ES2646048T3

ES2646048T3 - Ésteres de ácido hialurónico, su preparación y uso en dermatología

Info

Publication number: ES2646048T3
Application number: ES12167497.2T
Authority: ES
Inventors: Lucio Claudio Rovati
Original assignee: Rottapharm SpA
Current assignee: Rottapharm SpA
Priority date: 2011-05-13
Filing date: 2012-05-10
Publication date: 2017-12-11
Anticipated expiration: 2032-05-10
Also published as: US20120289478A1; CN102775514A; CA2776222C; CA2776222A1; EP2522337A2; EP2522337B1; US9062129B2; CN102775514B; JP2012241192A; RU2012119458A; EP2522337A3; RU2598552C2; ITTO20110428A1; JP5995517B2

Abstract

Ésteres de ácido hialurónico con derivados del ácido hidroxicinámico

Description

DESCRIPCION

Esteres de acido hialuronico, su preparacion y uso en dermatologfa

5 La presente invencion se refiere a derivados noveles de acido hialuronico (HA) con derivados del acido hidroxicinamico, como el acido ferulico y el acido cafeico.

El HA es un glicosoaminglicano (GAG) que consiste en una secuencia repetida de una unidad de disacarido formada por acido glucuronico y N-acectilglucosamina.

10

El HA realiza varias funciones biologicas, que abarcan desde la regulacion del agua presente en los tejidos hasta la motilidad celular, y tambien tiene una funcion, en la dermis, como un andamio de soporte mediante su vinculacion con otras sustancias para formar complejos macromoleculares que proporcionan compacidad a la piel.

15 Los derivados hidroxicinamicos como el acido ferulico y el acido cafeico se distribuyen ampliamente en las semillas y hojas del mundo vegetal de forma libre o vinculados de forma covalente con lignina u otros biopolfmeros. Debido al nucleo fenolico y a la conjugacion extendida de la cadena lateral, forman radicales de fenoxi, que se estabilizan mediante resonancia lo que genera su potente funcion antioxidante y protectora para varias patologfas inflamatorias y en la propiedad protectora de las celulas expuestas a radiaciones ultravioletas.

20

El acido hialuronico es una sustancia hidratante que, a nivel de la piel, actua reteniendo el agua transepidermica. Es, sin embargo, una molecula altamente hidrofflica que penetra con dificultad en la capa cornea lipfdica y es ademas una sustancia que esta sometida a una rapida degradacion. Una de las ventajas de los compuestos de la presente invencion es que la presencia de substitutos del hidroxicinamico del polfmero modificado proporciona proteccion 25 contra la degradacion enzimatica accionada por la hialuronidasa que esta presente en los tejidos; ademas, la esterificacion del HA con los derivados del acido hidroxicinamico ha permitido obtener compuestos con propiedades lipofflicas mejoradas, con respecto al polfmero nativo y que por tanto puede bio-absorberse facilmente a traves de la epidermis.

30 En vista de sus propiedades qufmicas, ffsicas y biologicas, el HA ha sido particularmente estudiado y ha sido objeto de modificaciones estructurales y existen varias publicaciones y patentes relacionadas con nuevos derivados.

Se han realizado varios trabajos sobre los procesos para la reticulacion del HA para obtener productos viscoelasticos que se usaran principalmente para su administracion intra-articular en la terapia contra la artrosis, 35 como se describe por ejemplo, en EP 0 341 745, o para usarse tambien como anti-adhesivo post-quirurgico, como se describe por ejemplo en US 4.582.865.

Relativamente inferior es el numero de patentes o publicaciones relacionadas con los esteres obtenidos sobre los grupos de hidroxi del HA con acidos organicos.

40

Entre estas, podemos senalar el documento US 5.679.567, que describe la preparacion de HA acetilado con diferentes grados de sustitucion. El documento WO2005/092929 y Inv. New Drugs (2004), 22 (3), 207-217, describe esteres derivados del HA con acido butfrico, que dotan con actividad anti-proliferativa y que son por tanto potencialmente utiles para un uso antitumoral, mientras que el documento WO2008/081255 describe otros esteres 45 derivados del HA con acido butfrico, pero con un alto grado de reticulacion y que se usarfan principalmente como agentes de mejora de la viscosidad-elasticidad para la administracion intra-articular. Otros esteres derivados del HA se describen por Picotti et al. en el documento W02009/080220, donde el HA es esterificado con el acido lipoico para proporcionar derivados para el uso dermocosmetico o como dispositivo medico para un tratamiento intraarticular.

