ES2638537T3

ES2638537T3 - Proceso, tubo y dispositivo para la preparación de la composición sanitaria de las heridas

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Publication number: ES2638537T3
Application number: ES11719062.9T
Authority: ES
Inventors: Antoine Turzi
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-03-11
Filing date: 2011-03-11
Publication date: 2017-10-23
Anticipated expiration: 2031-03-11
Also published as: JP6321119B2; JP6359495B2; PT2544697T; EP3854406A1; EP4241856A2; RU2012143493A; JP2019206594A; US9517255B2; EP4241856A3; JP2017149786A; US20150125436A1; HUE033098T2; RU2667964C1; JP2017061538A; IL252122A0; US8945537B2; CA2789533C; HRP20190517T1; JP6588499B2; JP2015232028A

Abstract

Un método para la preparación de una composición de curador de herida o composición de curador de tejido, comprendiendo las etapas de: a) Recogida de sangre total en un tubo que comprende ácido hialurónico y un gel tixotrópico, b) Centrifugar dicho tubo, y c) Recogida del sobrenadante que comprende dicho ácido hialurónico y plasma rico en plaquetas.

Description

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[0064] Un tubo de "vacío" se refiere aquí a un tubo en el que no hay sustancias, no hay composiciones o también se han insertado y/o añadido en el tubo.

[0065] Cualquier proceso o método de la presente invención se pueden preparar usando al menos un tubo de acuerdo con la invención.

[0066] En otro aspecto, el presente documento describe un procedimiento o método para la preparación de una composición de curador de herida o composición de curador de tejido, que comprende las etapas de:

a) Recogida de sangre total en un tubo,

b) Centrifugación del tubo,

c) Recogida del coágulo.

[0067] Ventajosamente, ningún agente de coagulación se usa para la preparación de la composición de curador de herida o la composición de curador de tejido. Ventajosamente, la composición de curador de herida o composición de curador de tejido representa una composición lista para usar. Tal composición se puede aplicar directamente sobre las úlceras diabéticas.

[0068] Preferiblemente, el proceso o método para la preparación de una composición de curador de herida o composición de curador de tejido para uso en odontología y/o ortopedia.

[0069] En otro aspecto, el presente documento describe una composición de curador de heridas composición de curador de tejido que comprende un coágulo para uso en odontología, ortopedia, artritis, pseudo-artritis o más. En una realización, la composición de curador de herida o composición de curador de tejido formada por el coágulo se aplica en una cavidad dental, en una úlcera diabética, úlcera de perforación, úlcera de perforación diabética, u otros. Método de tratamiento y uso de la composición de curador de herida o composición de curador de tejido que comprende un coágulo también se describe.

[0070] En una realización, la composición de curador de herido o composición de curador de tejido pueden combinarse con el fosfato tricálcico (TCP) o con cualquier sustituto óseo preferiblemente antes de la formación del coágulo.

[0071] La composición de curador de heridas que comprende TCP se puede preparar preferentemente en un vial.

[0072] En una realización, la composición de curador de heridas o composición de curador de tejido pueden combinarse con ácido hialurónico (HA) preferiblemente antes de la formación del coágulo.

[0073] En otro aspecto, la presente invención proporciona un método o proceso para la preparación de una composición de concentrado de plaquetas o la composición de plasma rico en plaquetas, que comprende las etapas de:

a) Centrifugación de la sangre entera en un tubo según la invención comprende preferiblemente citrato sódico y un gel tixotrópico, y b) Recogida del plasma rico en plaquetas.

[0074] La etapa de centrifugación eliminará los glóbulos rojos (GR) del plasma. La fase superior es un plasma rico en plaquetas (PRP), y la fase inferior es sangre entera anticoagulada menos el plasma rico en plaquetas.

[0075] Preferiblemente, la etapa de centrifugación se realiza a una fuerza de o aproximadamente 1500 g hasta aproximadamente 2000 g. Preferentemente, la etapa de centrifugación se realiza en un período de tiempo suficiente para formar una barrera entre el plasma que contiene las plaquetas, los linfocitos y los monocitos y el gel que contiene los eritrocitos.

[0076] Preferiblemente, la etapa de separación b) se hace recogiendo el sobrenadante desde lo alto de dicha barrera. En una realización, el plasma rico en plaquetas enriquecido se separa del plasma completo mediante la eliminación de la mitad del sobrenadante que contiene el plasma pobre en plaquetas. Preferentemente, el plasma enriquecido está enriquecido en leucocitos, trombocitos y proteínas de adhesión (por ejemplo, fibronectina (proteína soluble) o vitronectina (proteína secretada por las plaquetas)) en comparación con la sangre entera nativa.

