ES2644752T3 - Terapia de combinación inyectable para trastornos oculares - Google Patents

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Description

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DESCRIPCION
Terapia de combinacion inyectable para trastornos oculares Antecedentes de la invencion
Degeneracion macular es un termino que se refiere a y describe una diversidad de enfermedades diferentes caracterizadas por cambios degenerativos en la macula, todos los cuales conducen a una perdida de la vision central. La macula es un area pequena de la retina del ojo, de aproximadamente 3 a 5 milfmetros de tamano, adyacente al nervio optico. Es el area mas sensible de la retina y contiene la fovea, una region deprimida que permite alta agudeza visual y contiene una densa concentracion de conos, los fotorreceptores que son responsables de la vision del color. La degeneracion macular relacionada con la edad (ARMD) es la causa mas habitual de ceguera funcional en los pafses desarrollados para aquellos con mas de 50 anos de edad. La enfermedad se caracteriza por degeneracion progresiva de la retina, el epitelio pigmentario retiniano (RPE), y la coroides subyacente (el tejido altamente vascular que descansa debajo del RPE, entre la retina y la esclerotica). Las celulas del RPE reciclan pigmento visual (rodopsina), fagocitan los extremos de los fotorreceptores diariamente como parte de la regeneracion de bastones y conos, y transportan fluido a traves de la membrana de la coroides. La vision central se deteriora cuando las celulas del RPE dejan de funcionar de forma apropiada. A pesar de la investigacion exhaustiva, la patogenesis de la ARMD no se comprende completamente. Pueden contribuir estres oxidativo, inflamacion, antecedentes geneticos, y factores ambientales o de comportamiento tales como fumar y la dieta.
Un distintivo clmico de la ARMD es la aparicion de drusas, depositos localizados de material lipoproteinaceo que se acumula en el espacio entre el RPE y la membrana de Brunch. Las drusas son por lo general el hallazgo clmico mas temprano de la ARMD, y la existencia, ubicacion, y numero de drusas se usan en la clasificacion de la enfermedad en estadios y progresion de monitorizacion (Ambati, J., et al., Surv. Ophthalmol., 48(3): 257-293, 2003; "Preferred Practice Pattern: Age-Related Macular Degeneration", American Academy of Ophthalmology, 2003).
Se ha clasificado la ARMD en las formas "seca" y "humeda" (exudativa, o neovascular). La ARMD seca es mucho mas habitual que la humeda, pero la forma seca puede progresar hacia la forma humeda, y producirse las dos simultaneamente en un numero considerable de casos. La ARMD seca se caracteriza por lo general por apoptosis progresiva de las celulas del RPE, las celulas fotorreceptoras suprayacentes, y frecuentemente tambien las celulas subyacentes de la capa capilar coroidal. Las areas de confluencia (por ejemplo, al menos 175 pm de diametro mmimo) de muerte de celulas de RPE acompanadas por atrofia de fotorreceptores suprayacentes se denominan atrofia geografica. Los pacientes con esta forma experimentan un deterioro lento y progresivo de la vision central. La ARMD humeda se caracteriza por hemorragia y/o derrame de fluidos de vasos anomalos que han crecido a partir de los vasos coroidales (coriocapilares) por debajo del RPE y la macula. Esto puede ser responsable de una perdida de vision repentina y discapacitante. Gran parte de la perdida de vision que experimentan los pacientes se debe a tal neovascularizacion coroidal (CNV) y a sus complicaciones. Se ha identificado un subtipo de ARMD neovascular en el que la proliferacion angiomatosa se origina a partir de la retina y se extiende posteriormente al espacio subretiniano, comunicando finalmente en algunos casos con nuevos vasos coroidales (Yannuzzi, L.A., et al., Retina, 21(5):416-34, 2001). Esta forma de ARMD neovascular, denominada proliferacion angiomatosa retiniana (RAP) puede ser particularmente grave. La existencia de drusas maculares es un factor de riesgo importante para el desarrollo tanto de la forma humeda como la forma seca de ARMD.
Los paneles de la Figura 1 muestran las estructuras presentes en un ojo normal y algunos de los procesos que se producen en la ARMD. Las Figuras 1A y 1B muestran las estructuras presentes en los segmentos anterior y posterior del ojo. Las Figuras 1C-1E representan las capas exteriores de un ojo normal (1C), un ojo que padece ARMD seca (1D), y un ojo que padece ARMD humeda (1E). La capa nuclear exterior (ONL) contiene nucleos de los fotorreceptores bastones y conos. Cada fotorreceptor contiene un segmento interior (IS) y un segmento exterior (OS), el ultimo de los cuales contiene el pigmento rodopsina, que inicia la cascada de fototransduccion que sigue a la exposicion a la luz. El RPE descansa bajo los fotorreceptores y sobre la membrana de Bruch. Como se muestra en las Figuras 1D y 1E, la estructura normal de la retina esta alterada mediante una diversidad de formas como en los pacientes que ARMD.
El edema macular esta asociado a una diversidad de trastornos oculares que incluyen ARMD, retinopatfa diabetica, afecciones inflamatorias tales como uveitis anterior o posterior, etc. La macula se vuelve espesa como resultado de la acumulacion de fluido que se pierde de los vasos sangumeos debilitados o anomalos de otro modo de los tejidos circundantes. El derrame de sangre u otros fluidos y el aumento resultante en el espesor macular puede conducir a alteraciones agudas en la agudeza visual, percepcion del color, etc. De ese modo, el edema macular puede contribuir a las alteraciones y perdidas visuales que experimentan los individuos que padecen ARMD y una diversidad de otros trastornos oculares.
El desarrollo de terapias farmacologicas para ARMD y otros trastornos oculares asociados a la neovascularizacion del ojo es un area de investigacion activa. Se ha centrado gran cantidad de esfuerzo en metodos para destruir o sellar los vasos sangumeos anomalos y/o inhibir su desarrollo. La terapia fotodinamica implica administracion intravenosa sistemica de un colorante sensible a la luz (verteporfina) que se activa en el ojo mediante un laser,
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dando como resultado la formacion de productos toxicos dentro de los vasos sangumeos anomalos. La administracion local de inhibidores de la angiogenesis en el ojo se muestra considerablemente prometedora. La Administracion de Alimentos y Farmacos de los Estados Unidos de America aprobo el farmaco pegaptanib sodico (Macugen®; Pfizer/Eyetech) para el tratamiento de degeneracion macular relacionada con la edad humeda a finales del 2004. Macugen es un aptamero que se une a una isoforma del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), una protema que actua como senal en el desencadenamiento del crecimiento de vasos sangumeos anomalos, el aumento de permeabilidad, y el derrame consecuente que caracteriza la ARMD humeda. La union de Macugen al VEGF evita que se una a los receptores de VEGF, inhibiendo de ese modo su actividad. Otros inhibidores de la angiogenesis para el tratamiento de ARMD exudativa incluyen anticuerpos monoclonales tales como ranibizumab (Lucentis®; Genentech) que se unen al VEGF y bloquean su interaccion con los receptores de VEGF.
Los inhibidores de la angiogenesis que interfieren con las rutas de transduccion de senal que desempenan un papel fundamental en la angiogenesis, tales como la ruta del VEGF, ofrecen un poderoso enfoque para controlar la neovascularizacion. Sin embargo, la terapia con inhibidores de la angiogenesis sola tiene una diversidad de desventajas. Los ensayos clmicos de los inhibidores de la angiogenesis que interfieren con la ruta del VEGF han implicado su administracion en solucion por inyeccion intravttrea a intervalos de 4-6 semanas. Desafortunadamente, este procedimiento esta asociado a un riesgo significativo de complicaciones tales como lesion traumatica del cristalino, desprendimiento de retina, y endoftalmitis asociada a traumatismo o infeccion intraocular. Con un riesgo global de un 1 %, durante el curso de un ano, un intervalo de dosificacion de 6 semanas dana como resultado un riesgo global de aproximadamente un 9 % por ojo, mientras que un intervalo de dosificacion de 4 semanas dana como resultado un riesgo global de aproximadamente un 13% por ojo. Por estas y otras razones, los enfoques actuales para el uso de inhibidores de la angiogenesis siguen siendo una solucion menos que optima para tratar ARMD humeda. Sigue existiendo la necesidad en la tecnica de enfoques mejorados para tratar ARMD. Tambien sigue existiendo la necesidad de enfoques mejorados para tratar otras afecciones caracterizadas por degeneracion macular, neovascularizacion coroidal, neovascularizacion retiniana, proliferacion angiomatosa retiniana, y/o derrame de vasos sangumeos en el ojo.
El sumario de la invencion
La invencion es como se define en las reivindicaciones. En un primer aspecto, la presente invencion proporciona un primer y un segundo agentes terapeuticos para su uso en el tratamiento de un trastorno ocular caracterizado por degeneracion macular, neovascularizacion coroidal o neovascularizacion retiniana, en el que
se administran al ojo del sujeto cantidades eficaces del primer y el segundo agentes terapeuticos, opcionalmente en un procedimiento individual;
el primer agente terapeutico es un agente anti-VEGF seleccionado entre el grupo que consiste en anticuerpos o fragmentos de anticuerpo que se unen a VEGF, una protema de fusion que contiene dominios extracelulares de dos receptores de VEGF conectados a la region Fc de un anticuerpo, y acidos nucleicos que se unen al VEGF; y el segundo agente terapeutico se selecciona entre el grupo que consiste en un analogo de compstatina que tiene al menos una actividad inhibidora de complemento 5 veces mayor que la compstatina, un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo monoclonal que se une a C3 y un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo que se une a C5, factor B o factor D.
Ciertas caractensticas preferentes de la invencion se exponen en las reivindicaciones dependientes en el presente documento. En ciertas realizaciones de la invencion, al menos una parte del primer agente terapeutico, opcionalmente basicamente la dosis completa administrada del primer agente terapeutico, se proporciona en forma de un componente de una formulacion de liberacion sostenida. El primer y el segundo agentes terapeuticos se pueden proporcionar en forma de componentes de una formulacion de liberacion sostenida individual o en forma de componentes de formulaciones de liberacion sostenida distintas.
En ciertas realizaciones de la invencion, el procedimiento es un procedimiento de inyeccion, por ejemplo, una inyeccion intravttrea. En ciertas realizaciones, el procedimiento es un procedimiento de inyeccion en el que, antes de la administracion, el primer agente terapeutico esta contenido en una jeringa y la formulacion de liberacion sostenida que comprende el segundo agente terapeutico esta contenida en una aguja unida a la jeringa. Por ejemplo, el primer agente terapeutico puede estar disuelto en un medio lfquido situado en la jeringa y la formulacion sostenida del segundo agente terapeutico puede comprender un implante ocular situado en la aguja.
En cualquier realizacion de la invencion, la formulacion de liberacion sostenida puede comprender un implante ocular. En cualquier realizacion de la invencion, la formulacion de liberacion sostenida puede comprender un polfmero y uno o mas agentes terapeuticos.
En otro aspecto, la invencion proporciona un artmulo de fabricacion que comprende el primer y el segundo agentes terapeuticos del primer aspecto, en el que el artmulo de fabricacion comprende una aguja que contiene el segundo agente terapeutico, en el que el artmulo de fabricacion comprende ademas opcionalmente una jeringa, tal como una jeringa que contiene el primer agente terapeutico y/o en el que el artmulo de fabricacion contiene una forma de dosificacion unitaria del primer agente terapeutico y/o una forma de dosificacion unitaria del segundo agente terapeutico.
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El ardculo de fabricacion puede comprender ademas una jeringa, en el que el ardculo de fabricacion contiene al menos un compartimento y la jeringa y la aguja estan alojadas en un compartimento individual del artfculo de fabricacion y/o en el que la jeringa y la aguja estan unidas entre sf o en el que el artfculo de fabricacion contiene al menos dos compartimentos, y en el que la jeringa y la aguja estan alojadas en compartimentos individuales.
En otro aspecto, la invencion proporciona un artfculo de fabricacion que comprende el primer y el segundo agentes terapeuticos del primer aspecto, en el que cada agente terapeutico esta contenido en una jeringa individual y en el que el artfculo de fabricacion comprende ademas opcionalmente una aguja.
En cualquier realizacion de la presente invencion, el trastorno ocular puede ser una afeccion relacionada con degeneracion macular, retinopatfa diabetica, retinopatfa de la prematuridad, o cualquier afeccion que presente CNV, RNV, o RAP.
El primer agente terapeutico se puede seleccionar entre el grupo que consiste en: Macugen® (pegaptanib sodico) u otro aptamero o ligando de acido nucleico del VEGF; Lucentis® (ranibizumab), Avastin® (bevacizumb) u otro anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se una espedficamente a VEGF; combretastatina o un derivado o profarmaco de la misma tal como Combretastatina A4 Profarmaco (CA4P); trampa de VEGF; EVIZON™ (lactato de escualamina); AG-013958 (Pfizer, Inc.); JSM6427 (Jerini AG), p2-glicoprotema 1 (p2-GP1), y ARN pequeno de interferencia (siARN) o ARN de horquilla pequena (shARN) que inhibe la expresion de una o mas isoformas del VEGF, o inhibe la expresion de un receptor de VEGF. En ciertas realizaciones de la invencion, el agente terapeutico no es un esteroide.
Los expertos en la materia entenderan que ciertos compuestos incluidos en las estructuras del presente documento pueden exhibir tautomena, isomena conformacional, isomena geometrica y/o estereoisomena. Se ha de entender que la invencion incluye el uso de cualquier forma tautomerica, isomerica conformacional, enantiomerica y/o isomerica geometrica de los compuestos que se describen en el presente documento. Cualquier referencia en el presente documento que emplee una nomenclatura que corresponda a formulas estructurales ilustradas que representen solo una de varias formas tautomericas (o estructuras de resonancia) no se pretende que limite el alcance de los compuestos que se describen en el presente documento. Los expertos en la materia tambien reconoceran que los compuestos que se desvelan para el uso en la invencion pueden existir en numerosos estados de protonacion diferentes que dependen, entre otras cosas, del pH de su entorno. Cuando las formulas estructurales que se proporcionan en el presente documento representan los compuestos en solo uno de varios estados de protonacion posibles, se ha de entender que estas estructuras son unicamente ilustrativas, y que la invencion no se limita a ningun estado de protonacion particular - se pretende que todas y cada una de las formas protonadas entren dentro del alcance de la invencion.
En ciertas realizaciones, los compuestos de uso en la presente invencion pueden portar multiples cargas positivas o negativas y pueden tener asociados a los mismos los contraiones apropiados. La identidad de los contraiones que estan asociados puede estar gobernada por los metodos de smtesis y/o aislamiento mediante los que se obtienen los compuestos. Los contraiones incluyen, pero no se limitan a, cloruro y otros haluros, acetato, trifluoroacetato, citrato, sulfato, fosfato, etc., y las mezclas de los mismos. Se ha de entender que la identidad de cualquier contraion asociado no es una caractenstica cntica y que la invencion incluye los compuestos en asociacion con cualquier tipo de contraion. Ademas, dado que los compuestos pueden existir en una diversidad de formas diferentes, se pretende que la invencion incluya no solo las formas que estan en asociacion con contraiones (por ejemplo, sales secas), sino tambien las formas que no estan en asociacion con contraiones (por ejemplo, soluciones acuosas u organicas).
A menos que se indique de otro modo o sea claramente evidente de otro modo a partir del contexto, la invencion hace uso de metodos convencionales de biologfa molecular, cultivo celular, mantenimiento de animales, examen oftalmico, y administracion de agentes terapeuticos a sujetos, etc., y usa los significados aceptados en la tecnica de los terminos. La presente solicitud hace referencia a diversos documentos de patente y publicaciones.
Ademas, se hace referencia a las siguientes publicaciones:
Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols in Immunology, Current Protocols in Protein Science, y Current Protocols in Cell Biology, todas de John Wiley & Sons, N.Y., edicion a partir de julio de 2002; Sambrook, Russell, y Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 2001; Kuby Immunology, 4a ed, Goldsby, R.A., Kindt, T.J., y Osborne, B. (eds.); W.H. Freeman, 2000, Goodman y Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10a Ed. .McGraw Hill, 2001, Katzung, B. (ed.) Basic and Clinical Pharmacology, McGraw-Hill/Appleton & Lange; 9a edicion (diciembre de 2003), Ophthalmic Surgery: Principles and Practice, 3a ed., W.B. Saunders Company, 2002; Albert, DM y Lucarelli, MJ (eds.), Clinical Atlas of Procedures in Ophthalmic Surgery, American Medical Association, 2003. En el caso de un conflicto o inconsistencia entre cualquiera de las referencias incorporadas y la presente memoria descriptiva, prevalecera la memoria descriptiva, entendiendose que la determinacion de si existe un conflicto o inconsistencia entra dentro del criterio de los inventores y se puede realizar en cualquier momento.
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Breve descripcion de las figuras
Las figuras 1A-1E muestran representaciones esquematicas de los segmentos anterior y posterior del ojo (1A y 1B) y de las capas exteriores del ojo (1C-1E). La figura 1C representa un ojo normal. La figura 1D representa un ojo que padece ARMD seca. La figura 1E representa un ojo que padece ARMD exudativa. ONL = capa nuclear exterior; IS = segmento interior; OS = segmento exterior; RPE = capa epitelial retiniana de pigmento; BM = membrana de Bruch; CC = coriocapilares. De Tezel, T., et al., Trends in Molecular Medicine, 10(9), 417-420, 2004.
La figura 2 muestra una secuencia consenso para una repeticion consenso corta (SCR), un modulo descubierto en protemas de control del complemento. De Smith, SA, et al., J. Virol. 74(12), 5659-5666, 2000.
Las figuras 3A y 3B muestran secuencias del precursor de la protema de control del complemento del virus vacuna (SEQ ID NO: 33) y la protema de control del complemento del virus vacuna madura (sEq ID NO: 34).
La figura 4 muestra una comparacion de secuencia de protemas de control del complemento maduras de una diversidad de aislados de ortopoxvirus (SEQ ID NO: 35 - 42). Se enumeran los sitios geneticos correspondientes. Modificado de Smith, SA, et al., J. Virol. 74(12), 5659-5666, 2000.
La figura 5 muestra una comparacion de la estructura del dominio de SCR de una diversidad de protemas de control del complemento y fragmentos de las mismas, el numero de restos K + R, % de restos K + R, pI, numero de sitios de union de heparina putativos, y capacidad para inhibir la hemolisis y/o unirse a heparina. Modificado de Smith, SA, et al., J. Virol. 74(12), 5659-5666, 2000. Los dominios son modulos de SCR. De ese modo, por ejemplo, rVCP SCR (2, 3, 4), es un polipeptido producido de forma recombinante que contiene las SCR 2, 3, y 4 de VCP.
La figura 6 muestra la secuencia de aminoacidos de SPICE (SEQ ID NO: 44).
La figura 7 muestra la estructura de la compstatina y la estructura de un analogo de compstatina que muestra una actividad inhibidora del complemento aumentada con respecto a la compstatina. La figura tambien muestra el valor de CI50 de la compstatina y del analogo de compstatina para la inhibicion del complemento humano. Los aminoacidos 4 y 9 de la cadena peptfdica que se representan en la parte superior de la figura son como se muestran en la parte inferior izquierda para la compstatina y como se muestran en la parte inferior derecha para el analogo de compstatina. De ese modo, las cajas marcadas como "X4" y "X9" en la cadena de polipeptido representan las cadenas laterales de los aminoacidos X4 y X9 que se muestran en la parte inferior de la figura para la compstatina (izquierda) y el analogo de compstatina (derecha), respectivamente.
La figura 8 muestra un compuesto a modo de ejemplo para su uso en la invencion.
La figura 9 muestra un montaje de aguja/jeringa cargado con el primer y el segundo agentes terapeuticos.
Definiciones
"Penodo de actividad" se refiere al penodo de tiempo durante el que un sujeto experimenta una mejona en uno o mas smtomas y/o signos de un trastorno despues de la administracion de un agente terapeutico, con respecto a las condiciones o al estado de lmea basal existentes antes de la administracion del agente terapeutico. El penodo de actividad comienza cuando el sujeto experimenta la primera mejona y termina cuando las condiciones o el estado del sujeto vuelven a la lmea basal que existfa antes de la administracion de la gente.
"Angiogenesis" o "angiogenico" se refieren a la formacion, crecimiento, y/o desarrollo de nuevos vasos sangumeos.
Las expresiones "inhibidor de la angiogenesis" y "agente antiangiogenico" se usan de forma intercambiable en el presente documento para referirse a agentes que son capaces de inhibir o reducir uno o mas procesos asociados a la angiogenesis que incluyen, pero no se limitan a, proliferacion de celulas endoteliales, supervivencia de celulas endoteliales, migracion de celulas endoteliales, diferenciacion de celulas precursores en celulas endoteliales, y formacion de tubo capilar.
"Anticuerpo", como se usa en el presente documento, se refiere a una inmunoglobulina o a una parte de la misma que se une a un antfgeno. Un anticuerpo puede ser natural o producirse total o parcialmente de forma sintetica. Un anticuerpo se puede obtener a partir de fuentes naturales, por ejemplo, se puede purificar a partir de un animal tal como un roedor, conejo, o gallina, que se ha inmunizado con un antfgeno o un constructo que codifica el antfgeno.
Un anticuerpo puede ser un miembro de cualquier clase de inmunoglobulinas, incluyendo cualquiera de las clases humanas: IgG, IgM, IgA, IgD, e IgE. Un anticuerpo de uso en la presente invencion puede ser un fragmento de anticuerpo tal como Fab', F(ab')2, scFv (cadena variable individual) u otro fragmento que retenga un sitio de union a antfgeno, o un fragmento scFv producido de forma recombinante, incluyendo fragmentos producidos de forma recombinante que comprendan un dominio de union a antfgeno de inmunoglobulina. Vease, por ejemplo, Allen, T., Nature Reviews Cancer, Vol. 2, 750-765, 2002, y las referencias en el mismo. Los fragmentos de anticuerpo que contienen el idiotipo de la molecula de anticuerpo se pueden generar mediante tecnicas conocidas. Por ejemplo, los fragmentos F(ab')2 se pueden producir mediante digestion con pepsina de la molecula de anticuerpo, los fragmentos Fab' se pueden producir por reduccion de los puentes disulfuro del fragmento F(ab')2, o por tratamiento de la molecula de anticuerpo con papama y un agente reductor. Un anticuerpo puede ser un multfmero de anticuerpo o un multimero de fragmentos de anticuerpo. Los anticuerpos, fragmentos de anticuerpo, y/o dominios de protema que comprenden un sitio de union a antfgeno se pueden generar y/o seleccionar in vitro, por ejemplo, usando tecnicas
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tales como presentacion sobre fagos (Winter, G. et al., Annu. Rev. Immunol. 12:433-455, 1994), presentacion sobre ribosomas (Hanes, J., y Pluckthun, A. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94:4937-4942, 1997), etc.
Un anticuerpo puede ser policlonal (por ejemplo, un anticuerpo policlonal purificado por afinidad) o monoclonal. Un "anticuerpo monoclonal", como se usa en el presente documento, se refiere a una poblacion basicamente homogenea de anticuerpos o a un miembro de tal poblacion, es decir, los anticuerpos individuales que comprende la poblacion son identicos excepto por posibles mutaciones de origen natural que puedan estar presentes en cantidades minoritarias. A diferencia de las preparaciones de anticuerpo policlonal que por lo general incluyen diferentes anticuerpos dirigidos frente a diferentes determinantes (epttopos), cada anticuerpo monoclonal esta dirigido frente a un unico determinante del antigeno y por lo tanto es altamente espedfico. El modificador "monoclonal" indica el caracter del anticuerpo de obtenerse a partir de una poblacion basicamente homogenea de anticuerpos, y no se interpreta que sea necesaria la produccion del anticuerpo mediante ningun metodo particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que se usan de acuerdo con la presente invencion se pueden preparar mediante el metodo del hibridoma descrito por primera vez por Kohler & Milstein, Nature 256: 495, 1975 o, alternativamente, se pueden preparar mediante metodos de ADN recombinante (vease, por ejemplo, el documento de Patente de Estados Unidos n.° 4.816.567).
Un anticuerpo puede ser un anticuerpo "quimerico" en el que, por ejemplo, se fusiona un dominio variable de origen roedor con un dominio constante de origen humano, reteniendo de ese modo la especificidad del anticuerpo de roedor. El dominio de origen humano no necesita originarse directamente en un ser humano en el sentido de que se sintetice en primer lugar en un ser humano. En su lugar, se pueden generar dominios "humanos" en roedores cuyo genoma incorpore genes de inmunoglobulina humana. Tal anticuerpo se considera al menos parcialmente "humanizado". El grado en que un anticuerpo esta "humanizado" puede variar. De ese modo, una parte o la mayona del dominio variable de un anticuerpo de roedor se puede reemplazar con secuencias humanas, por ejemplo, mediante mutagenesis dirigida a sitio o un polinucleotido que codifique el anticuerpo o una parte del mismo. De acuerdo con un enfoque, se injertan regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de roedor, por ejemplo, murinas, en las regiones marco conservadas ligera variable (VL) y pesada variable (VH) de moleculas de inmunoglobulina humana, mientras se retienen solo los residuos de la region marco conservada de roedor considerados esenciales para la integridad del sitio de union a antfgeno. Vease Gonzales NR, Tumour Biol. Enero- febrero;26(1):31-43, 2005 para una revision de diversos metodos para minimizar la antigenicidad de un anticuerpo monoclonal. Tales anticuerpos quimericos humanos o humanizados son a menudo preferentes para su uso en terapia de enfermedades o trastornos humanos, dado que es menos probable que los anticuerpos humanos o humanizados induzcan una respuesta inmune.
Se conoce una diversidad de metodos para determinar si un anticuerpo reacciona o no con, o se une espedficamente a, tal antfgeno y, si se desea, para determinar la afinidad de tal union. Algunos ejemplos incluyen ensayos de inmunoabsorcion ligados a enzimas (ELISA), radioinmunoensayos (RIA), y similares. La union de un anticuerpo a una molecula diana tal como una protema puede inhibir o interferir la actividad de la molecula diana. Por ejemplo, la union de un anticuerpo a un ligando tal como un factor de crecimiento puede interferir la union del ligando a su receptor o receptores; la union de un anticuerpo a un receptor puede interferir la union del receptor a su ligando o ligandos.
Los terminos "aproximadamente" o "alrededor", por referencia a un numero, incluyen numeros que entran dentro de un intervalo de un 5 % en cualquier direccion (mayor o menor) del numero a menos que se indique de otro modo o sea evidente de otro modo a partir del contexto (excepto cuando tal numero excediera del 100 % de un posible valor).
"Biocompatible" se refiere a un material que es basicamente no toxico para las celulas de un receptor en las cantidades y en la ubicacion usadas, y no provoca ni causa ningun efecto perjudicial o adverso significativo en el cuerpo del receptor en la ubicacion usada, por ejemplo, una reaccion inmunologica o inflamatoria inaceptable, formacion de tejido cicatricial inaceptable, etc. Un material que es biocompatible con el ojo no interfiere basicamente la fisiologfa o la funcion del ojo.
"Biodegradable" significa que un material es capaz de descomponerse ffsica y/o qmmicamente en las celulas o en el cuerpo de un sujeto, por ejemplo, mediante hidrolisis en condiciones fisiologicas y/o mediante procesos biologicos naturales tales como la accion de las enzimas presentes en las celulas o en el cuerpo, y/o mediante procesos tales como disolucion, dispersion, etc., para formar especies qrnmicas mas pequenas que por lo general se pueden metabolizar y, opcionalmente, usar por parte del cuerpo, y/o excretar o desechar de otro modo. Preferentemente, un compuesto biodegradable es biocompatible. Un polfmero cuyo peso molecular disminuye a lo largo del tiempo in vivo debido a la reduccion del numero de monomeros se considera biodegradable.
Una "macromolecula biologica" es una molecula de gran tamano compuesta por subunidades mas pequenas del tipo que se encuentra en los sistemas biologicos. Algunos ejemplos incluyen polipeptidos, acidos nucleicos, y polisacaridos. Por lo general, una macromolecula biologica contiene al menos 3 subunidades (por ejemplo, aminoacidos, nucleosidos, monosacaridos, etc.). La macromolecula biologica puede ser un polipeptido, acido
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nucleico, o polisacarido de origen natural. La macromolecula biologica puede estar modificada, por ejemplo, puede estar conjugada a una molecula no biologica tal como un poKmero sintetico, etc.
Las expresiones "caracterizado por degeneracion macular, neovascularizacion coroidal, neovascularizacion retiniana, o cualquier combinacion de las anteriores" y "caracterizado por degeneracion macular, neovascularizacion coroidal, o neovascularizacion retiniana" pretenden indicar que la degeneracion macular, CNV, y/o RNV, es un rasgo caractenstico (es decir, habitual) del trastorno. La degeneracion macular, CNV, y/o RNV, pueden ser un rasgo definitorio y/o diagnostico del trastorno.
"Neovascularizacion coroidal" (CNV) se refiere al desarrollo, proliferacion, y/o crecimiento anomalo de vasos sangumeos que surgen de los coriocapilares. Los vasos sangumeos se extienden por lo general a traves de la membrana de Bruch, la capa de RPE, y/o el espacio subretiniano.
Un "componente del complemento" o "protema del complemento" es una molecula que esta implicada en la activacion del sistema de complemento o participa en una o mas actividades mediadas por el complemento. Los componentes de la ruta clasica del complemento incluyen, por ejemplo, C1q, C1r, C1s, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, y el complejo C5b-9, tambien denominado complejo de ataque a membrana (MAC) y fragmentos activos o productos de escision enzimatica de cualquiera de los anteriores (por ejemplo, C3a, C3b, C4a, C4b, C5a, etc.). Los componentes de la ruta alternativa incluyen, por ejemplo, los factores B, D, H, e I, y properdina.
Los terminos "suministrar" o "suministro", en el contexto de un dispositivo de suministro de farmaco o formulacion de liberacion sostenida, se refiere a la liberacion de un agente terapeutico en su entorno circundante en el cuerpo.
Un "dispositivo de suministro de farmaco" se refiere a un dispositivo, estructura, o elemento que contiene y/o suministra un agente terapeutico a un sujeto. La liberacion del farmaco se puede producir, pero no necesariamente, como resultado de la degradacion del dispositivo de suministro de farmaco en el cuerpo. La expresion "dispositivo de suministro de farmaco" se usa en el presente documento para referirse a dispositivos que contienen un agente terapeutico y a dispositivos que aun no se han cargado con el agente terapeutico. Un implante ocular es un dispositivo de suministro de farmaco que tiene las dimensiones y la estructura apropiadas para su colocacion en el ojo. Preferentemente, un dispositivo de suministro de farmaco ocular no interfiere basicamente con la fisiologfa y/o el funcionamiento del ojo, por ejemplo, el dispositivo no causa ninguna alteracion o una alteracion minima en la vision.
