ES2599391T3

ES2599391T3 - Microórgano dérmico modificado genéticamente que expresa eritropoyetina y/o interferón

Info

Publication number: ES2599391T3
Application number: ES11174205.2T
Authority: ES
Inventors: Stephen F. Bellomo; Itzhak Lippin; Guillermo Alberto Piva; Lior Rosenberg; Mordechay Bukhman; Baruch S. Stern; David Shalhevet; Menachem D. Shavitt; Andrew L. Pearlman; Shani Noam; Einat Almon
Original assignee: Medgenics Medical Israel Ltd
Current assignee: Medgenics Medical Israel Ltd
Priority date: 2003-05-01
Filing date: 2004-04-29
Publication date: 2017-02-01
Anticipated expiration: 2024-04-29
Also published as: CA2748659A1; KR20110079781A; CA2788000A1; KR20110089461A; EP1653807A2; IL213282A0; US20170143374A1; JP5129382B2; CA2748670A1; KR101198189B1; EP1653807A4; AU2010212435B2; KR20060037243A; EP2377401A1; ES2386283T3; EP2377404A1; CA2748661C; EP2377401B1; WO2013118109A1; JP2012035092A

Abstract

Microórgano dérmico modificado genéticamente para utilizar en terapia, en el que dicho microórgano dérmico modificado genéticamente expresa y secreta al menos un producto génico recombinante, en el que dicho producto génico recombinante se selecciona entre eritropoyetina o interferón; en el que dicho microórgano dérmico es un explante que tiene una pluralidad de componentes dérmicos y no incluye capas epidérmicas, reteniendo dichos componentes dérmicos la microarquitectura y la estructura tridimensional del tejido dérmico a partir del cual se derivaba; y en el que dicho microórgano dérmico tiene una dimensión de longitud de 5 a 100 mm y una dimensión de sección transversal de 0,5 a 3,5 mm.

Description

DESCRIPCION

Microorgano dermico modificado geneticamente que expresa eritropoyetina y/o interferon 5 CAMPO DE LA INVENCION

[0001] La invencion se refiere al campo de los microorganos a base de tejidos y microorganos terapeuticos a base de tejidos.

10 ANTECEDENTES DE LA INVENCION

[0002] Se conocen diversos procedimientos para la administracion de agentes terapeuticos. Por ejemplo, los agentes terapeuticos pueden administrarse por via oral, transdermica, por inhalacion, por inyeccion y mediante un deposito de liberacion retardada. En cada uno de estos casos, el procedimiento de administracion esta

15 limitado por los procesos corporales a los que queda sometido el agente, por el requerimiento de una administracion frecuente y por las limitaciones del tamano de las moleculas que pueden utilizarse. En algunos de estos procedimientos, la cantidad del agente terapeutico varla entre administraciones.

[0003] Un microorgano dermico (DMO), que puede mantenerse fuera del cuerpo (“ex vivo" o “in vitro") 20 en un estado funcional autonomo durante un periodo prolongado de tiempo y que puede someterse a diversas

manipulaciones, puede implantarse despues subcutaneamente o en el interior del cuerpo con el fin de tratar enfermedades o trastornos o con fines de cirugla plastica. El DMO puede modificarse para expresar un producto genico de interes. Estos microorganos dermicos modificados se denominan generalmente microorganos terapeuticos dermicos (DTMO).

25

[0004] Se ha observado que los microorganos de piel que incluyen capas de los tejidos dermicos y epidermicos, por ejemplo, de acuerdo con se resume en el documento PCT/IL02/0880, estan asociados con una serie de problemas cllnicos. La recogida de una muestra de piel deja una herida superficial en el paciente que puede durar varias semanas y puede dejar cicatrices. La muestra de piel recogida necesita un procesamiento considerable

30 para generar microorganos a partir de ella. Ademas, se ha observado que la implantacion de microorganos de piel de manera subcutanea o mas profundamente en el cuerpo da lugar al desarrollo de quistes o microquistes de queratina. Adicionalmente, la implantacion de microorganos de piel como injertos en “cortes” en la superficie de la piel requiere una pericia tecnica considerable para manipular el MO manteniendo su orientacion correcta.

35 [0005] La recogida de dermis, por ejemplo, para usarla como “material de relleno” en un procedimiento

de cirugla plastica o de cosmetica, es conocida en la tecnica. Las tecnicas de recogida convencionales incluyen el uso de un dermatomo o un escalpelo para exfoliar una capa de epidermis con el fin de exponer una seccion de la dermis. El dermatomo o escalpelo puede usarse entonces de nuevo para recoger manualmente la seccion expuesta de la dermis.

40

[0006] Otro aparato convencional para la recogida de dermis, aunque no de uso comun, es el recogedor de tejido dermico Martin, comercializado por Padgett (artlculo n° P-225), para la recogida de cilindros dermicos de la espalda para su posterior implantacion en los labios en procedimientos cosmeticos de aumento de labios. Para utilizar este dispositivo, que no es de uso comun, un tubo de corte afilado que incluye un tubo reutilizable de paredes

45 gruesas con un diametro interior de aproximadamente 4,5 mm se gira manualmente a muy poca velocidad. Normalmente, el uso de este tipo de dispositivo requiere ejercer presion sobre la superficie de la piel directamente sobre el sitio de recogida y la colocacion de suturas de tension activa a medida que se empuja el tubo hacia delante. Ademas, generalmente la dermis recogida resultante no tiene forma ni dimensiones uniformes e incluye “bloques” de epidermis a cada extremo del cilindro dermico.

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DESCRIPCION RESUMIDA DE LA INVENCION

[0007] En base a la presente descripcion contenida en el presente documento, la presente invencion proporciona un microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar en terapia, en el que dicho microorgano

55 modificado geneticamente expresa y secreta al menos un producto genico recombinante, en que dicho producto genico recombinante se selecciona entre eritropoyetina o interferon; en el que dicho microorgano dermico es un explante que tiene una pluralidad de componentes dermicos y no incluye capas epidermicas, conservando dichos componentes dermicos la microarquitectura y la estructura tridimensional del tejido dermico del que se derivaban, y en el que dicho microorgano tiene una dimension de longitud de 5-100 mm y una dimension de seccion transversal 60 es de 0,5-3,5 mm.

[0008] La presente invencion y realizaciones de la misma se indican en las reivindicaciones adjuntas.

[0009] La invencion proporciona un DMO/DTMO con capacidad de mantenimiento ex vivo en un estado 65 generalmente viable que puede permitir la realization de diversas manipulaciones en el DMO mientras se conserva

un alto nivel de production y secretion del agente terapeutico deseado. Ademas, los casos de la presente

descripcion proporcionan un procedimiento de recogida de un DMO y subsiguiente implantacion de un DTMO sin la formacion de quistes o microquistes de queratina, por ejemplo, al implantar el DTMO de manera subcutanea o mas profundamente en el cuerpo. Ademas, los expertos en la tecnica apreciaran que los procedimientos y dispositivos de acuerdo con algunos casos de la presente descripcion pueden ser relativamente simples y, por lo tanto, el nivel de 5 destreza requerido de un profesional para llevar a cabo estos procedimientos y/o usar los dispositivos de la presente descripcion puede no ser tan exigente como el requerido en los procedimientos convencionales.

[00010] El microorgano dermico (DMO) tiene una pluralidad de componentes dermicos que pueden

incluir celulas del tejido dermico y una matriz circundante. El dMo conserva generalmente una microarquitectura y 10 estructura tridimensional del organo dermico del que se ha obtenido y las dimensiones del DMO permiten la difusion pasiva de los nutrientes y gases adecuados a las celulas y la difusion de los residuos celulares fuera de las celulas para minimizar la toxicidad celular y concomitante muerte debida a una nutricion insuficiente y a la acumulacion de residuos.

15 [00011] En algunas realizaciones de ejemplo de la invencion, el microorgano dermico de la invencion no

produce queratina o produce cantidades despreciables de queratina.

[00012] En algunas realizaciones de la invencion, el microorgano dermico no produce queratina ni/o quistes de queratina despues de una implantacion subcutanea o mas profunda en el cuerpo.

20

[00013] En otra realizacion de la invencion, el microorgano dermico de la invencion produce microquistes de queratina, que se atrofian en un periodo de tiempo relativamente breve, por ejemplo, dlas o semanas despues de la implantacion subcutanea.

25 [00014] En otra realizacion de la invencion, el microorgano dermico de la invencion contiene follculos

pilosos y glandulas sebaceas que se atrofian despues de un breve periodo de tiempo, por ejemplo, dlas o semanas.

[00015] En otra realizacion de la invencion, el microorgano dermico de la invencion contiene glandulas que conectan con la superficie de la piel despues de un breve periodo de tiempo, por ejemplo, dlas o semanas.

30

[00016] Mas casos de ejemplo de la descripcion proporcionan un procedimiento y un aparato para la recogida de un microorgano dermico. El procedimiento puede incluir la estabilizacion y/o el soporte de una estructura de tejido cutaneo de la que va a recogerse un microorgano dermico, por ejemplo, de modo que la estructura de tejido cutaneo se mantenga en una forma y/o posicion deseadas, la separation de al menos una portion del

35 microorgano dermico de la estructura de tejido cutaneo y el aislamiento del cuerpo del microorgano dermico separado. De acuerdo con algunos de estos casos de ejemplo, la configuration de soporte puede incluir un primer elemento tubular y la herramienta de corte puede incluir un segundo elemento tubular adaptado para su insertion a lo largo del primer elemento y de manera sustancialmente coaxial con este. De acuerdo con otros casos de ejemplo, la configuracion de soporte puede incluir una camara de vaclo con una superficie de soporte interior capaz de 40 mantener la estructura de tejido cutaneo en una forma y/o posicion deseadas para permitir que la herramienta de corte separe el DMO de dicha estructura de tejido cutaneo.

[00017] Mas realizaciones de ejemplo de la invencion proporcionan un microorgano dermico modificado geneticamente que expresa al menos un producto genico recombinante, en que el microorgano dermico tiene varios

45 componentes dermicos, incluidas las celulas y la matriz del tejido dermico, que conservan la microarquitectura y la estructura tridimensional del tejido dermico del que se han obtenido y tiene unas dimensiones seleccionadas para permitir la difusion pasiva de los nutrientes y gases adecuados a las celulas y la difusion de los residuos celulares fuera de las celulas para minimizar la toxicidad y concomitante muerte celular debida a una nutricion insuficiente y a la acumulacion de residuos, en que al menos algunas de las celulas del microorgano dermico expresan al menos un 50 producto genico recombinante o al menos una porcion de dicho al menos un producto genico recombinante.

[00018] Aun mas realizaciones de ejemplo de la invencion proporcionan un microorgano dermico modificado geneticamente que expresa al menos una protelna recombinante, en que el microorgano dermico tiene varios componentes dermicos, incluidas las celulas y la matriz del tejido dermico, que conservan la microarquitectura

55 y la estructura tridimensional del tejido dermico del que se han obtenido y tiene unas dimensiones seleccionadas para permitir la difusion pasiva de los nutrientes y gases adecuados a las celulas y la difusion de los residuos celulares fuera de las celulas para minimizar la toxicidad y concomitante muerte celular debida a una nutricion insuficiente y a la acumulacion de residuos, en que al menos algunas de las celulas del microorgano dermico expresan al menos una porcion de al menos una protelna recombinante.

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[00019] En algunas realizaciones de la invencion, el microorgano dermico modificado geneticamente de la invencion sustancialmente no produce queratina.

[00020] En algunos casos, la descripcion proporciona un procedimiento para la administration de un 65 producto genico recombinante producido por el microorgano dermico a un receptor.

[00021] En algunos casos, la descripcion proporciona un procedimiento para inducir un efecto fisiologico local o sistemico mediante la implantacion de un microorgano dermico en un receptor.

[00022] En otro caso, la descripcion proporciona un procedimiento para la administracion de una protelna 5 de interes a un sujeto. El procedimiento incluye la implantacion del microorgano dermico modificado geneticamente

en la piel, bajo la piel o en otros lugares del cuerpo.

[00023] En otro caso, la descripcion proporciona un procedimiento para la implantacion de un microorgano dermico para evitar o reducir la formation de quistes de queratina.

10

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

[00024] Las realizaciones no limitantes de la invention se describen en la descripcion siguiente, que ha de leerse con referencia a las figuras anejas a este documento. En las figuras, las estructuras, elementos o partes

15 de estos identicos y similares que aparecen en mas de una figura estan marcados generalmente con referencias identicas o similares en las figuras en las que aparecen. Las dimensiones de los componentes y las caracterlsticas mostradas en las figuras se han seleccionado fundamentalmente por razones de conveniencia y claridad de la presentation y no estan necesariamente a escala.

20 La figura 1 es un diagrama de bloques esquematico de un procedimiento de ejemplo para la production y utilization de microorganos terapeuticos dermicos (DMO);

las figuras 2A y 2B muestran, respectivamente, un analisis de correlation entre la secretion in vitro por mIFNa-TMO y hEPO-TMO antes de la implantacion y los niveles en el suero in vivo despues de su implantacion, de acuerdo con una realizacion de la invencion;

25 las figuras 3A y 3B muestran, respectivamente, el aumento de los niveles de hEPO en el suero determinados por un ensayo ELISA y el aumento del recuento de reticulocitos despues de la implantacion autologa de un TMO en un cerdo enano, de acuerdo con una realizacion de la invencion;

la figura 4 es una ilustracion esquematica de una grafica que muestra los niveles de secrecion de eritropoyetina humana (hEPO) por DTMO-hEPO preparados a partir de seis pieles humanas diferentes;

30 la figura 5 muestra la histologla de un DTMO y un TMO de piel de espesor parcial;

la figura 6 muestra la tincion inmunohistoqulmica (IHC) y con hematoxilina y eosina (H&E) de un DTMO; la figura 7 muestra los niveles in vivo de hEPO en el suero y el efecto fisiologico sobre los niveles de hematocrito despues de la implantacion subcutanea de DTMO-hEPO y TMO-hEPO de piel de espesor parcial en ratones SCID; la figura 8 muestra el analisis cllnico e histologico de DTMO-hEPO y TMO-hEPO de piel de espesor parcial 35 implantados subcutaneamente en ratones SCID;

la figura 9 muestra el analisis histologico de MO de piel injertados en cortes de la piel (MO de piel de espesor parcial, derecha) o implantados subcutaneamente (DMO, izquierda) a los 17 dlas despues de la implantacion en voluntarios sanos;

la figura 10 es un diagrama de flujo esquematico que ilustra un procedimiento de recogida de un DMO;

40 las figuras 11a-11c son ilustraciones esquematicas de etapas de ejemplo de la recogida de un DMO de acuerdo con el procedimiento de la figura 10;

la figura 12 es una ilustracion esquematica de una herramienta de pinzamiento que puede usarse en un aparato de recogida de tejido dermico;

la figura 13 es una ilustracion esquematica de un aparato de recogida de tejido dermico que incluye un tubo cortador 45 de cilindros insertado en una fuente de tejido para un DMO y que recoge coaxialmente con una aguja gula interior; las figuras 14a-14c son ilustraciones esquematicas de una vista frontal, una vista lateral y una vista desde arriba, respectivamente, de un aparado de recogida de tejido dermico de vaclo.

la figura 15 es una ilustracion esquematica de una vista de section transversal del aparato de las figuras 14a-14c que soporta un microorgano dermico en una position deseada;

50 la figura 16 es una ilustracion esquematica de una vista de seccion transversal del aparato de la figura 15 que soporta externamente un microorgano dermico que va a recogerse en una posicion deseada; la figura 17 es una ilustracion esquematica de un aparato de recogida de tejido dermico; la figura 18 es una ilustracion esquematica de un aparato de recogida;

la figura 19 es una ilustracion esquematica de la implementation del aparato de recogida de la figura 18 para la 55 recogida de un DMO;

la figura 20 es un diagrama de flujo que ilustra un procedimiento de implantacion de un DTMO;

la figura 21 es un diagrama de flujo que ilustra un procedimiento de ablation de un DTMO;

la figura 22 es una ilustracion esquematica de un sistema para el procesamiento de un DMO recogido.

60 DESCRIPCION DETALLADA DE REALIZACIONES DE EJEMPLO

[00025] La descripcion siguiente se presenta para capacitar a un experto en la tecnica para realizar y usar la invencion de acuerdo con se proporciona en el contexto de una aplicacion particular y de sus requerimientos. Varias modificaciones a las realizaciones descritas seran evidentes para los expertos en la tecnica, y se pueden

65 aplicar los principios generales definidos en este documento a otras realizaciones. Por lo tanto, la presente invencion no pretende limitarse a las realizaciones particulares mostradas y descritas. En otros casos, los procedimientos,

procedimientos y componentes bien conocidos no se han descrito en detalle para no complicar la presente invention.

[00026] En la description detallada siguiente se exponen numerosos detalles especlficos con el fin de

5 proporcionar una profunda comprension de la presente invencion. Sin embargo, los expertos en la tecnica entenderan que la presente invencion puede ponerse en practica sin estos detalles especlficos.

DEFINICIONES DE EJEMPLO DE LOS TERMINOS USADOS EN ESTE DOCUMENTO

10 [00027] El termino “explante”, de acuerdo con se usa en este documento, se refiere en algunas

realizaciones de la invencion a una section de un tejido u organo vivo extralda de uno o mas tejidos u organos de un sujeto.

[00028] El termino “microorgano dermico” o “DMO”, de acuerdo con se usa en este documento, se refiere

15 en algunas realizaciones de la invencion a una estructura aislada de un tejido u organo derivada de, o identica a un explante que ha sido preparada para conservar la viabilidad y funcionalidad celular, a la vez que se mantienen al menos algunas de las interacciones in vivo similares a las de los tejidos o el organo del que se ha obtenido. Los microorganos dermicos pueden incluir varios componentes dermicos que conservan la microarquitectura del tejido o el organo del que se derivan y la estructura tridimensional del tejido dermico del que se derivan, con dimensiones 20 seleccionadas para permitir la difusion pasiva de los nutrientes y gases adecuados a las celulas dentro del MO y la difusion de los residuos celulares fuera de las celulas del MO para minimizar la toxicidad y concomitante muerte celular debida a una nutrition insuficiente y a la acumulacion de residuos. Los microorganos dermicos pueden constar esencialmente de varios componentes de la dermis (componentes tisulares de la piel localizados debajo de la epidermis). Estos componentes pueden contener fibroblastos de la piel, celulas epiteliales, otros tipos de celulas, 25 bases de follculos pilosos, terminaciones nerviosas, glandulas sudorlparas y sebaceas y vasos sangulneos y linfaticos. Cuando se usa mas adelante en este documento, la descripcion de las realizaciones que se refieren a un MO se refiere tambien a un MO dermico. Cuando se usa el termino “tejido dermico”, se refiere tambien a “organo dermico”.

30 [00029] De acuerdo con se usa en este documento, el termino “microarquitectura” se refiere, en algunas

realizaciones de la invencion, a la caracterlstica del explante por la que, en una realization, al menos aproximadamente el 50%, en otra realizacion, al menos aproximadamente el 60%, en otra realizacion, al menos aproximadamente el 70%, en otra realizacion, al menos aproximadamente el 80% y, en otra realizacion, al menos aproximadamente el 90% o mas de las celulas de la poblacion mantienen in vitro su contacto flsico y/o funcional con 35 al menos una sustancia celular o no celular con la que estaban en contacto flsico y/o funcional in vivo. Preferentemente, las celulas del explante mantienen al menos una actividad biologica del organo o el tejido del que se han aislado.

[00030] El termino “donante”, de acuerdo con se usa en este documento, se refiere en algunas 40 realizaciones de la invencion a un sujeto del que se extrae el explante que se usa para formar uno o mas

microorganos o esta ya en forma de estos.

[00031] El termino “microorgano terapeutico (TMO)”, de acuerdo con se usa en este documento, se refiere en algunas realizaciones de la invencion a un microorgano (MO) que puede usarse para facilitar un objetivo

45 terapeutico como, por ejemplo, un MO que ha sido alterado o modificado geneticamente para producir un agente terapeutico, como una protelna o una molecula de ARN. El agente terapeutico puede ser o no una sustancia presente en el cuerpo de forma natural. Cuando se usa mas adelante en este documento, la descripcion de las realizaciones que se refieren a un TMO se refiere tambien a un DTMO, que es un MO dermico terapeutico modificado geneticamente.

50

[00032] El termino “implantation”, de acuerdo con se usa en este documento, se refiere en algunas realizaciones de la invencion a la introduccion de uno o mas TMO o DTMO en un receptor, en que dichos TMO o DTMO pueden derivarse de tejidos del receptor o de tejidos de otro individuo o animal. Los TMO o DTMO pueden implantarse en un corte en la piel, implantarse subcutaneamente o colocarse en otros lugares deseados dentro del

55 cuerpo del receptor.

[00033] El termino “receptor”, de acuerdo con se usa en este documento, se refiere en algunas realizaciones de la invencion a un sujeto en el que se implantan uno o mas TMO o DTMO.

60 [00034] El termino “pinzamiento” (por ejemplo, de la piel), de acuerdo con se usa en este documento,

puede referirse a cualquier action similar o a cualquier action con una finalidad similar, por ejemplo, “pellizco” (por ejemplo, de la piel).

[00035] El termino “in vitro’’, de acuerdo con se usa en este documento, debe entenderse que incluye “ex

65 vivo”.

[00036] El termino “tubo cortador de cilindros”, de acuerdo con se usa en este documento, puede

referirse individual o colectivamente a los terminos “herramienta de corte”, “tubo de corte” y “aguja cortadora de cilindros”, asi como a cualquier otro elemento con funcionalidad similar.

