KR102491992B1 - 면역조정제로서 유용한 1,3-디히드록시-페닐 유도체 - Google Patents

면역조정제로서 유용한 1,3-디히드록시-페닐 유도체 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 일반적으로 면역조정제로서 유용한, R2가 페닐 또는 피리미딜 모이어티인 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다. 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 조성물 및 그의 사용 방법이 본원에 제공된다. 개시내용은 추가로 암 및 감염성 질환을 포함한 다양한 질환의 치료에 유용한, 개시내용에 따른 적어도 1종의 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

Description

면역조정제로서 유용한 1,3-디히드록시-페닐 유도체
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2016년 7월 8일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/359,971을 우선권 주장하며, 이는 본원에 참조로 포함된다.
본 개시내용은 일반적으로 PD-1/PD-L1 단백질/단백질 및 CD80/PD-L1 단백질/단백질 상호작용의 억제제로서 유용한 화합물에 관한 것이다. 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 조성물 및 그의 사용 방법이 본원에 제공된다. 개시내용은 추가로 암 및 감염성 질환을 포함한 다양한 질환의 치료에 유용한, 개시내용에 따른 적어도 1종의 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
프로그램화된 사멸-1 (CD279)은 T 세포 상의 수용체이며, 이는 그의 리간드인 프로그램화된 사멸-리간드 1 (PD-L1, CD274, B7-H1) 또는 PD-L2 (CD273, B7-DC)가 결합하는 경우에 T 세포 수용체로부터 활성화 신호를 억제하는 것으로 밝혀졌다 (Sharpe et al., Nat. Imm. 2007). PD-1 발현 T 세포가 그의 리간드를 발현하는 세포와 접촉하면, 증식, 시토카인 분비, 및 세포용해 활성을 포함한, 항원 자극에 반응한 기능적 활성이 감소된다. PD-1/PD-리간드 상호작용은 감염 또는 종양의 해소 동안 또는 자기 내성의 발생 동안 면역 반응을 하향 조절한다 (Keir Me, Butte MJ, Freeman GJ, et al. PD-1 and its ligands in tolerance and immunity. Annu. Rev. Immunol. 2008; 26: Epub). 종양 질환 또는 만성 감염 동안 발생하는 것과 같은 만성 항원 자극은, 상승된 수준의 PD-1을 발현하고 만성 항원에 대한 활성에 관하여 기능이상인 T 세포를 발생시킨다 (문헌 [Kim and Ahmed, Curr Opin Imm, 2010]에서 검토됨). 이는 "T 세포 소진"으로 불린다. B 세포도 또한 PD-1/PD-리간드 억제 및 "소진"을 나타낸다.
PD-L1은 또한 CD80과 상호작용하는 것으로 밝혀졌다 (Butte MJ et al., Immunity ;27:111-122 (2007)). 발현 면역 세포 상에서의 PD-L1/CD80 상호작용은 억제성인 것으로 밝혀졌다. 이러한 상호작용의 차단은 이러한 억제 상호작용을 제거하는 것으로 밝혀졌다 (Paterson AM, et al., J Immunol., 187:1097-1105 (2011); Yang J, et al. J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)).
PD-L1에 대한 항체를 사용한 PD-1/PD-L1 상호작용의 차단은 많은 시스템에서 T 세포 활성화를 회복 및 증대시키는 것으로 밝혀졌다. 진행성 암을 갖는 환자는 PD-L1에 대한 모노클로날 항체를 사용한 요법으로부터 이익을 얻는다 (Brahmer et al., New Engl J Med 2012). 종양의 전임상 동물 모델은 모노클로날 항체에 의한 PD-1/PD-L1 경로의 차단이 면역 반응을 증진시키고 다수의 조직학적으로 별개의 종양에 대한 면역 반응을 생성할 수 있다는 것을 밝혀냈다 (Dong H, Chen L. B7-H1 pathway and its role in the Evasion of tumor immunity. J Mol Med. 2003; 81(5):281-287; Dong H, Strome SE, Salamoa DR, et al. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion. Nat Med. 2002; 8(8):793-800).
PD-1/PD-L1 상호작용에 대한 간섭은 또한 만성 감염 시스템에서 증진된 T 세포 활성을 보여주었다. 마우스의 만성 림프구성 맥락수막염 바이러스 감염은 또한 PD-L1의 차단에 의해 개선된 바이러스 클리어런스 및 회복된 면역을 나타낸다 (Barber DL, Wherry EJ, Masopust D, et al. Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection. Nature. 2006; 439(7077):682-687). HIV-1에 감염된 인간화 마우스는 CD4+ T 세포의 바이러스혈증에 대한 증진된 보호 및 감소된 바이러스 고갈을 보여준다 (Palmer et al., J. Immunol 2013). PD-L1에 대한 모노클로날 항체를 통한 PD-1/PD-L1의 차단은 HIV 환자 (Day, Nature 2006; Petrovas, J. Exp. Med. 2006; Trautman, Nature Med. 2006; D'Souza, J.Immunol. 2007; Zhang, Blood 2007; Kaufmann, Nature Imm. 2007; Kasu, J. Immunol. 2010; Porichis, Blood 2011), HCV 환자 (Golden-Mason, J. Virol. 2007; Jeung, J. Leuk. Biol. 2007; Urbani, J. Hepatol. 2008; Nakamoto, PLoS Path. 2009; Nakamoto, Gastroenterology 2008) 또는 HBV 환자 (Boni,J. Virol. 2007; Fisicaro, Gastro. 2010; Fisicaro et al., Gastroenterology, 2012; Boni et al., Gastro., 2012; Penna et al., JHep, 2012; Raziorrough, Hepatology 2009; Liang, World J Gastro. 2010; Zhang, Gastro. 2008)로부터의 T 세포에 대한 시험관내 항원-특이적 기능을 회복시킬 수 있다.
PD-L1/CD80 상호작용의 차단은 또한 면역을 자극하는 것으로 밝혀졌다 (Yang J., et al., J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)). PD-L1/CD80 상호작용의 차단으로부터 발생한 면역 자극은 추가의 PD-1/PD-L1 또는 PD-1/PD-L2 상호작용의 차단과의 조합을 통해 증진되는 것으로 밝혀졌다.
면역 세포 표현형에서의 변경은 패혈성 쇼크에서 중요한 인자인 것으로 가설화된다 (Hotchkiss, et al., Nat Rev Immunol (2013)). 이는 증가된 수준의 PD-1 및 PD-L1 및 T 세포 아폽토시스를 포함한다 (Guignant, et al., Crit. Care (2011)). PD-L1에 대해 지시된 항체는 면역 세포 아폽토시스의 수준을 감소시킬 수 있다 (Zhang et al., Crit. Care (2011)). 게다가, PD-1 발현 결핍 마우스는 야생형 마우스보다 패혈성 쇼크 증상에 대해 보다 내성이 있다 (Yang J., et al.. J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)). 연구는 항체를 사용한 PD-L1의 상호작용의 차단이 부적절한 면역 반응을 억제할 수 있고, 질환 증상을 호전시킬 수 있다는 것을 밝혀내었다.
만성 항원에 대한 면역 반응을 증진시키는 것 외에도, PD-1/PD-L1 경로의 차단은 또한 만성 감염과 관련된 치료 백신접종을 포함한, 백신접종에 대한 반응을 증진시키는 것으로 밝혀졌다 (S. J. Ha, S. N. Mueller, E. J. Wherry et al., "Enhancing therapeutic vaccination by blocking PD-1-mediated inhibitory signals during chronic infection," The Journal of Experimental Medicine, vol. 205, no. 3, pp. 543-555, 2008.; A. C. Finnefrock, A. Tang, F. Li et al., "PD-1 blockade in rhesus macaques: impact on chronic infection and prophylactic vaccination," The Journal of Immunology, vol. 182, no. 2, pp.980-987, 2009; M.-Y. Song, S.-H. Park, H. J. Nam, D. -H. Choi, and Y.-C. Sung, "Enhancement of vaccine-induced primary and memory CD8+ t-cell responses by soluble PD-1," The Journal of Immunotherapy, vol. 34, no. 3, pp. 297-306, 2011).
PD-1 경로는 만성 감염 및 종양 질환 동안 만성 항원 자극으로부터 발생하는 T 세포 소진에서의 주요 억제 분자이다. PD-L1 단백질의 표적화를 통한 PD-1/PD-L1 상호작용의 차단은 종양 또는 만성 감염의 상황에서 백신접종에 대한 증진된 반응을 포함한, 시험관내 및 생체내 항원-특이적 T 세포 면역 기능을 회복시키는 것으로 밝혀졌다.
따라서, PD-L1과 PD-1 또는 CD80의 상호작용을 차단하는 작용제가 바람직하다.
출원인들은 PD-L1과 PD-1 및 CD80의 상호작용의 억제제로서 활성을 갖고, 이에 따라 치료 백신을 포함한, 암 또는 감염에서 면역을 증진시키기 위한 치료적 투여에 유용할 수 있는 강력한 화합물을 발견하였다. 이들 화합물은 그의 약물성에 중요한 바람직한 안정성, 생체이용률, 치료 지수, 및 독성 값을 갖는 제약으로서 유용한 것으로 제공된다.
본 개시내용은 또한 화학식 (I)의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 다른 단백질, 예컨대 PD-1 및 B7-1(CD80)과의 상호작용을 포함한 PD-L1의 활성과 연관된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 화학식 (I)의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 다른 단백질, 예컨대 PD-1 및 B7-1(CD80)과의 상호작용을 포함한 PD-L1의 활성과 연관된 질환 또는 장애의 치료 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 화학식 (I)의 화합물 및/또는 그의 염을 제조하기 위한 방법 및 중간체를 제공한다.
본 개시내용은 또한 요법에 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 개시내용은 또한 PD-L1 관련 상태, 예컨대 암 및 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다.
화학식 (I)의 화합물, 및 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 조성물은 다양한 감염성 질환 및 암을 치료, 예방 또는 치유하는 데 사용될 수 있다. 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물은 다양한 치료 영역에서의 질환 또는 장애, 예컨대 암 및 감염성 질환의 진행을 치료, 예방 또는 지연시키는 데 유용하다.
본 개시내용의 이들 및 다른 특색은 개시내용이 계속됨에 따라 확장된 형태로 제시될 것이다.
제1 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure 112019012812334-pct00001
상기 식에서,
m은 0, 1, 또는 2이고;
R1은 수소, 할로C1-C4알킬, 히드록시C1-C4알킬, -(CH2)nX, 및 -(CH2)nAr로부터 선택되고; 여기서
n은 1, 2, 3, 또는 4이고;
X는 수소, -CH3, -CF3, C1-C4알콕시, -N(CH3)2, C3-C6시클로알킬, CN, -CO2Rg, -C(O)NH2,
Figure 112019012812334-pct00002
, 모르폴리닐, 테트라히드로피라닐, 히드록시 기로 임의로 치환된 피롤리도닐, 및 C1-C4알킬, 카르복시, 히드록시, 및 C1-C4알콕시카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 기로 임의로 치환된 피페리디닐로부터 선택되고; 여기서 Rg는 수소 및 C1-C4알킬로부터 선택되고;
Ar은 벤조디옥사닐, 인다졸릴, 이소퀴놀리닐, 이속사졸릴, 나프틸, 옥사디아졸릴, 페닐, 피리디닐, 피리미디닐, 및 퀴놀리닐로부터 선택되고; 여기서 각각의 고리는 C1-C4알콕시, C1-C4알콕시카르보닐, C1-C4알콕시카르보닐아미노, C1-C4알킬, C1-C4알킬카르보닐, C1-C4알킬술포닐, 아미도, 아미도C1-C4알킬, -(CH2)qCO2C1-C4알킬, -(CH2)qOH, 카르복시, 시아노, 포르밀, 할로, 할로C1-C4알킬, 할로C1-C4알콕시, 니트로, 1개의 시아노 기로 임의로 치환된 페닐, 1개의 할로 기로 임의로 치환된 페닐옥시, 페닐카르보닐, 피롤, 및 테트라히드로피란으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4개의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 q는 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
R2는
Figure 112019012812334-pct00003
로부터 선택되고; 여기서
Rn은 수소, C1-C3알킬, 할로, 및 할로C1-C3알킬로부터 선택되고;
Y는 수소, C1-C3알콕시, C1-C3알킬, 시아노, 및 할로로부터 선택되고;
R5는 페닐 또는 5 내지 10개의 원자를 함유하는 모노시클릭 또는 비시클릭 불포화 헤테로사이클이고, 여기서 이들 원자 중 1 내지 4개는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택되고; 여기서 페닐 및 모노시클릭 또는 비시클릭 기는 C1-C3알킬, 시아노, 포르밀, 할로, 할로C1-C3알콕시, 할로C1-C3알킬, 히드록시, 옥소, -L-(CH2)m'NRcRd, -L-(CH2)m'OH,
Figure 112019012812334-pct00004
로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 치환기로 임의로 치환되고; 여기서
L은 결합, -CH2-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, 및 -O-로부터 선택되고; 단 L은 그것이 헤테로사이클 내 질소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 경우에 -CH2-이고;
m'는 1, 2, 3, 또는 4이고; 단 m'가 1인 경우에, L은 탄소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되는 결합이고;
t는 0, 1, 2, 또는 3이고;
z는 1, 2, 또는 3이고;
각각의 Rz는 독립적으로 C1-C4알콕시, C1-C4알콕시카르보닐, C1-C4알콕시카르보닐C1-C4알킬, C1-C4알킬, C1-C4알킬아미도, C1-C4알킬아미노, C1-C4알킬카르보닐, 아미도, 카르복시, 카르복시C1-C4알킬, 시아노, 디(C1-C4알킬)아미도, 디(C1-C4알킬)아미노, 할로, 할로C1-C4알콕시, 할로C1-C4알킬, 히드록시, 히드록시C1-C4알킬, -NRcRd, (NRcRd)C1-C4알킬, -NReRf, (NReRf)C1-C4알킬, 페닐, 및 페닐C1-C4알킬로부터 선택되고; 여기서 Re 및 Rf는 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 모르폴린 및
Figure 112019012812334-pct00005
로부터 선택된 고리를 형성하고;
Rc 및 Rd는 독립적으로 수소, C2-C4알케닐카르보닐, C1-C4알콕시카르보닐, C1-C6알킬, C1-C4알킬카르보닐, 아미도C1-C4알킬, 아미노C1-C4알킬, 아릴C1-C4알킬, C3-C10시클로알킬, (C3-C10시클로알킬)C1-C4알킬, 할로C1-C4알킬카르보닐, 헤테로아릴C1-C4알킬, 및 히드록시C1-C4알킬로부터 선택되고; 여기서 아미도C1-C4알킬, 아미노C1-C4알킬, 아릴C1-C4알킬, (C3-C10시클로알킬)C1-C4알킬, 및 헤테로아릴C1-C4알킬의 알킬 부분은 카르복시 및 히드록시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 기로 임의로 치환되고; 여기서 히드록시C1-C4알킬의 알킬 부분은 카르복시 및 히드록시로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 기로 임의로 치환되고; 여기서 아릴C1-C4알킬의 아릴 부분, C3-C10시클로알킬, (C3-C10시클로알킬)C1-C4알킬의 시클로알킬 부분, 및 헤테로아릴C1-C4알킬의 헤테로아릴 부분은 C1-C4알콕시카르보닐, C1-C4알킬, 및 할로로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 또는 3개의 기로 각각 임의로 치환되고;
Q는 S, O, 및 -NRp로부터 선택되고; 여기서 Rp는 수소, C1-C4알킬, C1-C4알킬아미도C1-C4알킬, C1-C4알킬아미노C1-C4알킬, 아미도C1-C4알킬, 아미노C1-C4알킬, 디(C1-C4알킬)아미도C1-C4알킬, 디(C1-C4알킬)아미노C1-C3알킬, 히드록시C1-C4알킬, 피리디닐, 및 메톡시로 임의로 치환된 페닐로부터 선택되고; 단 R2가
Figure 112019012812334-pct00006
인 경우에, R5는 페닐 이외의 것이고;
R6은 수소이거나, 또는, R5 및 R6은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 질소, 산소, 및 황으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 불포화 고리를 형성하고; 여기서 고리는 C1-C3알킬, 시아노, 포르밀, 할로, 할로C1-C3알킬, 히드록시, 옥소, -L-(CH2)nNRcRd, -L-(CH2)nOH로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환되고;
각각의 R3은 독립적으로 C2-C4알케닐, C1-C4알콕시, C1-C4알킬, 시아노, 할로, 및 할로C1-C4알킬로부터 선택되고;
R4는 -(CH2)pCHO, -(CH2)n'OH, 및 -(CH2)n'NRqR8로부터 선택되고, 여기서
p는 0, 1, 2, 또는 3이고;
n'는 1, 2, 3, 또는 4이고;
Rq는 수소, C1-C4알킬, 및 벤질로부터 선택되고;
R8은
Figure 112019012812334-pct00007
로부터 선택되고; 여기서
s는 0, 1, 또는 2이고;
z는 1, 2, 또는 3이고;
Rj는 C1-C3알킬, C1-C3알킬술포닐C1-C3알킬, C1-C3알킬술폭실C1-C3알킬, 및 C1-C3알킬술파닐C1-C3알킬로부터 선택되고;
Rw는 -CO2H 또는 -CONH2이고,
R9는 수소, 벤질, 및 메틸로부터 선택되고;
각각의 R9'는 독립적으로 수소, 에틸, 및 메틸로부터 선택되고;
R10은 수소, C1-C3알킬, 및 벤질로부터 선택되고;
R11은 C2-C4알케닐 및 C1-C4알킬로부터 선택되거나;
또는
R8 및 Rq는 이들이 부착되어 있는 질소 원자와 함께
Figure 112019012812334-pct00008
로부터 선택된 고리를 형성하고; 여기서
s는 0, 1, 또는 2이고;
z는 1, 2, 또는 3이고;
Q'는 CHR13', S, O, -N(CH2)2OH, 및 NCH3으로부터 선택되고;
R12는 수소, -CO2H, 히드록시C1-C4알킬, 및 -C(O)NHSO2R16으로부터 선택되고; 여기서 R16은 트리플루오로메틸, 시클로프로필, C1-C4알킬, 디메틸아미노, 4-메틸피페라지닐, 및 메틸 기로 치환된 이미다졸릴로부터 선택되고;
R13은 수소, 히드록시C1-C4알킬, 및 -CO2H로부터 선택되고;
R13'는 수소, 히드록시C1-C3알킬, 및 -CO2H로부터 선택되고;
R14는 C1-C4알콕시카르보닐, C1-C3알킬, 카르복시, 할로, 히드록시, 히드록시C1-C4알킬, 및 -NRc'Rd'로부터 선택되고; 여기서 Rc' 및 Rd'는 독립적으로 수소, C1-C4알콕시카르보닐, 및 C1-C4알킬카르보닐로부터 선택된다.
제1 측면의 제1 실시양태에서, 본 개시내용은 R1은 -(CH2)nAr이고, 여기서 n은 1이고, Ar이 시아노로 임의로 치환된 피리디닐인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
제1 측면의 제2 실시양태에서, 본 개시내용은 R1은 -(CH2)nAr이고, 여기서 n은 1이고, Ar이 시아노로 임의로 치환된 피리디닐이고; m은 1이고; R3은 할로인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
제3 실시양태에서, 본 개시내용은 R1은 -(CH2)nAr이고, 여기서 n은 1이고, Ar은 시아노로 임의로 치환된 피리디닐이고; m은 1이고; R3은 할로이고, R2는
Figure 112019012812334-pct00009
로부터 선택된, 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
상기 식에서,
Rn은 수소이고;
Y는 메틸이고;
R5는 페닐 또는 5 내지 10개의 원자를 함유하는 모노시클릭 또는 비시클릭 불포화 헤테로사이클이고, 여기서 이들 원자 중 1 내지 4개는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택되고; 여기서 페닐 및 모노시클릭 또는 비시클릭 기는 C1-C3알킬, 시아노, 포르밀, 할로, 할로C1-C3알콕시, 할로C1-C3알킬, 히드록시, 옥소, -L-(CH2)m'NRcRd, -L-(CH2)m'OH,
Figure 112019012812334-pct00010
로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 또는 3개의 치환기로 임의로 치환되고;
여기서 L은 결합, -CH2-, 및 -O-로부터 선택되고;
m'는 1, 2, 3, 또는 4이고; 단 m'가 1인 경우에, L은 탄소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되는 결합이고;
t는 0 또는 1이고;
z는 2 또는 3이고;
Rz는 히드록시이고;
Rc 및 Rd는 각각 메틸이고;
R6은 수소이다.
제1 측면의 제4 실시양태에서, 본 개시내용은 R1은 -(CH2)nAr이고, 여기서 n은 1이고, Ar은 시아노로 임의로 치환된 피리디닐이고; m은 1이고; R3은 할로이고; R4는 -(CH2)pCHO, -(CH2)n'OH, 및 -(CH2)n'NRqR8로부터 선택된, 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
상기 식에서,
p는 0이고;
n'는 1이고;
Rq는 수소이고;
R8은
Figure 112019012812334-pct00011
로부터 선택되고; 여기서
s는 1이고;
z는 2이고;
R9는 수소, 벤질, 및 메틸로부터 선택되고;
각각의 R9'는 독립적으로 수소, 에틸, 및 메틸로부터 선택되고;
R10은 수소, C1-C3알킬, 및 벤질로부터 선택되거나; 또는
R8 및 Rq는 이들이 부착되어 있는 질소 원자와 함께
Figure 112019012812334-pct00012
인 고리를 형성하고; 여기서
s는 0, 1, 또는 2이고;
z는 1, 2, 또는 3이고;
R14는 C1-C4알콕시카르보닐, C1-C3알킬, 카르복시, 및 히드록시로부터 선택된다.
제2 측면에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure 112019012812334-pct00013
상기 식에서,
m은 1이고;
R1은 -(CH2)nAr이고; 여기서
n은 1이고,
Ar은 시아노로 임의로 치환된 피리디닐이고;
R2는
Figure 112019012812334-pct00014
로부터 선택되고, 여기서
Rn은 수소이고;
Y는 C1-C3알킬이고;
R5는 페닐 또는 5 내지 10개의 원자를 함유하는 모노시클릭 또는 비시클릭 불포화 헤테로사이클이고, 여기서 이들 원자 중 1 내지 4개는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택되고; 여기서 페닐 및 모노시클릭 또는 비시클릭 기는 C1-C3알킬, 시아노, 포르밀, 할로, 할로C1-C3알콕시, 할로C1-C3알킬, 히드록시, 옥소, -L-(CH2)m'NRcRd, -L-(CH2)m'OH,
Figure 112019012812334-pct00015
로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서
L은 결합, -CH2-, 및 -O-로부터 선택되고; 단 L은 그것이 헤테로사이클 내 질소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되어 있는 경우에 -CH2-이고;
m'는 1, 2, 3, 또는 4이고; 단 m'가 1인 경우에, L은 탄소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되는 결합이고;
t는 0, 1, 2, 또는 3이고;
z는 1, 2, 또는 3이고;
Rz는 히드록시이고;
Rc 및 Rd는 C1-C6알킬이고; 단 R2가
Figure 112019012812334-pct00016
인 경우에, R5는 페닐 이외의 것이고;
R6은 수소이고,
R3은 할로이고;
R4는 -(CH2)pCHO, -(CH2)n'OH, 및 -(CH2)n'NRqR8로부터 선택되고, 여기서
p는 0이고;
n'는 1이고;
Rq는 수소이고;
R8은
Figure 112019012812334-pct00017
로부터 선택되고; 여기서
s는 1이고;
z는 2이고;
R9는 수소, 벤질, 및 메틸로부터 선택되고;
각각의 R9'는 독립적으로 수소, 에틸, 및 메틸로부터 선택되고;
R10은 수소, C1-C3알킬, 및 벤질로부터 선택되거나;
또는
R8 및 Rq는 이들이 부착되어 있는 질소 원자와 함께
Figure 112019012812334-pct00018
인 고리를 형성하고; 여기서
s는 1 또는 2이고;
z는 2 또는 3이고;
R14는 C1-C4알콕시카르보닐, C1-C3알킬, 카르복시, 할로, 및 히드록시로부터 선택된다.
제3 측면에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
제4 측면에서, 본 개시내용은 면역 반응의 증진, 자극, 조정 및/또는 증가를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 면역 반응을 증진, 자극, 조정 및/또는 증가시키는 방법을 제공한다. 제4 측면의 제1 실시양태에서, 방법은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 전, 그 후, 또는 그와 동시에 추가의 작용제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 제4 측면의 제2 실시양태에서, 추가의 작용제는 항미생물제, 항바이러스제, 유전자 발현을 조정하는 작용제, 세포독성제 및/또는 면역 반응 조절제이다.
제5 측면에서, 본 개시내용은 암 세포의 성장, 증식 또는 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암 세포의 성장, 증식 또는 전이를 억제하는 방법을 제공한다. 제5 측면의 제1 실시양태에서, 암은 흑색종, 신세포 암종, 편평 비소세포 폐암 (NSCLC), 비-편평 NSCLC, 결장직장암, 거세-저항성 전립선암, 난소암, 위암, 간세포성 암종, 췌장 암종, 두경부의 편평 세포 암종, 식도, 위장관 및 유방 암종, 및 혈액 악성종양으로부터 선택된다.
제6 측면에서, 본 개시내용은 감염성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 감염성 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 제6 측면의 제1 실시양태에서, 감염성 질환은 바이러스에 의해 유발된다. 제6 측면의 제2 실시양태에서, 바이러스는 HIV, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, 포진 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자로부터 선택된다.
제7 측면에서, 본 개시내용은 패혈성 쇼크의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 패혈성 쇼크를 치료하는 방법을 제공한다.
제8 측면에서, 본 개시내용은 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 PD-L1과 PD-1 및/또는 CD80의 상호작용을 차단하는 방법을 제공한다.
본 개시내용의 특색 및 이점은 하기 상세한 설명을 읽음으로써 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 보다 용이하게 이해될 수 있다. 명확성을 위해 별개의 실시양태와 관련하여 상기 및 하기에 기재된 본 개시내용의 특정 특색이 또한 조합되어 단일 실시양태를 형성할 수 있음이 인지되어야 한다. 반대로, 간결성을 위해 단일 실시양태와 관련하여 기재된 본 개시내용의 다양한 특색이 또한 조합되어 그의 하위-조합을 형성할 수 있다. 본원에서 예시적이거나 바람직한 것으로서 확인되는 실시양태는 예시인 것으로 의도되고, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본원에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 단수에 대한 언급은 복수를 또한 포함할 수 있다. 예를 들어, 단수형은 하나, 또는 하나 이상을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 어구 "화합물(들) 또는 그의 제약상 허용되는 염"은 적어도 1종의 화합물, 화합물의 적어도 1종의 염, 또는 그의 조합을 지칭한다. 예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 화학식 (I)의 화합물; 화학식 (I)의 2종의 화합물; 화학식 (I)의 화합물의 염; 화학식 (I)의 화합물 및 화학식 (I)의 화합물의 1종 이상의 염; 및 화학식 (I)의 화합물의 2종 이상의 염을 포함한다.
달리 나타내지 않는 한, 충족되지 않은 원자가를 갖는 임의의 원자는 원자가를 충족시키기에 충분한 수소 원자를 갖는 것으로 가정된다.
