ES2621531T3 - Nuevas formas de 5-azacitidina - Google Patents

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ES2621531T3
ES2621531T3 ES10179540.9T ES10179540T ES2621531T3 ES 2621531 T3 ES2621531 T3 ES 2621531T3 ES 10179540 T ES10179540 T ES 10179540T ES 2621531 T3 ES2621531 T3 ES 2621531T3
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azacitidine
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crystalline form
radiation
powder
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Dumitru Ionescu
Peter Blumbergs
Lee Alani Selvey
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Celgene International SARL
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Celgene International SARL
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Abstract

Una composición farmacéutica que comprende una forma cristalina de la 5-azacitidina para usar en un método de tratamiento de síndromes mielodisplásicos, en donde la forma cristalina de la 5-azacitidina se caracteriza por los picos observados usando difracción de rayos X de polvo (radiación Kα de Cu), que comprende picos que tienen los siguientes ángulos 2θ:**Tabla** y en donde el método comprende la administración oral de la composición farmacéutica.

Description

DESCRIPCION
Nuevas formas de 5-azacitidina Campo de la invencion
La invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de la 5-azacitidina para 5 usar en un metodo de tratamiento de smdromes mielodisplasicos, en donde la forma cristalina de la 5-azacitidina se caracteriza por los picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu) que comprende picos quetienen los siguientes angulos 20:
Angulo 20 (°)
6,
566
11
CD OO CO
13
O 00 CD
15
138
17
CD ■sr
20
762
21
o CD
22
776
24
CO CD CO
25
743
26
305
28
741
31
393
32
CD O 00
33
CO o
33
CD CO LD
36
371
39
157
41
CO CD
10 y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
Ademas, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una fase mixta de formas de 5- azacitidina para usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos, en donde la fase mixta de formas de 5- azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que tiene los siguientes angulos 20:
imagen1
imagen2
y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
La invencion tambien esta dirigida a una composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de 5- azacitidina para usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos, donde la forma cristalina se caracteriza 5 por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprenden picos que tienen los siguientes angulos 20:
imagen3
y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
La invencion tambien se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una 5-azacitidina solida amorfa
5
10
15
20
25
30
Se describe en la presente memoria el aislamiento de formas cristalinas polimorfas y pseudopolimorfas de 5- azacitidina (tambien conocida como azacitidina y 4-amino-1-p-D-ribofuranosil-S-triazin-2(1H)-ona). La 5-azacitidina se puede usar en el tratamiento de enfermedades, incluyendo el tratamiento de smdromes mielodisplasicos (MDS).
Antecedentes de la invencion
Los polimorfos existen como dos o mas fases cristalinas que tienen diferentes disposiciones y/o diferentes conformaciones de la molecula en una red cristalina. Cuando hay una molecula o moleculas de disolvente contenidas dentro de la red cristalina, el cristal resultante se llama un pseudopolimorfo o solvato. Si la o las moleculas de disolvente dentro de la estructura cristalina es una molecula de agua, entonces el pseudopolimorfo/solvato se llama un hidrato. Los solidos polimorfos y pseudopolimorfos presentan diferentes propiedades ffsicas, incluyendo las debidas al empaquetamiento, y diferentes propiedades termodinamicas, espectroscopicas, interfaciales y mecanicas (vease, Brittain, Polymorphism in Pharmaceutical Solids, Marcel Dekker, New York, Ny, 1999, pag, 1-2). Las formas polimorfas y pseudopolimorfas del principio activo (tambien conocido como el "principio activo farmaceutico" (API)), administradas solas o formuladas como un medicamento (conocido tambien como la forma farmaceutica final o acabada, o como la composicion farmaceutica) son bien conocidas y pueden afectar, por ejemplo, a la solubilidad, estabilidad, fluidez, fracturabilidad y compresibilidad de los principios activos y a la seguridad y eficacia de los medicamentos (vease, p. ej., Knapman, K Modem Drug Discoveries, Marzo 2000: 53).
La 5-azacitidina (tambien conocida como azacitidina y 4-amino-1-p-D-ribofuranosil-1,3,5-triazin-2(1H)-ona; denominacion del Nation Service Center NSC-102816; Numero de registro CAS 320-67-2) se ha sometido a ensayos clmicos patrocinados por el NCI para el tratamiento de smdromes mielodisplasicos (MDS). Vease Kornblith et al., J. Clin. Oncol. 20(10): 2441-2452 (2002), Gryn et al., Leukemia Research 26 (2.002), 893-897 y Silverman et al., J. Clin. Oncol. 20(10): 2429-2440 (2002). La 5-azacitidina se puede definir como que tiene la formula C8H12N4O5, un peso molecular de 244,20 y una estructura:
imagen4
La forma polimorfa del principio activo 5-azacitidina y el medicamento no se han caracterizado nunca. Un objeto de la presente invencion es caracterizar las formas polimorfas de la 5-azacitidina.
Resumen de la invencion
La invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de la 5-azacitidina para usar en un metodo de tratamiento de smdromes mielodisplasicos, en donde la forma cristalina de la 5-azacitidina se caracteriza por los picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu) que comprende picos que tienen los siguientes angulos 20:
imagen5
Angulo 20 (°)
21
o CD
22
776
24
CO CD CO
25
743
26
305
28
741
31
393
32
CD O CO
33
CO o
33
CD CO LD
36
371
39
157
41
CO CD
y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
Ademas, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una fase mixta de formas de 5- azacitidina para usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos, en donde la fase mixta de formas de 55 azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que tiene los siguientes angulos 20:
imagen6
5
10
15
20
25
La invencion tambien esta dirigida a una composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de 5- azacitidina para usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos, donde la forma cristalina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprenden picos que tienen los siguientes angulos 20:
imagen7
y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
La invencion tambien se refiere ademas a una composicion farmaceutica que comprende una 5-azacitidina solida amorfa para usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos, donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
Se ha encontrado inesperadamente que la 5-azacitidina existe en al menos ocho formas cristalinas polimorfas y pseudopolimorfas diferentes (formas I-VIII), ademas de en una forma amorfa. La forma I es un polimorfo encontrado en muestras del principio activo 5-azacitidina retenidas de la tecnica anterior. La forma II es un polimorfo encontrado en algunas de muestras del principio activo 5-azacitidina retenidas de la tecnica anterior; en esas muestras, la forma II se encuentra siempre en una fase mixta con la forma I. La forma III es un hidrato y se forma cuando las muestras retenidas de la tecnica anterior y las actuales de medicamento se reconstituyen con agua para formar una "suspension" antes de la administracion al paciente. La forma VI se encuentra en muestras retenidas de la tecnica anterior del medicamento de 5-azacitidina, sustancialmente exenta de otros polimorfos, o en fase mixta con la forma I.
La descripcion proporciona nuevas formas cristalinas denominadas forma IV, forma V, forma VII y forma VIII. Todas las formas I-VIII tienen patrones de difraccion de rayos X de polvo (XRPD) caractensticos y se distinguen facilmente entre sf usando la XRPD.
Tambien se incluyen en la descripcion metodos para sintetizar de forma consistente y reproducible el principio activo 5-azacitidina sustancialmente como forma IV, forma V o forma VIII. Tambien se proporcionan metodos para sintetizar de forma consistente y reproducible una fase mixta de forma I/VII. La invencion tambien proporciona composiciones farmaceuticas que comprenden diferentes formas de 5-azacitidina junto con uno o mas excipientes, diluyentes o vehmulos farmaceuticamente aceptables.
Breve descripcion de los dibujos
La figura 1 presenta el patron de difraccion de rayos X de polvo (XRPD) de la 5-azacitidina, forma I, marcado con los angulos 20 mas destacados (radiacion Ka de Cu).
La figura 2 presenta el patron de XRPD de la 5-azacitidina, fase mixta de forma I y forma II, marcado con los angulos 5 20 mas destacados (radiacion Ka de Cu).
La figura 3 presenta el patron de XRPD de la 5-azacitidina, forma III, marcado con los angulos 20 mas destacados (radiacion Ka de Cu).
La figura 4 presenta el patron de XRPD de la 5-azacitidina, forma IV, marcado con los angulos 20 mas destacados (radiacion Ka de Cu).
10 La figura 5 presenta el patron de XRPD de la 5-azacitidina, forma V, marcado con los angulos 20 mas destacados (radiacion Ka de Cu).
La figura 6 presenta el patron de XRPD de la 5-azacitidina, forma VI, marcado con los angulos 20 mas destacados (radiacion Ka de Cu).
La figura 7 presenta el patron de XRPD de la 5-azacitidina, fase mixta de forma I y forma VII, marcado con los 15 angulos 20 mas destacados (radiacion Ka de Cu).
La figura 8 presenta el patron de XRPD de la 5-azacitidina, forma VIII, marcado con los angulos 20 mas destacados (radiacion Ka de Cu).