Una "cantidad eficaz" de un agente activo se refiere a la cantidad del agente activo suficiente para provocar una respuesta biologica deseada. Como entenderan los expertos habituales en esta materia, la cantidad absoluta de un agente particular que es eficaz puede variar dependiendo de factores tales como el punto final biologico deseado, el agente que se suministra, el tejido diana, etc. Los expertos habituales en la materia tambien entenderan que una "cantidad eficaz" se puede administrar en una dosis individual, o se puede conseguir mediante administracion de dosis multiples. Por ejemplo, una cantidad eficaz de un agente terapeutico para el tratamiento de un trastorno ocular puede ser una cantidad suficiente para tratar el trastorno, por ejemplo, una cantidad suficiente para conseguir uno o mas de los siguientes: (i) inhibir o prevenir la formacion de drusas; (ii) causar la reduccion en el numero y/o el tamano de drusas (regresion de drusas); (iii) causar una reduccion en o prevenir los depositos de lipofuscina; (iv) inhibir o prevenir la perdida visual o ralentizar la velocidad de perdida visual; (v) inhibir la neovascularizacion coroidal o ralentizar la velocidad de neovascularizacion coroidal; (vi) causar una reduccion en el tamano y/o numero de lesiones caracterizadas por neovascularizacion coroidal; (vii) inhibir la neovascularizacion coroidal o ralentizar la velocidad de neovascularizacion retiniana; (viii) causar una reduccion en el tamano y/o numero de lesiones caracterizadas por neovascularizacion retiniana; (ix) mejorar la agudeza visual y/o sensibilidad de contraste; (x) reducir el edema macular y/o reducir el espesor macular anomalo; (xi) inhibir o prevenir la atrofia o apoptosis de fotorreceptores o celulas del RPE, o reducir la velocidad de atrofia o apoptosis de fotorreceptores o celulas del RPE; (xii) inhibir o prevenir el progreso de degeneracion macular no exudativa a degeneracion macular exudativa.
"Trastorno del ojo", que se usa de forma intercambiable en el presente documento con "trastorno ocular", se refiere a cualquier enfermedad, trastorno, o afeccion que implica o afecta al ojo o a una o mas porciones, estructuras, o partes del ojo. El ojo incluye el globo ocular, los musculos perioculares, y la parte del nervio optico que esta dentro de o es adyacente al globo ocular.
Degeneracion macular "exudativa" se usa en el presente documento como sinonimo de degeneracion macular de tipo "humeda", tal como se entienden generalmente estos terminos en la tecnica, es decir, para referirse a una afeccion relacionada con degeneracion macular tal como ARMD caracterizada por neovascularizacion y/o la presencia de un exudado.
"Identidad" se refiere al grado en que son iguales las secuencias de dos o mas acidos nucleicos o polipeptidos. El porcentaje de identidad entre una secuencia de interes y una segunda secuencia con respecto a una ventana de evaluacion, por ejemplo, con respecto a la longitud de la secuencia de interes, se puede calcular por alineacion de las secuencias, determinacion del numero de restos (nucleotidos o aminoacidos) dentro de la ventana de evaluacion que estan enfrentados a un resto identico que permite la introduccion de separaciones para maximizar la identidad, division por el numero total de restos de la secuencia de interes o de la segunda secuencia (que es mayor) que entra
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dentro de la ventana, y multiplicacion por 100. Por separacion se pretende indicar una parte de una secuencia que
no esta ocupada por ningun resto. Por ejemplo, la secuencia A K L-----S I G (SEQ ID NO: 43) contiene una
separacion de tres restos. Cuando se calcula el numero de restos identicos necesarios para conseguir un porcentaje de identidad particular, las fracciones se han de redondear al numero entero mas cercano. El porcentaje de identidad se puede calcular con el uso de una diversidad de programas de ordenador conocidos en la tecnica. Por ejemplo, los programas de ordenador tales como BLAST2, BLASTN, BLASTP, Gapped BLAST, etc., generan alineaciones y proporcionan el porcentaje de identidad entre una secuencia de interes y secuencias de cualquiera de una diversidad de bases de datos publicas. El algoritmo de Karlin y Altschul (Karlin y Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:22264-2268, 1990) modificado como en Karlin y Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877, 1993 esta incorporado en los programas NBLAST y XBLAST de Altschul et al. (Altschul, et al., J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990).
Para obtener alineaciones espaciadas con fines de comparacion, se utiliza Gapped BLAST como se describe en Altschul et al. (Altschul, et al. Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997). Cuando se utilizan los programas BLAST y Gapped BLAST, se usan los parametros por defecto de los respectivos programas. Se puede usar una matriz PAM250 o BLOSUM62. Vease el sitio web que tiene el URL
www.ncbi.nlm.nih.gov para estos programas. En una realizacion espedfica, el porcentaje de identidad de una secuencia de interes y una segunda secuencia se calcula usando BLAST2 con los parametros por defecto.
"Terapia invasiva", como se usa en el presente documento, es una terapia que implica la insercion de un instrumento o dispositivo en el ojo o la orbita, por ejemplo, entrada en o penetracion del globo ocular o entrada en la orbita mediante un instrumento tal como una aguja, trocar, cateter, o similar.
Los "liposomas" son partmulas esfericas microscopicas artificiales formadas por una bicapa (o multiples capas) lipfdica que encierra un compartimento acuoso. Los liposomas se pueden usar para suministrar ciertas composiciones de la invencion.
La expresion "agente terapeutico de accion prolongada" se refiere a un agente terapeutico que tiene un penodo de actividad de al menos 3 meses cuando se administra en cantidades medicamente aceptables. Una "cantidad medicamente aceptable" se refiere a una cantidad que no causa toxicidad o efectos adversos inaceptables en las condiciones de administracion.
"Afeccion relacionada con degeneracion macular" se refiere a cualquiera de una diversidad de trastornos y afecciones en las que la macula degenera o pierde actividad funcional. La degeneracion o perdida de actividad funcional puede surgir como resultado de, por ejemplo, muerte celular, disminucion de la proliferacion celular, y/o perdida de la funcion biologica normal. La degeneracion macular puede conducir a y/o manifestarse como alteraciones en la integridad estructural de la matriz celular y/o extracelular de la macula, una alteracion en la arquitectura normal de la matriz celular y/o extracelular, y/o la perdida de funcion de las celulas maculares. Las celulas pueden ser cualquier tipo de celula normalmente presente en o cercana a la macula incluyendo celulas del RPE, fotorreceptores, y/o celulas endoteliales capilares. La ARMD es la principal afeccion relacionada con degeneracion macular. Otras incluyen distrofia macular de Best, distrofia del fundus de Sorsby, Mallatia Leventinese y distrofia retiniana en panal de Doyne.
Degeneracion macular "no exudativa" se usa en el presente documento como sinonimo de degeneracion macular de tipo "seco" como se usan generalmente estas expresiones en la tecnica, para referirse a una afeccion relacionada con degeneracion macular, por ejemplo, ARMD, en la que no se han producido la neovascularizacion y/o el exudado que senan detectables usando metodos convencionales tales como angiograffa con fluorescema.
"Implante ocular" se refiere a un dispositivo o estructura que tiene las dimensiones, forma, y/o configuracion adecuadas y esta hecho de los materiales apropiados para que se pueda colocar en el ojo sin causar una interferencia inaceptable con la fisiologfa o el funcionamiento del ojo. Preferentemente, la colocacion de un implante ocular no altera significativamente la vision. Un implante ocular es por lo general un artmulo de fabricacion solido o semisolido y es por lo general macroscopico, es decir, visible a simple vista.
"Pluralidad" significa mas de uno.
"Polipeptido", como se usa en el presente documento, se refiere a un polfmero de aminoacidos, que incluye opcionalmente uno o mas analogos de aminoacido. Una protema es una molecula compuesta por uno o mas polipeptidos. Un peptido es un polipeptido relativamente corto, por lo general entre aproximadamente 2 y 60 aminoacidos de longitud. Los terminos "protema", "polipeptido", y "peptido" se pueden usar de forma intercambiable.
Los polipeptidos que se usan en el presente documento pueden contener aminoacidos tales como los que se encuentran de forma natural en las protemas, aminoacidos que no se encuentran de forma natural en las protemas, y/o analogos de aminoacido que no son aminoacidos. Se conoce un gran numero de analogos reconocidos en la tecnica de los 20 aminoacidos encontrados habitualmente en las protemas (los aminoacidos "convencionales"). Como se usa en el presente documento, un "analogo" de un aminoacido puede ser un aminoacido diferente que se parece estructuralmente al aminoacido (un aminoacido "no convencional") o un compuesto distinto de un aminoacido
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que se parece estructuralmente al aminoacido. Se pueden modificar uno o mas de los aminoacidos de un polipeptido, por ejemplo, mediante la adicion de una entidad qmmica tal como un grupo carbohidrato, un grupo fosfato, un grupo farnesilo, un grupo isofarnesilo, un grupo acido graso, un conector para conjugacion, funcionalizacion, u otra modificacion, etc. Se describen ciertos analogos y modificaciones adecuados no limitantes en el documento de Patente WO2004026328. El polipeptido puede estar acetilado, por ejemplo, en el extremo N- terminal y/o amidado, por ejemplo, en el extremo C-terminal.
Las modificaciones naturales u otras modificaciones qmmicas tales como las que se han descrito anteriormente se pueden producir en cualquier lugar de un polipeptido, incluyendo la cadena principal del peptido, las cadenas laterales de los aminoacidos y los extremos terminales amino o carboxilo. Un polipeptido dado puede contener numerosos tipos de modificaciones. Los polipeptidos pueden estar ramificados o pueden ser dciicos, con o sin ramificaciones. Los polipeptidos pueden estar conjugados a, encapsulados por, o embebidos en un poftmero o matriz polimerica, dendnmero, nanopartmula, micropartmula, liposoma, o similar. Los polipeptidos de uso en la presente invencion, por ejemplo, se pueden purificar a partir de fuentes naturales, producir in vitro o in vivo en sistemas de expresion adecuados que usan tecnologfa de ADN recombinante (por ejemplo, mediante celulas hospedadoras recombinantes o en animales o plantas transgenicos), sintetizar mediante medios qmmicos tales como smtesis de peptidos en fase solida convencional y/o metodos que implican union qmmica de los peptidos sintetizados (vease, por ejemplo, Kent, S., J Pept Sci., 9(9):574-93, 2003 y el documento de Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20040115774), o cualquier combinacion de estos. La expresion "secuencia de polipeptido" o "secuencia de aminoacidos", como se usa en el presente documento, se puede referir al propio material del polipeptido y no se restringe a la informacion de la secuencia (es decir, la sucesion de letras o codigos de tres letras seleccionada entre las letras y los codigos usados como abreviaturas para los nombres de los aminoacidos) que caracteriza bioqmmicamente un polipeptido. Una secuencia de polipeptido presentada en el presente documento se presenta en la direccion de N-terminal a C-terminal a menos que se indique de otro modo.
"Poxvirus" se refiere a una familia de virus complejos de ADN bicatenario que constituye la familia Poxviridae. La familia incluye los ortopoxvirus, un genero de la familia Poxviridae, subfamilia Chordopoxvirinae, que comprende numerosas especies que infectan a los mairnferos. Se describen poxvirus en Fields, BN, et al., Fields Virology, 3a ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2001. Los ortopoxvirus incluyen virus vacuna, virus de la viruela mayor, virus de la viruela menor, virus de la viruela bovina, virus de la viruela de los monos, virus de la viruela de los camellos, virus de la viruela porcina, y virus ectromelia.
"Protema de control del complemento de poxvirus" se refiere a los miembros de una familia de protemas homologas codificadas por una diversidad de poxvirus diferentes que se unen a una o mas protemas de la ruta del complemento e inhiben la ruta clasica de la activacion del complemento, la ruta alternativa de la activacion del complemento, la ruta de la lectina, o cualquier combinacion de estas. Las protemas de control del complemento de poxvirus son miembros de la superfamilia de protemas de control del complemento (CCP), tambien denominadas reguladores de activacion del complemento (RCA) (Reid, KBM y Day, AJ, Immunol Today, 10:177-80, 1989).
"Segmento posterior del ojo" se refiere a la parte del ojo detras del cristalino, que incluye el humor vftreo, la coroides, y la retina (incluyendo la macula).
"Mejora rapida del estado del ojo de un sujeto" se refiere a una mejora clmicamente significativa de uno o mas smtomas y/o signos de un trastorno ocular que se produce en dos semanas, o preferentemente en una semana, despues de la administracion de un agente terapeutico. La mejora rapida del estado del ojo de un paciente puede incluir, sin limitacion, uno cualquiera o mas de los siguientes: aumento de la agudeza visual (es decir, ganar dos o mas lmeas de vision en una carta de agudeza visual), disminucion de la distorsion visual, aumento de la sensibilidad de contraste, disminucion de derrame de vasos retinianos, disminucion del espesor macular (por ejemplo, una disminucion en el espesor macular de al menos un 50 % desde un valor de lmea base). En general, "rapido", como se usa en el presente documento por referencia a un efecto terapeutico u otro efecto biologico, significa que se produce en dos semanas o menos despues de un suceso de referencia (por ejemplo, la administracion de un agente terapeutico). En algunas realizaciones, "rapido" significa que se produce en una semana o menos despues de un suceso de referencia.
"Neovascularizacion retiniana" se refiere al desarrollo, proliferacion, y/o crecimiento anomalo de vasos sangumeos sobre o en la retina, por ejemplo, sobre la superficie retiniana (es decir, como sera evidente para el experto habitual en la materia, la proliferacion, y/o el crecimiento anomalos se originan en los vasos sangumeos ya presentes sobre o en la superficie). "Retiniano" hace referencia aqm a la fuente de la neovascularizacion.
"Procedimiento individual" significa un procedimiento, es decir, un proceso o serie de etapas o actos que implica una entrada individual en o penetracion del globo ocular o entrada en la orbita mediante un instrumento tal como una aguja, trocar, cateter, o similar. Por ejemplo, una inyeccion ocular, por ejemplo, una inyeccion intravftrea, es un procedimiento individual siempre que la punta de la aguja, una vez se ha insertado en el globo ocular, no se reintroduzca en el globo ocular una vez se haya retirado del mismo. Un procedimiento individual puede implicar o no implicar multiples penetraciones de una o mas estructuras del ojo, por ejemplo, el humor vftreo, siempre que solo tenga lugar una unica entrada en o penetracion del globo ocular.
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"Molecula pequena" se refiere a compuestos organicos, ya sean de origen natural o creados artificialmente (por ejemplo, mediante smtesis qmmica) que tienen un peso molecular relativamente bajo y que no son protemas, polipeptidos, ni acidos nucleicos. Por lo general, las moleculas pequenas tienen un peso molecular de menos de aproximadamente 1500 g/mol y multiples enlaces carbono-carbono.
"Union espedfica" se refiere generalmente a una asociacion ffsica entre un polipeptido diana (o, mas generalmente, una molecula diana) y una molecula de union tal como un anticuerpo o ligando. La asociacion depende por lo general de la presencia de un rasgo estructural particular en la diana tal como un determinante antigenico o epftopo reconocido por la molecula de union. Por ejemplo, si un anticuerpo es espedfico para el epftopo A, la presencia de un polipeptido que contenga el epftopo A o la presencia de A libre sin marcar en una reaccion que contenga tanto A libre marcado como la molecula de union que se une a la misma, reducira la cantidad de A marcado que se une a la molecula de union. Se ha de entender que la especificidad no necesita ser absoluta sino que generalmente se refiere al contexto en el que se produce la union. Por ejemplo, se conoce bien en la tecnica que numerosos anticuerpos tienen reactividad cruzada con otros epffopos ademas de los presentes en la molecula diana. Tal reactividad cruzada puede ser aceptable dependiendo de la aplicacion para la que se va a usar el anticuerpo. El experto habitual en la materia sera capaz de seleccionar anticuerpos o ligandos que tengan un grado suficiente de especificidad para que lleven a cabo de forma apropiada cualquier aplicacion dada (por ejemplo, para deteccion de una molecula diana, con fines terapeuticos, etc.). Tambien se ha de entender que la especificidad se puede evaluar en el contexto de factores adicionales tales como la afinidad de la molecula de union por la diana frente a la afinidad de la molecula de union por otras dianas, por ejemplo, competidores. Si una molecula de union exhibe una alta afinidad por una molecula diana que se desea detectar y una baja afinidad por moleculas no diana, el anticuerpo sera probablemente un reactivo aceptable. Una vez se establece la especificidad de una molecula de union en uno o mas contextos, se puede emplear en otros contextos, preferentemente similares, sin necesidad de reevaluar su especificidad. La union de dos o mas moleculas se puede considerar espedfica si la afinidad (constante de equilibrio de disociacion, Kd) es 10"3 M o menos, preferentemente 10"4 M o menos, mas preferentemente 10"5 M o menos, por ejemplo, 10"6 M o menos, 10"7 M o menos, 10"8 M o menos, o 10"9 M o menos en las condiciones de ensayo, por ejemplo, en condiciones fisiologicas.
"Estabilizar", como se usa en el presente documento con respecto a un trastorno ocular, significa reducir la velocidad de progreso del trastorno y/o prevenir o reducir la probabilidad de un empeoramiento rapido y perceptible de las condiciones de un ojo afectado por el trastorno.
"Sujeto", como se usa en el presente documento, se refiere a un individuo al que se va a suministrar un agente, por ejemplo, con fines experimentales, diagnosticos, y/o terapeuticos. Los sujetos preferentes son mairffferos, por ejemplo, primates, o seres humanos. Un sujeto bajo el cuidado de un medico u otro proveedor de atencion sanitaria se puede denominar "paciente".
"Homologfa de secuencia considerable", aplicado a una secuencia, significa que la secuencia presenta al menos aproximadamente un 60 % de identidad, de forma deseable al menos aproximadamente un 70 % de identidad, de forma mas deseable al menos aproximadamente un 80 % de identidad, y de la forma mas deseable al menos aproximadamente un 90 % de identidad con respecto a una secuencia de referencia. Cuando se comparan dos o mas secuencias, cualquiera de ellas se puede considerar como la secuencia de referencia. El % de identidad se puede calcular usando un algoritmo FASTA, BLASTN, o BLASTP. Se pueden usar los parametros por defecto. Se puede usar una matriz PAM250 o BLOSUM62.
Una "formulacion de liberacion sostenida" o "formulacion de suministro sostenido" es una composicion de materia que comprende un agente terapeutico como uno de sus componentes y comprende o tiene ademas uno o mas componentes, elementos, o estructuras eficaces para proporcionar la liberacion sostenida del agente terapeutico, opcionalmente en parte como consecuencia de la estructura ffsica de la formulacion. En algunas realizaciones, la estructura se proporciona al menos en parte mediante el propio agente terapeutico y, opcionalmente, una o mas sustancias presentes en el sitio de administracion. La liberacion sostenida es la liberacion o suministro que se produce de forma continua o intermitente durante un penodo de tiempo, por ejemplo, de al menos 1, 2, 4, o 6 semanas, al menos 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 18, o 24 meses, o mayor.
"Agente terapeutico" se usa de forma intercambiable en el presente documento con "farmaco", para referirse a cualquier agente farmaceuticamente activo util para tratar un trastorno. El termino incluye cualquier sal farmaceuticamente aceptable, profarmaco, sal de un profarmaco, y derivados de un agente activo tales como se conocen en la tecnica o se producen facilmente usando metodos convencionales conocidos en la tecnica. "Profarmaco" se refiere a un precursor de un farmaco, en el que el profarmaco no es farmacologicamente activo por sf mismo (o tiene una actividad menor o diferente que la actividad deseada del farmaco) pero se convierte, despues de la administracion (por ejemplo, mediante el metabolismo) en el farmaco farmaceuticamente activo. Un agente terapeutico puede ser, sin limitacion, una molecula pequena o una macromolecula biologica tal como una protema (por ejemplo, un anticuerpo) o un acido nucleico tal como un aptamero, siARN, etc.
"Tratar", como se usa en el presente documento, se refiere a proporcionar tratamiento, es decir, proporcionar cualquier tipo de administracion medica o quirurgica de un sujeto con el fin de revertir, aliviar, inhibir el progreso de,
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prevenir o reducir la probabilidad de una enfermedad, trastorno, o afeccion, o con el fin de revertir, aliviar, inhibir o prevenir el progreso de, prevenir o reducir la probabilidad que uno o mas smtomas o manifestaciones de una enfermedad, trastorno o afeccion. "Prevenir" se refiere a hacer que no se produzca una enfermedad, trastorno, afeccion, o un smtoma o manifestacion de los mismos. Tratar puede incluir administrar un agente al sujeto despues del desarrollo de uno o mas smtomas o manifestaciones indicativos de una afeccion tal como degeneracion macular o retinopatfa diabetica, por ejemplo, con el fin de revertir, aliviar, reducir la gravedad de, y/o inhibir o prevenir el progreso de la afeccion y/o revertir, aliviar, reducir la gravedad de, y/o inhibir uno o mas smtomas o manifestaciones de la afeccion. Una composicion de la presente invencion se puede administrar a un sujeto que ha desarrollado un trastorno ocular tal como ARMD exudativa o no exudativa o retinopatfa diabetica o tiene un alto riesgo de desarrollar tal trastorno con respecto a un miembro de la poblacion general. Una composicion de la presente invencion se puede administrar de forma profilactica, es decir, antes del desarrollo de cualquier smtoma o manifestacion de esa condicion. Por lo general, en este caso, el sujeto tendra riesgo de desarrollar la afeccion.
"Forma de dosificacion unitaria", como se usa en el presente documento, se refiere a unidades ffsicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el sujeto que se va a tratar (por ejemplo, para un ojo individual); conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de un agente activo seleccionado para producir los efectos terapeuticos deseados, opcionalmente junto con un vehmulo farmaceuticamente aceptable, que se puede proporcionar en una cantidad predeterminada. La forma de dosificacion unitaria puede ser, por ejemplo, un volumen de un lfquido (por ejemplo, un vehmulo farmaceuticamente aceptable) que contiene una cantidad predeterminada de un agente terapeutico, una cantidad predeterminada de un agente terapeutico en forma solida, un implante ocular que contiene una cantidad predeterminada de un agente terapeutico, una pluralidad de nanopartmulas o micropartmulas que contienen colectivamente una cantidad predeterminada de un agente terapeutico, etc. Se ha de entender que una forma de dosificacion unitaria puede contener una diversidad de componentes ademas del agente terapeutico. Por ejemplo, se pueden incluir vehmulos, diluyentes, estabilizantes, tampones, conservantes farmaceuticamente aceptables, etc.
Descripcion detallada de ciertas realizaciones de la invencion I. Vision de conjunto
La presente invencion proporciona agentes terapeuticos para su uso en el tratamiento de un trastorno ocular caracterizado por degeneracion macular, CNV, o RNV. La invencion tambien proporciona artmulos de fabricacion que comprenden los agentes terapeuticos. Los trastornos a modo de ejemplo que se pueden tratar de acuerdo con la invencion incluyen, pero no se limitan a, afecciones relacionadas con degeneracion macular, retinopatfa diabetica, y retinopatfa de la prematuridad. Aunque los conceptos que subyacen a la invencion se describen en el presente documento por referencia particular al tratamiento de ARMD humeda u otras afecciones caracterizadas por CNV y/o RNV, se aplican a una diversidad de trastornos oculares (y otros trastornos) diferentes.
La invencion incluye el reconocimiento de que los proveedores de atencion ocular, por ejemplo, los oftalmologos, a menudo son reacios a administrar un agente terapeutico, por ejemplo, un inhibidor de la angiogenesis, usando un procedimiento invasivo tal como una inyeccion intravttrea que este asociado al riesgo de una complicacion grave a menos que exista una probabilidad considerable de que la terapia produzca una mejora rapida del estado del ojo del paciente. Pueden ser reacios a usar un procedimiento invasivo para administrar una terapia que posiblemente pueda prevenir o retrasar el futuro empeoramiento o desestabilizacion de un ojo que es, al menos desde el punto de vista sintomatico, relativamente estable. De forma similar, los pacientes son a menudo reacios a experimentar la administracion de un agente terapeutico usando un procedimiento invasivo asociado al riesgo de complicacion grave a menos que hayan experimentado recientemente un empeoramiento o desestabilizacion perceptible en el estado de sus ojos y exista una probabilidad considerable de que la administracion del agente terapeutico de como resultado una mejora rapida y/o perceptible del estado. Los pacientes con un ojo en un estado relativamente estable a menudo son reacios a experimentar un procedimiento invasivo que administre un agente terapeutico que pueda detener o ralentizar el progreso del trastorno si el procedimiento se asocia al riesgo de una complicacion grave.
Como consecuencia, cuando la administracion de un agente terapeutico implica un procedimiento invasivo asociado a un riesgo de una complicacion grave, los pacientes se pueden tratar basandose en cada caso y en los smtomas, mejor que de acuerdo con una programacion de dosificacion predeterminada y recomendada que implicana al menos en parte administrar el agente mientras que el estado del paciente sea aparentemente estable, al menos desde un punto de vista sintomatico. Esto parece ser el caso incluso aun despues de que la programacion de dosificacion predeterminada recomendada pueda tener el potencial de retrasar o inhibir una futura desestabilizacion o empeoramiento. Se ha observado que en una clmica del ojo bien conocida, se administro un inhibidor de la angiogenesis a pacientes con ARMD exudativa basandose en los smtomas, en respuesta a un empeoramiento o desestabilizacion repentina en el estado de un ojo del paciente o en respuesta a la presencia de exudado (por ejemplo, hemorragia), mejor que de acuerdo con un programa de dosificacion predeterminados.
Los ensayos clmicos han demostrado que ciertos inhibidores de la angiogenesis, por ejemplo, Macugen y Lucentis, son beneficiosos en terminos de parametros importantes tales como agudeza visual cuando se administran segun se recomienda, es decir, por administracion intravttrea repetida de una solucion que contiene el agente. Por ejemplo, la
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administracion de ciertos inhibidores de la angiogenesis disminuye la velocidad de perdida visual y puede conducir al menos a una mejora temporal en la agudeza visual. Basandose en los ensayos clmicos, el intervalo de dosificacion recomendado para Lucentis es de 4 semanas (vease, por ejemplo, Heier, J.S., et al., Invest Opthalmol Vis Sci, 44: resumen electronico 972, 2003), mientras que el intervalo de dosificacion recomendado para Macugen es de 6 semanas (vease, por ejemplo, Gragoudas ES, N Engl J Med., 351(27):2805-16, 2004). Avastin, aunque no aprobado en la actualidad para el tratamiento de trastornos oculares por la Administracion de Alimentos y Farmacos de los Estados Unidos de America, se ha aprobado para el tratamiento de ciertos canceres y esta disponible para uso en el ojo. Dado que Lucentis y Avastin actuan de forma similar por union a las isoformas de VEGF, estos agentes pueden tener efectos terapeuticos similares.
La administracion repetida de inhibidores de la angiogenesis de acuerdo con los intervalos de dosificacion que se han descrito anteriormente podna dar como resultado una mejora sostenida en el estado del ojo del paciente por inhibicion ademas de la neovascularizacion y el derrame de vasos sangumeos. Sin embargo, dado el riesgo asociado a la inyeccion intravftrea, los oftalmologos parecen reacios a administrar una terapia asociada a un riesgo considerable mientras los smtomas del paciente permanezcan basicamente estables. De forma similar, los pacientes parecen reacios a someterse a un procedimiento con un riesgo considerable cuando sus smtomas permanecen basicamente estables.
Por lo tanto, como resultado del deseo de evitar inyecciones intravftreas, puede que los inhibidores de la angiogenesis no se administren de acuerdo con los intervalos de dosificacion recomendados o predeterminados. En su lugar, en la practica estos agentes se pueden administrar en una base sintomatica, por ejemplo, despues de que un sujeto haya experimentado un empeoramiento o desestabilizacion en el estado del ojo tal como una perdida aguda de agudeza visual y/o la presencia de exudado con respecto a unas condiciones de lmea basal, por ejemplo, con respecto a las condiciones mejoradas que resultaron despues de la administracion de la dosis previa del inhibidor de la angiogenesis. Tal empeoramiento o desestabilizacion se puede producir en un punto temporal variable e impredecible despues de la mejora inicial. En lugar de retirar del paciente el inhibidor de la angiogenesis cuando el paciente esta sintomaticamente estable en un esfuerzo de prevenir el futuro empeoramiento o desestabilizacion, con el posible riesgo de causar una complicacion grave, el tratamiento se puede posponer hasta que el sujeto haya experimentado en realidad empeoramiento o desestabilizacion de un modo tal que sea probable que el tratamiento de como resultado una mejora sintomatica ademas de cualquier posible efecto preventivo. De ese modo, el deseo de evitar la inyeccion intravftrea de un ojo que esta sintomaticamente estable tiene un efecto significativo y hasta el momento inapreciado en la practica clmica. En esencia, la relacion de riesgo/beneficio segun se percibe por los oftalmologos y los pacientes puede dictar el intervalo de administracion de los inhibidores de la angiogenesis que se debena llevar a cabo en una base individualizada, despues del empeoramiento o desestabilizacion del ojo de un paciente, mejor que de acuerdo con un intervalo de dosificacion predeterminado de aproximadamente 4 o 6 semanas. No esta claro si el tratamiento en base sintomatica tendra una eficacia mayor, menor, o equivalente en una base a largo plazo (por ejemplo, durante penodos de un ano o mas) con respecto al tratamiento de acuerdo con la programacion de dosificacion recomendada y predeterminada. Sin embargo, en vista del riesgo inequvoco y conocido de complicaciones asociadas a la inyeccion intravftrea, los oftalmologos y los pacientes pueden estar dispuestos a renunciar al posible aumento de beneficio a largo plazo que podna resultar de la administracion de terapia antiangiogenica a intervalos predeterminados de 4-6 semanas en lugar de sobre una base sintomatica.
En resumen, las observaciones de los inventores sugieren que los oftalmologos y los pacientes son reacios a aceptar los riesgos asociados a la inyeccion intravftrea a menos que exista una probabilidad significativa de que la terapia administrada de ese modo de como resultado una mejora rapida en el estado del ojo del paciente. Sin embargo, este modo de administracion puede no ser optimo en terminos de proporcionar mejora a largo plazo en y/o estabilizacion del estado del ojo del paciente.
