ES2847050T3 - Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas - Google Patents
Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas Download PDFInfo
- Publication number
- ES2847050T3 ES2847050T3 ES18187765T ES18187765T ES2847050T3 ES 2847050 T3 ES2847050 T3 ES 2847050T3 ES 18187765 T ES18187765 T ES 18187765T ES 18187765 T ES18187765 T ES 18187765T ES 2847050 T3 ES2847050 T3 ES 2847050T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- genbank
- antibody
- seq
- update date
- antibodies
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- RYBQBTDRBUKXDR-KEKNWZKVSA-N COc(c(OCCCOc(cc(c1c2)N=CC(CCC(C3)=C)N3C1=O)c2OC)c1)cc2c1N=C[C@H](CC(C1)=C)N1C2=O Chemical compound COc(c(OCCCOc(cc(c1c2)N=CC(CCC(C3)=C)N3C1=O)c2OC)c1)cc2c1N=C[C@H](CC(C1)=C)N1C2=O RYBQBTDRBUKXDR-KEKNWZKVSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
- C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Abstract
Un compuesto que es A: **(Ver fórmula)** y sales y solvatos del mismo.
Description
DESCRIPCIÓN
Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas
La presente invención se refiere a pirrolobenzodiazepinas (PBD), en particular a pirrolobenzodiazepinas que tienen un grupo protector C2 lábil, en forma de un conector a un agente de unión a una célula.
Antecedentes a la invención
Pirrolobenzodiazepinas
Algunas pirrolobenzodiazepinas (PBD) tienen la capacidad de reconocer y unirse a secuencias específicas de ADN; la secuencia preferida es PuGPu. El primer antibiótico antitumoral de PBD, la antramicina, se descubrió en 1965 (Leimgruber y col., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber y col., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965)). Desde entonces, se ha informado de varias PBD que se producen naturalmente, y se han desarrollado más de 10 rutas de síntesis para varios análogos (Thurston y col., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994); Antonow, D. y Thurston, D.E., Chem. Rev. 2011 111 (4), 2815-2864). Miembros de la familia incluyen abeimicina (Hochlowski y col., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), chicamicina (Konishi y col., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (patente japonesa 58-180 487; Thurston y col., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990); Bose y col., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)), mazetramicina (Kuminoto y col., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), neotramicinas A y B (Takeuchi y col., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), porotramicina (Tsunakawa y col., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), protracarcina (Shimizu y col., J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley y Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)), sibanomicina (DC-102) (Hara y col., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh y col., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), sibiromicina (Leber y col., J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988)) y tomamicina (Arima y col., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). Las PBD son de la estructura general:
Se diferencian en el número, tipo y posición de sustituyentes, en tanto sus anillos A aromáticos como anillos C de pirrolo, y en el grado de saturación del anillo C. En el anillo B hay tanto una imina (N=C), una carbinolamina (NH-CH(OH)) como un éter metílico de carbinolamina (NH-CH(OMe)) en la posición N10-C11 que es el centro electrófilo responsable de alquilar ADN. Todos los productos naturales conocidos tienen una configuración (S) en la posición C11a quiral que les proporciona un giro hacia la derecha cuando se miran desde el anillo C hacia el anillo A. Esto les da la forma tridimensional apropiada para isohelicidad con el surco menor del ADN de forma B, conduciendo a un encaje ajustado en el sitio de unión (Kohn, en Antibiotics III. Springer-Verlag, Nueva York, pág. 3-11 (1975); Hurley y Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). Su capacidad para formar un aducto en el surco menor les permite interferir con el procesamiento de ADN, de ahí su uso como agentes antitumorales.
Un compuesto de pirrolobenzodiazepina particularmente ventajoso se describe porGregson y col. (Chem. Commun.
1999, 797-798) como el compuesto 1, y por Gregson y col. (J. Med. Chem. 2001, 44, 1161-1174) como el compuesto 4a. Este compuesto, también conocido como SG2000, se muestra a continuación:
El documento WO 2007/085930 describe la preparación de compuestos de PBD diméricos que tienen grupos conectores para la conexión a un agente de unión a una célula, tal como un anticuerpo. El conector está presente en el puente que une las unidades de PBD monoméricas del dímero.
Los presentes inventores han descrito compuestos de PBD diméricos que tienen grupos conectores para la conexión a un agente de unión a una célula, tal como un anticuerpo, en el documento WO 2011/130613 y en el documento WO 2011/130616. El conector en estos compuestos está unido al núcleo de PBD a través de la posición C2, y se escinden generalmente por la acción de una enzima sobre el grupo conector.
Conjugados de anticuerpo-fármaco
Se ha establecido la terapia con anticuerpos para el tratamiento dirigido de pacientes con cáncer, trastornos inmunológicos y angiogénicos (Carter, P. (2006) Nature Reviews Immunology 6:343-357). El uso de conjugados de anticuerpo-fármaco (ADC), es decir, inmunoconjugados, para la administración local de agentes citotóxicos o citostáticos, es decir, fármacos para destruir o inhibir células tumorales en el tratamiento de cáncer, se dirige a la administración de los restos de fármaco a tumores, y la acumulación intracelular en su interior, mientras que la administración sistémica de estos agentes de fármaco no conjugados puede producir niveles inaceptables de toxicidad a células normales (Xie y col. (2006) Expert. Opin. Biol. Ther. 6(3):281-291; Kovtun y col. (2006) Cancer Res.
66(6):3214-3121; Law y col. (2006) Cancer Res. 66(4):2328-2337; Wu y col. (2005) Nature Biotech. 23(9):1137-1145; Lambert J. (2005) Current Opin. in Pharmacol. 5:543-549; Hamann P. (2005) Expert Opin. Ther. Patents 15(9):1087-1103; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Trail y col. (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337; Syrigos y Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614).
Así se busca máxima eficacia con la mínima toxicidad. Los esfuerzos para diseñar y refinar ADC se han basado en la selectividad de anticuerpos monoclonales (mAb), además del mecanismo de acción del fármaco, enlace del fármaco, relación de fármaco/anticuerpo (carga) y propiedades de liberación de fármaco (Junutula y col., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan y col. (2009) Blood 114(13):2721-2729; documentos US 7521541; US 7723485; WO2009/052249; McDonagh (2006) Protein Eng. Design & Sel. 19(7): 299-307; Doronina y col. (2006) Bioconj. Chem.
17:114-124; Erickson y col. (2006) Cancer Res. 66(8):1-8; Sanderson y col. (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852; Jeffrey y col. (2005) J. Med. Chem. 48:1344-1358; Hamblett y col. (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070). Los restos de fármaco pueden conferir sus efectos citotóxicos y citostáticos por mecanismos que incluyen unión a tubulina, unión a ADN, inhibición de proteasoma y/o topoisomerasa. Algunos fármacos citotóxicos tienden a ser inactivos o menos activos cuando se conjugan con grandes anticuerpos o ligandos de receptores de proteína.
Los presentes inventores han desarrollado dímeros de PBD particulares con grupos de enlace para la formación de conjugados de PBD con agentes de unión a una célula, y en particular conjugados de PBD de anticuerpo.
Resumen de la invención
En un primer aspecto, la presente invención proporciona el compuesto A:
y sales y solvatos del mismo.
El documento WO 2011/130615 desvela el compuesto 26:
el cual es el compuesto original de A. El compuesto A comprende este PBD con un enlazador para la unión a un agente de unión a una células. El agente de unión a una células proporciona una serie de restos de etilenglicol para proporcionar solubilidad que es útil en la síntesis de conjugados.
El compuesto Atiene dos centros sp2 en cada anillo C, que pueden permitir unión más fuerte en el surco menor del ADN, que para compuestos con solo un centro sp2 en cada anillo C.
Un segundo aspecto de la presente invención proporciona un conjugado de fórmula ConjA:
en la que CBA representa una agente de unión a una célula. El enlace al resto mostrado es mediante un S libre (tiol activo) sobre el agente de unión a una célula.
Descripción detallada de la invención
La presente invención proporciona un dímero de PBD con un conector conectado mediante la posición C2 sobre uno de los restos de PBD adecuados para formar un dímero de PBD conjugado mediante el conector a un agente de unión a una célula.
La presente invención es adecuada para su uso en proporcionar un compuesto de PBD a un sitio preferido en un sujeto. El conjugado permite la liberación de un compuesto de PBD activo que no retiene ninguna parte del conector. No hay ninguna punta presente que pudiera afectar la reactividad del compuesto de PBD. Así, ConjA liberaría el compuesto ReIA:
El enlace especificado entre el dímero de PBD y el agente de unión a una célula, por ejemplo, anticuerpo, en la presente invención es preferentemente estable extracelularmente. Antes del transporte o administración en una célula, el conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC) es preferentemente estable y sigue intacto, es decir, el anticuerpo sigue ligado al resto de fármaco. Los conectores son estables fuera de la célula diana y pueden escindirse a alguna tasa eficaz dentro de la célula. Un conector eficaz: (i) mantendrá las propiedades de unión específica del anticuerpo; (ii) permitirá la administración intracelular del conjugado o resto de fármaco; (iii) seguirá siendo estable e intacto, es decir, no se escindirá, hasta que el conjugado se haya administrado o transportado a su sitio elegido como diana; y (iv) mantendrá un efecto citotóxico destructor de células o un efecto citostático del resto de fármaco de PBD. La estabilidad del ADC puede medirse por técnicas analíticas convencionales tales como espectroscopía de masas, HPLC y la técnica de separación/análisis EM/CL.
La administración del compuesto de fórmula ReIA se logra en el sitio de activación deseado de los conjugados de fórmula ConjA por la acción de una enzima, tal como catepsina, en el grupo de enlace, y en particular en el resto de dipéptido de valina-alanina.
Agente de unión a una célula
Una agente de unión a una célula puede ser de cualquier tipo e incluir péptidos y no péptidos. Éstos pueden incluir anticuerpos o un fragmento de un anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión, linfocinas, hormonas, miméticos de hormonas, vitaminas, factores de crecimiento, moléculas de transporte de nutrientes, o cualquier otra molécula de unión a una célula o sustancia.
Péptidos
En una realización, el agente de unión a una célula es un péptido lineal o cíclico que comprende 4-30, preferentemente 6-20, restos de aminoácidos contiguos. En esta realización, se prefiere que un agente de unión a una célula esté ligado a un compuesto de pirrolobenzodiazepina monómérico o dimérico.
En una realización, el agente de unión a una célula comprende un péptido que se une a integrina avP6. El péptido puede ser selectivo para avP6 con respecto a XYS.
En una realización, el agente de unión a una célula comprende el polipéptido A20FMDV-Cys. A20FMDV-Cys tiene la secuencia: NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC. Alternativamente, puede usarse una variante de la secuencia de A20FMDV-Cys en la que uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez restos de aminoácidos están sustituidos con otro resto de aminoácido. Además, el polipéptido puede tener la secuencia NAVXXXXXXXXXXXXXXXRTC.
Anticuerpos
El término “anticuerpo” en el presente documento se usa en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, dímeros, multímeros, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos), y fragmentos de anticuerpos, mientras que presenten la actividad biológica deseada (Miller y col. (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861). Los anticuerpos pueden ser murinos, humanos, humanizados, quiméricos, o derivados de otras especies. Un anticuerpo es una proteína generada por el sistema inmunitario que puede reconocer y unirse a un antígeno específico (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5a ed., Garland Publishing, New York). Un antígeno diana generalmente tiene numerosos sitios de unión, también denominados epítopos, reconocidos por CDR sobre múltiples anticuerpos. Cada anticuerpo que se une específicamente a un epítopo diferente tiene una estructura diferente. Así, un antígeno puede tener más de un anticuerpo correspondiente. Un anticuerpo incluye una molécula de inmunoglobulina de longitud completa o una porción inmunológicamente activa de una molécula de inmunoglobulina de longitud completa, es decir, una molécula que contiene un sitio de unión al antígeno que se une inmunoespecíficamente a un antígeno de una diana de interés o parte del mismo, incluyendo tales dianas, pero no se limitan a, célula cancerosa o células que producen anticuerpos autoinmunitarios asociados a una enfermedad autoinmunitaria. La inmunoglobulina puede ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA), clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina. Las inmunoglobulinas pueden derivarse de cualquier especie, que incluye origen humano, murino o de conejo.
Los “fragmentos de anticuerpos” comprenden una porción de un anticuerpo de longitud completa, generalmente la región de unión al antígeno o variable del mismo. Ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y scFv; diacuerpos; anticuerpos lineales; fragmentos producidos por una biblioteca de expresión de Fab, anticuerpos antiidiotípicos (anti-Id), CDR (región determinante de la complementariedad) y fragmentos de unión al epítopo de cualquiera de los anteriores que se unen inmunoespecíficamente a antígenos de células cancerosas, antígenos virales o antígenos microbianos, moléculas de anticuerpo monocatenarias; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.
El término “anticuerpo monoclonal”, como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo obtenido a partir de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posibles mutaciones que se producen naturalmente que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, estando dirigidos contra un único sitio antigénico. Además, a diferencia de las preparaciones de anticuerpos policlonales que incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal está dirigido contra un único determinante sobre el antígeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos porque pueden sintetizarse sin contaminar por otros anticuerpos. El adjetivo “monoclonal” indica el carácter del anticuerpo como que se obtiene de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea, y no debe interpretarse como que requiera la producción del anticuerpo por cualquier procedimiento particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que van a usarse de acuerdo con la presente invención pueden prepararse mediante el procedimiento de hibridoma descrito por primera vez por Kohler y col. (1975) Nature 256:495, o pueden prepararse mediante procedimientos de ADN recombinante (véase el documento US 4816567). Los anticuerpos monoclonales también pueden aislarse de bibliotecas de anticuerpos de fago usando las técnicas descritas en Clackson y col. (1991) Nature, 352:624-628; Marks y col. (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597, o de ratones transgénicos que llevan un sistema de inmunoglobulina completamente humana (Lonberg (2008) Curr. Opinion 20(4):450-459).
Los anticuerpos monoclonales en el presente documento incluyen específicamente anticuerpos “quiméricos” en los que una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica u homóloga a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenecen a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la(s) cadena(s) es idéntico u homólogo a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otras especies o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpos, además de fragmentos de tales anticuerpos, mientras que presenten la actividad biológica deseada (documento US 4816567; y Morrison y col. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855). Los anticuerpos quiméricos incluyen anticuerpos “primatizados” que comprenden secuencias de unión al antígeno de dominio variable derivadas de un primate no humano (por ejemplo, mono del viejo mundo o simio superior) y secuencias de la región constante humanas.
Un “anticuerpo intacto” en el presente documento es uno que comprende un dominio VL y VH, además de un dominio constante de la cadena ligera (CL) y dominios constantes de la cadena pesada, CH1, CH2 y CH3. Los dominios
constantes pueden ser dominios constantes de la secuencia nativa (por ejemplo, dominios constantes de la secuencia nativa humana) o variante de la secuencia de aminoácidos de la misma. El anticuerpo intacto puede tener una o más “funciones efectoras”, que se refiere a aquellas actividades biológicas atribuibles a la región Fc (una región Fc de la secuencia nativa o región Fc variante de la secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo. Ejemplos de funciones efectoras de anticuerpos incluyen unión a C1q; citotoxicidad dependiente del complemento; unión al receptor de Fc; citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo (ADCC); fagocitosis; y regulación por disminución de receptores de la superficie celular tales como receptor de linfocitos B y BCR.
Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, pueden asignarse anticuerpos intactos a diferentes “clases”. Hay cinco clases principales de anticuerpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varias de éstas pueden dividirse adicionalmente en “subclases” (isotipos), por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e IgA2. Los dominios constantes de las cadenas pesadas que se corresponden con las diferentes clases de anticuerpos se denominan a, 8, e, y y |i, respectivamente. Las estructuras de subunidad y configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son muy conocidas.
Humanización
Las técnicas para reducir la inmunogenicidad in vivo de un anticuerpo no humano o fragmento de anticuerpo incluyen las denominadas “humanización”.
Un “anticuerpo humanizado” se refiere a un polipéptido que comprende al menos una porción de una región variable modificada de un anticuerpo humano en el que una porción de la región variable, preferentemente una porción sustancialmente inferior al dominio variable humano intacto, se ha sustituido con la secuencia correspondiente de una especie no humana y en la que la región variable modificada está unida a al menos otra parte de otra proteína, preferentemente la región constante de un anticuerpo humano. La expresión “anticuerpos humanizados” incluye anticuerpos humanos en los que uno o más restos de aminoácidos de la región determinante de la complementariedad (“CDR”) y/o uno o más restos de aminoácidos de la región estructural (“FW” o “FR”) están sustituidos con restos de aminoácidos de sitios análogos en roedores u otros anticuerpos no humanos. La expresión “anticuerpo humanizado” también incluye una variante de la secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina o fragmento de la misma que comprende una FR que tiene sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana y una CDR que tiene sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina no humana.
Formas “humanizadas” de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) son anticuerpos quiméricos que contienen secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. O, visto de otra forma, un anticuerpo humanizado es un anticuerpo humano que también contiene secuencias seleccionadas de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) en lugar de las secuencias humanas. Un anticuerpo humanizado puede incluir sustituciones de aminoácidos conservativas o restos no naturales de las mismas especies o de especies diferentes que no alteran significativamente su unión y/o actividad biológica. Tales anticuerpos son anticuerpos quiméricos que contienen secuencia mínima derivada de inmunoglobulinas no humanas.
Hay varias técnicas de humanización, que incluyen “ injerto de CDR”, “selección guiada”, “desinmunización”, “acondicionamiento superficial” (también conocida como “inactivación”), “anticuerpos compuestos”, “optimización de contenidos de la cadena humana” y barajado de regiones estructurales.
Injerto de CDR
En esta técnica, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo del receptor) en las que los restos de una región determinante de la complementariedad (CDR) del anticuerpo del receptor están sustituidos con restos de una CDR de una especie no humana (anticuerpo del donante) tal como ratón, rata, camello, bovino, cabra o conejo que tiene las propiedades deseadas (de hecho, las CDR no humanas están “ injertadas” sobre la región estructural humana). En algunos casos, los restos de la región estructural (FR) de la inmunoglobulina humana están sustituidos con restos no humanos correspondientes (esto puede ocurrir cuando, por ejemplo, un resto de FR particular tiene efecto significativo sobre la unión al antígeno).
Además, los anticuerpos humanizados pueden comprender restos que ni se encuentran en el anticuerpo del receptor ni en las CDR importadas o secuencias de la región estructural. Estas modificaciones se hacen para refinar adicionalmente y maximizar el rendimiento del anticuerpo. Así, en general, un anticuerpo humanizado comprenderá todos de al menos uno, y en un aspecto dos, dominios variables, en los que todos o todos los bucles hipervariables se corresponden con aquellos de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones FR son aquellas de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado también comprenderá opcionalmente al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fc), o aquella de una inmunoglobulina humana.
Selección guiada
El procedimiento consiste en combinar el dominio Vh o Vl de un anticuerpo no humano dado específico para un epítopo
particular con una biblioteca de Vh o Vl humana y los dominios V humanos específicos se seleccionan contra el antígeno de interés. Este VH humano seleccionado se combina entonces con una biblioteca de VL para generar una combinación de VHxVL completamente humana. El procedimiento se describe en Nature Biotechnology (N.Y.) 12, (1994) 899-903.
Anticuerpos compuestos
En este procedimiento, dos o más segmentos de la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo humano se combinan dentro de la molécula de anticuerpo final. Se construyen combinando múltiples segmentos de la secuencia de VH y VL humana en combinaciones que limitan o evitan los epítopos de linfocitos T humanos en las regiones V de anticuerpos compuestos finales. Si se requiere, los epítopos de linfocitos T se limitan o evitan intercambiando segmentos de las regiones V que contribuyen a o que codifican un epítopo de linfocitos T con segmentos alternativos que evitan epítopos de linfocitos T. Este procedimiento se describe en el documento US 2008/0206239 A1.
Desinmunización
Este procedimiento implica la eliminación de epítopos de linfocitos T humanos (u otra segunda especie) de las regiones V del anticuerpo terapéutico (u otra molécula). La secuencia de las regiones V de anticuerpos terapéuticos se analiza para la presencia de motivos de unión al MHC de clase II por, por ejemplo, comparación con bases de datos de motivos de unión al MHC (tales como la base de datos de “motivos” alojada en www.wehi.edu.au). Alternativamente, los motivos de unión al MHC de clase II pueden identificarse usando procedimientos de plegamiento computacional tales como aquellos ideados por Altuvia y col. (J. Mol. Biol. 249 244-250 (1995)); en estos procedimientos, péptidos de solapamiento consecutivos de las secuencias de las regiones V están probándose para sus energías de unión a proteínas del MHC de clase II. Estos datos pueden entonces combinarse con información sobre otras características de secuencias que se refieren a péptidos satisfactoriamente presentados, tales como anfipaticidad, motivos de Rothbard y sitios de escisión para catepsina B y otras enzimas de procesamiento.
Una vez se han identificado posibles epítopos de linfocitos T de segundas especies (por ejemplo, humana), se eliminan por la alteración de uno o más aminoácidos. Los aminoácidos modificados están normalmente dentro del propio epítopo del linfocito T, pero también pueden estar adyacentes al epítopo en términos de la estructura primaria o secundaria de la proteína (y, por tanto, pueden no estar adyacentes en la estructura primaria). Lo más normalmente, la alteración es a modo de sustitución pero, en algunas circunstancias, será más apropiada la adición o deleción de aminoácidos.
Todas las alteraciones pueden llevarse a cabo por tecnología de ADN recombinante, de manera que la molécula final pueda prepararse por expresión de un huésped recombinante usando procedimientos bien establecidos tales como mutagénesis dirigida al sitio. Sin embargo, también es posible el uso de química de proteínas o cualquier otro medio de alteración molecular.
Acondicionamiento superficial
Este procedimiento implica:
(a) determinar la estructura conformacional de la región variable del anticuerpo no humano (por ejemplo, roedor) (o fragmento del mismo) construyendo un modelo tridimensional de la región variable del anticuerpo no humano; (b) generar alineamientos de secuencias usando distribuciones de relativa accesibilidad a partir de estructuras cristalográficas de rayos X de un número suficiente de cadenas pesadas y ligeras de las regiones variables de anticuerpos no humanos y humanos para dar un conjunto de posiciones de las regiones estructurales de las cadenas pesadas y ligeras en las que las posiciones de alineamiento son idénticas en el 98 % del número suficiente de cadenas pesadas y ligeras de anticuerpos no humanos;
(c) definir para el anticuerpo no humano que va a humanizarse un conjunto de restos de aminoácidos expuestos en la superficie de las cadenas pesadas y ligeras usando el conjunto de posiciones de la región estructural generadas en la etapa (b);
(d) identificar a partir de las secuencias de aminoácidos de anticuerpo humano un conjunto de restos de aminoácidos expuestos en la superficie de las cadenas pesadas y ligeras que es lo más estrechamente idéntico al conjunto de restos de aminoácidos expuestos en la superficie definidos en la etapa (c), en el que la cadena pesada y ligera del anticuerpo humano están o no están naturalmente apareadas;
(e) sustituir, en la secuencia de aminoácidos del anticuerpo no humano que va a humanizarse, el conjunto de restos de aminoácidos expuestos en la superficie de las cadenas pesadas y ligeras definido en la etapa (c) con el conjunto de restos de aminoácidos expuestos en la superficie de las cadenas pesadas y ligeras identificado en la etapa (d);
(f) construir un modelo tridimensional de la región variable del anticuerpo no humano resultante de la sustitución especificada en la etapa (e);
(g) identificar, comparando los modelos tridimensionales construidos en las etapas (a) y (f), cualquier resto de aminoácido de los conjuntos identificados en las etapas (c) o (d), que están dentro de 5 Angstroms de cualquier átomo de cualquier resto de las regiones determinantes de la complementariedad del anticuerpo no humano que
va a humanizarse; y
(h) cambiar cualquier resto identificado en la etapa (g) del resto de aminoácido humano a no humano original para así definir un conjunto humanizante de anticuerpos no humanos de restos de aminoácidos expuestos en la superficie; con la condición de que la etapa (a) no necesita realizarse primero, pero debe realizarse antes de etapa (g).
Superhumanización
El procedimiento compara la secuencia no humana con el repertorio de genes de la línea germinal humana funcional. Se seleccionan aquellos genes humanos que codifican estructuras canónicas idénticas o estrechamente relacionadas con las secuencias no humanas. Se eligen aquellos genes humanos seleccionados con la mayor homología dentro de las CDR como donantes de FR. Finalmente, las CDR no humanas se injertan sobre estas FR humanas. Este procedimiento se describe en la patente WO 2005/079479 A2.
Optimización de contenidos de la cadena humana
Este procedimiento compara la secuencia no humana (por ejemplo, de ratón) con el repertorio de genes de la línea germinal humana y las diferencias se puntúan como contenido de la cadena humana (HSC) que cuantifica una secuencia al nivel de posibles epítopos de MHC/linfocitos T. A continuación, la secuencia diana se humaniza maximizando su HSC en vez de usando una medida de identidad global para generar múltiples variantes humanizadas diversas (descritas en Molecular Immunology, 44, (2007) 1986-1998).
Barajado de regiones estructurales
Las CDR del anticuerpo no humano están fusionadas en marco con conjuntos de ADNc que engloban todas las regiones estructurales de genes de la línea germinal humana de cadenas pesadas y ligeras conocidas. A continuación, los anticuerpos humanizados se seleccionan, por ejemplo, por inmunopurificación de la biblioteca de anticuerpos expresados en fago. Esto se describe en Methods 36, 43-60 (2005).
Ejemplos de agentes de unión a una célula incluyen aquellos agentes descritos para su uso en el documento WO 2007/085930, que se incorpora en el presente documento.
A continuación se enumeran antígenos asociados a tumor y anticuerpos relacionados para su uso en realizaciones de la presente invención.
ANTÍGENOS ASOCIADOS A TUMOR Y ANTICUERPOS RELACIONADOS
(1) BMPR1B (receptor de la proteína morfogenética ósea tipo IB)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_001203
Versión de Genbank n° NM_001203.2 GI:169790809
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:06 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_001194
Versión de Genbank n.° NP_001194.1 GI:4502431
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:06 PM
Referencias cruzadas
Ten Dijke, P. y col., Science 264 (5155): 101-104 (1994), Oncogene 14 10 (11):1377-1382 (1997); documentos WO2004/063362 (reivindicación 2); WO2003/042661 (reivindicación 12); US2003/134790-A1 (página 38-39); WO2002/102235 (reivindicación 13; página 296); WO2003/055443 (página 91-92); WO2002/99122 (Ejemplo 2; página 528-530); WO2003/029421 (reivindicación 6); WO2003/024392 (reivindicación 2; Fig. 112); WO2002/98358 (reivindicación 1; página 183); WO2002/54940 (página 100-101); WO2002/59377 (página 349-350); WO2002/30268 (reivindicación 27; página 376); WO2001/48204 (Ejemplo; Fig. 4); NP_001194 receptor de la proteína morfogenética ósea, tipo IB /pid=NP_001194.1.; MIM:603248; AY065994
(2) E16 (LAT1, SLC7A5)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM 003486
Versión de Genbank n.° NM_003486.5 GI:71979931
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:06 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_003477
Versión de Genbank n.° NP_003477.4 GI:71979932
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:06 PM
Referencias cruzadas
Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W. y col (1992) J. Biol. Chem. 267 (16):11267-11273); documentos WO2004/048938 (Ejemplo 2); WO2004/032842 (Ejemplo IV); WO2003/042661 (reivindicación 12); WO2003/016475 (reivindicación 1); WO2002/78524 (Ejemplo 2); WO2002/99074 (reivindicación 19; página 127-129); WO2002/86443 (reivindicación 27; páginas 222, 393); W02003/003906 (reivindicación 10; página 293); WO2002/64798 (reivindicación 33; página 93-95); WO2000/14228 (reivindicación 5; página 133-136); US2003/224454 (Fig. 3); WO2003/025138 (reivindicación 12; página 150); NP_003477 familia 7 de transportadores de solutos (transportador de aminoácidos catiónicos, y+system), miembro 5/pid=NP_003477.3 -Homo sapiens; MIM:600182; NM_015923.
(3) STEAP1 (antígeno epitelial de seis transmembranas de la próstata)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_012449
Versión de Genbank n.° NM_012449.2 GI:22027487
Fecha de actualización del registro de GenBank: 9 de septiembre de 201202:57 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_036581
Versión de Genbank n.° NP_036581.1 GI:9558759
Fecha de actualización del registro de GenBank: 9 de septiembre de 201202:57 PM
Referencias cruzadas
Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert, R.S. y col. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528); documentos WO2004/065577 (reivindicación 6); WO2004/027049 (Fig. 1L); EP1394274 (Ejemplo 11); WO2004/016225 (reivindicación 2); WO2003/042661 (reivindicación 12); US2003/157089 (Ejemplo 5); US2003/185830 (Ejemplo 5); US2003/064397 (Fig. 2); WO2002/89747 (Ejemplo 5; página 618-619); WO2003/022995 (Ejemplo 9; Fig. 13A, Ejemplo 53; página 173, Ejemplo 2; Fig. 2A); antígeno epitelial de seis transmembranas de la próstata; MIM:604415.
(4) 0772P (CA125, MUC16)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AF361486
Versión de Genbank n.° AF361486.3 GI:34501466
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 07:56 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAK74120
Versión de Genbank n.° AAK74120.3 GI:34501467
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 07:56 AM
Referencias cruzadas
J. Biol. Chem. 276 (29):27371-27375 (2001)); documentos WO2004/045553 (reivindicación 14); WO2002/92836 (reivindicación 6; Fig. 12); WO2002/83866 (reivindicación 15; página 116-121); US2003/124140 (Ejemplo 16); GI:34501467;
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, factor potenciador de megacariocitos, mesotelina)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_005823
Versión de Genbank n.° NM_005823.5 GI:293651528
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:47 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_0058144
Versión de Genbank n.° NP_005814.2 GI:53988378
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:47 PM
Referencias cruzadas
Yamaguchi, N. y col., Biol. Chem. 269 (2), 805-808 (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 10 (1):136-140 (1996), J. Biol. Chem. 270 (37):21984-21990 (1995); documentos WO2003/101283 (reivindicación 14); WO2002/102235 (reivindicación 13; página 287-288); WO2002/101075 (reivindicación 4; página 308-309); WO2002/71928 (página 320-321); WO94/10312 (página 52-57); IM:601051. (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, familia 34 de transportadores de solutos (fosfato de sodio), miembro 2, transportador 3b de fosfato dependiente de sodio tipo II)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_006424
Versión de Genbank n.° NM_006424.2 GI:110611905
Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 03:39 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_006415
Versión de Genbank n.° NP_006415.2 GI:110611906
Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 03:39 PM
Referencias cruzadas
J. Biol. Chem. 277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A. y col. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582); documentos WO2004/022778 (reivindicación 2); EP1394274 (Ejemplo 11); WO2002/102235 (reivindicación 13; página 326); EP0875569 (reivindicación 1; página 17-19); WO2001/57188 (reivindicación 20; página 329); WO2004/032842 (Ejemplo IV); WO2001/75177 (reivindicación 24; página 139-140); MIM:604217.
(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, semaforina 5b Hlog, dominio sema, siete repeticiones de trombospondina (tipo 1 y similares a tipo 1), dominio transmembrana (TM) y dominio citoplásmico corto, (semaforina) 5B)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AB040878
Versión de Genbank n.° AB040878.1 GI:7959148
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de agosto de 2006 05:40 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank BAA95969
Versión de Genbank n.° BAA95969.1 GI:7959149
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de agosto de 2006 05:40 PM
Referencias cruzadas
Nagase T. y col. (2000) DNA Res. 7 (2):143-150); documentos W02004/000997 (reivindicación 1); WO2003/003984 (reivindicación 1); WO2002/06339 (reivindicación 1; página 50); WO2001/88133 (reivindicación 1; página 41-43, 48 58); WO2003/054152 (reivindicación 20); W02003/101400 (reivindicación 11); acceso: 30 Q9P283; Genew; HGNC:10737
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, ADNc de RIKEN 2700050C12, ADNc de RIKEN gen 2700050C12)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AY358628
Versión de Genbank n.° AY358628.1 GI:37182377
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de diciembre de 200904:15 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAQ88991
Versión de Genbank n.° AAQ88991.1 GI:37182378
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de diciembre de 200904:15 AM
Referencias cruzadas
Ross y col. (2002) Cancer Res. 62:2546-2553; documentos US2003/129192 (reivindicación 2); US2004/044180 (reivindicación 12); US2004/044179 35 (reivindicación 11); US2003/096961 (reivindicación 11); US2003/232056 (Ejemplo 5); WO2003/105758 16 (reivindicación 12); US2003/206918 (Ejemplo 5); EP1347046 (reivindicación 1); WO2003/025148 (reivindicación 20); GI:37182378.
(9) ETBR (receptor tipo B de endotelina)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AY275463
Versión de Genbank n.° AY275463.1 GI:30526094
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 02:26 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAP32295
Versión de Genbank n.° AAP32295.1 GI:30526095
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 02:26 AM
Referencias cruzadas
Nakamuta M. y col., Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991; Ogawa Y. y col., Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 248-255, 1991; Arai H. y col., Jpn. Circ. J. 56, 1303-1307, 1992; Arai H. y col., J. Biol. Chem. 268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M. y col., Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 656-663, 1991; Elshorabagy N.A. y col., J. Biol. Chem. 268, 3873-3879, 1993; Haendler B. y col., J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M. y col., Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C. y col., J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y. y col., Biol. Chem. 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B. y col., Am. J. Med. Genet. 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W. y col., Eur. J. Hum. Genet. 5, 180-185, 1997; Puffenberger E.G. y col., Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie T. y col., Hum. Mol. Genet. 4, 2407-15 2409, 1995; Auricchio A. y col., Hum. Mol. Genet. 5:351-354, 1996; Amiel J. y col., Hum. Mol. Genet. 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W. y col., Nat. Genet. 12, 445-447, 1996; Svensson P.J. y col., Hum. Genet. 103, 145-148, 1998; Fuchs S. y col., Mol. Med. 7, 115-124, 2001; Pingault V. y col. (2002) Hum. Genet.
111, 198-206; documentos WO2004/045516 (reivindicación 1); WO2004/048938 (Ejemplo 2); W02004/040000 (reivindicación 151); WO2003/087768 (reivindicación 1); WO2003/016475 (reivindicación 1); WO2003/016475 (reivindicación 1); WO2002/61087 (Fig. 1); WO2003/016494 (Fig. 6); WO2003/025138 (reivindicación 12; página 144); WO2001/98351 (reivindicación 1; página 124-125); EP0522868 (reivindicación 8; Fig. 2); WO2001/77172 (reivindicación 1; página 297-299); US2003/109676; US6518404 (Fig. 3); US5773223 (reivindicación 1a; Col 31 34); W02004/001004.
(10) MSG783 (RNF124, proteína hipotética FLJ20315)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_017763
Versión de Genbank n.° NM_017763.4 GI:167830482
Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 12:34 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_060233
Versión de Genbank n.° NP_060233.3 GI:56711322
Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 201212:34 AM
Referencias cruzadas
Documentos WO2003/104275 (reivindicación 1); WO2004/046342 (Ejemplo 2); WO2003/042661 (reivindicación 12); WO2003/083074 (reivindicación 14; página 61); WO2003/018621 (reivindicación 1); WO2003/024392 (reivindicación 2; Fig. 93); WO2001/66689 (Ejemplo 6); ID de locus: 54894.
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gen 1 asociado al cáncer de próstata, proteína 1 asociada al cáncer de próstata, antígeno epitelial de seis transmembranas de próstata 2, proteína de próstata de seis transmembranas)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AF455138
Versión de Genbank n.° AF455138.1 GI:22655487
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:54 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAN04080
Versión de Genbank n.° AAN04080.1 GI:22655488
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:54 AM
Referencias cruzadas
Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002); documentos WO2003/087306; US2003/064397 (reivindicación 1; Fig. 1); WO2002/72596 (reivindicación 13; página 54-55); WO2001/72962 (reivindicación 1; Fig. 4B); WO2003/104270 (reivindicación 11); WO2003/104270 (reivindicación 16); US2004/005598 (reivindicación 22); WO2003/042661 (reivindicación 12); US2003/060612 (reivindicación 12; Fig. 10); WO2002/26822 (reivindicación 23; Fig. 2); WO2002/16429 (reivindicación 12; Fig. 10); GI:22655488.
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canales catiónicos de potencial de receptores transitorios, subfamilia M, miembro 4)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_017636
Versión de Genbank n.° NM_017636.3 GI:304766649
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de junio de 2012 11:27 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_060106
Versión de Genbank n.° NP_060106.2 GI:21314671
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de junio de 2012 11:27 AM
Referencias cruzadas
Xu, X.Z. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol. Chem.
278 (33):30813-30820 (2003); documentos US2003/143557 (reivindicación 4); WO2000/40614 (reivindicación 14; página 100-103); WO2002/10382 (reivindicación 1; Fig. 9A); WO2003/042661 (reivindicación 12); WO2002/30268 (reivindicación 27; página 391); US2003/219806 (reivindicación 4); WO2001/62794 (reivindicación 10 14; Fig. 1A-D); MIM:606936.
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, factor de crecimiento derivado de teratocarcinoma) Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_003212
Versión de Genbank n.° NM_003212.3 GI:292494881
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:27 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_8003203
Versión de Genbank n.° NP 8003203.1 GI:4507425
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:27 PM
Referencias cruzadas
Ciccodicola, A. y col., EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am. J. Hum. Genet. 49 (3):555-565 (1991); documentos US2003/224411 (reivindicación 1); WO2003/083041 (Ejemplo 1); WO2003/034984 (reivindicación 12); WO2002/88170 (reivindicación 2; página 52-53); WO2003/024392 (reivindicación 2; Fig. 58); WO2002/16413 (reivindicación 1; página 94-95, 105); WO2002/22808 (reivindicación 2; Fig. 1); US5854399 (Ejemplo 2; Col 17-18); US5792616 (Fig. 2); MIM:187395.
(14) CD21 (CR2 (receptor del complemento 2) o C3DR (C3d/receptor de virus de Epstein Barr) o Hs. 73792) Nucleótido
N.° de acceso de GenBank M26004
Versión de Genbank n.° M26004.1 GI:181939
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA35786
Versión de Genbank n.° AAA35786.1 GI:181940
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Referencias cruzadas
Fujisaku y col. (1989) J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125); Weis J.J. y col., J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988; Moore M. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 9194-9198, 1987; Barel M. y col., Mol. Immunol. 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K. y col. (1993) J. Immunol. 150, 5311-5320; documentos WO2004/045520 (Ejemplo 4); US2004/005538 (Ejemplo 1); WO2003/062401 (reivindicación 9); WO2004/045520 (Ejemplo 4); WO91/02536 (Fig. 9.1-9.9); WO2004/020595 (reivindicación 1); acceso: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786.1.
(15) CD79b (CD79B, CD79P, IGb (beta asociada a inmunoglobulina), B29)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_000626
Versión de Genbank n.° NM_000626.2 GI:90193589
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 201201:53 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_000617
Versión de Genbank n.° NP_000617.1 GI:11038674
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 201201:53 PM
Referencias cruzadas
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Muller y col. (1992) Eur. J. Immunol. 22 (6):1621-1625); documentos WO2004/016225 (reivindicación 2, Fig. 140); WO2003/087768, US2004/101874 (reivindicación 1, página 102); WO2003/062401 (reivindicación 9); WO2002/78524 (Ejemplo 2); US2002/150573 (reivindicación 5, página 15); US5644033; WO2003/048202 (reivindicación 1, páginas 306 y 309); documento WO 99/58658, US6534482 (reivindicación 13, Fig. 17A/B); WO2000/55351 (reivindicación 11, páginas 1145-1146); MIM:147245
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP9A (dominio SH2 que contiene proteína de anclaje a fosfatasa 1a), SPAP1B, SPAP1C)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_030764
Versión de Genbank n.° NM_030764.3 GI:227430280
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de junio de 2012 12:30 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_110391
Versión de Genbank n.° NP_110391.2 GI:19923629
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de junio de 2012 12:30 AM
Referencias cruzadas
AY358130); Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001), Xu, M.J. y col. (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3):768-775; WO2004/016225 (reivindicación 2); WO2003/077836; WO2001/38490 (reivindicación 5; Fig. 18D-1-18D-2); WO2003/097803 (reivindicación 12); WO2003/089624 (reivindicación 25); MIM:606509.
