ES2605823T3

ES2605823T3 - Cosmético

Info

Publication number: ES2605823T3
Application number: ES13740793.8T
Authority: ES
Inventors: Enrique Alabata; Patricia S. PAO
Original assignee: Restorsea LLC
Current assignee: Restorsea LLC
Priority date: 2012-01-23
Filing date: 2013-01-23
Publication date: 2017-03-16
Anticipated expiration: 2033-01-23
Also published as: US20130336948A1; EP3100717B1; PE20150269A1; IL233530A0; PL3100717T3; CO6801776A2; EP3100717A1; ES2901975T3; HUE030968T2; CN107149588A; CN103687586A; BR112014017913A2; JP6002734B2; SG194972A1; AP2014007818A0; US8992996B2; US20170027855A1; CR20130584A; EP2691069B1; PL2691069T3

Abstract

Un cosmético que comprende: un aislado proteico de desove de peces que tiene un efecto antiinflamatorio sobre la piel de mamíferos; un extracto de producto natural que comprende ácidos grasos insaturados y esteroles, teniendo dicho extracto de producto natural una actividad antioxidante sobre la piel de mamíferos; y un emulsionante que forma una mezcla de dicho aislado y dicho extracto.

Description

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DESCRIPCION

Cosmetico

Campo de la invencion

La presente invencion se refiere, en general, a un cosmetico y a componentes del mismo, y en particular, a un cosmetico que contiene extractos proteicos de eclosion de huevos y formulaciones de los mismos que son utiles para potenciar la calidad de la piel.

Antecedentes de la invencion

Las formulaciones cosmeticas tradicionales han incluido aceites y diversas sustancias lipofilas que formulan una capa protectora en la piel para mitigar los efectos de desgaste. La inclusion de un bloqueador solar en un cosmetico mitiga igualmente el dano de los rayos ultravioleta a la piel asociado con el envejecimiento y la produccion de radicales libres. Otros componentes convencionales respecto a las composiciones cosmeticas son emolientes que transmiten cantidades apreciables de agua a la piel que, en combinacion con aceites, afecta a la cantidad de humedad liberada o retenida de la piel para ocultar las arrugas. Desafortunadamente, dichas formulaciones cosmeticas convencionales han fracasado en permitir una mejora qrnmica a largo plazo de la calidad de la piel.

La observacion de trabajadores de un criadero de peces cuyas manos teman una calidad de piel excepcional, incluso con una exposicion prolongada al agua fna, era la genesis del aislamiento de una nueva clase de protemas asociadas con huevos de peces. Dichas protemas se detallan, por ejemplo, en los documentos US 6.346.245; 6.592.866; US 2011/0280882; WO2011/06434; y US 2009/0274770. Las protemas asf aisladas inclrnan zonasas, leucolectinas, protemas muy acidas (PMAs) y coroelisinas. Al menos algunas de estas protemas son eficaces en el tratamiento de trastornos autoinmunitarios e inflamatorios, asf como piel danada, todas con efectos secundarios mmimos. Si bien este tipo de protemas mejora la funcion de la piel danada asociada al desgaste y a diversos factores estresantes ambientales, tal como la exposicion al aire acondicionado o a contaminantes atmosfericos, estas protemas parecen tener un efecto escaso o nulo en otros atributos asociados a la piel danada y envejecida. Adicionalmente, pese a haber contemplado la inclusion de dicho aislado proteico de desove de peces en cosmeticos, la capacidad para mantener la actividad proteica y permitir la estabilidad durante el almacenamiento de una formulacion cosmetica representa un desafm tecnico.

Por consiguiente, es preciso un cosmetico estable durante el almacenamiento que trate multiples aspectos del envejecimiento de la piel al tiempo que se incorporan los atributos antiinflamatorios de los huevos y, en particular, protemas derivadas del desove de peces. Existe ademas una necesidad de un cosmetico que este practicamente exento de componentes cosmeticos sinteticos que posean efectos perjudiciales no deseados en los problemas de piel y de bioacumulacion.

Sumario de la invencion

Se proporciona una composicion que incluye un aislado proteico de desove de peces que tiene un efecto antiinflamatorio sobre la piel de mairnferos. Se presenta igualmente un extracto de producto natural que incluye acidos grasos insaturados y esteroles. El extracto de producto natural tiene una actividad antioxidante. Se proporciona un emulsionante o un solubilizante, o una combinacion de los mismos para formar una mezcla del aislado y el extracto. Se proporciona asimismo una composicion que incluye un aislado proteico de eclosion de huevos que tiene un efecto antiinflamatorio sobre la piel de mamfferos. Al menos un biocida protector de la actividad del aislado proteico de eclosion de huevos durante un almacenamiento de 3 meses a 20 °C esta presente mientras la actividad aplicada a la piel del sujeto tras el almacenamiento se mantenga dentro del 80 % de una protema no formulada y recien aislada. Un emulsionante forma una mezcla con el aislado proteico de eclosion de huevos que tiene una fase acuosa tamponada a un pH de entre 5,6 y 7,9. Se proporciona un kit inclusivo de una composicion antes mencionada en un envase de uso multiple no esteril junto con instrucciones para la aplicacion del mismo a la piel para favorecer el rejuvenecimiento de la piel.

Un proceso de produccion de un cosmetico inclusivo de un aislado proteico de eclosion de huevos que tiene una actividad en la piel de un mamffero incluye la formacion de al menos una fase acuosa y al menos una fase hidrofoba. Un emulsionante y al menos un biocida estan presentes en al menos una fase acuosa y al menos una fase hidrofoba. Al menos una fase acuosa y al menos una fase hidrofoba se combinan para formar una emulsion. La emulsion o al menos una fase acuosa se tampona a un pH de entre 5,5 y 7,9 antes de la adicion del aislado proteico de eclosion de huevos a la emulsion.

Se proporciona un proceso de mejora del aspecto de la piel que incluye la aplicacion de la composicion a la piel de un mamffero a un nivel de entre 1 x 10-6 a 0,1 mg del aislado y 2 x 10-7 a 0,02 mg de los acidos grasos insaturados por cm cuadrado de piel al menos tres veces por semana para conseguir la mejora del aspecto de la piel.

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Descripcion de la invencion

La presente invencion tiene utilidad como cosmetico con atributos restauradores cutaneos. En una realizacion, un cosmetico de la invencion se formula para otorgar un efecto sinergico entre los diversos componentes. En otra realizacion, se formula una composicion cosmetica de la invencion sin componentes sinteticos. Un cosmetico de la invencion en todas las realizaciones mantiene la actividad de los componentes proteicos mientras tenga una estabilidad durante el almacenamiento a temperatura ambiente y en respuesta a la exposicion microbiana a traves del procesamiento no esteril y la contaminacion microbiana por la utilizacion del sujeto. Se proporciona un proceso de formulacion que otorga una formulacion cosmetica con estos atributos de actividad proteica mantenida y estabilidad durante el almacenamiento en las condiciones de utilizacion y almacenamiento del cosmetico.

De acuerdo con la presente invencion, las protemas activas de eclosion de huevos y, en particular, la protema aislada del desove de peces que tiene un efecto antiinflamatorio sobre la piel de mairnferos vivos se combina con un extracto de producto natural que incluye acidos grasos insaturados y al menos un esterol. El extracto tiene simultaneamente actividad antioxidante y actividad de inhibicion de la colagenasa, y se combina con un emulsionante que estabiliza la mezcla que incluye el aislado proteico y el extracto. Se puede apreciar que multiples extractos se utilizan opcionalmente de forma simultanea en el presente documento para conseguir los requisitos composicionales y de actividad. Sorprendentemente, se ha descubierto que la actividad de protemas de eclosion de huevos, y, en particular, la protema de desove de peces y el extracto de producto natural funcionan sinergicamente en algunas realizaciones de la invencion para conseguir un aspecto superior para la piel y, en algunas realizaciones, el rejuvenecimiento de la piel, en comparacion con cualquiera de los ingredientes utilizados solos en una formulacion controlada. En aun otras realizaciones, se proporciona la estabilidad durante el almacenamiento de un cosmetico de la invencion de al menos 3 meses a 20 °C, mientras la actividad del componente proteico aplicado a la piel del sujeto tras el almacenamiento se mantenga dentro del 80 % de una protema no formulada y recien aislada.

Un aislado proteico de desove de peces incluye, por ejemplo, una zonasa, una leucolectina, o una combinacion de las mismas, y se han detallado las propiedades en los documentos US 6.346.245, col. 4, lmea 15, col. 5, lmea 8; US 2009/0274770 A1 [0321]-[0326] y US 2011/0280882 [0157]-[0194]; los extractos crudos que contienen tales protemas; y sus combinaciones. Fuentes a modo de ejemplo del desove de peces para el aislamiento proteico incluyen huevas de esturion, salmon, pescado blanco, coregono, bacalao, capelan, y lota. Se puede apreciar que otras fuentes de protemas de huevo claves en el presente documento incluyen los casos de huevo de anfibios; tales como los de los renacuajos y salamandras; casos de huevo de reptil, y casos de huevos de aves de corral. Normalmente, un huevo o, con particularidad, un aislado proteico de desove de peces que contiene al menos algunas de las protemas previamente citadas constituye de 0,0001 a 10% en peso total de una formulacion cosmetica de la invencion siendo 0,01 a 10 por ciento del extracto protema activa. Se puede apreciar que la cantidad de protema presente en un cosmetico de la invencion depende de factores que incluyen, de manera ilustrativa, la miscibilidad con otros componentes de otro cosmetico, y el grado de dano cutaneo.