5 [00037] Aunque, por razones de claridad y completitud de la presentacion, en este documento se

describen todos los aspectos de la production y la utilization de los DTMO, y los casos de la description se describen desde el principio hasta el final del proceso, debe entenderse que cada uno de los casos descritos en este documento puede usarse con otras metodologias y/o equipamiento para llevar a cabo otros casos y puede usarse para otros fines, algunos de los cuales se describen en este documento. La presente descripcion incluye partes 10 dedicadas a la preparation y el mantenimiento de microorganos dermicos para su transformation en DTMo. Debe entenderse que los microorganos dermicos producidos de acuerdo con estos casos de la descripcion pueden usarse para otros fines distintos de la transformacion en DTMO.

[00038] El microorgano es un microorgano dermico que incluye varios componentes de la dermis, por

15 ejemplo, fibroblastos y/o componentes epiteliales que contienen terminaciones nerviosas y/o glandulas sudoriparas y/o glandulas sebaceas y/o vasos sanguineos y linfaticos y/o fibras de elastina y/o fibras de colageno y/o componentes endoteliales y/o celulas derivadas del sistema inmunitario y/o matriz extracelular. Como demuestran los resultados de los ensayos que se resumen en la section de ejemplos mas adelante (ejemplo 5, figura 8), la implantation subcutanea convencional de un microorgano que incluye capas epidermicas (“Mo de piel de espesor 20 parcial”) en ratones y cerdos (no se muestran los datos de los cerdos) puede dar lugar a la formation de quistes de queratina o macroquistes de queratina. En contraste, cuando se toman muestras de tejido cutaneo para obtener un DMO, de acuerdo con realizaciones de ejemplo de la invention, no se observan quistes ni macroquistes en ratones, cerdos ni humanos. Debe senalarse que la actividad biologica (por ejemplo, la secretion de una proteina terapeutica, por ejemplo, eritropoyetina y, como resultado, el aumento del hematocrito) de un DTMO, de acuerdo con 25 realizaciones de ejemplo de la invencion, puede ser comparable o incluso mayor que la de un TMO derivado de piel de espesor parcial (vease el ejemplo 4). Es decir, ambos tipos de preparacion pueden liberar la misma cantidad de eritropoyetina; sin embargo, el DTMO puede producir y secretar mayores cantidades de proteina por unidad que un TMO derivado de piel de espesor parcial.

30 [00039] En general, la produccion de un DTMO puede incluir la recogida de un DMO, el mantenimiento

del DMO y/o la modificacion del DMO y/o su alteracion genetica y, en algunas realizaciones, la verificacion de la produccion de un agente deseado (por ejemplo, proteinas) por el DMO. La utilizacion de un DTMO puede incluir la produccion de sustancias terapeuticas, como proteinas, dentro del propio cuerpo de un paciente o un animal para el tratamiento del sujeto. Por ejemplo, el DTMO puede implantarse en o bajo la piel o dentro del cuerpo del sujeto para 35 producir el agente o la proteina in vivo. En el caso de que el tejido sea otro sujeto, el implante se protege opcionalmente de la reaction del sistema inmunitario del receptor, por ejemplo, alojando el DTMO en una capsula o cubierta inmunoprotectora. Por ejemplo, puede colocarse una membrana que rodee al DTMO colocando dicho DTMO en una capsula antes de la implantacion o al contrario. La membrana debe tener un tamano de poro suficientemente grande para permitir el paso de nutrientes, residuos y del agente terapeutico, pero suficientemente 40 pequeno para evitar el paso de las celulas del sistema inmunitario.

[00040] En una realization de la invencion, el DMO incluye toda la seccion transversal de la dermis. En

otra realizacion de la invencion, el microorgano dermico incluye parte de la seccion transversal de la dermis. En otra realizacion, el DMO incluye la mayor parte de la seccion transversal de la dermis, es decir, la mayor parte de las 45 capas y componentes de la dermis, incluidas la dermis papilar y reticular. En otra realizacion, el DMO incluye principalmente tejido dermico, pero tambien puede incluir tejido adiposo. En algunas realizaciones de la invencion, el DMO no produce queratina o produce una cantidad despreciable de queratina, con lo que se evita la produccion de quistes de queratina despues de la implantacion subcutanea en un paciente.

50 [00041] El DMO que va a recogerse puede extraerse del cuerpo por cualquier procedimiento de

extraction de tejidos conocido en la tecnica, como los procedimientos de biopsia. El procedimiento de recogida deja intacta la microarquitectura del tejido del que se extrae. En una realizacion, el DMO puede obtenerse por biopsia directa y luego cortarse al tamano requerido o escindir de este el tejido no deseado. En otra realizacion, puede obtenerse una muestra de tejido por biopsia directa, en la que se obtiene el tamano deseado del microorgano y no 55 se requiere ningun procesamiento adicional.

[00042] En algunas realizaciones de la invencion, el microorgano dermico se recoge directamente del

cuerpo y la herramienta de corte usada para la recogida del microorgano dermico puede tener, por ejemplo, aproximadamente 1-4 mm de diametro. En otra realizacion puede tener, por ejemplo, 1,71 mm de diametro. En otra 60 realizacion puede tener, por ejemplo, 1-3 mm de diametro. En otra realizacion puede tener, por ejemplo, 2-4 mm de diametro. En otra realizacion puede tener, por ejemplo, 1-2 mm de diametro. En otra realizacion puede tener, por ejemplo, aproximadamente 1,5 mm de diametro. En otra realizacion puede tener, por ejemplo, aproximadamente 2 mm de diametro. En algunas realizaciones, el microorgano dermico recogido puede no conservar su forma cilindrica despues de la recogida, es decir, al menos una dimension de su seccion transversal puede expandirse mientras que 65 al menos otra dimension de su seccion transversal puede contraerse. En una realizacion, por ejemplo, al menos una dimension puede ser de 0,5-3,5 mm y al menos una dimension puede ser de 1,5-10 mm.

[00043] Las dimensiones del tejido que se recoge son de aproximadamente 5-100 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge pueden ser de, por ejemplo, aproximadamente 10-60 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 20-60

5 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 20-50 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 20-40 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 20-100 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 30-100 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se 10 recoge son, por ejemplo, aproximadamente 40-100 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 50-100 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 60-100 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 70-100 mm de longitud. En otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 80-100 mm de longitud. En 15 otra realizacion, las dimensiones del tejido que se recoge son, por ejemplo, aproximadamente 90-100 mm de longitud, un aparato biorreactor cerrado y esteril puede usarse para transportar, soportar y/o alterar el DMO o DTMO durante la recogida, mm en longitud. En otra realizacion, la longitud puede ser de aproximadamente 20 mm. En otra realizacion, la longitud puede ser de aproximadamente 30 mm. En otra realizacion, la longitud puede ser de aproximadamente 40 mm.

20

[00044] Cuando un MO dermico tiene las dimensiones listadas anteriormente puede mantenerse in vitro, por ejemplo, en un medio de cultivo con las condiciones de cultivo de tejidos adecuadas por periodos de tiempo prolongados, por ejemplo, varios dlas, varias semanas o varios meses. El DMO puede mantenerse in vitro, por ejemplo, en medios de cultivo definidos. En una realizacion de ejemplo, los medios de cultivo pueden incluir factores

25 de crecimiento, suero bovino fetal (FCS) o suero humano, por ejemplo, sustituto de suero sintetico (SSS). En otra realizacion de ejemplo, los medios de cultivo pueden incluir suero del sujeto donante o del receptor. En otra realizacion mas, los medios de cultivo pueden incluir suero autologo.

[00045] En algunos casos de la descripcion, se puede utilizar un aparato biorreactor esteril y cerrado 30 para transportar, soportar y/o alterar el DMO o DTMO durante el proceso de recogida, alteracion e implantacion, por

ejemplo, desde la recogida hasta la implantacion, de acuerdo con se describe en detalle mas adelante, por ejemplo, con referencia a la figura 22. De acuerdo con algunas realizaciones de ejemplo, al menos parte del aparato biorreactor puede estar compuesto de material desechable.

35 [00046] En algunos casos de la descripcion, el aparato biorreactor puede cargarse en una estacion de

acoplamiento, que puede usarse para llevar a cabo diversos procesos y/o para mantener el DMO o DTMO en las condiciones deseadas. Opcionalmente, el aparato puede controlarse por ordenador de acuerdo con un protocolo.

[00047] De acuerdo con algunas realizaciones de la invention, en una determinada sesion de tratamiento 40 puede usarse solo una portion del DTMO generado. El resto del tejido del DTMO puede retornarse para su

mantenimiento y/o puede almacenarse (por ejemplo, criogenicamente o de otro modo) para un uso posterior.

[00048] Una caracterlstica de algunos casos de la descripcion es que es posible procesar conjuntamente un elevado numero de microorganos en un proceso por lotes para obtener los DTMO, de acuerdo con se describe

45 mas adelante. Esto puede permitir un procesamiento mas conveniente, pero no permite determinar por separado el nivel de secrecion de cada DTMO.

[00049] En algunas realizaciones de ejemplo de la invencion, puede llevarse a cabo un ensayo de potencia para el agente terapeutico, que puede ser producido y/o secretado por un unico DTMO o por un lote de

50 DTMO. El ensayo de potencia puede incluir, por ejemplo, un ensayo de proliferation celular en el que la respuesta de proliferacion de las celulas depende principalmente de la presencia del agente terapeutico en el medio de cultivo de las celulas.

[00050] El termino “estructura de tejido cutaneo”, de acuerdo con se usa en este documento, se refiere a 55 una estructura de componentes tisulares que puede ser estabilizada y/o soportada por los aparatos definidos en este

documento para permitir la recogida de un microorgano dermico a partir de esta. Una estructura de tejido cutaneo puede incluir componentes del tejido epidermico y componentes del tejido dermico. Opcionalmente, la estructura de tejido cutaneo puede incluir tejido adiposo y/o tejido muscular en la proximidad del tejido dermico.

60 [00051] De acuerdo con algunos casos de la descripcion, un procedimiento de recogida del microorgano

dermico puede incluir la estabilizacion y el soporte de una estructura de tejido cutaneo, a partir de la cual va a recogerse el microorgano, por ejemplo, de modo que al menos el microorgano dermico y/o uno o mas segmentos tisulares adicionales proximos se mantengan en una forma y/o position deseadas, la separation de al menos una porcion del microorgano dermico del tejido circundante y la extraction del microorgano dermico separado, de 65 acuerdo con se describe en detalle mas adelante.

[00052] La figura 1 muestra una vision general en forma de diagrama de bloques de una metodologla 200 para la produccion y la utilization de los DMO y DTMO, de acuerdo con un caso de ejemplo de la description. En el bloque 202 se recoge un DMO de un sujeto. En algunos casos de la descripcion, el DMO se recoge del mismo sujeto al que despues se administrara el tratamiento. En un caso de la descripcion, el DMO es de tejido dermico.

5 Opcionalmente, se recogen otros tejidos y se utilizan de manera similar a la descrita a continuation con referencia al tejido dermico. Aunque el procedimiento que se describe mas adelante es de ejemplo, es posible usar otros procedimientos para la recogida de muestras de tejido en algunos casos de la descripcion. Si se desea, el DMO puede almacenarse criogenicamente para un uso posterior (es decir, su introduction en la misma etapa del proceso). Alternativamente, en algunas realizaciones el DMO puede reimplantarse directamente en el paciente del

10 que se recogio para producir un efecto terapeutico, cosmetico u otro efecto fisiologico.

[00053] Para que un DMO sea un microorgano viable, debe tener al menos una dimension suficientemente pequena para que los nutrientes puedan difundirse a todas las celulas del DMO desde un medio nutritivo que esta en contacto con el DMO y para que los productos de desecho puedan difundirse fuera del DMO al

15 medio. Esto permite al DMO ser viable in vitro durante el tiempo suficiente para el procesamiento posterior descrito mas adelante y para la utilizacion opcional del DMO como fuente de un agente terapeutico, como una protelna. Generalmente, el procedimiento de recogida de un DMO de acuerdo con se describe anteriormente resulta en un DMO con una vida util in vitro de varios meses.

20 [00054] Despues de haber recogido el DMO, este se inspecciona opcionalmente de manera visual para

determinar si esta formado adecuadamente y tiene las dimensiones deseadas. La inspection tambien puede realizarse opticamente. El DMO se monta entonces opcionalmente en un soporte y se transporta (bloque 206) a un aparato (el biorreactor, de acuerdo con se describe mas adelante) en el que puede alterarse geneticamente. Se prepara un agente de modification genetica adecuado (bloque 208). Algunos procedimientos de ejemplo alternativos

25 de preparation del agente incluyen la creation de allcuotas con una cantidad deseada, mediante el uso de un tampon de dilution definido previamente, de un agente modificante como, por ejemplo, un vector vlrico, el posible almacenamiento criogenico y la descongelacion del agente modificante a temperatura controlada (0-4°C) y la validacion del la actividad del agente modificante. Todos estos procesos son bien conocidos en la tecnica. En este momento, el DMO puede almacenarse criogenicamente para su introduccion posterior en el mismo punto del

30 proceso. Esto puede realizarse mediante protocolos conocidos para la congelation gradual de tejidos y celulas, por ejemplo, con el uso del medio DMEM con DMSO al 10%.

[00055] En el bloque 210 se altera geneticamente el DMO. De acuerdo con se describe anteriormente, se conocen numerosos procedimientos de alteration genetica que pueden usarse en combination con la presente

35 invention. A modo de ejemplo, la siguiente descripcion se basa en el uso de un vector vlrico para la insertion de un gen en las celulas del DMO. Este procedimiento es bien conocido y no se describira en detalle, con exception de la metodologla y aparatos especiales para la introduccion del virus en el DMO.

[00056] En el bloque 212, el DTMO alterado geneticamente se somete opcionalmente a ensayos para

40 determinar las tasas de produccion y secretion del agente terapeutico. Existen diversos procedimientos para

determinar la cantidad de secrecion, por ejemplo, ELISA, otros inmunoensayos, analisis espectral, etc. Ademas, se analiza opcionalmente la calidad de la secrecion, por ejemplo, en cuanto a esterilidad y actividad de la protelna secretada. Esto puede realizarse periodicamente o de manera continua en llnea. El DTMO puede almacenarse criogenicamente en este momento para su uso posterior.

45

[00057] En los bloques 214 y 216 se determina la cantidad de DTMO requerida para la produccion de un efecto terapeutico deseado. De acuerdo con se indica mas adelante, los requerimientos de dosis terapeutica pueden estimarse a partir de las tasas de secrecion medidas, los parametros del paciente y estadlstica poblacional aplicada a la relation estimada o conocida entre la secrecion in vitro y los niveles en el suero in vivo.

50

[00058] En el bloque 218 se carga el numero seleccionado de DTMO en las herramientas de implantation. Algunas herramientas de implantation de ejemplo se han descrito anteriormente. Si se necesita, para aloinjertos o xenoinjertos o por otros motivos, el DTMO puede encapsularse. Si el DTMO debe transportarse antes de su transporte a las herramientas de implantacion, se coloca opcionalmente en una estacion de mantenimiento

55 (220), en la que se mantienen la temperatura, humedad, etc., a niveles que permiten al DTMO conservar la viabilidad durante el transporte. El material de DTMO restante se mantiene opcionalmente in vitro para su uso posterior. Esto puede realizarse en las condiciones de un incubador caliente (30-37°C), en las condiciones descritas anteriormente o en las condiciones de un incubador frlo (4°C), que pueden prolongar su viabilidad in vitro.

60 [00059] En el bloque 224 se implanta un subgrupo de los DTMO en el sujeto. Una realization de ejemplo

de un procedimiento de implantacion se describe anteriormente. A los expertos en la tecnica se les ocurriran otros procedimientos de implantacion, que dependen principalmente de la geometrla especlfica del microorgano que se use. Los estudios en animales han demostrado que los DMO y DTMO conservan la viabilidad in vivo, en el sentido de que el DTMO continua produciendo y secretando el agente terapeutico durante un periodo de semanas o meses

65 despues de la implantacion (figura 7). En los estudios en animales se producen cantidades terapeuticas durante periodos de hasta 160 dlas (o mas). Mientras que el tejido del DMO o DTMo parece integrarse o absorberse bien en

el sujeto en el que se implanta (especialmente si el tejido se implanta en un tejido del mismo tipo que aquel del que se recogio), las celulas que incluyen el DMO o el DTMO continuan produciendo y secretando el agente terapeutico.

[00060] En ambos casos se determina opcionalmente el rendimiento del DTMO in vivo (bloque 228). A

5 partir de esta evaluacion, por ejemplo, y/o de datos pasados del paciente (bloque 226), puede ajustarse entonces la dosis para el paciente (bloque 230) mediante el aumento de la cantidad del implante o la extraction de parte del implante, de acuerdo con se describe mas adelante. A medida que cambia la eficacia del implante pueden implantarse DTMO adicionales.

10 [00061] Generalmente, la alteration genetica puede incluir la incorporation en las celulas por

manipulation genetica de un gen o genes seleccionados que hacen que las celulas produzcan y opcionalmente secreten un agente terapeutico deseado, como una protelna. En una realization de la invention, al menos parte del proceso de sostenimiento del DMO durante la alteracion genetica, as! como la alteracion genetica en si misma, pueden llevarse a cabo en un biorreactor, de acuerdo con se describe mas adelante.

15

[00062] A continuation se hace referencia a la figura 10, que ilustra esquematicamente un diagrama de flujo de un procedimiento de recogida de un microorgano dermico de acuerdo con algunos casos de ejemplo de la description y a las figuras 11a-11c que ilustran sistematicamente etapas de ejemplo de la recogida de un microorgano dermico 1160 situado bajo una portion de tejido cutaneo 1120 de acuerdo con el procedimiento de la

20 figura 10.

[00063] De acuerdo con se indica en el bloque 1002, el procedimiento puede incluir opcionalmente la administration local de un anestesico, por ejemplo, de acuerdo con se conoce en la tecnica, en la proximidad del DMO que va a recogerse.

25

[00064] De acuerdo con se indica en el bloque 1004, el procedimiento puede incluir ademas la insertion de una gula interior 1110 en la porcion del tejido 1120. Es posible hacer finas incisiones (“cortes de lanceta”) 1190 y 1130 en la piel exterior, preferentemente mediante una lanceta quirurgica, un escalpelo o cualquier otra sonda afilada, para permitir una facil insercion de la gula interior 1110 y tambien para evitar o minimizar la recogida de

30 tejido epidermico. La gula interior 1110 puede insertarse en la porcion 1120 a traves de la incision 1190, por ejemplo, generalmente paralela a la superficie de la piel y/o a una profundidad deseada dentro de la dermis o justo debajo de la piel. La gula interior 1110 puede incluir una aguja fina, una varilla o cualquier otro objeto fino, generalmente derecho, que pueda colocarse dentro de la dermis o en un espacio subcutaneo. Por ejemplo, la gula interior 1110 puede incluir una aguja de un tamano de 20-25G, por ejemplo, aproximadamente de 22G, de acuerdo 35 con se conoce en la tecnica. La gula interior 1110 puede insertarse en la dermis o en el espacio subcutaneo y/o empujarse generalmente en sentido horizontal, es decir, en paralelo con la superficie de la piel. La longitud de penetration de la gula 1110 en la dermis puede corresponder generalmente a la longitud del DMO que va a recogerse. Por ejemplo, la gula interior 1110 puede insertarse manualmente y guiarse manualmente dentro de la dermis a una profundidad deseada, en que esta profundidad puede mantenerse sustancialmente uniforme durante 40 todo el proceso de insercion. Alternativamente, la gula interior 1110 puede insertarse en el espacio subcutaneo y a lo largo de este mediante detection manual del llmite entre la dermis fibrosa y una capa adiposa suave subyacente a medida que se inserta la gula interior.

[00065] De acuerdo con se indica en el bloque 1006, el procedimiento puede incluir opcionalmente guiar 45 la gula interior 1110 para salir de la piel, por ejemplo, por la incision 1130. De acuerdo con algunos casos de

ejemplo, la distancia entre las incisiones 1190 y 1130 puede ser aproximadamente igual o mayor que la longitud requerida para el DMO que va a recogerse.

[00066] De acuerdo con se indica en el bloque 1008, el procedimiento puede incluir tambien la insercion 50 de una herramienta de corte tubular coaxialmente con la gula interior 1110 y alrededor de esta, de modo que el

DMO puede quedar atrapado, es decir colocado entre la gula interior 1110 y la herramienta de corte. Esto puede conseguirse, por ejemplo, mediante el uso de una herramienta de corte tubular con un diametro interno mayor que el diametro externo de la gula interior 1110. La herramienta de corte puede incluir cualquier herramienta de corte adecuada, por ejemplo, un tubo cortador de cilindros 1150. El tubo cortador de cilindros 1150 puede incluir una 55 herramienta tubular, en general afilada simetricamente, por ejemplo, un tubo hipodermico procesado para tener un borde de corte afilado con una forma deseada. El tubo cortador de cilindros 1150 puede incluir, por ejemplo, un tubo de calidad medica estandar con una pared delgada, por ejemplo, con un espesor de entre 0,05 mm y 0,3 mm. El tubo cortador de cilindros 1150 puede tener un diametro, por ejemplo, de entre 1 mm y 10 mm. Las dimensiones, por ejemplo, el diametro del tubo cortador de cilindros 1150 y/o las dimensiones de la gula interior 1110 pueden 60 predeterminarse a partir del volumen y/o las dimensiones del DMO que se pretende recoger. El tubo cortador de cilindros 1150 puede tener un extremo afilado (“punta”) 1140 adaptado para servir como borde de corte. El tubo cortador de cilindros 1150 puede insertarse a traves de la porcion de tejido 1120, preferentemente despues de haber creado unas incisiones iniciales, por ejemplo, la incision 1130, en la superficie exterior de la piel con el fin de evitar la recogida de tejido epidermico.

