CN101659939A - 单核细胞分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于单核细胞的分离方法，其步骤依次为：a.将单核细胞分离试剂注入容器中，单核细胞分离试剂包括分离液、分离胶、细胞保养液；b.采集血液入容器内，使血液与细胞保养液混合均匀；c.使容器受离心力的影响，容器内的溶液形成不同层次的区带；d.吸出单核细胞层。本发明优点在于简化了单核细胞的分离方法，直接采血入预置好分离试剂的试管，不用制备稀释抗凝血液，细胞保养液延长分析前的标本贮存时间，离心后分离胶有效隔离红细胞，易于质量控制。
Description
技术领域：
本发明涉及一种用于单核细胞的分离方法。
背景技术：
免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞，主要包括淋巴细胞、单核-巨噬细胞、树突状细胞、各种粒细胞和肥大细胞等。根据各类免疫细胞独特的表面标志及其特殊功能，用体外或体内方法，对各类免疫细胞进行数量和功能测定，是观察机体免疫状态的一种重要手段。外周血单核细胞(peripheral bloodmononuclear cell，PBMC)主要是指淋巴细胞，是免疫学实验最常用的细胞群。目前主要使用的是体外方法，用体外方法检测某种细胞数量和功能的前提是从血液成分中有效分离出该细胞。传统的分离方法是使用聚蔗糖-泛影葡胺等分离液法分离，该法需预先制备抗凝全血并稀释到一定浓度，再将稀释后的血液轻轻叠加在分离液液面上进行离心分离，其步骤主要为：
1、制备抗凝血
2、用稀释剂将抗凝血倍比稀释
3、将分离液加入试管内
4、再将稀释后的血液轻轻叠加于分离液液面上
5、离心
6、吸取单核细胞层
此法操作繁琐，对操作人员的熟练程度要求比较高。
发明内容：
鉴于以上现状，本发明提供一种用于单核细胞的分离方法，解决了上述传统分离方法存在的问题。
本发明的技术方案是通过如下内容实现的：
一种用于血液中单核细胞分离的方法，其特征在于：其步骤依次为
a.将单核细胞分离试剂设置于容器中，所述单核细胞分离试剂包括分离液、分离胶、细胞保养液，加入的顺序依次为分离液、分离胶、细胞保养液。
b.采集血液入容器内，使血液与细胞保养液混合均匀。
c.使容器受离心力的影响，容器内的溶液形成不同层次的区带，使得容器中由下至上分别为红细胞层、分离胶、分离液、单核细胞层、血浆与细胞保养液的混合液。
d.吸出单核细胞层。
所述容器受离心力作用为将容器放入离心机中离心。
所述采血方式为真空采血。
所述吸出单核细胞层的方式为吸管吸出。
所述容器为试管。
所述离心力大小为(相对离心力)RCF 800g-1200g
所述离心的时间为8-12分钟。
分离液：成份为葡聚糖、泛影葡胺等；靠其特定的密度从血液中分离出单核细胞；
分离胶：将红细胞和血液中其它成分有效分隔开，防止溶血；
细胞保养液：为ACD保养液、CPD保养液或CPDA保养液，三种均可维持细胞的形态与活性。
本发明优点：使得单核细胞的分离方法减少了繁琐的步骤，从而更加简便，易于质量控制。
1、利用真空采血技术直接采血入预置好分离试剂的试管，不用制备稀释抗凝血液
2、细胞保养液提供细胞代谢所需物质，延长分析前标本贮存时间
3、离心后分离胶有效隔离红细胞，防止溶血对检测结果的影响。
具体实施方式：
通过真空采血技术，将一定量全血采入试管后，使血液与细胞保养液混匀。然后以相对离心力RCF 800g-1200g，将容器放入离心机中离心8-12分钟，由于单核细胞的密度(本文所述密度均为相对密度，把纯水在一定温度下的密度视为1，另一种物质在相同条件下的密度与它相除而得，下同)与血液中的其他成分以及试剂的密度不同，红细胞密度为1.092，分离胶密度为1.08，分离液密度为1.077，单核细胞密度与这些密度不同，因此根据密度梯度原理，形成不同层次的区带，且单核细胞呈白膜状，用吸管吸出此细胞层，可获得纯度达95％以上的单核细胞。
实施例1
通过真空采血技术，将一定量全血采入试管后，使血液与细胞保养液混匀。然后将容器放入离心机中，以相对离心力RCF 800g离心8分钟，由于PBMC的密度(本文所述密度均为相对密度，把纯水在一定温度下的密度视为1，另一种物质在相同条件下的密度与它相除而得，下同)与血液中的其他成分以及试剂的密度不同，红细胞密度为1.092，分离胶密度为1.08，分离液密度为1.077，PBMC的密度为1.07，因此根据密度梯度原理，形成不同层次的区带：最下层为红细胞层，依次往上为分离胶、分离液、单核细胞层、血浆与细胞保养液的混合液。故PBMC层位于血浆层和分离液的界面中，呈白膜状，用吸管吸出此细胞层，可获得纯度达95％以上的单核细胞。