Descripcion detallada
La invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de 5-azacitidina para 20 usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos, donde la forma cristalina de 5-azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprenden picos que tienen los siguientes angulos 20:
Angulo 20 (°)
6,
566
11
CD OO CO
13
O OO CD
15
138
17
CD ■sr
20
762
21
o CD
22
776
24
CO CD CO
25
743
26
305
28
741
31
393
32
CD O OO
33
CO o
33
CD CO LD
36
371
39
157
41
CO CD
Tambien se refiere a la composicion farmaceutica, en la que la forma cristalina de 5-azacitidina se caracteriza por un patron de difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu) sustancialmente segun la Figura 3; opcionalmente en donde la forma cristalina de 5-azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo 5 (radiacion Ka de Cu), que comprende picos que tienen los siguientes angulos 20, distancias d e intensidades relativas:
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
6,566
13,450 32,9
11,983
7,380 52,5
13,089
6,758 71,0
15,138
5,848 38,9
17,446
5,079 48,2
20,762
4,275 10,8
21,049
4,147 34,8
22,776
3,901 89,5
24,363
3,651 13,7
25,743
3,458 22,8
26,305
3,385 39,9
28,741
3,104 100,0
31,393
2,847 22,5
32,806
2,728 11,8
33,043
2,709 10,1
33,536
2,670 15,1
36,371
2,468 11,0
39,157
2,299 19,3
41,643
2,167 12,1
Una realizacion de la invencion es la composicion farmaceutica antes mencionada, en la que la forma cristalina de 5- azacitidina es un monohidrato preparado segun un metodo que comprende:
10 poner en contacto una forma cristalina de 5-azacitidina con agua; y
aislar la forma cristalina de 5-azacitidina; opcionalmente en donde la forma cristalina de 5-azacitidina usada en la preparacion de la forma cristalina de 5-azacitidina segun las reivindicaciones 1 a 3 es la Forma I, Forma II, Forma IV, Forma V, Forma VI, Forma VII o Forma VIII de 5-azacitidina o una mezcla de dos o mas de las mismas.
Ademas, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una fase mixta de formas de 515 azacitidina para usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos, en donde la fase mixta de formas de 5- azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que tiene los siguientes angulos 20:
imagen8
imagen9
y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
La invencion tambien se refiere a la composicion farmaceutica, en la que la fase mixta de formas de 5-azacitidina se caracteriza por un patron de difraccion de rayos X de polvo sustancialmente segun la Figura 2; opcionalmente en 5 donde la fase mixta de formas de 5-azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprende picos que tienen los siguientes angulos 20, distancias d e intensidades relativas:
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
12,244
7,223 34,8
13,082
6,762 37,0
13,458
6,574 29,2
14,452
6,124 25,4
16,521
5,361 19,0
17,648
5,022 12,1
18,677
4,747 12,7
19,093
4,645 41,3
20,231
4,386 42,1
21,353
4,158 15,5
22,309
3,982 35,1
23,070
3,852 100,0
23,909
3,719 18,9
26,641
3,343 18,2
26,813
3,322 12,6
27,158
3,281 46,0
29,309
3,045 27,3
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
29,609
3,015 12,7
30,384
2,939 10,5
32,074
2,788 12,0
La invencion tambien se dirige a una composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de 5-azacitidina para usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos, donde la forma cristalina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprenden picos que tienen los 5 siguientes angulos 20:
imagen10
y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
La invencion tambien se dirige a la composicion farmaceutica, en la que la forma cristalina de 5-azacitidina se 10 caracteriza por un patron de difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu) sustancialmente segun la Figura 6; opcionalmente en donde la forma cristalina de 5-azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprende picos que tienen los siguientes angulos 20, distancias d e intensidades relativas:
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
12,533
7,057 10,1
12,963
6,824 10,2
13,801
6,411 100,0
18,929
4,6843 10,0
20,920
4,243 34,2
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
21,108
4,205 49,4
21,527
4,125 47,0
22,623
3,922 10,7
22,970
3,869 13,8
24,054
3,697 77,8
26,668
3,340 23,0
27,210
3,275 33,7
28,519
3,127 12,9
29,548
3,021 27,2
30,458
2,932 50,3
33,810
2,649 11,6
35,079
2,556 12,6
37,528
2,411 24,7
La invencion tambien se refiere a la composicion farmaceutica, en la que la forma cristalina de 5-azacitidina se prepara segun un metodo que comprende:
liofilizar una disolucion de 5-azacitidina y manitol; y
5 aislar el solido liofilizado; opcionalmente en donde la disolucion de 5-azacitidina y manitol comprende 5-azacitidina y manitol en una relacion de aproximadamente 1:1 en peso.
Ademas, la invencion tambien se refiere a una composicion farmaceutica que comprende un solido amorfo de 5- azacitidina para usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos,
en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
10 Tambien se refiere a esta composicion farmaceutica, donde el solido amorfo de 5-azacitidina se prepara mediante un metodo que comprende:
anadir una forma cristalina de 5-azacitidina, que se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu) que tiene los siguientes angulos 20:
imagen11
5
10
15
20
25
Angulo 20 (°) 30,369 32,072
a un disolvente seleccionado del grupo que consiste en propilengMcol, polietilenglicol y DMSO; permitir que se alcance el equilibrio, y recuperar la 5-azacitidina del mismo.
Una realizacion de la invencion se dirige a cada una de las composiciones farmaceuticas antes mencionadas, en donde la composicion farmaceutica comprende ademas un excipiente, diluyente o vehmulo farmaceuticamente aceptable, o en donde la composicion farmaceutica esta preparada en forma de dosis unica, opcionalmente en donde cada unidad de dosificacion contiene de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 200 mg de la forma de 5-azacitidina, preferiblemente aproximadamente 100 mg de la forma 5-azacitidina.
Formas cristalinas I-VIII de la 5-azacitidina
Se ha descubierto que la 5-azacitidina existe en al menos ocho formas cristalinas polimorfas y pseudomorfas diferentes, y tambien en una forma amorfa.
Forma I
Se sintetizo una sola muestra del principio activo 5-azacitidina a partir de 5-azacitosina y 1,2,3,5-tetra-O-acetil-l3-D- ribofuranosa de acuerdo con el metodo de la tecnica anterior proporcionado en el ejemplo 1. La ultima etapa de este metodo es una recristalizacion del producto de smtesis bruto en un sistema de codisolventes de DMSO/metanol. Espedficamente, el producto de smtesis bruto se disuelve en DMSO (previamente calentado a aproximadamente 90°C), y despues se anade metanol a la disolucion de DMSO. La mezcla de codisolventes se equilibra a aproximadamente -20°C para permitir la formacion de cristal de 5-azacitidina. El producto se recoge por filtracion con vacm y se deja secar al aire.
El patron de difraccion de rayos X de polvo (XRPD; vease el ejemplo 5) de la 5-azacitidina resultante se muestra en la figura 1, junto con algunos de los valores de 20. La tabla 1 proporciona los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas para este material, que se designa como la forma I.
Tabla 1: Forma I de la 5-azacitidina - los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas (radiacion Ka de Cu).
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
12,182
7,260 39,1
13,024
6,792 44,1
14,399
6,146 31,5
16,470
5,378 27,1
18,627
4,760 16,0
19,049
4,655 35,9
20,182
4,396 37,0
21,329
4,162 12,4
23,033
3,858 100,0
23,872
3,724 28,0
26,863
3,316 10,8
27,135
3,284 51,5
29,277
3,048 25,6
29,591
3,016 11,5
30,369
2,941 10,8
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
32,072
2,788 13,4
El analisis termico de la forma I indica que esta forma de 5-azacitidina es anhidra. Vease el ejemplo 6.
Forma II
Las muestras retenidas del principio activo usado previamente para la formulacion del medicamento en las 5 investigaciones del Grupo B de Cancer y Leucemia (CALGB) patrocinadas por el NCI (ensayo en fase 2 8291 y ensayo en fase 3 9221) para el tratamiento del MDS (Investigational New Drug (IND) 7574), tambien se analizaron por XRPD. Las muestras de principio activo retenidas comprendfan la forma I, o una fase mixta de forma I y otro polimorfo; la forma II. Vease el ejemplo 5.
El patron de XRPD de polvo de la fase mixta de formas I y II se muestra en la figura 2 junto con algunos de los 10 valores de 20. Los picos caractensticos de la forma II se observan a 20 de 13,5, 17,6 y 22,3°. La tabla 2 proporciona los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas para esta fase mixta.
Tabla 2: 5-azacitidina, fase mixta de formas I y II - los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas (radiacion Ka de Cu).
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
12,244
7,223 34,8
13,082
6,762 37,0
13,458*
6,574 29,2
14,452
6,124 25,4
16,521
5,361 19,0
17,648*
5,022 12,1
18,677
4,747 12,7
19,093
4,645 41,3
20,231
4,386 42,1
21,353
4,158 15,5
22,309*
3,982 35,1
23,070
3,852 100,0
23,909
3,719 18,9
26,641
3,343 18,2
26,813
3,322 12,6
27,158
3,281 46,0
29,309
3,045 27,3
29,609
3,015 12,7
30,384
2,939 10,5
32,074
2,788 12,0
15 Estos resultados indican que los procedimientos de smtesis de 5-azacitidina de la tecnica anterior para el principio activo producen la forma I sustancialmente exenta de otras formas, o una fase mixta de forma I/II, es decir, un material solido en el que la 5-azacitidina esta presente en una fase mixta de tanto la forma I como la forma II.
El analisis termico de la fase mixta de forma I/II se presenta en el ejemplo 6.
Forma III
20 Se encuentra una forma cristalina adicional de la 5-azacitidina, designada forma III, en suspensiones de 513
azacitidina. Vease el ejemplo 8. Ademas, se ha encontrado que todas las formas de 5-azacitidina (incluyendo la 5- azacitidina en el medicamento de la tecnica anterior) se convierten en la forma III en agua. Vease el ejemplo 8. Por lo tanto, la reconstitucion del medicamento usado en los ensayos del NCI mencionados anteriormente habnan conducido a la formacion de una disolucion saturada (o "suspension") en la que la 5-azacitidina solida que quedaba 5 era la forma III. El patron de XRPD de polvo de la forma III se muestra en la figura 3 junto con algunos de los valores de 20. La tabla 3 proporciona los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas para este material cristalino. El patron de XRPD de polvo de la forma III es claramente diferente del de todas las otras formas de la 5-azacitidina.
Tabla 3: 5-azacitidina, forma III - los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas (radiacion Ka 10 de Cu).