65

[00067] De acuerdo con un caso de ejemplo de la descripcion, por ejemplo, tal como se ilustra en la

figura 11b, el procedimiento puede incluir la colocacion inicial del extremo 1140 del tubo cortador de cilindros 1150 sobre un extremo distal de la guia interior 1110, por ejemplo, en la incision 1130 y el deslizamiento del tubo cortador de cilindros 1150 a lo largo de la longitud de la guia interior 1110, por ejemplo, hacia la incision 1190, para recoger el DMO dermico.

5

[00068] De acuerdo con se indica en el bloque 1010, en un caso, el procedimiento puede incluir la rotacion del la herramienta de corte mientras dicha herramienta de corte avanza, por ejemplo, hacia el extremo proximal de la guia interior. Por ejemplo, puede usarse un taladro medico u otra herramienta adecuada con un mecanismo de rotacion para girar el tubo cortador de cilindros 1150 mientras se hace avanzar manual o

10 automaticamente, con lo que se recoge el DMO 1160 mas suavemente. Por ejemplo, un extremo proximal 1180 del tubo cortador de cilindros 1150 puede conectarse a un taladro medico 1170 como, por ejemplo, el taladro Aesculap Micro Speed fabricado por Aesculap AG & Co. KG, Am Aesculap Platz, D-78532 Tuttlingen, Alemania, que puede incluir una unidad de control, un motor, un cable de conexion, una pieza de mano y/o un interruptor de pie, con los numeros de catalogo GD650, GD658, GB661, GB166 y GB660, respectivamente. Es posible usar un taladro 15 semejante o cualquier otro taladro o mecanismo de rotacion adecuado para girar la herramienta de corte a una velocidad de rotacion apropiada para el corte del tejido dermico, por ejemplo, a una velocidad de rotacion relativamente alta, por ejemplo, a una velocidad superior a 1.000 rpm, por ejemplo, de entre 1.000 rpm y 10.000 rpm. Por ejemplo, el tubo 1150 puede hacerse girar a una velocidad de rotacion superior a 2.000 rpm, por ejemplo, de aproximadamente 7.000 rpm. Alternativamente, puede usarse una velocidad de rotacion relativamente baja, inferior 20 a 1.000 rpm o ninguna rotacion, de acuerdo con se describe mas adelante. Opcionalmente, la velocidad de rotacion del taladro puede variar de manera oscilante, es decir, la direccion de rotacion puede variar periodicamente entre la direccion de las agujas del reloj y la direccion contraria a las agujas del reloj. Mientras se gira por el taladro 1170, el tubo cortador de cilindros 1150 puede hacerse avanzar manual o automaticamente, por ejemplo, hacia el extremo proximal de la guia interior 1110, por ejemplo, hacia la incision 1190. El procedimiento puede incluir tambien la 25 parada del movimiento de avance del tubo cortador de cilindros 1150, por ejemplo, cuando la punta 1140 ha sobrepasado en su avance justamente la incision 1190. De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, al menos parte de la superficie interior y/o de la superficie exterior del tubo cortador de cilindros 1150 puede estar recubierta con un material de baja friccion, por ejemplo, teflon, parileno o cualquier otro material de recubrimiento adecuado, por ejemplo, para facilitar la separacion del tejido recogido de la superficie interior de la herramienta de 30 corte en una accion posterior y/o para reducir las fuerzas que actuan sobre el tejido durante la accion de corte, de acuerdo con se describe mas adelante.

[00069] En otro caso, un mecanismo de insercion de accion rapida, por ejemplo, accionado por un resorte, puede usarse para facilitar la penetracion del tubo cortador de cilindros 1150 en el sitio seleccionado para la

35 recogida y el corte de la dermis, por ejemplo, sin un movimiento de rotacion sustancial del tubo cortador de cilindros.

[00070] De acuerdo con se indica en el bloque 1012, el procedimiento puede incluir la retirada de la guia interior 1110, por ejemplo, con el DMO 1160 ensartado en esta, del interior del tubo cortador de cilindros 1150, con lo que se extrae el DMO 1160 de la porcion 1120.

40

[00071] De acuerdo con algunos casos, el DMO 1160 puede dejarse insertado en la guia interior 1110. En tal caso, la guia interior 1110 puede usarse para manejar, transportar y/o manipular el DMO 1160. Alternativamente, por ejemplo, el DMO 1160 puede desprenderse cuidadosamente de la guia interior 1160 y pasarse a una camara de procesamiento de un biorreactor, por ejemplo, de acuerdo con se describe en detalle mas adelante

45 con referencia a la figura 22 o a diversos dispositivos de transferencia (no se muestran) adaptados para transferir el DMO a un soporte diferente o a una camara para su procesamiento posterior. Tales dispositivos de transferencia pueden incluir, por ejemplo, forceps, agarradores de vacio o cualquier otro dispositivo mecanico capaz de asir el DMO 1160 y/o empujarlo para desprenderlo de la guia interior 1110. Ademas, es posible usar liquidos adecuados, como liquidos esteriles, solos o en combinacion con los medios indicados anteriormente para facilitar el 50 desprendimiento del DMO de la guia interior 1160.

[00072] De acuerdo con se indica en el bloque 1014, el procedimiento puede incluir tambien la retirada de la herramienta de corte, por ejemplo, el tubo cortador de cilindros 1150 de la porcion de la piel 1120.

55 [00073] Los expertos en la tecnica apreciaran que es posible implementar cualquier combinacion de las

acciones anteriores para realizar la recogida de acuerdo con casos de la descripcion. Ademas, pueden usarse otras acciones o series de acciones.

[00074] De acuerdo con algunos casos de la descripcion, el procedimiento de recogida puede incluir

60 adicionalmente la estabilizacion y/o el soporte externo del DMO que va a recogerse y/o del tejido en la proximidad del DMO que va a recogerse, por ejemplo, mediante el uso de un dispositivo y/o mecanismo de soporte externo, por ejemplo, ademas de la estabilizacion y/o el soporte interno de la dermis, por ejemplo, por la guia interior, de acuerdo con se describe mas adelante.

65 [00075] Tambien se hace referencia a la figura 12, que ilustra esquematicamente una herramienta de

pinzamiento estabilizante 1200 que puede usarse en combinacion con un aparato de recogida de tejido dermico, de

acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion.

[00076] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, la herramienta 1200 puede incluir un mecanismo de pinzamiento con bordes de pinzamiento 1210. Por ejemplo, la herramienta 1200 puede incluir una

5 pinza de pellizco o unos forceps, por ejemplo, de acuerdo con se conocen en la tecnica. La herramienta 1200 puede incluir una pinza de resorte con una fuerza de pinzamiento constante o con una fuerza de pinzamiento variable controlable. La herramienta 1200 puede colocarse en la superficie de la piel en paralelo con la gula interior 1110 y a cada lado de esta, por ejemplo, de modo que cuando esta cerrada, los bordes de pinzamiento 1210 pueden situarse por debajo de la gula interior 1110. Cuando los bordes de pinzamiento 1210 estan muy proximos entre si pueden 10 funcionar para estabilizar y/o soportar la gula interior 1110 y/o una porcion de la piel 1240 asociada con el DMO que va a recogerse, de modo que el DMO puede estabilizarse mientras se corta con el tubo 1150. En este caso, el tubo cortador de cilindros 1150 puede empujarse a traves de los bordes de pinzamiento 1210 de manera concentrica o no concentrica con la gula interior 1110 mientras se aplica fuerza. De acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion, los bordes de pinzamiento 1210 pueden incluir al menos una o dos filas de dientes de sierra 1260 para 15 un mejor pinzamiento de la porcion 1240 y para reducir, por ejemplo, minimizar el movimiento lateral de la piel durante el proceso de extraccion de cilindros.

[00077] Es posible usar otras herramientas y/o mecanismos para aplicar fuerza sobre la piel exterior con el fin de causar una compresion similar de la dermis que rodea la gula interior. Alternativamente, pueden usarse

20 otros dispositivos y/o procedimientos para la estabilizacion de la dermis que va a recogerse, como girar la gula interior y mantenerla en una posicion sustancialmente fija con respecto a la rotacion del tubo cortador de cilindros.

[00078] Tambien se hace referencia a la figura 13, que ilustra esquematicamente una vista de una seccion transversal del tubo cortador de cilindros 1150 insertado coaxialmente sobre la gula interior y a lo largo de esta

25 1110, de acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion.

[00079] De acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion, la gula interior 1110 puede colocarse en la porcion de la piel 1120 en una posicion tal que un eje 1125 de la gula 1110 se situe sustancialmente en el centro del DMO 1160. En tal caso, el tubo cortador de cilindros 1150 puede alinearse sustancialmente de manera coaxial

30 con la gula interior 1110, de modo que el DMO 1160 se inserta en la gula interior 1110 de manera aproximadamente simetrica.

[00080] Sin embargo, de acuerdo con otros casos de ejemplo de la descripcion, la gula interior y el tubo cortador de cilindros pueden colocarse en cualquier otra disposicion adecuada. Por ejemplo, la gula interior puede

35 colocarse en el espacio subcutaneo, de modo que el DMO que se desea recoger puede estar situado principalmente por encima de la gula interior y envuelto alrededor de esta. Por consiguiente, el tubo cortador de cilindros puede insertarse sobre la gula interior y/o guiarse de modo que la gula interior se situe proxima o en contacto con la superficie interna inferior del tubo cortador de cilindros a medida que este corta el DMO. En tal caso, la gula interior puede sostener el DMO, el cual puede reposar, por ejemplo, a lo largo de la superficie superior de la gula interior al 40 extraerlo.

[00081] De acuerdo con algunos casos de la presente descripcion, los procedimientos manuales descritos anteriormente puede ser facilitados por un aparato integrado (no se muestra) configurado para llevar a cabo algunos o todos los procedimientos anteriores para la recogida del DMO. Por ejemplo, con respecto a una realizacion de un

45 procedimiento de recogida, el aparato integrado puede estar configurado para permitir situar y guiar la insercion de la gula interior 1110, sujetar la herramienta de pinzamiento 1200, guiar la insercion del tubo cortador de cilindros 1150 y controlar su movimiento durante el proceso de corte y/o desprender el DMO 1160 sujeto a la gula interior 1110. Un aparato semejante puede hacer posible una operacion relativamente sencilla al llevar a cabo un procedimiento de recogida.

50

[00082] De acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion, un procedimiento para la recogida de un DMO de un sujeto puede incluir la generacion y/o el mantenimiento de una estructura de tejido cutaneo asociada con el DMO, por ejemplo, situada generalmente en un sitio de recogida seleccionado para la recogida del DMO, con una forma y posicion deseadas, de modo que la herramienta de corte pueda ser capaz de separar al menos parte del

55 DMO del tejido en la proximidad de dicho DMO. Por ejemplo, una porcion de la epidermis en la proximidad del sitio seleccionado para la recogida puede levantarse, por ejemplo, sujetando al menos una parte de la porcion de la epidermis a un area predefinida, por ejemplo, sustancialmente plana, de la superficie, de modo que al menos parte de la estructura de tejido cutaneo pueda levantarse y mantenerse en la forma y/o posicion deseadas. De acuerdo con algunos casos de ejemplo, la sujecion de la epidermis a la superficie predefinida puede incluir la aplicacion de 60 vaclo, por ejemplo, de acuerdo con se escribe mas adelante. Alternativa o adicionalmente, la sujecion de la epidermis a la superficie predefinida puede incluir la aplicacion de un adhesivo a la superficie.

[00083] A continuacion se hace referencia a las figuras 14a-14c, que ilustran esquematicamente una vista frontal, una vista lateral y una vista desde arriba, respectivamente, de un aparato de recogida de tejido dermico 1400

65 para la recogida de un DMO, de acuerdo con un caso de ejemplo de la descripcion, y a la figura 15, que ilustra esquematicamente una vista de seccion transversal de la implementacion del aparato 1400 implementado para

soportar externamente una estructura de tejido cutaneo que incluye un DMO 1510 en una posicion deseada, de acuerdo con un caso de la descripcion

[00084] El aparato 1400 puede incluir una camara de vaclo, por ejemplo, una camara longitudinal generalmente 5 cillndrica 1406, con una superficie de soporte superior 1430 conectada fluldicamente con una entrada de vaclo 1402

por medio de varios canales 1404. La entrada de vaclo 1402 puede conectarse fluldicamente con al menos una fuente de vaclo, por ejemplo, una bomba de vaclo (no se muestra), para proporcionar condiciones de vaclo a la camara 1406. La superficie 1430 y/o los canales 1404 pueden configurarse para permitir la sujecion a la superficie 1430 de al menos parte de una capa epidermica 1508 asociada con el DMO 1510, por ejemplo, situada 10 generalmente por encima del DMO 1510, cuando se aplica el vaclo a la camara 1406, por ejemplo, mediante la fuente de vaclo.

[00085] El aparato 1400 puede incluir tambien un canal de gula 1416 para guiar una herramienta de corte, por ejemplo, un tubo cortador de cilindros 1520 y mantener la herramienta de corte en una situacion predeterminada, por

15 ejemplo, a una distancia predeterminada de la superficie superior 1430. Por ejemplo, la superficie superior de la herramienta de corte 1520 puede situarse, por ejemplo, a una distancia de aproximadamente 1 mm de la superficie superior 1430. En otros casos, pueden usarse tambien otros intervalos como, por ejemplo, 0,3-2,0 mm. El canal 1416 puede incluir, por ejemplo, un canal generalmente cillndrico con un diametro ligeramente mayor que el diametro exterior del tubo cortador de cilindros 1520. El tubo cortador de cilindros 1520 puede incluir una aguja 20 cortadora de cilindros con un tamano de, por ejemplo, entre 1 mm y 10 mm, por ejemplo 14G (que corresponde a un diametro exterior de aproximadamente 2,11 mm) y con un borde de corte afilado simetricamente.

[00086] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, la superficie 1430 puede ser plana, generalmente curvada o puede tener cualquier otra forma. Por ejemplo, en un caso, la superficie 1430 puede tener un radio de

25 curvatura de aproximadamente 3,5 mm. En una realizacion la camara 1406 puede tener una anchura de, por

ejemplo, aproximadamente 4 mm. Ademas, en algunos casos, la camara 1406 puede tener una altura de, por

ejemplo, aproximadamente 5 mm. En otros casos, pueden usarse tambien otros intervalos como, por ejemplo, de 325 mm para el radio de curvatura de la superficie 1430 y/o para la anchura y/o la altura de la camara 1406, por ejemplo, en algunos casos de la descripcion es posible usar cualquier dimension deseada en el intervalo de 3-25

30 mm. La longitud de la camara 1406 puede ser generalmente similar a la longitud del DMO que se recoge, por

ejemplo, de aproximadamente 30 mm de longitud; sin embargo, es posible usar otros intervalos, por ejemplo, de 5100 mm para la longitud de la camara.

[00087] De acuerdo con algunos casos de ejemplo, el aparato 1400 puede incluir dos canales 1408 situados al 35 menos parcialmente a lo largo de dos lados de la camara 1406, respectivamente, para permitir el pinzamiento de la

capa epidermica 1508 de acuerdo con se describe mas adelante. Los canales 1408 pueden colocarse, por ejemplo, centrados a una altura deseada, por ejemplo, a aproximadamente la misma altura a la que va a recogerse el centro del DMO. En un caso, el centro de los canales 1408 puede colocarse a una altura de aproximadamente 2 mm por debajo de la superficie superior 1430, de modo que el pinzamiento pueda estabilizar y/o soportar el tejido que se 40 corta. De acuerdo con otros casos de la descripcion, el aparato 1400 puede incluir tambien dos elementos membranosos flexibles 1412 a cada lado de la superficie interior o de la superficie exterior de los canales 1408 para permitir el pinzamiento exterior del tejido sin afectar sustancialmente a las condiciones de vaclo aplicadas a la camara 1406. El aparato 1400 puede no incluir elementos 1412 ni/o canales 1408.

45 [00088] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, un procedimiento para la recogida del DMO 1510 mediante el aparato 1400 puede incluir la realizacion de dos incisiones (no se muestran), por ejemplo, haciendo dos cortes de lanceta mediante un escalpelo en una porcion de la piel asociada con el DMO 1510 a una distancia predeterminada, por ejemplo, a aproximadamente 30 mm, que puede corresponder a los puntos por los que se desea que el tubo cortador de cilindros 1520 entre y salga de la epidermis 1508 (“los sitios de penetracion de 50 entrada y salida”). Las incisiones pueden hacerse con el fin de asegurar que sustancialmente no habra ningun componente epidermico en los dos extremos del DMO recogido 1510 y/o para mantener la forma deseada de los sitios de penetracion, de modo que puedan sanar eficientemente, es decir, rapidamente y/o dejando cicatrices relativamente pequenas. El procedimiento puede incluir tambien la puesta en contacto del aparato 1400 con la capa epidermica 1508 (“el sitio de recogida”), de modo que las incisiones se situen por debajo de la camara 1406, es 55 decir, entre los puntos 1410 y 1414. Las incisiones pueden situarse en los puntos 1410 y/o 1414, respectivamente, o pueden situarse entre los puntos 1410 y 1414 para ayudar a forzar la “apertura” de los cortes de lanceta una vez que se aplica el vaclo a la camara 1406. De acuerdo con algunos casos de ejemplo, el aparato 1400 puede incluir opcionalmente un mecanismo configurado para crear los cortes de lanceta, por ejemplo, lancetas accionadas por resortes que producen los cortes de lanceta, por ejemplo despues de colocar el aparato 1400 en el sitio de recogida 60 y antes de aplicar el vaclo a la camara 1406.

[00089] El procedimiento puede incluir tambien la insercion del tubo cortador de cilindros 1520 en el canal 1416. El tubo cortador de cilindros 1520 puede conectarse, por ejemplo, por medio de un conector, por ejemplo, un portabrocas Jacobs o un soporte de friccion, a un taladro medico o a cualquier otra herramienta y/o mecanismo 65 adecuado, por ejemplo, el taladro 1170 (figura 11), capaz de girar el tubo cortador de cilindros 1520. Opcionalmente, la velocidad de rotacion del taladro puede variar de manera oscilante, es decir, la direccion de rotacion puede variar

periodicamente entre el “sentido de las agujas del reloj” y el “sentido contrario a las agujas del reloj”.

[00090] El procedimiento puede incluir tambien la aplicacion de vaclo a la camara 1406, por ejemplo, por activacion de la fuente de vaclo. En consecuencia, la estructura de tejido cutaneo puede ser aspirada a la camara

5 1406 y la epidermis 1508, por ejemplo, entre los cortes de lanceta, puede quedar firmemente sujeta contra la superficie 1430. La epidermis 1508, la dermis 1506 y/o los componentes de tejido adiposo 1504 pueden ser aspirados tambien a la camara 1406, dependiendo del espesor de cada una de estas capas de tejido y de las dimensiones de la camara 1406. Por lo tanto, las dimensiones de la camara 1406 pueden disenarse de acuerdo con el espesor anticipado de una o mas de las capas de tejido y/o, por ejemplo, de acuerdo con se describe en este 10 documento, puede aplicarse un pinzamiento exterior de modo que el tejido adiposo 1504 aspirado a la camara de vaclo 1406 pueda impulsarse hacia abajo y sustancialmente fuera de la camara 1406.

[00091] El procedimiento puede incluir ademas el giro del tubo cortador de cilindros 1520, por ejemplo, mediante el taladro 1170 (figura 11) a una velocidad de rotacion relativamente alta, por ejemplo, de mas de 1.000

15 rpm, por ejemplo, de entre 1.000 rpm y 10.000 rpm. Por ejemplo, el tubo cortador de cilindros 1520 puede hacerse girar a una velocidad de rotacion superior a 2.000 rpm, por ejemplo, de aproximadamente 7.000 rpm. Alternativamente, puede usarse una velocidad de rotacion relativamente baja de menos de 1.000 rpm o ninguna rotacion, de acuerdo con se describe anteriormente. El procedimiento puede incluir tambien el avance del tubo cortador de cilindros 1520 a lo largo de la camara de vaclo 1406, por ejemplo, al menos a lo largo de toda la longitud 20 de la camara 1406. El tubo cortador de cilindros 1520 puede guiarse a traves de un canal 1416 con el fin de asegurar que el microorgano dermico 1510 se recoja de aproximadamente la misma profundidad en la estructura de tejido cutaneo a lo largo de la camara 1406. El tubo cortador de cilindros 1520 puede hacerse avanzar manualmente o mediante un accionador motorizado (no se muestra), por ejemplo, para controlar la velocidad de avance del tubo cortador de cilindros 1520.

25

[00092] El procedimiento puede incluir tambien la separacion del DMO 1510 del tejido que rodea dicho DMO 1510. Por ejemplo, el aparato 1400 puede incluir una extension 1418, por ejemplo, con una longitud de entre 1 mm y 5 mm y un radio sustancialmente igual al radio del canal 1416, situada sustancialmente opuesta al canal 1416, de modo que el tubo cortador de cilindros 1520 puede avanzar en la extension 1418 despues de atravesar la camara

30 1406. Alternativamente, puede colocarse una superficie de corte 1440, por ejemplo, formada por silicona u otro material adecuado en la extension 1418, de modo que el tubo cortador de cilindros puede cortar en la superficie 1440 para separar el DMO recogido. Adicionalmente, es posible aplicar vaclo dentro del tubo cortador de cilindros 1520, por ejemplo desde su extremo posterior, de modo que el dMo 1510 puede ser aspirado activamente dentro del tubo cortador de cilindros 1520, lo que impulsa la separacion final del DMO del tejido circundante.

35

[00093] El procedimiento puede incluir ademas la retirada del tubo cortador de cilindros 1520, con el DMO 1510 incluido de su interior, del aparato 1400.