Queda entendido que en las ocasiones en las que se proporcionan un intervalo de valores, el intervalo tiene por objeto abarcar no solo los valores del criterio de valoracion del intervalo, sino tambien los valores intermedios del intervalo que se incluyen explfcitamente en el intervalo y vanan por la ultima cifra significativa del intervalo. A modo de ejemplo, un intervalo enumerado de 1 a 4 tiene por objeto incluir 1-2, 1-3, 2-4, 3-4, y 1-4.

Una composicion de la invencion contiene igualmente un extracto de producto natural. El extracto de producto natural incluye un acido graso insaturado y un esterol en una cantidad para que se proporcione una actividad antioxidante y una actividad de inhibicion de la colagenasa superior al 10 % en relacion con el control, medidas por un ensayo de capacidad de absorcion de radicales de oxfgeno (CARO), y el trazador de lipoperoxidacion en un medio de cultivo con un extracto de producto natural presente al 1 % y radiado con rayos ultravioleta B en una cantidad de 150 milijulios por centimetro cuadrado, respectivamente. R. L. Prior, et al. Assays for Hydrophillic and Lipophillic Antioxidant Capacity (oxygen radical absorbance capacity (ORACFL)) of Plasma and other Biological and Food Samples. J. Agric. Food Chem. (2003) 51:3273-3279. Se puede apreciar que los extractos naturales contienen a menudo mezclas de acidos grasos insaturados, uno o mas esteroles, y otros componentes de diferente actividad dermatologica. Un extracto de producto utilizado en una composicion de la invencion tambien inhibe la actividad de la colagenasa en algunas realizaciones en mas de un 5 % en algunas realizaciones, medida por comparacion con un control para un 0,1 % en peso de extracto en el control a traves de un protocolo de medicion visual del ensayo anticolagenasa en biopsias humanas con criocortes cutaneos incubados 30 minutos a 37 °C con, y sin un extracto seguido de tres horas de incubacion a 37 °C sin (control negativo) o con 15 microlitros por mililitro de colagenasa, seguido de lavado de las muestras de biopsia, seguido de la coloracion y microscopfa para la medicion visual de tricoma de Masson. En algunas realizaciones, un extracto de producto natural utilizado en una composicion de la invencion incluye al menos uno de un acido graso omega 3, omega 6 y omega 9. En aun otras realizaciones, los acidos grasos insaturados estan presentes en el extracto de producto natural en una cantidad de al menos 20 miligramos por 100 gramos de extracto. Un extracto de producto natural de la invencion tambien incluye al menos un tipo de esterol, el esterol incluye, de manera ilustrativa, colesterol, campesterol, estigmasterol, sitosterol, formas hidroxiladas de los mismos, y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, al menos un esterol esta presente en un extracto de producto natural en una cantidad mayor a 50 miligramos por 100 gramos de extracto. Normalmente, un extracto de producto natural esta presente en la composicion de la invencion de 0,01 a 10 por

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ciento en peso total, y en algunas realizaciones de 0,1 a 3 por ciento en peso total. Los factores determinates en la seleccion de la cantidad de extracto de producto natural incluyen, de manera ilustrativa, la estabilizacion de protemas y glucosidos de eclosion de huevos cosmeticos en presencia de protemas de eclosion de huevos, grado del dano cutaneo, y vida media del cosmetico.

Un extracto de producto natural, de acuerdo con la presente invencion, se forma con facilidad por medio de tecnicas convencionales, tales como la extraccion de una porcion de una planta, tal como hojas, tallos, brotes, rames, frutos, o combinaciones de los mismos con un primer disolvente que es hidrofilo o hidrofobo, y la filtracion de la mezcla despues de estar en contacto con el disolvente durante periodos de entre 1 a 48 horas, siendo la cantidad de disolvente comprendida normalmente entre 1 y 20 volumenes en relacion con la del material vegetal. La extraccion en los disolventes al disminuir la hidrofilia, y la elucion mediante tecnicas convencionales, permiten producir un extracto de producto natural de la invencion. Tecnicas de extraccion de acidos grasos/esterol representativas se hallan en J. S. O'Brien y A. A. Benson, J. Lipid Res., 5, 1964, pags. 432-436. El disolvente organico incluye, de forma ilustrativa, eteres, furanos, destilados de petroleo, alcanos, alcanos halogenados, alcoholes, acetatos, y combinaciones de los mismos. Despues de una interaccion suficiente entre las fases, de normalmente entre 20 minutos y 48 horas, la fase organica se afsla para obtener un extracto de acuerdo con la presente invencion. Fuentes adecuadas de extractos incluyen algas rojas, verdes, marrones, y cianobacterias con crecimiento en forma de cesped denominadas colectivamente en el presente documento como "algas marinas", y plantas o componentes de las mismas tienen frutos de color purpura, rojo, negro o naranja o coloraciones de la hoja, en las que la coloracion de la hoja se mide en presencia o ausencia de clorofila. Las algas marinas representan una fuente comun de extractos de producto natural de la invencion con niveles elevados de acidos grasos insaturados y esteroles. Se puede apreciar que las fuentes sinteticas y/o animales de acidos grasos insaturados y esteroles se utilizan con facilidad en una composicion de la invencion.

Ademas del aislado proteico de eclosion de huevos y el extracto de producto natural, la composicion de la invencion, en algunas realizaciones, incluye uno o varios componentes empleados habitualmente en cosmeticos con la condicion de que estos componentes mantengan los atributos del aislado proteico de eclosion de huevos y se mantenga el extracto de producto natural. Representativo de los componentes cosmeticos convencionales que se formulan con facilidad mas adelante, estos incluyen, de manera ilustrativa, agua desionizada que constituye opcionalmente la mayor parte en peso del cosmetico de la invencion; solidos y ceras, tales como petroleo, lanolina, ceresina, cera microcristalina, cera de carnauba, acidos grasos C10-C30, alcoholes C10-C30; aceites, tales como aceite de oliva, aceite de jojoba, aceite de ricino, aceite de girasol, aceite de avellana, manteca de karite, y aceite de cartamo; modificadores de la viscosidad/estabilizantes, tales como goma guar, goma xantana, carragenano, hidroxietilcelulosa, goma de esclerocio, carbomeros, poliacrilatos, y copolfmeros de alquil acrilato C10-C30-acrilato; humectantes hidrofilos, tales como glicerina, propanodiol, lactato de sodio, PCA de sodio; emolientes, tales como eter dicapnlico, miristato de miristilo, capratos C10-C30, trigliceridos C10-C30 que contienen acidos capnlico y/o caprico, y gliceridos C10-C30; coemulsionantes, tales como alcohol cetilico, alcohol esteanlico, estearato de glicerilo, acido estearico, estearato de glicol, y diestearato de glicerilo; emulsionantes, tales como tensioactivos no ionicos y tensioactivos anionicos, que incluyen, de manera ilustrativa, sales de lactilato de lauroilo, lactilato de caproilo, lactilato de cocoilo, lactilato de estearoilo, olivato de cetearilo, olivato de sorbitan, citrato de gliceril-oleato, en el que cationes tfpicos incluyen sodio, potasio, amonio, calcio, y magnesio; aceites de silicona; colorantes, tales como complementos inorganicos y tintes inorganicos; pigmentos inorganicos u organicos y tintes organicos tratados con jabon metalico o tratados con silicio; tensioactivos no ionicos, polisiloxanos; conservantes en agua; modificadores del pH; vitaminas y metabolitos de vitamina, como vitamina E, vitamina K, o los complejos de la vitamina B; aceites esenciales; compuestos absorbentes de luz ultravioleta; fragancias; agentes humectantes; agentes potenciadores de la corriente sangumea; agentes inductores de una sensacion de fno; antitranspirantes; activos, y biocidas.

Como se utiliza en el presente documento, se define un activo como compuesto organico aplicado a la piel humana para su limpieza, embellecimiento, fomentar su atractivo, o alterar el aspecto que tiene eficacia en la mejora de los atributos de la piel independientemente de si el compuesto es de naturaleza polar o no polar. Como se utiliza en el presente documento, este termino excluye concretamente una protema de eclosion de huevos, una mezcla de protemas de eclosion de huevos, y el extracto de producto natural. Compuestos organicos activos claves en el presente documento incluyen, de manera ilustrativa, extractos adicionales, tales como los del hongo mpo Songyi, Acacia farnesiana, Euterpe oleracea, Malpighia glabra, Bixa orellana, Prunus dulcis, Aloe vera, Rhododendron ferrugineum, Amaranthus caudatus, Angelica archangelica, Pimpinella anisum, Malus domestica, Mentha suaveolens, avenantramida de avena, Prunus armeniaca, Arnika montana, Cynara scolymus, Asparagus officinalis, Persea americana, Cardiospermum halicacabum, Melissa officinalis, Bambusa vulgaris, Musa paradisiaca, Adansonia digitata, Berber's vulgaris, Ocimum basilicum, Laurus nobilis, Epilobium angustifolium, Allium ursinum, Geum urbanum, Betula pubescens, Quassia amara, Nigella sativa, Ribes nigrum, Morus nigra, Raphanus sativus, Camellia sinensis, Rubus fruticosus, Iris versicolor, Vaccinium myrtillus, Borago officinalis, Vicia faba, Menyanthes trifoliata, Fagopyrum esculentum, Arctium lappa, Ruscus aculeatus, Theobroma cacao, Acorus calamus, Carum carvi, Elattaria cardamomum Daucus carota sativus, Erythroxylum catuaba, Centaurium erythraea, Matricaria chamomilla, Prunus cerasus, Cicer arietinum, Chlorella vulgaris, Aronia melanocarpa, Cinchona pubescens, Cinnamomum verum, Syzygium aromaticum, Cocos nucifera, Coffea arabica, Plectranthus barbatus, Tussilago farfara, Symphytum officinale, Plantago major, Coriandrum sativum, Zea mays, Papaver rhoeas, Centaurea cyanus, Gossypium herbaceum, Vaccinium vitis-idaea, Primula veris, Vaccinium macrocarpon, Cucumis sativus, Curcuma