La presente invencion incluye el reconocimiento de que el tratamiento dirigido por smtomas puede ser menos que optimo para prevenir o retrasar el empeoramiento adicional en el estado del paciente. Ademas, una formulacion de un agente terapeutico que sea preferente u optima para producir la mejora rapida en el estado del ojo de un paciente puede no ser preferente u optima para conseguir mejora y/o estabilizacion a largo plazo. Por ejemplo, en el caso de trastornos oculares, la mejora rapida se puede conseguir de la mejor manera mediante administracion local de un agente terapeutico en solucion o en una forma en la que se libere rapidamente, de un modo tal que se consiga rapidamente una alta concentracion del agente en la ubicacion donde se desea la actividad. Sin embargo, el beneficio a largo plazo se puede conseguir de la mejor manera mediante administracion local de una formulacion de liberacion sostenida de un agente terapeutico que proporcione una concentracion menor aunque aun terapeuticamente eficaz del agente terapeutico. Ademas, o alternativamente, el agente o agentes terapeuticos que son los mas apropiados para aliviar smtomas particulares pueden ser menos apropiados para proporcionar un beneficio a largo plazo.
"Administrar" o "administracion" se refiere generalmente a introducir un agente terapeutico, composicion, formulacion, etc., en un sitio o ubicacion deseados en o dentro del cuerpo de un sujeto, por ejemplo, un sitio o ubicacion dentro del ojo. La administracion se puede llevar a cabo, por ejemplo, mediante un proveedor de atencion sanitaria. Con fines de conveniencia, la presente memoria descriptiva se refiere generalmente a los oftalmologos. Sin
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embargo, los metodos que se describen en el presente documento, incluyendo tanto los metodos de la invencion como otros metodos (por ejemplo, metodos para diagnosticar y/o monitorizar un trastorno ocular) se pueden poner en practica mediante cualquier proveedor cualificado de atencion sanitaria.
La presente invencion proporciona agentes terapeuticos y artfculos de fabricacion que abordan las preferencias de los oftalmologos y los pacientes de evitar procedimientos asociados a un riesgo de complicaciones graves mientras el estado del ojo del paciente es relativamente estable y al mismo tiempo ofrecen los beneficios potenciales asociados a los agentes terapeuticos y/o formulaciones que pueden ser preferentes para la mejora, estabilizacion, y/o progreso reducido de la afeccion a largo plazo. En algunas realizaciones, la invencion proporciona agentes para su uso en el tratamiento de un trastorno ocular caracterizado por degeneracion macular, CNV, o RNV que comprende la etapa de administrar el primer y el segundo agentes terapeuticos al ojo del sujeto en un procedimiento individual, en el que el primer agente terapeutico proporciona una mejora rapida en el estado del ojo del sujeto y del segundo agente terapeutico es un agente terapeutico de larga duracion o se administra en forma de un componente de una formulacion de liberacion sostenida. El experto en la materia ha de entender que no todos los pacientes exhibiran una mejora en el estado del ojo. Tambien ha de entender que el tiempo de respuesta (donde "respuesta" se refiere a la mejora en el estado del ojo) puede ser un tiempo medio de respuesta entre los pacientes que exhiben una respuesta. En algunas realizaciones de la invencion, al menos un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, o 90 % de los pacientes exhiben una mejora rapida. En algunas realizaciones, la tasa de respuesta esta entre un 10 % y un 100 %, o cualquier intervalo intermedio tal como entre un 30 % y un 80 %, etc., exhiben una mejora rapida.
De acuerdo con ciertas realizaciones de la invencion se usa un procedimiento para administrar un primer agente terapeutico que proporciona una mejora rapida en el estado del ojo del paciente. El agente se puede administrar, por ejemplo, despues de un empeoramiento repentino en el estado del ojo del paciente tal como puede ser causado por hemorragia o derrame de los vasos retinianos. En el curso del mismo procedimiento, tambien se administra un segundo agente terapeutico (que puede ser igual o diferente que el primer agente terapeutico) con poco o ningun riesgo adicional para el paciente. El segundo agente terapeutico es un agente de larga duracion o es un componente de una formulacion de liberacion sostenida (o ambos). El segundo agente terapeutico puede proporcionar un beneficio a largo plazo al paciente, preferentemente prolongar el intervalo de tiempo antes de que el paciente experimente una desestabilizacion o perciba un empeoramiento significativo en el estado del ojo.
El primer y el segundo agentes terapeuticos se pueden administrar secuencialmente o se pueden administrar basicamente al mismo tiempo. Si se administran secuencialmente, se pueden administrar en cualquier orden. El orden se puede seleccionar basandose en la identidad y la formulacion de los agentes. En ciertas realizaciones de la invencion el primer y el segundo agentes terapeuticos se administran separados no mas de 5, 10, 15, 30, o 45 segundos, o separados no mas de 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, o 30 minutos. En otras palabras, el intervalo de tiempo entre completar la administracion del primer agente y completar la administracion del segundo agente esta separado no mas de 5, 10, 15, 30, o 45 segundos o no mas de 1, 2, 3, 4, 5, 0, 15, o 30 minutos en diversas realizaciones de la invencion. En ciertas realizaciones de la invencion la administracion del primer y el segundo agentes terapeuticos se completa en 5, 10, 15, 30, o 45 segundos o en 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, o 30 minutos desde el momento en el que cualquier cantidad de cualquiera del primer o el segundo agentes terapeuticos abandona los confines de cualquier instrumento o dispositivo medico o quirurgico (por ejemplo, aguja, jeringa, trocar, cateter, canula u otro dispositivo que pueda encerrar o contener una solucion o formulacion solida tal como un implante y se pueda usar para introducir tal solucion o formulacion solida en el ojo) y entra en contacto con los tejidos o los fluidos del ojo del sujeto.
Se dice que la administracion es "completa" cuando la dosis completa del agente que se administra ha abandonado los confines de cualquier instrumento o dispositivo medico o quirurgico que se use para introducir el agente terapeutico en el ojo del sujeto, entendiendose que tal instrumento o dispositivo puede retener una cantidad residual del agente. El intervalo de tiempo que comienza desde el momento en el que cualquier cantidad de cualquiera del primer o el segundo agentes terapeuticos abandona los confines de cualquier instrumento o dispositivo medico o quirurgico y entra en contacto con los tejidos o los fluidos del ojo del sujeto y el momento en el que la administracion de tanto el primer como el segundo agentes terapeuticos es completa se denomina en el presente documento "ventana de tiempo" de la administracion. Si se administran mas de dos agentes terapeuticos, la ventana del tiempo de la administracion es el intervalo de tiempo que comienza desde el momento en el que cualquier cantidad de cualquier agente terapeutico abandona los confines de cualquier instrumento o dispositivo medico o quirurgico y entra en contacto con los tejidos o los fluidos del ojo del sujeto y el momento en el que la administracion de todos los agentes terapeuticos es completa. Una ventana de tiempo corta de administracion del primer y el segundo agentes terapeuticos es un rasgo adicional de las realizaciones de la invencion. De ese modo, en el presente documento se desvela un metodo de tratamiento de un trastorno ocular caracterizado por degeneracion macular, CNV, o RNV que comprende la etapa de administrar el primer y el segundo agentes terapeuticos al ojo del sujeto en una ventana de tiempo corta, en el que el primer agente terapeutico proporciona una mejora rapida en el estado del ojo del sujeto y el segundo agente terapeutico es un agente terapeutico de larga duracion o se administra en forma de un componente de una formulacion de liberacion sostenida. En el metodo la ventana de tiempo puede ser no mas de 5, 10, 15, 30 o 45 segundos o no mas de 1,2, 3, 4, 5, 10, 15, o 30 minutos.
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Tambien se desvela en el presente documento un metodo de tratamiento de un trastorno ocular caracterizado por degeneracion macular, cNv, RNV que comprende la etapa de administrar el primer y el segundo agentes terapeuticos al ojo del sujeto, en el que el primer agente terapeutico es un inhibidor de la angiogenesis y el segundo agente terapeutico es un agente terapeutico de larga duracion o se administra en forma de un componente de una formulacion de liberacion sostenida. El segundo agente terapeutico puede ser, pero no necesariamente, un inhibidor del complemento. En ciertas realizaciones el segundo agente es un analogo de compstatina. Opcionalmente el primer y el segundo agentes terapeuticos se administran en un procedimiento individual.
Tambien se desvela un metodo de tratamiento de un trastorno ocular caracterizado por degeneracion macular, CNV, RNV que comprende la etapa de administrar el primer y el segundo agentes terapeuticos al ojo del sujeto, en el que el segundo agente terapeutico es un inhibidor del complemento que es un inhibidor del complemento de larga duracion o se administra en forma de un componente de una formulacion de liberacion sostenida. El primer agente terapeutico puede ser, pero no necesariamente, un inhibidor de la angiogenesis. Opcionalmente el primer y el segundo agentes terapeuticos se administran en un procedimiento individual.
El agente terapeutico que proporciona una mejora rapida en el estado del ojo del paciente se puede administrar en medio lfquido. En algunas realizaciones el agente se administra al menos en parte en una formulacion que libera el agente a lo largo del tiempo en cantidades suficientes y lo suficientemente rapido para proporcionar una mejora rapida en el estado del ojo del sujeto. Por ejemplo, se podnan usar partmulas que degraden o liberen de otro modo una cantidad eficaz del agente en las primeras 24, 48, 72, o 96 horas, en la primera semana, o en las primeras 2 semanas despues de la administracion. En algunas realizaciones se proporciona una primera parte del agente en solucion y se proporciona una segunda parte en una formulacion que proporciona liberacion a lo largo del tiempo. Opcionalmente la segunda parte es un componente de la preparacion de liberacion sostenida del segundo agente.
Mediante la administracion del primer y el segundo agentes terapeuticos en un procedimiento individual, ciertas realizaciones de la presente inversion minimizan el riesgo global de complicaciones y hacen la administracion del segundo agente terapeutico, que puede retrasar principalmente el progreso, inhibir el empeoramiento o desestabilizacion adicional, y/o proporcionar una mejora lenta en lugar de rapida en el estado del ojo del sujeto mas aceptable para los oftalmologos y/o los pacientes. El enfoque de terapia de combinacion de la presente invencion proporciona de ese modo una mejora inesperada e inapreciada en la relacion de riesgo/beneficio asociada a la terapia invasiva de los trastornos oculares.
Tambien se desvelan en el presente documento paquetes o kits y otros artmulos de fabricacion que facilitan la administracion conveniente, eficaz, y segura de multiples agentes terapeuticos al ojo usando un procedimiento individual.
En el presente documento se desvela un metodo de tratamiento de degeneracion macular exudativa con una combinacion de un farmaco antiangiogenico de larga duracion y un farmaco inhibidor del complemento de larga duracion o de liberacion sostenida. El farmaco antiangiogenico de larga duracion reduce el derrame y/o estimula la regresion de vasos sangumeos recien formados en las semanas posteriores al tratamiento; el farmaco inhibidor del complemento de larga duracion o de liberacion lenta prevendra la formacion de nuevos vasos sangumeos y estimulara la regresion de la enfermedad durante un penodo significativo de tiempo (meses o anos dependiendo del dispositivo o formulacion). De ese modo, ciertos metodos que se desvelan en el presente documento (1) inhiben/detienen la formacion de vasos sangumeos y/o derrame en pacientes con degeneracion macular exudativa de forma aguda, de un modo tal que la retina este mas cercana en proximidad a la capa coroides del ojo, y que de ese modo se reduzca el dano isquemico a la retina, y (2) instalan un inhibidor del complemento de larga duracion o de liberacion lenta que disminuira la respuesta inflamatoria en las capas de la retina/RPE/coroides del ojo y de ese modo bloqueara el estfmulo primario de crecimiento de vasos sangumeos y, opcionalmente, inhibira ademas la formacion de depositos de drusas.
En ciertas realizaciones de cualquier aspecto de la invencion, la administracion del primer agente terapeutico no da como resultado una mejora rapida en el estado del ojo del sujeto. Sin embargo, la mejora tiene lugar de forma mas gradual, por ejemplo, en 15 dfas a 3 semanas, en 15 dfas a 4 semanas, en 15 dfas a 5 semanas, o en 15 dfas a 6 semanas.
II. Agentes terapeuticos
Una diversidad de agentes terapeuticos diferentes son de uso en la presente invencion. Ademas, la invencion no esta limitada a la administracion de dos agentes terapeuticos. Por ejemplo, la invencion puede comprender la administracion de una composicion que comprende uno o mas agentes terapeuticos en solucion en medio lfquido, por ejemplo, un medio acuoso, y tambien administrar una composicion que comprende o consiste basicamente en una formulacion de liberacion sostenida, por ejemplo, un implante ocular, que comprende uno o mas agentes terapeuticos, en el curso del mismo procedimiento. De ese modo, ciertas realizaciones de la invencion implican administrar al menos dos, tres, o cuatro agentes terapeuticos en una composicion lfquida y al menos dos, tres, o cuatro agentes terapeuticos en una preparacion de liberacion sostenida. Cualquiera de los agentes terapeuticos que se describen en el presente documento se puede incluir en cualquiera o ambas de la composicion lfquida y la
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formulacion de liberacion sostenida. La formulacion de liberacion sostenida puede ser una composicion Ifquida siempre que posea propiedades de liberacion sostenida.
En ciertas realizaciones el agente terapeutico tiene un resto fijador de diana unido covalente o no covalentemente al mismo. El resto fijador de diana comprende un ligando que se une a un marcador presente sobre o en la superficie de una celula u otro componente diana tal como un constituyente de drusa presente en un sitio de actividad deseada. El termino "ligando" se usa para referirse a un resto que se une espedficamente a un segundo resto.
La cantidad total de cada agente terapeutico usado, y sus concentraciones, pueden variar. A modo de ejemplo, no limitante, las dosis estan entre 0,0001 mg/dosis y 100 mg/dosis para cada ojo que se va a tratar, por ejemplo, entre 0,001 mg/dosis y 100 mg/dosis, entre 0,01 mg/dosis y 100 mg/dosis, entre 0,05 mg/dosis y 50 mg/dosis, entre 0,1 mg/dosis y 10 mg/dosis, entre 0,5 mg/dosis y 5 mg/dosis, entre 1 mg/dosis y 10 mg/dosis, etc. (siendo todas las dosis aproximadas). A modo de ejemplo, no limitante, las concentraciones de un agente terapeutico en una composicion de la invencion estan entre aproximadamente 0,0001 mg y 100 mg del agente terapeutico por mililitro de solucion, por ejemplo, la concentracion puede estar entre 0,001 y 100 mg/ml, entre 0,01 y 50 mg/ml, entre 0,01 y 50 mg/ml, entre 0,1 y 10 mg/ml, etc., siendo todas las concentraciones aproximadas. En realizaciones espedficas la dosis de cualquiera o ambos del primer o el segundo agentes terapeuticos es, sin limitacion, exactamente o aproximadamente 0,1, 0,2, 0,25, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,75, 0,8, 0,9, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, o 5,0 mg o puede estar dentro de un intervalo delimitado por dos cualesquiera de los valores anteriores. Por ejemplo, en ciertas realizaciones una formulacion de liberacion sostenida, por ejemplo, un implante ocular, contiene exactamente o aproximadamente 0,1, 0,2, 0,25, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,75, 0,9, 0,9, 1,0, 2,0, 3,0,4,0, o 5,0 mg de un agente terapeutico o una cantidad que esta dentro de un intervalo delimitado por dos cualesquiera de los valores anteriores. Si el agente terapeutico esta ya aprobado o esta en estudio para su uso en el trastorno, se puede usar una dosis convencional, donde "convencional" significa una dosis unitaria que anteriormente se ha mostrado que es eficaz y/o esta aceptada en la tecnica cuando se usa como agente individual. Por ejemplo, se pueden administrar 0,5 mg de Lucentis o 0,3 mg de Macugen. En otras realizaciones la dosis esta entre 0,5 y 2 veces la dosis convencional.
Las siguientes secciones describen una diversidad de agentes terapeuticos de uso en la invencion, pero la invencion no se limita a estos agentes o clases de agentes o sus mecanismos de accion.
A. Inhibidores de la angiogenesis
Algunos inhibidores de la angiogenesis son agentes citotoxicos que danan o eliminan las celulas diana (por ejemplo, celulas endoteliales) o desencadenan una respuesta mediada por inmunidad que da como resultado el dano o la eliminacion de las celulas diana. Un segundo grupo incluye agentes que basicamente no danan o eliminan las celulas endoteliales sino que en su lugar inhiben su proliferacion, migracion, formacion de tubo capilar, diferenciacion de celulas endoteliales a partir de los precursores de los mismos, u otros procesos asociados a la angiogenesis.
Se ha desarrollado una diversidad de inhibidores de la angiogenesis. El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) es uno de los reguladores clave de la angiogenesis. Otros reguladores incluyen factor 2 de crecimiento de fibroblastos, factor de crecimiento derivado de epitelio pigmentario (PEDF), angiopoyetinas, y moleculas de factores de crecimiento extracelulares (vease, por ejemplo, Ng, E. y Adamis, A., Can. J. Ophthalmol., 40:352-68, 2005 para una discusion de los inhibidores de la angiogenesis y de las moleculas implicadas en la angiogenesis). Cualquiera de estos reguladores y/o las proternas con las que interaction puede ser una diana de un inhibidor de la angiogenesis. VEGF-A es un mitogeno de celulas endoteliales con la capacidad de estimular la angiogenesis in vivo (Leung DW, Cachianes G, Kuang W-J, Goeddel DV, Ferrara N, Science, 246:1306-1309, 1989). Otros miembros de la familia de VEGF incluyen VEGF-B, VEGF-C, y VEGF-D. VEGF-A estimula la proliferacion y supervivencia de las celulas endoteliales asf como la permeabilidad vascular (Ng, citado anteriormente, y referencias en el mismo). VEGF-A existe en varias isoformas diferentes que contienen 121, 145, 165, 189, y 208 aminoacidos (en los seres humanos), de las que VEGF165 puede ser el principal responsable de la neovascularizacion ocular patologica. Existe una diversidad de receptores diferentes para VEGF, por ejemplo, VEGFR-1, VEGFR-2, y VEGPR-3.
Los agentes que inhiben la actividad y/o la expresion de VEGF, por ejemplo, VEGF-A, o uno o mas receptores de VEGF se denominan en el presente documento "agentes anti-VEGF". Los agentes utiles de la invencion incluyen anticuerpos, fragmentos de anticuerpo, y acidos nucleicos que se unen a una o mas isoformas de VEGF o receptores de VEGF. La union puede inhibir la interaccion de una o mas isoformas de VEGF con sus receptores. Macugen (Pfizer, Eyetech) es un ligando de acido nucleico de VEGF (tambien denominado aptamero) que se une a e inhibe VEGF165 (documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.051.698). Lucentis (Genentech) es un fragmento de anticuerpo humanizado que se une a e inhibe el factor A de crecimiento endotelial vascular (VEGF-A) (Gaudreault, J., et al., Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 46, 726-733 (2005) y referencias en el mismo. Avastin (Genentech) es un anticuerpo humanizado de longitud completa que tambien se une a VEGF (revisado en Ferrara, N. Endocr Rev., 25(4):581-611,2004).
Otro inhibidor de la angiogenesis de uso en la invencion es la Trampa de VEGF (Regeneron Pharmceuticals), una proterna de fusion que contiene los dominios extracelulares de dos receptores de VEGF conectados a la region Fc de un anticuerpo (documento de Patente de Estados Unidos n.° 5.844.099).
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En el presente documento se desvelan inhibidores de la angiogenesis que son agentes que inhiben la expresion de una o mas moleculas proangiogenicas a traves del proceso celular denominado interferencia de ARN (ARNi), tambien denominado "silenciamiento genico" (Novina, C.D. y Sharp, P.A. (2004) "The RNAi revolution", Nature, 430, 161-164.). Tales agentes se denominan en el presente documento agentes de ARNi e incluyen siARN y shARN. Por lo general, los agentes de ARNi son acidos nucleicos que inducen una parte de doble cadena entre aproximadamente 17 y 29 nucleotidos, por ejemplo, 19-25, o 19 nucleotidos, de longitud, una cadena de la cual incluye una parte (la cadena "antisentido" o "gma") que es basica o perfectamente complementaria (por ejemplo, al menos un 70%, al menos un 80%, al menos un 90%, o un 100% complementaria) con un gen diana sobre aproximadamente 17-29 nucleotidos, por ejemplo, 19-25, o 19 nucleotidos. Opcionalmente el agente de ARNi incluye uno o mas nucleotidos protuberantes 3' de cadena individual. La presencia de un agente de ARNi resulta por lo general en una degradacion y/o represion traduccional espedfica de secuencia del ARNm diana codificado por el gen diana, inhibiendo de ese modo su expresion. Los agentes de ARNi y los metodos para su diseno y fabricacion se conocen bien la tecnica. Veanse, por ejemplo, Novina, citado anteriormente, y las referencias del mismo asf como los documentos U.S.S.N. 09/821.832 (Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20020086356) y U.S.S.N. 10/832.248 (Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20040229266). Se ha de entender que los agentes de ARNi pueden consistir completamente en nucleotidos tales como los que se encuentran de forma natural en ARN y/o ARN o pueden comprender cualquiera de una amplia diversidad de analogos de nucleotido o pueden diferir de otras formas de la estructura del ARN y ADN de origen natural. Veanse, por ejemplo, los documentos de Publicacion de Patente de Estados Unidos con numeros 20030175950, 20040192626, 20040092470, 20050020525, 20050032733.
En el presente documento se desvela un inhibidor de la angiogenesis que es un agente de ARNi, por ejemplo, un siARN, que inhibe la expresion de una o mas isoformas de VEGF (por ejemplo, VEGF165); o inhibe la expresion de un receptor de VEGF (por ejemplo, VEGFR1). El experto habitual en la materia podra disenar los agentes de ARNi apropiados basandose en las secuencias conocidas de estas moleculas (o cualquier otra molecula proangiogenica diana que incluye, pero no se limita a, angiogenina, angiopoyetina, factores de crecimiento de fibroblastos, PEDF, etc.), que estan disponibles en bases de datos publicas, por ejemplo, GenBank.
El agente de ARNi, cuando se administra a las celulas, por ejemplo, celulas endoteliales, in vitro en una cantidad apropiada opcionalmente junto con compuestos de mejora de captacion tales como lfpidos, puede inhibir la expresion de su gen diana en al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 %, al menos un 90 %. El agente de ARNi, cuando se administra al ojo en una cantidad apropiada, puede inhibir la expresion de su gen diana en al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 %, al menos un 90 %, o mas en al menos una estructura, tejido, o compartimento del ojo, por ejemplo, en la retina. Algunos agentes de ARNi a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, el siARN conocido como Cand5 (Acuity Pharmaceuticals), que inhibe la expresion de VEGF, Sirna-027 (Sirna Therapeutics), que inhibe la expresion de VEGFR-1, y los siARN que tienen una secuencia que difiere en 1, 2, o 3 posiciones de las de cualquiera de Cand5 o Siena-027. Se describen secuencias y estructuras adicionales de agentes de ARNi en los documentos U.S.S.N. 10/294.228 (Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20040018176), U.S.S.N. 10/764.957 (Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20050054596). Algunos acidos nucleicos adicionales que inhiben la expresion de un gen diana incluyen oligonucleotidos antisentido y ribozimas (vease, por ejemplo, el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.818.447).
Otros inhibidores de la angiogenesis incluyen diversos peptidos endogenos o sinteticos tales como angiostatina, arresteno, canstatina, combstatina, endostatina, trombospondina, y tumstatina. Otras moleculas antiangiogenicas incluyen talidomida y sus derivados antiangiogenicos tales como los iMiD (Barnias A, Dimopoulos MA. Eur J Intern Med. 14(8):459-469, 2003; Bartlett JB, Dredge K, Dalgleish AG. Nat Rev Cancer. 4(4):314-22,2004).
La administracion de ciertos inhibidores de la angiogenesis, por ejemplo, agentes anti-VEGF tales como Avastin o Lucentis mediante inyeccion intravftrea da como resultado una mejora rapida en el estado del ojo de un paciente.
Aunque sin el deseo de quedar unidos a ninguna teona, esta mejora rapida se puede producir al menos en parte debido a la disminucion de derrame de los vasos y la reduccion de edema macular. Estos efectos pueden ser, al menos a corto plazo (es decir, durante las primeras 1-2 semanas despues del tratamiento), al menos tan significativos como cualquier inhibicion del desarrollo o el crecimiento de vasos sangumeos que se produzca durante este penodo de tiempo. Los agentes terapeuticos que reducen rapidamente el edema macular pueden ser de uso particular para causar una mejora rapida en el estado del ojo de un paciente. Dado que VEGF es un inductor de la permeabilidad vascular, los agentes anti-VEGF pueden ser especialmente eficaces para estos fines. La endostatina tienen la capacidad de reducir la permeabilidad vascular (vease, por ejemplo, Campochiaro, PA., Expert Opin Biol Ther., 4(9): 1395-402, 2004). En ciertas realizaciones de la invencion se administran endostatina y un agente anti- VEGF, por ejemplo, un anticuerpo, fragmento de anticuerpo, o aptamero que se une a VEGF o a un receptor de VEGF. Cualquiera o ambos agentes pueden estar contenidos en una composicion lfquida o una formulacion de liberacion sostenida.
B. Rutas del complemento e inhibidores del complemento
El sistema de complemento desempena un papel crucial en una diversidad de procesos fisiologicos que incluyen la respuesta a lesiones y la defensa frente a entidades extranas tales como agentes infecciosos. Tambien se conoce
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que el sistema de complemento desempena un papel en una diversidad de enfermedades (Makrides, SC, Pharm Rev., 50(1): 59-87, 1998). El sistema de complemento comprende mas de 30 protemas sericas y celulares que estan implicadas en dos rutas principales, conocidas como las rutas clasicas y alternativa (Kuby Immunology, 2000).
La ruta clasica se desencadena habitualmente por union de un complejo de un antigeno y un anticuerpo IgM o IgG a C1 (aunque tambien pueden iniciar la ruta ciertos otros activadores). C1 activado escinde C4 y C2 para producir C4a y C4b, ademas de C2a y C2b. C4b y C2a se combinan para formar C3 convertasa, que escinde C3 para formar C3a y C3b. La union de C3b a C3 convertasa produce C5 convertasa, que escinde C5 en C5a y C5b. C3a, C4a, y C5a son anafilotoxinas y median multiples reacciones en la respuesta inflamatoria aguda. C3a y C5a tambien son factores quimiotacticos que atraen celulas del sistema inmunitario tales como neutrofilos. La actividad de C3 y C5 convertasa esta controlada por una diversidad de miembros endogenos de la familia de los Reguladores de la Activacion del Complemento (RCA), tambien denominada familia de Protemas de Control del Complemento (CCP), que incluye el receptor del complemento de tipo 1 (CR1; receptor de C3b:C4b), el receptor del complemento de tipo 2 (CR2), la protema cofactor de membrana (MCP; CD46), el factor acelerador del decaimiento (DAF), el factor H (fH), y la protema de union a C4b (C4bp). Las protemas de RCA se describen en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.897.290.
La ruta alternativa se inicia mediante superficies microbianas y diversos polisacaridos complejos. En esta ruta, C3b, que resulta de la escision de C3, que se produce de forma espontanea a bajo nivel, se une a dianas en las superficies celulares y forma un complejo con el factor B, que se escinde posteriormente mediante el factor D, dando como resultado una C3 convertasa. La escision de C3 y la union de otra molecula de C3b a la C3 convertasa da lugar a una C5 convertasa. Las C3 y C5 convertasas de esta ruta estan reguladas por CR1, DAF, MCP, y fH. El modo de accion de estas protemas implica actividad aceleradora del decaimiento (es decir, capacidad de disociar convertasas), capacidad de servir como cofactores en la degradacion de C3b o C4b por parte del factor I, o ambas.
Las C5 convertasas producidas en ambas rutas escinden C5 para producir C5a y C5b. C5b se une a continuacion a C6, C7, y C8 para formar C5b-8, que cataliza la polimerizacion de C9 para formar el complejo de ataque a membrana (MAC) C5b-9. El MAC se inserta en las membranas de las celulas diana y causa la lisis celular. Pequenas cantidades de MAC en la membrana de las celulas pueden tener una diversidad de consecuencias distintas de la muerte celular.
Una tercera ruta del complemento, la ruta del complemento de la lectina, se inicia por union de lectina de union a manosa (MBL) y la serina proteasa asociada a MBL (MASP) a carbohidratos. En la ruta de la lectina humana, MASP-1 y MASP-2 estan implicadas en la proteolisis de C4, C2 y C3, lo que conduce a una C3 convertasa descrita anteriormente.
La actividad del complemento esta regulada por diversas protemas de mairnfero denominadas protemas de control del complemento (CCP). Estas protemas difieren con respecto a la especificidad de ligando y el mecanismo o mecanismos de inhibicion del complemento (Lisczewski, mK y Atkinson, JP, in The Human Complement System in Health and Disease, ed. Volanakis, JE y Frank, MM, Decker, Nueva York, pag. 149-66, 1998). Pueden acelerar el decaimiento normal de convertasas y/o funcionar como cofactores del factor I, para escindir enzimaticamente C3b y/o C4b en fragmentos menores. Las CCP se caracterizan por la presencia de multiples (por lo general 4-56) motivos homologos conocidos como repeticiones consenso cortas (SCR), modulos de protema de control del complemento (CCP), o dominios SUSHI (Reid, KBM y Day, AJ, Immunol Today, 10:177-80, 1989). Estos dominios, que consisten en aproximadamente 50-70 aminoacidos, por lo general aproximadamente 60 aminoacidos, se caracterizan por un motivo conservado que incluye cuatro cistemas unidas por disulfuro (dos enlaces disulfuro), prolina, triptofano, y numerosos restos hidrofobos. La figura 2 muestra una secuencia consenso SCR. Cualquier SCR particular puede diferir del consenso en una o mas posiciones.
En la presente invencion el segundo agente es un inhibidor del complemento seleccionado entre el grupo que consiste en un analogo de compstatina que tiene una actividad inhibidora del complemento al menos 5 veces mayor que la compstatina, un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo monoclonal que se une a C3, y un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo que se une a C5, factor B o factor D. Un inhibidor del complemento puede inhibir la activacion del complemento, por ejemplo, inhibir la activacion de una o mas protemas del complemento. Por ejemplo, puede inhibir la escision de una protema del complemento inactiva en su forma activa. Los inhibidores del complemento incluyen, pero no se limitan a, (i) protemas de control del complemento o inhibidoras del complemento virales o de marnffero asf como fragmentos o variantes de las mismas que retienen la capacidad de inhibir el complemento; (ii) compstatina y derivados de la misma; (3) y antagonistas de receptores del complemento. Las siguientes secciones describen inhibidores del complemento de uso en diversas realizaciones de la invencion.