[00094] Se hace referencia a la figura 16 que ilustra esquematicamente una vista de seccion transversal del 40 aparato 1400 implementado para soportar externamente una estructura de tejido cutaneo en una posicion deseada,

de acuerdo con otro caso de ejemplo de la descripcion.

[00095] De acuerdo con el caso de ejemplo de la figura 16 puede conseguirse una mejora de la estabilizacion de la dermis 1506 y/o una mejora en la prevencion de la recogida de grasa 1504 en la camara de vaclo 1406

45 mediante el pinzamiento externo de la estructura de tejido cutaneo soportada dentro de la camara de vaclo. Por ejemplo, puede implementarse una herramienta de pinzamiento 1600, por ejemplo, analoga a la herramienta de pinzamiento descrita anteriormente con referencia a la figura 12, para “pellizcar” la estructura de tejido cutaneo soportada dentro de la camara de vaclo 1406, por ejemplo, simetricamente. Los dos extremos de pinzamiento 1502 de la herramienta de pinzamiento 1600 pueden insertarse en los canales 1408, respectivamente. La herramienta 50 1600 puede cerrarse de modo que los extremos de pinzamiento 1502 puedan presionar contra los elementos flexibles 1412. Por lo tanto, la estructura de tejido cutaneo en la camara 1406 puede pinzarse por los lados sin afectar sustancialmente a las condiciones de vaclo en la camara 1406. La fuerza de pinzamiento aplicada por los extremos de pinzamiento 1502 puede corresponder, por ejemplo, a una fuerza constante o variable de un resorte 1512 o de otro dispositivo similar.

55

[00096] Aunque la descripcion anterior puede referirse a una camara de vaclo con una forma y/o tamano generalmente constantes a lo largo de su eje longitudinal, los expertos en la tecnica apreciaran, de acuerdo con otros casos de la descripcion, que la camara de vaclo puede tener cualquier otra forma y/o tamano predeterminados, por ejemplo, de acuerdo con se describe mas adelante.

60

[00097] A continuacion se hace referencia a la figura 17 que ilustra esquematicamente un aparato de recogida de tejido dermico 1700, de acuerdo con otro caso de ejemplo de la descripcion.

[00098] El aparato 1700 puede incluir una camara de vaclo 1701 que incluye un saliente elevado 1706. El 65 saliente elevado 1706 puede tener una forma y/o tamano predeterminados adaptados, por ejemplo, para permitir la

creacion de una “meseta” de una unica capa de tejido de la piel en una orientacion generalmente plana, elevada por

encima de la trayectoria de un tubo cortador de cilindros 1716. Por ejemplo, la seccion 1706 puede tener mayor altura que las otras secciones de la camara 1701, de modo que es posible aspirar una capa adiposa 1718 a la seccion 1706 y soportarla a lo largo de la trayectoria del tubo cortador de cilindros 1716. Como resultado, despues de recoger un DMO de una longitud predeterminada, el tubo cortador de cilindros 1716 puede hacerse avanzar 5 ligeramente en la capa adiposa 1718, separando as! el DMO recogido del tejido que rodea dicho DMO. El DMO recogido puede permanecer dentro del tubo cortador de cilindros 1716 al retirarlo del cuerpo. La configuration del aparato 1700 puede eliminar la necesidad de realizar una incision de “salida” en la piel, por ejemplo, de acuerdo con se ha descrito anteriormente, lo que permite la recogida de un DMO con una unica incision.

10 [00099] De acuerdo con algunos casos de ejemplo de la description, el aparato 1700 puede incluir tambien un tope 1708 en el taladro para permitir avanzar manualmente el tubo cortador de cilindros 1716 una distancia predeterminada a lo largo de la camara 1701, por ejemplo, hasta una position en la que el tubo cortador de cilindros 1716 ha avanzado ligeramente dentro del tejido adiposo 1718.

15 [000100] A continuation se hace referencia a la figura 18 que ilustra esquematicamente un aparato de recogida 1800, de acuerdo con otro caso de ejemplo de la descripcion, y a la figura 19 que ilustra esquematicamente una vista de seccion transversal del aparato 1800 implementado para la recogida de un DMO 1830.

[000101] De acuerdo con algunos casos de ejemplo, para la recogida de un DMO pueden utilizarse dispositivos 20 para biopsias centrales similares a los usados, por ejemplo en aplicaciones de biopsias de cancer de mama, de

acuerdo con se describe mas adelante. El aparato 1800 puede incluir una herramienta de corte 1808, por ejemplo, de acuerdo con se describe anteriormente y un trocar de recogida subcutanea (HST) 1806, por ejemplo, una aguja hipodermica con una punta afilada 1804 y un diametro interior adecuado, por ejemplo, ligeramente mayor que el diametro exterior de la herramienta de corte 1808, de modo que la herramienta de corte 1808 pueda insertarse 25 dentro del HST 1806 de manera sustancialmente coaxial con este. El HST 1806 puede incluir una muesca recortada (“ventana”) 1802 de una profundidad adecuada, por ejemplo, de 1 mm o mas, y una longitud adecuada, por ejemplo sustancialmente igual a la longitud deseada del DMO que va a recogerse.

[000102] De acuerdo con casos de ejemplo de la figura 18, puede realizarse una unica incision, por ejemplo, un 30 corte de lanceta, por ejemplo, mediante un escalpelo, a traves de la que puede insertarse el HST 1806 junto con la

herramienta de corte 1808, por ejemplo, como una unica unidad, en la posicion deseada por debajo de la piel o en esta, preferentemente en el espacio subcutaneo, con la muesca 1802 orientada hacia arriba, hacia la capa dermica 1840. La herramienta de corte 1801 puede colocarse dentro del HST 1806 durante la penetration, de modo que la ventana recortada 1802 puede “cerrarse” para permitir una penetracion generalmente suave del HST 1806. La 35 herramienta 1808 y el hSt 1806 insertado en ella pueden desplazarse a lo largo de la superficie de separation subcutanea a lo largo de la longitud de la muesca 1802 y el extremo 1804 no puede salir a traves de la superficie de la piel. Una vez colocada apropiadamente, la herramienta 1808 puede retraerse para exponer la muesca 1802 y permitir que el tejido dermico rellene sustancialmente dicha muesca. Para facilitar que la dermis rellene sustancialmente la muesca 1802 puede aplicarse una presion apropiada en la superficie de la piel, por ejemplo, 40 mediante una herramienta de pinzamiento adecuada, por ejemplo, de acuerdo con se describe anteriormente con referencia a la figura 12 y/o puede aplicarse vaclo desde dentro del HST 1802 mediante un colector de vaclo (no se muestra), por ejemplo, situado por debajo de la muesca recortada 1802. La herramienta 1808 puede conectarse a un motor, por ejemplo, de acuerdo con se describe anteriormente, para girar la herramienta 1808 a una velocidad de rotation apropiada para el corte del tejido dermico, por ejemplo, una velocidad de rotation relativamente alta, por 45 ejemplo, una velocidad superior a 1.000 rpm, por ejemplo, de entre 1.000 rpm y 10.000 rpm. Por ejemplo, la herramienta 1808 puede hacerse girar a una velocidad de rotacion superior a 2.000 rpm, por ejemplo, de aproximadamente 7.000 rpm. La herramienta 1808 puede hacerse avanzar entonces, por ejemplo, manual o automaticamente, por ejemplo, hasta sobrepasar el extremo de la ventana recortada 1802 para cortar el DMO 1830 dentro de la muesca 1802. Una vez que se ha finalizado, los movimientos de avance y de giro de la herramienta 50 1808 pueden detenerse y dicha herramienta 1808 puede retraerse con el DMO recogido 1830 en su interior. El HST 1806 puede extraerse entonces del sitio de recogida. El DMO 1830 puede extraerse de la herramienta de corte 1808, por ejemplo, mediante una jeringa para impulsar un llquido esteril, por ejemplo, disolucion salina, a traves de la herramienta 1808 o mediante una fuente de vaclo para aspirar el DMO 1830 desde un extremo de la herramienta de corte 1808 (no se muestra).

55

[000103] Los expertos en la tecnica apreciaran que el aparato 1800 puede permitir la recogida del DMO mediante la realization de una unica incision. Ademas, el aparato 1800 puede aplicarse eficientemente para la recogida de un DMO de zonas con una piel relativamente gruesa, por ejemplo, de una region de la espalda del donante.

60

[000104] Los expertos en la tecnica apreciaran que los procedimientos y/o los aparatos de recogida, de acuerdo con casos de la descripcion, por ejemplo, de acuerdo con se describen anteriormente, pueden incluir la introduction de dispositivos finos de corte de tejido dentro de la dermis. Por lo tanto, los procedimientos y/o los aparatos de recogida, de acuerdo con casos de la descripcion, pueden permitir la recogida del DMO con un dano relativamente

65 mlnimo de la superficie exterior de la piel y, por consiguiente, pueden proporcionar un procedimiento mlnimamente invasivo para la recogida de los tejidos deseados.

[000105] Aunque algunos casos de la descripcion descritos en este documento pueden referirse a procedimientos y/o aparatos para la recogida de un DMO, los expertos en la tecnica apreciaran que, de acuerdo con otros casos de la descripcion, al menos algunos de los procedimientos y/o los aparatos pueden implementarse para 5 cualquier otro procedimiento, por ejemplo, procedimientos de cirugla plastica, procedimientos dermatologicos o cualquier otro procedimiento que incluya la recogida de tejidos. Por ejemplo, los procedimientos y/o los aparatos, de acuerdo con casos de la descripcion, pueden implementarse para la recogida de tejido dermico para usar, por ejemplo, en una posterior implantacion, como material de relleno.

10 [000106] De acuerdo con algunos casos de la presente descripcion, se proporcionan un sistema y un procedimiento para la manipulacion o el procesamiento ex vivo (“in vitro") de microorganos dermicos. El tejido dermico que se ha recogido como un MO directo puede dejarse en su gula interior como soporte para dicho MO. En estos casos, la gula interior puede usarse para mantener la posicion y la orientacion de los MO durante su procesamiento posterior. En otros casos, los MO dermicos pueden extraerse de la gula interior y colocarse 15 directamente en pocillos de cultivo de tejidos o en las camaras de transduccion de un biorreactor, de acuerdo con se describe en detalle mas adelante, por ejemplo, con referencia a la figura 22. En algunos casos, por ejemplo, si el DMO permanece en el tubo cortador de cilindros al retirarlo de la piel, el DMO puede ser expulsado del tubo cortador de cilindros mediante el uso de un llquido compatible, por ejemplo, disolucion salina o medio de cultivo, aplicado en el extremo posterior del tubo cortador de cilindros. Esto puede realizarse de modo que se expulse directamente el 20 DMO a una camara del biorreactor, por ejemplo, de acuerdo con se describe mas adelante. Alternativamente, puede aplicarse vaclo al extremo posterior del tubo cortador de cilindros para “aspirar” el DMO, por ejemplo, directamente a una camara del biorreactor.

[000107] De acuerdo con algunos casos de la presente descripcion, se proporcionan un sistema y un 25 procedimiento para la implantacion de un DTMO. Despues de la produccion y/o el procesamiento de un DMO, por

ejemplo, mediante la modificacion genetica del DMO, el DMO modificado o DTMO puede reimplantarse en el paciente, por ejemplo, para un tratamiento a base de protelnas o ARN. El numero de DTMO totales o parciales que se implanten puede quedar determinado por la dosis terapeutica deseada de la protelna secretada. Los DTMo pueden implantarse subcutaneamente o en cualquier otro lugar dentro del cuerpo. La implantacion subcutanea 30 mediante el uso de un trocar de aguja, por ejemplo, puede permitir que el DTMO permanezca en forma lineal en el espacio subcutaneo. La forma lineal de la implantacion puede facilitar la localizacion en caso de que se requiera la ablacion posterior del DTMO, por ejemplo, con el fin de detener el tratamiento o de reducir la dosis de la protelna terapeutica. Tambien pueden usarse otros patrones geometricos de implantacion conocidos. La implantacion lineal tambien puede facilitar la integracion del tejido dermico en el tejido circundante.

35

[000108] A continuacion se hace referencia a la figura 20 que ilustra esquematicamente un diagrama de flujo de un procedimiento de implantacion de un DTMO, de acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion.

[000109] De acuerdo con se indica en el bloque 2002, puede administrarse opcionalmente un anestesico local 40 en el sitio deseado de implantacion.

[000110] De acuerdo con se indica en el bloque 2004, de acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion, el DTMO, opcionalmente junto con solucion salina esteril circundante puede aspirarse en un vehlculo portador, por ejemplo, una aguja de implantacion, por ejemplo, sujeta a una jeringa. La jeringa puede tener cualquier

45 diametro adecuado, por ejemplo, entre calibre 17 y calibre 12. Opcionalmente, una punta de la aguja puede tener una corta extension de tubo de silicona o similar fijado a esta, para facilitar la aspiracion del DTMO en la canula de la aguja al retraer el embolo de la jeringa.

[000111] De acuerdo con se indica en el bloque 2006, la aguja de implantacion cargada con el DTMO puede 50 introducirse en la piel, por ejemplo, sin la extension de tubo de silicona, en su destino subcutaneo a lo largo de una

distancia aproximadamente equivalente a la longitud del DTMO.

[000112] De acuerdo con se indica en el bloque 2008, de acuerdo con algunos casos, la aguja de implantacion puede salir a traves de la superficie de la piel por el extremo distal del sitio de implantacion.

55

[000113] De acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion, el procedimiento puede incluir la aplicacion de presion sobre el microorgano terapeutico dermico aspirado, de modo que dicho microorgano terapeutico dermico salga del vehlculo portador al sitio de implantacion.

60 [000114] De acuerdo con se indica en el bloque 2010, la punta del DTMO puede asirse en el punto de salida con una herramienta de agarre, por ejemplo unas pinzas.

[000115] De acuerdo con se indica en el bloque 2012, la aguja de implantacion puede retraerse a traves del espacio subcutaneo, liberando el DTMO de la aguja de implantacion y depositando dicho DTMO linealmente a lo 65 largo del tracto de la aguja. Si es necesario, puede proporcionarse asistencia para facilitar la liberation del DTMO, por ejemplo, empujando hacia abajo ligeramente el embolo de la jeringa durante la retraction.

[000116] De acuerdo con se indica en el bloque 2014, una vez que el DTMO se ha colocado en su sitio, la herramienta de agarre puede soltar la punta de dicho DTMO.

5 [000117] Se proporcionan un sistema y un procedimiento para la demarcacion y localizacion in vivo de los microorganos dermicos implantados. La identificacion de la situation de una implantation subcutanea o de una implantation en cualquier otro lugar del cuerpo de un tejido procesado, como un DTMO, puede ser importante, por ejemplo, en el caso de que sea necesario detener el tratamiento proteico o disminuir la dosis de la protelna secretada. Por ejemplo, la termination o la titulacion de la dosis pueden realizarse mediante la extraction de uno o 10 mas DTMO en su totalidad y/o mediante la ablation de uno, una portion de uno o de mas de uno de los DTMO implantados. Con el fin de identificar un DTMO implantado subcutaneamente, de acuerdo con una realization, el DTMO puede colorearse antes de su implantacion mediante una tinta o un colorante biocompatible e inerte que contenga, por ejemplo, un cromoforo que puede ser visible a simple vista o puede requerir condiciones de iluminacion especiales para su visualization. De esta manera, un DTMO puede distinguirse del tejido circundante por 15 inspection visual y/o mediante el uso de procedimientos de realce de la imagen.

[000118] De acuerdo con una realizacion, la superficie periferica de un DTMO puede estar recubierta, por ejemplo, con partlculas de carbono biocompatibles, tinta de tatuajes biocompatible u otros materiales adecuados. Una vez implantado subcutaneamente, el DTMO puede ser visible a simple vista o con un dispositivo adecuado de

20 realce de la imagen. Otras formas de realzar la visibilidad de un DTMO implantado pueden incluir el uso de una potente fuente luminosa sobre la superficie de la piel o pellizcar la piel y dirigir la fuente luminosa a la piel por un lado, de modo que la piel pueda parecer translucida y el DTMO tenido hacerse mas visible. Alternativamente, el colorante puede ser fluorescente, visible solamente al iluminarlo con luz UV, como al usar esferas de plastico fluorescentes.

25

[000119] De acuerdo con otra realizacion, la situacion de un DTMO implantado subcutaneamente puede identificarse mediante la coimplantacion de una estructura biocompatible junto con el DTMO. Un ejemplo de una estructura biocompatible semejante es una sutura de nailon de una sola hebra no reabsorbible, de uso comun en numerosos procedimientos quirurgicos. Una sutura semejante puede implantarse en el mismo tracto de implantacion

30 que el DTMO o puede implantarse directamente por encima del DTMO en la dermis superior, de modo que pueda determinarse la situacion espacial del DTMO por la situacion de la sutura. Ademas, puede saberse que la profundidad del DTMO corresponde a la profundidad del espacio subcutaneo. La sutura puede ser visible a simple vista, observable mediante la asistencia de medios de iluminacion y/o observable con la ayuda de otros procedimientos adecuados de obtencion de imagenes como ultrasonidos. Alternativamente, la sutura puede ser 35 fluorescente y visible a traves de la piel con la iluminacion UV adecuada. Alternativamente, la sutura puede ser de un material absorbible, de modo que puede permitir la determination de la localizacion durante un periodo de tiempo deseado, como unos pocos meses.

[000120] De acuerdo con otra realizacion, el DTMO puede modificarse o manipularse geneticamente para incluir 40 un gen para expresar un marcador fluorescente u otro marcador que pueda ser visualizado. Por ejemplo, el DTMO

puede modificarse con el gen GFP (protelna verde fluorescente) o el gen indicador de la luciferasa, los cuales, por ejemplo, pueden expresarse junto con el gen de la protelna terapeutica. Asl, el DTMO puede visualizarse de manera no invasiva mediante la luz UV apropiada u otra iluminacion y condiciones de obtencion de imagenes adecuadas.

45 [000121] De acuerdo con algunos casos de la presente description, se proporcionan un sistema y un procedimiento para la extraccion o la ablacion de los DTMO implantados. Por ejemplo, en caso de que el tratamiento de un paciente a base de un DTMO deba terminarse o deba disminuirse la secretion de la protelna, es posible la extraccion parcial o total de cada DTMO implantado o su ablacion parcial o total. Un caso para la extraccion de un DTMO tiene lugar por medio de un tubo cortador de cilindros similar o de diametro ligeramente mayor que el usado 50 para la recogida directa del DMO.

[000122] Como puede observarse con referencia a la figura 21, en el bloque 2102 puede determinarse la situacion del DTMO implantado subcutaneamente. En el bloque 2103 puede administrarse opcionalmente un anestesico local en el sitio de extraccion del DTMO. En el bloque 2104 puede insertarse una gula interior

55 subcutaneamente a lo largo de la longitud del DTMO para recoger un cilindro de tejido que incluye el DTMO. En el bloque 2106 una aguja cortadora de cilindros del mismo o de mayor diametro que la aguja de implantacion (por ejemplo, de calibre 11 o similar) puede insertarse concentricamente sobre la gula interior. En el bloque 2108 puede recogerse un cilindro de tejido que incluye el DTMO. En el bloque 2110, la gula interior con el cilindro de tejido y la aguja cortadora de cilindros pueden extraerse de la piel con el DTMO. En un caso, esta estrategia de corte de 60 cilindros puede combinarse con una suction por vaclo para facilitar la extraccion del material cortado del cuerpo.

[000123] De acuerdo con un caso de la presente descripcion, es posible usar procedimientos mlnimamente invasivos o no invasivos para la ablacion del DTMO in situ con el objeto de hacer que el procedimiento sea menos traumatico y menos invasivo para el paciente. En un caso, en el caso de un DTMO tenido puede usarse un laser, por

65 ejemplo, un laser YAG no invasivo. Por ejemplo, la energla del laser YAG puede ser selectivamente absorbida por el cromoforo, de modo que la energla se dirige principalmente al DTMO, causando un dano mlnimo al tejido

circundante. Tambien pueden usarse otras fuentes de energla luminosa.

[000124] De acuerdo con otro caso, la ablacion del DTMO puede realizarse mediante el suministro de energla destructiva desde una sonda mlnimamente invasiva insertada en el espacio subcutaneo a lo largo de la longitud del

5 DTMO. Una sonda semejante puede permitir el suministro de diversos tipos de energla, como radiofrecuencia, energla criogenica, microondas, calor resistivo, etc. Puede usarse una estructura coimplantada, como una sutura, para determinar la situacion del DTMO, con lo que se permite la insercion de la sonda subcutaneamente, por ejemplo, a lo largo de la sutura o directamente por debajo de esta. En tal caso, por ejemplo, la energla destructiva puede suministrarse mientras la sutura todavla permanece en su sitio. Alternativamente, es posible extraer la sutura 10 despues de colocar la sonda y antes de suministrar la energla destructiva. La cantidad de energla aplicada puede ser la requerida para la desnaturalizacion de las protelnas en el tejido, como durante la coagulacion por diatermia. Adicional o alternativamente, la cantidad de energla aplicada puede ser tanta como la usada en los dispositivos de corte electroquirurgicos que carbonizan el tejido. Por supuesto, es posible usar otros medios de localizacion y otros medios para suministrar energla destructiva.

