El vial se tapó y la mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron y la mezcla resultante se diluyó con 60 ml de DCM (diclorometano), se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó para dar 301,0 mg de ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico en bruto.
Para la purificación, el material en bruto se recogió en un mínimo de acetonitrilo y se cargó en una columna C18 gold de Isco de 100 g y se purificó usando un Biotage Horizon empleando acetonitrilo/agua/acetato amónico 10 mM donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/acetonitrilo al 95 %/acetato amónico 10 mM aun gradiente de 10-100 % de B. El producto eluido al 55-60 % de B se recogió. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,185 min, m/z 632,0 (M H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 59,00 (m, 2H), 8,44 (m, 1H), 7,63 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,46-7,37 (m, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,08 (m, 1H), 5,32 (s a, 2H), 5,19 (m, 2H), 3,75 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,57 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,09 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,24 (m, 1H), 1,83-1,67 (m, 2H), 1,48 (m, 3H), 1,36 (m, 1H), 1,32 (m, 12H).
Producto intermedio: 5-bromo-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000018_0002
A 2-amino-4-bromofenol (200 mg, 1,064 mmol) y ácido 1 -metilpiperidin-4-carboxílico (152 mg, 1,064 mmol) en un tubo cerrado herméticamente se le añadió ácido polifosfórico (5 g). El recipiente se cerró herméticamente y la mezcla se calentó durante 3,5 horas a 190 °C. La mezcla de reacción se enfrió. A la mezcla a 0 °C se le añadió gota a gota 6 ml de agua y después NaOH ac. 10 M hasta que el pH alcanzó ~8. A la mezcla espesa de color púrpura se le añadió 30 ml de acetato de etilo. El producto se filtró a través de celite, se extrajo y se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó para dar 244,8 mg (74% de rendimiento) de 5-bromo-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol en forma de un sólido de color castaño. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 mm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100% de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS (Tiempo de retención)= 1,340 min, m/z 295,05, 297,00 (M H), pureza del 95 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 57,95 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 8,6, 1,9 Hz, 1H), 3,02-2,93 (m, 1H), 2,79 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,10­ 2,01 (m, 4H), 1,87-1,77 (m, 2H).
Ejemplo 1001: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000019_0001
A un tubo pequeño cerrado herméticamente se le añadió ácido S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico (40 mg, 0,063 mmol), 5-bromo-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol (18,68 mg, 0,063 mmol), THF (3 ml), agua (1 ml), fosfato de potasio, tribásico (26,9 mg, 0,127 mmol) y finalmente precatalizador XPhos de segunda generación (2,490 mg, 3,16 ^mol). El recipiente se cerró herméticamente, la mezcla se desgasificó/roció con nitrógeno y después se calentó durante una noche a 70 °C. El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 15-55 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 14,8 mg (rendimiento del 31 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 96 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,550 min; ESI-MS(+) m/z = 720,0 (M H) Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,394 min; ESI-MS(+) m/z = 720,1 (M H)
RMN 1H (500 MHz, DMSO-cfe) 58,98 (s, 2H), 8,40 (s, 1H), 7,71 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,51 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33-7,22 (m, 3H), 7,09 (s, 1H), 5,32 (m, 2H), 5,26 (s, 2H), 3,74 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,58 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,14 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 2,99 (m, 1H), 2,89 (m, 1H), 2,82 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,13-2,06 (m, 4H), 1,94-1,86 (m, 3H), 1,77 (m, 2H), 1,49 (m, 3H), 1,41-1,33 (m, 1H).
Los ejemplos y productos intermedios siguientes se sintetizaron de una manera análoga.
Producto intermedio: 6-bromo-2-(1 -metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000019_0002
Se obtuvieron 144,8 mg (33% de rendimiento) de 6-bromo-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol en forma de un sólido de color castaño. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 mm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0­ 100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 01 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,005 min, m/z 295,10, 297,10 (M H), pureza del 75 %. RMN 1H (500 MHz, CDCh) 57,66 (d, J=1,7 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,44 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 1H), 3,02-2,85 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,14 (m, 4H), 2,11-1,97 (m, 2H).
Ejemplo 1002: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000020_0001
El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 30-70 % de B durante 25 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El compuesto se purificó de nuevo por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 12-52 % de B durante 22 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 11,7 mg (rendimiento del 17%) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 94 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,432 min; ESI-MS(+) m/z = 720,1 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,462 min; ESI-MS(+) m/z = 720,0 (m h )
RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,97 (d, J=1,8 Hz, 2H), 8,40 (s, 1H), 7,73 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,50 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,33-7,21 (m, 3H), 7,08 (s, 1H), 5,32 (s, 2H), 5,26 (s, 2H), 3,77 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,60 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,17-3,09 (m, 2H), 3,05-2,95 (m, 1H), 2,92-2,86 (m, 1H), 2,81 (m, 2H), 2,28 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,13-2,03 (m, 4H), 1,90 (m, 1H), 1,77 (m, 2H), 1,49 (m, 3H), 1,37 (m, 1H).
Producto intermedio: (rac)-5-bromo-2-(1-metilpiperidin-3-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000020_0002
Se obtuvieron 289,4 mg (55 % de rendimiento) de (rac)-5-bromo-2-(1-metilpiperidin-3-il)benzo[d]oxazol en forma de un aceite de color amarillo. Los datos de LC/Ms se obtuvieron en un Shimadzu analytical lCMs (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 mm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,032 min, m/z 295,10, 297,10 (M H), pureza del 70 %. RMN 1H (500 MHz, CDCls) 57,81 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,42 (dd, J = 1,9, 8,7 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,23 (m, 2H), 2,82 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,25-2,17 (m, 1H), 2,07 (m, 2H), 1,90-1,82 (m, 1H), 1,79-1,63 (m, 3H).
Ejemplo 1003: Ácido (2S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000021_0001
El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 20-60 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 14,3 mg (rendimiento del 21 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 97,0 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,636 min; ESI-MS(+) m/z = 720,0 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,500 min; ESI-MS(+) m/z = 720,0 (m h )
RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,98 (s, 2H), 8,40 (s, 1H), 7,72 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,51 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,33-7,23 (m, 3H), 7,09 (s, 1H), 5,33 (d, J = 2,7 Hz, 2H), 5,27 (s, 2H), 3,77 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,60 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,17-3,11 (m, 2H), 3,06 (m, 1H), 2,93-2,86 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,37 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 2,27 (m, 1H), 2,24 (s a, 6H), 2,14-2,01 (m, 2H), 1,78 (m, 3H), 1,69-1,59 (m, 2H), 1,49 (m, 3H), 1,38 (m, 1H).
Producto intermedio: 5-bromo-2-(piperidin-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000021_0002
Se obtuvieron 699,7 mg (70 % de rendimiento) de 5-bromo-2-(piperidin-4-il)benzo[d]oxazol en forma de un sólido de color castaño. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical lCMs (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 mm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0­ 100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,027 min, m/z 281,10, 283,10 (M H), pureza del 90 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 57,95 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 8,7, 1,9 Hz, 1H), 3,09 (s, 1H), 2,99 (dt, J = 12,4, 3,6 Hz, 2H), 2,60 (td, J = 11,9; 2,5 Hz, 2H), 1,99 (dd, J = 12,7, 2,6 Hz, 2H), 1,75-1,61 (m, 2H).
Ejemplo 1004: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(piperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000021_0003
El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 15-55 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 11,5 mg (rendimiento del 20 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 97,1 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,348 min; ESI-MS(+) m/z = 706,1 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,494 min; ESI-MS(+) m/z = 706,0 (m h )
RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,99 (m, 2H), 8,46 (s, 1H), 7,73 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,33-7,21 (m, 3H), 7,10 (s, 1H), 5,33 (s, 2H), 5,26 (s, 2H), 3,84 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,76­ 3,72 (m, 1H), 3,29-3,21 (m, 1H), 3,19-3,11 (m, 2H), 3,07-3,00 (m, 1H), 2,94-2,85 (m, 1H), 2,81 (m, 2H), 2,22 (m, 4H), 2,13 (m, 2H), 1,87-1,75 (m, 3H), 1,72-1,64 (m, 1H), 1,47 (m, 3H), 1,37-1,26 (m, 1H).
Producto intermedio: 5-bromo-2-(1-ciclopropilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000022_0001
Se obtuvieron 283,4 mg (46 % de rendimiento) de 5-bromo-2-(1-ciclopropilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol en forma de un sólido de color castaño. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical lCm S (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 mm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,049 min, m/z 321,15, 323,10 (M H), pureza del 70%. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 57,95 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,6 Hz 1H), 7,53 (dd, J = 8,6, 1,9 Hz, 1H), 3,08-2,93 (m, 3H), 2,34 (td, J = 11,5; 2,4 Hz, 2H), 2,11-2,04 (m, 2H), 1,80-1,59 (m, 3H), 0,47-0,38 (m, 2H), 0,35-0,28 (m, 2H).
Ejemplo 1005: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(1-ciclopropilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000022_0002
El material en bruto se purificó por HPLC preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18, 30 x 100 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente complejo de 30-50 % de B durante 25 minutos con una parada de 10 minutos al 50 % de B, después 50-100 % de B durante 10 minutos a un caudal de 30 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se evaporaron. El rendimiento del producto fue de 21,5 mg (rendimiento del 18 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 99 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 14,83 min; pureza del 99 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 6,09 min; pureza del 99 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,129 min, m/z 746,20 y 748,20 (M H).
RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 58,96 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,57 (s, 1H), 7,54-7,46 (m, 1H), 7,32 (m, 3H), 7,06 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,34 (s, 2H), 4,51-4,40 (m, 1H), 4,40-4,23 (m, 1H), 3,59-3,45 (m, 1H), 3,28­ 3,10 (m, 3H), 3,03-2,85 (m, 1H), 2,64-2,44 (m, 2H), 2,28 (m, 6H), 1,98 (m, 2H), 1,92-1,76 (m, 4H), 1,76-1,62 (m, 1H), 1,62-1,44 (m, 1H), 1,39-1,23 (m, 1H), 0,51 (m, 4H).
Producto intermedio: 2-(8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-bromobenzo[d]oxazol
Figure imgf000023_0001
Se obtuvieron 110,7 mg de 2-(8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-bromobenzo[d]oxazol (38% de rendimiento) en forma de un sólido de color castaño. Los datos de LC/Ms se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,140 min, m/z 307,10 y 309,10 (M H), pureza del 100 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-cfe) 57,96 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,54 (dd, J = 8,7, 1,9 Hz, 1H), 3,96 (m, 2H), 3,55 (m, 1H), 2,20-2,04 (m, 4H), 2,02-1,90 (m, 4H).
Ejemplo 1006: Ácido (2S)-1-(4-((3-(2-(8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000023_0002
El material en bruto se purificó por HPLC preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18, 30 x 100 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 30-100 % de B durante 25 minutos con una parada de 10 minutos a un caudal de 30 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se evaporaron. El rendimiento del producto fue de 24 mg (rendimiento del 21 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 99 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 14,11 min; pureza del 98 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 6,01 min; pureza del 98 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,165 min, m/z 732,20 y 734,20 (M H).
RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 58,96 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,42-8,37 (m, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,57 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 6,8, 1,9 Hz, 1H), 7,34 (dd, J = 8,4, 1,7 Hz, 1H), 7,32-7,24 (m, 2H), 7,05 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,33 (s, 2H), 4,44 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,19 (m, 2H), 3,77-3,63 (m, 1H), 3,55-3,44 (m, 1H), 2,91 (m, 1H), 2,42-2,29 (m, 6H), 2,27 (s, 3H), 2,25-2,19 (m, 3H), 1,91-1,74 (m, 3H), 1,74-1,63 (m, 1H), 1,60­ 1,48 (m, 1H), 1,40-1,27 (m, 1H).
Producto intermedio: 5-bromo-2-(piridin-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000024_0001
Se obtuvieron 235 mg de 5-bromo-2-(piridin-4-il)benzo[d]oxazol (42 % de rendimiento) en forma de un sólido de color rosa. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10%), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,137 min, m/z 275,05, 277,05 (M H), pureza del 65 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-cfe) 58,88 (m, 2H), 8,16 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,11 (m, 2H), 7,87 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 8,7; 1,9 Hz, 1H).
