ES2542401T3 - Derivados sustituidos de xantina - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la siguiente fórmula:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que el factor de enriquecimiento isotópico para cada átomo de deuterio designado es al menos 5000.

Description

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vasculares, endoprótesis, o catéteres. Los recubrimientos adecuados y la preparación general de dispositivos implantables recubiertos son conocidos en la técnica y se ejemplifican en las patentes de Estados Unidos 6.099.562; 5.886.026; y 5.304.121. Los recubrimientos son típicamente materiales poliméricos biocompatibles tales como un polímero de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietilenglicol, ácido poliláctico, acetato de etilen vinilo, y mezclas de los mismos. Los recubrimientos pueden cubrirse también opcionalmente por un acabado adecuado de fluorosilicona, polisacáridos, polietilenglicol, fosfolípidos o combinaciones de los mismos para conferir características de liberación controlada a la composición. Los recubrimientos para dispositivos invasivos tienen que incluirse dentro de la definición de medio, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, del modo en que esos términos se usan en este documento.

De acuerdo con otra realización, la invención proporciona un método para recubrir un dispositivo médico implantable que comprende la etapa de poner en contacto dicho dispositivo con la composición de recubrimiento descrita anteriormente. Será obvio para los especialistas en la técnica que el recubrimiento del dispositivo sucederá antes de su implante en un mamífero.

De acuerdo con otra realización, la invención proporciona un método para impregnar un dispositivo implantable de liberación de fármaco que comprende la etapa de poner en contacto dicho dispositivo de liberación de fármaco con un compuesto o composición de esta invención. Los dispositivos implantables de liberación de fármaco incluyen, aunque sin limitación, cápsulas o balas de polímero biodegradable, cápsulas no degradables, de polímero difundible y obleas de polímero biodegradable.

De acuerdo con otra realización, la invención proporciona un dispositivo médico implantable recubierto con un compuesto o una composición que comprende un compuesto de esta invención, de modo que dicho compuesto es terapéuticamente activo.

De acuerdo con otra realización, la invención proporciona un dispositivo implantable de liberación de fármaco impregnado con o que contiene un compuesto o una composición que comprende un compuesto de esta invención, de modo que dicho compuesto se libera desde dicho dispositivo y es terapéuticamente activo.

Cuando un órgano o tejido es accesible a causa de su retirada desde el paciente, dicho órgano o tejido puede bañarse en un medio que contiene una composición de esta invención, puede aplicarse como pintura una composición de esta invención sobre el órgano, o puede aplicarse una composición de esta invención de cualquier otro modo conveniente. En otra realización, el compuesto de la invención comprende entre el 28 y el 68% (p/p) de la composición. En esta realización, el estearato de magnesio y la celulosa microcristalina comprenden aproximadamente el 2% (p/p) de la composición.

En otra realización, una composición de esta invención comprende adicionalmente un segundo agente terapéutico. El segundo agente terapéutico puede seleccionarse entre cualquier compuesto o agente terapéutico conocido por tener o mostrar propiedades ventajosas cuando se administra con un compuesto que tiene el mismo mecanismo de acción que pentoxifilina. Dichos agentes incluyen aquellos indicados como útiles en combinación con pentoxifilina, incluyendo aunque sin limitación, los descritos en los documentos WO 1997019686, EP 0640342, WO 2003013568, WO 2001032156, WO 2006035418, y WO 1996005838.

Preferiblemente, el segundo agente terapéutico es un agente útil en el tratamiento o prevención de una enfermedad