15

[000125] Despues de haber recogido un DMO, por ejemplo, de acuerdo con los casos de la presente descripcion, opcionalmente dicho DMO puede alterarse geneticamente. Para la alteracion genetica del tejido puede usarse cualquier metodologla conocida en la tecnica. Un procedimiento de ejemplo es la insercion de un gen en las celulas del tejido con un vector vlrico recombinante. Puede usarse cualquiera de una serie de vectores diferentes,

20 como vectores vlricos, vectores plasmldicos, ADN lineal, etc., de acuerdo con se conocen en la tecnica, para la introduccion en las celulas y/o el tejido diana de un fragmento de acido nucleico exogeno que codifica un agente terapeutico. Estos vectores pueden insertarse, por ejemplo, mediante el uso de cualquiera de los procedimientos de infeccion, transduccion, transfeccion, transfeccion por medio de fosfato de calcio, transfeccion por medio de DEAE- dextrano, electroporacion, transfeccion por medio de liposomas, administracion biollstica de genes, administracion 25 liposomica de genes mediante liposomas fusogenicos y anionicos (que son una alternativa al uso de liposomas cationicos), inyeccion directa, absorcion por medio de receptores, magnetoporacion, ultrasonidos y otros de acuerdo con se conocen en la tecnica. Esta insercion de genes se consigue mediante la introduccion del vector en la proximidad del DMO, de modo que el vector puede reaccionar con las celulas del DMO. Una vez que el fragmento de acido nucleico exogeno se ha incorporado en las celulas, puede cuantificarse la produccion y/o la tasa de 30 secrecion del agente terapeutico codificado por dicho fragmento de acido nucleico.

[000126] De acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion, la modificacion genetica del DMO puede modificar el perfil de expresion de un gen endogeno. Esto puede conseguirse, por ejemplo, mediante la introduccion de un potenciador o de un elemento regulador reprimible o inducible para controlar la expresion del gen endogeno.

35

[000127] En otro caso, la descripcion proporciona un procedimiento para la administracion de un producto genico de interes en un sujeto mediante la implantacion del DMO modificado geneticamente en el sujeto.

[000128] De acuerdo con se indica anteriormente, el DMO puede estar en contacto con una disolucion nutritiva 40 durante el proceso. Por lo tanto, un agente terapeutico generado por DTMO puede secretarse a la disolucion, donde

puede medirse su concentration. El gen de interes puede ser cualquier gen que codifique cualquier molecula de ARN (codificante o no codificante), peptido, polipeptido, glucoprotelna, lipoprotelna o una combination de estas o cualquier otro polipeptido modificado posteriormente. En un caso de la descripcion, el gen de interes puede expresarse de manera natural en la muestra de tejido. En otro caso de la descripcion, la muestra de tejido puede 45 manipularse geneticamente de modo que al menos una celula exprese el gen de interes, que no se expresa de manera natural en la celula o que tiene un perfil de expresion alterado dentro de la celula.

[000129] De acuerdo con se usa en este documento, el termino “acido nucleico” se refiere a polinucleotidos u oligonucleotidos como el acido desoxirribonucleico (ADN) y, en caso apropiado, acido ribonucleico (ARN) o un

50 mimetico de estos. Tambien debera entenderse que el termino incluye, como equivalentes, los analogos de ARN o ADN, preparados a partir de analogos de nucleotidos y, de acuerdo con sea aplicable a la realization que se describa, polinucleotidos monocatenarios (codificantes o no codificantes) y bicatenarios. Este termino incluye oligonucleotidos compuestos de las bases nitrogenadas naturales, azucares y enlaces internucleosldicos covalentes (esqueleto), as! como oligonucleotidos que tienen porciones no naturales con funcionalidad similar. Frecuentemente, 55 tales oligonucleotidos modificados o sustituidos se prefieren a las formas nativas debido a propiedades deseables como, por ejemplo, un aumento de la absorcion celular, una mayor afinidad por la diana del acido nucleico y un aumento de la estabilidad en presencia de nucleasas.

[000130] Como saben los expertos en la tecnica, los terminos “protelna”, peptido” o “polipeptido” significan un 60 pollmero lineal de aminoacidos unidos en una secuencia especlfica por enlaces peptldicos. De acuerdo con se usa

en este documento, el termino “aminoacido” se refiere a la forma estereoisomera D o L del aminoacido, a menos que se denomine especlficamente de otro modo. Tambien quedan comprendidas dentro del alcance de la invention protelnas equivalentes o peptidos equivalentes, por ejemplo, con la actividad biologica de la protelna supresora tumoral natural purificada. Las “protelnas equivalentes” y los “polipeptidos equivalentes” se refieren a compuestos 65 que se apartan de la secuencia lineal de las protelnas o polipeptidos naturales, pero que tienen sustituciones de aminoacidos que no modifican su actividad biologica. Estos equivalentes pueden diferir de las secuencias nativas

por la sustitucion de uno o mas aminoacidos por aminoacidos relacionados, por ejemplo, aminoacidos de carga similar, o por la sustitucion o la modificacion de cadenas laterales o grupos funcionales.

[000131] La proteina, peptido, polipeptido, glucoprotema o lipoprotema pueden ser, sin limitacion, cualquiera de 5 las proteinas siguientes o diversas combinaciones de estas: una proteasa, una lipasa, una ribonucleasa, una

desoxirribonucleasa, un factor de coagulacion sanguinea, una enzima citocromo p450, un factor de transcripcion, un componente del CMH, una citocina, una interleucina, una BMP, una quimiocina, un factor de crecimiento, una hormona, una enzima, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo de cadena sencilla, una oxidorreductasa, un p450 una peroxidasa, una hidrogenasa, una deshidrogenasa, una catalasa, una transferasa, una hidrolasa, una 10 isomerasa, una ligasa, una aminoacil-ARNt-sintetasa, una cinasa, una fosfoproteina, un transposon mutador, una oxidorreductasa, una colinesterasa, una glucoamilasa, una glucosil-hidrolasa, una transcarbamilasa, una nucleasa, una meganucleasa, una ribonucleasa, una ATPasa, una peptidasa, una sintetasa de nucleotidos ciclicos, una fosfodiesterasa, una fosfoproteina, una proteina asociada a ADN o ARN, una proteina del grupo de alta movilidad, una proteina Pax, una histona, una polimerasa, una proteina reparadora de ADN, una proteina ribosomica, una 15 proteina de transporte electronico, una globina, una metalotioneina, una proteina de transporte de membrana, una proteina estructural, un receptor, un receptor de la superficie celular, un receptor nuclear, una proteina G, un receptor olfativo, un receptor de canal ionico, un canal, un receptor de tirosina-cinasa, una molecula o receptor de adhesion celular, un fotorreceptor, un peptido activo, un inhibidor de proteasas, una chaperona, una chaperonina, una proteina asociada al estres, un factor de transcripcion y una proteina quimerica.

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[000132] En una realizacion, la cantidad de proteina secretada por el DMO de la invencion es de al menos 1,6 pg/DTMO y dia en el dia antes de la implantacion.

[000133] En una realizacion de esta invencion, el gen de interes puede codificar eritropoyetina o una proteina 25 equivalente a esta.

[000134] En otro caso de la descripcion, el gen de interes puede codificar, sin limitacion, cualquiera de las proteinas siguientes, cualquier combination de las proteinas siguientes y cualquier equivalente de estas: insulina, tripsinogeno, quimotripsinogeno, elastasa, amilasa, factor timico del suero, factor timico humoral, timopoyetina,

30 gastrina, secretina, somatostatina, sustancia P, hormona del crecimiento, una somatomedina, un factor estimulante de colonias, eritropoyetina, factor de crecimiento epidermico, factor eritropoyetico hepatico (hepatopoyetina), un factor de crecimiento de celulas hepaticas, una interleucina, un factor de crecimiento negativo, factor de crecimiento de fibroblastos y factor de crecimiento transformante de la familia p, interferon a, interferon p, interferon y, hormona de crecimiento humana, G-CSF, GM-CSF, receptor de TNF, PDGF, AAT, VEGF, superoxido-dismutasa, interleucina, 35 TGF-p, NGF, CTNF, PEDF, NMDA, AAT, actina, activina pA, activina pB, activina pC, activina pE, adenosina- desaminasa, p-agarasa, albumina, albumina (HSA), alcohol-deshidrogenasa, aldolasa, alfimeprasa, al-antitri psina, a-galactosidasa, al-glucoproteina acida (AGP), a1-antiquimotripsina, al-antitripsina (AT), a1-microglobulina (AIM), a2-macroglobulina (A2M), a-fetoproteina, a-galactosidasa, D-aminoacido-oxidasa, L-aminoacido-oxidasa, a-amilasa, p-amilasa, angiostatina, enzima de conversion de la angiotensina, anquirina, apolipoproteina, APO-SAA, arginasa, 40 asparraginasa, aspartil-aminotransferasa, factor natriuretico atrial (Anf), peptido natriuretico atrial (Anp), avidina, p2- glucoproteina 1, p2-microglobulina, p-N-acetilglucosaminidasa (p-NAG), p-amiloide, proteina natriuretica cerebral (Bnp), factor neurotrofico derivado del cerebro (BDNF), cadherina E, Calc a, Calc b, calcitonina, calciclina, caldesmona, calgizarina, calgranulina A, calgranulina C, calmodulina, calreticulina, calvasculina, anhidrasa carbonica, carboxipeptidasa, carboxipeptidasa A, carboxipeptidasa B, carboxipeptidasa Y, troponina cardiaca I, 45 troponina cardiaca T, caseina, a-catalasa, cateninas, catepsina D, CD95L, CEA, celulasa, proteina centromerica B, ceruloplasmina, ceruplasmina, colecistoquinina, colesterol-esterasa, colinesterasa, acetilcolinesterasa, butirilcolinesterasa, gonadotropina corionica (MCG), gonadotropina corionica p-CORE (BchCG), quimotripsina, quimotripsinogeno, creatina-cinasa, K-BB, CK-MB (creatina-cinasa MB), CK-MM, proteina de union a fosfolipidos de celulas claras, clostripaina, clusterina, CNTF, colageno, colagenasa, colagenos (tipo I-VI), factor estimulante de 50 colonias, complemento C1q, complemento C3, complemento C3a, complemento C3b-a, complemento C3b-p, complemento C4, complemento C5, factor del complemento B, concanavalina A, corticoliberina, hormona liberadora de corticotropina, proteina C reactiva (CRP), peptido natriuretico de tipo C (Cnp), cistatina C, dimero D, 81, cinasa similar a 81 (DIk1), desoxirribonucleasa, desoxirribonucleasa I, desoxirribonucleasa II, acidos desoxirribonucleicos, dersalazina, dextranasa, diaforasa, ADN-ligasa de T4, ADN-polimerasa 1, ADN-polimerasa de T4, EGF, elastasa, 55 elastina, factor de crecimiento endotelial vascular derivado de glandulas endocrinas (EG-VEGF), elastina, endotelina, endotelina 1, eotaxina, factor de crecimiento epidermico (EGF), peptido activador de neutrofilos epiteliales 78 (ENA-78), eritropoyetina (Epo), estriol, exodus, factor IX, factor VIII, proteina de union a acidos grasos, ferritina, factor de crecimiento de fibroblastos, factor de crecimiento de fibroblastos 10, factor de crecimiento de fibroblastos 11, factor de crecimiento de fibroblastos 12, factor de crecimiento de fibroblastos 13, factor de 60 crecimiento de fibroblastos 14, factor de crecimiento de fibroblastos 15, factor de crecimiento de fibroblastos 16, factor de crecimiento de fibroblastos 17, factor de crecimiento de fibroblastos 18, factor de crecimiento de fibroblastos 19, factor de crecimiento de fibroblastos 2, factor de crecimiento de fibroblastos 20, factor de crecimiento de fibroblastos 3, factor de crecimiento de fibroblastos 4, factor de crecimiento de fibroblastos 5, factor de crecimiento de fibroblastos 6, factor de crecimiento de fibroblastos 7, factor de crecimiento de fibroblastos 8, factor 65 de crecimiento de fibroblastos 9, fibronectina, cinasa de adhesion focal (FAK), folitropina a, galactosa-oxidasa, p- galactosidasa, y-IP-10, gastrina, GCP, G-CSF, factor neurotrofico derivado de celulas gliales (GDNF), proteina

gliofibrilar acida, protelna de filamentos gliales (GFP), receptor de la familia de factores neurotroficos derivados de celulas gliales (GFR), globulina, glucosa-oxidasa, glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa, a-glucosidasa, p-glucosidasa, p-glucuronidasa, glutamato-descarboxilasa, gliceraldehldo-3-fosfato-deshidrogenasa, glicerol-deshidrogenasa,

glicerol-cinasa, isoenzima BB de la glucogeno-fosforilasa, factor estimulante de colonias de macrofagos y 5 granulocitos (GM-CSF), protelna estimuladora del crecimiento (GRO), hormona del crecimiento, hormona de liberacion de la hormona del crecimiento, hemopexina, factor eritropoyetico hepatico (hepatopoyetina), herregulina a, herregulina p1, herregulina p2, herregulina p3, hexocinasa, histona, protelna morfogenetica osea humana, relaxina humana H2, hialuronidasa, hidroxiesteroide-deshidrogenasa, factor inducible por hipoxia 1a (HIF-1a), I-309/ITCA-3, IFN-a, IFN-p, IFN-y, IgA, IgE, IgG, IgM, insulina, factor de crecimiento similar a la insulina I (IGF-I), factor de 10 crecimiento similar a la insulina II (IGF-II), interferon, factor quimiotactico a de celulas T inducible por interferon (I- TAC), interleucina, interleucina 12p, protelna de union a interleucina 18, factor trebol intestinal, IP10, Jagged 1, Jagged 2, cadena ligera k, factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), Kiss1, La/SS-B, lactato-deshidrogenasa, L- lactato deshidrogenasa, lactoferrina, lactoperoxidasa, cadena ligera A, laminina a1, laminina a2, laminina p1, laminina p2, laminina p3, laminina y1, laminina y2, LD78p, leptina, leucina-aminopeptidasa, hormona luteinizante 15 (LH), LIF, lipasa, factor de crecimiento de celulas hepaticas, quimiocina expresada en el hlgado (LEC), antlgeno LKM, TNF, TNF-p, luciferasa, hormona de liberacion de la hormona luteinizante, protelna del gen activador de linfocitos 1 (LAG-1), linfotactina, lisozima, protelna inflamatoria de macrofagos 1a (MIP-1a), quimiocina derivada de macrofagos (MDC), malato-deshidrogenasa, maltasa, MCP (protelna quimiotactica de macrofagos/monocitos)-1, 2, 3 y 4, M-CSF, MEC (CCL28), protelna de membrana relacionada con el receptor frizzled (Mfrp), midquina, MIF, MIG 20 (monocina inducida por interferon y), MIP-2 a 5, MI P-1 p, Mp40, factor de crecimiento de mastocitos y celulas T P40, protelna basica de mielina, mieloperoxidasa, mioglobina, miostatina, factor de diferenciacion del crecimiento 8 (GDF- 8), miosina, miosina LC, miosina HC, ATPasa, NADasa, NAP-2, factor de crecimiento negativo, factor de crecimiento neural (NGF), neuraminidasa, neurregulina 1, neurregulina 2, neurregulina 3, enolasa especlfica de neuronas, neurotrofina 3 (NT-3), neurotrofina 4 (NT-4), neurturina, NGF, NGF-p, nicastrina, nitrato-reductasa, oxido-nltrico- 25 sintetasas, nortestosterona, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, NP-1, NT-1 a 4, NT-3 Tpo, NT-4, nucleasa, oncostatina M, ornitina-transcarbamoilasa, osteoprotegerina, ovoalbumina, oxalato-descarboxilasa, P16, papalna, PBP, PBSF, PDGF, PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PEDF, pepsina, peptido YY (PYY), peroxidasa, persefina, PF- 4, P-glucoprotelna, fosfatasa acida, fosfatasa alcalina, fosfodiesterasa I, fosfodiesterasa II, fosfoenolpiruvato- carboxilasa, fosfoglucomutasa, fosfolipasa, fosfolipasa A2, fosfolipasa C, fosfotirosina-cinasa, polipeptido activador 30 de la adenilato-ciclasa de la pituitaria, lactogeno placentario, placoglobina, placofilina, aminooxidasa plasmatica, protelna plasmatica de union a retinol, plasminogeno, pleiotropina (PTN), PLGF-1, PLGF-2, toxina antivlrica de fitolaca, prealbumina, protelna plasmatica asociada al embarazo A, glucoprotelna p1 especlfica del embarazo (SP1), prodinorfina, proencefalina, progesterona, proinsulina, prolactina, precursor de la hormona concentradora de melanina (Pmch), proopiomelanocortina, proorfanina, antlgeno especlfico de la prostata (PSA), fosfatasa acida 35 prostatica (PAP), protrombina, PSA-A1, protelna surfactante pulmonar A, piruvato-cinasa, ranpirnasa, RANTES, reelina, renina, resistina, globulina de union a retinol (RBP), Ro/SS-A 60 kDa, RO/SS-A 52 kDa, S100 (cerebro humano) (BB/AB), S100 (humana) homodlmero BB, saposina, SCF, SCGF-a, SCGF-p, SDF-1a, SDF-1p, protelna secretada relacionada con el receptor frizzled 1 (Sfrp1), protelna secretada relacionada con el receptor frizzled 2 (Sfrp2), protelna secretada relacionada con el receptor frizzled 3 (Sfrp3), protelna secretada relacionada con el 40 receptor frizzled 4 (Sfrp4), protelna secretada relacionada con el receptor frizzled 5 (Sfrp5), secretina, factor tlmico del suero, globulina de union (SHBG), somatomedina, somatostatina, somatotropina, s-RankL, sustancia P, superoxido-dismutasa, TGF-a, TGF-p, tiorredoxina, trombopoyetina (TPO), trombospondina 1, trombospondina 2, trombospondina 3, trombospondina 4, trombospondina 5, trombospondina 6, trombospondina 7, factor tlmico humoral, timopoyetina, timosina a1, timosina a1, quimiocina regulada por acitvacion y el timo (TARC), quimiocina 45 expresada por el timo (TECK), tiroglobulina (Tg), antlgeno microsomal tiroideo, peroxidasa tiroidea, peroxidasa tiroidea (TPO), tiroxina (T4), globulina de union a tiroxina (TBG), TNF-a, receptor de TNF, transferrina, receptor de transferrina, factor de crecimiento transformante de la familia b, transtirretina, triacilglicerol-lipasa, triyodotironina (T3), tropomiosina a, cinasa relacionada con la tropomiosina (trk), troponina C, troponina I, troponina T, tripsina, inhibidores de tripsina, tripsinogeno, TSH, Tweak, tirosina-descarboxilasa, ubicuitina, UDP-glucuronil-transferasa, 50 ureasa, uricasa, protelna de la orina 1, urocortina 1, urocortina 2, urocortina 3, urotensina II, protelna similar a Vang 1 (Vangl1), protelna similar a Vang 2 (Vangl2), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), precursor del peptido intestinal vasoactivo, vimentina, protelna de union a la vitamina D, factor de von Willebrand, Wnt1, Wnt10a, Wnt10b, Wnt11, Wnt12, Wnt13, Wnt14, Wnt15, Wnt16, Wnt2, Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt7b, Wnt8a, Wnt8b, Wnt9, xantina-oxidasa, protelna de union a fosfollpidos de celulas claras, clostripalna, 55 clusterina, CNTF, colageno, colagenasa, colagenos (tipo I-VI), factor estimulante de colonias, complemento C1q, complemento C3, complemento C3a, complemento C3b-a, complemento C3b-p, complemento C4, complemento C5, factor del complemento B, concanavalina A, corticoliberina, hormona liberadora de corticotropina, protelna C reactiva (CRP), peptido natriuretico de tipo C (Cnp), cistatina C, dlmero D, 81, cinasa similar a 81 (DIk1), desoxirribonucleasa, desoxirribonucleasa I, desoxirribonucleasa II, acidos desoxirribonucleicos, dersalazina, dextranasa, diaforasa, ADN- 60 ligasa de T4, ADN-polimerasa 1, ADN-polimerasa de T4, EGF, elastasa, elastina, factor de crecimiento endotelial vascular derivado de glandulas endocrinas (EG-VEGF), elastina, endotelina, endotelina 1, eotaxina, factor de crecimiento epidermico (EGF), peptido activador de neutrofilos epiteliales 78 (ENA-78), eritropoyetina (Epo), estriol, Exodus, factor IX, factor VIII, protelna de union a acidos grasos, ferritina, factor de crecimiento de fibroblastos, factor de crecimiento de fibroblastos 10, factor de crecimiento de fibroblastos 11, factor de crecimiento de fibroblastos 12, 65 factor de crecimiento de fibroblastos 13, factor de crecimiento de fibroblastos 14, factor de crecimiento de fibroblastos 15, factor de crecimiento de fibroblastos 16, factor de crecimiento de fibroblastos 17, factor de