[0077] En una realización, el tubo utilizado para la preparación de plasma rico en plaquetas se selecciona de:

i) un tubo separador de vidrio que contiene un gel tixotrópico a base de poliéster y una solución de citrato sódico tamponada a 0,10 M, ii) un tubo separador de tereftalato de polietileno que contiene un gel altamente tixotrópico formado por una mezcla de polímero y un citrato sódico anhidro en 3,5 mg/ml, iii) un tubo separador de olefina cíclica (COC) o polímero de olefina cíclica (COP) que contiene un gel tixotrópico

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a base de poliéster y una solución de citrato de de sodio tamponada a 0,10 M, o iv) un tubo separador de filtro de copolímero de olefina cíclica (COC) o polímero de olefina cíclica (COP) que contiene una solución de citrato sódico tamponada a 0,10 M o un citrato sódico anhidratado a 3,5 mg/mL.

[0078] En una realización más preferida, el método para la preparación de un concentrado de plaquetas utiliza un tubo según la invención con la adición de citrato (por ejemplo, una solución de citrato sódico tamponado a 0,10 M o un citrato sódico anhidro a 3,5 mg/ml).

[0079] En otro aspecto, la presente invención proporciona un método o proceso para la preparación de una composición de curador de herida o curador de tejido, que comprende las etapas de:

a) Centrifugación de la sangre entera en un tubo según la invención comprende preferiblemente citrato sódico y un gel tixotrópico, b) Recogida del plasma rico en plaquetas, y c) Mezcla del plasma rico en plaquetas con un extracto celular, composición de células, TCP, quitosano, ácido hialurónico, crema, máscara de crema, células de grasa, tejido graso, concentrado de médula ósea, lubricina, cdgelatina, toxina botulínica y/o células madre.

[0080] En otro aspecto, el presente documento describe una composición de curador de herida o curador de tejido:

a) un plasma rico en plaquetas o concentrado de plasma y b) TCP, quitosano, ácido hialurónico, crema, máscara de crema, células de grasa, tejido graso, concentrado de médula ósea, lubricina, cd-gelatina, toxina botulínica y/o células madre.

[0081] En otro aspecto, el presente documento describe una composición de curador de herida o curador de tejido:

a) un suero de trombina, b) un plasma rico en plaquetas o concentrado de plasma, y c) TCP, quitosano, ácido hialurónico, crema, máscara de crema, células de grasa, tejido graso, concentrado de médula ósea, lubricina, cd-gelatina, toxina botulínica y/o células madre.

[0082] La formación de un coágulo es un proceso de múltiples pasos o cascada y varios de estos pasos requieren la presencia de iones de calcio. Mediante la eliminación de los iones de calcio presentes en la sangre entera, como es el efecto cuando se recoge la sangre en citrato, se puede evitar que la sangre se coagule. Un agente quelante de calcio es una sustancia química que reacciona con el calcio, presente en la sangre, de tal manera que el calcio ya no puede funcionar en coagulación de sangre. El agente quelante más común es una sal de ácido cítrico (citrato), ya que tiene menos efectos secundarios sobre los componentes del sistema de coagulación. Por la recogida de sangre en un medio que contiene un agente quelante de calcio, tal como citrato, recogida de muestras y otras preparaciones de la muestra citrada se puede realizar durante un período de tiempo de hasta varias horas. El agente quelante de calcio preferido es citrato sódico.

[0083] Mientras que un medio de recogida de citrato sódico de 3,5 mg/ml es el que se utiliza con frecuencia para recoger y conservar sangre, la persona experta en esta técnica reconocerá que la relación de citrato sódico a la sangre completa podría estar en un intervalo diferente.

[0084] En otro aspecto, el presente documento describe una composición de concentrado de plaquetas aislada que comprende:

a) plasma;

b) plaquetas a una concentración de al menos 300X109 células/L;

c) células blancas de sangre a una concentración de al menos 7x109 células/L;

d) fibrinógeno a una concentración de al menos 3 mg/L;

y en donde la concentración de eritrocitos es menor que 0,6X1012 células/L.

[0085] Una composición de plasma rico en plaquetas también se denomina composición de concentrado de plasma en la presente memoria.