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longa, Bellis perennis, Rosa damascena, Turnera diffusa, Taraxacum officinale, Phoenix dactylifera, Lamium album, Rosa canina, Hylocereus undatus, Daemonorops Draco, Echinacea angustifolia, Leontopodium alpinum, Sambucus nigra, Acanthopanax senticosus, Phyllanthus emblica, Eucalyptus globulus, Oenthera biennis, Helichrysum arenarium, Euphrasia rostkoviana, Trigonella foenum-graecum, Ficus carica, Linum usitatissimum, Plumeria alba, Fumaria officinalis, Rumex acetosa, Gardenia Yessminoides, Gentiana lutea, Zingiber officinale, Ginkgo biloba, Panax ginseng, Solidago virgaurea, Vitis vinifera, Citrus paradisi, Camellia sinensis, Paullinia cupana, Graminis flos, Corylus avellana, Lawsonia inermis, Hibiscus sabdariffa, Lonicera japonica, Humulus lupulus, Aesculus hippocastanum, Equisetum arvense, Sempervivum tectorum, Hyssopus officinalis, Cetraria islandica, Baptisia tinctoria, Chondrus crispus, Hedera helix, Jasminum officinale, Simmondsia chinensis, Juniperus communis, Anthyllis vulneraria, Kigelia africana, Actinidia chinensis, Pueraria lobata, Alchemilla vulgaris, Lavandula angustifolia, Citrus limon, Cymbopogon cytratus, Glycyrrhiza glabra, Lilium candidum, Citrus aurantifolia, Tilia cordata, Nelumbo nucifera, Macadamia ternifolia, Magnolia biondii, Berberis aquifolium, Malva sylvestris, Mangifera indica, Calendula officinalis, Castanea sativa, Althaea officinalis, Filipendula ulmaria, Cucumis melo, Silybum marianum, Panicum miliaceum, Colophospermum mopane, Sorbus aucuparia, Verbascum thapsus, Guazuma ulmifolia, Myrtus communis, Tropaeolum majus, Azadirachta indica, Urtica dioica, Ascophyllum nodosum, Myristica fragrans, Quercus robur, Laminaria digitata, Avena sativa, Usnea barbata, Olea europaea, Allium cepa, Citrus sinensis, Mentha citrata, Origanum vulgare, Viola tricolor, Carica papaya, Capsicum annuum, Petroselinum crispum, Passiflora incarnata, Prunus persica, Pyrus communis, Centella asiatica, Paeonia officinalis, Piper nigrum, Mentha piperita, Ananas comosus, Prunus domestica, Punica granatum, Pulmonaria officinalis, Cucurbita pepo, Cydonia oblonga, Rubus idaeus, Trifolium pratense, Oryza sativa, Aspalathus linearis, Rosa centifolia, Rosmarinus officinalis, Secale cereale, Salvia officinalis, Schisandra chinensis, Hippophae rhamnoides, Sesamum indicum, Capsella bursa pastoris, Albizia julibrissin, Artemisia abrotanum, Mentha spicata, Triticum aestivum, Spirulina platensis, Picea abies, Hypericum perforatum, Averrhoa carambola, Stevia rebaudiana, Fragaria ananassa, Helianthus annuus, Melilotus officinalis, Tanacetum cinerariifolium, Citrus reticulata, Thymus vulgaris, Salvadora persica, Valeriana officinalis, Vanilla planifolia, Verbena officinalis, Viola odorata, Juglans regia, Nasturtium officinale, Citrullus lanatus, Triticum aestivum, Camellia sinensis, Crataegus rhipidophylla, Thymus serpyllum, Salix alba, hamamelis virginia, Isatis tinctoria, Lycium barbarum, Artemisia absinthium, Achillea millefolium, Hymenaea courbaril, Cananga odorata, Tricholoma matsutake Singer, o combinaciones de los mismos. Se puede apreciar que dichos extractos tambien pueden poseer un grado de actividad antimicrobiana que, en ciertas realizaciones, potencia la eficacia del biocida. Se utilizan normalmente compuestos organicos activos en una formulacion de la invencion de 0 a 1 por ciento en peso total, y en algunas realizaciones, de hasta 5 por ciento en peso total. Pese a que estos activos tienden a ser mas tolerantes en las condiciones de procesado de cosmeticos convencionales y, en muchas ocasiones, son susceptibles a una inclusion en una fase acuosa o lipofila distinta de la protema de eclosion de huevos y el extracto de producto natural, se debe apreciar que este tipo de compuestos organicos activos en algunas realizaciones se anaden posteriormente a la formacion de la emulsion a traves de una fase C u otra distinta a la emulsion.

Un cosmetico de la invencion se formula con facilidad en un cosmetico a base de agua que incluye, de forma ilustrativa, un tonico, una niebla de pulverizacion, un suero, una crema, una mascarilla, un protector solar, un limpiador facial, una hidratante, una preparacion para bano, una base lfquida, un astringente, una preparacion para el afeitado, un producto para el cuidado del cabello, y otros productos para el cuidado de la piel, o un medicamento topico que incluye, de forma ilustrativa, un agente antiinflamatorio. En realizaciones particulares de la presente invencion, se proporciona un cosmetico que incluye un emulsionante a base de plantas, tal como un lactilato que esta esencialmente exento de silicona, exento de aceite mineral, exento de vaselina, y exento de parabenos sinteticos. Un emulsionante "sustancialmente exento" de estos compuestos se define en el presente documento por tener menos de 10 por ciento en peso de emulsionante de estos compuestos en total. Una formulacion de la invencion se aplica con facilidad a la piel humana en las regiones que incluyen concretamente y de forma ilustrativa, el rostro en su conjunto; las regiones del rostro que rodean la boca, ojos, frente, sien, mejillas, o menton; manos; pies; cuello; cuero cabelludo; codos; pecho; antebrazos; hombros; piernas; y combinaciones de los mismos.

Un cosmetico de la invencion presenta dificultades en la formulacion para mantener la actividad de la protema. En general, se observa que el calentamiento y la mezcla de alta tasa de corte; tecnicas habituales para la formulacion cosmetica, tienden a desnaturalizar la protema activa. Es mas, las protemas activas son propensas a la degradacion microbiana, en especial, cuando un cosmetico de la invencion se procesa en condiciones no esteriles y se almacena a una temperatura ambiente de 20 °C. La formulacion de un cosmetico de la invencion requiere que la protema de eclosion de huevos se exponga a un intervalo limitado de valores de pH, mezclas de corte, y calor durante el proceso de formulacion con el fin de mantener la actividad de la protema de eclosion de huevos presente en el mismo. Para mantener la actividad proteica de eclosion de huevos, un proceso de formulacion cosmetica incluye el tamponamiento de cualquier fase constituyente cosmetica a un pH de entre 5,6 y 8 antes de la introduccion de la protema de eclosion de huevos a la fase. El tamponamiento se practica habitualmente en el campo e incluye la adicion de un acido, una base, una sal del acido, o una combinacion de los mismos para equilibrar una solucion acuosa o fase acuosa de una emulsion a un pH deseado. Se puede apreciar que la medicion del pH es rutinaria, se mide cuantitativamente mediante ajuste volumetrico o con electrodos potenciometricos, tales como los disponibles comercialmente en Thermo Fisher Scientific (Waltham MA, EE. UU.); y se mide cualitativamente con los kits de papel de tornasol.

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Aunque los valores de pH de un cosmetico de la invencion se ajustan entre 5,6 y 7,9 para el mantenimiento de la actividad proteica, estos inhiben parcialmente la degradacion microbiana de las protemas de eclosion de huevos, los biocidas estan presentes en una formulacion de la invencion a fin de mantener la actividad proteica en respuesta a los organismos presentes durante la formulacion, y en respuesta a la siembra continua del cosmetico con varios microbios durante la utilizacion de un recipiente de multiples dosis a traves del contacto topico y respiratorio del sujeto con un cosmetico de la invencion. Como resultado, una formulacion cosmetica de la invencion en las formulaciones de uso multiple y estable durante el almacenamiento incluye un biocida de amplio espectro o una combinacion de biocidas. Un biocida de amplio espectro se define en el presente documento por tener una actividad contra las bacterias Gram positivas, bacterias Gram negativas y hongos asociados a un sujeto humano sano. Biocidas claves en el presente documento incluyen, de manera ilustrativa, acido benzoico, parabenos, acido salidlico, acido carbolico, acido sorbico, alquil p-hidroxibenzoatos, p-clorometacresol, hexaclorofeno, cloruro de benzalconio, cloruro de clorhexidina, triclorocarbanilida, fenoxietanol, acilsarcosinas, glutation, acido malico, acido tartarico, acido ascorbico, ascorbatos, aceites vegetales esenciales, protemas mutacina, y combinaciones de los mismos. En ciertas realizaciones de la presente invencion, solo estan presentes biocidas de origen natural. Biocidas de origen natural incluyen, de manera ilustrativa, filtrados de fermentacion, tales como los de Lactobacillus, Streptococcus mutans, y Leuconostoc; bisabolol; eucaliptol; timol; inositol; saponinas; y extracto natural de plantas, tales como madreselva japonesa (Lonicera japonica), yang-ti (Rumex japonicus), kushen (Sophora flavescens), candock, oregano silvestre, naranja, salvia, manifoil, malva comun, chuanxiong (Cnidii officinale Makino), gentiana verde japonesa (Swertia japonica Makino), bisabolol, tomillo, dan gui (Angelica sinensis), cascara de naranja, abedul, cola de caballo menor, esponja vegetal, castano de Indias, saxffraga trepadora (Saxifraga stolonifera), arnica, lirio, artemisa, peoma, aloe, gardenia, asf como los detallados en M. M. Cowan, Clinical Microbiology Reviews, 12(4), octubre de 1999, pags. 564-582, o combinaciones de los mismos. Dichos extractos se obtienen mediante procedimientos detallados en Clinical Microbiology Reviews, 12(4), octubre de 1999, paginas 573-574 y, a menudo, por el uso de un disolvente organico hidrofilo, tal como un alcohol C-i-Cs, alcoholes politudricos, agua y alcoholes acuosos. En una realizacion de la invencion espedfica, la madreselva japonesa, floretina (manzanas), galangina (Helichrysum aureonitens) se utilizan como biocidas de origen natural, cada uno solo o en combinacion. Se puede apreciar que ademas de las propiedades biocidas, un extracto natural imparte a menudo una fragancia a un cosmetico de la invencion. Un biocida esta presente en envases de uso multiple de los cosmeticos de la invencion en realizaciones espedficas de 0,1 a 5 por ciento en peso total. Se puede apreciar que las cantidades de los biocidas mas alla del 5 por ciento en peso total se incluyen con facilidad, como se desee.