crecimiento de fibroblastos 18, factor de crecimiento de fibroblastos 19, factor de crecimiento de fibroblastos 2, factor de crecimiento de fibroblastos 20, factor de crecimiento de fibroblastos 3, factor de crecimiento de fibroblastos 4, factor de crecimiento de fibroblastos 5, factor de crecimiento de fibroblastos 6, factor de crecimiento de fibroblastos 7, factor de crecimiento de fibroblastos 8, factor de crecimiento de fibroblastos 9, fibronectina, cinasa de adhesion 5 focal (FAK), folitropina a, galactosa-oxidasa, p-galactosidasa, y-IP-10, gastrina, GCP, G-CSF, factor neurotrofico derivado de celulas gliales (GDNF), protelna gliofibrilar acida, protelna de filamentos gliales (GFP), receptor de la familia de factores neurotroficos derivados de celulas gliales (GFR), globulina, glucosa-oxidasa, glucosa-6-fosfato- deshidrogenasa, a-glucosidasa, p-glucosidasa, p-glucuronidasa, glutamato-descarboxilasa, gliceraldehldo-3-fosfato- deshidrogenasa, glicerol-deshidrogenasa, glicerol-cinasa, isoenzima BB de la glucogeno-fosforilasa, factor 10 estimulante de colonias de macrofagos y granulocitos (GM-CSF), protelna estimuladora del crecimiento (GRO), hormona del crecimiento, hormona de liberation de la hormona del crecimiento, hemopexina, factor eritropoyetico hepatico (hepatopoyetina), herregulina a, herregulina p1, herregulina p2, herregulina p3, hexocinasa, histona, protelna morfogenetica osea humana, relaxina humana H2, hialuronidasa, hidroxiesteroide-deshidrogenasa, factor inducible por hipoxia 1a (HIF-1a), I-309/ITCA-3, IFN-a, IFN-p, IFN-y, IgA, IgE, IgG, IgM, insulina, factor de 15 crecimiento similar a la insulina I (IGF-I), factor de crecimiento similar a la insulina II (IGF-II), interferon, factor quimiotactico a de celulas T inducible por interferon (I-TAC), interleucina, interleucina 12p, protelna de union a interleucina 18, factor trebol intestinal, IP10, Jagged 1, Jagged 2, cadena ligera k, factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), Kiss1, La/SS-B, lactato-deshidrogenasa, L-lactato deshidrogenasa, lactoferrina, lactoperoxidasa, cadena ligera A, laminina a1, laminina a2, laminina p1, laminina p2, laminina p3, laminina y1, 20 laminina y2, LD78p, leptina, leucina-aminopeptidasa, hormona luteinizante (LH), LIF, lipasa, factor de crecimiento de celulas hepaticas, quimiocina expresada en el hlgado (LEC), antlgeno LKM, TNF, TNF-p, luciferasa, hormona de liberacion de la hormona luteinizante, protelna del gen activador de linfocitos 1 (LAG-1), linfotactina, lisozima, protelna inflamatoria de macrofagos 1a (MIP-1a), quimiocina derivada de macrofagos (MDC), malato- deshidrogenasa, maltasa, MCP (protelna quimiotactica de macrofagos/monocitos)-1,2, 3 y 4, M-CSF, MEC (CCL28), 25 protelna de membrana relacionada con el receptor frizzled (Mfrp), midquina, MIF, MIG (monocina inducida por interferon y), MIP-2 a 5, MI P-1 p, Mp40, factor de crecimiento de mastocitos y celulas T P40, protelna basica de mielina, mieloperoxidasa, mioglobina, miostatina, factor de diferenciacion del crecimiento 8 (GDF-8), miosina, miosina LC, miosina HC, ATPasa, NADasa, NAP-2, factor de crecimiento negativo, factor de crecimiento neural (NGF), neuraminidasa, neurregulina 1, neurregulina 2, neurregulina 3, enolasa especlfica de neuronas, neurotrofina 30 3 (NT-3), neurotrofina 4 (NT-4), neurturina, NGF, NGF-p, nicastrina, nitrato-reductasa, oxido-nltrico-sintetasas, nortestosterona, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, NP-1, NT-1 a 4, NT-3 Tpo, NT-4, nucleasa, oncostatina M, ornitina-transcarbamoilasa, osteoprotegerina, ovoalbumina, oxalato-descarboxilasa, P16, papalna, PBP, PBSF, PDGF, PDGF-AA, PDGF-AB, pDgF-BB, PEDF, pepsina, peptido YY (PYY), peroxidasa, persefina, PF-4, P- glucoprotelna, fosfatasa acida, fosfatasa alcalina, fosfodiesterasa I, fosfodiesterasa II, fosfoenolpiruvato-carboxilasa, 35 fosfoglucomutasa, fosfolipasa, fosfolipasa A2, fosfolipasa C, fosfotirosina-cinasa, polipeptido activador de la adenilato-ciclasa de la pituitaria, lactogeno placentario, placoglobina, placofilina, aminooxidasa plasmatica, protelna plasmatica de union a retinol, plasminogeno, pleiotropina (PTN), PLGF-1, PLGF-2, toxina antivlrica de fitolaca, prealbumina, protelna plasmatica asociada al embarazo A, glucoprotelna p1 especlfica del embarazo (SP1), prodinorfina, proencefalina, progesterona, proinsulina, prolactina, precursor de la hormona concentradora de 40 melanina (Pmch), proopiomelanocortina, proorfanina, antlgeno especlfico de la prostata (PSA), fosfatasa acida prostatica (PAP), protrombina, PSA-A1, protelna surfactante pulmonar A, piruvato-cinasa, ranpirnasa, RANTES, reelina, renina, resistina, globulina de union a retinol (RBP), Ro/SS-A 60 kDa, RO/SS-A 52 kDa, S100 (cerebro humano) (BB/AB), S100 (humana) homodlmero BB, saposina, SCF, SCGF-a, SCGF-p, SDF-1a, SDF-1p, protelna secretada relacionada con el receptor frizzled 1 (Sfrp1), protelna secretada relacionada con el receptor frizzled 2 45 (Sfrp2), protelna secretada relacionada con el receptor frizzled 3 (Sfrp3), protelna secretada relacionada con el receptor frizzled 4 (Sfrp4), protelna secretada relacionada con el receptor frizzled 5 (Sfrp5), secretina, factor tlmico del suero, globulina de union (SHBG), somatomedina, somatostatina, somatotropina, s-RankL, sustancia P, superoxido-dismutasa, TGF-a, TGF-p, tiorredoxina, trombopoyetina (TPO), trombospondina 1, trombospondina 2, trombospondina 3, trombospondina 4, trombospondina 5, trombospondina 6, trombospondina 7, factor tlmico 50 humoral, timopoyetina, timosina a1, timosina a1, quimiocina regulada por acitvacion y el timo (TARC), quimiocina expresada por el timo (TECK), tiroglobulina (Tg), antlgeno microsomal tiroideo, peroxidasa tiroidea, peroxidasa tiroidea (TPO), tiroxina (T4), globulina de union a tiroxina (TBG), TNF-a, receptor de TNF, transferrina, receptor de transferrina, factor de crecimiento transformante de la familia b, transtirretina, triacilglicerol-lipasa, triyodotironina (T3), tropomiosina a, cinasa relacionada con la tropomiosina (trk), troponina C, troponina I, troponina T, tripsina, 55 inhibidores de tripsina, tripsinogeno, TSH, Tweak, tirosina-descarboxilasa, ubicuitina, UDP-glucuronil-transferasa, ureasa, uricasa, protelna de la orina 1, urocortina 1, urocortina 2, urocortina 3, urotensina II, protelna similar a Vang 1 (Vangl1), protelna similar a Vang 2 (Vangl2), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), precursor del peptido intestinal vasoactivo, vimentina, protelna de union a la vitamina D, factor de von Willebrand, Wnt1, Wnt10a, Wnt10b, Wnt11, Wnt12, Wnt13, Wnt14, Wnt15, Wnt16, Wnt2, Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, 60 Wnt7b, Wnt8a, Wnt8b, Wnt9 y xantina-oxidasa.

[000135] Despues del proceso de modification genetica, la muestra de tejido puede analizarse con el fin de

verificar la expresion del gen de interes por dicha muestra de tejido. Esto puede realizarse por cualquier procedimiento conocido en la tecnica, por ejemplo, mediante ELISA para la detection de protelnas o mediante un 65 ensayo de transferencia (Northern blot) para el ARN. La eficacia de un sistema vector de expresion en particular y del procedimiento de introduction del acido nucleico en una celula puede evaluarse mediante estrategias estandar

usadas rutinariamente en la tecnica. Por ejemplo, el ADN introducido en una celula puede detectarse por una tecnica de hibridacion de filtros (por ejemplo, transferencia de Southern) y el ARN producido por transcripcion del ADN introducido puede detectarse, por ejemplo por transferencia Northern, proteccion de ARNasa o reaccion en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR). El producto genico puede detectarse mediante un ensayo 5 adecuado, por ejemplo, por deteccion inmunologica de la protelna producida, por ejemplo, con un anticuerpo especlfico o mediante un ensayo funcional para detectar la actividad funcional del producto genico, por ejemplo, un ensayo enzimatico. Si el producto genico de interes que ha de expresarse en la celula no puede detectarse facilmente, es posible optimizar primeramente el sistema de expresion mediante un gen indicador ligado a los elementos de regulacion y al vector que va a usarse. El gen indicador codifica un producto genico facilmente 10 detectable y, por lo tanto, puede usarse para evaluar la eficacia del sistema. Los genes indicadores estandar usados en la tecnica incluyen genes que codifican p-galactosidasa, cloranfenicol-acetiltransferasa, luciferasa, GFP/EGFP y la hormona del crecimiento humana.

[000136] La invencion contempla, en una realization, el uso del DTMO modificado geneticamente para su 15 trasplante en un organismo. De acuerdo con se usan en este documento, los terminos “administrar”, “introducir”,

“implantar” y “trasplantar” pueden usarse de manera intercambiable y se refieren a la colocation del DTMO de la invencion en un sujeto, por ejemplo, un sujeto autologo, alogenico o xenogenico, mediante un procedimiento o via que resulte en la localization del DTMO en el sitio deseado. El DTMO se implanta en la situation deseada en el sujeto de tal manera que una portion de las celulas del DTMO permanezcan viables. En una realizacion de esta 20 invencion, al menos aproximadamente el 5%, en otra realizacion de esta invencion, al menos aproximadamente el 10%, en otra realizacion de esta invencion, al menos aproximadamente el 20%, en otra realizacion de esta invencion, al menos aproximadamente el 30%, en otra realizacion de esta invencion, al menos aproximadamente el 40%, en otra realizacion de esta invencion al menos aproximadamente el 50% o mas de las celulas permanecen viables despues de la administration a un sujeto. El periodo de viabilidad de las celulas despues de la 25 administracion a un sujeto puede ser desde tan breve como unas pocas horas, por ejemplo de 24 horas a algunos dlas, hasta tan prolongado como de unas pocas semanas a meses o anos. Para facilitar el trasplante de las poblaciones de celulas dentro de un tejido que puede estar sometido a un ataque inmunologico por parte del hospedador, por ejemplo si se usan injertos xenogenicos, como en los trasplantes entre cerdo y humano, el DTMO puede insertarse o bien encapsularse en un material inmunoprotector biocompatible, como dispositivos recargables 30 biodegradables o no biodegradables y luego trasplantarse al sujeto receptor. Los productos genicos producidos por tales celulas/tejido pueden administrarse, por ejemplo, por medio de dispositivos polimericos disenados para la liberation controlada de compuestos, por ejemplo, farmacos, incluidas sustancias biofarmaceuticas protelnicas. Para formar un implante para la liberacion sostenida de un producto genico de las poblaciones de celulas de la invencion en un sitio diana en particular pueden usarse diversos pollmeros compatibles (por ejemplo, hidrogeles), incluidos 35 pollmeros tanto biodegradables como no degradables. La generation de tales implantes es generalmente conocida en la tecnica. Por ejemplo, vease Concise Encyclopedia of Medical & Dental Materials, ed. David Williams (MIT Press: Cambridge, MA, Ee. UU., 1990); la patente de los EE. UU. n° 4.883.666 de Sabel y col.; la patente de los EE. UU. n° 4.892.538 de Aebischer y col.; la patente de los EE. UU. n° 5.106.627 de Aebischer y col.; la patente de los EE. UU. n° 4.391.909 de Lim; y la patente de los EE. UU. n° 4.353.888 de Sefton. Las poblaciones de celulas dentro 40 del DTMO pueden administrarse en un vehlculo o diluyente farmaceuticamente aceptable, como disolucion salina esteril y disoluciones tampon acuosas. El uso de tales vehlculos y diluyentes es bien conocido en la tecnica.

[000137] La protelna secretada, por ejemplo, sin limitation, puede ser cualquier protelna de acuerdo con los casos de la description descritos anteriormente. En una realizacion de esta invencion, la protelna de interes puede

45 ser eritropoyetina. En otro caso de la descripcion, el procedimiento de la descripcion puede usarse para la expresion y la secretion de cualquier protelna conocida en la tecnica y de combinaciones de estas. Ademas, el procedimiento de la descripcion puede usarse para la expresion de moleculas de ARN (codificantes o no codificantes).

[000138] Alternativamente, el DMO que incluye celulas modificadas geneticamente puede mantenerse in vitro y 50 el agente terapeutico que permanece en el medio sobrenadante que rodea la muestra de tejido puede aislarse e

inyectarse o administrarse al mismo sujeto o a un sujeto diferente.

[000139] Alternativa o adicionalmente, un microorgano dermico que incluye una celula modificada geneticamente puede conservarse criogenicamente mediante procedimientos conocidos en la tecnica, por ejemplo,

55 sin limitacion, congelation gradual (0°C, -20°C, -80°C, -196°C) en DMEM con DMSO al 10%, inmediatamente despues de su formation a partir de la muestra de tejido o despues de su alteration genetica.

[000140] De acuerdo con algunas realizaciones de la invencion, las cantidades de muestras de tejido con celulas modificadas geneticamente que han de implantarse se determinan a partir de uno o mas de los factores siguientes:

60 las cantidades correspondientes del agente terapeutico de interes administradas rutinariamente a tales sujetos sobre la base de las directrices reguladoras, protocolos cllnicos especlficos o estadlstica poblacional para sujetos similares. Las cantidades correspondientes del agente terapeutico, como la protelna de interes, especlficamente para este mismo sujeto, en caso de que este lo haya recibido anteriormente por medio de inyecciones o por otras vlas. Los datos del sujeto como peso, edad, condition flsica, estado cllnico. Los datos farmacocineticos de muestras 65 de tejido anteriores que incluyen la administracion de celulas modificadas geneticamente a otros sujetos similares. La respuesta a muestras de tejido anteriores que incluyen la administracion de celulas modificadas geneticamente a

este sujeto.

[000141] De acuerdo con algunas realizaciones de la invention, solo algunos de los DTMO se usan en una determinada sesion de tratamiento. Los DTMO restantes pueden retornarse para su mantenimiento (o almacenarse

5 criogenicamente o de otro modo) para un uso posterior.

[000142] Por lo tanto, de acuerdo con un caso de la description se proporciona un procedimiento para determinar la cantidad de un microorgano dermico terapeutico que ha de implantarse en un paciente, en que el procedimiento incluye la determination del nivel de secretion de un agente terapeutico por una cantidad del DTMO

10 in vitro; la estimation de una relation entre los niveles de production y de secrecion in vitro y los niveles del agente terapeutico en el suero in vivo; y la determinacion de la cantidad de DTMO que ha de implantarse sobre la base del nivel de secrecion determinado y de la relacion estimada. Opcionalmente, la relacion se estima sobre la base de uno o mas factores seleccionados entre el siguiente grupo de factores:

a) datos del sujeto como peso, edad, condition flsica, estado cllnico;

15 b) datos farmacocineticos de la administration anterior de un DTMO a otros sujetos similares; y c) datos farmacocineticos de la administracion anterior de un DTMO a este sujeto.

[000143] Opcionalmente, la relacion se estima sobre la base de al menos dos de dichos factores. Opcionalmente, la relacion se basa en tres de dichos factores.

20

[000144] En una realization de la invencion, la determinacion de la cantidad de un DTMO que ha de implantarse en un paciente se basa tambien en uno o los dos factores siguientes:

las cantidades correspondientes de la misma protelna terapeutica administrada rutinariamente a tales sujetos sobre la base de las directrices reguladoras, protocolos cllnicos especlficos o estadlstica poblacional para sujetos 25 similares; y

las cantidades correspondientes del mismo agente terapeutico especlficas para este mismo sujeto, en caso de que dicho sujeto lo haya recibido anteriormente por medio de inyecciones o por otras vlas de administracion.

[000145] En un caso de la descripcion, el procedimiento incluye la preparation de una cantidad del DTMO para 30 su implantation de acuerdo con la cantidad determinada.

[000146] Tambien se proporciona, de acuerdo con un caso de la descripcion, un procedimiento para ajustar la dosis de un agente terapeutico producido por un DTMO implantado en un sujeto y que excreta un agente terapeutico que incluye (a) la monitorizacion del nivel del agente terapeutico en el sujeto; (b) la comparacion del nivel del agente

35 con un nivel deseado; (c) si el nivel es inferior a un nivel mlnimo, la implantacion de un DTMO adicional; (d) si el nivel es superior a un nivel maximo, la inactivation o la extraction de una parte del DTMO implantado. Opcionalmente, el procedimiento implica la repetition periodica de (a)-(d). Alternativa o adicionalmente, la inactivacion o la extraccion consiste en la extraccion de una portion del DTMO implantado. Opcionalmente, la extraccion incluye la extirpation quirurgica. Alternativa o adicionalmente, la inactivacion o extraccion incluye la inactivacion. Opcionalmente, la 40 inactivacion incluye la destruction de una porcion del DTMO implantado. Opcionalmente, la inactivacion incluye la ablacion de una porcion del DTMO implantado.

[000147] De acuerdo con se describe anteriormente con referencia a la figura 1, al menos parte del proceso de sostenimiento del DMO durante la alteration genetica, as! como la alteration genetica misma pueden llevarse a

45 cabo en un biorreactor, de acuerdo con se describe a continuacion.

[000148] De acuerdo con algunos casos de la descripcion, el biorreactor puede tener algunas o todas las propiedades siguientes:

a) Permitir el suministro de nutrientes y gases a las superficies del DMO, de modo que estos puedan difundirse en el 50 DMO y el DMO pueda permanecer viable. Por lo tanto, no pueden bloquearse areas ni volumenes significativos del

DMO impidiendo su puesta en contacto con un llquido circundante.

b) Permitir el mantenimiento del DMO a una temperatura deseada.

c) Permitir el mantenimiento de un pH y una composition gaseosa deseados en la proximidad del DMO.

d) Permitir la extraccion de productos de desecho del DMO y/o del biorreactor.

55 e) Permitir un procedimiento sencillo de insertion del vector de modification genetica sin riesgo sustancial de que el vector de insercion contamine el entorno.

f) Permitir la extraccion del exceso de vector no usado.

g) Permitir la medicion de la cantidad de agente terapeutico generado.

h) Permitir la extraccion del agente terapeutico sustancialmente esteril.

60 i) Permitir la facil insercion del DMO y la extraccion de todo o de cantidades medidas de DTMO.

[000149] A continuation se hace referencia a la figura 22, que ilustra esquematicamente un sistema 2207 para el procesamiento de un DMO recogido 2204, de acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion.

65 [000150] De acuerdo con algunos casos de ejemplo de la descripcion, el sistema 2207 puede incluir un biorreactor 2200 con una o mas camaras de procesamiento 2202, cada una adaptada para acomodar un DMO 2204.

El biorreactor 2200, que en un caso de ejemplo tiene un numero de camaras igual al numero de los DMO recogidos de un sujeto en particular, puede adaptarse para suministrar un liquido o liquidos adecuados, por ejemplo, un medio de cultivo, a una o mas camaras de procesamiento 2202 desde un deposito de liquido local 2208 y/o descargar el liquido de una o mas de las camaras de procesamiento 2202, por ejemplo, a un contenedor de residuos 2210, de 5 acuerdo con se describe mas adelante. El liquido puede suministrarse al deposito 2208 a traves de una linea de entrada 2242, por ejemplo, conectada al deposito 2208 a traves de un conector esteril 2258, de acuerdo con se describe mas adelante.

[000151] El DMO 2204 puede transferirse a la camara 2202 mediante la herramienta de corte usada para la 10 recogida del DMO 2204, por ejemplo, de acuerdo con se describe anteriormente. Preferentemente, la transferencia

del DMO a la camara 2202 puede realizarse directamente despues de la recogida del DMO 2204 y mientras se mantienen las condiciones esteriles. La camara de procesamiento 2202 puede incluir un puerto de insercion del DMO 2201, adaptado para recibir al DMO 2204. Por ejemplo, el puerto 2201 puede incluir un septo esteril de separacion capaz de recibir una canula roma, por ejemplo, un sitio de inyeccion SafeLine®, comercializado por B. 15 Braun Medical Inc. Una vez que la punta de la herramienta de corte se ha insertado a traves del septo, el DMO 2204 puede expulsarse suavemente a la camara 2202 de manera generalmente esteril, por ejemplo, mediante una jeringa conectada al extremo posterior de la herramienta de corte. De acuerdo con un caso de ejemplo, el DMO 2204 puede expulsarse a un bano de medio 2206 dentro de la camara 2202. Alternativamente, si, por ejemplo, el DMO se ha recogido con una guia interior, por ejemplo, descrita anteriormente, es posible retirar una tapa 2232 colocada sobre 20 la camara 2202, por ejemplo, de acuerdo con se describe mas adelante, extraer cuidadosamente el DMO 2204 de la guia interior y colocarlo dentro de la camara 2202 y volver a colocar y sellar la tapa 2232 sobre la camara 2202 para mantener la esterilidad de la camara 2202.

[000152] El biorreactor 2200 puede adaptarse para aplicar, por ejemplo, de manera generalmente identica, uno 25 o mas procesos a los DMO que se acomodan dentro de al menos alguna de las camaras de procesamiento. De

acuerdo con casos de ejemplo, de la description, el biorreactor 2200 puede adaptarse para separar fluidicamente los contenidos de una o mas de las camaras de procesamiento de los contenidos de una o mas de las otras camaras de procesamiento, de acuerdo con se describe mas adelante.

30 [000153] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, el biorreactor 2200 puede incluir tambien un mecanismo para controlar el flujo de un liquido hacia dentro y/o fuera de la camara de procesamiento 2202, de acuerdo con se describe mas adelante.