Ejemplo 1007: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(piridin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxflico
Figure imgf000024_0002
El material en bruto se purificó por HPLC preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18, 30 x 100 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 10-100 % de B durante 20 minutos con una parada de 10 minutos a un caudal de 30 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se evaporaron. El rendimiento del producto fue de 18 mg (rendimiento del 31 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 95 %.
Se usaron dos inyecciones de LC/MS analítica para determinar la pureza final:
Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 14,27 min; pureza del 95 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 8,18 min; pureza del 95 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,400 min, m/z 700,20 (M H).
RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 58,94 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,91 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,80 (m, 2H), 8,38 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 8,22 (m, 2H), 7,88-7,76 (m, 1H), 7,73-7,66 (m, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,46-7,37 (m, 1H), 7,29 (m, 2H), 7,04 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,32 (s, 2H), 4,44 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,50 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 3,33 (m, 1H), 2,98-2,87 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,25-2,16 (m, 1H), 1,90-1,73 (m, 3H), 1,68 (m, 1H), 1,52 (m, 1H).
Producto intermedio: 5-bromo-2-(1-metilpirrolidin-3-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000025_0001
Se obtuvieron 171 mg de 5-bromo-2-(1-metilpirrolidin-3-il)benzo[d]oxazol (40 % de rendimiento) en forma de un sólido oleoso de color rojo. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 01 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,092 min, m/z 281,15 y 283,15 (M H), pureza del 70 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 57,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,69-7,65 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,52 (dd, J = 8,6, 2,0 Hz, 1H), 3,71 (m, 1H), 2,89 (m, 1H), 2,81 (m, 1H), 2,58 (m, 2H), 2,32-2,17 (m, 5H).
Ejemplo 1008: Ácido (2S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpirrolidin-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxflico
Figure imgf000025_0002
El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 20-60 % de B durante 25 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. El material se purificó de nuevo por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 25-65 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 21,6 mg (rendimiento del 35 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 91 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,319 min; ESI-MS(+) m/z = 706,1 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,372 min; ESI-MS(+) m/z = 706,1 (m h )
RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,89 (m, 2H), 8,35 (s, 1H), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,53 (s, 2H), 7,39 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,32-7,17 (m, 3H), 6,99 (s, 1H), 5,34 (s, 2H), 5,24 (s, 2H), 3,98 (m, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,77 (m, 1H), 3,51 (m, 1H), 2,98 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,47 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,28 (m, 1H), 2,23 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,01 (m, 2H), 1,60 (m, 3H), 1,38 (m, 1H).
Producto intermedio: 5-bromo-7-metil-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000026_0001
Se obtuvieron 196 mg de 5-bromo-7-metil-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol (43 % de rendimiento) en forma de un sólido de color naranja. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,167 min, m/z 309,15, 311,11 (M H), pureza del 85 %. RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 57,59 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,10-2,94 (m, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,29 (t, J = 11,1 Hz, 2H), 2,24-2,15 (m, 2H), 2,06-1,93 (m, 2H).
Ejemplo 1009: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(7-metil-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000026_0002
El material en bruto se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu que empleaba acetonitrilo/agua/acetato amónico donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/acetonitrilo al 95 %/acetato amónico al 10 mM con una columna Waters XBridge 5 ^m C1830x100 mm a un gradiente del 10-100% de B y un caudal de 30 ml/min. durante 20 minutos con una parada de 10 minutos. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 38 mg (rendimiento del 62 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 94%.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 14,57 min; pureza del 94 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 7,64 min; pureza del 94 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,244 min, m/z 734,25 y 735,25 (M H).
RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 58,94 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,92 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,37 (t, J = 1,9 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,47 (dd, J = 6,9, 2,1 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,31-7,22 (m, 2H), 7,11 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,30 (s, 2H), 4,42 (m, 1H), 4,28 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,31 (m, 4H), 2,97-2,78 (s, 3H), 2,65 (m, 3H), 2,56 (s, 3H), 2,46-2,34 (m, 2H), 2,31-2,16 (m, 5H), 1,92-1,75 (m, 4H), 1,70 (m, 1H), 1,52 (m, 1H).
Producto intermedio: 5-bromo-4-metil-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol
Se obtuvieron 197,9 mg de 5-bromo-4-metil-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol (45 % de rendimiento) en forma de un sólido de color rojo. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0­ 100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,105 min, m/z 309,10 y 311,10 (M H), pureza del 70 %. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 57,45 (d, J=8,7 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 2,99-2,90 (m, 3H), 2,63 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,20-1,99 (m, 6H).
Ejemplo 1010: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4-metil-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000027_0001
El material en bruto se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu que empleaba acetonitrilo/agua/acetato amónico en donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/ acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/ acetonitrilo al 95 %/ acetato amónico 10 mM con una columna Waters XBridge 5 u C1830x100 mm a un gradiente del 10-100 % de B y un caudal de 30 ml/min. durante 20 minutos con una parada de 10 minutos. El producto se volvió a purificar por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 15-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 17 mg (rendimiento del 29 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 99 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 14,45 min; pureza del 99 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 7,39 min; pureza del 99 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,149 min, m/z 734,25 (M H), pureza del 99 %. RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 58,88 (m, 1H), 8,82 (m, 1H), 8,31 (m, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,37 (m, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,08-6,91 (m, 3H), 5,28 (s, 2H), 5,23 (s, 2H), 4,34 (m, 1H), 4,19 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,24 (m, 1H), 3,18 (m, 1H), 2,85-2,67 (m, 3H), 2,56 (m, 4H), 2,32-2,22 (m, 2H), 2,20-2,07 (m, 6H), 1,99 (s, 3H), 1,82 (m, 2H), 1,80-1,63 (m, 2H), 1,63-1,54 (m, 1H), 1,47-1,35 (m, 1H).
Producto intermedio: 5-bromo-2-(4-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000027_0002
Se obtuvieron 243,2 mg de 5-bromo-2-(4-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol (56 % de rendimiento) en forma de un sólido oleoso de color castaño. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,119 min, m/z 295,10 y 297,10 (M H), pureza del 90 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 57,97 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 2,83 (m, 2H), 2,58 (m, 2H), 2,19 (m, 2H), 1,60 (m, 2H), 1,36 (s, 3H).
Ejemplo 1011: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000028_0001
El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 15-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 6,4 mg (rendimiento del 15 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 98 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Xbridge 3,5 ^m Fenilo, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 7,40 min, pureza del 98 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 8,17 min, pureza del 98 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,152 min, m/z 720,20 y 722,25 (M H), pureza del 98 %. RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 58,93 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,96 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,39 (t, J = 1,9 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,61 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 6,9, 2,1 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 8,4, 1,7 Hz, 1H), 7,32-7,25 (m, 2H), 7,05 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,34 (s, 2H), 4,44 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,50 (dd, J = 10,6, 3,5 Hz, 1H), 3,42-3,35 (m, 2H), 3,32-3,12 (m, 2H), 3,01-2,85 (m, 1H), 2,65 (m, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,26-2,16 (m, 1H), 2,03 (m, 2H), 1,96-1,91 (m, 1H), 1,90-1,68 (m, 4H), 1,59-1,45 (m, 4H).
Producto intermedio: 4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)-N,N-dietilciclohexanamina
Figure imgf000028_0002
Se obtuvieron 407,8 mg de 4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)-N,N-dietilciclohexanamina (74 % de rendimiento) en forma de un sólido oleoso de color rojo. Los datos de Lc /MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,182 min, m/z 351,15 y 353,15 (M H), pureza del 85%. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 57,80 (m, 1H), 7,42 (m, 1H), 7,35 (m, 1H), 3,08-2,84 (m, 6H), 2,45-2,32 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 1,96-1,60 (m, 4H), 1,30 (m, 6H).
Ejemplo 1012: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(4-(dietilamino)ciclohexil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000029_0001
El material en bruto se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu que empleaba acetonitrilo/agua/acetato amónico 10 mM donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/acetonitrilo al 95 %/ acetato amónico 10 mM con una columna Waters XBridge 5 ^m C18 OBD 30 x 100 mm a un gradiente del 5-100 % de B y un caudal de 30 ml/min. durante 20 minutos con una parada de 10 minutos. El producto se volvió a purificar por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 10-50 % de B durante 30 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. El rendimiento del producto fue de 12,5 mg (rendimiento del 20 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 98 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Xbridge 3,5 ^m Fenilo, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 8,78 min, pureza del 98 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 10,09 min, pureza del 98 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,092 min, m/z 776,30 (M H), pureza del 100 %.
RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 58,96 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,93 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,40 (t, J = 1,9 Hz, 1H), 7,68-7,65 (m, 2H), 7,57 (m, 1H), 7,49 (dd, J = 6,4, 2,4 Hz, 1H), 7,34 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H), 7,30-7,26 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,34 (s, 2H), 4,45 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 3,54-3,45 (m, 2H), 3,36 (m, 1H), 3,32-3,27 (m, 3H), 3,22 (m, 1H), 3,13 (m, 1H), 2,97-2,89 (m, 1H), 2,49 (m, 2H), 2,28 (m, 6H), 1,92-1,77 (m, 7H), 1,70 (m, 1H), 1,55 (m, 1H), 1,40 (t, J = 7,3 Hz, 6H).
Producto intermedio: 5-bromo-2-(1-isopropilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000029_0002
Se obtuvieron 264 mg de 5-bromo-2-(1-isopropilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol (76% de rendimiento) en forma de un sólido de color rosa. Los datos de LC/Ms se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 0,972 min, m/z 323,15 y 325,15 (m H), pureza del 99 %. RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 57,82 (dd, J = 1,7, 0,5 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 0,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 3,12-3,00 (m, 3H), 2,82 (m, 1H), 2,45 (td, J = 11,7; 2,4 Hz, 2H), 2,27-2,17 (m, 2H), 2,06-1,94 (m, 2H), 1,18-1,09 (m, 6H).
Ejemplo 1013: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(1-isopropilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000030_0001
El material en bruto se purificó por HPLC preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18, 30 x 100 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 0-75 % de B durante 25 minutos con una parada de 10 minutos a un caudal de 30 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se evaporaron. El rendimiento del producto fue de 15,2 mg (rendimiento del 25 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 97 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 |jm C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 14,77 min; pureza del 97 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 6,35 min; pureza del 99 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 0,890 min, m/z 749,10 (M H).
RMN 1H (500 MHz, C D3OD) 58,96 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,92 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,66 (m, 2H), 7,54 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 6,9, 1,9 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H), 7,27 (m, 2H), 7,04 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 5,31 (s, 2H), 4,46 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,56-3,35 (m, 6H), 3,14 (t, J = 11,3 Hz, 2H), 2,92 (td, J = 12,0; 3,2 Hz, 1H), 2,48 (dd, J = 14,2, 3,0 Hz, 2H), 2,35-2,18 (m, 6H), 1,92-1,75 (m, 3H), 1,70 (m, 1H), 1,59-1,48 (m, 1H), 1,44-1,28 (m, 6H).
Producto intermedio: 5-bromo-2-(8-metil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000030_0002
A una solución de 2-(8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-bromobenzo[d]oxazol (78,2 mg, 0,255 mmol) en DCE (1,2-dicloroetano, 3 ml) con trietilamina (0,106 ml, 0,764 mmol) se le añadieron 2,5 eq. de formaldehído ac. al 37 % (0,047 ml, 0,636 mmol). La mezcla se agitó durante 1 horas a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le añadió después triacetoxiborohidruro sódico puro (216 mg, 1,018 mmol) y la mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se volvió a diluir con 10 ml de DCM (diclorometano), se lavó con 2 ml de fosfato de potasio ac. 1,5 M, salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó en atmósfera de nitrógeno para dar 96 mg de un aceite de color rojo. El producto en bruto se recogió en 10 ml de metanol y se impulsó a través de un cartucho de intercambio iónico SCX-2 de Biotage de 5 g. El cartucho se roció con 3 volúmenes de columna (30 ml) de metanol, el producto básico se eluyó con 30 ml de amoniaco 2 M en metanol. Se obtuvieron 49,6 mg de 5-bromo-2-(8-metil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)benzo[d]oxazol (60 % de rendimiento) en forma de un sólido de color pardo rojizo.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10%), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 0,925 min, m/z 321,15 y 323,15 (M H), pureza del 99 %. RMN 1H (500 MHz, CDCls) 57,79 (d, J=1,9 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 8,5, 1,9 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 3,34-3,24 (m, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,22-2,10 (m, 4H), 1,93-1,84 (m, 2H), 1,74-1,66 (m, 2H).