Un cosmetico de la invencion se encuentra en determinadas realizaciones con un pH tamponado a un valor de entre 5,6 y 7,9 y en aun otras realizaciones comprendido entre 6,5 y 6,8, mientras que, en aun otras realizaciones, se encuentra comprendido entre 6,8 y 7,3. Sin desear quedar ligado a teona alguna particular, estos valores de pH facilitan la estabilizacion y la estabilidad durante el almacenamiento del extracto de huevo, tal como componentes del aislado de desove de peces, y del extracto de producto natural. La formulacion de un cosmetico de la invencion se facilita por la preformulacion de al menos dos componentes, incluyendo una emulsion de aceite en agua y una segunda fase de emulsion de agua en aceite o de silicona con fases adicionales opcionales, tales como, por ejemplo, una tercera fase que contiene el extracto de huevo activo, tal como el aislado de desove de peces y/o extracto de producto natural. Alternativamente, se puede apreciar que uno o ambos del aislado de eclosion de huevos o el extracto de producto natural se dispersan con facilidad, ya sea en la emulsion de aceite en agua, emulsion de agua en aceite, de agua en silicona o una formulacion serica. Se ha descubierto, sorprendentemente, que el tamponamiento del pH de diversas fases antes de la adicion de la protema activa de extracto de huevo es cntico en el establecimiento de la estabilidad durante el almacenamiento del cosmetico resultante de la invencion, asf como la actividad proteica sobre la piel del sujeto.

Los componentes minoritarios de la fase de una emulsion de aceite en agua incluyen, de manera ilustrativa, aceites, ceras, esteres, eteres, mantecas, gliceridos, o combinaciones de los mismos, como se ha detallado previamente. Los componentes mayoritarios de la fase de una emulsion de aceite en agua incluyen agua, sales acuosas, agentes humectantes, y varios materiales solubles en agua, como se ha detallado previamente. Un emulsionante de dicho sistema incluye tensioactivos ionicos, tensioactivos no ionicos, como se ha indicado previamente, y tambien incluyen lecitina, liposomas y oleosomas. Otros aditivos no esenciales se proporcionan con facilidad, como se ha detallado previamente, para incluir modificadores de la viscosidad, estabilizadores de emulsion, fragancias, y similares. En realizaciones espedficas, la emulsion de aceite en agua tiene un valor de pH de 5,6 a 7,9. En determinadas realizaciones, la emulsion de aceite en agua tiene un valor de pH de 6,5 y 6,8.

La emulsion de agua en aceite o agua en silicona vana las cantidades relativas de los componentes minoritarios y mayoritarios de la fase y se basa preferentemente en tensioactivos no ionicos y derivados de silicona como emulsionantes. Modificadores de la viscosidad y/o estabilizadores de la emulsion incluyen, de manera ilustrativa, sales solubles en agua, gomas, ceras, y combinaciones de las mismas, como se ha detallado previamente. En realizaciones espedficas, la fase interna es un pH ajustado a un valor de pH de 5,6 a 7,9. En determinadas realizaciones, el valor del pH de la fase interna es de 6,5 a 6,8. Se puede apreciar que varias vitaminas, tales como vitamina E, vitamina K, derivados de acido ascorbico, tales como glucosidos de acido ascorbico, se proporcionan con facilidad en una o ambas fases de emulsion antes mencionadas o se proporcionan como una tercera fase separada.

Un cosmetico de la invencion se forma con facilidad por una combinacion de fases premezcladas como se ha detallado previamente o alternativamente, todos estos componentes se mezclan entre sf en una secuencia convencional a la tecnica como una mezcla unificada. Se proporciona un proceso de mejora del aspecto de la piel que incluye la aplicacion de una composicion de la invencion a la piel de un mairnfero a un nivel de 1 x 10-6 a 0,1 mg 5 del aislado y 2 x 10-7 a 0,02 mg de los acidos grasos insaturados por centfmetro cuadrado de piel durante al menos tres veces por semana para lograr la mejora del aspecto de la piel.

Un sumario de los intervalos tfpicos para los cosmeticos de la invencion se proporciona en las Tablas 1-3. Se debe apreciar que otras formulaciones de base convencionales se ajustan con facilidad como se detalla en el presente 10 documento para estabilizar las protemas de eclosion de huevos, solo o en combinacion, con un extracto de producto natural que contiene acidos grasos y esteroles. Se proporcionan diversas formulaciones de base convencionales claves en el presente documento para un cosmetico en E. W. Flick, "Cosmetic and Toiletry Formulations", 2a ed., vol. 8; 2001, Noyes Publications, Norwich, Nueva York, EE. UU. (ISBN 0-1855-1454-9).

15 Tabla 1. Intervalos tfpicos del cosmetico de la invencion en emulsion de aceite en agua, en los que los porcentajes son porcentajes en peso total. Se proporciona en el presente documento una version en tres fases y cuatro fases.

Formulacion en tres fases

Fase A-1

Agua desionizada: Restante

Modificador de la viscosidad/estabilizador: 0 a 5%

Humectante hidrofilo: 0 a 20 %

Aceite vegetal/manteca: 1 a 20 %

Emoliente a base de vegetal: 0 a 20 %

Coemulsificante: 0 a 10%

Emulsionante secundario: 0 a 10%

Emulsionante de lactilato: 0,1 a 10%

Ajustador del pH/tampon a pH 5,6 a 7,9*: 0 a 5%

Biocida: 0,1 a 10%

Fragancia: 0 a 5%

Compuestos organicos activos no polares: 0 a 1 %

Fase B-1

Agua desionizada: 1 a 20 %

Activo (acido L-ascorbico 2-glucosido): 0 a 10%

Acido cftrico: 0 a 1 %

Dihidrato de citrato sodico: 0 a 1 %

Hidroxido sodico (20 %) a pH 5,6 a 7,9: 0 a 5%

Compuestos organicos activos polares: 0 a 1 %

Fase C-1

Activo (protema activa de eclosion de huevos al 0,034 % 0,001 a 10

Activo (extracto de producto natural) 0,001 a 10

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Formulacion en cuatro fases

Fase A-2a

Agua desionizada Restante

Modificador de la viscosidad/estabilizador: 0 a 5%

Humectante hidrofilo: 0 a sP 0s O CM

Ajustador del pH/tampon a pH 5,6 a 7,9*: 0 a 5%

Biocida*: 0 a 10%

Fragancia: 0 a cn sp 0s

Compuestos organicos activos polares: 0 a 1 %

Fase A-2b

Aceite vegetal/manteca: 1 a 20 %

Emoliente a base de vegetal: 0 a 20 %

Coemulsificante: 0 a 10%

Emulsionante secundario: 0 a 10%

Emulsionante de lactilato: 0, 1 a 10%

Biocida**: 0 a 5%

Fragancia: 0 a 5%

Compuestos organicos activos no polares: 0 a 1 %

Fase B-1

Agua desionizada: 1 a 20 %

Activo (acido L-ascorbico 2-glucosido): 0 a 10%

Acido cftrico: 0 a 1 %

Dihidrato de citrato sodico: 0 a 1 %

Hidroxido sodico (20 %) a pH 5,6 a 7,9: 0 a 5%

Compuestos organicos activos polares: 0 a 1 %

Fase C-1

Activo (protema activa al 0,034 % 0,001 a 10 %

Activo (extracto de producto natural)__________________________________0,001 a 10 %________________

*- El ajuste del pH puede realizarse, sin embargo, tambien despues de la combinacion de las fases A y B, antes de la adicion de la fase C-1.

**- Se requiere una cierta cantidad de biocida, normalmente 0,1 a 5 por ciento en peso total en las formulaciones de uso multiple no esteriles.________________________________________________________

5

Tabla 2. Intervalos tfpicos del cosmetico de la invencion en una emulsion de agua en silicona, en los que los

porcentajes son en porcentaje en peso total.

Fase A

Polisiloxano 1 a 20 %

Otra silicona 1 a 10%

Emulsionante de silicona/tensioactivo 1 a 15 %

Emoliente (sin silicona) 1 a 10 %

Compuestos organicos activos no polares 0 a 1 %

Fase B

Agua desionizada Restante

Glicol 1 a 30 %

Sal de metal alcalino 0,2 a 2 %

Modificador de la viscosidad/estabilizador 0,1 a 3 %

Ajustador del pH 0 a 3 %

Biocida** 0 a 2 %

Compuesto organico activo polar 0 a 1 %

Fase C

Activo (protema activa al 0,034 % 0,001 a 10 %

Activo (extracto de producto natural) 0,001 a 10 %

Tabla 3. Intervalos tfpicos del cosmetico de invencion en una formulacion serica, en los que los porcentajes son en

porcentaje en peso total.