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
6,566
13,450 32,9
11,983
7,380 52,5
13,089
6,758 71,0
15,138
5,848 38,9
17,446
5,079 48,2
20,762
4,275 10,8
21,049
4,147 34,8
22,776
3,901 89,5
24,363
3,651 13,7
25,743
3,458 22,8
26,305
3,385 39,9
28,741
3,104 100,0
31,393
2,847 22,5
32,806
2,728 11,8
33,043
2,709 10,1
33,536
2,670 15,1
36,371
2,468 11,0
39,157
2,299 19,3
41,643
2,167 12,1
El analisis termico y la espectroscopfa de RMN de proton (1H) indican que la forma III es una forma pseudopolimorfa de la 5-azacitidina, espedficamente un monohidrato. Veanse los ejemplos 6-7.
Forma IV
15 La forma IV es una forma cristalina de la 5-azacitidina. La forma IV se recupero por recristalizacion lenta en un sistema de codisolventes de DMSO/tolueno (vease el ejemplo 2) o por recristalizacion rapida en el sistema de codisolventes de DMSO/cloroformo (vease el ejemplo 3). El patron de XRPD de polvo de la forma IV se muestra en la figura 4 junto con algunos de los valores de 20. La tabla 4 proporciona los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas para este material cristalino. El patron de XRPD de polvo de la forma IV es claramente 20 diferente del de cualquier otra forma.
Tabla 4: 5-azacitidina, forma IV - los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas (radiacion Ka de Cu).
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
5,704
15,408 24,9
11,571
7,642 97,8
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
12,563
7,040 22,2
14,070
6,289 100,0
15,943
5,555 67,4
16,993
5,213 51,0
18,066
4,906 20,1
20,377
4,355 44,7
20,729
4,281 49,0
21,484
4,132 36,30
21,803
4,073 11,2
22,452
3,957 66,7
22,709
3,913 64,0
23,646
3,760 17,3
24,068
3,695 19,4
25,346
3,526 12,0
25,346
3,511 12,5
26,900
3,312 11,0
27,991
3,185 11,4
28,527
3,126 25,7
28,723
3,106 34,1
30,124
2,964 14,7
30,673
2,912 53,6
31,059
2,877 15,7
35,059
2,557 18,1
38,195
2,354 15,0
38,403
2,342 12,6
El analisis termico de la forma IV se presenta en el ejemplo 6.
Forma V
La forma V es una forma cristalina de la 5-azacitidina. La forma V se recupero por recristalizacion rapida de la 55 azacitidina en el sistema de codisolventes de DMSO/tolueno (vease el ejemplo 3). El patron de XRPD de polvo de la forma V se muestra en la figura 5 junto con algunos de los valores de 20. La tabla 5 proporciona los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas para este material cristalino. El patron de XRPD de polvo de la forma V es claramente diferente del de cualquier otra forma.
Tabla 5: 5-azacitidina, forma V - los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas (radiacion Ka 10 de Cu).
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
11,018
8,024 40,0
12,351
7,160 29,6
13,176
6,714 28,3
13,747
6,436 42,9
14,548
6,084 18,3
15,542
5,697 14,2
16,556
5,350 47,8
17,978
4,930 18,1
18,549
4,780 83,9
19,202
4,618 25,0
19,819
4,476 12,1
20,329
4,365 28,6
21,518
4,126 100,0
21,970
4,042 65,6
22,521
3,948 11,5
23,179
3,834 66,5
24,018
3,702 13,0
24,569
3,620 40,7
27,224
3,273 50,2
28,469
3,133 24,2
29,041
3,072 24,8
29,429
3,033 15,0
30,924
2,889 15,6
31,133
2,870 22,6
37,938
2,370 10,7
El analisis termico indica que la forma V es un solvato. Vease el ejemplo 6.
Forma VI
El medicamento usado en la investigacion del NCI mencionada antes se preparo tipicamente por liofilizacion de una 5 disolucion de 5-azacitidina y manitol (1:1 p/p). El medicamento resultante comprendfa 100 mg de 5-azacitidina y 100 mg de manitol como una torta liofilizada en un vial y se administro por inyeccion subcutanea como una suspension acuosa ("suspension"). El analisis de XRPD de las muestras retenidas del medicamento usado en la investigacion del NCI, puso de manifiesto la existencia de otro polimorfo, la forma VI. Las muestras de medicamento retenidas comprendfan la forma VI sola, o una fase mixta de forma I/VI. La tabla 6 proporciona los angulos 20 mas 10 destacados, distancias d e intensidades relativas para la forma VI.
Tabla 6: 5-azacitidina, forma VI - los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas (radiacion Ka de Cu).
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
12,533
7,057 10,1
12,963
6,824 10,2
13,801
6,411 100,0
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
18,929
4,6843 10,0
20,920
4,243 34,2
21,108
4,205 49,4
21,527
4,125 47,0
22,623
3,922 10,7
22,970
3,869 13,8
24,054
3,697 77,8
26,668
3,340 23,0
27,210
3,275 33,7
28,519
3,127 12,9
29,548
3,021 27,2
30,458
2,932 50,3
33,810
2,649 11,6
35,079
2,556 12,6
37,528
2,411 24,7
El analisis termico y la espectroscopfa de RMN de proton (1H) de la forma VI se presentan en los ejemplos 6-7.
Forma VII.
La forma VII es una forma cristalina de la 5-azacitidina. La forma VII se produjo por recristalizacion rapida en un 5 sistema de codisolventes de DMSO/metanol (vease el ejemplo 3). La forma VII se aislaba siempre por este metodo de recristalizacion como una fase mixta con la forma I. El patron de XRPD de polvo de la fase mixta de formas forma I y VII se muestra en la figura 7 junto con algunos de los valores de 20 y los picos caractensticos de la forma VII indicados con asteriscos. La tabla 7 proporciona los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas para esta fase mixta. La forma VII presenta picos caractensticos a 20 de 5,8, 11,5, 12,8, 22,4 y 26,6° 10 ademas de los picos presentados en el patron de XRPD de polvo de la forma I. El patron de XRPD de de la fase mixta de las formas I y VII es claramente diferente del de cualquier otra forma.
Tabla 7: 5-azacitidina, fase mixta de las formas I y VII - los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas (radiacion Ka de Cu).
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
5,779
15,281 14,7
11,537
7,664 8,3
12,208
7,244 28,0
12,759
6,932 21,7
13,048
6,780 34,4
14,418
6,138 22,5
16,489
5,372 21,6
18,649
4,754 13,5
19,101
4,643 34,7
20,200
4,392 34,4
20,769
4,273 10,5
21,355
4,157 11,7
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
22,365
3,972 29,9
23,049
3,856 100,0
23,884
3,723 23,1
26,628
3,345 13,3
27,145
3,282 52,9
29,296
3,046 26,2
29,582
3,017 11,3
32,078
2,788 12,9
El analisis termico de la forma VII se presenta en el ejemplo 6.
Forma VIII
La forma VIII es una forma cristalina de la 5-azacitidina. La forma VIII se recupero por recristalizacion de la forma I 5 de la 5-azacitidina en un sistema de un solo disolvente N-metil-2-pirrolidona (NMP) (vease el ejemplo 4). El patron de XRPD de polvo de la forma VIII se muestra en la figura 8 junto con algunos de los valores de 20. La tabla 8 proporciona los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas para este material. El patron de XRPD para la forma VIII es claramente diferente del de cualquier otra forma.
Tabla 8: 5-azacitidina, forma VIII - los angulos 20 mas destacados, distancias d e intensidades relativas (radiacion 10 Ka de Cu).
Angulo 20 (°)
distancia d (A) Intensidad relativa
6,599
13,384 2,9
10,660
8,292 2,2
12,600
7,020 23,4
13,358
6,623 2,6
15,849
5,587 2,0
17,275
5,129 4,2
20,243
4,383 5,8
20,851
4,257 7,8
21,770
4,079 74,4
22,649
3,923 32,1
25,554
3,483 100,0
25,740
3,458 7,8
29,293
3,046 3,8
32,148
2,782 8,8
35,074
2,556 7,4
38,306
2,348 2,5
5-Azacitidina amorfa
La 5-azacitidina amorfa se puede recuperar de disoluciones saturadas en equilibrio de 5-azacitidina en propilenglicol, polietilenglicol y DMSO. Vease el ejemplo 8.
15 Formulaciones farmaceuticas
Para la administracion mas eficaz del principio activo de la presente invencion, se prefiere preparar una formulacion
18
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
farmaceutica (tambien conocida como "medicamento") preferiblemente en forma de dosis unitaria, que comprende una o mas de las formas de 5-azacitidina de la presente invencion y uno o mas vetuculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables.
Dicha formulacion farmaceutica puede incluir, sin estar limitada por las ensenanzas expuestas en la presente memoria, una forma solida de la presente invencion que se mezcla con al menos un excipiente farmaceuticamente aceptable, se diluye mediante un excipiente o se encierra dentro de dicho vetuculo que puede estar en forma de una capsula, sobre, comprimido, comprimido bucal, pastilla, papel, u otro contenedor. Cuando el excipiente sirve como diluyente, puede ser un material solido, semisolido o lfquido que actua como un vetuculo, soporte o medio para el o los polimorfos de 5-azacitidina. Por lo tanto, las formulaciones pueden estar en forma de comprimidos, pfldoras, polvos, elixires, suspensiones, emulsiones, disoluciones, jarabes, capsulas (tales como, por ejemplo, capsulas de gelatina blandas y duras), supositorios, disoluciones inyectables esteriles y polvos envasados esteriles.