50

En nuestro conocimiento, hasta ahora, no hay ninguna descripcion de esteres polisacaridos y mas especfficamente de esteres del HA con derivados del acido hidroxicinamico, como el acido ferulico y el acido cafeico, para un uso dermoprotector como compuestos que tienen una actividad que mejora la elasticidad, hidrata y suaviza o para el uso como dispositivos medicos con actividad anti enrojecimiento o alivio de las afecciones eritematosas inducidas por 55 radiacion o como agentes de complementacion de la viscosidad.

La presente invencion describe esteres noveles derivados del acido hialuronico con derivados del acido hidroxicinamico, como el acido ferulico y cafeico, diferentes de los previamente citados derivados polisacaridos que fueron esterificados con diferentes acidos como el acido acetico, butfrico y lipoico.

El grado de sustitucion del acido hialuronico esterificado de acuerdo con la invencion puede ajustarse y depende de las condiciones de reaccion aplicadas como, por ejemplo, la proporcion estequiometrica entre el acido hialuronico y el derivado hidroxicinamico preactivado con carbonildiimidazol, la cantidad de base catalftica que se utiliza y el tiempo de reaccion, y se comprende, dentro del ambito de las condiciones experimentales investigadas, entre el 2% 5 y el 20%.

Las caracterfsticas qufmicas, ffsicas y reologicas de los derivados obtenidos de acuerdo con la invencion pueden cambiarse, por tanto, cambiando el grado de esterificacion del acido hialuronico con el componente hidroxicinamico. Dichos derivados pueden usarse topicamente como hidratante, mejorador de la elasticidad, anti edad, agentes anti 10 acne o tambien para tratamientos de lesiones en la piel de diferente naturaleza como heridas, dermatitis atopica, o hipertemias de la piel inducidas por radiaciones de diferente naturaleza.

La invencion tambien reivindica un procedimiento para preparar dichos derivados, que es diferente y novel con respecto a la tecnica anterior. Dicho procedimiento de hecho contempla una recuperacion de los productos de 15 reaccion por medio de precipitacion con acetona, seguida de una purificacion por tratamiento con metanol, filtrado y secado bajo vacfo, lo que permite eliminar las impurezas del proceso de sfntesis sin la necesidad de usar procesos lentos y costosos como la dialisis o filtracion tangencial, con la posterior recuperacion del producto final deseado por medio de liofilizacion o secado por atomizacion.

20 EJEMPLOS

Los experimentos RMN fueron registrados usando un instrumento Bruker Avance 400. Los compuestos se disolvieron en D2O a un pH 12 con el uso de una gota de KOD con una concentracion de aproximadamente 5mg/ml.

25 En la zona aromatica comprendida entre 6 y 8 ppm se pueden observar las senales aromaticas debido a la esterificacion, mientras que la senal muy fuerte del metilo singlete del acido hialuronico es visible a aproximadamente 1,8 ppm. La integracion de estas senales proporciona el grado de esterificacion de las muestras.

Ejemplo 1: Preparacion del acido ferulico del acido hialuronico con un grado medio de sustitucion 30 (compuesto 1)

3 g de hialuronato de sodio (mw 404; 7,9 meq. en unidades monomericas, peso molecular de 300 kD) se disuelven a 90° C en 60 ml de formamida. Tras enfriarse a temperatura ambiente, se anaden 1,05 ml de trietilamina (7,5 meq.) y 0,5 g de feruloilimidazol (mw 244; 1,99 meq.) suspendidos en 10 ml de formamida y preparado como se describe 35 en Molecules 2007, 12, p. 2540-2544, compuesto 12, a la solucion asf obtenida.

Tras una reaccion durante la noche a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se diluye con 15 ml de NaCl al 5%. La solucion inicialmente altamente viscosa, que de esta forma es mas fluida, se vierte, gota a gota, en 1 litro de acetona anhidra. El precipitado obtenido de este modo se filtra, se somete de nuevo a agitacion con 400 ml de 40 acetona anhidra, se vuelve a filtrar y de nuevo a agita con 200 ml de metanol anhidro.

Tras filtrar y secar bajo vacfo a 40° C, se recuperan 3,1 g de muestra anhidra.

El compuesto obtenido de este modo se analiza mediante espectroscopia IR, RMN y analisis elemental.