Ejemplo 1014: Ácido (2S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(8-metil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000031_0001
El material en bruto se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu que empleaba acetonitrilo/agua/acetato amónico donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/acetonitrilo al 95 %/acetato amónico 10 mM con una columna Xbridge 5 ^m 30 x 100 mm C18 a un gradiente del 30-100 % de B y un caudal de 30 ml/min. durante 25 minutos con una parada de 10 minutos. Las fracciones que contenían el producto deseado se evaporaron. El rendimiento del producto fue de 46,5 mg (rendimiento del 38 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 98 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 14,12 min; pureza del 99 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 6,15 min; pureza del 98 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10%), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,159 min, m/z 746,20 y 748,15 (M H).
RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 58,96 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,71-7,62 (m, 2H), 7,54 (s, 1H), 7,49 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 8,3, 1,7 Hz, 1H), 7,31-7,24 (m, 2H), 7,04 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 5,32 (s, 2H), 4,45 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,96 (s a, 2H), 3,73-3,62 (m, 1H), 3,55-3,46 (m, 1H), 2,99-2,87 (m, 1H), 2,79 (s, 3H), 2,49-2,34 (m, 6H), 2,27 (s, 3H), 2,19 (d, J = 8,6 Hz, 3H), 1,80 (m, 3H), 1,73-1,64 (m, 1H), 1,61-1,46 (m, 1H), 1,31 (m, 1H).
Producto intermedio: 3-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)biciclo[1.1.1]pentan-1-amina
Figure imgf000031_0002
Se obtuvieron 54 mg de 3-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)biciclo[1.1.1]pentan-1-amina (43 % de rendimiento) en forma de un sólido de color castaño. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 0,794 min, m/z 278,85 y 280,90 (M H), pureza del 90 %. RMN 1H (500 MHz, CDCls) 57,79 (d, J=1,9 Hz, 1H), 7,41 (dd, J = 8,7, 1,9 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 2,35 (s, 6H).
Ejemplo 1015: Ácido (S)-1-(4-((3-(2-(3-aminobiciclo[1.1.1]pentan-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000032_0001
El material en bruto se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu que empleaba acetonitrilo/agua/acetato amónico donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/acetonitrilo al 95 %/acetato amónico 10 mM con una columna XTERRA 5 ^m C1830x100 mm a un gradiente del 30-100 % de B y un caudal de 30 ml/min. durante 25 minutos con una parada de 10 minutos. El producto se volvió a purificar usando una HPLC preparativa Shimadzu que empleaba acetonitrilo/agua/acetato amónico donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/acetonitrilo al 95 %/acetato amónico 10 mM con una columna XTERRA 5 ^m C1830x100 mm a un gradiente del 30-50 % de B y un caudal de 30 ml/min. durante 25 minutos con una parada de 5 minutos, después al 50-100 % de B durante 10 minutos. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se evaporaron. El rendimiento del producto fue de 6 mg (rendimiento del 11 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 100 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 13,15 min; pureza del 100 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 5,76 min; pureza del 100 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10%), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,090 min, m/z 704,20 y 706,15 (M H).
RMN 1H (500 MHz, CDCls) 58,86 (d, J=1,4 Hz, 2H), 8,21 (s a, 1H), 7,60 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,41 (m, 1H), 7,29-7,22 (m, 3H), 6,64 (s, 1H), 5,29-5,23 (m, 1H), 5,22-5,15 (m, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,33 (s a, 2H), 3,54-3,41 (m, 2H), 2,68 (m, 1H), 2,39 (s, 6H), 2,22 (s, 3H), 1,95-1,71 (m, 5H), 1,49-1,32 (m, 1H).
Producto intermedio: Ácido 2-(4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)piperidin-1-il)acético
Figure imgf000033_0001
A una mezcla de 5-bromo-2-(piperidin-4-il)benzo[d]oxazol (245 mg, 0,871 mmol) y carbonato de cesio (315 mg, 0,967 mmol) en DMF (3 ml) a 0 °C, en atmósfera de nitrógeno, se le añadió, gota a gota, 2-bromoacetato de /ere-butilo (0,135 ml, 0,915 mmol). El baño de hielo se eliminó y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 2,5 horas la mezcla de reacción se diluyó con 2 ml de agua y 20 ml de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se extrajeron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron para dar un aceite en bruto. El producto en bruto se diluyó con 3 ml de agua y se impulsó a través de un cartucho de extracción Waters 1 g HLB. El cartucho se lavó abundantemente con 10 ml más de agua, el producto se eluyó con 30 ml de metanol. El disolvente se eliminó para dar 304 mg de 2-(4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)piperidin-1-il)acetato de /ere-butilo en forma de un sólido de color naranja ( 88 % de rendimiento). Los datos de Lc /MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10%), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,224 min, m/z 395,15, 397,10 (M H), pureza > 90 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 57,96 (d, J=1,9 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 8,7, 1,9 Hz, 1H), 3,14 (s, 2H), 3,05-2,97 (m, 1H), 2,89 (m, 2H), 2,38 (m, 2H), 2,12-2,00 (m, 2H), 1,83 (m, 2H), 1,42 (s, 9H).
Al 2-(4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)piperidin-1-il)acetato de /ere-butilo (50 mg, 0,126 mmol) en DCE (2,5 ml), a temperatura ambiente, se le añadió, en atmósfera de nitrógeno, ácido trifluoroacético (0,078 ml, 1,012 mmol). La mezcla de color púrpura se agitó durante 16 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío (rotavapor), se añadieron 10 ml de DCM y el proceso de evaporación se repitió para dar 57,9 mg (100 % de rendimiento) de ácido f 2-(4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)piperidin-1-il)acético, TFA en forma de un sólido de color rojo. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,024 min, m/z 339,0 y 341,05 (M H), pureza del 99 %. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 5 9,32 (s a, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,49-7,38 (m, 1H), 3,97 (m, 2H), 3,74 (m, 1H), 3,42 (m, 2H), 3,22 (m, 2H), 2,48 (m, 2H), 1,50 (m, 2H).
Ejemplo 1016: Ácido (S)-1-(4-((3-(2-(1-(carboximetil)piperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000033_0002
El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 10-50 % de B durante 25 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 19,1 mg (rendimiento del 26 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 94 %. Se usó una inyección de LC/MS analítica para determinar la pureza final.
Condición de inyección: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 |jm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condiciones del análisis: Tiempo de retención = 1,268 min; ESI-MS (+) m/z = 764,1 (M H).
RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 8 8,98 (s, 2H), 8,41 (s, 1H), 7,72 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,51 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33-7,22 (m, 3H), 7,10 (s, 1H), 5,33 (d, J = 2,6 Hz, 2H), 5,27 (s, 2H), 3,74 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,57 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,18 (s, 2H), 3,15-3,00 (m, 4H), 2,89 (m, 1H), 2,57 (m, 2H), 2,25 (m, 4H), 2,15 (m, 2H), 1,95 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 1,49 (m, 3H), 1,44-1,33 (m, 1H).
Producto intermedio: 5-bromo-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000034_0001
A ácido tetrahidro-2H-piran-4-carboxílico (0,690 g, 5,3 mmol) en DCM (10 ml) se le añadió, en atmósfera de nitrógeno, a 0 °C, DMF (0,041 ml, 0,530 mmol) y gota a gota, cloruro de oxalilo (1,180 ml, 7,9 mmol). El baño de hielo se eliminó y la mezcla se agitó durante 45 minutos. Los volátiles se eliminaron en el rotavapor, el aceite en bruto se diluyó con 10 ml de DCM y la evaporación se repitió.
A un RBF (matraz de fondo redondo) se le añadió 2-amino-4-bromofenol (1097 mg, 5,83 mmol) en DCM (20 ml) junto con piridina (0,429 ml, 5,30 mmol). La mezcla se agitó durante 15 minutos en atmósfera de nitrógeno. En un segundo RBF que contenía el cloruro de tetrahidro-2H-piran-4-carbonilo recién sintetizado (788 mg, 5,30 mmol) se le añadió, a temperatura ambiente, 2 ml de DCM seguido de la mezcla anterior que contenía 2-amino-4-bromofenol/piridina en DCM. La mezcla heterogénea combinada de color rosa se agitó durante una noche a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. La mezcla del producto en bruto se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó. El producto aislado en bruto se trituró con 4:1 de éter dietílico enfriado en hielo/hexano para dar 1,512 g de N-(5-bromo-2-hidroxifenil)tetrahidro-2H-piran-4-carboxamida ( 88 % de rendimiento) en forma de un sólido de color rosa. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,190 min, m/z 300,15, 302,15 (M H), pureza del 90 %. RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8 8,37 (s a, 1H), 7,58 (s a, 1H), 7,39 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 8,7, 2,4 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,09 (m, 2H), 3,47 (m, 2H), 2,62 (m, 1H), 1,98-1,77 (m, 4H).
A un tubo cerrado herméticamente se le añadió 2 ml de dioxano, N-(5-bromo-2-hidroxifenil)tetrahidro-2H-piran-4-carboxamida (200 mg, 0,666 mmol) y 3 eq. de oxicloruro de fósforo (0,186 ml, 1,999 mmol). El tubo se cerró herméticamente y la mezcla se calentó a 110 °C durante 2 horas. La mezcla se enfrió y el dioxano se evaporó para dar un aceite en bruto. El producto en bruto se trituró con agua y se secó al vacío para dar 160 mg (51 % de rendimiento) de 5-bromo-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)benzo[d]oxazol en forma de un sólido de color rosa. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 jm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10%), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,427 min, m/z 282,15, 284,10 (M H), pureza del 65%. RMN 1H (500 MHz, CDCla) 8 7,83 (d, J=1,7 Hz, 1H), 7,44 (dd, J = 1,7, 8,7 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,08 (dt, J = 11,7, 3,5 Hz, 2H), 3,58 (td, J = 11,7, 3,5 Hz, 3H), 3,29-3,15 (m, 1H), 2,11-1,98 (m, 4H).
Ejemplo 1017: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)benzo [d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000035_0001
El material en bruto se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu que empleaba acetonitrilo/agua/acetato amónico 10 mM donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/acetonitrilo al 95 %/ acetato amónico 10 mM con una columna Waters XBridge 10 ^m C18 OBD 30 x 100 mm a un gradiente del 5-100 % de B y un caudal de 30 ml/min. durante 20 minutos con una parada de 10 minutos. Las fracciones que contenían el material deseado se evaporaron. El rendimiento del producto fue de 22 mg (rendimiento del 39 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 99 %. Se usaron dos inyecciones de Cl/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1 , 0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Xbridge 3,5 ^m Fenilo, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1 , 0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 7,15 min, pureza del 99 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 7,66 min, pureza del 99 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,360 min, m/z 707,20 (M H), pureza del 100 %.
RMN 1 H (500 MHz, CD3OD) 58,96 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,92 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,39 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 7,65 (m, 2H), 7,56 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,31 (dd, J = 8,4, 1,7 Hz, 1H), 7,27 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,32 (s, 2H), 4,46 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,06 (dt, J = 11,2, 3,6 Hz, 2H), 3,64 (td, J = 11,2; 3,6 Hz, 2H), 3,52 (dd, J = 10,5, 3,1 Hz, 1H), 3,39-3,35 (m, 2H), 2,93 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,24 (m, 1H), 2,14 (m, 2H), 2,08-2,00 (m, 2H), 1,93-1,75 (m, 3H), 1,70 (m, 1H), 1,59-1,49 (m, 1H).