[0086] En una realización, una composición de concentrado de plaquetas o composición de plasma rico en plaquetas puede combinarse con fosfato tricálcico (TCP) y/o cualquier sustituto para el uso como corrector de volumen (TCP en 10-30 micras), en odontología, ortopedia (TCP a 50 micras).

[0087] En otro aspecto, el presente documento describe un método o proceso para la preparación de una composición de curador de herida o composición de curador de tejido, que comprende las etapas de:

a) Centrifugación de la sangre entera en un tubo que comprende ácido hialurónico,

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b) Separación opcional del plasma rico en plaquetas enriquecido y ácido hialurónico a partir del plasma completo, y c) Mezcla opcional del plasma rico en plaquetas enriquecido y ácido hialurónico.

[0088] Preferiblemente, el tubo comprende ácido hialurónico, preferentemente en la parte inferior del tubo, seguido de un gel tixotrópico y luego un anticoagulante, preferentemente citrato sódico (Figura 16).

[0089] Preferiblemente, la etapa de separación b) se hace recogiendo el sobrenadante que contiene el plasma rico en plaquetas enriquecido y ácido hialurónico desde lo alto de dicha barrera. En una realización, el plasma rico en plaquetas enriquecido y ácido hialurónico se separa del plasma completo mediante la eliminación de la mitad del sobrenadante que contiene el plasma pobre en plaquetas. Preferiblemente, el plasma enriquecido está enriquecido en leucocitos, trombocitos y proteínas de adhesión (por ejemplo, fibronectina (proteína soluble) o vitronectina (proteína secretada por las plaquetas)) en comparación con la sangre entera nativa.

[0090] En otro aspecto, la invención proporciona un proceso o método para la preparación de una composición de curador de herida o composición de curador de tejido, que comprende las etapas de:

a) Recogida de sangre completa preferiblemente en un tubo que contiene ácido hialurónico, un gel tixotrópico y/o un preferiblemente citrato sódico anticoagulante, b) Centrifugación del tubo preferiblemente hasta que la migración de las células rojas de la sangre bajo el gel tixotrópico y preferiblemente hasta que la migración de ácido hialurónico por encima del plasma enriquecido, c) Mezcla opcional del ácido hialurónico y plasma enriquecido, preferiblemente invirtiendo el tubo, d) Recogida del sobrenadante que contiene el ácido hialurónico y plasma enriquecido, y e) Mezcla opcional adicional de dicho ácido hialurónico y dicho plasma enriquecido.

[0091] En otro aspecto, la invención proporciona un proceso o método para la preparación de una composición de curador de herida o composición de curador de tejido, que comprende las etapas de:

a) Recogida de sangre completa preferiblemente en un tubo que contiene ácido hialurónico, un gel tixotrópico y/o preferiblemente un citrato sódico anticoagulante, b) Centrifugación del tubo preferiblemente hasta la formación de una capa de ácido hialurónico como primera capa de la parte superior del tubo seguido por una segunda capa que consiste en plasma o PRP enriquecido, c) Mezcla opcionalmente del ácido hialurónico y plasma enriquecido, invirtiendo preferiblemente el tubo, d) Recogida del sobrenadante que contiene el ácido hialurónico y el plasma enriquecido, y e) Mezcla opcionalmente además de dicho ácido hialurónico y dicho plasma enriquecido.

[0092] La etapa de centrifugación eliminará los glóbulos rojos (GR) desde el plasma. Después de la centrifugación, la fase superior es el ácido hialurónico con debajo de un plasma rico en plaquetas (PRP), seguido por el gel tixotrópico y la fase inferior es sangre entera anticoagulada que contiene las células rojas de la sangre menos el plasma rico en plaquetas (Figura 16). Durante la centrifugación, ácido hialurónico migra por encima de plasma (Figura 16).

[0093] Preferiblemente, el tubo contiene aproximadamente 1 ml a aproximadamente 2 ml de ácido hialurónico, aproximadamente 2 g de selector de células o gel tixotrópico y aproximadamente 1 ml de citrato sódico a 0,109 M.

[0094] Una representación esquemática del método para la preparación de una composición de curador de herida comprendiendo ácido hialurónico y PRP se proporciona en la Figura 16.

[0095] Preferiblemente, el plasma rico en plaquetas enriquecido y el ácido hialurónico se mezclan mediante simple inversión del tubo.

[0096] Ventajosamente, cuando se mezcla el plasma rico en plaquetas enriquecido y ácido hialurónico, el ácido hialurónico se expande inflado por plasma y las células.