Compuestos que inhiben la activacion o actividad de C3
En ciertas realizaciones de la invencion el inhibidor del complemento inhibe la activacion de C3. Algunos compuestos a modo de ejemplo incluyen compuestos que se unen a C3 e inhiben su escision. El compuesto puede ser un analogo de compstatina. La compstatina es un peptido dclico identificado usando presentacion en fagos que se une al componente del complemento C3 e inhibe la activacion del complemento. La compstatina inhibe la escision
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de C3 a C3a y C3b mediante convertasa. Dado que C3 es un componente principal de las tres rutas de activacion del complemento, la compstatina y los analogos de la misma son capaces de inhibir la activacion de la protema convergente de las tres rutas. Sin el deseo de quedar unidos a ninguna teona, la capacidad de la compstatina y de los analogos de la misma para inhibir la ruta alternativa de la activacion del complemento puede contribuir considerablemente a su eficacia en ciertos de los trastornos que se describen en el presente documento.
La invencion incluye el reconocimiento de que la compstatina y los analogos de la misma poseen ventajas unicas e inesperadas en comparacion con ciertos otros inhibidores del complemento, particularmente para la liberacion sostenida, en una diversidad de trastornos oculares. El peso molecular relativamente bajo (~1,6 kD) y diversas otras propiedades de los analogos de compstatina facilitan su incorporacion a las formulaciones y los dispositivos de suministro sostenido adecuados para proporcionar concentraciones terapeuticas al ojo. En ciertas realizaciones se suministra un analogo de compstatina de forma sostenida durante un penodo prolongado de tiempo tal como 1-2 semanas, 2-4 semanas, 1-3 meses, 3-6 meses, 6-12 meses, 1-2 anos, 2-5 anos, o 5-10 anos.
La compstatina se describe en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.319.897. La compstatina tiene una secuencia Ile-[Cys-Val-Val-Gln-Asp-Trp-Gly-His-His-Arg-Cys]-Thr (SEQ ID NO: 8), indicandose el enlace disulfuro entre las dos cistemas mediante corchetes. Hay una region dclica N-terminal de un peptido mayor (SEQ ID NO: 1 en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.319.897) que tambien muestra actividad inhibidora del complemento. Se han identificado una diversidad de fragmentos y variantes de compstatina que inhiben el complemento. Veanse, por ejemplo, las SEQ ID NO: 13, 15, 20, 21, y 22 del documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.319.897.
Se ha sintetizado una diversidad de analogos de compstatina que tienen una actividad inhibidora del complemento mayor que la compstatina. Veanse el documento de Patente WO2004/026328 (PCT/US2003/029653), Morikis, D., et al., Biochem Soc Trans. 32(Pt 1):28-32, 2004, Mallik, B., et al., J. Med. Chem., 274-286, 2005, y/o en Katragadda, M., et al. J. Med. Chem., 49: 4616-4622,2006. En la presente invencion se pueden usar los peptidos y peptidomimeticos inhibidores del complemento que se describen en los mismos.
Como se usa en el presente documento, la expresion "analogo de compstatina" incluye la compstatina y cualquier analogo inhibidor del complemento de la misma y se usa de forma intercambiable con "derivado de compstatina". La expresion "analogo de compstatina" incluye la compstatina y otros compuestos disenados o identificados basandose en la compstatina y cuya actividad inhibidora del complemento es al menos un 50 % mayor que la de la compstatina segun se mide, por ejemplo, usando cualquier ensayo de activacion del complemento aceptado en la tecnica o ensayos basicamente similares o equivalentes. Se describen ciertos analogos de compstatina y ensayos adecuados en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.319.897, el documento de Patente WO2004/026328, Morikis, citado anteriormente, Mallik, citado anteriormente, y/o Katragadda 2006, citado anteriormente. El ensayo puede medir, por ejemplo, la lisis de eritrocitos mediada por la ruta alternativa o puede ser un ensayo de ELISA (veanse los Ejemplos 5 y 6 de las solicitudes de Patente pendientes de publicacion USSN 11/544.389 y PCT/US06/39397). La invencion incluye realizaciones en las que se usan uno cualquiera o mas de los analogos de compstatina o las composiciones que se describen en el presente documento. En la invencion se usa un peptido que tiene una actividad inhibidora del complemento al menos 5 veces mayor que la compstatina, preferentemente una actividad al menos 10 veces mayor, etc.
La compstatina y cualquiera de sus analogos pueden estar acetilados o amidados, por ejemplo, en los extremos N- terminal y/o C-terminal. Por ejemplo, la compstatina y cualquiera de sus analogos pueden estar acetilados en el extremo N-terminal y amidados en el extremo C-terminal. De forma consistente con el uso en la tecnica, "compstatina", como se usa en el presente documento, y las actividades de los analogos de compstatina que se describen el presente documento con respecto a las de la compstatina, se refieren a compstatina amidada en el extremo C-terminal (Mallik, 2005, citado anteriormente).
Los concatameros o multfmeros de un analogo de compstatina de la misma tambien son de uso en la presente invencion. Un complejo supramolecular que comprende un analogo de compstatina es de uso en la invencion.
La actividad de un analogo de compstatina se puede expresar en terminos de su valor de CI50 (la concentracion del compuesto que inhibe la actividad del complemento en un 50 %), por ejemplo, en una concentracion en plasma particular, indicando un valor inferior de CI50 una mayor actividad como se reconoce en la tecnica.
Se conocen ciertas modificaciones para reducir o eliminar la actividad inhibidora del complemento y se pueden excluir de forma explfcita de cualquier realizacion de la invencion. Se ha informado que el valor de CI50 de la compstatina es 12 pM usando un ensayo de actividad del complemento que comprende la medicion de un ensayo de lisis de eritrocitos mediada por la ruta alternativa (documento de Patente WO2004/026328). En ciertas realizaciones de la invencion la actividad del analogo de compstatina es entre 10 y 50 veces mayor que la de la compstatina, o entre 50 y 99 veces mayor que la de la compstatina. En ciertas realizaciones de la invencion la actividad del analogo de compstatina es entre 99 y 264 veces la de la compstatina. Por ejemplo, la actividad puede ser 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, o 264 veces mayor que la de la compstatina. En ciertas realizaciones la actividad es entre 264 y 300, 300 y 350, 350 y 400, o 400 y 500 veces
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mayor que la de la compstatina. La invencion contempla ademas analogos de compstatina que tienen actividades entre 500 y 1000 veces mayor que la de la compstatina.
Se ha informado que la Kd de la union de la compstatina a C3 es 1,3 pM usando calorimetna de valoracion isotermica (Katragadda, et al., J. Biol. Chem., 279(53), 54987-54995,2004). Se ha correlacionado la afinidad de union de una diversidad de analogos de compstatina por C3 con su actividad, indicando un menor valor de Kd una mayor afinidad de union, como se reconoce en la tecnica. Se ha mostrado una correlacion lineal entre la afinidad de union y la actividad para ciertos analogos sometidos a ensayo (Katragadda, 2004, citado anteriormente; Katragadda 2006, citado anteriormente). En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de compstatina se une a C3 con una Kd entre 0,05 pM y 0,1 pM, entre 0,025 pM y 0,05 pM, entre 0,015 pM y 0,025 pM, entre 0,01 pM y 0,015 pM, o entre 0,001 pM y 0,01 pM. En ciertas realizaciones el valor de CI50 del analogo de compstatina esta entre aproximadamente 0,1 pM y aproximadamente 0,2 pM. En ciertas realizaciones el valor de CI50 del analogo de compstatina esta entre aproximadamente 0,05 pM y aproximadamente 0,1 pM. En ciertas realizaciones el valor de CI 50 del analogo de compstatina esta entre aproximadamente 0,001 pM y aproximadamente 0,05 pM.
Los compuestos "disenados e identificados basandose en la compstatina" incluyen, pero no se limitan a, compuestos que comprenden una cadena de aminoacidos cuya secuencia se obtiene mediante (i) modificacion de la secuencia de la compstatina (por ejemplo, reemplazando uno o mas aminoacidos de la secuencia de la compstatina con un aminoacido o analogo de aminoacido diferente, insertando uno o mas aminoacidos o analogos de aminoacido en la secuencia de la compstatina, o suprimiendo uno o mas aminoacidos de la secuencia de la compstatina); (ii) seleccion de una librena de peptidos de presentacion en fagos en la que se vanan aleatoriamente uno o mas aminoacidos de la compstatina, y ademas se modifica opcionalmente de acuerdo con el metodo (i); o (iii) identificacion por analisis sistematico de compuestos que compiten con la compstatina o cualquier analogo de la misma obtenido mediante los metodos (i) o (ii) por la union a C3 o un fragmento del mismo. Numerosos analogos de compstatina utiles comprenden una agrupacion hidrofoba, un giro p, y un puente disulfuro.
En ciertas realizaciones de la invencion la secuencia del analogo de compstatina comprende o consiste basicamente en una secuencia que se obtiene haciendo 1, 2, 3, o 4 sustituciones en la secuencia de la compstatina, es decir, se reemplazan 1, 2, 3, o 4 aminoacidos de la secuencia de la compstatina por un aminoacido convencional diferente o por un aminoacido no convencional. En ciertas realizaciones de la invencion se altera el aminoacido de la posicion 4.
En ciertas realizaciones de la invencion se altera el aminoacido de la posicion 9. En ciertas realizaciones de la invencion se alteran los aminoacidos de las posiciones 4 y 9. En ciertas realizaciones de la invencion solo se alteran los aminoacidos de las posiciones 4 y 9. En ciertas realizaciones de la invencion se altera el aminoacido de la posicion 4 o 9, o en ciertas realizaciones se alteran los aminoacidos tanto 4 como 9, y ademas se alteran hasta 2 aminoacidos situados en posiciones seleccionadas entre 1, 7, 10, 11, y 13. En ciertas realizaciones de la invencion se alteran los aminoacidos de las posiciones 4, 7, y 9. En ciertas realizaciones de la invencion se alteran los aminoacidos de las posiciones 2, 12, o ambos, con la condicion de que la alteracion conserve la capacidad del compuesto para ciclarse. Tal alteracion o alteraciones de las posiciones 2 y/o 12 pueden ser ademas de la alteracion o alteraciones de las posiciones 1, 4, 7, 9, 10, 11, y/o 13. Opcionalmente la secuencia de cualquiera de los analogos de compstatina cuya secuencia se obtenga por reemplazo de uno o mas aminoacidos de la secuencia de compstatina incluye ademas hasta 1, 2, o 3 aminoacidos adicionales en el extremo C-terminal. En una realizacion, el aminoacido adicional es Gly. Opcionalmente la secuencia de cualquiera de los analogos de compstatina cuya secuencia se obtenga por reemplazo de uno o mas aminoacidos de la secuencia de compstatina incluye ademas hasta 5, o hasta 10 aminoacidos adicionales en el extremo C-terminal. Se debena entender que los analogos de compstatina pueden tener una o mas de las caractensticas o los rasgos de las diversas realizaciones que se describen en el presente documento, y las caractensticas o los rasgos de cualquier realizacion pueden caracterizar ademas cualquier otra realizacion que se describe en el presente documento, a menos que se indique de otro modo o sea evidente a partir del contexto. En ciertas realizaciones de la invencion la secuencia del analogo de compstatina comprende o consiste basicamente en una secuencia que se muestra en la parte superior de la figura 7, en la que X4 y X9 representan cadenas laterales modificables.
Ciertos analogos de compstatina que tienen una actividad algo mayor que la compstatina contienen solo aminoacidos convencionales (los "aminoacidos convencionales" son glicina, leucina, isoleucina, valina, alanina, fenilalanina, tirosina, triptofano, acido aspartico, asparagina, acido glutamico, glutamina, cistema, metionina, arginina, lisina, prolina, serina, treonina e histidina). Ciertos analogos de compstatina que tienen una actividad mejorada incorporan uno o mas aminoacidos no convencionales. Los aminoacidos no convencionales utiles incluyen aminoacidos halogenados (por ejemplo, fluorados) individualmente o multiples veces, D-aminoacidos, homoaminoacidos, N-alquil aminoacidos, deshidroaminoacidos, aminoacidos aromaticos (distintos de fenilalanina, tirosina y triptofano), acido orto, meta o para-aminobenzoico, fosfoaminoacidos, aminoacidos metoxilados, y aminoacidos a,a-disustituidos. En ciertas realizaciones de la invencion, se disena un analogo de compstatina reemplazando uno o mas L-aminoacidos de un analogo de compstatina descrito en otra parte en el presente documento por el correspondiente D-aminoacido.
Algunos aminoacidos no convencionales a modo de ejemplo de uso incluyen 2-naftilalanina (2-NaI), 1-naftilalanina (1-NaI), acido 2-indanilglicina carboxflico (2Ig1), dihidrotriptofano (Dht), 4-benzoil-L-fenilalanina (Bpa), acido 2-a-
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aminobutmco (2-Abu), acido 3-a-aminobutmco (3-Abu), acido 4-a-aminobutmco (4-Abu), ciclohexilalanina (Cha), homociclohexilalanina (hCha), 4-fluoro-L-triptofano (4fW), 5-fluoro-L-triptofano (5fW), 6-fluoro-L-triptofano (6fW), 4- hidroxi-L-triptofano (4OH-W), 5-hidroxi-L-triptofano (5OH-W), 6-hidroxi-L-triptofano (6OH-W), 1-metil-L-triptofano (1MeW), 4-metil-L-triptofano (4MeW), 5-metil-L-triptofano (5MeW), 7-aza-L-triptofano (7aW), a-metil-L-triptofano (aMeW), p-metil-L-triptofano (pMeW), N-metil-L-triptofano (NMeW), ornitina (orn), citrulina, norleucina, acido y- glutamico, etc.
En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de compstatina comprende uno o mas analogos de Trp (por ejemplo, en la posicion 4 y/o 7 con respecto a la secuencia de la compstatina). Se han mencionado anteriormente analogos de Trp a modo de ejemplo. Veanse tambien Beene, et al. Biochemistry 41: 10262-10269, 2002 (que describe, entre otros, analogos de Trp halogenados individualmente y de forma multiple); Babitzke y Yanofsky, J. Biol. Chem. 270: 12452-12456, 1995 (que describe, entre otros, analogos de Trp metilados y halogenados y otros analogos de Trp e indol); y los documentos de Patente de Estados Unidos con numeros 6.214.790, 6.169.057, 5.776.970, 4.870.097, 4.576.750 y 4.299.838. Otros analogos de Trp incluyen variantes sustituidas (por ejemplo, con un grupo metilo) en un carbono a o p y, opcionalmente, tambien en una o mas posiciones del anillo de indol. Los aminoacidos que comprenden dos o mas anillos aromaticos, incluyendo las variantes sustituidas, sin sustituir, o sustituidas de forma alternativa de los mismos, tambien son de interes como analogos de Trp.
En ciertas realizaciones el analogo de Trp tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp. Por ejemplo, el anillo de indol puede estar sustituido con uno o mas grupos alquilo (por ejemplo, metilo). En ciertas realizaciones el analogo de Trp participa en una interaccion hidrofoba con C3. Tal analogo de Trp puede estar situado, por ejemplo, en la posicion 4 con respecto a la secuencia de la compstatina. En ciertas realizaciones el analogo de Trp comprende un componente de anillo aromatico bidclico sustituido o sin sustituir o dos o mas componentes de anillo aromatico monodclicos sustituidos o sin sustituir.
En ciertas realizaciones el analogo de Trp tiene una propension aumentada a formar enlaces de hidrogeno con C3 con respecto al Trp pero no tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp. El analogo de Trp puede tener una polaridad aumentada con respecto al Trp y/o una capacidad aumentada para participar en una interaccion electrostatica con un donador de enlace de hidrogeno en C3. Ciertos analogos de Trp a modo de ejemplo con un caracter formador de puentes de hidrogeno aumentado comprenden un sustituyente electronegativo en el anillo de indol. Tal analogo de Trp se puede situar, por ejemplo, en la posicion 7 con respecto a la secuencia de la compstatina.
En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de compstatina comprende uno o mas analogos de Ala (por ejemplo, en la posicion 9 con respecto a la secuencia de la compstatina), por ejemplo, analogos de Ala que son identicos a la Ala excepto en que incluyen uno o mas grupos CH2 en la cadena lateral. En ciertas realizaciones el analogo de Ala es un aminoacido sin ramificar con un solo metilo tal como 2-Abu. En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de compstatina comprende uno o mas analogos de Trp (por ejemplo, en la posicion 4 y/o 7 con respecto a la secuencia de la compstatina) y un analogo de Ala (por ejemplo, en la posicion 9 con respecto a la secuencia de la compstatina).
En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de compstatina es un compuesto que comprende un partido que tiene una secuencia de (X'aa)n- Gln - Asp - Xaa - Gly-(X"aa)m, (SEQ ID NO: 2) en la que cada X'aa y cada X"aa es un aminoacido o analogo de aminoacido seleccionado independientemente, en la que Xaa es Trp o un analogo de Trp, yen la que n > 1 y m > 1 y n + m esta entre 5 y 21. El peptido tiene una secuencia principal de Gln - Asp - Xaa - Gly, donde Xaa es Trp o un analogo de Trp, por ejemplo, un analogo de Trp tiene una propension aumentada a formar enlaces de hidrogeno con un donador de enlace de H con respecto al Trp pero, en ciertas realizaciones, no tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp. Por ejemplo, el analogo puede ser uno en el que el anillo de indol del Trp esta sustituido con un resto electronegativo, por ejemplo, un halogeno tal como fluor. En una realizacion Xaa es 5-fluorotriptofano. A falta de evidencias que demuestren lo contrario, el experto en la materia reconocera que cualquier peptido de origen no natural cuya secuencia comprenda esta secuencia principal y que inhiba la activacion del complemento y/o se una a C3 se habra disenado basandose en la secuencia de la compstatina. En una realizacion alternativa Xaa es un aminoacido o analogo de aminoacido distinto de un analogo de Trp que permite que el peptido Gln - Asp - Xaa - Gly forme un giro p.
En ciertas realizaciones de la invencion el peptido tiene una secuencia principal de X'aa-Gln - Asp - Xaa - Gly (SEQ ID NO: 3), donde X'aa y Xaa se seleccionan entre Trp y analogos de Trp. En ciertas realizaciones de la invencion el peptido tiene una secuencia principal de X'aa-Gln - Asp - Xaa - Gly (SEQ ID NO: 3), donde X'aa y Xaa se seleccionan entre Trp, analogos de Trp, y otros aminoacidos o analogos de aminoacido que comprenden al menos un anillo aromatico. En ciertas realizaciones de la invencion la secuencia principal forma un giro p en el contexto del peptido. El giro p puede ser flexible, permitiendo que el peptido asuma dos o mas conformaciones que se evaluan, por ejemplo, usando resonancia magnetica nuclear (RMN). En ciertas realizaciones X'aa es un analogo de Trp que comprende un componente de anillo aromatico bidclico sustituido o sin sustituir o dos o mas componentes de anillo aromatico monodclicos sustituidos o sin sustituir. En ciertas realizaciones de la invencion X'aa se selecciona entre el grupo que consiste en 2-naftilalanina, 1-naftilalanina, acido 2-indanilglicina carboxflico, dihidrotriptofano, y benzoilfenilalanina. En ciertas realizaciones de la invencion X'aa es un analogo de Trp que tiene un caracter
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hidrofobo aumentado con respecto al Trp. Por ejemplo, X'aa puede ser 1-metiltriptofano. En ciertas realizaciones de la invencion Xaa es un analogo de Trp que tiene una propension aumentada a formar enlaces de hidrogeno con respecto al Trp pero, en ciertas realizaciones, no tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp. En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de Trp que tiene una propension aumentada a formar enlaces de hidrogeno con respecto al Trp comprende una modificacion en el anillo de indol del Trp, por ejemplo, en la posicion 5, tal como una sustitucion de un atomo de halogeno por un atomo de H en la posicion 5. Por ejemplo, Xaa puede ser 5-fluorotriptofano.
En ciertas realizaciones de la invencion el peptido tiene una secuencia principal de X'aa-Gln - Asp - Xaa - Gly-X"aa (SEQ ID NO: 4), donde X'aa y Xaa se seleccionan cada uno independientemente entre Trp y analogos de Trp y X"aa se selecciona entre His, Ala, analogos de Ala, Phe, y Trp. En ciertas realizaciones de la invencion X'aa es un analogo de Trp que tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp, tal como 1-metiltriptofano o otro analogo de Trp que tenga un sustituyente alquilo en el anillo de indol (por ejemplo, en la posicion 1, 4, 5, o 6). En ciertas realizaciones X'aa es un analogo de Trp que comprende un componente de anillo aromatico bidclico sustituido o sin sustituir o dos o mas componentes de anillo aromatico monodclicos sustituidos o sin sustituir. En ciertas realizaciones de la invencion X'aa se selecciona entre el grupo que consiste en 2-naftilalanina, 1-naftilalanina, acido 2-indanilglicina carboxflico, dihidrotriptofano, y benzoilfenilalanina. En ciertas realizaciones de la invencion Xaa es un analogo de Trp que tiene una propension aumentada a formar enlaces de hidrogeno con C3 con respecto al Trp pero, en ciertas realizaciones, no tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp. En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de Trp que tiene una propension aumentada a formar enlaces de hidrogeno con respecto al Trp comprende una modificacion en el anillo de indol del Trp, por ejemplo, en la posicion 5, tal como una sustitucion de un atomo de halogeno por un atomo de H en la posicion 5. Por ejemplo, Xaa puede ser 5- fluorotriptofano. En ciertas realizaciones X"aa es Ala o un analogo de Ala tal como Abu o otro aminoacido sin ramificar con un solo metilo. En ciertas realizaciones de la invencion el peptido tiene una secuencia principal de X'aa-Gln - Asp - Xaa - Gly-X"aa (SEQ ID NO: 4), donde X'aa y Xaa se seleccionan cada uno independientemente entre Trp, analogos de Trp, y aminoacidos o analogos de aminoacido que comprenden al menos una cadena lateral aromatica, y X"aa se selecciona entre His, Ala, analogos de Ala, Phe, y Trp. En ciertas realizaciones X"aa se selecciona entre analogos de Trp, aminoacidos aromaticos, y analogos de aminoacidos aromaticos.
En ciertas realizaciones preferentes de la invencion el peptido es dclico. El peptido se puede ciclar a traves de un enlace entre dos aminoacidos cualesquiera, uno de los cuales es (X'aa)n y el otro de los cuales esta situado en (X"aa)m. En ciertas realizaciones la parte dclica del peptido tiene una longitud entre 9 y 15 aminoacidos, por ejemplo, 10-12 aminoacidos de longitud. En ciertas realizaciones la parte dclica del peptido tiene 11 aminoacidos de longitud, con un enlace (por ejemplo, un enlace disulfuro) entre los aminoacidos en las posiciones 2 y 12. Por ejemplo, el peptido puede tener 13 aminoacidos de longitud, con un enlace entre los aminoacidos en las posiciones 2 y 12 dando como resultado una parte dclica de 11 aminoacidos de longitud.
En ciertas realizaciones el peptido comprende o consiste en la secuencia X'aa1 - X'aa2 - X'aa3 - X'aa4 -Gln-Asp- Xaa-Gly X"aa1- X"aa2- X"aa3- X"aa4- X"aa5 (SEQ ID NO: 5). En ciertas realizaciones X'aa4 y Xaa se seleccionan entre Trp y analogos de Trp, y X'aa1, X'aa2, X'aa3, X"aa1, X"aa2, X"aa3, X"aa4, y X"aa5 se seleccionan independientemente entre aminoacidos y analogos de aminoacido. En ciertas realizaciones X'aa4 y Xaa se seleccionan entre aminoacidos aromaticos y analogos de aminoacidos aromaticos. Uno cualquiera o mas de X'aa1, X'aa2, X'aa3, X"aa1, X"aa2, X"aa3, X"aa4, y X"aa5 pueden ser identicos al aminoacido de la posicion correspondiente en la compstatina. En una realizacion, X"aa1 es Ala o un aminoacido sin ramificar con un solo metilo. El peptido puede se puede ciclar a traves de un enlace covalente entre (i) X'aa1, X'aa2, o X'aa3; y (ii) X"aa2, X"aa3, X"aa4 o X"aa5. En una realizacion el peptido se cicla a traves de un enlace covalente entre X'aa2 y X"aa4. En una realizacion los aminoacidos unidos covalentemente son cada Cys y el enlace covalente es un enlace disulfuro (S-S). En otras realizaciones en enlace covalente es un enlace C-C, C-O, C-S, o C-N. En ciertas realizaciones uno de los restos unido covalentemente es un aminoacido o un analogo de aminoacido que tiene una cadena lateral que comprende una amina primaria o secundaria, el otro resto unido covalentemente es un aminoacido o un analogo de aminoacido que tiene una cadena lateral que comprende un grupo acido carboxflico, y el enlace covalente es un enlace amida. Los aminoacidos o analogos de aminoacido que tienen una cadena lateral que comprende una amina primaria o secundaria incluyen lisina y acidos diaminocarboxflicos de estructura general NH2(CH2)nCH(NH2)COOH tales como acido 2,3-diaminopropionico (dapa), acido 2,4-diaminobutmco (daba), y ornitina (orn), en los que n = 1 (dapa), 2 (daba), y 3 (orn), respectivamente. Algunos ejemplos de aminoacidos que tienen una cadena lateral que comprende un grupo acido carboxflico incluyen aminoacidos dicarboxflicos tales como acido glutamico y acido aspartico. Tambien se pueden usar analogos tales como acido beta-hidroxi-L-glutamico.
En ciertas realizaciones, el analogo de compstatina es un compuesto que comprende un peptido que tiene una secuencia:
Xaa1 - Cys - Val- Xaa2 - Gln - Asp - Xaa2* - Gly - Xaa3 - His - Arg - Cys - Xaa4 (SEQ ID NO: 6); en la que:
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Xaa1 es Ile, Val, Leu, B -Ile, B -Val, B -Leu o un dipeptido que comprende Gly-Ile o B -Gly-Ile, y B
representa un primer resto bloqueante;
Xaa2 y Xaa2* se seleccionan independientemente entre Trp y analogos de Trp;
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Xaa3 es His, Ala o un analogo de Ala, Phe, Trp, o un analogo de Trp;
Xaa4 es L-Thr, D-Thr, Ile, Val, Gly, un dipeptido seleccionado entre Thr-Ala y Thr-Asn, o un tripeptido que comprende Thr-Ala-Asn, en los que un -OH carboxilo terminal de cualquiera de L-Thr, D-Thr, Ile, Val, Gly, Ala, o Asn esta reemplazado opcionalmente por un segundo resto bloqueante B2; y los dos restos Cys estan unidos mediante un enlace disulfuro.
En otras realizaciones Xaa1 esta ausente o es cualquier aminoacido o analogo de aminoacido, y Xaa2, Xaa2*, Xaa3, y Xaa4 son como se han definido anteriormente. Si Xaa1 esta ausente, el resto de Cys N-terminal puede tener un resto bloqueante B1 unido al mismo.
En otra realizacion, Xaa4 es cualquier aminoacido o analogo de aminoacido y Xaa1, Xaa2, Xaa2*, y Xaa3 son como se han definido anteriormente. En otra realizacion Xaa4 es un dipeptido seleccionado entre el grupo que consiste en: Thr-Ala y Thr-Asn, en los que el -OH carboxilo terminal o la Ala o Asn estan opcionalmente reemplazados por un segundo resto bloqueante B2.
En cualquiera de las realizaciones del analogo de compstatina de SEQ ID NO: 6, Xaa2 puede ser Trp.
En cualquiera de las realizaciones del analogo de compstatina de SEQ ID NO: 6, Xaa2 puede ser un analogo de Trp que comprende un componente de anillo aromatico bidclico sustituido o sin sustituir o dos o mas componentes de anillo aromatico monodclicos sustituidos o sin sustituir. Por ejemplo, el analogo de Trp se puede seleccionar entre 2- naftilalanina (2-NaI), 1-naftilalanina (1-NaI), acido 2-indanilglicina carboxflico (Ig1), dihidrotriptofano (Dht), y 4- benzoil-L-fenilalanina.
En cualquiera de las realizaciones del analogo de compstatina de SEQ ID NO: 6, Xaa2 puede ser un analogo de Trp que tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp. Por ejemplo, el analogo de Trp se puede seleccionar entre 1-metiltriptofano, 4-metiltriptofano, 5-metiltriptofano, y 6-metiltriptofano. En una realizacion, el analogo de Trp es 1-metiltriptofano. En una realizacion, Xaa2 es 1-metiltriptofano, Xaa2* es Trp, Xaa3 es Ala, y los demas aminoacidos son identicos a los de la compstatina.
En cualquiera de las realizaciones del analogo de compstatina de SEQ ID NO: 6, Xaa2* puede ser un analogo de Trp tal como un analogo de Trp que tiene una propension aumentada a formar enlaces de hidrogeno con C3 con respecto al Trp, que, en ciertas realizaciones, no tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp. En ciertas realizaciones el analogo de Trp comprende un sustituyente electronegativo en el anillo de indol. Por ejemplo, el analogo de Trp se puede seleccionar entre 5-fluorotriptofano y 6-fluorotriptofano.
En ciertas realizaciones de la invencion Xaa2 es Trp y Xaa2* es un analogo de Trp que tiene una propension aumentada a formar enlaces de hidrogeno con C3 con respecto al Trp que, en ciertas realizaciones, no tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp. En ciertas realizaciones del analogo de compstatina de SEQ ID NO: 6, Xaa2 es un analogo de Trp que tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp tal como un analogo de Trp seleccionado entre 1-metiltriptofano, 4-metiltriptofano, 5-metiltriptofano, y 6-metiltriptofano, y Xaa2* es un analogo de Trp que tiene una propension aumentada a formar enlaces de hidrogeno con C3 con respecto al Trp que, en ciertas realizaciones, no tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp. Por ejemplo, en una realizacion Xaa2 es metiltriptofano y Xaa2* es 5-fluorotriptofano.
En ciertas de las realizaciones mencionadas anteriormente, Xaa3 es Ala. En ciertas de las realizaciones mencionadas anteriormente Xaa3 es un aminoacido sin ramificar con un solo metilo, por ejemplo, Abu.
En ciertas realizaciones la invencion emplea un analogo de compstatina de SEQ ID NO: 6, como se ha descrito anteriormente, en la que Xaa2 y Xaa2* se seleccionan independientemente entre Trp, analogos de Trp, y otros aminoacidos o analogos de aminoacido que comprenden al menos un anillo aromatico, y Xaa3 es His, Ala o un analogo de Ala, Phe, Trp, un analogo de Trp, u otro aminoacido aromatico o analogo de aminoacido aromatico.