(17) HER2 (ErbB2)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank M11730
Versión de Genbank n.° M11730.1 GI:183986
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA75493
Versión de Genbank n.° AAA75493.1 GI:306840
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Referencias cruzadas
Coussens L. y col., Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T. y col., Nature 319, 230-234, 1986; Semba K. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M. y col., J. Cell Biol. 165, 869-880, 2004; Kuhns J.J. y col., J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S. y col., Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A. y col. (1993) Genomics 15, 426-429; documentos WO2004/048938 (Ejemplo 2); WO2004/027049 (Fig. 1I); WO2004/009622; WO2003/081210; WO2003/089904 (reivindicación 9); WO2003/016475 (reivindicación 1); US2003/118592; WO2003/008537 (reivindicación 1); WO2003/055439 (reivindicación 29; Fig. 1A-B); WO2003/025228 (reivindicación 37; Fig. 5C); WO2002/22636 (Ejemplo 13; página 95-107); WO2002/12341 (reivindicación 68; Fig. 7); WO2002/13847 (página 71-74); WO2002/14503 (página 114-117); WO2001/53463 (reivindicación 2; página 41-46); WO2001/41787 (página 15); WO2000/44899 (reivindicación 52; Fig. 7); WO2000/20579 (reivindicación 3; Fig. 2); US5869445 (reivindicación 3; Col 31-38); WO9630514 (reivindicación 2; página 56-61); EP1439393 (reivindicación 7); WO2004/043361 (reivindicación 7); WO2004/022709; WO2001/00244 (Ejemplo 3; Fig. 4); acceso: P04626; EMBL; M11767; AAA35808.1. EMBL; M11761; AAA35808.1
ANTICUERPOS
Abbott: Documento US20110177095
Por ejemplo, un anticuerpo que comprende CDR que tienen en general al menos el 80 % de identidad de secuencias con CDR que tienen secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 (CDR-H1), SEQ ID NO: 4 (CDR-H2), SEQ ID NO: 5 (CDR-H3), SEQ ID NO: 104 y/o SEQ ID NO: 6 (CDR-L1), SEQ ID NO: 7 (CDR-L2) y SEQ ID NO: 8 (CDR-L3), en el que el anticuerpo anti-HER2 o fragmento de unión anti-HER2 tiene inmunogenicidad reducida en comparación con un anticuerpo que tiene una VH de SEQ ID NO: 1 y una VL de SEQ ID NO: 2.
Biogen: Documento US20100119511
Por ejemplo, números de acceso de ATCC: PTA-10355, PTA-10356, PTA-10357, PTA-10358
Por ejemplo, una molécula de anticuerpo purificada que se une a HER2 que comprende las seis CDR de un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en BIIB71F10 (SEQ ID NOs: 11, 13), BIIB69A09 (SEQ ID NOs: 15, 17); BIIB67F10 (SEQ ID NOs: 19, 21); BIIB67F11 (SEQ ID NOs: 23, 25), BIIB66A12 (SEQ ID NOs: 27, 29), BIIB66C01 (SEQ ID NOs: 31, 33), BIIB65C10 (SEQ ID NOs: 35, 37), BIIB65H09 (SEQ ID NOs: 39, 41) y BIIB65B03 (SEQ ID NOs: 43, 45), o CDR que son idénticas o que tienen no más de dos alteraciones de dichas CDR.
Herceptin (Genentech) - Documento US6.054.297; n.° de acceso de ATCC CRL-10463 (Genentech)
Pertuzumab (Genentech)
Documento US20110117097
por ejemplo, véase SEQ ID NOs 15 y 16, SEQ ID NOs 17 y 18, SEQ ID NOs 23 y 24 y los números de acceso de ATCC HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12697.
Documento US20090285837
Documento US20090202546
por ejemplo, números de acceso de ATCC: HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12698.
Documento US20060088523
- por ejemplo, números de acceso de ATCC: HB-12215, HB-12216
- por ejemplo, un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos ligeras variables y pesadas variables en SEQ ID NOs 3 y 4, respectivamente.
- por ejemplo, un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos de la cadena ligera seleccionada de SEQ ID NO 15 y 23 y una secuencia de aminoácidos de la cadena pesada seleccionada de SEQ ID NO 16 y 24
Documento US20060018899
- por ejemplo, números de acceso de ATCC: (7C2) HB-12215, (7F3) HB-12216, (4D5) CRL-10463, (2C4) HB-12697.
- por ejemplo, un anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos en SEQ ID NO 23, o una variante desamidada y/u oxidada del mismo.
Documento US2011/0159014
- por ejemplo, un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena ligera que comprende las regiones hipervariables de SEQ iD n O: 1.
- Por ejemplo, un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las regiones hipervariables de SEQ iD NO: 2.
Documento US20090187007
Glycotope: anticuerpo TrasGEX http://www.glycotope.com/pipeline
Por ejemplo, véase International Joint Cancer Institute and Changhai Hospital Cancer Cent: HMTI-Fc Ab - Gao J. y col., BMB Rep. 31 de octubre de 2009;42(10):636-41.
Symphogen: Documento US20110217305
Union Stem Cell & Gene Engineering, China - Liu HQ. y col., Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. Mayo de 2010;26(5):456-8.
(18) NCA (CEACAM6)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank M18728
Versión de Genbank n.° M18728.1 GI:189084
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:48 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA59907
Versión de Genbank n.° AAA59907.1 GI:189085
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:48 AM
Referencias cruzadas
Barnett T. y col., Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y. y col., Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:16899-16903, 2002; documentos WO2004/063709; EP1439393 (reivindicación 7); WO2004/044178 (Ejemplo 4); WO2004/031238; WO2003/042661 (reivindicación 12); WO2002/78524 (Ejemplo 2); WO2002/86443 (reivindicación 27; página 427); WO2002/60317 (reivindicación 2); acceso: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915.1.
EMBL; M18728.
(19) MDP (DPEP1)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank BC017023
Versión de Genbank n.° BC017023.1 GI:16877538
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 201201:00 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAH17023
Versión de Genbank n.° AAH17023.1 GI:16877539
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 201201:00 PM
Referencias cruzadas
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002); documentos WO2003/016475 (reivindicación 1); WO2002/64798 (reivindicación 33; página 85-87); JP05003790 (Fig. 6-8); WO99/46284 (Fig. 9); MIM:179780.
(20) IL20R-alfa (IL20Ra, ZCYTOR7)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank AF184971
Versión de Genbank n.° AF184971.1 GI:6013324
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 10:00 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAF01320
Versión de Genbank n.° AAF01320.1 GI:6013325
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 10:00 PM
Referencias cruzadas
Clark H.F. y col., Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J. y col., Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H. y col., Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L. y col., J. Immunol. 167, 3545-3549, 2001; Parrish-Novak J. y col., J. Biol. Chem. 277, 47517-47523, 2002; Pletnev S. y col. (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F. y col. (2004) J. Immunol. 172, 2006-2010; documentos EP1394274 (Ejemplo 11); US2004/005320 (Ejemplo 5); WO2003/029262 (página 74-75); WO2003/002717 (reivindicación 2; página 63); WO2002/22153 (página 45-47); US2002/042366 (página 20-21); WO2001/46261 (página 57-59); WO2001/46232 (página 63-65); WO98/37193 (reivindicación 1; página 55-59); acceso: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1.
(21) Brevicano (BCAN, BEHAB)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank AF229053
Versión de Genbank n.° AF229053.1 GI:10798902
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 12:58 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAG23135
Versión de Genbank n.° AAG23135.1 GI:10798903
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 12:58 AM
Referencias cruzadas
Gary S.C. y col., Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F. y col., Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; documentos US2003/186372 (reivindicación 11); US2003/186373 (reivindicación 11); US2003/119131 (reivindicación 1; Fig. 52); US2003/119122 (reivindicación 1; Fig. 52); US2003/119126 (reivindicación 1); US2003/119121 (reivindicación 1; Fig. 52); US2003/119129 (reivindicación 1); US2003/119130 (reivindicación 1); US2003/119128 (reivindicación 1; Fig. 52); US2003/119125 (reivindicación 1); WO2003/016475 (reivindicación 1); WO2002/02634 (reivindicación 1)
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_004442
Versión de Genbank n.° NM_004442.6 GI:111118979
Fecha de actualización del registro de GenBank: 8 de septiembre de 201204:43 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_004433
Versión de Genbank n.° NP_004433.2 GI:21396504
Fecha de actualización del registro de GenBank: 8 de septiembre de 201204:43 PM
Referencias cruzadas
Chan, J. y Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); documentos WO2003042661 (reivindicación 12) WO200053216 (reivindicación 1; página 41); WO2004065576 (reivindicación 1); WO2004020583 (reivindicación 9) WO2003004529 (página 128-132); WO200053216 (reivindicación 1; página 42); MIM:600997.
(23) ASLG659 (B7h)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AX092328
Versión de Genbank n.° AX092328.1 GI:13444478
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de enero de 2011 07:37 AM
Referencias cruzadas
Documentos US2004/0101899 (reivindicación 2); WO2003104399 (reivindicación 11); W02004000221 (Fig. 3); US2003/165504 (reivindicación 1); US2003/124140 (Ejemplo 2); US2003/065143 (Fig. 60); WO2002/102235 (reivindicación 13; página 299); US2003/091580 (Ejemplo 2); WO2002/10187 (reivindicación 6; Fig. 10); WO2001/94641 (reivindicación 12; Fig. 7b); WO2002/02624 (reivindicación 13; Fig. 1A-1B); US2002/034749 (reivindicación 54; página 45-46); WO2002/06317 (Ejemplo 2; página 320-321, reivindicación 34; página 321-322); WO2002/71928 (página 468-469); WO2002/02587 (Ejemplo 1; Fig. 1); WO2001/40269 (Ejemplo 3; páginas 190-192); WO2000/36107 (Ejemplo 2; página 205-207); WO2004/053079 (reivindicación 12); WO2003/004989 (reivindicación 1); WO2002/71928 (página 233-234, 452-453); documento WO 01/16318.
(24) PSCA (precursor de antígenos citoblásticos de la próstata)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank AJ297436
Versión de Genbank n.° AJ297436.1 GI:9367211
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 11:25 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank CAB97347
Versión de Genbank n.° CAB97347.1 GI:9367212
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 11:25 AM
Referencias cruzadas
Reiter R.E. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1735-1740, 1998; Gu Z. y col., Oncogene 19, 1288-1296, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788; documentos WO2004/022709; EP1394274 (Ejemplo 11); US2004/018553 (reivindicación 17); WO2003/008537 (reivindicación 1); WO2002/81646 (reivindicación 1; página 164); WO2003/003906 (reivindicación 10; página 288); WO2001/40309 (Ejemplo 1; Fig. 17); US2001/055751 (Ejemplo 1; Fig. 1b); WO2000/32752 (reivindicación 18; Fig. 1); WO98/51805 (reivindicación 17; página 97); WO98/51824 (reivindicación 10; página 94); WO98/40403 (reivindicación 2; Fig. 1 B); acceso: 043653; EMBL; AF043498; AAC39607.1
(25) GEDA
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank AY260763
Versión de Genbank n.° AY260763.1 GI:30102448
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 02:24 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAP14954
Versión de Genbank n.° AAP14954.1 GI:30102449
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 02:24 AM
Referencias cruzadas
Proteína similar al componente de fusión del lipoma HMGIC AP14954/pid=AAP14954.1 - Homo sapiens (humano); documentos WO2003/054152 (reivindicación 20); WO2003/000842 (reivindicación 1); WO2003/023013 (Ejemplo 3, reivindicación 20); US2003/194704 (reivindicación 45); GI:30102449;
(26) BAFF-R (receptor del factor activante de linfocitos B, receptor 3 de BLyS, BR3)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank AF116456
Versión de Genbank n.° AF116456.1 GI:4585274
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 09:44 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAD25356
Versión de Genbank n.° AAD25356.1 GI:4585275
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 09:44 PM
Referencias cruzadas
Receptor de BAFF/pid=NP_443177.1 - Homo sapiens: Thompson, J.S. y col., Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); documentos WO2004/058309; WO2004/011611; WO2003/045422 (Ejemplo; página 32-33); WO2003/014294 (reivindicación 35; Fig. 6B); WO2003/035846 (reivindicación 70; página 615-616); WO2002/94852 (Col 136-137); WO2002/38766 25 (reivindicación 3; página 133); WO2002/24909 (Ejemplo 3; Fig. 3); MIM:606269; NP_443177.1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (isoforma del receptor CD22-B de linfocitos B, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814) Nucleótido
N.° de acceso de Genbank AK026467
Versión de Genbank n.° AK026467.1 GI:10439337
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de septiembre de 2006 11:24 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank BAB15489
Versión de Genbank n.° BAB15489.1 GI:10439338
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de septiembre de 2006 11:24 PM
Referencias cruzadas
Wilson y col. (1991) J. Exp. Med. 173:137-146; documento WO2003/072036 (reivindicación 1; Fig. 1); IM:107266; NP_001762.1; NM_001771_1.
(27a) CD22 (molécula CD22)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank X52785
Versión de Genbank n.° X52785.1 GI:29778
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:09 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank CAA36988
Versión de Genbank n.° CAA36988.1 GI:29779
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:09 AM
Referencias cruzadas
Stamenkovic I. y col., Nature 345 (6270), 74-77 (1990)??
Otra información
Símbolo oficial: CD22
Otros pseudónimos: SIGLEC-2, SIGLEC2
Otras designaciones: receptor CD22 de linfocitos B; molécula de adhesión a células de linfocitos B; BL-CAM; antígeno CD22; antígeno de superficie de linfocitos T Leu-14; lectina 2 similar a Ig de unión a ácido siálico; lectina 2 similar a Ig de unión a ácido siálico
ANTICUERPOS
G5/44 (Inotuzumab): DiJoseph JF. y col., Cancer Immunol Immunother. Enero de 2005;54(1):11-24.
Epratuzumab - Goldenberg DM. y col., Expert Rev Anticancer Ther. 6(10): 1341-53, 2006.
(28) CD79a (CD79A, CD79alfa), alfa asociada a inmunoglobulina, una proteína específica de linfocitos B que interacciona covalentemente con Ig beta (CD79B) y forma un complejo sobre la superficie con 35 moléculas de IgM, traduce una señal que participa en la diferenciación de linfocitos B), pl: 4,84, MW: 25028 TM: 2. Cromosoma del gen [P]: 19q13.2).
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_001783
Versión de Genbank n.° NM_001783.3 GI:90193587
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 201201:48 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_001774
Versión de Genbank n.° NP_001774.1 GI:4502685
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 201201:48 PM
Referencias cruzadas
Documentos WO2003/088808, US2003/0228319; WO2003/062401 (reivindicación 9); US2002/150573 (reivindicación 4, páginas 13-14); WO99/58658 (reivindicación 13, Fig. 16); WO92/07574 (Fig. 1); US5644033; Ha y col. (1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531; Müller y col. (1992) Eur. J. Immunol. 22:1621-1625; Hashimoto y col. (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme y col. (1992) Clin. Exp. Immunol. 90(1):141-146; Yu y col. (1992) J. Immunol. 148(2) 633-637; Sakaguchi y col. (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464
(29) CXCR5 (receptor 1 del linfoma de Burkitt, un receptor acoplado a la proteína G que se activa por la quimiocina CXCL13, funciona en la migración de linfocitos y defensa humoral, desempeña una función en la infección por el VIH-2 y quizás desarrollo de SIDA, linfoma, m ielom ay leucemia); 372 aa, pl: 8,54 MW: 41959 TM: 7. Cromosoma del gen [P]: 11q23.3
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_001716
Versión de Genbank n.° NM_001716.4 GI:342307092
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:49 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_001707
Versión de Genbank n.° NP_001707.1 GI:4502415
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:49 PM
Referencias cruzadas
Documentos WO2004/040000; WO2004/015426; US2003/105292 (Ejemplo 2); US6555339 (Ejemplo 2); WO2002/61087 (Fig. 1); WO2001/57188 (reivindicación 20, página 269); WO2001/72830 (páginas 12-13); WO2000/22129 (Ejemplo 1, páginas 152-153, Ejemplo 2, páginas 254-256); WO99/28468 (reivindicación 1, página 38); US5440021 (Ejemplo 2, col 49-52); WO94/28931 (páginas 56-58); WO92/17497 (reivindicación 7, Fig. 5); Dobner
y col. (1992) Eur. J. Immunol. 22:2795-2799; Barella y col. (1995) Biochem. J. 309:773-779
(30) HLA-DOB (subunidad beta de la molécula de MHC de clase II (antígeno la) que se une a péptidos y los presenta a linfocitos T CD4+); 273 aa, pl: 6,56, MW: 30820.TM: 1. Cromosoma del gen [P]: 6p21.3)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_002120
Versión de Genbank n.° NM_002120.3 GI:118402587
Fecha de actualización del registro de GenBank: 8 de septiembre de 201204:46 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_002111
Versión de Genbank n.° NP_002111.1 GI:4504403
Fecha de actualización del registro de GenBank: 8 de septiembre de 201204:46 PM
Referencias cruzadas
Tonnelle y col. (1985) EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson y col. (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck y col. (1992) J. Mol. Biol. 228:433-441; Strausberg y col. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903; Servenius y col. (1987) J. Biol. Chem. 262:8759-8766; Beck y col. (1996) J. Mol. Biol. 25255:1-13; Naruse y col. (2002) Tissue Antigens 59:512-519; documentos WO99/58658 (reivindicación 13, Fig. 15); US6153408 (Col 35-38); US5976551 (col 168-170); US6011146 (col 145-146); Kasahara y col. (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar y col. (1985) J. Biol. Chem. 260(26):14111-14119
(31) P2X5 (canal 5 de iones regulado por el ligando de los receptores purinérgicos P2X, un canal de iones regulado por ATP extracelular, puede participar en la transmisión sináptica y neurogénesis, la deficiencia puede contribuir a la patofisiología de la inestabilidad del detrusor idiopático); 422 aa, pl: 7,63, MW: 47206, TM: 1 Cromosoma del gen [P]: 17p13.3).
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_002561
Versión de Genbank n.° NM_002561.3 GI:325197202
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:41 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_002552
Versión de Genbank n.° NP_002552.2 GI:28416933
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:41 AM
Referencias cruzadas
Le y col. (1997) FEBS Lett. 418(1-2):195-199; documentos WO2004/047749; WO2003/072035 (reivindicación 10); Touchman y col. (2000) Genome Res. 10:165-173; WO2002/22660 (reivindicación 20); WO2003/093444 (reivindicación 1); WO2003/087768 (reivindicación 1); WO2003/029277 (página 82)
(32) CD72 (antígeno de diferenciación de linfocitos B CD72, Lyb-2); 359 aa, pl: 8,66, MW: 40225, TM: 1 Cromosoma del gen [P]: 9p13.3).
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_001782
Versión de Genbank n.° NM_001782.2 GI:194018444
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 201201:43 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_001773
Versión de Genbank n.° NP_001773.1 GI:4502683
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 201201:43 PM
Referencias cruzadas
Documentos WO2004042346 (reivindicación 65); WO2003/026493 (páginas 51-52, 57-58); WO2000/75655 (páginas 105-106); Von Hoegen y col. (1990) J. Immunol. 144(12):4870-4877; Strausberg y col. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903.
(33) LY64 (antígeno 64 de linfocitos (RP105), proteína de membrana de tipo I de la familia de repeticiones ricas en leucina (LRR), regula la activación de linfocitos B y la apoptosis, la pérdida de función está asociada a la elevada actividad de la enfermedad en pacientes con lupus eritematosos sistémicos); 661 aa, pI: 6,20, MW: 74147, TM: 1 Cromosoma del gen [P]: 5q12).
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_005582
Versión de Genbank n.° NM_005582.2 GI:167555126
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:50 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_005573
Versión de Genbank n.° NP_005573.2 GI:167555127
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:50 PM
Referencias cruzadas
Documentos US2002/193567; WO97/07198 (reivindicación 11, páginas 39-42); Miura y col. (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura y col. (1998) Blood 92:2815-2822; documentos WO2003/083047; WO97/44452 (reivindicación 8, páginas 57-61); WO2000/12130 (páginas 24-26).
(34) FcRH1 (proteína 1 sim ilar al receptor de Fc, un receptor putativo para el dominio Fc de inmunoglobulina que contiene dominios similares a Ig tipo C2 e ITAM, puede tener una función en la diferenciación de linfocitos B); 429 aa, pI: 5,28, MW: 46925, TM: 1 Cromosoma del gen [P]: 1q21-1q22)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_052938
Versión de Genbank n.° NM_052938.4 GI:226958543
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:43 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_443170
Versión de Genbank n.° NP_443170.1 GI:16418419
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:43 PM
Referencias cruzadas
Documentos WO2003/077836; WO2001/38490 (reivindicación 6, Fig. 18E-1-18-E-2); Davis y col. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003/089624 (reivindicación 8); EP1347046 (reivindicación 1); WO2003/089624 (reivindicación 7).
(35) IRTA2 (2 asociado a la translocalización de receptores de la superfamilia de inmunoglobulina, un inmunoreceptor putativo con posibles funciones en el desarrollo de linfocitos B y linfomagénesis; la desregulación del gen por translocalización se produce en algunos tumores malignos de linfocitos B); 977 aa, pI: 6,88, MW: 106468, TM: 1 Cromosoma del gen [P]: 1q21)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank AF343662
Versión de Genbank n.° AF343662.1 GI:13591709
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:16 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAK31325
Versión de Genbank n.° AAK31325.1 GI:13591710
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 201001:16 AM
Referencias cruzadas
AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; Ratón: AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571.1; documento WO2003/024392 (reivindicación 2, Fig. 97); Nakayama y col. (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127; documentos WO2003/077836; WO2001/38490 (reivindicación 3, Fig. 18B-1-18B-2).
(36) TENB2 (TMEFF2, tomoregulina, TPEF, HPP1, TR, proteoglicano de transmembrana putativo, relacionado con la familia de EGF/heregulina de factores de crecimiento y folistatina); 374 aa)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank AF179274
Versión de Genbank n.° AF179274.2 GI:12280939
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:05 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAD55776
Versión de Genbank n.° AAD55776.2 GI:12280940
Fecha de actualización del registro de GenBank: 11 de marzo de 2010 01:05 AM
Referencias cruzadas
Acceso NCBI: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI Gene: 23671; OMIM: 605734 SwissProt Q9UIK5; AY358907, CAF85723, CQ782436; documentos WO2004/074320; JP2004113151 WO2003/042661; WO2003/009814; EP1295944 (páginas 69-70); WO2002/30268 (página 329); WO2001/90304 US2004/249130; US2004/022727; WO2004/063355; US2004/197325; US2003/232350; US2004/005563 US2003/124579; Horie y col. (2000) Genomics 67:146-152; Uchida y col. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun 266:593-602; Liang y col. (2000) Cancer Res. 60:4907-12; Glynne-Jones y col. (2001) Int J Cancer. 15 de octubre 94(2):178-84.
(37) PSMA - FOLH1 (folato hidrolasa (antígeno de membrana específico de la próstata) 1)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank M99487
Versión de Genbank n.° M99487.1 GI:190663
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:48 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA60209
Versión de Genbank n.° AAA60209.1 GI:190664
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2010 08:48 AM
Referencias cruzadas
Israeli R.S. y col., Cancer Res. 53 (2), 227-230 (1993)
Otra información
Símbolo oficial: FOLH1
Otros pseudónimos: GIG27, FGCP, FOLH, GCP2, GCPII, NAALAD1, NAALAdasa, PSM, PSMA, mGCP
Otras designaciones: ácido dipeptidasa 1 ligada a alfa N-acetilado; ácido dipeptidasa I ligada a alfa N-acetilado; NAALADasa I; proteína del gen 27 inhibidor del crecimiento celular; folilpoli-gamma-glutamato carboxipeptidasa; glutamato carboxilasa II; glutamato carboxipeptidasa 2; glutamato carboxipeptidasa II; glutamato carboxipeptidasa de membrana; variante F del antígeno de membrana específico de la próstata; pteroilpoli-gamma-glutamato carboxipeptidasa
ANTICUERPOS
Documento US 7.666.425:
Anticuerpos producidos por hibridomas que tienen las siguientes referencias de ATCC: n.° de acceso de ATCC HB-12101, n.° de acceso de ATCC HB-12109, n.° de acceso de ATCC HB-12127 y n.° de acceso de ATCC HB
12126.
Prosean: un anticuerpo monoclonal seleccionado del grupo que consiste en 8H12, 3E11, 17G1,29B4, 30C1 y 20F2 (documento US 7.811.564; Moffett S. y col., Hybridoma (Larchmt). Diciembre de 2007;26(6):363-72).
Cytogen: anticuerpos monoclonales 7E11-C5 (n.° de acceso de ATCC HB 10494) y 9H10-A4 (n.° de acceso de ATCC HB11430) - documento US 5.763.202
GlycoMimetics: NUH2 - n.° de acceso de ATCC HB 9762 (documento US 7.135.301)
Human Genome Science: HPRAJ70 - n.° de acceso de ATCC 97131 (documento US 6.824.993); secuencia de aminoácidos codificada por el clon de ADNc (HPRAJ70) depositado como el depósito n.° 97131 de la Colección Americana de Cultivos Tipo (“ATCC”).
Medarex: anticuerpos anti-PSMA que carecen de restos de fucosilo - documento US 7.875.278
Los anticuerpos anti-PSMA de ratón incluyen los anticuerpos 3F5.4G6, 3D7.1.1,4E10-1.14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1G3, 3C4, 3C6, 4D4, 1G9, 5C8B9, 3G6, 4C8B9, y monoclonales. Los hibridomas que secretan 3F5.4G6, 3D7.1.1, 4E10-1.14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1G3, 3C4, 3C6, 4D4, 1G9, 5C8B9, 3G6 o 4C8B9 se han depositado públicamente y se describen en la patente de EE.UU. n.° 6.159.508. Los hibridomas relevantes se han depositado públicamente y se describen en la patente de EE.UU. n.° 6.107.090. Además, los anticuerpos anti-PSMA humanizados, que incluyen una versión humanizada de J591, se describen en más detalle en la publicación PCT WO 02/098897.
Otros anticuerpos anti-PSMA humana de ratón se han descrito en la materia, tales como mAb 107-1A4 (Wang, S. y col. (2001) Int. J. Cancer 92:871-876) y mAb 2C9 (Kato, K. y col. (2003) Int. J. Urol. 10:439-444).
Ejemplos de anticuerpos monoclonales anti-PSMA humana incluyen los anticuerpos 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 y 1C3, aislados y caracterizados estructuralmente como se ha descrito originalmente en las publicaciones PCT WO 01/09192 y el documento WO 03/064606 y en la solicitud provisional de EE.UU. n.° de serie 60/654.125, titulada “Human Monoclonal Antibodies to Prostate Specific Membrane Antigen (PSMA)”, presentada el 18 de febrero de 2005. Las secuencias de aminoácidos de Vh de 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 y 1C3 se muestran en SEQ ID NO: 1-9, respectivamente. Las secuencias de aminoácidos de Vl de 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 y 1C3 se muestran en SEQ ID NO: 10-18, respectivamente.
Otros anticuerpos anti-PSMA humanos incluyen los anticuerpos desvelados en la publicación PCT WO 03/034903 y la solicitud de EE.UU. n.° 2004/0033229.
NW Biotherapeutics: Una línea celular de hibridoma seleccionada del grupo que consiste en 3F5.4G6 que tiene número de acceso de ATCC HB12060, 3D7-1.I. que tiene número de acceso de At CC HB12309, 4E10-1.14 que tiene número de acceso de ATCC HB12310.3E11 (ATCC HB12488), 4D8 (ATCC HB12487), 3E6 (ATCC HB12486), 3C9 (ATCC HB12484), 2C7 (ATCC HB12490), 1G3 (ATCC HB12489), 3C4 (ATCC HB12494), 3C6 (ATCC HB12491), 4D4 (ATCC HB12493), 1G9 (ATCC HB12495), 5C8B9 (ATCC HB12492) y 3G6 (ATCC HB12485) - véase el documento US 6.150.508
PSMA Development Company/Progenics/Cytogen - Seattle Genetics: mAb 3.9, producido por el hibridoma depositado bajo el n.° de acceso de ATCC PTA-3258 o mAb 10.3, producido por el hibridoma depositado bajo el n.° de acceso de ATCC PTA-3347 - documento US 7.850.971
PSMA Development Company - Composiciones de anticuerpos para PSMA (documento US 20080286284, Tabla 1) La presente solicitud es una divisionaria de la solicitud de patente de EE.UU. n.° de serie 10/395.894, presentada el 21 de marzo de 2003 (documento US 7.850.971)
Hospital universitario de Friburgo, Alemania -mAbs 3/A12, 3/E7 y 3/F11 (Wolf P. y col., Prostate. 2010 Apr 1;70(5):562-9).
(38) SST (receptor de somatostatina; obsérvese que hay 5 subtipos) (38.1) SSTR2 (receptor 2 de somatostatina)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_001050
Versión de Genbank n.° NMR_001050.2 GI:44890054
Fecha de actualización del registro de GenBank: 19 de agosto de 201201:37 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_001041
Versión de Genbank n.° NP_001041.1 GI:4557859
Fecha de actualización del registro de GenBank: 19 de agosto de 201201:37 PM
Referencias cruzadas
Yamada Y. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89 (1), 251-255 (1992); Susini C. y col., Ann Oncol. Diciembre de 2006;17(12):1733-42
Otra información
Símbolo oficial: SSTR2
Otras designaciones: SRIF-1; SS2R; receptor de somatostatina tipo 2
(38.2) SSTR5 (receptor 5 de somatostatina)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank D16827
Versión de Genbank n.° D16827.1 GI:487683
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de agosto de 2006 12:45 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank BAA04107
Versión de Genbank n.° BAA04107.1 GI:487684
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de agosto de 2006 12:45 PM
Referencias cruzadas
Yamada, Y. y col., Biochem. Biophys. Res. Commun. 195 (2), 844-852 (1993)
Otra información
Símbolo oficial: SSTR5
Otros pseudónimos: SS-5-R
Otras designaciones: receptor de somatostatina subtipo 5; receptor de somatostatina tipo 5
(38.3) SSTR1
(38.4) SSTR3
(38.5) SSTR4
AvB6 - Am bas subunidades (39+40)
(39) ITGAV(integrina, alfa V;
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank M14648 J02826 M18365
Versión de Genbank n.° M14648.1 GI:340306
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:56 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA36808
Versión de Genbank n.° AAA36808.1 GI:340307
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:56 AM
Referencias cruzadas
Suzuki S. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83 (22), 8614-8618 (1986)
Otra información
Símbolo oficial: ITGAV
Otros pseudónimos: CD51, MSK8, VNRA, VTNR
Otras designaciones: antígeno identificado por el anticuerpo monoclonal L230; integrina alfa-V; integrina alfa-V-beta-3; integrina, alfa V (receptor de vitronectina, polipéptido alfa, antígeno CD51); subunidad alfa del receptor de vitronectina
(40) ITGB6 (integrina, beta 6)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank NM_000888
Versión de Genbank n.° NM_000888.3 GI:9966771
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:46 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_000879
Versión de Genbank n.° NP_000879.2 GI:9625002
Fecha de actualización del registro de GenBank: 27 de junio de 2012 12:46 AM
Referencias cruzadas
Sheppard D.J. y col., Biol. Chem. 265 (20), 11502-11507 (1990)
Otra información
Símbolo oficial: ITGB6
Otras designaciones: integrina beta-6
ANTICUERPOS
Biogen: Documento US 7.943.742 - Los clones de hibridoma 6.3G9 y 6.8G6 se depositaron en la ATCC, números de acceso ATCC PTA-3649 y -3645, respectivamente.
Biogen: Documento US7.465.449 - En algunas realizaciones, el anticuerpo comprende las mismas secuencias de polipéptidos de las cadenas pesadas y ligeras que un anticuerpo producido por el hibridoma 6.1A8, 6.3G9, 6.8G6, 6.2B1, 6.2B10, 6.2A1,6.2E5, 7.1G10, 7.7G5 o 7.1C5.
Centocor (J&J): Documentos US7.550.142; US7.163.681
Por ejemplo, en el documento US 7.550.142 - un anticuerpo que tiene regiones variables de las cadenas pesadas humanas y de las cadenas ligeras humanas que comprenden las secuencias de aminoácidos mostradas en SEQ ID NO: 7 y SEQ ID NO: 8.
Seattle Genetics: 15H3 (Ryan MC. y col., Cancer Res 15 de abril de 2012; 72(8 Suplemento): 4630)
(41) CEACAEM (molécula 5 de adhesión a células relacionada con el antígeno carcinoembrionario)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank M17303
Versión de Genbank n.° M17303.1 GI:178676
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAB59513
Versión de Genbank n.° AAB59513.1 GI:178677
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Referencias cruzadas
Beauchemin N. y col., Mol. Cell. Biol. 7 (9), 3221-3230 (1987)
Otra información
Símbolo oficial: CEACAM5
Otros pseudónimos: CD66e, CEA
Otras designaciones: antígeno 100 de meconio
ANTICUERPOS
AstraZeneca-Medlmmune: Documentos US 20100330103; US20080057063; US20020142359
- por ejemplo, un anticuerpo que tiene regiones determinantes de la complementariedad (CDR) con las siguientes secuencias: cadena pesada; CDR1 - DNYMH, CDR2 - WIDPENGDTE YAPKFRG, CDR3 - LIYAGYLAMD Y; y
cadena ligera CDR1 - SASSSVTYMH, CDR2 - STSNLAS, CDR3 - QQRSTYPLT.
- Hibridoma 806.077 depositado como el depósito n.° 96022936 de la Colección Europea de Cultivos celulares (ECACC).
Research Corporation Technologies, Inc.: Documento US5.047.507
Bayer Corporation: Documento US6.013.772
BioAlliance: Documentos US7.982.017; US7.674.605
• Documento US 7.674.605
- un anticuerpo que comprende la secuencia de la región variable de la cadena pesada de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, y la secuencia de la región variable de la cadena ligera de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.
- un anticuerpo que comprende la secuencia de la región variable de la cadena pesada de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5, y la secuencia de la región variable de la cadena ligera de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6.
Celltech Therapeutics Limited: Documento US5.877.293
The Dow Chemical Company: Documentos US5.472.693; US6.417.337; US6.333.405
Documento US5.472.693 - por ejemplo, ATCC N.° CRL-11215
Documento US6.417.337 - por ejemplo, ATCC CRL-12208
Documento US6.333.405 - por ejemplo, ATCC CRL-12208
Immunomedics, Inc: Documentos US7.534.431; US7.230.084; US7.300.644; US6.730.300;
US20110189085
- un anticuerpo que tiene CDR de la región variable de la cadena ligera comprende:
CDR1 comprende KASQDVGTSVA (SEQ ID NO: 20); CDR2 comprende WTSTRHT (SEQ ID NO: 21); y CDR3 comprende QQYSLYRS (SEQ ID NO: 22);
y las CDR de la región variable de la cadena pesada de dicho anticuerpo anti-CEA comprenden: CDR1 comprende TYWMS (SEQ ID NO: 23); CDR2 comprende EIHPDSSTINYAPSLKD (SEQ ID NO: 24); y CDR3 comprende LYFGFPWFAY (SEQ ID NO: 25).
Documentos US20100221175; US20090092598; US20070202044; US20110064653; US20090185974; US20080069775.
(42) MET (proto-oncogén met; receptor del factor de crecimiento de hepatocitos)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank M35073
Versión de Genbank n.° M35073.1 GI:187553
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 2012 11:12 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA59589
Versión de Genbank n.° AAA59589.1 GI:553531
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 2012 11:12 AM
Referencias cruzadas
Dean M. y col., Nature 318 (6044), 385-388 (1985)
Otra información
Símbolo oficial: MET
Otros pseudónimos: AUTS9, HGFR, RCCP2, c-Met
Otras designaciones: receptor de HGF; receptor de HGF/SF; receptor de SF; receptor del factor de crecimiento de hepatocitos; tirosina cinasa del proto-oncogén met; proto-oncogén c-Met; factor de dispersión del receptor; proteína tirosina-cinasa Met
ANTICUERPOS
Abgenix/Pfizer: Documento US20100040629
por ejemplo, el anticuerpo producido por el hibridoma 13.3.2 que tiene el número de acceso de la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) PTA-5026; el anticuerpo producido por el hibridoma 9.1.2 que tiene el número de acceso de ATCC PTA-5027; el anticuerpo producido por el hibridoma 8.70.2 que tiene número de acceso de ATCC PTA-5028; o el anticuerpo producido por el hibridoma 6.90.3 que tiene el número de acceso de ATCC PTA-5029.
Amgen/Pfizer: Documento US20050054019
por ejemplo, un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en s Eq ID NO: 2 en la que X2 es glutamato y X4 es serina y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 4 en la que X8 es alanina, sin las secuencias señal; un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO: 6 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 8, sin las secuencias señal; un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 12, sin las secuencias señal; o un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO: 14 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 16, sin las secuencias señal.
Agouron Pharmaceuticals (ahora Pfizer): Documento US20060035907
Eli Lilly: Documento US20100129369
Genentech: Documentos US5.686.292; US20100028337; US20100016241; US20070129301; US20070098707; US20070092520, US20060270594; US20060134104; US20060035278; US20050233960; US20050037431
US 5.686.292 - por ejemplo, ATCC HB-11894 y ATCC HB-11895
US 20100016241 - por ejemplo, ATCC HB-11894 (hibridoma 1A3.3.13) o HB-11895 (hibridoma 5D5.11.6) Centro Médico de la Defensa Nacional, Taiwán: Lu RM. y col., Biomaterials. Abril de 2011;32(12):3265-74.
Novartis: Documento US20090175860
- por ejemplo, un anticuerpo que comprende las secuencias de CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada 4687, en el que las secuencias de CDR1, Cd R2 y CDR3 de la cadena pesada 4687 son los restos 26-35, 50-65 y 98 102, respectivamente, de SEQ ID NO: 58; y las secuencias de CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera 5097, en el que las secuencias de CDR1, CDR2 y Cd R3 de la cadena ligera 5097 son los restos 24-39, 55-61 y 94-100 de SEQ ID NO: 37.
Pharmacia Corporation: Documento US20040166544
Pierre Fabre: Documentos US20110239316, US20110097262, US20100115639
Sumsung: Documento US 20110129481 - por ejemplo, un anticuerpo monoclonal producido a partir de una célula de hibridoma que tiene el número de acceso KCLRF-BP-00219 o el número de acceso de KCLRF-BP-00223.
Samsung: Documento US 20110104176 - por ejemplo, un anticuerpo producido por una célula de hibridoma que tiene el número de acceso: KCLRF-BP-00220.
Escuela médica de la Universidad de Turín: DN-30 Pacchiana G. y col., J Biol Chem. 12 de noviembre de 2010;285(46):36149-57
Van Andel Research Institute: Jiao Y. y col., Mol Biotechnol. Septiembre de 2005;31(1):41-54.
(43) MUC1 (mucina 1, asociada a la superficie celular)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank J05581
Versión de Genbank n.° J05581.1 GI:188869
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:48 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA59876
Versión de Genbank n.° AAA59876.1 GI:188870
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:48 AM
Referencias cruzadas
Gendler S.J. y col., J. Biol. Chem. 265 (25), 15286-15293 (1990)
Otra información
Símbolo oficial: MUC1
Otros pseudónimos: RP11-263K19.2, CD227, EMA, H23AG, KL-6, MAM6, MUC-1, MUC-1/SEC, MUC-1/X, MUC1/ZD, PEM, PEMT, PUM
Otras designaciones: antígeno DF3; antígeno H23; antígeno DF3 asociado a carcinoma de mama; mucina asociada a carcinoma; episialina; krebs von den Lungen-6; mucina 1, transmembrana; mucina-1; mucina urinaria reactiva con cacahuete; mucina epitelial polimórfica; mucina epitelial asociada a tumor; antígeno de la membrana epitelial asociado a tumor; mucina asociada a tumor
ANTICUERPOS
AltaRex- Quest Pharma Tech: Documento US 6.716.966 - por ejemplo, un anticuerpo para Alt-1 producido por el hibridoma ATCC n.° PTA-975.
AltaRex- Quest Pharma Tech: Documento US7.147.850
CRT: 5E5 - Sorensen AL. y col., Glycobiology vol. 16 n.° 2 pág. 96-107, 2006; HMFG2 - Burchell J. y col., Cancer Res., 47, 5476-5482 (1987)
Glycotope GT-MAB: GT-MAB 2.5-GEX (sitio web: http://www.glycotope.com/pipeline/pankomab-gex) Immunogen: Documento US7.202.346
- por ejemplo, anticuerpo MJ-170: línea celular de hibridoma MJ-170 n.° de acceso de ATCC PTA-5286; anticuerpo monoclonal MJ-171: línea celular de hibridoma MJ-171 n.° de acceso de ATCC PTA-5287; anticuerpo monoclonal MJ-172: línea celular de hibridoma MJ-172 n.° de acceso de ATCC PTA-5288; o anticuerpo monoclonal MJ-173: línea celular de hibridoma MJ-173 n.° de acceso de ATCC PTA-5302
Immunomedics: Documento US 6.653.104
Ramot Tel Aviv Uni: Documento US7.897.351
Regents Uni. CA: Documentos US 7.183.388; US20040005647; US20030077676.