Los ejemplos de excipientes adecuados incluyen, pero no se limitan a almidones, goma arabiga, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe y metilcelulosa. Las formulaciones pueden incluir adicionalmente agentes lubricantes tales como, por ejemplo, talco, estearato magnesico y aceite mineral; agentes humectantes; agentes emulsionantes y de suspension; agentes conservantes tales como hidroxibenzoatos de metilo y propilo; agentes edulcorantes; o agentes de sabor. Tambien se pueden usar polioles, tampones y cargas inertes. Los ejemplos de polioles incluyen, pero no se limitan a: manitol, sorbitol, xilitol, sacarosa, maltosa, glucosa, lactosa, dextrosa y similares. Los tampones adecuados abarcan, pero no se limitan a fosfato, citrato, tartrato, succinato y similares. Otras cargas inertes que se pueden usar abarcan las que son conocidas en la tecnica y son utiles en la fabricacion de diferentes formas farmaceuticas. Si se desea, las composiciones farmaceuticas solidas pueden incluir otros componentes tales como agentes de carga y/o agentes de granulacion, y similares. Las composiciones de la invencion se puede formular para asf proporcionar liberacion rapida, sostenida, controlada o retardada del principio activo despues de administrar al paciente usando procedimientos bien conocidos en la tecnica.
En algunas realizaciones de la invencion, la(s) forma(s) de 5-azacitidina se puede(n) hacer en forma de unidades de dosificacion para la administracion oral. La(s) forma(s) de 5-azacitidina se puede mezclar con un vetuculo solido, pulverulento tal como, por ejemplo, lactosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidon, amilopectina, derivados de celulosa o gelatina, asf como con un agente antifriccion tal como por ejemplo, estearato de magnesio, estearato de calcio y ceras de polietilenglicol. Despues la mezcla se comprime en comprimidos o se carga en capsulas. Si se desean comprimidos, capsulas o Pulvules recubiertos, dichos comprimidos, capsulas o Pulvules se pueden recubrir con una disolucion concentrada de azucar, que puede contener goma arabiga, gelatina, talco, dioxido de titanio, o con una laca disuelta en disolvente organico volatil o mezcla de disolventes. A este recubrimiento se le pueden anadir diferentes colorantes con el fin de distinguir entre comprimidos con diferentes compuestos activos o con diferentes cantidades del presente compuesto activo.
Se puede preparar capsulas de gelatina blanda en las que las capsulas contienen una mezcla de la(s) forma(s) de 5- azacitidina y aceite vegetal o materiales no acuosos, miscibles con agua tales como, por ejemplo, polietilenglicol y similares. Las capsulas de gelatina dura pueden contener granulos o polvo del polimorfo de 5-azacitidina en combinacion con un vetuculo solido, pulverulento, tal como, por ejemplo, lactosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidon de patata, almidon de mafz, amilopectina, derivados de celulosa o gelatina.
Los comprimidos para uso oral se preparan tfpicamente de la siguiente forma, aunque se pueden usar otras tecnicas. Las sustancias solidas se trituran suavemente o tamizan a un tamano de partfcuias deseado, y se homogeneiza y suspende un agente aglutinante en un disolvente adecuado. Se mezclan la(s) forma(s) de 5- azacitidina y agentes auxiliares con la disolucion de agente aglutinante. La mezcla resultante se humedece para formar una suspension uniforme. El humedecimiento tfpicamente hace que las partfculas se agreguen ligeramente, y la masa resultante se comprime con cuidado a traves de un tamiz de acero inoxidable que tiene un tamano deseado. Las capas de la mezcla despues se secan en unidades de secado controladas durante un periodo de tiempo predeterminado para lograr un tamano de partfculas y consistencia deseados. Los granulos de la mezcla secos se tamizan con cuidado para eliminar cualquier polvo. A esta mezcla se anaden agentes disgregantes, antifriccion y antiadherentes. Finalmente, la mezcla se comprime en comprimidos usando una maquina con los punzones y matrices adecuadas para obtener el tamano de comprimido deseado.
En el caso de que las formulaciones anteriores sean para usar para la administracion parenteral, dicha formulacion tfpicamente comprende disoluciones para inyeccion acuosas y no acuosas, esteriles, que comprenden una o mas formas de 5-azacitidina, para las cuales las preparaciones son preferiblemente isotonicas con la sangre del receptor previsto. Estas preparaciones pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos y soluto; que hacen a la formulacion isotonica con la sangre del receptor previsto. Las suspensiones acuosas y no acuosos pueden incluir agentes de suspension y agentes espesantes. Las formulaciones pueden estar presentes en envases de dosis unitarias o de multiples dosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados. Las disoluciones y suspensiones para inyeccion extemporanea se pueden preparar a partir de polvos esteriles, granulos y comprimidos del tipo descrito previamente.
Las preparaciones lfquidas para administracion oral se preparan en forma de disoluciones, jarabes o suspensiones, conteniendo las dos ultimas formas, por ejemplo, polimorfo(s) de 5-azacitidina, azucar y una mezcla de etanol, agua,
5
10
15
20
25
30
35
Como tales, las formulaciones farmaceuticas de la presente invencion se preparan preferiblemente en una forma farmaceutica unitaria, conteniendo cada unidad de dosificacion de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 200 mg, mas habitualmente aproximadamente 100 mg de la forma o formas de 5-azacitidina. En forma lfquida, la unidad de dosificacion contiene de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 200 mg, mas habitualmente aproximadamente 100 mg de la forma o formas de 5-azacitidina. La expresion "forma farmaceutica unitaria" se refiere a unidades ffsicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para sujetos/pacientes humanos y otros mairnferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada del polimorfo de 5-azacitidina calculada para producir el efecto terapeutico deseado, preferiblemente asociado con al menos un vehnculo, diluyente o excipiente farmaceuticamente aceptable.
Los siguientes ejemplos se proporcionan solo con fines ilustrativos, y no deben considerarse como limitantes del alcance de las reivindicaciones de ninguna forma.
Ejemplos
Ejemplo 1: Procedimiento de la tecnica anterior para la sintesis del principio activo 5-azacitidina
Usando 5-azacitosina (1) y 1,2,3,5-tetra-O-l3-acetil-ribofuranosa (2) (RTA) disponibles en el comercio, se puede sintetizar la 5-azacitidina (3) de acuerdo con la siguiente ruta.
imagen12
El producto de sintesis bruto se disuelve en DMSO (previamente calentado a aproximadamente 90°C) y despues se anade metanol a la disolucion de DMSO. La mezcla de codisolventes se equilibra a aproximadamente -20°C para permitir la formacion de cristales de 5-azacitidina. El producto se recoge por filtracion con vado y se deja secar al aire.
Ejemplo 2: Recristalizacion lenta en DMSO/tolueno
Se uso dimetilsulfoxido (DMSO) como el disolvente principal para solubilizar la forma I de 5-azacitidina y se uso tolueno como el codisolvente como sigue. Se disolvieron aproximadamente 250 mg de 5-azacitidina con aproximadamente 5 ml de DMSO, previamente calentado a aproximadamente 90°C, en vasos de precipitados de 100 ml separados. Los solidos se dejaron disolver hasta una disolucion transparente. Se anadieron a la disolucion 45 ml de tolueno, previamente calentado a aproximadamente 50°C, y la disolucion resultante se mezclo. La disolucion se cubrio y se dejo equilibrar en condiciones ambiente. El producto se recogio por filtracion con vacfo en forma de cristales blancos usando un embudo Buchner. El producto recogido se dejo secar al aire.
Ejemplo 3: Recristalizacion rapida en DMSO/metanol, DMSO/tolueno y DMSO/cloroformo
Se disolvieron aproximadamente 250 mg de 5-azacitidina con aproximadamente 5 ml de DMSO como el disolvente principal, previamente calentado a aproximadamente 90°C, en vasos de precipitados de 100 ml separados. Los solidos se dejaron disolver hasta una disolucion transparente. Se anadieron aproximadamente 45 ml del codisolvente seleccionado (metanol, tolueno o cloroformo), previamente calentado a aproximadamente 50°C, a la disolucion y la disolucion resultante se mezclo. La disolucion se cubrio y se puso en un congelador para equilibrar a aproximadamente -20°C para permitir la formacion de cristales. Se retiraron las disoluciones del congelador despues de la formacion de cristales.
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El producto de las disoluciones de metanol y tolueno se recogio por filtracion con vado usando un embudo Buchner. El producto cristalino blanco resultante se dejo secar al aire.
El producto en cloroformo era demasiado fino para ser recogido por filtracion con vado. La mayor parte del disolvente se decanto con cuidado de la disolucion de cloroformo y el disolvente de la suspension resultante se dejo evaporar a temperature ambiente hasta sequedad. La disolucion de cloroformo se evaporo hasta un producto blanco. Observese que la recristalizacion rapida usando el sistema de codisolvente de DMSO/metanol se ha usado tipicamente para preparar el principio activo 5-azacitidina en la tecnica anterior (vease la ultima etapa del procedimiento proporcionado en el ejemplo 1).
Ejemplo 4: Recristalizacion rapida en el sistema del disolvente unico N-metil-2-pirrolidona (NMP)
Se disolvieron aproximadamente 500 mg de 5-azacitidina con aproximadamente 5 ml de NMP, previamente calentada a aproximadamente 90°C, en vasos de precipitados de 50 ml separados. Los solidos se dejaron disolver hasta una disolucion transparente. La disolucion se cubrio y se puso en un congelador para equilibrar a aproximadamente -20°C para permitir la formacion de cristales. Se retiraron las disoluciones del congelador despues de la formacion de cristales, se equilibraron a temperatura ambiente. El producto se recogio por filtracion con vado usando un embudo Buchner. El producto recogido se dejo secar al aire.