En ciertas realizaciones de la invencion el resto bloqueante presente en los extremos N- y C-terminal de cualquiera de los analogos de compstatina que se describen en el presente documento es cualquier resto que estabilice un peptido frente a la degradacion que se podna producir de otro modo en la sangre o el humor arbitrio de un mairnfero (por ejemplo, un ser humano o un primate no humano). Por ejemplo, el resto bloqueante B1 podna ser cualquier resto que altere la estructura del extremo N-terminal de un peptido de un modo tal que inhiba la escision de un enlace peptfdico entre el aminoacido N-terminal del peptido y el aminoacido adyacente. El resto bloqueante B2 podna ser cualquier resto que altere la estructura del extremo C-terminal de un peptido de un modo tal que inhiba la escision de un enlace peptidico entre el aminoacido C-terminal del peptido y el aminoacido adyacente. Se podna usar cualquier resto bloqueante adecuado conocido en la tecnica. En ciertas realizaciones de la invencion el resto bloqueante B1 comprende un grupo acilo (es decir, la parte de un acido carboxflico que permanece despues de la retirada del grupo -OH). El grupo acilo comprende por lo general entre 1 y 12 carbonos, por ejemplo, entre 1 y 6 carbonos. Por ejemplo, en ciertas realizaciones de la invencion el resto bloqueante B1 se selecciona entre el grupo que consiste en: formilo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, valerilo, isovalerilo, etc. En una realizacion, el resto bloqueante B1 es un grupo acetilo, es decir, Xaa1 es Ac-Ile, Ac-Val, Ac-Leu, o Ac-Gly-Ile.
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En ciertas realizaciones de la invencion el resto bloqueante B2 es una amina primaria o secundaria (-NH2 o -NHR1, en la que R es un resto organico tal como un grupo alquilo).
En ciertas realizaciones de la invencion el resto bloqueante B1 es cualquier resto que neutralice o reduzca la carga negativa que de otro modo puede estar presente en el extremo N-terminal a pH fisiologico. En ciertas realizaciones de la invencion del resto bloqueante B2 es cualquier resto que neutralice o reduzca la carga negativa que de otro modo puede estar presente en el extremo C-terminal a pH fisiologico.
En ciertas realizaciones de la invencion, el analogo de compstatina esta acetilado o amidado en los extremos N- terminal y/o C-terminal, respectivamente. Un analogo de compstatina puede estar acetilado en el extremo N- terminal, amidado en el extremo C-terminal, o tanto acetilado en el extremo N-terminal como amidado en el extremo C-terminal. En ciertas realizaciones de la invencion un analogo de compstatina comprende un grupo alquilo o arilo en el extremo N-terminal en lugar de un grupo acetilo.
En ciertas realizaciones, el analogo de compstatina es un compuesto que comprende un peptido que tiene una secuencia:
Xaa1 - Cys - Val - Xaa2 - Gln - Asp - Xaa2* - Gly - Xaa3 - His - Arg - Cys - Xaa4 (SEQ ID NO: 7); en la que:
Xaa1 es Ile, Val, Leu, Ac-Ile, Ac-Val, Ac-Leu o un dipeptido que comprende Gly-Ile o Ac-Gly-Ile;
Xaa2 y Xaa2* se seleccionan independientemente entre Trp y analogos de Trp;
Xaa3 es His, Ala o un analogo de Ala, Phe, Trp, o un analogo de Trp;
Xaa4 es L-Thr, D-Thr, Ile, Val, Gly, un dipeptido seleccionado entre Thr-Ala y Thr-Asn, o un tripeptido que comprende Thr-Ala-Asn, en el que un -OH carboxilo terminal de cualquiera de L-Thr, D-Thr, Ile, Val, Gly, Ala, o Asn esta reemplazado opcionalmente con -NH2; y los dos restos de Cys estan unidos mediante un enlace disulfuro.
Xaa1, Xaa2, Xaa2*, Xaa3, y Xaa4 son como se han descrito anteriormente para las diversas realizaciones de SEQ ID NO: 6. Por ejemplo, en ciertas realizaciones Xaa2* es Trp. En ciertas realizaciones Xaa2 es un analogo de Trp que tiene un caracter hidrofobo aumentado con respecto al Trp, por ejemplo, 1-metiltriptofano. En ciertas realizaciones Xaa3 es Ala. En ciertas realizaciones Xaa3 es un aminoacido sin ramificar con un solo metilo.
En ciertas realizaciones de la invencion Xaa1 es Ile y Xaa4 es L-Thr.
En ciertas realizaciones de la invencion Xaa1 es Ile, Xaa2* es Trp, y Xaa4 es L-Thr.
En ciertas realizaciones la invencion utiliza un analogo de compstatina de SEQ ID NO:
anteriormente, en la que Xaa2 y Xaa2* se seleccionan independientemente entre Trp, aminoacidos o analogos de aminoacidos aromaticos, y
Xaa3 es His, Ala o un analogo de Ala, Phe, Trp, un analogo de Trp, u otro aminoacido aminoacido aromatico.
En ciertas realizaciones de cualquiera de los analogos de compstatina que se describen en el presente documento, Xaa3 es un analogo de His.
La Tabla 1 proporciona una lista no limitante de analogos de compstatina utiles en la presente invencion (excluyendo Ac-compstatina). Los analogos se denominan en forma abreviada en la columna izquierda indicando las modificaciones espedficas en las posiciones designadas (1-13) en comparacion con el peptido precursor,
compstatina (amidado en el extremo C-terminal). A menos que se indique otra cosa, los peptidos estan amidados en
el extremo C-terminal. El texto en negrita se usa para indicar ciertas modificaciones. La actividad con respecto a la compstatina (en este caso compstatina amidada en el extremo C-terminal) se basa en datos publicados y los analisis que se describen en los mismos (documento de Patente WO2004/026326, Mallik, 2005; Katragadda, 2006). Cuando se consultaron multiples publicaciones que informan de la actividad, se usa el valor publicado mas recientemente, y se ha de reconocer que los valores se pueden ajustar en el caso de diferencias entre los ensayos. Tambien se ha de entender que los peptidos que se enumeran en la Tabla 1 estan ciclados a traves de un enlace disulfuro entre los dos restos de Cys cuando se usan en la invencion.
7, como se ha descrito analogos de Trp, otros
aromatico o analogo de
Tabla 1
Peptido
Secuencia SEQ ID NO: Actividad con respecto a la compstatina
Compstatina
H-ICVVQDWGHHRCT-CONH2 8 *
Ac-compstatina
AC-ICVVQDWGHHRCT-CONH2 9 3 veces mas
Ac-V4Y/H9A
AC-ICVYQDWGAHRCT-CONH2 10 14 veces mas
Peptido
Secuencia SEQ ID NO: Actividad con respecto a la compstatina
Ac-V4W/H9A-OH
Ac-ICVWQDWGAHRCT-COOH 11 27 veces mas
Ac-V4W/H9A
Ac-ICVWQDWGAHRCT-CONH2 12 45 veces mas
Ac-V4W/H9A/T13dT-OH
Ac-ICVWQDWGAHRCdT-COOH 13 55 veces mas
Ac-V4(2-Nal)/H9A
Ac-ICV(2-Nal)QDWGAHRCT-CONH? 14 99 veces mas
Ac V4(2-Nal)/H9A-OH
Ac-ICV(2-Nal)QD7WGAHRCT-COOH 15 38 veces mas
Ac V4(1-Nal)/H9A -OH
Ac-ICV(1-Nal)QDWGAHRCT-COOH 16 30 veces mas
Ac-V42Igl/H9A
Ac-ICV(2-Iql)QDWGAHRCT-CONH? 17 39 veces mas
Ac-V42Igl/H9A-OH
Ac-ICV(2-Iql)QDWGAHRCT-COOH 18 37 veces mas
Ac-V4Dht/H9A -OH
Ac-ICVDhtQDWGAHRCT-COOH 19 5 veces mas
Ac-V4(Bpa)/H9A -OH
Ac-ICV(Bpa)QDWAHRCT-COOH 20 49 veces mas
Ac-V4(Bpa)/H9A
Ac-ICV(Bpa)QDWGAHCT-CONH? 21 86 veces mas
Ac-V4(Bta)/H9A -OH
Ac-ICV(Bta)QDWGAHRCT-COOH 22 65 veces mas
Ac-V4(Bta)/H9A
Ac-ICV(Bta)QDWGAHRCT-CONH? 23 64 veces mas
Ac-V4W/H9(2-Abu)
Ac-ICVWQDWG(2-Abu)HRCT-CONH? 24 64 veces mas
+G/V4W/H9A +AN -OH
H-GICVWQDWGAHRCTAN-COOH 25 38 veces mas
Ac-V4(5fW)/H9A
Ac-ICV(5fW)QDWGAHRCT- CONH2 26 31 veces mas
Ac-V4(5-MeW)/H9A
Ac-ICV(5-metil-W)QDWGAHRCT-CONHp 27 67 veces mas
Ac-V4(1-MeW)/H9A
Ac-ICV(1-metil-W)QDWGAHRCT-CONH? 28 264 veces mas
Ac-V4W/W7(5fW)/H9A
Ac-ICVWQD(5fW)GAHRCT-CONH? 29 121 veces mas
Ac-V4(5fW)/W7(5fW)/H9A
Ac-ICV(5fW)QD(5fW)GAHRCT- CONH2 30 NA
Ac-V4(5-MeW)/W7(5fW)H9A
Ac-ICV(5-metil-W)QD(5fW)GAHRCT- CONH2 31 NA
Ac-V4(1MeW)/W7(5fW)/H9A
Ac-ICV(1-metil-W)QD(5fW)GAHRCT- CONH2 32 264 veces mas
NA = no disponible
En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de compstatina tiene una secuencia seleccionada entre las secuencias 10-32. En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de compstatina tiene una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 14, 21, 28, 29, y 32. En ciertas realizaciones de la invencion el analogo de 5 compstatina tiene una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 30 y 31. En una realizacion de la invencion el analogo de compstatina tiene una secuencia de SEQ ID NO: 28. En una realizacion de la invencion el analogo de compstatina tiene una secuencia de SEQ ID NO: 32.
En otras realizaciones, se usan los analogos de compstatina que tienen las secuencias que se exponen en la Tabla 10 1, pero donde el grupo Ac se reemplaza con un resto bloqueante B1 alternativo, como se ha descrito anteriormente.
En otras realizaciones, se usan los analogos de compstatina que tienen las secuencias que se exponen en la Tabla 1, pero donde el grupo -NH2 se reemplaza con un resto bloqueante B2 alternativo, como se ha descrito anteriormente.
15 En una realizacion, el analogo de compstatina se une basicamente a la misma region de la cadena p del C3 humano que la compstatina. En una realizacion el analogo de compstatina es un compuesto que se une a un fragmento de la parte C-terminal de la cadena p del C3 humano que tiene un peso molecular de aproximadamente 40 kDa al que se une la compstatina (Soulika, A.M., et al., Mol. Immunol., 35:160, 1998; Soulika, A.M., et al., Mol. Immunol. 43(12):2023-9, 2006). En ciertas realizaciones el analogo de compstatina es un compuesto que se une al sitio de 20 union de la compstatina segun se determina en una estructura compstatina-C3, por ejemplo, una estructura cristalina o una estructura 3D derivada de RMN. En ciertas realizaciones el analogo de compstatina es un compuesto que podna sustituir a la compstatina en una estructura compstatina-C3 y podna formar basicamente los mismos contactos intermoleculares con C3 que la compstatina. En ciertas realizaciones el analogo de compstatina es un compuesto que se une al sitio de union de un peptido que tiene una secuencia expuesta en la Tabla 1, por ejemplo,
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SEQ ID NO: 14, 21, 28, 29, o 32 en una estructura peptido-C3, por ejemplo, una estructura cristalina. En ciertas realizaciones el analogo de compstatina es un compuesto que se une al sitio de union de un peptido que tiene SEQ ID NO: 30 o 31 en una estructura peptido-C3, por ejemplo, una estructura cristalina. En ciertas realizaciones el analogo de compstatina es un compuesto que podna sustituir a un peptido de SEQ ID NO: 9-32, por ejemplo, SEQ ID NO: 14, 21, 28, o 32 en una estructura peptido-C3 y podna formar basicamente los mismos contactos intermoleculares con C3 que el peptido. En ciertas realizaciones el analogo de compstatina es un compuesto que podna sustituir a un peptido de SEQ ID NO: 30 o 31 en una estructura peptido-C3 y podna formar basicamente los mismos contactos intermoleculares con C3 que el peptido.
El experto habitual en la materia sera capaz de terminar facilmente si un analogo de compstatina se une a un fragmento de la parte C-terminal de la cadena p de C3 usando metodos experimentales de rutina. Por ejemplo, el experto en la materia podna sintetizar una version fotorreticulable del analogo de compstatina incluyendo un aminoacido de fotorreticulacion tal como p-benzoil-L-fenilalanina (Bpa) en el compuesto, por ejemplo, en el extremo C-terminal de la secuencia (Soulika, A.M., et al., citado anteriormente). Opcionalmente se podnan incluir aminoacidos adicionales, por ejemplo, una marca de epftopo tal como una marca FLAG o una marca HA para facilitar la deteccion del compuesto, por ejemplo, mediante transferencia Western. El analogo de compstatina se incuba con el fragmento y se inicia la reticulacion. La localizacion conjunta del analogo de compstatina y el fragmento de C3 indica la union. Tambien se puede usar resonancia por plasmones superficiales para determinar si un analogo de compstatina se une al sitio de union de la compstatina en C3 o un fragmento del mismo. El experto en la materia podna usar programas de software de modelizacion molecular para predecir si un compuesto formana basicamente los mismos contactos intermoleculares con C3 que la compstatina o un peptido que tenga la secuencia de cualquiera de los peptidos de la Tabla 1, por ejemplo, SEQ ID NO: 14, 21,28, 29, o 32, o en otras realizaciones SEQ ID NO: 30 o 31.
Los analogos de compstatina se pueden preparar mediante diversos metodos sinteticos de smtesis de peptidos conocidos en la tecnica a traves de la condensacion de restos de aminoacido, por ejemplo, de acuerdo con los metodos convencionales de smtesis de peptidos, se pueden preparar por expresion in vitro o en celulas vivas a partir de secuencias de acidos nucleicos apropiadas que los codifican usando metodos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, los peptidos se pueden sintetizar usando las metodologfas convencionales en fase solida que se describen en Malik, citado anteriormente, Katragadda, citado anteriormente, y/o el documento de Patente WO2004026328. Se pueden proteger restos potencialmente reactivos tales como grupos amino y carboxilo, grupos funcionales reactivos, etc., y desproteger posteriormente usando diversos grupos protectores y metodologfas conocidos en la tecnica.
Vease, por ejemplo, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a ed. Greene, T. W. y Wuts, P. G., Eds., John Wiley & Sons, Nueva York: 1999. Los peptidos se pueden purificar usando enfoques convencionales tales como HPLC en fase inversa. La separacion de peptidos diastereomericos se puede llevar a cabo, si se desea, usando metodos conocidos tales como HPLC en fase inversa. Si se desea, las preparaciones se pueden liofilizar y posteriormente disolver en un disolvente adecuado, por ejemplo, agua. El pH de la solucion resultante se puede ajustar, por ejemplo a pH fisiologico, usando una base tal como NaOH. Si se desea, las preparaciones de los peptidos se pueden caracterizar mediante espectrometna de masas, por ejemplo, para confirmar la masa y/o la formacion de enlaces disulfuro. Veanse, por ejemplo, Mallik, 2005, y Katragadda, 2006.
La estructura de la compstatina se conoce en la tecnica, y tambien se conocen las estructuras de RMN de una diversidad de analogos de compstatina que tienen mayor actividad que la compstatina (Malik, citado anteriormente). La informacion estructural se puede usar para disenar mimeticos de compstatina. En una realizacion, el mimetico de compstatina es cualquier compuesto que compite con la compstatina o cualquier analogo de compstatina (por ejemplo, un analogo de compstatina cuya secuencia se expone en la Tabla 1) por la union a C3 o un fragmento del mismo (tal como un fragmento de 40 kD de la cadena p al que se une la compstatina) y que tiene una actividad igual o mayor que la de la compstatina. El mimetico de compstatina puede ser un peptido, acido nucleico, o molecula pequena. En ciertas realizaciones el mimetico de compstatina es un compuesto que se une al sitio de union de la compstatina segun se determina en una estructura compstatina-C3, por ejemplo, una estructura cristalina o una estructura 3D obtenida a partir de experimentos de RMN. En ciertas realizaciones el mimetico de compstatina es un compuesto que podna sustituir a la compstatina en una estructura compstatina-C3 y formana basicamente los mismos contactos intermoleculares con C3 que la compstatina. En realizaciones el mimetico de compstatina es un compuesto que se une al sitio de union de un peptido que tiene una secuencia expuesta en la Tabla 1, por ejemplo, SEQ ID NO: 14, 21, 28, 29, o 32, o en ciertas realizaciones SEQ ID NO: 30 o 31, en una estructura peptido-C3. En ciertas realizaciones el mimetico de compstatina es un compuesto que podna sustituir a un peptido que tiene una secuencia expuesta en la Tabla 1, por ejemplo, SEQ ID NO: 14, 21, 28, 29, o 32, o en ciertas realizaciones SEQ ID NO: 30 o 31, en una estructura peptido-C3 y formana basicamente los mismos contactos intermoleculares con C3 que el peptido. En ciertas realizaciones el mimetico de compstatina tiene una cadena principal no peptfdica pero tiene cadenas laterales dispuestas en una secuencia disenada basandose en la secuencia de la compstatina.
El experto en la materia ha de entender que una vez se ha determinado una conformacion deseada particular de un peptido corto, se conocen bien los metodos para disenar un peptido o un peptidomimetico que se ajuste a esa conformacion. Vease, por ejemplo, G.R. Marshall (1993), Tetrahedron, 49: 3547-3558; Hruby y Nikiforovich (1991), en Molecular Conformation and Biological Interactions, P. Balaram & S. Ramasehan, ed., Indian Acad. of Sci.,
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Bangalore, PP. 429-455), Eguchi M, Kahn M., Mini Rev Med Chem., 2(5):447-62, 2002. De relevancia particular para la presente invencion, el diseno de analogos de peptidos se puede refinar ademas considerando la contribucion de las diversas cadenas laterales de los restos de aminoacido, por ejemplo, al efecto de grupos funcionales o a consideraciones estericas como se describe en la tecnica para la compstatina y los analogos de la misma, entre otros.
Los expertos en la materia han de entender que un mimetico de un peptido puede servir igualmente bien que un peptido para el fin de proporcionar la conformacion de cadena principal espedfica y las funcionalidades de las cadenas laterales requeridas para la union a C3 y la inhibicion de la activacion del complemento. Por lo tanto, se contempla que esta dentro del alcance de la presente invencion producir y utilizar compuestos de inhibicion del complemento y union a C3 mediante el uso de aminoacidos de origen natural, derivados de aminoacidos, analogos o moleculas que no son aminoacidos capaces de unirse para formar la conformacion de cadena principal apropiada.
Un analogo no peptfdico, o un analogo que comprende componentes peptfdicos y no peptfdicos, se denomina en ocasiones en el presente documento "peptidomimetico" o "mimetico isosterico", para designar las sustituciones o derivaciones de un peptido que poseen muchos de los rasgos conformacionales de la cadena principal y/u otras funcionalidades, de un modo tal que sea suficientemente similar a los peptidos mostrados a modo de ejemplo para inhibir la activacion del complemento. Mas generalmente, un mimetico de compstatina es cualquier compuesto que situana farmacoforos de forma similar a su situacion en la compstatina, incluso si difiriera la cadena principal.
El uso de peptidomimeticos para el desarrollo de analogos peptfdicos de alta afinidad se conoce en la tecnica. Suponiendo restricciones rotacionales similares a las de los restos de aminoacido de un peptido, se pueden analizar analogos que comprenden restos que no son aminoacidos, y verificar sus motivos conformacionales, por medio del grafico de Ramachandran (Hruby y Nikiforovich 1991), entre otras tecnicas conocidas. Se pueden usar metodos virtuales de analisis sistematico para identificar mimeticos de compstatina que se unan a C3. Tales metodos pueden comprender el uso de algoritmos adecuados para acoplar computacionalmente, calificar, y opcionalmente clasificar una pluralidad de estructuras candidatas. Se puede usar cualquiera de una amplia diversidad de programas de software disponibles para llevar a cabo el metodo virtual de analisis sistematico. Algunos programas a modo de ejemplo utiles para acoplamiento molecular flexible incluyen DOCK 4.0, FlexX 1.8, AutoDock 3.0, GOLD 1.2, ICM 2.8, y versiones mas recientes de los mismos.
El experto en la materia podra establecer facilmente ensayos de analisis sistematico adecuados para identificar mimeticos de compstatina adicionales y para seleccionar los que tengan las actividades inhibidoras deseadas. Por ejemplo, se podna marcar la compstatina o un analogo de la misma (por ejemplo, con una marca radioactiva o fluorescente) y poner en contacto con C3 en presencia de diferentes concentraciones de un compuesto de ensayo.
Se evalua la capacidad de un compuesto de ensayo para disminuir la union del analogo de compstatina a C3. Un compuesto de ensayo que disminuya considerablemente la union del analogo de compstatina a C3 es un mimetico de compstatina candidato. Por ejemplo, un compuesto de ensayo que disminuya la concentracion en estado estacionario de un complejo analogo de compstatina-C3, o que disminuya la velocidad de formacion de un complejo analogo de compstatina-C3 en al menos un 25 %, o en al menos un 50 %, es un candidato a mimetico de compstatina. El experto en la materia ha de entender que se puede emplear una diversidad de variaciones de este ensayo de analisis sistematico. Los compuestos que se analizan sistematicamente incluyen productos naturales, librenas de aptameros, librenas de presentacion en fagos, librenas de compuestos sintetizados usando qrnmica combinatoria, etc. La invencion incluye sintetizar una librena combinatoria de compuestos basandose en la secuencia principal descrita anteriormente y analizar sistematicamente la librena para identificar mimeticos de compstatina. Cualquiera de estos metodos tambien se podna usar para identificar nuevos analogos de compstatina que tengan una actividad inhibidora mayor que los analogos de compstatina sometidos a ensayo de ese modo hasta la fecha.
Los anticuerpos monoclonales que se unen a los receptores de C3 o C3a (C3aR) son de uso en la invencion. El documento de Patente de Estados Unidos n.° 5.942.405 desvela antagonistas de C3aR. Se pueden identificar aptameros que se unen a e inhiben el factor B usando metodos tales como SELEX (discutido posteriormente). El documento de Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20030191084 desvela aptameros que se unen a C1q, C3 y C5.
Compuestos que inhiben la activacion o la actividad del factor B
Los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpo que se unen al factor B son de uso en la invencion. Algunos anticuerpos a modo de ejemplo que inhiben el factor B se describen en el documento de Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20050260198. En ciertas realizaciones el anticuerpo o el fragmento de union a antfgeno aislado se une selectivamente al factor B en el tercer dominio de repeticion consenso corta (SCR). En ciertas realizaciones el anticuerpo evita la formacion de un complejo C3bBb. En ciertas realizaciones el anticuerpo o el fragmento de union a antfgeno evita o inhibe la escision del factor B en factor D. En ciertas realizaciones el inhibidor del complemento es un anticuerpo que se une basicamente al mismo sitio de union en el factor B que un anticuerpo descrito en el documento de Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20050260198.
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Compuestos que inhiben la actividad del factor D
Los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpo que se unen al factor D son de uso en la invencion. Algunos anticuerpos a modo de ejemplo que inhiben el factor D se describen en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 7.112.327. En ciertas realizaciones el anticuerpo se une basicamente al mismo sitio de union en el factor B que un anticuerpo descrito en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 7.112.327. Algunos polipeptidos a modo de ejemplo que inhiben la activacion de la ruta alternativa y se cree que inhiben el factor D se desvelan en el documento de Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20040038869.
Protenas virales de control del complemento (VCCP) y protenas virales inhibidoras del complemento (VCIP)
Los poxvirus y herpesvirus son familias de virus grandes y complejos con un genoma de ADN bicatenario lineal, algunos de los cuales infectan animales y pueden causar una diversidad de enfermedades, la mas temida de las cuales en seres humanos es la viruela. Ciertos de estos virus codifican una diversidad de protemas inmunomoduladoras que se cree que desempenan un papel en la patogenesis al trastornar uno o mas aspectos de la respuesta inmune normal y/o desarrollar el acogimiento de un entorno mas favorable en el organismo hospedador (Kotwal, GJ, Immunology Today, 21(5), 242-248, 2000). Las VCCP se encuentran entre estas protemas. Las protemas de control del complemento de poxvirus son miembros de la superfamilia de protemas de control del complemento (CCP) y contienen por lo general 4 modulos SCR. Estas protemas poseen caractensticas que las hacen particularmente ventajosas para el tratamiento y la prevencion de afecciones relacionadas con degeneracion macular y para el tratamiento y la prevencion de neovascularizacion coroidal. Los agentes se describen en el documento de Patente U.S.S.N. 60/616.983, presentado el 8 de octubre de 2004, en el documento de Patente US 2006/0142191, presentado el 8 de octubre de 2005, titulado VIRAL COMPLEMENT CONTROL PROTEINS FOR EYE DISORDERS, y/o en el documento de Patente U.S.S.N. 60/751.771, y el documento de Patente US 2008/0075755, presentados el 19 de diciembre de 2005, y el 19 de diciembre de 2006, respectivamente, titulados VIRAL COMPLEMENT CONTROL PROTEINS FOR EYE DISORDERS CHARACTERIZED BY INFLAMMATION.
Una protema de control del complemento de poxvirus (PVCCP) puede comprender una secuencia codificada, por ejemplo, por virus vacuna, virus de la viruela mayor, virus de la viruela menor, virus de la viruela bovina, virus de la viruela de los monos, virus ectromelia, virus de la viruela de los conejos, virus mixoma, virus de enfermedad de tipo Yaba, o virus de la viruela porcina. Una protema de control del complemento de herpesvirus (HVCCP) puede comprender una secuencia codificada por radinovirus de Macaca fuscata, herpesvirus 17 de cercopitecinos, o virus del herpes 8 humano. La HVCCP puede comprender una secuencia codificada por virus del herpes simple saimiri ORF 4 u ORF 15 (Albrecht, JC. y Fleckenstein, B., J. Virol., 66, 3937-3940, 1992; Albrecht, J., et al., Virology, 190, 527-530, 1992).
La VCCP puede inhibir la ruta clasica del complemento, la ruta alternativa del complemento, la ruta de la lectina, o cualquier combinacion de estas. La VCCP, por ejemplo, una PVCCP, puede unirse a C3b, C4b, o ambos. La PVCCP puede comprender uno o mas sitios putativos de union a heparina (K/R-X-K/R) y/o poseer una carga positiva global. Preferentemente la PVCCP comprende al menos 3 modulos SCR (por ejemplo, 1-3 modulos), preferentemente 4 modulos SCR. La protema PVCCP puede ser un precursor de una PVCCP madura (es decir, puede incluir una secuencia de senal que normalmente se retira por escision cuando la protema se expresa en celulas infectadas por virus) o puede ser una forma madura (es decir, que carece de la secuencia de senal).
La protema de control del complemento de vacuna (VCP) es una protema codificada por virus segregada a partir las infectadas con vacuna. VCP tiene 244 aminoacidos de longitud, contiene 4 SCR, y se produce de forma natural por escision intracelular de un precursor de 263 aminoacidos. VCP migra como una protema de -35 kD en un gel de SDS al 12 %/poliacrilamida en condiciones reductoras y tiene una masa molecular predicha de aproximadamente 28,6 kD. VCP se describe en los documentos de Patente de Estados Unidos con numeros 5.157.110 y 6.140.472, y en Kotwal, GK, et al., Nature, 355, 176-178, 1988. Las figuras 3A y 3B muestran la secuencia del precursor y las protemas VCP maduras, respectivamente. Se ha mostrado que VCP inhibe la ruta clasica de activacion del complemento a traves de su capacidad de unirse a C3 y C4 y actuar como cofactor para la escision mediada por factor I de estos componentes asf como estimular el decaimiento de la convertasa existente (Kotwal, GK, et al., Science, 250, 827-830, 1990; McKenzie et al., J. Infect. Dis., 1566, 1245-1250, 1992). Tambien se ha mostrado que inhibe la ruta alternativa causando la escision de C3b en iC3b y previniendo de ese modo la formacion de la C3 convertasa de la ruta alternativa (Sahu, A, et al., J. Immunol., 160, 5596-5604, 1998). VCP bloquea de ese modo la activacion del complemento en multiples etapas y reduce los niveles de factores C3a, C4a, y C5a proinflamatorios y quimiotacticos.
VCP tambien posee la capacidad de unirse fuertemente a heparina ademas de a proteoglicanos de heparan sulfato. VCP contiene dos sitios putativos de union a heparina situados en los modulos 1 y 4 (Jha, P y Kotwal, GJ, y las referencias en el mismo). VCP es capaz de unirse a la superficie de las celulas endoteliales, posiblemente a traves de la interaccion con heparina y/o heparan sulfato en la superficie de las celulas, dando como resultado una disminucion de la union de anticuerpo (Smith, SA, et al., J. Virol., 74(12), 5659-5666,2000). VCP se puede recoger en los mastocitos y posiblemente persistir en el tejido durante pertedos prolongados de tiempo, prolongando de ese modo potencialmente su actividad (Kotwal, GJ, et al., In GP. Talwat, et al. (eds), 10° Congreso Internacional de
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Inmunolog^a, Monduzzi Editore, Bologna, Italia, 1998). Ademas, VCP puede reducir la migracion quimiotactica de leucocitos mediante el bloqueo de union a quimioquinas (Reynolds, D, et al., en S. Jameel y L. Villareal (ed., Advances in animal virology. Oxford & IBN Publishing, Nueva Delhi, India, 1999).
Los virus de la viruela mayor y menor codifican protemas que son altamente homologas con VCP y se denominan inhibidor de viruela de enzimas del complemento (SPICE) (Rosengard, AM, et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 99(13), 8803-8813, documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.551.595). El SPICE de diversas cepas de viruela secuenciadas hasta la fecha difiere de VCP en aproximadamente un 5 % (por ejemplo, difiere en aproximadamente 11 aminoacidos). De forma similar a VCP, SPICE se une a C3b y C4b y causa su degradacion, actuando como cofactor para el factor I. Sin embargo, SPICE degrada a C3b aproximadamente 100 veces mas rapido que VCP y degrada C4b aproximadamente seis veces mas rapido que VCP. La secuencia de aminoacidos de SPICE se presenta en la figura 6 y se puede describir como sigue a continuacion. Por referencia a la figura 6, una senal de secuencia se prolonga desde el aminoacido 1 hasta aproximadamente el aminoacido 19. Cuatro SCR se prolongan desde aproximadamente el aminoacido 20 hasta el aminoacido 263. Cada SCR se caracteriza por cuatro restos de cistema. Los cuatro restos de cistema forman dos enlaces disulfuro en la protema expresada. Los lfmites de cada SCR se definen de la mejor forma mediante el primer y el cuarto restos de cistema de la secuencia que forma los enlaces disulfuro en la SCR. Un resto de triptofano invariante esta presente entre la cistema 3 y la cistema 4 de cada SCR. SCR1 se prolonga desde el aminoacido 20 o 21 hasta el aminoacido 81. Ambos restos son cistemas que pueden estar implicadas en un enlace disulfuro. SCR2 se prolonga desde el aminoacido 86 hasta el aminoacido 143. SCR3 se prolonga desde el aminoacido 148 hasta el aminoacido 201. SCR4 se prolonga desde el aminoacido 206 hasta el aminoacido 261. Las SCR incluyen ubicaciones de union a complemento de SPICE. El SPICE o cualquiera de las partes del mismo que inhiben la activacion del complemento, por ejemplo, SPICE y polipeptidos relacionados con SPICE que contienen cuatro SCR, tales como los que se describen en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.551.595, son de uso en la presente invencion.