명세서 전반에 걸쳐, 기 및 그의 치환기는 안정한 모이어티 및 화합물을 제공하도록 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다.
본 개시내용을 기재하는 데 사용된 다양한 용어의 정의가 하기 열거된다. 이들 정의는 이들이 명세서 전반에 걸쳐 (이들이 구체적 경우에 달리 제한되지 않는 한) 개별적으로 또는 보다 큰 군의 일부로서 사용되는 바와 같은 용어에 적용된다. 본원에 기재된 정의는 본원에 참조로 포함된 임의의 특허, 특허 출원 및/또는 특허 출원 공개공보에 기재된 정의보다 우선한다.
본원에 사용된 용어 "C2-C4알케닐"은 1 내지 4개의 탄소 원자 및 1 또는 2개의 이중 결합을 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소로부터 유도된 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C2-C4알케닐카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C2-C4알케닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알콕시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C4알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알콕시카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C4알콕시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알콕시카르보닐C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C4알콕시카르보닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알콕시카르보닐아미노"는 -NH 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C4알콕시카르보닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C3알킬"은 1 내지 3개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소로부터 유도된 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소로부터 유도된 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C6알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소로부터 유도된 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알킬아미도"는 R이 C1-C4알킬 기인 -C(O)NHR을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알킬아미도C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C4알킬아미도 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알킬아미노"는 R이 C1-C4알킬 기인 -NHR을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알킬아미노C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C4알킬아미노 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알킬카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C4알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C3알킬술파닐"은 황 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C3알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C3알킬술파닐C1-C3알킬"은 C1-C3알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C3알킬술파닐을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C3알킬술포닐"은 술포닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C4알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C4알킬술포닐"은 술포닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C4알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C3알킬술포닐C1-C3알킬"은 C1-C3알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C3알킬술포닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C3알킬술폭실"은 술폭실 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C3알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C3알킬술폭실C1-C3알킬"은 C1-C3알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C3알킬술폭실 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아미도"는 -C(O)NH2를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아미도C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 아미도 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아미노C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 아미노 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아릴"은 페닐 기, 또는 고리 중 하나 또는 둘 다가 페닐 기인 비시클릭 융합된 고리계를 지칭한다. 비시클릭 융합된 고리계는 4- 내지 6-원 방향족 또는 비-방향족 카르보시클릭 고리에 융합된 페닐 기로 이루어진다. 본 발명의 아릴기는 기 내의 대체가능한 임의의 탄소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착될 수 있다. 아릴 기의 대표적인 예는 인다닐, 인데닐, 나프틸, 페닐 및 테트라히드로나프틸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "아릴C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 아릴 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "카르보닐"은 -C(O)-를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "카르복시"는 -CO2H를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "카르복시C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 카르복시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "시아노"는 -CN을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C3-C6시클로알킬"은 3 내지 6개의 탄소 원자 및 0개의 헤테로원자를 갖는 포화 모노시클릭, 탄화수소 고리계를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C3-C10시클로알킬"은 3 내지 10개의 탄소 원자 및 0개의 헤테로원자를 갖는 포화 모노시클릭, 탄화수소 고리계를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "(C3-C10시클로알킬)C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C3-C10시클로알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "디(C1-C4알킬)아미도"는 R이 C1-C4알킬 기인 -C(O)NR2를 지칭한다. 2개의 R 기는 동일하거나 상이할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "디(C1-C4알킬)아미도C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 디(C1-C4알킬)아미도 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "디(C1-C4알킬)아미노"는 R이 C1-C4알킬 기인 -NR2를 지칭한다. 2개의 R 기는 동일하거나 상이할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "디(C1-C4알킬)아미노C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 디(C1-C4알킬)아미노를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "디메틸아미노"는 -N(CH3)2를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "포르밀"은 -C(O)H를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로" 및 "할로겐"은 F, Cl, Br 또는 I를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로C1-C3알킬"은 1, 2 또는 3개의 할로겐 원자로 치환된 C1-C3알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로C1-C4알콕시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 할로C1-C4알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로C1-C4알킬"은 1, 2 또는 3개의 할로겐 원자로 치환된 C1-C4알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로C1-C4알킬카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 할로C1-C4알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은 질소, 산소, 및 황으로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 함유하는 5- 또는 6-원 방향족 고리를 지칭한다. 용어 "헤테로아릴"은 또한 헤테로아릴 고리가 또 다른 모노시클릭 헤테로아릴 기 또는 페닐 기에 융합된 비시클릭 기를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 헤테로아릴 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "히드록시"는 -OH를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "히드록시C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 히드록시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "(NRcRd)C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 NRcRd 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "(NReRf)C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 NReRf 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "니트로"는 -NO2를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "옥소"는 =O를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "페닐C1-C4알킬"은 C1-C4알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 페닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "페닐카르보닐"은 카르보닐 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 페닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "페닐옥시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 페닐 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "술포닐"은 -SO2-를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "술폭실"은 -SO-를 지칭한다.
어구 "제약상 허용되는"은, 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 합리적인 이익/위험 비에 상응하여 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 이들 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하기 위해 본원에 사용된다.
화학식 (I)의 화합물은 또한 본 개시내용의 범주 내에 있는 염을 형성할 수 있다. 달리 나타내지 않는 한, 본 발명의 화합물에 대한 언급은 그의 1종 이상의 염에 대한 언급을 포함하는 것으로 이해된다. 용어 "염(들)"은 무기 및/또는 유기 산 및 염기를 사용하여 형성된 산성 및/또는 염기성 염을 나타낸다. 또한, 용어 "염(들)"은, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물이 염기성 모이어티, 예컨대 아민 또는 피리딘 또는 이미다졸 고리, 및 산성 모이어티, 예컨대 카르복실산 둘 다를 함유하는 경우에 쯔비터이온 (내부 염)을 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 (즉, 비-독성인 생리학상 허용되는) 염, 예컨대, 예를 들어, 양이온이 염의 독성 또는 생물학적 활성에 유의하게 기여하지 않는, 허용되는 금속 및 아민 염이 바람직하다. 그러나, 다른 염이, 예를 들어 제조 동안 사용될 수 있는 단리 또는 정제 단계에서 유용할 수 있으며, 따라서 이는 개시내용의 범주 내에 있는 것으로 고려된다. 화학식 (I)의 화합물의 염은, 예를 들어, 화학식 (I)의 화합물을 산 또는 염기의 양, 예컨대 등가량과, 매질, 예컨대 염이 침전되는 매질 또는 수성 매질 중에서 반응시킨 다음 동결건조시키는 것에 의해 형성될 수 있다.
예시적인 산 부가염은 아세테이트 (예컨대 아세트산 또는 트리할로아세트산, 예를 들어, 트리플루오로아세트산에 의해 형성된 것), 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로클로라이드 (염산에 의해 형성됨), 히드로브로마이드 (브로민화수소에 의해 형성됨), 히드로아이오다이드, 말레에이트 (말레산에 의해 형성됨), 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 메탄술포네이트 (메탄술폰산에 의해 형성됨), 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥살레이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 숙시네이트, 술페이트 (예컨대 황산에 의해 형성된 것), 술포네이트 (예컨대 본원에 언급된 것), 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트 예컨대 토실레이트, 운데카노에이트 등을 포함한다.
예시적인 염기성 염은 암모늄 염, 알칼리 금속 염 예컨대 나트륨, 리튬, 및 칼륨 염; 알칼리 토금속 염 예컨대 칼슘 및 마그네슘 염; 바륨, 아연, 및 알루미늄 염; 유기 염기 (예를 들어, 유기 아민) 예컨대 트리알킬아민 예컨대 트리에틸아민, 프로카인, 디벤질아민, N-벤질-β-페네틸아민, 1-에페나민, N,N'-디벤질에틸렌-디아민, 데히드로아비에틸아민, N-에틸피페리딘, 벤질아민, 디시클로헥실아민 또는 유사한 제약상 허용되는 아민과의 염 및 아미노산 예컨대 아르기닌, 리신과의 염 등을 포함한다. 염기성 질소-함유 기는 작용제 예컨대 저급 알킬 할라이드 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 디알킬 술페이트 (예를 들어, 디메틸, 디에틸, 디부틸, 및 디아밀 술페이트), 장쇄 할라이드 (예를 들어, 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 아르알킬 할라이드 (예를 들어, 벤질 및 페네틸 브로마이드) 등으로 4급화될 수 있다. 바람직한 염은 모노히드로클로라이드, 히드로겐술페이트, 메탄술포네이트, 포스페이트 또는 니트레이트 염을 포함한다.
다양한 형태의 전구약물이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 하기 문헌에 기재되어 있다:
a) The Practice of Medicinal Chemistry, Camille G. Wermuth et al., Ch 31, (Academic Press, 1996);
b) Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);
c) A Textbook of Drug Design and Development, P. Krogsgaard-Larson and H. Bundgaard, eds. Ch 5, pgs 113 - 191 (Harwood Academic Publishers, 1991); 및
d) Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Bernard Testa and Joachim M. Mayer, (Wiley-VCH, 2003).
또한, 화학식 (I)의 화합물을, 그의 제조에 후속하여 단리 및 정제하여 중량 기준으로 99% 이상의 양의 ("실질적으로 순수한") 화학식 (I)의 화합물을 함유하는 조성물을 수득할 수 있고, 이어서 이는 본원에 기재된 바와 같이 사용되거나 제제화된다. 이러한 "실질적으로 순수한" 화학식 (I)의 화합물은 또한 본원에서 본 개시내용의 일부로서 고려된다.
"안정한 화합물" 및 "안정한 구조"는 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도로의 단리, 및 효과적인 치료제로의 제제화를 견디기에 충분히 강건한 화합물을 나타내는 것으로 의도된다. 본 개시내용은 안정한 화합물을 구현하는 것으로 의도된다.
"치료 유효량"은 PD-1/PD-L1 단백질/단백질 및/또는 CD80/PD-L1 단백질/단백질 상호작용을 억제하는 데 효과적이거나, 또는 암 또는 감염성 질환, 예컨대 HIV 또는 B형 간염, C형 간염 및 D형 간염을 치료 또는 예방하는 데 효과적인 본 개시내용의 화합물 단독의 양 또는 청구된 화합물의 조합물의 양 또는 다른 활성 성분과 조합된 본 개시내용의 화합물의 양을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 "치료하는 것" 또는 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서의 질환-상태의 치료를 포함하고, (a) 특히 이러한 포유동물이 질환-상태에 대한 소인이 있으나 이를 갖는 것으로 아직 진단되지는 않은 경우, 질환-상태가 포유동물에서 발생하는 것을 예방하는 것; (b) 질환-상태를 억제하는 것, 즉, 그의 발생을 정지시키는 것; 및/또는 (c) 질환-상태를 경감시키는 것, 즉, 질환 상태의 퇴행을 유발하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 화합물은 본 발명의 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 동위원소는 동일한 원자 번호를 갖지만 상이한 질량수를 갖는 이들 원자를 포함한다. 일반적 예로서 및 비제한적으로, 수소의 동위원소는 중수소 (D) 및 삼중수소 (T)를 포함한다. 탄소의 동위원소는 13C 및 14C를 포함한다. 동위원소-표지된 개시내용의 화합물은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 본원에 기재된 것과 유사한 과정에 의해, 달리 사용되는 비-표지된 시약 대신 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들면, 메틸 (-CH3)은 또한 중수소화 메틸 기 예컨대 -CD3을 포함한다.
화학식 (I)에 따른 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염은 치료할 상태에 적합한 임의의 수단에 의해 투여될 수 있으며, 이는 부위-특이적 치료에 대한 필요성 또는 전달할 화학식 (I)의 화합물의 양에 의해 좌우될 수 있다. 또한, 화학식 (I)의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 1종 이상의 비-독성, 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제 및/또는 아주반트 (본원에서 집합적으로 "담체" 물질로 지칭됨), 및 원하는 경우에 다른 활성 성분을 포함하는 제약 조성물의 부류가 본 개시내용에 포괄된다. 화학식 (I)의 화합물은 임의의 적합한 경로에 의해, 바람직하게는 이러한 경로에 적합화된 제약 조성물의 형태로, 및 의도된 치료에 효과적인 용량으로 투여될 수 있다. 본 개시내용의 화합물 및 조성물은, 예를 들어 경구로, 점막으로, 직장으로, 또는 비경구로, 예컨대 혈관내로, 정맥내로, 복강내로, 피하로, 근육내로, 및 흉골내로, 통상적인 제약상 허용되는 담체, 아주반트 및 비히클을 함유하는 투여 단위 제제로 투여될 수 있다. 예를 들어, 제약 담체는 만니톨 또는 락토스 및 미세결정질 셀룰로스의 혼합물을 함유할 수 있다. 혼합물은 추가의 성분 예컨대 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘 및 붕해제 예컨대 크로스포비돈을 함유할 수 있다. 담체 혼합물은 젤라틴 캡슐 내로 충전되거나 또는 정제로서 압축될 수 있다. 제약 조성물은, 예를 들어 경구 투여 형태 또는 주입으로서 투여될 수 있다.
경구 투여를 위해, 제약 조성물은, 예를 들어 정제, 캡슐, 액체 캡슐, 현탁액, 또는 액체 형태일 수 있다. 제약 조성물은 바람직하게는 특정한 양의 활성 성분을 함유하는 투여 단위의 형태로 제조된다. 예를 들어, 제약 조성물은 약 0.1 내지 1000 mg, 바람직하게는 약 0.25 내지 250 mg, 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 100 mg 범위의 양의 활성 성분을 포함하는 정제 또는 캡슐로서 제공될 수 있다. 인간 또는 다른 포유동물에 적합한 1일 용량은 환자의 상태 및 다른 인자에 따라 광범위하게 달라질 수 있지만, 상용 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
본원에서 고려되는 임의의 제약 조성물은, 예를 들어 임의의 허용되고 적합한 경구 제제를 통해 경구로 전달될 수 있다. 예시적인 경구 제제는, 예를 들어 정제, 트로키, 로젠지, 수성 및 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 및 연질 캡슐, 액체 캡슐, 시럽 및 엘릭시르를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 경구 투여를 위해 의도되는 제약 조성물은 경구 투여를 위해 의도되는 제약 조성물을 제조하는 것에 대한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있다. 제약상 맛우수한 제제를 제공하기 위해, 개시내용에 따른 제약 조성물은 감미제, 향미제, 착색제, 완화제, 항산화제, 및 보존제로부터 선택된 적어도 1종의 작용제를 함유할 수 있다.
정제는, 예를 들어, 화학식 (I)의 적어도 1종의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 정제의 제조에 적합한 적어도 1종의 비-독성 제약상 허용되는 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 예시적인 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 예를 들어 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 및 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 예를 들어 미세결정질 셀룰로스, 소듐 크로스카르멜로스, 옥수수 전분 및 알긴산; 결합제, 예컨대 예를 들어 전분, 젤라틴, 폴리비닐-피롤리돈 및 아카시아; 및 윤활제, 예컨대 예를 들어 스테아르산마그네슘, 스테아르산 및 활석을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 추가적으로, 정제는 비코팅되거나, 또는 불쾌한 맛이 나는 약물의 나쁜 맛을 차폐하거나 또는 위장관에서의 활성 성분의 붕해 및 흡수를 지연시켜 활성 성분의 효과를 보다 긴 기간 동안 지속시키기 위해 공지된 기술에 의해 코팅될 수 있다. 예시적인 수용성 맛 차폐 물질은 히드록시프로필-메틸셀룰로스 및 히드록시프로필-셀룰로스를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 시간 지연 물질은 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트 부티레이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
경질 젤라틴 캡슐은, 예를 들어, 화학식 (I)의 적어도 1종의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 염을 적어도 1종의 불활성 고체 희석제, 예컨대, 예를 들어, 탄산칼슘; 인산칼슘; 및 카올린과 혼합함으로써 제조될 수 있다.
연질 젤라틴 캡슐은, 예를 들어, 화학식 (I)의 적어도 1종의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 적어도 1종의 수용성 담체, 예컨대, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜; 및 적어도 1종의 오일 매질, 예컨대, 예를 들어, 땅콩 오일, 액체 파라핀, 및 올리브 오일과 혼합함으로써 제조될 수 있다.
수성 현탁액은, 예를 들어, 화학식 (I)의 적어도 1종의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 수성 현탁액의 제조에 적합한 적어도 1종의 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 수성 현탁액의 제조에 적합한 예시적인 부형제는 예를 들어 현탁화제, 예컨대 예를 들어 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸-셀룰로스, 알긴산나트륨, 알긴산, 폴리비닐-피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검; 분산제 또는 습윤제, 예컨대 예를 들어 자연 발생 포스파티드, 예를 들어 레시틴; 알킬렌 옥시드와 지방산의 축합 생성물, 예컨대 예를 들어 폴리옥시에틸렌 스테아레이트; 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방족 알콜의 축합 생성물, 예컨대 예를 들어 헵타데카에틸렌-옥시세탄올; 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨로부터 유래된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대 예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트; 및 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대 예를 들어 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 수성 현탁액은 또한 적어도 1종의 보존제, 예컨대, 예를 들어 에틸 및 n-프로필 p-히드록시벤조에이트; 적어도 1종의 착색제; 적어도 1종의 향미제; 및/또는 예를 들어 수크로스, 사카린, 및 아스파르탐을 포함하나 이에 제한되지는 않는 적어도 1종의 감미제를 함유할 수 있다.
유성 현탁액은, 예를 들어, 화학식 (I)의 적어도 1종의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 식물성 오일, 예컨대, 예를 들어, 아라키스 오일; 올리브 오일; 참깨 오일; 및 코코넛 오일 중에; 또는 미네랄 오일, 예컨대, 예를 들어, 액체 파라핀 중에 현탁시킴으로써 제조될 수 있다. 유성 현탁액은 또한 적어도 1종의 증점제, 예컨대, 예를 들어 밀랍; 경질 파라핀; 및 세틸 알콜을 함유할 수 있다. 맛우수한 유성 현탁액을 제공하기 위해, 상기에 이미 기재된 감미제 중 적어도 1종 및/또는 적어도 1종의 향미제가 유성 현탁액에 첨가될 수 있다. 유성 현탁액은, 예를 들어 항산화제, 예컨대, 예를 들어 부틸화 히드록시아니솔 및 알파-토코페롤을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 적어도 1종의 보존제를 추가로 함유할 수 있다.
분산성 분말 및 과립은, 예를 들어, 화학식 (I)의 적어도 1종의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 적어도 1종의 분산제 및/또는 습윤제; 적어도 1종의 현탁화제; 및/또는 적어도 1종의 보존제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 적합한 분산제, 습윤제, 및 현탁화제는 상기에 이미 기재된 바와 같다. 예시적인 보존제는, 예를 들어 항산화제, 예를 들어 아스코르브산을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 분산성 분말 및 과립은, 예를 들어 감미제; 향미제; 및 착색제를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 적어도 1종의 부형제를 또한 함유할 수 있다.
화학식 (I)의 적어도 1종의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염의 에멀젼은, 예를 들어, 수중유 에멀젼으로 제조될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 에멀젼의 유성 상은 공지된 성분으로부터 공지된 방식으로 구성될 수 있다. 오일 상은, 예를 들어 식물성 오일, 예컨대, 예를 들어 올리브 오일 및 아라키스 오일; 미네랄 오일, 예컨대, 예를 들어 액체 파라핀; 및 그의 혼합물에 의해 제공될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 상은 단지 유화제만을 포함할 수 있지만, 이는 적어도 1종의 유화제와 지방 또는 오일 또는 지방 및 오일 둘 다의 혼합물을 포함할 수 있다. 적합한 유화제는, 예를 들어 자연 발생 포스파티드, 예를 들어 대두 레시틴; 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 에스테르 또는 부분 에스테르, 예컨대, 예를 들어 소르비탄 모노올레에이트; 및 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 친수성 유화제는 안정화제로서 작용하는 친지성 유화제와 함께 포함된다. 또한 오일 및 지방 둘 다를 포함하는 것이 바람직하다. 이와 함께, 안정화제(들) 포함 또는 불포함 유화제(들)는 소위 유화 왁스를 구성하며, 왁스는 오일 및 지방과 함께, 크림 제제의 유성 분산 상을 형성하는 소위 유화 연고 베이스를 구성한다. 에멀젼은 또한 감미제, 향미제, 보존제, 및/또는 항산화제를 함유할 수 있다. 본 개시내용의 제제에 사용하기에 적합한 유화제 및 에멀젼 안정화제는 트윈(Tween) 60, 스팬(Span) 80, 세토스테아릴 알콜, 미리스틸 알콜, 글리세릴 모노스테아레이트, 소듐 라우릴 술페이트, 글리세릴 디스테아레이트를 단독으로, 또는 왁스 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 물질과 함께 포함한다.
화학식 (I)의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염은, 예를 들어, 또한 정맥내로, 피하로, 및/또는 근육내로, 임의의 제약상 허용되고 적합한 주사가능한 형태를 통해 전달될 수 있다. 예시적인 주사가능한 형태는, 예를 들어 허용되는 비히클 및 용매, 예컨대, 예를 들어 물, 링거액, 및 등장성 염화나트륨 용액을 포함하는 멸균 수용액; 멸균 수중유 마이크로에멀젼; 및 수성 또는 유질 현탁액을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
비경구 투여를 위한 제제는 수성 또는 비-수성 등장성 멸균 주사 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 이들 용액 및 현탁액은 경구 투여를 위한 제제에 사용하기 위한 것으로 언급된 담체 또는 희석제 중 1종 이상을 사용하거나, 또는 다른 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용함으로써 멸균 분말 또는 과립으로부터 제조될 수 있다. 화합물은 물, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 옥수수 오일, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 참깨 오일, 벤질 알콜, 염화나트륨, 트라가칸트 검, 및/또는 다양한 완충제 중에 용해될 수 있다. 다른 아주반트 및 투여 방식이 제약 기술분야에 널리 및 광범위하게 공지되어 있다. 활성 성분은 또한 염수, 덱스트로스 또는 물을 포함한 적합한 담체, 또는 시클로덱스트린 (즉, 캅티솔(Captisol)), 공용매 가용화제 (즉, 프로필렌 글리콜) 또는 미셀 가용화제 (즉, 트윈 80)와의 조성물로서 주사에 의해 투여될 수 있다.
멸균 주사가능한 제제는 또한, 예를 들어 1,3-부탄디올 중 용액과 같이 비-독성 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일이 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함한 임의의 무자극 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한, 지방산, 예컨대 올레산이 주사제의 제조에서 용도가 발견된다.
멸균 주사가능한 수중유 마이크로에멀젼은, 예를 들어 1) 화학식 (I)의 적어도 1종의 화합물을 유성 상, 예컨대, 예를 들어 대두 오일 및 레시틴의 혼합물 중에 용해시키고; 2) 화학식 (I) 함유 오일 상을 물 및 글리세롤 혼합물과 조합하고; 3) 조합물을 가공하여 마이크로에멀젼을 형성함으로써 제조될 수 있다.
멸균 수성 또는 유질 현탁액은 관련 기술분야에 이미 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 멸균 수용액 또는 현탁액은 비-독성 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매, 예컨대, 예를 들어 1,3-부탄 디올을 사용하여 제조될 수 있고; 멸균 유질 현탁액은 멸균 비-독성 허용되는 용매 또는 현탁 매질, 예컨대 예를 들어 멸균 고정 오일, 예를 들어 합성 모노- 또는 디글리세리드; 및 지방산, 예컨대, 예를 들어 올레산을 사용하여 제조될 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물에 사용될 수 있는 제약상 허용되는 담체, 아주반트, 및 비히클은 이온 교환체, 알루미나, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 자기-유화 약물 전달 시스템 (SEDDS), 예컨대 d-알파-토코페롤 폴리에틸렌글리콜 1000 숙시네이트, 제약 투여 형태에 사용되는 계면활성제, 예컨대 트윈, 폴리에톡실화 피마자 오일, 예컨대 크레모포르(CREMOPHOR) 계면활성제 (바스프(BASF)), 또는 다른 유사한 중합체 전달 매트릭스, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 완충제 물질, 예컨대 포스페이트, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세리드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대 프로타민 술페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 삼규산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스계 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모 지방을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 시클로덱스트린, 예컨대 알파-, 베타- 및 감마-시클로덱스트린, 또는 화학적으로 변형된 유도체, 예컨대 2- 및 3-히드록시프로필-시클로덱스트린을 포함한 히드록시알킬시클로덱스트린, 또는 다른 가용화된 유도체가 본원에 기재된 화학식의 화합물의 전달을 증진시키는 데 유리하게 사용될 수 있다.
본 개시내용의 제약 활성 화합물을 제약학의 통상적인 방법에 따라 가공하여 인간 및 다른 포유동물을 포함한 환자에게 투여하기 위한 의약 작용제를 제조할 수 있다. 제약 조성물은 통상적인 제약 작업, 예컨대 멸균에 적용될 수 있고/거나, 통상적인 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 완충제 등을 함유할 수 있다. 정제 및 환제는 추가적으로 장용 코팅을 갖는 것으로 제조될 수 있다. 이러한 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 습윤제, 감미제, 향미제, 및 퍼퓸제를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 화합물 및/또는 조성물을 사용하여 질환 상태를 치료하기 위한, 투여되는 화합물의 양 및 투여 요법은 대상체의 연령, 체중, 성별, 의학적 상태, 질환의 유형, 질환의 중증도, 투여 경로 및 빈도, 및 사용되는 특정한 화합물을 포함한 다양한 인자에 좌우된다. 따라서, 투여 요법은 폭넓게 달라질 수 있지만, 표준 방법을 사용하여 상용적으로 결정될 수 있다. 약 0.001 내지 100 mg/kg 체중, 바람직하게는 약 0.0025 내지 약 50 mg/kg 체중, 가장 바람직하게는 약 0.005 내지 10 mg/kg 체중의 1일 용량이 적절할 수 있다. 1일 용량은 1일에 1 내지 4회 용량으로 투여될 수 있다. 다른 투여 스케줄은 1주에 1회 용량 및 2일에 1회 용량 사이클을 포함한다.
치료 목적을 위해, 본 개시내용의 활성 화합물은 지시된 투여 경로에 적절한 1종 이상의 아주반트와 통상적으로 조합된다. 경구로 투여되는 경우에, 화합물은 락토스, 수크로스, 전분 분말, 알칸산의 셀룰로스 에스테르, 셀룰로스 알킬 에스테르, 활석, 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 산화마그네슘, 인산 및 황산의 나트륨 및 칼슘 염, 젤라틴, 아카시아 검, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈 및/또는 폴리비닐 알콜과 혼합된 다음, 편리한 투여를 위해 정제화 또는 캡슐화될 수 있다. 이러한 캡슐 또는 정제는, 히드록시프로필메틸 셀룰로스 중 활성 화합물의 분산액에 제공될 수 있는 바와 같이, 제어-방출 제제를 함유할 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물은 화학식 (I)의 적어도 1종의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염, 및 임의로 임의의 제약상 허용되는 담체, 아주반트, 및 비히클로부터 선택된 추가의 작용제를 포함한다. 본 개시내용의 대안적 조성물은 본원에 기재된 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 전구약물, 및 제약상 허용되는 담체, 아주반트, 또는 비히클을 포함한다.