Producto intermedio: El 2-(8-oxabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-bromobenzo[d]oxazol se sintetizó de una manera similar.
Figure imgf000035_0002
Se obtuvieron 375 mg de N-(5-bromo-2-hidroxifenil)-8-oxabiciclo[3.2.1]octano-3-carboxamida (81 % de rendimiento) en forma de un sólido de color castaño. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 □m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,862 min, m/z 381,20 y 383,15 (M H), pureza del 90 %. RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 59,11 (s a, 1H), 7,99 (m, 1H), 7,10 (dd, J = 8 ,6 , 2,4 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 8 , 6 Hz, 1H), 4,45 (m, 2H), 3,11-2,98 (m, 1H), 2,08-1,86 (m, 6 H), 1,69 (m, 2H).
Se obtuvieron 31,4 mg de 2-(8-oxabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-bromobenzo[d]oxazol (23 % de rendimiento) en forma de un sólido de color amarillo claro. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,502 min, m/z 308,10 y 310,10 (M H), pureza del 90 %. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 57,79 (s, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,34 (m, 1H), 4,52 (s a, 2H), 3,48-3,33 (m, 1H), 2,17 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,99-1,77 (m, 4H).
Ejemplo 1018: Acido (2S)-1 -(4-((3-(2-(8-oxabiciclo[3.2.1]octan-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000036_0001
El material en bruto se purificó por HPLC preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18, 30 x 100 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente complejo del 30 % de B durante 25 minutos, después el 50% de B durante 10 minutos y finalmente el 50-100% de B durante 5 minutos a un caudal de 30 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se evaporaron. El rendimiento del producto fue de 10,4 mg (rendimiento del 18 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 98 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 ^m C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 14,08 min; pureza del 98 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 9,13 min; pureza del 99 %.
Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10%), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,485 min, m/z 733,20 y 734,20 (M H).
RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 58,94 (m, 2H), 8,39 (m, 1H), 7,66 (m, 2H), 7,55 (m, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,27 (m, 3H), 7,05 (m, 1H), 5,38 (s, 2H), 5,33 (s, 2H), 4,54 (m, 2H), 4,45 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 3,49 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,14-1,94 (m, 9H), 1,78 (m, 3H), 1,66 (m, 1H), 1,53 (m, 1H), 1,30 (m, 1H).
El ejemplo 1019 y el ejemplo 1020 se prepararon de acuerdo con el esquema siguiente.
Figure imgf000036_0002
Ejemplo 1019: 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000037_0001
A un tubo cerrado herméticamente se le añadió 5-bromo-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol (85 mg, 0,289 mmol), 5-((4-doro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi) fenoxi)metil)nicotinonitrilo (150 mg, 0,289 mmol), THF (4,5 ml), agua (1,5 ml), fosfato de potasio, tribásico (245 mg, 1,157 mmol) y precatalizador XPhos de segunda generación (22,75 mg, 0,029 mmol). La mezcla se desgasificó/roció con nitrógeno, después se calentó durante una noche a 80 °C. La mezcla de reacción se enfrió, el disolvente se evaporó. El residuo se recogió en acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó. El aceite resultante se trituró con 3:1 de éter dietílico frío/hexanos para producir 148,8 mg de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (85 % de rendimiento) en forma de un polvo de color castaño claro. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0­ 100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,437 min, m/z 607,20, 609,20 (M H), pureza del 93 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 5 10,24 (s, 1H), 9,04 (d, J = 1,9 Hz, 2H), 8,56 (s, 1H), 7,74 (m, 2H), 7,63 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 7,40-7,20 (m, 4H), 5,50 (s, 2H), 5,44 (s, 2H), 3,43 (m, 1H), 3,04­ 2,96 (m, 1H), 2,81 (m, 2H), 2,67-2,58 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,14-2,03 (m, 3H), 1,86 (m, 1H).
Ejemplo 1020: Ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d] oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000037_0002
A un vial se le añadió 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d] oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (25 mg, 0,041 mmol) en DMF (1 ml) junto con ácido acético (0,100 ml) y ácido (R)-2-amino-3-hidroxi-2-metilpropanoico (12,26 mg, 0,103 mmol). El vial se cerró herméticamente y la mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le añadió después complejo de borano-2-picolina (5,29 mg, 0,049 mmol) y la mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters xBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 15-80 % de B durante 25 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto, ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico fue de 4,3 mg (14% de rendimiento) y su pureza estimada por análisis LCMS fue del 94 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,394 min; ESI-MS(+) m/z = 710,1 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,435 min; ESI-MS(+) m/z = 710,0 (m h )
RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,95 (m, 1H), 8,89 (m, 1H), 8,39 (m, 1H), 7,70 (m, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,31-7,18 (m, 3H), 7,02 (m, 1H), 5,33 (m, 2H), 5,24 (m, 2H), 4,00 (m, 4H), 3,07 (m, 1H), 2,92 (m, 2H), 2,41-2,24 (m, 4H), 2,22-2,07 (m, 4H), 1,88 (m, 2H), 1,76 (m, 2H), 1,24 (s, 3H).
Ejemplo 1021: 5-((4-cloro-2-(hidroximetil)-5-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000038_0001
El ejemplo 1021 se aisló de la mezcla de reacción del ejemplo 1020. El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 15-80 % de B durante 25 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto, 5-((4-cloro-2-(hidroximetil)-5-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo, fue de 2,6 mg (10 % de rendimiento) y su pureza estimada por análisis LCMS fue del 96,2 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,944 min; ESI-MS(+) m/z = 609,0 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,884 min; ESI-MS(+) m/z = 609,0 (m h )
Producto intermedio: 5-bromo-2-(1-fenilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol
Figure imgf000038_0002
A 2-amino-4-bromofenol (300 mg, 1,596 mmol) y clorhidrato del ácido 1-fenilpiperidin-4-carboxílico (386 mg, 1,596 mmol) se le añadió ácido polifosfórico (5 g). La mezcla se calentó durante 3,5 horas a 190 °C. A la mezcla de reacción a 0 °C se le añadió gota a gota 6 ml de agua con agitación manual. A la mezcla de reacción, se le añadió gota a gota, NaOH ac. 2 M. hasta que el pH alcanzó ~7. A la mezcla espesa de color púrpura se le añadió 30 ml de acetato de etilo, el producto se extrajo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó para dar 158,9 mg de 5-bromo-2-(1-fenilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol en forma de un sólido de color rojo (28 % de rendimiento) que según LCMS tenía una pureza del 95 %. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,202 min, m/z 357,15 y 359,15 (M H), pureza del 95 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6 ) 57,96 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8 , 6 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 1,9, 8 , 6 Hz, 1H), 7,27-7,19 (m, 2H), 6,99 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,78 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,74 (dt, J = 12,7, 3,4 Hz, 2H), 3,25 (m, 1H), 2,98-2,88 (m, 2H), 2,19 (dd, J = 13,3, 2,9 Hz, 2H), 1,98-1,88 (m, 2H).
Ejemplo 1022: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-fenilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000039_0001
A un tubo cerrado herméticamente se le añadió 5-bromo-2-(1-fenilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol (28,3 mg, 0,079 mmol), THF (3 ml), ácido (S)-1-(5-doro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico (50 mg, 0,079 mmol), fosfato de potasio, tribásico (42,0 mg, 0,198 mmol), agua (1 ml) y precatalizador XPhos se segunda generación (7,80 mg, 9,91 pmol). El recipiente se cerró herméticamente, la mezcla se desgasificó/roció con nitrógeno y después se calentó a 75 °C durante una noche. El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 pm C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 50-90 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 17,5 mg (rendimiento del 28,1 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 99 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 2,494 min; ESI-MS(+) m/z = 782,0 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,846 min; ESI-MS(+) m/z = 782,0 (m h )
RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8 9,02 (m, 2H), 8,47 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,53 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,36-7,20 (m, 5H), 7,14 (s, 1H), 7,01 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 6,79 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 5,35 (s a, 2H), 5,29 (s, 2H), 3,85-3,73 (m, 4H), 3,62 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,13 (m, 1H), 2,94 (m, 4H), 2,33-2,15 (m, 5H), 1,97 (m, 2H), 1,80 (m, 1H), 1,73 (m, 1H), 1,49 (m, 3H), 1,37 (m, 1H).
Ejemplo 1023: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-metoxi-4-((2-metN-3-(2-(1-fenNpiperidin-4-N)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2 -carboxílico
Figure imgf000039_0002
El ejemplo 1023 se preparó de acuerdo con el esquema anterior y el procedimiento siguiente: A 5-cloro-2-hidroxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)benzaldehído (1,41 g, 3,50 mmol) en DMF (23 ml) en atmósfera de nitrógeno se le añadió carbonato potásico (1,113 g, 8,05 mmol) y yodometano (0,436 ml, 7,00 mmol). La mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. El producto en bruto se diluyó con 75 ml de DCM, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó para dar 1,4 g ( 88 %) de 5-cloro-2-metoxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)benzaldehído en forma de un sólido de color castaño claro. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 mm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10%), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 2,044 min, m/z 417,25, 419,25 (M H), pureza del 90 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 8 10,16 (s, 1H), 7,69-7,65 (m, 2H), 7,64-7,59 (m, 1H), 7,25 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,11 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,01 (s, 3H), 2,54 (s, 3H), 1,32 (s, 12H).
A un RBF se le añadió ácido acético (27,5 pl, 0,480 mmol), DCE (1 ml), etanol (3 ml), THF (1 ml), 20 mg de secado al horno, tamices 4A molidos, ácido L-pipecólico (62,0 mg, 0,480 mmol) y 5-cloro-2-metoxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)benzaldehído (100 mg, 0,240 mmol). El RBF se cerró herméticamente, la mezcla se colocó en atmósfera de nitrógeno y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A un pequeño vial se le añadió THF (1 ml) y cianotrihidroborato de sodio (30,2 mg, 0,480 mmol). La mezcla se sonicó brevemente en solución, después se recogió en una jeringa. La solución resultante se vertió gota a gota en la mezcla de reacción anterior manualmente durante 4 horas. Después, la mezcla de reacción se agitó durante una noche en atmósfera de nitrógeno. El producto en bruto se diluyó con acetato de etilo, se lavó con fosfato de potasio 1,5 M, agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó para dar 134,7 mg de ácido (S)-1-(5-cloro-2-metoxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil) piperidin-2-carboxílico en forma de un sólido de color blanco (85 % de rendimiento, 80 % de pureza). Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 mm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100% de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,554 min, m/z 530,35 (M H), pureza del 80 %. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 8 7,64 (m, 1H), 7,59 (m, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,28-7,21 (m, 1H), 6,95 (S, 1H), 5,23 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,77-3,71 (m, 1H), 3,69-3,62 (m, 1H), 3,13 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,32 (m, 1H), 1,82 (m, 1H), 1,76-1,68 (m, 1H), 1,52 (m, 3H), 1,41-1,36 (m, 1H), 1,32 (s, 12H).
A un tubo cerrado herméticamente se le añadió 5-bromo-2-(1-fenilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol (35,4 mg, 0,099 mmol), THF (3 ml), ácido (S)-1-(5-cloro-2-metoxi-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico (68,25 mg, 0,129 mmol), fosfato de potasio, tribásico (52,6 mg, 0,248 mmol), agua (1 ml) y precatalizador XPhos se segunda generación (7,80 mg, 9,91 pmol). El recipiente se cerró herméticamente, la mezcla se desgasificó/roció con nitrógeno, después se calentó durante una noche a 75 °C. El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 47-87 % de B durante 23 minutos con una parada de 4 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El material se purificó de nuevo por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 pm C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de metanol:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 50-90 % de B durante 25 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del ejemplo 1023, ácido (S)-1-(5-cloro-2-metoxi-4-((2-metil-3-(2-(1-fenilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico, fue de 1,1 mg (2 % de rendimiento) y su pureza estimada por análisis LCMS fue del 92 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con 0,1 % ácido trifluoroacético a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 2,567 min; ESI-MS (+) m/z = 680,0 (M H); Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,866 min; ESI-MS (+) m/z = 680,0 (M H); Rm N 1H (400 MHz, DMSO-de) 8 7,76 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 6 , 8 Hz, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,33-7,19 (m, 5H), 7,03-6,97 (m, 2H), 6,92 (s, 1H), 6,78 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 5,27 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,79-3,67 (m, 2H), 3,30-3,21 (m, 2H), 2,94 (t, J = 10,9 Hz, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,65 (dd, J = 8,1, 3,9 Hz, 1H), 2,28-2,16 (m, 4H), 2,05-1,86 (m, 3H), 1,74-1,50 (m, 3H), 1,42 (m, 2H), 1,24 (m, 2H).