[000154] De acuerdo con un caso de ejemplo, el biorreactor 2200 puede incluir un regulador esteril 2222 35 conectado fluidicamente con una bomba de jeringa no esteril 2214, que puede adaptarse para inyectar aire en el

regulador 2222 y/o descargar aire del regulador 2222 de manera esteril, por ejemplo, a traves de un filtro esteril 2220, por ejemplo, un filtro de aire de 0,45 pm de poro. El biorreactor 2200 puede incluir tambien una valvula de control 2212 capaz de moverse entre al menos cuatro posiciones, por ejemplo, una position de entrada al regulador en la que el deposito de entrada 2208 se conecta fluidicamente con el regulador 2222, una posicion de salida del 40 regulador, en la que en contenedor de residuos 2210 se conecta fluidicamente con el regulador 2222, una posicion de regulador a camara, en la que la camara 2202 se conecta fluidicamente con el regulador 2222 y/o una posicion de no conexion, en la que el regulador 2222, la camara 2202, el deposito de entrada 2208 y el contenedor de residuos 2210 estan desconectados fluidicamente entre si. Un piston 2226 puede conectar la valvula 2212 con un motor 2224 adaptado para mover la valvula 2212 entre las diferentes posiciones. Opcionalmente, sobre el piston 45 2226 puede colocarse un diafragma de fuelle 2228, de modo que sustancialmente no haya transferencia de aire no esteril al regulador esteril 2222, por ejemplo, durante el movimiento del piston 2226.

[000155] El sistema 2201 puede incluir tambien un motor 2216 para accionar el embolo 2218 de la bomba de jeringa 2214. Si el biorreactor 2200 incluye mas de una camara, puede implementarse un solo motor para el

50 accionamiento simultaneo de cada uno de los embolos asociados con las camaras o pueden implementarse varios motores, cada uno de los cuales es capaz de accionar uno o mas de los embolos.

[000156] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, el sistema 2201 puede incluir un controlador 2286 capaz de controlar la operation del motor 2216 y/o el motor 2224, por ejemplo, de acuerdo con se describe mas

55 adelante.

[000157] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, el liquido del deposito 2208 puede transferirse de manera controlable a la camara 2202, por ejemplo, con el fin de llenar la camara 2202. Por ejemplo, el controlador 2286 puede activar el motor 2224 para colocar la valvula 2212 en la posicion de entrada al regulador y activar de

60 manera controlable el motor 2216 de modo que la bomba de jeringa 2214 evacue una cantidad predeterminada de aire del regulador 2222. Como resultado, es posible “aspirar” del deposito de entrada 2208 al regulador 2222 un volumen predeterminado de liquido que corresponde a dicho volumen predeterminado de aire. Despues, el controlador 2286 puede activar de manera controlable el motor 2224 para mover la valvula 2212 a la posicion de regulador a camara y activar de manera controlable el motor 2216, de modo que la bomba de jeringa 2214 65 descargue el liquido del regulador 2222 a la camara 2202. De manera similar, la bomba de jeringa y la valvula de control pueden controlarse para descargar el contenido de la camara 2202 o una cantidad parcial de este en el

contenedor de residuos 2210.

[000158] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, el llquido en la camara 2202 puede agitarse y/o mezclarse de manera controlada, por ejemplo, con el fin de facilitar la transduccion vlrica y/o cualquier otro 5 procedimiento de mantenimiento ex vivo aplicado al DMO 2204. Por ejemplo, el controlador 2286 puede activar de manera controlable el motor 2216 y/o el motor 2224, por ejemplo, de acuerdo con se describe anteriormente, para descargar periodicamente el llquido o una parte de este de la camara 2202 al regulador y a continuation inyectar el llquido del regulador 2222 de vuelta a la camara 2202.

10 [000159] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, puede usarse aire para purgar el llquido situado en una o mas de las “llneas de paso”, por ejemplo, que conectan fluldicamente el deposito de entrada 2208, el contenedor de residuos 2210 y/o la camara 2202, con el fin de “lavar” dichas llneas de paso despues de transferir llquido a/desde la camara 2202, el deposito de entrada 2208 y/o el regulador 2222. Este caso puede ser util, por ejemplo, con el fin de reducir el “volumen muerto” de llquido que puede quedar “atrapado” en una o mas de las 15 llneas de paso. Por ejemplo, el controlador 2286 puede activar de manera controlable el motor 2216 para mover el embolo de la jeringa 2218 de modo que se aspire un volumen de aire predeterminado en el regulador 2222 antes de aspirar el llquido del deposito 2208 en el regulador 2222. El regulador 2222 puede tener una geometrla tal que el aire se eleve por encima del llquido dentro del regulador 2222, de modo que al accionar la bomba de jeringa 2214 puede descargarse primero el llquido en el regulador 2222, seguido del aire, el cual actuara para lavar las llneas de 20 paso de algo o de todo el llquido que quede en estas.

[000160] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, la superficie del fondo 2230 de la camara 2202 puede incluir varios orificios o un patron similar a una malla, por ejemplo, configurados para permitir la transferencia del llquido dentro y/o fuera de la camara 2202 de una manera sustancialmente uniforme y/o para permitir la

25 descarga de sustancialmente la mayor parte del llquido de la camara 2202. Esta configuration puede permitir tambien reducir la ocurrencia de “puntos muertos”, es decir, areas de la camara 2202 en las que el llquido permanece estancado y/o no se renueva.

[000161] De acuerdo con casos de ejemplo, la tapa 2232 puede ser una tapa esteril retirable, como una 30 membrana fijada por un adhesivo despegable, un tapon de silicona o similar. La tapa 2232 puede adaptarse para

mantener una “barrera” esteril entre la camara 2202 y el entorno. Opcionalmente puede implementarse un filtro de aire esteril 2234, por ejemplo, un filtro de aire de 0,45 pm de poro, para conectar fluldicamente la camara 2202 con el entorno, permitiendo as! equilibrar la presion mientras se mantiene una barrera esteril entre la camara 2202 y el entorno. Alternativamente, la tapa 2232 puede incluir un material “transpirable”, de modo que la presion pueda 35 equilibrarse a traves de dicha tapa 2232.

[000162] El deposito 2208 y/o el contenedor de residuos 2210 pueden conectarse normalmente, por ejemplo, por medio de uno o mas colectores (no se muestran), con una o mas camaras de procesamiento 2202 para un sujeto especlfico. Alternativamente, el deposito de entrada 2208 y/o el contenedor de residuos 2210 pueden

40 conectarse individualmente con cada una de las camaras de procesamiento. El deposito de entrada 2208 y/o el contenedor de residuos 2210 pueden incluir un mecanismo para equilibrar la presion de manera esteril. Por ejemplo, el deposito de entrada 2208 y/o el contenedor de residuos 2210 pueden conectarse fluldicamente con el entorno a traves de un filtro de aire esteril 2236 y/o un filtro de aire esteril 2238, respectivamente. El filtro 2236 y/o el filtro 2238 pueden incluir, por ejemplo, un filtro de aire de 0,45 pm de poro. Alternativamente, el contenedor de residuos 2210 45 puede incluir un contenedor de residuos expansible, de modo que no se necesita equilibrar la presion y, por lo tanto, no se necesita el uso de un filtro esteril para ello.

[000163] De acuerdo con un caso de ejemplo de la descripcion, el biorreactor 2200 puede adaptarse para permitir la inyeccion de llquido o la descarga de llquido directas de/a la camara 2202. Puede usarse un puerto de

50 muestreo con septo 2240, por ejemplo, para la inyeccion directa de un llquido con un vector vlrico o para el muestreo del medio de cultivo para analizar diversos parametros del biorreactor, como ELISA, absorcion de glucosa, production de lactato o cualquier otro parametro indicativo. El puerto con septo 2240 puede incluir un puerto de silicona estandar adaptado para la insertion de una aguja o un puerto para canulas, por ejemplo, de acuerdo con se describe anteriormente con referencia al puerto de insercion del DMO 2201. A traves del puerto con septo 2240, 55 puede insertarse una jeringa (no se muestra) de manera extralble. La jeringa puede accionarse mediante un motor, por ejemplo, similar al motor 2216, que puede activarse manual o automaticamente, por ejemplo, mediante un controlador 2286.

[000164] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, al menos algunos y en algunos casos de ejemplo 60 todos, los componentes del biorreactor 2200 pueden mantenerse en condiciones predeterminadas, por ejemplo,

condiciones de incubation que incluyen una temperatura de aproximadamente 37°C, una atmosfera gaseosa de aproximadamente el 90-95% de aire y aproximadamente el 5-10% de CO2 y/o un relativamente alto grado de humedad, por ejemplo, del 85-100%. De acuerdo con un caso de ejemplo, solo la camara 2202 puede mantenerse en las condiciones de incubacion. De acuerdo con se describe anteriormente, estas condiciones de incubacion 65 pueden necesitarse, por ejemplo, para mantener la vitalidad del cultivo de tejidos del DMO.

[000165] De acuerdo con casos de ejemplo de la description, puede implementarse una disposition de suministro de llquido para suministrar llquido a la llnea de entrada 2242 desde al menos un tanque de llquido, por ejemplo, los tanques de llquido 2244 y 2246. En un caso de ejemplo, los tanques 2244 y 2246 pueden contener el mismo llquido, por ejemplo, un medio de cultivo, en cuyo caso un tanque puede usarse como deposito de apoyo

5 para el otro tanque. En otro caso de ejemplo, los tanques 2244 y 2246 pueden contener dos tipos de llquidos diferentes, por ejemplo, dos tipos de medio de cultivo para usar en distintas etapas del procesamiento del DMO. El tanque 2244 y/o el tanque 2246 pueden incluir un filtro de aire esteril para equilibrar la presion de manera esteril, por ejemplo, de acuerdo con se describe anteriormente con referencia al deposito 2208. Alternativamente, el tanque 2244 y/o el tanque 2246 pueden incluir un tanque colapsable, por ejemplo, una bolsa de plastico esteril de acuerdo 10 con se conocen en la tecnica.

[000166] De acuerdo con casos de ejemplo de la descripcion, cada uno de los tanques 2244 y 2246 pueden conectarse fluldicamente con un conector de combination 2254 por medio de una valvula 2252, por ejemplo, una valvula de manguito flexible, un puerto conector con septo 2248 y una pua de penetration 2250. El conector 2254

15 puede incluir, por ejemplo un conector en Y o en T, de acuerdo con se conocen en la tecnica. La valvula 2252 puede adaptarse para controlar el flujo de llquido desde el tanque 2244 y/o el tanque 2246 al conector 2254. Entre el conector 2254 y el conector 2258, a lo largo de la llnea de entrada 2242, puede situarse una bomba, por ejemplo, una bomba peristaltica 2256. El controlador 2286 puede usarse para controlar la cantidad y/o la tasa de flujo del llquido suministrado al deposito 2208 mediante el accionamiento controlable del motor 2257 y/o las valvulas 2252.

20

[000167] De acuerdo con una realization de ejemplo, el llquido contenido en los tanques 2244 y/o 2246 puede tener una vida util de almacenamiento de nueve dlas en condiciones de refrigeration a 4°C. Por lo tanto, puede emplearse un sistema de refrigeracion (no se muestra) para mantener el llquido de los tanques 2244 y/o 2246 a una temperatura que puede ser inferior a la temperatura de incubation del deposito 2208. Por consiguiente, la llnea de

25 entrada 2242 puede pasar a traves de una interfase entre condiciones de refrigeracion y condiciones de incubacion. Una vez que la vida util ha expirado, el tanque 2244 y/o el tanque 2246 pueden reemplazarse por nuevos tanques.

[000168] De acuerdo con un caso de ejemplo, al menos algunos de los elementos del biorreactor 2200 pueden estar formados por componentes desechables de plastico esteril. De acuerdo con estos casos, el aparato biorreactor

30 2200 puede incluir un aparato biorreactor empaquetado esterilmente de un solo uso que puede transportarse al sitio de recogida de un DMO y puede abrirse en un entorno esteril y prepararse in situ, de modo que se inyecta medio de cultivo en cada camara 2202 del biorreactor. La herramienta usada para la recogida de los DMO puede insertarse a traves de los puertos de insertion de DMO 2201 para expulsar los DMO a las camaras 2202 de manera esteril, de acuerdo con se describe anteriormente. El aparato biorreactor 2200 puede transportarse, por ejemplo, en 35 condiciones de incubacion, a un sitio de procesamiento donde puede conectarse con otros componentes del sistema 2207, por ejemplo, el conector 2258, los motores 2216 y/ 2224, las valvulas de manguito flexible 2252 y/o la bomba peristaltica 2256. El controlador 2286 puede controlar entonces el mantenimiento y la transduction del DMO durante la totalidad del proceso ex vivo en el que se produce el DTMO a partir del DMO recogido. La dosificacion necesaria para el sujeto especlfico puede determinarse mediante el uso del modelo farmacocinetico, por ejemplo, de acuerdo 40 con se describe en este documento. El aparato biorreactor 2200 puede separarse entonces del sistema 2207 y transportarse, por ejemplo, en condiciones de incubacion, al sitio de implantation. Con el fin de implantar un DTMO especlfico, por ejemplo, de acuerdo con los procedimientos de implantacion descritos anteriormente, la camara 2202 del biorreactor para el DTMO especlfico puede abrirse retirando la tapa 2232 y el DTMO puede extraerse de la camara.

45

Ejemplos Ejemplo 1

50 Niveles de secrecion de eritropoyetina humana in vitro por DTMO-hEPO

[000169] Se realizaron experimentos para analizar la variabilidad del nivel de secrecion de hEPO in vitro entre los DTMO-hEPO obtenidos de diferentes muestras de piel humanas.

55 Procedimiento experimental

[000170] Los DTMO-hEPO se prepararon (por triplicado) a partir de muestras de piel obtenidas de seis sujetos humanos diferentes y los niveles de secrecion de hEPO se midieron en determinados momentos, de acuerdo con se indica en la figura 4, despues de haber lavado el vector vlrico.

60

Resultados experimentales

[000171] Los niveles de secrecion de los DTMO-hEPO fueron similares entre las diferentes muestras de piel humanas. Ademas, los niveles de secrecion de los DTMO-hEPO fueron similares a los niveles de hEPO obtenidos

65 previamente a partir de un TMO-hEPO de piel de espesor parcial (datos no mostrados).

Ejemplo 2 Histologfa

5 [000172] Con el fin de verificar que el DTMO contiene fundamentalmente componentes dermicos, se realizo un analisis histologico. Los MO se prepararon a partir de piel de espesor parcial o de muestras de piel dermicas y el analisis histologico fue realizado por un dermopatologo. De acuerdo con puede observarse en el lado izquierdo de la figura 5, el DTMO contiene capas dermicas y componentes dermicos, sin capas basales ni/o epidermicas residuales. En comparacion, el TMO de piel de espesor parcial, que se muestra en el lado derecho de la figura 5, contiene todas 10 las capas de la piel, incluidas las capas basales y epidermicas.

Ejemplo 3

Estudios inmunocitoqufmicos

15

[000173] Para estudiar que celulas se transducen en el tejido del DTMO-hEPO, se llevo a cabo un analisis inmunocitoqulmico histologico del DTMO-hEPO en el dla 9 despues de la recogida mediante un anticuerpo monoclonal dirigido contra hEPO (dilucion 1:20). El analisis mostro una fuerte tincion de los fibroblastos dermicos, de acuerdo con se muestra en la figura 6. La tincion se extendio por todo el DTMO.

20

Ejemplo 4

Comparacion de la actividad hematopoyetica de hEPO derivada de un DTMO-hEPO y de un TMO entero a largo plazo en ratones SCID

25

[000174] Se realizo un experimento para examinar y comparar los efectos a largo plazo de un DTMO-hEPO y un TMO-hEPO derivado de piel de espesor parcial, implantados subcutaneamente en ratones SCID.

Procedimiento experimental

30

[000175] Se prepararon un DTMO-hEPO humano y un TMO-hEPO derivado de piel de espesor parcial humana y se implantaron subcutaneamente en dos grupos de ratones SCID (cinco ratones por grupo). En un grupo de control se implantaron un DTMO y un TMO derivado de piel de espesor parcial humanos transducidos con un vector vlrico Ad/lacZ.

35

Resultados experimentales

[000176] De acuerdo con se muestra en la figura 7, en los dos grupos experimentales se identificaron niveles de secrecion y respuestas fisiologicas similares, mientras que, de acuerdo con lo esperado, los ratones del grupo de

40 control no mostraron hEPO en la sangre.

[000177] En todos los grupos experimentales pudo observarse un aumento del hematocrito, tan pronto como a los 15 dlas despues de la implantacion, que se mantuvo durante mas de cinco meses, mientras que los ratones de control con MO/lacZ no mostraron tal aumento del nivel de hematocrito. El DTMO-hEPO parece producir niveles de

45 secrecion similares durante periodos de tiempo similares en comparacion con el TMO-hEPO derivado de piel de espesor parcial.

Ejemplo 5

50 Un DTMO-hEPO no forma quistes de queratina al ser implantado subcutaneamente Procedimiento experimental

[000178] Un DTMO-hEPO y un TMO-hEPO derivado de piel de espesor parcial se implantaron 55 subcutaneamente en ratones SCID y se superviso la formacion de quistes de queratina mediante analisis cllnicos e

histologicos.

Resultados experimentales

60 [000179] De acuerdo con puede verse claramente en la figura 8, la formacion de quistes de queratina pudo observarse en la implantacion del TMO-hEPO derivado de piel de espesor parcial a los 76 y 141 despues de la implantacion. En contraste, no se observo ninguna formacion de quistes en los ratones SCID con el DTMO-hEPO a los 113 dlas despues de la implantacion.

65 Ejemplo 6

Integracion de un derivado de piel de espesor parcial y un DMO en sujetos humanos sanos Procedimiento experimental

5 [000180] Un MO dermico humano y un TMO derivado de piel de espesor parcial humana se obtuvieron mediante un dermatomo disponible comercialmente (Aesculap GA630). Antes de la recogida se administro anestesia topica y local a los sitios donante y receptor mediante la locion Emla (anestesia topica) e inyecciones subcutaneas de marcalna y adrenalina (anestesia local).

10 [000181] Se recogieron dos tipos de muestras de piel con el fin de producir un MO dermico humano y un MO derivado de piel de espesor parcial humano. Para el MO derivado de piel de espesor parcial humano se escindio una tira de piel sana de la parte baja del abdomen. A partir de esta seccion de piel se prepararon seis MO lineales de acuerdo con se ha descrito anteriormente. Simultaneamente se hicieron cortes de dimensiones especlficas en el sitio de implantacion mediante una herramienta de corte ajustable y los MO se injertaron poco despues en los cortes

15 de la piel. Para preparar los MO dermicos humanos, la piel se recogio en dos etapas. Primeramente se recogio un colgajo de piel de 200 pm de profundidad, que se mantuvo en gasa humeda. De este sitio de recogida se recogio una tira de piel de la dermis de 1 mm de profundidad. Despues de la recogida de la piel, el colgajo de piel de 200 pm se repuso en el sitio donante, para servir como vendaje biologico. De la tira de la dermis recogida anteriormente se prepararon cuatro MO dermicos por un procedimiento identico al empleado para el TMO derivado de piel de espesor

20 parcial. Los MO dermicos humanos se implantaron subcutaneamente poco despues mediante un trocar. Los sitios donante y receptor se vendaron con una membrana transparente Bioclusive® (Johnson & Johnson, EE. UU.). El vendaje se cambio al cabo de una semana y los implantes se examinaron para comprobar la integracion de los injertos. Dos o tres semanas despues de la integracion de los MO se realizo el procedimiento de abdominoplastia programado y se escindio una seccion de la piel que inclula la zona de injerto e implantacion. Para determinar la

25 integracion de los MO, se llevo a cabo una evaluacion cllnica en la zona de injerto que incluyo fotograflas y un examen histologico.

Resultados experimentales

30 [000182] Una inspeccion cllnica, que se llevo a cabo una semana despues de la implantacion y el analisis histologico, que se realizo poco despues de la abdominoplastia (2-3 semanas despues del injerto) mostraron una excelente integracion de los MO injertados en los cortes de la piel y en los sitios de implantacion subcutanea de los MO dermicos (figura 9). No se encontro ninguna indicacion de inflamacion o hinchazon ni en los MO derivados de piel de espesor parcial implantados en los cortes ni en los MO dermicos implantados subcutaneamente.

35

Ejemplo 7

Implantacion autologa de TMO lineales de piel de espesor parcial de cerdos enanos que expresan la eritropoyetina humana (hEPO) en animales inmunocompetentes

40

[000183] Se prepararon microorganos lineales (30,6 mm de largo y 0,6 pm de ancho) de piel de cerdo enano (Sinclair) a partir de muestras de tejido de piel recientes obtenidas de animales vivos con anestesia general. Las muestras de tejido de piel de espesor parcial de 0,9-1, 1 mm (profundidad) se extrajeron mediante un dermatomo comercial (Aesculap GA630) y se limpiaron mediante DMEM con glutamina y penicilina-streptomicina en placas de

45 Petri (90 mm).

[000184] Con el fin de generar los microorganos lineales, las muestras de tejido anteriores se cortaron mediante un dispositivo de presion con una estructura de cuchilla de acuerdo con se describe anteriormente en las dimensiones deseadas: 30,6 mm x 600 pm. Los microorganos lineales resultantes se colocaron, uno por pocillo, en

50 una microplaca de 24 pocillos con 500 pl por pocillo de DMEM (Biological Industries, Beit Haemek), en ausencia de suero y con el 5% de CO2 a 37°C durante 24 horas. Cada uno de los pocillos se sometio a un procedimiento de transduccion con el fin de generar un microorgano terapeutico de piel de cerdo enano (TMO de piel de cerdo) mediante un vector adenovlrico (1x1010 Pl/ml) con el gen de la eritropoyetina humana (Adeno-hEPO) durante 24 horas mientras se agitaba la placa. El medio se cambio cada 2-4 dlas y se analizo en cuanto a la presencia de hEPO

55 secretada mediante un kit de ELISA especlfico (n° de catalogo DEP00, Quantikine IVD, R&D Systems).