Ejemplo 5: Difraccion de rayos X de polvo de 5-azacitidina
Se obtuvieron patrones de difraccion de rayos X de polvo de cada muestra en un difractometro Scintag XDS 2000 o un Scintag X2 0/0 que trabaja con radiacion de cobre a 45 kV y 40 mA usando un detector de silicio enfriado Kevex Psi Peltier o un detector de estado solido enfriado Thermo ARL Peltier. Se usaron rendijas de la fuente de 2 o 4 mm y rendijas del detector de 0,5 o 0,3 mm para la recogida de datos. El material recristalizado se molio con cuidado usando un mortero y mano de mortero de agata durante aproximadamente 1 min. Las muestras se pusieron en un soporte de muestra de acero inoxidable o silicio y se nivelaron usando un portaobjetos de vidrio. Los patrones de difraccion de polvo de las muestras se obtuvieron en 20 de 2 a 42° a 1°/minuto. La calibracion del difractometro X2 se verifica anualmente usando un patron de polvo de silicio. Los ficheros de datos originales se convirtieron a formato ASCII, se transfirieron a un ordenador compatible IBM y se presentaron en Origin® 6.1 para Windows.
La XRPD de una sola muestra de 5-azacitidina producida de acuerdo con el metodo del ejemplo 1 puso de manifiesto que esta muestra consistfa en la forma I de la 5-azacitidina.
Las muestras de principio activo retenidas para el NCI tambien se analizaron. Estas muestras se sintetizaron todas y recristalizaron previamente de acuerdo con el metodo del ejemplo 1 y se almacenaron a 5°C desde la produccion. La XRPD puso de manifiesto que algunas de las muestras retenidas estan compuestas solo de la forma I, mientras que otras muestras retenidas contienen una fase mixta de forma I y un polimorfo diferente, denominado forma II.
La XRPD de las muestras de principio activo retenidas para el NCI pusieron de manifiesto la existencia de la forma VI en algunas muestras. En esas muestras, la forma VI estaba presente como una fase mixta con la forma I.
La XRPD de la 5-azacitidina recristalizada obtenida en el ejemplo 2 puso de manifiesto que la recristalizacion lenta en el sistema de DMSO/tolueno produda la forma IV. La XRPD de la 5-azacitidina recristalizada obtenida en el ejemplo 3 puso de manifiesto que la recristalizacion rapida en un sistema de DMSO/cloroformo produda la forma IV, la recristalizacion rapida en un sistema de DMSO/tolueno produda la forma V y la recristalizacion rapida en un sistema de DMSO/metanol produda la fase mixta de forma I/forma VII. La XRPD de la 5-azacitidina recristalizada obtenida en el ejemplo 4 puso de manifiesto que el sistema de disolvente N-metil-2-pirrolidona produda la forma VIII.
Ejemplo 6: Analisis termico de la 5-azacitidina
Las mediciones de calorimetna diferencial de barrido (DSC) para cada muestra se recogieron usando un sistema de DSC Perkin Elmer Pyris 1 equipado con una unidad de refrigeracion Intracooler 2P. El DSC Pyris 1 se purgo con nitrogeno. La calibracion se realizo antes del analisis usando un patron de indio a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto. Se molio cada muestra con cuidado en un mortero y mano de mortero de agata. Se cerraron hermeticamente aproximadamente 1-3 mg de la muestra individualmente en un crisol de aluminio universal de 30 pl Perkin Elmer con agujeros en la tapa. Las muestras se calentaron de 25°C a 250°C o 350°C a 10°C/minuto.
Las mediciones del analisis termogravimetrico (TGA) para cada muestra se recogieron usando un aparato Perkin Elmer TGA 7 purgado con nitrogeno a aproximadamente 20 cc/minuto. Se usaron un peso de referencia de 100 mg y rnquel metal para verificar el equilibrio y calibraciones de temperatura, respectivamente. Las muestras se calentaron de 25°C a 250°C o 300°C a 10°C/minuto.
Las mediciones del punto de fusion (PF) con capilar se hicieron usando un aparato de punto de fusion Electrothermal 9300. Se uso una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto a partir de temperaturas de punto de ajuste descritas en las descripciones individuales. Los puntos de fusion visuales se dan como una media de determinaciones por triplicado.
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Los resultados son los siguientes:
Forma I
La TGA mostro una perdida de peso de 0,23% entre la temperatura ambiente y 150°C, lo que indica que es anhidra. La DSC presentaba un solo suceso con un inicio a 227,0°C.
La determinacion de punto de fusion con capilar se llevo a cabo por triplicado en una muestra de la forma I de 5- azacitidina. Se observo visualmente que la muestra se descompoma sin fundir a aproximadamente 215°C usando una velocidad de calentamiento de 10°C y una temperatura de inicio de 200°C. Por lo tanto, el suceso de la DSC es resultado de la descomposicion de la 5-azacitidina.
Fase mixta de forma I/II
El TGA de la fase mixta de forma I/II mostro una perdida de peso de 1,16% entre la temperatura ambiente y 150°C. El analisis de DSC presentaba un solo suceso con un inicio a 229,8°C. La descomposicion de la fase mixta estaba de acuerdo con la observada para la forma I de la 5-azacitidina.
Forma III
El TGA mostro una perdida de peso entre 6,56% y 8,44% cuando la temperatura se elevo de temperatura ambiente a 150°C. La perdida esta cerca de la cantidad teorica de humedad, 6,9%, que tendna la 5-azacitidina monohidrato. El analisis de DSC presentaba una endoterma, que esta en el intervalo asociado con la perdida de disolvente, y un suceso a mayor temperatura. La endoterma presentaba una temperatura de inicio en el intervalo de 86,4-89,2°C, temperaturas maximas en el intervalo de 95,8-97,0°C y valores de AH en el intervalo de 73,1-100,5 J/g. El suceso de mayor temperatura tema temperaturas de inicio en el intervalo de 229,1-232,1°C y estaba de acuerdo con la descomposicion observada para la forma I de 5-azacitidina.
La forma III de 5-azacitidina se calento a 105°C durante 4 horas en un intento de deshidratar el material. El material no cambio su aspecto ffsico durante el calentamiento. El TGA se uso para medir el contenido de agua de la forma III antes y despues de secado. La cantidad inicial de humedad presente en la forma III era 6,31% y era <0,1% despues de secado. El patron de XRPD de polvo para la forma III deshidratada se corresponde con el de la forma I. Por lo tanto la forma III se deshidrata a la forma I.
Forma IV
El TGA mostro una perdida de peso de 21,80% entre la temperatura ambiente y 150°C, lo cual no se corresponde con el contenido de disolvente para ninguno de los solvatos sencillos. No se sabe si la forma IV cristalina es un polimorfo o un pseudopolimorfo.
El analisis de DSC presentaba dos endotermas y un suceso a mayor temperatura. Las dos endotermas estan en el intervalo que esta asociado con la perdida de disolvente. La primera endoterma presentaba una temperatura de inicio de 87,6°C, una temperatura maxima de 90,1°C y valor de AH de 98,3 J/g. La segunda endoterma presentaba una temperatura de inicio de 136,0°C, una temperatura maxima de 139,0°C y valor de AH de 81,8 J/g. El suceso de mayor temperatura tema una temperatura de inicio de 230,6°C y estaba de acuerdo con la descomposicion que se observaba para la forma I de 5-azacitidina.
Forma V
El TGA mostro una perdida de peso de 21,45% entre la temperatura ambiente y 150°C, lo cual no se corresponde con el contenido de disolvente para ninguno de los solvatos sencillos. El analisis de DSC presentaba dos endotermas asociadas, una endoterma individual y un suceso de mayor temperatura. Las tres endotermas estan en el intervalo que esta asociado con la perdida de disolvente. Las dos endotermas asociadas presentan temperaturas de inicio de 66,6 y 68,0°C. La endoterma individual presentaba una temperatura de inicio de 88,7°C, una temperatura maxima de 121,5°C y un valor de AH de 180,3 J/g. El suceso de temperatura mayor tema una temperatura de inicio de 230,7°C y estaba de acuerdo con la descomposicion que se observaba para la forma I de 5- azacitidina.
Forma VI
El TGA mostro una perdida de peso de 1,10% entre la temperatura ambiente y 150°C. El analisis de DSC presentaba una endoterma pequena, una exoterma y un suceso de mayor temperatura. La endoterma pequena presentaba una temperatura de inicio de 57,8°C, una temperatura maxima de 77,0°C y un valor de AH de 55,7 J/g. La exoterma presentaba una temperatura de inicio de 149,3°C, una temperatura maxima de 157,1°C y un valor de AH de -17,9 J/g. El suceso de temperatura mayor tema una temperatura de inicio de 234,7°C y estaba de acuerdo con la descomposicion que se observaba para la forma I de 5-azacitidina.
El TGA mostro una perdida de peso de 2,45% entre la temperature ambiente y 150°C. El analisis de DSC presentaba una endoterma menor y un suceso de mayor temperature. La endoterma menor terna una temperature de inicio de 63,3°C, una temperature maxima de 68,3°C y un valor de AH de 17,1 J/g. El suceso de mayor temperatura terna una temperatura de inicio de 227,2°C y estaba de acuerdo con la descomposicion que se 5 observaba para la forma I de 5-azacitidina.
Ejemplo 7: Analisis de resonancia magnetica nuclear (RMN) de la forma III y forma VI
Se sabe que la 5-azacitidina es labil en agua. Puesto que la forma III se encuentra en disoluciones saturadas en equilibrio y la forma VI se produce por la liofilizacion de la disolucion de 5-azacitidina, era interesante examinar la pureza de estas formas de 5-azacitidina usando RMN. Los espectros de RMN de proton (1H) de la forma III y forma 10 VI estaban ambos de acuerdo con la estructura de 5-azacitidina en todos los detalles esenciales.