o afección seleccionada entre enfermedad vascular obstructiva periférica; glomerulonefritis; síndrome nefrótico; esteatohepatitis no alcohólica; leishmaniasis; cirrosis; fallo hepático; distrofia muscular de Duchenne; lesiones inducidas por radiación tardía; linfedema inducido por radiación; necrosis asociada a radiación; hepatitis alcohólica; fibrosis asociada a radiación; enterocolitis necrotizante en neonatos prematuros; nefropatía diabética, fallo renal inducido por hipertensión, y otra enfermedad renal crónica; glomeruloesclerosis segmentaria focal; sarcoidosis pulmonar; estomatitis aftosa recurrente; dolor crónico de mama en pacientes con cáncer de mama; tumores del cerebro y el sistema nervioso central; síndrome de malnutrición-inflamación-caquexia; enfermedad mediada por interleuquina-1; reacción de injerto contra hospedador y otras reacciones a aloinjertos; afecciones de hígado graso inducido por la dieta, lesiones ateromatosas, degeneración de hígado graso y otras afecciones degenerativas de los tejidos inducidas por dieta rica en grasas o inducidas por alcohol; infección por virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y otras infecciones retrovirales humanas; esclerosis múltiple; cáncer; enfermedades fibroproliferativas; infección fúngica; nefrotoxicidad inducida por fármacos; colitis por colágeno y otras enfermedades y/o afecciones caracterizadas por niveles elevados de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) u otras citoquinas inflamatorias; endometriosis; neuropatía óptica y alteraciones del SNC asociadas con síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), enfermedades por trastornos inmunes, o esclerosis múltiple; enfermedad autoinmune; infección vírica del sistema respiratorio superior; depresión; incontinencia urinaria; síndrome del intestino irritable; choque séptico; demencia de Alzheimer; dolor neuropático; disuria; daño de la retina o el nervio óptico; úlcera péptica; diabetes insulino-dependiente; diabetes no insulino-dependiente; nefropatía diabética; síndrome metabólico; obesidad; resistencia a la insulina; dislipidemia; tolerancia patológica a la glucosa; hipertensión; hiperlipidemia; hiperuricemia; gota; hipercoagulabilidad; e inflamación o lesión asociada con quimiotaxis y/o desgranulación de neutrófilos. Los compuestos de esta invención también pueden usarse para

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En una realización, la invención proporciona compuesto 121(S), para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un paciente que lo necesita seleccionada entre diabetes insulino-dependiente; diabetes no insulinodependiente; síndrome metabólico; obesidad; resistencia a la insulina; dislipidemia; tolerancia patológica a la glucosa; hipertensión; hiperlipidemia; hiperuricemia; gota; e hipercoagulabilidad.

En una realización, la invención proporciona compuesto 121(S), para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un paciente que lo necesita donde la enfermedad o afección se selecciona entre anemia, enfermedad de Graves, oclusión venosa de la retina, nefritis por lupus, degeneración macular, mielodisplasia, prurito de origen VIH, hipertensión pulmonar, oclusión arterial de la retina, inflamación intestinal, neuropatía óptica isquémica, pancreatitis aguda, anemia falciforme y beta talasemia.

Los usos médicos definidos en este documento también incluyen aquellos donde el paciente se identifica como en necesidad de un tratamiento indicado particular. La identificación de un paciente en necesidad de dicho tratamiento puede ser a juicio de un paciente o un profesional de asistencia sanitaria y puede ser subjetiva (por ejemplo, opinión) u objetiva (por ejemplo, medible por un ensayo o método de diagnóstico).

En otra realización, cualquiera de los usos médicos anteriores comprende uno o más segundos agentes terapéuticos. La elección del segundo agente terapéutico puede hacerse a partir de cualquier segundo agente terapéutico conocido por ser útil para su co-administración con pentoxifilina. La elección del segundo agente terapéutico también es dependiente de la enfermedad o afección particular a tratar. Ejemplos de segundos agentes terapéuticos que pueden emplearse en los métodos de esta invención son aquellos expuestos anteriormente para su uso en composiciones de combinación que comprenden un compuesto de esta invención y un segundo agente terapéutico.

En particular, las terapias de combinación de esta invención incluyen compuesto 121(S) y un segundo agente terapéutico para su uso en el tratamiento de las siguientes afecciones (con el segundo agente terapéutico particular indicado en paréntesis después de la indicación): lesiones inducidas por radiación tardía (α-tocoferol), fibrosis inducida por radiación (α-tocoferol), linfedema inducido por radiación (α-tocoferol), dolor crónico de mama en pacientes con cáncer de mama (α-tocoferol), nefropatía diabética tipo 2 (captopril), síndrome de malnutricióninflamación-caquexia (suplemento nutricional oral, tal como Nepro; y módulo de anti-inflamatorio oral, tal como Oxepa); y tumores del cerebro y el sistema nervioso central (radioterapia e hidroxiurea).

Las terapias de combinación de esta invención también incluyen compuesto 121(S) y un segundo agente terapéutico para su uso en el tratamiento de diabetes insulino-dependiente; diabetes no insulino-dependiente; síndrome metabólico; obesidad; resistencia a la insulina; dislipidemia; tolerancia patológica a la glucosa; hipertensión; hiperlipidemia; hiperuricemia; gota; e hipercoagulabilidad.