개시내용의 화합물은 PD-1/PD-L1 단백질/단백질을 억제하여 PD-L1 차단을 발생시킨다. PD-L1의 차단은 인간을 포함한 포유동물에서 암성 세포 및 감염성 질환에 대한 면역 반응을 증진시킬 수 있다.
한 측면에서, 본 개시내용은 암성 종양의 성장이 억제되도록 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염을 사용하여 대상체를 생체내 치료하는 것에 관한 것이다. 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염은 암성 종양의 성장을 억제하기 위해 단독으로 사용될 수 있다. 대안적으로, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염은 하기 기재된 바와 같이 다른 면역원성 작용제 또는 표준 암 치료와 함께 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 개시내용은 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다. 개시내용의 화합물의 사용하여 성장이 억제될 수 있는 것을 포함한 암의 예는 전형적으로 면역요법에 반응성인 암을 포함한다. 치료를 위해 바람직한 암의 비제한적인 예는 흑색종 (예를 들어, 전이성 악성 흑색종), 신암 (예를 들어, 투명 세포 암종), 전립선암 (예를 들어, 호르몬 불응성 전립선 선암종), 유방암, 결장암 및 폐암 (예를 들어, 비소세포 폐암)을 포함한다. 추가적으로, 개시내용은, 개시내용의 화합물을 사용하여 성장이 억제될 수 있는 불응성 또는 재발성 악성종양을 포함한다.
개시내용의 방법을 사용하여 치료될 수 있는 다른 암의 예는 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 고환암, 자궁암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 포함한 만성 또는 급성 백혈병, 소아기 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요도암, 신우 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양암, 편평 세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 것을 포함한 환경적으로 유발된 암, 및 상기 암의 조합을 포함한다. 또한, 본 개시내용은 전이성 암, 특히 PD-L1을 발현하는 전이성 암의 치료에 유용하다 (Iwai et al. (2005) Int. Immunol. 17:133-144).
임의로, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염은 또 다른 면역원성 작용제, 예컨대 암성 세포, 정제된 종양 항원 (재조합 단백질, 펩티드 및 탄수화물 분자 포함), 세포, 및 면역 자극 시토카인을 코딩하는 유전자로 형질감염된 세포와 조합될 수 있다 (He et al. (2004) J. Immunol. 173:4919-28). 사용될 수 있는 종양 백신의 비제한적 예는 흑색종 항원의 펩티드, 예컨대 gp100, MAGE 항원, Trp-2, MART1 및/또는 티로시나제의 펩티드, 또는 시토카인 GM-CSF를 발현하도록 형질감염된 종양 세포를 포함한다.
인간에서, 일부 종양 예컨대 흑색종은 면역원성인 것으로 밝혀졌다. PD-L1 차단에 의해 T 세포 활성화의 역치를 상승시킴으로써, 종양 반응이 숙주에서 활성화될 것을 예상할 수 있는 것으로 기대된다.
PD-L1 차단은 백신접종 프로토콜과 조합될 수 있다. 종양에 대한 백신접종을 위한 많은 실험적 전략들이 고안되었다 (문헌 [Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738] 참조; 또한 문헌 [Restifo, N. 및 Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 in DeVita, V. et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology. Fifth Edition] 참조). 이러한 전략 중 하나에서, 백신은 자가 또는 동종 종양 세포를 사용하여 제조된다. 이들 세포성 백신은 GM-CSF를 발현하도록 종양 세포가 형질도입될 때 가장 효과적인 것으로 밝혀졌다. GM-CSF는 종양 백신접종을 위한 항원 제시의 강력한 활성화제인 것으로 밝혀졌다 (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 3539-43).
다양한 종양에서의 유전자 발현 및 대규모 유전자 발현 패턴에 관한 연구 결과, 소위 종양 특이적 항원에 관하여 정의하게 되었다 (Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7). 다수의 경우에서, 이들 종양 특이적 항원은 종양 및 종양이 발생한 세포에서 발현되는 분화 항원, 예를 들어 멜라닌세포 항원 gp100, MAGE 항원, 및 Trp-2이다. 보다 중요하게는, 이들 항원 중 다수는 숙주에서 발견되는 종양 특이적 T 세포의 표적인 것으로 제시될 수 있다. PD-L1 차단을 종양에서 발현되는 재조합 단백질 및/또는 펩티드의 수집과 함께 사용하여 이들 단백질에 대한 면역 반응을 생성할 수 있다. 이들 단백질은 자기 항원으로서 면역계에 의해 정상적으로 인식되고, 따라서 이들에 대해 관용성이다. 종양 항원은 또한, 염색체의 텔로미어의 합성에 필요하고 85% 초과의 인간 암에서 및 단지 제한된 수의 체성 조직에서 발현되는 단백질 텔로머라제를 포함할 수 있다 (Kim, N et al. (1994) Science 266: 2011-2013). (이들 체성 조직은 다양한 수단에 의해 면역 공격으로부터 보호될 수 있음). 또한, 종양 항원은 단백질 서열을 변경하거나 또는 2개의 관련되지 않은 서열 사이의 융합 단백질 (즉, 필라델피아 염색체 내의 bcr-abl), 또는 B 세포 종양으로부터의 이디오타입을 생성하는 체세포 돌연변이로 인해 암 세포에서 발현되는 "신생-항원"일 수 있다.
다른 종양 백신은 인간 암에 연루된 바이러스, 예컨대 인간 유두종 바이러스 (HPV), 간염 바이러스 (HBV, HDV 및 HCV) 및 카포시 포진 육종 바이러스 (KHSV)로부터의 단백질을 포함할 수 있다. PD-L1 차단과 함께 사용될 수 있는 또 다른 형태의 종양 특이적 항원은 종양 조직 자체로부터 단리된 정제된 열 쇼크 단백질 (HSP)이다. 이들 열 쇼크 단백질은 종양 세포로부터의 단백질의 단편을 함유하고, 이들 HSP는 종양 면역 도출을 위해 항원 제시 세포로의 전달시 고도로 효율적이다 (Suot, R & Srivastava, P (1995) Science 269:1585-1588; Tamura, Y. et al. (1997) Science 278:117-120).
수지상 세포 (DC)는 항원-특이적 반응을 촉발하는 데 사용될 수 있는 강력한 항원 제시 세포이다. DC는 생체외 생산될 수 있고, 다양한 단백질 및 펩티드 항원, 뿐만 아니라 종양 세포 추출물로 로딩될 수 있다 (Nestle, F. et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). DC는 또한, 이들 종양 항원을 또한 발현시키기 위해 유전적 수단에 의해 형질도입될 수 있다. DC는 또한 면역화 목적을 위해 종양 세포에 직접 융합되었다 (Kugler, A. et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336). 백신접종 방법으로서, DC 면역화는 보다 강력한 항종양 반응을 활성화시키기 위해 PD-L1 차단과 효과적으로 조합될 수 있다.
PD-L1 차단은 또한 표준 암 치료와 조합될 수 있다. PD-L1 차단은 화학요법과 효과적으로 조합될 수 있다. 이들 경우에, 투여된 화학요법 시약의 용량을 감소시키는 것이 가능할 수 있다 (Mokyr, M. et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). 이러한 조합의 예는 흑색종의 치료를 위해 다카르바진과 조합된 본 개시내용의 화합물이다. 이러한 조합의 또 다른 예는 흑색종의 치료를 위해 인터류킨-2 (IL-2)와 조합된 본 개시내용의 화합물이다. PD-L1 차단 및 화학요법의 조합 사용을 뒷받침하는 과학적 근거는 대부분의 화학요법 화합물의 세포독성 작용의 결과인 세포 사멸이 항원 제시 경로에서 종양 항원의 수준을 증가시켜야 한다는 것이다. 세포 사멸을 통한 PD-L1 차단과 상승작용을 유발할 수 있는 다른 조합 요법은 방사선요법, 수술 및 호르몬 박탈이다. 각각의 이들 프로토콜은 숙주에서 종양 항원의 공급원을 생성한다. 또한, 혈관신생 억제제가 PD-L1 차단과 조합될 수 있다. 혈관신생의 억제는 숙주 항원 제시 경로 내로 종양 항원을 공급할 수 있는 종양 세포 사멸로 이어진다.
본 개시내용의 화합물은 또한 종양 세포에 대해 Fc 알파 또는 Fc 감마 수용체-발현 이펙터 세포를 표적화하는 이중특이적 화합물과 조합되어 사용될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,922,845 및 5,837,243 참조). 이중특이적 화합물을 사용하여 2개의 별개의 항원을 표적화할 수 있다. 예를 들어 항-Fc 수용체/항종양 항원 (예를 들어, Her-2/neu) 이중특이적 화합물은 대식세포를 종양 부위로 표적화하는 데 사용되었다. 이 표적화는 종양 특이적 반응을 보다 효과적으로 활성화시킬 수 있다. 이들 반응의 T 세포 아암은 PD-L1 차단의 사용에 의해 증대될 것이다. 대안적으로, 종양 항원 및 수지상 세포 특이적 세포 표면 마커에 결합하는 이중특이적 화합물의 사용에 의해 항원이 DC에 직접 전달될 수 있다.
종양은 매우 다양한 메카니즘에 의해 숙주 면역 감시를 피한다. 이들 메카니즘 중 많은 것은, 종양에 의해 발현되고 면역억제성인 단백질의 불활성화에 의해 극복될 수 있다. 이들은 특히, TGF-베타 (Kehrl, J. et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard, M. & O'Garra, A. (1992) Immunology Today 13: 198-200), 및 Fas 리간드 (Hahne, M. et al. (1996) Science 274: 1363-1365)를 포함한다. 각각의 이들 엔티티에 결합하고 차단하는 억제제는 면역억제제의 효과를 상쇄시키고 숙주에 의한 종양 면역 반응을 유리하게 하기 위해 본 개시내용의 화합물과 조합되어 사용될 수 있다.
숙주 면역 반응성을 활성화하는 화합물이 PD-L1 차단과 조합되어 사용될 수 있다. 이들은 DC 기능 및 항원 제시를 활성화시키는 수지상 세포의 표면 상의 분자를 포함한다. 항-CD40 화합물은 T 세포 헬퍼 활성을 효과적으로 대체할 수 있고 (Ridge, J. et al. (1998) Nature 393: 474-478), PD-L1 차단과 함께 사용될 수 있다 (Ito, N. et al. (2000) Immunobiology 201 (5) 527-40). T 세포 공동자극 분자 예컨대 CTLA-4 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,811,097), OX-40 (Weinberg, A. et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero, I. et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997)), 및 ICOS (Hutloff, A. et al. (1999) Nature 397: 262-266)에 대한 활성화 화합물은 또한 T 세포 활성화의 증가된 수준을 제공할 수 있다.
골수 이식은 조혈계 기원의 다양한 종양을 치료하는 데 현재 사용된다. 이식편 대 숙주 질환은 이러한 치료의 결과이지만, 이식편 대 종양 반응으로부터 치료 이익을 획득할 수 있다. 공여자 생착 종양 특이적 T 세포의 유효성을 증가시키기 위해 PD-L1 차단이 사용될 수 있다.
개시내용의 다른 방법은 특정한 독소 또는 병원체에 노출된 적 있는 환자를 치료하는 데 사용된다. 따라서, 개시내용의 또 다른 측면은 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 감염성 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 논의된 바와 같은 종양에 대한 그의 적용과 유사하게, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염은 병원체, 독소 및 자기-항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 단독으로, 또는 아주반트로서, 백신과 조합되어 사용될 수 있다. 이 치료 접근법이 특히 유용할 수 있는 병원체의 예는 현재 효과적인 백신이 없는 병원체, 또는 통상적인 백신이 완전하게 효과적이지는 않은 병원체를 포함한다. 이들은 HIV, 간염 (A, B, C 또는 D), 인플루엔자(Influenza), 헤르페스(Herpes), 지아르디아(Giardia), 말라리아(Malaria), 리슈마니아(Leishmania), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas Aeruginosa)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. PD-L1 차단은 감염 과정에 걸쳐 변경된 항원을 제시하는 HIV와 같은 작용제에 의해 확립된 감염에 대해 특히 유용하다. 이들 신규한 에피토프는 투여 시 외래로서 인식되고, 따라서 PD-1을 통한 음성 신호에 의해 약화되지 않는 강한 T 세포 반응을 유발한다.
개시내용의 방법에 의해 치료가능한 감염을 유발하는 병원성 바이러스의 일부 예는 HIV, 간염 (A, B, C, 또는 D), 포진 바이러스 (예를 들어, VZV, HSV-1, HAV-6, HHv-7, HHV-8, HSV-2, CMV, 및 엡스타인 바르(Epstein Barr) 바이러스), 아데노바이러스, 인플루엔자 바이러스, 플라비바이러스, 에코바이러스, 리노바이러스, 콕사키 바이러스, 코로나바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 볼거리 바이러스, 로타바이러스, 홍역 바이러스, 풍진 바이러스, 파르보바이러스, 백시니아 바이러스, HTLV 바이러스, 뎅기 바이러스, 유두종바이러스, 연속종 바이러스, 폴리오바이러스, 광견병 바이러스, JC 바이러스 및 아르보바이러스 뇌염 바이러스를 포함한다.
개시내용의 방법에 의해 치료가능한 감염을 유발하는 병원성 박테리아의 일부 예는 클라미디아, 리케치아 박테리아, 미코박테리움, 스타필로코쿠스, 스트렙토코쿠스, 뉴모코쿠스, 메닝고코쿠스 및 고노코쿠스, 클레브시엘라, 프로테우스, 세라티아, 슈도모나스, 레지오넬라, 디프테리아, 살모넬라, 바실루스, 콜레라, 파상풍, 보툴리눔독소증, 탄저병, 흑사병, 렙토스피라증 및 라임병 박테리아를 포함한다.
개시내용의 방법에 의해 치료가능한 감염을 유발하는 병원성 진균의 일부 예는 칸디다(Candida) (알비칸스(albicans), 크루세이(krusei), 글라브라타(glabrata), 트로피칼리스(tropicalis) 등), 크립토코쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 아스페르길루스(Aspergillus) (푸미가투스(fumigatus), 니거(niger) 등), 뮤코랄레스(Mucorales) 속 (뮤코르(mucor), 압시디아(absidia), 리조푸스(rhizophus)), 스포로트릭스 쉔크키이(Sporothrix schenckii), 블라스토미세스 더마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 파라콕시디오이데스 브라실리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis), 콕시디오이데스 임미티스(Coccidioides immitis) 및 히스토플라스마 캅술라툼(Histoplasma capsulatum)을 포함한다.
개시내용의 방법에 의해 치료가능한 감염을 유발하는 병원성 기생충의 일부 예는 엔트아메바 히스톨리티카(Entamoeba histolytica), 발란티디움 콜라이(Balantidium coli), 네글레리아포울렐리(Naegleriafowleri), 아칸트아메바(Acanthamoeba) 종, 지아르디아 람블리아(Giardia lamblia), 크립토스포리디움(Cryptosporidium) 종, 뉴모시스티스 카리니이(Pneumocystis carinii), 플라스모디움 비박스(Plasmodium vivax), 바베시아 미크로티(Babesia microti), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 리슈마니아 도노바니(Leishmania donovani), 톡소플라스마 곤디이(Toxoplasma gondii) 및 니포스트롱길루스 브라실리엔시스(Nippostrongylus brasiliensis)를 포함한다.
상기 모든 방법에서, PD-L1 차단은 다른 형태의 면역요법, 예컨대 시토카인 치료 (예를 들어, 인터페론, GM-CSF, G-CSF, IL-2), 또는 종양 항원의 증진된 제시를 제공하는 이중특이적 항체 요법 (예를 들어, 문헌 [Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123] 참조), 백신, 또는 유전자 발현을 변형시키는 작용제와 조합될 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 자가면역 반응을 유발하고 증폭시킬 수 있다. 사실상, 종양 세포 및 펩티드 백신을 사용하여 항-종양 반응을 유도하는 것은 많은 항-종양 반응이 항-자기 반응성 (항-CTLA-4+GM-CSF-변형된 B 16 흑색종에서 관찰된 탈색소, 상기 문헌 [van Elsas et al.]; Trp-2 백신접종된 마우스에서의 탈색소 (Overwijk, W. et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96: 2982-2987); TRAMP 종양 세포 백신 (상기 문헌 [Hurwitz, A. (2000)]), 흑색종 펩티드 항원 백신접종에 의해 유발된 자가면역 전립선염 및 인간 임상 시험에서 관찰된 백반증 (Rosenberg, S A and White, D E (1996) J. Immunother Emphasis Tumor Immunol 19 (1): 81-4)을 수반한다는 것을 밝힌다.
따라서, 질환 치료를 위해 이들 자기 단백질에 대한 면역 반응을 효과적으로 생성하도록 백신접종 프로토콜을 고안하기 위해 항-PD-L1 차단을 다양한 자기 단백질과 함께 사용하는 것을 고려하는 것이 가능하다. 예를 들어, 알츠하이머병은 뇌에서 아밀로이드 침착물 내에 A.베타. 펩티드의 부적절한 축적을 수반하고; 아밀로이드에 대한 항체 반응은 이들 아밀로이드 침착물을 제거할 수 있다 (Schenk et al., (1999) Nature 400: 173-177).
다른 자기 단백질이 또한 알레르기 및 천식의 치료를 위한 IgE, 및 류마티스 관절염을 위한 TNF.알파.와 같이 표적으로서 사용될 수 있다. 마지막으로, 다양한 호르몬에 대한 항체 반응이 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염을 사용하여 유도될 수 있다. 생식 호르몬에 대한 중화 항체 반응은 피임을 위해 사용될 수 있다. 특정한 종양의 성장을 위해 요구되는 호르몬 및 다른 가용성 인자에 대한 중화 항체 반응이 또한 가능한 백신접종 표적으로서 고려될 수 있다.
항-PD-L1 항체의 사용에 대해 상기 기재된 것과 유사한 방법이, 다른 자기-항원, 예컨대 알츠하이머병에서의 A.베타.를 포함한 아밀로이드 침착물, 시토카인 예컨대 TNF 알파, 및 IgE의 부적절한 축적을 갖는 환자를 치료하기 위해 치료적 자가면역 반응의 유도를 위해 사용될 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염과 관심 항원 (예를 들어, 백신)의 공투여에 의해 항원-특이적 면역 반응을 자극하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 또 다른 측면에서, 개시내용은 대상체에게 (i) 항원; 및 (ii) 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염을 투여하여 대상체에서의 항원에 대한 면역 반응이 증진되도록 하는 것을 포함하는, 대상체에서 항원에 대한 면역 반응을 증진시키는 방법을 제공한다. 항원은, 예를 들어 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원, 또는 병원체로부터의 항원일 수 있다. 이러한 항원의 비제한적 예는 상기 섹션에서 논의된 것, 예컨대 상기 논의된 종양 항원 (또는 종양 백신), 또는 바이러스, 박테리아 또는 상기 기재된 다른 병원체로부터의 항원을 포함한다.
이전에 기재된 바와 같이, 개시내용의 화합물은 1종 이상의 다른 치료제, 예를 들어 세포독성제, 방사성독성제 또는 면역억제제와 공투여될 수 있다. 개시내용의 화합물은 다른 치료제 전에, 그 후에 또는 그와 공동으로 투여될 수 있거나, 또는 다른 공지된 요법, 예를 들어 항암 요법, 예를 들어 방사선과 공투여될 수 있다. 이러한 치료제는 특히 그 자체로는 환자에게 독성 또는 준독성인 수준에서만 효과적인 항신생물제, 예컨대 독소루비신 (아드리아마이신), 시스플라틴 블레오마이신 술페이트, 카르무스틴, 클로람부실, 데카르바진 및 시클로포스파미드 히드록시우레아를 포함한다. 시스플라틴은 100 mg/용량으로서 4주마다 1회 정맥내로 투여되고, 아드리아마이신은 60-75 mg/mL 용량으로서 21일마다 1회 정맥내로 투여된다. 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염과 화학요법제의 공-투여는 인간 종양 세포에 세포독성 효과를 산출하는 상이한 메카니즘을 통해 작동하는 2종의 항암제를 제공한다. 이러한 공-투여는 약물에 대한 내성의 발생, 또는 항체와 비반응성이 되게 할 종양 세포의 항원성에서의 변화로 인한 문제를 해결할 수 있다.
또한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염 및 사용에 대한 지침서를 포함하는 키트가 본 개시내용의 범주 내에 있다. 키트는 추가로 적어도 1종의 추가의 시약을 함유할 수 있다. 키트는 전형적으로 키트의 내용물의 의도되는 용도를 지시하는 라벨을 포함한다. 용어 라벨은 키트 상에 또는 키트와 함께 공급되거나, 또는 달리 키트에 동반되는 임의의 문서 또는 기록물을 포함한다.
상기 다른 치료제는, 본 개시내용의 화합물과 조합되어 사용되는 경우에, 예를 들어 문헌 [Physicians' Desk Reference (PDR)]에 지시된 양으로 또는 달리 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정된 양으로 사용될 수 있다. 본 개시내용의 방법에서, 이러한 다른 치료제(들)는 본 발명의 화합물의 투여 전에, 그와 동시에, 또는 그 후에 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 PD-1/PD-L1 상호작용을, PD-1/PD-L1 균질 시간-분해 형광 (HTRF) 결합 검정에 의해 측정된 바와 같이 10 μM 이하, 예를 들어 0.01 내지 10 μM의 IC50값으로 억제한다. 바람직하게는, 화학식 (I)의 화합물은 PD-1/PD-L1 상호작용을 1 μM 이하, 예를 들어 0.01 내지 1 μM의 IC50 값으로 억제한다.
실시예
본 개시내용은 하기 실시예에서 추가로 정의된다. 실시예는 단지 예시로서 주어진 것으로 이해되어야 한다. 상기 논의 및 실시예로부터, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 개시내용의 필수적인 특징을 확인할 수 있으며, 본 개시내용의 취지 및 범주에서 벗어나지 않는 한, 본 개시내용을 다양한 용도 및 조건에 적합하도록 다양하게 변화 및 변형시킬 수 있다. 그 결과, 본 개시내용은 하기 본원에 제시된 예시적인 예에 의해 제한되지 않고, 오히려 본원에 첨부된 청구범위에 의해 정의된다.
본원에 사용된 약어는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있을 것이다. 예는 테트라히드로푸란에 대해 THF; 디클로로메탄에 대해 DCM; N,N-디메틸포름아미드에 대해 DMF; 디메틸술폭시드에 대해 DMSO; 트리플루오르아세트산에 대해 TFA; 아세트산에 대해 AcOH; 아세토니트릴에 대해 ACN 또는 MeCN; 메탄올에 대해 MeOH; 아세트산암모늄에 대해 NH4OAc; 디이소프로필 아조디카르복실레이트에 대해 DIAD; 시간에 대해 h; 분에 대해 min; 1,2-디클로로에탄에 대해 DCE; 에탄올에 대해 EtOH; 체류 시간 또는 실온에 대해 rt 또는 RT (문맥이 지시할 것임); 및 디이소프로필에틸아민에 대해 DIPEA이다.
반응식 1, 2 및 3은 실시예의 제조를 위해 사용될 수 있는 일부 방법을 나타낸다. 교차-커플링 파트너, 브로마이드 및 보론산 (또는 보론산 에스테르)가 상호교환가능하다는 것이 이해된다.
반응식 1
Figure 112019012812334-pct00019
반응식 2
Figure 112019012812334-pct00020
반응식 3
Figure 112019012812334-pct00021
실험:
중간체: (2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00022
밀봉된 튜브에 THF (75 mL), 물 (18 mL), 퀴놀린-7-보론산 (500 mg, 2.89 mmol), (3-브로모-2-메틸페닐)메탄올 (0.581 g, 2.89 mmol), 삼염기성 인산칼륨 (1.53 g, 7.23 mmol), 및 제2 세대 XPhos 전촉매 (0.068 g, 0.087 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 질소로 x3 탈기/플러싱하고, 이어서 2일 동안 실온에서 교반하였다. 조 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 물, 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 25-80% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)페닐)메탄올 0.42g (57% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.94 (dd, J=4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.42 (d, J=8.3 Hz, 1H), 8.04 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.62 - 7.51 (m, 2H), 7.47 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.33 - 7.26 (m, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 5.15 (t, J=5.1 Hz, 1H), 4.59 (d, J=4.6 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H).
중간체: 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00023
THF (12mL) 중 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (184 mg, 0.911 mmol)를 THF (12mL) 중 (2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)페닐)메탄올 (206.5 mg, 0.828 mmol), 5-클로로-2,4-디히드록시벤즈알데히드 (157 mg, 0.911 mmol), 및 트리페닐포스핀 (239 mg, 0.911 mmol)의 용액에 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 교반하고 밤새 실온에 도달하도록 하였다. 반응 혼합물을 농축시킨 다음, 실리카 겔 상에서 10-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)벤질)옥시)벤즈알데히드 280 mg (71% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈(Shimadzu) 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼(Micromass Platform) LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티(Waters Aquity) BEH 1.7 μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt (체류 시간) = 1.059분, m/z 404.2 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.06 (s, 1H), 8.96 (dd, J=4.3, 1.7 Hz, 1H), 8.88 (m, 2H), 8.45 (dd, J=8.4, 0.8 Hz, 1H), 8.08 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.95 - 7.89 (m, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.63 - 7.56 (m, 2H), 7.43 - 7.34 (m, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 2.29 (s, 3H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00024
작은 둥근 바닥 플라스크 (RBF)에 탄산세슘 (452 mg, 1.387 mmol), 5-(클로로메틸)니코티노니트릴 (212 mg, 1.387 mmol), 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)벤질)옥시)벤즈알데히드 (280 mg, 0.693 mmol), 및 DMF (10 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 조 혼합물을 10mL DCM으로 희석하고, 4 방울의 수성 0.1M HCl로 중화시키고, 추출하고, 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 생성된 고체를 차가운 (0℃) 디에틸 에테르로 연화처리하여 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 179 mg (37% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 BEH 1.7μm C18, 2 x 50mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 95% HPLC 등급 아세토니트릴/ 10 mM 아세트산암모늄/ 5% HPLC 등급 물), (A = 95% HPLC 등급 물 / 10 mM 아세트산암모늄 / 5% HPLC 등급 아세토니트릴), 3분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 2.07분, m/z 520.3 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.23 (s, 1H), 9.03 (d, J=2.6 Hz, 2H), 8.95 (d, J=2.9 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.44 (d, J=8.1 Hz, 1H), 8.08 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.97 - 7.88 (m, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.63 - 7.54 (m, 3H), 7.38 (d, J=4.0 Hz, 2H), 7.28 (s, 1H), 5.50 (s, 1H), 5.46 (s, 1H), 2.30 (s, 3H).
실시예 1001
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00025
스크류 마개 바이알에 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (40 mg, 0.077 mmol), (R)-2-아미노-3-히드록시-2-메틸프로판산 (27.5 mg, 0.231 mmol), 소듐 트리아세톡시히드로보레이트 (48.9 mg, 0.231 mmol) 및 DMF (3 mL)를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 실온에서 밤새 진탕시켰다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지(XBridge) 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-85% B, 35분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 4.5 mg (10% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 99%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.93 (d, J=4.0 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.44 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.07 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.62 - 7.55 (m, 3H), 7.52 (m, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 2H), 7.13 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.33 (s, 2H), 4.04 (m, 2H), 3.75 - 3.69 (m, 1H), 3.60 - 3.52 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 1.26 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.58분;
ESI-MS(+) m/z = 623.4 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.3 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.66분;
ESI-MS(+) m/z = 623.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.5 (M - H).