Ejemplo 8: Conversion de la forma polimorfa de la 5-azacitidina
Se anadio la forma I de 5-azacitidina a diferentes disolventes en suficientes cantidades para formar una suspension y la suspension se dejo equilibrar durante un periodo de tiempo. Se recupero el material solido que estaba presente en la suspension, se seco y se analizo usando XRPD (de acuerdo con el protocolo de XRPD incluido en el ejemplo 15 5) con el objetivo de detectar nuevos polimorfos y pseudopolimorfos durante la transicion al estado disuelto. Las
muestras equilibradas durante 19 horas en disolucion salina, dextrosa al 5%, tween 80 al 5%, octanol saturado con agua, etanol/agua (50/50) y agua sola, dieron como resultado una forma claramente diferente de la 5-azacitidina, designada forma III (vease mas adelante). Las muestras equilibradas durante 19 horas en acetona, metiletilcetona y etanol dieron materiales identificados como la forma I. Las muestras equilibradas durante 19 horas en propilenglicol, 20 polietilenglicol y DMSO dieron materiales amorfos. Los resultados se resumen en la tabla 9.
Tabla 9: Resultados del analisis de difraccion de rayos X de polvo para muestras de solubilidad: asignacion de forma (radiacion K de Cu)
Disolvente
Asignacion del patron de XRPD
Disolucion salina
Forma III
Dextrosa al 5%
Forma III
Acetona
Forma I
Propilenglicol
Amorfo
Polietilenglicol
Amorfo
Metiletilcetona
Forma I
Tween 80 al 5%
Forma III
DMSO
Amorfo
Octanol saturado con agua
Forma III
Alcohol etflico
Forma I
EtOH/agua DI 50/50
Forma III
Agua DI
Forma III
Tambien se estudio la conversion de otras formas de 5-azacitidina. Espedficamente, se pesaron una fase mixta de 25 forma I/II, forma VI (el medicamento liofilizado usado en los ensayos de farmaco del NCI de la tecnica anterior), una fase mixta de forma I/VI y una fase mixta de forma I/VII en vasos de precipitados de vidrio pequenos individuales, y se anadio agua mediante pipeta a cada vaso de precipitados. El tamano de la muestra y el volumen de agua estaban ajustados para mantener una relacion aproximada de 25 mg/ml. La suspension resultante se dejo equilibrar durante 15 minutos. Despues de equilibrado, la muestra se filtro y el material solidos se seco y se analizo usando 30 XRPD. En cada caso, se observo la forma III de 5-azacitidina. Los resultados indican que todas las formas de la 5- azacitidia se convierten en la forma III durante la transicion al estado disuelto en agua. Por lo tanto, cuando se administraba una suspension de 5-azacitidina ("suspension") a pacientes en la investigacion del NCI mencionada antes, los pacientes recibfan tanto 5-azacitidina en disolucion como forma III de 5-azacitidina.
Ejemplos
35 Ejemplo 1: Procedimiento de la tecnica anterior para la smtesis del principio activo 5-azacitidina
Usando 5-azacitosina (1) y 1,2,3,5-tetra-O-l3-acetil-ribofuranosa (2) (RTA) comercialmente disponibles, se puede
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sintetizar la 5-azacitidina (3) de acuerdo con la siguiente ruta.
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El producto de smtesis bruto se disuelve en DMSO (previamente calentado a aproximadamente 90°C) y despues se anade metanol a la disolucion de DMSO. La mezcla de codisolventes se equilibra a aproximadamente -20°C para permitir la formacion de cristales de 5-azacitidina. El producto se recoge por filtracion con vado y se deja secar al aire.
Ejemplo 2: Recristalizacion lenta en DMSO/tolueno
Se uso dimetilsulfoxido (DMSO) como el disolvente principal para solubilizar la forma I de 5-azacitidina y se uso tolueno como el codisolvente como sigue. Se disolvieron aproximadamente 250 mg de 5-azacitidina con aproximadamente 5 ml de DMSO, previamente calentado a aproximadamente 90°C, en vasos de precipitados de 100 ml separados. Los solidos se dejaron disolver hasta una disolucion transparente. Se anadieron a la disolucion 45 ml de tolueno, previamente calentado a aproximadamente 50°C, y la disolucion resultante se mezclo. La disolucion se cubrio y se dejo equilibrar en condiciones ambiente. El producto se recogio por filtracion con vado en forma de cristales blancos usando un embudo Buchner. El producto recogido se dejo secar al aire.
Ejemplo 3: Recristalizacion rapida en DMSO/metanol, DMSO/tolueno y DMSO/cloroformo
Se disolvieron aproximadamente 250 mg de 5-azacitidina con aproximadamente 5 ml de DMSO como el disolvente principal, previamente calentado a aproximadamente 90°C, en vasos de precipitados de 100 ml separados. Los solidos se dejaron disolver hasta una disolucion transparente. Se anadieron aproximadamente 45 ml del codisolvente seleccionado (metanol, tolueno o cloroformo), previamente calentado a aproximadamente 50°C, a la disolucion y la disolucion resultante se mezclo. La disolucion se cubrio y se puso en un congelador para equilibrar a aproximadamente -20°C para permitir la formacion de cristales. Se retiraron las disoluciones del congelador despues de la formacion de cristales.
El producto de las disoluciones de metanol y tolueno se recogio por filtracion con vado usando un embudo Buchner. El producto cristalino blanco resultante se dejo secar al aire.
El producto en cloroformo era demasiado fino para ser recogido por filtracion con vado. La mayor parte del disolvente se decanto con cuidado de la disolucion de cloroformo y el disolvente de la suspension resultante se dejo evaporar a temperatura ambiente hasta sequedad. La disolucion de cloroformo se evaporo hasta un producto blanco. Observese que la recristalizacion rapida usando el sistema de codisolvente de DMSO/metanol se ha usado tfpicamente para preparar el principio activo 5-azacitidina en la tecnica anterior (vease la ultima etapa del procedimiento proporcionado en el ejemplo 1).
Ejemplo 4: Recristalizacion rapida en el sistema del disolvente unico N-metil-2-pirrolidona (NMP)
Se disolvieron aproximadamente 500 mg de 5-azacitidina con aproximadamente 5 ml de NMP, previamente calentada a aproximadamente 90°C, en vasos de precipitados de 50 ml separados. Los solidos se dejaron disolver hasta una disolucion transparente. La disolucion se cubrio y se puso en un congelador para equilibrar a aproximadamente -20°C para permitir la formacion de cristales. Se retiraron las disoluciones del congelador despues de la formacion de cristales, se equilibraron a temperatura ambiente. El producto se recogio por filtracion con vado usando un embudo Buchner. El producto recogido se dejo secar al aire.
Ejemplo 5: Difraccion de rayos X de polvo de 5-azacitidina
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Se obtuvieron patrones de difraccion de rayos X de polvo de cada muestra en un difractometro Scintag XDS 2000 o un Scintag X2 0/0 que trabaja con radiacion de cobre a 45 kV y 40 mA usando un detector de silicio enfriado Kevex Psi Peltier o un detector de estado solido enfriado Thermo ARL Peltier. Se usaron rendijas de la fuente de 2 o 4 mm y rendijas del detector de 0,5 o 0,3 mm para la recogida de datos. El material recristalizado se molio con cuidado usando un mortero y mano de mortero de agata durante aproximadamente 1 min. Las muestras se pusieron en un soporte de muestra de acero inoxidable o silicio y se nivelaron usando un portaobjetos de vidrio. Los patrones de difraccion de polvo de las muestras se obtuvieron en 20 de 2 a 42° a 1°/minuto. La calibracion del difractometro X2 se verifica anualmente usando un patron de polvo de silicio. Los ficheros de datos originales se convirtieron a formato ASCII, se transfirieron a un ordenador compatible IBM y se presentaron en Origin® 6.1 para Windows.
La XRPD de una sola muestra de 5-azacitidina producida de acuerdo con el metodo del ejemplo 1 puso de manifiesto que esta muestra consistfa en la forma I de la 5-azacitidina.
Las muestras de principio activo retenidas para el NCI tambien se analizaron. Estas muestras se sintetizaron todas y recristalizaron previamente de acuerdo con el metodo del ejemplo 1 y se almacenaron a 5°C desde la produccion. La XRPD puso de manifiesto que algunas de las muestras retenidas estan compuestas solo de la forma I, mientras que otras muestras retenidas contienen una fase mixta de forma I y un polimorfo diferente, denominado forma II.
La XRPD de las muestras de principio activo retenidas para el NCI pusieron de manifiesto la existencia de la forma VI en algunas muestras. En esas muestras, la forma VI estaba presente como una fase mixta con la forma I.
La XRPD de la 5-azacitidina recristalizada obtenida en el ejemplo 2 puso de manifiesto que la recristalizacion lenta en el sistema de DMSO/tolueno produda la forma IV. La XRPD de la 5-azacitidina recristalizada obtenida en el ejemplo 3 puso de manifiesto que la recristalizacion rapida en un sistema de DMSO/cloroformo produda la forma IV, la recristalizacion rapida en un sistema de DMSO/tolueno produda la forma V y la recristalizacion rapida en un sistema de DMSO/metanol produda la fase mixta de forma I/forma VII. La XRPD de la 5-azacitidina recristalizada obtenida en el ejemplo 4 puso de manifiesto que el sistema de disolvente N-metil-2-pirrolidona produda la forma VIII.
Ejemplo 6: Analisis termico de la 5-azacitidina
Las mediciones de calorimetna diferencial de barrido (DSC) para cada muestra se recogieron usando un sistema de DSC Perkin Elmer Pyris 1 equipado con una unidad de refrigeracion Intracooler 2P. El DSC Pyris 1 se purgo con nitrogeno. La calibracion se realizo antes del analisis usando un patron de indio a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto. Se molio cada muestra con cuidado en un mortero y mano de mortero de agata. Se cerraron hermeticamente aproximadamente 1-3 mg de la muestra individualmente en un crisol de aluminio universal de 30 pl Perkin Elmer con agujeros en la tapa. Las muestras se calentaron de 25°C a 250°C o 350°C a 10°C/minuto.