Productos intermedios: 4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)ciclohexanocarboxilato de metilo y ácido 4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2 -il)ciclohexanocarboxílico
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A un RBF se le añadió a 0 °C, en atmósfera de nitrógeno, ácido 4-(metoxicarbonil) ciclohexanocarboxílico (0,484 g, 2,60 mmol), DCM seco (10 ml), DMF seca (0,040 ml, 0,520 mmol) y gota a gota cloruro de oxalilo (0,854 ml, 5,72 mmol). El baño con hielo se eliminó y la mezcla se agitó durante 45 minutos en atmósfera de nitrógeno. Los volátiles se eliminaron en el rotavapor, el aceite en bruto se diluyó con DCM seco y la evaporación se repitió para dar 4-(clorocarbonil)ciclohexanocarboxilato de metilo en bruto. A un vial se le añadió el 4-(clorocarbonil)ciclohexancarboxilato de metilo recién sintetizado (2,60 mmol supuesto), PhCl (2 ml), 5-bromobenzoxazol (257 mg, 1,3 mmol) y carbonato potásico (27,6 mg, 0,200 mmol) en agua (0,667 ml). El vial se cerró herméticamente y la mezcla se agitó durante una noche a 140 °C. La mezcla se enfrió y los volátiles se eliminaron. El producto en bruto se recogió en 1:1 de etilacetato/DCM, se lavó con una cantidad mínima de agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó. La mezcla de reacción en bruto se recogió después en 6 ml de acetonitrilo/DMF y se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu que empleaba acetonitrilo/agua/acetato amónico donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/acetonitrilo al 95 %/acetato amónico 10 mM con una columna Waters Sunfire 5 ^m C18 30x100 mm a un gradiente del 25-100 % de B y un caudal de 40 ml/min. durante 15 minutos con una parada de 5 minutos. Se obtuvo 4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)ciclohexanocarboxilato de metilo en forma de una mezcla ~1:1 de isómeros cis y trans por análisis RMN y en forma de un sólido de color melocotón (100 , 8 mg, 23 % de rendimiento). Los datos de lC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 2-98 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 100 %/ácido trifluoroacético al 0,05 %), (A = agua calidad de HPLC del 100 %/ácido trifluoroacético al 0,05 %), en 2 minutos con un tiempo de gradiente de 1,5 minutos a un caudal de 0,8 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,334 min, m/z 337,9 y 339,9 (M H).
A un vial se le añadió 4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)ciclohexanocarboxilato de metilo (20 mg, 0,059 mmol) en THF (2 ml) junto con hidróxido de litio (7,08 mg, 0,296 mmol) en agua (0,400 ml). La mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron, el residuo de color blanco resultante se recogió en acetato de etilo, se lavó con NH4Cl, salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó para dar 18,7 mg de ácido 4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)ciclohexanocarboxílico en forma de un sólido de color blanco. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 mm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 2,114 min, m/z 324,15, 326,15 (M H), pureza del 95 %. RMN 1H (500 MHz, CD3OD) 5 7,82 (m, 1H), 7,54 (m, 1H), 7,51 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,02 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 2,33 (m, 1H), 2,30 (m, 1H), 2,16 (m, 1H), 2,03 (m, 2H), 1,81 (m, 1H), 1,75-1,59 (m, 1H).
Ejemplo 1024: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(4-(metoxicarbonil)ciclohexil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000041_0002
A un tubo cerrado herméticamente se le añadió ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico (30 mg, 0,047 mmol), t Hf (3 ml), agua (1 ml), 4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)ciclohexanocarboxilato de metilo (16,05 mg, 0,047 mmol), fosfato de potasio, tribásico (25,2 mg, 0,119 mmol) y precatalizador XPhos de segunda generación (3,74 mg, 4,75 |jmol). El recipiente se cerró herméticamente, la mezcla se desgasificó/roció con nitrógeno, después se calentó durante una noche a 80 °C. La mezcla de reacción en bruto se concentró, se recogió en 4 ml de acetonitrilo y se purificó usando una HPLC preparativa Shimadzu que empleaba acetonitrilo/agua/acetato amónico donde el disolvente A fue acetonitrilo al 5 %/agua al 95 %/acetato amónico 10 mM y el disolvente B fue agua al 5 %/acetonitrilo al 95 %/acetato amónico 10 mM con una columna Phenomenex Axia C 18 30x100 mm 10 ^m a un gradiente del 20-100 % de B y un caudal de 40 ml/min. durante 12 minutos con una parada de 10 minutos. Las fracciones se agruparon y el disolvente se eliminó en una corriente de nitrógeno para dar 8,0 mg (22 % de rendimiento) de ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(4-(metoxicarbonil)cidohexil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil) oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico en forma de un sólido de color blanco con una pureza del 96 %. Los datos de LC/MS se obtuvieron en un Shimadzu analytical LCMS (ESI+) a 220 nm usando las condiciones de ajuste siguientes: columna Waters Aquity BEH 1,7 mm C18, 2,1 x 50 mm, con un gradiente del 0-100 % de B (B = acetonitrilo calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/agua calidad de HPLC del 10 %), (A = agua calidad de HPLC del 90 %/ácido trifluoroacético al 0,1 %/acetonitrilo calidad de HPLC del 10 %), en 2 minutos con una parada de 1 minuto a un caudal de 1 ml/minuto. Tr de LCMS = 1,234 min, m/z 763,15, 764,10 (M H). Se usaron dos inyecciones de LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Waters Xbridge 3,5 pm C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condiciones de la inyección 2: Waters Sunfire 3,5 pm C18, 3,0 x 150 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 10-100 % de B durante 15 minutos con una parada de 5 minutos al 100 % de B a un caudal de 0,5 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 14,68 min; pureza del 95 %.
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 11,30 min; pureza del 97 %.
RMN 1 H (500 MHz, CD3OD) 8 8,96 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 8,40 (t, J = 1,8 Hz, 1H), 7,70-7,61 (m, 2H), 7,57-7,47 (m, 3H), 7,34-7,24 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,30 (s, 2H), 4,44 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,73­ 3,68 (m, 3H), 3,51 (d a, J = 7,9 Hz, 1H), 3,29-3,15 (m, 1H), 3,05 (m, 1H), 2,94 (t a, J = 11,0 Hz, 1H), 2,73-2,64 (m, 1H), 2,55-2,41 (m, 1H), 2,36-2,27 (m, 4H), 2,25-2,12 (m, 3H), 2,10-2,00 (m, 3H), 1,87-1,76 (m, 3H), 1,74-1,66 (m, 2H), 1,59­ 1,43 (m, 1H).
Ejemplo 1025 y ejemplo 1026: Ácido (S)-1-(4-((3-(2-(4-carboxiciclohexil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000042_0001
E jem plo 1025 (isóm era 1)
E jem plo 1026 (isóm era 2)
A un tubo cerrado herméticamente se le añadió ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico (40 mg, 0,063 mmol), THF (3 ml), agua (1 ml), ácido 4-(5-bromobenzo[d]oxazol-2-il)ciclohexanocarboxílico (17,10 mg, 0,053 mmol), fosfato de potasio, tribásico (28,0 mg, 0,132 mmol) y precatalizador XPhos de segunda generación (4,15 mg, 5,27 pmol). El recipiente se cerró herméticamente, la mezcla se desgasificó/roció con nitrógeno, después se calentó durante una noche a 80 °C. El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 pm C18 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a un gradiente del 15-55 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían los productos deseados se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación.
Ejemplo 1025 (Isómero 1, el primer isómero de elución): El rendimiento del producto fue de 11,1 mg (rendimiento del 28 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 100 %.
Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final.
Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 pm C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con 0,1 % ácido trifluoroacético a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,474 min; ESI-MS(+) m/z = 749,2 (M H) Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,839 min; ESI-MS(+) m/z = 749,2 (M H) RMN 1H (500 MHz, DMSO-cfe) 58,98 (dd, J = 3,2, 2.0 Hz, 2H), 8,41 (m, 1H), 7,71 (m, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,36-7,22 (m, 3H), 7,10 (m, 1H), 5,34 (s, 2H), 5,27 (s, 2H), 3,85-3,76 (m, 1H), 3,68-3,59 (m, 1H), 3,18-3,11 (m, 1H), 3,08-2,98 (m, 1H), 2,96-2,88 (m, 1H), 2,36-2,26 (m, 2H), 2,26-2,18 (m, 5H), 2,10-2,02 (m, 2H), 1,86-1,60 (m, 4H), 1,59-1,45 (m, 5H), 1,43-1,32 (m, 1H).
Ejemplo 1026 (Isómero 2, el segundo isómero de elución): El rendimiento del producto fue de 6,3 mg (rendimiento del 16 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 99 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100% 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,596 min; ESI-MS (+) m/z = 749,2 (M H); Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,906 min; ESI-MS (+) m/z = 749,2 (M H); RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 58,97 (dd, J = 3,2, 2.0 Hz, 2H), 8,40 (m, 1H), 7,72-7,68 (m, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,52-7,48 (m, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,33-7,21 (m, 3H), 7,08 (s, 1H), 5,33 (s, 2H), 5,26 (s, 2H), 3,87-3,79 (m, 1H), 3,70-3,62 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 3,17-3,10 (m, 1H), 2,97-2,87 (m, 1H), 2,36-2,27 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,12-2,01 (m, 2H), 1,99-1,69 (m, 9H), 1,57-1,46 (m, 3H), 1,42-1,30 (m, 1H).
El esquema siguiente ilustra la síntesis del ejemplo 1027 al ejemplo 1031.
Figure imgf000043_0001
Producto intermedio: 5-(7-bromoquinoxalin-2-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000043_0002
Se añadió precatalizador XPhos de segunda generación (40,5 mg, 0,051 mmol) a un tubo de paredes gruesas, con tapón de rosca, que contenía una solución desgasificada con argón de 7-bromo-2-cloroquinoxalina (250 mg, 1,027 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de tere-butilo (317 mg, 1,027 mmol) y fosfato potásico (545 mg, 2,57 mmol) en THF (5 ml) y agua (1 ml). El tubo se cerró herméticamente y la mezcla se agitó a ta durante 16 h antes de diluirlo con acetato de etilo y agua. La capa acuosa se separó y la capa orgánica se extrajo dos veces más con acetato de etilo. El extracto orgánico combinado se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para dar un residuo de color caramelo claro. El residuo se recogió en una pequeña cantidad de diclorometano y se cargó en una columna RediSepRf de fase normal de gel de sílice Teledyne ISCO 40 g desechable que primero se eluyó con hexanos por 120 ml, seguido de 0-50 % de B por 1400 ml donde el disolvente B = acetato de etilo y el disolvente A = hexanos. Después de la concentración del eluyente, se aisló el producto deseado, 3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de tere-butilo (56,0 mg, 14% de rendimiento) en forma de un sólido de color amarillo claro. LCMS: tR (tiempo de retención) = 1,51 min; LCMS (ESI) m/z calc. para C i8H2iBrN3O2: 390,08, encontrado: 389,95 y 391,95 [M+H]+. Condiciones de LCMS: Vol de inyección = 3 ul; Gradiente = 2-98 % de B; Tiempo de gradiente = 1,5 min; Caudal = 0,8 ml/min; Longitud de onda = 220 nm; Fase móvil A = 0:100 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,05 %; Fase móvil B = 100:0 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,05 %; Columna = Waters Aquity BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 U (= ^m); Temp. del horno = 40 °C. RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 59,10 (s, 1H), 8,25 (s a, 1H), 7,94 (d, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,80 (dd, J = 8 ,8 , 2,0 Hz, 1H), 7,04 (s a, 1H), 4,59 (s a, 2H), 3,66 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,50 (s a, 2H), 1,55 (s, 9H).