[000185] Los TMO lineales de hEPO de piel de cerdo enano descritos anteriormente se implantaron subcutaneamente y se injertaron como injertos cutaneos en varios cerdos enanos inmunocompetentes (en dos de los cerdos enanos los TMO-hEPO se implantaron subcutaneamente y en otros dos cerdos enanos diferentes los

60 TMO-hEPO se injertaron en cortes de 1 mm de profundidad). Se implanto un numero suficiente de TMO-hEPO en

cada cerdo enano, de modo que su nivel de secrecion combinado antes de la implantacion en cada cerdo fue de

aproximadamente 7 pm por dla. Durante siete dlas despues de la implantacion se obtuvieron unos niveles elevados de hEPO en el suero (figura 3A), determinados por un ensayo ELISA, y un aumento del recuento de reticulocitos.

65 [000186] Por tanto, estara claro que la presente invencion se ha descrito utilizando descripciones detalladas no

limitantes de realizaciones de la misma que se proporcionan a modo de ejemplo. Solamente se ha mostrado un

numero limitado de cambios geneticos. Sin embargo, sobre la base de la metodologla descrita en este documento, en la que un tejido vivo se reimplanta en el cuerpo de un paciente y de la viabilidad de dicho tejido en el cuerpo despues de la implantacion, esta claro que practicamente cualquier cambio genetico en el tejido inducido por practicamente cualquier procedimiento conocido resultara en la secrecion de las protelnas o de otros agentes 5 terapeuticos deseados en el paciente.

[000187] A los expertos en la tecnica se les ocurriran variaciones de las realizaciones de la invention, incluidas combinaciones de las caracterlsticas de las diversas realizaciones. Por lo tanto, el alcance de esta invencion se encuentra solamente limitado por el alcance de las reivindicaciones. Ademas, para evitar cualquier pregunta

10 referente al alcance de las reivindicaciones, donde se usan los terminos “comprender”, “incluir” o “tener” y sus formas conjugadas en las reivindicaciones, se indica “incluye, pero sin limitarse necesariamente a estos/as”.

[000188] La presente solicitud comprende, ademas, los siguientes casos:

15 1. Un microorgano dermico que comprende una pluralidad de componentes dermicos, que retienen sustancialmente la microarquitectura y la estructura tridimensional del tejido dermico a partir del cual se derivan, que tiene dimensiones seleccionadas a fin de permitir la difusion pasiva de nutrientes y gases adecuados a las celulas de dicho microorgano dermico y la difusion de residuos celulares fuera de dichas celulas con el fin de minimizar la toxicidad celular y la muerte concomitante debido a una nutrition insuficiente y la acumulacion de residuos en dichos 20 microorganos dermicos.

2. El microorgano dermico de 1, en el que dicho microorgano dermico produce no mas que una cantidad insignificante de queratina.

3. El microorgano dermico aislado de organos dermica de acuerdo con 1 o 2, que tiene una longitud de aproximadamente 5-100 mm.

25 4. El microorgano dermico de cualquiera de 1 a 3, en el que dicho microorgano dermico incluye parte de la section transversal de la dermis.

5. El microorgano dermico de 4, en el que dicho microorgano dermico incluye la mayor parte de la seccion transversal de la dermis.

6. El microorgano dermico de 5, en el que dicho microorgano dermico incluye sustancialmente toda la seccion 30 transversal de la dermis.

7. El microorgano dermico de cualquiera de 1 a 6, en el que dicho microorgano dermico comprende, ademas, tejido graso.

8. El microorgano dermico de cualquiera de 1 a 7, en el que dicho microorgano dermico comprende, ademas, tejido de al menos una capa epidermica.

35 9. El microorgano dermico de 8, en el que dicha al menos una capa epidermica comprende una capa epidermica basal.

10. El microorgano dermico de cualquiera de 1 a 9, en el que dicho microorgano dermico se puede mantener in vitro durante al menos varios dlas.

11. El microorgano dermico de 10, en el que dicho microorgano dermico es se puede mantener in vitro durante al 40 menos varias semanas.

12. El microorgano dermico de cualquiera de 1 a 11, en el que dicho microorgano dermico comprende una demarcacion in vivo.

13. El microorgano dermico de cualquiera de 1 a 12, en el que dicho microorgano dermico esta encapsulado en una carcasa inmunoprotectora.

45 14. Un microorgano dermico modificado geneticamente que expresa al menos un producto genico recombinante, comprendiendo dicho microorgano dermico una pluralidad de componentes dermicos, que retienen la microarquitectura y la estructura tridimensional del tejido dermico a partir del cual se derivan, que tiene dimensiones seleccionadas a fin de permitir la difusion pasiva de nutrientes y gases adecuados a las celulas de dicho microorgano dermico y la difusion de los residuos celulares fuera de dichas celulas con el fin de minimizar la 50 toxicidad celular y la muerte concomitante debido a la nutricion insuficiente y la acumulacion de residuos en dicho microorgano dermico, en el que al menos algunas de dichas celulas expresan al menos una parte de al menos un producto genico recombinante.

15. El microorgano dermico modificado geneticamente de 14, en el que dicho microorgano dermico incluye parte de la seccion transversal de la dermis.

55 16. El microorgano dermico modificado geneticamente de 15, en el que dicho microorgano dermico incluye la mayor parte de la seccion transversal de la dermis.

17. El microorgano dermico modificado geneticamente de 16, en el que dicho microorgano dermico incluye sustancialmente toda la seccion transversal de la dermis.

18. El microorgano dermico modificado geneticamente de cualquiera de 14 a 17, en el que dicho microorgano 60 dermico comprende, ademas, tejido graso.

19. El microorgano dermico modificado geneticamente de cualquiera de 14 a 18, en el que dicho al menos un producto genico recombinante se produce de forma natural por un organo a partir del cual se deriva el microorgano dermico.

20. El microorgano dermico modificado geneticamente de cualquiera de 14 a 18, en el que dicho al menos un 65 producto genico recombinante no se produce de forma natural por el organo del cual se deriva el microorgano

dermico.

21. El microorgano dermico modificado geneticamente de cualquiera de 14 a 20, en el que dicho microorgano dermico modificado geneticamente comprende una demarcacion in vivo.

22. El microorgano dermico modificado geneticamente de cualquiera de 14 a 21, en el que dicho microorgano dermico modificado geneticamente esta encapsulado en una carcasa inmunoprotectora.

5 23. Un procedimiento para inducir un efecto fisiologico local o sistemico en un sujeto que comprende implantar en el cuerpo un microorgano dermico de acuerdo con cualquiera de 1 a 22.

24. El procedimiento de 23, en el que la implantacion de dicho microorgano dermico comprende implantar dicho microorgano dermico en la piel o por debajo de la misma.

25. Un procedimiento de administracion de un producto genico de interes a un sujeto que comprende implantar en el 10 cuerpo el microorgano dermico modificado geneticamente de cualquiera de 14 a 24.

26. El procedimiento de 25, en el que la implantacion de dicho microorgano dermico modificado geneticamente comprende implantar dicho microorgano dermico modificado geneticamente en la piel o por debajo de la misma.

27. El procedimiento de cualquiera de 23 a 26, en el que dicho microorgano dermico se deriva de dicho sujeto.

28. El procedimiento de cualquiera de 23 a 26, en el que dicho microorgano dermico se deriva de un donante.

15 29. El procedimiento de 28, en el que dicho donante es un ser humano.

30. El procedimiento de 28, en el que dicho donante es un animal no humano.

31. Un procedimiento para determinar la cantidad de un microorgano dermico terapeutico a ser implantado en un paciente, comprendiendo el procedimiento:

determinar el nivel de production y/o secretion de un agente terapeutico por una cantidad del microorgano dermico 20 in vitro;

estimar la relation entre la produccion y/o secrecion in vitro y los niveles sericos in vivo del agente terapeutico; y determinar la cantidad de microorgano dermico terapeutico a ser implantado, en base al nivel de produccion y/o secrecion determinado y la relacion estimada.

32. Un procedimiento para la implantacion de un microorgano dermico terapeutico en un sitio de implantacion que 25 comprende:

insertar en dicho sitio de implantacion un portador que tiene dicho microorgano dermica terapeutico aspirado en el mismo;

extraer dicho portador mientras se mantiene dicho microorgano dermico terapeutico en dicho sitio de implantacion.

33. El procedimiento de 32, en el que dicho sitio de implantacion es en la piel o debajo de la misma.

30 34. Un procedimiento para la implantacion de un microorgano dermico terapeutico en un sitio de implantacion que comprende:

insertar en dicho sitio de implantacion un portador que tiene dicho microorgano dermico terapeutico aspirado en el mismo;

aplicar presion sobre el microorgano dermico terapeutico aspirado de manera que dicho microorgano dermico 35 terapeutico aspirado sale de dicho portador en dicho sitio de implantacion.

35. El procedimiento de 34, en el que dicho sitio de implantacion previsto es en el interior del cuerpo.

36. Un procedimiento para el ajuste de la dosis de un agente terapeutico producido por un microorgano dermico terapeutico implantado en un sujeto y la excretion de un agente terapeutico, que comprende:

hacer un seguimiento del nivel de agente terapeutico en el sujeto; y 40 controlar la cantidad de microorgano dermico terapeutico en el sujeto basado en una comparacion entre dicho nivel de agente terapeutico y al menos un nivel umbral.

37. Un procedimiento de acuerdo con 36, en el que dicho al menos un nivel umbral comprende un nivel mlnimo y un nivel maximo, y en el que el control de la cantidad de microorgano dermico terapeutico comprende:

implantar un microorgano dermico terapeutico adicional si dicho nivel de agente terapeutico es menor que dicho 45 nivel mlnimo; y

inactivar o eliminar una parte del microorgano dermico terapeutico implantado si dicho nivel de agente terapeutico es mas alto que dicho nivel maximo.

38. Un procedimiento de acuerdo con 37, que comprende, ademas, repetir periodicamente dicho seguimiento y dicho control hasta que el nivel de dicho agente es entre dicho nivel mlnimo y dicho nivel maximo.

50 39. Un procedimiento de acuerdo con 37 o 38, en el que la inactivation o elimination de dicha parte comprende eliminar dicha parte.

40. Un procedimiento de acuerdo con 37 o 38, en el que la inactivacion o eliminacion de dicha parte comprende la extirpation quirurgica de dicha parte.

41. Un procedimiento de acuerdo con 37 o 38, en el que la inactivacion o eliminacion de dicha parte comprende la 55 ablation de dicha parte.

42. Un procedimiento de acuerdo con 37 o 38, en el que la inactivacion o eliminacion de dicha parte comprende matar dicha parte.

43. Un aparato para la recoleccion de un microorgano dermico, comprendiendo el aparato:

una configuration de soporte para soportar una estructura de tejido relacionada con la piel de la que dicho 60 microorgano dermico debe recogerse; y

una herramienta de corte capaz de separar dicho microorgano dermico de dicha estructura de tejido relacionada con la piel.

44. El aparato de 43, en el que dicha configuracion de soporte comprende un primer elemento tubular y en el que dicha herramienta de corte comprende un segundo elemento tubular adaptado para ser insertado a lo largo de y

65 sustancialmente de forma coaxial con dicho primer elemento.

45. El aparato de 44, en el que dicho primer elemento tubular comprende una aguja de gula interior.

46. El aparato de 44 o 45, en el que dicho primer elemento tubular esta adaptado para extraer dicho microorgano dermico de dicho segundo elemento tubular.

47. El aparato de cualquiera de 44 a 46, en el que dicho segundo elemento tubular comprende un tubo de extraccion de muestras capaz de cortar a traves de dicha estructura de tejido relacionada con la piel cuando avanza a lo largo

5 de un eje de corte.

48. El aparato de 47, en el que dicho tubo de extraccion de muestras comprende un tubo de extraccion giratorio.

49. El aparato de 47 o 48, en el que al menos una de una superficie interior y una superficie exterior de dicho tubo

de extraccion de muestras esta recubierto al menos parcialmente con un material de baja friccion.

50. El aparato de 49, en el que dicho material de baja friccion comprende Teflon o Parylene.

10 51. El aparato de 44, en el que dicho primer elemento tubular comprende un recorte en muesca.

52. El aparato de cualquiera de 43 a 51, en el que dicha estructura de soporte comprende un mecanismo de sujecion para soportar dicha estructura de tejido relacionada con la piel.

53. El aparato de 43, en el que dicha configuracion de soporte comprende una camara de vaclo que tiene una superficie interior de soporte capaz de mantener dicha estructura de tejido relacionada con la piel en una forma y

15 posicion deseadas para permitir que dicha herramienta de corte separe dicho microorgano dermico de dicha estructura de tejido relacionada con la piel.

54. El aparato de 53, en el que dicha estructura de tejido relacionada con la piel se encuentra en el interior de dicha camara cuando se aplica una condition de vaclo a dicha camara.

55. El aparato de 53 o 54 que comprende un canal de gula conectado a dicha camara de vaclo y configurada para 20 mantener dicha herramienta de corte, cuando se inserta en dicho canal de gula, a una distancia predeterminada de

dicha superficie de soporte.

56. El aparato de 55, en el que dicha distancia esta predeterminada en base a una ubicacion deseada dentro de dicha estructura de tejido relacionada con la piel para recoger dicho microorgano dermico.

57. El aparato de cualquiera de 53 a 56, que comprende uno o mas canales de vaclo para conectar de manera fluida 25 al menos parte de dicha superficie con al menos una fuente de vaclo.

58. El aparato de cualquiera de 53 a 57, que comprende una configuracion de sujecion para sujetar dicha estructura de tejido relacionada con la piel cuando dicha estructura de tejido relacionada con la piel esta soportada por dicha superficie de soporte.

59. El aparato de cualquiera de 53 a 58, en el que al menos una dimension de dicha camara esta predeterminada en 30 base a al menos una dimension prevista de dicho microorgano dermico.

60. El aparato de cualquiera de 53 a 59, en el que dicha herramienta de corte esta adaptada para extraer dicho microorgano dermico de dentro de dicha camara.

61. El aparato de cualquiera de 53 a 60, en el que dicha camara de vaclo comprende una protuberancia elevada capaz de mantener una meseta de la piel generalmente por encima de la trayectoria de la herramienta de corte, de

35 manera que el microorgano dermico recogido se separa del cuerpo con solo una puncion.

62. El aparato de cualquiera de 43 a 61 que comprende un mecanismo de rotation capaz de girar dicha herramienta de corte.

63. El aparato de 62, en el que dicho mecanismo de rotacion gira dicha herramienta de corte a una velocidad de al menos 1.000 RPM.

40 64. El aparato de 63, en el que dicho mecanismo de rotacion gira dicha herramienta de corte a una velocidad de al menos 2.000 RPM.

65. El aparato de 64, en el que dicho mecanismo de rotacion gira dicha herramienta a una velocidad de aproximadamente 7.000 RPM.

66. El aparato de cualquiera de 43 a 65, en el que dicha estructura de tejido relacionada con la piel tiene una forma 45 generalmente cillndrica.

67. El aparato de cualquiera de 43 a 66, en el que dicha estructura de tejido relacionada con la piel comprende componentes del tejido epidermico y componentes del tejido dermico.

68. El aparato de 67, en el que dicha estructura de tejido relacionada con la piel comprende, ademas, al menos parte de tejido graso y tejido muscular.

50 69. El aparato de cualquiera de 43 a 68, en el que dicha microorgano dermico recogido comprende al menos parte de una section transversal de la dermis.

70. El aparato de 69, en el que dicho microorgano dermico comprende, ademas, tejido graso.

71. El aparato de 69 o 70, en el que dicho microorgano dermico comprende, ademas, tejido epidermico.

72. El aparato de cualquiera de 43 a 71, en el que dicho microorgano dermico comprende una pluralidad de 55 componentes dermicos, que retienen sustancialmente la microarquitectura y estructura tridimensional del tejido

dermico a partir del cual se derivan, que tiene dimensiones seleccionadas a fin de permitir la difusion pasiva de nutrientes y gases adecuados a celulas de dicho microorgano dermico y la difusion de residuos celulares fuera de dichas celulas con el fin de minimizar la toxicidad celular y la muerte concomitante debido a la nutrition insuficiente y la acumulacion de residuos en dicho microorgano dermico.

60 73. Un procedimiento para la recoleccion de un microorgano dermico de un sujeto, que comprende:

soportar una estructura de tejido relacionada con la piel de la que se recoge dicho microorgano dermico; y separar dicho microorgano dermico de dicha estructura de tejido relacionada con la piel.

74. Un procedimiento de acuerdo con 73, en el que dicho soporte comprende insertar una gula interior en dicha estructura de tejido relacionada con la piel, y en el que dicha separation comprende insertar una herramienta de

65 corte a lo largo de y coaxialmente con dicha gula interior.

75. Un procedimiento de acuerdo con 74, en el que dicho soporte comprende sujetar dicha estructura de tejido

relacionada con la piel.

76. El procedimiento de 74 o 75, que comprende, ademas, extraer la gula interior de manera que se extrae dicho microorgano dermico.

77. El procedimiento de cualquiera de 74 a 76, en el que insertar dicha gula interior comprende insertar dicha gula 5 interior generalmente en paralelo con una superficie de la piel de dicha estructura de tejido relacionada con la piel.

78. El procedimiento de cualquiera de 74 a 77, en el que dicha separacion comprende, ademas, girar dicha herramienta de corte.

79. El procedimiento de 78, en el que dicho giro comprende girar dicha herramienta de corte de rotacion a una velocidad superior a 1.000 RPM.

10 80. El procedimiento de 79, en el que dicho giro comprende girar dicha herramienta de corte de rotacion a una velocidad superior a 2.000 RPM.

81. El procedimiento de 80, en el que dicho giro comprende girar dicha herramienta de corte a una velocidad de aproximadamente 7.000 RPM.

82. El procedimiento de 73, en el que el soporte comprende aplicar a dicha estructura de tejido relacionada con la 15 piel una condicion de vaclo.

83. El procedimiento de cualquiera de 73 a 82, en el que dicha estructura de tejido relacionada con la piel comprende componentes del tejido epidermico y componentes del tejido dermico.

84. El procedimiento de 83, en el que dicha estructura de tejido relacionada con la piel comprende, ademas, al menos parte de tejido graso y de tejido muscular.

20 85. El procedimiento de cualquiera de 73 a 84, en el que dicho microorgano dermico comprende al menos parte de la seccion transversal de la dermis.

86. El procedimiento de 85, en el que dicho microorgano dermico comprende, ademas, tejido graso.

87. El procedimiento de cualquiera de 73 a 86, que comprende formar al menos una puncion.

88. El procedimiento de cualquiera de 73 a 87, en el que dicho microorgano dermico comprende una pluralidad de 25 componentes dermicos, que retienen sustancialmente la microarquitectura y la estructura tridimensional del tejido

dermico a partir del cual se derivan, que tiene dimensiones seleccionadas a fin de permitir la difusion pasiva de nutrientes y gases adecuados a celulas de dicho microorgano dermico y la difusion de los residuos celulares fuera de dichas celulas con el fin de minimizar la toxicidad celular y la muerte concomitante debido a la nutricion insuficiente y la acumulacion de residuos en dicho microorgano dermico.

30

Claims

REIVINDICACIONES

1. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar en terapia, en el que dicho microorgano dermico modificado geneticamente expresa y secreta al menos un producto genico recombinante, en el que dicho producto

5 genico recombinante se selecciona entre eritropoyetina o interferon; en el que dicho microorgano dermico es un explante que tiene una pluralidad de componentes dermicos y no incluye capas epidermicas, reteniendo dichos componentes dermicos la microarquitectura y la estructura tridimensional del tejido dermico a partir del cual se derivaba; y

en el que dicho microorgano dermico tiene una dimension de longitud de 5 a 100 mm y una dimension de seccion 10 transversal de 0,5 a 3,5 mm.
2. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun la reivindicacion 1, en el que dicho microorgano dermico modificado geneticamente incluye parte de la seccion transversal de la dermis.

15 3. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun la reivindicacion 2, en el que dicho microorgano dermico modificado geneticamente incluye la mayor parte de la seccion transversal de la dermis.
4. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho microorgano dermico modificado geneticamente incluye ademas tejido graso.

20
5. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho microorgano dermico modificado geneticamente comprende una demarcacion in vivo.
6. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun la reivindicacion 5, en el que dicha 25 demarcacion in vivo comprende una tinta o colorante sobre la superficie periferica de dicho microorgano dermico

modificado geneticamente.
7. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun la reivindicacion 5, en el que dicha demarcacion in vivo comprende un gen de protelna verde fluorescente (GFP) o un gen indicador de la luciferasa

30 expresados por dicho microorgano dermico modificado geneticamente.
8. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho microorgano dermico modificado geneticamente tiene de 10 a 60 mm de longitud.

35 9. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho microorgano dermico modificado geneticamente tiene de 20 a 40 mm de longitud.
10. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que dicho producto genico recombinante se ha introducido en dicho microorgano dermico modificado

40 geneticamente utilizando un vector vlrico.
11. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que dicho producto genico recombinante es eritropoyetina.

45 12. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que dicho producto genico recombinante es interferon.
13. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun la reivindicacion 12, en el que dicho interferon es interferon alfa, interferon beta o interferon gamma.

50
14. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que dicha terapia induce un efecto fisiologico local o sistemico en un sujeto.
15. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en 55 el que dicha terapia libera dicho producto genico recombinante a un sujeto y en el que dicho microorgano dermico

deriva de dicho sujeto.
16. Microorgano dermico modificado geneticamente para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que dicha terapia comprende implantar dicho microorgano dermico modificado geneticamente en la piel o por

60 debajo de la misma o mas profundamente en el cuerpo que la implantacion subcutanea.