实施例2
通过真空采血技术，将一定量全血采入试管后，使血液与细胞保养液混匀。然后以相对离心力RCF 1200g，将容器放入离心机中离心12分钟，由于PBMC的密度(本文所述密度均为相对密度，把纯水在一定温度下的密度视为1，另一种物质在相同条件下的密度与它相除而得，下同)与血液中的其他成分以及试剂的密度不同，红细胞密度为1.092，分离胶密度为1.08，分离液密度为1.077，PBMC的密度为1.07，因此根据密度梯度原理，形成不同层次的区带：最下层为红细胞层，依次往上为分离胶、分离液、单核细胞层、血浆与细胞保养液的混合液。故PBMC层位于血浆层和分离液的界面中，呈白膜状，用吸管吸出此细胞层，可获得纯度达95％以上的单核细胞。
实施例3
通过真空采血技术，将一定量全血采入试管后，使血液与细胞保养液混匀。然后以相对离心力RCF 1000g，将容器放入离心机中离心10分钟，由于PBMC的密度(本文所述密度均为相对密度，把纯水在一定温度下的密度视为1，另一种物质在相同条件下的密度与它相除而得，下同)与血液中的其他成分以及试剂的密度不同，红细胞密度为1.092，分离胶密度为1.08，分离液密度为1.077，PBMC的密度为1.07，因此根据密度梯度原理，形成不同层次的区带：最下层为红细胞层，依次往上为分离胶、分离液、单核细胞层、血浆与细胞保养液的混合液。故PBMC层位于血浆层和分离液的界面中，呈白膜状，用吸管吸出此细胞层，可获得纯度达95％以上的单核细胞。
本文出现的“单核细胞”为“单个核细胞”的简称。
Claims (7)
1、一种单核细胞分离的方法，其特征在于：其步骤依次为
a.将单核细胞分离试剂预置于容器中，所述单核细胞分离试剂包括分离液、分离胶、细胞保养液，加入的顺序依次为分离液、分离胶、细胞保养液；
b.采集血液入容器内，使血液与细胞保养液混合均匀；
c.使容器受离心力的作用，容器内的溶液形成不同层次的区带，使得容器中由下至上分别为红细胞层、分离胶、分离液、单核细胞层、血浆与细胞保养液的混合液；
d.吸出单核细胞层。
2、根据权利要求1所述的单核细胞分离的方法，其特征在于：所述c步骤是将容器放入离心机中进行离心。
3、根据权利要求1所述的单核细胞分离的方法，其特征在于：所述采血方式为真空采血。
4、根据权利要求1所述的单核细胞分离的方法，其特征在于：所述吸出单核细胞层的方式为吸管吸出。
5、根据权利要求1-2任意一项所述的单核细胞分离的方法，其特征在于：所述容器为试管。
6、根据权利要求1-2任意一项所述的单核细胞分离的方法，其特征在于：所述受到离心力的大小为RCF 800g-1200g。
7、根据权利要求1-2任意一项所述的单核细胞分离的方法，其特征在于：所述离心的时间为8-12分钟。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105112373A (zh) * | 2015-09-15 | 2015-12-02 | 上海麦禾生物科技有限公司 | 一种溶血性贫血患者外周血单核细胞的分离方法 |
| CN110268262A (zh) * | 2017-01-27 | 2019-09-20 | 公益财团法人神户医疗产业都市推进机构 | 单核细胞分离装置及单核细胞分离方法 |
| CN112220802A (zh) * | 2010-03-11 | 2021-01-15 | 安托万·图瑞兹 | 伤口修复剂组合物的制备工艺、管子及装置 |
| WO2024152474A1 (zh) * | 2023-01-16 | 2024-07-25 | 楚天思为康基因科技(长沙)有限公司 | 一种细胞离心分离方法 |
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2009
- 2009-09-28 CN CN200910167784A patent/CN101659939A/zh active Pending
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