[0097] Ventajosamente, la composición de curador de heridas o composición de curador de tejido obtenida es una composición lista para uso. Ventajosamente, la composición de curador de heridas o composición de curador de tejido obtenida es un gel viscoso o pegamento biológico adecuado para la inyección, y por ejemplo se puede usar como soporte mecánico o de relleno.

[0098] Ventajosamente, el método o proceso para la preparación de una composición de curador de heridas o composición de curador de tejido o gel viscoso es económico, simple y rápido.

[0099] Preferiblemente, la etapa de centrifugación se realiza en un período de tiempo suficiente hasta la migración de las células rojas de la sangre bajo el gel tixotrópico y preferiblemente hasta la migración de ácido hialurónico por encima del plasma enriquecido.

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a) plasma; b) plaquetas a una concentración de al menos 300X109 células/L; c) células blancas de sangre a una concentración de al menos 7x109 células/L; d) fibrinógeno a una concentración de al menos 3 mg/L; e) aproximadamente 1 ml a aproximadamente 2 ml de ácido hialurónico;

y en donde la concentración de eritrocitos es menor que 0.6X1012 células/L.

[0113] En una realización, una composición de curador de heridas o composición de curador de tejido pueden combinarse con el fosfato tricálcico (TCP) y/o cualquier sustituto para el uso como corrector de volumen (TCP en 1030 micras), en odontología, ortopedia (TCP a 50 micras).

[0114] En una realización, una composición de curador de herida, una composición de curador de tejido, un agente hemostático, una composición de concentrado de plaquetas, una composición de plasma rico en plaquetas se puede combinar en el tubo de recogida de sangre con ácido hialurónico.

[0115] En otro aspecto, el presente documento describe un proceso o un método para la preparación de un agente hemostático, una composición de curador herida o composición de curador de tejido, que comprende la etapa de mezclar un suero de trombina o suero de trombina con una composición de plasma rico en plaquetas, una composición de plasma rico en plaquetas, composición de curador de heridas o composición de curador de tejido.

[0116] En otro aspecto, el presente documento describe un procedimiento o método para la preparación de una composición de curador de heridas o composición de curador de tejido o agente hemostático que comprende:

a) Proporcionar un concentrado de plaquetas o concentrado de plaquetas, b) Mezclar el concentrado de plaquetas con un activador de coagulación, suero de trombina o suero de trombina, y c) Mezclar opcionalmente un extracto celular, tal como extracto de queratinocitos, médula ósea, fibroblastos, periostio o células de la córnea, melanocitos y células de Langheran; células grasas; células del músculo, tales como mioblastos y células de satélite; osteoblastos; condrocitos; células progenitoras de sangre, células del cordón umbilical; células madre mesenquimales (MSCs), preadipocitos, células pre-endhoteliales, células de Schwann o células de tendón de Aquiles.

[0117] Preferiblemente, un concentrado autólogo de plaquetas, una trombina autóloga y/o un extracto celular autólogo se utiliza(n). Más preferiblemente, se utilizan un concentrado autólogo de plaquetas y una trombina autóloga y un extracto celular autólogo. Preferiblemente, se utilizan tubos de acuerdo con la invención.

[0118] En otro aspecto, el presente documento describe un procedimiento o método para la preparación de una composición de curador de herida o composición de curador de tejido o agente hemostático que comprende:

a) mezclar un concentrado de plaquetas con un suero de trombina autóloga, y b) mezclar opcionalmente al menos un extracto de células autólogas, tal como extracto de los queratinocitos, médula ósea, fibroblastos, periostio o células de la córnea, melanocitos y células de Langheran; células grasas; células del músculo, tales como mioblastos y células satélite; osteoblastos; condrocitos; células de cordón umbilical; células madre mesenquimales (MSC), preadipocitos, células pre-endhoteliales, células de Schwann o células del tendón de Aquiles.

[0119] En otro aspecto, el presente documento describe un procedimiento o método para la preparación de una composición de curador de herida o composición de curador de tejido o agente hemostático que comprende:

a) mezclar un concentrado de plaquetas autólogas con un suero de trombina, en el que el concentrado de plaquetas autólogas y/o el suero de trombina se preparan usando tubos, y b) mezclar opcionalmente al menos un extracto de células autólogas, tal como extracto de los queratinocitos, médula ósea, fibroblastos, células del periostio o corneales, melanocitos y células de Langheran; células grasas; células del músculo, tales como mioblastos y células satélite; osteoblastos; condrocitos; células de cordón umbilical; células madre mesenquimales (MSC), preadipocitos, células pre-endhoteliales, células de Schwann o células del tendón de Aquiles.