El segundo agente terapéutico puede administrarse junto con el compuesto de esta invención como parte de una única forma de dosificación (tal como una composición de esta invención que comprende un compuesto de la invención y un segundo agente terapéutico como se ha descrito anteriormente) o como formas separadas de múltiples dosificaciones. Como alternativa, el agente adicional puede administrarse antes de, de forma consecutiva con, o después de la administración de un compuesto de esta invención. En dicho tratamiento de terapia de combinación, tanto los compuestos de esta invención como los segundos agentes terapéuticos se administran por métodos convencionales. La administración de una composición de esta invención, que comprende tanto un compuesto de la invención como un segundo agente terapéutico, a un paciente no excluye la administración por separado de ese mismo agente terapéutico, cualquier otro segundo agente terapéutico o cualquier compuesto de esta invención a dicho paciente en otro momento durante un curso de tratamiento.

Las cantidades eficaces de estos segundos agentes terapéuticos son bien conocidas para los especialistas en la técnica y pueden encontrarse directrices para la dosificación en patentes y solicitudes de patente publicadas remitidas en este documento, así como en Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2ª Edición, Appleton y Lange, Stamford, Conn. (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif. (2000), y otros textos médicos. Sin embargo, pertenece al ámbito de conocimiento de los especialistas en la técnica la determinación del intervalo de cantidad eficaz óptima del segundo agente terapéutico.

En una realización de la invención, cuando se administra un segundo agente terapéutico a un sujeto, la cantidad eficaz del compuesto de esta invención es menor de lo que sería su cantidad eficaz cuando no se administra el agente terapéutico. En otra realización, la cantidad eficaz del segundo agente terapéutico es menor de lo que sería su cantidad eficaz cuando no se administra el compuesto de esta invención. De este modo, pueden minimizarse los efectos secundarios indeseados asociados con altas dosis de cualquier agente. Otras ventajas potenciales (incluyendo sin limitación regímenes de dosificación mejorados y/o costes reducidos del fármaco) serán evidentes para los especialistas en la técnica. En otro aspecto más, la invención proporciona el uso de compuesto 121(S) solo o junto con uno o más de los segundos agentes terapéuticos descritos anteriormente en la fabricación de un medicamento, como una

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en la estructura que se indica a continuación

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puede realizarse en lotes sucesivos. La siguiente tabla muestra el porcentaje de incorporación de deuterio en cada uno del metil(CO), (CO)metileno, y el carbono de metino del anillo imidazol para realizaciones en lote sucesivas de 50 kg de pentoxifilina en cada lote:

Lote 1

(CO)metileno metil(CO) carbono de metino

Intercambio 1

88,6 88,8 13,8

Intercambio 2

97,8 98,0 26,3

Intercambio 3

99,2 99,2 37,4

Lote 2

Intercambio 1 (R1-2)

82,3 83,8 6,4

Intercambio 2 (R1-3)

96,7 96,8 12,4

Intercambio 3

98,9 98,9 26,4

Lote 3

Intercambio 1 (R2-2)

78,0 80,8 5,8

Intercambio 2 (R2-2)

95,1 95,6 11,6

Intercambio 3

98,9 99,0 27,1

Intercambio 4*

99,3 99,4 32,6

R1-2: reciclado del Lote 1, Intercambio 2 R1-3: reciclado del Lote 1, Intercambio 3 R2-2: reciclado del Lote 2, Intercambio 2 R2-3: reciclado del Lote 2, Intercambio 3

En una realización, el Intercambio 4 es opcional. En la realización del Lote 3 mostrado en la tabla, el Intercambio 4 se realizó a la mitad del volumen para asegurar una elevada incorporación de deuterio en el Lote 3.

Ejemplo 8 (referencia). Síntesis de (±)8-d1-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidroxihexil)-3-metil-7-(metil-d3)-1H-purina-2,6(3H,7H)diona (Compuesto 435).

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(±)8-d1-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidroxihexil)-3-metil-7-(metil-d3)-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 435). A una solución del Compuesto 409 (0,50 g, 1,7 mmol, 1,0 equiv.) en EtOD (13 ml, Aldrich 99,5 % atómico de D) se le añadió NaBD4 (0,08 g, 1,9 mmol, 1,1 equiv., Cambridge Isotope Labs, 99 % atómico de D). Se observó un aumento de la temperatura de 24 ºC a 27 ºC. La reacción se agitó 2 horas a temperatura ambiente y después se interrumpió mediante la adición de D2O (30 ml) (Cambridge Isotope, 99 % atómico de D). Se formó una suspensión de color

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Ejemplo 10 (referencia). Síntesis de 8-d1-3,7-Dimetil-1-(4,4,6,6,6-d6-5-oxohexil)-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 407).