: Fase A Agua desionizada Restante

: Modificador de la viscosidad 0,1 a 2%

: Ajustador del pH 0,1 a 3%

: Glicol 0,01 a 10 %

: Glicerina 0,01 a 10 %

: Biocida 0,01 a 2%

: Compuesto organico activo polar 0 a 1 %

10: Solubilizante Fase B 0,1 a 10%

: Compuesto organico activo no polar 0 a 1 %

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Fase C

Activo (protema activa al 0,034 % 0,001 a 10 %

Activo (extracto de producto natural) 0,001 a 10 %

La presente invencion se describe adicionalmente por los siguientes artmulos:

Artmulo 1. Un cosmetico que comprende:

un aislado proteico de desove de peces que tiene un efecto antiinflamatorio sobre la piel de mairnferos; un extracto de producto natural que comprende acidos grasos insaturados y esteroles, dicho extracto de producto natural tiene una actividad antioxidante sobre la piel de mai^eras; y

un emulsionante o un solubilizante, o una combinacion de los mismos, que forma una mezcla de dicho aislado y dicho extracto.

Artmulo 2. El cosmetico del artmulo 1, en el que dicho aislado proteico de desove de peces esta presente de 0,00001 a 10 por ciento en peso total.

Artmulo 3. El cosmetico del artmulo 1, en el que dicho extracto de producto natural es un extracto vegetal.

Artmulo 4. El cosmetico del artmulo 3, en el que dicho extracto vegetal es un alga marina.

Artmulo 5. El cosmetico del artmulo 1, en el que dicho extracto de producto natural se obtiene de algas rojas, algas marrones o cianobacterias con crecimiento en forma de cesped.

Artmulo 6. El cosmetico del artmulo 1, en el que dichos acidos grasos insaturados incluyen al menos uno de un acido graso omega 3, omega 6 u omega 9.

Artmulo 7. El cosmetico del artmulo 1, en el que dichos esteroles incluyen al menos uno de colesterol, campesterol, estigmasterol o sitosterol.

Artmulo 8. El cosmetico del artmulo 1, que comprende ademas un acido ascorbico o sal de ascorbato.

Artmulo 9. El cosmetico del artmulo 1, que comprende ademas al menos un biocida.

Artmulo 10. El cosmetico del artmulo 9, en el que al menos dicho biocida comprende un extracto vegetal, un filtrado de fermentacion bacteriana, o una combinacion de los mismos.

Artmulo 11. El cosmetico del artmulo 9, en el que al menos dicho biocida comprende un extracto de madreselva japonesa en combinacion con otro extracto vegetal para inhibir organismos encontrados en un sujeto humano sano, dichos organismos son bacterias Gram positivas, bacterias Gram negativas, y hongos.

Artmulo 12. El cosmetico del artmulo 1, en el que dicho aislado proteico de desove de peces, dicho extracto de producto natural, y dicho emulsionante estan sustancialmente exentos de silicona, vaselina, parabeno sintetico, y aceite mineral.

Artmulo 13. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 1 a 12, en el que dicho aislado proteico de desove de peces comprende zonasa.

Artmulo 14. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 1 a 12, en el que dicho aislado proteico de desove de peces consiste esencialmente en zonasa como protema activa.

Artmulo 15. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 1 a 12, en el que dicho aislado proteico de desove de peces comprende leucolectina.

Artmulo 16. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 1 a 12, en el que dicho aislado proteico de desove de peces consiste concretamente en leucolectinas como protemas activas.

Artmulo 17. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 1 a 12, en el que dicho emulsionante consiste concretamente en componentes a base de planta.

Artmulo 18. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 1 a 12, en el que dicha mezcla tiene una fase acuosa, dicha fase acuosa tiene un pH de entre 5,6 y 7,9.

Artmulo 19. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 1 a 12, en el que dicho aislado proteico de desove de peces se obtiene de huevas de salmon.

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Artmulo 20. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 1 a 12, en el que dicho aislado proteico de desove de peces se obtiene de huevas de al menos uno de pescado blanco, coregono, bacalao, capelan y lota.

Artmulo 21. Un cosmetico que comprende:

un aislado proteico de eclosion de huevos que tiene un efecto antiinflamatorio sobre la piel de mairnferos; se proporciona al menos un biocida protector de la actividad de dicho aislado proteico de eclosion de huevos durante 3 meses de almacenamiento a 20 °C, mientras la actividad aplicada a la piel del sujeto tras el almacenamiento permanezca dentro del 80 % de protema no formulada y recien aislada; y

un emulsionante o un solubilizante, o una combinacion de los mismos que forman una mezcla de dicho aislado proteico de eclosion de huevos, dicha mezcla tiene una fase acuosa, tamponada a un pH de entre 5,6 y 7,9.

Artmulo 22. El cosmetico del artmulo 21, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos se obtiene de al menos un caso de huevo de anfibio, un caso de huevo de reptil, un caso de aves de corral, o desove de peces.

Artmulo 23. El cosmetico del artmulo 21, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos, al menos dicho biocida, y dicho emulsionante esta sustancialmente exento de silicona, vaselina, parabeno sintetico, y aceite mineral.

Artmulo 24. El cosmetico del artmulo 21, en el que al menos dicho biocida consiste en extractos de plantas.

Artmulo 25. El cosmetico del artmulo 21, en el que al menos dicho biocida comprende un extracto de madreselva japonesa en combinacion con otro extracto vegetal para inhibir organismos encontrados en un sujeto humano sano, dichos organismos son bacterias Gram positivas, bacterias Gram negativas, y hongos.

Artmulo 26. El cosmetico del artmulo 21, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos esta presente de 0,00001 a 1 por ciento en peso total.

Artmulo 27. El cosmetico del artmulo 21, que comprende ademas un extracto de producto natural que incluye acidos grasos insaturados y esteroles, dicho extracto tiene una actividad antioxidante sobre la piel de marnfferos.

Artmulo 28. El cosmetico del artmulo 27, en el que dicho extracto se obtiene de algas rojas, algas marrones o cianobacterias con crecimiento en forma de cesped.

Artmulo 29. El cosmetico del artmulo 27, en el que dichos acidos grasos insaturados incluyen al menos uno de un acido graso omega 3, omega 6 u omega 9.

Artmulo 30. El cosmetico del artmulo 27, en el que dichos esteroles incluyen al menos uno de colesterol, campesterol, estigmasterol o sitosterol.

Artmulo 31. El cosmetico del artmulo 21, que comprende ademas un acido ascorbico o sal de ascorbato.

Artmulo 32. El cosmetico del artmulo 21, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos, al menos dicho biocida, y dicho emulsionante estan sustancialmente exentos de silicona, vaselina, parabeno sintetico, y aceite mineral.

Artmulo 33. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 21 a 32, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos comprende zonasa.

Artmulo 34. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 21 a 32, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos consiste concretamente en zonasa como protema activa.

Artmulo 35. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 21 a 32, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos comprende leucolectina.

Artmulo 36. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 21 a 32, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos consiste concretamente en leucolectinas como protemas activas.

Artmulo 37. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 21 a 32, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos se obtiene de huevas de salmon.

Artmulo 38. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 21 a 32, en el que dicho aislado proteico de eclosion de huevos se obtiene de huevas de al menos uno de pescado blanco, coregono, bacalao, capelan, y lota.

Artmulo 39. El cosmetico de uno cualquiera de los artmulos 21 a 32, en el que dicho pH se comprende entre 6,5 y 6,8.

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Artfculo 40. El cosmetico de uno cualquiera de los artfculos 21 a 32, en el que dicho pH se comprende entre 6,8 y 7,3.

Artfculo 41. Un kit que comprende un cosmetico de uno de los artfculos 21 a 32 en un envase de uso multiple no esteril junto con instrucciones para su aplicacion a la piel para favorecer el rejuvenecimiento de la piel.

Artfculo 42. Un proceso de produccion de un cosmetico del artfculo 21, que comprende:

la formacion de al menos una fase acuosa y al menos una fase hidrofoba, dicho emulsionante y al menos dicho biocida presentes en al menos una de dicha fase acuosa y al menos una de dicha fase hidrofoba; la combinacion de al menos dicha fase acuosa y al menos dicha fase hidrofoba para formar una emulsion; el tamponamiento de dicha emulsion o al menos una de dicha fase acuosa a un pH de entre 5,5 y 7,9; y

la adicion posterior de dicho aislado proteico de eclosion de huevos a dicha emulsion.

Artfculo 43. El proceso del artfculo 42, en el que dicho pH se comprende entre 6,5 y 6,8.

Artfculo 44. El proceso del artfculo 42, en el que dicho pH se comprende entre 6,8 y 7,3.

Artfculo 45. El proceso del artfculo 42, que comprende anadir ademas un extracto de producto natural a dicha emulsion, dicho extracto de producto natural comprende acidos grasos insaturados y esteroles, dicho extracto de producto natural tiene una actividad antioxidante sobre la piel de mairnferos.

Artfculo 46. El proceso del artfculo 42, en el que dicha adicion ocurre independientemente del calentamiento y de la mezcla de alta tasa de corte.

Artfculo 47. Un proceso de mejora del aspecto de la piel, que comprende:

la aplicacion a la piel de un mamffero de una composicion de la reivindicacion 1 a un nivel de 1 x 10-6 a 0,1 mg de dicho aislado proteico de desove de peces y 2 x 10-7 a 0,02 mg de dichos acidos grasos insaturados por cm cuadrado de piel al menos tres veces por semana para lograr el rejuvenecimiento de la piel.

Artfculo 48. El proceso del artfculo 47, en el que la piel del mamffero es un rostro humano.

Artfculo 49. El proceso del artfculo 47, en el que la piel del mamffero es una de las regiones faciales de un ser humano como boca, ojos, frente, sien, mejillas, o menton.

Artfculo 50. El proceso del artfculo 47, en el que la piel del mam^era es un cuero cabelludo humano.

La presente invencion se ilustra adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes.