Roche GlycArt: Documento US8.021.856
Centro Nacional Ruso de Investigaciones Oncológicas: Imuteran-Ivanov PK. y col., Biotechnol J. Julio de 2007;2(7):863-70
Universidad Técnica de Braunschweig: (IIB6, HT186-B7, HT186-D11, HT186-G2, HT200-3A-C1, HT220-M-D1, HT220-M-G8) -Thie H. y col., PLoS One. 14 de enero de 2011;6(1):e15921
(44) CA9 (anhidrasa carbónica IX)
Nucleótido
N.° de acceso de Genbank . X66839
Versión de Genbank n.° X66839.1 GI:1000701
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:15 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank CAA47315
Versión de Genbank n.° CAA47315.1 GI:1000702
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:15 AM
Referencias cruzadas
Pastorek J. y col., Oncogene 9 (10), 2877-2888 (1994)
Otra información
Símbolo oficial: CA9
Otros pseudónimos: CAIX, MN
Otras designaciones: CA-IX; P54/58N; antígeno G250 asociado a RCC; proteína G250 asociada a RCC; carbonato deshidratasa IX; anhidrasa carbónica 9; deshidratasa carbónica; antígeno MN de membrana; pMW1; antígeno G250 asociado a carcinoma de células renales
ANTICUERPOS
Abgenix/Amgen: Documento US20040018198
Affibody: moléculas de Affibody anti-CAIX
(http://www.affibody.com/en/Product-Portfolio/Pipeline/)
Bayer: Documento US7.462.696
Bayer/Morfosys: mAb 3ee9 - Petrul HM. y col., Mol Cancer Ther. Febrero de 2012;11 (2):340-9
Escuela Médica de Harvard: Anticuerpos G10, G36, G37, G39, G45, G57, G106, G119, G6, G27, G40 y G125. Xu C. y col., PLoS One. 10 de marzo de 2010;5(3):e9625
Instituto de Virología, Academia Eslovaca de Ciencias (Bayer) - Documento US5.955.075
- por ejemplo, M75 - acceso ATCC n.° HB 11128 o MN12 - acceso ATCC n.° HB 11647
Instituto de Virología, Academia Eslovaca de Ciencias: Documento US7.816.493
- por ejemplo, el anticuerpo monoclonal M75 que es secretado del hibridoma VU-M75, que se depositó en la Colección Americana de Cultivos Tipo bajo ATCC n.° HB 11128; o el anticuerpo monoclonal V/10 secretado del hibridoma V/10-VU, que se depositó en la Autoridad Depositaria Internacional de la Colección Coordinada Belga de Microorganismos (BCCM) en el Laboratorium voor Moleculaire Bioloqie-Plasmidencollectie (LMBP) en la Universeit Gent en Gante, Bélgica, bajo el acceso n.° LMBP 6009CB.
Instituto de Virología, Academia Eslovaca de Ciencias - Documentos US20080177046; US20080176310; US20080176258; US20050031623
Novartis: Documento US20090252738
Wilex: Documento US7.691.375 - por ejemplo, el anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma DSM ASC 2526.
Wilex: Documento US20110123537; Rencarex: Kennett RH. y col., Curr Opin Mol Ther. Febrero de 2003;5(1):70-5 Xencor: Documento US20090162382
(45) EGFRvIlI (receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), variante de transcrito 3,
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_201283
Versión de Genbank n.° NM_201283.1 GI:41327733
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:47 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_958440
Versión de Genbank n.° NP_958440.1 GI:41327734
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:47 PM
Referencias cruzadas
Batra SK. y col., Cell Growth D iffer 1995;6:1251-1259.
ANTICUERPOS:
Documentos US7.628.986 y US7.736.644 (Amgen)
Por ejemplo, una secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 142 y variantes y una secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 144 y variantes.
Documento US20100111979 (Amgen)
Por ejemplo, un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos de la cadena pesada que comprende:
CDR1 que consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las secuencias de aminoácidos para la región CDR1 de anticuerpos 13.1.2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16) y 333 (SEQ ID NO: 17);
CDR2 que consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las secuencias de aminoácidos para la región CDR2 de anticuerpos 13.1.2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16) y 333 (SEQ ID NO: 17); y CDR3 que consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las secuencias de aminoácidos para la región CDR3 de anticuerpos 13.1.2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16) y 333 (SEQ ID NO: 17).
Documento US20090240038 (Amgen)
Por ejemplo, un anticuerpo que tiene al menos uno de los polipéptidos de la cadena pesada o ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos el 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID n O: 2, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, y cualquier combinación de los mismos.
Documento US20090175887 (Amgen)
Por ejemplo, un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de la cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de anticuerpo 13.1.2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16) y 333 (SEQ ID NO: 17).
Documento US20090156790 (Amgen)
Por ejemplo, un anticuerpo que tiene el polipéptido de la cadena pesada y un polipéptido de la cadena ligera, en el que al menos uno de los polipéptidos de la cadena pesada o ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos el 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, y cualquier combinación de los mismos.
Documentos US20090155282, US20050059087 y US20050053608 (Amgen)
Por ejemplo, una secuencia de aminoácidos de la cadena pesada del anticuerpo seleccionada del grupo que consiste en la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de anticuerpo 13.1.2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SeQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16) y 333 (SEQ ID NO: 17).
MR1-1 (documento US7.129.332; Duke)
Por ejemplo, un anticuerpo de variante que tiene la secuencia de SEQ ID NO 18 con las sustituciones S98P-T99Y en CDR3 VH y F92W en CDR3 VL.
L8A4, H10, Y10 (Wikstrand CJ. y col., Cancer Res. 15 de julio de 1995;55(14):3140-8; Duke)
US20090311803 (Universidad de Harvard)
Por ejemplo, SEQ ID NO: 9 para la región variable de la cadena pesada del anticuerpo y SEQ ID NO: 3 para las secuencias de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera
Documento US20070274991 (EMD72000, también conocido como matuzumab; Universidad de Harvard)
Por ejemplo, SEQ ID NO: 3 y 9 para la cadena ligera y cadena pesada, respectivamente
Documento US6.129.915 (Schering)
Por ejemplo, SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 y 6.
mAb CH12 - Wang H. y col., FASEB J. Enero de 2012;26(1):73-80 (Instituto del Cáncer de Shangai).
RAbDMvlll - Gupta P. y col., BMC Biotechnol. 7 de octubre de 2010;10:72 (Centro Médico de la Universidad de Stanford).
mAb Ua30 - Ohman L. y col., Tumour Biol. Marzo-abril de 2002;23(2):61-9 (Universidad de Uppsala).
Han DG. y col., Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. Enero de 2010;30(1):25-9 (Universidad de Xi'an Jiaotong).
(46) CD33 (molécula de CD33)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank M_23197
Versión de Genbank n.° NM_23197.1 GI:180097
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA51948
Versión de Genbank n.° AAA51948.1 GI:188098
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Referencias cruzadas
Simmons D. y col., J. Immunol. 141 (8), 2797-2800 (1988)
Otra información
Símbolo oficial: CD33
Otros pseudónimos: SIGLEC-3, SIGLEC3, p67
Otras designaciones: antígeno CD33 (gp67); gp67; antígeno de superficie CD33 de células mieloides; lectina 3 similar a Ig de unión al ácido siálico; lectina similar a Ig de unión al ácido siálico
ANTICUERPOS
H195 (lintuzumab) - Raza A. y col., Leuk Lymphoma. Agosto de 2009;50(8):1336-44; documento US6.759.045 (Seattle Genetics/Immunomedics)
mAb OKT9: Sutherland, D.R. y col., Proc Natl Acad Sci USA 78(7): 4515-4519 1981, Schneider, C. y col., J Biol Chem 257, 8516-8522 (1982)
mAb E6: Hoogenboom, H.R. y col., J Immunol 144, 3211-3217 (1990)
Documento US6.590.088 (Human Genome Sciences)
Por ejemplo, SEQ ID NOs: 1 y 2 y n.° de acceso de ATCC 97521
Documento US7.557.189 (Immunogen)
Por ejemplo, un anticuerpo o fragmento del mismo que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende tres CDR que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1-3 y una región variable de la cadena ligera que comprende tres CDR que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 4-6.
(47) CD19 (molécula CD19)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_001178098
Versión de Genbank n.° NM_001178098.1 GI:296010920
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de septiembre de 2012 12:43 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_001171569
Versión de Genbank n.° NP_001171569.1 GI:296010921
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de septiembre de 2012 12:43 AM
Referencias cruzadas
Tedder TF. y col., J. Immunol. 143 (2): 712-7 (1989)
Otra información
Símbolo oficial: CD19
Otros pseudónimos: B4, CVID3
Otras designaciones: antígeno CD19 de linfocitos B; antígeno de superficie B4 de linfocitos B; antígeno de superficie Leu-12 de linfocitos T; antígeno CD19 de diferenciación
ANTICUERPOS
Immunogen: HuB4 - Al-Katib AM. y col., Clin Cancer Res. 15 de junio de 2009;15(12):4038-45. 4G7: Kügler M. y col., Protein Eng Des Sel. Marzo de 2009;22(3):135-47
Por ejemplo, secuencias en la Fig. 3 de Knappik, A. y col., J Mol Biol febrero de 2000;296(1):57-86 AstraZeneca /Medlmmune: MEDI-551 - Herbst R. y col., J Pharmacol Exp Ther. Octubre de 2010;335(1):213-22 Glenmark Pharmaceuticals: GBR-401 - Hou S. y col., Mol Cancer Ther 10 de noviembre de 2011 (suplemento de resúmenes de la reunión) C164
Documento US7.109.304 (Immunomedics)
Por ejemplo, un anticuerpo que comprende la secuencia de hA19Vk (SEQ ID NO: 7) y la secuencia de hA19VH (SEQ ID NO: 10)
Documento US7.902.338 (Immunomedics)
Por ejemplo, un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende las secuencias de CDR de la región determinante de la complementariedad de la cadena ligera CDR1 de SEQ ID NO: 16 (KASQSVDYDGDSYLN); CDR2 de SEQ ID NO: 17 (DASNLVS); y CDR3 de SEQ ID NO: 18 (QQSTEDPWT) y las secuencias de CDR de la cadena pesada CDR1 de SEQ ID NO: 19 (SYWMN); CDR2 de SEQ ID NO: 20 (QIWPGDGDTNYNGKFKG) y CDR3 de SEQ ID NO: 21 (RETTTVGRYYYAMd Y) y también comprende secuencias de la región estructural (FR) y región constante de anticuerpo humano con uno o más restos de aminoácidos de la región estructural sustituidos de las secuencias de la región estructural correspondientes del anticuerpo murino parental, y en el que dichos restos de FR sustituidos comprenden la sustitución de serina con fenilalanina en el resto de Kabat 91 de la región variable de la cadena pesada.
Medarex: MDX-1342 - Cardarelli PM. y col., Cancer Immunol Immunother. Febrero de 2010;59(2):257-65.
MorphoSys/Xencor: MOR-208/XmAb-5574 -Zalevsky J. y col., Blood. 16 de abril de 2009;113(16):3735-43 Documento US7.968.687 (Seattle Genetics)
Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno que comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 y un dominio variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24.
4G7 chim - Lang P. y col., Blood. 15 de mayo de 2004;103(10):3982-5 (Universidad de Tubingen)
Por ejemplo, la Fig. 6 y SEQ ID NO: 80 del documento US20120082664
Escuela de Medicina de la Universidad de Zhejiang: 2E8 - Zhang J. y col., J Drug Target. Noviembre de 2010;18(9):675-8
(48) IL2RA (receptor de interleucina 2, alfa); secuencia de referencia de NCBI: NM_000417.2);
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_000417
Versión de Genbank n.° NM_000417.2 GI:269973860
Fecha de actualización del registro de GenBank: 9 de septiembre de 2012 04:59 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_000408
Versión de Genbank n.° NP_000408.1 GI:4557667
Fecha de actualización del registro de GenBank: 9 de septiembre de 201204:59 PM
Referencias cruzadas
Kuziel W.A. y col., J. Invest. Dermatol. 94 (6 SUPL.), 27S-32S (1990)
Otra información
Símbolo oficial: IL2RA
Otros pseudónimos: RP11-536K7.1, CD25, IDDM10, IL2R, TCGFR
Otras designaciones: subunidad alfa del receptor de FIL-2; IL-2-RA; subunidad alfa de IL-2R; IL2-RA; antígeno TAC; subunidad alfa del receptor de interleucina-2; p55
ANTICUERPOS
Documento US6.383.487 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
Documento US6.521.230 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
Por ejemplo, un anticuerpo que tiene un sitio de unión al antígeno comprende al menos un dominio que comprende CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos en SEQ ID NO: 7, CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos en SEQ ID NO: 8 y CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos en SEQ ID NO: 9; o dichos CDR1, CDR2 y CDR3 tomados en secuencia en conjunto comprenden una secuencia de aminoácidos que es al menos el 90 % idéntica a SEQ ID NOs: 7, 8 y 9 tomados en secuencia en conjunto.
Daclizumab - Rech AJ. y col., Ann N Y Acad Sci. Septiembre de 2009;1174:99-106 (Roche)
(49) AXL (tirosina cinasa de receptor de AXL)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank M76125
Versión de Genbank n.° M76125.1 GI:292869
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:53 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA61243
Versión de Genbank n.° AAA61243.1 GI:29870
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:53 AM
Referencias cruzadas
O'Bryan J.P. y col., Mol. Cell. Biol. 11 (10), 5016-5031 (1991); Bergsagel P.L. y col., J. Immunol. 148 (2), 590-596 (1992)
Otra información
Símbolo oficial: AXL
Otros pseudónimos: JTK11, UFO
Otras designaciones: oncogén AXL; secuencia/gen transformante de AXL; oncogén AXL; receptor UFO de proteína tirosina-cinasa
ANTICUERPOS YW327.6S2 - Ye X. y col., Oncogene. 23 de septiembre de 2010;29(38):5254-64. (Genentech)
BergenBio: BGB324 (http://www.bergenbio.com/BGB324)
(50) CD30 - TNFRSF8 (superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral, miembro 8)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank M83554
Versión de Genbank n.° M83554.1 GI:180095
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:53 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA51947
Versión de Genbank n.° AAA51947.1 GI:180096
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:53 AM
Referencias cruzadas
Durkop H. y col., Cell 68 (3), 421-427 (1992)
Otra información
Símbolo oficial: TNFRSF8
Otros pseudónimos: CD30, D1S166E, Ki-1
Otras designaciones: receptor de CD30L; antígeno Ki-1; receptor de CD30 de citocina; antígeno CD30 de activación de linfocitos; superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral, miembro 8
(51) BCMA (antígeno de maduración de linfocitos B) - TNFRSF17 (superfamilia del receptor de factor de necrosis tumoral, miembro 17)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank Z29574
Versión de Genbank n.° Z29574.1 GI:471244
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:40 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank CAA82690
Versión de Genbank n.° CAA82690.1 GI:471245
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:40 AM
Referencias cruzadas
Laabi Y. y col., Nucleic Acids Res. 22 (7), 1147-1154 (1994)
Otra información
Símbolo oficial: TNFRSF17
Otros pseudónimos: BCM, BCMA, CD269
Otras designaciones: antígeno de maduración de linfocitos B; factor de maduración de linfocitos B; proteína de maduración de linfocitos B; superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral, miembro 17
(52) Ag de CT - CTA (antígenos testiculares de cáncer)
Referencias cruzadas
Fratta E. y col., Mol Oncol. Abril de 2011;5(2):164-82; Lim SH. y col., Am J Blood Res. 2012;2(1):29-35.
(53) CD 174 (Lewis Y) - FUT3 (fucosiltransferasa 3 (galactósido 3(4)-L-fucosiltransferasa, grupo sanguíneo de Lewis) Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM000149
Versión de Genbank n.° NM000149.3 GI:148277008
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 04:49 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_000140
Versión de Genbank n.° NP_000140.1 GI:4503809
Fecha de actualización del registro de GenBank: 26 de junio de 2012 04:49 PM
Referencias cruzadas
Kukowska-Latallo, J.F. y col., Genes Dev. 4 (8), 1288-1303 (1990)
Otra información
Símbolo oficial: FUT3
Otros pseudónimos: CD174, FT3B, FucT-III, LE, Les
Otras designaciones: FT de Lewis; alfa-(1,3/1,4)-fucosiltransferasa; grupo sanguíneo Lewis alfa-4-fucosiltransferasa; fucosiltransferasa III; galactósido 3(4)-L-fucosiltransferasa
(54) CLEC14A (familia 14 del dominio de lectina tipo C, miembro A; n ° de acceso de GenBank NM175060)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM175060
Versión de Genbank n.° NM175060.2 GI:371123930
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de abril de 2012 03:34 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_778230
Versión de Genbank n.° NP_778230.1 GI:28269707
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de abril de 2012 03:34 PM
Otra información
Símbolo oficial: CLEC14A
Otros pseudónimos: UNQ236/PR0269, C14orf27, CEG1, EGFR-5
Otras designaciones: familia 14 del dominio de lectina tipo C, miembro A; proteína que contiene dominio similar a CIECT y EGF; receptor 5 del factor de crecimiento epidérmico
(55) GRP78 - HSPA5 (proteína 5 de 70 kDa de choque térmico (proteína regulada por glucosa, 78 kDa) Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM005347
Versión de Genbank n.° NM005347.4 GI:305855105
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:42 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_005338
Versión de Genbank n.° NP_005338.1 GI:16507237
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:42 PM
Referencias cruzadas
Ting J. y col., DNA 7 (4), 275-286 (1988)
Otra información
Símbolo oficial: HSPA5
Otros pseudónimos: BIP, GRP78, MIF2
Otras designaciones: proteína de 78 kDa regulada por glucosa; proteína de unión grp78 al Ca(2+) de la luz del retículo endoplásmico; proteína de unión a la cadena pesada de la inmunoglobulina
(56) CD70 (molécula CD70) L08096
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank L08096
Versión de Genbank n.° L08096.1 GI:307127
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2012 08:54 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA36175
Versión de Genbank n.° AAA36175.1 GI:307128
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 2012 08:54 AM
Referencias cruzadas
Goodwin R.G. y col., Cell 73 (3), 447-456 (1993)
Otra información
Símbolo oficial: CD70
Otros pseudónimos: CD27L, CD27LG, TNFSF7
Otras designaciones: ligando CD27; CD27-L; antígeno CD70; antígeno Ki-24; antígeno de superficie CD70; superfamilia del factor de necrosis tumoral (ligando), miembro 7; superfamilia del ligando del factor de necrosis tumoral, miembro 7
ANTICUERPOS MDX-1411 contra CD70 (Medarex)
h1 F6 (Oflazoglu, E. y col., Clin Cancer Res. 1 de octubre de 2008;14(19):6171-80; Seattle Genetics)
Por ejemplo, véase el documento US20060083736 SEQ ID NOs: 1, 2, 11 y 12 y la Fig. 1.
(57) Antígenos específicos de células madre. Por ejemplo:
• 5T4 (véase la entrada (63) más adelante)
• CD25 (véase la entrada (48) anteriormente)
• CD32
° Polipéptido
■ N.° de acceso de GenBank ABK42161
■ Versión de Genbank n.° ABK42161.1 GI:117616286
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 25 de julio de 2007 03:00 PM
• LGR5/GPR49
° Nucleótido
■ N.° de acceso de GenBank NM_003667
■ Versión de Genbank n.° NM_003667.2 GI:24475886
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 03:38 PM
° Polipéptido
■ N.° de acceso de GenBank NP_003658
■ Versión de Genbank n.° NP_003658.1 GI:4504379
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 22 de julio de 2012 03:38 PM
• Prominina/CD133
° Nucleótido
■ N.° de acceso de GenBank NM_006017
■ Versión de Genbank n.° NM_006017.2 GI:224994187
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:47 PM
° Polipéptido
■ N.° de acceso de GenBank NP_006008
■ Versión de Genbank n.° NP_006008.1 GI:5174387
■ Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:47 PM
(58) ASG-5
Referencias cruzadas
(Smith L.M. y col., AACR 2010 Annual Meeting (resumen n.° 2590); Gudas J.M. y col., AACR 2010 Annual Meeting (resumen n.° 4393)
ANTICUERPOS
Anticuerpo anti-AGS-5: M6.131 (Smith, L.M. y col., AACR 2010 Annual Meeting (resumen n.° 2590)
(59) ENPP3 (pirofosfatasa/fosfodiesterasa 3 de ectonucleótido)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AF005632
Versión de Genbank n.° AF005632.2 GI:4432589
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 09:41 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAC51813
Versión de Genbank n.° AAC51813.1 GI:2465540
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 09:41 PM
Referencias cruzadas
Jin-Hua P. y col., Genomics 45 (2), 412-415 (1997)
Otra información
Símbolo oficial: ENPP3
Otros pseudónimos: RP5-988G15.3, B10, CD203c, NPP3, PD-IBETA, PDNP3
Otras designaciones: E-NPP 3; dJ1005H11.3 (fosfodiesterasa I/nucleótido pirofosfatasa 3); dJ914N13.3 (fosfodiesterasa I/nucleótido pirofosfatasa 3); miembro 3 de la familia de ectonucleótido pirofosfatasa/fosfodiesterasa; gp130RB13-6; fosfodiesterasa I beta; fosfodiesterasa I/nucleótido pirofosfatasa 3; fosfodiesterasa-I beta
(60) PRR4 (4 rica en prolina (lacrimal))
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_007244
Versión de Genbank n.° NM_007244.2 GI:154448885
Fecha de actualización del registro de GenBank: 28 de junio de 2012 12:39 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_009175
Versión de Genbank n.° NP_009175.2 GI:154448886
Fecha de actualización del registro de GenBank: 28 de junio de 2012 12:39 PM
Referencias cruzadas
Dickinson D.P. y col., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36 (10), 2020-2031 (1995)
Otra información
Símbolo oficial: PRR4
Otros pseudónimos: LPRP, PROL4
Otras designaciones: proteína rica en prolina lacrimal; proteína 4 rica en prolina asociada a carcinoma nasofaríngeo; polipéptido 4 rico en prolina; proteína 4 rica en prolina
(61) GCC - GUCY2C (guanilato ciclasa 2C (receptor de enterotoxina estable al calor)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_004963
Versión de Genbank n.° NM_004963.3 GI:222080082
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:50 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_004954
Versión de Genbank n.° NP_004954.2 GI:222080083
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de septiembre de 201201:50 PM
Referencias cruzadas
De Sauvage F.J. y col., J. Biol. Chem. 266 (27), 17912-17918 (1991); Singh S. y col., Biochem. Biophys. Res. Commun.
179 (3), 1455-1463 (1991)
Otra información
Símbolo oficial: GUCY2C
Otros pseudónimos: DIAR6, GUC2C, MUCIL, STAR
Otras designaciones: GC-C; receptor de STA; guanilil ciclasa C; hSTAR; receptor de enterotoxina estable al calor; guanilato ciclasa intestinal
(62) Liv-1- SLC39A6 (familia 39 de transportadores de solutos (transportador de cinc), miembro 6) Nucleótido
N.° de acceso de GenBank U41060
Versión de Genbank n.° U41060.2 GI:12711792
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de noviembre de 200904:35 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA96258
Versión de Genbank n.° AAA96258.2 GI:12711793
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de noviembre de 200904:35 PM
Referencias cruzadas
Taylor KM. y col., Biochim Biophys Acta. 1 de abril de 2003;1611(1-2):16-30
Otra información
Símbolo oficial: SLC39A6
Otros pseudónimos: LIV-1
Otras designaciones: proteína LIV-1, regulada por estrógeno; ZIP-6; proteína LIV-1 regulada por estrógeno; familia 39 de transportadores de solutos (transportador de ión metálico), miembro 6; familia de transportadores de solutos 39 miembro 6; transportador de cinc ZIP6; proteína 6 similar a zrt- y Irt
(63) 5T4, glucoproteína de trofoblastos, TPBG - TPBG (glucoproteína de trofoblastos)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AJ012159
Versión de Genbank n.° AJ012159.1 GI:3805946
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 10:27 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank CAA09930
Versión de Genbank n.° CAA09930.1 GI:3805947
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 10:27 AM
Referencias cruzadas
King K.W. y col., Biochim. Biophys. Acta 1445 (3), 257-270 (1999)
Otra información
• Símbolo oficial: TPBG
• Otros pseudónimos: 5T4, 5T4AG, M6P1
• Otras designaciones: antígeno oncofetal 5T4; glucoproteína de trofoblastos oncofetales 5T4; glucoproteína de oncotrofoblastos 5T4
(64) CD56 - NCMA1 (molécula 1 de adhesión a células neurales)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_000615
Versión de Genbank n.° NM 000615.6 GI:336285433
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:32 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_000606
Versión de Genbank n.° NP_000606.3 GI:94420689
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:32 PM
Referencias cruzadas
Dickson, G. y col., Cell 50 (7), 1119-1130 (1987)
Otra información
Símbolo oficial: NCAM1
Otros pseudónimos: CD56, MSK39, NCAM
Otras designaciones: antígeno reconocido por el anticuerpo monoclonal 5.1H11; molécula de adhesión a células neurales, NCAM
ANTICUERPOS
Immunogen: HuN901 (Smith SV. y col., Curr Opin Mol Ther. Agosto de 2005;7(4):394-401)
Por ejemplo, véase humanizado de anticuerpo N901 murino. Véase la Fig. 1b y 1e de Roguska, M.A. y col., Proc Natl Acad Sci USA febrero de 1994;91:969-973.
(65) CanAg (antígeno asociado a tumor CA242)
Referencias cruzadas
Haglund C. y col., Br J Cancer 60:845-851, 1989; Baeckstrom D. y col., J Biol Chem 266:21537-21547, 1991
ANTICUERPOS
huC242 (Tolcher AW y col., J Clin Oncol. 15 de enero de 2003;21(2):211-22; Immunogen)
Por ejemplo, véase el documento US20080138898A1 SEQ ID NO: 1 y 2
(66) FOLR1 (receptor 1 de folato)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank J05013
Versión de Genbank n.° J05013.1 GI:182417
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA35823
Versión de Genbank n.° AAA35823.1 GI:182418
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 AM
Referencias cruzadas
Elwood P.C. y col., J. Biol. Chem. 264 (25), 14893-14901 (1989)
Otra información
Símbolo oficial: FOLR1
Otros pseudónimos: FBP, FOLR
Otras designaciones: FR-alfa; células KB FBP; proteína de unión a folato adulta; proteína de unión a folato; receptor alfa de folato; receptor de folato, adulto; antígeno MOv18 asociado a tumor de ovario
ANTICUERPOS
M9346A - Whiteman KR. y col., Cancer Res 15 de abril de, 2012; 72(8 Suplemento): 4628 (Immunogen)
(67) GPNMB (glucoproteína (transmembrana) nmb)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank X76534
Versión de Genbank n.° X76534.1 GI:666042
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:10 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank CAA54044
Versión de Genbank n.° CAA54044.1 GI:666043
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:10 AM
Referencias cruzadas
Weterman M.A. y col., Int. J. Cancer 60 (1), 73-81 (1995)
Otra información
Símbolo oficial: GPNMB
Otros pseudónimos: UNQ1725/PRO9925, HGFIN, NMB
Otras designaciones: glucoproteína NMB; proteína similar a nmb de glucoproteína; osteoactivina; HGFIN de transmembrana de glucoproteína; NMB de transmembrana de glucoproteína
ANTICUERPOS
Celldex Therapeutics: CR011 (Tse KF. y col., Clin Cancer Res. 15 de febrero de 2006;12(4):1373-82)
Por ejemplo, véase el documento EP1827492B1 SEQ ID NO: 22, 24, 26, 31, 33 y 35
(68) TIM-1 - HAVCR1 (receptor 1 celular del virus de la hepatitis A)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AF043724
Versión de Genbank n.° AF043724.1 GI:2827453
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 06:24 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAC39862
Versión de Genbank n.° AAC39862.1 GI:2827454
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 06:24 PM
Referencias cruzadas
Feigelstock D. y col., J. Virol. 72 (8), 6621-6628 (1998)
Otra información
Símbolo oficial: HAVCR1
Otros pseudónimos: HAVCR, HAVCR-1, KIM-1, KIM1, TIM, TIM-1, TIM1, TIMD-1, TIMD1
Otras designaciones: proteína 1 del dominio de inmunoglobulina y dominio de mucina de linfocitos T; proteína 1 de la membrana de linfocitos T; molécula 1 de lesión renal
(69) RG-1/Mindina diana de tumor de la próstata - Mindina/RG-1
Referencias cruzadas
Parry R. y col., Cancer Res. 15 de septiembre de 2005;65(18):8397-405
(70) B7-H4 - VTCN1 (inhibidor 1 de la activación de linfocitos T que contienen el dominio del conjunto V) Nucleótido
N.° de acceso de GenBank BX648021
Versión de Genbank n.° BX648021.1 GI:34367180
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 08:40 AM
Referencias cruzadas
Sica GL. y col., Immunity. Junio de 2003;18(6):849-61
Otra información
Símbolo oficial: VTCN1
Otros pseudónimos: RP11-229A19.4, B7-H4, B7H4, B7S1, B7X, B7h.5, PRO1291, VCTN1
Otras designaciones: miembro de la familia B7, H4; miembro 1 de la superfamilia B7; molécula coestimulante B7x de linfocitos T; molécula co-estimulante B7x de linfocitos T; inhibidor 1 de la activación de linfocitos T que contienen el dominio del conjunto V; proteína B7-H4 inmunocoestimulante
(71) PTK7 (proteína tirosina cinasa 7 PTK7)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AF447176
Versión de Genbank n.° AF447176.1 GI:17432420
Fecha de actualización del registro de GenBank: 28 de noviembre de 200801:51 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAL39062
Versión de Genbank n.° AAL39062.1 GI:17432421
Fecha de actualización del registro de GenBank: 28 de noviembre de 200801:51 PM
Referencias cruzadas
Park S.K. y col., J. Biochem. 119 (2), 235-239 (1996)
Otra información
Símbolo oficial: PTK7
Otros pseudónimos: CCK-4, CCK4
Otras designaciones: cinasa 4 de carcinoma de colon; proteína tirosina-cinasa 7 inactiva; receptor 7 de pseudo-tirosina cinasa; 7 similar a la proteína tirosina-cinasa
(72) CD37 (molécula CD37)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_001040031
Versión de Genbank n.° NM_001040031.1 GI:91807109
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de julio de 2012 02:08 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_001035120
Versión de Genbank n.° NP_001035120.1 GI:91807110
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de julio de 2012 02:08 PM
Referencias cruzadas
Schwartz-Albiez R. y col., J. Immunol. 140 (3), 905-914 (1988)
Otra información
Símbolo oficial: CD37
Otros pseudónimos: GP52-40, TSPAN26
Otras designaciones: antígeno CD37; antígeno 37 de diferenciación celular; antígeno CD37 de leucocitos; antígeno CD37 de superficie de leucocitos; tetraspanina-26; tspan-26
ANTICUERPOS
Boehringer Ingelheim: mAb 37.1 (Heider KH. y col., Blood. 13 de octubre de 2011;118(15):4159-68)
Trubion: CD37-SMIP (G28-1 scFv-Ig) (Zhao X. y col., Blood. 2007;110: 2569-2577)
Por ejemplo, véase el documento US20110171208A1 SEQ ID NO: 253
Immunogen: K7153A (Deckert J. y col., Cancer Res 15 de abril de 2012; 72(8 Suplemento): 4625)
(73) CD138 - SDC1 (sindecano 1)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AJ551176
Versión de Genbank n.° AJ551176.1 GI:29243141
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 12:09 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank CAD80245
Versión de Genbank n.° CAD80245.1 GI:29243142
Fecha de actualización del registro de GenBank: 1 de febrero de 2011 12:09 PM
Referencias cruzadas
O'Connell FP. y col., Am J Clin Pathol. Febrero de 2004 121 (2):254-63
Otra información
Símbolo oficial: SDC1
Otros pseudónimos: CD138, SDC, SYND1, sindecano
Otras designaciones: antígeno CD138; receptor del factor de crecimiento de fibroblastos de proteoglicanos de sulfato de heparano; proteoglicano 1 de sindecano; sindecano-1
ANTICUERPOS
Biotest: MAb quimerizado (nBT062) - (Jagannath S. y col., Poster ASH n.° 3060, 2010; solicitud de patente WIPO WO/2010/128087)
Por ejemplo, véase el documento US20090232810 SEQ ID NO: 1 y 2
Immunogen: B-B4 (Tassone P. y col., Blood 104_3688-3696)
Por ejemplo, véase el documento US20090175863A1 SEQ ID NO: 1 y 2
(74) CD74 (molécula CD74, complejo mayor de histocompatibilidad, cadena invariante de clase II)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_004355
Versión de Genbank n.° NM_004355.1 GI:343403784
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:30 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_004346
Versión de Genbank n.° NP_004346.1 GI:10835071
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:30 PM
Referencias cruzadas
Kudo, J. y col., Nucleic Acids Res. 13 (24), 8827-8841 (1985)
Otra información
Símbolo oficial: CD74
Otros pseudónimos: DHLAG, HLADG, II, la-GAMMA
Otras designaciones: antígeno CD74 (polipéptido invariante del complejo mayor de histocompatibilidad, asociado al antígeno de clase II); cadena gamma del antígeno de histocompatibilidad de clase II de HLA; cadena invariante
asociada a antígenos de HLA-DR; HLA-DR-gamma; cadena invariante asociada a la; cadena gamma de HLA-DR del MHC; cadena gamma de antígenos de clase II; p33
ANTICUERPOS
Immunomedics: hLL1 (Milatuzumab,) - Berkova Z. y col., Expert Opin Investig Drugs. Enero de 2010;19(1):141-9)
Por ejemplo, véase el documento US20040115193 SEQ ID NOs: 19, 20, 21,22, 23 y 24
Genmab: HuMax-CD74 (véase el sitio web)
(75) Claudinas - CL (Claudinas)
Referencias cruzadas
Offner S. y col., Cancer Immunol Immunother. Mayo de 2005; 54(5):431-45, Suzuki H. y col., Ann N Y Acad Sci. Julio de 2012;1258:65-70)
En seres humanos, se han descrito 24 miembros de la familia - véase la referencia bibliográfica.
(76) EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_005228
Versión de Genbank n.° NM_005228.3 GI:41927737
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:47 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_005219
Versión de Genbank n.° NP_005219.2 GI:29725609
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:47 PM
Referencias cruzadas
Dhomen NS. y col., Crit Rev Oncog. 2012;17(1):31-50
Otra información
Símbolo oficial: EGFR
Otros pseudónimos: ERBB, ERBB1, HER1, PIG61, mENA
Otras designaciones: homólogo del oncogén viral de la leucemia eritroblástica aviar (v-erb-b); proteína 40 inhibidora del crecimiento celular; proteína 61 inductora de proliferación celular; proto-oncogén c-ErbB-1; proteína tirosina-cinasa de receptor erbB-1
ANTICUERPOS BMS: Cetuximab (Erbitux) - Broadbridge VT. y col., Expert Rev Anticancer Ther. Mayo de 2012;12(5):555-65.
Por ejemplo, véase el documento US6217866 - depósito ATTC n.° 9764.
Amgen: Panitumumab (Vectibix) - Argiles G. y col., Future Oncol. Abril de 2012;8(4):373-89
Por ejemplo, véase el documento US6235883 SEQ ID NOs: 23-38.
Genmab: Zalutumumab - Rivera F. y col., Expert Opin Biol Ther. Mayo de 2009;9(5):667-74.
YM Biosciences: Nimotuzumab - Ramakrishnan MS. y col., MAbs. Enero-febrero de 2009;1(1):41-8.
Por ejemplo, véase el documento US5891996 SEQ iD NOs: 27-34.
(77) Her3 (ErbB3) - ERBB3 (homólogo 3 (aviar) del oncogén viral de la leucemia eritroblástica v-erb-b2)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank M34309
Versión de Genbank n.° M34309.1 GI:183990
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA35979
Versión de Genbank n.° AAA35979.1 GI:306841
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:47 PM
Referencias cruzadas
Plowman, G. D. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87 (13), 4905-4909 (1990)
Otra información
Símbolo oficial: ERBB3
Otros pseudónimos: ErbB-3, HER3, LCCS2, MDA-BF-1, c-erbB-3, c-erbB3, erbB3-S, p180-ErbB3, p45-sErbB3, p85-sErbB3
Otras designaciones: proteína c-ErbB-3 similar a proto-oncogén; proteína tirosina-cinasa erbB-3 de receptor; receptor HER3 de la superficie celular tipo tirosina cinasa
ANTICUERPOS
Merimack Pharma: MM-121 (Schoeberl B. y col., Cancer Res. 15 de marzo de 2010 70(6):2485-2494)
Por ejemplo, véase el documento US2011028129 SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8.
(78) RON - MST1R (receptor 1 estimulante de macrófagos (tirosina cinasa relacionada con c-met)) Nucleótido
N.° de acceso de GenBank X70040
Versión de Genbank n.° X70040.1 GI:36109
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:17 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank CCA49634
Versión de Genbank n.° CCA49634.1 GI:36110
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:17 PM
Referencias cruzadas
Ronsin C. y col., Oncogene 8 (5), 1195-1202 (1993)
Otra información
Símbolo oficial: MST1 R
Otros pseudónimos: CD136, CDw136, PTK8, RON
Otras designaciones: receptor de MSP; variante de MST1 R RON30; variante de MST1 R RON62; proteína tirosina cinasa 8 PTK8; variante de RON E2E3; tirosina cinasa relacionada con c-met; receptor de la proteína estimulante de macrófagos; p185-Ron; variante 1 de RON soluble; variante 2 de RON soluble; variante 3 de RON soluble; variante 4 de RON soluble
(79) EPHA2 (receptor A2 de EPH)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank BC037166
Versión de Genbank n.° BC037166.2 GI:33879863
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 201201:59 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAH37166
Versión de Genbank n.° AAH37166.1 GI:22713539
Fecha de actualización del registro de GenBank: 6 de marzo de 201201:59 PM
Referencias cruzadas
Strausberg R.L. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26), 16899-16903 (2002)
Otra información
Símbolo oficial: EPHA2
Otros pseudónimos: ARCC2, CTPA, CTPP1, ECK
Otras designaciones: receptor 2 de efrina tipo A; proteína tirosina cinasa de receptor de células epiteliales; variante 1 de EPHA2 soluble; receptor ECK de la proteína tirosina-cinasa
ANTICUERPOS
Medimmune: 1C1 (Lee JW. y col., Clin Cancer Res. 1 de mayo de 2010 16(9):2562-2570)
Por ejemplo, véase el documento US20090304721A1 Fig. 7 y 8.
(80) CD20 - MS4A 1 (4 dominios que atraviesan la membrana, subfamilia A, miembro 1)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank M27394
Versión de Genbank n.° M27394.1 GI:179307
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de noviembre de 2009 11:16 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA35581
Versión de Genbank n.° AAA35581.1 GI:179308
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de noviembre de 2009 11:16 AM
Referencias cruzadas
Tedder T.F. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1), 208-212 (1988)
Otra información
Símbolo oficial: MS4A1
Otros pseudónimos: B1, Bp35, CD20, CVID5, LEU-16, MS4A2, S7
Otras designaciones: antígeno CD20 de linfocitos B; antígeno B1 de la superficie celular de linfocitos B; antígeno CD20; receptor de CD20; antígeno Leu-16 de superficie de leucocitos
ANTICUERPOS
Genentech/Roche: Rituximab - Abdulla NE. y col., BioDrugs. 1 de abril de 2012;26(2):71-82.
Por ejemplo, véase el documento US5736137, n.° de depósito ATCC HB-69119.
GSK/Genmab: Ofatumumab - Nightingale G. y col., Ann Pharmacother. Octubre de 2011;45(10):1248-55.
Por ejemplo, véase el documento US20090169550A1 SEQ ID NOs: 2, 4 y 5.
Immunomedics: Veltuzumab - Goldenberg DM. y col., Leuk Lymphoma. Mayo de 2010;51(5):747-55.
Por ejemplo, véase el documento US7919273B2 SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5 y 6.
(81) Tenascina C - TNC (tenascina C)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_002160
Versión de Genbank n.° NM_002160.3 GI:340745336
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:33 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_002151
Versión de Genbank n.° NP_002151.2 GI:153946395
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de septiembre de 201202:33 PM
Referencias cruzadas
Nies D.E. y col., J. Biol. Chem. 266 (5), 2818-2823 (1991); Siri A. y col., Nucleic Acids Res. 19 (3), 525-531 (1991)
Otra información
Símbolo oficial: TNC
Otros pseudónimos: 150-225, GMEM, GP, HXB, JI, TN, TN-C
Otras designaciones: GP 150-225; citotactina; antígeno de la matriz extracelular asociado a glioma; hexabraquiona (tenascina); antígeno miotendinoso; neuronectina; tenascina; isoforma 14/AD1/16 de tenascina-C
ANTICUERPOS
Philogen: G11 (von Lukowicz T. y col., J Nucl Med. Abril de 2007;48(4):582-7) y F16 (Pedretti M. y col., Lung Cancer. Abril de 2009;64(1):28-33)
Por ejemplo, véase el documento US7968685 SEQ ID NOs: 29, 35, 45 y 47.
(82) FAP (proteína de activación de fibroblastos, alfa)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank U09278
Versión de Genbank n.° U09278.1 GI:1888315
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201009:22 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAB49652
Versión de Genbank n.° AAB49652.1 GI:1888316
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201009:22 AM
Referencias cruzadas
Scanlan, M.J. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91 (12), 5657-5661 (1994)
Otra información
Símbolo oficial: FAP
Otros pseudónimos: DPPIV, FAPA
Otras designaciones: gelatinasa de 170 kDa unida a membrana de melanoma; serina proteasa de membrana integral; seprasa
(83) DKK-1 (homólogo de Dickkopf 1 (Xenopus laevis))
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_012242
Versión de Genbank n.° NM_012242.2 GI:61676924
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:48 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_036374
Versión de Genbank n.° NP_036374.1 GI:7110719
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:48 PM
Referencias cruzadas
Fedi P. y col., J. Biol. Chem. 274 (27), 19465-19472 (1999)
Otra información
Símbolo oficial: DKK1
Otros pseudónimos: UNQ492/PRO1008, DKK-1, SK
Otras designaciones: proteína 1 relacionada con dickkopf; similar a dickkopf-1; proteína 1 similar a dickkopf; proteína 1 relacionada con dickkopf; hDkk-1
ANTICUERPOS
Novartis: BHQ880 (Fulciniti M. y col., Blood. 9 de julio 2009 114(2):371-379)
Por ejemplo, véase el documento US20120052070A1 SEQ ID NOs: 100 y 108.