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8-d1-3,7-Dimetil-1-(4,4,6,6,6-d5-5-oxohexil)-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 407). Una mezcla de 58 disponible en el mercado (7,95 g, 28,6 mmol) y carbonato potásico (990 mg, 7,2 mmol) en D2O (195 ml, Cambridge Isotopes, 99,9 % atómico de D) se calentó a reflujo durante 24 horas. El sólido suspendido disuelto gradualmente dio una solución de color amarillo. La solución se enfrió a aproximadamente 40 ºC y se concentró a presión reducida para dar un sólido de color castaño. El sólido se disolvió en D2O (195 ml) y la solución se calentó a reflujo durante 24 horas más. La solución se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida para dar un sólido de color castaño. Se añadió acetato de etilo (200 ml) y la mezcla se agitó durante 0,5 horas a aproximadamente 40 ºC. Los materiales insolubles se retiraron por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar un sólido de color amarillo pálido, que se trituró con MTBE (40 ml) para dar 7,5 g (93 %) del Compuesto 407 en forma de un sólido de color blanquecino. 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 1,64-1,68 (m, 4H), 3,57 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 3,99-4,04 (m, 2H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3): δ 20,84, 27,40, 29,69, 33,57, 40,81, 107,62, 148,77, 151,48, 155,28, 209,07. HPLC (método: columna Waters Atlantis T3 2,1 x 50 mm 3 µm C18-RP -método de gradiente ACN al 5-95 % + ácido fórmico al 0,1 % en 14 min (1,0 ml/min) con 4 min de mantenimiento en ACN al 95 % + ácido fórmico al 0,1 %; Longitud de onda: 305 nm): tiempo de retención: 3,24 min; pureza del 99,9 %. MS (M+H): 285,3, (M+Na): 307,2. Análisis Elemental (C13H12D6N4O3): Calculado: C = 54,92, H = 6,38, N = 19,71. Observado: C = 54,89, H = 6,38, N = 19,70.

Fue destacable en el espectro 1H RMN anterior la ausencia de los siguientes picos: un singlete en aproximadamente 2,15 ppm indicando la ausencia de hidrógenos de metil cetona; un triplete en aproximadamente 2,51 ppm indicando una ausencia de hidrógenos de metilencetona; y un singlete en aproximadamente 7,52 ppm indicando una ausencia de hidrógeno en la posición número 8 en el anillo de purina.

Ejemplo 11 (referencia). Síntesis de (±)8-d1-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidroxihexil)-3,7-dimetil-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 437).

(±)8-d1-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidroxihexil)-3,7-dimetil-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 437). Se añadió borodeuterido sódico (1,06 g, 25,3 mmol, Cambridge Isotopes, 99 % atómico de D) a una suspensión de 407 (6,5 g, 22,9 mmol) en etanol-d1 (65 ml, Aldrich, 99,5 % atómico de D) a 0 ºC. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó hasta que se desarrollo una solución transparente (aproximadamente 1 hora). La reacción se interrumpió con una solución saturada de cloruro de amonio-d4 (Cambridge Isotopes, 98 % atómico de D) en D2O (8 ml, Cambridge Isotope, 99,9 % atómico de D), etanol-d1 se evaporó a presión reducida y el residuo se extrajo con EtOAc (160 ml). La fase orgánica se lavó con D2O (20 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida para dar 4,8 g (73 %) del Compuesto 437 en forma de un sólido de color amarillo pálido.

Ejemplo 12 (referencia). Separación quiral de (R)-8-d1-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidroxihexil)-3,7-dimetil-1H-purina2,6(3H,7H)-diona Compuesto 437(R)) y (S)-8-d1-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidroxihexil)-3,7-dimetil-1H-purina-2,6(3H,7H)diona (Compuesto 437(S)).

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Ejemplo 17 (referencia). Síntesis de (±) 1-(4,4,6,6,6-d5-5-hidroxihexil)-3,7-dimetil-8-d-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 421).

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5 Síntesis de (±) 1-(4,4,6,6,6-d5-5-hidroxihexil)-3,7-dimetil-8-d-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 421). Siguiendo el mismo método general que para la síntesis del Compuesto 437 en el Ejemplo 11 anterior, el Compuesto 407 (véase el Ejemplo 10) se trató con NaBH4 en EtOD y se extrajo con CH2Cl2 para proporcionar el Compuesto 421.