Tambien se han identificado y secuenciado protemas de control del complemento de virus de la viruela bovina (denominada protema moduladora de inflamacion, IMP) y de virus de la viruela de los monos (denominada en el presente documento protema de control de complemento de virus de la viruela de los monos, MCP) (Miller, CG, et al., Virology, 229, 126-133, 1997 y Uvarova, EA y Shchelkunov, SN, Virus Res., 81(1-2), 39-45,2001). MCP difiere de las demas PVCCP que se describen en el presente documento en que contiene un truncamiento en la parte C- terminal del cuarto sCr.
Se ha de entender que la secuencia exacta de las protemas de control del complemento identificadas en diferentes aislados de virus pueden diferir ligeramente.
Se pueden usar protemas de control del complemento de cualquiera de tales aislados, con la condicion de que las protemas no hayan experimentado una mutacion que elimine basicamente su actividad. De ese modo, la secuencia de una VCCP tal como SPICE o VCP puede diferir de las secuencias exactas presentadas en el presente documento o en los numeros de registro enumerados en la Tabla 1. Tambien se ha de entender que se puede realizar una diversidad de alteraciones de aminoacidos, por ejemplo, adiciones, supresiones, o sustituciones tales como sustituciones conservativas de aminoacidos, en un polipeptido habitual tal como una VCCP sin que afecte significativamente a su actividad, de un modo tal que la protema resultante se considera equivalente a la protema original. Por ejemplo, se pueden cambiar con frecuencia hasta aproximadamente un 10% de los aminoacidos, o pasta aproximadamente un 20 % de los aminoacidos sin alterar significativamente la actividad. Ademas, por supuesto, los dominios conocidos por tener funciones similares se pueden sustituir entre sf. Tales dominios se pueden encontrar en un polipeptido individual (por ejemplo, dominios repetidos) o en polipeptidos homologos diferentes. El efecto de cualquier alteracion de aminoacidos o sustitucion de dominios particular se puede determinar facilmente.
La figura 4 muestra una alineacion de secuencia de una diversidad de protemas de control del complemento de poxvirus de aislados de viruela mayor y menor, vacuna, virus de la viruela bovina, y virus de la viruela de los monos. La figura 5 muestra una comparacion de la estructura del dominio SCR de una diversidad de protemas de control del complemento y fragmentos de las mismas, el numero de restos K+R, % de restos K+R, pl, numero de sitios putativos de union a heparina, y capacidad para inhibir la hemolisis (indicativo de actividad inhibidora del complemento) y/o unirse a heparina.
Sin limitacion, cualquiera de los polipeptidos virales identificados por el numero de registro de la siguiente Tabla 2 es de uso en diversas realizaciones de la invencion.
Tabla 2: Protemas de control del complemento virales representativas
Virus
Protema Registro Tipo de virus
Viruela
D12L NP_042056 Ortopoxvirus
D15L (SPICE) AAA69423 Ortopoxvirus
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Virus
Protema Registro Tipo de virus
Vacuna
VCP AAO89304 Ortopoxvirus
Viruela bovina
CPXV034 AAM13481 Ortopoxvirus
C17L CAA64102 Ortopoxvirus
Viruela de los monos
D14L AAV84857 Ortopoxvirus
Virus ectromelia
Protema de control del complemento CAE00484 Ortopoxvirus
Viruela de los conejos
RPXV017 AAS49730 Ortopoxvirus
Radinovirus de Macaca fuscata
JM4 AAS99981 Radinavirus (Herpesvirus)
Herpesvirus 17 de cercopitecinos
Protema de union a complemento (ORF4) NP_570746 Herpesvirus
Virus del herpes 8 humano
Protema de union a complemento (ORF4) AAB62602 Herpesvirus
Compuestos que inhiben la activacion o la actividad de C5
Los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpo que se unen a C5 son de uso en la invencion. Algunos anticuerpos a modo de ejemplo se describen en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.534.058. Se describen compuestos que se unen a e inhiben C5 en los documented de Publicacion de Patente de Estados Unidos con numeros 20050090448 y 20060115476. En ciertas realizaciones el anticuerpo se une basicamente al mismo sitio de union en C5 que un anticuerpo descrito en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.534.058 o un peptido descrito en el documento de Patente USSN 10/937.912. El documento de Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20060105980 desvela aptameros que se unen a e inhiben C5.
Algunos antagonistas del receptor de C5a a modo de ejemplo incluyen una diversidad de polipeptidos ctelicos pequenos tales como los que se describen en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.821.950; el documento de Patente US 2009/0117171; y/o el documento de Patente PCT/US06/08960 (WO2006/099330).
Por ejemplo, el compuesto puede ser de la siguiente formula general I:
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donde A es H, alquilo, arilo, NH2, NHalquilo, N(alquilo)2, NHarilo o NHacilo; B es un grupo alquilo, arilo, fenilo, bencilo, naftilo o indol, o la cadena lateral de un D- o L-aminoacido seleccionado entre el grupo que consiste en fenilalanina, homofenilalanina, triptofano, homotriptofano, tirosina, y homotirosina; C es la cadena lateral de un D-, Lo homo-aminoacido seleccionado entre el grupo que consiste en prolina, alanina, leucina, valina, isoleucina, arginina, histidina, aspartato, glutamato, glutamina, asparagina, lisina, tirosina, fenilalanina, ciclohexilalanina, norleucina, triptofano, cistema y metionina; D es la cadena lateral de un D- o L-aminoacido seleccionado entre el grupo que consiste en ciclohexilalanina, homociclohexilalanina, leucina, norleucina, homoleucina, homonorleucina y triptofano; E es la cadena lateral de un D- o L-aminoacido seleccionado entre el grupo que consiste en triptofano y homotriptofano; F es la cadena lateral de un D- o L-aminoacido seleccionado entre el grupo que consiste en arginina, homoarginina, lisina y homolisina o es una de las siguientes cadenas laterales
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u otro mimetico de una cadena lateral de arginina, donde X es NCN, NNO2, CHNO2 o NSO2NH2; n es un numero 5 entero de 1 a 4, y R1 es H o un alquilo, arilo, CN, NH2, OH, --CO-CH2CH3, -CO-CH3, --CO--CH2CH2CH3, --CO--CH2 Ph, o --CO-Ph; y X1 es --(CH2)nNH- o (CH2)n -S--, --(CH2)2 O-, --(CH2)3 O-, -(CH2)3-, --(CH2)4--, o --CH2COCHRNH-, donde R es la cadena lateral de cualquier aminoacido comun o no comun, y donde n es un numero entero de 1 a 4, por ejemplo, 1, 2, 3, o 4.
10 En ciertos compuestos, F es una de las siguientes cadenas laterales:
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u otro mimetico de una cadena lateral de arginina; donde X es NCN, NNO2, CHNO2 o NSO2NH2; n es un numero entero de 1 a 4, y R1 es H o un alquilo, arilo, CN, NH2, OH, --CO-CH2CH3, --CO-CH3, --CO--CH2CH2CH3, -CO--CH2 Ph, o --CO-Ph; B es un grupo indol, indol metilo, bencilo, fenilo, naftilo, naftil metilo, cinamilo, o cualquier otro derivado del grupo aromatico; y C es D- o L-ciclohexilalanina (Cha), leucina, valina, isoleucina, fenilalanina, triptofano o metionina. En ciertos compuestos, A es L-arginina. En ciertos compuestos, F es un L-aminoacido. En ciertos compuestos, F es L-arginina. En ciertos compuestos, n = 1, 2, 3, o 4.
El compuesto se puede seleccionar entre el grupo que consiste en las SEQ ID NO: 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 y 28, como se describe en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.821.950. Tambien se pueden usar otros compuestos desvelados en el mismo. Por ejemplo, A, B, C, D, E, F, y R1 pueden ser cualquiera de los grupos mencionados en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.821.950. Se ha de observar que a las letras A, B, C, D, E, y F de las formulas que se presentan en el presente documento se han de dar los significados que se describen en el presente documento y en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.821.950 y no representan elementos qmmicos o isotopos tales como boro, carbono, deuterio, o fluor. Los compuestos descritos anteriormente se denominaran colectivamente en el presente documento GPCRA.
Un inhibidor del complemento puede ser un inhibidor del receptor de C5a, por ejemplo, un antagonista de C5a. Por ejemplo, el inhibidor del complemento puede ser un peptido que tiene la siguiente secuencia: HC-[ORN-PRO-dCHA- TRP-ARG] (SEQ ID NO: 45) donde HC = hidrocinamato, dCHA = d-ciclohexilalanina, ORN = 1 -ornitina, y [ ] indica ciclacion a traves de un enlace amida. El inhibidor del complemento puede ser un peptido que tiene la secuencia Ac- PHE-[ORN-PRO-dCHA-TRP-ARG] (SEQ ID NO: 46), usando las mismas abreviaturas. El inhibidor del complemento puede ser el compuesto que se representa en la figura 8 o un inhibidor del receptor de C3a, por ejemplo, un antagonista de C3a.
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Los metodos para preparar GPCRA, confirmar su estructura, y someter a ensayo su actividad como moduladores de GPCR se desvelan en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.821.950. Ciertos de estos compuestos estan disponibles en Promics (Brisbane, Australia). Un inhibidor del complemento es PMX205.
C. Agentes terapeuticos de larga duracion
En ciertas realizaciones de la invencion al menos uno de los agentes terapeuticos es un agente de larga duracion. Por ejemplo, ciertos inhibidores del complemento pueden tener intrmsecamente una larga duracion de actividad incluso si no se proporcionan como un componente de una formulacion de liberacion sostenida. El agente terapeutico de larga duracion puede tener, por ejemplo, un penodo de actividad de al menos 3 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, o al menos 12 meses cuando se administra en solucion en un medio lfquido en cantidades medicamente aceptables. El agente terapeutico de larga duracion se pueda administrar en solucion en un medio lfquido o puede ser un componente de una formulacion solida o semisolida que contiene opcionalmente uno o mas componentes terapeuticamente activos o inactivos adicionales.
En otras realizaciones, se modifica un agente terapeutico que no es un agente de larga duracion de un modo tal que se vuelva de larga duracion. La modificacion puede estabilizar, por ejemplo, el agente frente a la actividad de diversas moleculas endogenas tales como proteasas. Las modificaciones adecuadas se conocen en la tecnica e incluyen, por ejemplo, pegilacion.
En ciertas realizaciones de la invencion el agente terapeutico de larga duracion se administra en forma de un componente de una formulacion de liberacion sostenida, por ejemplo, un implante ocular o cualquier formulacion de liberacion sostenida que se describe en el presente documento.
III. Composiciones tfquidas que comprenden un agente terapeutico
En ciertas realizaciones de la invencion al menos uno de los agentes terapeuticos, por ejemplo, cualquiera de los agentes terapeuticos utiles en la invencion discutida anteriormente, se administra en solucion en un medio lfquido. Se pueden combinar preparaciones adecuadas, por ejemplo, preparaciones basicamente puras de uno o mas agentes terapeuticos con vehfculos farmaceuticamente aceptables, diluyentes, disolventes, etc., para producir una composicion farmaceutica apropiada, es decir, una que sea farmaceuticamente aceptable para la administracion al ojo. La preparacion puede contener un vehuculo farmaceuticamente aceptable, diluyente, etc. Los vehfculos adecuados se conocen en la tecnica e incluyen, por ejemplo, agua esteril para inyeccion, solucion salina, etc. Algunos componentes adicionales pueden incluir, pero no se limitan a, tampones, conservantes, sales, etc.
Los propios agentes terapeuticos se pueden proporcionar en forma de sales farmaceuticamente aceptables, que incluyen las que se obtienen a partir de acidos y bases inorganicos y organicos farmaceuticamente aceptables. Algunos ejemplos de sales de acido adecuadas incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, alcanforato, alcanforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, glicolato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Las sales obtenidas a partir de bases apropiadas incluyen sales de metal alcalino (por ejemplo, sodio y potasio), metal alcalinoterreo (por ejemplo, magnesio), amonio y N+(alquil C-m)4. La presente invencion tambien preve la cuaternarizacion de cualquier grupo basico que contenga nitrogeno de los compuestos que se desvelan en el presente documento. Se pueden obtener productos solubles o dispersables en agua o aceite mediante tal cuaternarizacion.
Las soluciones o suspensiones pueden incluir componentes tales como un diluyente esteril tal como agua para inyeccion, solucion salina, u otro disolvente aceptable para la administracion al ojo, tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro sodico o dextrosa. El pH se puede ajustar con acidos o bases, tales como acido clorhudrico o hidroxido sodico. La preparacion se puede encerrar en ampollas, jeringas desechables o viales de dosis individual o multiple hechos de vidrio o plastico y proporcionados para venta comercial y/o uso de cualquiera de tales maneras. El termino "suspension" incluye una composicion que comprende partfculas en un medio lfquido. En algunas realizaciones, las partfculas consisten basicamente en un agente terapeutico. En otras realizaciones las partfculas comprenden un componente de liberacion de farmaco tal como un polfmero y, opcionalmente, uno o mas componentes adicionales tales como un excipiente.
En algunas realizaciones de la invencion la composicion lfquida comprende un agente que mejora la captacion del agente terapeutico por parte de las celulas, mejora la biodisponibilidad del agente en su sitio de accion, o mejora de otro modo la actividad del agente terapeutico. Por ejemplo, se conoce en la tecnica una diversidad de vehfculos de suministro que mejoran la captacion y/o actividad de agentes de ARNi tales como siARN y se pueden incluir en la composicion lfquida.
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Las formulaciones farmaceuticas preferentes son estables en las condiciones de fabricacion y almacenamiento y se pueden conservar frente a la accion contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos.
IV. Formulaciones de liberacion sostenida
Una formulacion de liberacion sostenida de uso en la presente invencion proporciona una concentracion terapeutica de un farmaco al ojo o una parte o region del mismo durante un penodo prolongado de tiempo. El penodo de tiempo durante el que esta presente un nivel terapeutico del farmaco puede ser, por ejemplo, al menos 1, 2, 4, o 6 semanas, al menos 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 18, 24 meses, o mayor. La liberacion puede comenzar inmediatamente o poco despues (por ejemplo, en 24 horas) despues de la administracion de la formulacion de suministro sostenido.
Alternativamente, la liberacion se puede retrasar, por ejemplo, puede comenzar en un punto temporal al menos 24 horas despues de la administracion. Sin limitacion, la liberacion se puede producir a un ritmo constante o se puede producir de forma intermitente (por ejemplo, en estallidos durante los cuales se libera una cantidad considerable del agente), o se pueden alternar penodos de liberacion constante con estallidos. En ciertas realizaciones el agente terapeutico se libera a velocidades controladas o predeterminadas cuando la formulacion de liberacion sostenida se situa en el ojo. Tales velocidades pueden variar, por ejemplo, de aproximadamente 0,003 microgramosMa a aproximadamente 5000 microgramosMa, o entre aproximadamente 01 microgramos/dfa a aproximadamente 5 microgramosMa, o entre aproximadamente 0,05 microgramos a aproximadamente 1 microgramoMa. En algunas realizaciones la velocidad de liberacion esta entre 1 |jg y 5 pg/dfa.
Una formulacion de liberacion sostenida de uso en la presente invencion comprende por lo general un agente terapeutico y un componente, elemento, o estructura adicional que contribuye a las propiedades de liberacion sostenida de la formulacion. El componente, elemento, o estructura adicional que es eficaz para proporcionar liberacion sostenida se denomina en el presente documento "componente de regulacion de suministro de farmaco".
Opcionalmente el elemento de regulacion de suministro de farmaco se disena para proporcionar control sobre la cinetica de liberacion. Se ha de entender que la naturaleza ffsica de la formulacion, por ejemplo, la forma y el area superficial total de cualquier constituyente solido o semisolido, puede contribuir a sus propiedades de liberacion sostenida. A modo de otro ejemplo, la compresion apretada de partfculas que contienen un agente activo puede dar como resultado una liberacion que tenga lugar durante un penodo de tiempo mas prolongado que si las partfculas no estuvieran comprimidas. En algunas realizaciones la estructura se proporciona al menos en parte mediante el propio agente terapeutico y, opcionalmente, una o mas sustancias presentes en el sitio de administracion tal como un ion, protema, etc. En algunas realizaciones no necesita estar presente ningun componente de regulacion de suministro de farmaco adicional en la composicion administrada. Por ejemplo, una composicion que comprende un agente terapeutico en un medio lfquido puede formar una estructura que tenga las propiedades de un gel despues de su administracion. El agente terapeutico se puede liberar a lo largo del tiempo, opcionalmente a medida que se degrada la estructura. El componente de regulacion de suministro de farmaco puede comprender o consistir en una matriz de polfmero que este asociada ffsicamente al agente terapeutico. Por ejemplo, el agente terapeutico puede estar atrapado, embebido, o encapsulado por la matriz de polfmero. Una formulacion de liberacion sostenida puede estar en forma de un implante ocular individual, una pluralidad de nanopartfculas, micropartfculas, o liposomas, un material semisolido o viscoso tal como un gel, etc. El agente terapeutico puede ser preferentemente de aproximadamente un 1 % a un 90 % en peso de la formulacion de liberacion sostenida. Mas preferentemente, el agente terapeutico es de aproximadamente un 20 % a aproximadamente un 80 % en peso de la formulacion de liberacion sostenida. En ciertas realizaciones, el agente terapeutico comprende aproximadamente un 40 % en peso de la formulacion de liberacion sostenida (por ejemplo, 30 %-50 %).
Se ha usado una diversidad de vehfculos de suministro polimericos para proporcionar liberacion sostenida en un contexto ocular y se puede usar para administrar las composiciones de la invencion. Se pueden usar diversos polfmeros, por ejemplo, polfmeros biocompatibles, que puede ser biodegradables. Los polfmeros pueden ser homopolfmeros, copolfmeros (incluyendo copolfmeros en bloque), lineales, de cadena ramificada, o reticulados.
Algunos polfmeros utiles incluyen, pero no se limitan a, acido polilactico (PLA), acido poliglicolico (PGA), polilactida- co-glicolido (PLGA), poli(fosfazina), poli(ester de fosfato), policaprolactonas, polianhudridos, etileno acetato de vinilo, poliortoesteres, polieteres, y poli(beta amino esteres). Tambien son de uso peptidos, protemas tales como colageno o albumina, polisacaridos tales como quitosano, alginato, acido hialuronico (o derivados de cualquiera de estos) y dendnmeros (por ejemplo, dendnmeros PAMAM). Los metodos para la preparacion de tales formulaciones seran evidentes para los expertos en la materia. Ciertos de los materiales tambien se pueden obtener comercialmente, por ejemplo, en Alza Corporation. Cualquiera de estos polfmeros, o las combinaciones de los mismos, pueden ser utiles en diversas realizaciones de la invencion.
Algunos polfmeros adicionales a modo de ejemplo incluyen derivados de celulosa tales como carboximetilcelulosa, policarbamatos o poliureas, poli(acetato de vinilo) reticulado y similares, copolfmeros de etileno-ester de vinilo que tienen un contenido de ester de un 4 a un 80 % tal como copolfmero de etileno-acetato de vinilo (EVA), copolfmero de etileno-hexanoato de vinilo, copolfmero de etileno-propionato de vinilo, copolfmero de etileno-butirato de vinilo, copolfmero de etileno-pentanoato de vinilo, copolfmero de etileno-trimetil acetato de vinilo, copolfmero de etileno-
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dietil acetato de vinilo, copoftmero de etileno-3-metil butanoato de vinilo, copoftmero de etileno-3-3-dimetil butanoato de vinilo, y copoftmero de etileno-benzoato de vinilo, o las mezclas de los mismos.
Se han introducido poli(orto esteres) en el ojo y han demostrado propiedades favorables para el suministro de farmacos oculares de liberacion sostenida (Einmahl, S., Invest. Ofthalmol. Vis. Sci., 43(5), 2002). Se han usado partfculas de polilactida para fijar como diana un agente a la retina y RPE despues de inyeccion intravftrea de una suspension de tales partfculas (Bourges, J-L, et al., Invest. Ofthalmol. Vis. Sci., 44(8), 2003).
Se describen formulaciones de liberacion sostenida que incluyen diversos implantes oculares y otros sistemas de suministro de farmaco oculares que son de uso en diversas realizaciones de la invencion, por ejemplo, en los documentos de Patente de Estados Unidos con numeros 6.692.759; 6.331.313; 5.869.079; 5.824.072; y los documentos de Patente U.S.S.N. 10/918.597 (Publicacion n.° 20050048099); 10/837.357 (Publicacion n.° 20050244469); 11/092.122 (Publicacion n.° 20050244472) y 11/116.698 (Publicacion n.° 20050281861) asf como una diversidad de otros documentos de patente y publicaciones a los que se ha hecho referencia anteriormente.
Un metodo para preparar una formulacion de liberacion sostenida implica combinar o mezclar el agente terapeutico con un componente polimerico para formar una mezcla. A continuacion, la mezcla se puede extruir, comprimir, moldear, etc., para formar una composicion individual. Opcionalmente, se puede usar calor y/o presion. A continuacion la composicion individual se puede procesar para formar implantes o partfculas individuales adecuados para colocacion en un ojo de un paciente. Se conocen en la tecnica metodos adicionales para incorporar agentes terapeuticamente activos a matrices polimericas. La matriz polimerica se puede conformar en diversas formas tales como varillas, discos, obleas, etc., que pueden tener un intervalo de dimensiones diferente (por ejemplo, longitud, ancho, etc.) y volumenes. Algunas formas a modo de ejemplo incluyen esferica, ciftndrica, helicoidal, forma de hilo o helicoidal, forma de tornillo, cubica, conica, elipsoidal, biconvexa, hemisferica o casi hemisferica, etc.
En ciertas realizaciones de la invencion un implante ocular se dimensiona y da forma de un modo tal que entre en el eje hueco de una aguja de inyeccion, por ejemplo, una aguja de calibre 22, 25, 27, 30, 33, o 35 (o una aguja de cualquier calibre que vane entre 22 y 35). Algunas dimensiones a modo de ejemplo y no limitantes para un implante ciftndrico pueden ser de aproximadamente 0,5 a 8 miftmetros de longitud y de aproximadamente 0,1 a 2 miftmetros de diametro, por ejemplo, de aproximadamente 0,75 mm a aproximadamente 1,5 mm de diametro. Implantes que tienen otras formas, por ejemplo, otras estructuras de tipo varilla con secciones transversales que son rectangulares o cuadradas en seccion transversal pueden tener una seccion transversal en la que los dos puntos mas distantes entre sf esten separados como maximo de 0,1 mm a 1 mm. En realizaciones particulares el implante intraocular puede tener una longitud u otra dimension mayor entre aproximadamente 5 micrometros y aproximadamente 2 mm, o entre aproximadamente 10 micrometros y aproximadamente 1 mm para administracion con una aguja. Alternativamente, la longitud u otra dimension mayor es mayor de 1 mm, o mayor de 2 mm, tal como 3 mm o hasta 10 mm. El humor vftreo del ser humano es capaz de acomodar implantes relativamente grandes de geometnas variables, que tengan longitudes, por ejemplo, de 1 a 10 mm.
En ciertas realizaciones de la invencion los implantes tambien pueden ser al menos algo flexibles, lo que puede facilitar la insercion del implante en el ojo, por ejemplo, en el humor vftreo, y/o puede facilitar la acomodacion del implante. El peso total del implante puede ser aproximadamente 250-5000 microgramos, por ejemplo, aproximadamente 500-1000 microgramos. Por ejemplo, un implante puede ser de aproximadamente 500 microgramos o aproximadamente 1000 microgramos. Tambien se pueden conformar implantes mayores y procesar adicionalmente antes de la administracion a un ojo. Ademas, los implantes mayores pueden ser deseables donde se proporcionen cantidades relativamente mayores de un agente terapeutico en el implante, segun se use.
En una realizacion la formulacion de liberacion sostenida es un implante ocular biocompatible que comprende una capa exterior polimerica basicamente impermeable que cubre un nucleo que comprende el farmaco que se va a suministrar, en la que dicha capa exterior tiene uno o mas orificios, mediante los que se practican una o mas aberturas en la capa exterior a traves de las cuales, cuando el dispositivo esta en uso, pueden entrar los fluidos del cuerpo al dispositivo y el farmaco contenido en el dispositivo (por ejemplo, disuelto, encapsulado, o atrapado en el dispositivo) puede migrar al exterior del dispositivo. En ciertas realizaciones los orificios tienen en total un area superficial de menos de un 10 por ciento que el area superficial total del dispositivo. En ciertas realizaciones de la invencion el implante ocular comprende una capa de revestimiento exterior que es permeable al agente terapeutico, permitiendo su difusion lenta al exterior del implante. La composicion, estructura, y/o espesor de la capa de revestimiento se puede seleccionar para proporcionar una velocidad de permeabilidad y difusion particular.
Un farmaco puede estar contenido en un implante ocular en forma de polvo seco, partfculas, granulos, o en forma de un solido comprimido. El farmaco tambien puede estar presente en forma de una solucion o puede estar disperso en una matriz de poftmero. Los implantes oculares pueden tener el agente o agentes activos distribuidos de forma homogenea en la matriz polimerica, por ejemplo, pueden ser monolfticos. En otras realizaciones el agente o agentes activos estan distribuidos de forma heterogenea en la matriz polimerica. Por ejemplo, regiones discretas del implante pueden contener partfculas solidas de un agente activo, o un deposito de agente activo puede estar encapsulado por la matriz polimerica. El agente o agentes terapeuticos pueden estar distribuidos en un patron no homogeneo en la matriz. Por ejemplo, un implante puede incluir una parte que tenga una concentracion mayor del agente terapeutico
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con respecto a una segunda parte del implante. Las estructuras estratificadas, teniendo las capas diferentes composiciones y pudiendo tener diferentes caractensticas ffsicas tales como densidad o porosidad, son otra posibilidad. Por ejemplo, las capas pueden contener diferentes agentes terapeuticos o combinaciones de los mismos. En otra realizacion, capas que son relativamente resistentes a la degradacion estan intercaladas con capas que se degradan con mayor rapidez.
Los materiales polimericos biodegradables que se incluyen para formar la matriz pueden ser objeto de inestabilidad enzimatica o hidrolttica. Se pueden reticular poUmeros solubles en agua con reticuladores inestables hidroltticos o biodegradables para proporcionar polfmeros insolubles en agua utiles. El grado de estabilidad puede variar ampliamente, dependiendo, por ejemplo, de la seleccion de monomero, de si se emplea un homopolfmero o copolfmero o mezcla, y de si el polfmero incluye grupos acido terminales. La biodegradacion del polfmero y por lo tanto el perfil de liberacion prolongada de la formulacion de liberacion sostenida tambien se puede ver influenciado por el peso molecular promedio relativo de los materiales polimericos empleados. Se pueden incluir diferentes pesos moleculares en los mismos o diferentes materiales polimericos de las formulaciones para modular el perfil de liberacion. Por ejemplo, el peso molecular promedio del polfmero puede variar de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 kD, por ejemplo, de aproximadamente 10 a 100 kD, o de aproximadamente 15 a 50 kD.
Se pueden preparar nanopartfculas o micropartfculas usando cualquier metodo conocido en la tecnica que incluye, pero no se limita a, secado por pulverizacion, separacion de fase, emulsion individual y doble, evaporacion de disolvente, extraccion de disolvente, y coacervacion simple y compleja. Tambien se pueden preparar composiciones polimericas formadas por partfculas usando granulacion, extrusion, y/o esferonizacion. Una composicion puede contener nanopartfculas o micropartfculas que tengan diferentes composiciones y/o propiedades.
Las composiciones que se usan en la preparacion de partfculas se pueden alterar para producir partfculas de un tamano o propiedades (por ejemplo, hidrofobicidad, hidrofilicidad, morfologfa externa, "adherencia", forma, etc.) adecuados. El metodo de preparacion de la partfcula y las condiciones (por ejemplo, disolvente, temperatura, concentracion, caudal de aire, etc.) que se usan tambien pueden depender del agente terapeutico y/o de la composicion de la matriz de polfmero.
Las micropartfculas y nanopartfculas de uso en la invencion pueden tener una diversidad de dimensiones. Generalmente, una micropartfcula tendra un diametro de 500 micrometros o menos, por ejemplo, entre 1 y 500 micrometres, entre 50 y 500 micrometres, entre 100 y 250 micrometres, entre 20 y 50 micrometres, entre 1 y 20 micrometres, entre 1 y 10 micrometres, etc., y una nanopartfcula tendra un diametro de menos de 1 micrometre, por ejemplo, entre 10 nm y 100 nm, entre 100 nm y 250 nm, entre 100 nm y 500 nm, entre 250 nm y 500 nm, entre 250 nm y 750 nm, entre 500 nm y 750 micrometros. Si las partfculas preparadas mediante cualquiera de los metodos anteriores tienen un intervalo de tamano fuera del intervalo deseado, las partfculas se pueden clasificar segun su tamano, por ejemplo, usando un tamiz. Las partfculas pueden ser basicamente uniformes en tamano (por ejemplo, diametro) o forma o pueden ser heterogeneas en tamano y/o forma. Pueden ser basicamente esfericas o pueden tener otras formas, en cuyo caso la dimension pertinente sera la mayor dimension recta en lugar del diametro.