[0120] En otro aspecto, el presente documento describe un procedimiento o método para la preparación de una composición de curador de herida o composición de curador de tejido o agente hemostático que comprende:

a) Proporcionar un concentrado de plaquetas, preferiblemente un concentrado de plaquetas autólogo, b) Mezclar el concentrado de plaquetas con un suero de trombina, y c) Mezclar opcionalmente al menos un extracto de células, preferiblemente un extracto celular autólogo, tal como extracto de los queratinocitos, la médula ósea, los fibroblastos, periostio o células de la córnea, melanocitos y células de Langheran; células grasas; células del músculo, tales como mioblastos y células satélite; osteoblastos;

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condrocitos; células de cordón umbilical; las células madre mesenquimales (MSCs), preadipocitos, células preendhoteliales, células de Schwann o células de tendón de Aquiles.

[0121] Preferiblemente, la invención proporciona un método o proceso para la preparación de una composición de curador de herida autóloga o composición de curador de tejidos o agente hemostático. Una composición de curador de heridas autóloga o composición de curador de tejidos o agente hemostático en este documento significa una composición en la que o bien el concentrado de plaquetas o bien el suero de trombina es autólogo.

[0122] En un aspecto más preferido, la invención proporciona un método o proceso para la preparación de una composición de curador de heridas completamente autóloga o composición de curador de tejidos o agente hemostático. Una composición de curador de herida completamente autóloga o composición de curador de tejidos o agente hemostático en este documento significa una composición en la que tanto el concentrado de plaquetas como el suero de trombina son autólogos. En este aspecto preferido de la invención, todos los componentes de la sangre para la composición de curador de heridas o composición de curador de tejido o agente hemostático se derivan del mismo paciente o animal al que se aplicará la composición de curador de herida o composición de curador de tejidos

o agente hemostático.

[0123] En otro aspecto, la invención proporciona un método o proceso para la preparación de una composición de curador de heridas o composición de curador de tejido completamente autólogo o agente hemostático en combinación con al menos un extracto de células autólogas. En este aspecto, el concentrado de plaqueta, el suero de trombina y el extracto de célula son todos autólogos y por lo tanto se derivan del mismo paciente o animal.

[0124] En otro aspecto, el presente documento describe un procedimiento o método para la preparación de una composición de curador de herida autólogo o composición de curador de tejido autólogo o agente hemostático autólogo que comprende:

a) Mezclar un concentrado de plaquetas autólogas con un suero de trombina autóloga, y b) Mezclar opcionalmente al menos un extracto de células, tal como extracto de queratinocitos, médula ósea, fibroblastos, periostio o células de la córnea, melanocitos y células de Langheran; células grasas; células musculares tales como mioblastos y células satélite; osteoblastos; condrocitos; células de cordón umbilical; células madre mesenquimales (MSCs), preadipocitos, células pre-endhoteliales, células de Schwann o células del tendón de Aquiles,

en el que el concentrado de plaquetas autólogas y la trombina autóloga ambos se derivan del mismo paciente o del mismo animal.

[0125] En otro aspecto, el presente documento describe un procedimiento o método para la preparación de una composición de curador de herida autólogo o composición de curador de tejido autólogo o agente hemostático autólogo que comprende:

a) Mezclar un concentrado de plaquetas autólogas con un suero de trombina autóloga, y b) Mezclar opcionalmente al menos un extracto de células autólogas, tal como extracto de los queratinocitos, médula ósea, fibroblastos, periostio o células de la córnea, melanocitos y células de Langheran; células grasas; células del músculo, tales como mioblastos y células satélite; osteoblastos; condrocitos; células de cordón umbilical; células madre mesenquimales (MSC), preadipocitos, células pre-endhoteliales, células de Schwann o células del tendón de Aquiles,

en el que el concentrado de plaquetas autólogas, la trombina autóloga y el extracto de células autólogas se derivan del mismo paciente o del mismo animal.

[0126] El plasma rico en plaquetas, plasma rico en plaquetas autólogo, suero de trombina, suero de trombina autóloga, composición de curador de herida o composición de curador de tejidos o agente hemostático puede combinarse con uno o más extractos de células. En una realización, el extracto celular se selecciona a partir de queratinocitos, médula ósea, fibroblastos, periostio o células de la córnea, melanocitos y células de Langheran; células grasas; células del músculo, tales como mioblastos y células satélite; osteoblastos; condrocitos; células de cordón umbilical; células madre mesenquimales (MSCs), preadipocitos, células pre-endhoteliales, células de Schwann o células de tendón de Aquiles.