하기 실시예를 실시예 1001과 유사한 방식으로 제조하였다:
중간체: (2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00026
조 생성물을 실리카 겔 상에서 25-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)페닐)메탄올 0.48g (99% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.85 (d, J=2.2 Hz, 1H), 8.30 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.06 (dd, J=14.2, 8.3 Hz, 2H), 7.83 - 7.76 (m, 1H), 7.70 - 7.62 (m, 1H), 7.50 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 1H), 7.29 - 7.21 (m, 1H), 5.17 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.60 (d, J=5.4 Hz, 2H), 2.18 (s, 3H).
중간체: 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00027
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)벤질)옥시)벤즈알데히드 0.21g (74% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt (체류 시간) = 1.125분, m/z 403.9 (M + H).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 11.44 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.93 (d, J=2.2 Hz, 1H), 8.18 (d, J=8.6 Hz, 1H), 8.12 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.88 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.65 - 7.55 (m, 3H), 7.40 - 7.36 (m, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.26 (s, 2H), 2.33 (s, 3H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00028
5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 115 mg을 황색 고체로서 수득하였다 (38% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.140분, m/z 520.1 (M + H).
실시예 1002
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00029
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 40-80% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 7.8 mg (16% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 99%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.12 - 8.03 (m, 2H), 7.82 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.67 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.42 - 7.33 (m, 2H), 7.12 (s, 1H), 5.35 (m, 4H), 4.03 (s, 2H), 3.71 - 3.69 (m, 1H), 3.59 - 3.53 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 1.25 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.60분;
ESI-MS(+) m/z = 623.4 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.4 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.71분;
ESI-MS(+) m/z = 623.4 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.3 (M - H).
실시예 1003
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00030
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 25-85% B, 30분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 4.8 mg (10% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 99%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (d, J=5.1 Hz, 2H), 8.86 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.12 - 8.03 (m, 2H), 7.82 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.67 (t, J=7.3 Hz, 1H), 7.61 - 7.55 (m, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.32 (s, 2H), 4.04 (d, J=12.8 Hz, 1H), 3.88 (t, J=6.4 Hz, 1H), 3.26 - 3.17 (m, 1H), 2.99 (m, 1H), 2.25 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 1.96 - 1.87 (m, 1H), 1.68 (d, J=9.9 Hz, 1H), 1.54 (m, 3H), 1.36 (m, 1H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.69분;
ESI-MS(+) m/z = 633.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 631.4 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.75분;
ESI-MS(+) m/z = 633.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 631.4 (M - H).
중간체: (2-메틸-3-(퀴놀린-2-일)페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00031
조 생성물을 실리카 겔 상에서 25-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (2-메틸-3-(퀴놀린-2-일)페닐)메탄올 0.77g (85% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J=8.3 Hz, 1H), 8.18 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.89 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.76 (m, 1H), 7.71 - 7.64 (m, 1H), 7.62 - 7.54 (m, 1H), 7.48 (m, 1H), 7.46 - 7.41 (m, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 1H), 4.80 (d, J=5.6 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H).
5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-2-일)벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00032
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-70% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-2-일)벤질)옥시)벤즈알데히드 0.14g (25% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.05 (s, 1H), 8.48 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.09 - 8.02 (m, 2H), 7.82 (m, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.68 - 7.64 (m, 2H), 7.62 - 7.61 (m, 1H), 7.49 (dd, J=7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.39 (s, 2H), 2.33 (s, 3H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴놀린-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00033
5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 82 mg을 베이지색 고체로서 수득하였다 (46% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.134분, m/z 520.0 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.05 (d, J=1.7 Hz, 2H), 8.57 (m, 1H), 8.48 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.10 - 8.02 (m, 2H), 7.82 (m, 1H), 7.78 - 7.73 (m, 1H), 7.71 - 7.62 (m, 3H), 7.51 (dd, J=7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.32 (s, 1H), 5.55 - 5.46 (m, 4H), 2.40 - 2.33 (m, 3H).
실시예 1004
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-2-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00034
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 30-80% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 16.1 mg (60% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 98%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (d, J=14.3 Hz, 2H), 8.52 (s, 1H), 8.47 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.05 (t, J=7.3 Hz, 2H), 7.81 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 2H), 7.61 - 7.55 (m, 2H), 7.48 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 7.16 (s, 1H), 5.37 (m, 4H), 3.96 (s, 2H), 3.62 (m, 1H), 3.53 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.60분;
ESI-MS(+) m/z = 623.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.4 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.82분;
ESI-MS(+) m/z = 623.4 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.4 (M - H).
중간체: (2-메틸-3-(퀴놀린-6-일)페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00035
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-70% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (2-메틸-3-(퀴놀린-6-일)페닐)메탄올 0.28g (39% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.96 (dd, J=4.3, 1.6 Hz, 1H), 8.23 - 8.12 (m, 2H), 7.74 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.69 (dd, J=8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.46 (dt, J=8.1, 3.9 Hz, 2H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 4.82 (d, J=5.6 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H).
중간체: 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-6-일)벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00036
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-70% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-6-일)벤질)옥시)벤즈알데히드 0.160g (45% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.05 (s, 1H), 8.95 (dd, J=4.3, 1.7 Hz, 1H), 8.44 (dd, J=8.6, 1.0 Hz, 1H), 8.10 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.95 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.77 - 7.68 (m, 2H), 7.62 - 7.55 (m, 2H), 7.42 - 7.36 (m, 2H), 6.90 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 2.27 (s, 3H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴놀린-6-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00037
5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴놀린-6-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 165 mg을 오렌지색 고체로서 수득하였다 (65% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.090분, m/z 520.0 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.05 (m, 2H), 8.95 (dd, J=4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.57 (t, J=2.0 Hz, 1H), 8.48 - 8.41 (m, 1H), 8.11 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.96 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.79 - 7.72 (m, 2H), 7.63 - 7.56 (m, 2H), 7.42 - 7.36 (m, 2H), 7.32 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.47 (s, 2H), 2.30 (s, 3H).
실시예 1005
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00038
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 25-65% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 16.0 mg (33% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 99%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (d, J=15.4 Hz, 2H), 8.94 (d, J=4.0 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.43 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.10 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.98 - 7.90 (m, 1H), 7.74 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.63 - 7.51 (m, 3H), 7.40 - 7.29 (m, 2H), 7.15 (s, 1H), 5.36 (m, 4H), 3.97 (s, 2H), 3.66 - 3.50 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.54분;
ESI-MS(+) m/z = 623.4 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.4 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.82분;
ESI-MS(+) m/z = 623.4 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.4 (M - H).
중간체: (2-메틸-3-(퀴녹살린-2-일)페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00039
조 생성물을 실리카 겔 상에서 20-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (2-메틸-3-(퀴녹살린-2-일)페닐)메탄올 0.69g (79% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.08 (s, 1H), 8.21 - 8.10 (m, 2H), 7.95 - 7.85 (m, 2H), 7.61 - 7.57 (m, 1H), 7.47 (dd, J=7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 1H), 5.24 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.63 (d, J=5.4 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H).
중간체: 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-2-일)벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00040
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-70% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-2-일)벤질)옥시)벤즈알데히드 0.360g (17% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.05 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.15 (m, 2H), 7.92 (m, 2H), 7.71 (m, 2H), 7.47 (m, 2H), 6.87 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 2.38 (s, 3H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴녹살린-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00041
5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴녹살린-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 341 mg을 황색 고체로서 수득하였다 (99% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.384분, m/z 521.0 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 9.05 (dd, J=9.7, 2.0 Hz, 2H), 8.62 - 8.55 (m, 1H), 8.22 - 8.13 (m, 2H), 7.96 - 7.90 (m, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.71 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.58 - 7.57 (m, 1H), 7.46 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 5.55 (m, 4H), 2.41 (s, 3H).
실시예 1006
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-2-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00042
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 25-65% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 4.3 mg (9.4% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 95%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.11 (s, 1H), 9.02 (d, J=15.8 Hz, 2H), 8.51 (s, 1H), 8.22 - 8.11 (m, 2H), 7.99 - 7.87 (m, 2H), 7.65 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.59 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.42 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.37 (m, 4H), 3.94 (s, 2H), 3.65 - 3.49 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.22 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.50분;
ESI-MS(+) m/z = 624.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 622.4 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.77분;
ESI-MS(+) m/z = 624.4 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 622.4 (M - H).
중간체: (3-(이소퀴놀린-3-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00043
조 생성물을 실리카 겔 상에서 25-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (3-(이소퀴놀린-3-일)-2-메틸페닐)메탄올 0.69g (99% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1H), 8.17 (d, J=7.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.82 (m, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 1H), 7.52 - 7.44 (m, 1H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 5.18 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.60 (d, J=5.4 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H).
중간체: 5-클로로-2-히드록시-4-((3-(이소퀴놀린-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00044
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-70% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 5-클로로-2-히드록시-4-((3-(이소퀴놀린-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤즈알데히드 0.407g (33% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.05 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.50 (br. s., 1H), 8.18 (d, J=8.3 Hz, 1H), 8.04 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.83 (t, J=7.4 Hz, 1H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.57 (d, J=6.8 Hz, 1H), 7.48 (d, J=6.8 Hz, 1H), 7.41 - 7.35 (m, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 2.31 (s, 3H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(이소퀴놀린-3-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00045
5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(이소퀴놀린-3-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 86 mg을 황갈색 고체로서 수득하였다 (25% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.109분, m/z 520.1 (M + H).
실시예 1007
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(이소퀴놀린-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00046
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-100% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 7.2 mg (17% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.41 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.19 (d, J=8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.83 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.73 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.60 - 7.54 (m, 2H), 7.47 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.35 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 5.36 (m, 4H), 3.98 (s, 2H), 3.66 - 3.60 (m, 1H), 3.55 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.59분;
ESI-MS(+) m/z = 623.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.4 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.84분;
ESI-MS(+) m/z = 623.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.5 (M - H).
중간체: (3-(이소퀴놀린-7-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00047
조 생성물을 실리카 겔 상에서 25-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (3-(이소퀴놀린-7-일)-2-메틸페닐)메탄올 0.51g (72% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.36 (s, 1H), 8.54 (d, J=5.9 Hz, 1H), 8.04 (m, 2H), 7.89 (d, J=5.9 Hz, 1H), 7.75 (dd, J=8.6, 1.7 Hz, 1H), 7.48 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.31 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.27 - 7.15 (m, 1H), 4.59 (m, 2H), 2.16 (s, 3H).
중간체: 5-클로로-2-히드록시-4-((3-(이소퀴놀린-7-일)-2-메틸벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00048
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 5-클로로-2-히드록시-4-((3-(이소퀴놀린-7-일)-2-메틸벤질)옥시)벤즈알데히드 0.299g (41% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.04 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.54 (d, J=5.8 Hz, 1H), 8.11 - 8.03 (m, 2H), 7.90 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.76 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.57 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.42 - 7.32 (m, 2H), 6.87 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 2.26 (s, 3H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(이소퀴놀린-7-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00049
5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(이소퀴놀린-7-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 319 mg을 황갈색 고체로서 수득하였다 (83% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.065분, m/z 520.2 (M + H).
실시예 1008
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(이소퀴놀린-7-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00050
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-70% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 2 mg (10% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 99%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.38 (s, 1H), 9.02 (m, 2H), 8.59 - 8.47 (m, 2H), 8.12 - 8.01 (m, 2H), 7.90 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.76 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.62 - 7.48 (m, 2H), 7.35 (m, 2H), 7.15 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.34 (s, 2H), 3.98 (br. s., 2H), 3.63 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.53분;
ESI-MS(+) m/z = 623.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.5 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.68분;
ESI-MS(+) m/z = 623.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.5 (M - H).
중간체: (3-(이소퀴놀린-6-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00051
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (3-(이소퀴놀린-6-일)-2-메틸페닐)메탄올 0.333g (42% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.37 (s, 1H), 8.54 (d, J=5.7 Hz, 1H), 8.19 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 2H), 7.64 (dd, J=8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.48 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.31 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.22 (d, J=7.4 Hz, 1H), 5.20 (t, J=5.3 Hz, 1H), 4.59 (d, J=5.0 Hz, 2H), 2.16 (s, 3H).
중간체: 5-클로로-2-히드록시-4-((3-(이소퀴놀린-6-일)-2-메틸벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00052
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 5-클로로-2-히드록시-4-((3-(이소퀴놀린-6-일)-2-메틸벤질)옥시)벤즈알데히드 0.158g (31% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.04 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.55 (d, J=5.8 Hz, 1H), 8.21 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.89 (d, J=6.0 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.66 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.43 - 7.32 (m, 2H), 6.89 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 2.25 (s, 3H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(이소퀴놀린-6-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00053
5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(이소퀴놀린-6-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 136 mg을 오렌지색 고체로서 수득하였다 (67% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.065분, m/z 520.0 (M + H).
실시예 1009
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(이소퀴놀린-6-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00054
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-70% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 추가로 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 45-85% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 1.3 mg (3% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.37 (s, 1H), 9.01 (m, 2H), 8.55 (d, J=5.9 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.21 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.93 - 7.86 (m, 2H), 7.66 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.56 (d, J=6.2 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.13 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 3.94 - 3.86 (m, 2H), 3.53 - 3.46 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.17 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.52분;
ESI-MS(+) m/z = 623.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.5 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.64분;
ESI-MS(+) m/z = 623.1 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 621.5 (M - H).
중간체: 7-브로모-2-클로로퀴녹살린
Figure 112019012812334-pct00055
퀴녹살린-2-올 (10 g, 68.4 mmol) 및 아세트산 (500 mL, 68.4 mmol)을 함유하는 둥근 바닥 플라스크 (RBF)에 브로민 (3.60 mL, 69.9 mmol)을 질소 하에 천천히 적가하였다. 첨가가 완결되었을 때, 적색 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 생성된 조 생성물을 여과하고, 고체를 물 1 L로 세척하고, 1시간 동안 공기 건조시켰다. 고체를 DMSO 10mL에 녹이고, 물 100mL를 첨가하였다. 생성된 연황색 고체를 여과하고, 진공 하에 건조시켜 7-브로모퀴녹살린-2-올 (74%) 12.69g을 수득하였다.
LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 1000% HPLC 등급 아세토니트릴/0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 1분 유지, 유량 0.8mL/분.
LCMS Rt = 0.859분, m/z 226.9 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 12.39 (br.s., 1H), 8.19 (s, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 1H), 7.46 (m, 2H).
RBF에 7-브로모퀴녹살린-2-올 (7.3 g, 32.4 mmol) 및 포스포릴 트리클로라이드 (36.3 mL, 389 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 0℃로 냉각시킨 다음, 60분에 걸쳐 빙수 500mL 내로 천천히 점적하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 30-90% DCM/헥산을 사용하여 정제하여 7-브로모-2-클로로퀴녹살린 5.4g (66.4%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 1000% HPLC 등급 아세토니트릴/0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 1분 유지, 유량 0.8mL/분.
LCMS Rt = 1.275분, m/z 244.8 (M + H).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.06 (s, 1H), 8.35 (d, J=2.3 Hz, 1H), 8.14 - 8.09 (m, 1H), 8.09 - 8.04 (m, 1H).
중간체: (3-(7-브로모퀴녹살린-2-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00056
조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 하기 방법: 메탄올/물/ 트리플루오로아세트산 사용 시마즈 정제용 HPLC (여기서 용매 A는 10% 메탄올 / 90% 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산, 용매 B는 10% 물 / 90% 메탄올 / 0.1% 트리플루오로아세트산, 워터스 선파이어(Waters Sunfire) 5μm C18 19 x 100mm 칼럼 사용, 구배 30-100% B 및 유량 30 mL/분, 15분에 걸침, 이어서 7분 유지)를 사용하여 정제하여, (3-(7-브로모퀴녹살린-2-일)-2-메틸페닐)메탄올 0.204g (73% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나(Phenomenex Luna) 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2.0분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 1.593분, m/z 329.2 (M + H);
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.12 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.36 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.11 (dd, J=8.9, 2.4 Hz, 1H), 8.06 - 8.00 (m, 1H), 7.59 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.47 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 1H), 5.26 (m, 1H), 4.62 (d, J=5.4 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H).
중간체: 4-((3-(7-브로모퀴녹살린-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00057
조 생성물을 에탄올 10mL로 연화처리한 다음, 여과하여 4-((3-(7-브로모퀴녹살린-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드 160 mg (38% 수율)을 담황갈색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.562분, m/z 484.8 (M + H).
중간체: 5-((5-((3-(7-브로모퀴녹살린-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00058
5-((5-((3-(7-브로모퀴녹살린-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 115 mg을 오렌지색 고체로서 수득하였다 (41% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.529분, m/z 600.9 (M + H).
실시예 1010
(R)-2-((4-((3-(7-브로모퀴녹살린-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00059
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 40-80% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 추가로 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 50-90% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 3.4 mg (7% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 97%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.16 (s, 1H), 9.02 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.17 - 8.10 (m, 1H), 8.05 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.66 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.60 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.43 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.37 (s, 4H), 4.03 - 3.86 (m, 3H), 3.65 - 3.50 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.23 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.76분;
ESI-MS(+) m/z = 702.4 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 700.4 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.88분;
ESI-MS(+) m/z = 702.4 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 700.4 (M - H).
중간체: (3-(벤조[d]티아졸-6-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00060
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-60% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (3-(벤조[d]티아졸-6-일)-2-메틸페닐)메탄올 0.577g (95% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.044분, m/z 256.5 (M + H).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.03 (s, 1H), 8.18 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.51 - 7.41 (m, 2H), 7.33 - 7.28 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 4.81 (d, J=5.6 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H).
중간체: 4-((3-(벤조[d]티아졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00061
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 4-((3-(벤조[d]티아졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드 0.500g (32% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.439분, m/z 409.9 (M + H).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 11.46 (s, 1H), 9.74 - 9.68 (m, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.20 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.91 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.59 - 7.47 (m, 3H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 5.24 (s, 2H), 2.28 (s, 3H).
중간체: 5-((5-((3-(벤조[d]티아졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00062
5-((5-((3-(7-브로모퀴녹살린-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 260 mg을 오렌지색 고체로서 수득하였다 (61% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.405분, m/z 526.0 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 9.05 (m, 2H), 8.60 - 8.53 (m, 1H), 8.17 (dd, J=4.9, 3.3 Hz, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.58 (dd, J=6.9, 2.1 Hz, 1H), 7.50 (dd, J=8.4, 1.7 Hz, 1H), 7.39 - 7.34 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.46 (s, 2H), 2.28 (s, 3H).
실시예 1011
(R)-2-((4-((3-(벤조[d]티아졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00063
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-60% B, 25분에 걸침, 이어서 100% B에서 7-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 16 mg (35% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.43 (s, 1H), 9.03 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 8.21 - 8.10 (m, 2H), 7.57 (s, 1H), 7.55 - 7.45 (m, 2H), 7.35 - 7.27 (m, 2H), 7.15 (s, 1H), 5.43 - 5.25 (m, 4H), 3.98 (s, 2H), 3.68 - 3.54 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.59분;
ESI-MS(+) m/z = 629.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 627.7 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.68분;
ESI-MS(+) m/z = 629.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 627.7 (M - H).
중간체: (3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00064
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-60% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸페닐)메탄올 0.461g (74% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.005분, m/z 240.1 (M + H);
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.16 (s, 1H), 7.71 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.63 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.44 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.33 (dd, J=8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.30 (m, 1H), 7.24 (m, 1H), 4.80 (d, J=5.4 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H).
중간체: 4-((3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00065
조 생성물을 실리카 겔 상에서 0-70% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 4-((3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드 0.320g (40% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.400분, m/z 394.3 (M + H).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 11.45 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.75 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.65 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 3H), 5.24 (s, 2H), 2.26 (s, 3H).
중간체: 5-((5-((3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00066
5-((5-((3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 412 mg을 오렌지색 고체로서 수득하였다 (80% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.387분, m/z 510.2 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.05 (m, 2H), 8.82 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.86 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.75 (m, 2H), 7.56 (d, J=6.1 Hz, 1H), 7.42 - 7.28 (m, 4H), 5.51 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 2.26 (s, 3H).
실시예 1012
(R)-2-((4-((3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00067
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-80% B, 25분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 16 mg (33% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (m, 2H), 8.81 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.85 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.51 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.38 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.30 (q, J=7.9 Hz, 2H), 7.14 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.32 (s, 2H), 3.98 (s, 2H), 3.67 - 3.60 (m, 1H), 3.55 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.25 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.55분;
ESI-MS(+) m/z = 613.1 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 611.2 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.61분;
ESI-MS(+) m/z = 613.0 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 611.1 (M - H).
중간체: (3-(벤조푸란-5-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00068
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-60% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (3-(벤조푸란-5-일)-2-메틸페닐)메탄올 1.03g (55% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.68 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.55 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.51 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.44 - 7.40 (dd, J=1.5, 8.6 Hz, 1H), 7.33 - 7.28 (m, 1H), 7.28 - 7.25 (m, 1H), 7.24 - 7.21 (m, 1H), 6.83 (dd, J=2.1, 0.9 Hz, 1H), 4.80 (br. s., 2H), 2.27 (s, 3H).
중간체: 4-((3-(벤조푸란-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00069
조 생성물을 실리카 겔 상에서 0-50% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 4-((3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드 0.215g (41% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+/-)로 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 95% HPLC 등급 아세토니트릴/ 10mM 아세트산암모늄/ 5% HPLC 등급 물), (A = 95% HPLC 등급 물 / 10mM 아세트산암모늄 / 5% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 2.17분, m/z 391.31 (M - H).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 11.18 (s, 1H), 10.05 (s, 1H), 8.06 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.68 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.58 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.52 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.37 - 7.21 (m, 2H), 7.04 - 6.99 (m, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.34 (s, 2H), 2.23 (s, 3H).
중간체: 5-((5-((3-(벤조푸란-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00070
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm 칼럼, 이동상 A는 5:95 아세토니트릴/물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴/물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 55-95% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 용매를 증발시켜 5-((5-((3-(벤조푸란-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 240 mg (82% 수율)을 수득하였다.
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 0.5 mL/분; 검출: UV 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 2.41분;
ESI-MS(+) m/z = 509.0 (M + H)
분석 조건 2: 체류 시간 = 3.21분;
ESI-MS(+) m/z = 509.2 (M + H)
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.08 - 8.91 (m, 2H), 8.57 (s, 1H), 8.06 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.68 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.62 - 7.57 (m, 1H), 7.54 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.41 - 7.22 (m, 4H), 7.01 (d, J=1.4 Hz, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 2.26 (s, 3H).
실시예 1013
(R)-2-((4-((3-(벤조푸란-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00071
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 45-85% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 10 mg (28% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (m, 2H), 8.52 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.67 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.57 (m, 2H), 7.48 (m, 1H), 7.26 (m, 3H), 7.14 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 5.43 - 5.25 (m, 4H), 4.04 - 3.87 (m, 2H), 3.71 - 3.51 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.88분;
ESI-MS(+) m/z = 612.9 (M + H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 3.35분;
ESI-MS(+) m/z = 612.0 (M + H).
실시예 1014
(S)-2-((4-((3-(벤조푸란-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-5-구아니디노펜탄산
Figure 112019012812334-pct00072
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 25-65% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 24 mg (58% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 96%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.05 - 8.95 (m, J=8.1 Hz, 2H), 8.46 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.66 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.49 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.32 - 7.19 (m, 3H), 7.10 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 5.33 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 3.73 (d, J=13.6 Hz, 1H), 3.66 - 3.58 (m, 1H), 3.16 - 3.03 (m, 1H), 3.03 - 2.94 (m, 1H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.62 - 1.40 (m, 4H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.73분;
ESI-MS(+) m/z = 668.0 (M + H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 3.29분;
ESI-MS(+) m/z = 668.1 (M + H).
실시예 1015
2-((4-((3-(벤조푸란-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00073
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 45-85% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 11.5 mg (33% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (m, 2H), 8.53 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.67 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.58 (m, 2H), 7.50 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.32 - 7.21 (m, 3H), 7.15 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 5.35 (s, 2H), 5.33 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.28 (m, 6H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3.5분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3.5분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.90분;
ESI-MS(+) m/z = 596.0 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 594.2 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 3.35분;
ESI-MS(+) m/z = 596.0 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 594.2 (M - H).
중간체: (3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00074
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-60% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸페닐)메탄올 0.470g (55% 수율)을 오렌지색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 0.987분, m/z 240.1 (M + H).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.15 (s, 1H), 7.82 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.52 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 2H), 7.25 (d, J=1.2 Hz, 1H), 4.80 (s, 2H), 2.25 (s, 3H).
중간체: 4-((3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00075
조 생성물을 실리카 겔 상에서 0-50% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 4-((3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드 0.190g (34% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 1.973분, m/z 394.3 (M - H).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 11.18 (br. s., 1H), 10.05 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.88 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.75 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.55 (d, J=6.1 Hz, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 3H), 6.89 (s, 1H), 5.35 (s, 2H), 2.24 (s, 3H).
중간체: 5-((5-((3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00076
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm 칼럼, 이동상 A는 5:95 메탄올/물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 메탄올/물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 60-100% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 10-분 유지, 유량 20 mL/분. 용매를 증발시켜 5-((5-((3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 271 mg (72% 수율)을 수득하였다.
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 0.5 mL/분; 검출: UV 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 2.12분;
ESI-MS(+) m/z = 510.1 (M + H)
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.98분;
ESI-MS(+) m/z = 510.1 (M + H)
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.04 (m, 2H), 8.80 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.88 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.78 - 7.73 (m, 2H), 7.57 (dd, J=7.2, 1.5 Hz, 1H), 7.40 - 7.28 (m, 4H), 5.51 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 2.27 (s, 3H).
실시예 1016
2-((4-((3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00077
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 25-65% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 12.4 mg (36% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (m, 2H), 8.80 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.88 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.53 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.41 - 7.26 (m, 3H), 7.15 (s, 1H), 5.34 (m, 4H), 3.88 (s, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.27 (s, 6H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.54분;
ESI-MS(+) m/z = 597.2 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 595.2 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.57분;
ESI-MS(+) m/z = 597.2 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 595.3 (M - H).
실시예 1017
(R)-2-((4-((3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00078
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 10-100% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 20.3 mg (61% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.87 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.50 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 3H), 7.12 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.68 (m, 1H), 3.54 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.26 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3.5분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3.5분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.70분;
ESI-MS(+) m/z = 613.1 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 611.1 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 3.27분;
ESI-MS(+) m/z = 613.2 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 611.0 (M - H).
중간체: (3-(벤조푸란-6-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00079
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-60% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (3-(벤조푸란-6-일)-2-메틸페닐)메탄올 0.486g (56% 수율)을 백색 발포체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.67 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.63 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 1H), 7.33 - 7.28 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.19 (dd, J=7.9, 1.3 Hz, 1H), 6.83 (dd, J=2.1, 0.9 Hz, 1H), 4.80 (br. s., 2H), 2.27 (s, 3H).
중간체: 4-((3-(벤조푸란-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00080
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-60% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 4-((3-(벤조푸란-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드 0.603g (60% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.05 (s, 1H), 8.05 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.74 - 7.71 (m, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 2H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.22 (m, 1H), 7.03 (dd, J=2.2, 0.9 Hz, 1H), 6.91 - 6.86 (m, 1H), 5.34 (s, 2H), 2.25 (s, 3H).