10 Ejemplo 18 (referencia). Separación quiral de (R)-1-(4,4,6,6,6-d5-5-hidroxihexil)-3,7-dimetil-8-d-1H-purina2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 421(R)) y (S)-1-(4,4,6,6,6-d5-5-hidroxihexil)-3,7-dimetil-8-d-1H-purina-2,6(3H,7H)diona (Compuesto 421 (S)).

15 Separación de los enantiómeros 421(R) y 421(S) a partir del (±) Compuesto 421. Una porción del Compuesto racémico 421 obtenido como se ha descrito anteriormente se separó de la misma manera que el Compuesto racémico 437 (véase el Ejemplo 12) para proporcionar los enantiómeros separados del Compuesto 421(R) (560 mg) y el Compuesto 421(S) (520 mg).

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20 A.(R)-1-(4,4,6,6,6-d5-5-hidroxihexil)-3,7-dimetil-8-d-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 421(R)). RMN (300 MHz, CDCl3): δ 1,41-1,48 (m, 2H), 1,64-1,72 (m, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,79 (s, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,03 (t, J = 7,3, 2H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3): δ 22,69, 27,84, 29,72, 33,60, 41,14, 67,62, 107,64, 148,74, 151,51, 155,38. HPLC (método: columna Waters Atlantis T3 2,1 x 50 mm 3 µm C18-RP -método de gradiente ACN al 5-95 % + ácido fórmico al 0,1 % en 14 minutos (1,0 ml/min) con mantenimiento de 4 minutos en ACN al 95 %; Longitud de onda:

25 254 nm): tiempo de retención: 3,33 min; pureza >99,9 %. HPLC quiral (método: Columna Chiralpak AD de 25 cm método isocrático hexano al 78 %/isopropanol al 22 %/dietilamina al 0,1 % durante 40 minutos a 1,00 ml/min; Longitud de onda: 254 nm): tiempo de retención: 24,77 min (enantiómero R); 28,16 min (esperado para el enantiómero S); pureza de >99,9 % de e.e. MS (M+H-H2O): 269,1; (M+H): 287,1; (M+Na): 309,3. Análisis Elemental (C13H14D6N4O3): Calculado: C = 54,53, H = 7,04, N = 19,57. Observado: C = 54,44, H = 7,18, N = 19,32.

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B. (S)-1-(4,4,6,6,6-d5-5-hidroxihexil)-3,7-dimetil-8-d-1H-purina-2-6(3H,7H)-diona (Compuesto 421(S)). RMN (300 MHz, CDCl3): δ 1,37-1,48 (m, 2H), 1,64-1,74 (m, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,79 (s, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,03 (t, J = 7,4, 2H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3): δ 22,70, 27,84, 29,71, 33,60, 41,14, 67,61, 107,64, 148,74, 151,51, 155,38. HPLC (método: columna Waters Atlantis T3 2,1 x 50 mm 3 µm C18-RP -método de gradiente ACN al 5-95 % + ácido 35 fórmico al 0,1 % en 14 minutos (1,0 ml/min) con mantenimiento de 4 minutos en ACN al 95 %; Longitud de onda: 254 nm): tiempo de retención: 3,34 min; pureza >99,9 %. HPLC quiral (método: Columna Chiralpak AD de 25 cm método isocrático hexano al 78 %/isopropanol al 22 %/dietilamina al 0,1 % durante 40 minutos a 1,00 ml/min; Longitud de onda: 254 nm): tiempo de retención: 28,16 min (enantiómero S); 24,77 min (esperado para el enantiómero R); pureza de >99,9 % de e.e. MS (M+H-H2O): 269,1; (M+H): 287,1; (M+Na): 309,3. Análisis Elemental

40 (C13H14D6N4O3): Calculado: C = 54,53, H = 7,04, N = 19,57. Observado: C = 54,54, H = 7,18, N = 19,31.

Fue destacable en el espectro 1H RMN tanto de 421(R) como de 421(S) la ausencia de un pico en aproximadamente 7,51 ppm, indicando una ausencia de hidrógeno en la posición 2 en el sistema de anillo imidazol.

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por tratamiento con una base adecuada y una fuente de protones, tal como agua.

Ejemplo 20 (referencia). Síntesis de (R)-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidroxihexil)-3,7-dimetil-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 137(R)).