Las mediciones del analisis termogravimetrico (TGA) para cada muestra se recogieron usando un aparato Perkin Elmer TGA 7 purgado con nitrogeno a aproximadamente 20 cc/minuto. Se usaron un peso de referencia de 100 mg y mquel metal para verificar el equilibrio y calibraciones de temperatura, respectivamente. Las muestras se calentaron de 25°C a 250°C o 300°C a 10°C/minuto.
Las mediciones del punto de fusion (PF) con capilar se hicieron usando un aparato de punto de fusion Electrothermal 9300. Se uso una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto a partir de temperaturas de punto de ajuste descritas en las descripciones individuales. Los puntos de fusion visuales se dan como una media de determinaciones por triplicado.
Los resultados son los siguientes:
Forma I
La TGA mostro una perdida de peso de 0,23% entre la temperatura ambiente y 150°C, lo que indica que es anhidra. La DSC presentaba un solo suceso con un inicio a 227,0°C.
La determinacion de punto de fusion con capilar se llevo a cabo por triplicado en una muestra de la forma I de 5- azacitidina. Se observo visualmente que la muestra se descompoma sin fundir a aproximadamente 215°C usando una velocidad de calentamiento de 10°C y una temperatura de inicio de 200°C. Por lo tanto, el suceso de la DSC es resultado de la descomposicion de la 5-azacitidina.
Fase mixta de forma I/II
El TGA de la fase mixta de forma I/II mostro una perdida de peso de 1,16% entre la temperatura ambiente y 150°C. El analisis de DSC presentaba un solo suceso con un inicio a 229,8°C. La descomposicion de la fase mixta estaba de acuerdo con la observada para la forma I de la 5-azacitidina.
Forma III
El TGA mostro una perdida de peso entre 6,56% y 8,44% cuando la temperatura se elevo de temperatura ambiente a 150°C. La perdida esta cerca de la cantidad teorica de humedad, 6,9%, que tendna la 5-azacitidina monohidrato.
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El analisis de DSC presentaba una endoterma, que esta en el intervalo asociado con la perdida de disolvente, y un suceso a mayor temperature. La endoterma presentaba una temperature de inicio en el intervalo de 86,4-89,2°C, temperatures maximas en el intervalo de 95,8-97,0°C y valores de AH en el intervalo de 73,1-100,5 J/g. El suceso de mayor temperature terna temperatures de inicio en el intervalo de 229,1-232,1°C y estaba de acuerdo con la descomposicion observada para la forma I de 5-azacitidina.
La forma III de 5-azacitidina se calento a 105°C durante 4 horas en un intento de deshidratar el material. El material no cambio su aspecto ffsico durante el calentamiento. El TGA se uso para medir el contenido de agua de la forma III antes y despues de secado. La cantidad inicial de humedad presente en la forma III era 6,31% y era <0,1% despues de secado. El patron de XRPD de polvo para la forma III deshidratada se corresponde con el de la forma I. Por lo tanto la forma III se deshidrata a la forma I.
Forma IV
El TGA mostro una perdida de peso de 21,80% entre la temperatura ambiente y 150°C, lo cual no se corresponde con el contenido de disolvente para ninguno de los solvatos sencillos. No se sabe si la forma IV cristalina es un polimorfo o un pseudopolimorfo.
El analisis de DSC presentaba dos endotermas y un suceso a mayor temperatura. Las dos endotermas estan en el intervalo que esta asociado con la perdida de disolvente. La primera endoterma presentaba una temperatura de inicio de 87,6°C, una temperatura maxima de 90,1°C y valor de AH de 98,3 J/g. La segunda endoterma presentaba una temperatura de inicio de 136,0°C, una temperatura maxima de 139,0°C y valor de AH de 81,8 J/g. El suceso de mayor temperatura terna una temperatura de inicio de 230,6°C y estaba de acuerdo con la descomposicion que se observaba para la forma I de 5-azacitidina.
Forma V
El TGA mostro una perdida de peso de 21,45% entre la temperatura ambiente y 150°C, lo cual no se corresponde con el contenido de disolvente para ninguno de los solvatos sencillos. El analisis de DSC presentaba dos endotermas asociadas, una endoterma individual y un suceso de mayor temperatura. Las tres endotermas estan en el intervalo que esta asociado con la perdida de disolvente. Las dos endotermas asociadas presentan temperaturas de inicio de 66,6 y 68,0°C. La endoterma individual presentaba una temperatura de inicio de 88,7°C, una temperatura maxima de 121,5°C y un valor de AH de 180,3 J/g. El suceso de temperatura mayor terna una temperatura de inicio de 230,7°C y estaba de acuerdo con la descomposicion que se observaba para la forma I de 5- azacitidina.
Forma VI
El TGA mostro una perdida de peso de 1,10% entre la temperatura ambiente y 150°C. El analisis de DSC presentaba una endoterma pequena, una exoterma y un suceso de mayor temperatura. La endoterma pequena presentaba una temperatura de inicio de 57,8°C, una temperatura maxima de 77,0°C y un valor de AH de 55,7 J/g. La exoterma presentaba una temperatura de inicio de 149,3°C, una temperatura maxima de 157,1°C y un valor de AH de -17,9 J/g. El suceso de temperatura mayor terna una temperatura de inicio de 234,7°C y estaba de acuerdo con la descomposicion que se observaba para la forma I de 5-azacitidina.
Forma VII
El TGA mostro una perdida de peso de 2,45% entre la temperatura ambiente y 150°C. El analisis de DSC presentaba una endoterma menor y un suceso de mayor temperatura. La endoterma menor terna una temperatura de inicio de 63,3°C, una temperatura maxima de 68,3°C y un valor de AH de 17,1 J/g. El suceso de mayor temperatura terna una temperatura de inicio de 227,2°C y estaba de acuerdo con la descomposicion que se observaba para la forma I de 5-azacitidina.
Ejemplo 7: Analisis de resonancia magnetica nuclear (RMN) de la forma III y forma VI
Se sabe que la 5-azacitidina es labil en agua. Puesto que la forma III se encuentra en disoluciones saturadas en equilibrio y la forma VI se produce por la liofilizacion de la disolucion de 5-azacitidina, era interesante examinar la pureza de estas formas de 5-azacitidina usando RMN. Los espectros de RMN de proton (1H) de la forma III y forma VI estaban ambos de acuerdo con la estructura de 5-azacitidina en todos los detalles esenciales.
Ejemplo 8: Conversion de la forma polimorfa de la 5-azacitidina
Se anadio la forma I de 5-azacitidina a diferentes disolventes en suficientes cantidades para formar una suspension y la suspension se dejo equilibrar durante un periodo de tiempo. Se recupero el material solido que estaba presente en la suspension, se seco y se analizo usando XRPD (de acuerdo con el protocolo de XRPD incluido en el ejemplo 5) con el objetivo de detectar nuevos polimorfos y pseudopolimorfos durante la transicion al estado disuelto. Las muestras equilibradas durante 19 horas en disolucion salina, dextrosa al 5%, tween 80 al 5%, octanol saturado con agua, etanol/agua (50/50) y agua sola, dieron como resultado una forma claramente diferente de la 5-azacitidina,
Disolvente
Asignacion del patron de XRPD
Disolucion salina
Forma III
Dextrosa al 5%
Forma III
Acetona
Forma I
Propilenglicol
Amorfo
Polietilenglicol
Amorfo
Metiletilcetona
Forma I
Tween 80 al 5%
Forma III
DMSO
Amorfo
Octanol saturado con agua
Forma III
Alcohol etnico
Forma I
EtOH/agua DI 50/50
Forma III
Agua DI
Forma III
Tabla 9: Resultados del analisis de difraccion de rayos X de polvo para muestras de solubilidad: asignacion de forma 5 (radiacion K de Cu)
Tambien se estudio la conversion de otras formas de 5-azacitidina. Espedficamente, se pesaron una fase mixta de forma I/II, forma VI (el medicamento liofilizado usado en los ensayos de farmaco del NCI de la tecnica anterior), una fase mixta de forma I/VI y una fase mixta de forma I/VII en vasos de precipitados de vidrio pequenos individuales, y se anadio agua mediante pipeta a cada vaso de precipitados. El tamano de la muestra y el volumen de agua 10 estaban ajustados para mantener una relacion aproximada de 25 mg/ml. La suspension resultante se dejo equilibrar durante 15 minutos. Despues de equilibrado, la muestra se filtro y el material solidos se seco y se analizo usando XRPD. En cada caso, se observo la forma III de 5-azacitidina. Los resultados indican que todas las formas de la 5- azacitidia se convierten en la forma III durante la transicion al estado disuelto en agua. Por lo tanto, cuando se administraba una suspension de 5-azacitidina ("suspension") a pacientes en la investigacion del NCI mencionada 15 antes, los pacientes recidan tanto 5-azacitidina en disolucion como forma III de 5-azacitidina.
Realizaciones preferidas:
1. Forma IV de 5-azacitidina caracterizada por un patron de difraccion de rayos X de polvo obtenido por irradiacion con rayos X Ka de Cu que presenta picos principales con espaciados interplanares en:
imagen14
imagen15
2. Una composicion farmaceutica que comprende la forma de 5-azacitidina del punto 1 y un excipiente, diluyente o vehnculo farmaceuticamente aceptable.
3. La Forma V de 5-azacitidina caracterizada por un patron de difraccion de rayos X de polvo obtenido por irradiacion 5 con rayos X Ka de Cu que presenta picos principales con espaciados interplanares en:
imagen16
imagen17
4. Una composicion farmaceutica que comprende la forma de 5-azacitidina del punto 3 y un excipiente, diluyente o vetnculo farmaceuticamente aceptable.
5. La Forma VII de 5-azacitidina caracterizada por un patron de difraccion de rayos X de polvo obtenido por 5 irradiacion con rayos X Ka de Cu que incluye picos de difraccion a 20 de 5,8; 11,5; 12,8; 22,4 y 26,6°.