(84) CD52 (molécula CD52)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_001803
Versión de Genbank n.° NM_001803.2 GI:68342029
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:48 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_001794
Versión de Genbank n.° NP_001794.2 GI:68342030
Fecha de actualización del registro de GenBank: 30 de septiembre de 201201:48 PM
Referencias cruzadas
Xia M.Q. y col., Eur. J. Immunol. 21 (7), 1677-1684 (1991)
Otra información
Símbolo oficial: CD52
Otros pseudónimos: CDW52
Otras designaciones: antígeno CAMPATH-1; antígeno CD52 (antígeno CAMPATH-1); antígeno CDW52 (antígeno CAMPATH-1); antígeno 1 de la patología de cambridge; proteína E5 secretora epididimal; he5; proteína 5 específica de epididimis humana
ANTICUERPOS
Alemtuzumab (Campath) - Skoetz N. y col., Cochrane Database Syst Rev. 15 de febrero de 2012 2:CD008078. Por ejemplo, véase el n.° de acceso a DrugBank DB00087 (BIOD00109, BTD00109)
(85) CS1 - SLAMF7 (miembro 7 de la familia de SLAM)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank NM_021181
Versión de Genbank n° NM_021181.3 GI:1993571
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de junio de 2012 11:24 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank NP_067004
Versión de Genbank n.° NP_067004.3 GI:19923572
Fecha de actualización del registro de GenBank: 29 de junio de 2012 11:24 AM
Referencias cruzadas
Boles K.S. y col., Immunogenetics 52 (3-4), 302-307 (2001)
Otra información
Símbolo oficial: SLAMF7
Otros pseudónimos: UNQ576/PRO1138, 19A, CD319, CRACC, CS1
Otras designaciones: proteína 19A24; subconjunto 1 de CD2; células citotóxicas activantes del receptor similar a CD2; células citotóxicas activantes del receptor similar a CD2; proteína FOAP-12 de la membrana; proteína similar a LY9 novedoso (antígeno 9 de linfocitos); proteína 19A
ANTICUERPOS BMS: elotuzumab/HuLuc63 (Benson DM. y col., J Clin Oncol. 1 de junio de 2012 30(16):2013-2015)
Por ejemplo, véase el documento US20110206701 SEQ ID NOs: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 y 16.
(86) Endoglina - ENG (endoglina)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank AF035753
Versión de Genbank n.° AF035753.1 GI:3452260
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 06:36 PM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAC32802
Versión de Genbank n.° AAC32802.1 GI:3452261
Fecha de actualización del registro de GenBank: 10 de marzo de 2010 06:36 PM
Referencias cruzadas
Rius C. y col., Blood 92 (12), 4677-4690 (1998)
Símbolo oficial: ENG
Otra información
Otros pseudónimos: RP11-228B15.2, CD105, END, HHT1, ORW, ORW1
Otras designaciones: antígeno CD105
(87) Anexina A1 - ANXA1 (anexina A1)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank X05908
Versión de Genbank n.° X05908.1 GI:34387
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:02 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank CCA29338
Versión de Genbank n.° CCA29338.1 GI:34388
Fecha de actualización del registro de GenBank: 2 de febrero de 2011 10:02 AM
Referencias cruzadas
Wallner B.P. y col., Nature 320 (6057), 77-81 (1986)
Otra información
Símbolo oficial: ANXA1
Otros pseudónimos: RP11-71A24.1, ANX1, LPC1
Otras designaciones: anexina I (lipocortina I); anexina-1; calpactina II; calpactina-2; cromobindina-9; lipocortina I; p35; proteína inhibidora de fosfolipasa A2
(88) V-CAM (CD106) - VCAM1 (molécula 1 de adhesión a células vasculares)
Nucleótido
N.° de acceso de GenBank M60335
Versión de Genbank n.° M60335.1 GI:340193
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:56 AM
Polipéptido
N.° de acceso de GenBank AAA61269
Versión de Genbank n.° AAA61269.1 GI:340194
Fecha de actualización del registro de GenBank: 23 de junio de 201008:56 AM
Referencias cruzadas
Hession C. y col., J. Biol. Chem. 266 (11), 6682-6685 (1991)
Otra información
Símbolo oficial VCAM1
Otros pseudónimos: CD106, INCAM-100
Otras designaciones: antígeno CD106; proteína 1 de adhesión a células vasculares
Secuencias de anticuerpos
Anti-Integrina avfi6
RHAB6.2
QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGFAFTDSYMHWVRQAPGQGLEWMGW IDPENGDTE
YAPKFQGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCTRGTPTAVPNLRGDLQVLAQKVAG
PYPFDYWGQGTLVTVSS RHCB6.2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFIDSYMHWVRQAPGQRLEWMGWIDPENGDTE
YAPKFQGRVTITTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGTPTAVPNLRGDLQVLAQKVAG
PYPFDYWGQGTLVTVSS RHF
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNFIDSYMHW VRQAPGQRLEW MGW IDPENGDT
EYAPKFQGRVTFTTDTSASTAYIVELSSLRSEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYW GQGTLVTV
SS RHFB6
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNFIDSYMHW VRQAPGQRLEW MGW IDPENGDT
EYAPKFQGRVTFTTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCNEGTPTAVPNLRGDLQVLAQKVA
G PYYFD Y WGQGTLVTVSS RHAY100bP
ENVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPDRF
SGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIK RKFL36L50
ENVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHW LQQKPGQAPRLLIYLTSNLASGIPDRF
SGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIK RKC
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPDRFS
GSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIK
Anti-CD33
CD33 Hum195 VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYNMHW VRQAPGQGLEW IGYIYPYNGGTG
YNQKFKSKATITADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRPAMDYW GQGTLVTVSS
CD33 Hum195 VK
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASESVDNYGISFMNW FQQKPGKAPKLLIYAASNQGSG
VPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQSKEVPW TFGQGTKVEIK
Anti-CD19
VH acondicionada superficialmente de CD19 B4
QVQLVQPGAEW KPGASVKLSCKTSGYTFTSNW MHW VKQRPGQGLEW IGEiDPSDSYTN
YNQNFKGKAKLTVDKSTSTAYMEVSSLRSDDTAVYYCARGSNPYYYAMDYW GQGTSVTV
SS VK acondicionada superficialmente de CD19 B4
EIVLTQSPAIMSASPGERVTMTCSASSGVNYMHWYQQKPGTSPRRWIYDTSKLASGVPAR
FSGSGSGTSYSLTISSMEPEDAATYYCHQRGSYTFGGGTKLEIK
Anti-Her2
Cadena de VH de herceptina
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHW VRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRY
ADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVS
Cadena de VL de herceptina
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAW YQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSR
FSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK
Anti-CD25
Simulect VK (también conocido como Basiliximab)
QIVSTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSRSYMQWYQQKPGTSPKRWIYDTSKLASGVPAR
FSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQRSSYTFGGGTKLEIK
Simulect VH
QLQQSGTVLARPGASVKMSCKASGYSFTRYWMHWIKQRPGQGLEWIGAIYPGNSDTSYN
QKFEGKAKLTAVTSASTAYMELSSLTHEDSAVYYCSRDYGYYFDFW GQGTTLTVSS
Anti-PSMA
VH '1 desinmunizado
EVQLVQSGPEVKKPGATVKISCKTSGYTFTEYTIHWVKQAPGKGLEWIGNINPNNGGTTYN
QKFEDKATLTVDKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAAGWNFDYWGQGTLLTVSS
VK '1 desinmunizado
DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTLTCKASQDVGTAVDW YQQKPGPSPKLLIYWASTRHTGIPSR
FSGSGSGTOFTLTISSLQPEDFADYYCQQYNSYPLTFGPGTKVDIK
VH1 '5 desinmunizado
EVKLVESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFSNYW MNWVRQAPGKGLEW VAEIRSQSNNF
ATHYAESVKG RVTISRDDS KSIVYLQM N N LRAE DTGVYYCTRRWN N FWGQGTTVTVSS
VH2 '5 desinmunizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCVASGFTFSNYW MNWVRQAPGKGLEW VAEIRSQSNNFA
THYAESVKGRVTISRDDSKSIVYLQMNNLRAEDTAVYYCTRRWNNFW GQGTTVTVSS
VH3 '5 desinmunizado
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCVASGFTFSNYWMNWVRQAPGKGLEW VAEIRSQSNNFA
THYAESVKGRVTISRDDSKSIVYLQMNNLRAEDTAVYYCTRRWNNFW GQGTTVTVSS
VH4 '5 desinmunizado
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCVASGFTFSNYWMNWVRQAPGKGLEW VAEIRSQSNNFA
THYAESVKGRFTISRDDSKSIVYLQMNNLRAEDTAVYYCTRRWNN FWGQGTTVTVSS
VK1 '5 desinmunizado
NIVMTQFPSSMSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKMLIYGASNRFTGVPD
RFTGSGSATDFTLTISSLQTEDLADYYCGQSYTFPYTFGQGTKLEMK VK2 '5 desinmunizado
NIVMTQFPSSMSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKMLIYGASNRFTGVPD
RFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDLADYYCGQSYTFPYTFGQGTKLEIK VK3 '5 desinmunizado
NIQMTQFPSAMSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKMLIYGASNRFTGVPD
RFS GSGSGTD FTLTISS LQAE DLADYYCGQS YTFP YTFGQGTKLEIK VK4 '5 desinmunizado
NIQMTQFPSAMSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKMLIYGASNRFTGVPD
RFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDEADYYCGQSYTFPYTFGQGTKLEIK VK DI '5 desinmunizado
NIVMTQFPKSMSASAGERMTLTCKASENVGTYVSW YQQKPTQSPKMUYGASNRFTGVPD
RFSGSGSGTDFILTISSVQAEDLVDYYCGQSYTFPYTFGGGTKLEMK VH DI '5 desinmunizado
EVKLEESGGGLVQPGGSMKISCVASGFTFSNYWMNWVRQSPEKGLEW VAEIRSQSNNFA
THYAESVKGRVIISRDDSKSSVYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
RHA '5 humanizado
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYWMNWVRQASGKGLEWVGEIRSQSNNFA
THYAESVKGRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRRWNNFWGQGTTVTVSS
RHB '5 humanizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYW MNWVRQASGKGLEW VAEIRSQSNNFA
THYAESVKGRVIISRDDSKNTVYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRW NNFWGQGTTVTVSS
RHC '5 humanizado
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYWMNWVRQASGKGLEW VAEIRSQSNNFA
THYAESVKGRVI1SRDDSKNTVYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRWNNFWGGGTTVTVSS
RHD '5 humanizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYW MNWVRQASGKGLEW VGEIRSQSNNFA
THYAESVKGRVIISRDDSKNTVYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRW NNFWGQGTTVTVSS
RHE '5 humanizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYW MNWVRQASGKGLEW VAEIRSQSNNFA
THYAESVKGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRW NNFWGQGT7VTVSS
RHF '5 humanizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYW MNWVRQASGKGLEW VAEIRSQSNNFA
THYAESVKGRVIISRDDSKNTAYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRW NNFWGQGTTVTVSS
RHG '5 humanizado
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYW MNWVRQASGKGLEW VAEIRSQSNNFA
THYAESVKGRVIISRDDSKNTAYLQMNSLRTEDTAVYYCTRRW NNFWGQGTTVTVSS
RKA '5 humanizado
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSW YQQKPGTAPKLLIYGASNRFTGVPSR
FSGSGSATDFTLTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK RKB '5 humanizado
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSW YQQKPGTAPKLUYGASNRFTGVPSR
FSGS GSATDFTLTIN N LQP E D FATYYCGQS YTFPYTFGQGTKVEIK RKC '5 humanizado
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSW YQQKPGTAPKMLIYGASNRFTGVPS
RFSGSGSATDFTLTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK RKD '5 humanizado
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSW YQQKPGTAPKMLIYGASNRFTGVPS
RFSGSGSATDFTLTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK RKE '5 humanizado
NIVMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSWYQQKPGTAPKLLIYGASNRFTGVPDR
FTGSGSATDFILTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK RKF '5 humanizado
NIVMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSW YQQKPGTAPKMLIYGASNRFTGVPSR
FSGSGSATDFILTINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK RKG '5 humanizado
NIVMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASENVGTYVSW YQQKPGTAPKMLIYGASNRFTGVPDR
FTGSGSATDFTITINNLQPEDFATYYCGQSYTFPYTFGQGTKVEIK
El anticuerpo parental también puede ser una proteína de fusión que comprende una secuencia de péptidos de unión a albúmina (ABP) (Dennis y col. (2002) “Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins” J Biol Chem. 277:35035-35043; documento WO 01/45746). Los anticuerpos de la invención incluyen proteínas de fusión con secuencias de ABP enseñadas por: (i) Dennis y col. (2002) J Biol Chem. 277:35035-35043 en las Tablas III y IV, página 35038; (ii) documento US 2004/0001827 en [0076]; y (iii) documento WO 01/45746 en las páginas 12-13.
En una realización, el anticuerpo se ha producido para dirigirse específicamente al antígeno relacionado con el tumor avP6.
El agente de unión a una célula puede marcarse, por ejemplo, para ayudar en la detección o purificación del agente tanto antes de la incorporación como un conjugado, o como parte del conjugado. La marca puede ser una marca de biotina. En otra realización, el agente de unión a una célula puede marcarse con un radioisótopo.
Las realizaciones de la presente invención incluyen ConjA en el que el agente de unión a una célula está seleccionado de un anticuerpo para cualquiera de los antígenos tratados anteriormente.
Las realizaciones de la presente invención incluyen ConjA en el que el agente de unión a una célula está seleccionado de cualquiera de los anticuerpos tratados anteriormente.
La presente invención también puede referirse a conjugados en los que el agente de unión a una células se selecciona de un anticuerpo contra cualquiera de los antígenos discutidos anteriormente y cualquiera de los anticuerpos discutidos anteriormente ligado a diferentes fármacos.
Carga de fármaco
La carga de fármaco es el número promedio de fármacos de PBD por agente de unión a una célula, p. ej., anticuerpo. Si los compuestos de la invención están unidos a cisteínas, la carga de fármaco puede oscilar de 1 a 8 fármacos (D) por agente de unión a una célula, es decir, en los que 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 restos de fármaco están covalentemente unidos al agente de unión a una célula. Las composiciones de conjugados incluyen colecciones de agentes de unión a una célula, p. ej., anticuerpos, conjugados con un intervalo de fármacos, de 1 a 8. Si los compuestos de la invención están unidos a lisinas, la carga de fármaco puede oscilar de 1 a 80 fármacos (D) por agente de unión a una célula, aunque puede preferirse un límite superior de 40, 20, 10 o 8. Las composiciones de conjugados incluyen colecciones de agentes de unión a una célula, p. ej., anticuerpos, conjugados con un intervalo de fármacos, de 1 a 80, 1 a 40, 1 a 20, 1 a 10 o 1 a 8.
El número promedio de fármacos por anticuerpo en preparaciones de ADC de reacciones de conjugación puede caracterizarse mediante medios convencionales tales como UV, HPLC de fase inversa, HIC, espectroscopía de masas, ensayo de ELISA y electroforesis. También puede determinarse la distribución cuantitativa de ADC en términos de p. Por ELISA, puede determinarse el valor promediado de p en una preparación particular de ADC (Hamblett y col. (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson y col. (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852). Sin embargo, la distribución de valores de p (fármaco) no es discernible por la unión anticuerpo-antígeno y la limitación de la detección de ELISA. Por tanto, el ensayo de ELISA para la detección de conjugados de anticuerpo-fármaco no determina si los restos de fármaco están unidos al anticuerpo, tal como los fragmentos de la cadena pesada o cadena ligera, o los restos de aminoácidos particulares. En algunos casos, puede lograrse separación, purificación y caracterización de ADC homogéneos en los que p es un cierto valor de ADC con otras cargas de fármaco por medios tales como HPLC de fase inversa o electroforesis. Tales técnicas también son aplicables a otros tipos de conjugados.
Para algunos conjugados de anticuerpo-fármaco, p puede estar limitado por el número de sitios de unión sobre el anticuerpo. Por ejemplo, un anticuerpo puede tener solo uno o varios grupos tiol de cisteína, o puede tener solo uno o varios grupos tiol suficientemente reactivos mediante los cuales puede unirse un conector. Mayor carga de fármaco, por ejemplo, p >5, puede producir agregación, insolubilidad, toxicidad o pérdida de la permeabilidad celular de ciertos conjugados de anticuerpo-fármaco.
Normalmente, menos del máximo teórico de los restos de fármaco están conjugados con un anticuerpo durante una reacción de conjugación. Un anticuerpo puede contener, por ejemplo, muchos restos de lisina que no reaccionan con el producto intermedio de fármaco-conector (D-L) o reactivo conector. Solo los grupos lisina más reactivos pueden reaccionar con un reactivo de conector reactivo con amina. Por tanto, solo los grupos tiol de cisteína más reactivos pueden reaccionar con un reactivo de conector reactivo con tiol. Generalmente, los anticuerpos no contienen muchos, si alguno, grupos tiol de cisteína libres y reactivos que puedan ligarse a un resto de fármaco. La mayoría de los restos de tiol de cisteína en los anticuerpos de los compuestos existen como puentes de disulfuro y deben reducirse con un agente reductor tal como ditiotreitol (DTT) o TCEP, bajo condiciones reductoras parciales o totales. La carga (relación
de fármaco/anticuerpo) de un ADC puede controlarse de varias maneras diferentes, que incluyen: (i) limitando el exceso molar de producto intermedio de fármaco-conectar (D-L) o reactivo de conector con respecto al anticuerpo, (ii) limitando el tiempo de reacción de la conjugación o temperatura, y (iii) condiciones reductoras parciales o reductoras limitantes para la modificación del tiol de cisteína.
Ciertos anticuerpos tienen disulfuros entre cadenas reducibles, es decir, puentes de cisteína. Los anticuerpos pueden hacerse reactivos para la conjugación con reactivos de conector mediante tratamiento con un agente reductor tal como DTT (ditiotreitol). Cada puente de cisteína formará así, teóricamente, dos nucleófilos de tiol reactivos. Pueden introducirse grupos nucleófilos adicionales en anticuerpos mediante la reacción de lisinas con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) produciendo la conversión de una amina en un tiol. Los grupos tiol reactivos pueden introducirse en el anticuerpo (o fragmento del mismo) manipulando uno, dos, tres, cuatro o más restos de cisteína (p. ej., preparando anticuerpos mutantes que comprenden uno o más restos del aminoácido cisteína no nativos). El documento US 7521541 enseña a manipular anticuerpos por introducción de aminoácidos de cisteína reactivos.
Los aminoácidos de cisteína pueden manipularse en sitios reactivos en un anticuerpo y que no forman enlaces disulfuro entre cadenas o intermoleculares (Junutula y col., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan y col. (2009) Blood 114(13):2721-2729; documentos US 7521541; US 7723485; WO2009/052249). Los tioles de cisteína manipulados pueden reaccionar con reactivos de conector o los reactivos de fármaco-conector de la presente invención que tienen grupos electrófilos reactivos con tiol tales como maleimida o alfa-haloamidas para formar ADC con anticuerpos manipulados por cisteína y el resto de fármacos de PBD. Así, la localización del resto de fármaco puede diseñarse, controlarse y conocerse. La carga de fármaco puede controlarse, ya que los grupos tiol de cisteína manipulados normalmente reaccionan con reactivos de conector reactivos con tiol o reactivos de fármaco-conector en alto rendimiento. La manipulación de un anticuerpo IgG para introducir un aminoácido de cisteína por sustitución en un único sitio sobre la cadena pesada o ligera da dos nuevas cisteínas sobre el anticuerpo simétrico. Una carga de fármaco próxima a 2 puede lograrse con casi homogeneidad del producto de conjugación ADC.
Si más de un grupo nucleófilo o electrófilo del anticuerpo reacciona con un producto intermedio de fármaco-conector, o reactivo de conector seguido de resto de fármaco reactivo, entonces el producto resultante es una mezcla de compuestos de ADC con una distribución de restos de fármaco unidos a un anticuerpo, p. ej., 1, 2, 3, etc. Los procedimientos de cromatografía de líquidos tales como fase inversa polimérica (PLRP) e interacción hidrófoba (HIC) pueden separar compuestos en la mezcla por el valor de carga del fármaco. Las preparaciones de ADC con un único valor de carga de fármaco (p) pueden aislarse, sin embargo, estos ADC de valor de carga único pueden todavía ser mezclas heterogéneas debido a que los restos de fármaco pueden unirse, mediante el conector, en diferentes sitios sobre el anticuerpo.
Así, las composiciones de conjugado de anticuerpo-fármaco de la invención incluyen mezclas de compuestos de conjugados de anticuerpo-fármaco en las que el anticuerpo tiene uno o más restos de fármaco de PBD y en las que los restos de fármaco pueden unirse al anticuerpo en diversos restos de aminoácidos.
En una realización, el número promedio de grupos de pirrolobenzodiazepina diméricos por agente de unión a una célula está en el intervalo 1 a 20. En algunas realizaciones, el intervalo está seleccionado de 1 a 8, 2 a 8, 2 a 6, 2 a 4, y 4 a 8.
En algunas realizaciones, hay un grupo de pirrolobenzodiazepina dimérico por agente de unión a una célula.
Incluye otras formas
A menos que se especifique de otro modo, en lo anterior se incluyen las formas iónicas, de sal, solvato y protegidas muy conocidas de estos sustituyentes. Por ejemplo, una referencia a ácido carboxílico (-COOH) también incluye la forma aniónica (carboxilato) (-COO'), una sal o solvato de la misma, además de formas protegidas convencionales. Similarmente, una referencia a un grupo amino incluye la forma protonada (-N+HR1R2), una sal o solvato del grupo amino, por ejemplo, una sal de clorhidrato, además de formas protegidas convencionales de un grupo amino. Similarmente, una referencia a un grupo hidroxilo también incluye la forma aniónica (-O-), una sal o solvato de la misma, además de formas protegidas convencionales.
Sales
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manipular una sal correspondiente del compuesto activo, por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se tratan en Berge y col., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).
Por ejemplo, si el compuesto es aniónico, o tiene un grupo funcional que puede ser aniónico (p. ej., -COOH puede ser -COO'), entonces puede formarse una sal con un catión adecuado. Ejemplos de cationes inorgánicos adecuados incluyen iones de metales alcalinos tales como Na+ y K+, cationes alcalinotérreos tales como Ca2+ y Mg2+, y otros cationes tales como Al+3. Ejemplos de cationes orgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, ión amonio (es decir, NH4+) e iones amonio sustituidos (p. ej., NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+). Ejemplos de algunos iones amonio
sustituidos adecuados son aquellos derivados de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina y trometamina, además de aminoácidos, tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ión amonio cuaternario común es N(CHa)4+.
Si el compuesto es catiónico, o tiene un grupo funcional que pueda ser catiónico (p. ej., -NH2 puede ser -NH3+), entonces puede formarse una sal con un anión adecuado. Ejemplos de aniones inorgánicos adecuados incluyen aquellos derivados de los siguientes ácidos inorgánicos: clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso, fosfórico y fosforoso.
Ejemplos de aniones orgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, aquellos derivados de los siguientes ácidos orgánicos: ácido 2-acetoxibenzoico, acético, ascórbico, aspártico, benzoico, canforsulfónico, cinámico, cítrico, edético, etanodisulfónico, etanosulfónico, fumárico, gluceptónico, glucónico, glutámico, glicólico, hidroximaleico, hidroxinaftalenocarboxílico, isetiónico, láctico, lactobiónico, láurico, maleico, málico, metanosulfónico, múcico, oleico, oxálico, palmítico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fenilsulfónico, propiónico, pirúvico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, tartárico, toluenosulfónico, trifluoroacético y valérico. Ejemplos de aniones orgánicos poliméricos adecuados incluyen aquellos derivados de los siguientes ácidos poliméricos: ácido tánico, carboximetilcelulosa.
Solvatos
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manipular un solvato correspondiente del compuesto activo. El término “solvato” se usa en el presente documento en el sentido convencional para referirse a un complejo de soluto (p. ej., compuesto activo, sal de compuesto activo) y disolvente. Si el disolvente es agua, el solvato puede denominarse convenientemente un hidrato, por ejemplo, un mono-hidrato, un di-hidrato, un tri-hidrato, etc.
La invención incluye compuestos en los que un disolvente se añade a través del enlace imina del resto de PBD, que se ilustra a continuación, en el que el disolvente es agua o un alcohol (RAOH en la que RA es alquilo C1-4):
Estas formas pueden denominarse formas carbinolamina y de éter de carbinolamina de PBD (como se describe en la sección referente a R10 anterior). El equilibrio de estos equilibrios depende de las condiciones a las que los compuestos se encuentran, además de la naturaleza del propio resto.
Estos compuestos particulares pueden aislarse en forma sólida, por ejemplo, por liofilización.
Isómeros
Ciertos compuestos de la invención pueden existir en una o más formas geométricas, ópticas, enantioméricas, diastereoméricas, epiméricas, atrópicas, estereoisoméricas, tautómeras, conformacionales o anoméricas particulares, que incluyen, pero no se limitan a, formas cis y trans; formas E y Z; formas c, t y r; formas endo y exo; formas R, S y meso; formas D y L, formas d y l; formas (+) y (-); formas ceto, enol y enolato; formas sin y anti; formas sinclinales y anticlinales; formas a y P; formas axiales y ecuatoriales; formas de barco, silla, giro, sobre y media silla; y combinaciones de las mismas, denominadas conjuntamente en lo sucesivo “ isómeros” (o “formas isoméricas”).
El término “quiral” se refiere a moléculas que tienen la propiedad de no superponibilidad del componente de la imagen especular, mientras que el término “aquiral” se refiere a moléculas que son superponibles sobre su componente de imagen especular.
El término “estereoisómeros” se refiere a compuestos que tienen constitución química idéntica, pero se diferencian con respecto a la disposición de los átomos o grupos en el espacio.
“Diaestereómero” se refiere a un estereoisómero con dos o más centros que quiralidad y cuyas moléculas no son imágenes especulares entre sí. Los diaestereómeros tienen diferentes propiedades físicas, p. ej., puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales y reactividades. Las mezclas de diaestereómeros pueden separarse bajo procedimientos analíticos de alta resolución tales como electroforesis y cromatografía.
“Enantiómeros” se refiere a dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares no superponibles entre sí.
Las definiciones estereoquímicas y convenciones usadas en el presente documento generalmente siguen a S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; y Eliel, E. y Wilen, S., “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1994. Los compuestos de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y, por tanto, existen en diferentes formas estereoisoméricas. Se pretende que todas las formas estereoisoméricas de los compuestos de la invención, que incluyen, pero no se limitan a, diaestereómeros, enantiómeros y atropisómeros, además de mezclas de los mismos, tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de girar el plano del plano-luz polarizada. En la descripción de un compuesto ópticamente activo, los prefijos D y L, o R y S, se usan para indicar la configuración absoluta de la molécula alrededor de su(s) centro(s) quiral(es). Los prefijos d y I o (+) y (-) se emplean para designar el signo de rotación del plano-luz polarizada por el compuesto, significando (-) o I que el compuesto es levógiro. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrógiro. Para una estructura química dada, estos estereoisómeros son idénticos, excepto en que son imágenes especulares entre sí. Un estereoisómero específico también puede denominarse un enantiómero, y una mezcla de tales isómeros se denomina frecuentemente mezcla enantiomérica. Una mezcla 50:50 de enantiómeros se denomina una mezcla racémica o un racemato, que puede producirse si no ha habido estereoselección o estereoespecificidad en una reacción química o procedimiento. Los términos “mezcla racémica” y “racemato” se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantioméricas, que carecen de la actividad óptica.
Obsérvese que, excepto como se trata más adelante para las formas tautómeras, específicamente excluidas del término “isómeros”, como se usa en el presente documento, son isómeros estructurales (o constitucionales) (es decir, isómeros que se diferencian en las conexiones entre átomos en vez de simplemente por la posición de átomos en el espacio). Por ejemplo, una referencia a un grupo metoxi, -OCH3, no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, un grupo hidroximetilo, -CH2OH. Similarmente, una referencia al orto-clorofenilo no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, meta-clorofenilo. Sin embargo, una referencia a una clase de estructuras puede incluir bien formas estructuralmente isoméricas que se encuentran dentro de esa clase (p. ej., alquilo C1-7 incluye n-propilo e iso-propilo; butilo incluye n-, iso-, sec- y terc-butilo; metoxifenilo incluye orto-, meta- y para-metoxifenilo).
La exclusión anterior no se refiere a formas tautómeras, por ejemplo, formas ceto, enol y enolato, como en, por ejemplo, los siguientes pares tautómeros: ceto/enol (ilustrados más adelante), imina/enamina, amida/iminoalcohol, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enetiol, N-nitroso/hidroxiazo y nitro/aci-nitro.
ceto e n o l enolato
El término “tautómero” o “forma tautómera” se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías que son interconvertibles mediante una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómeros de protones (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen interconversiones mediante la migración de un protón, tales como isomerizaciones ceto-enol e imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones por reorganización de algunos de los electrones de enlace.
Obsérvese que específicamente incluidos en el término “isómero” están compuestos con una o más sustituciones isotópicas. Por ejemplo, H puede estar en cualquier forma isotópica, que incluye 1H, 2H (D) y 3H (T); C puede estar en cualquier forma isotópica, que incluye 12C, 13C y 14C; O puede estar en cualquier forma isotópica, que incluye 16O y 18O; y similares.
Ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como, pero no se limitan a 2H (deuterio, D), 3H (tritio), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl y 125I. Diversos compuestos isotópicamente marcados de la presente invención, por ejemplo, aquellos en los que los isótopos radiactivos tales como 3H, 13C y 14C se incorporan. Tales compuestos isotópicamente marcados pueden ser útiles en estudios metabólicos, estudios de cinética de reacción, técnicas de detección u obtención de imágenes, tales como tomografía de emisión de positrones (PET) o tomografía computerizada de emisión monofotónica (SPECT) que incluyen ensayos de distribución en tejido de fármaco o sustrato, o en el tratamiento radiactivo de pacientes. Los compuestos terapéuticos marcados o sustituidos con deuterio de la invención pueden tener propiedades de DMPK mejoradas (metabolismo y farmacocinética del fármaco), referentes a la distribución, metabolismo y secreción (ADME). La sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, elevada semivida in vivo o requisitos de dosificación reducidos. Un compuesto marcado con 18F puede ser útil para estudios de PET o SPECT. Los compuestos isotópicamente marcados de la presente invención y profármacos de los mismos pueden prepararse generalmente llevando a cabo los procedimientos desvelados en los esquemas o en los
ejemplos y preparaciones descritos más adelante sustituyendo un reactivo no isotópicamente marcado por un reactivo isotópicamente marcado fácilmente disponible. Además, la sustitución con isótopos más pesados, particularmente deuterio (es decir, 2H o D), puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, elevada semivida in vivo o requisitos de dosificación reducidos o una mejora en el índice terapéutico. Se entiende que el deuterio en este contexto se considera un sustituyente. La concentración de un isótopo más pesado tal, específicamente deuterio, puede definirse por un factor de enriquecimiento isotópico En los compuestos de la presente invención, cualquier átomo no específicamente designado como un isótopo particular se indica que representa cualquier isótopo estable de ese átomo.
A menos que se especifique de otro modo, una referencia a un compuesto particular incluye todas aquellas formas isoméricas, que incluyen mezclas (completa o parcialmente) racémicas y otras mezclas de las mismas. Los procedimientos para la preparación (p. ej., síntesis asimétrica) y separación (p. ej., cristalización fraccionada y medios cromatográficos) de tales formas isoméricas son tanto conocidos en la técnica como se obtienen fácilmente adaptando los procedimientos enseñados en el presente documento, o procedimientos conocidos, de una manera conocida.
A ctiv idad b io lóg ica
Ensayos de proliferación celular in vitro
Generalmente, la actividad citotóxica o citostática de un conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC) se mide: exponiendo las células de mamífero que tienen proteínas receptoras, p. ej., HER2, al anticuerpo del ADC en un medio de cultivo celular; cultivar las células durante un periodo de aproximadamente 6 horas a aproximadamente 5 días; y medir la viabilidad celular. Los ensayos in vitro basados en células se usan para medir la viabilidad (proliferación), citotoxicidad e inducción de apoptosis (activación por caspasas) de un ADC de la invención.
La potencia in vitro de conjugados de anticuerpo-fármaco puede medirse por un ensayo de proliferación celular. El ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo® es un procedimiento de ensayo homogéneo comercialmente disponible (Promega Corp., Madison, WI) basado en la expresión recombinante de luciferasa de coleópteros (patentes de EE.UU. n.° 5583024; 5674713 y 5700670). Este ensayo de proliferación celular determina el número de células viables en cultivo basándose en la cuantificación de ATP presente, un indicador de células metabólicamente activas (Crouch y col. (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; documento US 6602677). El CellTiter-Glo® se realiza en formato de 96 pocillos, haciéndolo susceptible a cribado de alta resolución automatizado (HTS) (Cree y col. (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404). El procedimiento de ensayo homogéneo implica añadir el único reactivo (reactivo CellTiter-Glo®) directamente a las células cultivadas en medio complementado con suero. No se requieren el lavado de células, eliminación de medio y múltiples etapas de pipeteado. El sistema detecta tan solo 15 células/pocillo en un formato de 384 pocillos en 10 minutos después de añadir reactivo y mezclar. Las células pueden tratarse continuamente con ADC, o pueden tratarse y separarse de ADC. Generalmente, las células tratadas brevemente, es decir, 3 horas, mostraron los mismos efectos de potencia que las células continuamente tratadas.
El formato “añadir-mezclar-medir” homogéneo produce la lisis celular y generación de una señal luminiscente proporcional a la cantidad de ATP presente. La cantidad de ATP es directamente proporcional al número de células presentes en el cultivo. El ensayo CellTiter-Glo® genera una señal luminiscente “de tipo brillo”, producida por la reacción de la luciferasa, que tiene una semivida generalmente superior a cinco horas, dependiendo del tipo de célula y del medio usado. Las células viables se reflejan en unidades relativas de luminiscencia (URL). El sustrato, luciferina de escarabajo, se descarboxila oxidativamente por luciferasa de luciérnaga recombinante, con la conversión concomitante de ATP en AMP y generación de fotones.
La potencia in vitro de conjugados de anticuerpo-fármaco también puede medirse por un ensayo de citotoxicidad. Se lavan células adherentes cultivadas con PBS, se desprenden con tripsina, se diluyen en medio completo, que contiene 10 % de SBF, se centrifugan, se resuspenden en medio fresco y se cuentan con un hemocitómetro. Los cultivos en suspensión se cuentan directamente. Suspensiones monodispersas de células adecuadas para el recuento pueden requerir la agitación de la suspensión por aspiración repetida para romper los grupos de células.
La suspensión de células se diluye a la densidad de siembra deseada y se dispensa (100 |jl por pocillo) en placas de 96 pocillos negras. Se incuban placas de líneas de células adherentes durante la noche para permitir la adherencia. Pueden usarse cultivos celulares en suspensión el día de la siembra.
Se prepara una solución madre (1 ml) de ADC (20 jg/m l) en el medio de cultivo celular apropiado. Se preparan diluciones de 10 veces en serie de ADC de solución madre en tubos de centrífuga de 15 ml transfiriendo en serie 100 j l a 900 j l de medio de cultivo celular.
Se dispensan cuatro pocillos por duplicado de cada dilución de ADC (100 j l) en placas de 96 pocillos negras, previamente sembradas con suspensión de células (100 jl), produciendo un volumen final de 200 j l. Los pocillos de control reciben medio de cultivo celular (100 jl).
Si el tiempo de duplicación de la línea celular es superior a 30 horas, la incubación de ADC es durante 5 días, si no se
hace una incubación de cuatro días.
Al final del periodo de incubación, se evalúa la viabilidad celular con el ensayo de azul Alamar. Se dispensa azul Alamar (Invitrogen) sobre la placa completa (20 |jl por pocillo) y se incuba durante 4 horas. Se mide la fluorescencia de azul Alamar a la excitación de 570 nm, emisión de 585 nm sobre el lector de placas Varioskan Flash. El porcentaje de supervivencia celular se calcula a partir de la fluorescencia media en los pocillos tratados con ADC en comparación con la fluorescencia media en los pocillos de control.
Eficacia in vivo
La eficacia in vivo de los conjugados de anticuerpo-fármaco (ADC) de la invención puede medirse por estudios de xenoinjerto de tumor en ratones. Por ejemplo, la eficacia in vivo de un ADC anti-HER2 de la invención puede medirse por un modelo de ratón de explante transgénico de HER2 de alta expresión. Se propaga un aloinjerto del ratón transgénico Fo5 mmtv que no responde a, o responde poco a, terapia con HERCEPTIN®. Los sujetos se tratan una vez con ADC a ciertos niveles de dosis (mg/kg) y exposición al fármaco PBD (jg /m 2); y control con tampón placebo (vehículo) y se monitorizan durante dos semanas o más para medir el tiempo hasta el duplicado del tumor, logaritmo de la destrucción celular y el encogimiento tumoral.
Uso
Los conjugados de la invención pueden usarse para proporcionar un compuesto de PBD en una localización diana.
La localización diana es preferentemente una población de células proliferativas. El anticuerpo es un anticuerpo para un antígeno presente sobre una población de células proliferativas.
En una realización, el antígeno está ausente o presente a un nivel reducido en una población de células no proliferativas en comparación con la cantidad de antígeno presente en la población de células proliferativas, por ejemplo, una población de células tumorales.
En la localización diana, el conector puede escindirse de manera que libere un compuesto RelA. Así, el conjugado puede usarse para proporcionar selectivamente un compuesto RelA a la localización diana.
El conector puede escindirse por una enzima presente en la localización diana.
La localización diana puede ser in vitro, in vivo o ex vivo.
Los compuestos de conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC) de la invención incluyen aquellos con utilidad para actividad contra el cáncer. En particular, los compuestos incluyen un anticuerpo conjugado, es decir, covalentemente unido por un conector, a un resto de fármaco de PBD, es decir, toxina. Si el fármaco no está conjugado a un anticuerpo, el fármaco de PBD tiene un efecto citotóxico. La actividad biológica del resto de fármaco de PBD se modula así por conjugación con un anticuerpo. Los conjugados de anticuerpo-fármaco (ADC) de la invención administran selectivamente una dosis eficaz de un agente citotóxico a tejido tumoral, por lo que puede conseguirse mayor selectividad, es decir, una menor dosis eficaz.
Así, en un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de conjugado como se describe en el presente documento para su uso en terapia.
En otro aspecto también se proporciona un compuesto de conjugado como se describe en el presente documento para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa.
Un experto habitual en la materia puede determinar fácilmente si un conjugado candidato trata o no una afección proliferativa para cualquier tipo de célula particular. Por ejemplo, ensayos que pueden usarse convenientemente para evaluar la actividad ofrecida por un compuesto particular se describen en los siguientes ejemplos.
El término “enfermedad proliferativa” se refiere a una proliferación celular no deseada o no controlada de células excesivas o anormales que es no deseada, tal como crecimiento neoplásico o hiperplásico, tanto in vitro como in vivo.
Ejemplos de afecciones proliferativas incluyen, pero no se limitan a, proliferación celular benigna, pre-maligna y maligna, que incluyen, pero no se limitan a, neoplasias y tumores (p. ej., histiocitoma, glioma, astrocitoma, osteoma), cánceres (p. ej., cáncer de pulmón, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer gastrointestinal, cáncer del intestino, cáncer de colon, carcinoma de mama, carcinoma de ovario, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer cerebral, sarcoma, osteosarcoma, sarcoma de Kaposi, melanoma), linfomas, leucemias, psoriasis, enfermedades de los huesos, trastornos fibroproliferativos (p. ej., de tejidos conjuntivos) y aterosclerosis. Cánceres de particular interés incluyen, pero no se limitan a, leucemias y cánceres de ovario.
Puede tratarse cualquier tipo de célula, que incluye, pero no se limita a, pulmón, gastrointestinal (que incluye, p. ej., intestino, colon), mama (mamario), de ovario, próstata, hígado (hepático), riñón (renal), vejiga, páncreas, cerebro y piel.
En una realización, el tratamiento es de un cáncer pancreático.
En una realización, el tratamiento es de un tumor que tiene integrina avP6 sobre la superficie de la célula.
Se contempla que los conjugados de anticuerpo-fármaco (ADC) de la presente invención pueden usarse para tratar diversas enfermedades o trastornos, p. ej., caracterizados por la expresión en exceso de un antígeno de tumor. Afecciones o trastornos hiperproliferativos a modo de ejemplo incluyen tumores benignos o malignos; leucemia, tumores malignos hematológicos y linfoides. Otros incluyen trastornos neuronales, de la glía, astrocíticos, hipotalámicos, glandulares, macrofágicos, epiteliales, del estroma, blastocélicos, inflamatorios, angiogénicos e inmunológicos, que incluyen autoinmunitarios.
Generalmente, la enfermedad o trastorno que va a tratarse es una enfermedad hiperproliferativa tal como cáncer. Ejemplos de cáncer que van a tratarse en el presente documento incluyen carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia o tumores malignos linfoides. Más ejemplos particulares de tales cánceres incluyen cáncer de células escamosas (p. ej., cáncer de células escamosas epiteliales), cáncer de pulmón que incluye cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, adenocarcinoma de pulmón y carcinoma escamoso de pulmón, cáncer de peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico o del estómago que incluye cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, glioblastoma, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de las glándulas salivares, cáncer de riñón o renal, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pene, además de cáncer de cabeza y cuello.