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10 Síntesis de (R)-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidroxihexil)-3,7-dimetil-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 137(R)). Una solución de 437(R) (650 mg, 2,26 mmol, véase el Ejemplo 12) y K2CO3 (320 mg, 2,3 mmol) en agua (40 ml) se calentó a 110 ºC (temperatura del baño) durante 26 horas. La solución se concentró a sequedad, se disolvió de nuevo en agua (30 ml) y se calentó a 100 ºC durante 6 horas más. Después de enfriar a temperatura ambiente, la solución se extrajo con CH2Cl2 (4 x 50 ml). La solución orgánica se secó (Na2SO4), se filtró, se concentró y después

15 se secó al vacío para proporciona 565 mg de 137(R) en forma de un sólido de color blanquecino. 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 1,38-1,48 (m, 2H), 1,64-1,72 (m, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,99 (d, J = 0,5, 3H), 4,02 (t, J = 7,4, 2H), 7,51 (d, J = 0,6, 1H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3): δ 22,65, 27,84, 29,71, 33,61, 41,13, 107,67, 141,43, 148,73, 151,50, 155,37. HPLC (método: columna Waters Atlantis T3 2,1 x 50 mm 3 µm C18-RP -método de gradiente ACN al 5-95 % + ácido fórmico al 0,1 % en 14 minutos (1,0 ml/min) con mantenimiento de 4 minutos en ACN al 95 %;

20 Longitud de onda: 305 nm): tiempo de retención: 3,30 min; pureza >99,9 %. MS (M+H-H2O): 269,4; (M+H): 287,1; (M+Na): 309,3. Análisis Elemental (C13H14D6N4O3): Calculado: C = 54,53, H = 7,04, N = 19,57. Observado: C = 54,43, H = 6,93, N = 19,44.

Síntesis alternativa de (R)-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidrohexil)-3,7-dimetil-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto

25 137(R)). En un matraz de FR de 3 bocas de 3 l se cargó el Compuesto 437(R) (100 g) seguido de agua (1,0 l) y K2CO3 (0,25 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a 80 ± 5 ºC y se controló por 1H RMN. La reacción se completó después de 24 horas y se trató después de 65 horas. El producto resultante se extrajo con tres veces con EtOAc y los productos sólidos de las tres extracciones se combinaron y se disolvieron de nuevo en 5 volúmenes de EtOAc a 60 ºC-65 ºC. Se añadió n-heptano (5,5 vol.) a 60 ºC-65 ºC durante 15 minutos y se enfrió a 20 ºC durante

30 una noche (16 h). La suspensión se filtró y la torta húmeda se lavó con n-heptano (2 x 1 vol. para proporcionar el producto Compuesto 137(R) después del secado a 40 ºC-50 ºC. Se aisló un total de 92,4 g del Compuesto 137(R). La pureza por HPLC fue del 99,92 % (AUC) y la selectividad quiral fue del 100 % con respecto al enantiómero "S". El análisis 1H RMN mostró un 99,2 % de "H" en la posición 8 en el anillo de 3,4,5,7-tetrahidro-1H-purina-2,6-diona y un 99,4 % de "D" en la posición metilo.

35 Ejemplo 21 (referencia). Síntesis de (S)-1-(4,4,5,6,6,6-d6-5-Hidroxihexil)-3,7-dimetil-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 137(S)).

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40 Siguiendo el mismo método general que para la síntesis del Compuesto 137(R) en el Ejemplo 20 anterior, una porción del Compuesto 437(S) (véase el Ejemplo 12) se convirtió en 310 mg del Compuesto 137(S). 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 1,36-1,45 (m, 2H), 1,62 (s, 1H), 1,64-1,74 (m, 2H), 3,58 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 4,02 (t, J = 7,3, 2H), 7,50 (s, 1H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3): δ 23,05, 28,24, 30,07, 33,95, 41,49, 107,92, 141,57, 148,93,

45 151,68, 155,53. HPLC (método: columna Waters Atlantis T3 2,1 x 50 mm 3 µm C18-RP -método de gradiente ACN

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forma de un sólido de color blanco. Las aguas madre combinadas se concentraron para proporcionar 2,0 g del Compuesto 421(S) en forma de un sólido de color amarillo (rendimiento del 0,5 %). El producto aislado era de una calidad muy alta (pureza del 100 % por HPLC) y un enantiómero individual (100/0 de S/R% por HPLC quiral) del lote principal con una incorporación del 99,5 % de "D" en la posición metilo por 1H RMN.