En ciertas realizaciones de la invencion una formulacion de liberacion sostenida comprende un agente terapeutico y un material formador de gel. De acuerdo con ciertas realizaciones de la invencion, se prepara una solucion que contiene el material formador de gel soluble y un agente terapeutico por combinacion del material formador de gel soluble y el agente terapeutico en solucion usando cualquier metodo adecuado, por ejemplo, por adicion del agente terapeutico a una solucion que contiene el material formador de gel. La composicion se suministra localmente a una ubicacion apropiada del ojo de un sujeto. La solucion forma rapidamente un gel en o cerca del sitio de administracion. El agente terapeutico esta atrapado en el gel. El agente terapeutico se difunde fuera del gel o se libera a medida que el gel se degrada a lo largo del tiempo, proporcionando de ese modo un suministro continuo del agente a los tejidos y estructuras que estan en contacto ffsico directo con el gel o situados en las cercamas. En ciertas realizaciones la solucion se administra detras de la esclerotica del ojo. El suministro se puede conseguir mediante inyeccion (por ejemplo, usando una aguja de calibre 25, 27, o 30 o similar), mediante un cateter, etc. En otras realizaciones la solucion se administra por via intravftrea. En ciertas realizaciones un "gel" es una estructura que exhibe propiedades (por ejemplo, fluidez) intermedias entre las fases solida y lfquida. La estructura puede ser un coloide solido o semisolido que comprende una fase continua y una fase lfquida. La estructura puede tener el aspecto habitual de un gel, cuyo aspecto es facilmente reconocible por los expertos en la materia.
En una realizacion, se usa colageno soluble como material formador de gel. El colageno es inicialmente soluble, por ejemplo, en un medio acuoso, y forma una solucion que tiene una baja viscosidad pero es capaz de formacion rapida de un gel en las condiciones apropiadas, por ejemplo, las condiciones que se encuentran tras la administracion a un sujeto mairnfero. Se puede usar una diversidad de diferentes preparaciones de colageno en la presente invencion con la condicion de que sea inicialmente soluble y sea capaz de formar rapidamente un gel en las condiciones apropiadas. Se describen preparaciones de colageno apropiadas, y metodos para su fabricacion, por ejemplo, en los documentos de Patente de Estados Unidos con numeros 5.492.135; 5.861.486; 6.197.934; 6.204.365; y el documento de Patente WO 00/47130, pero la invencion no esta limitada a tales preparaciones y metodos. Estos colagenos se preparan en forma soluble y forman rapidamente un gel tras la exposicion a fluidos fisiologicos u otros fluidos que tienen una concentracion adecuada de iones. De acuerdo con la presente invencion, inyectar o introducir
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de otro modo la solucion de colageno en el ojo o cerca del ojo da como resultado la formacion de un gel, supuestamente inducida por el contacto con los fluidos fisiologicos. Sin embargo, se ha de observar que la invencion no esta limitada en modo alguno por el mecanismo mediante el que se produce la formacion del gel. Ademas, como se ha indicado anteriormente, el gel se puede formar in vitro y a continuacion implantarse en la ubicacion apropiada.
Otros materiales formadores de gel de uso en la invencion incluyen, pero no se limitan a, acido hialuronico y formas modificadas del mismo, polisacaridos tales como alginato y formas modificadas del mismo, peptidos de autoensamblaje, etc. Vease, por ejemplo, el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.129.761 para una descripcion adicional del alginato y las formas modificadas del mismo, el acido hialuronico y las formas modificadas del mismo, y ejemplos adicionales de materiales formadores de gel solubles que son de uso en diversas realizaciones de la presente invencion. Otros precursores de hidrogel polimericos incluyen copolfmeros en bloque de oxido de polietileno-polipropilenglicol tales como Pluronics ™ o Tetronics™ que estan reticulados mediante enlace de hidrogeno y/o mediante un cambio de temperatura, como se describe en Steinleitner et al., Obstetrics & Gynecology, 77:48-52 (1991); y Steinleitner et al., Fertility and Sterility, 57:305-308 (1992). Otros materiales que se pueden utilizar incluyen protemas tales como fibrina o gelatina. Tambien se pueden utilizar mezclas de polfmeros. Por ejemplo, se puede utilizar una mezcla de oxido de polietileno y acido poliacnlico que forma un gel mediante enlace de hidrogeno despues de la mezcla.
Por lo general, un material formador de gel de uso en la invencion es capaz de disolverse al menos parcialmente, o en ciertas realizaciones de la invencion disolverse basica o totalmente, por ejemplo, en un medio acuoso. Por ejemplo, puede estar disuelto al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 %, al menos un 90 %, al menos un 95 %, o mas, en peso, del material formador de gel presente en una composicion formadora de gel. En ciertas realizaciones esta disuelto basicamente un 100 % del material. El medio acuoso puede contener uno o mas lfquidos ademas de agua, por ejemplo, diversos alcoholes. En general, al menos un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, o un 100 % del lfquido presente en el medio es agua.
Son utiles los precursores de hidrogel reticulables covalentemente. Por ejemplo, una poliamina soluble en agua, tal como quitosano, se puede articular con un diisotiocianato soluble en agua, tal como diisotiocianato de polietilenglicol. Los isotiocianatos reaccionaran con las aminas para formar un gel reticulado qmmicamente. Tambien se pueden utilizar reacciones de aldehudos con aminas, por ejemplo, con dialdehndo de polietilenglicol. Tambien se puede utilizar un polfmero soluble en agua hidroxilado.
En ciertas realizaciones de la invencion un agente terapeutico esta unido covalente o no covalentemente a un componente de regulacion de suministro de farmaco tal como un polfmero a traves de un resto de union. El resto de union se escinde para liberar el agente terapeutico del componente de regulacion de suministro de farmaco para proporcionar liberacion sostenida. Por ejemplo, el resto de union puede ser un peptido que contiene un sitio que se escinde mediante una enzima endogena tal como una proteasa o puede contener un enlace labil o hidrolizable, por ejemplo, un enlace disulfuro, un resto ester, etc.
Se pueden implantar en el ojo celulas que expresen un agente terapeutico que es una macromolecula biologica tal como una protema o un agente de ARNi y son de uso de ciertas realizaciones de la invencion para proporcionar liberacion sostenida. El documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.436.427 proporciona un metodo para suministrar moleculas biologicamente activas al ojo mediante implantes de capsulas biocompatibles que contienen una fuente celular de la molecula biologicamente activa.
En ciertas realizaciones de la invencion la formulacion de liberacion sostenida comprende liposomas. Por ejemplo, se puede administrar una suspension liposomal. Los liposomas se pueden preparar de acuerdo con metodos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo, como se describe en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 4.522.811 y otras referencias que se enumeran en el mismo. Se han descrito liposomas, incluyendo los liposomas dirigidos (por ejemplo, liposomas dirigidos por anticuerpos) y liposomas pegilados (Hansen CB, et al., Biochim Biofys Acta. 1239(2):133-44,1995; Torchilin VP, et al., Biochim Biofys Acta, 1511(2):397-411, 2001; Ishida T, etal., FEBS Lett. 460(1):129-33, 1999).
El experto habitual en la materia ha de entender que los materiales y los metodos que se seleccionan para la preparacion de una formulacion de liberacion sostenida, implante, etc., debenan ser tales que retengan la actividad del compuesto. Por ejemplo, puede ser deseable evitar un excesivo calentamiento de ciertos agentes tales como polipeptidos, que podna conducir a la desnaturalizacion o perdida de actividad. Ademas, se ha de entender que una formulacion de liberacion sostenida puede contener una diversidad de componentes adicionales que carecen de actividad terapeutica y que pueden contribuir o no contribuir a las caractensticas de liberacion sostenida de la formulacion. Algunos ejemplos incluyen agentes plastificantes, agentes solubilizantes, agentes que disminuyen la solubilidad, y agentes dispersantes (vease el documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.331.313), con la condicion de que tales componentes sean compatibles con la administracion al ojo en las condiciones usadas. Por ejemplo, una formulacion de liberacion sostenida puede incluir una p-ciclodextrina, que es eficaz para mejorar la solubilidad del agente terapeutico. La p-ciclodextrina se puede proporcionar en una cantidad de aproximadamente un 0,5 % (p/p) a aproximadamente un 25 % (p/p) del implante. En ciertos implantes, la p-ciclodextrina se proporciona
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en una cantidad de aproximadamente un 5% (p/p) a aproximadamente un 15% (p/p) de la formulacion. Otras formulaciones incluyen una gama-ciclodextrina, y/o derivados de ciclodextrina.
En el presente documento, una formulacion de liberacion sostenida puede incluir un componente de excipiente, tal como cantidades eficaces de agentes de tamponamiento, conservantes y similares. Algunos agentes de tamponamiento solubles en agua adecuados incluyen, sin limitacion, carbonatos, fosfatos, bicarbonatos, citratos, boratos, acetatos, succinatos alcalinos y alcalinoterreos y similares, tales como fosfato, citrato, borato, acetato, bicarbonato, carbonato sodico, y similares. Estos agentes estan presentes de forma ventajosa en cantidades suficientes para mantener el pH del sistema de aproximadamente 2 a aproximadamente 9 y mas preferentemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 8. Como tal, el agente de tamponamiento puede ser tanto como aproximadamente un 5 % en peso del sistema total. Algunos conservantes solubles en agua adecuados incluyen bisulfito sodico, bisulfato sodico, tiosulfato sodico, ascorbato, cloruro de benzalconio, clorobutanol, timerosal, acetato fenilmercurico, borato fenilmercurico, nitrato fenilmercurico, parabenos, metilparabeno, alcohol polivimlico, alcohol bendlico, feniletanol y similares y las mezclas de los mismos. Estos agentes pueden estar presentes en cantidades de un 0,001 a aproximadamente un 5 % en peso y preferentemente de un 0,01 a aproximadamente un 2 % en peso. Estos agentes tambien se pueden usar en ciertas de las composiciones lfquidas que se describen en el presente documento.
En algunas realizaciones de la invencion la formulacion de liberacion sostenida comprende un agente que mejora la captacion del agente terapeutico por parte de las celulas, mejora la biodisponibilidad del agente en su sitio de accion, o mejora de otro modo la actividad del agente terapeutico. Por ejemplo, se conocen en la tecnica una diversidad de vetuculos de suministro que mejoran la captacion y/o la actividad de agentes de ARNi tales como siARN y se pueden incluir en la formulacion de liberacion sostenida.
Si se desea, las proporciones de agente terapeutico, polfmero, y cualquier otro modificador se pueden determinar empmcamente mediante formulacion de varios implantes, por ejemplo, con proporciones variables de tales ingredientes. Se puede usar un metodo aprobado por la USP para ensayo de disolucion o liberacion para medir la velocidad de liberacion (USP 23; NF 18 (1995) pag. 1790-1798). Los implantes tambien se pueden someter a ensayo in vivo.
Se incluyen dentro del alcance de la expresion "formulacion de liberacion sostenida" de un agente terapeutico dispositivos o "chips" que incluyen uno o mas depositos que contienen el agente y que liberan el agente o una parte del mismo desde uno o mas depositos en el medio circundante (veanse, por ejemplo, los documentos de Patente de Estados Unidos con numeros 5.797.898 y 6.976.982). La liberacion se puede producir mediante una diversidad de medios. Por ejemplo, los depositos pueden tener una tapa biodegradable que sea impermeable al agente y se degrade a lo largo del tiempo, de un modo tal que el agente terapeutico se libere una vez se haya degradado la tapa. Tapas de diferentes espesores haran que la liberacion se produzca en diferentes momentos. Se pueden usar medios mecanicos, electricos, u otros medios para liberar el agente de un deposito, usando opcionalmente medios de control externos para regular la liberacion. La liberacion se puede producir en momentos predeterminados y/o en cantidades predeterminadas. El dispositivo puede ser programable.
V. Metodos de administracion
Se puede usar una diversidad de metodos, tecnicas, y procedimientos diferentes para administrar el primer y el segundo agentes terapeuticos. En ciertas realizaciones de la invencion la administracion se lleva a cabo mediante inyeccion intravttrea. Aunque se ha de entender que existe una cierta cantidad de variabilidad intramedico. Un ejemplo no limitante de un procedimiento intravttreo se puede llevar a cabo como sigue a continuacion: se mide la tension del ojo por lo general con un tensiometro y se califica clmicamente la inflamacion. Se anestesian los ojos con bloqueantes de los canales de sodio (tales como novocama) y se tratan con gotas midriaticas (de naturaleza simpatomimetica, anti-parasimpatica o mioplegica), seguido de tratamiento adicional con gotas de anestesico y de antibiotico. A continuacion se inserta un especulo bajo los parpados y se pide al paciente que mire hacia los lados.
Se usa un calibre para medir una distancia de 2 mm desde el limbo y determinar el sitio de la inyeccion (esto se realiza con el fin de evitar golpear el cristalino con la aguja). A continuacion se carga una jeringa de inyeccion (por ejemplo, una jeringa de 1 ml o 0,5 ml) con una aguja (por ejemplo, una aguja de calibre 22, 25, 27, o 30) con 50-100 microlitros de un agente (por ejemplo, Avastin de 1 mg o Macugen de 0,3 mg), o se usa una jeringa que esta cargada previamente con el agente. A continuacion se inserta la aguja en el sitio de inyeccion hasta que se alcanza la mitad de la cavidad vftrea con la punta de la aguja y el farmaco se inyecta lentamente. A continuacion la jeringa se retrae lentamente y se administra presion durante unos pocos segundos en el sitio de inyeccion con una gasa humeda. Se administran mas gotas de antibiotico y se retira el especulo. A continuacion, se observa al paciente por lo general durante 10 a 60 min, tiempo durante el que se mide la presion intraocular a intervalos regulares.
Otros metodos de administracion incluyen, por ejemplo, inyeccion coroidal, inyeccion transescleral o colocacion de un parche escleral, cateterizacion arterial selectiva, administracion intraocular incluyendo transretiniana, subconjunctiva bulbar, inyeccion intravftrea, inyeccion supracoroidal, inyeccion subtenoniana, bolsillo escleral e inyeccion de corte escleral, mediante bomba osmotica, etc. En la inyeccion coroidal y el parche escleral, el medico
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usa una aproximacion local al ojo despues del inicio de la anestesia apropiada, incluyendo analgesicos y oftalmoplegicos. Se dirige una aguja que contiene el compuesto terapeutico a la coroides o la esclerotica del sujeto y se inserta en condiciones esteriles. Cuando se situa la aguja de forma apropiada, se inyecta el compuesto a cualquiera de las dos o a ambas de la coroides y la esclerotica.
La administracion intraocular de farmacos destinados al tratamiento de degeneracion muscular y/u otras afecciones intraoculares mediante una diversidad de metodos se conoce bien en la tecnica, y se puede usar cualquier metodo adecuado en la presente invencion. Veanse, por ejemplo, los documentos de Patente de Estados Unidos con numeros 5.632.984 y 5.770.589. El documento de Patente de Estados Unidos n.° 6.378.526 proporciona metodos para inyeccion intraescleral de un material terapeutico o diagnostico en una ubicacion suprayacente a la retina, que proporciona una tecnica mmimamente invasiva para suministrar el agente al segmento posterior del ojo.
Pueden ser necesarias tan solo modificaciones minoritarias de los procedimientos anteriores, o ninguna modificacion en absoluto, para administrar el primer y el segundo agentes terapeuticos de acuerdo con la presente invencion. Se pueden usar los tiempos y presiones de inyeccion convencionales o modificarse de forma apropiada. Por ejemplo, el tiempo total de inyeccion puede ser mayor que en el caso de inyeccion de un agente individual. Se ha de entender que la naturaleza de las modificaciones, si hubiera alguna, estaran dictadas al menos en parte por el procedimiento particular asf como la por naturaleza de los agentes terapeuticos y su formulacion ademas de la forma en la que se proporcionan para su uso por parte del medico. Por ejemplo, en una realizacion, se carga en la aguja una formulacion de liberacion sostenida que contiene el segundo agente terapeutico, por ejemplo, un implante ocular. Se puede suministrar al medico una aguja que ya tenga cargada previamente la formulacion de liberacion sostenida o el medico puede cargar la aguja con la formulacion de liberacion sostenida. El medico une la aguja a la jeringa. A continuacion se aspira un volumen apropiado (que contiene una cantidad apropiada) de una solucion que contiene el primer agente terapeutico en la jeringa y se lleva a cabo el procedimiento de inyeccion intravftrea como se ha descrito anteriormente. La depresion del embolo de la jeringa expulsara tanto el primer agente terapeutico como la formulacion de liberacion sostenida en el humor vftreo (o en otro sitio del ojo si se usa una tecnica distinta de una inyeccion intravftrea). En otra realizacion, se proporciona al medico una jeringa que contiene un volumen apropiado de una solucion que contiene el primer agente terapeutico, opcionalmente junto con una aguja que esta cargada previamente con la formulacion de liberacion sostenida que contiene el segundo agente terapeutico. De ese modo, el medico no necesita realizar ninguna medicion, dilucion, ni ninguna otra manipulacion de los propios agentes terapeuticos.
En otra realizacion, ambos agentes terapeuticos estan contenidos en jeringas individuales. La inyeccion se lleva a cabo con un montaje de aguja y jeringa, en el que la jeringa contiene el primer agente terapeutico o, mas generalmente, la jeringa contiene una composicion que comprende el primer agente terapeutico. Despues de la administracion del agente terapeutico contenido en la jeringa, se retira la jeringa y se une a la aguja una segunda jeringa, que contiene el segundo agente terapeutico o, mas generalmente, una composicion que comprende el segundo agente terapeutico. A continuacion se administra el segundo agente (o composicion) terapeutico. Los agentes terapeuticos se pueden administrar en cualquier orden. Se puede administrar consecutivamente cualquier numero de agentes terapeuticos, sin retirar la punta de la aguja del ojo del sujeto.
La figura 9 muestra una realizacion a modo de ejemplo de un montaje de aguja y jeringa que se puede usar para poner en practica la invencion. El montaje incluye una jeringa que tiene un barril y un embolo con un tope en su extremo. La jeringa se une a una aguja, por lo general por medio de una punta roscada con una abertura (por ejemplo, una punta de anclaje Luer), que no se muestra. La parte de la jeringa entre el tope y el extremo del barril contiene un agente terapeutico, por ejemplo, un inhibidor de la angiogenesis. La jeringa contiene un agente terapeutico adicional, por ejemplo, una formulacion de liberacion sostenida tal como un implante ocular que contiene un agente terapeutico (por ejemplo, un inhibidor de complemento). Con fines de claridad, el implante se representa fuera de la aguja en la figura 9 aunque, por supuesto, debena estar situado dentro del eje de la aguja para su administracion. Al ejercer presion en el embolo despues de la introduccion de la aguja en el ojo de un sujeto se expulsara tanto el agente terapeutico de la jeringa como el implante ocular de la aguja en el ojo. En otras realizaciones, la jeringa se puede proporcionar con medios adicionales o alternativos de expulsion del implante.
En ciertas realizaciones de la invencion el primer y el segundo agentes terapeuticos se suministran a diferentes estructuras, regiones, compartimentos, o tejidos del ojo en un procedimiento individual. Por ejemplo, una aguja u otro instrumento puede pasar a traves de diferentes estructuras, regiones, compartimentos, o tejidos del ojo durante el proceso de insertar y retirar la aguja. El primer y el segundo agentes terapeuticos se pueden expulsar en diferentes estructuras, regiones, compartimentos, o tejidos del ojo en el curso de un procedimiento de inyeccion individual. Por ejemplo, en una realizacion, uno de los agentes terapeuticos se introduce en el humor vftreo y uno de los agentes terapeuticos se introduce en una estructura, region, compartimento, o tejido diferente del ojo en un procedimiento individual. Se puede introducir en el humor vftreo el agente que proporciona una mejora rapida en el estado del ojo del sujeto o la formulacion de liberacion sostenida del segundo agente terapeutico.
El volumen que se administra dependera de la ubicacion del ojo en la que se administra la composicion. Por ejemplo, para inyeccion intravftrea, se usan preferentemente volumenes de 200 pl, preferentemente 100 pl o menos. En ciertas realizaciones el volumen total del ftquido inyectado es 200 pl o menos, l0o pl o menos, 50 pl o menos. En
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ciertas realizaciones de la invencion el volumen total de material introducido en el ojo del sujeto (incluyendo Kquido y cualquier componente solido o semisolido) es de 500 pl o menos, 400 pl o menos, 300 pl o menos, 200 pl o menos, 100 pl o menos, 50 pl o menos, o 25 pl o menos.
VI. Terapia genica
En el presente documento se desvela una terapia genica, en la que se administran al ojo uno o mas agentes terapeuticos que son un acido nucleico que codifica un agente terapeutico tal como un siARN o una protema tal como una VCCP en asociacion operable con elementos reguladores suficientes para dirigir la expresion del acido nucleico. Una composicion que comprende un agente terapeutico de acido nucleico puede consistir basicamente en el acido nucleico o un vector de terapia genica en un diluyente aceptable, o puede comprender un componente de regulacion de liberacion de farmaco tal como una matriz de polfmero con el que esta asociado ffsicamente el acido nucleico o el vector de terapia genica, por ejemplo, con el que esta mezclado o con el que esta encapsulado o embebido. El vector de terapia genica puede ser un plasmido, virus, u otro vector. Alternativamente, la composicion farmaceutica puede comprender una o mas celulas que produzcan un acido nucleico o polipeptido terapeutico. Preferentemente tales celulas segregan el agente terapeutico en el espacio extracelular.
Los vectores virales que se han usado para protocolos de terapia genica incluyen, pero no se limitan a, retrovirus, lentivirus, otros ARN virus tales como poliovirus o virus Sindbis, adenovirus, virus asociados a adenovirus, herpes virus, SV 40, vacuna y otros ADN virus. Los vectores retrovirales o lentivirales de replicacion defectuosa son vectores de transferencia genica ampliamente utilizados. Los metodos qmmicos de terapia genica implican transferencia genica mediada por vetuculo a traves del uso de vesfculas de lfpidos fusogenicas tales como liposomas u otras vesfculas para fusion de membrana. Se puede introducir de forma conveniente un vetuculo que aloja un acido nucleico de interes en el ojo o en los fluidos corporales o la corriente sangumea. El vetuculo se puede dirigir espedficamente al sitio al organo o tejido diana en el cuerpo. Por ejemplo, se pueden usar liposomas portadores de ADN espedficos de celula o tejido y el acido nucleico extrano portado por el liposoma se puede absorber por parte de esas celulas espedficas. La transferencia genica tambien puede implicar el uso de compuestos basados en lfpidos que no son liposomas. Por ejemplo, lipofectinas y citofectinas son compuestos basados en lfpidos que contienen iones positivos que se unen a acidos nucleicos cargados negativamente y forman un complejo que puede transportar el acido nucleico a traves de una membrana celular.
Ciertos polfmeros cationicos se unen espontaneamente a y condensan acidos nucleicos tales como ADN en nanopartfculas. Por ejemplo, se han usado protemas de origen natural, peptidos, o derivados de los mismos. Los polfmeros cationicos sinteticos tales como polietilenimina (PEI), polilisina (PLL), etc., condensan ADN y son vetuculos de suministro utiles. Tambien se pueden usar dendnmeros. Numerosos polfmeros utiles contienen tanto grupos amino cargables, que permiten la interaccion ionica con fosfato de ADN cargado negativamente, como una region degradable, tal como una union ester hidrolizable. Algunos ejemplos incluyen poli(alfa-(4-aminobutil)-L-acido glicolico), red de poli(amino ester), y poli(beta-amino esteres). Estos agentes de complejacion pueden proteger acidos nucleicos frente a la degradacion, por ejemplo, de nucleasas, componentes del suero, etc., y crear una carga superficial menos negativa, que puede facilitar el paso a traves de membranas hidrofobas (por ejemplo, citoplasmatica, lisosomal, endosomal, nuclear) de la celula. Ciertos agentes de complejacion facilitan los sucesos de trafico intracelular tales como escape endosomal, transporte citoplasmatico, y entrada nuclear, y se pueden disociar del acido nucleico.
VII. Artculos de fabricacion
En otro aspecto de la invencion, se proporciona un artfculo de fabricacion, que se puede denominar paquete o kit farmaceutico, que comprende el primer y el segundo agentes terapeuticos y una aguja que contiene el segundo agente terapeutico y, opcionalmente, material o artfculos adicionales utiles para tratar los trastornos que se han descrito anteriormente. En otro aspecto, se proporciona un artfculo de fabricacion que comprende el primer y el segundo agentes terapeuticos del primer aspecto, en el que cada agente terapeutico esta contenido en una jeringa individual y en el que el artfculo de fabricacion comprende ademas opcionalmente una aguja. El artfculo de fabricacion puede comprender un recipiente o una etiqueta o prospecto sobre o asociado al recipiente. Algunos recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas, etc. Los recipientes se pueden formar a partir de una diversidad de materiales tales como vidrio o plastico. El recipiente contiene una composicion que es, sola o junto con otra composicion, eficaz para tratar la afeccion. Opcionalmente, el recipiente puede tener un puerto de acceso esteril (por ejemplo, el recipiente puede ser vial que tiene un tope perforable por una aguja de inyeccion hipodermica). La etiqueta o el prospecto puede indicar que la composicion se usa para tratar una o mas afecciones de seleccion, por ejemplo, un trastorno ocular tal como degeneracion macular. El artfculo de fabricacion puede comprender (a) un primer recipiente con una composicion contenida en el mismo, en el que la composicion comprende un primer agente terapeutico; y (b) un segundo recipiente con una composicion contenida en el mismo, en el que la composicion comprende una formulacion de liberacion sostenida de un segundo agente terapeutico. El artfculo de fabricacion en esta realizacion de la invencion puede comprender ademas un prospecto que indica que la primera y la segunda composiciones se pueden usar para tratar un trastorno ocular particular, por ejemplo, ARMD exudativa. Ademas, o alternativamente, el artfculo de fabricacion puede comprender ademas un segundo (o tercer)
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recipiente que comprende un Ifquido farmaceuticamente aceptable, tal como agua bacteriostatica para inyeccion (BWFI), solucion salina taponada con fosfato, solucion de Ringer y solucion de dextrosa.
En ciertas realizaciones de la invencion el artfculo de fabricacion puede comprender ademas uno o mas dispositivos o instrumentos para administrar un agente terapeutico al ojo. Por ejemplo, el artfculo de fabricacion puede incluir una o mas agujas (por ejemplo, una aguja de calibre 22, 25, 27, o 30) y/o una o mas jeringas (por ejemplo, jeringas de 0,3, 0,5, o 1,0 ml). La aguja o la jeringa, o ambas, pueden contener una o mas composiciones que comprendan una forma de dosificacion unitaria de un agente terapeutico. Por ejemplo, el artfculo de fabricacion puede incluir una aguja o jeringa que contiene un volumen y/o cantidad predeterminado de una composicion que comprende un agente terapeutico. El artfculo de fabricacion puede contener una aguja o jeringa que contiene una formulacion de liberacion sostenida de un agente terapeutico, por ejemplo, un implante ocular. La aguja y la jeringa pueden estar unidas entre sf, pero no necesariamente. La aguja y/o la jeringa se pueden proporcionar con un tapon retirable. La provision de una o mas composiciones ya cargadas en el dispositivo que se usara para administrar el agente o agentes puede proporcionar un aumento de fiabilidad, seguridad, y conveniencia. El artfculo de fabricacion puede incluir una pluralidad de jeringas, cada una de las cuales contiene opcionalmente una forma de dosificacion unitaria de un agente terapeutico diferente. Por ejemplo, se pueden incluir una primera jeringa que contiene un primer agente terapeutico y una segunda jeringa que contiene un tercer agente terapeutico. En una realizacion, se proporcionan una primera jeringa que contiene un inhibidor de la angiogenesis y una segunda jeringa que contiene un inhibidor de complemento. Cualquiera de los dos o ambos agentes pueden estar en una composicion lfquida. Cualquiera de los dos o ambos agentes pueden ser un componente de una formulacion de liberacion sostenida. Cada jeringa puede contener una composicion que contiene un agente terapeutico individual y opcionalmente otros componentes tales como un vehuculo farmaceuticamente aceptable. Alternativamente, una o mas de las jeringas pueden contener una composicion que contiene una pluralidad de diferentes agentes terapeuticos y opcionalmente otros componentes tales como un vehfculo farmaceuticamente aceptable.
Los componentes individuales que se han descrito anteriormente se pueden envasar junto con un recipiente de mayor tamano, por ejemplo, una caja, sobrecito, poliestireno extrrndo, o envoltorio de plastico, u otro recipiente, que puede contener opcionalmente material de envasado adicional. Se debena tener cuidado de usar materiales que, si fuera necesario o deseable, protejan al agente o agentes terapeuticos de la luz y/o otras condiciones ambientales y no afecten de forma adversa a los mismos. El artfculo de fabricacion puede incluir instrucciones, por ejemplo, en forma de un prospecto, que instruyan al medico en lo que respecta a los metodos mediante los que se debenan administrar las composiciones incluyendo, si fuera apropiado, instrucciones para montar, diluir, o manipular de otro modo cualquier componente individual. En una realizacion, cada artfculo de fabricacion contiene cantidades apropiadas de la primera y la segunda composiciones que comprenden el primer y el segundo agentes terapeuticos para llevar a cabo un procedimiento individual (es decir, una administracion individual del primer y el segundo agentes terapeuticos al ojo). Se incluyen opcionalmente dispositivos o instrumentos tales como una aguja y una jeringa para llevar por procedimiento. La aguja, la jeringa, o ambas, pueden estar cargadas previamente con una composicion que comprende un agente terapeutico. Los artfculos de fabricacion que contienen uno o mas de cualquiera de los agentes terapeuticos, las formulaciones de liberacion sostenida de los mismos, y/o los dispositivos o instrumentos para administrar un agente terapeutico al ojo, y cualquier combinacion de los mismos, estan dentro del alcance de la invencion.
Preferentemente, cualquier composicion que se administra al ojo es esteril. La composicion puede estar preparada a partir de componentes esteriles, o se puede llevar a cabo una esterilizacion despues de la fabricacion. Los metodos de esterilizacion incluyen irradiacion, calor, etc. Preferentemente, el metodo de estabilizacion usado no reduce basicamente la actividad o la actividad biologica o terapeutica de los agentes terapeuticos. Los dispositivos y los instrumentos que se usan para administracion al ojo tambien son preferentemente esteriles, al menos en la medida en la que entran en el ojo.
VIII. Ensayo en modelos de animales
Se conocen en la tecnica modelos de animales que replican uno o mas rasgos de degeneracion macular, retinopatfa diabetica, CNV, inflamacion, u otras afecciones oculares. Se puede administrar un compuesto de la invencion en diversas dosis a ratones, ratas, perros, primates, etc. que tengan degeneracion macular y/o CNV espontanea o en los que se haya inducido degeneracion macular y/o CNV mediante un tratamiento. Se evalua la capacidad del compuesto para prevenir o tratar uno o mas signos o smtomas de degeneracion macular (por ejemplo, CNV, acumulacion de lipofuscina en y/o drusas bajo el RPE, atrofia o hipertrofia de fotorreceptores, pigmentacion alterada del RPE, perdida de fotorreceptores, electrorretinograma alterado, etc.). Se puede usar examen visual, fotograffa, histopatologfa, inmunohistologfa, etc.