45

Se obtuvo un grado de sustitucion (esterificacion) del 8%, calculando la proporcion de las senales de integracion (RMN) entre la senal del grupo metflico del HA y la senal doblete del acido ferulico (cf. RMN de la figura 1).

Ejemplo 2: Preparacion ester ferulico del acido hialuronico con un grado bajo de sustitucion.

50

Se sigue el mismo procedimiento del ejemplo 1, sin embargo se reduce el tiempo de reaccion antes de la adicion del NaCl a solo 2 horas. Se obtienen 2,8 g de compuesto anhidro con un grado de esterificacion del 4% (cf. RMN figura 2).

55 Ejemplo 3: Preparacion ester ferulico del acido hialuronico con un grado alto de sustitucion.

Se sigue el procedimiento del ejemplo 1, sin embargo se aumenta el tiempo de reaccion antes de la adicion de NaCl a 24 horas y la cantidad de imidazol a 1,9 g (7,9 meq.). Se obtienen 3,3 g de compuesto anhidro con un grado de esterificacion del 17% (cf. RMN figura 3).

Ejemplo 4: Preparacion del acido cafeico de acido hialuronico.

A una solucion de acido cafeico (0,51 g, 2,83 mmol) en THF anhidro (10 ml), se anade 1,1'-carbonildiimidazol (CDI, 0,92 g, 5,67 mmol). La mezcla resultante se mantuvo bajo reflujo durante 1 hora y la mezcla de reaccion se utilizo 5 directamente en el siguiente paso.

Se disolvio hialuronato de sodio (3,0, 7,92 mmol en unidades monomericas) en formamida (60 ml) a 70° C en 1 hora en un balon de dos cuellos colocado en un bano de arena. La solucion viscosa e incolora obtenida de esta forma se enfrio a temperatura ambiente y se anadio con TEA (1,1 ml, 7,92 mmol) y con la solucion en THF de imidazol 10 (aproximadamente 2,8 mmol). La mezcla se agito hasta que se obtuvo una solucion homogenea de color anaranjado-rojizo. La viscosidad y la consistencia de la solucion aumento hasta un punto que llevo en unos minutos a la formacion de un aglomerado gelatinoso de color anaranjado-rojizo (gomoso y elastico). Tras haberlo mantenido en descanso a temperatura ambiente durante la noche, el aglomerado se anadio a una solucion de NaCl al 5% w/v (15 ml).

15

El gel obtenido fue tratado con 200 ml de acetona, filtrada, re-suspendida bajo agitacion dos veces con 100 ml de metanol, filtrado y secado bajo vacfo. Se obtuvieron 2,5 g de producto anhidro con color amarillo ocre.

Una muestra de aproximadamente 6 mg del polfmero se dejo aumentar en 0,7 ml de D2O para obtener un gel 20 perfectamente transparente e incoloro. El gel se transfirio a un tubo RMN y el analisis (figura 4) mostro senales doblete entre 6 y 7,2 ppm, que puede atribuirse a los hidrogenos aromaticos del acido cafeico esterificado y la fuerte senal singlete del grupo de metilo a 1,8 ppm. La adicion de una gota de NaOD al 40% en D2O permitio cuantificar el grado de derivatizacion del hialuronato de sodio, que se constato que era igual al 7%.

25 Ejemplo 5: Evaluacion de la resistencia contra la degradacion enzimatica.

La presencia de microorganismos en la epidermis causa una actividad biologica relevante en la piel, una actividad que se muestra en forma de varias funciones enzimaticas, entre las cuales las realizadas por la enzima hialuronidasa. El acido hialuronico (HA) se degrada naturalmente debido a la presencia de dicha enzima, que 30 cataliza su degradacion por medio de la hidrolisis de los enlaces glucosfdico beta 1.4 entre las unidades monomericas de la cadena de polisacaridos. El HA reticulado es altamente resistente a la accion enzimatica de la hialuronidasa y dicha resistencia aumenta con el aumento del grado de reticulado. La esterificacion del HA con moleculas que tienen una estructura qufmica adecuada como los derivados del acido hidroxicinamico de acuerdo con la invencion, ha permitido obtener compuestos con caracterfsticas reologicas que pueden compararse con un 35 HA reticulado, manteniendo sin embargo un buen grado de solubilidad en agua.

Se utilizaron sal de sodio de HA comercial (peso molecular de 300 kD), como la usada en la sfntesis descrita previamente, y dos muestras de HA esterificado con acido ferulico con un grado de esterificacion bajo y alto como se describe respectivamente en los ejemplos 2 y 3 anteriores.