Etapa 2 (procedimiento alternativo):

[1] Un matraz de FR de 3 bocas de 12 l equipado con un manto de calentamiento, un termopar J-Kem, un agitador mecánico, un condensador de reflujo y una sonda de pH se cargó con CRED A131 (9,5 g, ALMAC lote Nº IM-1311-061-1) y 2 l de solución de tampón (KH2PO4 0,1 M, pH = 7,0, igual que a continuación). La mezcla de reacción se agitó para disolver todos los sólidos. Se añadió en una porción una solución de glucosa (558 g, Aldrich lote Nº 088K0039) en tampón (2 l) seguido de una solución de NAD (19,25 g, Spectrum lote Nº YA0655) en tampón (500 ml), y una solución de GDH (1,5 g, ALMAC lote Nº IM-1311-131-1) en tampón (500 ml). La mezcla de reacción inicial tenía un pH de 6,98. A la mezcla de reacción se le añadió una mezcla del Compuesto 407 en tampón (3 l) a 30 ºC y el recipiente se aclaró con tampón (1,6 l). El aclarado se cargó en el reactor. El pH de la mezcla de reacción era de 6,99. La mezcla de reacción se calentó a 30 ºC y se controló mediante un pHmetro. La temperatura de reacción se mantuvo de 29,0 ºC a 31,5 ºC y el pH de la mezcla de reacción se mantuvo entre pH 6,93 y pH 7,02 añadiendo gota a gota una solución 4 M de KOH según sea necesario. La reacción se completó después de 22 horas con una conversión del 99,96 % según se determinó por HPLC. El análisis por HPLC quiral del producto resultante mostró que la selectividad quiral era del 99,85 % con respecto al S-alcohol deseado.

[2] La mezcla de reacción se mezcló con NaCl (2 kg) y se extrajo con EtOAc (1 x 4 l y 3 x 2 l). Durante la primera extracción, se formó una capa de trapo y la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de celite. No se encontraron problemas adicionales con la separación de fases después de la filtración. Los extractos orgánicos combinados se concentraron a aproximadamente 1,5 l a 50 ºC-60 ºC y se añadió n-heptano (2 l) para precipitar los sólidos. La suspensión se enfrió a 20 ºC y se filtró. El matraz se aclaró con el filtrado para completar la transferencia. La torta de filtro se lavó con n-heptano (2 x 500 ml) y se secó durante el fin de semana a 40 ºC50 ºC para proporcionar el Compuesto 421(S) (366 g, rendimiento del 94 %). El producto se analizó por HPLC (pureza del 99,95 %), HPLC quiral (99,88/0,12 S/R), y 1H RMN (incorporación "D" al 99,5 % en la posición metilo). Etapa 3. Compuesto 121(S). En un matraz de FR de 3 bocas de 3 l, el Compuesto 421(S) (100 g) se cargó seguido de agua (1,0 l) y K2CO3 (0,25 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a 80 ± 5 ºC y se controló por 1H RMN. La reacción se completó después de 24 horas y se trató después de 65 horas. El producto resultante se extrajo con tres veces con EtOAc y los productos sólidos de las tres extracciones se combinaron y se disolvieron de nuevo en 5 volúmenes de EtOAc a 60 ºC-65 ºC. Se añadió n-heptano (5,5 vol.) a 60 ºC-65 ºC durante 15 minutos y se enfrió a 20 ºC durante una noche (16 h). La suspensión se filtró y la torta húmeda se lavó con n-heptano (2 x 1 vol. para proporcionar el producto Compuesto 121(S) después del secado a 40 ºC50 ºC. Se aisló un total de 92,4 g del Compuesto 121(S). La pureza por HPLC fue del 99,92 % (AUC) y la selectividad quiral fue del 100 % con respecto al enantiómero "S". El análisis 1H RMN mostró un 99,2 % de "H" en la posición en el anillo de 3,4,5,7-tetrahidro-1H-purina-2,6-diona y un 99,4 % de "D" en la posición metilo.