Producto intermedio: 7-bromo-2-(1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)quinoxalina
Figure imgf000044_0001
Se añadió ácido trifluoroacético (0,4 ml, 5,19 mmol) a una solución de 3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de tere-butilo (50 mg, 0,128 mmol) en DCM seco (2 ml) a ta. La mezcla se agitó a ta durante 2 h antes de evaporarla a sequedad. El residuo se hizo base libre usando un cartucho de SCX de 1,0 g (MeOH:2N NH3:MeOH) para producir 7-bromo-2-(1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)quinoxalina en forma de un aceite de color caramelo que se usó "tal cual" y se llevó adelante directamente. LCMS: tR = 0,77 min; LCMS (ESI) m/z calc. para C13H13BrN3: 290,03, encontrado: 289,85 y 291,85 [M+H]+. Condiciones de LCMS: Vol de inyección = 3 ul; Gradiente = 2-98 % de B; Tiempo de gradiente = 1,5 min; Caudal = 0,8 ml/min; Longitud de onda = 220 nm; Fase móvil A = 0:100 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,05%; Fase móvil B = 100:0 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,05 %; Columna = Waters Aquity BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 U; Temperatura del horno = 40 °C.
Ejemplo 1027: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(3-(1,2,5,6-tetra-hidropiridin-3-il)quinoxalin-6 -il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2 -carboxílico
Figure imgf000044_0002
Se añadió precatalizador XPhos de segunda generación (10,09 mg, 0,013 mmol) a un vial de 1 dram que contenía una solución desgasificada con argón de 7-bromo-2-(1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)quinoxalina (37,2 mg, 0,128 mmol), una mezcla (1:4) de ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)-bencil)piperidin-2-carboxílico y ácido (S)-1-(4-((3-borono-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico (70,5 mg, 0,128 mmol, con base de ácido borónico, preparado de una manera similar a como se ha descrito anteriormente) y fosfato potásico (68,0 mg, 0,321 mmol) en THF (1 ml) y agua (0,5 ml). El vial se cerró herméticamente y la mezcla se agitó a 80 °C durante 16 h. Después de la refrigeración hasta ta, la capa orgánica se separó y se concentró hasta casi sequedad y el residuo resultante se recogió en MeOH (1 ml) y DMF (1 ml) y se purificó por LCMS preparativa con las condiciones siguientes: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 U; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Gradiente: 14-54 % de B durante 19 min, después una parada de 4 min al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 25,4 mg (27 %) y su pureza estimada por análisis LCMS fue del 97 %. Se usó LCMS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna Waters XBridge C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 U; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 98,3 %; Masa observada: 714,97; Tiempo de retención: 1,44 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 * 50 mm, 1,7 U; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0­ 100 % de B durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 96,7%; Masa observada: 714,98; Tiempo de retención: 1,46 min. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 59,34 (s, 1H), 9,02 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 9,01 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,12 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 8,4, 1,8 Hz, 1H), 7,59 (dd, J = 6,2, 2,6 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,407,34 (m, 2H), 7,24 (s a, 1H), 7,12 (s, 1H), 5,34 (s, 2H), 5,31 (s, 2H), 3,87 (s a, 2H), 3,81 (d a, J = 13,6 Hz, 1H), 3,61 (d a, J = 13,6 Hz, 1H), 3,13-3,07 (m, 1H), 2,98-2,83 (2m, 3H), 2,37 (s a, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,29-2,24 (m, 1H), 1,83-1,78 (m, 1H), 1,75-1,68 (m, 1H), 1,55-1,45 (m, 3H), 1,41-1,30 (m, 1H).
Producto intermedio: 3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-8-azabicido[3.2.1]oct-2-en-8-carboxilato de /ere-butilo
Figure imgf000045_0001
Se añadió precatalizador XPhos de segunda generación (11,76 mg, 0,015 mmol) a un tubo de paredes gruesas, con tapón de rosaca, que contenía una solución desgasificada con argón de 7-bromo-2-cloroquinoxalina (72,6 mg, 0,298 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-8-carboxilato de /ere-butilo (100 mg, 0,298 mmol) y fosfato potásico (158 mg, 0,746 mmol) en THF (2 ml) y agua (1,0 ml). El tubo se cerró herméticamente y la mezcla se agitó a ta durante 16 h antes de diluirlo con acetato de etilo y agua. La capa acuosa se separó y la capa acuosa se extrajo dos veces more con acetato de etilo. El extracto orgánico combinado se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para dar un residuo de color caramelo. Tres cuartos de este residuo se recogieron en una pequeña cantidad de diclorometano y se cargaron en una columna RediSepRf de fase normal de gel de sílice Teledyne ISCO 24 g desechable que primero se eluyó con hexanos por 80 ml, seguido de 0-50 % de B por 280 ml donde el disolvente B = acetato de etilo y el disolvente A = hexanos. Después de la concentración del eluyente, se aisló el producto deseado, 3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-8-azabiciclo-[3.2.1]oct-2-en-8-carboxilato de /ere-butilo (21,2 mg, 17 % de rendimiento) en forma de una película de color amarillo claro. El cuarto restante del residuo en bruto se presentó para purificación por LCMS preparativa con fines de caracterización con las condiciones siguientes: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 U; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Gradiente: 50-100 % de B durante 22 min, después una parada de 5 min al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 6,2 mg (5 %) y su pureza estimada por análisis LCMS fue del 100 %. Se usó LCMS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 * 50 mm, 1,7 U; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0­ 100 % de B durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 100,0%; Masa observada: 416,06; Tiempo de retención: 2,5 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 * 50 mm, 1,7 U; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 416,07; Tiempo de retención: 2,51 min. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 59,32 (s, 1H), 8,24 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,04­ 7,99 (m, 1H), 7,93 (dd, J = 8 ,8 , 1,8 Hz, 1H), 7,49 (s a, 1H), 4,54 (s a, 1H), 4,49-4,37 (m, 1H), 3,13-2,98 (m, 1H), 2,65­ 2,54 (m, 1H), 2,28-2,09 (m, 1H), 1,98 (s a, 2H), 1,77-1,64 (m, 1H), 1,39 (s, 9H).
La preparación a una escala de dos mmol y la purificación usando una columna normal de gel de sílice Teledyne ISCO se llevó a cabo de una manera similar: LCMS: tR = 1,55 min; LCMS (ESI) m/z calc. para C2oH23BrN3O2: 416,10, encontrado: 415,95 y 417,95 [M+H]+. Condiciones de LCMS: Vol de inyección = 3 ul; Gradiente = 2-98 % de B; Tiempo de gradiente = 1,5 min; Caudal = 0,8 ml/min; Longitud de onda = 220 nm; Fase móvil A = 0:100 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,05 %; Fase móvil B = 100:0 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,05 %; Columna = Waters Aquity BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 U; Temperatura del horno = 40 °C.
Ejemplo 1028: Ácido (2S)-1 -(4-((3-(3-(8-(/ere-Butoxicarbonil)biciclo[3.2.1]oct-2-en-3-il)quinoxalin-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000045_0002
El ejemplo 1028 se preparó de una manera similar a la del ejemplo 1027. El material en bruto se purificó a través de LC/MS preparativa con las condiciones siguientes: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 U; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Gradiente: 20-85 % de B durante 25 min, después una parada de 5 min al 100% de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 2,5 mg (3,2 %) y su pureza estimada por análisis LCMS fue del 97 %. Se usó LCMS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 x 50 mm,
1,7 U; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 min, después una parada de 0,75
min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 100,0 %;
Masa observada: 841,05; Tiempo de retención: 2,21 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge
C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 U; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B:
95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV 220 nm. Resultados de
la inyección 2: Pureza: 96,6 %; Masa observada: 841,06; Tiempo de retención: 2,26 min. z, DMSO-d6) 59,32 (s, 1H), 9,04-9,03 (m, 1H), 9,02-9,00 (m, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,13 (d, J = 8,4 Hz, 1 ,77 (dd, J
= 8,4, 1,8 Hz, 1H), 7,59 (dd, J = 5,9, 2,9 Hz, 1H), 7,48 (s a, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,39-7,36 , 2H), 5,32
(s, 2H), 4,55 (s a, 1H), 4,50-4,38 (m, 1H), 3,80 (d a, J = 13,9 Hz, 1H), 3,63 (d a, 1H), 3,19-3,02 (2m, 2,95-2,83 (m, 1H), 2,74-2,59 (m, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,31-2,26 (m, 1H), 2,26-2,08
Figure imgf000046_0001
3-1,96 (m, 2H), 1,86-1,77 (m, 1H), 1,76-1,65 (m, 2H), 1,49 (s a, 3H), 1,42-1,34 (m, 2H), 1,39 (s, 9H).
Producto intermedio: 2-(8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-il)-7-bromoquinoxalina
Figure imgf000046_0002
Se añadió ácido trifluoroacético (200 pl, 2,60 mmol) en una porción a una solución de 3-(7-bromoquinoxalin-2-il)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-8-carboxilato de /ere-butilo (50 mg, 0,12 mmol) en diclorometano seco (1 ml) a ta. La mezcla
se agitó a ta durante 1,5 h antes de concentrarla con una corriente de nitrógeno y colocarla a alto vacío durante 16 h.
El residuo resultante se hizo base libre usando un cartucho de 1 g Varian Mega Bond Elut Flash SCX (MeOH y después
NH32 M en MeOH; 3 volúmenes de columna cada uno). Después de eso, se aisló el producto deseado, 2-(8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-il)-7-bromoquinoxalina (35,7 mg, 94% de rendimiento) en forma de un cristal de color caramelo claro que se llevó directamente hacia delante. LCMS: tR = 1,06 min; LCMS (ESI) m/z calc. para C-isH-isBrNs:
316,05, encontrado: 316,15 y 318,15 [M+H]+. Condiciones de LCMS: Vol de inyección = 1 ul; Gradiente = 0-100 % de
B; Tiempo de gradiente = 2 min; Caudal = 1 ml/min; Longitud de onda = 220 nm; Fase móvil A = 10:90 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B = 90:10 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético
al 0,1 %; Columna = Waters Aquity BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 U; Temperatura del horno = 40 °C.
Ejemplo 1029: Ácido (2S)-1-(4-((3-(3-(8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-il)quinoxalin-6-il)-2-metilbencil)-oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000046_0003
El ejemplo 1029 se preparó de una manera similar a la del ejemplo 1027. El material en bruto se purificó a través de
LC/MS preparativa con las condiciones siguientes: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 U; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM;
Gradiente: 12-52 % de B durante 22 min, después una parada de 4 min al 100% de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación.
El rendimiento del producto fue de 20,8 mg (25 %) y su pureza estimada por análisis LCMS fue del 97 %. Se usó
LCMS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18,
2,1 x 50 mm, 1,7 U; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100 % de B durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 97,3 %; Masa observada: 741,02; Tiempo de retención: 1,43 min. Condiciones de la inyección 2:
Columna: Waters XBridge C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 U; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM;
Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: 0-100% de B durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm).
Resultados de la inyección 2: Pureza: 97,3 %; Masa observada: 741,05; Tiempo de retención: 1,41 min. RMN 1H (500
MHz, DMSO-de) 59,28 (s, 1H), 9,02 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 9,01 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,11 (d, J = 8,4 Hz, 1H),
7,87 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 8 ,6 , 1,7 Hz, 1H), 7,58 (dd, J = 6,2, 1,8 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,41 (d a, J = 5,5 Hz, 1H), 7,39­
7,35 (m, 2H), 7,12 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 5,34 (s a, 2H), 5,31 (s, 2H), 3,94-3,90 (m, 1H), 3,89-3,85 (m, 1H), 3,80 (d a, J =
14,3 Hz, 1H), 3,61 (d a, J = 13,6 Hz, 1H), 3,13-3,05 (m, 1H), 2,99-2,96 (m, 1H), 2,95-2,92 (m, 1H), 2,92-2,86 (m, 1H),
2,30 (s, 3H), 2,33-2,22 (m, 1H), 2,06-1,95 (m, 2H), 1,90-1,85 (m, 1H), 1,82-1,75 (m, 1H), 1,75-1,66 (m, 1H), 1,65-1,56
(m, 1H), 1,55-1,43 (m, 3H), 1,41-1,29 (m, 1H).