Enfermedades autoinmunitarias para las que los compuestos de ADC pueden usarse en el tratamiento incluyen trastornos reumatológicos (tales como, por ejemplo, artritis reumatoide, síndrome de Sjogren, esclerodermia, lupus tales como LES y nefritis lúpica, polimiositis/dermatomiositis, crioglobulinemia, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos y artritis psoriásica), osteoartritis, trastornos autoinmunitarios gastrointestinales y del hígado (tales como, por ejemplo, enfermedades inflamatorias del intestino (p. ej., colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn), gastritis autoinmunitaria y anemia perniciosa, hepatitis autoinmunitaria, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria y celiaquía), vasculitis (tal como, por ejemplo, vasculitis asociada a ANCA, que incluye vasculitis de Churg-Strauss, granulomatosis de Wegener y poliarteritis), trastornos neurológicos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, esclerosis múltiple, síndrome de opsoclono-mioclono, miastenia grave, neuromielitis óptica, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y polineuropatías autoinmunitarias), trastornos renales (tales como, por ejemplo, glomerulonefritis, síndrome de Goodpasture y enfermedad de Berger), trastornos dermatológicos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, psoriasis, urticaria, ronchas, pénfigo vulgar, penfigoide bullosoy lupus eritematoso cutáneo), trastornos hematológicos (tales como, por ejemplo, púrpura trombocitopénica, púrpura trombocitopénica trombótica, púrpura post-transfusión y anemia hemolítica autoinmune), aterosclerosis, uveítis, enfermedades auditivas autoinmunitarias (tales como, por ejemplo, enfermedad del oído interno y sordera parcial), enfermedad de Behcet, síndrome de Raynaud, trasplante de órganos y trastornos endocrinos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, enfermedades autoinmunitarias relacionadas con la diabetes tales como diabetes mellitus dependiente de insulina (DMDI), enfermedad de Addison y enfermedad tiroidea autoinmunitaria (por ejemplo, enfermedad de Graves y tiroiditis)). Tales enfermedades más preferidas incluyen, por ejemplo, artritis reumatoide, colitis ulcerosa, vasculitis asociada a ANCA, lupus, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren, enfermedad de Graves, DMDI, anemia perniciosa, tiroiditis y glomerulonefritis.
Procedim ientos de tratam iento
Los conjugados de la presente invención pueden usarse para terapia. El término “cantidad terapéuticamente eficaz” es una cantidad suficiente para mostrar beneficio a un paciente. Tal beneficio puede ser al menos mejora de al menos un síntoma. La cantidad real administrada, y la tasa y tiempo-ciclo de administración, dependerá de la naturaleza y gravedad de lo que esté tratándose. La prescripción del tratamiento, p. ej., decisiones sobre la dosificación, está dentro de la responsabilidad de médicos generales y otros doctores médicos.
Un compuesto de la invención puede administrarse solo o en combinación con otros tratamientos, tanto simultáneamente como secuencialmente dependiendo de la afección que vaya a tratarse. Ejemplos de tratamientos y terapias incluyen, pero no se limitan a, quimioterapia (la administración de agentes activos, que incluyen, p. ej., fármacos, tales como quimioterapéuticos); cirugía; y radioterapia.
Un “agente quimioterapéutico” es un compuesto químico útil en el tratamiento de cáncer, independientemente del mecanismo de acción. Clases de agentes quimioterapéuticos incluyen, pero no se limitan a: agentes alquilantes, antimetabolitos, alcaloides de las plantas de venenos del huso, antibióticos citotóxicos/antitumorales, inhibidores de la topoisomerasa, anticuerpos, fotosensibilizadores e inhibidores de cinasas. Los agentes quimioterapéuticos incluyen compuestos usados en “terapia dirigida” y quimioterapia convencional.
Ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen: erlotinib (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), docetaxel (Ta XOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-Fu (fluorouracilo, 5-fluorouracilo, CAS n.° 51-21-8), gemcitabina (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (CAS n.° 391210-10-9, Pfizer), cisplatino (cis-diamina, dicloroplatino (II), CAS n.° 15663-27-1), carboplatino (CAS n.° 41575-94-4), paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), trastuzumab (HERCEPTlN®, Genentech), temozolomida (4-metil-5-oxo-2,3,4,6,8-pentazabiciclo[4.3.0]nona-2,7,9-trieno-9-carboxamida, CAS n.° 85622-93-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), tamoxifeno ((Z)-2-[4-(1,2-difenilbut-1-enil)fenoxi]-N,A/-dimetiletanamina, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) y doxorubicina (ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD y rapamicina.
Más ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen: oxaliplatino (ELOXATIN®, Sanofi), bortezomib (VELCADE®, Millennium Pharm.), sutent (SUNITiN iB®, SU11248, Pfizer), letrozol (FEMARA®, Novartis), mesilato de imatinib (GLEEVEC®, Novartis), XL-518 (inhibidor Mek, Exelixis, documento WO 2007/044515), ARRY-886 (inhibidor de Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (inhibidor de PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (inhibidor de PI3K, Novartis), XL-147 (inhibidor de PI3K, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), fulvestrant (FASLODEX®, AstraZeneca), leucovorina (ácido folínico), rapamicina (sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), lonafarnib (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), sorafenib (NEXAVAR®, BAY43-9006, Bayer Labs), gefitinib (IRESSA®, AstraZeneca), irinotecan (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), tipifarnib (ZARNESTrA ™ , Johnson & Johnson), ABRAXANE™ (sin Cremophor), formulaciones de nanopartículas manipuladas con albúmina de paclitaxel (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), vandetanib (rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), clorambucilo, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), temsirolimus (TORISEL®, Wyeth), pazopanib (GlaxoSmithKline), canfosfamida (TELCYTA®, Telik), tiotepa y ciclofosfamida (CYTOXAN®, NEOSAR®); alquilsulfonatos tales como busulfano, improsulfano y piposulfano; aziridinas tales como benzodopa, carbocuona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas que incluyen altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilomelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina y bulatacinona); una camptotecina (incluyendo el análogo sintético topotecan); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos de adozelesina, carzelesina y bizelesina); criptoficinas (particularmente criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos KW-2189 y CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; una sarcodictina; espongistatina; mostazas del nitrógeno tales como clorambucilo, clornafacina, clorofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalan, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimnustina; antibióticos tales como los antibióticos de enediína (p. ej., caliqueamicina, caliqueamicina gamma 1I, caliqueamicina omega l1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); dinemicina, dinemicina A; bisfosfonatos, tales como clodronato; una esperamicina; además de cromóforo de neocarzinostatina y cromóforos antibióticos de cromoproteína enediína relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, morfolinodoxorubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2-pirrolino-doxorubicina y desoxidoxorubicina), epirubicina, esorubicina, idarubicina, nemorubicina, marcelomicina, mitomicinas tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; antimetabolitos tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos de ácido fólico tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antiadrenérgicos tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reforzador de ácido fólico tal como ácido frolínico; aceglatona; glucósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diazicuona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglúcido; nitrato de galio, hidroxiurea; lentinano; lonidainina; maitansinoides tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2-etilhidrazida; procarbazina; complejo de polisacáridos PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofirano; espirogermanio; ácido tenuazónico; triazicuona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido (“Ara-C”); ciclofosfamida; tiotepa; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino tales como cisplatino y carboplatino; vinblastina; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina (NAVELBINE®); novantrona; tenipósido; edatrexato; daunomicina; aminopterina; capecitabina (XELODA®, Roche); ibandronato; CPT-11; inhibidor de la topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides tales como ácido retinoico; y sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
También se incluyen en la definición de “agente quimioterapéutico”: (i) agentes antihormonales que actúan para regular o inhibir la acción de hormonas sobre tumores tales como antiestrógenos y moduladores de receptores de estrógenos selectivos (SERM), que incluyen, por ejemplo, tamoxifeno (incluyendo NOLVADEX®; citrato de tamoxifeno), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, queoxifeno, LY117018, onapristona y FARESTON® (citrato de toremifina); (ii) inhibidores de la aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la producción de estrógenos en las glándulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, MEGASE® (acetato de megestrol), AROm As IN® (exemestano; Pfizer), formestanio, fadrozol, RIVISOR® (vorozol), FEMARA® (letrozol;
Novartis) y ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca); (iii) antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; además de troxacitabina (un análogo de 1,3-dioxolano nucleósido citosina); (iv) inhibidores de proteínas cinasas tales como inhibidores de MEK (documento WO 2007/044515); (v) inhibidores de lípido cinasas; (vi) oligonucleótidos antisentido, particularmente aquellos que inhiben la expresión de genes en rutas de señalización que participan en la proliferación celular anómala, por ejemplo, PKC-alfa, Raf y H-Ras, tales como oblimersen (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) ribozimas tales como inhibidores de la expresión de VEGF (por ejemplo, ANGIOZYME®) e inhibidores de la expresión de HER2; (viii) vacunas tales como vacunas de terapia génica, por ejemplo, ALLo Ve CTIN®, LEUVECTIN®y VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; inhibidores de latopoisomerasa 1 tales como LUr To TECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) agentes antiangiogénicos tales como bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); y sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
También se incluyen en la definición de “agente quimioterapéutico” anticuerpos terapéuticos tales como alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); cetuximab (ERBITUX®, Imclone); panitumumab (VECTIBIX®, Amgen), rituximab (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), ofatumumab (ARZERRA®, Gs K), pertuzumab (PERJETA™, OMNITARG™, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), tositumomab (Bexxar, Corixia), y el conjugado de anticuerpo-fármaco gemtuzumab ozogamicina (MYLOTARG®, Wyeth).
Anticuerpos monoclonales humanizados con potencial terapéutico como agentes quimioterapéuticos en combinación con los conjugados de la invención incluyen: alemtuzumab, apolizumab, aselizumab, atlizumab, bapineuzumab, bevacizumab, bivatuzumab mertansine, cantuzumab mertansine, cedelizumab, certolizumab pegol, cidfusituzumab, cidtuzumab, daclizumab, eculizumab, efalizumab, epratuzumab, erlizumab, felvizumab, fontolizumab, gemtuzumab ozogamicina, inotuzumab ozogamicina, ipilimumab, labetuzumab, lintuzumab, matuzumab, mepolizumab, motavizumab, motovizumab, natalizumab, nimotuzumab, nolovizumab, numavizumab, ocrelizumab, omalizumab, palivizumab, pascolizumab, pecfusituzumab, pectuzumab, pertuzumab, pexelizumab, ralivizumab, ranibizumab, reslivizumab, reslizumab, resivizumab, rovelizumab, ruplizumab, sibrotuzumab, siplizumab, sontuzumab, tacatuzumab tetraxetano, tadocizumab, talizumab, tefibazumab, tocilizumab, toralizumab, trastuzumab, tucotuzumab celmoleucina, tucusituzumab, umavizumab, urtoxazumab y visilizumab.
Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención, y para su uso de acuerdo con la presente invención, pueden comprender, además del principio activo, es decir, un compuesto de conjugado, un excipiente farmacéuticamente aceptable, vehículo, tampón, estabilizador u otros materiales muy conocidos para aquellos expertos en la materia. Tales materiales deben ser no tóxicos y no deben interferir con la eficacia del principio activo. La naturaleza precisa del vehículo u otro material dependerá de la vía de administración, que puede ser oral, o mediante inyección, p. ej., cutánea, subcutánea o intravenosa.
Las composiciones farmacéuticas para administración por vía oral pueden estar en forma de comprimido, cápsula, polvo o líquido. Un comprimido puede comprender un vehículo sólido o un adyuvante. Las composiciones farmacéuticas líquidas generalmente comprenden un vehículo líquido tal como agua, petróleo, aceites animales o vegetales, aceite mineral o aceite sintético. Pueden incluirse disolución de una solución salina fisiológica, dextrosa u otra disolución de sacáridos o glicoles tales como etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol. Una cápsula puede comprender un vehículo sólido tal como una gelatina.
Para inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, o inyección en el sitio de aflicción, el principio activo estará en forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable que está libre de pirógenos y tiene pH, isotonicidad y estabilidad adecuados. Aquellos expertos habituales en la materia son perfectamente capaces de preparar soluciones adecuadas usando, por ejemplo, vehículos isotónicos tales como inyección de cloruro sódico, inyección de Ringer, inyección de Ringer con lactato. Pueden incluirse conservantes, estabilizadores, tampones, antioxidantes y/u otros aditivos, según se requiera.
Form ulaciones
Aunque es posible usar el compuesto de conjugado (p. ej., administrarse) solo, frecuentemente es preferible que esté presente como una composición o formulación.
En una realización, la composición es una composición farmacéutica (p. ej., formulación, preparación, medicamento) que comprende un compuesto de conjugado, como se describe en el presente documento, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En una realización, la composición es una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de conjugado, como se describe en el presente documento, junto con uno o varios de otros componentes farmacéuticamente aceptables muy conocidos para aquellos expertos en la materia, que incluyen, pero no se limitan a, vehículos, diluyentes, excipientes, adyuvantes, cargas, tampones, conservantes, antioxidantes, lubricantes, estabilizadores, solubilizantes, tensioactivos (p. ej., agentes humectantes), agentes enmascaradores, agentes colorantes, aromatizantes y edulcorantes farmacéuticamente aceptables.
En una realización, la composición comprende además otros agentes activos, por ejemplo, otros agentes terapéuticos
o profilácticos.
Vehículos, diluyentes, excipientes adecuados, etc., pueden encontrarse en textos farmacéuticos estándar. Véanse, por ejemplo, Handbook of Pharmaceutical Additives, 2a edición (eds. M. Ash y I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, Nueva York, EE.UU.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a edición, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; y Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2a edición, 1994.
El término “farmacéuticamente aceptable”, como se usa en el presente documento, se refiere a compuestos, componentes, materiales, composiciones, formas de dosificación, etc., que son, dentro del alcance del criterio médico sensato, adecuados para su uso en contacto con los tejidos del sujeto en cuestión (p. ej., humano) sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación, proporcional a una relación de beneficio/riesgo razonable. Cada vehículo, diluyente, excipiente, etc., debe también ser “aceptable” en el sentido de ser compatible con los otros componentes de la formulación.
Las formulaciones pueden prepararse por cualquier procedimiento muy conocido en la técnica de la farmacia. Tales procedimientos incluyen la etapa de poner en asociación el compuesto activo con un vehículo que constituye uno o más componentes accesorios. En general, las formulaciones se preparan poniendo uniforme e íntimamente en asociación el compuesto activo con vehículos (p. ej., vehículos líquidos, vehículo sólido finamente dividido, etc.), y luego moldear el producto, si fuera necesario.
La formulación puede prepararse para proporcionar liberación rápida o lenta; inmediata, retardada, controlada o liberación sostenida; o una combinación de las mismas.
Las formulaciones adecuadas para administración parenteral (p. ej., mediante inyección) incluyen líquidos estériles, libres de pirógenos, isotónicos, acuosos o no acuosos (p. ej., soluciones, suspensiones), en los que el principio activo se disuelve, suspende o proporciona de otro modo (p. ej., en un liposoma u otra micropartícula). Tales líquidos pueden contener adicionalmente otros componentes farmacéuticamente aceptables, tales como antioxidantes, tampones, conservantes, estabilizadores, bacteriostáticos, agentes de suspensión, espesantes y solutos que convierten la formulación en isotónica con la sangre (u otro fluido corporal relevante) del receptor previsto. Ejemplos de excipientes incluyen, por ejemplo, agua, alcoholes, polioles, glicerol, aceites vegetales y similares. Ejemplos de vehículos isotónicos adecuados para su uso en tales formulaciones incluyen inyección de cloruro sódico, solución de Ringer o inyección de Ringer con lactato. Normalmente, la concentración del principio activo en el líquido es de aproximadamente 1 ng/ml a aproximadamente 10 pg/ml, por ejemplo, de aproximadamente 10 ng/ml a aproximadamente 1 pg/ml. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes cerrados de dosis unitaria o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales, y puede almacenarse en una condición secada por congelación (liofilizada) que requiere solo la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de uso. Pueden prepararse soluciones y suspensiones para inyección extemporánea a partir de polvos estériles, gránulos y comprimidos.
D osificación
Se apreciará por un experto en la materia que las dosificaciones apropiadas del compuesto de conjugado, y composiciones que comprenden el compuesto de conjugado, pueden variar de paciente a paciente. Determinar la dosificación óptima implicará generalmente equilibrar el nivel de beneficio terapéutico contra cualquier riesgo o efectos secundarios perjudiciales. El nivel de dosificación seleccionado dependerá de varios factores que incluyen, pero no se limitan a, la actividad del compuesto particular, la vía de administración, el momento de administración, la tasa de eliminación del compuesto, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación, la gravedad de la afección, y la especie, sexo, edad, peso, afección, salud general e historia médica previa del paciente. La cantidad de compuesto y la vía de administración serán por último lugar a criterio del médico, veterinario o profesional clínico, aunque generalmente la dosificación se seleccionará para lograr concentraciones locales en el sitio de acción que consiguen el efecto deseado sin causar efectos secundarios nocivos o perjudiciales sustanciales.
La administración puede efectuarse en una dosis, continuamente o intermitentemente (p. ej., en dosis divididas a intervalos apropiados) durante el transcurso del tratamiento. Procedimientos de determinación de los medios más eficaces y de dosificación de la administración son muy conocidos para aquellos expertos en la materia y variarán con la formulación usada para la terapia, el fin de la terapia, la(s) célula(s) diana(s) que está(n) tratándose y el sujeto que está tratándose. Pueden llevarse a cabo administraciones individuales o múltiples con el nivel de dosis y patrón que se selecciona por el médico práctico, veterinario o profesional clínico.
En general, una dosis adecuada del compuesto activo está en el intervalo de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 25 mg (más normalmente aproximadamente 1 pg a aproximadamente 10 mg) por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. Si el compuesto activo es una sal, un éster, una amida, un profármaco, la cantidad administrada se calcula basándose en el compuesto parental y así el peso real que va a usarse se aumenta proporcionalmente.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano de acuerdo con la siguiente pauta de dosificación: aproximadamente 100 mg, 3 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano de acuerdo con la siguiente pauta de dosificación: aproximadamente 150 mg, 2 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano de acuerdo con la siguiente pauta de dosificación: aproximadamente 200 mg, 2 veces al día.
Sin embargo en una realización, el compuesto de conjugado se administra a un paciente humano de acuerdo con la siguiente pauta de dosificación: aproximadamente 50 o aproximadamente 75 mg, 3 o 4 veces al día.
En una realización, el compuesto de conjugado se administra a un paciente humano de acuerdo con la siguiente pauta de dosificación: aproximadamente 100 o aproximadamente 125 mg, 2 veces al día.
Las cantidades de dosificación descritas anteriormente pueden aplicarse al conjugado (incluyendo el resto de PBD y el conector al anticuerpo) o a la cantidad eficaz de compuesto de PBD proporcionada, por ejemplo, la cantidad de compuesto que es liberable después de la escisión del conector.
Para la prevención o tratamiento de enfermedad, la dosificación apropiada de un ADC de la invención dependerá del tipo de enfermedad que va a tratarse, como se ha definido anteriormente, la gravedad y transcurso de la enfermedad, si la molécula se administra para fines preventivos o terapéuticos, terapia previa, la historia clínica del paciente y respuesta al anticuerpo, y el criterio del médico adjunto. La molécula se administra adecuadamente al paciente de una vez o durante una serie de tratamientos. Dependiendo del tipo y gravedad de la enfermedad, aproximadamente 1 |jg/kg a 15 mg/kg (p. ej., 0,1-20 mg/kg) de molécula es una dosificación candidata inicial para administración al paciente, tanto, por ejemplo, por una como más administraciones separadas, o por infusión continua. Una dosificación diaria típica podría oscilar de aproximadamente 1 jg/kg a 100 mg/kg o más, dependiendo de los factores mencionados anteriormente. Una dosificación a modo de ejemplo de ADC que va a administrarse a un paciente está en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg de peso del paciente. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la afección, el tratamiento es sostenido hasta que se produce una supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Una pauta de dosificación a modo de ejemplo comprende un ciclo de administración de una dosis de carga inicial de aproximadamente 4 mg/kg, seguido de dosis adicionales cada semana, dos semanas o tres semanas de un ADC. Pueden ser útiles otras pautas de dosificación. El progreso de esta terapia se monitoriza fácilmente por técnicas y ensayos convencionales.
Tratamiento
El término “tratamiento”, como se usa en el presente documento en el contexto de tratar una afección, se refiere generalmente a tratamiento y terapia, tanto de un ser humano como un animal (p. ej., en aplicaciones veterinarias), en el que se logra algún efecto terapéutico deseado, por ejemplo, la inhibición del progreso de la afección, e incluye una reducción en la tasa de progreso, una detención en la tasa de progreso, regresión de la afección, mejora de la afección y cura de la afección. También se incluye el tratamiento como medida profiláctica (es decir, profilaxis, prevención).
El término “cantidad terapéuticamente eficaz”, como se usa en el presente documento, se refiere a la cantidad de un compuesto activo, o un material, composición o dosificación que comprende un compuesto activo, que es eficaz para producir algún efecto terapéutico deseado, proporcional a una relación de beneficio/riesgo razonable, cuando se administra según una pauta de tratamiento deseada.
Similarmente, el término “cantidad profilácticamente eficaz”, como se usa en el presente documento, se refiere a la cantidad de un compuesto activo, o un material, composición o dosificación que comprende un compuesto activo, que es eficaz para producir algún efecto profiláctico deseado, proporcional a una relación de beneficio/riesgo razonable, cuando se administra de acuerdo con una pauta de tratamiento deseada.
Preparación de conjugados de fármaco
Los conjugados de anticuerpo-fármaco, además de conjugados con otros agentes de unión a una célula, pueden prepararse por varias vías, empleando reacciones de química orgánica, condiciones y reactivos conocidos para aquellos expertos en la materia, que incluyen reacción de un grupo nucleófilo de un anticuerpo o agente de unión a una célula con un fármaco-reactivo de conector. Este procedimiento puede emplearse con varios anticuerpos y agentes de unión a una célula para preparar los conjugados de anticuerpo-fármaco de la invención.
Grupos nucleófilos sobre anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, grupos tiol de la cadena lateral, p. ej., cisteína. Los grupos tiol son nucleófilos y capaces de reaccionar para formar enlaces covalentes con grupos electrófilos sobre restos de conector tales como aquellos de la presente invención. Ciertos anticuerpos tienen disulfuros entre cadenas reducibles, es decir, puentes de cisteína. Los anticuerpos pueden hacerse reactivos para la conjugación con reactivos
de conector mediante tratamiento con un agente reductor tal como DTT (reactivo de Cleland, ditiotreitol) o TCEP (clorhidrato de tris(2-carboxietil)fosfina; Getz y col. (1999) Anal. Biochem. Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA). Cada puente de disulfuro de cisteína formará así, teóricamente, dos nucleófilos de tiol reactivos. Grupos nucleófilos adicionales pueden introducirse en anticuerpos mediante la reacción de lisinas con 2-iminotiolano (reactivo de Traut), produciendo la conversión de una amina en un tiol.
E l sujeto/paciente
El sujeto/paciente puede ser un animal, mamífero, un mamífero placentario, un marsupial (p. ej., canguro, tejón australiano), un monotremo (p. ej., ornitorrinco), un roedor (p. ej., una cobaya, un hámster, una rata, un ratón), murino (p. ej., un ratón), un lagomorfo (p. ej., un conejo), aviar (p. ej., un ave), canino (p. ej., un perro), felino (p. ej., un gato), equino (p. ej., un caballo), porcino (p. ej., un cerdo), ovino (p. ej., una oveja), bovino (p. ej., una vaca), un primate, simio (p. ej., un simio inferior o simio superior), un simio inferior (p. ej., tití, babuino), un simio superior (p. ej., gorila, chimpancé, orangután, gibón), o un ser humano.
Además, el sujeto/paciente puede estar en cualquiera de sus formas de desarrollo, por ejemplo, un feto. En una realización preferida, el sujeto/paciente es un ser humano.
En una realización, el paciente es una población en la que cada paciente tiene un tumor que tiene integrina avP6 sobre la superficie de la célula.
Ejemplos
Procedimientos experimentales generales
Las rotaciones ópticas se midieron en un polarímetro ADP 220 (Bellingham Stanley Ltd.) y las concentraciones (c) se facilitan en g/100 ml. Los puntos de fusión se midieron usando un aparato de punto de fusión digital (electrotérmico). Los espectros de IR se registraron en un espectrómetro de IR Spectrum 1000 FT de Perkin-Elmer. Los espectros de RMN 1H y 13C se adquirieron a 300 K usando un espectrómetro de RMN de Bruker Avance a 400 y 100 MHz, respectivamente. Los desplazamientos químicos se informan con respecto a TEM (8 = 0,0 ppm) y las señales se designan s (singlete), d (doblete), t (triplete), dt (triplete doble), dd (doblete de dobletes), ddd (doblete doble de dobletes) o m (multiplete), con las constantes de acoplamiento dadas en hercios (Hz). Se recogieron datos de espectroscopía de masas (EM) usando un instrumento Micromass ZQ de Waters acoplado a una HPLC 2695 de Waters con una PDA 2996 de Waters. Los parámetros de Micromass ZQ de Waters usados fueron: capilar (kV), 3,38; cono (V), 35; extractor (V), 3,0; temperatura de la fuente (°C), 100; temperatura de desolvatación (°C), 200; velocidad de flujo del cono (l/h), 50; velocidad de flujo de desolvatación (l/h), 250. Los datos de espectroscopía de masas de alta resolución (HR-EM) se registraron en un Micromass QTOF Global de Waters en modo W positivo usando puntas de vidrio de borosilicato recubiertas de metal para introducir las muestras en el instrumento. Se realizó cromatografía en capa fina (CCF) sobre placas de aluminio de gel de sílice (Merck 60, F254), y la cromatografía ultrarrápida utilizó gel de sílice (Merck 60, 230-400 de malla ASTM). Excepto por el HOBt (NovaBiochem) y los reactivos soportados sobre sólido (Argonaut), todos los otros productos químicos y disolventes se compraron de Sigma-Aldrich y se usaron como se suministraron sin más purificación. Se prepararon disolventes anhidros mediante destilación bajo una atmósfera de nitrógeno seca en presencia de un agente secante apropiado, y se almacenaron sobre tamices moleculares de 4A o alambre de sodio. Éter de petróleo se refiere a la fracción que hierve a 40-60 °C.
Condiciones de EM/CL generales:
Procedimiento 1 (procedimiento por defecto, usado a menos que se indique lo contrario)
La HPLC (Waters Alliance 2695) se realizó usando una fase móvil de agua (A) (ácido fórmico 0,1 %) y acetonitrilo (B) (ácido fórmico 0,1 %). Gradiente: composición inicial 5 % de B durante 1,0 min, a continuación 5 % de B a 95 % de B durante 3 min. La composición se mantuvo durante 0,1 min al 95 % de B, y a continuación volvió a 5 % de B en 0,03 minutos y se mantuvo allí durante 0,87 min. El tiempo de ejecución total del gradiente es igual a 5 min.
Procedimiento 2
La HPLC (Waters Alliance 2695) se realizó usando una fase móvil de agua (A) (ácido fórmico 0,1 %) y acetonitrilo (B) (ácido fórmico 0,1 %). Gradiente: composición inicial 5 % de B durante 1,0 min, a continuación 5 % de B a 95 % de B durante un periodo de 2,5 min. La composición se mantuvo durante 0,5 min al 95 % de B, y a continuación volvió a 5 % de B en 0,1 minutos y se mantuvo allí durante 0,9 min. El tiempo de ejecución total del gradiente es igual a 5 min.
Para ambos procedimientos
Velocidad de flujo de 3,0 ml/min, 400 |jl se dividieron a través de una pieza en T de volumen muerto cero que pasa al espectrómetro de masas. Intervalo de detección de longitud de onda: 220 a 400 nm. Tipo de función: matriz de diodos (535 barridos). Columna: Phenomenex Onyx Monolithic C1850 x 4,60 mm.
Las condiciones de purificación ultrarrápida de fase inversa fueron las siguientes: El sistema de purificación ultrarrápida (Varían 971-Fp) se ejecutó utilizando una fase móvil de agua (A) y acetonitrilo (B). Gradiente: composición inicial 5 % de B sobre 20 VC (volumen de la columna), luego 5 % de B a 70 % de B en 60 VC. La composición se mantuvo durante 15 VC al 95 % de B, y luego regresó al 5 % de B en 5VC y se mantuvo a 5 % de B para 10 VC. El tiempo de ejecución total del gradiente es igual a 120 VC. Caudal de 6,0 ml/min. Intervalo de detección de longitud de onda: 254 nm. Columna: Agilent AX1372-1 SF10-5.5gC8.
HPLC preparativa: Se llevó a cabo cromatografía líquida de rendimiento ultraalto en fase inversa (UPLC) en columnas Phenomenex Gemini NX 5|j C-18 de las siguientes dimensiones: 150 x 4,6 mm para análisis y 150 x 21,20 mm para trabajos preparativos. Todos los experimentos por UPLC se realizaron con condiciones de gradiente. Los eluyentes usados fueron el disolvente A (H2O con ácido fórmico al 0,1 %) y el disolvente B (CH3CN con ácido fórmico al 0,1 %). Los caudales usados fueron 1,0 ml/min para HPLC analítica y 20,0 ml/min para preparativa. La detección se realizó a 254 y 280 nm.
Síntesis del producto intermedio 12
(a) 1',3'-bis[2-metoxi-4-(metoxicarbonil)fenoxi]propano (3)
Se añadió gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo (71,3 ml, 73,2 g, 362 mmol) durante un periodo de 60 min a una solución agitada sobre la cabeza de metil vainillato 2 (60,0 g, 329 mmol) y Ph^P (129,4 g, 494 mmol) en anhidro THF (800 ml) a 0-5 °C (hielo/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó agitar a 0-5 °C durante 1 hora adicional, después de lo cual se añadió gota a gota una solución de 1,3-propanodiol (11,4 ml, 12,0 g, 158 mmol) en THF (12 ml) durante un periodo de 20 min. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 5 días. El precipitado blanco resultante 3 se recogió por filtración al vacío, se lavó con THF y se secó en un desecador al vacío hasta peso constante. Rendimiento = 54,7 g (84% basado en 1,3-propanodiol). Pureza satisfactoria por LC/MS (3,20 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 427 ([M Na]+, 10); 1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,64 (dd, 2H, J = 1,8, 8,3 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 1,8 Hz), 6,93 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,30 (t, 4H, J = 6,1 Hz), 3,90 (s, 6H), 3,89 (s, 6H), 2,40 (p, 2H, J = 6,0 Hz).
(b) 1 ’,3'-bis[2-metoxi-4-(metoxicarbonil)-5-nitrofenoxi]propano (4)
Se añadió lentamente Cu(NO3)2,3H2O sólido (81,5 g, 337,5 mmol) a una suspensión agitada sobre la cabeza del biséster 3 (54,7 g, 135 mmol) en anhídrido acético (650 ml) a 0-5 °C (hielo/acetona). La mezcla de reacción se dejó agitar durante 1 hora a 0-5 °C y luego se dejó calentar a temperatura ambiente. En esta etapa se observó una exotermia leve (aprox. 40-50 °C), acompañada de un espesamiento de la mezcla y el desprendimiento de NO2. Se añadió anhídrido acético adicional (300 ml) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 16 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en hielo (~ 1,5 l), se agitó y se dejó que volviera a la temperatura ambiente. El precipitado amarillo resultante se recogió por filtración al vacío y se secó en un desecador para proporcionar el compuesto bis-nitro 4 deseado en forma de un sólido amarillo. Rendimiento = 66,7 g (100 %). Pureza satisfactoria por
LC/MS (3,25 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 517 ([M Na]+, 40); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 57,49 (s, 2H), 7,06 (s, 2H), 4,32 (t, 4H, J = 6,0 Hz), 3,95 (s, 6H), 3,90 (s, 6H), 2,45-2,40 (m, 2H).
(c) 1',3'-bis(4-carboxi-2-metoxi-5-nitrofenoxi) propano (5)
Una suspensión del éster metílico 4 (66,7 g, 135 mmol) en THF (700 ml) se trató con NaOH 1 N (700 ml) y la mezcla de reacción se dejó agitar vigorosamente a temperatura ambiente. Después de 4 días de agitación, la suspensión se convirtió en una solución de color oscuro que se sometió a evaporación rotatoria a presión reducida para eliminar el THF. El residuo acuoso resultante se acidificó a pH 1 con HCl concentrado y el precipitado incoloro 5 se recogió y se secó concienzudamente en un horno de vacío (50 °C). Rendimiento = 54,5 g (87 %). Pureza satisfactoria por LC/MS (2,65 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 489 ([M Na]+, 30)); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,62 (s, 2H), 7,30 (s, 2H), 4,29 (t, 4H, J = 6,0 Hz), 3,85 (s, 6H), 2,30-2,26 (m, 2H).
(d) 1,1'-[[(Propano-1,3-diil)dioxi]bis[(5-metoxi-2-nitro-1,4-fenileno)carbonil]]bis[(2S,4R)-metilo-4-hidroxipirrolidina-2-carboxilato] (6)
Se añadió cloruro de oxalilo (24,5 ml, 35,6 g, 281 mmol) a una suspensión agitada del ácido nitrobenzoico 5 (43 g, 92,3 mmol) y DMF (6 ml) en DCM anhidro (600 ml). Tras la efervescencia inicial, la suspensión de reacción se convirtió en una solución y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 horas. La conversión al cloruro de ácido se confirmó tratando una muestra de la mezcla de reacción con MeOH y el éster bis-metílico resultante se observó por LC/MS. La mayor parte del disolvente se eliminó por evaporación a presión reducida; la solución concentrada resultante se volvió a disolver en una cantidad mínima de d Cm seco y se trituró con éter dietílico. El precipitado amarillo resultante se recogió por filtración, se lavó con éter dietílico frío y se secó durante 1 hora en un horno de vacío a 40 °C. Se añadió cloruro de ácido sólido en porciones durante un periodo de 25 minutos a una suspensión agitada de clorhidrato de (2S,4R)-metil-4-hidroxipirrolidina-2-carboxilato (38,1 g, 210 mmol) y TEA (64,5 ml, g, 463 mmol) en DCM (400 ml) a -40 °C (hielo seco/C^CN). Inmediatamente, la reacción se completó a juzgar por LC/MS (2,47 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 721 ([M H]+, 100). La mezcla se diluyó con DCM (200 ml) y se lavó con HCl 1N (300 ml), NaHCO3 saturado (300 ml), salmuera (400 ml), se secó (MgSO4), se filtró y el disolvente se evaporó al vacío para dar el producto puro 6 en forma de un sólido de color naranja (66,7 g, 100 %). [a]22D = -46.1° (c = 0,47, CHCh); 1H RMN (400 MHz, CDCh) (rotámeros) 57,63 (s, 2H), 6,82 (s, 2H), 4,79-4,72 (m, 2H ), 4,49-4,28 (m, 6H), 3,96 (s, 6H), 3,79 (s, 6H), 3,46-3,38 (m, 2H), 3,02 (d, 2H, J = 11,1 Hz), 2,48-2,30 (m, 4H), 2,29-2,04 (m, 4H); 13C RMN (100 MHz, CDCla) (rotámeros) 5 172,4, 166,7, 154,6, 148,4, 137,2, 127,0, 109,7, 108,2, 69,7, 65,1, 57,4, 57,0, 56,7, 52,4, 37,8, 29,0; IR (ATR, CHCh) 3410 (br), 3010, 2953, 1741, 1622, 1577, 1519, 1455, 1334, 1274, 1211, 1177, 1072, 1050, 1008, 871 cm-1; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 721 ([M H]+, 47), 388 (80); HRMS [M H]+ teórico C31H36N4O16 m/z 721,2199, encontrado (ES+) m/z 721,2227.
(e) 1,1 '-[[(propano-1,3-diil) dioxi]bis(11aS,2R)-2-(hidroxi)-7-metoxi-1,2,3,10,11,11a hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]-benzodiazepin-5,11-diona] (7)
Método A: Se añadió una solución del nitro-éster 6 (44 g, 61,1 mmol) en MeOH (2,8 l) al níquel de Raney® recién comprado (~ 50 g de una suspensión de ~ 50 % en H2O) y gránulos antiborboteo en un frasco de fondo redondo de 3 bocas de 5 l. La mezcla se calentó a reflujo y luego se trató gota a gota con una solución de hidrato de hidrazina (21,6 ml, 22,2 g, 693 mmol) en MeOH (200 ml), momento en el que se observó una vigorosa efervescencia. Cuando se completó la adición (~45 min), se añadió cuidadosamente níquel Raney® adicional hasta que cesó la efervescencia y se descargó el color amarillo inicial de la mezcla de reacción. La mezcla se calentó a reflujo durante 5 min más, momento en el que la reacción se consideró completa por TLC (90:10 v/v CHCh/MeOH) y LC/MS (2,12 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 597 ([M H]+, 100)). La mezcla de reacción se filtró en caliente inmediatamente a través de un embudo de sinterización que contenía celite con succión al vacío. El filtrado se redujo en volumen por evaporación al vacío, momento en el que se formó un precipitado incoloro que se recogió por filtración y se secó en un desecador de vacío para proporcionar 7 (31 g, 85 %). [a]27D = 404° (c = 0,10, DMF); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 10,2 (s, 2H, NH), 7,26 (s, 2H), 6,73 (s, 2H), 5,11 (d, 2H, J = 3,98 Hz, OH), 4,32 4,27 (m, 2H), 4,19-4,07 (m, 6H), 3,78 (s, 6H), 3,62 (dd, 2H, J = 12,1, 3,60 Hz), 3,43 (dd, 2H, J = 12,0, 4,72 Hz), 2,67-2,57 (m, 2H), 2,26 (p, 2H, J = 5,90 Hz), 1,99-1,89 (m, 2H); 13C RMN (100 MHz, DMSO-d6) 5 169,1, 164,0, 149,9, 144,5, 129,8, 117,1, 111,3, 104,5, 54,8, 54,4, 53,1, 33,5, 27,5; IR (ATR, puro) 3438, 1680, 1654, 1610, 1605, 1516, 1490, 1434, 1379, 1263, 1234, 1216, 1177, 1156, 1189, 1089, 1038, 1018, 952, 870 cm'1; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 619 ([M Na]+, 10), 597 ([M H]+, 52), 445 (12), 326 (11); HRMS [M H]+teórico C29H32N4O10 m/z 597,2191, encontrado (ES+) m/z 597,2205.
Método B: Se añadió una suspensión de Pd/C al 10% (7,5 g, 10% p/p) en DMF (40 ml) a una solución del nitroéster 6 (75 g, 104 mmol) en DMF (360 ml). La suspensión se hidrogenó en un aparato de hidrogenación Parr durante 8 horas. El progreso de la reacción se controló mediante LC/MS después de que se detuviera la absorción de hidrógeno. El Pd/C sólido se eliminó por filtración y el filtrado se concentró por evaporación rotatoria a vacío (por debajo de 10 mbar) a 40 °C para proporcionar un aceite oscuro que contenía trazas de DMF y carbón residual. El residuo se digirió en EtOH (500 ml) a 40 °C en un baño de agua (baño de evaporador rotatorio) y la suspensión resultante se filtró a través de celite y se lavó con etanol (500 ml) para dar un filtrado claro. Se añadió hidrato de hidrazina (10 ml, 321 mmol) a la solución y la mezcla de reacción se calentó a reflujo. Después de 20 minutos, se
observó la formación de un precipitado blanco y se dejó continuar el reflujo durante 30 minutos más. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el precipitado se recuperó por filtración, se lavó con éter dietílico (2:1 volumen de precipitado) y se secó en un desecador de vacío para proporcionar 7 (50 g, 81 %). Datos analíticos para el método B: idénticos a los obtenidos para el método A (rotación óptica, 1H RMN, LC/MS y TLC).
(f) 1,1 '-[[(propano-1,3-diil)dioxi]bis(11aS,2R)-2-(terc-butildimetílsililoxi)-7-metoxi-1,2,3,10,11, 11a-hexahidro-5H-pirrolo [2,1-c][1,4]-benzodiazepin-5,1-diona] (8)
Se agregaron TBSCI (27,6 g, 182,9 mmol) e imidazol (29,9 g, 438,8 mmol) a una solución turbia de tetralactama 7 (21,8 g, 36,6 mmol) en DMF anhidro (400 ml) a 0 °C (hielo/acetona). La mezcla se dejó agitar bajo una atmósfera de nitrógeno durante 3 horas, después de lo cual la reacción se consideró completa según la evaluación de LC/MS (3,90 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 825 ([M H]+, 100. La mezcla de reacción se vertió en hielo (~ 1,75 l) y se dejó calentar a temperatura ambiente con agitación. El precipitado blanco resultante se recogió por filtración al vacío, se lavó con H2O, éter dietílico y se secó en el desecador de vacío para proporcionar 8 puro (30,1 g, 99 %). [a]23D = 234° (c = 0,41, CHCh); 1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,65 (s, 2H, NH), 7,44 (s, 2H), 6,54 (s, 2H), 4,50 (p, 2H, J = 5,38 Hz), 4,21-4,10 (m, 6H), 3,87 (s, 6H), 3,73-3,63 (m, 4H), 2,85-2,79 (m, 2H), 2,36-2,29 (m, 2H), 2,07-1,99 (m, 2H), 0.86 (s, 18H), 0,08 (s, 12H); 13C RMN (100 MHz, CDCla) 8 170,4, 165,7, 151,4, 146,6, 129,7, 118,9, 112,8, 105,3, 69,2, 65,4, 56,3, 55,7, 54,2, 35,2, 28,7, 25,7, 18,0, -4,82 y -4,86; IR (ATR, CHCh) 3235, 2955, 2926, 2855, 1698, 1695, 1603, 1518, 1491, 1446, 1380, 1356, 1251, 1220, 1120, 1099, 1033 cm'1; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 825 ([M H]+, 62), 721 (14), 440 (38); HRMS [M H]+teórico C41H60N4O1üSÍ2 m/z 825,3921, encontrado (ES+) m/z 825,3948.