Ejemplo 25 (referencia). Síntesis de 3,7-Dimetil-1-(4,4,6,6,6-d5-5-oxohexil)-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona Compuesto

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Síntesis de 3,7-Dimetil-1-(4,4,6,6,6-d5-5-oxohexil)-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona (Compuesto 107). El compuesto 121 (0,49 g, 1,72 mmol, véase el Ejemplo 22) y N-óxido de N-metilmorfolina "NMO" (301 mg, 2,58 mmol) se disolvieron en CH2Cl2 (20 ml). Se añadió perrutenato de tetrapropilamonio "TPAP" (27 mg, 0,086 mmol) y la solución se agitó durante 2,5 horas a temperatura ambiente. El análisis por TLC (EtOAc) mostró que la reacción se había completado. La reacción se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc. El material se secó en un horno de vacío (50 ºC) durante 4 horas para proporcionar 400 mg (82 %) del Compuesto 107. El material se purificó adicionalmente mediante cristalización (EtOAc/heptano) para dar 320 mg de 107. El análisis por RMN y LCMS no indicó ninguna pérdida de deuterio. 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 1,64-1,70 (m, 4H), 3,57 (s, 3H), 3,99 (d, J = 0,6, 3H), 4,01-4,04 (m, 2H), 7,51 (d, J = 0,6, 1H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3): δ 20,82, 27,38, 29,69, 33,61, 40,80, 107,75, 141,42, 148,76, 151,46, 155,26. HPLC (método: columna Waters Atlantis T3 2,1 x 50 mm 3 µm C18-RP -método de gradiente ACN al 5-95 % + ácido fórmico al 0,1 % en 14 minutos (1,0 ml/min) con mantenimiento de 4 minutos en ACN al 95 %; Longitud de onda: 305 nm): tiempo de retención: 3,28 min; pureza >99,9 %. MS (M+H): 284,1; (M+Na): 306,0.

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Evaluación biológica

Ejemplo 40. Estudio farmacocinético de 435(S) y otros compuestos representativos en chimpancés después de dosificación oral

5 Se disolvieron por separado 435(S)* y compuestos representativos 121(S), 137(S)*, 421(S)* y 437(S)* en agua caliente (65 ºC) a una concentración [[de 10 mg/ml]]. Después se siguió el mismo protocolo descrito para el Ejemplo 39 para cada compuesto representativo. *no parte de la presente invención.

10 Tabla 17 i) -iv). Resultados farmacocinéticos después de administración oral en chimpancés.

i)

AUC0-12 (h*ng/ml)

Compuesto(s) medido(s)a

Macho Hembra

435(S)

354 133

121(S)

304 105

435(S) + 409

715 282

121(S)+107

553 224

M5 deuterado (M5a)

585 670

M5

630 653

ii)

AUC0-12 (h*ng/ml)

Compuesto(s) medido(s)a

Macho Hembra

435(S)

100 243

137(S)

63 163

435(S) + 409

195 435

137(S)+107

127 381

M5 deuterado (M5a)

719 754

M5

539 635

iii)

AUC0-12 (h*ng/ml)

Compuesto(s) medido(s)a

Macho Hembra

435(S)

881 947

421(S)

743 634

435(S) + 409

1130 1000

421(S)+407

979 834

M5 deuterado (M5a)

500 376

M5 deuterado (M5b)

447 350

iv)

AUC0-12 (h*ng/ml)

Compuesto(s) medido(s)a

Macho Hembra

435(S)

686 1140

437(S)

757 1178

435(S) + 409

876 1654

437(S)+407

947 1662

M5 deuterado (M5a)

562 306

M5 deuterado (M5b)

627 416

a) Masa observada mediante LC-MS/MS.

La Tabla 17 i)-iv) muestra los resultados de la administración oral de 435(S) y de compuestos 121(S), 137(S), 421(S) y 437(S), respectivamente, en chimpancés. Para cada chimpancé, los valores de AUC0-12 para cada uno de 121(S), 137(S), 421(S) y 437(S) son comparables con los valores de AUC0-12 para 435(S). Asimismo, la suma de los valores

15 AUC0-12 para 435(S) y 409 es comparable a las sumas de los valores AUC0-12 para cada uno de 121(S), 137(S), 421(S) y 437(S) y sus respectivos metabolitos cetona 107, 107, 407 y 407.

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Finalmente, también se encontraron valores comparables para el metabolito M5a de 435(S) y los correspondientes metabolitos de 121(S), 137(S), 421(S) y 437(S), es decir, M5, M5, M5b y M5b (mostrado a continuación).

imagen30

5 Sin descripción adicional, se cree que un especialista en la técnica puede, usando la descripción precedente y los ejemplos ilustrativos, preparar y utilizar los compuestos de la presente invención y poner en práctica los usos médicos reivindicados. Debe entenderse que el análisis y ejemplos anteriores presentan simplemente una descripción detallada de ciertas realizaciones preferidas. Será evidente para los especialistas en la técnica que

10 pueden hacerse diversas modificaciones sin alejarse del alcance de la invención.

Claims (1)

1. imagen1