중간체: 5-((5-((3-(벤조푸란-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00081
5-((5-((3-(벤조푸란-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 493 mg을 황색 분말로서 수득하였다 (75% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 1.509분, m/z 509.15 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.09 - 8.97 (m, 2H), 8.56 (t, J=2.0 Hz, 1H), 8.05 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.81 - 7.70 (m, 2H), 7.60 - 7.51 (m, 2H), 7.37 - 7.29 (m, 3H), 7.22 (dd, J=7.9, 1.4 Hz, 1H), 7.03 (dd, J=2.2, 0.9 Hz, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.41 (s, 2H), 2.27 (s, 3H).
실시예 1018
2-((4-((3-(벤조푸란-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00082
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-60% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 4.9 mg (11% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 98%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-δ) δ 9.02 (d, J=15.4 Hz, 2H), 8.51 (br. s., 1H), 8.02 (br. s., 1H), 7.73 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.53 (br. s., 1H), 7.48 (m, 1H), 7.32 - 7.24 (m, 2H), 7.20 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.13 (br. s., 1H), 7.02 (br. s., 1H), 5.33 (m, 4H), 3.92 (s, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.27 (s, 6H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.85분;
ESI-MS(+) m/z = 596.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 594.6 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.86분;
ESI-MS(+) m/z = 596.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 594.6 (M - H).
실시예 1019
(R)-2-((4-((3-(벤조푸란-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00083
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 10-50% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 추가로 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 45-85% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 8.2 mg (18% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 98%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.72 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.47 (d, J=6.1 Hz, 1H), 7.32 - 7.22 (m, 2H), 7.18 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.29 (s, 2H), 3.99 (br. s., 2H), 3.88 (m, 1H), 3.56 (m, 1 H), 2.24 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.81분;
ESI-MS(+) m/z = 612.6 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 610.6 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.85분;
ESI-MS(+) m/z = 612.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 610.5 (M - H).
실시예 1020
(S)-1-(4-((3-(벤조푸란-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00084
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-60% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 추가로 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 40-80% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 7.3 mg (15% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 96%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 - 8.95 (m, 2H), 8.45 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.72 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.48 (d, J=6.2 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.32 - 7.23 (m, 2H), 7.19 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.27 (s, 2H), 3.82 (br. s., 2H), 2.90 - 2.77 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.16 (m, 1H), 1.79 - 1.59 (m, 3H), 1.30 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.95분;
ESI-MS(+) m/z = 622.6 (M + H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.90분;
ESI-MS(+) m/z = 622.6 (M + H).
중간체: (3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00085
조 생성물을 실리카 겔 상에서 10-60% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 (3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸페닐)메탄올 0.71g (98% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.06 (s, 1H), 8.07 (d, J=1.2 Hz, 1H), 8.01 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.45 (dd, J=7.1, 1.5 Hz, 1H), 7.41 (dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 2H), 4.81 (d, J=5.6 Hz, 2H), 2.31 - 2.25 (s, 3H).
중간체: 4-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00086
조 생성물을 실리카 겔 상에서 0-60% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 정제하여 4-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드 0.234g (21% 수율)을 황색 분말로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 2.053분, m/z 410.3 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.05 (s, 1H), 9.47 (s, 1H), 8.26 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.01 (d, J=1.4 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.55 (dd, J=7.2, 1.7 Hz, 1H), 7.45 (dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 6.89 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 2.26 (s, 3H).
중간체: 5-((5-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00087
5-((5-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 231 mg을 황색 고체로서 수득하였다 (81% 수율). LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 2.037분, m/z 526.3 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.47 (s, 1H), 9.05 (m, 2H), 8.57 (t, J=2.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J=1.3 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.62 - 7.54 (m, 1H), 7.47 (dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.38 - 7.35 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.46 (s, 2H), 2.29 (s, 3H).
실시예 1021
(R)-2-((4-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00088
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-60% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 5.8 mg (12% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 99%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.45 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.24 (d, J=8.1 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.44 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.13 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.62 (m, 1H), 3.54 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.62분;
ESI-MS(+) m/z = 629.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 627.5 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.65분;
ESI-MS(+) m/z = 629.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 627.5 (M - H).
실시예 1022
2-((4-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00089
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 30-70% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 3.8 mg (8% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.46 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.25 (d, J=8.1 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 7.44 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 5.34 (m, 4H), 3.90 (s, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.27 (s, 6H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.65분;
ESI-MS(+) m/z = 613.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 611.5 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.65분;
ESI-MS(+) m/z = 613.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 611.5 (M - H).
실시예 1023
(S)-1-(4-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00090
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 25-65% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 9.7 mg (20% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.45 (s, 1H), 9.00 (m, 2H), 8.45 (s, 1H), 8.24 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 1H), 7.44 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.33 - 7.28 (m, 2H), 7.13 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 3.85 - 3.74 (m, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.21 - 2.12 (m, 1H), 1.79 - 1.60 (m, 3H), 1.29 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.78분;
ESI-MS(+) m/z = 639.6 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 637.6 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.68분;
ESI-MS(+) m/z = 639.6 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 637.5 (M - H).
중간체: 5-((5-((3-(1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00091
작은 밀봉된 튜브에 5-브로모-1H-벤즈이미다졸 (22.79 mg, 0.116 mmol), 디옥산 (1446 μl), 물 (482 μl), 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (50 mg, 0.096 mmol), 탄산세슘 (94 mg, 0.289 mmol), 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (2.82 mg, 3.86 μmol)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 혼합물을 질소로 x3 탈기/플러싱하였다. 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 농축시켜 거의 건조시키고, 아세토니트릴 4 mL에 녹이고, 아세토니트릴/물/0.1% 트리플루오로아세트산 사용 시마즈 정제용 HPLC (여기서 용매 A는 10% 아세토니트릴 / 90% 물/ 0.1% 트리플루오로아세트산, 용매 B는 10% 물 / 90% 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산, 엑스테라(XTERRA) 5μ C18 19x100mm 칼럼 사용, 구배 30-100% B 및 유량 25 mL/분, 15분에 걸침, 이어서 10분 유지)를 사용하여 정제하여, 5-((5-((3-(1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴, TFA 염 21.4 mg (36% 수율)을 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 1.472분, m/z 509.4 (M + H).
실시예 1024
(R)-2-((4-((3-(1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00092
바이알에 DMF (1 mL), 아세트산 (0.111 mL), 5-((5-((3-(1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴, TFA (21.4 mg, 0.034 mmol), 2-메틸-D-세린 (12.28 mg, 0.103 mmol), 및 보란-2-피콜린 착물 (5.51 mg, 0.052 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 실온에서 밤새 진탕시켰다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 15-55% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 7 mg (33% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 98%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.66 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.53 - 7.43 (m, 2H), 7.27 (m, 2H), 7.18 - 7.09 (m, 2H), 5.37 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.64 (m, 1 H), 3.57 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.25 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.31분;
ESI-MS(+) m/z = 612.6 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 610.6 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.32분;
ESI-MS(+) m/z = 612.5 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 610.5 (M - H).
중간체: 2-(5-브로모-1H-벤조[d]이미다졸-1-일)-N,N-디메틸에탄아민 및 2-(6-브로모-1H-벤조[d]이미다졸-1-일)-N,N-디메틸에탄아민
Figure 112019012812334-pct00093
RBF에 DMSO (3 mL), 2-클로로-N,N-디메틸에탄아민 HCl 염 (219 mg, 1.523 mmol), 및 5-브로모-1H-벤즈이미다졸 (250 mg, 1.269 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 분말 무수 수산화나트륨 (228 mg, 5.71 mmol)을 첨가하였다. RBF을 밀봉하고, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 밤새 교반하였다. 조 혼합물을 10mL 물로 희석하고, 6g 워터스 HLB 카트리지를 통과시켰다. 카트리지를 추가의 물의 30mL x2로 플러싱하였다. 생성물을 메탄올 60mL로 용리시킨 다음, 증발시켜 2-(5-브로모-1H-벤조[d]이미다졸-1-일)-N,N-디메틸에탄아민 및 2-(6-브로모-1H-벤조[d]이미다졸-1-일)-N,N-디메틸에탄아민의 1:1 혼합물 351.6 mg (93% 수율)을 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 1000% HPLC 등급 아세토니트릴/0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 /0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 1분 유지, 유량 0.8mL/분.
LCMS Rt = 0.694분, m/z 267.9 & 269.9 (M + H).
1H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.98 (m, 1H), 7.94 (d, J=1.7 Hz, 0.5H), 7.66 (m, 0.5H), 7.56 (d, J=1.7 Hz, 0.5H), 7.42 - 7.35 (m, 1H), 7.27 (m, 0.5H), 4.21 (m, 2H), 2.71 (m, 2H), 2.33 - 2.25 (m, 6H).
중간체: 5-((4-클로로-5-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 및 5-((4-클로로-5-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00094
밀봉된 튜브에 THF (3614 μl), 물 (1205 μl), 2-(5-브로모-1H-벤조[d]이미다졸-1-일)-N,N-디메틸에탄아민 및 2-(6-브로모-1H-벤조[d] 이미다졸-1-일)-N,N-디메틸에탄아민의 1:1 혼합물 (110 mg, 0.370 mmol), 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (120 mg, 0.231 mmol), 인산칼륨 (147 mg, 0.694 mmol), 및 제2 세대 Xphos 전촉매 (14.56 mg, 0.019 mmol)를 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 혼합물을 질소로 탈기/플러싱하고, 이어서 밤새 75℃에서 가열하였다. 조 반응 혼합물을 1:1 DMF/메탄올 8 mL에 녹이고, 아세토니트릴/물/0.1% 트리플루오로아세트산 사용 시마즈 정제용 HPLC (여기서 용매 A는 10% 아세토니트릴 / 90% 물/ 0.1% 트리플루오로아세트산, 용매 B는 10% 물 / 90% 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산, 엑스테라 5μ C18 30x100mm 칼럼 사용, 구배 20-100% B 및 유량 40 mL/분, 15분에 걸침, 이어서 10분 유지)를 사용하여 정제하여, 5-((4-클로로-5-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴, 2TFA 및 5-((4-클로로-5-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴, 2TFA의 1:1 혼합물 98.7 mg을 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 워터스 액퀴티 BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm 칼럼, 구배 2-98%B (B = 100% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.05% 트리플루오로아세트산), (A = 100% HPLC 등급 물 / 0.05% 트리플루오로아세트산), 1.5분 내, 이어서 0.5분 유지, 유량 0.8 mL/분.
LCMS Rt = 0.964분, m/z 580.30 (M + H).
실시예 1025
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산 및 (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산
Figure 112019012812334-pct00095
바이알에 DMF (1 mL), 아세트산 (0.100 mL), 보란-2-피콜린 착물 (3.97 mg, 0.037 mmol), D-세린 (7.80 mg, 0.074 mmol), 및 5-((4-클로로-5-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴, 2 TFA 및 5-((4-클로로-5-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴, 2 TFA의 1:1 혼합물을 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 실온에서 밤새 진탕시켰다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 메탄올: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 45-85% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 위치이성질체의 1:1 혼합물 5.3 mg (31% 수율, 98% 순도)을 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (m, 2H), 8.52 (br. s., 1H), 8.30 - 8.23 (m, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.20 (d, J=7.3 Hz, 0.5H), 7.15 (m, 1.5H), 5.42 - 5.33 (m, 2H), 5.29 (br. s., 2H), 4.36 (m, 2H), 4.02 - 3.89 (m, 2H), 3.63 (m, 2H), 3.07 (m, 1H), 2.71 - 2.62 (m, 2H), 2.31 - 2.12 (m, 9H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3.5분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3.5분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.30분;
ESI-MS(+) m/z = 669.1 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 667.2 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.89분;
ESI-MS(+) m/z = 669.1 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 667.2 (M - H).
실시예 1026
2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산 및 2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00096
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 10-50% B, 25분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 위치이성질체의 1:1 혼합물 4.2 mg (25% 수율, 97% 순도)을 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (m, 2H), 8.53 (s, 1H), 8.30 - 8.23 (m, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 1H), 7.61 - 7.52 (m, 2H), 7.49 (m, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.22 - 7.11 (m, 2H), 5.34 (m, 4H), 4.41 - 4.32 (m, 2H), 3.88 (s, 2H), 2.73 - 2.62 (m, 2H), 2.36 - 2.05 (m, 9H), 1.26 (s, 6H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3.5분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 메탄올:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3.5분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.49분;
ESI-MS(+) m/z = 667.7 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 665.7 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 2.43분;
ESI-MS(+) m/z = 667.8 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 665.3 (M - H).
중간체: (R)-1-(2-(5-브로모벤조[d]옥사졸-2-일)에틸)피롤리딘-3-올
Figure 112019012812334-pct00097
디클로로메탄 (DCM) (20 mL) 중 2-아미노-4-브로모페놀 (980 mg, 5.21 mmol)에 3-클로로프로피오닐 클로라이드 (0.500 mL, 5.21 mmol)를 실온에서 적가하였다. 분홍색 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 생성물 혼합물에 DCM 5mL 및 3-클로로프로피오닐 클로라이드 0.5당량 (0.250mL, 2.61mmol)을 첨가하였다. 교반을 30분 동안 계속하였다. 조 생성물에 포화 수성 중탄산나트륨 5mL를 교반하면서 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반한 다음, 분리 깔때기로 옮겼다. 생성물을 추출하고, 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 N-(5-브로모-2-히드록시페닐)-3-클로로프로판아미드 1.46g (99% 수율)을 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 1.737분, m/z 280.1 & 282.1 (M + H).
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.19 (br. s., 1H), 9.40 (s, 1H), 8.12 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.08 (dd, J=8.5, 2.2 Hz, 1H), 6.82 (d, J=8.5 Hz, 1H), 3.85 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.93 (t, J=6.2 Hz, 2H).
작은 밀봉된 튜브에 N-(5-브로모-2-히드록시페닐)-3-클로로프로판아미드 (153 mg, 0.55 mmol), 및 폴리인산 (5 mL)을 첨가하였다. 튜브를 밀봉하고, 혼합물을 130℃에서 4시간 동안 가열하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 차가운 수산화암모늄을 pH 7까지 점적하였다. 생성물을 에틸 아세테이트 30mL로 희석하고, 추출하고, 15mL의 1.5M 인산칼륨, 물, 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 증발시켜 5-브로모-2-(2-클로로에틸)벤조[d]옥사졸 및 5-브로모-2-비닐벤조[d]옥사졸의 1:1 혼합물 100.6 mg (70% 수율)을 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 1.750분, m/z 259.9 & 261.9 (M + H) (클로로에틸 생성물에 대해)
1H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.85 (m, 1H), 7.46 (m, 1H), 7.40 (m, 1H), 6.75 (dd, J=17.5, 11.2 Hz, 0.5H), 6.50 (d, J=17.5 Hz, 0.5H), 5.91 (d, J=11.2 Hz, 0.5H), 4.01 (t, J=6.9 Hz, 1H), 3.42 (t, J=6.9 Hz, 1H).
5-브로모-2-(2-클로로에틸)벤조[d]옥사졸 (50 mg, 0.192mmol) 및 5-브로모-2-비닐벤조[d]옥사졸 (50 mg, 0.223mmol)의 1:1 혼합물에 DMF (5 mL), 탄산세슘 (300 mg, 0.921 mmol), 및 (R)-피롤리딘-3-올 히드로클로라이드 (85 mg, 0.691 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 분리 깔때기로 옮겼다. 조 생성물에 물 10mL 및 에틸 아세테이트 25mL를 첨가하고, 생성물을 추출하고, 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 (R)-1-(2-(5-브로모벤조[d] 옥사졸-2-일)에틸)피롤리딘-3-올 60.8 mg (85% 수율)을 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 1.218분, m/z 312.1 (M + H).
1H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.73 (m, 1H), 7.40 - 7.34 (m, 1H), 7.34 - 7.29 (m, 1H), 4.30 (m, 1H), 3.08 (m, 2H), 2.97 (m, 2H), 2.77 (m, 1H), 2.71 - 2.57 (m, 2H), 2.37 (m, 1H), 2.10 (m, 1H), 1.70 (m, 1H).
실시예 1027
(R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(2-(2-(3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00098
밀봉된 튜브에 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (79 mg, 0.152 mmol), THF (4.5 mL), 물 (1.5mL), (R)-1-(2-(5-브로모벤조[d]옥사졸-2-일)에틸)피롤리딘-3-올 (84 mg, 0.228 mmol), 삼염기성 인산칼륨 (64.6 mg, 0.305 mmol), 및 제2 세대 XPhos 전촉매 (5.99 mg, 7.61 μmol)를 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 혼합물을 질소로 탈기/플러싱하고, 이어서 밤새 75℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 오일로 농축시키고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 반응 혼합물을 1:1 DMF/메탄올 8 mL에 녹이고, 아세토니트릴/물/트리플루오로아세트산 사용 시마즈 정제용 HPLC (여기서 용매 A는 10% 아세토니트릴 / 90% 물/ 0.1% 트리플루오로아세트산, 용매 B는 10% 물 / 90% 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산, 워터스 엑스테라 5μm C18 30x100mm 칼럼 사용, 구배 20-100% B 및 유량 25 mL/분, 10분에 걸침, 이어서 10분 유지)를 사용하여 정제하여, (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(2-(2-(3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴, TFA 55.7 mg (48% 수율)을 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS rt = 1.547분, m/z 623.3 (M + H).
1H NMR (500MHz, THF-d8) δ 10.29 (m, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.82 (m, 1H), 7.63 - 7.56 (m, 1H), 7.55 - 7.41 (m, 1H), 7.31 - 7.18 (m, 3H), 7.04 (m, 1H), 6.95 - 6.84 (m, 1H), 5.36 (m, 4H), 4.51 - 4.46 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.63 - 3.51 (m, 4H), 3.05 (t, J=7.2 Hz, 1H), 2.88 (s, 1H), 2.77 (s, 1H), 2.30 (m, 4H), 1.73 (m, 1H).
실시예 1028
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(2-(2-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00099
바이알에 DMF (1.3 mL), 아세트산 (0.130 mL), (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(2-(2-(3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴, TFA (48.6 mg, 0.066 mmol), 2-메틸-D-세린 (19.63 mg, 0.165 mmol), 및 보란-2-피콜린 착물 (8.46 mg, 0.079 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 혼합물을 실온에서 밤새 진탕시켰다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-60% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 7.5 mg (16% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 100%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.73 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.49 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.33 - 7.23 (m, 3H), 7.13 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.30 (s, 2H), 4.22 - 4.13 (m, 1H), 3.94 (s, 2H), 3.61 - 3.58 (m, 1H), 3.52 - 3.50 (m, 1H), 3.16 - 3.08 (m, 2H), 2.96 - 2.87 (m, 2H), 2.80 - 2.73 (m, 1H), 2.62 (m, 1H), 2.50 (m, 1H), 2.36 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.00 - 1.91 (m, 1H), 1.51 (m, 1H), 1.22 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.43분;
ESI-MS(+) m/z = 726.0 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 724.0 (M - H).
분석 조건 2: 체류 시간 = 1.33분;
ESI-MS(+) m/z = 725.9 (M + H),
ESI-MS(-) m/z = 724.0 (M - H).
실시예 1029
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(2-(2-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00100
실시예 1029를 실시예 1028과 유사한 방식으로 제조하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm 칼럼, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 15-65% B, 25분에 걸침, 이어서 100% B에서 5분 유지, 유량 20 mL/분. 물질을 하기 조건을 사용하여 추가로 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유, 및 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유, 구배 15-55% B에서의 아세토니트릴: 물 (0.1% TFA 함유), 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 2TFA 염으로서 3.2 mg이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 96%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.01 (m, 2H), 8.46 (s, 1H), 7.74 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.60 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 3H), 7.14 (s, 1H), 5.35 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.18 (br. s., 1H), 3.80 (d, J=14.0 Hz, 1H), 3.63 (d, J=14.0 Hz, 1H), 3.13 (m, 4H), 2.98 - 2.87 (m, 3H), 2.79 (dd, J=9.8, 6.1 Hz, 1H), 2.65 (m, 1H), 2.38 (dd, J=9.5, 3.7 Hz, 1H), 2.33 - 2.27 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.95 (m, 1H), 1.86 - 1.68 (m, 2H), 1.50 (m, 4H), 1.41 - 1.34 (m, 1H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.468분;
ESI-MS(+) m/z = 736.1 (M + H)
분석 조건 2: 체류 시간 = 1.398분;
ESI-MS(+) m/z = 736.1 (M + H)
중간체: 3-((6-브로모피리딘-2-일)옥시)프로판-1-올
Figure 112019012812334-pct00101
DMF (30 mL) 중 2,6-디브로모피리딘 (4.27 g, 18.03 mmol) 및 5 당량의 1,3-프로판디올 (6.47 mL, 90 mmol)의 용액에 미네랄 오일 (1.081 g, 27.0 mmol) 중 60% 수소화나트륨을 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 10분 동안 교반하고, 빙조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 재냉각시킨 다음, 염수 5mL로 켄칭하였다. 생성물을 에틸 아세테이트 (50mL x 3)로 추출하고, 셀라이트/황산나트륨의 플러그로 통과시키고, 질소의 스트림 하에 밤새 증발시켰다. 생성물을 실리카 겔 상에서 헥산 중 0-70% 에틸 아세테이트를 사용하여 정제하여 3-((6-브로모피리딘-2-일)옥시)프로판-1-올 2.13g (38% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LCMS (ESI+)로 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 1.219분, m/z 233.95 (M + H), 95% 순도.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.43 (t, J=8.2 Hz, 1H), 7.07 (dd, J=8.2, 0.6 Hz, 1H), 6.69 (dd, J=8.2, 0.6 Hz, 1H), 4.49 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.76 (q, J=5.9 Hz, 2H), 2.11 - 1.92 (m, 2H).
중간체: (R)-1-(3-((6-브로모피리딘-2-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-올
Figure 112019012812334-pct00102
섬광 바이알에 3-((6-브로모피리딘-2-일)옥시)프로판-1-올 (100 mg, 0.431 mmol), DCM (2 mL), 및 트리에틸아민 (0.066 mL, 0.474 mmol)을 첨가하였다. 용액을 0℃로 냉각시키고, 메탄술포닐 클로라이드 (0.033 mL, 0.431 mmol)를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 빙조를 제거하고, 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 바이알을 뷔히(Buchi) 회전증발기로 옮기고, 용매를 제거하고, 조 생성물, 3-((6-브로모피리딘-2-일)옥시)프로필 메탄술포네이트를 황갈색 오일로서 수득하였다. 단리된 황갈색 오일에 DMF (10 mL), 6 당량의 (R)-피롤리딘-3-올 히드로클로라이드 (320 mg, 2.59 mmol), 5 당량 아이오딘화나트륨 (323 mg, 2.155 mmol), 및 10 당량 탄산칼륨 (596 mg, 4.31 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 55℃에서 7시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 10 mL 물로 희석하고, 워터스 6g HLB 추출 카트리지를 통과시켰다. 카트리지를 추가의 물 20 mL로 플러싱하고, 생성물을 메탄올 20mL로 용리시켰다. 이어서, 메탄올 용액을 바이오타지(Biotage) 5g SCX-2 카트리지를 통과시켰다. SCX 카트리지를 메탄올 20mL로 플러싱하였다. 목적 생성물을 메탄올 중 2M 암모니아 50mL로 용리시켰다. 휘발성 물질을 질소의 스트림 하에 증발시켜 (R)-1-(3-((6-브로모피리딘-2-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-올 60 mg (44% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다. LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LCMS (ESI+)로 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 1.059분, m/z 302.95 (M + H), 90% 순도.
1H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.41 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.04 (d, J=7.6 Hz, 1H), 6.67 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.41 - 4.30 (m, 3H), 2.93 (m, 1H), 2.73 (d, J=10.1 Hz, 1H), 2.65 - 2.59 (m, 2H), 2.52 (dd, J=10.0, 5.1 Hz, 1H), 2.33 - 2.25 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 2.02 - 1.92 (m, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 1H).
중간체: (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(6-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00103
밀봉된 튜브에 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (52.5 mg, 0.101 mmol), THF (6 mL), 물 (2.000 mL), (R)-1-(3-((6-브로모피리딘-2-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-올 (27.7 mg, 0.092 mmol), 삼염기성 인산칼륨 (48.8 mg, 0.230 mmol), 및 제2 세대 X-Phos 전촉매 (3.62 mg, 4.60 μmol)를 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 혼합물을 질소로 탈기/플러싱하고, 이어서 밤새 80℃에서 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 휘발성 물질을 질소의 스트림 하에 제거하였다. 생성된 유성 고체를 DCM에 녹이고, 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 질소 하에 증발시켜 (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(6-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴을 황색 고체로서 66.6 mg (83%) 수득하였다.
LC/MS 데이터를 시마즈 분석용 LC /마이크로매스 플랫폼 LC (ESI+) 상에서 220nm에서 하기 세트의 조건을 사용하여 수득하였다: 페노메넥스 루나 3μm C18, 2 x 30mm 칼럼, 구배 0-100%B (B = 90% HPLC 등급 아세토니트릴/ 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 물), (A = 90% HPLC 등급 물 / 0.1% 트리플루오로아세트산/ 10% HPLC 등급 아세토니트릴), 2분 내, 이어서 1분 유지, 유량 1 mL/분.
LCMS Rt = 1.480분, m/z 614.25(M + H).
1H NMR (500MHz, CDCl3) δ 10.29 (s, 1H), 8.91 (m, 2H), 8.09 (m, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.66 (dd, J=8.4, 7.3 Hz, 1H), 7.50 - 7.39 (m, 2H), 7.33 (m, 1H), 6.97 (m, 1H), 6.73 (dd, J=8.3, 0.7 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.29 - 5.22 (m, 4H), 4.39 (t, J=6.5 Hz, 2H), 4.32 (m, 1H), 2.93 (m, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.64 (t, J=7.3 Hz, 2H), 2.50 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.28 (m, 1H), 2.23 - 2.12 (m, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 2H), 1.73 (m, 1H).