(g) 1,1'-[[(propano-1,3-diil)dioxi]bis(11aS,2R)-2-(terc-butildimetilsililoxi)-7-metoxi-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]-benzodiazepin-5,11-diona] (9)
Se añadió gota a gota una solución de n-BuLi (68,3 ml de una solución 1,6 M en hexano, 109 mmol) a una suspensión agitada de tetralactama 8 (30,08 g, 36,4 mmol) en THF anhidro (600 ml) a -30 °C (hielo seco/etilenglicol) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó agitar a esta temperatura durante 1 hora (ahora de color naranja rojizo), momento en el que se añadió gota a gota una solución de SEMCI (19,3 ml, 18,2 g, 109 mmol) en THF anhidro (120 ml). La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La reacción se consideró completa según lo juzgado por TLC (EtOAc) y LC/MS (4,77 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 1085 ([M H]+, 100). El THF se eliminó por evaporación al vacío y el residuo resultante se disolvió en EtOAc (750 ml), se lavó con H2O (250 ml), salmuera (25ü ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar la tetralactama 9 protegida con N10-SEM cruda como un aceite (máx. 39,5 g, 100 %). El producto se llevó a cabo en la siguiente etapa sin purificación. [a]23D = 163° (c = 0,41, CHCh); 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 87,33 (s, 2H), 7,22 (s, 2H), 5,47 (d, 2H, J = 9,98 Hz), 4,68 (d, 2H, J = 9,99 Hz), 4,57 (p, 2H, J = 5,77 Hz), 4,29 4,19 (m, 6H), 3,89 (s, 6H), 3,79-3,51 (m, 8H), 2,87-2,81 (m, 2H), 2,41 (p, 2H, J = 5,81 Hz), 2,03-1,90 (m, 2H), 1,02 0,81 (m, 22H), 0,09 (s, 12H), 0,01 (s, 18H); 13C RMN (100 MHz, CDCh) 8 170,0, 165,7, 151,2, 147,5, 133,8, 121,8, 111,6, 106,9, 78,1, 69,6, 67,1, 65,5, 56,6, 56,3, 53,7, 35,6, 30,0, 25,8, 18,4, 18,1, -1,24, -4,73; IR (ATR, CHCh) 2951, 1685, 1640, 1606, 1517, 1462, 1433, 1360, 1247, 1127, 1065 cm’1; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 1113 ([M Na]+, 48), 1085 ([M H]+, 100), 1009 (5), 813 (6); HRMS [M H]+teórico C53H8aN4O12Si4 m/z 1085,5548, encontrado (ES+) m/z 1085,5542.
(h) 1,1 ’-[[(propano-1,3-diil)dioxi]bis(11aS,2R)-2-hidroxi-7-metoxi-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1,2,3,10,11,11ahexahidro-5H-pirrolo [2,1-c][1,4]-benzodiazepin-5,11-diona] (10)
Se añadió una solución de TBAF (150 ml de una solución 1,0 M en THF, 150 mmol) a una solución agitada del bissilil éter crudo 9 [84,0 g (máx. 56,8 g), 52,4 mmol] en THF (800 ml) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 hora, el análisis de la mezcla de reacción por TLC (95:5 v/v CHCh/MeOH) reveló la finalización de la reacción. El THF se eliminó por evaporación a presión reducida a temperatura ambiente y el residuo resultante se disolvió en EtOAc (500 ml) y se lavó con NH4Cl (300 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (60 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron a presión reducida para proporcionar el producto crudo. La purificación por cromatografía ultrarrápida (elución en gradiente: 100 % de CHCh a 96:4 v/v de CHCh/MeOH) dio la tetralactama 10 pura como una espuma blanca (36,0 g, 79 %). LC/MS 3,33 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 879 ([M Na]+, 100), 857 ([M H]+, 40); [a]23D = 202° (c = 0,34, CHCh); 1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,28 (s, 2H), 7,20 (s, 2H), 5,44 (d, 2H, J = 10,0 Hz), 4,72 (d, 2H, J = 10,0 Hz), 4,61-4,58 (m, 2H), 4,25 (t, 4H, J = 5,83 Hz), 4,20-4,16 (m, 2H), 3,91-3,85 (m, 8H), 3,77-3,54 (m, 6H), 3,01 (br s, 2H, OH), 2,96-2,90 (m, 2H), 2,38 (p, 2H, J = 5,77 Hz), 2,11 2,05 (m, 2H), 1,00-0,91 (m, 4H), 0,00 (s, 18H); 13C RMN (100 MHz, CDCh) 8169,5, 165,9, 151,3, 147,4, 133,7, 121,5, 111,6, 106,9, 79,4, 69,3, 67,2, 65,2, 56,5, 56,2, 54,1, 35,2, 29,1, 18,4, -1,23; IR (ATR, CHCh) 2956, 1684, 1625, 1604, 1518, 1464, 1434, 1361, 1238, 1058, 1021 cm-1; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 885 ([M 29]+, 70), 857 ([M H]+, 100), 711 (8), 448 (17); HRMS [M H]+teórico C41H6üN4O^SÍ2 m/z 857,3819, encontrado (ES+) m/z 857,3826.
(i) 1,1 '-[[(propano-1,3-diil)dioxi]bis(11aS)-7-metoxi-2-oxo-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1,2,3,10,11,11a-hexahidro-5H-pirrolo [2,1-c][1,4]-benzodiazepin-5,11-diona] (11)
Diol 10 (25.6 g, 30 mmol, 1 eq.), NaOAc (6,9 g, 84 mmol, 2,8 eq.) y TEMPO (188 mg, 1,2 mmol, 0,04 eq.) se disolvieron
en DCM (326 ml) bajo Ar. Esto se enfrió a -8 °C (temperatura interna) y se añadió TCCA (9,7 g, 42 mmol, 1,4 eq.) en porciones durante 15 minutos. TLC (EtOAc) y LC/MS [3,60 min. (ES+) m/z (intensidad relativa) 854,21 ([M H]+, 40), (ES-) m/z (intensidad relativa) 887,07 ([M - H Cl]-, 10)] después de 30 minutos indicó que la reacción fue completa. Se añadió DCM frío (200 ml) y la mezcla se filtró a través de un lecho de celite antes de lavarse con una solución de hidrogenocarbonato de sodio saturado/tiosulfato de sodio (1:1 v/v; 200 ml x 2). La capa orgánica se secó con MgSO4, se filtró y el disolvente se eliminó al vacío para dar una esponja amarilla/naranja (25,4 g, 99 %). LC/MS [3,60 min. (ES+) m/z (intensidad relativa) 854,21 ([M H]+, 40); [a]20D = 291° (c = 0,26, CHCh); 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 7,32 (s, 2H), 7,25 (s, 2H), 5,50 (d, 2H, J = 10,1 Hz), 4,75 (d, 2H, J = 10,1 Hz), 4,60 (dd , 2H, J = 9,85, 3,07 Hz), 4,31 4,18 (m, 6H), 3,89-3,84 (m, 8H), 3,78-3,62 (m, 4H), 3,55 (dd, 2H, J = 19,2, 2,85 Hz), 2,76 (dd, 2H, J = 19,2, 9,90 Hz), 2.42 (p, 2H, J = 5,77 Hz), 0,98-0,91 (m, 4H), 0,00 (s, 18H); 13C RMN (100 MHz, CDCla) 8206,8, 168,8, 165,9, 151,8, 148,0, 133,9, 120,9, 111,6, 107,2, 78,2, 67,3, 65,6, 56,3, 54,9, 52,4, 37,4, 29,0, 18,4, -1,24; IR (ATR, CHCh) 2957, 1763, 1685, 1644, 1606, 1516, 1457, 1434, 1360, 1247, 1209, 1098, 1066, 1023 cm'1; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 881 ([M 29]+, 38), 853 ([M H]+, 100), 707 (8), 542 (12); HRMS [M H]+ teórico C41H56N4O12Si2 m/z 853,3506, encontrado (ES+) m/z 853,3502.
(j) 1,1'-[[(propano-1,3-diil)dioxi]bis(11aS)-7-metoxi-2-[[(trifluorometil)sulfonil]oxi]-10-((2-(trimetilsililo)etoxi)metil)-1,10,11,11a-tetrahidro-5H-pirrolo [2,1-c][1,4]-benzodiazepin-5,11-diona] (12)
Se inyectó 2,6 lutidina anhidra (5,15 ml, 4,74 g, 44,2 mmol) en una porción a una solución vigorosamente agitada de bis-cetona 11 (6,08 g, 7,1 mmol) en DCM seco (180 ml) a -45 °C (hielo seco/acetonitrilo) bajo una atmósfera de nitrógeno. El anhídrido tríflico anhidro, tomado de una ampolla recién abierta (7,2 ml, 12,08 g, 42,8 mmol), se inyectó rápidamente gota a gota, mientras se mantenía la temperatura a -40 °C o menos. La mezcla de reacción se dejó agitar a -45 °C durante 1 hora, momento en el que la TLC (50/50 v/v n-hexano/EtOAc) reveló el consumo completo de material de partida. La mezcla de reacción fría se diluyó inmediatamente con DCM (200 ml) y, con agitación vigorosa, se lavó con agua (1 x 100 ml), solución de ácido cítrico al 5 % (1 x 200 ml), NaHCO3 saturado (200 ml) y salmuera (100 ml) y se secó (MgSO4). La filtración y evaporación del disolvente a presión reducida proporcionaron el producto crudo que se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (elución en gradiente: 90:10 v/v n-hexano/EtOAc a 70:30 v/v n-hexano/EtOAc) para proporcionar bis-enol triflato 12 como una espuma amarilla (5,5 g, 70 %). LC/MS 4,32 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 1139 ([M Na]+, 20); [a]24D = 271° (c = 0,18, CHCh); 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 7,33 (s, 2H), 7,26 (s, 2H), 7,14 (t, 2H, J = 1,97 Hz), 5,51 (d, 2H, J = 10,1 Hz), 4,76 (d, 2H, J = 10,1 Hz), 4,62 (dd, 2H, J = 11,0, 3,69 Hz), 4,32-4,23 (m, 4H), 3,94-3,90 (m, 8H), 3,81-3,64 (m, 4H), 3,16 (ddd, 2H, J = 16,3, 11,0, 2,36 Hz), 2.43 (p, 2H, J = 5,85 Hz), 1,23-0,92 (m, 4H), 0,02 (s, 18H); 13C RMN (100 MHz, CDCh) 8 167,1, 162,7, 151,9, 148,0, 138,4, 133,6, 120,2, 118,8, 111,9, 107,4, 78,6, 67,5, 65,6, 56,7, 56,3, 30,8, 29,0, 18,4, -1,25; IR (ATR, CHCh) 2958, 1690, 1646, 1605, 1517, 1456, 1428, 1360, 1327, 1207, 1136, 1096, 1060, 1022, 938, 913 cm-1; MS (ES+) m/z (intensidad relativa) 1144 ([M 28]+, 100), 1117 ([M H]+, 48), 1041 (40), 578 (8); HRMS [M H]+ teórico C43H54N4O16ShS2F6 m/z 1117,2491, encontrado (ES+) m/z 1117,2465.
Ejemplo 1
(a) trifluorometanosulfonato de (S)-8-(3-(((S)-2-(4-aminofenil)-7-metoxi-5,11-dioxo-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5,11-dioxo-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-ilo (13)
Se añadió Pd(PPh3)4 (116,9 mg, 0,101 mmol) a una mezcla en agitación del triflato bis-enol 12 (5,65 g, 5,06 mmol), pinacol éster del ácido 4-aminofenilborónico (1 g, 4,56 mmol), Na2CO3 (2,46 g, 23,2 mmol), MeOH (37 ml), tolueno (74 ml) y agua (37 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a 30 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 24 horas, después de lo cual, todo el éster borónico se había consumido. Después, la mezcla de reacción se evaporó a sequedad antes de que el residuo se recogiera en EtOAc (150 ml) y se lavó con H2O (2 x 100 ml), salmuera (150 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para proporcionar el producto en bruto. La purificación por cromatografía ultrarrápida (elución de gradiente: 80:20 v/v Hexano/EtOAc a 60:40 v/v Hexano/EtOAc) proporcionó el producto 13 en forma de una espuma de color amarillenta (2,4 g, 45 %). LC/MS 4,02 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 1060,21 ([M+ H]+ , 100); RMN 1H: (CDCI3, 400 Hz) 87,40 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,27 (s a, 3H), 7,24 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7,15 (t, 1H, J = 2,0 Hz), 6,66 (d, 2H, J= 8,5 Hz), 5,52 (d, 2H, J= 10,0 Hz), 4,77 (d, 1H, J= 10,0 Hz), 4,76 (d, 1H, J = 10,0 Hz), 4,62 ( dd, 1H, J = 3,7, 11,0 Hz), 4,58 (dd, 1H, J = 3,4, 10,6 Hz), 4,29 (t, 4H, J = 5,6 Hz), 4,00-3,85 (m, 8H), 3,80 -3,60 (m, 4H), 3,16 (ddd, 1H, J = 2,4, 11,0, 16,3 Hz), 3,11 (ddd, 1H, J = 2,2, 10,5, 16,1 Hz), 2,43 (p, 2H, J=5,9 Hz), 1,1 -0,9 (m, 4H), 0,2 (s, 18H). RMN 13C: (CDCI3, 100 Hz) 8169,8, 168,3, 164,0, 162,7, 153,3, 152,6, 149,28, 149,0, 147,6, 139,6, 134,8, 134,5, 127,9, 127,5, 125,1, 123,21, 121,5, 120,5, 120,1, 116,4, 113,2, 108,7, 79,8, 79,6, 68,7, 68,5, 67,0, 66,8, 58,8, 58,0, 57,6, 32,8, 32,0, 30,3, 19,7, 0,25.
(b) (S)-2-(4-Aminofenil)-8-(3-(((S)-2-ddopmpil-7-metoxi-5,11-dioxo-10-((2-(trímetilsilil)etoxi)metil)-5,10,11,11atetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-5,11(10H, 11aH)-diona (14)
Se disolvieron trifenilarsina (0,24 g, 0,8 mmol), óxido de plata (I) (1,02 g, 4,4 mmol), ácido ciclopropilborónico (0,47 g, 5.5 mmol) y el material de partida 13 (1,15 g, 1,1 mmol) en dioxano (30 ml) en una atmósfera de argón. Se trituró fosfato potásico tribásico (2,8 g, 13,2 mmol) con una maja y un mortero y se añadió rápidamente a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se evacuó y se lavó abundantemente con argón, 3 veces y se calentó a 71 °C. Se añadió bis(benzonitrilcloruro) de paladio (II) (84 mg, 0,22 mmol) y el recipiente de reacción se evacuó y se lavó abundantemente con argón 3 veces. Después de 10 minutos se tomó una pequeña muestra para análisis por TLC (80:20 v/v de acetato de etilo/hexano) y LC/MS. Después de 30 minutos, la reacción se había completado (el análisis LC/MS indicó el consumo completo del material de partida) y la reacción se filtró a través de celite y el lecho de filtro se lavó con acetato de etilo (400 ml). El filtrado se lavó con agua (2 x 200 ml) y salmuera (2 x 200 ml). La capa orgánica se secó con MgSO4, se filtró y el disolvente se retire al vacío. La purificación por cromatografía en columna sobre gel de sílice (30:70 v/v Hexano/Acetato de etilo) proporcionó el producto 14 en forma de un sólido de color naranja/amarillo (0,66 g, 63 %). Método 1, LC/MS (3,85 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 952,17 ([M H]+, 100). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 87,36 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,30 (s, 1H), 7,25-7,19 (m, 4H), 6,68 (s, 1H), 6,62 (d, 2H, J= 8,4 Hz), 5,49 (dd, 2H,
J= 5,6, 10,0 Hz), 4,73 (ap. t, 2H, J= 10,8 Hz), 4,54 (dd, 1H, J= 3,2, 10,4 Hz), 4,40 (dd, 1H, J = 3,2, 10,4 Hz), 4,29 -4,23 (m, 4H), 3,91 -3,85 (m, 7H), 3,80 -3,71 (m, 2H), 3,70 -3,61 (m, 2H), 3,38-3,32 (m, 1H), 3,12-3,01 (m, 1H), 2,50 -2,69 (m, 1H),2,40 (q, 2H, J = 5,6 Hz), 1,50- 1,43 (m, 1H), 0,99 - 0,71 (m, 6H), 0,54-0,59 (m, 2H), 0,00 (s, 18H) ppm.
(c) (S)-2-(4-Aminofenyi)-8-(3-(((S)-2-ddopropyi-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-1 H-benzo[e]pirrolo[1,2- a][1,4]diazepin-5( 11aH)-ona (15)
Se disolvió SEM dilactama 14 (0,66 g, 0,69 mmol) en THF (23 ml) y se enfrió a -78 °C en una atmósfera de argón. se añadió gota a gota una solución de Super-Hidride® (1,7 ml, 1 M en THF) durante 5 minutos mientras que se monitorizaba la temperatura. Después de 20 minutos se tomó una pequeña muestra y se lavó con agua para el análisis LC/MS. Se añadió agua (50 ml) y se retiró el baño frío. La capa orgánica se extrajo y se lavó con salmuera (60 ml). Las capas acuosas combinadas se lavaron con CH2Ch/MeOH (90/10 v/v) (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO4, se filtraron y el disolvente se retire al vacío. El producto en bruto se disolvió en MeOH (48 ml), CH2CI2 (18 ml) y agua (6 ml) y se añadió suficiente gel de sílice para proporcionar una suspensión espesa. Después de 5 días de agitación, la suspensión se filtró a través de un embudo sinterizado y se lavó con CH2Ch/MeOH (9:1) (~ 200 ml) hasta que el producto dejó de eluirse. La capa orgánica se lavó con salmuera (2 x 70 ml), se secó con MgSO4, se filtró y el disolvente se retiró al vacío. La purificación por cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCh al 100 % a 96/4 v/v CHCh/MeOH) proporcionó el producto 15 en forma de un sólido de color amarillo (302 mg, 66 %). Método 1, LC/MS (2,42 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 660,74 ([M H]+, 30). RMN 1H (400 Hz, CDCh) 87,86 (d, 1H, J= 3,6 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 7,58 - 7,44 (m, 3H), 7,34 - 7,20 (m, 3H), 6,88 - 6,66 (m, 4H), 4,35 - 4,15 (m, 6H), 3,95 - 3,75 (m, 7H), 3,39 - 3,22 (m, 1H), 3,14 - 3,04 (m, 1H), 2,93 - 2,85 (m, 1H), 2,46 - 2,36 (m, 2H), 1,49 -1,41 (m, 1H), 0,80 - 0,72 (m, 2H), 0,58 - 0,51 (ap. s, 2H) ppm.
(d) ((2S)-1-(((2S)-1-((4-(8-(3-((2-Ciciopropil-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de alilo (16)
En un matraz de fondo redondo desgasificado lleno de argón, se disolvieron HO-Ala-Val-alloc (149,6 mg, 0,549 mmol) y EEDQ (135,8 mg, 0,549 mmol) en una mezcla 9:1 de CH2O2 seco/MeOH (5 ml). El matraz se envolvió en papel de aluminio y la mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1 hora antes de añadir el material de partida 15 (302 mg, 0,457 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar durante unas 40 horas adicionales a temperatura ambiente antes de que se retiraran los volátiles mediante evaporación rotatoria a presión reducida (la reacción se siguió de LC/MS, TR material de partida 2,32 min, (ES+ 660,29 ([/W+H]+ ,100)). El producto en bruto se purificó directamente por cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3 al 100 % a 90/10 v/v CHCh/MeOH) para proporcionar el producto puro (16) con un rendimiento del 42 % (174 mg). Método 2 LC/MS (2,70 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 914,73 ([M+ H]+, 60), 660,43 (60), 184,31 (100)).
(e) (2S)-2-amino-N-((2S)-1-((4-(8-(3-((2-ciclopropil-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida (17)
El material de partida 16 (170 mg, 0,185 mmol) se disolvió en CH2CI2 seco (5 ml) en un matraz de fondo redondo lleno con argón, antes de añadirse pirrolidina (41 pl, 0,21 mmol). El matraz se purgó/rellenó tres veces con argón antes de añadirse Pd(PPh3)4 (14 mg, 0,084 mmol) y la operación de lavado se repitió. Después de 1 hora, se observó el consumo completo de material de partida (la reacción fue seguida por LC/MS) y se añadió Et2O (50 ml) a la mezcla de reacción que se dejó agitar hasta que todo el producto se separó de la solución. El sólido se filtró a través de un embudo sinterizado y se lavó dos veces con Et2O (2 x 25 ml). Se reemplazó el matraz colector y se disolvió el sólido aislado en CHCh (100 ml o hasta que todo el producto pasó por el embudo sinterizado). Después, los volátiles se retiraron por evaporación rotatoria a presión reducida para producir el producto en bruto 17, el cual se usó directamente en la siguiente etapa (168 mg). LC/MS Método 2 (2,70 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 830,27 ([M+ H]+, 50), 660,13 (80), 171,15 (100)).
(f) N-((R)-1-(((S)-1-((4-((S)-8-(3-(((S)-2-ddopropil-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)-1-(3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-3,6,9,12,15,18,21,24-octaoxaheptacosan-27-amida (18)
El material de partida 17 (154 mg, 0,185 mmol) y EDCI.HCI (110 mg, 0,185 mmol) se solubilizaron en CH2CI2 seco (5 ml) en un matraz de fondo redondo purgado y llenado con argón. La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1 hora antes de añadir PEGs-maleimida (35,6 mg, 0,185 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante unas 16 horas adicionales (o hasta que la reacción se completó, se monitorizó por LC/MS). La solución de reacción se diluyó con CH2CI2 (50 ml) y los orgánicos se lavaron con H2O (50 ml) y salmuera (50 ml) antes de secarse con MgSO4, se filtró y el disolvente se retiró por evaporación rotatoria a presión reducida para proporcionar el producto en bruto. La purificación sobre cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCh al 100 % a 85/15 v/v CHCh/MeOH) dio el producto deseado (135mg), sin embargo, se observaron trazas restantes de PEG-maleimida sin reaccionar (por LC/MS, 2,21 min, Método 2). La cromatografía en gel de sílice de fase inversa automatizada (H2O/CH3CN) (véase la
información general para conocer las condiciones) retiró con éxito la impureza proporcionando un producto final puro (18, 37 mg de producto puro a partir de 110 mg, 33%). Rendimiento global = 17 %. Método 2 LC/MS (2,58 min (Es ) m/z (intensidad relativa) 1404,03 ([M+ H]+, 20), 702,63 (100)). RMN 1H (400 Hz, CDCla) 87,91 (t, J= 3,5 Hz, 1H), 7,80 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 7,75 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,54 - 7,50 (m, 2H), 7,45 (s, 1H), 7,39 - 7,31 (m, 2H), 6,87 (d, J = 10,5 Hz, 2H), 6,76 (s, 1H), 6,72-6,68 (m, 2H), 4,74-4,62 (m, 1H), 4,45-4,17 (m, 7H), 3,95 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,67 -3,58 (m, 34H), 3,54 (m, 2H), 3,42 (dd, J = 10,2, 5,2 Hz, 2H), 3,16-3,07 (m, 1H), 2,92 (dd, J= 16,1,4,1 Hz, 1H), 2,62-2,49 (m, 4H), 2,48-2,39 (m, 2H), 2,37-2,25 (m, 1H), 1,92 (s, 1H), 1,52-1,44 (m, 3H), 1,10-0,93 (m, 6H), 0,79 (dd, J = 9,2, 5,3 Hz, 2H), 0,57 (dd, J = 9,2, 5,3 Hz, 2H), no se observaron NH.
Ejemplo 2
(a) ácido (R)-2-((R)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido) propanoico (20b)
HO-Ala-Val-H 20a (350 mg, 1.86 mmol) y Na2CO3 (493 mg, 4,65 mmol) se disolvieron en H2O destilada (15 ml) y la mezcla se enfrió a 0 °C antes de que se añadiera dioxano (15 ml) (se produjo precipitación parcial de la sal de
aminoácido). Se añadió gota a gota una solución de Fmoc-Cl (504 mg, 1,95 mmol) en dioxano (15 ml) con agitación vigorosa durante 10 minutos. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 2 horas antes de retirar el baño de hielo y la agitación se mantuvo durante 16 horas. El disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria a presión reducida y el residuo se disolvió en agua (150 ml). El pH se ajustó de 9 a 2 con HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo posteriormente con EtOAc (3 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron con MgSO4, se filtraron y los compuestos volátiles se eliminaron mediante evaporación rotatoria a presión reducida para proporcionar HO-Ala-Val-Fmoc puro 20b (746 mg, 97 % de rendimiento). LC/MS 2,85 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 410,60; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,79 (d, J = 7,77 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 7,77 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 6.30 (bs, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,71-7,56 (m, 1H), 4,54-4,36 (m, 2H), 4,08-3,91 (m, 1H), 2,21-2,07 (m, 1H), 1,50 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,06-0,90 (m, 6H).
(b) (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-3-metil-1-oxo-1-(((S)-1-oxo-1-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)amino)propan-2-il)amino)butan-2-il)carbamato (20)
Se añadió éster pinacol del ácido 4-aminofenilborónico (146,9 mg, 0,67 mmol) a una solución de HO-Ala-Val-Fmoc 20b (330 mg, 0,8 mmol), DCC (166 mg, 0,8 mmol) y d Ma P (5 mg), cat.) en Dc M seco (8 ml) previamente agitado durante 30 minutos a temperatura ambiente en un matraz lavado con argón. La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción fue seguida por LCMS y TLC. La mezcla de reacción se diluyó con CH2Cl2 y los extractos orgánicos se lavaron con H2O y salmuera antes de secarse con MgSO4, se filtraron y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida. El producto crudo se cargó en seco en una columna de cromatografía de gel de sílice (hexano/EtOAc, 6: 4) y el producto puro 20 se aisló como un sólido blanco con un rendimiento del 88 % (360 mg).
(c) trifluorometanosulfonato de 8-(3-((2-(4-((S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)fenil)-7-metoxi-5,11-dioxo-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5,11-dioxo-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-5,10,11,11atetrahidro-1 H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-ilo (21)
Se disolvieron bis-triflato 12 (2,03 g, 1,81 mmol), pinacol éster borónico (1 g, 1,63 mmol) y Na2CO3 (881 mg, 8,31 mmol) en una mezcla de tolueno/MeOH/H2O, 2:1:1 (40 ml). El matraz de reacción se purgó y se llenó con argón tres veces antes de aadir tetraguis(trifenilfosfina)paladio (0) (41 mg, 0,035 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 30 °C durante una noche. Los disolventes se retiraron a presión reducida y el residuo se recogió en H2O (100 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron con MgSO4, se filtraron y los volátiles se retiraron por evaporación rotatoria a presión reducida. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc, 8:2 a 25:75) para proporcionar 21 puro con un rendimiento del 33 % (885 mg). LC/MS 3,85 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 1452,90 ; RMN 1H (400 Hz, CDCla) 5 7,78-7,16 (m, 17H), 7,13 (s, 1H), 6,51 -6,24 (m, 1H), 5,51 (dd, J = 10,0, 5,1 Hz, 2H), 5,36-5,11 (m, 1H), 4,74 (dd, J= 10,1, 4,4 Hz, 2H), 4,70-4,53 (m, 2H), 4,47 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,37 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 4,27 (m, 4H), 4,20-4,14 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,77 (ddd, J = 16,7, 9,0, 6,4 Hz, 3H), 3,71 - 3,61 (m, 2H), 3,24 - 2,91 (m, 3H), 2,55-2,33 (m,2H), 2,22-2,07 (m, 1H), 1,52-1,37 (m, 3H), 1,04-0,86(m, 10H), 0,00 (s, 18H).
(d) (9H-fluoren-9-il)metil((2S)-1-(((2S)-1-((4-(8-(3-((2-ddopropil-7-metoxi-5,11-dioxo-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-5,10,11,11a-tetra hidro-1 H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5,11-dioxo-10-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-il) fenil) amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato (22)
Se añadió trifenilarsina (42 mg, 0,137 mmol) a una mezcla de PBD-triflato 21 (250 mg, 0,172 mmol), ácido ciclopropilborónico (73,9 mg, 0,86 mmol), óxido de plata (159 mg, 0,688 mmol) y fosfasto potásico tribásico (438 mg, 2,06 mmol) en dioxano seco (10 ml) en una atmósfera de argón. La reacción se lavó abundantemente con argón 3 veces y se añadió cloruro de bis(benzonitrilo)paladio (ll) (13,2 mg, 0,034 mmol). La reacción se lavó abundantemente con argón 3 veces más antes de calentarse a 75 °C y se agitó durante 10 minutos. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite, el cual posteriormente se aclaró con acetato de etilo. El disolvente se retiró por evaporación rotatoria a presión reducida. El residuo resultante se sometió a cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice; metanol/cloroformo al 1%). Las fracciones puras se recogieron y combinaron, y el exceso de eluyente se retiró por evaporación rotatoria a presión reducida para producir el producto deseado 22 (132 mg, rendimiento del 50 %). LC/MS 3,83 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 1345,91 ; RMN 1H (400 Hz, CDCh) 57,88-7,14 (m, 17H), 6,69 (s, 1H), 6,45 -6,25 (m, 1H), 5,57-5,41 (m,2H),5,34-5,14 (m, 1H), 4,78-4,67 (m, 2H), 4,62-4,55 (m, 1H), 4,50-4,45 (m, 2H), 4,51 -4,44 (m, 1H), 4,31 -4,21 (m, 4H), 4,16 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 3,82-3,71 (m, 2H), 3,66 (m, 3H), 3,40-3,28 (m, 1H), 3,07 (m, 1H), 2,70-2,57 (m, 1H), 2,47-2,36 (m, 2H), 2,15 (m, 1H), 1,51 -1,40 (m, 3H), 1,03-0,87 (m, 11H), 0,77-0,71 (m, 2H), 0,60-0,54 (m, 2H), 0,00 (t, J= 3,0 Hz, 18H).
(e) (9H-fluoren-9-il)metil((2S)-1-(((2S)-1-((4-(8-(3-((2-ddopropil-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato (23)
Se añadió gota a gota una solución de Super-Hydride® (0,5 ml, 1 M en THF) a una solución de SEM-dilactama 22
(265 mg, 0,19 mmol) en THF (10 ml) a -78 °C bajo una atmósfera de argón. La adición se completó durante 5 minutos con el fin de mantener constante la temperatura interna de la mezcla de reacción. Después de 20 minutos, se inactivó una alícuota con agua para el análisis por LC/MS, que reveló que la reacción se había completado. Se añadió agua (20 ml) a la mezcla de reacción y se retiró el baño frío. La capa orgánica se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron con MgSO4, se filtraron y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida. El producto crudo se disolvió en MeOH (12 ml), CH2Ch (6 ml), agua (2 ml) y suficiente gel de sílice para formar una suspensión por agitación espesa. Después de 5 días, la suspensión se filtró a través de un embudo sinterizado y se lavó con CH2Ch/MeOH (9:1) (200 ml) hasta que se completó la elución del producto. La capa orgánica se lavó con salmuera (2 x 70 ml), se secó con MgSO4, se filtró y el disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria a presión reducida. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (100 % de CHCl3 a 96 % de CHCh/4 % de MeOH) proporcionó el producto 23 como un sólido amarillo (162 mg, 63 %). LC / MS 3,02 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 1052,37.
(f) (2S)-2-amino-N-((2S)-1-((4-(8-(3-((2-ddopmpil-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidm-1H-benzo[e]pirmlo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida (17)
Se añadió piridina en exceso (0,2 ml, 2 mmol) a una solución de SEM-dilactama 23 (76 mg, 0,073 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 20 min, momento en el que la reacción se había completado (como se monitorizó por LC/MS). La mezcla de reacción se diluyó con CH2Ch (75 ml) y la fase orgánica se lavó con H2O (3 x 75 ml) hasta la completa retirada de la piperidina. La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y el exceso de disolvente se retiró mediante evaporación rotatoria a presión reducida para producir el producto en bruto 17, el cual se usó como tal en la siguiente etapa. LC/MS 2,32 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 830,00.
(g) N-((2S)-1-(((2S)-1-((4-(8-(3-((2-ddopmpil-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidm-1H-benzo[e]pirmlo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)-1-(3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)- 3,6,9,12,15,18,21,24-octaoxaheptacosan-27-amida (18)
Se añadió clorhidrato de EDCI (14 mg, 0,0732 mmol) a una suspensiónde Maleimida-PEGs-ácido (43,4 mg, 0,0732 mmol) en CH2CI2 seco (5 ml) en atmósfera de argón. La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente antes de añadirse PBD 17 (60,7 mg, 0,0732 mmol). Se mantuvo la agitación hasta que la reacción se completó (normalmente 5 horas). La reacción se diluyó con CH2Cl2 y la fase orgánica se lavó con H2O y salmuera antes de secarse sobre MgSO4, se filtró y el disolvente en exceso se retiró por evaporación rotatoria a presión reducida por evaporación rotatoria a presión reducida. El producto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice cuidadosamente (elución lenta comenzando con CHCh al 100 % hasta 9:1 CHCh/MeOH) seguido de cromatografía de fase inversa para retirar la maleimida-PEG-ácido sin reaccionar. El producto 18 se aisló en un 17,6% (21,8 mg). LC/MS 2,57 min (ES+) m/z (intensidad relativa) 1405,30 ; RMN 1H (400 Hz, CDCh) 57,91 (t, J= 3,5 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,54 - 7,50 (m, 2H), 7,45 (s, 1H), 7,39 - 7,31 (m, 2H), 6,87 (d, J = 10,5 Hz, 2H), 6,76 (s, 1H), 6,72 -6,68 (m, 2H), 4,74 -4,62 (m, 1H), 4,45-4,17 (m, 7H), 3,95 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,67 3,58 (m, 34H), 3,54 (m, 2H), 3,42 (dd, J= 10,2, 5,2 Hz, 2H), 3,16-3,07 (m, 1H), 2,92 (dd, J= 16,1, 4,1 Hz, 1H), 2,62 2,49 (m, 4H), 2,48-2,39 (m, 2H), 2,37-2,25 (m, 1H), 1,92 (s, 1H), 1,52-1,44 (m, 3H), 1,10-0,93 (m, 6H), 0,79 (dd, J= 9,2, 5,3 Hz, 2H), 0,57 (dd, J= 9,2, 5,3 Hz, 2H), no se observaron NH.
Métodos experimentales generales para el Ejemplo 3
El progreso de la reacción se controló mediante cromatografía en capa fina (TLC) usando gel de sílice Merck Kieselgel 60 F254, con indicador fluorescente sobre placas de aluminio. La visualización de TLC se logró con luz ultravioleta o vapor de yodo a menos que se indique lo contrario. La cromatografía ultrarrápida se realizó usando gel de sílice Merck Kieselgel 60 F254. Los disolventes de extracción y cromatografía se compraron y usaron sin purificación adicional en Fisher Scientific, Reino Unido. Todos los productos químicos se compraron en Aldrich, Lancaster o BDH.
Los espectros de RMN 1H y 13C se obtuvieron en un espectrómetro Bruker Avance 400. Las constantes de acoplamiento se expresan en hercios (Hz). Los desplazamientos químicos se registran en partes por millón (ppm) campo abajo del tetrametilsilano. Las multiplicidades de espín se describen como s (singlete), sa (singlete ancho), d (doblete), t (triplete), c (cuadruplete), p (pentuplete) y m (multiplete). Los espectros de IR se registraron en un espectrofotómetro Perkin-Elmer FT / IR paragon 1000 mediante la aplicación de la muestra en una solución de cloroformo usando el sistema ATR "golden gate". Las rotaciones ópticas se midieron a temperatura ambiente usando un polarímetro Bellingham and Stanley ADP 220. La espectrometría de masas se realizó en un ThermoQuest Navigator de Thermo Electron, los espectros de electrospray (ES) se obtuvieron a 20 a 30 V. Se realizaron mediciones de masa precisas utilizando el tándem global Micromass Q-TOF. Todas las muestras se analizaron en modo de ionización por electropulverización utilizando acetonitrilo al 50% en agua y ácido fórmico al 0,1% como disolvente. Las muestras se ejecutaron en modo W, lo que proporciona una resolución típica de 19000 a FWHH. El instrumento se calibró con [Glu] -Fibrinopéptido B inmediatamente antes de la medición.
LCMS
LC/MS (Shimazu LCMS-2020) usando una fase móvil de agua (A) (ácido fórmico al 0,1 %) y acetonitrilo (B) (ácido fórmico al 0,1 %).
Gradiente: la composición inicial B al 5 % se mantuvo durante 0,25 min, después se incrementó de B al 5 % a B al 100 % durante un período de 2 min. La composición se mantuvo durante 0,50 min a B al 100 %, después se volvió a B al 5 % en 0,05 minutos y se mantuvo allí durante 0,05 min. El tiempo total de ejecución del gradiente es igual a 3 min. Caudal flujo 0,8 ml/min. Intervalo de detección de longitud de onda: 190 a 800 nm. Temperatura del horno: 50 °C. Columna: Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18 1,7 mm 2,1x50 mm.
HPLC preparativa
Las condiciones para la HPLC preparativa fueron las siguientes: la HPLC (Shimadzu UFLC) se realizó usando una fase móvil de agua (ácido fórmico al 0,1 %) A y acetonitrdilo (ácido fórmico al 0,1 %) B. Intervalo de detección de longitud de onda: 254 nm.
Columna: Fenomenex Gemini 5|j C18 150x21-20 mm.
Gradiente:
B
t=0 13 %
t=15,00 95 %
t=17,00 95 %
t=20,00 13 %
El tiempo total de ejecución del gradiente es de 20 min; caudal 20,00 ml/min.
Ejemplo 3
(a)________ trifluorometanosulfonato________ de________(S)-5-(((terc-butildimetilsilil)oxv)metil)-1-(5-metoxi-2-nitro-4-((tr¡¡soprop¡ls¡l¡l)ox¡)benzo¡l)-4,5-d¡h¡dro-1H-p¡rrol-3-¡lo (37)
Se inyectó 2,6-lutidina anhidra (16,06 ml, 0,137 mol) en una porción a una solución vigorósamente agitada de cetona 36 (20 g, 0,034 mol) en CH2CI2 seco (350 ml) a -45 °C (hielo seco/acetonitrilo) en una atmósfera de argón. Se inyectó rápidamente anhídrido tríflico anhidro, extraído de una botella recién abierta (17,37 ml, 0,1 mol), manteniendo la temperatura a -40 °C o menos. La mezcla de reacción se dejó agitar a -45 °C durante 1 hora, momento en el cual la TLC (Hexano/EtOAc; 95/5) reveló un consumo completo de material de partida. La mezcla de reacción fría se diluyó inmediatamente con CH2CI2 (400 ml) y, con agitación vigorosa, se lavó con agua helada (1 x 200 ml), solución helada de ácido cítrico al 5% (1 x 300 ml), NaHCO3 saturado (300 ml), salmuera (200 ml). Los orgánicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc; 100 % a 90:10) para proporcionar enol-triflato 37 en forma de una espuma de color amarillo (22,06 g, 89 %). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 87,72 (s, 1H),7,26 (s, 1H),6,75(s, 1H), 60,6 (m a, 1H), 5,75 (d, J= 5,7 Hz, 0,5H), 4,78 (m, 1H), 4,59 (d, J= 8,2 Hz, 0,5H), 3,92 (s, 3H), 3,18 (dd, J= 15,2, 3,2 Hz, 4H), 2,99 (dd, J= 15,7, 3,2 Hz, 4H), 1,36-1,22 (m, 3H), 1,11 (d, J= 7,3 Hz, 18H), 0,92 (s, 9H), 0,12 (s, 6H) ; ES+= 2,39 min, m/z 1447,05 [2M Na]+.