Ejemplo 1030: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(3-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)quinoxalin-6 -il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2 -carboxílico
Figure imgf000047_0001
El ejemplo 1030 se preparó de una manera similar a la del ejemplo 1027. El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a un gradiente del 15-55 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 7,3 mg (rendimiento del 9 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 94 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,328 min; ESI-MS(+) m/z = 715,0 (M H) Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,298 min; ESI-MS (+) m/z = 715,0 (M H) RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 59,36 (s, 1H), 9,06-8,95 (m, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,16 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,79 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,58-7,50 (m, 2H), 7,41-7,33 (m, 2H), 7,28 (s, 1H), 7,17 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 7,09 (m, 2H), 5,38 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 5,34 (s, 2H), 4,25 (m, 1H), 3,92 (m, 1H), 3,40 (m, 2H), 3,33 (m, 1H), 3,26 (m, 2H), 2,94 (m, 2H), 2,89-2,81 (m, 1H), 2,32-2,24 (m, 4H), 2,08 (m, 1H), 1,65 (m, 4H), 1,47 (m, 1H).
Ejemplo 1031: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(3-(4-metilpiperazin-1-il)quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2 -carboxílico
Figure imgf000047_0002
El ejemplo 1031 se preparó a partir de 7-bromo-2-(4-metilpiperazin-1-il)quinoxalina de una manera similar a la del ejemplo 1027. El material en bruto se purificó por LC/MS preparativa usando las condiciones siguientes: Waters XBridge 5 ^m C18, 19 x 200 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con TFA al 0,1 % y la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con TFA al 0,1 % a un gradiente del 15-55 % de B durante 20 minutos con una parada de 5 minutos a un caudal de 20 ml/minuto. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue de 6,1 mg (rendimiento del 6 %) y su pureza estimada mediante análisis por LCMS fue del 93 %. Se usaron dos inyecciones de CL/EM analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Waters Acquity UPLC b Eh 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato amónico 10 mM a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm. Condiciones de la inyección 2: Waters Acquity UPLC BEH 1,7 ^m C18, 2,1 x 50 mm donde la fase móvil A fue 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; la fase móvil B fue 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 % a una temperatura de 50 °C a un gradiente del 0-100 % de B durante 3 minutos con una parada de 0,75 minutos al 100 % 'de B a un caudal de 1,0 ml/minuto a una longitud de onda de UV de 220 nm.
Condición de análisis 1: Tiempo de retención = 1,387 min; ESI-MS(+) m/z = 732,1 (M H)
Condición de análisis 2: Tiempo de retención = 1,434 min; ESI-MS(+) m/z = 732,1 (m h )
RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 59,02 (m, 2H), 8,93 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,96 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,58-7,52 (m, 3H), 7,43 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,27 (s a, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,16 (s a, 1H), 7,06 (s a, 1H), 5,39 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 5,35 (s, 2H), 4,82-4,61 (m, 1H), 4,28 (m, 3H), 4,04-3,86 (m, 2H), 3,34-3,24 (m, 5H), 2,86 (m, 5H), 2,28 (s, 3H), 2,18-2,05 (m, 2H), 1,67 (m, 3H), 1,49 (m, 1H).
Los ejemplos 2001-2018 se prepararon de la manera mostrada a modo de ejemplo por el ejemplo 2001 y análogos a aquellos descritos anteriormente.
Ejemplo 2001: 5-((4-doro-2-(((1,3-dihidroxipropan-2-il)(metil)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-((1S,4S)-5-metil-2,5-diazabicido[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000048_0001
Etapa 1: A una mezcla de dihidrobromuro de (1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano (300 mg, 1,154 mmol), 5-bromo-2-clorobenzo[d]oxazol (179 mg, 0,769 mmol) en DMF (4 ml) se le añadió base de Hunig (0,403 ml, 2,308 mmol). La solución de reacción se agitó durante 2 h y se diluyó con acetato de etilo, se lavó con salmuera, se concentró después de secar con MgSO4. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con 10-30% de MeOH en DCM para dar 60 mg de 2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-5-bromobenzo[d]oxazol en forma de un sólido. LC/m S (ESI) m/z 295,8 (M+1)+.
Etapa 2: Una mezcla de 5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo (0,088 g, 0,17 mmol), 2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-5-bromobenzo[d]oxazol (0,050 g, 0,170 mmol) y K3PO40,5 M (1,020 ml, 0.510 mmol) en THF ( 6 ml) y 1,4-dioxano (1,200 ml) se agitó en atmósfera de N2, burbujeando durante 15 min, después se trató con precatalizador XPhos de 2a generación (6,69 mg, 8,50 pmol). La mezcla se roció durante 10 min, después se agitó en atmósfera de nitrógeno durante 16 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con agua y salmuera, se secó (MgSO4) y se concentró. El aislado en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 80 mg del producto deseado 5-((5-((3-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo en forma de un sólido. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 pm; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100%; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 100%; Masa observada: 606,1; Tiempo de retención: 1,86 min.
Etapa 3: Una mezcla de 5-((5-((3-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-formilfenoxi)metil)nicotinonitrilo (18,18 mg, 0,03 mmol), 2-aminopropan-1,3-diol (10,93 mg, 0,120 mmol) y ácido acético (0,012 ml, 0,210 mmol) en DCE (2 ml) y EtOH (2 ml) y cianoborohidruro sódico (1 M en THF) (0,120 ml, 0,120 mmol) se agitó durante 16 h a ta. A la mezcla de reacción se le añadió 0,02 ml de solución de formaldehído al 37 % en agua, después se agitó durante 16 h. Después de eliminar los disolventes, el material en bruto se purificó por LC/EM preparativa con las condiciones siguientes: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 20-60 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue 7,0 mg y su pureza estimada mediante análisis CLEM fue del 89 %. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 pm; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 89,1 %; Masa observada: 709,09; Tiempo de retención: 1,64 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 90,3 %; Masa observada: 709,12; Tiempo de retención: 1,32 min.
Ejemplo 2002: Acido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-((1S,4S)-5-metil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000049_0001
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 15-55 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100%; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 733,05; Tiempo de retención: 1,51 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 97,0 %; Masa observada: 733,1; Tiempo de retención: 1,38 min.
Ejemplo 2003: 5-((5-((3-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-(((1,3-dihidroxipropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000049_0002
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 15-55 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 99,2 %; Masa observada: 681; Tiempo de retención: 1,3 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 681,06; Tiempo de retención: 1,43 min.
Ejemplo 2004: 5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)(metil)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-((1S,4S)-5-metil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000050_0001
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 20-60 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 95,0 %; Masa observada: 723,08; Tiempo de retención: 1,63 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 94,6 %; Masa observada: 723,12; Tiempo de retención: 1,35 min.
Ejemplo 2005: Ácido (S)-1-(4-((3-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000050_0002
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 10-50 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV ( 220 nm). Resultados de la inyección 1 : Pureza: 96,6 %; Masa observada: 719,02; Tiempo de retención: 1,38 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 719; Tiempo de retención: 1,39 min.
Ejemplo 2006: 5-((5-((3-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000051_0001
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 15-55 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El material se purificó de nuevo mediante LC/EM preparativa con las condiciones siguientes: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Gradiente: B al 10-50 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El material se purificó de nuevo mediante LC/EM preparativa con las condiciones siguientes: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de metanol:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de metanol:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 45-85 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 100,0%; Masa observada: 695,1; Tiempo de retención: 1,33 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 100,0%; Masa observada: 695,05; Tiempo de retención: 1,43 min.
Ejemplo 2007: Ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico
Figure imgf000051_0002
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 22-62 % durante 23 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 721,04; Tiempo de retención: 1,9 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 721,02; Tiempo de retención: 1,47 min.
Ejemplo 2008: 5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxipropan-2-il)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000052_0001
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 26-66 % durante 25 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 98,9 %; Masa observada: 683,01; Tiempo de retención: 1,95 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 99,2 %; Masa observada: 682,99; Tiempo de retención: 1,4 min.
Ejemplo 2009: 5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000052_0002
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Gradiente: B al 10-50 % durante 25 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 98,2 %; Masa observada: 697,03; Tiempo de retención: 1,95 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 97,8 %; Masa observada: 697,02; Tiempo de retención: 1,44 min.
Ejemplo 2010: (5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)-L-serina
Figure imgf000053_0001
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 15-55 % durante 22 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 93,0 %; Masa observada: 696,93; Tiempo de retención: 1,8 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 93,6 %; Masa observada: 696,98; Tiempo de retención: 1,41 min.
Ejemplo 2011: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000053_0002
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 20-60 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 98,6 %; Masa observada: 710,97; Tiempo de retención: 1,84 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 98,8 %; Masa observada: 710,98; Tiempo de retención: 1,44 min.
Ejemplo 2012: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)amino)pentanoico
Figure imgf000054_0001
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 22-62 % durante 22 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 709,05; Tiempo de retención: 1,91 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 709,01; Tiempo de retención: 1,53 min.
Ejemplo 2013: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)amino )-3-metilbutanoico
Figure imgf000054_0002
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 22-62 % durante 22 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 709,01; Tiempo de retención: 1,9 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 709; Tiempo de retención: 1,5 min.
Ejemplo 2014: 5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxipropan-2-il)(metil)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000055_0001
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 35-75 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV ( 220 nm).
Resultados de la inyección 1: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 697,01; Tiempo de retención: 2,11 min.
Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min al 100 % de B; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV ( 220 nm). Resultados de la inyección 2 : Pureza: 97,7 %; Masa observada: 696,98; Tiempo de retención: 1,46 min.
Ejemplo 2015: 5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)(metil)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo
Figure imgf000055_0002
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 35-75 % durante 19 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 99,2 %; Masa observada: 711,03; Tiempo de retención: 2,04 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 99,4 %; Masa observada: 711,03; Tiempo de retención: 1,49 min.
Ejemplo 2016: N-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)-N-metil-L-serina
Figure imgf000056_0001
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 20-60 % durante 22 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 96,4 %; Masa observada: 711,02; Tiempo de retención: 1,88 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 96,1 %; Masa observada: 710,97; Tiempo de retención: 1,45 min.
Ejemplo 2017: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)(metil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico
Figure imgf000056_0002
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 22-62 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 4 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV ( 220 nm). Resultados de la inyección 1 : Pureza: 100 , 0 %; Masa observada: 725,21; Tiempo de retención: 1,43 min. Condiciones de la inyección 2 : Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 100,0 %; Masa observada: 725,22; Tiempo de retención: 1,57 min.
Ejemplo 2018: Ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)(metil)amino)pentanoico
Figure imgf000057_0001
El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 25-65 % durante 20 minutos, a continuación una parada de 5 minutos al 100 % de B; Caudal: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. Se usó LC/MS analítica para determinar la pureza final. Condiciones de la inyección 1: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato amónico 10 mM; Fase móvil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato amónico 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 1: Pureza: 94,7 %; Masa observada: 723,25; Tiempo de retención: 1,68 min. Condiciones de la inyección 2: Columna: Waters XBridge C18, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 ^m; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: de B al 0 % a B al 100 % durante 3 min, después una parada de 0,75 min en B al 100 %; Caudal: 1 ml/min; Detección: MS y UV (220 nm). Resultados de la inyección 2: Pureza: 96,4 %; Masa observada: 723,23; Tiempo de retención: 1,52 min.
ENSAYO BIOLÓGICO
La capacidad de los compuestos de Fórmula (I) de unirse a PD-L1 se investigó usando un ensayo de unión de fluorescencia en tiempo resuelto homogéneo (HTRF) de PD-1/PD-L1.
Ensayo de unión de fluorescencia en tiempo resuelto homogéneo (HTRF).