40

El experimento se realizo siguiendo procedimientos convencionales.

Poco despues, se incubo a 37° C una solucion de polisacaridos (1 mg/ml) mantenida a 37° C y que contenfa la enzima en una cantidad igual a 0,1 mg/ml (hialuronidasa testicular bovina, tipo I-S, Sigma, 1000 U/mg). A intervalos 45 de tiempo regulares, en el rango de 0 a 2 horas, se tomaron muestras en una cantidad de 0,5 ml y se pusieron a 100° C durante 5 minutos, se filtraron para eliminar la enzima y despues se analizaron mediante un analisis cromatografico de exclusion por tamano: el procesamiento del cromatograma permite determinar la distribucion del peso molecular.

50 Tras 30 minutos de incubacion con la enzima, el HA comercial no esterificado se sometio a una fuerte degradacion, cambiando desde un peso molecular medio de aproximadamente 300 kD a un valor aproximadamente 10 veces mas bajo. La muestra relacionada con el ejemplo 2, con un grado de esterificacion de aproximadamente el 4%, se sometio a una degradacion de aproximadamente el 60%, mientras que la muestra relacionada con el ejemplo 3, con un alto grado de esterificacion, se sometio solo a un proceso de degradacion imitado cambiando a un peso 55 molecular medio de aproximadamente 250 kD.

Ejemplo 6: Estudio reologico sobre una muestra de HA esterificado con acido ferulico.

El comportamiento reologico de un compuesto de acuerdo con la invencion (compuesto del ejemplo 1) se comparo 60 con el de la sal de sodio de HA (peso molecular de 300 kD) usada como la materia prima de inicio para la

preparacion de los esteres de acuerdo con la invencion.

Las mediciones reologicas se realizaron utilizando un reometro Rotovisco 1-Haake, sistema placa/placa, software Rheowin 323. La viscosidad se midio mediante un gradiente de velocidad del disco, "tasa de corte", desde 0,01 s-1 a 5 500 s-1 y las muestras se disolvieron en la cantidad del 2% en solucion salina de NaCl al 5%.

La muestra relacionada con el ejemplo 1 mostraba un comportamiento reologico del tipo pseudo-plastico, donde la viscosidad disminuye al aumentar la tasa de corte (cf. figuras 5a y 5b). Los parametros calculados del diagrama de flujo, obtenido al aplicar la relacion Ostwald de Waele, eran, respectivamente: K (Pa.s), es decir, fndice de 10 consistencia de flujo igual a 9,97 +/-0,53 (n=3) y n=0,47 (fndice de comportamiento de flujo, es decir la pendiente de la curva de viscosidad, en una escala logarftmica, como una funcion del gradiente de velocidad).

En la practica, este resultado lleva a concluir que la esterificacion del HA con acido ferulico proporciona cadenas que a cortes bajos tienen conformaciones de impedimento no lineales nada despreciables, que pueden interactuar entre 15 ellas. Al aumentar el corte aplicado, las cadenas tienden a alinearse con el flujo, revertiendo asf el sistema al comportamiento nativo.

Por el contrario, el HA nativo no modificado tiene un perfil tfpico de las soluciones, con un valor K muy bajo (K=0,40 Pa.s).

20

Ejemplo 7: La actividad Anti-ROS del HA ferulico (Ejemplo 1) en los neutrofilos humanos activados.

Se investigo si los compuestos de acuerdo con la invencion podfan mantener la actividad antioxidante de recogida de anti-radicales de los sustratos de acidos hidroxicinamicos usados para la esterificacion del HA.

25

Hemos estudiado la capacidad del compuesto 1 de inhibir, in vitro, la actividad de las moleculas reactivas de oxfgeno (ROS) producidas por los leucocitos neutrofilos humanos, activadas por Forbol-Miristato-Acetato (PMA) en la presencia de Luminol, una sustancia que en presencia de oxidantes, como el H2O2, exhibe quimiluminiscencia.

30 Por tanto, las cantidades de suspensiones de celula de los leucocitos (106celula/ml) se incubaron con compuesto 1 disuelto en una solucion reguladora en la presencia de Luminol (5 pM). Las celulas se incubaron a 37° C durante 10 minutos con el compuesto 1 o con sal de sodio de HA nativa en una concentracion del 0,02 y 0,2 nM. A partir de entonces, las celulas se activaron con PMA de 0,1 pM y la quimiluminiscencia se monitorizo durante 20 minutos a intervalos de tiempo de 4 minutos con el lector de fluorescencia HTS7000 (Perkin Elmer).