실시예 1030
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(6-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00104
바이알에 (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(6-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (34 mg, 0.055 mmol), L-피페콜산 (10.74 mg, 0.083 mmol), DMF (1 mL), AcOH (0.111 mL), 및 보란-2-피콜린 착물 (11.86 mg, 0.111 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 실온에서 밤새 진탕시켰다. 조 생성물을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-75% B, 30분에 걸침, 이어서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물 (S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(6-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산의 수율은 4.4 mg (10.4%)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 95.5%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.00 (m, 2H), 8.46 (s, 1H), 7.79 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.54 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.40 - 7.35 (m, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.06 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.79 (d, J=8.2 Hz, 1H), 5.34 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.29 (t, J=6.7 Hz, 2H), 4.21 - 4.10 (m, 1H), 3.77 (d, J=13.7 Hz, 1H), 3.06 (m, 1H), 2.87 (m, 1H), 2.69 (m, 1H), 2.48 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.29 (m, 2H), 2.22 (m, 1H), 2.03 - 1.89 (m, 2H), 1.89 - 1.82 (m, 6H), 1.49 (m, 4H), 1.34 (m, 1H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.358분;
ESI-MS(+) m/z = 727.1 (M + H)
분석 조건 2: 체류 시간 = 1.383분;
ESI-MS(+) m/z = 727.1 (M + H)
실시예 1031
(R)-5-((4-클로로-2-(히드록시메틸)-5-((3-(6-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00105
실시예 1031을 실시예 1030의 반응 혼합물로부터 단리시켰다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 20-75% B, 30분에 걸침, 이어서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 4.6 mg (11% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 95%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.96 (m, 2H), 8.38 (s, 1H), 7.85 - 7.69 (m, 1H), 7.49 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.42 - 7.30 (m, 2H), 7.30 - 7.21 (m, 1H), 7.11 - 6.97 (m, 2H), 6.78 (d, J=7.9 Hz, 1H), 5.32 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 4.27 (m, 2H), 3.88 (m, 1 H), 2.70 (m, 1H), 2.43 (m, 1H), 2.31 (m 4H), 1.95 (m 1H), 1.86 (m, 5 H), 1.51 (m, 1 H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.599분;
ESI-MS(+) m/z = 616.1 (M + H)
분석 조건 2: 체류 시간 = 1.598분;
ESI-MS(+) m/z = 616.1 (M + H)
중간체: (2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)페닐)메탄올
Figure 112019012812334-pct00106
(2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)페닐)메탄올을, THF 중 제2 세대 XPhos 전촉매 및 0.5 M 수성 삼염기성 인산칼륨을 사용함으로써 실온에서 6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)퀴녹살린과 (3-브로모-2-메틸페닐)메탄올 사이의 커플링으로부터 수득하였다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 8.93 - 8.89 (m, 2H), 8.18 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.78 (dd, J=8.7, 1.9 Hz, 1H), 7.51 (dd, J=7.2, 1.6 Hz, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 4.85 (d, J=5.5 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.72 (t, J=5.6 Hz, 1H).
중간체: 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00107
5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤즈알데히드를, THF 중 디이소프로필 아조디카르복실레이트 및 트리페닐포스핀을 사용하여 (2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)페닐)메탄올과 5-클로로-2,4-디히드록시벤즈알데히드 사이의 반응으로부터 수득하였다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 11.47 (s, 1H), 9.77 - 9.71 (m, 1H), 8.95 - 8.88 (m, 2H), 8.20 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.09 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.80 (dd, J=8.7, 1.9 Hz, 1H), 7.62 - 7.55 (m, 2H), 7.44 - 7.35 (m, 2H), 6.68 (s, 1H), 5.27(m, 2H), 2.34 (s, 3H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00108
5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴을, DMF 중 탄산세슘을 사용하여 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤즈알데히드와 5-(클로로메틸)니코티노니트릴 사이의 반응으로부터 수득하였다.
실시예 1032
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00109
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산을, DMF 중 TFA 및 소듐 트리아세톡시보로히드라이드를 사용하여 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴과 (S)-피페리딘-2-카르복실산 사이의 반응으로부터 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 25-65% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.01 (d, J=2.7 Hz, 4H), 8.47 (s, 1H), 8.19 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.03 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.87 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.62 - 7.57 (m, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.41 - 7.35 (m, 2H), 7.15 (s, 1H), 5.40 - 5.34 (m, 2H), 5.32 (s, 2H), 3.79 (d, J=13.7 Hz, 1H), 3.62 (d, J=14.0 Hz, 1H), 3.14 (dd, J=7.3, 4.3 Hz, 1H), 2.93-2.85 (m, 1H) 2.34 - 2.24 (m, 4H), 1.84 - 1.68 (m, 2H), 1.49 (br. s., 3H), 1.37 (br. s., 1H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 0.5 mL/분; 검출: UV 220 nm.
LCMS (주입 1 조건: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt (체류 시간) =1.65분, ESI m/z 634(M+1), 632 (M-1).
LCMS (주입 2 조건: 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=2.52분, ESI m/z 634 (M+1), 632 (M-1).
실시예 1033
(R)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00110
(R)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산을 실시예 1001과 유사한 방식으로 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 및 (R)-피페리딘-2-카르복실산으로부터 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 25-65% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.01 (d, J=2.7 Hz, 4H), 8.47 (s, 1H), 8.19 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.87 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.61 - 7.57 (m, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 7.15 (s, 1H), 5.40 - 5.30 (m, 4H), 3.79 (d, J=13.7 Hz, 1H), 3.62 (d, J=13.7 Hz, 1H), 3.14 (dd, J=7.3, 4.0 Hz, 1H), 2.93-2.85 (m, 1H), 2.34 - 2.25 (m, 4H), 1.85 - 1.68 (m, 2H), 1.49 (br. s., 3H), 1.37 (br. s., 1H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 0.5 mL/분; 검출: UV 220 nm.
LCMS (주입 1 조건: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=1.60분, ESI m/z 634 (M+1), 632 (M-1).
LCMS (주입 2 조건: 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=2.52분, ESI m/z 634 (M+1), 632 (M-1).
실시예 1034
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산
Figure 112019012812334-pct00111
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산을 실시예 1001과 유사한 방식으로 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 및 (R)-2-아미노-3-히드록시프로판산으로부터 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 20-60% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.07 - 8.99 (m, 4H), 8.54 (s, 1H), 8.20 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.03 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.87 (dd, J=8.5, 1.8 Hz, 1H), 7.59 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 7.18 (s, 1H), 5.43 - 5.33 (m, 4H), 4.07 - 3.98 (m, 2H), 3.74 (dd, J=11.3, 4.3 Hz, 1H), 3.67-3.61 (m, 1H), 3.22 - 3.17 (m, 1H), 2.32 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 0.5 mL/분; 검출: UV 220 nm.
LCMS (주입 1 조건: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=1.73분, ESI m/z 610 (M+1), 608 (M-1).
LCMS (주입 2 조건: 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=2.47분, ESI m/z 610 (M+1), 608 (M-1).
실시예 1035
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00112
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산을 실시예 1001과 유사한 방식으로 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 및 (R)-2-아미노-3-히드록시-2-메틸프로판산으로부터 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 15-55% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (d, J=1.5 Hz, 1H), 9.03 - 8.98 (m, 3H), 8.52 (s, 1H), 8.19 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.86 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.60 - 7.54 (m, 2H), 7.42 - 7.34 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 5.36 (d, J=11.6 Hz, 4H), 3.95 (s, 2H), 3.63 - 3.58 (m, 1H), 3.53 (d, J=11.3 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.23 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 0.5 mL/분; 검출: UV 220 nm.
LCMS (주입 1 조건: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=1.54분, ESI m/z 624 (M+1), 622 (M-1).
LCMS (주입 2 조건: 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=2.50분, ESI m/z 624 (M+1), 622 (M-1).
실시예 1036
(S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00113
(S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산을 실시예 1001과 유사한 방식으로 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 및 (S)-2-아미노-3-히드록시-2-메틸프로판산으로부터 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 15-55% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (d, J=1.5 Hz, 1H), 9.03 - 8.99 (m, 3H), 8.52 (s, 1H), 8.19 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.02 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.86 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.59 - 7.55 (m, 2H), 7.41 - 7.34 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 5.36 (d, J=11.6 Hz, 4H), 3.95 (s, 2H), 3.63 - 3.59 (m, 1H), 3.53 (d, J=11.3 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0%B, 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.5-분 유지; 유량: 0.5 mL/분; 검출: UV 220 nm.
LCMS (주입 1 조건: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=1.62분, ESI m/z 624 (M+1), 622 (M-1).
LCMS (주입 2 조건: 메탄올:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=2.50분, ESI m/z 624 (M+1), 622 (M-1).
중간체: 3-브로모-1-(3-클로로프로필)피리딘-2(1H)-온 및 3-브로모-1-(3-브로모프로필)피리딘-2(1H)-온
Figure 112019012812334-pct00114
DMF (13 mL) 중 3-브로모피리딘-2(1H)-온 (500 mg, 2.87 mmol)의 용액에 K2CO3 (794 mg, 5.75 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 1-브로모-3-클로로프로판 (0.283 mL, 2.87 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 19시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하였다. 잔류물을 DCM 중에 용해시켰다. 유기 층을 물, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시킨 다음, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/DCM (0-50%)의 구배로 용리시키면서 정제하여 목적 화합물 (352mg, 49%)의 혼합물을 수득하였다.
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 7.77 (dd, J=7.3, 1.9 Hz, 1H), 7.39 - 7.35 (m, 1H), 6.11 (t, J=6.9 Hz,1H), 4.22 - 4.15 (m, 2H), 3.61 - 3.54 (m, 1.5H), 3.42 (t, J=6.1 Hz, 0.5H), 2.41 - 2.35 (m, 0.5H), 2.30 (dt, J=12.4, 6.4 Hz, 1.5H). 1H NMR 스펙트럼에 기초하여: 3-브로모-1-(3-클로로프로필)피리딘-2(1H)-온은 75%이고, 3-브로모-1-(3-브로모프로필)피리딘-2(1H)-온 (76)은 25%였다.
중간체: 5-((4-클로로-5-((3-(1-(3-클로로프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00115
5-((4-클로로-5-((3-(1-(3-클로로프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴을, THF 중 제2 세대 XPhos 전촉매 및 0.5 M 수성 삼염기성 인산칼륨을 사용하여 3-브로모-1-(3-클로로프로필)피리딘-2(1H)-온 및 3-브로모-1-(3-브로모프로필)피리딘-2(1H)-온의 혼합물을 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴과 커플링하는 것으로부터 수득하였다.
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 10.32 - 10.27 (m, 1H), 8.97 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.88 (d, J=1.9 Hz, 1H), 8.19 (t, J=2.0 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.46 (dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.35 (m, 1H), 7.27 - 7.22 (m, 1H), 7.22 - 7.18 (m, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.34 (t, J=6.8 Hz, 1H), 5.27 (d, J=6.0 Hz, 2H), 5.17 (s, 2H), 4.24 - 4.17 (m, 2H), 3.61 (t, J=6.1 Hz, 2H), 2.33 - 2.25 (m, 5H).
중간체: (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(1-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00116
DMF (8 mL) 중 5-((4-클로로-5-((3-(1-(3-클로로프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (304mg, 0.540 mmol) (77), (R)-피롤리딘-3-올, HCl (100 mg, 0.811 mmol) 및 K2CO3 (112 mg, 0.811 mmol), 아이오딘화나트륨 (81 mg, 0.540 mmol)의 교반 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 가열하였다. 용매를 제거하였다. 잔류물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 1회 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염수로 세척한 다음, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과에 의해 제거하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 (바이오타지 25s, 0-20% MeOH/DCM) 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 145 mg을 수득하였다.
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 10.29 (s, 1H), 8.98 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.87 (d, J=1.9 Hz, 1H), 8.22 (t, J=2.0 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.47 - 7.46 (m, 1H), 7.39 - 7.34 (m, 2H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 6.46 - 6.44 (m, 1H), 6.32 - 6.28 (m, 1H),5.37 (br, s 2H), 5.16 (s, 2H), 4.34 (ddt, J=7.0, 4.7, 2.1 Hz, 1H), 4.12 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.91 (td, J=8.6, 4.8 Hz, 1H), 2.72 (d, J=9.9 Hz, 1H), 2.55 - 2.47 (m, 3H), 2.31 - 2.24 (m, 4H), 2.22 - 2.14 (m, 1H), 2.05 - 1.96 (m, 2H), 1.75 (dt, J=13.5, 6.7 Hz, 1H).
실시예 1037
(S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00117
2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산을, MeOH 중 보란-2-피콜린 착물 및 아세트산을 사용하여 (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(1-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴과 (S)-2-아미노-3-히드록시-2-메틸프로판산의 커플링으로부터 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 5-45% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (d, J=1.8 Hz, 1H), 9.00 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.73 (dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.43 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.35 (dd, J=6.6, 1.8 Hz, 1H), 7.22 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.13 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.32 (t, J=6.8 Hz, 1H), 5.34 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.17 (br. s., 1H), 4.01 - 3.94 (m, 4H),, 2.72 - 2.65 (m, 1H), 2.57 - 2.53 (m, 2H), 2.45 - 2.35 (m, 3H), 2.29 (dd, J=9.5, 3.3 Hz, 1H),2.16-212 (m,1H), 2.14 (s, 3H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.85 - 1.75 (m, 2H), 1.53 (dd, J=8.4, 4.8 Hz, 1H), 1.23(s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: UV 220 nm.
LCMS (주입 1 조건: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=1.185분, ESI m/z 716 (M+1), 714 (M-1).
LCMS (주입 2 조건: 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유)
Rt=1.182분, ESI m/z 716 (M+1), 714 (M-1).
실시예 1038
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00118
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산을 실시예 1006과 유사한 방식으로 (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(1-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴과 (R)-2-아미노-3-히드록시-2-메틸프로판산 사이의 반응으로부터 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 5-45% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (d, J=1.8 Hz, 1H), 9.00 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.73 (dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.43 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.35 (dd, J=6.6, 2.2 Hz, 1H), 7.22 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.32 (t, J=6.8 Hz, 1H), 5.34 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.17 (br. s., 1H), 4.01 - 3.94 (m, 4H), 2.69 (dd, J=9.5, 6.2 Hz, 1H), 2.56 - 2.53 (m, 2H), 2.43 - 2.36 (m, 3H), 2.28 (dd, J=9.5, 3.7 Hz, 1H), 2.16 - 2.11 (m, 1H), 2.14(s, 3H), 2.01 - 1.93 (m, 1H), 1.85 - 1.75 (m, 2H), 1.58 - 1.49 (m, 1H), 1.23 (s, 3H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: UV 220 nm.
LCMS (주입 1 조건: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=1.203분, ESI m/z 716 (M+1), 714 (M-1).
LCMS (주입 2 조건: 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유)
Rt=1.158분, ESI m/z 716 (M+1), 714 (M-1).
실시예 1039
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00119
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산을 실시예 1006과 유사한 방식으로 (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(1-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 및 (S)-피페리딘-2-카르복실산으로부터 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 10-50% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.01 (s, 2H), 8.46 (s, 1H), 7.74 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 2H), 7.37 - 7.34 (m, 1H), 7.23 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.13 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.32 (t, J=6.8 Hz, 1H), 5.33 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 4.17 (br. s., 1H), 4.02 - 3.95 (m, 2H), 3.85 (d, J=13.6 Hz, 1H), 3.68 (d, J=13.6 Hz, 1H), 3.19 - 3.11 (m, 1H), 2.95-2.87 (m,1H), 2.69 (dd, J=9.7, 6.4 Hz, 1H), 2.55 (m, 2H), 2.45 - 2.36 (m, 3H), 2.32 - 2.26 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.01 - 1.93 (m, 1H), 1.82 (t, J=6.6 Hz, 3H), 1.75-1.64 (m,1H), 1.50 (br. s., 4H), 1.37 (br. s., 1H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: UV 220 nm.
LCMS (주입 1 조건: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=1.218분, ESI m/z 726 (M+1), 724 (M-1).
LCMS (주입 2 조건: 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유)
Rt=1.218분, ESI m/z 726 (M+1), 724 (M-1).
실시예 1040
(S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산
Figure 112019012812334-pct00120
(S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산을 실시예 1006과 유사한 방식으로 (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(1-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 및 (S)-2-아미노-3-히드록시프로판산으로부터 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 15-50% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (d, J=1.5 Hz, 1H), 9.01 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.73 (dd, J=6.6, 1.8 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.43 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.35 (dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.23 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.13 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.32 (t, J=6.8 Hz, 1H), 5.34 (d, J=7.3 Hz, 2H), 5.27 (s, 2H), 4.17 (br. s., 1H), 4.05 - 3.94 (m, 4H), 3.73 - 3.67 (m, 1H), 3.64 - 3.58 (m, 1H), 3.17 - 3.12 (m, 1H), 2.75 - 2.67 (m, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 1H), 2.46 - 2.38 (m, 3H), 2.30 (dd, J=9.5, 3.7 Hz, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.82 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.58 - 1.50 (br, s, H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: UV 220 nm.
주입 2 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: UV 220 nm.
LCMS (주입 1 조건: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유)
Rt=1.161분, ESI m/z 702 (M+1), 700 (M-1).
LCMS (주입 2 조건: 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유)
Rt=1.158분, ESI m/z 702 (M+1), 700 (M-1).
실시예 1041
(S)-1-(4-((3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00121
작은 밀봉된 튜브에 THF (2 mL), 물 (0.667 mL), 5-브로모벤족사졸 (13.16 mg, 0.066 mmol), (S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산 (35 mg, 0.055 mmol), 삼염기성 인산칼륨 (23.51 mg, 0.111 mmol), 및 제2 세대 XPhos 전촉매 (2.179 mg, 2.77 μmol)를 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 혼합물을 질소로 탈기/플러싱한 다음, 밤새 75℃에서 가열하였다.
조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 25-65% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 추가로 정제하였다: 워터스 엑스브리지 5μm C18, 19 x 200 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 이동상 B는 95:5 아세토니트릴: 물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 구배 25-65% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지, 유량 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 4.2 mg (12% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정 순도는 95%였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.93 (m, 2H), 8.71 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.51 - 7.46 (m, 1H), 7.44 - 7.32 (m, 1H), 7.30 - 7.11 (m, 2H), 7.03 (m, 1H), 6.54 (m, 1H), 5.28 (m, 2H), 5.17 (m, 2H), 3.71 (d, J=13.7 Hz, 1H), 3.49 (d, J=13.7 Hz, 1H), 3.04 - 2.97 (m, 1H), 2.89 - 2.80 (m, 1H), 2.25 - 2.18 (m, 4H), 1.70 (m, 2H), 1.43 (m, 3H), 1.34 - 1.23 (m, 1H).
2종의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다.
주입 1 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 10mM 아세트산암모늄 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
주입 2 조건: 워터스 액퀴티 UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, 여기서 이동상 A는 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B는 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유, 온도 50℃, 구배 0-100% B, 3분에 걸침, 이어서 100% B에서 0.75-분 유지, 유량 1.0 mL/분, UV 파장 220 nm.
분석 조건 1: 체류 시간 = 1.696분;
ESI-MS(+) m/z = 623.0 (M + H)
분석 조건 2: 체류 시간 = 1.874분;
ESI-MS(+) m/z = 623.1 (M + H)
실시예 2001 내지 2016을 하기 기재된 바와 같이 제조하였고, 이들 실시예에 사용된 HPLC LC/MS 조건을 하기 열거하였다:
LC/MS 조건 A:
칼럼 = 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm
출발 %B = 2; 최종 %B = 98
구배 시간 = 1.5분; 정지 시간 = 2 또는 2.5분
유량 = 0.8 mL/분; 파장 = 220 nm 또는 254 nm
용매 A = 100% 물 / 0.05% TFA
용매 B = 100% ACN / 0.05% TFA, (ACN = 아세토니트릴)
오븐 온도 = 40℃
LC/MS 조건 B:
칼럼 = 페노메넥스-루나 C18, 2.0 X 50 mm, 3 μm
출발 %B = 0; 최종 %B = 100
구배 시간 = 4분; 정지 시간 = 5 또는 6분
유량 = 0.8 mL/분; 파장 = 220 nm 또는 254 nm
용매 A = 5% ACN / 95% 물 / 10 mM NH4OAc
용매 B = 95% ACN / 5% 물 / 10 mM NH4OAc
오븐 온도 = 40℃
LC/MS 조건 C:
칼럼 = 액퀴티 UPLC BEH, C18 2.1 X 50 mm, 1.7μ
출발 %B = 0; 최종 %B = 100
구배 시간 = 2분; 정지 시간 = 3분
유량 = 0.8 mL/분; 파장 = 220 nm 또는 254 nm
용매 A = 10% MeOH / 90% H2O / 0.1% TFA
용매 B = 90% MeOH / 10% H2O / 0.1% TFA
오븐 온도 = 40℃
LC/MS 조건 D:
칼럼 = 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm
출발 %B = 2; 최종 %B = 98
구배 시간 = 1.5분; 정지 시간 = 1.6분
유량 = 0.8 mL/분; 파장 = 220 nm 또는 254 nm
용매 A = 100% 물 / 0.05% TFA
용매 B = 100% ACN / 0.05% TFA
오븐 온도 = 50℃
LC/MS 조건 E:
칼럼 = 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm
출발 %B = 0; 최종 %B = 100
구배 시간 = 3분; 정지 시간 = 3.75분
유량 = 1.0 mL/분; 파장 = 220 nm
용매 A = 5% ACN / 95% 물 / 10 mM NH4OAc
용매 B = 95% ACN / 5% 물 / 10 mM NH4OAc
오븐 온도 = 50℃
LC/MS 조건 F:
칼럼 = 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm
출발 %B = 0; 최종 %B = 100
구배 시간 = 3분; 정지 시간 = 3.75분
유량 = 1.0 mL/분; 파장 = 220 nm
용매 A = 5% ACN / 95% 물 / 0.1% TFA
용매 B = 95% ACN / 5% 물 / 0.1% TFA
오븐 온도 = 50℃
중간체: 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00122
새로이 증류된 무수 THF (250 mL) 중 (2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)메탄올 (8.0 g, 32.2 mmol), 5-클로로-2,4-디히드록시벤즈알데히드 (5.56 g, 32.2 mmol), 및 트리페닐포스핀 (11.4 g, 43.5 mmol)의 자기 교반 용액을 빙수조에서 냉각시키고, DIAD (디이소프로필 아조디카르복실레이트, 8.0 mL, 41.1 mmol)로 천천히 (30분에 걸침) 처리하였다. 반응물을 아르곤으로 플러싱하고, 밀봉하고, 천천히 실온으로 가온하면서 밤새 교반되도록 하였다. 반응물을 진공 하에 농후한 오일로 증발시키고, 이어서 CH2Cl2/ hex 중에 120 g 텔레다인 이스코(Teledyne Isco) 실리카 플래쉬 칼럼의 헤드에 적용하고, 12 col vol (칼럼 부피)에 걸쳐 100% 헥산에서 40% EtOAc/헥산의 구배를 사용하여 바이오타지 상에서 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 진공 하에 증발시키고, 고진공 하에 건조시켜 순수한 표제 화합물을 5.5 g (42%)을 백색 고체로서 수득하였다:
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 11.43 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 7.80 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.60 - 7.47 (m, 2H), 7.25 (t, J=7.5 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 2.59 (s, 3H), 1.39 (s, 12H).
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00123
무수 DMF (40 mL) 중 5-클로로-2-히드록시-4-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)벤즈알데히드 (2.76 g, 6.85 mmol)의 자기 교반 용액에 5-(클로로메틸)니코티노니트릴 (1.26 g, 8.26 mmol)에 이어서 탄산세슘 (3.35 g, 10.28 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 N2로 잘 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 75℃ 오일 조에 넣었다. 2.75시간 후, 반응물을 냉각시키고, EtOAc (200 mL) 및 물 (150 mL)을 사용하여 분배하였다. 수성 층을 추가의 EtOAc (200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2 x 50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 (15 mL) 중에 용해시키고, 80 g 텔레다인 이스코 실리카 플래쉬 칼럼의 헤드에 적용하고, 100% CH2Cl2에서 25% EtOAc/CH2Cl2의 구배를 사용하여 8 칼럼 부피에 걸쳐 바이오타지 상에서 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 진공 하에 증발시킨 다음, 고진공 하에 건조시켜 순수한 표제 화합물 1.92 g (54%)을 회백색 고체로서 수득하였다:
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 10.29 (s, 1H), 8.91 (dd, J=11.7, 2.1 Hz, 2H), 8.07 (t, J=2.1 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.81 (dd, J=7.5, 1.2 Hz, 1H), 7.47 (d, J=6.6 Hz, 1H), 7.24 (t, J=7.6 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 2.60 (s, 3H), 1.39 (s, 12H).
중간체: 4-브로모-3-클로로-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)피리딘
Figure 112019012812334-pct00124
무수 DMF (5 mL) 중 수소화나트륨 (74.1 mg, 3.09 mmol)의 현탁액에 3-(피페리딘-1-일)프로판-1-올 (440 mg, 3.07 mmol)을 연속식 아르곤 플러싱 하에 천천히 첨가하였다. 반응물을 10분 동안 교반한 다음, 고체 4-브로모-2,3-디클로로피리딘 (655 mg, 2.89 mmol)으로 여러 부분으로 1분에 걸쳐 처리하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반되도록 하고, 0.45 uM 프릿을 통해 여과하고, 역상 정제용 HPLC (선파이어 C18 10uM 50x300 mm 칼럼 사용, 10% 용매 B에서 100% 용매 B, 30분에 걸침, 150 mL / 분, 220 nM에서의 검출 (용매 A는 10% MeOH / 90% 물, 0.1% TFA 함유, 용매 B는 90% MeOH 및 10% 물, 0.1% TFA 함유))에 의해 정제하여 순수한 표제 화합물 (151.5 mg, 9%)을 TFA 염으로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 7.86 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.21 (d, J=5.3 Hz, 1H), 4.47 (t, J=5.7 Hz, 2H), 3.79 (br d, J=11.7 Hz, 2H), 3.37 - 3.25 (m, 2H), 2.83 - 2.67 (m, 2H), 2.39 - 2.25 (m, 2H), 2.04 - 1.89 (m, 5H), 1.56 - 1.40 (m, 1H)
중간체: 5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)피리딘-4-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00125
무수 THF (7 mL) 중 4-브로모-3-클로로-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)피리딘, 2 TFA (86.3 mg, 0.154 mmol) 및 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (90 mg, 0.173 mmol)의 용액에 물 중 삼염기성 인산칼륨, 0.5 M (0.8 mL, 0.400 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 아르곤으로 잘 플러싱하고, 이어서 제2 세대 X-phos 전촉매 (17 mg, 0.022 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 다시 아르곤으로 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 실온에서 3.5일 동안 교반되도록 하였다. 용매를 N2의 완만한 스트림 하에 제거하고, 잔류물을 물 (100 mL) 및 EtOAc (75mL)를 사용하여 분배하였다. 유기 층을 염수 (40 mL)로 추출하고, Na2SO4 하에 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 하에 제거하여 조 물질로 사용되는 표제 화합물을 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 1.104분; m/e = 645, (체류(ret) 시간 = 체류(retention) 시간).