6. Una composicion farmaceutica que comprende la forma de 5-azacitidina del punto 5 y un excipiente, diluyente o vetnculo farmaceuticamente aceptable.
7. La Forma VIII de 5-azacitidina caracterizada por un patron de difraccion de rayos X de polvo obtenido por irradiacion con rayos X Ka de Cu que presenta picos principales con espaciados interplanares en:
imagen18
10
8. Una composicion farmaceutica que comprende la forma de 5-azacitidina del punto 7 y un excipiente, diluyente o vetnculo farmaceuticamente aceptable.
9. Un metodo para preparar la Forma IV de 5-azacitidina sustancialmente exenta de otras formas, comprendiendo el metodo:
15 cristalizar la 5-azacitidina a partir de una mezcla de disolventes que comprende dimetilsulfoxido y
cloroformo enfriando dicha disolucion desde una temperatura seleccionada para permitir que dicha 5- azacitidina se disuelva completamente hasta aproximadamente -20°C; y
aislar dichos cristales.
10. Un metodo para preparar la Forma IV de 5-azacitidina sustancialmente exenta de otras formas, comprendiendo 20 el metodo:
cristalizar la 5-azacitidina a partir de una mezcla de disolventes que comprende dimetilsulfoxido y tolueno enfriando dicha disolucion desde una temperatura seleccionada para permitir que dicha 5-azacitidina se
29
10
15
disuelva completamente hasta aproximadamente temperatura ambiente; y aislar dichos cristales.
11. Un metodo para preparar la Forma V de 5-azacitidina sustancialmente exenta de otras formas, comprendiendo el metodo:
cristalizar la 5-azacitidina a partir de una mezcla de disolventes que comprende dimetilsulfoxido y tolueno enfriando dicha disolucion desde una temperatura seleccionada para permitir que dicha 5-azacitidina se disuelva completamente hasta aproximadamente -20°C; y
aislar dichos cristales.
12. Un metodo para preparar una fase mixta de la Forma I de 5-azacitidina y de la Forma VII de 5-azacitidina sustancialmente exenta de otras formas, comprendiendo el metodo:
cristalizar la 5-azacitidina a partir de una mezcla de disolventes que comprende dimetilsulfoxido y metanol enfriando dicha disolucion desde una temperatura seleccionada para permitir que dicha 5-azacitidina se disuelva completamente hasta aproximadamente -20°C; y
aislar dichos cristales.
13. Un metodo para preparar la Forma VIII de 5-azacitidina sustancialmente exenta de otras formas, que comprende cristalizar la 5-azacitidina a partir de N-metil-2-pirrolidona y aislar dichos cristales.

Claims (13)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Una composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de la 5-azacitidina para usar en un metodo de tratamiento de smdromes mielodisplasicos, en donde la forma cristalina de la 5-azacitidina se caracteriza por los picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprende picos que tienen los 5 siguientes angulos 20:
    Angulo 20 (°)
    6,
    566
    11
    CD OO CO
    13
    O 00 CD
    15
    138
    17
    CD ■sr
    20
    762
    21
    o CD
    22
    776
    24
    CO CD CO
    25
    743
    26
    305
    28
    741
    31
    393
    32
    CD O 00
    33
    CO o
    33
    CD CO LD
    36
    371
    39
    157
    41
    CO CD
    y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
  2. 2. La composicion farmaceutica para usar segun la reivindicacion 1, en la que la forma cristalina de 5-azacitidina se caracteriza por un patron de difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu) sustancialmente segun la Figura 3.
    10 3. La composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de 5-azacitidina para usar segun la
    reivindicacion 1 o 2, en la que la forma cristalina de 5-azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprende picos que tienen los siguientes angulos 20, distancias d e intensidades relativas:
    Angulo 20 (°)
    distancia d (A) Intensidad relativa
    6,566
    13,450 32,9
    11,983
    7,380 52,5
    13,089
    6,758 71,0
    15,138
    5,848 38,9
    17,446
    5,079 48,2
    20,762
    4,275 10,8
    21,049
    4,147 34,8
    22,776
    3,901 89,5
    24,363
    3,651 13,7
    Angulo 20 (°)
    distancia d (A) Intensidad relativa
    25,743
    3,458 22,8
    26,305
    3,385 39,9
    28,741
    3,104 100,0
    31,393
    2,847 22,5
    32,806
    2,728 11,8
    33,043
    2,709 10,1
    33,536
    2,670 15,1
    36,371
    2,468 11,0
    39,157
    2,299 19,3
    41,643
    2,167 12,1
  3. 4. La composicion farmaceutica para usar segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la forma cristalina de 5-azacitidina es un monohidrato preparado segun un metodo que comprende:
    - poner en contacto una forma cristalina de 5-azacitidina con agua; y
    5 - aislar la forma cristalina de 5-azacitidina.
  4. 5. La composicion farmaceutica para usar segun la reivindicacion 4, en la que la forma cristalina de 5-azacitidina usada en la preparacion de la forma cristalina de 5-azacitidina segun las reivindicaciones 1 a 3 es la Forma I, Forma II, Forma IV, Forma V, Forma VI, Forma VII o Forma VIII de 5-azacitidina o una mezcla de dos o mas de las mismas.
  5. 6. Una composicion farmaceutica que comprende una fase mixta de formas de 5-azacitidina para usar en un metodo 10 para tratar smdromes mielodisplasicos, en donde la fase mixta de formas de 5-azacitidina se caracteriza por picos
    observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que tiene los siguientes angulos 20:
    imagen1
    Angulo 20 (°) 32,074
    y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
  6. 7. La composicion farmaceutica para usar segun la reivindicacion 6, en la que la fase mixta de formas de 55 azacitidina se caracteriza por un patron de difraccion de rayos X de polvo sustancialmente segun la Figura 2.
  7. 8. La composicion farmaceutica para usar segun las reivindicaciones 6 o 7, en donde la fase mixta de formas de 5- azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprende picos que tienen los siguientes angulos 20, distancias d e intensidades relativas:
    Angulo 20 (°)
    distancia d (A) Intensidad relativa
    12,244
    7,223 348
    13,082
    6,762 37,0
    13,458
    6,574 29,2
    14,452
    6,124 25,4
    16,521
    5,361 19,0
    17,648
    5,022 12,1
    18,677
    4,747 12,7
    19,093
    4,645 41,3
    20,231
    4,386 42,1
    21,353
    4,158 15,5
    22,309
    3,982 35,1
    23,070
    3,852 100,0
    23,909
    3,719 18,9
    26,641
    3,343 18,2
    26,813
    3,322 12,6
    27,158
    3,281 46,0
    29,309
    3,045 27,3
    29,609
    3,015 12,7
    30,384
    2,939 10,5
    32,074
    2,788 12,0
    10 9. Una composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de 5-azacitidina para usar en un metodo para
    tratar smdromes mielodisplasicos, donde la forma cristalina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprenden picos que tienen los siguientes angulos 20:
    imagen2
    imagen3
    y en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
  8. 10. La composicion farmaceutica para usar segun la reivindicacion 9, en la que la forma cristalina de 5-azacitidina se caracteriza por un patron de difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu) sustancialmente segun la Figura 6.
    5 11. La composicion farmaceutica que comprende una forma cristalina de 5-azacitidina para usar segun la
    reivindicacion 9 o 10, en la que la forma cristalina de 5-azacitidina se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu), que comprende picos que tienen los siguientes angulos 20, distancias d e intensidades relativas:
    Angulo 20 (°)
    distancia d (A) Intensidad relativa
    12,533
    7,057 10,1
    12,963
    6,824 10,2
    13,801
    6,411 100,0
    18,929
    4,6843 10,0
    20,920
    4,243 34,2
    21,108
    4,205 49,4
    21,527
    4,125 47,0
    22,623
    3,922 10,7
    22,970
    3,869 13,8
    24,054
    3,697 77,8
    26,668
    3,340 23,0
    27,210
    3,275 33,7
    28,519
    3,127 12,9
    29,548
    3,021 27,2
    30,458
    2,932 50,3
    33,810
    2,649 11,6
    35,079
    2,556 12,6
    37,528
    2,411 24,7
    10 12. La composicion farmaceutica para usar segun cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en la que la forma
    cristalina de 5-azacitidina se prepara segun un metodo que comprende:
    10
    15
    liofilizar una disolucion de 5-azacitidina y manitol; y aislar el solido liofilizado.
  9. 13. La composicion farmaceutica para usar segun la reivindicacion 12, en la que la disolucion de 5-azacitidina y manitol comprende 5-azacitidina y manitol en una relacion de aproximadamente 1:1 en peso.
  10. 14. Una composicion farmaceutica que comprende un solido amorfo de 5-azacitidina para usar en un metodo para tratar smdromes mielodisplasicos, en donde el metodo comprende la administracion oral de la composicion farmaceutica.
  11. 15. La composicion farmaceutica para usar segun la reivindicacion 14, en la que el solido amorfo de 5-azacitidina se prepara mediante un metodo que comprende:
    anadir una forma cristalina de 5-azacitidina, que se caracteriza por picos observados usando difraccion de rayos X de polvo (radiacion Ka de Cu) que tiene los siguientes angulos 20:
    imagen4
    a un disolvente seleccionado del grupo que consiste en propilenglicol, polietilenglicol y DMSO; permitir que se alcance el equilibrio, y recuperar la 5-azacitidina del mismo.
  12. 16. La composicion farmaceutica para usar segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la composicion farmaceutica comprende ademas un excipiente, diluyente o vehfculo farmaceuticamente aceptable, o en donde la composicion farmaceutica esta preparada en forma de dosis unica.
  13. 17. La composicion farmaceutica para usar segun la reivindicacion 16, en la que cada unidad de dosificacion contiene de 5 mg a 200 mg de la forma de 5-azacitidina, preferiblemente 100 mg de la forma de 5-azacitidina.
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