EJEMPLO 1

Una crema cosmetica se prepara despues de la formulacion de las tres fases. La fase A se calienta a 75-80 °C con mezcla suficiente para formar una mezcla homogenea. La fase B se mezcla previamente en un recipiente separado a temperatura ambiente y se anade a la fase A a 40 °C o a una temperatura inferior. La fase C se anade a la ahora mezcla de fases A y B combinadas en orden con la mezcla suficiente hasta que se forme una crema homogenea. Se tiene como resultado una crema homogenea y estable durante el almacenamiento.

EJEMPLO 2

Se proporciona una crema cosmetica en la que el aislado proteico de desove de peces y un extracto de producto natural son componentes de la fase A en lugar del aislado proteico de desove de peces y el extracto de producto natural presentes en una fase C separada al Ejemplo 1. Con la formacion de la fase A a temperatura ambiente para evitar la desnaturalizacion de las protemas, se obtiene una crema similar.

EJEMPLOS COMPARATIVOS

Una composicion comparativa al Ejemplo 1 se crea como una crema sin aislado proteico de desove de peces (ejemplo comparativo A). Otra composicion esta desprovista de un extracto de producto natural (ejemplo comparativo B). Asimismo, se produce una formulacion de control que carece tanto de aislado proteico de desove de peces como de extracto de producto natural (ejemplo comparativo C). Un grupo de estudio de 40 individuos se divide en cuatro grupos, cada grupo se aplica diariamente una crema del ejemplo 1 o una de los ejemplos comparativos A-C durante 12 semanas. Se mide el valor basal de la elasticidad de la piel para cada sujeto, y al final de la investigacion sobre la normalizacion con respecto al control del ejemplo comparativo C, la composicion del ejemplo 1 muestra una tersura y suavidad superiores relativas a los ejemplos comparativos A-C. Todas las composiciones se normalizan en un nivel de 1 x 10"6 mg del aislado (si esta presente) y 2 x 10"7 mg de los acidos

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grasos insaturados (si estan presentes) por cm cuadrado de piel por aplicacion.

EJEMPLO 3

Los huevos de salmon sin fertilizar, frescos (Salmo salar) recogidos de hembras en fase reproductiva (finales de otono) se mantienen en hielo, y el extracto se fabrico de manera inmediatamente preferente. Es posible congelar huevos liofilizados en un crioprotector (por ejemplo, 1,2-propanodiol 1,5 M y sacarosa 0,2 M) sin alterar la membrana del huevo. La congelacion debe ser gradual (-1 °C/min) a -80 °C. Los huevos deben descongelarse y mantenerse en hielo durante todo el procedimiento de preparacion del extracto.

Los huevos se lavan dos veces en SSEH o en agua de mar con inhibidores de la proteasa (10 pg/ml). La solucion de lavado se elimina y los huevos se lisan y se homogenizan en un homogeneizador de vidrio-vidrio preenfriado Dounce. El lisado se transfiere a tubos de centrifugacion de polfmeros Beckman Ultra Clear (5 ml) evitando al mismo tiempo la transferencia de las cascaras de huevo, y se centrifugo durante 15 min a 15.000 g a 4°C en una ultracentrifugadora Beckman utilizando un rotor SW55T1. De este modo, se obtienen tres fracciones; fraccion lipfdica superior, fraccion media citoplasmatica, y una fraccion inferior que contiene cascaras de huevo y desechos nucleicos. La fraccion media citoplasmatica es el extracto recogido. Se espera que este extracto que contiene muchos organulos citosolicos, incluyendo mitocondrias, lisosomas y peroxisomas, deba ser transparente y viscoso, y tener un tono anaranjado. Se anaden inhibidores de la proteasa (10 pg/ml de solucion madre) y los extractos se mantienen a -80 °C. Se recogen embriones en fase blastula media de pez cebra, se elimina el lfquido, y se congelan a -20 °C. Para preparar el extracto, los embriones se descongelan en hielo, se lisan y se homogenizan por medio de un homogeneizador de vidrio-vidrio Dounce en una pequena cantidad de SSEH o agua de mar (preferentemente menos de 50 % en v/v de lfquido). El lisado se filtra a traves de un tejido de lino esteril y se centrifuga a 5.000 g a 4 °C durante 20 minutos en un rotor SX4250 utilizando una centrifugadora Beckman X-22R. El extracto citoplasmatico (sobrenadante) se recoge y se anaden los inhibidores de la proteasa (10 pg/ml). El extracto puede ser un filtrado de Millipore (filtro esteril MilliQ de 0,22 micrometros). Los extractos se mantienen a -80 °C. El pH del extracto se mide por papel de tornasol, la concentracion proteica se mide por el ensayo de Bradford, y la osmolaridad se mide por un osmometro.

Este procedimiento general es util para la preparacion de extractos de erizo de mar, camarones, huevos/o huevas de peces o huevos de rana. En pocas palabras, las huevas se recogen de peces hembra prenadas poco despues de liberar sus huevos en un programa de desove (hormona GCh inyectada (1 ml/kg) a 6 a 8 horas antes de la liberacion de sus huevos, por lo general, en la madrugada (2-4 AM), o de ranas prenadas. Las huevas/huevos se liofilizan o congelan a -20 °C o se utilizan frescos. Las huevas se recogen de diferentes tipos de peces. Para el erizo de mar, se inyecta KCl 0,5 M en torno a la boca para provocar el desprendimiento de los huevos. El extracto se prepara a partir de huevos/huevas por aplastamiento (rotura celular u homogeneizacion Dounce) o centrifugacion a velocidades diferentes para separar el citoplasma con todo el contenido, con/sin cascaras de huevo (zona pelucida), con/sin nucleo/citosol, con/sin organulos, con/sin lfpidos. El fraccionamiento adicional puede llevarse a cabo para aislar uno o mas de ARNm, protemas, peptidos pequenos, carbohidratos y lfpidos. Los componentes principales de los acidos grasos en las huevas son acido oleico, acido linoleico, y acidos grasos omega 3.

Tras la aplicacion del protocolo anterior para los extractos de huevos de salmon, los extractos de huevos de salmon teman una concentracion proteica sorprendentemente alta que vana de 100-380 mg/ml, pH entre 6,4-6,8, y una osmolaridad de aproximadamente 350 mOsm. Los extractos son transparentes, viscosos y no filtrables (por filtro de 0,45 micrometros de MilliQ). La protema del extracto se precipita con facilidad tras la adicion de agua o soluciones hidratadas con baja capacidad de tamponamiento debido al alto contenido en protemas y bajo pH. Los extractos pueden neutralizarse a un pH 7,0 mediante la adicion de alcalinos (1-3 pl de NaOH 1M/ml extracto), despues de lo cual, la dilucion en agua y las soluciones hidratadas son posibles. Los extractos del pez cebra teman una concentracion de protemas que variaba de 23 a 26 mg/ml, pH entre 6,4 a 6,8, y una osmolaridad entre 80-150 mOsm. Los extractos son transparentes, no viscosos, filtrables y se diluyen en agua con facilidad en todas las diluciones.

EJEMPLO 4

Las zonasas de salmon purificadas por filtracion en gel ademas de ser purificadas por afinidad pueden purificarse adicionalmente a una pureza de grado secuencial por medio de un procedimiento cromatografico final. Este procedimiento emplea una columna PBE94, con un tampon de Tris-acetato (10 mM, pH 9,0), en el que la elucion posterior se prepara con un gradiente de sal (hasta una sal de NaCl 1 M) en este tampon. Esta etapa aumenta en sf la actividad catalttica de las zonasas en un valor de 7,6 veces, para una purificacion total de 714 veces y con un rendimiento del 28 % del material de partida. Esta etapa de purificacion deja la identidad proteica de las zonasas intacta como un resto de 28 kDa. Por tanto, la etapa no elimina los contaminantes principales proteicos sin relacion de la preparacion de zonasa. El peso molecular de zonasas purificadas es identico al observado por la tecnica de inmunoelectrotransferencia para los restos de zonasa presentes en el fluido de eclosion y en el "crudo de zonasa".

Lo que aparentemente tiene lugar en el tercer y ultimo procedimiento cromatografico es que se eliminan peptidos pequenos contaminantes. Estos peptidos parecen ser oligopeptidos con aproximadamente una docena de residuos,

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originados muy probablemente de las cascaras de huevo y/o del embrion de salmon. Estos peptidos contaminantes parecen ejercer efectos inhibidores sobre la catalisis de zonasa, ya que su eliminacion aumenta la actividad catafftica de la zonasa. Ademas, su presencia interfiere con las primeras etapas en la secuenciacion de Edman de este producto de zonasa. Las dos formas de zonasas contempladas en esta tercera etapa de purificacion se unen de manera algo diferente a la matriz de columna. No obstante, ambas formas tienen secuencias aminoacidas similares en sus porciones N-terminal.

Las secuencias aminoacidas parciales de peptidos generados por CNBr establecieron las zonasas como protemas distintas. El analisis estructural indico que las zonasas pueden tener distintos dominios cataffticos y de union a sustrato, lo que puede explicar su sensibilidad a agentes quelantes de calcio cuando actuan sobre sustratos macromoleculares (fisiologico) (la union se inhibe, por lo tanto, la catalisis se inhibe indirectamente), y tambien su sensibilidad a inhibidores de serina proteasa cuando actuan en sustratos pequenos (la catalisis se inhibe directamente).

EJEMPLO 5

Tanto la zonasa como la leucolectina se purifican de fluido de eclosion de salmon. Para mejorar la concentracion proteica de fluido de eclosion, los huevos de salmon se transfieren a volumenes mmimos de agua antes de la eclosion. La eclosion muy smcrona puede ser inducida por temperaturas elevadas (ambiente), o por desoxigenacion (Oppen-Berntsen et al. 1990, Aquaculture, 86, pags. 417-430), que produce un pequeno volumen de preparacion muy concentrada de zonasa cruda y protemas asociadas.