La interacción de PD-1 y PD-L1 se puede evaluar usando preparaciones purificadas solubles de los dominios extracelulares de las dos proteínas. Los dominios extracelulares de la proteína PD-1 y PD-L1 se expresaron como proteínas de fusión con marcadores de detección, para PD-1, el marcador era la porción Fc de la inmunoglobulina (PD-1-Ig) y para PD-L1 era el motivo 6 histidina (PD-L1-His). Todos los estudios de unión se realizaron en un tampón de ensayo de HTRF que consistía en dPBS suplementado con albúmina de suero bovino al 0,1 % (con) y Tween-20 al 0,05 % (v/v). Para el ensayo de unión de h/PD-L1-His, los inhibidores se preincubaron con PD-L1-His (final 10 nM) durante 15 m en 4 ^l de tampón de ensayo, seguido de la adición de PD-1-Ig (final 20 nM) en 1 ^l de tampón de ensayo y una incubación adicional durante 15 m. La detección de HTRF se realizó usando anti-Ig marcado con cripato de europio (final 1 nM) y anti-His marcado con aloficocianina (APC) (final 20 nM). Los anticuerpos se diluyeron en tampón de detección de HTRF y se dispensaron 5 ^l por encima de la reacción de unión. La mezcla de reacción se dejó equilibrar durante 30 minutos y se obtuvo la señal resultante (relación 665 nm/620 nm) usando un fluorómetro EnVision. Se establecieron ensayos de unión adicionales entre las proteínas humanas PD-1-Ig/PD-L2-His (20 y 5 nM, respectivamente) y CD80-His/PD-L1-Ig (100 y 10 nM, respectivamente).
Proteínas recombinantes: El PD-1 humano (25-167) con un dominio Fc humano C-terminal de la etiqueta del epítopo de la inmunoglobulina G (Ig) [hPD-1 (25-167) -3S-iG] y el PD-L1 humano (18-239) con un marcador epitópica His C-terminal [hPD-L1 (18-239) -TVMV-His] se expresó en células HEK293T y se purificó secuencialmente mediante cromatografía de afinidad con Proteína y cromatografía de exclusión por tamaño. El PD-L2-His humano y el CD80-His se obtuvieron a través de fuentes comerciales.
Secuencia de PD-1-Ig humano recombinante
hPD1(25-167)-3S-IG
Lr,5PL?PWNÍ RTF? P / iL I iW TE5DHATFTC SF3IIIFEP EV LTIWYF MSFFII CID FIA /* F FE DFS CJZIC’D ~F FFVICLFIIAK DFHMFWFAF. p i i r c ÍTYIYG
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5 P E t f . í ijp.T HT5 F F 'fr APE LDGG^PVFDF tFKPKI'TL.V I SK T P E V T IT /
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FFEWGQGIIVF S C 5 VMKEALH I1H YT.'.FALFL 5 P GF
(SEQ ID NO: 1)
Secuencia de PD-L1-His humano recombinante
hPDL1(18-239)-TVMV-HÍs
: AFTvrm TL yweygfhmt ieckfpvefc lxxaaliyym EKsr-nruoF F Y'KGEEDLFYC HScTFQFAFX. T.FDCIFl 5FA AIOITDYKLC LAGVYFYMIS I - I YXFGADYFJ.IT YK'T.'APi’lIFI MCRZLYVEipy TCEHEIT'XOA EGYFEAEVr.í IPX TFEDHQVLSG KTTTTÍTCFP.E E KL FtTVTS TL FIN IT T K E IF YCTFPP.LBPE
X. Y FIÍHTAELV1P KLPIAHFY:E PTGSRETVEF ropHHHF.H
(SEQ ID NO: 2)
La tabla a continuación enumera los valores de CI50 para los ejemplos representativos de esta divulgación medidos en el ensayo de unión de fluorescencia en tiempo resuelto homogéneo (HTRF) de PD-1/PD-L1. Los intervalos son los siguientes: A = 0,18 nM - 0,99 nM; B = 1,0 nM - 5,0 nM; C= 5,01-10,1 nM; D = 10,2 - 200 nM; E = 201 nM->10 uM
Figure imgf000058_0004

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de fórmula (I):
    Figure imgf000063_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:
    m es 0 , 1 o 2 ;
    Z se selecciona entre -OCH3 y -O(CH2)nAr; en donde
    n es 1, 2, 3 o 4;
    Ar se selecciona entre fenilo y piridinilo, en donde cada anillo está opcionalmente sustituido con 1, 2, 3 o 4 sustituyentes seleccionados independientemente entre alcoxi C1-C4, alquilo C1-C4, amido, carboxi, ciano, formilo, halo, haloalquilo C1-C4, haloalcoxi C1-C4 y nitro;
    A se selecciona entre -CH2O-, -OCH2-, -(CH2)2-, -CH=CH-, -C(O)NH- y -NHC(O)-,
    en donde cada grupo se dibuja con su lado izquierdo unido a R2 y su lado derecho unido al anillo fenilo;
    R2 se selecciona de
    Figure imgf000063_0002
    en las que
    Rm y Rn se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C1-C3 y halo;
    Y se selecciona entre hidrógeno, alcoxi C1-C3, alquilo C1-C3 , ciano y halo;
    R5 es un anillo monocíclico o bicíclico de tres a diez miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno y oxígeno y que contiene cero, uno, dos o tres dobles enlaces, en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre alcoxi C1-C3, alcoxi C1-C3alquilo C1-C4, alcoxicarbonilo C1-C4, alquilo C1-C4, dialquilamino (C1-C4), amino, aminoalquilo C1-C4, carboxi, carboxialquilo C1-C4, cicloalquilo C3-C4 y fenilo;
    cada R3 se selecciona independientemente entre alquilo C1-C4, ciano, halo y haloalquilo C1-C4;
    R4 se selecciona entre -CH2OH, -CHO y -(CH2)nNRqR8; en donde
    n es 1, 2, 3 o 4;
    Rq se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4;
    R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-C4, -(CH2)nN(CH3)2,
    Figure imgf000063_0003
    R9 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1 ;
    cada R9' se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C1-C3 y
    R10 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4 o
    R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo que es
    Figure imgf000063_0004
    en el que
    s es 0 , 1 o 2 ;
    z es 1,2 o 3 y
    cada R14 se selecciona independientemente entre alcoxicarbonilo Ci-C4, alquilo Ci-C6, carboxi, halo, hidroxi e hidroxialquilo C1-C4.
    2. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde m es 1 y R3 es halo.
    3. Un compuesto de la reivindicación 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Z es -OCH2Ar en donde Ar es piridinilo sustituido con un grupo ciano.
    4. Un compuesto de la reivindicación 3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde A es -CH2O-.
    5. Un compuesto de la reivindicación 4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde
    R2 es
    Figure imgf000064_0001
    Rn se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1 y
    R5 es un anillo monocíclico o bicíclico de seis a ocho miembros que contiene un átomo de nitrógeno y cero dobles enlaces, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre alquilo C1 , dialquilamino (C1-C4), amino, carboxialquilo C1-C4 y cicloalquilo C3-C4.
    6. Un compuesto de la reivindicación 5 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R4 es -(CH2)NRqR8; en donde
    Rq se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1;
    R8 se selecciona de
    Figure imgf000064_0002
    R9 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1;
    cada R9' se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C1 y
    R10 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4 o
    R8 y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo que es
    Figure imgf000064_0003
    en el que
    s es 1 ;
    z es 3 y
    R14 es carboxi.
    7. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde m es 1;
    Z es -O(CH2)nAr;
    n es 1 ;
    Ar es piridinilo sustituido con un grupo ciano;
    A es -CH2O;
    R2 se selecciona de
    Figure imgf000065_0001
    en las que
    Rm y Rn se seleccionan independientemente entre hidrógeno y alquilo C1-C3;
    Y se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C3;
    R5 es un anillo monocíclico o bicíclico de cinco a ocho miembros que opcionalmente contiene uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno y oxígeno y que contiene cero, uno, dos o tres dobles enlaces, en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado entre alquilo C1-C4, dialquilamino (C1-C4), amino, carboxialquilo C1-C4 y cicloalquilo C3-C4;
    R3 es halo;
    R4 se selecciona entre -CH2OH, -CHO y -(CH2)nNRqR8; en donde
    n es 1;
    Rq se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4;
    R8 se selecciona de
    Figure imgf000065_0002
    R9 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1;
    cada R9' se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C1-C3 y
    R10 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-C4 o
    R8 *y Rq, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo que es
    Figure imgf000065_0003
    en el que
    s es 1;
    z es 13 y
    R14 es carboxi.
    8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 que se selecciona entre
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d] oxazol-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (2S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(piperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(1-ciclopropilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (2S)-1-(4-((3-(2-(8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(piridin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (2S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-metilpirrolidin-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(7-metil-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(4-metil-2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5 il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopindin-3-il)iTietoxi)-4-((2-iTietil-3-(2-(4-iTietilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-doro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(4-(dietilamino)cidohexil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(1-isopropilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (2S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(8-metil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(4-((3-(2-(3-aminobiciclo[1.1.1]pentan-1 -il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(4-((3-(2-(1-(carboximetil)piperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)benzo [d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (2S)-1-(4-((3-(2-(8-oxabiciclo[3.2.1]octan-3-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    5-((4-cloro-2-formil-5-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo; ácido (R)-2-((5-cloro-2-((5-cianopindin-3-il)iTietoxi)-4-((2-iTietil-3-(2-(1-iTietilpiperidin-4-il)benzo[d] oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
    5-((4-cloro-2-(hidroximetil)-5-((2-metil-3-(2-(1-metilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
    5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxipropan-2-il)(metil)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-((1S,4S)-5-metil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-((1S,4S)-5-metil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    5-((5-((3-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxiM-cloro-2-(((1,3-dihidroxipropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
    5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)(metil)amino)metil)-5-((2-methy1-3-(2-((1S,4S)-5-metil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
    ácido (S)-1-(4-((3-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-iTietilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    5-((5-((3-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-4-cloro-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxipropan-2-il)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
    5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
    (5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)-L-serina;
    ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)amino )-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
    ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)amino)pentanoico;
    ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)amino)-3-metilbutanoico;
    5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxipropan-2-il)(metil)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
    5-((4-cloro-2-(((1,3-dihidroxi-2-metilpropan-2-il)(metil)amino)metil)-5-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)fenoxi)metil)nicotinonitrilo;
    N-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)-N-metil-L-serina;
    ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)(metil)amino)-3-hidroxi-2-metilpropanoico;
    ácido (S)-2-((5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)(metil)amino)pentanoico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(2-(1-fenilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-metoxi-4-((2-metil-3-(2-(1-fenilpiperidin-4-il)benzo[d]oxazol-5-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((3-(2-(4-(metoxicarbonil)ciclohexil) benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(4-((3-(2-(4-carboxiciclohexil)benzo[d]oxazol-5-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-doro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(3-(1,2,5,6-tetra-hidropiridin-3-il)quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (2S)-1-(4-((3-(3-(8-(terc-butoxicarbonil)biciclo[3.2.1]oct-2-en-3-il)quinoxalin-6-il)-2-metilbencil)oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (2S)-1-(4-((3-(3-(8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-il)quinoxalin-6-il)-2-metilbencil)-oxi)-5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)bencil)piperidin-2-carboxílico;
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(3-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico y
    ácido (S)-1-(5-cloro-2-((5-cianopiridin-3-il)metoxi)-4-((2-metil-3-(3-(4-metilpiperazin-1-il)quinoxalin-6-il)bencil)oxi)bencil)piperidin-2-carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
    9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
    10. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso como un medicamento.
    11. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal terapéuticamente aceptable del mismo para uso para mejorar, estimular y/o incrementar una respuesta inmunitaria en un sujeto que lo necesita.
    12. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal terapéuticamente aceptable del mismo para su uso para inhibir el crecimiento, la proliferación o la metástasis de células cancerosas en un sujeto que lo necesita.
    13. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal terapéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de una enfermedad infecciosa en un sujeto que lo necesita.
    14. El compuesto de la reivindicación 1 o una sal terapéuticamente aceptable del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 13 en donde la enfermedad infecciosa está causada por un virus.
    15. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal terapéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de choque séptico en un sujeto que lo necesita.
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