중간체: 3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)옥시)프로판-1-올
Figure 112019012812334-pct00126
아르곤 하에 순수한 프로판-1,3-디올 (4 g, 52.6 mmol)에 수소화나트륨 (68 mg, 2.75 mmol)을 첨가하였다. (매우 따뜻한) 반응물을 N2 하에 플러싱한 다음, 4-브로모-2,3-디클로로피리딘 (500 mg, 2.204 mmol)에 이어서 무수 THF (5 mL)로 처리하였다. 반응물을 아르곤으로 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 실온에서 2일 동안 교반되도록 하였다. 반응물을 1 N HCl (1 mL)을 함유하는 물 (150 mL)에 붓고, EtOAc (200 mL)를 사용하여 분배하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 물 (23 x 70 mL), 염수 (75 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 조 물질을 CH2Cl2 중에 80 g 텔레다인 이스코 실리카 플래쉬 칼럼의 헤드에 적용하고, 100% CH2Cl2에서 100% EtOAc/헥산의 구배를 사용하여 9 칼럼 부피에 걸쳐 바이오타지 상에서 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 진공 하에 증발시키고, 고진공 하에 건조시켜 순수한 표제 화합물 (210 mg, 43%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 0.860분; m/e = 222;
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 8.17 (d, J=5.5 Hz, 1H), 6.84 (d, J=5.6 Hz, 1H), 4.29 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.92 (t, J=5.8 Hz, 2H), 2.14 (quin, J=5.9 Hz, 2H)
중간체: 5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-4-(3-히드록시프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00127
무수 THF (30 mL) 중 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (400 mg, 0.771 mmol) 및 3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)옥시)프로판-1-올 (175 mg, 0.788 mmol)의 용액에 물 중 삼염기성 인산칼륨, 0.5 M (3.9 mL, 1.950 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 아르곤으로 플러싱한 다음, 제2 세대 X-phos 전촉매 (60 mg, 0.076 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 다시 아르곤으로 잘 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 18시간 동안 65℃ 오일 조에 두었다. 용매를 N2의 완만한 스트림 하에 대부분 제거하고, 잔류물을 EtOAc (100 mL) 및 물 (40 mL)을 사용하여 분배하였다. 수성 층을 EtOAc (50 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, 염수 (15 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 조 물질을 CH2Cl2 중에 40 g 텔레다인 이스코 실리카 플래쉬 칼럼의 헤드에 적용하고, 100% CH2Cl2에서 100% EtOAc의 구배를 사용하여 8 칼럼 부피에 걸쳐, 이어서 100% EtOAc에서 20% MeOH / EtOAc의 구배를 사용하여 5 칼럼 부피에 걸쳐 바이오타지 상에서 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 진공 하에 증발시키고, 고진공 하에 건조시켜 순수한 표제 화합물 (300 mg, 67%)을 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 1.002분; m/e = 578;
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 10.29 (s, 1H), 8.92 (d, J=1.5 Hz, 2H), 8.47 (d, J=5.6 Hz, 1H), 8.11 (t, J=1.8 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.49 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.95 (d, J=5.6 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.33 (s, 2H), 5.15 (s, 2H), 4.35 (br t, J=4.9 Hz, 2H), 3.95 (br s, 2H), 2.23 - 2.15 (m, 5H)
중간체: 5-((5-((3-(4-(3-브로모프로폭시)-3-클로로피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00128
CH2Cl2 (5 mL) 중 5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-4-(3-히드록시프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (182 mg, 0.315 mmol) 및 트리페닐포스핀 (98.3 mg, 0.375 mmol)의 자기 교반 용액에 아르곤, 연속식 아르곤 플러싱 하에 고체 사브로민화탄소 (123 mg, 0.371 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 아르곤으로 잘 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 40 g 텔레다인 이스코 실리카 플래쉬 칼럼의 헤드에 직접 적용하고, 100% CH2Cl2에서 100% EtOAc의 구배를 사용하여 11 칼럼 부피에 걸쳐 바이오타지 상에서 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 진공 하에 증발시키고, 고진공 하에 건조시켜 순수한 표제 화합물 (88.5 mg, 44%)을 수득하였다.
LC/MS 조건 B: 체류 시간 3.68분; m/e = 640
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 10.29 (s, 1H), 8.93 (m, 2H), 8.48 (d, J=5.5 Hz, 1H), 8.11 (t, J=2.1 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.51 - 7.46 (m, 1H), 7.37 - 7.33 (m, 1H), 7.31 - 7.29 (m, 1H), 6.95 (d, J=5.6 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.33 (s, 2H), 5.16 (s, 2H), 4.34 (t, J=5.6 Hz, 2H), 3.69 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.47 (quin, J=6.0 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H).
중간체: (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00129
DCE (15 mL) 및 EtOH (15 mL)의 혼합물 중 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (1.2 g, 2.313 mmol) 및 (R)-2-아미노-3-히드록시-2-메틸프로판산 (0.551 g, 4.63 mmol)의 혼합물에 아세트산 (0.265 mL, 4.63 mmol) 및 4A 분자체 (100 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, 소듐 시아노보로히드라이드 (4.63 mL, 4.63 mmol)로 40시간에 걸쳐 적가 처리하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시키고 (<20℃ 조), 잔류물을 역상 정제용 HPLC (선파이어 C18 10uM 50x100 mm 칼럼 사용, 15% 용매 B에서 100% 용매 B, 30분에 걸침, 150 mL/분, 220 nM에서의 검출 (용매 A는 5% CH3CN / 95% 물, 10 mM NH4OAc 함유, 용매 B는 95% CH3CN / 5% 물, 10 mM NH4Oac 함유))로 정제하여 순수한 표제 화합물 (220 mg, 15%)을 수득하였다.
LC/MS 조건 C: 체류 시간 2.120분, m/e = 622;
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ 8.96 (d, J=6.3 Hz, 1H), 8.89 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.39 (d, J=12.5 Hz, 1H), 7.69 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.55 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.49 - 7.38 (m, 1H), 7.30 - 7.24 (m, 1H), 7.18 (dt, J=14.9, 7.5 Hz, 1H), 7.03 - 6.90 (m, 1H), 5.35 (d, J=2.3 Hz, 2H), 5.26 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.92 (d, J=11.8 Hz, 1H), 3.72 (d, J=12.0 Hz, 1H), 2.61 - 2.32 (m, 3H), 1.44 (s, 3H), 1.38 (s, 6H).
중간체: 2-브로모-1,3-디메틸-5,6,7,8-테트라히드로피라졸로[1,2-a]피리다진-4-윰 브로마이드
Figure 112019012812334-pct00130
150 mL 압력 병에 4-브로모-3,5-디메틸-1H-피라졸 (2.29 g, 13.08 mmol), 탄산칼륨 (4 g, 28.9 mmol) 및 무수 아세토니트릴 (70 mL)을 첨가하였다. 반응물을 N2로 플러싱한 다음, 1,4-디브로모부탄 (22 g, 102 mmol)으로 처리하였다. 반응물을 마개를 막고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 50 - 55 C로 5시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 용매를 N2의 완만한 스트림 하에 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 (40 mL)로 연화처리하고, 고체를 여과에 의해 수집하여 순수한 표제 화합물 (2.6 g, 64%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 4.60 (br s, 4H), 2.54 (s, 6H), 2.39 (dt, J=6.4, 3.0 Hz, 4H)
중간체: (R)-1-(4-(4-브로모-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)부틸)피롤리딘-3-올
Figure 112019012812334-pct00131
N2 하에 건조 반응 바이알에 2-브로모-1,3-디메틸-5,6,7,8-테트라히드로피라졸로[1,2-a]피리다진-4-윰 브로마이드 (400 mg, 1.290 mmol), (R)-피롤리딘-3-올, HCl (200 mg, 1.618 mmol), 무수 DMSO (2 mL), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (530 μl, 3.03 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 Ar로 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 135℃ 오일 조에 10.5시간 동안 두었다. 반응물을 메탄올 (2 mL)로 희석하고, 역상 정제용 HPLC (선파이어 C18 10uM 50x300 mm 칼럼 사용, 10% 용매 B에서 100% 용매 B, 30분에 걸침, 150 mL / 분, 220 nM에서의 검출 (용매 A는 5% CH3CN / 95% 물, 10 mM NH4OAc 함유, 용매 B는 95% CH3CN 및 5% 물, 10 mM NH4OAc 함유))에 의해 정제하여 순수한 표제 화합물 (140.5 mg, 33%)을 황갈색 고체로서 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 0.769분, m/e = 316
중간체: 4-((5-브로모-4-메틸피리딘-3-일)메톡시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00132
연속식 아르곤 플러싱 하에 무수 THF (20 mL) 중 (5-브로모-4-메틸피리딘-3-일)메탄올 (418 mg, 2.069 mmol), 5-클로로-2,4-디히드록시벤즈알데히드 (400 mg, 2.318 mmol), 및 트리페닐포스핀 (600 mg, 2.288 mmol)의 혼합물에 DIAD (450 μl, 2.314 mmol)를 시린지를 통해 5분에 걸쳐 첨가하였다. 반응물을 단단히 마개를 막고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. N2의 완만한 스트림 하에 대부분의 용매를 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 (25 mL) 및 물의 혼합물 (30 mL) 중에 재용해시키고, 대부분의 용매를 N2의 완만한 스트림 하에 제거하였다. 잔류물을 차가운 MeOH (20 μL)로 연화처리하고, 고체를 여과에 의해 수집하여 표제 화합물 (263.2 mg, 36%)을 황갈색 고체로서 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 1.144분, m/e = 356
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 11.45 (s, 1H), 9.74 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 2.50 (s, 3H)
중간체: 5-((5-((5-브로모-4-메틸피리딘-3-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00133
무수 DMF (1.1 mL) 중 4-((5-브로모-4-메틸피리딘-3-일)메톡시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드 (253 mg, 0.709 mmol) 및 5-(클로로메틸)니코티노니트릴 (130 mg, 0.852 mmol)의 용액에 탄산세슘 (278 mg, 0.853 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 N2로 잘 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 65℃ 오일 조에서 3시간 동안 두었다. 피펫을 통해 물 (14 mL)로 반응물을 첨가하고, 고체를 여과하고, Et2O (10 mL)로 세척하고, 고진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (380 mg, 정량적)을 담갈색 고체로서 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 1.174분, m/e = 472;
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.24 (s, 1H), 9.04 (dd, J=6.2, 2.1 Hz, 2H), 8.74 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.56 (t, J=2.0 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 5.49 (d, J=1.7 Hz, 4H), 2.46 (s, 3H)
중간체: 2-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란
Figure 112019012812334-pct00134
오븐 건조된 150 mL 압력 병에 2-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (5.30 g, 17.2 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (7.3 g, 28.7 mmol), 및 아세트산칼륨 (5.3 g, 54.0 mmol)을 채웠다. 디옥산 (100 mL)을 첨가하고, 아르곤 중에 10분 동안 버블링하고, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (825 mg, 1.128 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 밀봉하고, 80℃ 오일 조에서 21시간 동안 가열하였다. 반응물을 물 (300 mL) 및 EtOAc (250 L)로 처리하고, 셀라이트를 통해 여과하여 일부 암색 고체를 제거하였다. 셀라이트를 에틸 아세테이트 (300 mL)로 세척하였다. 층을 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 암색 유성 고체로 증발시켰다. CH2Cl2/헥산 중에서 330 g 텔레다인 이스코 실리카 플래쉬 칼럼의 헤드에 적용하고, 100% 헥산에서 100% CH2Cl2의 구배를 사용하여 11 칼럼 부피에 걸쳐 바이오타지 상에서 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 진공 하에 증발시키고, 고진공 하에 건조시켜 순수한 표제 화합물 4.36 g (71%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 7.38 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.16 (t, J=7.8 Hz, 1H), 6.94 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.11 (t, J=5.7 Hz, 2H), 3.66 (t, J=6.5 Hz, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.36 (quin, J=6.1 Hz, 2H), 1.37 (s, 12H).
중간체: 5-((5-((5-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-4-메틸피리딘-3-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00135
THF (30 mL) 중 5-((5-((5-브로모-4-메틸피리딘-3-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (335 mg, 0.709 mmol) 및 2-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (275 mg, 0.774 mmol)의 용액에 삼염기성 인산칼륨 (3.54 mL, 1.770 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 아르곤으로 매우 잘 플러싱한 다음, 제2 세대 X-Phos 전촉매 (53 mg, 0.067 mmol)로 처리하였다. 반응물을 다시 아르곤으로 매우 잘 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 2.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 반응물을 45℃ 오일 조에 45분 동안 둔 다음, 밤새 실온에서 18시간 동안 교반되도록 하였다. 추가의 촉매 (12 mg, 0.015 mmol)를 첨가하고, 아르곤으로 잘 플러싱하고, 40℃ 오일 조에서 3.5시간 동안 두었다. 반응물을 EtOAc (110 mL)로 희석하고, 물 (1 x 15 mL), 염수 (1 x 15 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 용매를 증발시켜 표제 화합물 (340 mg, 77%)을 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 1.155분, m/e = 620
중간체: 1-(3-(히드록시메틸)-2-메틸페닐)-3,5-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드
Figure 112019012812334-pct00136
건조 반응 바이알에 (2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)메탄올 (1.02 g, 4.11 mmol), 3,5-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (510 mg, 4.11 mmol), 아세트산구리 (II) (0.747 g, 4.11 mmol) 및 피리딘 (3 mL)을 첨가하였다. 반응물을 공기로 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 42시간 동안 진탕시키면서 60℃ 모래 조에 두었다. 용매를 N2의 완만한 스트림 하에 대부분 제거하고, CH2Cl2 (10 mL)를 생성된 잔류물에 첨가하였다. 반응물을 다시 공기로 플러싱하고, 마개를 막고, 7일 동안 실온에서 교반하였다. 고체 침전물을 여과하고, 여과물을 80 g 텔레다인 이스코 실리카 플래쉬 칼럼의 헤드에 적용하고, 100% 헥산에서 70% EtOAc / 헥산의 구배를 사용하여 10 칼럼 부피에 걸쳐 바이오타지 상에서 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 표제 화합물 (149 mg, 15%)를 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 0.744분, m/e = 245.
중간체: 1-(3-((2-클로로-4-포르밀-5-히드록시페녹시)메틸)-2-메틸페닐)-3,5-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드
Figure 112019012812334-pct00137
THF (6 mL) 중 1-(3-(히드록시메틸)-2-메틸페닐)-3,5-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (149 mg, 0.610 mmol), 5-클로로-2,4-디히드록시벤즈알데히드 (210 mg, 1.217 mmol) 및 트리페닐포스핀 (192 mg, 0.732 mmol)의 용액에 연속식 아르곤 유동 하에 DIAD (0.192 mL, 0.989 mmol)를 4-5분에 걸쳐 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 단단히 마개를 막고, 실온에서 수시간 동안 교반되도록 하였다. 용매를 N2의 완만한 스트림 하에 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 (7 mL) 중에 용해시키고, 40g 텔레다인 이스코 실리카 플래쉬 칼럼의 헤드에 적용하고, 100% 헥산에서 100% EtOAc의 선형 구배를 사용하여 15 칼럼 부피에 걸쳐 바이오타지 상에서 정제시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 표제 화합물 (140 mg, 55%)을 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 1.189분, m/e = 399;
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 11.17 (s, 1H), 10.05 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.69 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.48 - 7.43 (m, 1H), 7.38 (d, J=7.6 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.97 (s, 3H)
중간체: 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(4-포르밀-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00138
무수 DMF (550 μL) 중 1-(3-((2-클로로-4-포르밀-5-히드록시페녹시)메틸)-2-메틸페닐)-3,5-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (122 mg, 0.306 mmol) 및 5-(클로로메틸)니코티노니트릴 (56 mg, 0.367 mmol)의 용액에 탄산세슘 (120 mg, 0.368 mmol) 및 아이오딘화나트륨 (5 mg, 0.033 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 아르곤으로 잘 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 65℃ 오일 조에서 3시간 동안 두었다. 반응물을 EtOAc (125 mL)로 희석하고, 유기 층을 물 (3 x 20 mL), 염수 (1 x 20 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 용매를 증발시켜 표제 화합물 (63.3 mg, 40%)을 수득하였다.
LC/MS 조건 A: 체류 시간 1.195분, m/e = 515.
중간체: (R)-1-((3,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)메틸)피롤리딘-3-올
Figure 112019012812334-pct00139
EtOH (5 mL) 중 3,5-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (0.3 g, 2.417 mmol), 및 (R)-피롤리딘-3-올, HCl (0.597 g, 4.83 mmol)의 혼합물에 아세트산 (0.277 mL, 4.83 mmol) 및 4A 분자체 (100 mg)를 첨가하였다. 반응물을 N2로 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 소듐 시아노보로히드라이드 (4.83 mL, 4.83 mmol)로 처리하고, N2로 플러싱하고, 마개를 막고, 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 MeOH (100 mL)로 희석하고, 다시 N2로 플러싱하고, 마개를 막고, 실온에서 18시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 역상 정제용 HPLC (선파이어 C18 10uM 50x300 mm 칼럼 사용, 10% 용매 B에서 100% 용매 B, 30분에 걸침, 150 mL / 분, 220 nM에서의 검출 (용매 A는 5% CH3CN / 95% 물, 10 mM NH4OAc 함유, 용매 B는 95% CH3CN 및 5% 물, 10 mM NH4OAc 함유))에 의해 정제하여 순수한 표제 화합물 (280 mg, 33%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LC/MS 조건 C: 체류 시간 0.504분, m/e = 196.
1H NMR (500MHz, 클로로포름-d) δ 4.46 (tt, J=5.6, 1.4 Hz, 1H), 3.90 - 3.78 (m, 2H), 3.41 (ddd, J=10.1, 8.4, 5.3 Hz, 1H), 3.23 (d, J=11.1 Hz, 1H), 2.82 (dd, J=11.2, 5.7 Hz, 1H), 2.71 - 2.63 (m, 1H), 2.30 (s, 6H), 2.06 - 1.98 (m, 2H).
실시예 2001
5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)피리딘-4-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-(((1,3-디히드록시-2-메틸프로판-2-일)아미노)메틸)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00140
DCE (0.8 mL) 및 에탄올 (0.7 mL) 중 5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)피리딘-4-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (40 mg, 0.062 mmol) 및 2-아미노-2-메틸프로판-1,3-디올 (27 mg, 0.257 mmol)의 용액에 아세트산 (14 μl, 0.245 mmol) 및 활성화된 4A 분자체를 첨가하였다. 반응물을 아르곤 하에 플러싱하고, 25분 동안 실온에서 교반한 다음,　THF 중 소듐 시아노보로히드라이드, 1 M (0.22 mL, 0.220 mmol)로 시린지를 통해 3시간에 걸쳐 천천히 처리하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 구배: 15-55% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 순수한 표제 화합물 (21.6 mg, 46%)을 수득하였다.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.59분; m/e = 734 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 1.41분; m/e = 734 (M+H)+.
실시예 2002
(R)-5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-4-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-(((1,3-디히드록시-2-메틸프로판-2-일)아미노)메틸)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00141
DCE (0.8 mL) 및 에탄올 (0.7 mL)의 혼합물 중 5-((5-((3-(4-(3-브로모프로폭시)-3-클로로피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (46.5 mg, 0.073 mmol) 및 2-아미노-2-메틸프로판-1,3-디올 (25 mg, 0.238 mmol)의 용액에 아세트산 (12 μl, 0.210 mmol) 및 활성화된 4A 분자체를 첨가하였다. 반응물을 아르곤 하에 간략하게 플러싱하고, 실온에서 25분 교반한 다음, THF 중 소듐 시아노보로히드라이드, 1.0 M (220 μL, 0.220 mmol)로 천천히 3시간에 걸쳐 처리하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 추가의 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 N2의 스트림 하에 대부분 제거하고, 잔류물을 MeOH (1.5 mL) 중에 재용해시켰다. 생성된 용액을 (R)-피롤리딘-3-올, HCl (120 mg, 0.971 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (210 μL, 1.202 mmol)으로 처리하고, 18시간 동안 진탕시키면서 65℃ 모래 조에 두었다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하여 순수한 표제 화합물 (37.4 mg, 67%)을 수득하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 10-50% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량 20 mL/분.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.18분; m/e = 736 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 1.15분; m/e = 736 (M+H)+.
실시예 2003
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(4-((S)-3-히드록시피롤리딘-1-일)부틸)-3,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00142
THF (6 mL) 중 (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산 (35 mg, 0.056 mmol) 및 (R)-1-(4-(4-브로모-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)부틸)피롤리딘-3-올 (20 mg, 0.063 mmol)의 용액에 물 중 삼염기성 인산칼륨 0.5 M (0.4 mL, 0.200 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 Ar로 잘 플러싱한 다음, 제2 세대 X-phos 전촉매 (5 mg, 6.35 μmol)로 처리하였다. 반응물을 다시 아르곤으로 잘 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 65시간 동안 교반하면서 60℃ 오일 조에 두었다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하여 순수한 표제 화합물 (5.8 mg, 14%)을 수득하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 10-50% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.36분; m/e = 731 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 1.23분; m/e = 731 (M+H)+.
실시예 2004
5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-4-(3-히드록시프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-(((1,3-디히드록시-2-메틸프로판-2-일)아미노)메틸)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00143
DCE (0.8 mL) 및 EtOH (0.5 mL)의 혼합물 중 5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-4-(3-히드록시프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (23 mg, 0.040 mmol) 및 2-아미노-2-메틸프로판-1,3-디올 (25 mg, 0.238 mmol)의 용액에 아세트산 (10 μl, 0.175 mmol) 및 활성화된 4A 분자체를 첨가하였다. 반응물을 아르곤으로 간략하게 플러싱하고, 20분 동안 실온에서 교반한 다음, THF 중 소듐 시아노보로히드라이드 1 M (160 μl, 0.160 mmol)로 2시간에 걸쳐 적가 처리하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하여 순수한 표제 화합물 (19.5 mg, 74%)을 수득하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 10-50% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.53분; m/e = 667 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 1.32분; m/e = 667 (M+H)+.
실시예 2005
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((5-(3-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-메틸페닐)-4-메틸피리딘-3-일)메톡시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00144
DCE (800 μL) 및 EtOH (500 μL)의 혼합물 중 5-((5-((5-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-4-메틸피리딘-3-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (52 mg, 0.084 mmol) 및 L-피페콜산 (33 mg, 0.256 mmol)의 용액에 아세트산 (19 μL, 0.332 mmol) 및 4A 분자체를 첨가하였다. 반응물을 N2로 간략하게 플러싱하고, 마개를 막고, 실온에서 45분 동안 교반한 다음, THF 중 소듐 시아노보로히드라이드, 1.0M (250 μL, 0.250 mmol)로 2시간에 걸쳐 적가 처리하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 용매를 N2의 스트림 하에 대부분 제거하고, 잔류물을 MeOH (1.5 mL) 중에 재용해시켰다. 생성된 용액을 (R)-3-히드록시피롤리딘 히드로클로라이드 (155 mg, 1.254 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (350 μL, 2.004 mmol)으로 처리하고, 3.5시간 동안 진탕시키면서 65℃ 모래 조에 두었다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 10-50% B, 23분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 물질을 추가로 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하여 순수한 표제 화합물 (14.2 mg, 14%)을 TFA 염으로서 수득하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 구배: 5-40% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.24분; m/e = 740 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 1.08분; m/e = 740 (M+H)+.
실시예 2006
5-((4-클로로-2-(((2-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)아미노)메틸)-5-((3-(4-(((2-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)아미노)메틸)-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00145
DCE (900 μL) 및 EtOH (600 μL)의 혼합물 중 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(4-포르밀-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (22.8 mg, 0.044 mmol)의 용액에 (3R)-1-(2-아미노에틸)-3-피롤리디놀 (43 mg, 0.330 mmol), 아세트산 (8 μL, 0.140 mmol) 및 4A 분자체를 첨가하였다. 반응물을 N2로 간략하게 플러싱하고, 단단히 마개를 막고, 1시간 동안 실온에서 교반한 다음, THF 중 소듐 시아노보로히드라이드, 1.0M (270 μL, 0.270 mmol)로 5시간에 걸쳐 적가 처리하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하여 순수한 표제 화합물 (2.9 mg, 8%)을 수득하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 5-35% B, 18분에 걸침, 이어서 100% B에서 3-분 유지; 유량: 20 mL/분.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.18분; m/e = 743 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 0.907분; m/e = 743 (M+H)+.
실시예 2007
5-((4-클로로-2-(((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)메틸)-5-((3-(4-(((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)메틸)-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00146
DCE (900 μL) 및 EtOH (600 μL)의 혼합물 중 5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(4-포르밀-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (22.8 mg, 0.044 mmol) 및 (R)-3-히드록시피롤리딘 히드로클로라이드 (40 mg, 0.324 mmol)의 용액에 아세트산 (5.2 μL, 0.091 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (13 μL, 0.074 mmol) 및 4A 분자체를 첨가하였다. 반응물을 N2로 간략하게 플러싱하고, 마개를 막고, 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, THF 중 소듐 시아노보로히드라이드, 1.0M (270 μL, 0.270 mmol)로 3.5시간에 걸쳐 적가 처리하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하여 순수한 표제 화합물 (8.0 mg, 26%)을 수득하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 8-48% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.23분; m/e = 657 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 1.22분; m/e = 657 (M+H)+.
실시예 2008
(R)-5-((4-클로로-2-(((1,3-디히드록시-2-메틸프로판-2-일)아미노)메틸)-5-((5-(3-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-메틸페닐)-4-메틸피리딘-3-일)메톡시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00147
DCE (800 μL) 및 에탄올 (500 μL)의 혼합물 중 5-((5-((5-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-4-메틸피리딘-3-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (20.4 mg, 0.033 mmol) 및 2-아미노-2-메틸-1,3-프로판디올 (10.4 mg, 0.099 mmol)의 용액에 아세트산 (7.5 μL, 0.131 mmol) 및 활성화된 4A 분자체를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, THF 중 소듐 시아노보로히드라이드, 1.0M (115 μL, 0.115 mmol)로 30분에 걸쳐 적가 처리하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 N2의 스트림 하에 대부분 제거하고, 잔류물을 MeOH (1.5 mL) 중에 재용해시켰다. 생성된 용액을 (R)-3-히드록시피롤리딘 히드로클로라이드 (74 mg, 0.599 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (185 μL, 1.059 mmol)으로 처리하고, N2로 간략하게 플러싱하고, 마개를 막고, 4.5시간 동안 진탕시키면서 65℃ 모래 조에 둔 다음, 45℃ 모래 조에 36시간 동안 두었다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하여 표제 화합물 (7.2 mg, 29%)을 수득하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 5-55% B, 25분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.31분; m/e = 716 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 1.18분; m/e = 716 (M+H)+.
실시예 2009
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(4-(((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)메틸)-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00148
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산 (90 mg, 0.145 mmol), (R)-1-((3,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)메틸)피롤리딘-3-올, 2 AcOH (63 mg, 0.200 mmol), 2,2'-비피리딘 (23 mg, 0.147 mmol), 및 아세트산구리 (II)의 혼합물 (40 mg, 0.220 mmol)에 피리딘 (1 mL)을 첨가하였다. 반응물을 마개를 막고, 공기의 존재 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 구배: 5-45% B, 25분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 물질을 추가로 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하여 순수한 표제 화합물 (1.3 mg, 1.2%)을 수득하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 10-50% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 3-분 유지; 유량: 20 mL/분.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.04분; m/e = 689 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 1.16분; m/e = 689 (M+H)+.
실시예 2010
(R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(4-포르밀-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00149
CH2Cl2 (2 mL) 중 (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산 (32.5 mg, 0.052 mmol), 및 3,5-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (11.9 mg, 0.096 mmol)의 혼합물에 피리딘 (32 μl, 0.396 mmol)에 이어서 고체 아세트산구리 (II) (16 mg, 0.088 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 O2로 플러싱하고, 밀봉하고, 실온에서 6일 동안 교반하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 15-55% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 물질을 추가로 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하여 표제 화합물 (1 mg, 2%)을 수득하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 15-55% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분.
LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.47분; m/e = 618 (M+H)+.
LC/MS 조건 F: 체류 시간 1.57분; m/e = 618 (M+H)+.