La purificacion inicial de la zonasa implico la filtracion de los huevos eclosionados de salmon a traves de una estopilla. Este filtrado puede congelarse durante anos sin degradacion significativa de zonasa, antes de descongelarse y emplearse para la purificacion adicional proteica. Este hecho simplifica, en gran medida, la produccion de un material de partida para la purificacion de zonasa de salmon y protemas asociadas, incluyendo leucolectina.

La siguiente etapa, opcional, involucrada ajusta el filtrado de protema a urea 4 M, para disociar fragmentos de la cascara de huevo de salmon, lo que permitio su eliminacion junto con los desechos extranos por centrifugacion a baja velocidad (15.000 g; dos veces durante 15 min). Este material no mostro signos de obstruccion en las columnas, que es caracteffstico de materiales crudos preparados de modo diferente a lo que se ha descrito previamente. Esta preparacion de protema cruda es adecuada para la purificacion por tecnicas cromatograficas convencionales.

La leucolectina de fluido de eclosion puede aislarse junto con zonasa. A partir de preparaciones de zonasa parcialmente purificadas (como se ha descrito previamente), la leucolectina puede aislarse por cromatograffa de exclusion cuando la zonasa en su forma nativa sea sustancialmente mayor que la leucolectina. Para una primera separacion, se utilizan columnas Superdex 16/60, tras lo cual, la zonasa puede eliminarse mediante cromatograffa de afinidad en columnas de benzamidina-sefarosa.

Para preparaciones a gran escala, el uso de ultrafiltracion tambien es adecuado cuando la zonasa en su forma nativa no penetre significativamente en ultrafiltros con exclusion por tamano de 100 kDa a diferencia de la leucolectina.

Los tampones utilizados son Tris milimolar (por ejemplo, 10 mM) con un pH aproximadamente neutro o ligeramente alcalino (pH 7,5-8,5), que contienen 5 mM de NaCl. Se descubre que la protema leucolectina se copurifica con zonasa. El tamano de esta nueva protema, estimado por cromatograffa en condiciones nativas, es de apenas 30 kDa.

El PM estimado de la lectina es de aproximadamente 25-30 kDa. El valor p1 estimado para la lectina de salmon correspondiente es aproximadamente pH = 6,5. Los valores pls observados (Riste, sin publicar) son de pH 6,5 a 6,9 en lectinas perivitelinas de salmon, y de pH 6,4 a 6,6 en lectinas leucocitarias de salmon (la lectina se identifica mediante tecnicas de inmunoelectrotransferencia).

EJEMPLO 6

Un estudio para evaluar la seguridad y eficacia de los productos cosmeticos en forma de una crema de dfa y una crema para el contorno de ojos utiliza las formulaciones desveladas previamente durante un periodo de estudio de 12 semanas. Un total de 40 sujetos de sexo femenino, con edades comprendidas entre 37 y 60 anos, se seleccionaron para el estudio. Todas las 40 participantes completaron el estudio.

En las condiciones de este estudio, los materiales de ensayo identificados como la crema de dfa y la crema para el contorno de ojos, demostraron potencial para mejorar las lmeas faciales finas, arrugas, hiperpigmentacion, uniformidad del tono de la piel, luminosidad de la piel, laxitud de la piel, y aspereza tactil durante un periodo de uso

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de doce semanas. Ademas, los materiales de ensayo son bien tolerados y no demostraron el potencial para causar irritacion cutanea significativa cuando se aplica al rostro.

Se observaron mejoras estad^sticamente significativas en las puntuaciones de Packman y Gans para las lmeas faciales superficiales del rostro, y en las puntuaciones de la escala visual analogica (EVA) para la hiperpigmentacion facial, uniformidad del tono de la piel, luminosidad de la piel, laxitud de la piel, y aspereza tactil siguiendo dos, seis y doce semanas de aplicaciones dos veces al dfa. No se observan aumentos estadfsticamente significativos en la irritacion (eritema, edema, sequedad, escozor, ardor y sensacion de tirantez/sequedad) desde el valor basal en cualquier intervalo post-tratamiento.

EJEMPLO 7

Se realiza un estudio para evaluar la eficacia de conservantes biocidas contra la contaminacion microbiana en productos cosmeticos en forma de una crema de dfa y crema para el contorno de ojos utilizando las formulaciones desveladas previamente durante dos periodos de estudio de 4 semanas. Los metodos empleados se hallan en las Directrices de Microbiologfa CPTP, seccion 20, M-3, A Method for Preservation Testing of Water Miscible Personal Care Products y USP 34, seccion 61, Neutralization/Removal of Antimicrobial Activity. Los organismos de ensayo incluyen Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Aspergillus niger. Para los productos de la categona 2, el conservante se considera eficaz en la muestra examinada, si a), las concentraciones de bacterias viables demuestran como mmimo una reduccion de 3,0 log (99,9 %) a partir del recuento inicial a los 7 dfas, y sin aumento durante la duracion del periodo de ensayo, y b), la concentracion de levaduras y mohos viables demuestra como mmimo una reduccion de 1,0 log (90,0 %) a partir del recuento inicial a los 7 dfas, y sin aumento durante la duracion del periodo de ensayo.

Los resultados del estudio mostraron que la crema de dfa y la crema para el contorno de ojos correspondfan a los criterios de aceptacion para los productos de la categona 2.

EJEMPLO 8

Un estudio se lleva a cabo para determinar el potencial comedogenico de los materiales de ensayo en forma de crema de dfa y crema para el contorno de ojos con formulaciones desveladas previamente mediante la evaluacion de si los materiales de ensayo provocaron microcomedones, tras cuatro semanas de aplicacion reiterada en condiciones de parche oclusivo, en relacion con un control negativo (parche no dosificado). El alcohol de lanolina acetilada sirvio como material de control positivo con el fin de validar el estudio. Los ensayos se llevan a cabo durante un periodo de estudio de 4 semanas. Un total de 15 sujetos, con edades comprendidas entre 22 a 45 anos, se seleccionan para el estudio. Los 15 participates completaron el estudio.

La evaluacion de los especfmenes de biopsia folicular recogidos de los sitios de ensayo indico que los materiales de ensayo y control provocaron puntuaciones globales de evaluacion promedias de 0,5 (1-24% de masas rugosas pequenas). La relacion media de microcomedones por folmulo es 1 % para los materiales de ensayo y el control negativo, y 6 % para el control positivo. No existen diferencias estadfsticamente significativas en las relaciones de microcomedones a folmulos entre los materiales de ensayo y el control negativo, pese a que el control positivo demostro una relacion significativamente mayor que el control negativo.

El estudio mostro que no se describen experiencias adversas durante el periodo de estudio. Los materiales de ensayo no demostraron el potencial para provocar comedogenicidad. Las relaciones de microcomedones por folmulo no son estadfsticamente diferentes para los sitios tratados con cada uno de los materiales de ensayo y los sitios en los cuales se aplica un parche de control negativo sin tratar.

EJEMPLO 9

Se lleva a cabo un estudio para determinar la irritacion cutanea y el potencial de sensibilizacion de un material de ensayo en forma de crema para el contorno de ojos con formulaciones desveladas previamente. Los ensayos se llevan a cabo durante un periodo de estudio de 8 semanas. Este estudio se inicio con 225 sujetos. Once sujetos interrumpieron su participacion en el estudio por razones no relacionadas con el material de ensayo. Un total de 214 sujetos completaron el estudio.

Los ensayos se llevan a cabo mediante la aplicacion de parches con el material de ensayo a un area de ensayo limpiada con alcohol isopropflico al 70 %, y se deja secar. El material de ensayo se aplica en la parte superior de la espalda (entre la escapula) y se deja en contacto directo con la piel durante un periodo de 24 horas. Los parches se aplican en el mismo sitio el lunes, miercoles y viernes para un total de 9 aplicaciones durante el periodo de induccion. Este programa puede haber sido modificado para permitir visitas o vacaciones no realizadas. Si un sujeto no esta en condiciones de informar sobre la fecha de ensayo asignada, se aplica el material de ensayo en 2 dfas consecutivos durante la fase de induccion y/o un maquillaje de dfa se anade al final de la fase de induccion. Los sitios se clasifican por un tecnico supervisor de irritacion cutanea 24 horas despues de la retirada, los martes y jueves, de los parches por los sujetos, y 48 horas despues de la retirada, el sabado, de los parches, a menos que el

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programa de aplicacion de parches se altere como se ha descrito previamente.

Los sitios se clasifican de acuerdo con el siguiente sistema de puntuacion:

Escala de puntuacion dermica

0 Ninguna reaccion visible en la piel + Eritema apenas perceptible 1+ Eritema leve 2+ Eritema bien definido 3+ Eritema y edema graves 4+ Eritema y edema con vesiculacion

Si se produce una reaccion "2+" o mayor, el material de ensayo se aplica a un sitio intacto adyacente. Si se produce una reaccion "2+" o mayor en el sitio nuevo, el sujeto no se aplica de nuevo el parche durante la fase de induccion, aunque supone un desaffo en el dfa apropiado del estudio. A discrecion del director del estudio, los sitios de parche con puntuaciones menores a "2+" pueden haber cambiado.

Despues de un periodo aproximado de 2 semanas de descanso, los parches de estimulacion se aplican a los sitios de ensayo no tratados previamente en la espalda. Tras haber transcurrido 24 horas, los parches se retiran por un tecnico CRL, y los sitios de ensayo se evaluan para las reacciones cutaneas. Los sitios de ensayo se evaluan nuevamente a las 48 y 72 horas. Los sujetos que exhiben reacciones durante la fase de estimulacion pueden haber sido citados para una lectura de 96 horas.