[0127] Una composición de curador de heridas o composición de curador de tejido o agente hemostático de la invención presente estimulará la regeneración celular, actuando como un pegamento biológico a fin de promover la adhesión de tejidos.

[0128] En una realización, en lugar de suero de trombina, un activador de la coagulación alternativa puede usarse tal como cloruro de calcio, preferiblemente gluconato de calcio.

[0129] En una realización, múltiples activadores de coagulación pueden usarse en combinación, preferiblemente

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herida o tejido y un dispositivo de aplicación (por ejemplo, una jeringa doble) para la dispensación simultánea sobre la herida de la composición de concentrado de plaquetas o la composición de plasma rico en plaquetas o agente hemostático o una composición de curador de herida de tejido o suero de trombina de acuerdo con la divulgación.

[0168] En una realización, el kit está adaptado para la regeneración de tejidos.

[0169] En otro aspecto, el presente documento describe un método para promover la cicatrización de la herida o tejido de curación y/o el sellado y/o tejido y/o la regeneración ósea en una herida o tejido de un humano o animal que comprende:

a) Proporcionar una composición de curador de herida o curador de tejido o agente hemostático de acuerdo con la divulgación, y b) aplicación de una cantidad terapéuticamente eficaz del curador de herida o tejido o agente hemostático a una herida, un tejido dañado o un hueso dañado.

[0170] En otro aspecto, el presente documento describe un método de tratamiento que comprende:

[0171] En otro aspecto, el presente documento describe un método para inducir la regeneración periodontal en una herida o un defecto periodontal de un mamífero con la enfermedad periodontal u otra condición que requiere la regeneración periodontal que comprende:

a) Proporcionar un curador de herida o tejido o agente hemostático según la invención, b) Aplicar una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición de heridas o curador de tejido o agente hemostático a la herida o el tejido o el defecto periodontal o cavidad, c) Insertar, opcionalmente, una barrera periodontal, y d) Cerrar la herida o tejido.

[0172] Preferiblemente, la barrera se sitúa entre el tejido gingival y la herida o tejido tratado según las etapas a) y b). En una realización, la barrera está seleccionada a partir de una membrana, un polímero biodegradable y/o un material poroso biocompatible.

[0173] La membrana puede ser obtenida mediante la combinación de PRP y gluconato de calcio 10% en una proporción de 30 a 70 o 50 en el 50, respectivamente. La centrifugación se realiza durante aproximadamente 30 minutos.

[0174] En otro aspecto, el presente documento describe un método para promover la regeneración de la piel en una cicatriz o una arruga de humano o animal que comprende:

a) Proporcionar una composición de heridas o curador de tejido o agente hemostático según la invención, y b) Llenar la cicatriz de la piel o de la línea de arrugas con dicha composición de heridas o curador de tejido o agente hemostático.

[0175] En otro aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de una composición de células, que comprende las etapas de:

a) Centrifugación de la sangre entera en un tubo de acuerdo con la invención, b) Separar opcionalmente el plasma rico en plaquetas enriquecido desde el plasma completo, y c) Re-suspender el plasma enriquecido, d) Proporcionar un extracto celular tal como un extracto de células dérmicas tales como queratinocitos, fibroblastos, melanocitos y la célula de Langheran; células grasas; células de médula ósea; células del músculo, tales como mioblastos y células satélite; osteoblastos; condrocitos; células de filtro del periostio; células de la córnea; células de cordón umbilical; células madre mesenquimales (MSC), preadipocitos, células preendhoteliales, células de Schwann, células de tendón o células de islotes de páncreas, y e) Mezclar el concentrado de plaquetas obtenido en el paso (c) con el extracto celular obtenido en d).

[0176] Preferiblemente, la etapa de centrifugación se realiza a una fuerza de o aproximadamente 1500 g hasta aproximadamente 2000 g. Preferentemente, la etapa de centrifugación se realiza en un período de tiempo suficiente para formar una barrera entre el plasma que contiene las plaquetas, los linfocitos y los monocitos y el sedimento que contiene los eritrocitos.

[0177] Preferiblemente, la etapa de separación b) se hace recogiendo el sobrenadante desde lo alto de dicha

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