35

El compuesto 1 mostro un maximo de inhibicion del 78% a la concentracion probada mas alta, mientras que el HA estaba practicamente inactivo, mostrando que la introduccion de acido ferulico en el polisacarido disminuyo la actividad anti-radical del sustrato inicial.

40 Ejemplo 8: Preparacion de una crema suavizante O/W con un filtro solar.

Como un ejemplo no limitante de la invencion, se preparo una formula en crema que contenfa un derivado de ester de acuerdo con la invencion, reforzada mediante la adicion de una sustancia dotada con un factor de proteccion solar (UVB) como gamma-oryzanol, para asf integrar la accion de la fraccion del cromoforo en el polisacarido 45 modificado.

La formula contiene el compuesto 1 descrito en el ejemplo 1 a una concentracion del 2%, mezclado con excipientes convencionales usados en dermatologfa, como agentes emulsificantes, conservantes, agentes calmantes, disolventes y un producto que tiene una actividad protectora contra las radiaciones solares, llamado gamma- 50 oryzanol.

Brevemente, el proceso de preparacion fue el siguiente:

a) fase grasa: carbonato dicaprflico, coco-caprilato, poligliceril-2 dipolihidroxiestearato, y fenoxietanol se disolvieron 55 bajo agitacion mediante calor hasta aproximadamente 80° C en un disolvente; tras la disolucion, se anadio gamma-

oryzanol;

b) fase acuosa: agua, dehidroacetato de sodio y el compuesto 1 se cargaron en un emulsificador turbo; tras calentar hasta aproximadamente 60° C hasta su disolucion, se anadieron componentes adicionales siempre bajo un ligero agitado, siendo la mezcla emulsificadora glucosa de laurilo carboxilato de sodio/glucosido de laurilo y la mezcla

60 conservante metilpropanediol/fenilpropanol;

c) emulsion: la fase grasa se vertio bajo agitacion en la fase acuosa y se activo la turbina durante 10 minutos; la masa de reaccion eventualmente se enfrio lentamente, siempre bajo agitacion, hasta la temperature de 20/25° C.

Se obtuvo una crema con la siguiente composicion (% por peso):

5

Compuesto 1: 2

Carbonato de dicaprililo: Agente calmante 10

Coco caprilato: Agente calmante 10

Poliglic.-dipolihidroxiestearato: Agente emulsificador 8

Fenoxietanol: Conservantes 1

Gamma-oryzanol: Filtro UVB 4

Dehidroacetato de sodio: Conservantes 0,5

Metilpropanediol/fenilpropanol: Conservantes 1,5

Glucosa de laurilo carboxilato de sodio: Agente emulsificador 1,5

Lauril glucosido: Agente emulsificador 1,5

Agua quod suficiente a 100

Ejemplo 9: Ensayo funcional de la actividad dermocosmetica.

10

Se investigaron las actividades funcionales dermocosmeticas como la hidratacion y la elasticidad de la piel con el uso de la formula prototipo mostrada en los ejemplos precedentes, con un panel de voluntarios entrenados expresamente. En el estudio, la actividad de la formula del ejemplo 8 se comparo con la misma formula sin el ingrediente activo (Control) en dos grupos de voluntarios tratados dos veces al dfa durante un periodo de cuatro 15 semanas (tiempos T0 y T4w).

a) Elasticidad de la piel: la evaluacion de la elasticidad de la piel se realizo con "medidor de la piel", un instrumento de medicion que, mediante una sonda aplicada a la piel, produce en la sonda en si misma una presion negativa (succion) durante 1 segundo, seguido de su liberacion. La elasticidad se calcula mediante la proporcion entre la

20 deformacion residual y la extension maxima de la piel. Dicha proporcion, conocida en la bibliograffa como el parametro R2, muestra la capacidad de la piel para volver a su estado de descanso original tras un evento de estres. Cuanto mas se acerque dicho valor a 1, mayor sera la elasticidad de la piel.