En base a la poblacion del ensayo de 214 sujetos y en las condiciones de este estudio, el material de ensayo en crema para el contorno de ojos no demostro un potencial para provocar irritacion cutanea o sensibilizacion.

EJEMPLO 10

Una serie de estudios se llevan a cabo para determinar la irritacion cutanea y el potencial de sensibilizacion de un material de ensayo en forma de crema de dfa y crema para el contorno de ojos con las formulaciones desveladas previamente con un componente de factor de proteccion solar (FPS) adicional anadido a las formulaciones. Un FPS se define como la relacion de la cantidad de energfa requerida para producir un eritema mmimo sobre la piel protegida con respecto a la cantidad de energfa necesaria para producir un eritema mmimo sobre la piel no tratada, calculado de la siguiente forma:

FPS = DME en piel proteqidaJ/m2 DME sitio de control sin proteger J/m2

I. Se lleva a cabo un estudio para evaluar la eficacia de un producto de protector solar en combinacion con una crema de dfa como se ha formulado previamente mediante la determinacion del factor de proteccion solar (FPS), utilizando el metodo de ensayo de factor de proteccion solar (FPS) internacional (mayo de 2006) en condiciones estaticas. Una formulacion de protector solar convencional se ensaya simultaneamente con el material de ensayo. El patron es el patron de FPS con padimato O/oxibenzona (COLIPA P2) (16,63 ± 3,43). La ubicacion de la aplicacion del material de ensayo/control es la espalda, y es aleatoria, de modo tal, que el area de la espalda que recibe el tratamiento con un material de ensayo individual no es la misma para todos los sujetos. Un total de 10 sujetos de sexo masculino y femenino, con edades comprendidas entre 25 a 57 anos y, en general con buena salud, se seleccionan para el estudio. No se describen acontecimientos adversos durante el curso del estudio.

II. Se lleva a cabo un estudio para evaluar la eficacia de un producto de protector solar con un FPS 30 en combinacion con una crema de dfa como se ha formulado previamente mediante la determinacion de un factor de proteccion (FPA) contra la radiacion ultravioleta A (UVA) en condiciones estaticas de acuerdo con el patron de medicion de la Asociacion de la Industria Cosmetica Japonesa (AICJ) para la proteccion contra los rayos UVA (01/01196). Un total de 10 sujetos adultos participaron en el estudio. Un simulador solar con multiples puertos de arco de xenon (150w, Modelo 15S, Solar Light Company, Filadelfia, PA) que tiene un espectro de emision continuo de luz ultravioleta en la region UVA y UVB (290-400 nm), se utiliza como fuente de irradiacion de luz ultravioleta y se filtra para proporcionar un espectro similar solar basico. Se emplean los siguientes filtros para asegurar las salidas espectrales adecuadas: Schott WG33513 mm y UG1111 mm. La salida de la lampara se mide inmediatamente antes del inicio de los ensayos de cada sujeto con un medidor de intensidad UV (Modelo PMA2100, Solar Light Company, Filadelfia, PA). Las distribuciones espectrales de la salida optica de los simuladores solares se validan anualmente.

El oscurecimiento pigmentario es una reaccion marron-gris a marron negro observada en la piel humana despues de la exposicion a rayos UVA debido a una reaccion de fotooxidacion en la que se oxida un precursor incoloro de la melanina para convertirse en melanina pigmentada. Un oscurecimiento pigmentario persistente mmimo (OPPM) se define como la dosis de irradiacion de luz UVA necesaria para inducir una respuesta tal en la piel no tratada. Antes de la fase de ensayo, el OPPM de cada sujeto se determina por una secuencia geometrica progresiva de exposiciones a luz UV. El aumento de la dosis de radiacion UVA es de 1,25. Dos a cuatro horas despues de la

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irradiacion, los sitios se evaluan para el oscurecimiento pigmentario de acuerdo con el siguiente sistema de puntuacion:

0 Negativo, sin reaccion visible

± Oscurecimiento pigmentario (mmimo) apenas perceptible

1+ Oscurecimiento pigmentario (moderado) con bordes perceptibles inequvocos

2 + Oscurecimiento pigmentario pronunciado o bien definido

Los sitios de ensayo que miden 5 x 10 cm se exponen con un rotulador quirurgico en la espalda del sujeto entre las escapulas y la lmea de cintura, lateral a la lmea media. Estas areas se designan para el material de ensayo o patron de protector solar. Un sitio adyacente se designa para una determinacion simultanea de OPPM en la piel sin tratar. Despues de la aplicacion del producto, cada area de ensayo se subdivide en sitios de aproximadamente 1 cm2 que se utilizan para exposicion en serie definida a la luz UVA. Una porcion de 0,1 ml de material de ensayo o patron se aplica al sitio de ensayo apropiado y se extiende uniformemente en el sitio utilizando un dedal (equivalente a 2 |jl/cm2). La irradiacion de los sitios comenzo entre 15 minutos y 30 minutos despues de la aplicacion. Los tiempos de exposicion se seleccionan para cada sitio tratado basado en el OPPM determinado previamente de la piel sin proteccion y el FPA previsto del material de ensayo o patron. Todos los sitios de ensayo se evaluan dos a cuatro horas despues de la exposicion para determinar la respuesta de oscurecimiento pigmentario persistente mmimo.

Un factor de proteccion de UVA (FPA) se define como la relacion de la cantidad de tiempo requerido para producir un OPPM en la piel protegida con respecto a la cantidad de tiempo necesario para producir un OPPM en la piel sin tratar, calculado de la siguiente forma:

FPA = OPPM en piel protegida OPPM sitio de control sin proteger

El error estandar debe encontrarse dentro del 10 % de los valores medidos.

El numero entero del valor medio de FPA de los sitios irradiados tratados determina el grado de proteccion de los rayos UVA. Para todos los valores FPA equivalentes a 2 o superiores, se aplica la siguiente clasificacion para determinar el grado de proteccion:

Valor FPA

2 o mas, pero menos de 4 o mas, pero menos de 8 o mas

PA (Grado de proteccion de rayos UVA) 4 PA+

8 PA++

PA+++

El material de ensayo presentado en crema de dfa con FPS 30 exhibio un valor medio de proteccion de rayos UVA de FPA 6,5, en los 10 sujetos.

III. Se lleva a cabo un estudio para evaluar un material de ensayo de una crema de dfa como se ha formulado previamente que contiene activos de protector solar para la proteccion de amplio espectro mediante la determinacion de su longitud de onda critica de conformidad con la AMA (Registro Federal/vol. 76, n.° 117/viernes, 17 de junio de 2011/Reglas y Reglamentos).

La absorbancia de un protector solar se integra (suma) a partir de 290 nm a traves de las longitudes de onda UV hasta que la suma alcance el 90 % de la absorbancia total del protector solar en la region ultravioleta (290-400 nm). La longitud de onda en la que la absorbancia sumada alcanza el 90 % de la absorbancia total se define como la "longitud de onda crftica", y se considera que es una medida de la amplitud de la proteccion del protector solar. Un protector solar que tiene una parte significativa de su absorbancia en UVA puede clasificarse como "amplio espectro", cuando la longitud de onda critica sea mayor a 370 nm.

Para cada longitud de onda en el espectro UV completo (290 a 400 nanometros) se determina la transmitancia espectral. Los valores de transmitancia se miden en intervalos de 1 nanometro.

La longitud de onda critica del material de ensayo en crema de dfa con FPS es de 371,00 nm, que cumple con los criterios de longitud de onda critica de un mmimo de 370 nm requerido para el etiquetado de "amplio espectro".

Se lleva a cabo un estudio de ensayo similar para evaluar un material de ensayo en crema de dfa como se ha formulado previamente que contiene activos de protector solar para la proteccion de amplio espectro mediante la determinacion de su factor de proteccion UVA (UVA-FP) in vitro, su relacion FPS/UVA-Fp, y la longitud de onda critica de la crema de dfa cumple con las directrices COLIPA, 2011.

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REIVINDICACIONES

1. Un cosmetico que comprende:

un aislado proteico de desove de peces que tiene un efecto antiinflamatorio sobre la piel de mai^eras; un extracto de producto natural que comprende acidos grasos insaturados y esteroles, teniendo dicho extracto de producto natural una actividad antioxidante sobre la piel de mairnferos; y un emulsionante que forma una mezcla de dicho aislado y dicho extracto.
2. El cosmetico de la reivindicacion 1, en el que dicho aislado proteico de desove de peces esta presente de 0,0001

a 10 por ciento en peso total.
3. El cosmetico de la reivindicacion 1, en el que dicho extracto de producto natural es un extracto vegetal.
4. El cosmetico de la reivindicacion 1, en el que dicho extracto de producto natural es un extracto de algas marinas.
5. El cosmetico de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende ademas un derivado de acido ascorbico,

tal como un glucosido de acido ascorbico.
6. El cosmetico de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que comprende ademas al menos un biocida.
7. El cosmetico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho aislado proteico de desove de peces comprende zonasa.
8. El cosmetico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho aislado proteico de desove de peces comprende leucolectina.
9. El cosmetico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho aislado proteico de desove de peces se obtiene de huevas de salmon.
10. Un kit que comprende un cosmetico de una de las reivindicaciones 1 a 9 en un envase de uso multiple no esteril junto con instrucciones para la aplicacion del mismo a la piel a fin de favorecer el rejuvenecimiento de la piel.
11. Un proceso de mejora del aspecto de la piel que comprende:

aplicar a la piel de un marnffero un cosmetico de la reivindicacion 1 a un nivel de 1 x 10-6 a 0,1 mg de dicho aislado proteico de desove de peces y 2 x 10-7 a 0,02 mg de dichos acidos grasos insaturados por cm cuadrado de piel al menos tres veces por semana para conseguir una mejora del aspecto de la piel.