Los modelos utiles incluyen animales (por ejemplo, ratones, cerdos del Yucatan, monos, etc.) en los que se induce CNV mediante tratamiento con laser (vease, por ejemplo, Bora, P.S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 100(5): 2679-2684, 2003; Zacks, DN, et al., Invest Ofthalmol Vis Sci. 243(7):2384-91, 2002). Otros modelos incluyen animales que se han tratado con una diversidad de agentes tales como hidroperoxido de lfpido (Tamai, K., et al., Exp Eye Res. 74(2):301-8, 2002), microgranulos que comprende factores de crecimiento, etc. Tambien son utiles animales sometidos a ingeniena genetica que sobreexpresan o subexpresan uno o mas genes. Por ejemplo, los ratones
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transgenicos (ratones mcd/mcd) que expresan una forma mutada de catepsina D que es enzimaticamente inactiva presentan rasgos asociados a atrofia geografica (Rakoczy, PE, et al, Am. J. Path., 161(4), 1515-1524, 2002). La expresion mediada por virus asociados a adenovirus (AAV) de factor de crecimiento endotelial vascular induce CNV en ratas (Wang, F., et al., Invest Ofthalmol Vis Sci. 44(2):781-90, 2003). Un modelo de animal es un raton transgenico deficiente en protema quimioatractora de monocitos (Ccl-2) o su receptor de quimioquina cognado (Ccr- 2) (Ambati, J., et al., Nat Med. 9(11):1390-7, 2003; documento de Patente U.S.S.N. 10/685.705 - documento de Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20040177387). Los ratones envejecidos con una deficiencia en cualquiera de estas protemas exhiben una diversidad de rasgos que ARMD incluyendo acumulacion de lipofuscina en y drusas bajo el RPE, atrofia de fotorreceptores, y CNV. Se desvelan metodos para someter a ensayo la eficacia de un agente candidato usando este modelo de raton en el documento de Publicacion de Patente de Estados Unidos n.° 20040177387. En general, se administra un agente candidato al raton antes o despues del desarrollo de rasgos de ARMD, y se monitoriza menos un ojo para el desarrollo o regresion de drusas y/o acumulacion de lipofuscina en el mismo, para el efecto del agente candidato en la membrana de Bruch, el efecto en la degeneracion retiniana, y/o para el efecto en CNV.
Los agentes terapeuticos se administran como se describe en el presente documento. El ojo se puede analizar mediante oftalmoscopia (por ejemplo, oftalmoscopia indirecta, evaluacion de lampara de hendidura), angiograffa (por ejemplo, angiograffa con fluorescema), histopatologfa, tomograffa por coherencia optica (OCT), fotograffa del fondo, o una combinacion de los mismos. Cualquiera de estos metodos se puede usar para evaluar la eficacia en un modelo de animal o en seres humanos. Los compuestos que muestran resultados prometedores en los estudios de animales se someten a ensayo en seres humanos, por ejemplo, usando protocolos y puntos finales convencionales para ensayos clmicos para terapias para ARMD o retinopaffa diabetica pero se ha de entender que se pueden administrar agentes a seres humanos sin la evidencia de eficacia en modelos de animales.
IX. Identificacion de sujetos y respuesta de evaluacion
La invencion puede incluir la provision de un sujeto al que se va a administrar una composicion de la invencion. El sujeto padece por lo general un trastorno ocular caracterizado por degeneracion macular, CNV, o RNV. Las composiciones se administran al sujeto de acuerdo con la invencion con la intencion de tratar o prevenir tal afeccion. De ese modo, por lo general se habra identificado que el sujeto tiene riesgo de padecer o padece tal afeccion. Los metodos para el diagnostico de degeneracion macular, CNV, y RNV, etc., y para evaluar la respuesta a la terapia se conocen en la tecnica.
Se puede usar cualquier ensayo y criterio adecuado para identificar un sujeto con riesgo de padecer o que padece una afeccion relacionada con degeneracion macular, retinopaffa diabetica, o CNV y/o para evaluar el estado del ojo del sujeto antes o despues de la terapia (por ejemplo, para determinar si el sujeto se encuentra en necesidad de terapia o ha respondido a la terapia). La agudeza visual se puede medir usando, por ejemplo, una carta de Snellen, una carta de Bailey-Lovie, una carta de progresion decimal, un ensayo de agudeza visual de Freiburg, una medicion del angulo mmimo de resolucion (MAR), etc. Se puede medir la metamorfopsia (distorsion visual) usando una carta de Amsler. Se puede medir la sensibilidad de contraste usando una carta de Pelli-Robson. Los estudios diagnosticos incluyen, pero no se limitan a, examen oftalmico convencional del fondo, examen estereo biomicroscopico de la macula, angiograffa con fluorescema del fondo intravenoso, fotograffa del fondo, videoangiograffa con verde de indocianina, y tomograffa por coherencia optica (OCT). La OCT puede ser de uso particular para medir el espesor macular, un indicador de edema macular. Un sujeto que presenta una anomaffa en uno o mas de estos estudios diagnosticos (por ejemplo, un sujeto que esta fuera de un intervalo que se considera normal para un ojo sano) se puede tratar de acuerdo con la presente invencion.
Se puede clasificar a los sujetos por tener ARMD temprana, intermedia, o avanzada de acuerdo con el esquema de clasificacion que se usa en el estudio de enfermedades oculares relacionadas con la edad (AREDS), que se expone en las directrices desarrolladas por la Academia Americana de Oftalmologfa (American Academy of Ofthalmology, Age Related Macular Degeneration Preferred Practice Pattern™, 2003; disponible para descarga en el URL
www.aao.org/aao/education/library/ppp/amd_new.cfm). Un sujeto que entra dentro de cualquiera de estas categonas se puede tratar de acuerdo con la presente invencion. Si el sujeto ya ha desarrollado cNv, el sujeto puede tener CNV clasica, CNV oculta, o una mezcla de las dos. Por supuesto, se podnan usar esquemas de clasificacion alternativos, de los cuales se describe una diversidad en la bibliograffa.
Se conoce que la ARMD tiene un componente genetico, basado en estudios que muestran un aumento de la incidencia de ARMD en individuos con familiares que padecen ARMD (por ejemplo, estudios de gemelos). Por lo tanto, un sujeto se puede considerar con riesgo de desarrollar ARMD si tiene uno o mas parientes cercanos (por ejemplo, padre, abuelo, hermano, primo, ffo, ffa), que han recibido un diagnostico de ARMD. Los individuos que tienen ciertas variantes polimorficas de genes que codifican ciertos componentes del complemento, tales como el gen del factor H, son particularmente propensos a desarrollar ARMD (vease, por ejemplo, Klein RJ, et al., Zeiss C, Science, 308(5720):385-9, 2005; Edwards AO, et al., Science, 308(5720):421-4, 2005; Haines JL, et al., Science, 308(5720):419-21, 2005). En una realizacion el metodo comprende proporcionar o determinar el genotipo de un sujeto, en el que el genotipo incluye informacion en lo que respecta a la presencia de uno o mas polimorfismos que
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predisponen a ARMD. Opcionalmente, el gen codifica un componente del complemento, por ejemplo, factor H o factor B.
Los individuos que fuman y/o consumen una dieta alta en grasas tambien se encuentran en riesgo aumentado. La incidencia de ARMD aumenta con la edad. Por lo tanto, un individuo por encima de aproximadamente 50 anos de edad, generalmente al menos 60 o al menos 70 anos de edad se puede considerar en riesgo aumentado. Un individuo que tiene drusas y uno o mas factores de riesgo adicionales puede estar en riesgo particular de desarrollar ARMD. Un individuo con multiples drusas, particularmente si son grandes y con ftmites borrosos, puede estar en riesgo particular. Un individuo con hiperpigmentacion o hipopigmentacion o atrofia geografica del RPE puede estar en riesgo particular. Se asocian mutaciones geneticas espedficas a diversas afecciones relacionadas con degeneracion macular menos comunes. Un sujeto que ha recibido un diagnostico de diabetes esta en riesgo de desarrollar retinopatfa diabetica. Ademas, un sujeto que ha desarrollado ARMD en un ojo esta en riesgo aumentado de desarrollar el trastorno en el otro ojo.
La respuesta a la terapia se puede evaluar mediante cualquiera de los metodos mencionados anteriormente. Se han llevado a cabo numerosos estudios para evaluar la eficacia de una diversidad de terapias diferentes en la restitucion de la vision, prevencion de la perdida visual, y/o que dan como resultado la mejora o la ralentizacion del progreso de ARMD o neovascularizacion coroidal segun se juzga mediante ensayos diagnosticos tales como los que se han descrito anteriormente. El experto habitual en la materia sera capaz de seleccionar los criterios apropiados con los que juzgar la eficacia de la terapia.
La mejora rapida en el estado del ojo del sujeto puede ser, por ejemplo, cualquier mejora clrnicamente significativa de un signo o smtoma asociado al trastorno ocular. Por ejemplo, la mejora puede ser una mejora en la agudeza visual (por ejemplo, agudeza visual mejor corregida) tal como ganar 1, 2, 3, o mas lrneas en una carta ocular. La mejora puede ser una disminucion en el espesor macular, por ejemplo, una disminucion en al menos 50 pm, al menos 100 pm, al menos 150 pm, etc. La mejora puede ser una disminucion en el area de exudado evidente en o sobre la retina.
La mejora puede ser un aumento de al menos un 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, o mas, en cualquier medida cuantitativa del estado del ojo del sujeto, donde un aumento en la medida cuantitativa indique la mejora en el estado del ojo del sujeto. La mejora puede ser una disminucion de al menos un 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, o mas, en cualquier medida cuantitativa del estado del ojo del paciente, donde una disminucion en la medida cuantitativa indique la mejora en el estado del ojo de sujeto. Si se usa un sistema de calificacion como indicacion del estado del ojo del sujeto (por ejemplo, un sistema de calificacion que incluya calificaciones que vanan de 1-3, 1-5, 1-10, etc.), la mejora puede ser, por ejemplo, un aumento de al menos 1, 2, 3, o mas unidades, donde un aumento en la calificacion indique la mejora en el estado del ojo del sujeto.
Alternativamente, si se usa un sistema de calificacion en el que una disminucion en la calificacion indica una mejora en el estado del ojo del paciente, la mejora puede ser una disminucion de al menos 1, 2, 3, o mas unidades. El experto habitual en la materia entendera que se puede usar una diversidad de sistemas de calificacion. Por ejemplo, las calificaciones se pueden expresar en terminos de unidades tales como "+" o "-" en lugar de con numeros enteros. Por supuesto, se ha de entender que las respuestas individuales variaran, y no todos los sujetos responderan. En estudios de animales y ensayos clrnicos, los cambios en el estado del ojo de un sujeto se pueden expresar en terminos de un cambio promedio o medio en la poblacion estudiada y/o el uso de ensayos estadfsticos apropiados.
En un ejemplo, los sujetos con ARMD exudativa se dividen en dos grupos. Se evalua una diversidad de parametros, por ejemplo agudeza visual (por ejemplo, la mejor agudeza visual corregida), sensibilidad de contraste, distorsion visual, numero o area de hemorragia retiniana, espesor macular, etc., para proporcionar una indicacion de lmea base del estado del ojo del sujeto. Un grupo recibe una inyeccion intravftrea individual de un primer agente terapeutico, por ejemplo, un inhibidor de la angiogenesis tal como un agente anti-VEGF, por ejemplo, Lucentis, Avastin, o Macugen. El otro grupo recibe la misma dosis del primer agente terapeutico y tambien recibe una formulacion de liberacion sostenida de un segundo agente terapeutico (por ejemplo, un inhibidor del complemento tal como compstatina o un derivado de la misma), administrandose ambos agentes conjuntamente mediante una inyeccion intravftrea individual. La formulacion de liberacion sostenida puede ser, por ejemplo, un implante ocular con forma cilmdrica o de tornillo que comprende el segundo agente terapeutico, una pluralidad de partmulas que comprenden el agente, una composicion que forma una estructura solida o semisolida discreta tal como un gel despues de la administracion, etc. Los grupos se monitorizan a lo largo del tiempo. Se evaluan parametros tales como agudeza visual (por ejemplo, la mejor agudeza visual corregida), sensibilidad de contraste, distorsion visual, numero o area de hemorragia retiniana, espesor macular, etc., preferentemente usando los mismos metodos y metricas que se usaron en la evaluacion inicial para determinar los valores de lmea base. Por ejemplo, la resolucion de edema macular se puede monitorizar mediante OCT. Las evaluaciones para determinar el numero de sujetos que experimentan una mejora rapida en el estado de un ojo tratado pueden tener lugar, por ejemplo, 1 semana, 10 dfas, o 2 semanas despues del tratamiento. Se compara el numero de sujetos que experimentan una mejora rapida en el estado de un ojo tratado (por ejemplo, disminucion rapida de edema macular y sus molestias visuales asociadas) entre los dos grupos. Tambien se monitorizan el tiempo medio de desestabilizacion, por ejemplo, el tiempo medio antes de se produzca un empeoramiento agudo en uno o mas de los parametros anteriores. Tambien se monitorizan (por
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ejemplo, usando angiograffa con fluorescema y/o examen oftalmico) el grado de neovascularizacion y/o derrame de los vasos en diversos puntos temporales despues del tratamiento, por ejemplo, puntos temporales en los dfas 30, 60, 90, 120, 150, y 180 y a intervalos de 30 dfas despues del ultimo (o un subconjunto apropiado de estos puntos temporales). Se puede evaluar y comparar el cambio desde la lmea base en la calificacion del espesor retiniano entre los dos grupos. Una mayor disminucion media en el espesor retiniano en uno o mas de los puntos temporales anteriores en el grupo que recibio la terapia combinada de la presente invencion es indicativa de que la terapia combinada de la presente invencion proporciona una ventaja terapeutica para tratar el trastorno ocular. Se puede evaluar el cambio desde la lmea base en la calificacion de derrame de fluorescema (donde la calificacion de derrame de fluorescema proporciona una indicacion de neovascularizacion y/o derrame de los vasos y una mayor calificacion indica una mayor cantidad de neovascularizacion y/o derrame de los vasos). Una mayor disminucion media en la calificacion de derrame de fluorescema desde la lmea base en el grupo que recibio la terapia combinada de la presente invencion es indicativa de que la terapia combinada de la presente invencion proporciona una ventaja terapeutica para tratar el trastorno ocular.
Cada uno de los ejemplos anteriores se repite excepto en que el primer y el segundo agentes terapeuticos son ambos inhibidores del complemento o combinaciones de los mismos. Por ejemplo, el primer agente terapeutico es una VCCP y el segundo agente terapeutico es una GPCRA. Alternativamente, el primer agente terapeutico es compstatina o un derivado de la misma y el segundo agente terapeutico es una VCCP.
Cada uno de los ejemplos anteriores se repite excepto en que uno de los grupos recibe, mediante una inyeccion intravftrea individual, una composicion que comprende multiples agentes terapeuticos en un medio lfquido y una formulacion de liberacion sostenida que comprende al menos un agente terapeutico. Los agentes terapeuticos multiples pueden ser, por ejemplo, diferentes inhibidores de la angiogenesis. Alternativamente, los agentes terapeuticos multiples pueden incluir un inhibidor del complemento y un inhibidor de la angiogenesis. La formulacion de liberacion sostenida puede contener, por ejemplo, dos o mas inhibidores del complemento diferentes o un inhibidor del complemento y un inhibidor de la angiogenesis. Por ejemplo, en una realizacion de la formulacion de liberacion sostenida contiene un analogo de compstatina y Lucentis.
Cada uno de los ejemplos anteriores se repite excepto en que al menos un agente terapeutico es un agente de ARNi. Por ejemplo, el primer o el segundo agente terapeutico es un siARN que inhibe la expresion de una o mas moleculas proangiogenicas endogenas tales como una o mas isoformas de vEgF, uno o mas receptores de VEGF, uno o mas componentes del complemento, etc. En una realizacion, la formulacion de liberacion sostenida contiene al menos dos agentes de ARNi, cada uno de los cuales inhibe la expresion de una molecula proangiogenica diferente. Por ejemplo, la formulacion de liberacion sostenida puede contener Cand5 y Sima-027.
Cada uno de los ejemplos anteriores se repite en sujetos que padecen retinopatia diabetica.
En otro ejemplo se evalua la capacidad de la invencion para inhibir el progreso de ARMD temprana (AREDS 2) a ARMD intermedia (AREDS 3). Los sujetos con ARMD temprana se dividen en dos grupos, uno de los cuales recibe
una combinacion de agentes de la invencion como se describe en cualquiera de los dos ejemplos anteriores
mientras que el otro no recibe ninguna terapia, o bien una terapia alternativa tal como una terapia con un agente individual, por ejemplo, Lucentis, Avastin, o Macugen como se describe en cualquiera de los dos ejemplos anteriores. Los grupos se monitorizan durante un penodo de tiempo (por ejemplo, como se ha descrito anteriormente). Ademas, se determina el porcentaje de sujetos que progresan de ARMD temprana a intermedia. Una menor proporcion de sujetos que progresan a ARMD intermedia en el grupo que recibe la terapia combinada de la presente invencion es indicativa de que la terapia combinada de la presente invencion proporciona una ventaja terapeutica para tratar el trastorno ocular.
En otro ejemplo se evalua la capacidad de la invencion para inhibir el progreso de ARMD intermedia (AREDS 3) a ARMD avanzada (AREDS 4). Los sujetos con ARMD intermedia se dividen en dos grupos, uno de los cuales recibe
una combinacion de agentes de la invencion como se describe en cualquiera de los dos ejemplos anteriores
mientras que el otro no recibe ninguna terapia, o bien una terapia alternativa tal como Lucentis, Avastin, Macugen como se describe en cualquiera de los dos ejemplos anteriores. Los grupos se monitorizan durante un penodo de tiempo (por ejemplo, como se ha descrito anteriormente). Se determina el porcentaje de sujetos que progresan de ARMD intermedia a avanzada. Una menor proporcion de sujetos que progresan a ARMD avanzada en el grupo que recibe la terapia combinada de la presente invencion es indicativa de que la terapia combinada de la presente invencion proporciona una ventaja terapeutica para tratar el trastorno ocular.
Ademas de monitorizar el progreso de ARMD, tambien se puede monitorizar la incidencia de efectos secundarios y complicaciones. La consideracion de los efectos secundarios es un aspecto importante cuando se evalua el resultado global y la proporcion de riesgo/beneficio de la terapia. Por ejemplo, si dos terapias son igualmente eficaces en terminos de inhibir el progreso de o tratar ARMD, la terapia con una menor incidencia de efectos secundarios (por ejemplo, complicaciones graves tales como las que se han mencionado anteriormente) se prefiere por lo general para la mayona de los sujetos. En ciertas realizaciones de la terapia de la invencion de un trastorno tal como ARMD, o un trastorno que presenta CNV o RNV a partir de cualquier causa, el uso de los metodos y las composiciones de la invencion esta asociado a menores efectos secundarios totales, por ejemplo, complicaciones
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graves, a lo largo del tiempo (por ejemplo, durante un penodo de 1-2 anos) que una terapia en la que se administran multiples agentes individualmente o una terapia en la que solo se usa un agente terapeutico individual.
Equivalentes y alcance
En las reivindicaciones y en cualquier otro lugar de la memoria descriptiva, los artfculos tales como "un", "uno", "una", "el", y "la" pueden significar uno o mas de uno a menos que se indique lo contrario o sea evidente de otro modo a partir del contexto. Por ejemplo, se debena entender que los artfculos indefinidos "un" y "una", como se usan en el presente documento en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, a menos que se indique claramente lo contrario, significan "al menos uno". Las reivindicaciones o las descripciones que incluyen "o" entre uno o mas miembros de un grupo se consideran satisfechas si uno, mas de uno, o la totalidad de los miembros del grupo estan presentes en, se emplean en, o son pertinentes de otro modo para un producto o proceso dado a menos que se indique lo contrario o sea evidente de otro modo a partir del contexto. La invencion incluye realizaciones en las que exactamente un miembro del grupo esta presente en, se emplea en, o es pertinente de otro modo para un producto o proceso dado. La invencion tambien incluye realizaciones en las que mas de uno, o la totalidad de los miembros del grupo estan presentes en, se emplean en, o son pertinentes de otro modo para un producto o proceso dado.
Ademas, se ha de entender que la invencion incluye todas las variaciones, combinaciones, y permutaciones en las que una o mas limitaciones, elementos, clausulas, terminos descriptivos, etc., de una o mas de las reivindicaciones enumeradas (o de la parte de la memoria descriptiva pertinente para tal reivindicacion o elemento de reivindicacion) se introduce en otra reivindicacion. Por ejemplo, y sin limitacion, cualquier reivindicacion que sea dependiente de otra reivindicacion se puede modificar para incluir uno o mas elementos o limitaciones que se encuentren en cualquier otra reivindicacion (o de la parte de la memoria descriptiva pertinente para tal reivindicacion o elemento de reivindicacion) que sea dependiente de la misma reivindicacion de base. Ademas, cuando las reivindicaciones o la descripcion indiquen una composicion, se ha de entender que se incluyen los metodos para administrar la composicion de acuerdo con cualquiera de los metodos que se desvelan en el presente documento, y los metodos de uso de la composicion para cualquiera de los fines que se desvelan en el presente documento, y se incluyen metodos de preparacion de la composicion de acuerdo con cualquiera de los metodos de preparacion que se desvelan en el presente documento, a menos que se indique de otro modo o a menos que sea evidente para el experto habitual en la materia que pudiera surgir una contradiccion o inconsistencia. La invencion incluye todas las variaciones, combinaciones, y permutaciones en las que uno o mas elementos, clausulas, terminos descriptivos, etc., de una o mas de las reivindicaciones enumeradas se introduce en otra reivindicacion dependiente de la misma reivindicacion de base a menos que se indique de otro modo o a menos que sea evidente para el experto habitual en la materia que pudiera surgir una contradiccion o inconsistencia.
Cuando los elementos estan presentes en forma de listas, por ejemplo, en formato de grupo Markush o similar, se ha de entender que tambien se desvela cada subgrupo de los elementos, y se puede retirar cualquier elemento del grupo. En general, se ha de entender que cuando la invencion, o los aspectos de la invencion, se refieren a que comprenden elementos, rasgos, etc., particulares, ciertas realizaciones de la invencion o aspectos de la invencion consiste en, o consisten basicamente en, tales elementos, rasgos, etc. Con fines de simplicidad esas realizaciones no se han expuesto espedficamente in haec verba en el presente documento en todos los casos.
La inclusion de una etapa de "provision de un sujeto..." en ciertas realizaciones de la invencion se pretende que indique que la composicion se administra para tratar un trastorno ocular. De ese modo el sujeto tendra o se encontrara en riesgo de un trastorno ocular y la composicion se administra para tratar el trastorno, por lo general despues de la recomendacion bien fundada de un medico o practicante quirurgico, por ejemplo, un oftalmologo, que puede ser o no ser el mismo individuo que administra la composicion. La invencion incluye realizaciones en las que no se incluye de forma explfcita una etapa de provision y realizaciones en las que se incluye una etapa de provision.
La invencion tambien incluye realizaciones en las que se incluye una etapa de identificacion del sujeto que se encuentra en riesgo de o que padece un trastorno ocular caracterizado por degeneracion macular, CNV, o RNV.
Cuando se dan intervalos, se incluyen los extremos y la invencion incluye realizaciones en las que se excluyen cualquiera de los dos o ambos extremos. Ademas, se ha de entender que a menos que se indique de otro modo o sea evidente de otro modo partir del contexto y el entendimiento del experto habitual en la materia, los valores expresados en forma de intervalos pueden adoptar cualquier valor o subintervalo espedfico dentro de los intervalos indicados en diferentes realizaciones de la invencion, hasta la decima de la unidad del lfmite inferior del intervalo, a menos que el contexto lo indique claramente de otro modo.

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    REIVINDICACIONES
    1. Primer y segundo agentes terapeuticos para su uso en el tratamiento de un trastorno ocular caracterizado por degeneracion macular, neovascularizacion coroidal o neovascularizacion retiniana, en el que
    se administran cantidades eficaces del primer y el segundo agentes terapeuticos al ojo del sujeto, opcionalmente en un procedimiento individual;
    el primer agente terapeutico es un agente anti-VEGF seleccionado entre el grupo que consiste en anticuerpos o fragmentos de anticuerpo que se unen a VEGF, una protema de fusion que contiene dominios extracelulares de dos receptores de VEGF conectados a la region Fc de un anticuerpo, y acidos nucleicos que se unen a VEGF; y el segundo agente terapeutico se selecciona entre el grupo que consiste en un analogo de compstatina que tiene una actividad inhibidora del complemento al menos 5 veces mayor que la compstatina, un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo monoclonal que se une a C3 y un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une a C5, factor B o factor D.
  2. 2. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el analogo de compstatina es
    a) un compuesto que comprende un peptido dclico que tiene una secuencia principal de X'aa-Gln - Asp - Xaa - Gly (SEQ ID NO: 3), donde X'aa y Xaa se seleccionan entre Trp y analogos de Trp, o
    b) un compuesto que comprende un peptido dclico que tiene una secuencia principal de X'aa-Gln - Asp - Xaa - Gly-X"aa (SEQ ID NO: 4), donde X'aa y Xaa se seleccionan cada uno independientemente entre Trp y analogos de Trp y X"aa se selecciona entre His, Ala, aminoacidos sin ramificar con un solo metilo, Phe, Trp, y analogos de Trp, o
    c) un compuesto que comprende un peptido dclico que tiene una secuencia de X'aal - X'aa2 - X'aa3 - X'aa4- Gln-Asp-Xaa-Gly- X"aa1- X"aa2- X"aa3- X"aa4- X"aa5 (SEQ ID NO: 5), donde X'aa4 y Xaa se seleccionan entre Trp y analogos de Trp, en la que X'aal, X'aa2, X'aa3, X"aa1, X"aa2, X"aa3, X"aa4, y X"aa5 se seleccionan independientemente entre aminoacidos y analogos de aminoacido, y el peptido esta ciclado a traves de un enlace entre X'aa2 y X"aa4.
  3. 3. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el procedimiento es un procedimiento de inyeccion, tal como un procedimiento de inyeccion en el que el primer y el segundo agentes terapeuticos se inyectan en el humor vttreo del ojo del sujeto y/o un procedimiento de inyeccion en el que, antes de la administracion, el primer agente terapeutico esta contenido en una jeringa y el segundo agente terapeutico esta contenido en una aguja unida a la jeringa y en el que, preferentemente, el primer agente terapeutico esta disuelto en un medio lfquido situado en la jeringa y el segundo agente terapeutico comprende un implante ocular situado en la aguja.
  4. 4. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en el que el primer agente terapeutico o composicion se selecciona entre el grupo que consiste en bevacizumab, ranibizumab, pegaptanib y Trampa de VEGF.
  5. 5. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el primer agente terapeutico o composicion esta disuelto o suspendido en un medio lfquido antes de la administracion y/o el segundo agente terapeutico comprende un implante ocular, en el que opcionalmente el segundo agente terapeutico se libera desde el implante ocular de un modo tal que mantenga un nivel terapeutico en el ojo del sujeto durante un penodo de al menos tres meses.
  6. 6. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el segundo agente terapeutico se administra en forma de una formulacion de liberacion sostenida que comprende un material polimerico tal como un material polimerico seleccionado entre el grupo que consiste en: poli-acido lactico (PLA), poli- acido glicolico (PGA), poli-lactida-co-glicolido (PLGA)5 poli(fosfazina), poli(ester de fosfato), policaprolactonas, polianhndridos, etileno acetato de vinilo, poliortoesteres, polieteres, poli(beta amino esteres), copolfmeros que contienen subunidades monomericas encontradas en cualquiera de los polfmeros anteriores, colageno, albumina, quitosano, alginato, acido hialuronico, y las mezclas de cualquiera de los polfmeros anteriores y preferentemente el material polimerico es biodegradable.
  7. 7. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el segundo agente terapeutico se administra en forma de una formulacion de liberacion sostenida que comprende nanopartfculas, micropartfculas, dendnmeros, o liposomas que comprenden el segundo agente terapeutico, un material solido o semisolido que atrapa o encapsula el segundo agente terapeutico, o un material inactivo al que esta unido covalentemente el segundo agente terapeutico.
  8. 8. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el primer agente terapeutico se administra en forma soluble o de partfculas en un medio lfquido y el segundo agente terapeutico se administra en o unido a una matriz solida o semisolida y/o en el que el segundo agente terapeutico,
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    cuando se administra en forma de un componente de una formulacion de liberacion sostenida, tiene un penodo de actividad mayor que el del primer agente terapeutico.
  9. 9. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que la administracion del segundo agente terapeutico prolonga el intervalo de tiempo durante el que el sujeto experimenta una mejora en el estado del ojo del sujeto con respecto al intervalo de tiempo durante el que el sujeto habna experimentado una mejora si el primer agente terapeutico se hubiera administrado como terapia unica.
  10. 10. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en el que el trastorno ocular es degeneracion macular relacionada con la edad exudativa.
  11. 11. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el sujeto ha experimentado un empeoramiento perceptible en el estado del ojo del sujeto en las dos semanas precedentes a la administracion del primer y el segundo agentes terapeuticos.
  12. 12. El primer y el segundo agentes terapeuticos para el uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el procedimiento se lleva a cabo una o mas veces adicionales a intervalos de tiempo mayores que el penodo de actividad del primer agente terapeutico.
  13. 13. Articulo de fabricacion que comprende el primer y el segundo agentes terapeuticos de la reivindicacion 1, en el que el artfculo de fabricacion comprende una aguja que contiene el segundo agente terapeutico, en el que el artfculo de fabricacion comprende ademas opcionalmente una jeringa, tal como una jeringa que contiene el primer agente terapeutico y/o en el que el artfculo de fabricacion contiene una forma de dosificacion unitaria del primer agente terapeutico y/o una forma de dosificacion unitaria del segundo agente terapeutico.
  14. 14. El artfculo de fabricacion de la reivindicacion 13, que comprende ademas una jeringa, en el que el artfculo de fabricacion contiene al menos un compartimento y la jeringa y la aguja estan alojadas en un unico compartimento del artfculo de fabricacion y/o en el que la jeringa y la aguja estan unidas entre sf o en el que el artfculo de fabricacion contiene al menos dos compartimentos, y en el que la jeringa y la aguja estan alojadas en compartimentos individuales.
  15. 15. Articulo de fabricacion que comprende el primer y el segundo agentes terapeuticos de la reivindicacion 1, en el que cada agente terapeutico esta contenido en una jeringa individual y en el que el articulo de fabricacion comprende ademas opcionalmente una aguja.
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