El tratamiento del grupo relacionado con la formula del ejemplo 8 arrojo una variacion de porcentaje del parametro R2 en el tiempo T4w referido al tiempo inicial T0 de 27,5% (prueba p<0,05 t), mientras que la misma variacion de 25 porcentaje para el grupo Control no era significativa. Dicho resultado ha demostrado que el compuesto 1 de acuerdo con la invencion esta dotado con una actividad de mejora de la elasticidad relevante, resultando en el aumento del parametro R2 que no se encontro en el grupo Control preparado con los mismos excipientes.

b) Hidratacion de la piel: el nivel de hidratacion de la piel del rostro se midio con un "corneometro", un instrumento 30 que mide la hidratacion de la piel sobre el principio fisico de capacitancia. El instrumento consiste en un sensor

cuadrado con un area de 49 mm2. Al presionar la superficie del sensor sobre una zona plana de la piel del rostro, el instrumento proporciona un numero proporcional al contenido de agua en la capa cornea. El numero proporciona por tanto la medicion de la hidratacion de la piel de la superficie de la piel expresada como unidades corneometricas (desde 0 a 150 c.u.), que son unidades arbitrarias del instrumento.

35

Al final de la prueba, el grupo tratado con la formula del ejemplo 8 registro un aumento de la variacion del porcentaje de los valores de hidratacion de la piel igual al 4,8% contra ninguna variacion del grupo Control usado con fines comparativos. Se constato, sin embargo, que dicho aumento estaba cerca del lfmite de significancia, un resultado que probablemente se debe al numero relativamente bajo de miembros del panel usado (n=10).

Claims

REIVINDICACIONES

I. Esteres de acido hialuronico con derivados del acido hidroxicinamico.

5 2. Esteres de acido hialuronico de acuerdo con la reivindicacion 1, donde los derivados del acido

hidroxicinamico son acido ferulico y acido cafeico.
3. Esteres de acido hialuronico de acuerdo con la reivindicacion 1, donde el peso molecular del acido hialuronico esta entre 200 mil y 400 mil Dalton.

10
4. Esteres de acido hialuronico de acuerdo con la reivindicacion 2, donde el grado de sustitucion de los acidos cefeico y ferulicos en los polisacaridos esta entre el 2% y el 20%.
5. Procedimiento para la preparacion de esteres de acido hialuronico (HA) de acuerdo con la 15 reivindicacion 1, donde la sal de sodio de acido hialuronico se disuelve en formamida, dicha sal reacciona en la

presencia de una cantidad equivalente de una base terciaria, con un derivado del acido hidroxicinamico, previamente activado con carbonildiimidazol (CDI) a temperatura ambiente, la masa viscosa obtenida se diluye con una solucion acuosa de NaCl, el producto de la reaccion se recupera mediante precipitacion con acetona, seguida de purificacion con metanol, filtrado y secado bajo vacfo.

20
6. Procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 5, en el cual el derivado es acido hidroxicinamico, acido ferulico.
7. Procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 5, en el cual el derivado es acido hidroxicinamico, 25 acido cafeico.
8. Procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 5, en la cual el acido activado con CDI esta presente en una proporcion con respecto al HA de entre 0,25 y 1 equivalente dependiendo del grado deseado de esterificacion que esta comprendido entre el 2% y el 20%.

30
9. Procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 5, en la cual se permite que el HA reaccione con el acido activado con CDI durante un tiempo de entre 1 y 24 horas dependiendo del grado de esterificacion deseado, entre el 2% y el 20%.

35 10. Esteres de acido hialuronico de acuerdo con la reivindicacion 1 para su uso en el tratamiento topico de

lesiones de la piel como heridas, ulceras, dermatitis, psoriasis, o hipertermina inducida por radiacion.

II. Esteres de acido hialuronico de acuerdo con la reivindicacion 1 para su uso en el tratamiento topico como hidratantes, agentes de elasticidad, agente anti edad o agente anti acne.

40
12. Esteres de acido hialuronico de acuerdo con la reivindicacion 1 para su uso en el tratamiento intraarticular como agentes para suplementar la viscosidad.
13. Composiciones topicas que comprenden esteres de acido hialuronico de acuerdo con la reivindicacion 45 1, y excipientes inertes dermatologicamente aceptables.
14. Composiciones topicas de acuerdo con la reivindicacion 13, que incluyen un porcentaje de ester de acido hialuronico entre el 0,1% y el 5% por peso de la composicion.

50 15. Composiciones topicas de acuerdo con la reivindicacion 13 en forma de crema, gel, unguento, locion

acuosa o hidro-alcoholica, emulsion de aceite/agua o agua/aceite.
16. Esteres de acido hialuronico de acuerdo con la reivindicacion 1, donde el grupo carboxilo se salifica

con sodio.