(b) (11S)-8-(3-bromopropox¡)-11-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)px¡)-2-c¡clcpop¡l-7-metox¡-5-oxo-11,11a-d¡h¡dro-1H-benzo[e1p¡rrolo[1,2-a1[1.41d¡azep¡n-10(5H)-carbox¡lato de terc-butilo (45)
(i) (S)-(2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-ddopmpil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-il)(5-metoxi-2-nitm-4-((triisopropilsilil)oxi)fenil)metanona (38)
Se disolvieron trifenilarsina (0,343 g, 1,12 mmol), óxido de plata (I) (1,3 g, 5,6 mmol), ácido ciclopropilborónico (0,6 g, 7,01 mmol) y triflato 37 (1 g, 1,4 mmol) en dioxano (20 ml) en una atmósfera de argón. Se trituró fosfato potásico tribásico (3,6 g, 16,8 mmol) con una maja y un mortero y se añadió rápidamente a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se evacuó y se lavó abundantemente con argón tres veces y se calentó a 71 °C. Se añadió cloruro de bis(benzonitrilo)paladio (ll) (107 mg, 0,28 mmol) y el recipiente de reacción se evacuó y se lavó abundantemente con argón tres veces. Después de 10 minutos, se tomó una pequeña muestra para análisis por TLC (Hexano/EtOAc; 80:20) revelando que la reacción estaba completa. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y el lecho del filtro se lavó con EtOAc (200 ml). El filtrado se lavó con agua (200 ml) y salmuera (200 ml). La capa orgánica se secó con MgSO4, se filtró y el disolvente se retiró al vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc; 100 % a 80:20) proporcionó el producto 38 en forma de un sólido de color amarillo. (0,663 g, 78 %). RMN 1H (400 Hz, CDCla) 87,70 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 4,64 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,70 (s, 2H), 2,64 (dd, J= 16,2, 2,42 Hz, 1H), 2,42 (dd, J = 16,2, 2,4 Hz, 1H), 1,35-1,22 (m, 3H), 1,19 (m, 1H), 1,10 (d, J= 7,3 Hz, 18H), 0,91 (s, 9H), 0,61 (m, 2H), 0,40 (dd, J= 7,2, 3,4 Hz, 2H), 0,10 (d, J= 1,9 Hz, 6H).) ; ES+ = 2,39 min, m/z 605,30 [M H]+
(ii) (S)-(2-amino-5-metoxi-4-((tríisopropilsilil)oxi)fenil)(2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-ddopropil-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-il)metanona (39)
En un matraz seco de fondo redondo de dos bocas previamente lavado de forma abundante con argón y equipado con un termómetro, se solubilizó nitrofenilo 38 (3.03 g 5 mmol) en una solución de ácido fórmico al 5 % en metanol (25 ml). Rápidamente se vertió cinc 1,64 g, 25 mmol) en la solución. La temperatura se elevó instantáneamente a 45 °C y se enfrió lentamente de nuevo a temperatura ambiente, momento en el cual se completó (~15 min, reacción monitorizada por LCMS). Después, la mezcla de reacción se filtró a través de celite y el lecho adicional se lavó con EtOAc (2 x 100 ml). Los orgánicos combinados se lavaron posteriormente con NaHCO3 (ac) saturado (100 ml), H2O (100 ml) y salmuera (100 ml), antes de secarlos sobre MgSO4, filtrar y retirar los volátiles al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc; 100 % a 80:20) y el producto 39 puro se aisló en forma de un aceite incoloro pálido (1,35 g, rendimiento del 47 ). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 87,26 (s, 2H), 6,71 (s, 1H), 4,61 (s a, 1H), 4,22 (s, 2H), 3,88 (s, 1H), 3,77 (s, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,60 (dd, J= 16,5, 3,7 Hz, 1H), 2,43 (dd, J=16,5, 3,7 Hz, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,22 (m, 3H), 1,09 (d, J=7,2 Hz, 18H), 0,89 (s, 9H), 0,68 - 0,58 (m, 2H), 0,48 - 0,36 (m, 2H), 0,05 (d, J = 5,8 Hz, 6H). ES+ = 2,40 min, m/z 575,30 [M H]+
(iii) (S)-(2-(2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4-ciclopropil-2,3-dihidro-1H-pirrolo-1-carbonil)-4-metoxi-5-((triisopropilsilil)oxi)fenil)carbamato de terc-butilo (40)
Se calentaron juntos la amina 39 (770 mg, 1,34 mmol) y Boc2O (350 mg, 1,6 mmol) a 70 °C en un matraz de fondo redondo. Para ayudar con la solubilidad, se añadió CHCh (3 ml) y la mezcla se dejó agitar hasta que se completó la reacción (seguido de LCMS). La solución en bruto espesa se dejó enfriar hasta temperatura ambiente antes de cargarse directamente en una de cromatografía en columna sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc; 100 % a 95: 5). El producto 40 se aisló en forma de una espuma incolora. (741 mg, rendimiento del 82 %). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 8 7,73 (s, 1H), 7,26 (s, 2H), 6,73 (s, 1H), 4,64 (s, 1H), 3,91 (s, 1H), 3,78 (s, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,61 (dd, J= 16,2, 3,0 Hz, 1H), 2,45 (dd, J= 16,2, 3,0 Hz, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,36 (m, 1H), 1,33- 1,23 (m, 3H), 1,11 (d, J= 7,3 Hz, 18H), 0,89 (s, 9H), 0,64 (m, 2H), 0,43 (m, 2H), 0,05 (d, J= 7,2 Hz, 6H) ; ES+ = 2,56 min, m/z 675,30 [M+H]+.
(iv) (S)-(2-(4-ciclopropil-2-(hidroximetil)-2,3-dihidro-1H-pirroloe-1-carbonil)-4-metoxi-5-((triisopropilsilil)oxi)fenil)carbamato de terc-butilo (41)
Se solubilizó el silil éter 40 (741 mg, 1,1 mmol) en una mezcla 7:2:1:1 de AcOH/H2O/MeOH/THF (11 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que la reacción se completó (~3horas). Los volátiles se retiraron al vacío y el residuo se recogió en EtOAc (50 ml). La fase orgánica se lavó con NaHCO3 (ac.) saturado (50 ml), H2O (50 ml) y salmuera (50 ml), antes de secar sobre MgSO4, filtrar y concentrar al vacío. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Hex/EtOAc; 100 % a 60:40) y el producto 41 puro se aisló en forma de una espuma incolora (521 mg, rendimiento del 84 %). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 87,94 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,17 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 3,82 (t, J= 8,7 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,72 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 2,76 (ddd, J= 16,4, 10,2, 1,6 Hz, 1H), 2,08 (dd, J= 16,3, 4,4 Hz, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,42 - 1,33 (m, 1H), 1,33-1,23 (m, 3H), 1,11 (d, J= 7,3 Hz, 18H), 0,67 (dd, J= 5,0, 3,1 Hz, 2H), 0,46 - 0,39 (m, 2H) ; ES+ = 2,25 min, m/z 561,45 [M+H]+.
(v) (11S)-2-cidopropil-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-8-((tríisopropilsilil)oxi)-11,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de terc-butilo (42)
Se añadió DMSO (163 pl, 2,29 mmol) a una solución enfriada de cloruro de oxalilo (93 pl, 1,1 mmol) en CH2CI2 (2 ml) a -78 °C. Después de 15 minutos, se añadió gota a gota una solución del alcohol 41 (515 mg, 0,91 mmol) en CH2CI2 (5 ml) a la mezcla oxidante. La reacción se dejó agitar a -78 °C durante 1 hora antes de añadir NEt3 (640 pl, 4,59 mmol) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambeente. Tras la finalización, la mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (40 ml) y la solución se lavó con Hci (ac.) 0,1 M (50 ml), H2O (50 ml), NaHCO3 (ac.) (50 ml) y salmuera (50 ml). Los orgánicos se secaron con MgSO4, se filtraron y los volátiles se retiraron al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc; 100 % a 60:40) para proporcionar 42 puro en forma de una espuma de color blanco (350 mg, 68 %). RMN 1H (400 Hz, CDCh) 87,17 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 5,65 (dd, J= 8,6, 2,3 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,77 (dt, J= 13,2, 6,7 Hz, 1H), 3,38 (s, 1H), 2,88 (dd, J= 17,7, 9,2 Hz, 1H), 2,52 (d, J= 14,5 Hz, 1H), 1,46 (m, 1H), 1,39 (s, 9H), 1,31 - 1,19 (m, 3H), 1,10 (dd, J = 7,4, 2,1 Hz, 18H), 0,77-0,70 (m, 2H), 0,56-0,48 (m, 2H); ES+ = 1,89 min, m/z 559,45 [M+H]+.
(vi) (11S)-11-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-cidopropil-7-metoxi-5-oxo-8- ((triisopropilsilil)oxi)-11,11a-dihidro-1 H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)- carboxilato de terc-butilo (43)
Se solubilizó el alcohol 42 (350 mg, 0,62 mmol) en CH2Ch seco (5 ml) en un matraz de fondo redondo cerrado de manera hermética previamente lavado tres veces con argón. La solución se enfrió a 0°C antes de añadir posteriormente lutidina (0,3 ml, 2,5 mmol) y TBS-OTf (0,43 ml, 1,8 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó hasta que se completó (monitorizada por LCMS). Una vez completada, la solución se diluyó con CH2Ch (50 ml), se lavó con NH4Cl (ac.) saturado (50 ml), H2O (50 ml), NaHCO3 (ac.) saturado (50 ml) y salmuera (50 ml). Los orgánicos se secaron con MgSO4, se filtraron y los volátiles se retiraron al vacío. El material en bruto se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc; 100 % a 80:20) para proporcionar 43 puro en formade un aceite incoloro (397,3 mg, 94 %). RMN 1H (400 Hz, CDCh) 87,16 (s, 1H), 6,69 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 5,78 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,65 (td, J = 10,1, 3,7 Hz, 1H), 2,82 (ddd, J= 16,8, 10,3, 2,6 Hz, 1H), 2,30 (dd, J= 16,8, 2,6 Hz, 1H), 1,45-1,37 (m, 1H), 1,32 (s, 9H), 1,25 (dd, J= 14,1, 8,0 Hz, 3H), 1,09 (dd, J= 7,4, 4,1 Hz, 18H), 0,85
(s, 9H), 0,74-0,67 (m, 2H), 0,55-0,49 (m, 1H), 0,47-0,40 (m, 1H), 0,25 (s, 3H), 0,20 (s, 3H) ; ES+ = 2,39 min, m/z 695,55 [M+Na]+.
(vii) (11S)-11-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-ddopropil-8-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-11,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de terc-butilo (44)
Se solubilizó el monómero 43 (518,8 mg, 0,77 mmol) en DMF húmeda (5 ml 0,1 ml de H2O) antes de añadirse (78,5 mg, 0,77 mmol) y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente hasta que se completó (seguido por LCMS). La mezcla se diluyó posteriormente con EtOAc (50 ml), se inactivó con ácido cítrico (ac.) (pH=3, 40 ml), después se lavó con H2O (50 ml) y salmuera (50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y los volátiles se retiraron al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc ; 100 % a 60:40) y el producto 44 puro se aisló en forma de un sólido de color blanco (351 mg, rendimiento del 88 %). RMN 1H (400 Hz, CDCla) 87,20 (s, 1H), 6,68 (s, 1H), 6,68 (s, 1H'), 5,79 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,70 (td, J= 10,1, 3,7 Hz, 1H), 2,82 (ddd, J= 16,9, 10,3, 2,0 Hz, 1H), 2,31 (dd, J= 16,9, 2,0 Hz, 1H), 1,44 - 1,37 (m, 1H), 1,32 (s, 9H), 0,86 (s, 9H), 0,75 -0,68 (m, 1H), 0,57 - 0,49 (m, 1H), 0,46 (m, 1H), 0,23 (d, J = 6,9 Hz, 6H) ; ES+ = 1,82 min, m/z 517,35 [M+Na]+.
(viii) (11 S)-8-(3-bmmopropoxi)-11-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-ddopmpil-7-metoxi-5-oxo-11,11a-dihidm-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de terc-butilo (45)
En un matraz seco de fondo redondo lavado de manera abundante previamente tres veces con argón, se solubilizó el alcohol 44 (300 mg, 0,58 mmol) en DMF seca (5 ml). Posteriormente, se añadieron K2CO3 (123 mg, 0,58 mmol) y 1,3-dibromopropano (0,3 ml, 2,9 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 70 °C y se dejó agitar hasta la finalización (~1 hora, seguido por LCMS). La reacción se diluyó con EtOAc (50 ml), se lavó con H2O (75 ml) y salmuera (50 ml) antes de secarla sobre MgSO4, se filtró y los volátiles se retiraron al vacío. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Hexano/EtOAc; 100 % a 70:30) y el producto 45 puro se aisló en forma de una espuma incolora (311 mg, rendimiento del 84 %). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 87,21 (s, 1H), 6,69 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 5,82 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,14 (t, J= 5,9 Hz, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,69 (ddd, J = 10,2, 9,0, 3,7 Hz, 1H), 3,63 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,84 (ddd, J= 16,7, 10,4, 1,9 Hz, 1H), 2,38 (p, J = 6,1 Hz, 2H), 2,31 (dd, J=16,5, 2,1 Hz, 1H), 1,45-1,37 (m, 1H), 1,33 (s, 9H), 0,87 (s, 9H), 0,77 -0,69 (m, 2H), 0,57 -0,49 (m, 1H), 0,49 -0,42 (m, 1H), 0,24 (d, J = 5,4 Hz, 6H) ; ES+ = 2,16 min, m/z 638,95 [M+Na]+.
(c) (11S)-2-(4-((S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-¡l)metox¡)carbon¡l)amino)-3-met¡lbutanam¡do)propanam¡do)fen¡l)-11-((tercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-8-h¡drox¡-7-metox¡-5-oxo-11.11a-d¡h¡dro-1H-benzo[e1p¡rrolo[1,2-a1[1.41d¡azep¡n-10(5H)-carbox¡lato de terc-butilo (53)
(i) (S)-(4-(4-aminofenil)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-il)(5-metoxi-2-nitro-4-((triisopropilsilil)oxi)fenil)metanona (46)
Se añadió Pd(PPh3)4 (609 mg, 0,52 mmol) a una mezcla en agitación de triflato 37 (18,8 g, 26,3 mmol), pinacol éster del ácido 4-aminofenilborónico (8,64 g, 39,4 mmol), Na2CO3 (12,78 g, 120 mmol). ), MeOH (80 ml), tolueno (160 ml) y agua (80 ml). Se dejó agitar la mezcla de reacción a 30 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 24 horas, después de lo cual se consumió todo el éster borónico. Después, la mezcla de reacción se evaporó a sequedad antes de que el residuo se recogiera en EtOAc (100 ml) y se lavó con H2O (100 ml), salmuera (100 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida para proporcionar el producto en bruto. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc; 100% a 70:30) proporcionó el producto 46 en forma de una espuma de color amarillenta. (11,06 g, 64 %). RMN 1H (400 Hz, CDCla) 87,74 (s, 1H), 7,00 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,58 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 6,06 (s, 1H), 4,77 (m a, 1H), 3,91 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 3,68 (s a, 2H), 3,13 (m a, 1H), 2,97 (d, J= 14,5 Hz, 1H), 1,36 1,21 (m, 3H), 1,12 (d, J= 7,3 Hz, 18H), 0,89 (s, 10H), 0,10 (s, 6H).) ; ES+ = 2,27 min, m/z698 [M CH3CN]+
(ii) ((S)-1-(((S)-1-((4-((S)-5-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-1-(5-metoxi-2-nitro-4-((triisopropilsilil)oxi)benzoil)-4,5-dihidro-1H-pirrol-3-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de (9H-fluoren-9-il)m etilo (47)
A un matraz de fondo redondo seco previamente lavado con argón se le añadió la anilina 46 (10,05 g, 15,3 mmol), el dipéptido (6,3 g, 15,3 mmol) y CH2Ch seco (500 ml). Después, el matraz se purgó tres veces con argón antes de añadir EEDQ (3,79 g, 15,3 mmol) y la mezcla se dejó en agitación a temperatura ambiente. La reacción fue seguida por LCMS y después de 3,5 horas se completó la reacción. La reacción se interrumpió con H2O (200 ml) y se extrajo dos veces con CH2Ch (250 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (150 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se retiró al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de
sílice (Hexano/EtOAc; 100% a 55:45) para proporcionar el producto 47 puro (13,821 g, 86%). RMN 1H (400 Hz, CDCla) 88,26 (s, 1H), 7,64 (s d, J= 4,9 Hz, 3H), 7,43 (t, J= 7,3 Hz, 1H), 7,36 (d, J= 7,3 Hz, 1H), 7,28 (t, J= 7,3 Hz, 1H), 7,19 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,71 (s, 1H), 6,27 (d, J = 6,3Hz, 1H), 6,08 (s, 1H), 5,11 (d, J=6,6 Hz, 1H), 4,69 (s a, 1H), 4,52 (m a, 1H), 4,36 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 4,08 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,11 -2,97 (m a, 1H), 2,88 (bd, J= 15,2 Hz, 1H), 2,03 (s a, 1H), 1,33 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,24-1,11 (m, 3H), 1,01 (d, J= 7,4 Hz, 18H), 0,86-0,79 (m, 6H), 0,77 (s, 9H), 0,00 (s, 6H) ; ES+ = 2,37 min, sin masa.
(iii) ((S)-1-(((S)-1-((4-((S)-1-(2-amino-5-metoxi-4-((triisopropilsilil)oxi)benzoil)-5-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-4,5-dihidro-1H-pirrol-3-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de (9H-fluoren-9-il)m etilo (48)
En un matraz seco de fondo redondo de dos bocas previamente lavado con argón y equipado con un termómetro, se solubilizó el nitrofenilo 47 (2,97 g, 2,8 mmol) en una solución de ácido fórmico al 5 % en metanol (50 ml). Se vertió rápidamente cinc (1,85 g, 28 mmol) en la solución. La temperatura subió instantáneamente a 40 C y se enfrió lentamente de nuevo a temperatura ambiente, momento en el cual se completó la reacción (~15 minutos, reacción monitorizada por LCMS). Después, la mezcla de reacción se filtró a través de celite y el lecho adicional se lavó con EtOAc (2 x 150 ml). Los orgánicos combinados se lavaron posteriormente con NaHCO3 (ac.) saturado (100 ml), H2O (100 ml) y salmuera (100 ml), antes de secarlos sobre MgSO4, filtrar y retirar los volátiles al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (Hexano/EtOAC 75:25 a 50:50) y el producto 48 puro se aisló en forma de un aceite de color amarillo pálido (2,291 g, rendimiento del 79%). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 8 8,37 (s, 1H), 7,74 (s+d, J= 4,9 Hz, 3H), 7,53 (t, J= 7,4 Hz, 2H), 7,46 (d, J= 11,3 Hz, 2H), 7,39 (t, J= 7,3 Hz, 2H), 7,28 (t, J = 11,3 Hz, 2H), 7,09 (d, J= 7,9 Hz, 2H), 6,38 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 6,18 (s, 1H), 5,21 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,81 (s a, 1H), 4,72 - 4,57 (m, 1H), 4,47 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 4,19 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,00-3,94 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,23-3,07 (m, 1H), 2,98 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 2,15 (s, 1H), 1,43 (d, J= 6,9 Hz, 3H), 1,36-1,18 (m, 3H), 1,12 (d, J= 7,4 Hz, 18H), 0,97-0,89 (m, 6H), 0,88 (s, 9H), 0,10 (s, 6H). ES+ = 2,37 min, m/z sin masa.
(iv) ((S)-1-(((S)-1-((4-((S)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-metoxi-4-((triisopropilsilil)oxi)benzoil)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)-4,5-dihidro-1H-pirrol-3-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metilo (49)
La amina 48 (14,913 g, 14,6 mmol) y BoC2O (3,83 g, 17,5 mmol) se calentaron juntos a 70 °C en un matraz de fondo redondo. Para ayudar con la solubilidad, se añadió CHCh (25 ml) y la mezcla se dejó agitar hasta que se completó la reacción (seguido de LCMS). La solución en bruto espesa se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de cargarse directamente en una cromatografía en columna sobre gel de sílice (Hexano/EtOAc; 100 % a 65:35). El producto 49 se aisló en forma de una espuma de color crema (13,2 g, rendimiento del 80 %).
RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 8 8,40 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,74 (d, J= 7,8 Hz, 3H), 7,54 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 7,48 (d, J= 7,7 Hz, 2H), 7,38 (t, J= 7,4 Hz, 2H), 7,31 -7,25 (m, 3H), 7,14 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 6,84 (s a, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,50 (d, J= 6,4 Hz, 1H), 5,28 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 4,77 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 4,70-4,58 (m, 1H), 4,47 (t, J= 5,7 Hz, 2H), 4,19 (t, J= 6,1 Hz, 1H), 4,00 (m, 2H), 3,88 (s a, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,05 (m, 1H), 2,98 (dd, J= 15,4, 3,3 Hz, 1H), 2,15 (m a, 1H), 1,46 (s, 9H), 1,43 (d, J=11,7 Hz, 3H), 1,36-1,22 (m, 3H), 1,12 (d, J= 7,4 Hz, 18H), 1,00-0,89 (m, 6H), 0,84 (s, 9H), 0,05 (d, J= 6,0 Hz, 6H)) ; ES+ = 2,53 min, sin masa.
(v) ((S)-1-(((S)-1-((4-((S)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-metoxi-4-((triisopropilsilil)oxi)benzoil)-5-(hidroximetil)-4,5-dihidro-1H-pirrol-3-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de (9H-fluoren-9-il)m etilo (50)
Se solubilizó silil éter 49 (13,2 g, 11,8 mmol) en una mezcla 7:2:1:1 de AcOH/H2O/MeOH:THF (220 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que se completó la reacción (se dejó durante la noche ). Los volátiles se retiraron al vacío y el residuo se recogió en EtOAc (400 ml). La fase orgánica se lavó con NaHCO3 (ac.) saturado (200 ml), H2O (200 ml) y salmuera (10 ml) antes de secarse sobre MgSO4, filtrarse y concentrarse al vacío. El material en bruto se purificó pro cromatografía sobre gel de sílice (Hex/EtOAc; 50:50 a 0: 00) y el producto 50 puro se aisló en forma de una espuma de color amarillo claro (11,168 g, rendimiento del 94 %). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 88,45 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,74 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,52 (dd, J= 17,9, 8,9 Hz, 4H), 7,39 (t, J= 7,4 Hz, 2H), 7,33-7,26 (m, 3H), 7,13 (d, J= 7,4 Hz, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 5,26 (s, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,69- 4,58 (m, 1H), 4,47 (d, J= 6,2 Hz, 2H), 4,43 (s, 1H), 4,17 (d, J= 14,2 Hz, 1H), 3,99 (s, 1H), 3,89 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,30-3,17 (m, 1H), 2,64 (d, J= 16.9 Hz, 1H), 2,23-2,09 (m, 1H), 1,44 (s, 9H), 1,44 (d, J= 10,9 Hz, 2H), 1,29 (ddd, J= 14,3, 13,0, 7,4 Hz, 3H), 1,12 (d, J = 7,4 Hz, 18H), 0,92 (m, 6H) ; ES+ = 2,23 min, sin masa.
(vi) (11S)-2-(4-((S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)fenil)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-8-((triisopropilsilil)oxi)-11,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de terc-butilo (51)
Se añadió DMSO (1,55 l, 21,9 mmol) a una solución enfriada de cloruro de oxalilo (0,89 ml, 10,5 mmol) en CH2Ch (50 ml) a -78 °C. Después de 15 minutos, se añadió gota a gota una solución del alcohol 50 (8,8 mg, 8,76 mmol) en CH2Cl2 (100 ml) a la mezcla oxidante. La reacción se dejó en agitación a -78 °C durante 1 hora antes de añadir NEt3 (6,11 ml, 43,8 mmol) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. Una vez completada, la mezcla de reacción
se diluyó con CH2CI2 (100 ml) y la solución se lavó con HCl (ac.) 0,1 M (250 ml), H2O (250 ml), NaHCO3 (ac.) saturado (250 ml) y salmuera (200 ml). Los orgánicos se secaron con MgSO4, se filtraron y los volátiles se retiraron al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (CH2Ch/EtOAc; 100 % a 50:50) para proporcionar 51 puro en forma de un aceite de color amarillo (8,8 mg, 100 %). RMN 1H (400 Hz, CDCh) 88,71 (s, 1H), 7,74 (t, J= 8,4 Hz, 3H), 7,52 (d, J = 7,4 Hz, 5H), 7,43-7,33 (m, 4H), 7,23-7,17 (m, 2H), 6,69 (s, 1H), 6,42 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 5,78 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 5,62 (s, 1H), 5,23 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 4,84-4,69 (m, 1H), 4,65 (d, J = 22,5 Hz, 1H), 4,45-4,29 (m, 2H), 3,91 (dd, J= 11,3, 8,1 Hz, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,28 (q, J = 11,9 Hz, 1H), 2,98 (t, J= 12,6 Hz, 1H), 2,14 (dd, J= 12,9, 10,0 Hz, 1H), 1,52-1,42 (m, 3H), 1,38 (s, 9H), 1,26 (m, 3H), 1,16-1,05 (m, 18H), 0,93 (d, J=6,0Hz, 6H) ; ES+ = 2,19 min, sin masa.
(vii) (11S)-2-(4-((S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido) fenil)-11-((terc-butildimetilsilil)oxi)-7-metoxi-5-oxo-8-((tríisopropilsilil)oxi)-11,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de terc-butilo (52)
Se solubilizó el alcohol 51 (8,8 g, 8,78 mmol) en CH2Ch seco (150 ml) en un matraz de fondo redondo cerrado de manera hermética previamente lavado tres veces con argón. La solución se enfrió a 0 °C antes de añadir posteriormente lutidina (4 ml, 35,1 mmol) y TBS-OTf (6 ml, 26,3 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó hasta que se completó (monitorizado por LCMS). Una vez completada, la solución se diluyó con CH2Ch (100 ml), se lavó con NH4Cl (ac.) saturado (150 ml), H2O (100 ml), NaHCO3 (ac.) saturado (100 ml) y salmuera (100 ml). Los orgánicos se secaron con MgSO4, se filtraron y los volátiles se retiraron al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Hexano/EtoAc: 100 % a 80:20) para proporcionar 52 puro en forma de un aceite incoloro (6,18 mg, 70 %). RMN 1H (400 Hz, CDCh) 88,40 (s, 1H), 7,76 (d, J= 7,5 Hz, 2H), 7,55 (dd, J= 13,0, 6,7 Hz, 4H), 7,40 (t, J = 7,3 Hz, 4H), 7,33-7,27 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 6,49 (s, 1H), 5,87 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,30 (d, J= 5,7 Hz, 1H), 4,71 -4,59 (m, 1H), 4,48 (d, J= 6,8 Hz, 2H), 4,20 (t, J= 6,7 Hz, 1H), 4,04 - 3,96 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,84 -3,77 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,79 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 2,26-2,11 (m, 1H), 1,46 (d, J= 6,9 Hz, 3H), 1,33 (s, 9H), 1,27 (dd, J= 17,1, 9,7 Hz, 3H), 1,11 (dd, J= 7,4, 4,0 Hz, 18H), 0,93 (s, 6H), 0,89 (s, 9H), 0,27 (s, 3H), 0,22 (s, 3H); ES+ = 2,55 min, m/z 116,30 [M+H]+.
(viii) (11S)-2-(4-((S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)fenil)-11-((terc-butildimetilsilil)oxi)-8-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-11,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de terc-butilo (53)
El monómero 52 (1 g, 0,89 mmol) se solubilizó en DMF húmedo (5 ml 0,5 ml de H2O) antes de añadir LiOAc (91 mg, 0,89 mmol) y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente hasta que se completó (~3 h, seguido por LCMS). Posteriormente, la mezcla se diluyó con EtOAc (50 ml), se inactivó con ácido cítrico (acuoso) (pH = 3, 40 ml) y después se lavó con H2O (50 ml) y salmuera (50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y los volátiles se retiraron al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Hexano/EtOAc/MeOH; 60:40:0 a 60:30:10) y el producto 53 puro se aisló en forma de un sólido de color crema (675 mg, rendimiento del 78 %). RMN 1H (400 Hz, CDCh) 88,36 (s, 1H), 7,76 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,55 (dd, J= 16,0, 7,5 Hz, 4H), 7,40 (t, J= 7,4 Hz, 4H), 7,30 (ddd, J= 14,7, 7,4, 1,1 Hz, 3H), 7,24 (s, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,38 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,87 (s, 1H), 5,23 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 4,69 - 4,57 (m, 1H), 4,49 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 4,20 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,04 - 3,96 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,87 (dd, J = 10,1, 3,5 Hz, 1H), 3,29 (dd, J= 18,0, 8,5 Hz, 1H), 2,80 (d, J= 19,4 Hz, 1H), 2,24-2,08 (m, 1H), 1,46 (d, J = 10,5 Hz, 3H), 1,33 (s, 9H), 1,00 - 0,91 (m, 6H), 0,90 (s, 9H), 0,25 (d, J = 8,6 Hz, 6H). ; ES+ = 2,08 min, m/z 960,35 [M+H]+.
(d) N-((2S)-1-(((2S)-1-((4-(8-(3-((2-ciclopropil-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e1pirrolo[1,2-a1[1,41diazepin-8-¡l)ox¡)propox¡)-7-metox¡-5-oxo-5.11a-d¡h¡dro-1H-benzo[e1p¡rrolo[1.2-a1[1.41diazep¡n-2-¡l)fen¡l)am¡no)-1-oxopropan-2-¡l)am¡no)-3-met¡l-1-oxobutan-2-¡l)-1-(3-(2.5-d¡oxo-2.5-d¡h¡dro-1H-p¡rrol-1-¡l)propanam¡do)-3.6.9.12.15.18.21.24-octaoxaheptacosan-27-amida (18)
(i) (11S)-2-(4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)fenil)-8-(3-(((11S)-10-(terc-butoxicarbonil)-11-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-ddopropil-7-metoxi-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-11-((terc-butildimetilsilil)oxi)-7-metoxi-5-oxo-11,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de terc-butilo (54)
En un matraz seco de fondo redondo previamente lavado de manera abundante tres veces con argón, se solubilizaron el monómero 45 (310 mg, 0,48 mmol), el monómero 53 (513 mg, 0,53 mmol), K2CO3 (103 mg, 0,48 mmol) y TBAI (18 mg, 0,048 mmol) en DMF seca (5 ml) y la mezcla se calentó a 60 °C. La reacción se dejó agitar hasta que se completó (seguido por LCMS), antes de diluirse con EtOAc (50 ml), lavarse con H0O (75 ml) y salmuera (50 ml). Los orgánicos se secaron sobre MgSO4, se filtraron y los volátiles se retiraron al vacío. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (CHCh/MeOH; 100 % a 98: 2) y el producto 54 puro se aisló en forma de un sólido de color blanco (280,3 mg, rendimiento del 46 %). RMN 1H (400 Hz, CDCh) 88,93 (s, 1H), 7,85 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 7,52 (d, J= 8,6 Hz, 2H), 7,40 (s, 1H), 7,28 (d, J= 8,6 Hz, 2H), 7,19 (s, 2H), 6,69 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 5,90 (d, J= 9,3 Hz, 1H), 5,81 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 4,60 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 4,20 (dd, J = 15,9, 11,1 Hz, 4H), 3,88 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,84 (dd, J = 6,3, 4,5 Hz, 1H), 3,68 (td, J= 10,2, 3,7 Hz, 1H), 3,38-3,22 (m, 2H), 2,89-2,73 (m, 2H), 2,48 2,26 (m, 4H), 1,47 (d, J= 7,0 Hz, 3H), 1,42 (m, 1H), 1,30 (s, 18H), 1,02 (d, J= 7,0 Hz, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,86 (s, 10H),
0,84 (s, 6H), 0,72 (dd, J= 8,1, 3,3 Hz, 2H), 0,57-0,50 (m, 1H), 0,45 (m, 1H), 0,28-0,20 (m, 12H) ; ES+ = 2,16 min, m/z 1297,55 [M+Na]+.
(77) (11S)-8-(3-(((11S)-10-(terc-butoxicarbonil)-11-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2- (4-((2S,5S)-37-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-5-isopropil-2-metil-4,7,35-trioxo-10,13,16,19,22,25,28,31-octaoxa-3,6,34-tríazaheptatríacontanamido)fenil)-7-metoxi-5-oxo-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-11-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-cidopropil-7-metoxi-5-oxo-11,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de terc-butilo (55)
En un matraz seco de fondo redondo previamente lavado de manera abundante tres veces con argón, se solubilizó el dímero 54 (270 mg, 0,021 mmol) en CH2Ch seco (6 ml). Posteriormente se añadieron clorhidrato de EDCI (40 mg, 0,021 mmol) y maleimida-PEG8-OH (123 mg, 0,021 mmol) a la solución que se dejó agitar a temperatura ambiente hasta que se completó (~1 hora, seguido por LCMS). Una vez completada, la reacción se diluyó con CH2Ch (50 ml) y la fase orgánica se lavó con H2O (50 ml) y salmuera (50 ml) antes de secarse sobre MgSO4, filtrarse y retirar los volátiles por evaporación rotatoria a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (cHch/MeOH 100 % a 97:3) y el producto 55 puro se aisló en forma de una espuma de color amarillo claro (318,8 mg, rendimiento del 82 %). RMN 1H (400 Hz, CDCla) 8,64 (s, 1H), 7,69 (d, J= 15,0 Hz, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,28 (d, J= 15,0 Hz, 2H), 7,26, (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,20 (s, 1 H),7,03 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,69 (s, 2H), 6,65 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,37 (t, J = 4,7 Hz, 1H), 5,89 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 5,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,67 (p, J = 7,2 Hz, 1H), 4,27-4,12 (m, 5H), 3,88 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,84 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 3,73-3,56 (m, 46H), 3,53 (t, J= 5,0 Hz, 1H), 3,41 (dd, J = 10,3, 5,2 Hz, 1H), 3,35-3,22 (m, 1H), 2,90- 2,74 (m, 1H), 2,67 (ddd, J= 13,6, 9,2, 4,1 Hz, 1H), 2,52 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 2,48-2,45 (m, 1H), 2,45-2,37 (m, 1H), 2,37-2,22 (m, 1H), 2,02 (t, J= 9,0 Hz, 1H), 1,45 (d, J= 7,1 Hz, 3H), 1,42 - 1,37 (m, 1H), 1,30 (s, 9H), 0,99 (s, 6H), 0,89 (s, 9H), 0,86 (s, 9H), 0,78 - 0,67 (m, 2H), 0,58 - 0,49 (m, 1H), 0,48 -0,42 (m, 1H), 0,28 - 0,20 (m, 12H) ; ES+ = 2,15 min, m/z 1891,60 [M+Na]+
(iii) N-((2S)-1-(((2S)-1-((4-(8-(3-((2-ciclopropil-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oxi)propoxi)-7-metoxi-5-oxo-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-2-il)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)-1-(3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-lH-pirrol-1-il)propanamido)- 3,6,9,12,15,18,21,24-octaoxaheptacosan-27-amida (18)
El dímero 55 (318 mg, 0,017 mmol) se solubilizó en H2O seco (160 ml) y la suspensión se enfrió a 0 °C antes de añadir TFA (4 ml) y la mezcla se dejó agitar hasta que se completó (aproximadamente 20 minutos, seguido por LCMS). Una vez completada, la reacción se diluyó con C ^ C h (50 ml) y la fase orgánica se lavó con NaHCO3 enfriado con hielo (2 x 50 ml), H2O (50 ml) y salmuera (50 ml) antes de secarse sobre MgSO4, filtrarse y los volátiles se retiraron al vacío. El material en bruto se purificó directamente mediante HPLC preparativa de fase inversa (H2O/CH3CN, véanse las condiciones a continuación) y el producto 18 puro se aisló en forma de un sólido de color amarillo (61 mg, rendimiento del 26 %). RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 88,76 (s, 1H), 7,88 (d, J= 3,9 Hz, 1H), 7,78 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,51 - 7,48 (m, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,33 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,20 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,68 (s, 2H), 6,62 (s, 1H), 4,69 (p, J= 7,1 Hz, 1H), 4,41 -4,24 (m, 5H), 4,24-4,16 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,83 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 3,67 -3,56 (m, 33H), 3,55 -3,49 (m, 1H), 3,39 (dt, J = 14,0, 7,0 Hz, 1H), 3,10 (dd, J= 15,0, 11,6 Hz, 1H), 2,89 (dd, J= 16,9, 3,6 Hz, 1H), 2,75-2,64 (m, 1H), 2,51 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 2,48-2,44 (m, 1H), 2,44-2,38 (m, 1H), 2,28 (dt, J = 13,3, 6,8 Hz, 1H), 1,47 (s, 1H), 1,46 (d, J= 7,1 Hz, 3H), 1,02 (dd, J= 10,7, 6,9 Hz, 6H), 0,82-0,72 (m, 2H), 0,55 (q, J= 5,2 Hz, 2H). ES+ = 1,39 min, m/z 1404,45 [M+H]+
Ejemplo 4: Actividad de compuestos liberados
Ensayo de K562
Se mantuvieron células de leucemia mieloide crónica humana K562 en medio RPM1 1640 complementado con 10 % de suero bovino fetal y glutamina 2 mM a 37 °C en una atmósfera humidificada que contenía 5 % de CO2 y se incubaron con una dosis especificada de fármaco durante 1 hora o 96 horas a 37 °C en la oscuridad. La incubación se terminó por centrifugación (5 min, 300 g) y las células se lavaron una vez con medio sin fármaco. Tras el tratamiento con el fármaco apropiado, las células se transfirieron a placas de microtitulación de 96 pocillos (104 células por pocillo, 8 pocillos por muestra). A continuación, las placas se mantuvieron en la oscuridad a 37 °C en una atmósfera humidificada que contenía 5 % de CO2. El ensayo se basa en la capacidad de las células viables para reducir una sal de tetrazolio soluble amarilla, bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-2H-tetrazolio (MTT, Aldrich-Sigma), a un precipitado de formazano púrpura insoluble. Tras la incubación de las placas durante 4 días (para permitir que las células de control aumenten en número aproximadamente 10 veces), se añadieron 20 pl de solución de MTT (5 mg/ml en solución salina tamponada con fosfato) a cada pocillo y las placas se incubaron adicionalmente durante 5 h. A continuación, las placas se centrifugaron durante 5 min a 300 g y se pipeteó volumen del medio del sedimento de células dejando 10-20 pl por pocillo. Se añadió DMSO (200 pl) a cada pocillo y las muestras se agitaron para garantizar la mezcla completa. A continuación, la densidad óptica se leyó a una longitud de onda de 550 nm sobre un lector de placas de ELISA Titertek Multiscan, y se construyó una curva de dosis-respuesta. Para cada curva, se leyó un valor de CI50 como la dosis requerida para reducir la densidad óptica final al 50 % del valor de control.
Ejemplo 5: Formación de conjugados
Procedimiento general de conjugación de anticuerpos
Se diluyen anticuerpos a 1-5 mg/ml en un tampón de reducción (ejemplos: solución salina tamponada con fosfato PBS, tampón histidina, tampón borato de sodio, tampón Tris). Se añade una solución recientemente preparada de TCEP (clorhidrato de tris(2-carboxietil)fosfina) para reducir selectivamente los puentes de disulfuro de cisteína. La cantidad de TCEP es proporcional al nivel objetivo de reducción, dentro de 1 a 4 equivalentes molares por anticuerpo, que generan 2 a 8 tioles reactivos. Después de la reducción durante varias horas a 37 °C, la mezcla se enfría hasta temperatura ambiente y el exceso de fármaco-conector (B) se añade como una solución de DMSO diluida (contenido de DMSO final de hasta el 10 % en volumen/volumen de mezcla de reacción). La mezcla se agita suavemente a tanto 4 °C como a temperatura ambiente durante el tiempo apropiado, generalmente 1-3 horas. El exceso de tioles reactivos puede hacerse reaccionar con un “reactivo de encapuchado de tiol” como N-etilmaleimida (NEM) al final de la conjugación. Los conjugados de anticuerpo-fármaco se concentran usando filtros de concentración centrífuga con un corte de peso molecular de 10 kDa o superior, a continuación se purifican por filtración de flujo tangencial (TFF) o cromatografía de líquidos rápida de proteínas (FPLC). Los conjugados de anticuerpo-fármaco correspondientes pueden determinarse por análisis de cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) o cromatografía de líquidos de resolución ultra-alta (UHPLC) para evaluar la relación de fármaco por anticuerpo (DAR) usando cromatografía de fase inversa (RP) o cromatografía de interacción hidrófoba (HIC), acoplada a detección UV-visible, de fluorescencia o por espectrómetro de masas; el nivel de agregados y la pureza de los monómeros puede analizarse por HPLC o UHPLC usando cromatografía de exclusión por tamaño acoplada a detección UV-visible, de fluorescencia o por espectrómetro de masas. La concentración de conjugado final se determina por una combinación de ensayo espectroscópico (absorbancia a 280, 214 y 330 nm) y bioquímico (ensayo con ácido bicinconínico BCA; Smith, P.K. y col. (1985) Anal. Biochem. 150 (1): 76-85; usando un anticuerpo IgG de concentración conocida como referencia). Los conjugados de anticuerpo-fármaco se esterilizan generalmente por filtración usando filtros de 0,2 |jm bajo condiciones asépticas, y se guardan a 4 °C, -20 °C o -80 °C.
Ejemplos de conjugaciones particulares se describen a continuación.
ADC1A
Se diluye anticuerpo 1 (15 mg, 102 nanomoles) en 13,5 ml de un tampón de reducción que contiene borato de sodio 10 mM a pH 8,4, EDTA 2,5 mM y una concentración final de anticuerpo de 1,1 mg/ml. Se añade una solución 20 mM de TCEP (2 equivalentes molares/anticuerpo, 200 nanomoles, 10 j l ) y la mezcla de reducción se calienta a 37 °C durante una hora en una estufa de incubación orbital. Después de enfriarse hasta temperatura ambiente, se añade el compuesto A como una solución de DMSO (5 equivalentes molares/anticuerpo, 510 nanomoles, en 1,2 ml de DMSO). La solución se mezcla 3 horas a temperatura ambiente, y después se inactivó mediante la adición de N-etilmaleimida (NEM, 10 equivalentes molares, 1000 nanomoles, 100 j l a 10 mM), a continuación se transfiere a un filtro de centrífuga de 50 kDa de MWCO Amicon Ultracell de 15 ml, se concentra a aprox. 2,0 ml y se inyecta en una FPLC AKTA™ usando una columna XK16/70 de GE Healthcare rellena con Superdex 200 PG, eluyendo con 1,5 ml/min de solución salina tamponada con fosfato (PBS) esterilizada por filtración. Las fracciones correspondientes al pico de monómero de ADC1A se reúnen, se analizan y se esterilizan por filtración. El ensayo de BCA da una concentración de ADC1A final a 1,25 mg/ml en 10,0 ml, y la masa obtenida es 12,5 mg (83 % de rendimiento). El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence usando una columna Agilent PLRP-S 1000 A 8 um 150 x 2,1 mm que eluye con un gradiente de agua y acetonitrilo sobre una muestra reducida de ADC1A a 280 nm y 330 nm (específica de fármacoconector) muestra una mezcla de cadenas ligeras y pesadas unidas a varias moléculas de A , de acuerdo con una relación de fármaco por anticuerpo (DAR) de 2,5 moléculas de A por anticuerpo. El análisis de SEC sobre una FPLC AKTA™ usando una columna XK16/70 de GE Healthcare rellena con Superdex 200 PG, eluyendo con solución salina tamponada con fosfato (PBS) esterilizada por filtración sobre una muestra de ADC1A a 280 nm muestra una pureza de monómeros del 99,4 % con 0,6 % de agregados.