중간체: 4-((4-브로모-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드
Figure 112019012812334-pct00150
THF (20 mL) 중 (4-브로모-3-메틸피리딘-2-일)메탄올 (560 mg, 2.77 mmol), 5-클로로-2,4-디히드록시벤즈알데히드 (478 mg, 2.77 mmol), 및 트리페닐포스핀 (800 mg, 3.05 mmol)의 혼합물을 연속식 N2 플러싱의 결과로서 냉각시키면서 (황색 탁한 혼합물), DIAD (450 μl, 2.314 mmol)를 시린지를 통해 2분에 걸쳐 첨가하였다. 현탁액은 DIAD를 첨가 시 투명한 오렌지색 용액이 되었고, ~10분 후, 일부 침전물이 관찰되었다. 반응물을 N2 하에 밀봉하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 생성물의 제1 수확물을 반응 혼합물을 여과하는 것에 의해 수집하여 0.277g을 백색 고체로서 수득하였다. 여과물을 N2 하에 송풍 건조시키고, 차가운 MeOH로 연화처리한 다음, 여과하여 약~0.2g의 생성물의 제2 수확물을 회백색 고체로 수득하였다 (총 0.47g, 45%).
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 11.37 (s, 1H), 9.69 (s, 1H), 8.24 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.53 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 2.54 (s, 3H). LC/MS 조건 D: 체류 시간 1.01분, m/e = 356
중간체: 5-((5-((4-브로모-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00151
DMF (6 mL) 중 4-((4-브로모-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-5-클로로-2-히드록시벤즈알데히드 (0.277 g, 0.777 mmol), 5-(클로로메틸)니코티노니트릴 (0.142 g, 0.932 mmol), 아이오딘화나트륨 (0.012 g, 0.078 mmol) 및 탄산세슘 (0.304 g, 0.932 mmol)의 혼합물을 질소 하에 75℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 50 ml 빙수에 부었다. 이어서, 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 여과하여 생성물 5-((5-((4-브로모-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (0.3 g, 0.597 mmol, 77% 수율)을 회백색 고체로서 수집하였다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 10.25 (s, 1H), 8.96 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.92 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.20 (d, J=5.3 Hz, 1H), 8.11 (t, J=2.0 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.55 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 5.21 (s, 2H), 2.60 (s, 3H). LC/MS 조건 D: 체류 시간 1.07분, m/e = 472
중간체: 5-((5-((4-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00152
클로로(2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) (0.025 g, 0.032 mmol)을 THF (15 mL) 중 2-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.225 g, 0.635 mmol) 및 삼염기성 인산칼륨 (3.17 mL, 1.587 mmol)의 혼합물에 첨가하였다 (N2로 10분 동안 플러싱한 후 촉매를 첨가하였음). 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc/수성 중탄산나트륨 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc (3 x 20 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 수성 중탄산나트륨 (2 x 20 ml) 및 염수 (20 ml)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 생성물 0.5 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지 호리즌(Biotage Horizon) 시스템; 레디셉Rf(RediSepRf) 40 g 칼럼; EtOAc/헥산, 구배: 0% ~ 100%)에 의해 정제하여 5-((5-((4-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (0.3 g, 0.459 mmol, 72.3% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 10.27 (s, 1H), 8.99 (d, J=2.3 Hz, 1H), 8.92 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.44 (d, J=4.8 Hz, 1H), 8.15 (t, J=2.1 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.24 - 7.18 (m, 1H), 7.11 (d, J=5.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.67 (d, J=7.0 Hz, 1H), 5.60 - 5.45 (m, 2H), 5.27 (s, 2H), 4.17 (td, J=5.8, 3.3 Hz, 2H), 3.65 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.39 (dd, J=6.3, 5.8 Hz, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.86 (s, 3H). LC/MS 조건 D: 체류 시간 1.08분; m/e = 620
실시예 2011
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((4-(3-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00153
ClCH2CH2Cl (5 mL) 및 EtOH (5 mL) 중 5-((5-((4-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (0.1 g, 0.161 mmol), (S)-피페리딘-2-카르복실산 (0.042 g, 0.322 mmol), 아세트산 (0.018 mL, 0.322 mmol) 및 약간의 4A MS (분자체)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 소듐 시아노보로히드라이드 (THF 중 1.0 M) (0.322 mL, 0.322 mmol)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 1일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 N2로 밤새 플러싱하고, 2시간 동안 펌프 건조시켰다. 잔류물을 DMF 4 ml 중에 용해시키고, 여과하고, 여과물을 2개의 동일 부분으로 나누고, 이들 중 1개 부분을 후속 단계에 적용하였다. 다른 부분을 사용하여 실시예 2014를 제조하였다. 중간체의 용액에 (R)-피롤리딘-3-올, HCl (0.100 g, 0.805 mmol) 및 DIPEA (디이소프로필에틸아민, 0.141 mL, 0.805 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 15-55% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 물질을 추가로 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 구배: 10-50% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 3-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 (S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((4-(3-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)벤질)피페리딘-2-카르복실산 (6.6 mg, 5.4%)을 TFA 염으로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (s, 2H), 8.46 - 8.37 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.28 - 7.18 (m, 1H), 7.12 (br. s., 2H), 7.01 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.68 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.29 (s, 2H), 4.20 (br. s., 1H), 4.13 - 4.00 (m, 2H), 3.74 (dd, J=14.3, 5.5 Hz, 1H), 3.57 (dd, J=14.1, 5.3 Hz, 1H), 3.13 (br. s., 1H), 2.88 (d, J=11.7 Hz, 1H), 2.78 - 2.69 (m, 1H), 2.66 - 2.56 (m, 3H), 2.46 (d, J=6.2 Hz, 1H), 2.40 - 2.33 (m, 1H), 2.30 - 2.19 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.02 - 1.93 (m, 1H), 1.92 (s, 5H), 1.81 (s, 3H), 1.78 (br. s., 2H), 1.60 - 1.32 (m, 5H). LC/MS 조건 E 체류 시간 1.25분; m/e = 740.1.
실시예 2012
(S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((4-(3-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00154
ClCH2CH2Cl (2 mL) 및 EtOH (2 mL) 중 5-((5-((4-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (120mg, 0.193 mmol), (S)-2-아미노-3-히드록시-2-메틸프로판산 (46.0 mg, 0.387 mmol), 아세트산 (0.022 mL, 0.387 mmol) 및 약간의 4A MS의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 소듐 시아노보로히드라이드 (0.322 mL, 0.322 mmol)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시키고, 2시간 동안 펌프 건조시켰다. 잔류물을 DMF 4 ml 중에 용해시켰다. 이 물질의 절반을 후속 단계에 적용하였다. 다른 절반 부분을 실시예 2015를 위해 사용하였다. DMF 2ml 중 중간체의 용액에 (R)-피롤리딘-3-올, HCl (47.8 mg, 0.387 mmol) 및 DIPEA (0.141 mL, 0.805 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 워터스 엑스브리지 c-18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 0-30% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 물질을 추가로 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 10-50% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 (S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((4-(3-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산 (4.9 mg, 수율 3.4%)을 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.05 - 8.97 (m, 1H), 8.48 - 8.37 (m, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.28 - 7.22 (m, 1H), 7.17 - 7.10 (m, 2H), 7.02 (d, J=7.7 Hz, 1H), 6.68 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.41 (d, J=2.9 Hz, 2H), 5.32 (s, 2H), 4.20 (br. s., 1H), 4.13 - 4.02 (m, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.59 - 3.44 (m, 3H), 2.80 - 2.68 (m, 1H), 2.66 - 2.56 (m, 3H), 2.37 (dd, J=9.5, 4.0 Hz, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.03 - 1.93 (m, 2H), 1.83 (s, 3H), 1.57 (d, J=2.9 Hz, 1H), 1.22 (s, 3H). LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.13분; m/e = 730.0.
실시예 2013
(R)-5-((4-클로로-2-(((1-히드록시-2-(히드록시메틸)부탄-2-일)아미노)메틸)-5-((4-(3-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00155
ClCH2CH2Cl (2 mL) 및 EtOH (2 mL) 중 5-((5-((4-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-4-클로로-2-포르밀페녹시)메틸)니코티노니트릴 (80mg, 0.129 mmol), 2-아미노-2-에틸프로판-1,3-디올 (30.7 mg, 0.258 mmol), 아세트산 (0.015 mL, 0.258 mmol) 및 약간의 4A MS의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 소듐 시아노보로히드라이드 (0.322 mL, 0.322 mmol)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 N2로 밤새로 플러싱하고, 2시간 동안 펌프 건조시켰다. 잔류물을 DMF 4 ml 중에 용해시키고, 여과하고, 여과물을 2개의 동일 부분으로 나누고, 1개의 부분을 후속 단계에 적용하였다. 다른 부분을 실시예 2016의 합성을 위해 사용하였다. 중간체의 용액에 (R)-피롤리딘-3-올, HCl (0.100 g, 0.805 mmol) 및 DIPEA (0.141 mL, 0.805 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 구배: 5-40% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 (R)-5-((4-클로로-2-(((1-히드록시-2-(히드록시메틸)부탄-2-일)아미노)메틸)-5-((4-(3-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)페녹시)메틸)니코티노니트릴을 TFA 염 (15.2 mg, 수율 15%)으로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (br. s., 2H), 8.47 - 8.34 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.25 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.16 - 7.09 (m, 2H), 7.01 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.68 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.39 (d, J=3.7 Hz, 2H), 5.30 (s, 2H), 4.20 (br. s., 1H), 4.12 - 3.97 (m, 2H), 3.61 (s, 1H), 2.79 - 2.56 (m, 4H), 2.49 - 2.31 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.83 (s, 3H), 1.57 (d, J=4.4 Hz, 1H), 1.36 (q, J=7.2 Hz, 2H), 0.77 (t, J=7.5 Hz, 3H). LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.17분; m/e = 730.1.
실시예 2014
(S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-메틸-4-(2-메틸-3-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)페닐)피리딘-2-일)메톡시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
Figure 112019012812334-pct00156
DMF (2 mL) 중 (S)-1-(4-((4-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)피페리딘-2-카르복실산 (실시예 2011로부터의 중간체) (60 mg, 0.038 mmol), 피페리딘 (32.0 mg, 0.376 mmol) 및 DIPEA (0.066 mL, 0.376 mmol)의 혼합물을 질소 하에 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 20-60% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 물질을 추가로 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 구배: 10-50% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 3-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 (S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-메틸-4-(2-메틸-3-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)페닐)피리딘-2-일)메톡시)벤질)피페리딘-2-카르복실산 (7.1 mg, 수율 15%)을 TFA 염으로서 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (s, 2H), 8.48 - 8.38 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.34 - 7.19 (m, 2H), 7.14 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.72 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.45 (d, J=4.0 Hz, 2H), 5.37 (br. s., 2H), 4.21 (br. s., 2H), 4.17 - 4.06 (m, 2H), 3.88 (br. s., 1H), 3.31 - 3.19 (m, 1H), 2.85 (br. s., 1H), 2.28 - 2.17 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.86 (d, J=4.4 Hz, 3H), 1.67 (br. s., 10H). LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.12분; m/e = 738.3.
실시예 2015
(S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-메틸-4-(2-메틸-3-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)페닐)피리딘-2-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure 112019012812334-pct00157
DMF (2 mL) 중 (S)-2-((4-((4-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산 (65mg, 0.025 mmol) (실시예 2012로부터의 중간체)의 용액에 피페리딘 (21.40 mg, 0.251 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 워터스 엑스브리지 c-18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 10-50% B, 15분에 걸침, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 (S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-메틸-4-(2-메틸-3-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)페닐)피리딘-2-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산 (14.8 mg, 수율 78%)을 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.00 (d, J=14.3 Hz, 1H), 8.51 - 8.36 (m, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.25 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.13 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.68 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.41 (br. s., 2H), 5.32 (s, 2H), 4.12 - 4.02 (m, 2H), 3.88 (br. s., 2H), 3.64 - 3.46 (m, 2H), 2.47 (t, J=7.2 Hz, 3H), 2.38 (d, J=5.1 Hz, 6H), 2.11 (s, 4H), 1.82 (s, 4H), 1.51 (d, J=4.8 Hz, 5H), 1.40 (d, J=4.8 Hz, 3H), 1.23 (s, 4H). LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.10분; m/e = 728.1.
실시예 2016
5-((4-클로로-2-(((1-히드록시-2-(히드록시메틸)부탄-2-일)아미노)메틸)-5-((3-메틸-4-(2-메틸-3-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)페닐)피리딘-2-일)메톡시)페녹시)메틸)니코티노니트릴
Figure 112019012812334-pct00158
DMF (2 mL) 중 5-((5-((4-(3-(3-브로모프로폭시)-2-메틸페닐)-3-메틸피리딘-2-일)메톡시)-4-클로로-2-(((1-히드록시-2-(히드록시메틸)부탄-2-일)아미노)메틸)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (실시예 2013로부터의 중간체) (42mg, 0.022 mmol), 피페리딘 (18.77 mg, 0.220 mmol) 및 DIPEA (0.038 mL, 0.220 mmol)의 혼합물을 질소 하에 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS는 목적 생성물을 나타내었다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 정제용 LC/MS에 의해 하기 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 10-50% B, 20분에 걸침, 이어서 100% B에서 5-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 5-((4-클로로-2-(((1-히드록시-2-(히드록시메틸)부탄-2-일)아미노)메틸)-5-((3-메틸-4-(2-메틸-3-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)페닐)피리딘-2-일)메톡시)페녹시)메틸)니코티노니트릴 (15.5 mg, 수율 92%)을 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (br. s., 1H), 8.46 - 8.33 (m, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.25 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.16 - 7.09 (m, 2H), 7.02 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.68 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.45 - 5.35 (m, 2H), 5.30 (s, 2H), 4.15 - 3.99 (m, 2H), 3.61 (s, 1H), 3.31 (s, 1H), 2.46 (t, J=7.0 Hz, 2H), 2.37 (br. s., 3H), 2.12 (s, 3H), 1.92 (s, 5H), 1.83 (s, 3H), 1.51 (d, J=5.1 Hz, 4H), 1.45 - 1.30 (m, 4H), 0.77 (t, J=7.5 Hz, 3H). LC/MS 조건 E: 체류 시간 1.11분; m/e = 728.2.
생물학적 검정
PD-L1에 결합하는 화학식 (I)의 화합물의 능력을 PD-1/PD-L1 균질 시간-분해 형광 (HTRF) 결합 검정을 사용하여 조사하였다.
균질 시간-분해 형광 (HTRF) 결합 검정.
PD-1 및 PD-L1의 상호작용은 2개의 단백질의 세포외 도메인의 가용성, 정제된 제제를 사용하여 평가될 수 있다. PD-1 및 PD-L1 단백질 세포외 도메인을 검출 태그와의 융합 단백질로서 발현시켰고, PD-1의 경우에 태그는 이뮤노글로불린의 Fc 부분이었고 (PD-1-Ig), PD-L1의 경우에는 6개의 히스티딘 모티프였다 (PD-L1-His). 모든 결합 연구는 0.1% (w/v) 소 혈청 알부민 및 0.05% (v/v) 트윈-20으로 보충된 dPBS로 이루어진 HTRF 검정 완충제 중에서 수행하였다. h/PD-L1-His 결합 검정을 위해, 억제제를 검정 완충제 4 μl 중 PD-L1-His (10 nM 최종)와 함께 15분 동안 사전-인큐베이션하고, 이어서 검정 완충제 1 μl 중 PD-1-Ig (20 nM 최종)를 첨가하고, 추가로 15분 동안 인큐베이션하였다. HTRF 검출은 유로퓸 크립테이트-표지된 항-Ig (1 nM 최종) 및 알로피코시아닌 (APC) 표지된 항-His (20 nM 최종)를 사용하여 달성하였다. 항체를 HTRF 검출 완충제 중에 희석하고, 5 μl를 결합 반응물의 상단에 분배하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 평형화되도록 하고, 엔비전(EnVision) 형광계를 사용하여 생성된 신호 (665nm/620nm 비)를 수득하였다. 추가의 결합 검정을 인간 단백질 PD-1-Ig/PD-L2-His (각각 20 & 5 nM) 및 CD80-His/PD-L1-Ig (각각 100 & 10 nM) 사이에 수립하였다.
재조합 단백질. 이뮤노글로불린 G (Ig) 에피토프 태그의 C-말단 인간 Fc 도메인을 갖는 인간 PD-1 (25-167) [hPD-1 (25-167)-3S-IG] 및 C-말단 His 에피토프 태그를 갖는 인간 PD-L1 (18-239) [hPD-L1(18-239)-TVMV-His]을 HEK293T 세포에서 발현시키고, 단백질A 친화성 크로마토그래피 및 크기 배제 크로마토그래피에 의해 순차적으로 정제하였다. 인간 PD-L2-His 및 CD80-His는 상업적 공급원을 통해 수득하였다.
재조합 인간 PD-1-Ig의 서열
Figure 112019012812334-pct00159
재조합 인간 PD-L1-His의 서열
Figure 112019012812334-pct00160
하기 표는 PD-1/PD-L1 균질 시간-분해 형광 (HTRF) 결합 검정에서 측정된 본 개시내용의 대표적인 화합물에 대한 IC50 값을 열거한다. 범위는 하기와 같다: A = 0.001 내지 0.010 마이크로몰; B = 0.011 내지 0.150 마이크로몰; C = 0.151 내지 10 마이크로몰.
Figure 112019012812334-pct00161
화학식 (I)의 화합물은 PD-1/PD-L1 상호작용의 억제제로서 활성을 보유하고, 따라서 PD-1/PD-L1 상호작용과 연관된 질환 또는 결핍의 치료에 사용될 수 있다. PD-1/PD-L1 상호작용의 억제를 통해, 본 개시내용의 화합물은 감염성 질환 예컨대 HIV, A형 간염, B형 간염, C형 간염 또는 D형 간염 및 암을 치료하는 데 사용될 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Bristol-Myers Squibb Company <120> COMPOUNDS USEFUL AS IMMUNOMODULATORS <130> 12662WOPCT <150> US 62/359,971 <151> 2016-07-08 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 384 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala 1 5 10 15 Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe 20 25 30 Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro 35 40 45 Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln 50 55 60 Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg 65 70 75 80 Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr 85 90 95 Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu 100 105 110 Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro 115 120 125 Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Gly 130 135 140 Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr 145 150 155 160 His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser 165 170 175 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 180 185 190 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 195 200 205 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 210 215 220 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 225 230 235 240 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 245 250 255 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 275 280 285 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 290 295 300 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 305 310 315 320 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 325 330 335 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 340 345 350 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 355 360 365 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 375 380 <210> 2 <211> 237 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser 1 5 10 15 Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu 20 25 30 Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln 35 40 45 Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg 50 55 60 Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala 65 70 75 80 Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys 85 90 95 Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val 100 105 110 Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro 115 120 125 Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys 130 135 140 Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys 145 150 155 160 Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr 165 170 175 Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr 180 185 190 Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile 195 200 205 Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr Gly Ser Ser 210 215 220 Glu Thr Val Arg Phe Gln Gly His His His His His His 225 230 235

Claims (17)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure 112022071988630-pct00181

    상기 식에서,
    m은 1이고;
    R1은 -(CH2)nAr이고; 여기서
    n은 1이고;
    Ar은 시아노로 임의로 치환된 피리디닐이고,
    R2는
    Figure 112022071988630-pct00182
    이고; 여기서
    Rn은 수소이고;
    Y는 메틸이고;
    R5는 5 내지 10개의 원자를 함유하는 모노시클릭 또는 비시클릭 불포화 헤테로사이클이고, 여기서 이들 원자 중 1 내지 4개는 독립적으로 질소 및 황으로부터 선택되고; 여기서 모노시클릭 또는 비시클릭 기는 C1-C3알킬, 시아노, 포르밀, 할로, 할로C1-C3알콕시, 할로C1-C3알킬, 히드록시, 옥소, -L-(CH2)m'NRcRd, -L-(CH2)m'OH,
    Figure 112022071988630-pct00171
    로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 또는 3개의 치환기로 임의로 치환되고;
    여기서 L은 결합, -CH2-, 및 -O-로부터 선택되고;
    m'는 1, 2, 3, 또는 4이고; 단 m'가 1인 경우에, L은 탄소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착되는 결합이고;
    t는 0 또는 1이고;
    z는 2 또는 3이고;
    Rz는 히드록시이고;
    Rc 및 Rd는 각각 메틸이고;
    R6은 수소이고;
    R3은 할로이고;
    R4는 -(CH2)pCHO, -(CH2)n'OH, 및 -(CH2)n'NRqR8로부터 선택되고, 여기서
    p는 0, 1, 2, 또는 3이고;
    n'는 1, 2, 3, 또는 4이고;
    Rq는 수소, C1-C4알킬, 및 벤질로부터 선택되고;
    R8은
    Figure 112022071988630-pct00183
    로부터 선택되고; 여기서
    s는 0, 1, 또는 2이고;
    z는 1, 2, 또는 3이고;
    Rj는 C1-C3알킬, C1-C3알킬술포닐C1-C3알킬, C1-C3알킬술폭실C1-C3알킬, 및 C1-C3알킬술파닐C1-C3알킬로부터 선택되고;
    Rw는 -CO2H 또는 -CONH2이고,
    R9는 수소, 벤질, 및 메틸로부터 선택되고;
    각각의 R9'는 독립적으로 수소, 에틸, 및 메틸로부터 선택되고;
    R10은 수소, C1-C3알킬, 및 벤질로부터 선택되고;
    R11은 C2-C4알케닐 및 C1-C4알킬로부터 선택되거나;
    또는
    R8 및 Rq는 이들이 부착되어 있는 질소 원자와 함께
    Figure 112022071988630-pct00184
    Figure 112022071988630-pct00185
    로부터 선택된 고리를 형성하고; 여기서
    s는 0, 1, 또는 2이고;
    z는 1, 2, 또는 3이고;
    Q'는 CHR13', S, O, -N(CH2)2OH, 및 NCH3으로부터 선택되고;
    R12는 수소, -CO2H, 히드록시C1-C4알킬, 및 -C(O)NHSO2R16으로부터 선택되고; 여기서 R16은 트리플루오로메틸, 시클로프로필, C1-C4알킬, 디메틸아미노, 4-메틸피페라지닐, 및 메틸 기로 치환된 이미다졸릴로부터 선택되고;
    R13은 수소, 히드록시C1-C4알킬, 및 -CO2H로부터 선택되고;
    R13'는 수소, 히드록시C1-C3알킬, 및 -CO2H로부터 선택되고;
    R14는 C1-C4알콕시카르보닐, C1-C3알킬, 카르복시, 할로, 히드록시, 히드록시C1-C4알킬, 및 -NRc'Rd'로부터 선택되고; 여기서 Rc' 및 Rd'는 독립적으로 수소, C1-C4알콕시카르보닐, 및 C1-C4알킬카르보닐로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서,
    p는 0이고;
    n'는 1이고;
    Rq는 수소이고;
    R8은
    Figure 112022071988630-pct00186
    Figure 112022071988630-pct00187
    로부터 선택되고; 여기서
    s는 1이고;
    z는 2이고;
    R9는 수소, 벤질, 및 메틸로부터 선택되고;
    각각의 R9'는 독립적으로 수소, 에틸, 및 메틸로부터 선택되고;
    R10은 수소, C1-C3알킬, 및 벤질로부터 선택되거나; 또는
    R8 및 Rq는 이들이 부착되어 있는 질소 원자와 함께
    Figure 112022071988630-pct00179
    인 고리를 형성하고; 여기서
    s는 1 또는 2이고;
    z는 2 또는 3이고;
    R14는 C1-C4알콕시카르보닐, C1-C3알킬, 카르복시, 할로, 및 히드록시로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 제약상 허용되는 염.
  3. (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-7-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-3-일)벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-2-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴놀린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-2-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(이소퀴놀린-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(이소퀴놀린-7-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(이소퀴놀린-6-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((4-((3-(7-브로모퀴녹살린-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((4-((3-(벤조[d]티아졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((4-((3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    2-((4-((3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((4-((3-(벤조[d]옥사졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((4-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    2-((4-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산;
    (S)-1-(4-((3-(벤조[d]티아졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산;
    (R)-2-((4-((3-(1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산;
    2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산;
    2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-2-메틸프로판산;
    (R)-5-((4-클로로-2-포르밀-5-((3-(2-(2-(3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(2-(2-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(2-(2-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산;
    (S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(6-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산;
    (R)-5-((4-클로로-2-(히드록시메틸)-5-((3-(6-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴;
    (S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산;
    (R)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((2-메틸-3-(퀴녹살린-6-일)벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (S)-1-(5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)피페리딘-2-카르복실산;
    (S)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(3-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)프로필)-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시프로판산;
    5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)피리딘-4-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-(((1,3-디히드록시-2-메틸프로판-2-일)아미노)메틸)페녹시)메틸)니코티노니트릴;
    (R)-5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-4-(3-(3-히드록시피롤리딘-1-일)프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-(((1,3-디히드록시-2-메틸프로판-2-일)아미노)메틸)페녹시)메틸)니코티노니트릴;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(1-(4-((S)-3-히드록시피롤리딘-1-일)부틸)-3,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    5-((4-클로로-5-((3-(3-클로로-4-(3-히드록시프로폭시)피리딘-2-일)-2-메틸벤질)옥시)-2-(((1,3-디히드록시-2-메틸프로판-2-일)아미노)메틸)페녹시)메틸)니코티노니트릴;
    5-((4-클로로-2-(((2-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)아미노)메틸)-5-((3-(4-(((2-((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)에틸)아미노)메틸)-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴;
    5-((4-클로로-2-(((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)메틸)-5-((3-(4-(((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)메틸)-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)페녹시)메틸)니코티노니트릴;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(4-(((R)-3-히드록시피롤리딘-1-일)메틸)-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산;
    (R)-2-((5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)-4-((3-(4-포르밀-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)아미노)-3-히드록시-2-메틸프로판산; 및
    (S)-1-(4-((3-(벤조[d]옥사졸-5-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-클로로-2-((5-시아노피리딘-3-일)메톡시)벤질)피페리딘-2-카르복실산
    으로부터 선택된 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 치료 유효량의 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 면역 반응의 증진, 자극, 조정 및/또는 증가를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증진, 자극, 조정 및/또는 증가시키기 위한 제약 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 전, 그 후, 또는 그와 동시에 투여되는 추가의 작용제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 추가의 작용제가 항미생물제, 항바이러스제, 세포독성제, 유전자 발현 조정제 및/또는 면역 반응 조절제인 제약 조성물.
  7. 치료 유효량의 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암 세포의 성장, 증식 또는 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에서 암 세포의 성장, 증식 또는 전이를 억제하기 위한 제약 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 암이 흑색종, 신세포 암종, 편평 비소세포 폐암 (NSCLC), 비-편평 NSCLC, 결장직장암, 거세-저항성 전립선암, 난소암, 위암, 간세포성 암종, 췌장 암종, 두경부의 편평 세포 암종, 식도, 위장관 및 유방 암종, 및 혈액 악성종양으로부터 선택된 것인 제약 조성물.
  9. 치료 유효량의 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 감염성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 감염성 질환을 치료하기 위한 제약 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 감염성 질환이 바이러스에 의해 유발된 것인 제약 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 바이러스가 HIV, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, 포진 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자로부터 선택된 것인 제약 조성물.
  12. 치료 유효량의 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 패혈성 쇼크의 치료를 필요로 하는 대상체에서 패혈성 쇼크를 치료하기 위한 제약 조성물.
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