ADC2A
El anticuerpo 2 (15 mg, 100 nanomoles) se diluyó en 13,5 ml de un tampón de reducción que contenía borato sódico 10 mM pH 8,4, EDTA 2, mM y una concentración final de anticuerpo de 1,1 mg/ml. Se añadió una solución 40 mM de TCEP (3 equivalentes molares/anticuerpo, 300 nanomoles, 7,5 ml) y la mezcla de reducción se calentó a 37 °C durante una hora en una incubadora orbital. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió A como una solución de DMSO (7 equivalentes molares/anticuerpo, 700 nanomoles, en 1,0 ml de DMSO). La solución se mezcló 2,5 horas a temperatura ambiente, después se inactiva mediante la adición de N-etilmaleimida (NEM, 30 equivalentes molares, 3000 nanomoles, 100 ml a 30 mM), después se transfirió a un filtro giratorio Amicon Ultracell 50KDa MWCO de 15 ml, se concentra a aprox. 2,0 ml y se inyectó en un FPLC AKTA™ usando una columna GE Healthcare XK16/70 empaquetada con Superdex 200 PG, eluyendo con 1,5 ml/min de solución salina tamponada con fosfato (PBS) filtrada y esterilizada. Las fracciones correspondientes al pico de monómero de ADC2A se agruparon, se concentraron usando un filtro giratorio Amicon Ultracell 50 KDa MWCO de 15 ml, se analizaron y se esterilizaron por filtración. El ensayo de BCA dio una concentración de ADC2A final de 3,94 mg/ml en 2,7 ml, la masa obtenida fue de 10,6 mg (rendimiento del 71 %). El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence usando una columna Agilent PLRP-S 1000 A 8um 150 x 2,1 mm eluyendo con un gradiente de agua y acetonitrilo en una muestra reducida de ADC2A a 280 nm y
330 nm (específico del enlazador de fármacos) muestra una mezcla de cadenas ligeras y pesadas unidas a varias moléculas de A , consistente con una relación fármaco por anticuerpo (DAR) de 2,4 moléculas de A por anticuerpo. El análisis de UHPLC en un sistema Shimadzu Prominence usando una columna Waters Acquity UPLC BEH200 SEC 1,7 um 4,6 x 150 mm eluyendo con solución salina tamponada con fosfato (PBS) filtrada y esterilizada en una muestra de ADC2A a 280 nm muestra una pureza de monómero del 97,5 % con 1,9 % de agregados .
Como se usa en el presente documento, "Anticuerpo 1" es un anticuerpo anti-Her2 que comprende un dominio VH que tiene la secuencia de acuerdo con SEQ ID NO. 1 y un dominio VL que tiene la secuencia de acuerdo con SEQ ID NO. 2.
Como se usa en el presente documento, "Anticuerpo 2" es un anticuerpo anti-CD25 ("Simulect") que comprende un dominio VH que tiene la secuencia de acuerdo con SEQ ID NO. 3 y un dominio VL que tiene la secuencia de acuerdo con SEQ ID NO. 4.
Ejemplo 6: estudios de eficacia de ADC in vitro
La citotoxicidad de ADC2A se evaluó en un ensayo de citotoxicidad como se describe anteriormente, y los resultados se muestran en la Figura 1. o representa la línea celular que expresa el antígeno (células SU-DHL-1 del Instituto Leibniz DSMZ-Colección alemana de microorganismos y cultivos celulares .), y ▲ representa la línea celular que no expresa el antígeno (células Daudi de la Colección Americana de Cultivos Tipo), y las barras de error indican una desviación estándar de 6.
Ejemplo 7: estudios de eficacia de ADC in vivo
Ratones CB.17 SCID, de edades 8-12 semanas, se inyectan subcutáneamente con fragmentos de tumor de 1 mm3 derivados de la línea celular BT-474 en el flanco. Cuando los tumores alcanzan un tamaño promedio de 100 - 150 mm3, se empieza el tratamiento. Los ratones se pesan dos veces a la semana. El tamaño tumoral se mide dos veces a la semana. Los animales se monitorizan individualmente. El punto final del experimento es un volumen tumoral de 1000 mm3 o 60 días, sea cual sea el que aparezca primero. Los que responden pueden ser seguidos más tiempo.
Grupos de 10 ratones xenoinjertados se inyectan i.v. con 0,2 ml de conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC), o anticuerpo desnudo, en solución salina tamponada con fosfato (vehículo) o con 0,2 ml de vehículo solo. La concentración de ADC se ajusta para dar, por ejemplo, 0,3 o 1,0 mg de ADC/kg de peso corporal en una dosis única. Pueden administrarse tres dosis idénticas a cada ratón a intervalos de, por ejemplo, 1 semana.
La Figura 2 muestra el efecto sobre el volumen tumoral medio en grupos de 10 ratones dosificados con ADC1A a 0,3 (gris) o 1,0 mg/kg (morado) en comparación con controles de vehículo (negro) o anticuerpo desnudo (azul).
Abreviaturas
Ac acetilo
Acm acetamidometilo
Alloc aliloxicarbonilo
Boc dicarbonato de di-ferc-butilo
t-Bu terc-butilo
Bzl bencilo, en el que Bzl-OMe es metoxibencilo y Bzl-Me es metilbenceno
Cbz o Z benciloxi-carbonilo, en el que Z-Cl y Z-Br son cloro- y bromobenciloxicarbonilo, respectivamente DMF N,N-dimetilformamida
Dnp dinitrofenilo
DTT ditiotreitol
Fmoc 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilo
imp grupo protector de imina A/-10: 3-(2-metoxietoxi)propanoato-Val-Ala-PAB
MC-OSu maleimidocaproil-O-N-succinimida
Moc metoxicarbonilo
MP maleimidopropanamida
Mtr 4-metoxi-2,3,6-trimetilbencenosulfonilo
PAB para-aminobenciloxicarbonilo
PEG etilenoxi
PNZ carbamato de p-nitrobencilo
Psec 2-(fenilsulfonil)etoxicarbonilo
TBDMS terc-butildimetilsililo
TBDPS terc-butildifenilsililo
Teoc 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo
Tos tosilo
Troc cloruro de 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo
Trt tritilo
Claims (89)
1. Un compuesto que es A:
y sales y solvatos del mismo.
2. Un conjugado de fórmula ConjA:
en la que CBA representa un agente de unión a una célula.
3. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el agente de unión a una célula es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo para un antígeno asociado a un tumor.
4. El conjugado de la reivindicación 3, en el que el anticuerpo, o el fragmento de anticuerpo, es un anticuerpo que se une a uno o más antígenos asociados a un tumor o receptores de la superficie celular seleccionados de (1)-(88):
(1) BMPR1B;
(2) E16;
(3) STEAP1;
(4) 0772P;
(5) MPF;
(6) Napi3b;
(7) Sema 5b;
(8) PSCA hlg;
(9) ETBR;
(10) MSG783;
(11) STEAP2;
(12) TrpM4;
(13) CRIPTO;
(14) CD21;
(15) CD79b;
(16) FcRH2;
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20R-alfa;
(21) Brevicano;
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R;
(27) CD22;
(28) CD79a;
(29) CXCR5;
(30) HLA-DOB;
(31) P2X5;
(32) CD72;
(33) LY64;
(34) FcRHI;
(35) IRTA2;
(36) TENB2;
(37) PSMA - FOLH1;
(38) SST;
(38.1) SSTR2;
(38.2) SSTR5;
(38.3) SSTR1;
(38.4) SSTR3;
(38.5) SSTR4;
(39) ITGAV;
(40) ITGB6;
(41) CEACAM5;
(42) MET;
(43) MUC1;
(44) CA9;
(45) EGFRvIII;
(46) CD33;
(47) CD 19;
(48) IL2RA;
(49) AXL;
(50) CD30 - TNFRSF8;
(51) BCMA - TNFRSF17;
(52) Ag de CT - CTA;
(53) CD174 (Lewis Y) - FUT3;
(54) CLEC14A;
(55) GRP78 - HSPA5;
(56) CD70;
(57) Antígenos específicos de células madre;
(58) ASG-5;
(59) ENPP3;
(60) PRR4;
(61) GCC -GUCY2C;
(62) Liv-1 - SLC39A6;
(63) 5T4;
(64) CD56 - NCMA1;
(65) CanAg;
(66) FOLR1;
(67) GPNMB;
(68) TIM-1 -HAVCR1;
(69) RG-1/Mindina diana de tumor de la próstata - Mindina/RG-1;
(70) B7-H4 - VTCN1;
(71) PTK7;
(72) CD37;
(73) CD138 -SDC1;
(74) CD74;
(75) Claudinas - CL;
(76) EGFR;
(77) Her3;
(78) RON - MST1 R;
(79) EPHA2;
(80) CD20 - MS4A1;
(81) Tenascina C - TNC;
(82) FAP;
(83) DKK-1;
(84) CD52;
(85) CS1 - SLAMF7;
(86) Endoglina- ENG;
(87) Anexina A1 - ANXA1;
(88) V-CAM (CD106) -VCAM1.
5. El conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que el anticuerpo, o el fragmento de anticuerpo, es un anticuerpo modificado con cisteína.
6. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en el que la carga de fármaco (p) de fármacos (D) con respecto a anticuerpo (Ab) es un número entero de 1 a aproximadamente 8.
7. El conjugado de acuerdo con la reivindicación 6, en el que p es 1, 2, 3 o 4.
8. Una composición que comprende una mezcla de compuestos de conjugados de fármaco de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, en la que la carga de fármaco promedio por anticuerpo en la mezcla de compuestos de conjugados de anticuerpo-fármaco es de aproximadamente 1 a aproximadamente 8.
9. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7 o la composición de acuerdo con la reivindicación 8, para su uso en terapia.
10. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7 o la composición de acuerdo con la reivindicación 8, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa en un sujeto.
11. El conjugado o la composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde la enfermedad es cáncer.
12. Una composición farmacéutica que comprende el conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7 o la composición de acuerdo con la reivindicación 8 y un diluyente, un vehículo o un excipiente farmacéuticamente aceptables.
13. La composición farmacéutica de la reivindicación 12 que comprende además una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente quimioterapéutico.
14. Un procedimiento de preparación de un conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, comprendiendo el procedimiento la etapa de hacer reaccionar un agente de unión a una célula con el compuesto A tal como se define en la reivindicación 1.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261712924P | 2012-10-12 | 2012-10-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2847050T3 true ES2847050T3 (es) | 2021-07-30 |
Family
ID=49474386
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES13780099T Active ES2713164T3 (es) | 2012-10-12 | 2013-10-11 | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas |
| ES18187765T Active ES2847050T3 (es) | 2012-10-12 | 2013-10-11 | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES13780099T Active ES2713164T3 (es) | 2012-10-12 | 2013-10-11 | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9415117B2 (es) |
| EP (2) | EP3470086B1 (es) |
| JP (2) | JP6367811B2 (es) |
| KR (3) | KR102138220B1 (es) |
| CN (2) | CN110256469B (es) |
| AU (1) | AU2013328674B2 (es) |
| BR (1) | BR112015008251B1 (es) |
| CA (2) | CA2885315C (es) |
| CY (2) | CY1121390T1 (es) |
| DK (2) | DK2906248T3 (es) |
| ES (2) | ES2713164T3 (es) |
| HK (1) | HK1213183A1 (es) |
| HR (2) | HRP20190366T1 (es) |
| HU (2) | HUE052835T2 (es) |
| LT (2) | LT2906248T (es) |
| MX (2) | MX362004B (es) |
| NZ (2) | NZ705910A (es) |
| PL (2) | PL3470086T3 (es) |
| PT (2) | PT3470086T (es) |
| RS (2) | RS58203B1 (es) |
| SI (2) | SI3470086T1 (es) |
| TR (1) | TR201902494T4 (es) |
| WO (1) | WO2014057073A1 (es) |
| ZA (1) | ZA201501781B (es) |
Families Citing this family (73)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0819095D0 (en) | 2008-10-17 | 2008-11-26 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| KR101671360B1 (ko) | 2010-04-15 | 2016-11-01 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 표적화된 피롤로벤조디아제핀 접합체 |
| NZ602933A (en) | 2010-04-15 | 2014-09-26 | Seattle Genetics Inc | Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases |
| BR112014006703A8 (pt) | 2011-09-20 | 2018-01-09 | Spirogen Sarl | "pirrolobenzodiazepinas |
| EA026643B1 (ru) | 2011-10-14 | 2017-04-28 | Сиэтл Дженетикс, Инк. | Пирролбензодиазепины и конъюгаты направленного действия |
| JP6170497B2 (ja) | 2011-10-14 | 2017-07-26 | メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ | ピロロベンゾジアゼピン |
| ES2945932T3 (es) | 2011-10-14 | 2023-07-10 | Seagen Inc | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados dirigidos |
| EA027386B1 (ru) | 2011-10-14 | 2017-07-31 | Медимьюн Лимитед | Пирролобензодиазепины |
| CN104717979A (zh) * | 2012-08-02 | 2015-06-17 | 基因泰克公司 | 抗etbr抗体和免疫偶联物 |
| SI2906296T1 (en) | 2012-10-12 | 2018-06-29 | Adc Therapeutics Sa | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| BR112015008173A2 (pt) | 2012-10-12 | 2017-11-28 | Adc Therapeutics Sarl | conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo anti-psma |
| EP2906250B1 (en) | 2012-10-12 | 2018-05-30 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates |
| US9919056B2 (en) | 2012-10-12 | 2018-03-20 | Adc Therapeutics S.A. | Pyrrolobenzodiazepine-anti-CD22 antibody conjugates |
| US9745303B2 (en) | 2012-10-12 | 2017-08-29 | Medimmune Limited | Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation |
| EP2906297B1 (en) | 2012-10-12 | 2017-12-06 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| SI2839860T1 (sl) | 2012-10-12 | 2019-07-31 | MedImmune Limited, | Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati |
| TR201902494T4 (tr) | 2012-10-12 | 2019-03-21 | Medimmune Ltd | Pirrolobenzodiazepinler ve onların konjugatları. |
| JP6392763B2 (ja) * | 2012-10-12 | 2018-09-19 | エイディーシー・セラピューティクス・エス・アーＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａ | ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体 |
| AU2013366490B9 (en) | 2012-12-21 | 2018-02-01 | Medimmune Limited | Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases |
| EP2935268B2 (en) | 2012-12-21 | 2021-02-17 | MedImmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| MX364330B (es) | 2013-03-13 | 2019-04-23 | Medimmune Ltd | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas. |
| SG11201507214SA (en) | 2013-03-13 | 2015-10-29 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| KR20160042871A (ko) * | 2013-06-21 | 2016-04-20 | 이나뜨 파르마, 에스.아. | 폴리펩티드의 효소적 콘쥬게이션 |
| WO2015052532A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| US9950078B2 (en) | 2013-10-11 | 2018-04-24 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| GB201317981D0 (en) | 2013-10-11 | 2013-11-27 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| GB201317982D0 (en) | 2013-10-11 | 2013-11-27 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| WO2015052535A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| TW201617368A (zh) | 2014-09-05 | 2016-05-16 | 史坦森特瑞斯公司 | 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法 |
| EP3193940A1 (en) | 2014-09-10 | 2017-07-26 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| GB201416112D0 (en) | 2014-09-12 | 2014-10-29 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| EP3191135B1 (en) | 2014-09-12 | 2020-08-19 | Genentech, Inc. | Anti-her2 antibodies and immunoconjugates |
| CN107148285B (zh) | 2014-11-25 | 2022-01-04 | Adc治疗股份有限公司 | 吡咯并苯并二氮杂䓬-抗体缀合物 |
| CA2973355A1 (en) | 2015-01-14 | 2016-07-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Heteroarylene-bridged benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using |
| CA2973354A1 (en) | 2015-01-14 | 2016-07-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using |
| GB201506389D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
| GB201506411D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Bergenbio As | Humanized anti-axl antibodies |
| GB201506405D0 (en) * | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
| GB201506402D0 (en) * | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
| GB201506394D0 (en) * | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
| CA2990030A1 (en) | 2015-06-23 | 2016-12-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Macrocyclic benzodiazepine dimers, conjugates thereof, preparation and uses |
| MA43345A (fr) | 2015-10-02 | 2018-08-08 | Hoffmann La Roche | Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation |
| CA2949032A1 (en) | 2015-11-30 | 2017-05-30 | Pfizer Inc. | Site specific her2 antibody drug conjugates |
| GB201601431D0 (en) | 2016-01-26 | 2016-03-09 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| GB201602359D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| GB201602356D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| TW201805309A (zh) | 2016-04-21 | 2018-02-16 | 艾伯維史坦森特瑞斯有限責任公司 | 新穎抗－bmpr1b抗體及使用方法 |
| GB201607478D0 (en) | 2016-04-29 | 2016-06-15 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| EP3458069B1 (en) | 2016-05-18 | 2023-07-05 | Mersana Therapeutics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| EP3475284B1 (en) | 2016-06-24 | 2022-11-02 | Mersana Therapeutics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| GB201617466D0 (en) | 2016-10-14 | 2016-11-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| GB201619490D0 (en) * | 2016-11-17 | 2017-01-04 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| EP3348560A1 (en) * | 2017-01-16 | 2018-07-18 | Spago Nanomedical AB | Chemical compounds for coating of nanostructures |
| GB201702031D0 (en) | 2017-02-08 | 2017-03-22 | Medlmmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| UA125198C2 (uk) | 2017-02-08 | 2022-01-26 | Ейдісі Терапьютікс Са | Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло |
| SI3612537T1 (sl) | 2017-04-18 | 2022-10-28 | Medimmune Limited | Konjugati pirolobenzodiazepina |
| CN110536703A (zh) | 2017-04-20 | 2019-12-03 | Adc治疗有限公司 | 使用抗axl抗体-药物缀合物的组合疗法 |
| BR112019026564A2 (pt) | 2017-06-14 | 2020-06-30 | Adc Therapeutics Sa | regimes de dosagem para a administração de um adc anti-cd19 |
| CN111065638B (zh) | 2017-08-18 | 2021-04-09 | 麦迪穆有限责任公司 | 吡咯并苯并二氮杂䓬缀合物 |
| TW202405006A (zh) | 2017-09-29 | 2024-02-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗體－吡咯并苯二氮呯衍生物複合體 |
| EP3710066B1 (en) | 2017-11-14 | 2022-06-08 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| WO2019104289A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-31 | Mersana Therapeutics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates |
| CU24558B1 (es) * | 2017-11-28 | 2021-12-08 | Ct Inmunologia Molecular | Anticuerpos monoclonales que reconocen al receptor del factor de crecimiento epidérmico y sus fragmentos derivados |
| US20220305127A1 (en) | 2017-12-21 | 2022-09-29 | Mersana Therapeutics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates |
| GB201803342D0 (en) | 2018-03-01 | 2018-04-18 | Medimmune Ltd | Methods |
| GB201806022D0 (en) | 2018-04-12 | 2018-05-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| GB201902495D0 (en) | 2019-02-25 | 2019-04-10 | Medimmune Ltd | Methods of synthesis and intermediates |
| WO2020223445A1 (en) * | 2019-04-30 | 2020-11-05 | Senti Biosciences, Inc. | Chimeric receptors and methods of use thereof |
| EP4013494A1 (en) | 2019-08-12 | 2022-06-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Macrophage stimulating 1 receptor (mst1r) variants and uses thereof |
| US20240123081A1 (en) | 2019-10-25 | 2024-04-18 | Medimmune, Llc | Branched moiety for use in conjugates |
| WO2022178067A1 (en) * | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Janssen Biotech, Inc | Materials and methods for targeting regulatory t cells for enhancing immune surveillance |
| KR102285542B1 (ko) | 2021-03-09 | 2021-08-04 | 주식회사 레젠 | 투광등용 리플렉터 및 이를 가진 투광등 |
| WO2023173096A1 (en) * | 2022-03-11 | 2023-09-14 | Sigma-Aldrich Co. Llc | Pyrrolobenzodiazepine intermediates and uses thereof |
Family Cites Families (130)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3361742A (en) | 1964-12-07 | 1968-01-02 | Hoffmann La Roche | 5-oxo-1h-pyrrolo-[2, 1-c][1, 4]-benzodiazepin-2-crylamides |
| US3523941A (en) | 1967-03-06 | 1970-08-11 | Hoffmann La Roche | Benzodiazepine compounds and process for their preparation |
| US3524849A (en) | 1967-10-27 | 1970-08-18 | Hoffmann La Roche | Process for the preparation of pyrrolo-benzodiazepine acrylamides and intermediates useful therein |
| IL33558A (en) | 1968-12-30 | 1973-10-25 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Antibiotic pyrrolo-benzodiazepine compound,its derivatives and processes for their production |
| FR2027356A1 (en) | 1968-12-30 | 1970-09-25 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Benzodiazepinone antibiotics |
| JPS4843755B1 (es) | 1969-06-26 | 1973-12-20 | ||
| JPS5382792U (es) | 1976-12-10 | 1978-07-08 | ||
| JPS585916B2 (ja) | 1977-12-27 | 1983-02-02 | 株式会社ミドリ十字 | 新規ベンゾジアゼピン系化合物 |
| JPS5615289A (en) | 1979-07-17 | 1981-02-14 | Green Cross Corp:The | Novel benzodiazepinnbased compound 3 |
| JPH0353356Y2 (es) | 1981-02-06 | 1991-11-21 | ||
| CA1185602A (en) | 1981-02-27 | 1985-04-16 | Emilio Kyburz | Imidazodiazepines |
| CA1184175A (en) | 1981-02-27 | 1985-03-19 | Walter Hunkeler | Imidazodiazepines |
| CA1173441A (en) | 1981-02-27 | 1984-08-28 | Hoffmann-La Roche Limited | Imidazodiazepines |
| JPS58180487A (ja) | 1982-04-16 | 1983-10-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法 |
| JPS58180487U (ja) | 1982-05-28 | 1983-12-02 | 松下電工株式会社 | 光線式報知器の組立体 |
| US4427588A (en) | 1982-11-08 | 1984-01-24 | Bristol-Myers Company | Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin |
| US4427587A (en) | 1982-11-10 | 1984-01-24 | Bristol-Myers Company | Total synthesis of antitumor antibiotics BBM-2040A and BBM-2040B |
| JPS59152329A (ja) | 1983-02-17 | 1984-08-31 | Green Cross Corp:The | 局所障害抑制剤 |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| FR2586683B1 (fr) | 1985-08-29 | 1988-07-01 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux derives de neothramycine, leur procede de preparation et leur application en tant que medicaments |
| US5583024A (en) | 1985-12-02 | 1996-12-10 | The Regents Of The University Of California | Recombinant expression of Coleoptera luciferase |
| JP2660201B2 (ja) | 1988-08-05 | 1997-10-08 | 塩野義製薬株式会社 | 新規ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体および老人性痴呆薬 |
| FR2676230B1 (fr) | 1991-05-07 | 1993-08-27 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux derives de pyrrolo [1,4]-benzodiazepines, leur procede de preparation et medicaments les contenant. |
| GB9205051D0 (en) | 1992-03-09 | 1992-04-22 | Cancer Res Campaign Tech | Pyrrolobenzodiazepine derivatives,their preparation,and compositions containing them |
| FR2696176B1 (fr) | 1992-09-28 | 1994-11-10 | Synthelabo | Dérivés de pipéridine, leur préparation et leur application en thérapeutique. |
| US6214345B1 (en) | 1993-05-14 | 2001-04-10 | Bristol-Myers Squibb Co. | Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates |
| GB9316162D0 (en) | 1993-08-04 | 1993-09-22 | Zeneca Ltd | Fungicides |
| JPH08336393A (ja) | 1995-04-13 | 1996-12-24 | Mitsubishi Chem Corp | 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法 |
| US6602677B1 (en) | 1997-09-19 | 2003-08-05 | Promega Corporation | Thermostable luciferases and methods of production |
| ATE349722T1 (de) | 1998-07-08 | 2007-01-15 | E Ink Corp | Verbesserte farbige mikroverkapselte elektrophoretische anzeige |
| GB9818732D0 (en) | 1998-08-27 | 1998-10-21 | Univ Portsmouth | Collection of compounds |
| PT1193270E (pt) | 1998-08-27 | 2003-10-31 | Spirogen Ltd | Pirrolobenzodiazepinas |
| GB9818730D0 (en) | 1998-08-27 | 1998-10-21 | Univ Portsmouth | Collections of compounds |
| GB9818731D0 (en) | 1998-08-27 | 1998-10-21 | Univ Portsmouth | Compounds |
| US6909006B1 (en) | 1999-08-27 | 2005-06-21 | Spirogen Limited | Cyclopropylindole derivatives |
| US20040001827A1 (en) | 2002-06-28 | 2004-01-01 | Dennis Mark S. | Serum albumin binding peptides for tumor targeting |
| DE60041564D1 (de) | 1999-12-24 | 2009-03-26 | Genentech Inc | Verfahren und Zusammensetzungen zur Verlängerung der Entsorgungshalbwertszeit von biowirksamen Verbindungen |
| ES2254492T3 (es) | 2000-09-19 | 2006-06-16 | Moses Lee | Composiciones y procedimientos de uso de analogos aquirales de cc-1065 y de duocarmicinas. |
| US6362331B1 (en) | 2001-03-30 | 2002-03-26 | Council Of Scientific And Industrial Research | Process for the preparation of antitumor agents |
| US6660856B2 (en) | 2002-03-08 | 2003-12-09 | Kaohsiung Medical University | Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues |
| EP1545613B9 (en) | 2002-07-31 | 2012-01-25 | Seattle Genetics, Inc. | Auristatin conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease |
| US20040138269A1 (en) | 2002-10-11 | 2004-07-15 | Sugen, Inc. | Substituted pyrroles as kinase inhibitors |
| GB0226593D0 (en) | 2002-11-14 | 2002-12-24 | Consultants Ltd | Compounds |
| CA2520898C (en) | 2003-03-31 | 2009-10-20 | Council Of Scientific And Industrial Research | Non-cross-linking pyrrolo(2,1-c)(1,4)benzodiazepines as potential antitumour agents and process thereof |
| GB0321295D0 (en) | 2003-09-11 | 2003-10-15 | Spirogen Ltd | Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines |
| GB0416511D0 (en) | 2003-10-22 | 2004-08-25 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| US7511032B2 (en) | 2003-10-22 | 2009-03-31 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto |
| SG195524A1 (en) | 2003-11-06 | 2013-12-30 | Seattle Genetics Inc | Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands |
| AU2005214988A1 (en) | 2004-02-17 | 2005-09-01 | Absalus, Inc. | Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus |
| WO2005082023A2 (en) | 2004-02-23 | 2005-09-09 | Genentech, Inc. | Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates |
| GB0404578D0 (en) | 2004-03-01 | 2004-04-07 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| GB0404574D0 (en) | 2004-03-01 | 2004-04-07 | Spirogen Ltd | Amino acids |
| PL1720881T3 (pl) * | 2004-03-01 | 2013-05-31 | Medimmune Ltd | Pochodne 11-hydroksy-5h-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-onu jako kluczowe związki pośrednie do otrzymywania C2 podstawionych pirolobenzodiazepin |
| GB0404577D0 (en) | 2004-03-01 | 2004-04-07 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| DE102004010943A1 (de) | 2004-03-03 | 2005-09-29 | Degussa Ag | Verfahren zur Herstellung von N-geschützten 4-Ketprolinderivaten |
| WO2005085260A1 (en) | 2004-03-09 | 2005-09-15 | Spirogen Limited | Pyrrolobenzodiazepines |
| FR2869231B1 (fr) | 2004-04-27 | 2008-03-14 | Sod Conseils Rech Applic | Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine |
| GB0410725D0 (en) | 2004-05-13 | 2004-06-16 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents |
| SI1791565T1 (sl) | 2004-09-23 | 2016-08-31 | Genentech, Inc. | Cisteinsko konstruirana protitelesa in konjugati |
| EP1831418A2 (en) | 2004-12-24 | 2007-09-12 | Showa Denko Kabushiki Kaisha | Production method of thermoelectric semiconductor alloy, thermoelectric conversion module and thermoelectric power generating device |
| DK1844074T3 (da) | 2005-02-03 | 2013-07-15 | Antitope Ltd | Humane antistoffer og proteiner |
| CA2605507C (en) | 2005-04-19 | 2016-06-28 | Seattle Genetics, Inc. | Humanized anti-cd70 binding agents and uses thereof |
| PT1879901E (pt) | 2005-04-21 | 2010-03-29 | Spirogen Ltd | Pirrolobenzodiazepinas |
| US20070154906A1 (en) | 2005-10-05 | 2007-07-05 | Spirogen Ltd. | Methods to identify therapeutic candidates |
| ATE427949T1 (de) | 2005-10-05 | 2009-04-15 | Spirogen Ltd | 4-a4-(5-oxo-2,3,5,11a-tetrahydro-5h-pyrrolo a2, 1-cua1,4ubenzodiazepin-8-yloxy)-butyrylaminou-1 - pyrrol-2-carbonsaurealkylesterderivate und verwandte verbindung zur behandlung einer proliferativen erkrankung |
| AU2006302415B2 (en) | 2005-10-07 | 2012-09-13 | Exelixis, Inc. | Azetidines as MEK inhibitors for the treatment of proliferative diseases |
| PL1813614T3 (pl) | 2006-01-25 | 2012-03-30 | Sanofi Sa | Środki cytotoksyczne zawierające nowe pochodne tomaymycyny |
| JP5622390B2 (ja) | 2006-07-18 | 2014-11-12 | サノフイ | 癌治療用対ｅｐｈａ２アンタゴニスト抗体 |
| EP1914242A1 (en) | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Sanofi-Aventis | Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer |
| WO2008050140A2 (en) | 2006-10-27 | 2008-05-02 | Spirogen Limited | Compounds for treatment of parasitic infection |
| ES2523915T5 (es) | 2006-12-01 | 2022-05-26 | Seagen Inc | Agentes de unión a la diana variantes y usos de los mismos |
| CA2683568A1 (en) | 2007-05-08 | 2008-11-20 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates |
| SI2019104T1 (sl) | 2007-07-19 | 2013-12-31 | Sanofi | Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomaimicinske derivate, in njihova terapevtska uporaba |
| US8937161B2 (en) | 2007-10-19 | 2015-01-20 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered anti-TENB2 antibodies and antibody drug conjugates |
| GB0722087D0 (en) | 2007-11-09 | 2007-12-19 | Spirogen Ltd | Polyamides |
| GB0722088D0 (en) | 2007-11-09 | 2007-12-19 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| CA2711736A1 (en) * | 2008-01-18 | 2009-07-23 | Medimmune, Llc | Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation |
| NO2842575T3 (es) | 2008-03-18 | 2018-02-24 | ||
| GB0813432D0 (en) | 2008-07-22 | 2008-08-27 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| EP2349040B9 (en) | 2008-10-15 | 2014-12-17 | Zimmer GmbH | Intramedullary nail |
| GB0819097D0 (en) | 2008-10-17 | 2008-11-26 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| GB0819095D0 (en) | 2008-10-17 | 2008-11-26 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| RU2683325C2 (ru) | 2009-02-05 | 2019-03-28 | Иммьюноджен, Инк. | Новые производные бензодиазепина |
| FR2949469A1 (fr) | 2009-08-25 | 2011-03-04 | Sanofi Aventis | Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique |
| CA2775350A1 (en) | 2009-09-24 | 2011-03-31 | Seattle Genetics, Inc. | Dr5 ligand drug conjugates |
| EP2534158B1 (en) | 2010-02-09 | 2014-01-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Benzylpyrrolidinone derivatives as modulators of chemokine receptor activity |
| NZ602933A (en) | 2010-04-15 | 2014-09-26 | Seattle Genetics Inc | Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases |
| JP5972864B2 (ja) | 2010-04-15 | 2016-08-17 | メディミューン リミテッド | ピロロベンゾジアゼピン及びそれらのコンジュゲート |
| WO2011130615A2 (en) | 2010-04-15 | 2011-10-20 | Dr. Reddy's Laboratories Ltd. | Preparation of lacosamide |
| GB201006340D0 (en) | 2010-04-15 | 2010-06-02 | Spirogen Ltd | Synthesis method and intermediates |
| KR101671360B1 (ko) | 2010-04-15 | 2016-11-01 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 표적화된 피롤로벤조디아제핀 접합체 |
| ES2717657T3 (es) | 2011-02-15 | 2019-06-24 | Immunogen Inc | Métodos para la preparación de conjugados |
| BR112014006703A8 (pt) * | 2011-09-20 | 2018-01-09 | Spirogen Sarl | "pirrolobenzodiazepinas |
| JP6170497B2 (ja) | 2011-10-14 | 2017-07-26 | メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ | ピロロベンゾジアゼピン |
| AU2012322933B2 (en) | 2011-10-14 | 2017-02-02 | Medimmune Limited | Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines |
| EA026643B1 (ru) | 2011-10-14 | 2017-04-28 | Сиэтл Дженетикс, Инк. | Пирролбензодиазепины и конъюгаты направленного действия |
| ES2945932T3 (es) | 2011-10-14 | 2023-07-10 | Seagen Inc | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados dirigidos |
| EP2750713B1 (en) | 2011-10-14 | 2015-09-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| EA027386B1 (ru) | 2011-10-14 | 2017-07-31 | Медимьюн Лимитед | Пирролобензодиазепины |
| IN2014MN02092A (es) | 2012-04-30 | 2015-09-04 | Spirogen Sarl | |
| JP6125614B2 (ja) | 2012-04-30 | 2017-05-10 | ユーシーエル ビジネス ピーエルシー | ピロロベンゾジアゼピン |
| MX2015000359A (es) | 2012-07-09 | 2015-04-14 | Genentech Inc | Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd79b. |
| MX2015000357A (es) | 2012-07-09 | 2015-05-12 | Genentech Inc | Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd22. |
| CN104717979A (zh) | 2012-08-02 | 2015-06-17 | 基因泰克公司 | 抗etbr抗体和免疫偶联物 |
| EP2906252B1 (en) | 2012-10-12 | 2017-06-14 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-anti-her2 antibody conjugates |
| JP6392763B2 (ja) | 2012-10-12 | 2018-09-19 | エイディーシー・セラピューティクス・エス・アーＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａ | ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体 |
| BR112015008173A2 (pt) | 2012-10-12 | 2017-11-28 | Adc Therapeutics Sarl | conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo anti-psma |
| SI2839860T1 (sl) | 2012-10-12 | 2019-07-31 | MedImmune Limited, | Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati |
| EP2906297B1 (en) | 2012-10-12 | 2017-12-06 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| EP2906250B1 (en) | 2012-10-12 | 2018-05-30 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates |
| SI2906296T1 (en) | 2012-10-12 | 2018-06-29 | Adc Therapeutics Sa | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| US9919056B2 (en) | 2012-10-12 | 2018-03-20 | Adc Therapeutics S.A. | Pyrrolobenzodiazepine-anti-CD22 antibody conjugates |
| TR201902494T4 (tr) | 2012-10-12 | 2019-03-21 | Medimmune Ltd | Pirrolobenzodiazepinler ve onların konjugatları. |
| US9745303B2 (en) | 2012-10-12 | 2017-08-29 | Medimmune Limited | Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation |
| WO2014057118A1 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Adc Therapeutics Sarl | Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates |
| AU2013366490B9 (en) | 2012-12-21 | 2018-02-01 | Medimmune Limited | Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases |
| EP2935268B2 (en) | 2012-12-21 | 2021-02-17 | MedImmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| ME03394B (me) | 2013-02-22 | 2020-01-20 | Medimmune Ltd | Antidllз-antitelo-pbd konjugati i nihovа upotreba |
| AU2014230735B2 (en) | 2013-03-13 | 2018-03-15 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| SG11201507214SA (en) | 2013-03-13 | 2015-10-29 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| MX364330B (es) | 2013-03-13 | 2019-04-23 | Medimmune Ltd | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas. |
| US20160106861A1 (en) | 2013-04-26 | 2016-04-21 | Spirogen Sarl | Axl antibody-drug conjugate and its use for the treatment of cancer |
| WO2015052532A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| GB201317982D0 (en) | 2013-10-11 | 2013-11-27 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| WO2015052535A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| US20160256561A1 (en) | 2013-10-11 | 2016-09-08 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| US9950078B2 (en) | 2013-10-11 | 2018-04-24 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| GB201317981D0 (en) | 2013-10-11 | 2013-11-27 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| JP6681838B2 (ja) | 2013-12-16 | 2020-04-15 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | ペプチド模倣薬化合物及びその抗体−薬剤複合体 |
| GB201406767D0 (en) | 2014-04-15 | 2014-05-28 | Cancer Rec Tech Ltd | Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates |
-
2013
- 2013-10-11 TR TR2019/02494T patent/TR201902494T4/tr unknown
- 2013-10-11 PT PT181877655T patent/PT3470086T/pt unknown
- 2013-10-11 US US14/051,717 patent/US9415117B2/en active Active
- 2013-10-11 RS RS20190024A patent/RS58203B1/sr unknown
- 2013-10-11 HU HUE18187765A patent/HUE052835T2/hu unknown
- 2013-10-11 DK DK13780099.1T patent/DK2906248T3/en active
- 2013-10-11 ES ES13780099T patent/ES2713164T3/es active Active
- 2013-10-11 LT LTEP13780099.1T patent/LT2906248T/lt unknown
- 2013-10-11 AU AU2013328674A patent/AU2013328674B2/en active Active
- 2013-10-11 MX MX2015004560A patent/MX362004B/es active IP Right Grant
- 2013-10-11 LT LTEP18187765.5T patent/LT3470086T/lt unknown
- 2013-10-11 KR KR1020197032333A patent/KR102138220B1/ko active IP Right Grant
- 2013-10-11 CN CN201910645725.9A patent/CN110256469B/zh active Active
- 2013-10-11 JP JP2015536139A patent/JP6367811B2/ja active Active
- 2013-10-11 KR KR1020197038868A patent/KR20200003278A/ko not_active IP Right Cessation
- 2013-10-11 SI SI201331845T patent/SI3470086T1/sl unknown
- 2013-10-11 DK DK18187765.5T patent/DK3470086T3/da active
- 2013-10-11 RS RS20210002A patent/RS61294B1/sr unknown
- 2013-10-11 NZ NZ705910A patent/NZ705910A/en unknown
- 2013-10-11 SI SI201331325T patent/SI2906248T1/sl unknown
- 2013-10-11 ES ES18187765T patent/ES2847050T3/es active Active
- 2013-10-11 CN CN201380053485.4A patent/CN104703630A/zh active Pending
- 2013-10-11 KR KR1020157009875A patent/KR20150083994A/ko active Application Filing
- 2013-10-11 HU HUE13780099A patent/HUE043738T4/hu unknown
- 2013-10-11 PT PT13780099T patent/PT2906248T/pt unknown
- 2013-10-11 PL PL18187765T patent/PL3470086T3/pl unknown
- 2013-10-11 MX MX2018013577A patent/MX366303B/es unknown
- 2013-10-11 PL PL13780099T patent/PL2906248T3/pl unknown
- 2013-10-11 CA CA2885315A patent/CA2885315C/en active Active
- 2013-10-11 NZ NZ745069A patent/NZ745069A/en unknown
- 2013-10-11 WO PCT/EP2013/071235 patent/WO2014057073A1/en active Application Filing
- 2013-10-11 CA CA3060520A patent/CA3060520C/en active Active
- 2013-10-11 BR BR112015008251-3A patent/BR112015008251B1/pt active IP Right Grant
- 2013-10-11 EP EP18187765.5A patent/EP3470086B1/en active Active
- 2013-10-11 EP EP13780099.1A patent/EP2906248B1/en active Active
-
2015
- 2015-03-16 ZA ZA2015/01781A patent/ZA201501781B/en unknown
-
2016
- 2016-02-01 HK HK16101149.0A patent/HK1213183A1/zh unknown
-
2018
- 2018-07-04 JP JP2018127804A patent/JP6516909B2/ja active Active
-
2019
- 2019-02-26 CY CY20191100233T patent/CY1121390T1/el unknown
- 2019-02-26 HR HRP20190366TT patent/HRP20190366T1/hr unknown
-
2021
- 2021-01-22 HR HRP20210126TT patent/HRP20210126T1/hr unknown
- 2021-02-04 CY CY20211100096T patent/CY1123778T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10646584B2 (en) | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof | |
| ES2847050T3 (es) | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas | |
| ES2728869T3 (es) | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas | |
| EP3054989A1 (en) | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof | |
| BR112015008253B1 (pt) | Pirrolobenzodiazepinas e conjugados destas |